Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Влияние белков мРИП на трансляцию глобиновой мРНК в бесклеточной системе

ВАК РФ 03.00.03, Молекулярная биология

Автореферат диссертации по теме "Влияние белков мРИП на трансляцию глобиновой мРНК в бесклеточной системе"

МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ имени М. В. ЛОМОНОСОВА

на правах рукописи

КОРНЕЕВА Надежда Леонидовна

УДК 547.963.3

ВЛИЯНИЕ БЕЛКОВ мРНП НА ТРАНСЛЯЦИЮ ГЛОБИНОВОЙ мРНК В БЕСКЛЕТОЧНОЙ СИСТЕМЕ

03.00.03 - Молекулярная биология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Пудино - 1995

Работа выполнена в Институте белка Российской Академии наук

Научный руководитель: доктор биологических наук,

чл. -корр. Л. П. Овчинников

Официальные оппоненты: доктор биологических наук

С. Ю. Морозов, кандидат биологических наук А. С. Воронина.

Ведущая организация: Институт молекулярной биологии РАН

Защита диссертации состоитися «г*"» г 995 г.

в часов на заседании Специализированного совета

Д. 053.05.70 при Московском Государственном Университете ин. М. В. Ломоносова.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке биологического факультета МГУ им. М. В. Ломоносова

Автореферат разослан

995 г.

Ученый секретарь Совета кандидат химических наук

В. Н. Каграманов

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Регуляция биосинтеза белка является одной из центральных проблей молекулярной биологии. Изучение свойств и функций белков нРНП - универсальной форны существования мРНК в клетках эукариот, является важной частью этой проблемы.

Вся мРНК эукариатической клетки существует в форне мРНП частиц СннфорносонЭ. Различают транслируемые мРНП полирибоеом и свободные СнетранслируемыеЭ нРНП. Фракция свободных нРНП клетки обычно функционально гетерогенна и может включать в себя мРНП, находящиеся в равновесии с иРНП полирибосом, мРНП на стадии перехода из ядра в цитоплазму, а также мРНП, содержащие репрессированные и маскированные мРНК.

Предполагается, что функциональное состояние мРНК в клетке зависит от белков, ассоциированных с ней.. Согласно этой концепции, набор белков в разных классах мРНП должен различаться. В препаратах суммарных мРНП, содержащих набор разных мРНК, обнаруживают белки, представленные в качестве минорных и мажорных компонентов. Миноры могут быть специфичны для определенных мРНК или классов мРНК и отвечать за регуляцию синтеза определенных белков, тогда как нажорные белки ассоциированы со всеми или почти всеми мРНК и могут осуществлять глобальный контроль белкового синтеза в клетке.

мРНП, выделенные из различных клеток и тканей, содержат два нажорных белка" с молекулярными массами 70 и 50 кДа. Белок 70 кДа является полис АЗ-связывающим белком СРАВРЭ, ассоциированным с 3' концевой полисАЭ-последовательностью мРНК. Этот белок высоко консервативен в эволюции и присутствует в большинстве, если не во всех, эукариотах. Белок 50 кДа Ср503 является преобладающим белком свободных иРНП соматических клеток. Он присутствует также в полирибосомных иРНП, но в неньших количествах. Функциональная роль этих двух белков в трансляции мРНК в настоящее время мало изучена.

Цель и ' задачи, исследования. Настоящая работа посвящена изучению роли белков свободных и полирибосомных мРНП ретикулоцитов кролика в трансляции. В1 связи с этим были поставлены следующие задачи: а/ выделение препаратов свободных и полирибосомных мРНП; б/ исследование особенностей трансляции

полирибосонных и свободных иРНП и мРНК, входящей в состав соответствующих частиц, в бесклеточных системах трансляции Из ретикулоцитов кролика и зародышей пшеницы; в/ исследование влияния мажорных белков нРНП. р50 и РАВР, на трансляцию мРНК в бесклеточных системах.

