Получение стимуляторов роста микроорганизмов из лекарственных растений

Баронец, Наталья Геннадьевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Получение стимуляторов роста микроорганизмов из лекарственных растений
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Получение стимуляторов роста микроорганизмов из лекарственных растений"

На правах рукописи

БАРОНЕЦ Наталья Геннадьевна

ПОЛУЧЕНИЕ СТИМУЛЯТОРОВ РОСТА МИКРООРГАНИЗМОВ ИЗ ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ

Специальность 03.00.07 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва 2004

Работа выполнена в ГУ Научно-исследовательском институте вакцин и сывороток им И.И. Мечникова РАМН

Научныйруководитель:

доктор биологических наук В.А Мельникова

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Л.П. Блинкова

кандидат биологических няук О.В. Гунар

Ведущая организация:

ГУ Московская медицинская академия им И.М. Сеченова МЗ РФ

Зщш лкпртщп еостоштеш 23 е*В1яЯри 2М4 г. ■ на

заседании диссертационного совета Д 001.035.01 в ГУ Научно-исследовательском институте вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН по адресу: г. Москва, Малый Казенный пер., д. 5а.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ Научно-исследовательского института вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН.

Автореферат разослан 23 августа 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук

И.В. Яковлева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы

Неблагоприятная эпидемиологическая обстановка в нашей стране вызывает потребность в качественных диагностических препаратах, в том числе, и в питательных средах. Основными компонентами питательных сред являются пептоны, однако, анализ рецептур микробиологических сред свидетельствует о необходимости введения в их состав стимуляторов роста, каковыми являются мясные и дрожжевые экстракты. Стимулятор роста бактерий из кормовых дрожжей (ЭКД) значительно уступает по ростовым свойствам импортным экстрактам из пекарских или пивных дрожжей и не может быть использован для изготовления иммунопрепаратов. Отечественные производители медицинских

иммунобиологических препаратов испытывают постоянный дефицит мясных и дрожжевых экстрактов и часто вынуждены закупать дорогостоящие импортные препараты.

В- последние годы наблюдается повышенный интерес исследователей к поиску новых высокоэффективных стимуляторов роста микроорганизмов. Он вызван открытием некультивируемых форм и необходимостью их рекультивации, что, в свою очередь, способствовало выявлению нового класса стимуляторов рост микроорганизмов, в том числе, действующих по принципу автоиндукторов [Ю.М.Романова и соавт., 1997, 2000, 2002; R.Reissbгodt и соавт., 2002 и др-].

Повышенный интерес к стимуляторам роста микроорганизмов заставил нас обратить внимание на лекарственные растения, специфическая особенность которых состоит в том, что они способны синтезировать огромное количество самых разнообразных химических соединений различной природы, относящихся к различным классам. Многие из них являются биологически активными и оказывают глубокое воздействие на живую клетку.

Среди биологически активных веществ (БАВ), синтезируемых и накапливаемых растениями, известны такие классы природных соединений, как алкалоиды, терпеноиды, фенольные соединения и их гликозиды, полисахариды, витамины и минеральные вещества, которые могут оказывать стимулирующее влияние на рост микроорганизмов. Так, выявлено стимулирующее влияние

рас. илшюнллымя

С И БЛ нотиса

экстракта из листьев душицы на кислотообразование Lactobacillus planlarum и ингибирующее влияние листьев и масла душицы на рост и кислотообразование Leuconostoc mesenteroides [Kivanc et al., 1991].

Исследованиями, выполненными в НИИВС им. И.И.Мечникова, показано, что экстракты травы душицы, листьев осины и липы оказывают стимулирующий эффект на рост бактерий. При выяснении действующего начала стимулятора из травы душицы установлено, что экстракт душицы разделялся на 3 фракции, при этом наилучший стимулирующий эффект проявляла фракция Ш, в концентрации 0,001%. В составе этой фракции выявлены фенолы, флавоноиды, фенолкарбоновые и жирные кислоты [Г.П.Адлова и соавт., 1998]. Полученные авторами данные позволяют предположить возможность выделения из растительного сырья сильнодействующих стимуляторов и ингибиторов роста микроорганизмов, влияние которых проявляется в очень малых концентрациях.

Поскольку высшие растения доступны в качестве сырьевой базы и среди продуктов их биосинтеза присутствуют химические соединения, являющиеся известными природными стимуляторами роста, представляется перспективным продолжить поиск стимуляторов роста растительного происхождения.

Целью настоящей работы является поиск новых стимуляторов роста микроорганизмов среди лекарственных растений.

Задачи исследования:

1. По данным литера туры провести отбор лекарственных рааений. содержащих химические соединения, которые могут служить стимуляторами роста микроорганизмов.

2. Получить водные экстракты отобранных растений.

3. Изучить влияние полученных экстрактов на рост избранных штаммов микроорганизмов.

4. Определить оптимальную концентрацию экстрактов, оказывающих стимулирующее влияние на рост микроорганизмов.

5. Изучить стабильность основных биологических свойств тестируемых микроорганизмов, выращиваемых на питательных средах с растительными экстрактами.

6. Определить действующее начало стимуляторов роста из лекарственных растений.

7. Изучить совместное влияние экстрактов лекарственных растений с целью создания комплексного стимулятора роста.

Научная новизна работы

Впервые экспериментально доказано стимулирующее влияние экстрактов растений, содержащих витамин К, на рост микроорганизмов. Эффект 0,25% экстрактов этих растений эквивалентен влиянию синтетического аналога витамина К - викасола в концентрации 15мкг/л. Синтетические витамины С и Р в концентрации 0.2г/л стимулировали рост шигелл и стафилококков.

Выявлены экстракты лекарственных и используемых в пищу растений, оказывающих заметное стимулирующее влияние на рост шигелл, стафилококков. S.gallinarum 665, S.pyogenes Dick 1, C.xerosis 1911 и C.albicans NCTC 885-653. Это экстракты из корней алтея и солодки, травы пастушьей сумки и фиалки, столбиков с рыльцами кукурузы, слоевищ морской капусты, белокочанной капусты и топинамбура.

Экстракты из листьев толокнянки, сенны и зеленого чая. березовых почек и корневищ лапчатки ингибировали рост изученных тест-штаммов микроорганизмов.

Установлено, что биологически активные вещества, выделенные из лекарственных растений (полисахариды из пастушьей сумки, фиалки и морской капусты, флавоноиды из фиалки и зверобоя, глицирризиновая кислота из корня солодки) не оказывали стимулирующего влияния на рост изученных микроорганизмов в противоположность водным экстрактам этих растений.

Практическая значимость

Выявленное синергичное влияние нескольких экстрактов лекарственных растений с разными действующими веществами открывает перспективу создания

комплексного стимулятора роста бактерий для бактериологических питательных сред.

Выявлен экстракт лекарственного растения (слоевища ламинарии), коюрые улучшают качество питательных сред с низкими ростовыми свойствами. Добавление этого экстракта усиливает стимулирующее влияние ЭКД, являющегося признанным источником витаминов группы В.

Оформляется заявка на изобретение на стимулятор роста микроорганизмов из растений.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Экстракты из корней алтея и солодки, травы пастушьей сумки и фиалки, столбиков с рыльцами кукурузы, слоевищ морской капусты, белокочанной кап>с1ы и топинамбура стимулируют рост всех изученных микроорганизмов.

2. Синтетический аналог витамина К - викасол в концентрации 15мк1/,| и синтетические витамины С и РР в концентрации 0.2г/л стимулируюч росч изученных штаммов шигелл и стафилококков.

3. Биологически активные вещества, выделенные из лекарственных растений, не оказывают стимулирующего влияния на рост изученных микроорганизмов в отличие от водных экстрактов этих растений.

Апробация работы

Основные положения диссертации доложены на 3 Международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы разработки и производства диагностических питательных сред и тестсистем (Махачкала, 2001); Юбилейной международной научно - практической конференции «Пищевые продую ы XXI века» (Москва. 2001); заседании VIII съезда Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 2002); 4 Международной научно-практической конференции, посвященной 50-летию НПО «Питательные среды» МЗ РФ «Разработки и стандартизация микробиологических питательных сред и тестсистем», (Махачкала, 2003). Диссертация апробирована на научной конференции отдела микробиологии ГУ НИИВС им. И.И. Мечникова 25 мая 2004г.

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 2 работы в центральной печати.

Объем и структура диссертации

Материалы диссертации изложены на 132 страницах машинописного текста, иллюстрированы 17 рисунками и 8 таблицами, состоят из введения, обзора литературы, 5 глав результатов собственных исследований, заключения, выводов и списка использованной литературы, включающего 191 источник.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ Объекты и методы исследования

В работе преимущественно использовали лекарственное растительное сырье, перерабатываемое на ОАО «Красногорсклексредства». Выбор обусловлен тем. что такое лекарственное сырье правильно заготовлено и прошло тщательный контроль на содержание действующих веществ, недопустимых примесей, радионуклидов цезия и стронция, испытание на микробиологическую чистоту. На каждый вид растительного сырья утверждена соответствующая фармакопейная статья {ГФ СССР X изд., XI изд. вып.2. ФС. ВФС) предусматривающая порядок и сроки заготовки растительного сырья, внешние признаки, качественные реакции, числовые показатели.

Экстракты лекарственных растений получали по методике, регламентированной ГФ XI издания и разработанной в НИИВС им. И.И.Мечникова

Полученные экстракты оценивали по физико-химическим и биологическим показателям, принятым для оценки качества питательных сред.

Тест-штаммами служили Candida albicans NCTC 885/653, Shigellajlexneri la №8516, S.sonnei "S-form", Salmonellagallinarum 665, Streptococcus pyogenes Dick I. Corynebacterium xerosis 1917, Staphylococcus aureus 209P, S.aureus "ВИОТКО "

Получение биологически активных веществ из растений осуществляли но ГФ X и XI издания. Полисахариды получали 5-кратным кипячением растительного сырья, последующим осаждением полученных водных извлечений 95% этанолом при t З0°С и центрифугированием [ГФ XI, ст.83]. Полисахариды добавляли взамен ЭКД в количестве 0,5 г. на 100 мл. среды. Глицирризиновую кислоту из корня

солодки получали экстрагированием ацетоном [ГФ X, ст.573]. 100 мл. раствора глицирризиновой кислоты, содержащего 0,00104 г. глицирризиновой кислоты в 1 мл, добавляли к основе сухой питательной среды без ЭКД. Сумму флавоноидов из ЛРС извлекали троекратным кипячением на водяной бане с 50% спиртом [ГФ XI. ст.52]. Раствор суммы флавоноидов добавляли взамен ЭКД в количестве 10 мл на 100 мл среды.

Полученные результаты подвергали статистической обработке [Сергиенко В.И., Бондарева И.Б., 2001].

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Выбор метода получения экстрактов

На примере двух штаммов стафилококков - S. aureus 209P. Sanreus "ВИОТКО", двух иламмов шигелл Sflexneri la №8516, S.sonnei "S-fonn" и Sgallinarum 665 нами изучены две методики приготовления экстрактов: методика. регламентированная ГФ XI изд., вып.2 и методика, разработанная в НИИВС им.И.И.Мечникова Г.П.Адловой и соавт., 1998.

Экстракты готовили из корней алтея, травы пастушьей сумки и травы фиалки. Экстракты вводили в состав питательных агаров в количестве 0.25% по сухому веществу.

