Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Влияние аспирина на тромбоцитарный и коагуляционный компоненты гемостаза в зависимости от интенсивности процессов ПОЛ в тромбоцитах

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Влияние аспирина на тромбоцитарный и коагуляционный компоненты гемостаза в зависимости от интенсивности процессов ПОЛ в тромбоцитах"

/

' / г

> с

\

РГ6 од

1 8 т V-?')

На правах рукописи

Марченко Дмитрий Спартакович

ВЛИЯНИЕ АСПИРИНА НА ТРОМБОЦИТАРНЫЙ И КОАГУЛЯЦИОННЫЙ КОМПОНЕНТЫ ГЕМОСТАЗА И ЗАВИСИМОСТИ ОТ ИНТЕНСИВНОСТИ ПРОЦЕССОВ НОЛ В ТРОМБОЦИТАХ

03. 00. 04 - биохимия 14. 00.25 - фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степен кандидата медицинских наук I

Г

УФА - 1998

Работа выполнена в Тюменской медицинской академии

Научный консультант:

доктор медицинских наук, профессор А. Ш. Бышевский

Официальные оппонент:

Член-корреспондент РАЕН,

доктор медицинских наук, профессор Ф. Н. Гильмиярова доктор медицинских наук, профессор Э. А. Ортенберг Ведущее учреждение: Гематологический научный центр г. Москва

Защита состоится «х-!-/ » с( ^¿ /:Д199^ г на заседании диссертационного Совета Д 084.53.01 при Башкирском государственном медицинском университете (425000, г. Уфа, ул. Ленина, 3)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Башкирского государственного медицинского университета.

Автореферат разослан . 199^_г.

Ученый секретарь

диссертационного Совета, профессор

Э. Г. Давлетов

РОССИЙСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ БИБЛИОТЕКА

С}5 О 5-С 1

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Тромбоциты ГГЦ/могут быстро изменять гемостатческии потенциал как важнейший кде1 очный регулятор свертывания крови |Д.М.Зубаиров, 1978; З.С.Баркшан. 1988;Б.И.Кушпк. 1990; А.Ш.Бы-шевский и др.. 1996]. Изменение некоторых видов активности "ГЦ -важное звено в формировании наклонности к тромботеморра! ическнм состояниям Ц.И.Козинец, 15.А.Макаров. 1997J. что подтверждено наблюдениями ¡а функцией 'ИД при нарушениях iCMoeinea [В.П.Ьадуда и Ф„ 1994. Ymaguchi. Telsutaiii. 1995|.

СвоГкл во TI1, определят i. темой aiическии шмспцнал обусловлено iipeiiMuiieeiBCHHo их способное) ыо к ai peí апии. адгезии и реакции высвобождения - взаимосвязанным функциям ¡'лС.Гибрнедян. ( .') Акопов. 1985. 11 А.Федоров. 1991. Schvnpperi с а. 1993] И медицине используют соединения, нш ибирмощце ai peí ацию и реакцию высвобождения ГЦ Эффсми пвный прием юрможення ai peiamni - применение нншби торов продукции физиологическою ннд\мора процесса фом-боксана А;. Воздейавовать на его leiiepaiuno можно на разных ламах превращения предшественника - арахидоновой kiic.ioili. Особенно >ф-фекшвно торможение ее прекращений, каптируемых инклоокст е-назой.

Из ншибшоров цнклооксигеназы чаще применякися (и не юлько как amnaipeiamыi аспирин АО и индомечацин ¡Mayer е. а. 1998: Palatnick. íeiienbein. 1998; Rupprecht е.a., I99X¡. 'Зффекшвпосп. ншибшоров дрмпх мааои превращения арахидоновон кислоты ниже [Chen et al.. 1995} Наиболее актвно иеиолыуемый в пракшке ингибитор циклоокешеназы - АС. юрмозпт при определенных дозах и синтез ан-maipeiaina проел ациклина. 'Juim определяйся необходимость про-тоджан, поиск новых amiiurpei ашов или приемов, ишеисифинирую-щпх м|>фек1 известных ашпагреишн.пз (К.М.Лакпн. 1988;. Bor/.ak е. а.. I998J Выявлена способноец, ашнокепдаптв ограничивай, шрешиию ГЦ |Sleiner. 1993; Hepner-Pus/km. 1995. Xiao е.а. 1995; Vericel е. а.. . 1995|. Изучена комбинация вшамниов Д. Г.. С' и F'. каждый из которых антиоксидант (С.Н.Пльдецова. 1990] В совокунностн via комбинация снижас! гемосчатические сдвиги [С.Л.Галян, 1993]. провоцируемые тромбинемией. ее введение снижает н агрегацию ТЦ [А.А.Вакудин. 1998; И.В.Ральченко. 1998J. Их используют для профилактики тромбо-геморрагий в клинике |А.А.Вакулип, 1993, 1998; Ю.И.Цирук. 1998].

Двусторонняя связь между ПОЛ и гемосюзом [В.П.Мищенко, 1981; А.Ш.Бышевский и др.. 1991-1996], положительное влияние па гемостаз ашиоксидаитов, роль ГЦ как важного звена в связи ПОЛ и гемостаз [И.В.Селиванова, 1994; А.А.Вакулнн. 1998], ланные о снижении агрекщии ТЦ под влиянием ашиоксидаитов |Xiao е.а.. 1995], единичные сведения о способности антиоксидантов уменьшать дозу АС,

угнстающую aiperamuo [И:А.Дементьсва, 1998], указывают на необходимость расширения представлений о возможности потенцировагь ан-тишрегантную акшвность АС антиоксидантами. Можно ставить вопрос и шире: актуальна разработка представления об ингибиторах превращений арахидоиовой кислоты не зависимо от уровня на котором они действуют. Однако значительное число соединений, ингибирующих превращения арахидоната на разных уровнях, большой объем такого рода исследований послужил основанием ограничить задачу наиболее широко используемым ингибитором ai peí ацип - АС, тем более что он чаще других используется как антиагрегант. Интерес представляет и ею влияние на коагуляционпый гемостаз.

11сль работы - выявить возможность повышения ангиагре(антного действия АС и его влияния на гемокоагутяцию за счет \i петепия интенсивности процессов ПОЛ в организме.

Задачи исследования: ]). Изучить влияние комбинации витаминов-аитиоксидангов (A. Е, С и Р) на агрегацию 'ГЦ н высвобождение факторов Р.-,. Р4 и Р|0. 2). Изучшь влияние на те же свойства сннтешческо-го антиоксиданта и прооксиданта. 3). Изучить влияние ингибитора превращений арахидоиовой кислоты, катализируемых циклоокеш сиазой (аспирина), на те же свойства ТЦ на фоне прооксиданта и антиоксидап-тов. 4. Изучить влияние АС на коагуляционпый гемоааз на фоне про- и антиоксиданта.

i 1аучная новшна. Получены данные, подтверждающие, что анги-оксиланты снижают агрегацию ТЦ. установлено, что антиоксиданты юрмош сопряженное с агрегацией высвобождение фф. Р;„ Р4И Р]0.

Количественно охарактеризовано свойство прооксиданта ограничивать, а антиоксида!нов - усиливать апгиагрегантный эффект АС и реакцию высвобождения. Установлено, что эффекты АС и ДМ, вта-минов-антпоксидатов па агрегацию и высвобождение потенцированы.

Впервые показано, что потенцирование антиагрегантного эффекта АС антиоксидантами. его ограничение ирооксидантами соответственно снижает или усиливает напряжение гемокоагуляционного гемостаза через изменения степени активности ГЦ.

Практическое значение работы. Материалы исследований использованы при разработке методических рекомендаций по применению ан-тноксидантов в хирургической клинике при оперативных вмешательствах на сосудах нижних конечностей.