Научная новизна работы. В результате проведенных исследований показано. что белки, ассоциированные с мРНК ретикулоцитов кролика, способствуют более эффективной трансляции мРНК in vitro. В частности показано, что в системе из ретикулоцитов кролика белки мРНП предотвращают ингибирование ' трансляции, вызываемое высокими концентрациями матрицы, и делают бесклеточную систему активной в широком диапазоне концентраций мРНК. При исследовании трансляции нРНП и мРНК. выделенной из них, в бесклеточной системе трансляции из зародышей пшеницы оказалось, что свободные мРНП ретикулоцитов кролика, в отличие от полирибосонных нРНП или мРНК, транслируются с очень низкой эффективностью, что • вызвано блоком инициации трансляции свободных иРНП. Добавление фракции белков, смытых с рибосом ретикулоцитов кролика 0,5 М KCl, в пшеничную систему приводит к активации трансляции свободных мРНП. На основании полученных результатов было сделано предположение о существовании в ретикулоцитах кролика специальной системы «репрессии/активации», регулирующей распределение мРНК между фракциями свободных мРНП и полирибосом. Данная система, по-видимому, включает в себя:

- репрессор трансляции, ассоциированный с нРНК в составе свободных нРНП;

- активатор трансляции, ассоциированный с рибосомами и снимающий действие репрессора.

Исследовано влияние двух мажорных белков мРНП: р50 и РАВР, на трансляцию мРНК in vitro■ Показано, что р50 полностью ингибирует трансляцию мРНК в бесклеточной систене. РАВР, напротив, значительно стимулирует трансляцию.

Методом непрямой иимунофлуоресцентной никроскопии выявлены различия во внутриклеточной локализации белков: антитела против р50 окрашивают преинушественно цитоплазну клеток, тогда как антитела против РАВР окрашивают как цитоплазму, так и ядрышки. Сосредоточение РАВР в ядрышках, месте, где происходит синтез пре-рРНК, согласуется с полученными данными о высокой аффинности РАВР к рРНК. На основании этих результатов сделано

предположение о существовании новой функции РАВР, связанной с процессами, происходящими в ядрышках.

Апробация работы. Основные результаты работы были доложены на конференции «Трансляционный контроль» CCold Spring Harbor, США, 1989Э, 4-ом Европейском конгрессе по клеточной биологии СПрага, 1994Э и ежегодной научной конференции Института белка РАН СПущино, 1994Э.

Публикации. По материалан диссертации опубликовано 8 печатных работ.

Структура диссертации. Диссертация состоит из следующих разделов: «Введение», «Обзор литературы», посвященный описанию свойств и функций белков цитоплазкатических мРНП, «Материалы и методы», «Результаты и обсуждение», «Выводы» и «Список цитированной литературы» С 225 ссылок!).

II. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В настоящее время не вызывает сомнений тот факт, что функциональное состояние мРНК в клетке зависит от набора белков, ассоциированных с ней. Вместе с тем, не известено, какие именно белки могут регулировать распределение мРНК между пулами свободных и полирибосомных мРНП.

Мы исследовали влияние белков мРНП на трансляцию мРНК путей сравнения трансляции мРНК в составе мРНП и свободной мРНК в бесклеточных системах трансляции из ретикулоцитов кролика и зародышей пшеницы.

1. Особенности трансляции мРНП ретикулоцитов кролика в бесклеточной системе из ретикулоцитов кролика

Препарты полирибосомных и свободных мРНП получали методом аффинной хронатографии на олигоСйТЭ-целлюлозе из полирибосом, диссоциированных под действием ЕДТА, или из пострибосомного супернатанта. мРНП дополнительно очищали центрифугированием в градиенте сахарозы.

Полирибосомные мРНП имели плавучую плотность в CsCl равную 1,45 г/см3, что соответствует отношению масс белок : РНК примерно 2:1, содержали преимущественно 9S глобиновые мРНК и

два мажорных белка с относительными молекулярными массами 50 и 78 кДа Ср50 и РАВРЗ Срис. 1, дорожка

Свободные мРНП имели плавучую плотность в СэС1 в 1,39 г/снэ, что соответствует отношению масс белок : РНК около 3 : 1, содержат преимущественно 93 глобиновые мРНК и несколько мажорных компонентов с молекулярными массами от 30 до 150 кДа. Преобладающим среди белков был белок 50 кДа Ср503 Срис. 1. дорожка 23.

