Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Влияние дегидратации и дивалентных катионов на осмотическую устойчивость эритроцитов при постгипертоническом лизисе

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Влияние дегидратации и дивалентных катионов на осмотическую устойчивость эритроцитов при постгипертоническом лизисе"

РГБ ОД

? н т •

ХАРШОБСКИЛ ГОСУДАКПВНШи УНИВЕРСИТЕТ

На правах рукописи

В;ИЯНИЕ ДЕПУШАТАЩИ И ДИВАЛШТНЫл КАТИШОВ НА ОСМСГГИЧЕСКУЮ УСТОЙЧИВОСТЬ ЭРИТРОЦИТОВ ПРИ ПОСТгаШРГОНИЧБСКОМ ЛИоИСЕ

0b.00.I3 - физиолошя человека и животных

автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наув

1954

Диссертация является рукописью

Работа выполнена в Харьковском государственном ушгзрсктете

Научный руководитель: доктор биологических нарт, профессор

Гондаренко Г.алериГ: Антонович ■

Официальные опоненты: доктор биологических паук, профессор

Жехунов Геннадий Федорович ./Харьковский медицинский, университет/

кандидат биологических наук, с.н.с. Древаль Блад:;слав Иванович

/Харьковский государственны"! .. университет/

Ведущая организация: Харьковский НЯИ медицинской

радиологии

Защита состоится "Р?п ¡99" г. в " /0 на засе-

дании специализированного совега4-С 053.05.07 Харьковского государственного университета /Зт0077, г. Харьков, пл. Свобода, 4 , аудитория 3-15/

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной библиотеке Харьковского государственного университета.

Автореферат разослан " б>/" Гр^шЬяж^у.

Ученый секретарь специализированного ученого совета Ш{// - Некрасова, к-.Ы

' ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Известно, что клетки .животного происхождения могут обратимо терять до 50 % свободной клеточной воды и гибнут при превышении этого критического уровня. [Бондаренко В.А., 1988]. Однако, как правило, гибель клеток происходит не при дегидратации, а при попытке вернуть их в нормальные изотонические условия, т.е. при регидратации. Такой тип повреждения получил название постгипертонического лизиса.(ПЛ) [Zade-Öppen A.M., 1968-70} и встречается в процессе размораживания эритроцитов, консервированных в условиях низкой температур! [ Lovelock J.M.,1953].

Механизмы, ответственные за повреждений эритроцитов при переходе из гипертонических условий в изотонические, и основные стадии этого процесса остаются неизвестными.

С"другой стороны показано,что дивалентнда катионы Са2^, Шу* и Zn + оказывают, стабилизирующее влияние на мембрану при ее взаимодействии с рядом литических агентов, таких как вирус Sen.Jay, а - токсин, мелиттин и.т.д. £ßaikJ°rJ С. L., 3386-29] .

В связи с этим целью настоящей ра'ботн было изучить влияние катионов" Са2,+ И^и 2п\ входацих в состав среда ре гидратации, на ПЛ эритроцитов, рзгидратироЕанньк в изотонических средах различной ионной силы, после дегидратации в гипертонических растворах NaCI и сахарозы в разных диапазонах температуры и времени.

Задачи исследования. Всоответствии с поставленной целью работы предполагалось решить следующие экспериментальные задачи;

1. Исследовать осмотическое поведение регидратированных эритроцитов в зависимости от факторов сред дегидратации и регид-ратации, таких как температура, время, оснолярность и ионная сила.

2. Исследовать влияние дивалентных катионов СаА+, М^+и 2i\* на уровень и динамику ПЛ эритроцитов, регидратированных в электролитных и неэлектролитных изотонических средах, в зависимости от, момента действия катионов на эритроциты и от условий (температура, время, осмолярность) предварительной дегидратации клеток.

3. Изучить обратимость эффекта дивалентных катионов на ПЛ, а также определить изменение его уровня при обработке эритроцитов в стадии предварительной дегидратации различными концентрациями указанных катионов.

4. Исследовать объемные распределения эритроцитов на этапе ре гидратации, а также взаимосвязь между уровнем гемолиза и изменением объема регидратированных клеток, в зависимости от присутствия дивалентных катионов в среде регвдратации и от условий гипертонической и изотонической инкубации клеток.