11олученныс данные использованы при составлении инструкции по клиническому испытанию ВИТАКОМПЛЕКСА (рабочее название), рекомендованному Фармакологическим Комитетом Минздравмедпрома для медицинского применения под названием «СЕЛМЕВИТ» (протокол № 10 от 25 сентября 1997 г).

Данные, полученные в процессе исследований, использованы при

паписапии монографии "Тромбоциты" (Тюмень. 1996). ; ,

На основе полученных данных подготовлены и шданы методические рекомендации для врачей хирургических специальностей. Результаты работы внедрены в практическую деятельность МСЧ и/о Ямбург-газдобыча. ОКБ Тюмени и Облонкодиспансера.

Апробация и публикация. Основные положения диссертации представлены на 9-й Европейской конференции "Вопросы гсмореологин" (Сиена, 1995), на Международном симпозиуме «Биологически активные добавки к пище и их использование с профилактической и лечебной целью при наиболее распространенных заболеваниях" (Тюмень, 1995), на школе молодых ученых "Ф13юлопя та патолопя перекисного окисления лпи/нв, гемостазу та имуногенезу" (Полтава, 1995). Международном симпозиуме "Физиология и патология гемостаза" (Симферополь-Полтава, 1994), Международных симпозиумах "Медицина и охрана здоровья населения" (Тюмень, 1996. 1997, 1998). По материалам диссертации опубликовано 6 работ'.

Основные положения, выносимые на защиту 1. Апшоксиданты снижают спонтанную и АДФ-индуцируемую агрегацию ТЦ, высвобождение факторов Рл и Р4 и Р|(). Антитромбоцнтариая активность ингибитора циклооксигеназы аспирина увеличивается на фоне антиоксидап-тов, которые потенцируют эффект АС на агрегацию и реакцию высвобождения. 2. На фоне угнетения ПОЛ в ТЦ уменьшается доза АС, вызывающая 50%-нос торможение агрегации. При усилении процессов ПОЛ в ТЦ антнтромбоцнгарный эффект АС ограничивается. 4. Проти-восвсртывающее влияние АС на коагуляционный компонент гемостаза ослабляется при активации и усиливается при угнетении ПОЛ в ТЦ.

Целесообразно углубленное изучение в клинике зависимости эффекта АС от состояния ПОЛ, в частности, его эффекта на фоне антиок-ендантов. в качестве которых может использоваться комбинации витаминов, к применению которых нет каких-либо ограничений (исключая индивидуальную непереносимость).

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 135 стр. машминописи, включает введение, обзор литературы, собственные данные, обсуждение, выводы и список использованной литературы (87 работ отечественных и 162 - зарубежных авторов).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследований. Эксперименты выполнены на беспородных белых крысах (самцы, 575 особей, 120+15 г): для них известна суточная потребность в витаминах, использовавшихся нами как комплексный антиоксидант, известна доза ДМ. вызывающая угнетение ПОЛ, доза прооксиданта (свинца), активирующая ПОЛ в ТЦ, есть данные об эффектах разных доз АС, большинство работ по проблемам гемостаза выполнены на крысах [Б.И.Кузник, В.П.Скипетров, 1975;

Б.А.Кудряшов, 1975: Д.М.Зубаиров, 1978].

Предварительно нашли, что средние арифметические значения, как и величины ш исследуемых показателей, близки при п = 5 или 10 (число вариант). Поэтому включали в группу 5 крыс, увеличивая их число при значительном варьировании показателя внутри фуппы. Из-за зависимости гемостаза от сезона и метеофакторов [А.Ш.Бышевский. В.Н.Кожевников, 1986] в каждом эксперименте была кошрольная группа.

Кровь брали у наркотизированных диэтиловым эфиром крыс из яремной вены в шприц со стабилизатором (вену обнажали), обрабатывая по гемостазиологическим правилам [В.П.Батуда и др., 1980]. Для оценки гемостаза контролировали: 1. Лгрсгационную актнвноаь ГЦ (агрегометр "'Биомак"), устанавливая МА и начальную скорость ^ и). Индуктор агрегации - ЛДФ (конечная концентрация 0,01 мг/м.т) [В.П.Балуда и др., 1980|: 2. Спонтанную агрегацию [В.П.Балуда и др., 1980]): 3. Ф. Р.; в плазме - по разнице показателей АВР до и после удаления ТЦ [В.П.Балуда и др. 1980]; 4. Ф. Р3 - по разнице показателей АВР в плазме после АДФ-агрегации | В.П.Балуда и др. 1980]: 5. Ф. Р4 плазмы - по действию прогретой бедной ТЦ плазмы на тромбин-гепариновое время свертывания субстратной плазмы; 6. Содержание ф. Р|о - в модификации А.П.Соломонова, Э.Г.Ларского [В.П.Балуда и др., 1980) спектрофлуоромсгрически; 7. Число ТЦ - по В.В.Меньшикову [1987]; 8. АВР, АЧТВ и ТГ - по описанию [В.П.Батуда и др., 1980]; 9. Содержание ПДФ - в модификации Д.Ш.Бышсвского и др. [1989|.

Для оценки ПОЛ и антиоксидаптной активности определяли содержание первичных /ДК/ и вторичных /ГБК/продукюв исрксидации, период индукции /Г1И/ и скорость окисления /СО/ [В.Н.Унгкалова и др., 1987]. ПИ выражали временем поглощения пробой 25 мм' кислорода, СО устанавливали по углу наклона линейного участка кинетической кривой [С.П.Ельдеиова. 1990].

Как комплексный аптиоксидаит использовали комбинацию витаминов А, Е. С и Р - апробированные эффекторы угнетения ПОЛ крови и ее компонентов [С.Л.Галяи, 1993; В.Г.Соловьев и др., 1997]. Применяли дозы: витамины А - 0,18, Е - 0,15, С - 45 и Р - 20 мг/100 г массы тела. В этих дозах комбинация не влияет на гемостаз здоровых людей и животных [СЛ. Галян, 1993; Т.П.Шевлюкова, 1996: Ю.И.Цирук, 1998]. Витамины вводили с утренней порцией рациона ежедневно, 12 дней -срок, достаточный для антиоксидаитного эффекта [С.Н.Ельдецова, 1990: А.А.Вакулин, 1998]. ДМ вводили (также с рационом), чтобы уточнить, связан ли эффект витаминов только с их антиоксидантными свойствами. Основная доза ДМ - 100 мг/100 г, а также увеличенная в 2 и 4 раза. Прооксидант (уксуснокислый свинец) использовали в связи с тем, что он не влияет в дозах, вызывающих минимальные изменения

порфиринового обмена (5 мг/100 г массы), но активирует ПОЛ и, вторично, свертываемость кропи при такой продолжительности введения [С.Н.Ельдецова, 1990; А.А.Мкртумяп, 1994: В.Г.Соловьев, 1997]. Всасывается около 5% соли [Свинец. ВОЗ, 1980].

Чтобы установить, имеется ли взаимоусиление (или гашение) эффектов ингибитора циклооксигеназы ТЦ при введении АС на фоне ан-тиоксиданта и прооксиданта, вводили ДМ или свинец на 12-й день после ежедневного введения витаминов, ДМ или свинца. АС вводили за 24 ч до отбора проб крови однократно в дозе Dh(1»„, чтобы «оставить место» для выявления эффекта на агрегацию антиоксидантов и прооксиданта.

Результаты обработаны методом вариационной статистики для малых рядов наблюдений с использованием таблицы Сл.юдента-Фишера.