кДа

Рис. 1. SDS-электрофорез белков:

CID полирибосонных мРНП;

С 23 свободных мРНП;

СЗЗ «коровых» свободных мРНП;

С43 белка р50 свободных мРНП;

С53 полиСA3-связывающего белка

ретикулоцитов кролика.

Крайняя левая дорожка - маркеры.

1 2 3 4 5

Полученные препараты полирибосонных и свободных . мРНП соответствовали по основным характеристикам мРНП из данного объекта, описанными ранее.

На рисунке 2 показано включение меченых аминокислот в белок в зависимости от концентрации глобиновой мРНК, добавленной в систему в виде мРНП или после депротеинизации. Полученные нами данные позволяют выявить ряд характерных отличий трансляции мРНП двух классов от трансляции депротеинизированной мРНК:

1. При низких концентрациях свободная мРНК транслируется несколько более эффективно, чем мРНК в сотаве мРНП.

2. При оптимальных концентрациях матриц мРНК в составе мРНП транслируется более эффективно С на 20-50 У., в разных опытахЗ по сравнению со свободной мРНК. Оптинальная концентрация мРНК в составе нРНП всегда была выше, чен оптинальная концентрация свободной мРНК.

3. нРНК в составе мРНП эффективно транслируется в более широком диапазоне концентраций. чен свободная мРНК; высокие концентрации мРНК ингибируют трансляцию, тогда как мРНК в

составе мРНП, добавленная в систену в тех же количествах., не оказывает ингибирующего действия.

50 юо 150 200 50 100 150 200

. свободная РНК' или РНК в составе мРНП, мнг/мл

Рис. 2. Трансляция полирибосонных мРНП САЭ, свободных нРНП СБ} и мРНК, выделенной из них, в бесклеточной системе из ретикулоцитов кролика.

Для исследования вопроса - связано ли ингибирование трансляции высокими концентрациями нРНК с какими-то специфическими особенностями мРНК или подобное ингибирование будут вызывать любые РНК и синтетические полирибонуклеотиды, в бесклеточную систему трансляции, содержащую глобиновую мРНК в оптимальной концентрации, добавляли дополнительное количество мРНК СконтрольЭ, рРНК из Е, со Ji или гомополирибонуклеотиды -поли(0, полис О, поли(Ц) и полиСАЭ. Мы показали, что в использованном диапазоне концентраций рРНК не влияла на белковый синтез, в то время как те же количества мРНК снижали синтез белка почти до фонового уровня. Поли(О) и полиСО почти не влияли на трансляцию, полисЮ значительно снижала трансляцию, тогда как полисАЭ являлась исключительно сильным ингибитором, значительно более сильным, чем мРНК.

Исходя из этих результатов, можно предположить. что ингибирование бесклеточной системы трансляции высокими концентрациями мРНК связано, главным образом, с присутствием полисАЭ-последовательности на е5 3'-конце.

В последующих экспериментах кы показали, что высокие концентрации мРНК подавляют ^биосинтез белка преимущественно на стадии инициации, так/ как ингибирование трансляции сопровождалось снижением количества полирибосЬм по сравнению с контролен. Можно предположить, что при внесении . в систему большого количества свободной мРНК факторы инициации, большинство из которых - РНК-связывающие белки, связываются с нРНК и рассеиваются на множестве нолекул. В результате, ни на одной молекуле кРНК не оказывается полного комплекта факторов инициации, и инициация трансляции становится невозможной. Вероятно, мРНП активно транслируются даже при высоких концентрациях, так как содержат те факторы инициации, которые лимитируют процесс трансляции в условиях высоких концентраций свободной мРНК в системе. Если это предположение соответствует действительности, можно было бы ожидать, что добавление мРНП в систему, ингибированную высокими концентрациями свободной мРНК■ приведёт к стимуляции белкового синтеза. Проведенные эксперименты, однако, показали, что ингибирование высокими концентрациями свободной нРНК не снимается при добавлении мРНП. Мы заключаем, что белки мРНП препятствуют инигибированию белкового синтеза высокими концентрациями мРНК не потому, что содержат факторы инициации. Роль белков мРНП может сводиться к тому, что эти белки организуют структуру м! ЧК такин образом, что оставляют доступными для факторов инициации только необходимые участки мРНК Слидерные последовательности:) или повышают кооперативность связывания факторов с отдельными молекулами мРНК. В результате этого полный набор необходимых факторов инициации оказывается на некоторых молекулах мРНК даже при высоких концентрациях матриц.