Научная новизна« Установлено, что ПЛ развивается не по коллоидно-осмотическому механизм, а обусловлен изменениями, происходящими внутри клеток в стадии дегидратации, которые ведут к снижэ-ниюустойчивости мембраны к формированию гемолитических пор в этапе регидратации. Ддвалектные катионн оказывают как активируящй (Са2^ Zn *), так и ингибирующий эффект на ПЛ путем взаимодействия со специфическими группами (сайтами) , входящими в структуру гемолитической поры и регулирующими ее функционирование. Указанные сайты обладают различной специфичностью и сродством к катионам, а также нестабильной локализацией в клетке. Наличие аятивирутацих сайтов является характерной особенностью для ПЛ. В случае ПЛ было обнаружено, что обитая популяция эритроцитов в стадии регидратации подразделяется на три отдельные субпопуляции, обладающие разной чувствительностью к мембранным повреждениям и распределение которых варьирует в зависимости от условий инкубации клеток, а также от присутствия дивалентных катионов в среде регидратации. Установлено, что при ПЛ , в отличив от гипотонического гемолиза С Lake W., 19??, GodiaV. 1Э?б] и гемолиза, индуцированного экзогенными аген-таии [Baskford C.L.,15Si] отсутствует прямая корреляция между уровнем гемолиза и степенью изменения объема эритроцитов.

Теоретическая и практическая значимость. Целесообразность исследования явления Ш1 заключается в том, что данный тип гемолиза является специфической и малоизученной моделью повреждения клетки, связанного с избыточной потерей внутриклеточной воды и изменениями физико-химических свойств цитоплазмы.

Понимание механизмов повреждения регидратированных эритроцитов позволит обосновать ноше. подхода к разработке методов низкотемпературной консервации эритроцитов, где регидратация являете»" одним из этапов цикла замораживания-- размораживания клеток.

Основные положения, выносимые на защиту.

I. ПЛ имеет эндогенное происхождение, обусловленное внутриклеточными изменениями, развивающимися в стадии дегидратации эритроцитов.

2. В структуру мембранных пор регидратированных эритроцитов зходят специфические сайты, способшз связываться с катионами

р , О, п,

За , и Zri , регулируя тагам образом функционирование пор.

3. Изменение объема эритроцитов при ПЛ, а также их чувствительность к гемолизу определяется условями инкубации клоток, а гакзе воздействием дивалентных катионов на них.

Апробация работа. Материала работа представлены на У1 Украинском биохимическом съезде (Киев, 1992), на XX научно - практической конференции " Актуальные вопросы медицины " (Харьков, 1992), а тагсзз на научной конференции молодых учекях биологкче-ского факультета и ЕМ биологии ХГУ (Харьков, 1992),

Публикации. По материалам диссортации опубликовано 4 работ.

Структура диссертации. Диссертационная работа складывается из введения, литературного обзора, катёркалов и методов исследования, четырех глав с изложением результатов и их обсуждением, заключения и списка литературы, з который включены 144 работы иностранных авторов и 21 отечественных. Работа: изложена на I8.4-сграницах машинописного текста и в еэ состав входят 40 рисунков.

. ШЕВШН И МЕТОДЕ! ИССЛЕДОВАНИЯ

£ работе были использованы-эритроцита второй группы донорской крови.

Для исследования осмотического поведения эритроцитов при ПЛ клетки инкубировались в гшертонгяеских-растворах 1,5 MNaCIrons 0,5 - I»2 М сахарозы (гематокрит 10 И) при температура от б' до 37°С в течение 0; 15; 30 кинут с последующим перекосом в изотонические среда 0,15 Ы NaCI;. 0,27 Н сахарозы или 0,27 ChCl, при t = 13 - 20°С, где спектрофотоиетрическин измерением оптической плотности (Ш)(3= 720 Нм) определят, динамику ПЛ во времени и изменение формы клеток [Дегтярев A.B. 1990,Kam" А. 1990].

Кроме того, клетки дегидратированные при таких ге условиях, инкубировали в течение 5 мин в изотонической среде, после чего спентрофотометрическим методом С Л= 415} 720 Им) исследовали влияние катионов Са2+, (0,1 - 100 Ш/л) п2$*( 0,01 - I i£l/.n) добавленных в изотоническую среду как до, так и после регидшта-цаи, на уровень и данакищг ПЛ. 2+

Для того, чтобы проверить обратимость эффекта ионов Са % Zn2+ на ПЛ в изотонические растворы вводили аквиыолярные концент-

-б,- •. •

рации ЕОТА - хелатора катионов.