Активность ТЦ при угнетении или активации НО. I в hiisl. В 1-Й серии исследований изучали СА и ЛДФ-атрегацию при введении витаминов, определяя одновременно количество ТЦ, уровень фф. [V Р4 и I'w в плазме после агрегации. Подопытных крыс разделили на две группы: 1. Крысы не подвергались каким-либо воздействиям (интакшыи контроль); 2. Крысы получали витамины А, Е. С и 1' в дозах, адекватных лечебным. Пробы крови брали в 1-й день (исходные), на 8-й и 13-й дни от начала опытов.В ходе эксперимента у крыс, неподвсргавшихся воздействиям, изменения показателей в динамике не наблюдали. На фоне витаминов к восьмому дню обнаружилась тенденция снижения активности ТЦ: уменьшение МА, НС агрегации, уровня фф. Р4 и Рщ в плазме. К 13-му дню эти сдвиги стати достоверными (табл. 1).

Состояние ИОЛ (табл. 2) в ТЦ контрольной группы не изменялось. У «витаминизированных» крыс в ГЦ уменьшилось содержание ДК и ТЬК-продуктов, удлинился период индукции (ПИ) и уменьшилась скорость окисления. Как и показатели активности ТЦ. эти величины к 8-му дню обнаружили тенденцию к изменению, а к концу наблюдений отличались от исходных достоверно.

Таблица 1. Влияние витаминов на агрегацию, п-5 на каждом этане.

Показатели Контроль Витамины

СА, % 8,9±1,1 9,1+1,2

8,6+1,2 8,111,0

8,>±1,0 7,5±0,8*

МА, % 58.212,9 58,9+3,0

57,113,9 54,812,9

59.3+2,4 51,1+2.8*

1ц а 5,4+0,4 5,5+0,3

5,3±0,3 5,0+0,3

5,6+0.2 4,810,2*

ГЦ, тыс.мкл 1034+29 999128

978+32 1024+31

1003131 967+27

Р;,% 87,2+2,8 89,112,9

88,813,9 86,313,7

89,3+2,6 79,212,7*

1*4, С 3,0+0,03 3,110.01

3,1+0,02 2,8+0,01

2,9+0,02 2,4+0,02*

Рщ, НГ/МЛ 8,9+0.14 9,1+0,12

8.810,11 8,410,08

8,610,09 8,1+0,03*

Примечания: верхняя строка - исходные, 2-я - на 8-й, 3-я - па 13-й день опыта

Таблица 2. Влияние втаминов на интенсивность ПОЛ вТЩп~5)

Показатели Контроль Витамины

ЛК, А/мг липидя 0.13+0,03 0.15+0,041

0,1210,02 0,11+0,022

0,1410,03 0,0710,008*

ТЬК, сд'мг липнла 0,5710.07 0,5510,06

0,6110.08 0,4910,04

0,55+0.07 0,33+0,04*

ПИ, мин/мл 49,1+2,8 51,413,0

51,2+2,9 55,913,2

50,312,6 73,9+3,1*

СО, мм'/мл н мин 0,69+0,07 0,7310.09

0,7210,06 0,6410,06

0,7210,07 0,4710,04*

Примечания, как к табл. 1 Следовательно, наблюдали снижение активности ТЦ, сопутствующее росту ашиоксидантного потенциала, что согласуется с ранее установленной возможностью ограничивать активацию ТЦ антиокси-дантами [И.Л.Дементьева, 1998]. Важно, что мы изучили этот процесс в динамике, сопост авляя не только контроль с опытом, но и наблюдая за сост оянием показателей от исходного момента до конечного. Во 2-й серии опытов по аналогичной схеме вместо витаминов ис-

иользовали синтетический аитиоксидант ДМ (100 mi /100 г массы тела в су г). 11од его воздействием (табл. 3) произошли изменения, сходные но направленности и интенсивности с вызванными витаминами: уменьшились все показатели активности ТЦ.

Разница между витаминами и ДФ (в этой дозе) заключается в том, что ДФ обнаружил частичный эффект уже на 8-й день введения: выявилась не только тенденция к снижению активности ГЦ, по и статистически достоверное изменение отдельных показателей в этом направлении (СА и МА АДФ-агрегания, уровень ф. Рц, - табл. 3).

Таблица 3. Влияние ДМ на аг ретацию 1 Ц, п - 5 на каждом этапе

Показатели Контроль Димефосфон

СЛ. % 8.5±1.0 9.2Ю.Л

8.7±1.1 К.<ьц.7*

8.710.9 6 2±0.5*

МЛ, °0 58,8±2,7 57.6+1.1

59.2±2,8 \> ¡-¡.Г

57,8i2.6 M.1:2.!:

Tga 5.7±0.5 5,5*0,3

5,4+0,4 5.110.3

5.7±0,5 4.3±0.1*

ГЦ. тыс. мкл 934±31 1099131

1078±35 1004±22

1024+28 997+25

Р,."« 86.7±2,4 88 2+2 2

87.7±3,4 89.1+3,1

88,5±2,7 74.2+2,1*

Р4.с 3.1+0.02 3,0+0,01

3.2±0.02 2,3±0,01*

2.8+0,01 2,1 ±0,03*

Р|П. III' 4.1 8.8±0.12 9.(1±0.06

8,0+0,1 I 8.3±0,07*

8,8±0,07 7 о+п 0">*

I (римечання: как к таил 1

Данные табл. 4, свидетельствуют, что и показатели интенсивности ПОЛ в ГЦ изменились в направлении, указывающем на снижение интенсивности процессов перокендации.

Таблииа 4. Влияние ДМ на интенсивность ПОЛ в ТЦ. п=5 на каждом лапе

Показатели Контроль Димефосфон

ДК, А/'мг липида 0,12±0,02 0,13+0.012

0,14±0,03 0,1010,006*

0,15±0,04 0.05+0,003*

ТВК, ед'мг литтила 0.56+0,08 0,5010,05

0,63±0,09 0,48+0,04

0,57+0,07 0,30+0,03*

ПИ, мин. мл 49,812.3 50,2+2,1

50,0±2.7 55,2+3,1

51.1+2.5 73.6±2.0*

СО. мм' мл в мин 0,63+0,06 0,7310,06

0.71 ±0,06 0.61+0,04*

0.69+0.08 0.4010.02*

11рн.мечания. тс же, чго к габл. 1

Обнаружив, хотя и слабо выраженную, зависимость степени сдвига активности УЦ 01 изменений ПОЛ в них, в 3-й серии опытов ту чади состояние ТЦ и ПОЛ в них при разных дозах ДФ: Контрольные животные добавок не получали, подопытные получали 100, 200 или 400 \и ДФ/100 г массы в сут. Выявилась зависимость С1еиенн изменения активности ТЦ, от дозы. К восьмому дню наметились сдвиги, отражающие снижение агрегационпой и «высвобождающей» способности ТЦ. Интенсивность изменений выше при увеличении дозы ДФ. особенно к 13-му дню (рис. 1А и В): наклоны кривых снижения агрегационпой активности и интенсивности высвобождения существенны (особенно кривые начальной скорости реакции и содержания ф. Рд в плазме крови.

—•—С А,

%

1да

-л-Р-4

-к-Р-10

0 100 200 400

Рис. 1А. Изменения спонтанной агрегации, начальной скорости и высвобождения фф. Р4 и Рц,. на 13-й лень

Рис И). Изменения МЛ и высвобождения ф. Р;. на 13-й день

В табл. 5 приведены данные о состоянии ПОЛ после введения ДМ (у тех же крыс): чем выше доза ДМ, 1ем заметнее угнетение ПОЛ, особенно по степени изменения содержания в ГЦ продуктов перокси-даиии.