Во всех случаях экстракты, приготовленные по методике, разрабошшюй в НИИВС им. И.И.Мечникова, оказывали лучшее стимулирующее влияние на poci изученных микроорганизмов, чем экстракты, приготовленные по методике ГФ XI изд.. вып.2. Кроме того, при культивировании S.gallinarum 665 на среде, содержащей экстракт алтея, приготовленный по методике ГФ XI наблюдался более скудный рост, чем на среде, не содержащей ЭКД (рис. 1).

Полученные результаты свидетельствуют о том, что .в результате экстракции по методике, разработанной в НИИВС им. И.И.Мечникова, происходит достаточно полное извлечение биологически активных веществ. оказывающих стимулирующее влияние на рост микроорганизмов. Вместе с тем, эта методика является более щадящей, и в процессе экстракции не разрушаются ценные биологически активные вещества, такие, например, как витамины.

>э"

0 §

35 3 25 2 1.5 1

05 0

в.аигеиз "ВИО ГКО "

Э Пехпеп 1а N¡8516

$.аигеив 209Р

в-даШпагит 665

[Ь

I гЬ гЬ

* _ гЬ

•V •

3 *

\ 1

2 £ € 2 г

| 1 £ *

Е о и Я а в-

ё §

З.юлле/ З^огт

гЬ Г "1 гЬ [Ь

> , гЬ Т

'> ¡(Г Г

11 - * * * л »■<

8 £ 5 £ 5 5

§ I

коп $ * Ю

ч Ье

I 5

О Г)

о п

* Ш

га 2 э * Ч £

I I | ^ * I

и ч с

О О

.о>

3 8

| §

С 3

га •&

I ^

О О

1> о ю

5 £ 5 5

8 « " а

1 | * *

Обозначения: по оси абсцисс - наименование эксграюов лекарственных растений, добавляемых к основам питательных сред в концентрации 0,25% по с)хочу веществу взамен 'ЗКД М - приготовленною по методике, разработанной в НИИВС им Мечникова, ГФ- при! отопленного поГФХ! изд. вын 2 Кот роль-основы ии1а1ельиы\ сред с ЭКД и безЭКД

В дальнейшей работе экстракты из растений, отобранных нами по данным литературы, готовили только по щадящей методике.

2. Изучение влияния концентрации экстрактов лекарственных растений на ростовые свойства питательных сред.

Следующим этапом работы явилось определение оптимальной концентрации экстрактов лекарственных растений, оказывающих стимулирующее влияние на рост микроорганизмов. На рис. 2 представлено влияние различных концентрации экстрактов алтея, солодки, эхинацеи, мать-и-мачехи, кукурузных столбиков с рыльцами, пастушьей сумки, белокочанной капусты на рост двух шигелл на питательном агаре (АП-агаре) с растительными стимуляторами. Из рис. 2 видно, что кривая зависимости диаметра колоний шигелл ог концешрации добавляемого в среду экстракта имеет экстремальный характер, концентрации стимуляторов (0.05-0.1%) лимитируют рост недостатком факторов роста, а высокие - ингибируют его избытком (0,5%). Для большинства экстрактов оптимальной концентрацией является 0,25% (экстракты травы пастушьей сумки, мать-и-мачехи, солодки, алтея (для тест-штамма S. З-ргш), эхинацеи,

белокочанной капусты). Для некоторых экстрактов оптимальной была концентрация 0.1% (экстракты солодки и эхинацеи при выращивании тест-штамма S. Авхпвп 1а N8516) или 0,5% (экстракты алтея и кукурузных столбиков с рыльцами) (р<0.05). Полученные данные позволяют сделав вывод и юм. чк> оптимальная для роста микроорганизмов концентрация экстрактов растений находится в пределах 0.1-0,5% по сухому остатку.

3. Изучение влияния экстрактов лекарственных растений на рост избранных тест-штаммов микроорганизмов.

На рис. 3 представлено влияние растительных экстрактов на рост требовательного штамма сальмонелл S.gallinanim 665. Ярким стимулирующим свойством обладает 0,25% экстракт побегов капусты, среднее стимулирующее влияние на рост S.gallinarum оказывает 0,25% экстракт пастушьей сумки, слабое -экстракты алтея (0,25%), спорыша (0,25%) и коры калины (25%). Ингибирующее

Б.Лехпеп 1а №8516

Э-волле/ "в^огт "

♦ алтеи —О—солодка —А— эхинацея

мать-и-мачеха кукурузы столб, —в— паст.сумка —бе локоч.ка п

Рисунок 2 Влияние концентрации экстрактов лекарственных растений на ростовые свойства питательных сред

Обозначения: по оси абсцисс - концеш рация же фактов лекаре I пенных растений, добавляемых к основе питательной среды взамен ЭКД. Контроль - АП-агар с ЭКД и ЛП-агар без ЭКД

влияние оказывают экстракты тысячелистника, крапивы и зеленого чая в концентрации 0,25%.

5 3.5

Рисунок 3. Влияние экстрактов лекарственных растений на рост 8.%аШпатш 665

Обозначения: по оси абсцисс - наименование экстракта лекарственного растения, добавляемого к основе питательной среды в концентрации 0.25% по сухому веществу взамен ЭКД. Контроль - АП-агар с ЭКД и ЛП-агар без ЭКД.

На рис. 4 представлены результаты изучения влияния растительных экстрактов на рост шигелл. Как видно, ярко выраженным стимулирующим эффектом обладали экстракты фиалки, хвоща, пастушьей сумки, череды, крапивы, спорыша и белокочанной капусты. Среднее стимулирующее влияние (практически на уровне контроля с ЭКД) оказывали экстракты алтея, подорожника, пастушьей сумки. Слабым стимулирующим эффектом обладали экстракты солодки, эхинацеи. эрвы, тысячелистника, цветков липы, шиповника, коры калины, семян льна. Установлено, что экстракт корней солодки стимулирует рост шигелл в концентрации 0,1%, а столбиков с рыльцами кукурузы - 0,5%. Сильными

Рисунок 4. Влияние растительных экстрактов на рост изученных штаммов шнгелл

Обозначения: по оси абсцисс - наименование эксгракюв лекарственных растений, добавляемых к основе питательной среды в концентрации 0.25% по сухому веществу взамен ЭКД. Контроль - АП-агар с ЭКД и АП-агар без ЭКД.

ингибирующими свойствами по отношению к штаммам шигелл обладали экстракты листьев облепихи, мать-и-мачехи, чабреца, лапчатки, зеленого чая.

Рис. 5 демонстрирует влияние растительных экстрактов на рост тест-штаммов стафилококков. Экстракт алтея стимулирует рост стафилококков в концентрации от 0,05 до 0,5%, сильным стимулирующим действием обладают экстракты побегов капусты (от 0,1 до 0,5%). семян льна, цветков липы, плодов шиповника, пастушьей сумки, кукурузных столбиков с рыльцами, корней солодки, травы спорыша, листьев крапивы, коры калины. Установлено, что стимуляторами роста стафилококков являлись также экстракты корней солодки в концентрации 0,1 и 0,25%, фиалки (0,5%) и календулы (0.25%). Ингибировали рост стафилококков экстракт из травы зверобоя (0.25%) и тысячелистника (0.5%). березовых почек (0,25%), листьев подорожника (0,5%), особенно сильно - экстракт из листьев толокнянки, зеленого чая, сенны (0,25%) и мяты (0,1-0,5%), а также экстракт из корневищ лапчатки.

Выявлено, что практически все изученные экстракты в той или иной степени стимулировали рост C.albicam NCTC 885-653 (рис. 6). Показано, что ингибировал рост гриба только экстракт березовых почек в концентрации 0,25-0,5%. а в концентрации 0,1% он оказывал слабое стимулирующее действие, такое же. как экстракты из травы хвоща и фиалки.

При культивировании Spyogenes Dick I и С.xerosis 1911 на питательном бульоне с добавлением растительных экстрактов лучше всего рос штамм стрептококка. Самый яркий стимулирующий эффект на рост тесышамми S.pyogenes Dick 1 оказывали экстракты солодки, хвоща, тысячелистника и эхинацеи. Отсутствовал рост S.pyogenes Dick 1 только в средах с экстрактом крапивы (0,25%), березовых почек (0,5%), мяты, лапчатки, толокнянки, спорыша. Более требователен тест-штамм С. xerosis 1911. его рост стимулировали экстракты корней алтея, солодки, травы фиалки, зверобоя, календулы, пастушьей сумки, спорыша, семян льна. Рост С. xerosis 1911 ингибировали экстракты травы череды, тысячелистника, хвоща и чабреца, листьев сенны, облепихи, крапивы, мяты, толокнянки, зеленого чая и подорожника, цветков ромашки и эхинацеи. а также березовых почек и корневищ лапчатки.

Рисунок 5 Влияние растительных экстрактов на рост изученных штаммов стафилококков

Обозначения, по оси абсцисс - наименование эксграктов лекарственных рааений, добавляемых к основе пшательной среды в концентрации 0,25% по сухому веществу взамен ЭКД Контроль - основа питательной среды с ЭКД и без ЭКД

4 3.5 3 2.5 2 1.5

т £

0.5

5 5

Л Р)

о о

* »о

'3 а>

Б §

о §

«с и

5 ш и

5 о

з §

5 з

1В (В

о.

Г)

2 §

3 ■8-

«в »о

О) &

а-

о.

о <о о с

э-«в г

Е то

5 О.

га &

«о

Е 1

<в 5 >3 * э

ас а: о 3

§ X X 3

№ V о « о.

§ о & о с о с

о <в 3 и

(В

с <в

2 I

ш с

го

5Г §

Рисунок 6. Влияние экстрактов растений на рост С.а1Ысап5 Л'СГС885-653

Обозначения: по оси абсцисс - наименование лот рак юн лекарственных растений, добавляемых к основе питательной среды Сабуро в концентрации 0.25% по сухому вещссч иу взамен ЭКД: по оси ординат - диамар колоний, мм. Контроль - среда Сабуро с ЭКД и среда Сабуро без ЭКД.

Таким образом, выявлены экстракты лекарственных растений, оказывающих ярко выраженное стимулирующее влияние на рост избранных тест-штаммов микроорганизмов: трава пастушьей сумки, фиалки и хвоща, семена льна, корни алтея и солодки, столбики с рыльцами кукурузы, белокочанная капуста. Ингибиторами роста являлись экстракты из листьев облепихи, зеленого чая, толокнянки и мяты, а также березовых почек и корневищ лапчатки. Экстракты некоторых лекарственных растений оказывали двойственное влияние на poci микроорганизмов: для одних тест-штаммов экстракты являлись еж мул я юрами роста, для других - ингибиторами. Это экстракты из листьев подорожника, крапивы и мать-и-мачехи, травы череды, чабреца, тысячелистника и спорыша, цветков эхинацеи.

Микроорганизмы, выращенные на питательных средах с экстрактами лекарственных растений, сохраняли свои основные биологические свойства. Колонии шигелл и сальмонелл вырастали в S-форме с ровным краем, стафилококки образовывали ярко-желтый (S aureus 209 Р) или лимонно-желшй (5 иигет "ВИОТКО") пигмент, Spyogenes Dick 1 в бульоне давал придонно-приаеночный рост, a C.xerosis 1911- диффузное помутнение среды.

4. Влияние витаминов и других биологически активных веществ из лекарственных растений на рост микроорганизмов

Анализируя полученные результаты, мы обратили внимание на то. что экстракты, обладающие выраженными стимулирующими свойствами по отношению к микроорганизмам, обладают определенным набором БАВ.