Применением ионофора А 23187 ( 5 ) в сочетании с гипертонической обработкой эритроцитов ионами и Ъ?* исследовали локализацию сайтов гемолитической поры.

Методом спектроскопии ютульсов сопротивления на установке типа Соа^ег [Аке$оп&Р, 19833 определяли объемные распределения эритроцитов и их теней в зависимости от условий гипертонической инкубации С время 15: 30 мин, 1 = 0; 37°С) и от концентрации катионов Са2+, Мд и входящих в состав; среды регидратации клеток

Статистическую обработку проводили по методу Стьюдента-Фишера

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОВСУВДНИЕ

Влияние условий дегидратации ( температура, время, осыоляр-кость) и ионной силы среда регидратации на осмотический отк- ■ лик и уровень лизиса регидратированньк эритроцитов.

Исследования показали, что повышение осмолярности (0,5-1,2 М) сахарозной среды дегидратации эритроцитов приводит к увеличению динамики ИЛ, выражающемуся в повышении амплитуда кривых ОП суспензии регидратированных клеток С рис. I) . При этом увеличение ионной силы среда регидратации добавлением N801 (4-М) приводит к ингибированию гемолиза (рис. I).

Обнаружено, что изменение тоничности электролитной среда регидратации до 0,35 М введением раствора 4 Ы ЫаС1 (или КСО приводит к восстановлению формы эзошоцитов для клеток, предварительно дегидратированных в 0,5-0,7 М растворе сахарозы, и к трансформации в сфероциты в случае дегидратации в 0,8-1,2 М сахарозе. Процесс восстановления исходной форш клеток зависит от температуры, времени и степени дегидратации и постепенно редуцируется с увеличением этих факторов. Прямая зависимость между уровнем лизиса регидратированных клеток и параметрами гипертонической инкубации свидетельствует о том, что ПЛ обусловлен изменениями, происходящими в клетках на этапе дегидратации при уменьшении объема [ Бондаренко. ВЛ*-, 19883, ведупрми к утрате мембранной устойчивости к повреждениям при регидратации.

Согласно другим данным СРездЬЕ, 19883| мембрана бритроци-тов, прошедших через фазу лизиса, способна замыкаться и восстанавливать проницаемость, близкую к исходной. Это подтверждается

Е-о • О X t-о

<4

fcs"

(В <

■ ы и ы. V

sr

к

е о

К

BP ЕМЯ

Рис. 2. Изменение отческой плотности суспензии эритроци-. тов .при'регидратации клеток в среде, содержащей 0,15'М NaCI посла инкубации в гипертонических растворах сахарозы, С 0,5 - 1,2 М) при 37°С в течение 15 кинут. Стрелками 'указаны моменты добавления в кювету концентрированного, раствора 4 М NaCI до конечной концентрации его в среде 0,33 М.

Показан ответ контрольных эритроцитов на добавку, 4 М NaCI и уменьшание светопоглощешя при разведении тем же количеством физического раствора.

''•■„-.-'.'' . - s - ' .

и нашими результатами, согласно котором рсг.;дратация в изотонической сахарозе сопровождается относительно быстрым прекращением критического набухания эритроцитов по сравнению с изотоиичесйми растворамиNaCl и ChCI, где этот процесс растянут во времена. .

'Последнее означает, что непроницаемость ызибраны для калеку л сахарозы восстанавливается раньше, чем для ионов На+ .и холин -хлорада8 имеющих меньший размер. При этом монет прийти к выводу о* том, что восстановление исходаой проницаемости мембраны эритроцитов происходит раньше в неэлекзгролитнкз:, чем в электролитных средах. ,•

Активация ПЛ эритроцатов иоказш и Zi?+ -главная особешость модзлиругщего воздействия давалентных катионов в данном тгахе гемолиза.

Дивалентные катионы способны ицгибировать лизис, вызванный литическиш агентами CBasK}ord С. L, 1985 - 89], однако, при ПЛ катионы, входящие в состав среда регидратации, оказывает1 модули- . рувщий эффект на гемолиз (рис..2).

Ионы Са?+ независимо от условий регидратации способны как активировать (0,01 - ОД мМ/л) так и ингибировать(0,3 - I iHL/à) ПЛ, и теряют активирующее влияние, если'клетки.ингибировались в электролитных ( NaCI) средам ( рис. 2А) .