Таблица 5. Сосюяние 1 ЮЛ в ТЦ крыс, получавших ДМ

Показатели Контроль Вводили димефосфон. чг'ЮО г

100 200 400

ДК, ¿V мг ли- 0,11 ±41,03 0,11 ±0,013 0,14+0.011 0,10±0,011

иида 0,15±0,02 0,09±0,004* 0.07±0,003* 0,07±0,003*

0.1310.04 0,04±0,002* 0,03±0,002* 0,04+0,003*

'ГБК, ед.'мг ли- 0.52+0,06 0,52+0,04 0,53±0,05 0,50±0.03

пида 0,64+0,06 0,46+0.03 0,43±0,02 0,36+0,02

0,53±0,07 0,3110,03* 0,24+0,02* 0.19±0,02*

ПИ. мин/мл 49,8+2,3 51,1+2,0 51,7+2,0 50,1 + 1.9

51,1+2,4 55,7±3,2 56,9+2,4 59,9±3,0

50,3±2.6 12.9+2,1 * 77,8±2,0* 82,4±2,0*

СО. мм1 'мл в 0,61 ±0,05 0,70+0,05 0.71 ±0,04 0,72±0,04

мин 0.66±0,04 0,59+0,03* 0,51 ±0.02* 0,47+0,02*

0.67+0,07 0,38±0,02* 0,32+0.03* 0.2810,03*

Примечания, как к табл. 1

В следующей серии исследований изучали изменения ТЦ при введении нрооксиданта - уксуснокислого свинца (5, 10 или 15 мг/100 г в суточной гюрпии рациона). Ранее показано, что 1-я и 2-я дозы активируют ПОЛ в эритроцитах и плазме [С.Н.Ельдецова, 1990], начиная с 10-12 дня.

Мы сохранили схему, применявшуюся нами при введении антиок-сидантов: отбор проб на 8-й и 13-й дни опыта. Выявилось, что эффект свинца на активность ТЦ растет пропорционально дозе, как и сроки его проявления (табл. 6).

- 10-

Таблица 6. Влияние возрастающих ло) свинца на 'ГЦ, п_5.

I Указатели Контроль Вводили уксуснокислый свинец, мг/100 г

5 10 15

8,1 + 1,0 9,1 ±0,6 8.7±0,7 9,3+0,8

8.7±0.6 9.6+0,6 10.4+0.3* 11,9+0,5*

8,4±0,8 11,1+0,3* 15,0±0.4* 17,9±0,4*

МА, % 57,6±3,0 57,6+1,4 56,5±1,3 57.1 + 1,3

57,1 ±2,2 61,1 + 1,0* 59,5+1,1* 64.8+: 1.4*

56,9±2,3 67,0±2,3* 75.0+1.3* 79.2+1,4*

и; а 5.5±0,3 5,5+0,3 5.4+0.2 6,010.5

5.010,2 5.7+0,4 5,1>±0,2 7,1±0.3*

5,5±0,4 6.3+0,2* 7.8±0,3* 8,7±0,2*

^ Р,«; " ~ 85.3±2,2 88,1 + 1,8 87,2+2.1 87,911.2

Х4.8Ь2.9 92.1+3.0 95,1 ±2,2* 99.3±1 0*

86.3+2.4 94.8+1.2* 99,8+2.1* 110+2. И'

________________ Р,с 3.2 ±0.01 3,1+0,01 3.310.03 3,710.02

3,0±0,02 3,410.01 4,710,01* 4.910.02*

2,4x0,03 4,3+0.02* 5,9+0,02* 6.510.03*

['¡г,, н1 мл 8.310.13 9,1 ±0.05 8,710,06 8,610,04

8.7±0,12 9.9±0.08* 10,0+0,05* 9,9±0,06*

8.9+0.07 10,9+0 04* 12,210,07* 14,2±0.03*

Обозначения как в табл. I Из данных 1абл. 7 видно, чго и степень иитепсифпканнн ПОЛ в ТЦ пропорциональна дозе свинца. Наиболее же существенно то, что ак-твация ПОЛ сопровождает активацию ТЦ.

Показатели Контроль Вводили уксуснокислый свинец, мг. 100 г

5 10 15

ДК. А'мг ли- 0.15+0,02 0.18+0,011 0,19+0,012 0,18±0,009

ли да 0.17±0,03 0.22+0,005 0,28±0,002* 0.33±0,002*

0,15±0,03 0,25±0.003* 0.43+0.003* 0.49±0,003*

ТБК. ед. М1 ли- 0,5110.05 0,53+0,05 0,5210.04 0,50г0.04

пила 0,6210,05 0,56+0,04 0,61 ±0,02* 0.7510,02

0,59+0,08 0,64+0.02* 0.73±0,03* 0,8410.03*

11И, мин. мл 49,9±2.2 54,1 ±2,1 54,6+2,1 51,0 + 1,7

51,2±2,3 49,2±3.3 46,9±2,3 42,3+2,0

51,1 ±2,2 42,0+2,0* 37,9±2,1* 33,4+1,7*

СО, мм'/мл в 0,65±0,06 0,7710,07 0,76±0,05 0.75±0,05

мин 0,69+0,03 0,82±0,04 0,8510,03* 0,91 ±0,02*

0,69±0,06 0,95+0,03* 1,14+0,04* 121,6+0,04*

Обозначения: как к табл. 1

Судя но данным А.А.Вакулина [1998] и И.В.Ральченко [1998], активация ПОЛ, вызываемая разными по природе воздействиями (тромбинемия, тромбопластинемия, гипоксемия) влечет за собой активацию 'ГЦ. Наши опыты подтверждают это и выявляют количественную зависимость между э тими сдвигами.

Таким образом, обсуждаемые эксперименты выявили, что угнетение ПОЛ в ГЦ ограничивает агрегантную активность и высвобождение фф. Р3, Р4 и Р|о, а активация ПОЛ - увеличивает агрегацию и интенсивность высвобождения этих факторов.

Следовательно, мы могли использовать животных, получающих в течение 12 дней антиоксидангы или прооксидант. для изучения зави-симосш атиагрегаптного эффекта аспирина /АС/ ог интенсивности ПОЛ в ГЦ, чему посвящена следующая группа опытов.

В.ишние аспирина на агрегацию и реакцию высвобождения на фоне измененной интенсивности процессов НОЛ в ТЦ начали изучать с поиска ОКо;,, Ранее показано | И.А.Дементьева, 1998]. что эффекты АС на агрегацию при введении в желудок зондом гакпе же. как при введении в составе рациона питания. Мы использовали последний способ введения, отбирая пробы через сут после скармливания АС. Изучив эффект доз в 5, 15, или 20 мг на 100 г массы через 1. 2, 3 и 4 су т, мы нашли, что однократная доза 15 мг/!0() 1' массы угнетает АДФ-агрегацию с 51,4±4.2 до 27,8±2,7%, т.е. примерно па 50%. следовательно, является 015(,»„.

Через 2 сут эффект ослаблен, через 3 су т - едва заметен, а через 4 сут отс\ гсгвует. Поэтому мы использовали однократное введение АС (15 мг/100 г в составе рациона) в последующем, ограничив длительность наблюдений 1 и 2 сут. Сформировали следующие подопытные группы: 1. Крыс не подвергали воздействиям, кровь брали на 13-й день опыта (контроль 1); 2. Крысы в течение 12 дней получали ДМ - 100, 200 или 400 мг/100 г массы тела (контроль II). Кровь брали на 13-й день; 3. Крысы не получали ДМ, на 12-й день вводили однократно АС (опыт I); 4. Крысы полу чали ДМ, на 12-п день вводили АС (опыт II). У всех животных через 1 н 2 сут после введения АС брали пробы крови.

Сопоставляя контроль I с контролем П. мы могли судить об эффекте ДМ; сопоставляя опыт 1 с контролем 1 - об эффекте АС на естественном фоне 1 ЮЛ; сопоставление опыта II с опытом 1 позволяло судить о зависимости эффекта АС от ДМ. Рассмотрим результаты этих экспериментов, представляя данные в соответствие со сказанным.

Введение АС (табл. 9) проявило себя как [)15о%, что подтвердило возможность оценки эффекта АС через 1-2 сут после введения и позволило сопоставлять влияние АС на ТЦ в условиях естественного уровня ПОЛ с его влиянием на фоне антиоксиданта. Под влиянием ДМ все показатели агрегации и реакции высвобождения снизились, как и в предыдущих опытах.