Поскольку стимулирующее влияние ряда экстрактов определяется, по нашему представлению, наличием в них витамина К, мы изучили влияние этих экстрактов на рост тест-штаммов сальмонелл и шигелл в сопоставлении с влиянием добавления в среду синтетического аналога витамина К - викасола в концентрации 7,5 и 15 мкг/л (рис. 7). Как оказалось, наиболее выраженный стимулирующий эффект на рост тест-штаммов шигелл и сальмонелл оказывают экстракт пастушьей сумки в концентрации 0,25% по сухому веществу, экстракт столбиков с рыльцами кукурузы (0,5%) и экстракт молодых побегов капусты (0,25%). Такое же

Рисунок 7 Влияние экстрактов растений, содержащих витамин К, на рост изученных тест-штаммов ш иге л л и сальмонелл

Обозначения по оси абсцисс- наименование экс фактов лекарественных растений добавляемых к основе питательной среды в концентрации 0,25% по с\хому веществу взамен ЭКД

К-1 - основа питательной среды с добавлением викасола в количестве 7,5мкг/л взамен ЭКД К-2 -основа питательной среды с добавлением викасола в количестве 15мкг/л взамен ЭКД Контрочъ АП-а1ар

стимулирующее влияние оказывает и синтетический аналог витамина К в концентрации 15мкг/л.

Учитывая полученные данные о влиянии витамина К на рост всех изученных тест-штаммов микроорганизмов, представлялось перспективным изучить влияние других витаминов, входящих в состав растений, на рост микроорганизмов. По данным литературы известно, что в растениях в достаючном количестве присутствуют витамины С и PP. В качестве их синтетических аналоюи мы использовали аскорбиновую и никотиновую кислоты. Препараты виыминои С и РР добавляли взамен ЭКД по 0,02г на 100мл среды (рис. 8). В целом можно сказать о благоприятном влиянии аскорбиновой и никотиновой кислот на poci изученных штаммов микроорганизмов. Витамины С и РР оказывают на рост шигелл и стафилококков практически такое же влияние, как коммерческий витаминный препарат ЭКД. Особенно обращает на себя внимание факт ярко выраженной стимуляции никотиновой кислотой роста такого тест-ппамма. как S.sonnei "S-form ".

Анализ данных литературы показал, что действующими веществами растений, оказывающих выраженное стимулирующее влияние на рост микроорганизмов, являются полисахариды, флавоноиды, витамины, органические кислоты. Многие из этих веществ, будучи выделенными из растений, предположительно могут оказывать стимулирующее влияние на рост микроорганизмов. В связи с этим, были выделены и изучены флавоноиды из фиалки и зверобоя, полисахариды из фиалки, пастушьей сумки, морской катеты и алтея, а также глицирризиновая кислота из корня солодки. В качестве аналога биофлавоноида и витамина РР использовали государственный стандартный образец рутин. На рис. 9 показано, что наиболее заметное стимулирующее влияние оказывал полисахарид пастушьей сумки на рост стафилококков; однако он оказывал слабое стимулирующее влияние на рост шигелл и не стимулировал рост S.gallinarum 665 . Небольшое стимулирующее влияние на рост шигелл оказывала глицирризиновая кислота, однако она не стимулировала рост стафилококков. Полисахарид фиалки оказывал небольшое стимулирующее действие только на рост одного штамма стафилококков - S aureus 209P. Полисахариды алтея и морской

З.Лехпег! 1а N28516

гЬ

а =

0 О.

1 §

Я «

о и к \£

т С)

и л

ы V ю

Рисунок 8. Влияние витаминов на рост изученных тест-штаммов микроорганизмов

Обозначения: по оси абсиисе наименование витаминов, добавляемых к основам питательных сред взамен 'ЖД. Примечание: копией грация аскорбиновой и никотиновом кисло I 0.2 |/л питательной среды. Контроль - основы питательных сред с ЭКД и основы питательных сред без "ЖД

2 г

>5"

X О

с; о к

о.

I-

0) г

3,5 3 2,5 2 1.5 1

0,5 О

З.даШпагит 665

Э-аигеия "ВИОТКО"

5Мехпеп 1а №8516

[Ь

Рисунок 9. Влияние биологически активных веществ на рост изученных тсст-штаммов микроорганизмов

Обозначения: по оси абсцисс - наименование биологически активных веществ, добавляемых к основам питательных сред взамен ЭКД. Контроль - основы питательных сред с 'ЖД и основы шлательнмх сред без ЭКД

Примечание: концентрация полисахаридов пастиьей сумки, фиалки, алтея и морской капусты - 5г/л питательной среды; концентрация I лицирризшювой кислоты 1,04 1 /л мшатсльпой среды; концсшрация рутина 0,02г/л питательной среды; содержание раствора суммы флавоиоидон филкм и зверобоя в питательной среде 10%.

капусты, рутин и флавоноиды фиалки и зверобоя не оказывали стимулирующего влияния на рост изученных микроорганизмов.

Таким образом, оказалось, что биологически активные вещества, выделенные из лекарственных растений и взятые по отдельности, не оказывали стимулирующего влияния на рост изученных микроорганизмов (исключение -полисахарид пастушьей сумки). Этот факт позволил сделать вывод, что стимулир)ющее влияние на рост изученных штаммов шигелл и стафилококков оказывает весь комплекс биопогически активных веществ, содержащихся в такич лекарственных растениях, как трава пастушьей сумки и фиалки, корни алтея и солодки

5. Перспективы создания комплексного стимулятора роста микроорганизмов из экстрактов лекарственных растений

Полученные эксперимешальные данные о стимулирующем влиянии на рост микроорганизмов экстрактов из лекарственных и употребляемых в пищу растений позволил нам высказать предположение о возможности создания комплексного стимулятора бактериального роста Поскольку каждый из выбранных нами в качестве биостимулятора экстрактов имел, по данным литературы разные действующие вещества, мы полагали, что их стимулирующее действие будет суммироваться, если использовать их совместно

Нами выявлено, что стимулирующее действие экстракта из корней алтея усиливает добавление экстрактов из плодов шиповника, травы зверобоя и цветков календулы Экстракт корней алтея в сочетании с экстрактом листьев сенны стимулирует рост Сalbicans . но не шигелл. В то же время, действие зксграктов корней аттея и солодки не суммируется, но экстракт из корней солодки в сочетании с экстрактом травы спорыша заметно стимулирует рост стафилококков Наибольшее стимулирующее действие на рост С albicans оказывал комплексный стимулятор, состоящий из экстрактов корней алтея, цветков календулы и гравы череды.

Диаметр колоний, мм

S.fíexnerl 1а №8516

1,5 -

■ílíl

гЬ

s <•>

Е v»

8'Ь *

* о' Г-

ss & ? 5?|

+ п

V» в4

£ч |о СЧ <м

I &

О О)

+ ♦

3 §

II £ 8 С) о

5 | § с

О +

S.sonríe! S-form

S.aureus ВИОТКО

íl

S.aureus 209 P

íl

5 1

m í

з | i

<!> g í

§ *.

3 01

0 lo с | ? ! 515

1 í ♦ c g g

3 +

O +•

Щ 8

! I s

СМ Л

£ 8- 5 s

= " "й

o + o

« 5 §

П Г II

? + x з

3 3 3 f

O OI n ¿

♦ + ♦ s

4 ч S t с с с

0> +

•s 3

; э

Q. +

8 ♦

CM ?

m g

I 5

Рисунок 10. Изучение совместного действия ЭКД и экстрактов растений на рост микроорганизмов

Обозначения: по оси абсцисс - cocían жепериментальной пита1ельной среды

стимулировать рост избранных тест-штаммов. Как следует из представленных данных (рис. 10), экстракты из травы пастушьей сумки, хвоща и фиалки, а также семян льна и корней алтея оказывают дополнительное стимулирующее воздействие на изученные штаммы микроорганизмов, но не настолько ярко выраженное, как можно было бы ожидать. Исключение составлял лишь экстракт слоевищ морской капусты, который оказывал заметное, синергичное с ЭКД, стимулирующее влияние на рост шигелл и стафилококков. Другие экстракты, например, из листьев подорожника и мать-и-мачехи, цветков ромашки и травы тысячелистника оказывали ингибирующее действие.

Таким образом, коммерческое использование растительных экстрактов в настоящее время представляется несколько проблематичным, однако полученные результаты представляют несомненный теоретически и практический интерес и могут служит основанием для создания комплексного биостимулятора.

ВЫВОДЫ

1. Выявлены экстракты лекарственных растений, оказывающие выраженное стимулирующее влияние на рост изученных микроорганизмов: экстракты корней алтея, солодки, травы фиалки и пастушьей сумки, кукурузных столбиков с рыльцами, слоевищ ламинарии. Экспериментально подтверждено известное стимулирующее влияние экстрактов белокочанной капусты и топинамбура.

2. Впервые выявлено стимулирующее влияние экстрактов растений, содержащих витамин К, на рост изученных штаммов микроорганизмов. Эффект 0,25% экстрактов этих растений был эквиваленгеп влиянию синтетической) аналога витамина К - викасола в концентрации 15 мкг/л.

3. Аскорбиновая и никотиновая кислоты (витамины С и РР) в концентрации 0,2г/л питательной среды оказывали стимулирующее влияние на рост шигелл и стафилококков.

4. Биологически активные вещества, выделенные из лекарственных растений (полисахариды из пастушьей сумки, фиалки и морской капусты, флавоноиды из фиалки и зверобоя, глицирризиновая кислота из корня солодки) не оказывали стимулирующего влияния на рост тест-штаммов микроорганизмов в противоположность водным экстрактам этих растений.

5. Выявлено синергичное влияние комплексов из экстрактбв лекарственных растений: алтей-зверобой, алтей-шиповник, зверобой-календула, алтей-календула-череда, имеющих в составе действующие вещества, относящиеся к различным классам.

6. Экстракт из слоевищ ламинарии при добавлении в готовую питательную среду усиливает стимулирующее влияние ЭКД, являющегося источником витаминов группы В.

Список опубликованных работ

1. Баронец Н.Г., Адлова Г.П., Мельникова ВА. Влияние экстрактов лекарственных растений на рост микроорганизмов. Ж. микробиол., 2001. - №5. - с. 71-72.

2. Мельникова ВА.. Баронец Н.Г., Адлова Г.П.. Смирнова ГА Лекарственные растения как источник получения стимуляторов роста микроорганизмов. Матер. 3 Межд. научно-практич. конф. «Актуальные вопросы разработки и производства диагностических питательных сред и тестсистем». -Махачкала.-2001.-с. 18-19.

3. Баронец Н.Г. Стимуляторы роста микроорганизмов из лекарственных растений. Сб. докладов Юбилейной международной научно - практической конференции «Пищевые продукты XXI века». - М.. 2001. - т. 1. - с. 73 - 74.

4. Мельникова В.А., Баронец Н.Г., Адлова Г.П.- Особенности влияния экстрактов лекарственных растений на рост микроорганизмов. Матер. МП съезда всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. М. 2002.-т. 1.-е. 202.

5. Мельникова В.А.. Баронец Н.Г., Адлова Г.П. Биологически активные вещества из лекарственных растений как стимуляторы роста микроорганизмов. Матер. 4 Межд. научно-практич. конф., посвященной 50-летию НПО «Питательные среды» МЗ РФ «Разработки и стандартизация микробиологических питательных сред и тестсистем». Махачкала. - 2003. - с. 46.

6. Баронец Н.Г. Витамин К как стимулятор роста микроорганизмов // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 2003. № 4. С 104-105.