2. Особенности трансляции мРНП ретикулоцитов кролика в бесклеточной системе из зародышей пшеницы

При трансляции мРНП ретикулоцитов кролика в бесклеточной системе из зародышей пшеницы выяснилось, что свободные мРНП не активны в такой системе Срис. ЗЭ. В то же вреня нРНК в составе полирибосомных мРНП, а также изолированная мРНК из обоих классов мРНП, были активны в трансляции. Мы предположили, что мРНК в

составе свободных нРНП ретикулоцитов кролика ассоциирована с

репрессором трансляции, действие^, которого проявляется в системе

из зародышей пшеницы, но не обнаруживается в I системе из ретикулоцитов кролика.

Рис. 3. Трансляция полирибосомных мРНП САЭ, свободных нРНП СБ} и мРНК, выделенной из них, в бесклеточной системе трансляции из зародышей пшеницы.

Похоже, что низкий уровень трансляции свободных• мРНП ретикулоцитов кролика в экстрактах из зародышей пшеницы связан с их неэффективной инициацией, так как, при добавлении в систему из зародышей пшеницы свободных мРНП полирибосомы в системе практически не образовывались, в то время как изолированная мРНК эффективно форнировала полирибосомы в системе из зародышей пшеницы.

Поскольку свободные мРНП ретикулоцитов кролика активны в трансляции в ретикулоцитнон лизате, мы предположили, что в этом лизате содержится некий фактор, снимающий действие репрессора. ассоциированного с мРНК в свободных мРНП.

Для проверки этого предположения разные фракции лизата ретикулоцитов кролика были испытаны на способность активировать трансляцию мРНК свободных мРНП в системе из зародышей пшеницы. Ни безрибосомный экстракт, ни РНК-связывающие белки такой активностью не обладали. В то же время фракция белков, смьггых с рибосом ретикулоцитов кролика 0,5 М KCl, активировала трансляцию свободных мРНП в пшеничном экстракте С рис. 43. Эффективность

трансляции депротеинизированной мРНК при этом не только не повышалась, но, напротив. слегка понижалась. При внесении препарата белков, снытых с рибосом ретикулоцитов кролика, в пшеничный экстракт, не содержащий экзогенной нРНК, синтез белка не наблюдался. Это свидетельствует о тон, что препарат белков не содержал в своем составе нРНК.

Таким образон, в лизате ретикулоцитов кролика был обнаружен активатор трансляции свободных мРНП. Этот активатор находится в комплексе с рибосомами, из которых он диссоциирует под действием 0,5 М KCl.

т

5 10

О, 5 М KCl" смыв, мг/мл

Рис. 4. Влияние 0,5 М KCl-смыва с рибосом ретикулоцитов кролика на трансляцию свободных мРНП С2Э и мРНК CID в бесклеточной систене из зародышей пшеницы. Кривая СЗЭ - контроль без добавления мРНК.

В совокупности, полученные данные позволяют сделать предположение о существовании специальной системы,

осуществляющей контроль за распределением мРНК между фракцией свободных иРНП и полирибосом в ретикулоцитнон лизате. Эта система включает в себя: С1Э репрессор трансляции, ассоциированный с мРНК свободных мРНП и' препятствующий инициации

трансляции нРНК и С2Э активатор трансляции, ассоциированный с рибосомами и снимающий действие репрессора.