Таблица 8 Сопоставление контролен 1 (интактныс крысы) и II (крысы получали

ДМ -1,2,3 строки - соответственно 100, 200 и 400 иг/100 г); п-5.

Группа СА, % МА, % 1ёа Рт Р4 Р„.

К1 8,6+1,1 58,5+3,8 5,0+0,3 81,0±2,5 2,6±0,08 8,3±0,10

К И 7,4+0,5* 51,112,0* 4,1+0,3* 73,8±2,1* 2,1±0,03* 7,6±0,08*

5,910,2* 47,0±2,3* 4,8±0,3 68,1 ±2,0* 1,8±0,03* 7,2±0,06*

5,2±0,4* 41,0+2,1* 4.1+0,2* 62,1 + 1,9* 1,2+0,02* 6,4±0,02*

Таблица 9. Сопоставление результате опыта 1 (введение АС) с контролем 1

(интактные крысы), п-5.

Группа СА, % МА, % а Р-, Г Рд

К. 1 8,6+1,1 58.5±3.8 5,0+0.3 81.0±2.5 2,6+0,08 8.3+0,10

Опыт 1 4,9+0,1* 28,0+2,1* 3,8+0.2 58.6+1.8* 1.4+0,02* 6,6+0,05*

7,9±0,3* 48.0+2.0* 4,0±0,3* 62.9 + 1.7* 1,9±0.02* 7.510.03 *

Примечание, верхняя строка в «Опыте I» - через сут после введения аспирина, нижняя - через 2 сут.

Как следует го данных табл. 10, глубина изменения всех показателей значительнее при введении АС на фоне предварительного ограничения процессов ПОЛ введением ДМ.

Таблица 10. Сопоставление результатов опыта II (введение АС на фоне ДМ) с опытом I (введение АС без ДМ), п=5.

Группа СА. % МА, % Т11 а Р, Р4 Рю

К. 1 8,6+1.1 58,5+3,8 5,0+0,3 81,0+2,5 2,6+0,08 8,3±0,10

Опыт 1 4,9+0.1* 28,0±2,1* 3,8±0,2 58,6±1,8* 1,4±0,02* 6,610,05*

7,9+0,3* 48,0±2,0* 4,0±0.3* 62.9 + 1,7* 1,9+0,02* 7,510,03 *

Опыт 11 4,2±0,08* 19+1,1* 3.1 ±0.2* 52,0±1,5* 1,2+0,01* 5,9+0,04*

7,1 ±0,11 * 42.1±1.8* 3.5±0.3* 59,1 ±1,6* 1,7±0,02* 6.2+0,04*

Примечание: верхняя строка - 1 сут после введения АС, нижняя - через 2 сут. Таблица 11. Влияние аспирина (15 мг/100 г) на агрегацию ТЦ на фоне угнетения ПОЛ разными дозами ДМ, п - 10.

Группа СА, % МА, % ща Р., Р4 Ры

К 8.411.2 57,414,1 5,210.3 81,212,4 2.710,06 8.2+0.11

АС 6.211.2* 28.513,1* 3.410,2* 57,911,6* 1,510,03* 6.310.04*

ДМ 7,310.4* 52,012,0* 4,010.4* 73,112,2* 2.0Ю.02* 7,3+0.07*

5,7±0.2* 47,1±2,2* 4,610,2 69,012.2* 1,710.02* 7.310,05*

5.010.?* 40.112,0* 4,2+0,1* 61,111,7* 1,210,03* 6.210,01*

' ДМ+АС 4,210,05* ' 18,911,1* 3,0+0,1* 51,811,4* 1*310,02* 5,710,03 *

4,0+0,2* 16,111,0* 2,7±0,10* 45,811,4* 0,9+0,02* 5,0Ю,03*

3,3+0,1* 11,010,7* 1,9+0,08* 38,2+1,0* 0,710,02* 4,2+0,02*

АС - аспирин, ДМ - диыефосфон (в 1-й строке - 100, во 2-й - 200 и в 3-й - 400 мг/100 г.

Сравнения проводятся с контролем (К).

Эффект АС в зависимости от степени угнетения ПОЛ изучили при помощи ДМ (100, 200 или 400 мг/100 г: на 12-й день вводили однократно АС (15 мг/100 i' массы) и через 1 сут брали пробы. Оказалось (табл. 11), что эффекты ДМ и АС на активность ТЦ при совместном введении выше, чем при введении порознь.

Анализ данных табл. 11 с помощью уравнения Уэбба позволил установить следующее:

При дозе дичефосфоиа 100 .»<?■ /00 г)

для спонтанной агрегации 0,50 > (0.26-0,13) - (0,26x0.13) - синергизм

для максимальной АДФ-агрегацни 0,67 > (0,50-0.09) - (0,50x0,09) - синергизм

для начальной скорости агрегации 0,42 = (0,34*0,23) - (0.34x0,23) - ехммацни

для^Ь

для 4 Р, - 0,36 (0.28+0,1) - (0.28x0,1) - синергизм Для ^ Р4 - 0.52 (0,44-0.26) - (0,44x0.26) - суммаиия Для <!>_ Р,,, - 0.30 - (0,23+0,11)- (0,23x0. II)- суммаиия

При <)оп' ¡Шчефчсфони 200 мг ¡00 г

для спонтанной агрегации 0,52 > (0,26+0.32) - (0,26x0,32) - синергизм

для максп матьной АДФ-агрегации 0,72 > (0,50+0,18) - (0,50x0,18) - синергизм

для начальной скорости 0,48 > (0,11 +0,36) - (0,11x0,36) - синергизм для 4 Р,-0.43 > (0,28 i0.15) - (0,28x0,15) - синергизм для Р, - 0.66 > (0,44+0,37) - (0,44x0,37) - суммаиия Для (¡г Рх., - 0,39 > (0,23* 0,11) - (0,23x0,11)- синергизм

при i)me димсфосфоиа 400 мг 100 с

для спонтанной агрегации 0,61 > (0.26-0,40) - (0,26x0,40) - синергизм

для максимальной АДФ-агрегации 0.81 > (0,50 v0,30) - (0,50x0,30) - синергизм

для начальной скорости 0,63 "><0,11+0,19) -(0,11x0,19) -синергизм для&Р, - 0.53 > (0,28+0.24)-(0,28x0,24)-синергизм для (Jr P¡ - 0,74 > (0,44+0,55) - (0,44x0,55) - суммация anaáLEüi- 0,49 > (0,23-0.24) - (0,23x0,24) - синергизм

Из результатов анализа видно, что эффекты АС и ДМ порознь на агрегацию и высвобождение, потенцированы при введении АС на фоне ДМ. Исключение - простая суммация эффектов.

Изучая эффект АС на фоне прооксиданта - свинца (уксуснокислый свинец в составе рациона, 12 дней по 5, 7,5 или 10 мг/100 г). На 12-й день вводили АС (15 мг/100 г) и через 1 сут брали пробы, определяя те же показатели, что и ранее. Оказалось, что свинец активирует arpera-

цшо и высвобождение пропорционально дозе, а эффекты АС на фоне свинца ослаблены (табл. 12). Таблица 12. Влияние аспирина (15 мг/'ЮО г) на агрегацию ТЦ на фоне активации ПОЛ разными дозами свинца - 5, 7,5 или 10 мг/100 г (п 10)

Группа СА, % МА, % 1ва Р, Р^ Рю

К 8,7+1,3 56,1 ±4,1 5,7±0.4 83,2+2,3 2,810.07 8,710,12

АС 5,311,1* 27,9+3,2* 4,3±0,2* 74,011,5* 2.2±0,02* 6,310,02*

Свинец 9,610,5* 62,1+2,1* 6,4±0,3* 90.0±2,1* 3,6+0,03* 9,110,08*

10,9+0,4* 67,112,1* 7.2±0,3* 98,1+2,5* 3.910,03* 10,310,1*

11.9+0.5* 71,4±2,3* 8,2±0,1* 10911.7* 4.310.04* 12,110,01*

СВ ^ АС 8,2±0,04* 50.1 ±1.2* 4,8±0,1 * 81,9+1.5* 2,610,03* 7,810,03*

9,3+0,3* 56,212.3* 6,4+0,11* 76.111.6* 3.1+0,02* 9,210,03*

10,8+0,2* 64,410.7* 7,3 ±0.09* 72.011.0* 3,710,03* 9,8+0,01*

Примечания: свинец ,СВ/в первой строке - 5, во второй - 7.5 и в третьей - 10 мг, 100 г Сравнения проводятся с контролем (К).