Принято к исполнению 18/08/2004 Исполнено 19/08/2004

Заказ № 284 Тираж: 100 экз.

ООО «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 Москва, Балаклавский пр-т, 20-2-93 (095)747-64-70 (095)318-40-68 www.autoreferat.ru

04-15241

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Баронец, Наталья Геннадьевна

ВВЕДЕНИЕ

ЧАСТЬ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. СТИМУЛЯТОРЫ РОСТА МИКРООРГАНИЗМОВ КАК

НЕЗАМЕНИМЫЕ КОМПОНЕНТЫ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД

Глава 2. ОБЩИЕ СВЕДЕНИЯ О ВЕЩЕСТВАХ, СОДЕРЖАЩИХСЯ В ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЯХ

2.1. Лекарственные растения как, источник стимуляторов роста микроорганизмов

2.2. Содержание действующих веществ в лекарственных растениях

Глава 3. ВЗАИМООТНОШЕНИЯ РАСТЕНИЙ И МИКРООРГАНИЗМОВ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Получение стимуляторов роста микроорганизмов из лекарственных растений"

Неблагоприятная эпидемиологическая обстановка в нашей стране вызывает потребность в качественных диагностических препаратах, в том числе, и в питательных средах. Основными компонентами питательных сред являются пептоны, однако, анализ рецептур микробиологических сред свидетельствует о необходимости введения в их состав стимуляторов роста, каковыми являются мясные и дрожжевые экстракты [84]. Стимулятор роста бактерий из кормовых дрожжей (ЭКД) значительно уступает по ростовым свойствам импортным экстрактам из пекарских или пивных дрожжей и не может быть использован для изготовления иммунопрепаратов. Отечественные производители медицинских иммунобиологических препаратов испытывают постоянный дефицит мясных и дрожжевых экстрактов и часто вынуждены закупать дорогостоящие импортные препараты.

В последние годы значительно возрос интерес исследователей к стимуляторам роста в связи с открытием некультивируемых форм микроорганизмов и необходимостью их рекультивации [114, 115], выявлены новые стимуляторы роста микроорганизмов [183, 184] и новые классы соединений, работающие по принципу автоиндукторов и регулирующие социальное поведение бактерий [23].

Повышенный интерес к стимуляторам роста микроорганизмов заставил нас обратить внимание на высшие растения, специфическая особенность которых состоит в том, что они способны синтезировать огромное количество самых разнообразных химических соединений различной природы, относящихся к различным классам. Многие из них являются биологически активными и оказывают глубокое воздействие на живую клетку.

Среди биологически активных веществ (БАВ), синтезируемых и накапливаемых растениями, известны такие классы природных соединений, как алкалоиды, терпеноиды, фенольные соедииения и их гликозиды, полисахариды, витамины и минеральные вещества, которые могут оказывать стимулирующее влияние на рост микроорганизмов. Так, выявлено стимулирующее влияние листьев душицы на кислотообразование Lactobacillus plantarum и инг ибирующее влияние листьев и масла душицы на рост и кислотообразование Leuconostoc mesenteroides [177].

Исследованиями, выполненными в НИИВС им. И.И.Мечникова, покачано, что экстракты травы душицы, листьев осины и липы оказывают стимулирующий эффект на рост бактерий. При выяснении действующего начала стимулятора из травы душицы установлено, экстракт душицы разделялся на 3 фракции, при этом наилучший стимулирующий эффект проявляла фракция III, в концентрации 0,001%. В составе этой фракции выявлены фенолы, флавоноиды, фенолкарбоновые и жирные кислоты [2]. Полученные авторами данные позволяют предположить возможность выделения из растительного сырья сильнодействующих стимуляторов и ингибиторов роста микроорганизмов, влияние которых проявляется в очень малых концентрациях.

Цель и задачи исследования

Задачи исследования:

1. По данным литературы провести отбор лекарственных растений, содержащих химические соединения, которые могут служить стимуляторами роста микроорганизмов.

2. Получить водные экстракты отобранных растений.

3. Изучить влияние полученных экстрактов на рост избранных штаммов микроорганизмов.

6. Определить действующее начало стимуляторов роста из лекарственных растений.

Научная новизна работы

Впервые экспериментально доказано стимулирующее влияние экстрактов растений, содержащих витамин К, на рост микроорганизмов. Эффект 0,25% экстрактов этих растений эквивалентен влиянию синтетического аналога витамина К - викасола в концентрации 15мкг/л. Синтетические витамины С и РР в концентрации 0,2г/л стимулировали рост шигелл и стафилококков.

Выявлены экстракты лекарственных и используемых в пищу растений, оказывающих заметное стимулирующее влияние на рост шигелл, стафилококков, S.gallinarum 665, S.pyogenes Dick 1, С.xerosis 1911 и С.albicans NCTC 885-653. Это экстракты из корней алтея и солодки, травы пастушьей сумки и фиалки, столбиков с рыльцами кукурузы, слоевищ морской капусты, белокочанной капусты и топинамбура.

Экстракты из листьев толокнянки, сенны и зеленого чая, березовых почек и корневищ лапчатки ингибировали рост изученных тест-штаммов микроорганизмов.

Установлено, что биологически активные вещества, выделенные из лекарственных растений (полисахариды из пастушьей сумки, фиалки и морской капусты, флавоноиды из фиалки и зверобоя, глицирризиновая кислота из корпя солодки) не оказывали стимулирующего влияния на рост изученных микроорганизмов в противоположность водным экстрактам этих растений.

Практическая значимость

Выявленное синергичное влияние нескольких экстрактов лекарственных растений с разными действующими веществами открывает перспективу создания комплексного стимулятора роста бактерий для бактериологических питательных сред.

Выявлен экстракт лекарственного растения (слоевища ламинарии), которые улучшают качество питательных сред с низкими ростовыми свойствами. Добавление этого экстракта усиливает стимулирующее влияние ЭКД, являющегося признанным источником витаминов группы В.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Экстракты из корней алтея и солодки, травы пастушьей сумки и фиалки, столбиков с рыльцами кукурузы, слоевищ морской капусты, белокочанной капусты и топинамбура стимулируют рост всех изученных микроорганизмов.

2. Синтетический аналог витамина К - викасол в концентрации 15мкг/л и синтетические витамины С и РР в концентрации 0,2г/л стимулируют рост изученных штаммов шигелл и стафилококков.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Баронец, Наталья Геннадьевна

выводы

1. Выявлены экстракты лекарственных растений, оказывающие выраженное стимулирующее влияние на рост изученных микроорганизмов: экстракты корней алтея, солодки, правы фиалки и пастушьей сумки, кукурузных столбиков с рыльцами, слоевищ ламинарии.

Экспериментально подтверждено известное стимулирующее влияние экстрактов белокочанной капусты и топинамбура.

2. Впервые выявлено стимулирующее влияние экстрактов растений, содержащих витамин К, на рост изученных штаммов микроорганизмов. Эффект 0,25% экстрактов этих растений был эквивалентен влиянию синтетического аналога витамина К - викасола в концентрации 15 мкг/л.

3. Аскорбиновая и никотиновая кислоты (витамины С и РР) в концентрации 0,2 г/л питательной среды оказывали стимулирующее влияние на рост шигелл и стафилококков.

5. Выявлено синергичное влияние комплексов из экстрактов лекарственных растений: алтей-зверобой, алтей-шиповник, зверобой-календула, алтей-календула-череда, имеющих в составе действующие вещества, относящиеся к различным классам.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В связи с неблагоприятной эпидемиологической обстановкой, в стране возросла потребность в иммунопрофилактических препаратах. Соответственно, возросла потребность в производстве недорогих и качественных питательных сред, изготавливаемых на основе отечественного непищевого сырья. Единственным в стране коммерческим стимулятором роста микроорганизмов для питательных сред является экстракт кормовых дрожжей (ЭКД), который имеет ряд недостатков [84].

Питательные среды, производимые Государственным научным центром прикладной микробиологии, г.Оболенск Московской обл., имеют в своем составе дрожжевой экстракт Yeast Extract 64343, производства Sanofi Diagnostics Pasteur (Франция). Стоимость этих питательных сред делает возможным их использование только в диагностических целях. Такая ситуация заставляет искать новые, более эффективные, доступные и более дешевые источники сырья для производства питательных сред, в особенности сред для микробиологических производств.

В последние годы наблюдается повышенный интерес исследователей к поиску новых высокоэффективных стимуляторов роста микроорганизмов. Он вызван открытием некультивируемых форм и необходимостью их рекультивации, что, в свою очередь, способствовало выявлению нового класса стимуляторов роста микроорганизмов, в том числе, действующих по принципу автоиндукторов [114, 115, 183, 184].

Учитывая данные литературы о структурных и функциональных связях растений и микроорганизмов [76, 130, 142], мы обратили наше внимание на лекарственные растения, как источники биологически активных веществ (БАВ), способных оказывать глубокое воздействие на живую клетку.

Растения синтезируют различные биологически активные соединения: полисахариды, алкалоиды, гликозиды, сапонины, эфирные масла, органические кислоты и витамины, которые могут оказывать стимулирующее влияние на рост микроорганизмов. Ранее исследователями было проведено изучение влияния экстрактов лекарственных растений на рост микроорганизмов. Так, выявлено стимулирующее влияние листьев душицы на кислотообразование Lactobacillus plantarum и ингибирующее влияние листьев и масла душицы на рост и кислотообразование Leuconostoc mesenteroides [177]. Исследованиями [2] показано, что экстракты травы душицы, листьев осины и липы оказывают стимулирующий эффект на рост бактерий. Полученные авторами данные позволили предположить возможность выделения из растительного сырья сильнодействующих стимуляторов и ингибиторов роста микроорганизмов.

Таким образом, так как высшие растения синтезируют химические соединения, являющиеся известными природными стимуляторами роста, и, кроме того, они доступны в качестве сырьевой базы, представлялось перспективным продолжить поиск стимуляторов • роста растительного происхождения.

В результате выполненной работы выявлены экстракты лекарственных растений, оказывающих яркое стимулирующее влияние на рост избранных тест-штаммов микроорганизмов: слоевища морской капусты, трава пастушьей сумки, фиалки, зверобоя и хвоща, семена льна, корни алтея и солодки, столбики с рыльцами кукурузы, молодые побеги белокочанной капусты, цветки календулы.

Ингибиторами роста являлись экстракты из листьев облепихи, зеленого чая, толокнянки и мяты, а также березовых почек и корневищ лапчатки.

Экстракты некоторых лекарственных растений оказывали двойственное влияние на рост микроорганизмов: для одних тест-штаммов экстракты являлись стимуляторами роста, для других - ингибиторами. Это эксзракты из листьев подорожника, крапивы, мать-и-мачехи, травы череды, чабреца, тысячелистника и спорыша, цветков эхинацеи.

Микроорганизмы, выращиваемые на питательных средах с экстрактами лекарственных растений, сохраняли свои основные биологические свойства. Колонии шигелл и сальмонелл вырастали в S-форме с ровным краем, стафилококки образовывали ярко-желтый (S. aureus 209 Р) или лимонно-желтый (S. aureus «ВИОТКО») пигмент, S. pyogenes Dick 1 в бульоне образует придонпо - пристеночный рост, а С. xerosis 1911 обеспечивает диффузное помутнение среды.