Пронывка свободных мРНП ретикулоцитов кролика 0,5 М МаС1 удаляла с мРНК практически все белки за исключением мажорного белка р50 Срис. 1, дорожка 33. Такие коровые частицы сохраняли низкую трансляционную активность в пшеничном экстракте Срис. 53. Можно предположить, что репрессором трансляции глобиновой нРНК в составе свободных мРНП является мажорный коровый белок р50.

В

с. о

й X s я

15 30 45

РНК, мкг/мл

Рис. 5. Трансляция «коровых» свободных мРНП ретикулоцитов кролика и мРНК, выделенной из них, в бесклеточной системе из зародышей пшеницы.

3. Влияние нажорных белков мРНП на трансляцию глобиновой мРНК in vitro

Два нажорных белка мРНП: р50 и РАВР, были получены в чистом виде. р50 был выделен из свободных мРНП ретикулоцитов кролика хроматографией на ДЭАЭ-целлюлозе и гель-фильтрацией Срис. 1, дорожка 43. РАВР был очищен из безрибосомного супернатанта

ретикулоцитов кролика методом аффинной хроматографии на полисАЭ-сефарозе Срис. 1, дорожка 53.

При добавлении очищенного препарата р50 ретикулоцитов кролика в экстракты из зародышей пшеницы белок полностью ингибировал трансляцию глобиновой мРНК в этой системе Срис. 6Э. Ингибируюший эффект р50 наблюдался также при добавлении его Св значительно больших колическтвахЭ в бесклеточную систему из ретикулоцитов кролика, содержащую оптимальную концентрацию нРНК (Minich and Ovchinnikov, 199Z) • Как показали последующие эксперименты (Minich and Ovchinnikov, 1992), добавление р50 в бесклеточную систену, ингибированную высокими концентрациями мРНК, приводило в начале к стимуляции трансляции, а затем, при увеличении соотношения р50 : мРНК, к полному подавлению ее активности. На основании данных, полученных в этой работе, и данных, процитированных выше, было предположено, что р50 может оказывать двоякое действие на активность мРНК в трансляции: при небольших соотношениях р50 : нРНК белок р50 промотирует трансляцию, в то вреня как при увеличении этого соотношения р50 проявляет свойство репрессора трансляции.

соотношение белок/РНК (моль/ноль)

Рис.6. Влияние белка р50 на трансляцию глобиновой мРНК в бе'склеточной системе из зародышей пшеницы.

Недавно р50 был просеквенирован и идентифицирован как член семейства Y-box связывающих факторов транскрипции (Evdokimova et al., 1994). Эти факторы активируют транскрипцию генов, содержащих в проноторах инвертированную ССААТ последовательность в особом окружении CY-ЬохЗ. Таким образом, можно предположить, что белок р5О способен регулировать процесс биосинтеза белка на двух уровнях: регулировать транскрипцию в ядре, связываясь с ДНК, и регулировать трансляцию, взаимодействуя с мРНК в цитоплазме. Можно ожидать, что накопление мРНК в клетке будет способствовать выходу р50 из ядра в цитоплазму, что должно приводить к замедлению транскрипции с Y-box содержащих, генов. Таким образом, р50 может определять активность транскрипции в зависимости от содержания мРНК в клетке.

Добавление очищенного РАВР ретикулоцитов кролика в бесклеточную систему из ретикулоцитов кролика, содержащую оптимальную концентрацию глобиновой мРНК, приводило к повышению эффективности процесса трансляции почти в два раза Срис. 73.

.РАВР, ккг/мл

Рис. 7. Влияние РАВР на трансляцию глобиновой мРНК в бесклеточной систене из ретикулоцитов кролика: CID при оптимальной концентрации мРНК СЗО мкг^нлЗ; С23 и С 43 при высоких концентрациях мРНК С120 мкг/мл или 240 мкг/мл, соответственноЗ; СЗЭ при ингибировании системы полиСАЗ.

Интересно, что, в отличие от р50, высокие концентрации РАВР не оказывали ингибиторного действия на процесс трансляции. Добавление РАВР в систену, ингибированную полиСА},, повышало эффективность трансляции мРНК, однако полного восстановления биосинтеза белка не происходило. Добавление РАВР в систену, ингибированную высокими концентрациями мРНК, также стимулировало работу системы, но максимальная активность опять не достигалась.

Таким образом, один РАВР "не в состоянии устранить ингибирующее действие высоких концентраций свободной мРНК.

Полученные в данной работе результаты вместе с результатами В. Б. Миниха и Л. П. Овчинникова позволяют предложить следующую схему инактивации - активации мРНК в трансляции:

тСРАВРЗ

пС~р503

мРНК*2п(р50) > мРНК*п(р50)*тСРАВРЭ

По этой схеме неактивное состояние мРНК в трансляции определяется большим количеством р50, ассоциированного с ней, что мы имеем в случае свободных мРНП. Активация обусловлена диссоциацией части Сокола половиньО р50 из комплексов с мРНК и присоединением к мРНК РАВР; именно такой белковый состав имеют полирибосомные мРНП. Оба белка, р50 и P/BPi необходимы для обеспечения максимальной активности мРНК.

Простая конкуренция РАВР и р50 за места связывания на мРНК могла бы обеспечивать переход мРНК из неактивного состояния в активное. Согласно данным В. Б. Миниха и Л. П. Овчинникова (Minieh and Ovchinnikov, 1992} р50 имеет относительно низкое сродство к полиСАЭ. С другой стороны, как показано в данной работе, РАВР обладает высоким сродством ге только к полиСАЗ, но и к другим последовательностям РНК. Следовательно, РАВР мог бы вытеснять р50 не только с 3' концевой полисАЭ-последовательности мРНК, но также и с других участков мРНК. Кроме того, было показано, что р50 может фосфорилироваться (Mi.nich and Ovchinnikov, 1992). Не исключено, что фосфорилирование может изменять сродство р50 к мРНК и быть тем механизмом, который запускает «переодевание» нРНК и, таким образом, изменяет еб

функциональный статус.

4. Локализация мажорных белков нРНП. р50 и РАВР. в фибробластах кожи человека

При помощи поликлональных антител к белку 50 кДа свободных мРНП ретикулоцитов кролика . и антител к полиСАЗ-связывающему белку ретикулоцитов кролика мы исследовали внутриклеточное распределение данных белков методом иммунофлуоресцентного окрашивания клеток фибробластов кожи человека.

На рисунке 8А представлена картина иммуннофлуоресцентного окрашивания клеток антителами против белка р50. Видно, что антитела дйффузно распределяются по всей цитоплазме. При окрашивании клеток антителами против РАВР наблюдается другая картина Срис. 8БЭ. Наряду с диффузным окрашиваниен цитоплазмы, как и в случае с применением антител против р50 кДа, антитела против РАВР выявляют четко окрашенные структуры в ядре клеток фибробластов кожи человека. Данные структуры по своему положению соответствуют ядрышкам. Полученная картина распределения РАВР в клетке позволяет сделать предположение о сушествовании новой функции РАВР, связанной с процессами, происходящими в ядрышках.

В данной работе мы показали, что РАВР обладает высоким сродством к рРНК. Не исключено, что РАВР накапливается в ядрышке за счет взаимодействия с предшественниками рРНК и, возможно, принимает участие в её синтезе и процессинге.

Рис. 8. Иммуннофлуоресцентное окрашивание фибробластов кожи человека поликлональными антителами против белка р50 САЭ и полисАЭ-связывающего белка СБ5 ретикулоцитов кролика.

III. выводы

1. Проведено сравнение натричной активности изолированной нРНК ретикулоцитов кролика с активностью мРНК в составе полирибосомных и свободных нРНП в бесклеточной систене из ретикулоцитов кролика. Показано, что белки обоих классов нРНП обеспечивают трансляцию нРНК в широком диапазоне концентраций матрицы, препятствуя ингибированию системы высокими концентрациями мРНК.

2. Показано, что свободные мРНП ретикулоцитов кролика не активны в трансляции в системе из зародышей пшеницы, в то время как мРНК, выделенная из этих мРНП, и полирибосомные мРНП активны

кв такой системе. Свободные мРНП становятся активными в трансляции в системе из зародышей пшеницы при добавлении в нее 0,5' М КС1 смыва с рибосом ретикулоцитов кролика.

Высказано предположение, что мРНК в составе мРНП ретикулоцитов кролика находится под контролем репрессора трансляции, ассоциированного с мРНК свободных мРНП, и активатора трансляции, находящегося в составе фракции рибосом.

3. Показано, что неактивное состояние свободных мРНП ретикулоцитов кролика в системе из зародышей пшеницы сохраняется после удаления большинства белков промывкой свободных мРНП 0,5 М НаС1. Высказано предположение, что репрессором трансляции является коровый белок свободных мРНП с молекулярной массой 50. кДа Ср50Э.

4. Исследовано влияние двух мажорных белков мРНП, р50 и полисАЭ-связывающего белка СРАВРЭ, на трансляцию мРНК в бесклеточных системах. Показано, что р50 ингибирует трансляцию системы, содержащей оптимальную концентрацию мРНК. РАВР, напротив, значительно активирует трансляцию мРНК.

5. Методом непрямой иммунофлуоресцентной микроскопии исследовано внутриклеточное распределение двух мажорных белков мРНП в фибробластах кожи человека. Показано, что актитела против р50 окрашивают преимущественно цитоплазму клеток, тогда как антитела против РАВР окрашивают как цитоплазму, так и ядрышки. Высказано предположение, что РАВР взаимодействует не только с мРНК, но и с предшественниками рРНК и может участвовать в биогенезе рибосом в ядре.

Материалы диссертации опубликованы в следующих работах:

1. Minich W.B., Korneveva N . L , , Ovohinnikov L.P. (1989). Translational active mRNPs from rabbit reticulocytes are qualitatively different from free mRNA in their translatability in cell-free system. FEBS Lett. 257, p.257-259.

2. Minich W.B., Korneveva N.L.. Berezin Yu.V., Ovohinnikov L.P. (1989) A special masking/demasking system controls mRNA distributions between free and polyribosomes in rabbit reticulocytes. Republican scientific conference. Modern problems of phisico-chemical bioligy and biotechnology. Thesis. Alma-Ata, USSR, p. 20.

3. Minich W.B., Korneveva N.L.. Berezin Yu.V., Ovohinnikov L.P. (1989) A special masking/demasking system controls mRNA distributions between free and polyribosomes in rabbit reticulocytes. International symposium. Molecular organisation of biological structures. Thesis. Moscow, USSR, p. 272.

4. Minich W.B., Korneveva N.L.. Berezin Yu.y., Ovohinnikov L.P. (1989). A special repressor/activator system controls distribution of mRNA between translationally active and inactive mRNPs in rabbit reticulocites. FEBS Lett. 258, p. 227-229.

5. Minich W.B., Korneveva N.L.. Berezin Yu.V., Ovohinnikov L.P.

(1989) Features of translation of informosomes in cell-free systems of protein biosynthesis. Meeting on translational control. Thesis. Cold Spring Harbor, New York, p. 19 (plenary lecture).

6. Minich W.B., Volyanik E.V., Korneveva N.L.■ Berezin Yu.V., Ovohinnikov L.P. (1989) Features of translation of informosomes in a cell-free systems of protein biosynthesis. Second bilateral symposium USSR-USA. Structure of eucaryotic genom and regulation of its expression. Tbilisi, October 16-20. Thesis. Moscow, p. 31-32.

7. Minich.W.B., Korneveva N.L., Berezin Yu.V., Ovohinnikov L.P.

(1990). Cytoplasmic mRNP proteins affect mRNA translation. Molecular Biology Reports 14, p. 65-67.

8. Korneveva IL_, Ovohinnikov L., Gavrilova L.(1994) Localisation of major mRNP proteins in human diploid skin fibroblasts. Cell Biol. International 18, N 5, p. 421.