Интенсивность реакции высвобождения наибольшая на фоне свинца, наименьшая - на фоне АС. н промежуточная - при введении АС на фоне свинца (рис. 5).

■ к

□ ас

осв

□ св+ас р-3 р-4 р-10

Рис 5. Высвобождение фф. Р3, Р4 и Рк> у животных, получавших АС: слева направо: интакшые крыс, вводили свинец (СВ), АС и АС на фоне свинца.

Итак, активация ПОЛ, предшествующая введению АС, ослабляе! его антиагрегантный эффект, угнетение ПОЛ - усиливает. Чтобы уточнить это, провели эксперименты, в ходе которых крысы получали одновременно и свинец, и ДМ (при таком сочетании антиоксидантный и прооксидантный эффекты нивелируются [И.А.Дементьева, 1998]) . Крысы получали с суточной порцией рациона уксуснокислый свинец (5 мг/100 г) и ДМ (100 мг/100 г массы, 12 сут), на 12-й день вводили АС (15 мг/100 г) н через 1 сут брали пробы крови. На фоне одновременных добавок к рациону антиоксиданта и нрооксидаита АС вызвал такие же сдвиги, которые нашли на фоне обычного рациона. Следовательно, выявленное усиление ацгиагрегантного действия АС на фоне ДМ, или ослабление - на фоне свинца (антиоксидант и ирооксидант соответственно) не выявилось при одновременном введении этих соединений с рационом. Определение показателей ПОЛ в ТЦ этих животных обнару-

жило, что АС ограничил ПОЛ. Примерно в той же степени снизилась интенсивность Г10Л в ТЦ крыс, получивших АС на фоне одновременного введения про- и антиоксиданта. Это сделало необходимым сопоставить эффекты АС на ПОЛ па фоне только прооксиданта или только антиоксиданта (табл. 12).

Таблица 12. Влияние АС (15 мг/100 г) на ПОЛ на фоне одновременного введения свинца (5 мг/ЮО г) и ДФ( 100 мг/100 г), п " 5. _

j Показатели Контроль Вводили АС на фоне обычного рациона Вводили АС на | фоне СВ и ДМ [

J ДК. Л(мг липнда 0.15+0.02 0.07+0.02* 0.08+0.02* !

! ТБК. е.г'мг липнда 0,58±0.04 0,41 ±0,03* 0,4410.02* j

i ПИ, мин. мл 51.3±2,10 60,5±2.1 * 58,0+1.2* :

¡ LO, мм /мл в мин 0,74+0.08 0.45±0,06* ü.44±0,O4* |

Обозначения СВ - свинец

Далее, обнаружено, чго способность АС тормозить ПОЛ на фоне ДМ заме) нее, чем при обычном рационе. Эффект АС на 1IOJI после введения с рационом свинца менее заметен. Это связано с тем. что свинец, как показано выше, активирует ПОЛ.

Таким образом, можно заключить, что АС подавляет интенсивность ПОЛ в ТЦ. Это связано, видимо, с торможением циклооксигсна-зы. катализирующей образование эндоперекпеей, и, следовательно, способствующей накоплению пероксидов.

На фоне свинца, у скоряющего образование пероксидов, эффект АС на ПОЛ суммируется с эффектом свинца. Так как направленность их действия противоположна, эффект АС ослаблялся: разница между нн-гибирующнм эффектом АС и активирующим - свинца.

Взаимоотношения между влиянием всех исследованных воздействий на ПОЛ и агрегацию позволяют говорить о зависимости между направленностью и степенью воздействия испытуемого агента на ПОЛ и его воздействием на активность ТЦ. В итоге можно обратить внимание на следующее:

- угнетение ПОЛ и рост антиокендантного потенциала в ТЦ сопровождается снижением их агрегационной активности и способности к высвобождению факторов гемокоагуляции:

- активация ПОЛ в ТЦ и подавление антиоксидантного потенциала в них сопровождаются ростом их способности к агрегации и интенсификацией реакции высвобождения;

- АС, наряду с антиагрегантным действием и угнетением высвобождения, оказывает на ТЦ влияние, сходное с эффектом антиоксидан-тов; антиагрегантный эффект АС усиливается на фоне ослабленного ПОЛ и ослабляется на фоне активации ПОЛ.

Эти наблюдения позволили предположить, что АС, как антиагре-гант. может снижать гемокоагуляционный потенциал, усиливающийся при некоторых экстремальных воздействиях, и, что эта способность АС

зависит от уровня процессов ПОЛ в орг анизме.

Влияние АС на коагулнционный гемостаз в зависимости от интенсивности

ПОЛ. В этой части работы изучали в эксперименте (на фоне активации или подавления ПОЛ) коагуляционный гемостаз, определяя показатели интенсивности непрерывно протекающего с небольшой скоростью внугрисосудистого свертывания крови: АВР, АЧТВ, уровень ПДФ и частота ЭТ (индикатор содержания растворимых комплексов мономерного фибрина /РКМФ/[В.11Балуда и др., 1980; З.С'.Баркаган, 1988: С.Л.Галяи, 1993]).

Вначале изучили влияние ДМ (100 и 200 мг/100 г в сут, 12 дней). На 12-й день 5 крысам из каждой группы ввели АС (15 мг/100 г), через сутки взяли пробы, у остальных (5 в группе) взяли пробы без введения АС (табл. 13).

Таблица 13 Сосюяние гемокоагуляции при введении ДМ (12 дней, п = 5/

Показатели Контроль ДМ. 100 мг/100 г ДМ, 200 мг'ЮОг

АВР, с 39,7±1,2 43,2+1,8 48,3±2,1*

АЧТВ, е 29,8±0,8 34,0+1,2 36.2±1,2*

ПДФ, мг% 12,6±0,7 10,2±0,8* 9,0+0,6*

ЭТ, % 36,3+1,9 33,2±1,7 25.1±1,6*

ДМ вызвал тенденцию к снижению общей свертывающей активности, но лишь один показатель уровня тромбиногенеза (ПДФ) был достоверно выше контроля. При большей дозе ДМ появились достоверные признаки ограничения тромбиногенеза и коагулемии.

Таблица 14. Показатели состояния гемокоагуляции после введения АС на фоне ДМ _и без него (п-5)__

Показатели АС ДМ (100 мг/100 г) + АС ДМ (200 мг/100 1) г АС

АВР, с 42,7±1,0* 43.9±|,3* 47,3±2,0**"

АЧТВ, е 35,0±0,8* 38,2+1,2* 43.0±1,2*"

ПДФ, мг% 11,6±0,8 9,1+0,8** 7,4±0,5*+*

ЭТ, % 36.3+1,9 32,1 + 1,4* го.ои.г*"1'

Знак * - сравнение с контролем табл 13, знак + - 2-й и 3-й колонки с 1-й, знак " -колонок 2-й и 3-й табл. 14 с теми же колонками табл. 13

АС в отсутствии ДМ, вызвал слабое, но достоверное удлинение АВР и АЧТВ, не изменив уровня ПДФ и частоты ЭТ. АС на фоне ДМ (100 мг/100 г) вызвал статистически достоверное удлинение АВР и АЧТВ, снижение ПДФ и ЭТ, особенно при удвоенной дозе ДМ (табл. 14).