Ионы оказывают активирующий эффект (10 - 100 »й/л) в неэлектролитных средах, a практически на еишзт на ПЛ. Слабое ингибирующее влияние проявляют ионы и Са^+ ( 100 Ш/л) в электролитных средах (рис, 2А). Подобный характер действия катионов на ПЛ, как в случае лизиса, индуцированного лирическими агентами, свидетельствует о наличии в структуре гемолитической: поры регидратированных эритроцитов специфических сайтов связывания с катионами, способных регулировать функционирование поры.

Наличие активирующих сайтов характерно для ПЛ и указывает на то, что при таком типе гемолиза эффект катионов не обусловлен экранирующим взаимодействием с заряженными компонентами поры, -казг " в других видах гемолиза [Pasternak С.А., 1985] . Как блокирующие, так и активирующие сайты обладают наибольшим сродством связывания с ионами Zru2+. Проявление активирующего эффекта ионами Zr?+ и в разных концентрациях и средах, инкубации клеток свидетельствует -о наличии специфических активирующих сайтов для Са^+ и Zr?+, од-

нако, ионы не способны связываться с указанными компонентами мембраны.

Ингиби^уюцее влияние дивалентных катионов Са^4", Мд2+, на ПЛ эритроцитов. Исследования показали, что добавлешё катионов в изотоническую среду,, независимо от ее состава, послз начала регидратации приводит к полному устранению активирующего эффекта. Пр! этом все

100

ю 75 S

«=;"

о 50 ас

и и

и

О 0,01 0,1 1 10 100 0.01 0.1 1 10 100

КОНЦЕНТРАЦИЯ (мЮ

Рис. 2. Влияние дивалентных катионов Са2+( А А) , ®)

и Zvv+Ca я) на гемолиз эритроцитов, регкдратированных в изотонических средах NaCI (А) и сахарозы (Б) в присутствии ионов после 15 мин инкубации при 37°С в гипертонических растворах электролитов (1,5 М NaCI) - штрихованные символы или неэлектролитов (1,2 !Л сахарозы) - открытые симболы. v , 7 - обозначают уровень лизиса при регидратации клеток в. средах без катионов.

катионы Mg2+, Zy?* ингибируют гемолиз, а с увеличением времени добавления катионов блокирование ПЛ усиливается. Указанный эффект свидетельствует о том, что блокировочные сайты менее ионо-специфичны по сравнению с активирующими.

Поскольку блокирующее действие на ПЛ способны оказывать все

катионы как до (рис. 2) , так и после начала регидратации, можно гоЕорить.о наличии единого блокировочного сайта в структуре гемолитической поры. Взаимодействие катионов 2тГ+ с эквимолярнши концентрациями хелатора ЕРТА в разных моментах регидратации показало, что блокирующий эффект носит обратимый характер (рис. 3). При этом сохранение активирующей способности 2у\+ после действия ЕОТА свидетельствует о том, что константа связывания .({.одК) с ак-тивирувпрпж сайтами больше, чем с блокирующими.

100 А £

го А

о «ы

г си

ч —>>—1 - 1 1

0,01 0.1 I ГО 0,01 ол 1 10

конце.нтрация ст)

Рис. 3. Влияние ионов' и ЕОТА на гемолиз эритроцитов, инкубированных 15 мин в 1,2 М растворе сахарозы при 37°С и регид-ратированных в изотонических средахN801 (А) и сахарозы (Б) , содержащих ионы о » эквимолярную смесь 2п.2+ и ЕРТА (а)

или когда эквимолярное количество ЕРТА было добавлено через I мин после введения клеток в среду регидратации (о). Общее время регидратации клеток перед определением гемолиза составляет 5 мин.

Поскольку увеличение времени добавления катионов в среду регидратации привело к повышению блокирующего эффекта, мобно заключить, что в процессе регидратации во время набух;ания клеток усиливается экспонирование блокирующих сайтов. Обработка эритроцитов в условиях гипертонии как активирующими, так и ингибирукщкки концентрациями ионов Са2+ и 2п+ в присутствии или без ионофора

А 23187 (5 цМ) , повышающего концентрацию ионов внутри клетки, устранила соответствующие•эффекты при переносе клеток в изотоническую среду (рис. 4)--, свидетельствуя о том, что оба т^па сайтов в условиях гипертонии локализованы внутри клетки, а лишь на этапе регидратации экспонируются на внешную поверхность клеточной мембраны. Поскольку активация ПЛ наблюдается только в случае изначального содержания катионов в составе изотонической среды, можно прийти к выводу о том, что экспонирование активирующих сайтов кратковременное.