Аналогичные результаты получены при изучении таких употребляемых в пищу растений, как топинамбур, рябина, жимолость, кукуруза. Оказалось, что наиболее пригодными для получения экстрактов частями растения топинамбур являются клубни и стебель, причем наилучшими ростовыми свойствами обладали экстракты топинамбура из стеблей, собранных в июне месяце; очевидно, по данным [7, 99] это связано с сезонной динамикой накопления биологически активных веществ в растении.

Рябина обыкновенная привлекла наше внимание, поскольку она содержит органические кислоты, в том числе аскорбиновую, яблочную, лимонную, винную, сорбиновую и парасорбиновую, витамины К, А, Р и др., глюкозу, сорбозу, сорбит, маннит, фосфолипиды, фенолкарбоновые кислоты и др. Рябина черноплодная или арония содержит сахара, органические кислоты, в том числе, яблочную, пектиновые и дубильные вещества, каротин, витамины В|, В2, С, Е, РР [78].

Кукуруза представляет собой ценную продовольственную культуру. Широко используется для приготовления кукурузного экстракта, являющегося компонентов питательных сред в производстве антибиотиков [5].

Изучали также экстракты из листьев хрена, а также листьев и плодов жимолости, поскольку эти растения не включены в список лекарственных. В доступной нам литературе мы не нашли о них упоминания. По данным [124] плоды жимолости синеплодной содержат аскорбиновой кислоты 1()0мг/100г, органических кислот 2-3%, а также вещества, обладающие Р-витаминной активностью. Листья хрена, по данным [117] содержат 143,7мг% витамина С.

Выявлено, что экстракты из молодых листьев хрена, плодов жимолости, черноплодной и обыкновенной рябины и зерен кукурузы оказывали заметное стимулирующее влияние на рост шигелл. Рост стафилококков заметно стимулировался экстрактами зерен кукурузы и незначительно - экстрактами из плодов аронии и рябины обыкновенной.

Таким образом, в результате исследований выявлено стимулирующее влияние на рост шигелл такого непризнанного лекарственным растения как молодые листья хрена. Экстракт из листьев хрена также стимулировал рост S.pyogenes Dick 1 и C.xerosis 191 /, но не стимулировал рост С.albicans АТСС. 885/653. Хорошими стимуляторами шигелл признаны плоды жимолости, рябины обыкновенной, аронии и зерен кукурузы. Экстракт из зерен кукурузы ярко стимулировал рост стафилококков.

Анализируя полученные результаты, мы обратили внимание на то, что экстракты, обладающие выраженными стимулирующими свойствами по отношению к микроорганизмам, обладают определенным набором БАВ. Так, морская капуста, экстракты которой наиболее ярко стимулировали рост шигелл и стафилококков, богата (3-каротииом, витаминами (А, В2, В^, В(„ Bi2, С, Е и Д), биологически активными соединениями, макро- и микроэлементами [97, 149].

Стимулирующее влияние экстрактов из корня алтея определяется, на наш взгляд, содержанием в нем нейтральных полисахаридов, органических кислот, витамина С; корней солодки - содержанием глицирризиновой, фенолкарбоновых и органических кислот; травы фиалки - витаминов С, Р; травы хвоща, спорыша, череды и пастушьей сумки, листьев подорожника и крапивы, столбиков с рыльцами кукурузы и молодых побегов белокочанной капусты -витамина К [78].

Как оказалось, наиболее выраженный стимулирующий эффект на рост тест-штаммов шигелл и сальмонелл оказывали: экстракт пастушьей сумки в концентрации 0,25% по сухому веществу, экстракт столбиков с рыльцами кукурузы (0,5%) и экстракт молодых побегов капусты (0,25%). Такое же стимулирующее влияние оказывал и синтетический аналог витамина К в концентрации 15 мкг/мл.

Однако экстракты других растений, содержащих витамин К, оказывали менее выраженное стимулирующее влияние на рост шигелл и сальмонелл.

Анализ данных литературы показал, что в столбиках с рыльцами ку курузы помимо витамина К обнаружены витамины С, В2, В6, паптотеновая кислота, флавоноиды, органические кислоты, в капусте - витамины С (около 50мг%), Р (до 210мг%), В| (0,25мг%), В2, фолиевая кислота, токоферолы (витамин Е), никотиновая кислота, каротиноиды, аминокислоты, гликозиды, минеральные вещества, в то время как в крапиве - белки, органические кислоты, в т.ч. аскорбиновая, гликозид уртицин, пантотеиовая кислота, гистамин, соли железа, в тысячелистнике, коре калины и спорыше - аскорбиновая кислота, каротин, органические кислоты. Таким образом, эти растения беднее по содержанию БАВ, чем, столбики с рыльцами кукурузы, пастушья сумка, капуста [61, 72, 83].

Представлялось необходимым изучить также влияние экстрактов лекарственных растений, содержащих витамин К, на рост тест-штаммов микроорганизмов, принадлежащих к другим семействам. Установлено, что жизнедеятельность стафилококков активируется экстрактами пастушьей сумки(0,25%) и молодых побегов капусты.

Что касается влияния экстрактов, содержащих витамин К, на рост дрожжеподобного гриба C.albicans NCTC 885-653, то рост этого микроорганизма стимулировался экстрактами столбиков с рыльцами кукурузы, травы спорыша и пастушьей сумки и молодых побегов капусты. При этом'оказалось, что экстракт травы тысячелистника, содержащий витамин К, активировал рост C.albicans NCTC 885-653 так же, как и экстракт травы фиалки, не содержащий этого витамина, или смесь 0,1% экстрактов травы тысячелистника и фиалки. Стимулирующий эффект растительных экстрактов не отличается от такового, вызванного витаминсодержащим ЭКД и синтетическим аналогом витамина К -викасолом.

Исследования показали, что активацию роста требовательных штаммов S. pyogenes Dick 1 и С. xerosis 1911 обеспечивали только водные экстракты пастушьей сумки и молодых побегов капусты. Экстракты коры калины и зеленого чая незначительно стимулировали рост стрептококка, а экстракты травы спорыша и коры калины - рост С. xerosis 1911.

В целом можно сказать о благоприятном влиянии аскорбиновой и никотиновой кислот на рост изученных штаммов микроорганизмов. Витамины С и РР оказывали на рост шигелл и стафилококков практически такое же влияние, как коммерческий витаминный препарат ЭКД. Особенно обращает на себя внимание факт яркой стимуляции никотиновой кислотой роста такого гест-штамма, как S. sonnei «S-form».

Анализ литературных данных показал, что действующими веществами растений, оказывающих яркое стимулирующее • влияние на рост микроорганизмов, являются полисахариды, флавоноиды, витамины, органические кислоты. Многие из этих веществ, будучи выделенными из растений, предположительно могли бы оказывать стимулирующее влияние на рост микроорганизмов. В связи с этим, были выделены и изучены флавоноиды из фиалки и зверобоя, полисахариды из фиалки, пастушьей сумки, морской капусты и алтея, а также глицирризиновая кислота из корня солодки. В качестве аналога биофлавоноида и витамина РР использовали государственный стандартный образец рутин.

Показано, что наиболее заметное стимулирующее влияние оказывал полисахарид пастушьей сумки на рост стафилококков; однако он оказывал слабое стимулирующее влияние на рост шигелл и не стимулировал рост S. gallinarum 665. Небольшое стимулирующее влияние на рост шигелл оказывала глицирризиновая кислота, однако она не стимулировала рост стафилококков. Полисахарид фиалки оказывал небольшое стимулирующее действие только на рост одного штамма стафилококков - S. aureus 209-Р. Полисахариды алтея и морской капусты, рутин и флавоноиды фиалки и зверобоя не оказывали стимулирующего влияния на рост изученных микроорганизмов.

Таким образом, оказалось, что биологически активные вещества, выделенные из лекарственных растений и взятые по отдельности, не оказывали, за редким исключением, как, например, полисахарид пастушьей сумки, стимулирующего влияния на рост изученных микроорганизмов. Этот факт позволил сделать вывод, что весь комплекс биологически активных веществ. содержащихся в таких лекарственных растениях, как трава пастушьей сумки и фиалки, корни алтея и солодки, оказывает стимулирующее влияние на рост изученных штаммов шигелл и стафилококков.

Полученные нами экспериментальные данные полностью согласуются с мнением ученых о поливалептности растений или о «плавающей» валентности, эффект которой является одним из принципиальных вопросов, связанных с суждением о механизме действия лекарственных растений [61]. Авторы считают, что лекарственные растения действуют на молекулярном уровне, а не по принципу широко известного мнения, ставшего практически парадигмой: лекарственные растения обладают целебными свойствами благодаря содержанию в них действующих (антимикробных) веществ.

Наши данные о стимулирующем влиянии экстрактов лекарственных растений на рост микроорганизмов опровергают мнение о стимулирующем влиянии выделенных из них БАВ. Растения действуют всем комплексом извлекаемых из них компонентов.

Полученные экспериментальные данные о стимулирующем влиянии па рост микроорганизмов экстрактов из лекарственных и употребляемых в пищу растений позволил нам высказать предположение о возможности создания комплексного стимулятора бактериального роста. Поскольку каждый из выбранных нами в качестве биостимулятора экстрактов имел, по данным литературы, разные действующие начала, мы полагали, что их стимулирующее действие будет суммироваться, если использовать их совместно.

Нами выявлено, что, стимулирующее действие экстракта корней алтея усиливало добавление экстрактов из плодов шиповника, травы зверобоя и цветков календулы. Экстракт корней алтея в сочетании с экстрактом листьев сенны стимулировал рост C.albicans NCTC 885-653, но не шигелл. В то же время, действие экстрактов корней алтея и солодки не суммировалось, но экстракт из корней солодки в сочетании с экстрактом травы спорыша заметно стимулировал рост стафилококков. Наибольшее стимулирующее действие на рост C.albicans NCTC 885-653 оказывал комплексный стимулятор, состоящий из экстрактов корней алтея, цветков календулы и травы череды.

Другим аспектом исследования явился поиск ответа на вопрос, будут ли экстракты из растений, добавленные к питательным средам, содержащим коммерческий стимулятор роста ЭКД как источник витаминов группы В, стимулировать рост избранных тсст-штаммов. Показано, что, экстракты из травы пастушьей сумки, хвоща и фиалки, а также семян льна и корней алтея оказывали дополнительное стимулирующее воздействие на изученные штаммы микроорганизмов, но не настолько яркое, как можно было бы ожидать. Исключение составлял лишь экстракт слоевищ морской капусты, который оказывал заметное, синергичное с ЭКД, стимулирующее влияние на рост шигелл и стафилококков.

Другие экстракты, например, из листьев подорожника и мать-и-мачехи, цветков ромашки и травы тысячелистника оказывали ингибирующее действие.

Таким образом, коммерческое использование растительных экстрактов в настоящее время представляется несколько проблематичным, однако полученные результаты представляют несомненный теоретический и практический интерес и могут служить основанием для создания комплексного биостимулятора.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Баронец, Наталья Геннадьевна, Москва

1. Абу Дарвиш М., Журавлев Н.С., Павлий А.И. Химическое изучение коры жостера обыкновенного. Матер. Междунар. совещания «Физиолого - биохимические аспекты изучения лекарственных растений». - Новосибирск, 1998., с.6

2. Адлова Г.П. и соавт. Разработка стимуляторов роста бактерий из растений. -Ж. микробиол., 1998,№1 с. 13-17

3. Айзенман Б.Е, Смирнов В.В, Бондаренко А.С. Фитонциды и антибиотики высших растений. Киев: Наук, думка, 1984.