Можно предполагать, что изменения коагуляционного компонента гемостаза при введении АС связаны с торможением агрегации и ограничением реакции высвобождения. Введение АС на фоне антиоксидан-та в меньшей дозе вызвало изменения гемокоагуляции той же направ-

ленности, что и сам АС. Это проявилось тенденцией к удлинению АВР и АЧТВ, а также достоверным снижением уровня Г1ДФ. При большей дозе антиоксиданта эффект АС заметнее: удлинились АВР и АЧТВ, снизились уровень ПДФ и частота положительных Э'Г - четкие признаки гипокоагулемни.

Таким образом, аттпюксидант и АС порознь в испытанных дозах вызывают' слабо выраженные сдвиги гшюкоагулемического харак!сра, являющиеся, видимо,' следствием снижения вклада ТЦ в по.иержание гемокоагуляционного потенциала. АС на фоне ограничения ПОЛ сильнее тормозит агрегацию и заметно снижает активность коагуляционно-го гемостаза.

Здесь также проявилась связь между угнетением ИОЛ н \течением коагуляционного гемостаза. Это побудило пас исследовать коагуля-ционный гемостаз при действии антиафеганта на фоне активации ПОЛ: проведены эксперименты по схеме, повторяющей опыты с ДМ. вместо которого вводили проокендапт (уксуснокислый свинец. 5 или 10 мг/100 массы тела в сут. 12 дней).

Таблица 15. Показатели сосюяния гемокоагуляции после введения свиица /СВ в _ _течение 12 дней (п - 5)__

Показатели Контроль СВ, 5 мг'ЮО г СВ. 10 мс 100 г 1

АВР. с 41.9±1.4 37.211.2 35.012.1* !

АЧТВ. с 32.9±1,1 30,011.1 38.911,2*

ПДФ. мг% 11,8±0,6 14.210,5* 16,110,6* |

ЭТ, " о 2(),0± 1.2 25,211,4 50.011.6* |

Обозначения: как в табл. 12.

Свинец (5 мг) слабо отразился на уровне показателей: содержание ПДФ повысилось достоверно (на 16,9 %), АВР и АЧТВ офазилн тенденцию к укорочению. Частота ЭТ не изменилась. При большей дозе (10 мг/100 г) тенденция подтвердилась: сократилось АВР, удлинилось АЧТВ (рассогласование), приросло содержание ПДФ (на 36.4 %). увеличилась в 2 ра?а частота ЭТ.

АС на фоне меньшей дозы свинца вызвал сдвиги, указывающие па слабое противодействие прооксиданта эффекту АС. 11рп большей дозе свинца (10 мг/100 г) это подтвердилось наличием достоверных отличий (табл. 16).

Таблица 16. Показатели состояния гемокоагуляции после введения АС на фоне свинца /СВ / и без него (п"5)____

Показатели АС СВ, 5 мг/100 г + АС СВ, 10 мг/100 г < АС

АВР, с 44,7+1,0* 43,911,3* 46,312,0*'

АЧТВ, с 35,910.8* 36.211,2* 41,1 + 1,1**

ПДФ, мг?о 10,910,5 12,710,6" 11,510,5'*

ЭТ,% 20,011,2 35,111,4* 20,0+1,2*^

Обозначения: * - достоверные отличия от контроля в табл. 14, 2-й и 3-й колонки с 1-й,"- колонок 2-й и 3-й табл. 14 с теми же колонками в табл. 15.

Такнм образом, свинец в дозе 10 мг/100 г, заметно активирующей, как показано выше, ПОЛ, ограничивает эффект АС на коагудяционный компонент гемостаза. Следовательно, эффект АС на коагуляционный гемостаз снижается при интенсификации ПОЛ.

На фоне одновременного введения свинца и ДМ (соответственно 5 или 10 мг/100 г и 100 или 200/100 г, 12 дней. АС вводили на 12-й день и через сут брали пробы). Эффект АС оказался таким же, как и у крыс, ненолучавшпх про- или антиоксиданта.

Следовательно, модификация эффекта АС на гемокоагуляцню при введении про- или антиоксиданта, связана с воздействием этих соединений (свинца пли ДМ) на ПОЛ. Это видно из тою, что взаимонивелирование эффектов прооксиданга и антиоксиданга на ПОЛ предупреждает сдвиг реакции коагуляциоппого гемостаза па АС.

Влияние комбинации шпачннои А, Е, С и Р на зффект АС. ДФ нельзя 01 нести к средствам, которые в отличие от витаминов, не имеют противопоказаний и побочных эффектов. 1 («этому, заканчивая исследование, мы провели эксперименты с комбинацией витаминов-антиоксидантов (А. Е, С и Р). основываясь на следующем. Кафедра биохимии в сотрудничестве с клиническими кафедрами и врачами практического здравоохранения изучает эффект этой комбинации для несиецифической профилактики тромбогеморрагий при атеросклерозе [К.В.Горбатиков, 1998], пнеулинзависимом сахарном диабете [А.А.Нелаева. 1996], ос-теоспптезе длинных трубчатых костей [А.А.Вакулин. 1994], аденомэк-гомии [В.М.Шафер, 1989. 1996], наблюдая позитивное, подтвержденное клинически и лаборашрно, влияние на гемостаз. Возможно, исследования с АС позволят рекомендовать комбинацию витаминов или поливитаминных комплексов, содержащих эти витамины, для снижения дозировки антиагрегантов, в частности, наиболее распространенною из них - АС.

Крысы 12 дней получали витамины в дозах, адекватных лечебным, или удвоенные дозы - в течение недели. Затем вводили АС, контролируя состояние коагуляциоппого гемостаза, а при введении удвоенных доз еще и активность ГЦ.

Введение витаминов в удвоенных дозах не изменило коагуляцион-ной активности крови, а АС на фоне удвоенной дозы витаминов заме тнее влиял на гемокоагуляцню, чем при введении животным, неполу-чавшим дополнительно витаминов (табл. 17).

Таблица 17. Показатели состояния гемокоагуляиии после введения ЛС на фоне 7-мнднепного ввсдения витаминовЕ, С и Р в удвоенных дозах(п=5)

Показатели

ЛВ1\ с АЧТВ, с ПДФ, мг%

эт, %

Контроль

42.011,1 32,111,0 П.6±0,8 25.0 г 1.2

Вводили витамины 43,011,2

32.811.1 10,910,9

25.011.2

АС

46,411,0* 36,410,7* 8,910,4! ■ 0,0* ^

АС на фоне витаминов 49,911.1 41,0±1,1*+

7,210,2*"

„

Обозначения: * - достоверное оглимие от контроля," - достоверное отличие 3-й колонки от 2-й

То же нашли при изучении активноеш ГЦ у лих крыс (табл. 18): снижение активности ТЦ. вызываемое АС на фоне витаминов и изменение активность ГЦ под действием только витаминов.

Таблица 18. Влияние АС на фоне витаминов А. Е. С и Р в у двоенных дозах в теме ни е 7 дней на ТЦ (п - 5)

Показатели Контроль АС Витамины АС+Витамимы

СА, % 8,610,7 7,610,4* 7.8Ю.1* 6,910.8*

МА. % 57,111,8 51,1+2,1* 52,011,1* 46,312,1**

\аа 5.410,1 4,510,1* 4,8+0,2* 3,610,2*'

ТЦ, тыс/мкд 978132 979133 961132 967127

Р-,,% 88,613,1 80,112,1 82,111,0* 74,1 + 1,1 *"

Р4,с 3,2+0,02 2.4Ю.01* 2,6+0,01* 2,0+0,005*"

Р,(1. нг/мл 8.810,11 7,810,10* 7,910,1 * 7,010,06*

АС на фоне 12-дневного введения витаминов (табл.19) заметнее, чем без них у;цпшил АВР и АЧТВ, снизил уровень ПДФ и частоту положительного Э'Г, т.е. снизил гемостатический потенциал и скорость физиологического внутрисосудистого свертывания.

Таблица 19. Показатели состояния гемокоагуляиии после введения АС на фоне 12-дневного введения витаминов А, 1£. С и Р (п-5), контроль из опыта, представленного в табл. 18)

Показатели

АВР, с АЧТВ, с ПДФ, мг% ЭТ, %

Кош роль

42.011.1 32.111.0 11,6+0,8

25.011.2

АС

47,911,0* 38,710,8* 7,8+0,3* 15.0*

АС на фоне витаминов 53,8+1,0*" 43,1>1,1*' 6,210,2*" 0,0*"

Последнее демонстративнее при графическом изображении (рис. 6): АС удлиняет АВР и АЧТВ, снижает показатели интенсивности тромбинемии (ПДФ и ЭТ). На фоне комбинации витаминов эти сдвиги значительнее.

Контроль

Вит.+АС

□АВР ОАЧТВ □ ПДФ ■ ЭТ

(Слева направо)

Рис. 6. Интенсивность сдвигов коагуляционного гемостаза после введения АС (контроль - показатели у шпактных крыс; АС - аспирин введен иитакшым животным; Вит. >АС - аспирин введен крысам, получавшим витамины.

Итак, антиокенданг в дозах, повышающих противоокислигельный потенциал и снижающих интенсивность ПОЛ, вызывает не только изменение агреганионных и «высвобождающих» свойств ТЦ, но и снижает активность коагуляционного компонента гемостаза. Прооксидант оказывает противоположное воздействие.

АС не только тормозит агрегацию ТЦ и реакцию высвобождения, но и снижает активность гемокоагуляционного потенциала. На фоне антиоксиданта эта способность АС усиливается, а на фоне прооксидан-та - ослабляется.

В итоге установили, что антноксиданты снижают агрегацию ГЦ и тормозят сопряженное с ней высвобождение фф. Г1;. Р4 и Рщ, обеспечивающих связь т ромбонитарного и коагуляционного компонентов гемостаза, количественно охарактеризовали свойства прооксиданта ограничивать, а антиоксидантов - усиливать антиагрегантпын эффект АС и его влияние на высвобождение. Обнаружено также, что потенцирование ат иагрегантного эффекта АС антиоксидантами и его офаничение прооксидантами соответственно уменьшает или усиливает напряжение гемокоагуляционного компонента гемостаза.

Совокупность полученных данных свидетельствует о целесообразности дальнейшего изучения в условиях эксперимента возможности ограничивать последствия гипертромбинемии одновременным применением антиоксидантов и, в частности, аспирина, (или шире - ингибиторов превращений арахидоновой кислоты в ТЦ). Целесообразно, основываясь на полученных данных, изучать в клинике при состояниях, характеризующихся ростом активации тромбоцитарного звена гемостаза, эффекты АС на агрегацию при одновременном назначении его с антиоксидантами, в частности, с витаминным комплексом А, Е С и Р, либо с поливитаминными комплексами, включающими перечисленные компоненты.

ВЫВОДЫ

1. Комбинация витаминов Л, Е, С и Р при в велении в лозах, алек-ватных лечебным, снижает у экспериментальных животных интенсивность спонтанной и АДФ-индуцируемой агрегации, а также степень высвобождения тромбоцитарных факторов 3, 4 и 10.

2. Синтетический ангиоксидант димефосфон в дозах, обеспечивающих торможение процессов ПОЛ, также снижает способность тромбоцшов к агрегации и к реакции высвобождения факторов 3, 4 и 10.

3. Интенсивность влияния антноксидантов на агрегашюнную активность тромбоцитов и реакцию высвобождения пропорциональна С1енени угнетения ПОЛ и обратнопропорштональна росту прошво-окисл тельного шиснциала.

4. Антиагрегантный эффект ингибитора циклоокешеназы (аспирина) и его ограничивающее влияние на реакцию высвобождения факторов Р~,. Рд и Рю усиливаются при снижении интенсивноеIи процессов ПОЛ в ТЦ, и ослабляются - при их активации.

5. Антиагрегантный эффект аспирина и антиоксидангов. торможение ими реакции высвобождения потенцированы.

6. Введение антноксидантов и аспирина экспериментальным животным ограничивают интенсивность внутрпсосудистого свертывания, видимо, за счет ограничения вклада тромбоцитарного компонента в активацию коагуляцнонного гемостаза

Полученные данные могут служить основанием для клинического изучения эффектов аспирина на фоне одновременно]! коррекции процессов ПОЛ с помощью антноксидантов, так как многие из патологических состояний, характеризующихся наклонностью к внутрисосуди-стому тромбообразованию. протекают с активацией тромбоцитарного звена гемостаза и процессов ПОЛ.

Список публикаций по теме диссертации

1. Защитный эффект аспирина на фоне дополнительного введения витаминов //Международный симпозиум «Медицина и охрана здоровья». Тюмень, 1997, с. 335-338 (соавт. С. Л. Галян, И. А. Дементьева, А. А. Вакулин и др.).

2. Влияние антиоксидантов и прооксиданта на активность тромбоцитов //Там же, с. 338-340 (соавт. А. Ш. Бышевский, А. А. Вакулин, И. А. Дементьева и др.).

3. Влияние ингибиторов трансформации арахидоната на проагре-гантную активность эритроцитов и лейкоцитов и перекисное окисление липидов в них II Научн. вестник ТГУ. 1998, том 3, с. 21-24 (соавт.

A. Ш. Бышевский, С. Л. Галян, А. А. Вакулин и др.).

4. К механизмам потенцирования антиагрегантного эффекта аспирина /I Там же, с. 25-29.

5. Перспективы использования витаминов-антиоксидантов в лечении ИЗСД //V Российский национальный конгресс «Человек и лекарство». М., 1998, с. 151-152 (соавт. А. А. Нелаева, А. Ш. Бышевский, И. А. Трошина и др.).

6. Витамины-антиоксиданты потенцируют активность ингибиторов превращения арахидоновой кислоты в тромбоцитах // Там же, с. 354 (соавт. А. Ш. Бышевский, С. Л. Галян, А. А. Нелаева и др.).

7. Неспецифическая медикаментозная профилактика тромбогемор-рагических осложнений II Научн. вестник ТГУ. 1998, том 4, с. 11-15 (соавт. А. Ш. Бышевский, С. Л. Галян, В. А. Полякова и др.).

8. Роль тромбоцитов, эритроцитов и сосудистой стенки в регуляции тромбинемии при активации перскисного окисления липидов. 5-я Международная конф. «Биоантиоксидант». М., 1998, с. 173 (соавторы

B. Г. Соловьев, С. Л. Галян , Л. С. Лошкарева, А. Ш. Бышевский).

9. Влияние на гемокоагуляцию воздействий, снижающих активность тромбоцитов // Там же, с. 391 (соавт. С. Л. Галян, Т. АП. Шев-люкова, И. В. Ральченко и др.).

Используемые в работе сокращения

АВР - активированное время рекальцификации

АЧТВ - активированное частичное тромбонластиновое время

ДВС - днссеминированное внутрисосудис roe свертывание

МДА - малоновый диальдегид

Dl5n%. доза, ннгибирующая агрегацию на 50%

ДК - диеновые копъюгагы

\1А - максимальная агрегация

НДФ - продукты деградации фибрина

СА - спонт анная агрегация

СО - скорость окисления

ТХ - тромбоксан

tga - тангенс угла наклона начальной части агрегаюграммы.

характеристика скорости агрегации,

ф. фактор

фф. факторы

'УГ - тганоловый тес г