100-

.n:

ю S

с о £ ы

U

50

X

I

Рис. 4. Влияние. Са2+, Zr£+, EDTA и ионофора А 23187 на гемолиз регидратированных эритроцитов. Клетки инкубировались 15 .мин в гипертонической сахарозе при 37°С в присутствии или отсутствии дивалентных катионов, I ьй EDTA или 5^Li А 23187 и переносились в. изотонические растворы NaCI . Гемолиз измеряли после 5 мин инкубации клеток в изотонической среде.

Объемные раепрсделния репщратированлых эритроцитов и их теней при постгипертоническом лизисе в зависи-. мости от условий дегидратации и регидратации и присутствия дивалентннх катионов.

¡^следование объемных распределений рег'иде-тированннх эритро-цитсг. показало, что в состав общей'популяции эритроцитов входят тр;: отдельные субпопуляции с различной чувствительностью к набуханию п лизису, з зависимости от условий гипертонической инкубации клеток. Первая субпопуляция обладает максимальной устойчивостью к регидратации, ¡слетки которой практически восстанавливают свой изотопический объем без повреждения. Клетки второй субпопуляции набухают, но не гемолизируют. Третья субпопуляция нглменее устойчива к ПЛ, клетки которой гемолизируют,. превращаясь в тени. Чувствительность клеток второй сублопудяции к набуханию повышается с увеличением температуры и времени дегидратации.

Существование первых двух субпопуляций показывает, что мембран!' регидратированных клеток способны заклгаться и "ьапечатгжать" возникшие дефекты, стабилизируясь при увеличенное объеме.

Известно, что ионы Ыдс'+, слабо влияющие на ПЛ, тажхе как и К4", участвуют в регуляции формы и объема эритроцитов, стабилизируя их[Ри.г^ипе5 N4 1938 ] . Однако, объемные распределения клеток, помещенных в гипертонические растворы М^6* (ЗОО^мМ)» заранее реги-дратировашкх в'присутствии Са^СЮО.мМ) или 2п* ( 0,1 мМ) После . инкубации-е 1,2 Ы сахарозе при 0 или 37°С, показали, что механизмы этой регуляции нарушаются при дегидратации в 37°С, где появляются дзе субпопуляции клеток с разным объемом. Указанная особенность не наблюдается при 0°С, а также в. растворах 300 Ш и К4",-где распределение клеток унимодальное. '

Гистограммы объемных изменений регидратиросанных эритроцитов в присутствии как ингабкрупщкх, так л активирующих концентраций 2>\ + и Са2+, в комплексе или без ЕОТА (рис.5) показываю, что объем набухшей субпопуляции клеток правый пик в случае действия активирующих концентраций ( 0,1 ьй) и Са2+ ( 50 ш) (кривые 3,?) мало отличается от такового в случае отсутствия катионов (кривая 2) . Кроме того, присутствие блокирующего (I м;,0 не приводит к полному редуцированию набухшей субпопуляции (кривая 4) .

Установленное отсутствие прямой зависимости мезду уровнем .чизиса и степенью изменения клеточного объема свидетельствует о

Рис. 5. Распределение по объему смешанной популяции регадра-тированных клеток и теней в изотоническом растворе МаС1 в присутствии активирувщих и блокирующее концентраций ионов и Са2+ или Е О ТА после 15 мин инкубации эритроцитов в 1,2 М сахарозы при температуре 37°С. I - распределение контрольных эритроцитов; 2 - регидратированные эритроциты; 3, 4 - эритроциты, регидратиро-ванные в присутствии ионов в концентрации 0,1 ыМ и I мМ соо-

тветственно; 5 - эритроциты, регидратированные в присутствии I Ш 2и I Л Е О ТА, добавляемого через I мин после начала регид-ратации; б - то же, что и 5, ко ЕР ТА изначально входил в состав среди регидратации; 7 - эритроциты, регидратированные в присутствии 50''..41 Са2+.

той, что эффект влияния катионов на ПЛ не обусловлен объемными изменениями клеток, а связан с локальным их действием на мембрану, а также подтверждает, что коллоидно-осмотическое набухание не является главной причиной ПЛ.