4. Амосов А.С., Литвиненко В.И. Фенольные соединения родов Glycyrrhiza L. и Meristotropis Fisch. et Меу. Сообщ.1/// раст.ресурсы.-1995.-т.31, вып.З.-c.l 16-136. (обзор: солодка, раздельнолодочник)

5. Андреева С.М. Ячменные проростки как источник веществ, влияющих на синтез некоторых биологически активных соединений микроорганизмами.: Автореферат дис. на соискание ученой степени канд. биол. наук. Л., 1969.

6. Аникина Е.В. Физико-химическая характеристика экстрактов из некоторых видов лекарственных растений как пищевых добавок. Растительные ресурсы, 1996 Т. 32, в.4, с.30-35.

7. Бадмаев П. Основы врачебной науки Тибета жуд-ши. М., Наука, 1991. 159с. (Репринтное воспроизведение издания «Главного руководства по врачебной науке жуд-ши» 1903).

8. Беззубов А.А., Гесслер Н.Н. Растительные источники S-мегилметионина// Прикл. биохимия и микробиология. 1992. -т.28, вып.З, - с.423-429.

9. Белоусова Н.И. Состав жирных масел багульников флоры Сибири и Российского Дальнего Востока: Автореф. дис. канд. хим. наук/ Новосибирский и-т биоорганической химии СО РАН. Новосибирск, 1996.-21с.

10. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. М.: Медицина, 1998.704с.

11. Блинкова Л.П., Горобец О.Б., Батуро А.Г1. Изучение иигибирующих и стимулирующих веществ, обнаруженных у водорослей // Матер. VIII Всеросс. съезда эпидемиол., микрпобиол. и паразитол.: Т.1.-М., 2002, с. 138.

12. Блинкова Л.П., Горобец О.Б., Батуро А.П. Предпосылки создания питательных сред для выявления нскультивируемых форм микроорганизмов // Матер. 3-й Междунар. науч.-практич. конференции. Махачкала, 2001. с.85.

13. Бобейкэ В.А., Лупашку Г.А.,Дикусарэ И.П.,Кинтя П.К. Фитогормоноподобная активность стероидных гликозидов в связи с их химическим строением.//Физиология и биохимия культурных растений.-1995.-т.27, №4.-с.259-268.

14. Болотова В.Ц., Сакаян Е.И., Лесносовская Е.Е., Пастушенков Л.В. Спектрофотометрический метод определения содержания полисахаридов в листьях Tilia cordata Mill. // Раст. Ресурсы. 2001. - 37, №3. - с. 109-112.

15. Большая медицинская энциклопедия. Том 4. Издание 3. М., «Советская энциклопедия», 1976.

16. Валягина Е.Т., Малютина А.И. Лекарственные растения СПб.: Специальная литература, 1996. -425 с.

17. Веревкина М.Н. Микробный и биохимический состав стимулятора роста микроорганизмов ТС-1./ Диагностика, лечение и профилактика заболеваний с.-х. животных. Ставрополь, 1997.

18. Веревкина М.Н. Эффективность использования стимулятора роста микроорганизмов ТС-1 в зависимости от сроков его получения // Диагностика, лечение и профилактика заболеваний с.-х. животных. Ставрополь, 1996 (1997), с. 1921.

19. Георгиевский В.П., Комиссаренко Н.Ф., Дмитрук С.Е. Биологически активные вещества лекарственных растений. Новосибирск: «Наука» Сибирское отделение, 1990. - 336с.

20. Гесслер Н.Н., Беззубов А.А., Подлепа Е.М., Быховский В.Я. Метаболизм S-метилметионина (витамина U) в растениях.// Прикл. биохимия и микробиология. -1991. ill, вып.2, - с.246-254.

21. Гинцбург А.Л., Ильина Т.С., Романова Ю.М. «Quorum sensing» или социальное поведение бактерий.// Ж. микробиол., 2003, №5, с.86-93.

22. Головкина М.Т., Новотелыюв Н.В. Синергизм аскорбиновой кислоты и биофлавоноидов и пути его практического использования. // Микроорганизмы и зеленое растение. Сб. статей. Отв. ред. д.б.н. проф. Вернер А.Р. - Новосибирск: Наука, 1967.-с. 122-130.

23. Головко Э.А. Физиолого-биохимические основы взаимодействия высших растений и микроорганизмов в естественных и искусственных экосистемах: Автореф. дис.к.б.н. Киев, 1985.

24. Государственная Фармакопея СССР. 10-е изд./МЗ СССР.-.М.: Медицина,1978.

25. Голубинская Н.С. Микориза древесных растений.// Структурные и функциональные связи высших растений и микроорганизмов. Сб. трудов. Отв. ред. Яковлева З.М. - Новосибирск: Наука. Сибирское отделение, 1977. - с.56-68.

26. Голышин П.Н. Экологическая роль растительных эксудатов во взаимодействии растений и микроорганизмов.: Автореф. дис.к.б.п./ МГУ им. М.В.Ломоносова. Фак. почвоведения. М., 1991.

27. Горлов И.Ф., Юрина О.С. Некоторые данные по количественному составу биологически активных веществ солодкового корня. // Совершенствование технологий производства и переработки с.-х. продукции в соврем, условиях. -Волгоград, 1999, -с.173-175.

28. Государственная Фармакопея СССР: Выпуск 1. Общие методы анализа / МЗ СССР.-11-е изд.,доп.- М.: Медицина, 1987.-336с.

29. Государственная Фармакопея СССР: Выпуск 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР.-11-е изд., доп.- М.: Медицина. 1987.-336с.

30. Гранкина В.П. Солодка уральская источник дубильных веществ// Изучение и использование солодки в народном хозяйстве СССР.- Алма-Ата, 1991.-с.121.

31. Грачева И.М., Гаврилова Н.Н., Иванова Л.А. Технология микробных белковых препаратов, аминокислот и жиров. -М.: Пищевая промышленность, 1980. -448 с.

32. Громова Л.И. К вопросу о наличии биологически активных веществ в некоторых растениях Дальнего Востока и Северного Кавказа.: Автореф дис. на соиск. учен, степени к.б.н. Ставрополь, 1973.

33. Гулин В.И., Боуман М.К., Диканов С.А., Цветков Ю.Д. / Анизотропия g-тензора радикалов витамина К|. Сравнение с акцептором электрона А| в фотосистеме I зеленых растений. // Докл. АН СССР. 1991. Т.318, №5. с. 1246-1249.

34. Даниленко В., Машанов В.И. Эрва шерстистая' источник уникальных гликозидов. Матер. Междунар. совещания «Физиолого - биохимические аспекты изучения лекарственных растений». - Новосибирск, 1998., с.23.

35. Делова Г.В., Родюкова Е.Н., Макаренко Н.Г. Чувствительность синегнойной палочки к фитонцидам некоторых растений.// Микроорганизмы и зеленое растение. Сб. статей. Отв. ред. д.б.н. проф. Вернер А.Р. - Новосибирск: Наука, 1967.-с.81-89.

36. Дмитриева В.А., Дмитриев В.В. Русско-английский словарь терминов по микробиологии/ АН СССР. Ин-т биохимии и физиологии микроорганизмов. М.: Наука, 1991.-24 8с.

37. Доморадский И.В. Некоторые проблемы адаптации патогенных бактерий в окружающей среде. // ЖМЭИ 1997. - №4. - с.31-35.

38. Дощанова Б.К. Поиск ингибиторов и стимуляторов роста микроорганизмов среди полусинтетических препаратов па основе растительных соединений. / Автореф. дис. .к.б.п. Алма-Ата. 1989. -43с.

39. Блинов Н.П. Химическая микробиология. М.: Высш. шк., 1989.-448с.

40. Ельчинова О.А., Горюиова Т.А. Микроэлементы биофилы в лекарственных растениях горного Алтая. Матер. Междунар. совещания «Физиолого -биохимические аспекты изучения лекарственных растений». - Новосибирск, 1998., с.24.

41. Еременко Л.Л. Содержание флавоноидов в календуле лекарственной при интродукции. Матер. Междунар. совещания «Физиолого биохимические аспекты изучения лекарственных растений». - Новосибирск, 1998., с.25.

42. Ефимов Е.И., Белова И.В., Соколова К.Я., Соловьева И.В., Конькова Н.К., Иванова Т.П., Мочалова А.Г. Новая питательная среда для культивирования лакто- и бифидобактерий // Матер. 4-й Междунар. науч.-практич. конференции. Махачкала, 2003.-c.22.

43. Задорожный A.M., Кошкин А.Г., Соколов С.Я., Шретер А.И. Справочник по лекарственным растениям. М.: Лесн. пром-ть, 1988. - 415с.

44. Зайцев В.В., Зелютков Ю.Г. Использование биостимулятора при культивировании микробов./ Мат. междунар. науч.-практ. конф. «проблемы патологии. Санитарии и бесплодия в животноводстве». Минск, 1998.

45. Звягинцев Д.Г. Добровольская Т.Г., Лысак Л.В. Растения как центры формирования бактериальных сообществ. // Журн. общ. биологии. 1993. - т.54, №2. -с. 183-200.

46. Ивасенко С.А., Прибыткова Л.Н., Адекенов С.М.; Ющенко Н.С., Бондарец В.Г. Содержание каротиноидов и флавоноидов в соцветиях некоторых сортов Calendula officinalis L. (календула лекарственная).// Раст.ресурсы, 2000, т.36, вын.2, с.107-110.

47. Ивахно С.Ю., Голованова Л.В., Станиловская Е.В., Кулешова Л.Н. Выделение алкалоидов из чистотела большого. // Науч.тр. НИИ Фармации мин-ва здравоохранения и мед. нром-ти РФ.-1995.-т.34.-с.184-189.

48. Ивашин Д.С., Катина З.Ф., Рыбачук И.З., и др. Справочник по заготовкам лекарственных растений. Киев: Урожай, 1989.

49. Путинская Г.А., Пономарснко С.П., Серая Л.И., Малова В.В. Влияние биостимуляторов и фунгицидов на параметры роста естественных ассоциаций почвенных микроорганизмов. /Мкробюл .журн., 2000, Т.62, №3.

50. Йорданов Д., Николов П., Бойчинов АСП. Фитотерапия. София: Медицина и физкультура, 1969.

51. Карнаухов В.Н. Биологические функции каротиноидов/ Отв. ред. Бурштейн Э.А.; АН СССР. Ин-т биол.физики.-М.: Наука, 1988.-241с.

52. Киселева А.В., Волхонская Т.А., Киселев В.Е. Биологически активные вещества лекарственных растений Южной Сибири. Новосибирск: «Наука». Сибирское отделение, 1991.

53. Клышев П.К., Нурахов Д.Б., Умирбаева К.Ж. Микробиологическое окисление анабазина. Алма-Ата, «Наука», 1997.-96с.

54. Ковалев П.А. Роль фитогормонов во взаимодействии высших растений и микроорганизмов.-Изв. АН Молдавской ССР. Сер. биол и хим. наук, 1983, №2, с. 1318.

55. Кокурин Н.Л. Элементарный состав льна-долгунца критерий качества сырья для производства белковых концентратов// Современные достижения биотехнологии.- Ставрополь, 1996.-е. 14-15.

56. Колесников М.П., Гинс В.К. Фенольные соединения в лекарственных растениях.// Прикл. биохимия и микробиол., 2001, т.37, №4, с.457-465.

57. Колесников М.П., Гинс В.К. Формы кремния в лекарственных растениях.// Прикл. биохимия и микробиол., 2001, т.37, №5, с.616-620.

58. Колесова В.Г., Марченко В.А., Сыровежко Н.В. лекарственные растения: мифы и реальность. Традиционная (народная) медицина в объективе науки. СПб.: СПХФА, 1998.-261с.

59. Колпаков Л.И., Бондаренко В.М., Куприянова-Ашина Ф.Г., Егоров С.Ю. стимулирующее действие экзогенной РНКазы на эубиогические штаммы лактобацилл, бифидобактерий и Escherichia coli И Ж. микробиол., 1996, №4, с. 14-18.

60. Комиссаренко А.Н., Точкова Т.В. Биологически активные вещества листьев Arctostaphylos uva-ursi (L.) Spreng. и их количественное содержание// Расг. ресурсы.-1995.-Т.31, вып.1.-с.37-44.

61. Коновалов Д.А., Старых В.В., Шхануков Ю.Ж. Фитотоксическая и антифунгальная активность суммы лактоиов Artemisia taurica Willd. // Раст. ресурсы, том 38, вып.З, 2002.

62. Кретович B.JI. Основы биохимии растений М.: Высш. шк., 1980. 445с.

63. Кузнецова М.А., Рыбачук И.З. Фармакогнозия: Учебник. 2-е изд. - М.: Медицина, 1993.-448с.

64. Кузьмина С.С., Попова А.С. содержание рутина в растениях центральной Якутии. // Теоретич. и прикладные проблемы охраны генофонда и обогащения биоразнообразия: Тез. докл. регион, науч. конференции. Якутск, 1997. - с. 106.

65. Ларина Т.В., Гесслер Н.Н. Физиологическая роль S-метилметионина в кочанах капусты белокочанной при хранении// Физиология растений.-1994.-т.41. №3,-с.409-414.

66. Лебедев В.И. Химический состав рода Plantago (подорожник) // Изыскание новых биологически активных веществ в лекарственных растениях флоры Дальнего Востока. Сб. науч. трудов. Хабаровск, 1984. - с. 77-86.

67. Лекарственные растения государственной фармакопеи. Фармакогнозия. -под. ред проф Самылиной И.А., проф. Северцева М.: 1999г.

68. Лимитирование и ингибирование микробиологических процессов. Сб. статей: Отв. ред. В.К.Ерошин.-Пущино, 1980.-178с.

69. Литвин В.Ю. Механизмы длительной резервации патогенных бакгерий в почвах и водоемах природных очагов инфекций. // Материалы VIII Всерос. съезда эпид, микроб, и паразитол.: М., 2002. Т. 1. - с. 355.

70. Литвин В.Ю. Механизмы устойчивого сохранения возбудителя чумы в окружающей среде (новые факты и гипотезы). // ЖМЭИ 1997. - №4. - с.26-31.

71. Литвин В.Ю., Емельяненко Е.Н., Пушкарева В.И. Патогенные бакгерии, общие для человека и растений: проблема и факты.// ЖМЭИ -1996. №2. - с. 101-104.

72. Литвиненко В.И., Попова II.В., Кожух И.А. Химическое изучение бадана толстолистного. Матер. Междунар. совещания «Физиолого биохимические аспекты изучения лекарственных растений». - Новосибирск, 1998., с.36.

73. Ловкова М.Я., Рабинович A.M., Пономарева С.М. и др. Почему растения лечат. М.: Наука, 1990. - 256с.

74. Ловкова М.Я., Соколова С.М.,Бузук Г.Н. и др. Избирательное накопление элементов растениями, синтезирующими сапонины// Прикл. биохимия и микробиология,-1 997.-t.33, №6.-с.635-642.

75. Лукьянова Л.М., Политова Н.Ю., Локтева Т.Н., Булычева Т.М. Содержание белка в растениях Хибинских гор.// Раст. ресурсы, 1989.-t.25, №8.-с.393-398.

76. Майстренко Г.Г. Симбиоз у небобовых древесных растений на примере облепихи.// Структурные и функциональные связи высших растений и микроорганизмов. Сб. трудов. Отв. ред. Яковлева З.М. - Новосибирск: Наука. Сибирское отделение, 1977. - с. 17-34.

77. Максимова Г.Н. Интенсификация роста дрожжей с использованием биостимуляторов./ Мат. междунар. науч. конф. «Биотехнология на рубеже 2 тысячелетий». Саранск, 2001.

78. Машковский М.Д. Лекарственные средства. М.: Медицина, 1988. т. 1 624с.; т.2, 575с.

79. Меджидов М.М. Справочник по микробиологическим питательным средам. М.: Медицина, 2003.

80. Медицинская микробиология/ Гл. ред. В.И. Покровский, O.K. Поздеев -М.: ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 1999.

81. Методические указания по применению физико-химических методов контроля питательных сред. М., 1977.

82. Методы общей бактериологии. Т. 1-3. Под ред. Ф. Герхардта. М.: Мир,1983.

83. Методические рекомендации по контролю • питательных сред по биологическим показателям. МЗ СССР, 1980.

84. Микробиология и биохимия разложения растительных материалов: Сб. ст./АН СССР. Ин-т биохимии и физиологии микроорганизмов. Отв. ред. Г.К.Скрябин и др.- М.: Наука, 1988.-334с.

85. Микроорганизмы и высшие растения.: Сб. статей/ Казан, ин-т биологии. Отв. ред. С.М.Самсонова.- Казань, 1978.-97с.

86. Мир растений. Т. 1-7. Под ред. Тахтаджяна А.Л. М.: Просвещение, 1991.

87. Мишин Л.Т., Грущенко М.М. Линолевая кислота как стимулятор роста термотолерантных дрожжей// Изв. акад. наук Беларуси. Серия биологических наук. 1994, №4.

88. Мишустин Е.Н., Емцев В.Т. Микробиология. М.: Колос, 1978.

89. Мосичев М.С., Складнев А.А., Котов В.Б. Общая технология микробиологических производств-М.: Легкая и пищевая промышленность, 1982.

90. Москаленко С.А. Микробиологический скрининг антибиотических, иммуномодулирующих и цитостатических свойств растений дальневосточной флоры, используемых в этномедицине: Автореф. дис.канд. биол. наук./ Владивост. мед. инт. Владивосток, 1988.

91. Муравьева Д.А., Пшукова И.В., Щербинина Е.Ф. Спектральный анализ сырья лекарственных растений семейства розоцветных. Матер. Междунар. совещания

92. Физиолого биохимические аспекты изучения лекарственных растений». -Новосибирск, 1998., с.43.

93. Муравьева Д.А., Самылина И.А., Яковлев Г.П. Фармакогнозия: Учебник для студентов фармацевтических вузов. 4-е изд. - М.: Медицина, 2003. - 656с.

94. Новиков Ю.Ф., Коганов М.М., Богданова И.А. Исследование состава растворимых белков соков зеленых растений методом изоэлектрического фокусирования// Докл. ВАСХНИЛ -1989. №3 -с. 15-17.

95. Оразова М.Х. Структура микробного комплекса прикорневой зоны растений. М., 1994.

96. Островский Д.Н., Лысак Е.И. Ртуть может выполнять роль фактора роста при стрессе у микроорганизмов.//ДАН, 2000, т.374, №1, с. 121-123.

97. Паников Н.С. Кинетика роста микроорганизмов. Общие закономерности и экологические приложения/ Рос.АН Ин-т микробиологии.-М.: Наука, 1991.-310с.

98. Пасешниченко В.А. Растения — продуценты биологически активных веществ (Лекарственные растения продуценты алкалоидов, изопреноидов, фенольных соединений). - Соросовский образовательный журнал, 2001, т.7, №8. -с.13-19.

99. Пастушенков Л.В., Пастушенков А.Л., Пастушснков В.Л Лекарственные растения. 2-е изд. - СПб.: ДЕАН, 1998.

100. Пелипенко Т.В., Турышева Н.А., Тимофеенко Т.И., Шагалова J1.B. Биологически активные вещества С02-экстрактов из растительного сырья// Изв. вузов. Пищ. технология, 1999, №4. с. 12-14.

101. Петров К.А. Биологическая активность эфирных масел Ledum palustrc L., Acorus calamus L., Artemisia jacutica Drob.// Теоретические и прикладные проблемы охраны генофонда и обогащения биоразиообразия.-Якутск, 1997.-С.97-98.

102. Питательные среды. Каталог. BioMerieux, 1996. — 108с.

103. Полуденный J1.B., Журавлев В.П. Заготовка, выращивание и переработка лекарственных растений: Учеб. пособие. -М.: Изд-во МСХА, 2000. 184с.

104. Пригода А.С., Муратов B.C. Современное состояние и перспективы получения и использования питательных сред.-М., 1989.-55с:

105. Растительные ресурсы СССР. Л.: Наука, 1984. т.1 460с.; 1985. т.2 336с.; 1987. т.З 326с.

106. Регистр лекарственных средств России. Энциклопедия лекарств. Выпуск 9. М., ООО «РЛС-2002», 2002.

107. ИЗ. Родионов B.C., Ильинова М.К., Шуляковская Т.А. Годичные ритмы концентрации и жирно-кислотного состава липидов почек березы// Лесоведение. 1087. №4. С.57-64.

108. Романова Ю.М., Алексеева Н.В., Гинцбург А.Л. некультивируемое состояние у патогенных бактерий на модели Salmonella typhimurium: феномен и генетический контроль//Ж. микробиол., 1997, №4, с. 35-41. •

109. Романова Ю.М., Бошнаков Р.Х., Баскакова Т.В., Гинцбург А.Л. Механизмы активации патогенных бактерий в организме хозяина.// Ж. микробиол., 2000, №4, Приложение, С.7-11.

110. Романова Ю.М., Гинцбург А.Л. Цитокины возможные активаторы роста патогенных бактерий.// Вестник РАМН, 2000, №1, с. 13-17.

111. Романович Е.А. Лекарственные растения северной Осетии и содержание в них витамина С. Орджоникидзе: Ир, 1969.

112. Рупасова Ж.А., Кухарева Л.А., Игнатенко В.А. Особенности накопления фенольных соединений в душице обыкновенной при интродукции в Беларуси. Матер.

113. Междунар. совещания «Физиолого биохимические аспекты изучения лекарственных растений». - Новосибирск, 1998., с.57.

114. Рупасова Ж.А., Кухарева Л .В., Игнатенко В.А., Варавина Н.П, Рудаковская Р.Н., Василавская Т.Н. Сезонная динамика биологически активных соединений душицы обыкновенной в условиях Беларуси. Изв.Нац. АН Беларуси. Сер.биол., 1998, №2 -с. 10-15.

115. Рупасова Ж.А., Прилищ Н.П., Игнатенко В.А., Рудаковская P.II. Особенности сезонного накопления витамина С в растениях пустырника пятилопастного и валерианы лекарственной в условиях Беларуси// Изв. АН Беларуси. Серия биология.-1994.-№4.-с.З-5.

116. Свиридова Т.П. Биологические особенности алтея лекарственного (Altheaofficinalis) при выращивании в Сибирском ботаническом саду. // Генет. ресурсы лекарственных и ароматических растений. М., 2001. - с.210-214.

117. Сенина Э.Г. Жимолость синеплодная ценное ягодное и лекарственное растение в Сибири. // Матер. Междунар. совещания «Физиолого - биохимические аспекты изучения лекарственных растений». - Новосибирск, 1998., с.60.

118. Сергиенко В.И., Бондарева И.Б. Математическая статистика в клинических исследованиях. М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001.