выводе

1. ПЛ эритроцитов обусловлен не коллоидно-осмотическим набуханием, а рождением в стадии рещцратации клеток крупных мембранных-дефектов или пор, непосредственно проницаемых для гемоглобина. При этом увеличение объема регидратированных клеток является сопутствующим фактором, а не главной причиной лизиса эритроцитов.

2. Мембранные дефекты.у регидратированных эритроцитов имеют эндогенное происхождение и обусловлены внутриклеточными изменениями на этапе дегидратации, ведущими к утрате мембранной стабильности к устойчивости к повреждениям при регидратации.

3. Дивалентные катионы способны активировать (Са,+ иди ингибировать ( Са? М^*, Ъъ) ПЛ в зависимости от состава сред дегидратации и регидратации и от момента их действия на регидрати-ровашше эритроциты, не только предотвращая формирование пор, но

и вызывая блокирование уже созданных. При ПЛ эффективность ингиби-рования катионами можно выразить вчотношении: 2г1*~> Са^+> ингибирование носит обратимый характер и усиливается с увеличением ионной силы среды регидратации.

4. Модулирующий эффект дивалентных катионов на ПЛ обусловлен связыванием ионов с двумя типами мембранных сайтов, регулирующих. функционирование гемолитических пор и отвечающих за активирование и ингибирование гемолиза. Установлено, что в структуру гемолити-. ческой поры входят два активирующих ионоспецифических для Са2+ и

и один блокирующий сайт, способный связываться с различным сродством со всеми катионами. -Наибольшим сродством к обоим типам сайтов обладают ионы 2уг+, а ионы не способны связываться с активирующими сайтами, наличие которых является характерной особенностью для ПЛ.

5. В условиях гипертонической дегидратации оба типа сайтов локализованы внутри клетки и активируются лишь на этапе регидратации, при которой они экспонируются на внешнюю поверхность плазматической мембраны. При этом, экспонирование активирующих сайтов

сратковремзипое, соответствуйте времени увеличения объема регид-■»тирозашг.'х клеток. ;

6. В состав общей популяции решдратированных эритроцитов зходят три субп'опуляции, клетки которых обладают различной чувст-зительностью к ПЛ. Клетки как первой, так и второй субпопуляции три'набухании не подвергаются гемолизу, однако, лить ьритроциты 1ервой субпопуляциимаксимально устойчивой к ПЛ, способнн вос-зтанавливать исхода, й уровень объема. Клетки третьей субпопуляции, тиболее чувствительной к ПЛ, в процессе набухания гемолкзируют

а превращаются в тени.

7. Установлено, что иквилибрация клеток, регидратироваяных тосле дегидратации при 37°С в изотонических средах как в присутствии, так и в отсутствии активирующих концентраций Са2+ С100 мф . или Zn_'+ ( 0,1 мМ) , в гипертонических расворах (300 ьМ) характеризуется особенностью, заключающейся в появлении двух субпопуляций клеток с разным объемом. Указанная особенность не проявляется в аналогичных гипертонических средах ионов Na+ и 1С1", а так-

ке после дегидратации аритроцитов при 0°С.

ОШССК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ Д1ССЕРТАЩИ.

1. Пателарос C.B., Влияние двухвалентных катионов на постгипертонический лизис аритроцитов в разных средах регидратагцш// в сб.: фундаментальные и прикладные проблемы криобиологии.-Ш и К АН Украины.- 1993.- с 96-101.

2 Пателарос C.B., Сынчикова О.П., Влияние дивалентных катионов на постгипертонический лизис эритроцитов крови человека // Сборник научных работ аспирантов Х1У: естественные и физико-математические науки. Харьков: Изд-во "Основа"'при Х1У. 1992.-е ¡3-43.

3. Пателарос C.B., Сынчикова О .П., Влияние двухвалентных катионов на постгипертонический лизис эритроцитов крови человека // Тезисы докладов XX научно-практической, конференции молодых ученых и специалистов "Актуальные вопросы медицины". Харьков.-1992.-с.76.

4. Пателарос C.B. Физиология влияния дивалентных катионов на постгипертонический гемолиз аритроцитов человека// Материалы научной конференции молодых ученых биологического факультета и научно-исследовательского института биологии. Харьков,-XI7.-1994.-с. 29.