119. Сидорович Е.А., Рупасова Ж.А., Кухарева Л.А., Игнатенко В.А., Рудаковская Р.Н., Варавина Н.П., Матюшевская Е.Н. t/собенности сезонной динамики углеводов, органических кислот и жирных масел в растениях бадана толстолистного

120. Bergenia crassifolia (L.) Fritsch.) при интродукции в условиях Беларуси./ Бюл. Гл ботан. сада. 1999., Вып. 178., с. 137- 144.

121. Смирнов В.В., Бакина К.А., Бондарепко А.С. и др. Новый сесквитерпеновый фенол из Bidens cernua L. с антимикробной активност ью/ // Раст. ресурсы.-1995.-т.31, вып.2.-с.31-37.

122. Смирнова Е.Б., Старцева O.JL, Катунина Л.С., Проценко С.Л., Борздова И.Ю. Использование растительного сырья в питательных основах // Матер. 3-й Междунар. науч.-практич. конференции. Махачкала, 2001. с.8.

123. Современная фитотерапия. Под ред. чл-кор. проф., д-ра Веселима Петкова -София, 1988г.

124. Спиридонова Н.С. Аскорбиновая кислота в растениях. Свердловск, Сред.-Уральское кн. изд., 1968. -80с.

125. Справочник ВИДАЛЬ. Лекарственные препараты в России,- М.: АстраФармСервис, 1997.

126. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования/ Под ред. М.О. Биргера М.: Медицина, 1982.

127. Старцева О.Л., Катунина Л.С., Смирнова Е.Б., Головнева С.И. Разработка производственной питательной основы для культивирования чумного микроба // Матер. 4-й Междунар. науч.-практич. конференции. Махачкала, 2003. с.37.

128. Структурные и функциональные связи высших растений и микроорганизмов. /Сборник/ Отв. ред. канд. биол. наук З.М.Яковлева. Новосибирск, «Наука», Сибирское отделение, 1977. 221с.

129. Судачкова Н.Е., Милютина И.Л., Семенова Г.П. Состав и содержание свободных аминокислот в различных частях и тканях Pinus sylvestris L., Larix sibirica Ledeb. и L.gmelinii (Rupr.) Rupr. // Раст. ресурсы. Том 39, вып.1. - 2003. - с. 19-22.

130. Сур С.В. Состав эфирных масел лекарственных растений. Раст. ресурсы. 1993, №1, вып.1, т.28, с.98-117.

131. Тарков М.И. Микробиологические методы оценки искусственных питательных сред. Кишинев, «Штиница», 1972.-166с.

132. Ткачев А.В. Химия возобновляемого растительного сырья: исследование терпеноидов растений Сибири и Дальнего Востока: Автореф. дис. д-ра хим. наук/ Новосиб. НИИ органической химии. Новосибирск, 1996.-76с.

133. Толкунова Н.Н., Чуева Е.Н., Бидюк А.Я. Влияние экстрактов лекарственных растений на развитие микроорганизмов./ Пищ. пром-ть, 2002, №8. -с.70-71.

134. Трошкова Г.П., Богрянцева М.П. Проблемы оптимизации бессывороточной питательной среды на основе ферментативного гидролизата сои // Матер. 3-й Междунар. науч.-практич. конференции. Махачкала, 2001. с.8.

135. Турницкий А.Ю., Рахимова Б.Б., Кулыясов А.Т, Адекенов С.М. Скополетин и умбеллиферон из Centaurea sibirica (василек). Матер. Междунар. совещания «Физиолого биохимические аспекты изучения лекарственных растений». - Новосибирск, 1998., с.65.

136. Турова А.Д., Сапожникова Э.Н. Лекарственные растения в СССР и их применение-М., 1982.

137. Тутов И.К., Кравцов В.А., Соловьева С.Я., Ожередова Н.А., Веревкииа М.Н., Заерко В.И., Потапова О.А. Использование стимулятора роста микроорганизмовдля культивирования аттенуированных штаммов сальмлиелл./ Вестник ветеринарии. -Ставрополь, 1996.

138. Тутов И.К., Соловьева С.Я., Кравцов В.А., Ожередова Н.А. Использование стимуляторов роста микроорганизмов для культивирования производственных штаммов сальмонелл // Вестник ветеринарии, 1996, №1. — с.69 — 71.

139. Фармакология. Атлас. Под. ред Гринкевич Н.И., Ладыгиной Е.Я. М.: Медицина, 1989г.

140. Филиппова Р.Л., Володина Е.М., Колеснов А.Ю. Роль фруктовых и овощных соков в профилактике заболеваний: Обзор соврем, исслед. / Пищ. нром-ть, 1999. -№6,-с.64-65.

141. ФС 42-3635-98 Трава эрвы шерстистой. МЗ РФ.

142. ФС 42-3874-99 Физико-химические, химические, физические и иммунохимические методы контроля медицинских' иммунобиологических препаратов. МЗ РФ., 2000.

143. Хайдукова Е.В., Надеждин Д.В., Коссиор Л.А., Теслов Л.С. Антимикробная активность сухих экстрактов из надземной части Salvia tcsquicola Klok. et Pobed. и листьев S.officinalis L.// Раст. ресурсы. Вып. 3, 2003.

144. Чиков П.С. Лекарственные растения путь к здоровью. - М.: Научно -издательский центр «Инженер», 1997. - 489 с.

145. Чупахина Г.Н. Система аскорбиновой кислоты растений/ Калинин!р. гос. ун-т.- Калининград, 1997.-119с.

146. Чхиквишвили И.Д., Харебаева Г.И. Цикориевая и хлорогеновая кислоты в некоторых растениях, произрастающих в Грузии.// Прикл. биох. и микробиол. 2001. - Т.37, №2. - с.214-217.

147. Шаин С.С. Экзогенная регуляция накопления биологически активных в-в лекарственными и эфиромасличными растениями как- способ формирования максимальной биопродуктивности в онтогенезе// С/х биология. Серия биология растений.-1996.-№3.-с.68-82.

148. Шульц Э.Э., Петрова Т.Н., Ильичева Т.Н., Покровский А.Г., Толстиков Г.А. Фенольные компоненты солодки уральской. Матер. Междунар. совещания «Физиолого биохимические аспекты изучения лекарственных растений». -Новосибирск, 1998., с.78.

149. Энциклопедический словарь лекарственных растений и продуктов животного происхождения. Под ред. Яковлева Г.П. и Блиновой К.Ф. СПб.: Специальная литература, 1999.

150. Banaszak H., Ojczyk К., Szymczak-Nowak J., Sitarski A., Wasacz E. Influence of Agrispon on health growth and yield of sugar beet.// Progress in plant protection. -Poznan, 1999, Vol. 39, N2. P. 789-792.

151. Bos R., Woerdenbag H.J. Analytical aspects of the essential oil, valerianic acid derivatives, and valeopotriates in Valeriana officinalis roots and rhizomes. // Beitr. Zuchtungsforch. 1996. Jg 2, H.l. - S. 355-358.

152. Broudiscou L.-P., Papon Y., Broudiscou A.F. Effects of dry plant extracts of fermentation and methanogenes in continuous culture of rumen microbes. // Anim. Feed Sc. Technol., 2000, Vol. 87, N 3/4. p. 263-277.

153. Cars A., Cassidy C., Cohen E. Rodale's illustrated encyclopedia of herbs. -Rodale press, 1987, VI, 545 p.

154. Collins C.H., Lyne Patricia M., Grange J.M. Collins and Lyne's Microbiological Methods. 6th ed. London etc.: Butterworths, 1989. - X, 409 p.

155. Dickens J.A., Berrang M.E., Cox N.A. Efficacy of an herbal extract on the microbiological quality of broiler carcasses during a simulated chill. // Poultry Sc., 2000, Vol.79, N8.-p. 1200-1203.

156. Duke James A. CRC Handbook of Medicinal Herbs. 3 print. - Boca Raton. Florida: CRC Press, 1986. - 677 p.

157. Elgamal M.H.A., Ouf S.A., Hanna A.G., Yassin F.Y. Phytochemical and mycological investigation of Artemisia monosperma. // Folia microbiol., 1997, Vol.42, N3. -P.203-210.

158. European Pharmacopoeia, 3rd edition, 1997.

159. Evstatieva L.N. Chemical composition of the essential oil in Acorus calamus L. (Araceae).//Fitologija. Sofia, 1996. - Vol. 48. - p. 19-23.

160. Ivanova E. Phytochemical investigation of Potent ilia reptans L. // Conf. proc./L

161. Intern, conf. on chemistry and biotechnology of biologically active natural products. Sofia, 1989. p. 417-423.

162. Kivanc M., Akgul A., Dogan A.// Int. J. Food Microbiol. 1991. - Vol. 13, № l.-p. 81 -86.

163. Li W., Asada Y., Yoshikawa T. Flavonoid constituents from Glycyrrhiza glabra hairy root cultures.// Phytochemistry. 2000, Vol.55, N5. - P. 447-456.

164. Lyte M. and S.Ernst. Catecholamine induced growth of gram negative bacteria. Life Sci, 1992, 50, p.203-212.

165. Lyte M., C.D.Frank and B.T.Green. Production of an autoinducer of growth by norepinephrine cultured Escherichia coli 0157:H7. FEMS Microbiol. Lett., 1996, p. 155-159.

166. Mandelstam Joel, McQuillen Kenneth, Dawes Ian. Biochemistry of Bacterial Growth. 3rd edition. - Oxford etc.: Blackwell Scientific Publications, 1982. -VIII, 449 p.

167. Marczal G., Cserjesi Z., Hethelyi E., Petri G. / Data of the essential oil content and composition of Calendula officinalis L. // Herba Hungarica, 1987. T. 26. № 2/3. p. 179 189.

168. Rosenberg Eugene, Cohen Irun R. Microbial Biology. Philadelphia etc.: Holt-Saunders intern, ed., 1983.- XII, 433 p.

169. Sindlar J Determination of selected content substances in the species Glycyrrhiza uralensis Fish. // Agr. trop. subtrop. Prague, 1999, Vol.32, - p.91-93.

170. Sivropoulou A., Papanicolaou E., Nicolaou C. / Antimicrobial and cytotoxic activities of Origanum Essential Oils. // J. agr. Food Chem. -1996. Vol. 44. - № 5. - p. 1202- 1205.

171. Stanev S. Variation of chemical compounds in the essential oil from some native forms of Chamomile (Camomilla recutita L.) // Beitr. Zuchtungsforch. 1996. Jg 2, H.l.-S. 214-217.

172. Weglarz Z., el-Ansari M.A., Ali M.S., Skiba A. Phenolic constituents from lime (Tilia cordata Mill.) inflorescences// Ann. Warsaw Agr/ Univ. Hortic., 2000, N21. p.29-34.

173. Wood M., Schollenberg M., Zamorski C. Effects of extracts of four mcdicinal plants on growth of selected fungi and bacteria. // Ann. Warsaw. Agr. Univ. Hortic., Warsaw, 1997, N18. -p.41-52.

174. ГашиЬ О.С., Мимица-ДукиЬ Н, НиколиЬ А. Химическое изучение мяты перечной: определение общего содержания эфирных масел и D-ментола.// Зборник прир. Науке/ Матица српска. Одельенье прир. Науке, 1981, 60, с.45-61.

Информация о работе

Баронец, Наталья Геннадьевна
кандидата биологических наук
Москва, 2004
ВАК 03.00.07

Диссертация

Получение стимуляторов роста микроорганизмов из лекарственных растений - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы