Влияние антимикробного препарата из липидов морских рыб на возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний

Лаженцева, Любовь Юрьевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Влияние антимикробного препарата из липидов морских рыб на возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Влияние антимикробного препарата из липидов морских рыб на возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний"

На правах рукописи

РГБ ОД

~ ^ ДЕК ..

ВЛИЯНИЕ АНТИМИКРОБНОГО ПРЕПАРАТА ИЗ ЛИПИДОВ МОРСКИХ РЫБ НА ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

03.00.07 - микробиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Владивосток - 2000 год

Работа выполнена в Тихоокеанском научно-исследовательском рыбохозяйственном центре (ТИНРО-центре) и Владивостокском государственном медицинском университете (ВГМУ)

Научные руководители:

Мотавкмна U.C. - доктор медицинских наук, профессор, член - корр.

РАЕН, ТММА, заслуж. деят. науки РФ

Блинов Ю.Г. - кандидат технических наук

Официальные оппоненты: Калсник Т.К. - доктор биологических наук, профессор Москаленко С.А. - кандидат биологических наук

Ведущее учреждение, дающее отзыв о научно-практической ценности диссертации, - Институт биологии моря ДВНЦ РАН (лаборатория фармакологии)

Защита состоится « » декабря 2000 г на заседании Диссертационного Совета Д.084.24.02 во Владивостокском Государственном Медицинском университете по адресу 690600, г. Владивосток, пр. Острякова, 2, главный корпус

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ВГМУ по тому же адресу, корпус 3

Автореферат разослан « 1о » ноября 2000

Ученый секретарь Диссертационного Совета, кандидат медицинских наук, доцент

Р.Н. Диго

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Аюуалыюсгь проблемы. Широкое распространение среди возбудителей локальных гнойно-воспалительных процессов штаммов, резистентных к антибиотикам, является одной из причин возникновения тяжелых госпитальных инфекций, появления хронических форм заболеваний, лекарственной аллергии, снижения иммунитета среди населения и постлекарственной инфекционной патологии дисбактериоза и кандидамикоза (Планельес Х.Х., Харитонова A.M., 1955; Сингур Л.Г., 1986; Мель Н.П., 1990; Гудкова Е.И., 1993; Емельянова И.Н., 1999).

Приобретите выраженной устойчивости микроорганизмов к антимикробным препаратам обусловлено различными механизмами. Ведущее значение среди них имеет наличие факторов защиты у возбудителей, кодирующих и реализующих лекарственную резистентность (фактор RTF), различных эписомальных структур и ферментов, способных разрушать и преобразовывать антибиотики (Планельес Х.Х., 1956; Кудлай Д.Г., 1969; Livermole D.M., 1995). К последним, в частности, можно отнести фермент - бета-лакгамазу.

На этом фоне особое значение для комплексного лечения локальных гнойно-воспалительных процессов приобретает поиск и применение безвредных антисептических препаратов широкого или универсального спектра действия (Кузин М.И., 1986; Larsen R. Et al., 1989). Перспективным в этом направлении является создание и разработка новых антимикробных препаратов природного происхождения. В качестве потенциальных источников таковых наибольшее внимание привлекают жиры морских рыб, антимикробные свойства которых давно отмечены народной медициной и установлены рядом ученых (Kabara J.J., 1987; Esterbauer Н., 1993; Takamura Н„ Gardner H.W., 1996).

В ТИНРО-центре получен новый антимикробный препарат (НАЛ) из липидов морских рыб (Патент № 2043725), обладающий высокой

биологической активностью в отношении возбудителей порчи рыбных продуктов и возбудителей пищевых токсикоинфекций (Бывальцева Т.М., 1997). Изучение химического состава консерванта позволило установить, что наиболее активными компонентами его являются продукты окислительной деградации лип идо в (Рыбин В.Г., 2000).

Медико-биологические исследования, проведенные в Институте питания РАМН (г. Москва), показали абсолютную безвредность препарата при использовании его в качестве пищевого антисептика. Иммунобиологические испытания, выполненные во Владивостокском государственном медицинском университете, установили его безопасность при наружном и парентеральном применении.

Вместе с тем, исследований о влиянии НАЛ из липидов морских рыб на возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний с целью использования его в качестве наружного антисептического препарата в комплексном лечении локальных инфекций до нашей работы не проводилось.

Целыо работы явилась оценка биологического действия нового антимикробного препарата из липидов морских рыб на возбудителей локальных гнойно-воспалительных заболеваний и обоснование перспективности его использования в клинической практике для лечения больных с местной инфекционной патологией.

Задачами для достижения указанной цели служили:

- Проведение анализа литературы об антисептических препаратах, применяемых в этиотропной терапии гнойно-воспалительных инфекций мягких тканей, кожных покровов и слизистых оболочек у человека.

- Выделение из локальных воспалительных очагов в моно-культурах возбудителей и их идентификация.

- Изучение антибиотикорезистентности микробных изолятов из локализованных воспалительных поражений и одного из ее механизмов -бста-лактамазной активности.

- Исследование спектра влияния НАЛ из липидов рыб на выделенные штаммы бактерий, простейших и микроскопических грибов in vitro.

Определение количественных характеристик биологического действия препарата на возбудителей гнойно-воспалительных инфекций in vitro и в биотопах.

- Выяснение возможного действия НАЛ на некоторые ферменты патогенности микробов.

- Проведение анализа эффективности препарата из липидов морских рыб на основе результатов клинико-лабораторных испытаний.

Научная новизна и теоретическая ценность

На основе результатов бактериологического исследования проведен комплексный анализ моно-культур возбудителей гнойно-воспалительных инфекций кожи, мягких тканей и слизистых оболочек. Определены и идентифицированы доминирующие и сопутствующие микробные виды.

Изучены резистентность выделенных возбудителей гнойно-воспалительных процессов к используемым в клинической практике антибиотикам и способность превращать активную форму антибиотика в неактивную за счет продукции бета-л актам аз.

Установлено выраженное антимикробное действие препарата из липидов рыб на возбудителей гнойно-воспалительных инфекций in vitro. Установлен механизм антимикробного действия НАП из рыбьего жира. Впервые доказано ингибиторное влияние его на ферменты патогенности микроорганизмов.

Научно, теоретически и практически обоснована перспективность эффективного использования нового препарата из липидов морских рыб как антисептического средства для наружного применения в комплексном лечении больных с гнойными, термическими и травматическими ранами, а также дерматовенерическими заболеваниями.

Новизна исследований подтверждена заявками на патенты РФ «Способ лечения инфекций, передаваемых половым путем» (приоритетная

справка № 2000103593/14(003534) от 14.02.2000 г), «Способ лечения микробной экземы» (приоритетная справка № 2000117402/14(018405) от 03.07.2000 г), «Способ лечения гнойных ран» (приоритетная справка N 2000117528/14(018439 от 05.07.2000 г).

Практическая значимость работы

На основе анализа и обобщения результатов научных экспериментальных исследований нами и в соавторстве разработаны и предложены:

- Новый антисептический препарат из липидов морских рыб для наружного применения в клинической практике.

- Действующие клинические концентрации НАЛ на возбудителей местных гнойно-воспалительных инфекций.

- Способы применения препарата из липидов рыб при местном лечении гнойно-воспалительных очагов.

- Методические рекомендации «Антимикробный препарат из липидов рыб в терапии и профилактике местных инфекционных заболеваний».

Проведены клинические испытания НАЛ при местном лечении больных с гнойными ранами и дерматовенерическими заболеваниями (получены 3 акта).

«Метод местного лечения уреаплазмоза» с применением НАП внедрен для практического использования на кафедре дерматовенерологии ВГМУ и во Владивостокском городском кожно-венерическом диспансере, «Метод лечения гнойных ран» - в клинике Дальневосточной центральной клинической бассейновой больнице (ДЦКББ).

Материалы научных разработок внедрены в учебный процесс кафедры микробиологии, вирусологии, иммунологии ВГМУ (г. Владивосток).

Апробация результатов исследований

По теме диссертации опубликовано 9 работ, 2 - приняты в печать. Основные фрагменты работы были представлены и доложены на X научно-практической конференции дерматологов и венерологов Амурской области с

всероссийским участием «Актуальные вопросы дерматологии и венерологии» (г. Благовещенск, БГМИ. 1998); Всероссийской научной конференции молодых ученых медиков «Актуальные проблемы экспериментальной и теоретической медицины» (г. Москва, Медицинская Академия им. И.М. Сеченова, 1998), 1-й Тихоокеанской научно-практической конференции студентов и молодых ученых медиков с международным участием «Актуальные проблемы экспериментальной, профилактической и клинической медицины (Владивосток, ВГМУ, 2000); Всероссийской научно-практической конференции «Совремешше аспекты диагностики и лечения хронического простатита» (Курск, КГМУ, 2000), Всероссийской научно-практической конференции «Внутриутробные и урогенитальные инфекции в условиях Сибири и Севера» (Красноярск, Институт медицинских проблем Севера, 2000).

Структура диссертации

Диссертация размещена на 193 страницах, включает 26 таблиц и 42 рисунка, состоит из введения, обзора литературы (1 глава с 3 разделами), собственных исследований (5 глав), заключения, общих выводов, рекомендаций для внедрения в практику, указателя литературы из 255 источников, в том числе 162 - отечественных и 93 - иностранных. В конце работы представлены Приложения.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

1. Антимикробный препарат из жиров морских рыб, представляющий собой комплекс продуктов окисления липидов, обладает выраженным действием на возбудителей локальных гнойно-воспалительных процессов.

2. Антимикробный эффект препарата из липидов рыб на возбудителей местных инфекций обусловлен антиферментным механизмом действия.

3.Целесообразность применения нового НАП в комплексном лечении местных инфекций подтверждена серией клинических испытаний.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалом для исследований явились микробные штаммы, изолированные от больных с локализованными гнойно-воспалительными процессами; антибиотики, используемые в клинической практике для лечения местных инфекций; а также антимикробный препарата из рыбного жира.

НАЛ получен согласно «Технологической инструкции по изготовлению антимикробного препарата» № 36-20-96 и ТУ 9281-02100472012-96 «Антимикробный препарат. Технические условия».

Материалом для получения препарата явились рыбный жир сардины иваси, по основным показателям качества соответствующий ГОСТ 1304-76 «Жиры рыб и морских млекопитающих. Технические условия», водопроводная вода, отвечающая требованиям ГОСТ 2874-82 «Вода питьевая. Гигиенические требования и контроль за качеством».

Для изучения бактерицидного действия НАЛ были использованы 460 штаммов микроорганизмов, выделенные из 716 проб отделяемого травматических и термических ран, локальных гнойно-воспалительных очагов кожи и мягких тканей, из гнойного экссудата и соскобов при воспалительных процессах мочеполовых органов (уретры, цервикального канала, предстательной железы), из гнойного отделяемого среднего уха, глаз и миндалин. Материал отбирался врачами при непосредственном обследовании больного.

Исследования эффективности НАЛ в комплексной противомикробной и патогенетической терапии местных гнойно-воспалительных заболеваний проводились на больных добровольцах в условиях клиники на кафедрах дермато-венерических болезней и общей хирургии Владивостокского Государственного медицинского университета совместно с доцентами, кандидатами медицинских наук Л.Г. Сингур и В.В. Усовым.

Методы исследования

Направления исследований, методические подходы и объем выполненной работы представлены в табл. 1. Исследования проведены как с использованием общепринятых методов, так и разработанных нами, в частности, для определения антиферментного действия НАЛ из рыбного жира. Метод оформлен как заявка на изобретете и отправлен во ВНИИШЭ РФ.

Таблица 1

Направления, методы и объем проведенных исследований

№ п/п Направление исследований Методы исследований Объем работы

1 2 3 4

1. Микробиологический (бактериологический) анализ материала от больных 1. Выделение чистой культуры на разных средах 2. Идентификация микробного вида по совокупности признаков Д. Берджи (1997) 3. Определение факторов патогенности (Биргер М.О., 1982; Бойко A.B., Бойко О.В., 1997; Никитин В.М., 1986) у изолированных штаммов: а) гемолизина; б) лецитиназы; в) коагулазы; г) фосфатазы; в) РНК-азы; е) ДНК-азы. 4. Определение протеолитичес-кой активности (Горская Е.М. ссоавт., 1995; Никитин В.М., 1986): а) казеиназы, б) желатиназы. 716 проб 460 шт. 298пгг. 298 шт. 298 шт. 298 шт. 298пгг. 298 шт. 298 шт. 298 пгг.

2. Анализ антибиотико-грамм возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний 5. Метод лекарственных дисков с антибиотиками согласно рекомендациям Е.А.Ведьминой, Н.М.Фурер (964), М.С. Поляка (1997). 6. Определение /7-лактамазной активности (ЦНИКВИ, 1988). 680 проб 680 проб 680 проб

1 2 3 4

3. Исследование спектра и уровня действия АП на возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний 7. Определение минимально ингибирующих концентраций НАП (Красилыгаков А.П., 1995). 8. Подбор минимальных и клинических концентраций препарата в зависимости от возбудителей. 9. Расчет индекса активности НАП (Красильников А.П., 1995). 282 проб 282 проб 282 проб

4. Изучение влияния препарата из липидов рыб на ферменты патогенности 10. Определение инактивации ферментативной активности у микроорганизмов: а) лецитиназной; б) фосфатазной; в) коагулазной; г) нуклеазной; д) протеолитической, е) гемолитической 74 пробы 162пробы 43 пробы 323пробы 197пробы 177пробы

5. Изучение возможного влияния АП на эндоферменты микробов 11 .Определение состава ПНЖК в липидах бактерий и грибов 2 серии

6. Анализ и оценка эффективности АП в клинических испытаний 12.Результаты клинических наблюдений использования НАП в комплексном лечении больных с: а) ранами и гнойно-воспалительными процессами мягких тканей; б) микробной экземой; в) заболеваниями, передаваемыми половым путем. 56 чел. 30 чел. 156 чел

7. Статистический анализ исследований и их обработка 13. Статистическая обработка методом вариационной статистики по И.Л. Ашмарину, АЛ. Воробьеву (1961), A.C. Каминскому (1964) с оценкой достоверности по Стьюденту-Фишеру. Все цифровые показатели

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Биологическая характеристика возбудителей гнойно-воспалительных инфекций кожи, мягких тканей и слизистых оболочек человека. Дня

определения влияния НАП на возбудителей гнойно-воспалительных инфекционных заболеваний нами были выделены в чистом виде 460 штаммов микроорганизмы из локализованных воспалительных очагов. Всего бактериологическому обследованию было подвергнуто 716 больных, в том числе с различными урогенитальными заболеваниями - 650 (87,9%), пациентов с гнойно-воспалительными раневыми инфекциями - 56 (7,8%) больных и 10 (1,3%) - с гнойно-воспалительными заболеваниями уха, горла и глаз.

Из 56 микробных штаммов, выделенных от больных с раневой хирургической патологией почта половина (46,4+6,6%) изолятов идентифицирована как S. aureus. К виду Р. aeruginosa отнесено только 12 (21,4 ± 5,4%) штаммов возбудителей. Несколько меньшая группа заболеваний (16,0 ±4,5 %) была обусловлена Р. vulgaris. Всего 5 штаммов (8,9 ±3,8%) составили стрептококки вида P. pyogenes и 4 штамма (7,1 ±3,4%) - E.coli.

Бактериологическое исследование 650 больных с урогенитальными заболеваниями показало, что из патологического материала в 32,6% случаев (212 человек) были выделены монокультуры. Из них 26,8% составляли возбудители специфических заболеваний, передающихся половым путем (U. urealyticum - 17,9%, N. gonorrhoeae - 4,2 %, Т. vaginalis - 4,7 %). 57,3 % монокультур составили условно-патогенные аэробные и анаэробные бактерии. В 16,9 % случаев урогенитальных заболеваний обусловлены грибами С. albicans.

Из материала 438 больных с урогенитальными заболеваниями довольно часто (67,4 %) выделялись микробные ассоциации в виде двух и более видов, которые обусловливали смешанные инфекции. Микробные ассоциации были представлены различными сочетаниями, в том числе

анаэробных и аэробных бактерий (82,5 %), бактерий и грибов (8,9 %), бактерий и простейших (2,7 %), грибов и простейших (5,9 %).

Для оценки способности вызывать инфекционный процесс нами была изучены факторы патогенности культур в виде биологической активности ферментов и токсинообразования у выделенных возбудителей. В их число вошли лецитиназная, гемолитическая, плазмокоагулазная, фосфатазная, нуклеазная и протеолитическая активность. Выбор указанных направлений обусловлен необходимостью и доступностью определения влияния ПАП липидной природы на микробные экзоферменты и токсины.

В результате проведенных исследований была установлена способность возбудителей гнойно-воспалительных раневых и урогениталь-ных инфекций продуцировать токсины и различные ферменты патогенности. В этой связи все биологически активные штаммы были отобраны для дальнейших исследований, поскольку могли служить превосходной моделью для контроля и изучения влияния НАЛ.

Чувствительность возбудителей гнойно-воспалительных инфекций к антимикробным препаратам. В основе выбора антибиотиков для изучения резистентности микробных штаммов к лекарственным веществам нами была положена необходимость получения сведений о численности клинических изолятов, устойчивых к антибиотикам, используемым в медицинской практике.

При анализе общей чувствительности клинических изолятов к антибиотикам вне зависимости от вида было установлено, что для последних характерна выраженная устойчивость к традиционным антимикробным препаратам, в том числе последнего поколения (рис. 1).

Наиболее эффективными в отношении возбудителен различных групп являются, как видно, препараты из группы фторхинолонов, к которым чувствительность проявляли около половины штаммов, изолированных от больных (к офлоксацнну - 49,2 ± 0,8%, к ципрофлоксацину - 44,5 ± 0,8%).

Относительно высокой ингибирующей активностью отличаются препараты из группы аминогликозидов, например, гентамицин. К нему выявлено в среднем 31,9+0,7% чувствительных изолятов.

Из группы макролидов клинические штаммы оказались наиболее чувствительны к мидекамнцину - макропену (в 31,9 + 0,7% случаев), а к спираминину, азитромицину и рокситромицину они были малочувствительны (соответственно 16,2+0,5%, 16,4 + 0,5% и 1,1 ±0,5% штаммов).

Рис.1. Резистентность клинических штаммов возбудителей местных гнойно-воспалительных инфекций к антибиотикам

Обозначения: А - чувствительные, Б —устойчивые штаммы; 1 - офлоксацин, 2 - ципрофлоксацин, 3- гентамицин, 4 - доксициклин, 5- азитромицин, 6 - спирамицин, 7 - мидекамицин, 8 - роскитромицин, 9 - амоксицил-лин, 10 - ампициллин, 11 - клиндамицин, 12 - ванкомицин

Около трети изученных клинических изолятов проявляли чувствительность к препаратам из группы пеницил-лпнов, в том числе по отношению к амоксициллиину - 36,9±0,7% и к ампициллину - 28,0±0,7% штаммов, а также к аминогликозидам (к гентамицину - 31,9± 0,7% штаммов).

Низкий уровень чувствительности возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний отмечен к препаратам группы тетрациклинов -всего 9,4 ±0,3% изученных штаммов показали чувствительность к локсиннюшну. К антибиотикам резерва клинические изоляты проявляли

0Б □ А

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12

Антибиотики

различную активность. 36,6±0,7% штаммов были чувствительными к ванкомицину и 8,3 ± 0,3% испытуемых культур — к клиндамицину.

В целом, нами установлено, что 66,3 ±1,7% клинических изолятов обладают антибиотикорезистентносгью, что, по-видимому, нередко и обусловливает низкую эффективность лечения, рост заболеваемости, а также переход в подострые и хронические формы.

Одним из факторов устойчивости микроорганизмов к антимикробным препаратам является способность выделять ферменты /?-лактамазы, разрушающие /?-лактамные антибиотики с образованием соединений, неактивных в отношении соответствующих препаратов. В результате разрушения антибиотиков Д-лактамазоактивными штаммами возбудителей гнойно-воспалительных инфекций или сопутствующей микрофлоры терапевтический эффект от антибиотикотерапии нередко не достигается. Поэтому параллельно с изучением антибиотикорезистентностн клинических штаммов возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний мы определяли у клинических изолятов способность вырабатывать /?-лактамазы (рис. 2).

Возбудители

Рис. 2. Способность клинических штаммов вырабатывать /У-лактамазы

Обозначения: 1 - S. aureus, 2 - S. epidermidis, 3 - S. pyogenes, 4 -P. aeruginosa, 5 - P. vulgaris, 6 - A. hydrophila, 7 - Moraxella, 8 - Acinetobacter, 9 - Klebsiella, 10 - Enterococcus, 11 - E. coli, 12 - N. gonorrhoeae.

Результаты исследований показали, что способностью разрушать ß-лактамные антибиотики обладают довольно большое число микроорганизмов (25,0 + 3,6%). Причем, в смешанных культурах активность проявляется, вероятно, за счет взаимной стимуляции бактерий или обмена R-плазмидами, кодирующими и реализующими способность к продукции /7-лактамаз. По разным видам, однако, эта активность не была однозначной. Максимально часто она встречалась у штаммов А. hydrophila, Р. aeruginosa, Moraxella, Enterococcus, S. epidermidis, реже - у остальных исследованных видов.

На основании результатов проведенных исследований можно предположить, что лечение каждого четвертого больного, получающего указанные антибиотики, может быть неэффективным за счет их разрушения ß -лактамазоактивными культурами. Подобная ситуация, вероятно, имеет место и в отношении других этиотропных средств. Мало того, в ходе проявления /?-лактамазной активности может развиться лекарственная болезнь или аллергия (Власова Е.В., 1989; Лисицнна Е.В., 1989; Мель Н.П., 1990).

Для определения чувствительности бактерий к антисептическим препаратам и оценки их терапевтической значимости имеется комплекс показателей, в связи с чем нами была проведена количественная оценка ингибирующего действия НАЛ из линидов морских рыб в отношении выделенных клинических изолятов. Кроме того, в эксперимент были включены штаммы дерматофитов - Т. nibrum (Castellane), Т. mentagrophytes (var.interdigitele) и М. caiüs, любезно предоставленные в наше распоряжение профессором А. Д. Юцковским.

Количественную оценку ингибирующего действия НАП проводили по содержанию суммы наиболее активных соединений (4-HNE и 4-HNDE), значение которой определяли расчетным путем с учетом результатов исследований В.Г. Рыбина (2000).

В результате проведенных исследовании было установлено, что допустимой концентрацией препарата, действующей на псе виды

возбудителей, является исходная. Ее микробоцидный эффект обеспечивается в зависимости от вида возбудителя с плотностью культуры 108 - 109 КОЕ/мл в течение 1 — 5 минутной экспозиции.

Минимальная ингибирующая концентрация (МИК) ПАП в растворе, эмульсионной, гелевой или мазевой форме in vitro зависела от вида микроорганизма и его устойчивости, но не превышала 1/3 от исходного значения (табл. 2).

Таблица 2

Основные показатели ингибируюшего действия HAII на возбудителей местаых инфекций (по сумме 4-HNE и 4-HNDE, в мкМ)

Микроорганизм МИК, мкМ Клиническая доза, мкМ Индекс активности

S. aureus 32,4 54,0 5

S. pyogenes 32,4 54,0 5

P. vulgaris 27,0 54,0 6

P. aeruginosa 32,4 54,0 5

M. hominis 27,0 40,5 6

U. urealyticum 23,1 40,5 7

Moraxella 32,4 54,0 5

Acrococcus 32,4 54,0 5

E. coli 27,0 54,0 6

Corynebacterium 32,4 81,0 5

Fusobacterium 32,4 81,0 5

N. gonorrhoeae 23,1 40.5 7

Enterococcus 32,4 54.0 5

Bacteroides 40,5 81.0 4

Acinetobacter 32,4 54.0 5

T. vaginalis 27,0 40.5 6

Mobiluncus 32,4 54,0 5

C. albicans 40,5 81,0 4

T.rubrum 40,5 81,0 4

M. canis 40,5 81,0 4

T. mentagrophytes 40,5 81,0 4

Наиболее чувствительными к действию НАП оказались бактерии и простейшие. Более устойчивыми к препарату из лнпидов рыб явились все штаммы микроскопических грибов.

Значение МИК не может явиться основанием для назначения терапевтической дозы, так как после введения в биотоп концентрация АП будет снижаться за счет взаимодействия активных соединений с белками плазмы и некротического материала. С учетом этого нами проведены исследования по определению клинической концентрации препарата в присутствии избыточного содержания белковых соединений - 1% альбумина. Результаты испытаний показали, что для подавления развитая возбудителей в очагах воспаления необходимо увеличение концентрации препарата не менее, чем в 2 раза, а продолжительности контакта - в 4-10 раз. В связи с этим, терапевтические концентрации АП должны составлять не менее 1/2 от исходной, а время контакта - увеличено до 5-50 мин.

Для оценки клинической эффективности антимикробных препаратов рекомендован (Красилышков А.П., 1995) индекс активности антисептика (ИАА). Под ним следует понимать отношение рабочей концентрации (допустимой, безвредной) антисептика к его минимально ингибирующей для конкретного штамма бактерий (штаммовая чувствительность) или для одной популяции, рода, вида, группы близкородственных видов бактерий (популяционная, вариантная, видовая или групповая чувствительность).

Результаты исследований (табл. 2) позволили установить, что АП обладает не только широким спектром действия, но и высоким уровнем антимикробной активности, так как ИАА к клиническим изолятам составляет не менее 2. При наружном использовании препарата его микробоцидное действие будет гарантировать излеченность больного.

Антимикробное действие препарата из липидов морских рыб на факторы патогенности возбудителей гнойно-воспалительных заболевании. Для подтверждения выдвинутого В.Г. Рыбиным (2000) предположения об антиферментном механизме действия липидного антисептического препарата нами прослежено in vitro его влияние на экзоферменты и токсины (гемолизин) микроорганизмов.

Для изучения антиферментной активности АП был использован разработанный нами метод, в основе которого положена качественная реакция на фермент. При этом была установлена четкая зависимость результата от концентрации активного начала в препарате и его соотношения с ферменто- и токсино-содержащим субстратом (табл. 3).

Таблица 3

Сравнительная чувствительность ферментов некоторых видов и родов микробов к подавляющему действию антимикробного препарата

Штаммы-продуценты Содержание активных компонентов, в мкМ

1 2 3 4 5 6 7 М±м

S. aureus 32,4 27,0 27,0 27,0 32,4 27,0 23,1 27,4 ± 3,3

S. pyogenes 32,4 32,4 32,4 27,0 32,4 27,0 23,1 29,5 ± 3,8

P. aeruginosa 32,4 27,0 27,0 32,4 32,4 32,4 27,0 30,1 ± 2,8

A. hydrophila 32,4 32,4 27,0 32,4 32,4 32,4 27,0 30,8 ± 2,6

P. vulgaris 27,0 - 23,1 27,0 27,0 32,4 27,0 27,2 ± 2,9

Moraxella 32,4 27,0 27,0 27,0 32,4 27,0 27,0 28,5 ± 2,6

Acinetobacter 32,4 27,0 27,0 27,0 32,4 27,0 27,0 28,5 ± 2,6

Klebsiella 32,4 32,4 27,0 27,0 32,4 27,0 27,0 29,3 + 2,8

E. coli 27,0 * 23,1 27,0 27,0 27,0 27,0 26,3 ± 1,6

С. albicans 40,5 32,4 27,0 32,4 32,4 32,4 27,0 32,0+ 4,5

Итого: 32,1 + 3,9 29,7 + 2,8 26,8 + 2,5 28,6 + 2,6 31,4 + 2,3 29,2 + 2,7 26,2 ± 1,6 29,0 ± '•7

Обозначения: 1 — гемолизины, 2 - лецитиназа, 3 - РНК-аза, 4 - ДНК-аза, 5 - ({юсфатаза, 6 — желатиназа, 7 - казеиназа.

Средняя ингнбирующая доза суммы наиболее активных компонентов АП (4-HNE и 4-HNDE) в отношении гемолизинов всех испытанных гемолизиноактивных штаммов микробов составила 32,1 мкМ. Для РНК-азы и ДНК-азы этот показатель соответственно составил 26,7 и 28,4 мкМ, фосфата-зы - 31,4 мкМ, лецитиназы - 29,7 мкМ, плазмокоагулазы — 27,0 мкМ Средняя подавляющая доза суммы активных соединений препарата в отношении желатиназы составила 29,4 мкМ, казеиназы - 25,9 мкМ.

Таким образом, на основами многочислешюй серии опытов по активности АП в отношении экзоферментов подтверждено предположение о способности его необратимо инактивировать ферменты.

Выраженное ингибиторное влияние препарата из липидов рыб на микробные ферменты патогенности позволяет прогнозировать высокую эффективность его при местном применении в клинической практике для терапии и профилактики гнойно-воспалительных заболеваний кожи, мягких тканей, слизистых оболочек и полостей.

Инактивация протеолитических ферментов АП позволит уменьшить доступность бактериям к питательным компонентам среды, что приведет к снижению скорости и уровня колонизации клеток микробными популяциями и ингибированию процесса образования ряда медиаторов воспаления.

Антинуклеазная и антикоагулазная активность препарата может оказаться полезной в исключении негативного влияния условно- патогенных микроорганизмов на генетический аппарат клеток хозяина, антителообразующие и фагоцитирующие функции макроорганизма, а антифосфатазная - поможет сохранить его клеточные мембраны.

Отмечена четкая зависимость эффективности действия АП от вида и рода микробов, характера ферментов. Самым стабильным и менее подверженным действию препарата являются ферменты патогеплости С. albicans. Устойчивость его выражалась максимальной величиной содержания активных компонентов в препарате - 40,5 мкМ.

Наиболее чувствительными к действию АП оказались РЖ-аза у Е. coli и Р. vulgaris, а также казеин аза у S. aureus и S. pyogenes, у которых инактивацию вызывал препарат, содержащий в сумме 23,1 мкМ активных компонентов.

Полученные наблюдения по изучению действия АП из жира морских рыб на один из наиболее важных механизмов патогенеза инфекционной патологии - ферменто-токсические факторы патогенное™ микробов, показывают его универсальность и перспективность в лечении гнойно-воспалительных заболеваний.

На основании результатов проведенных исследований антимикробной активности препарата нами было выдвинуто предположение о перспективном его использовании для наружного применения при лечении гнойно-воспалительных процессов. Для этого нами было рекомендовано применение АП из рыбного жира в виде раствора в исходном состоянии, а также после разведения стерильной дистиллированной водой, растворами физиологическим, 0,5 % глюкозы, глицерином, а также в форме мазей и эмульсий на его основе.

Оценка эффективности использования препарата из лнпидов морских рыб в комплексном лечении гнойно-воспалительных инфекций. НАЛ из липидов рыб был рекомендован в качестве антисептического средства для местной терапии и профилактики гнойно-воспалительных инфекций, для антисептической защиты кожных покровов среднего уха, полости носа, рта и слизистых влагалища, мочеиспускательного, цервикалыюго каналов, ожоговых, травматических, и операционных ран, а также гнойно-воспалительных процессов мягких тканей - абсцессов, флегмон, фурункулов, карбункулов.

Местное введение препарата рекомендовано в виде асептической обработки ран, ванночек, дренирования, вливайия, закапывания, инстиляций, клизм, компрессов, тампонад, а также введением в полость ран через пассивные трубчатые дренажи, в системах проточного дренирования в

случае ушивания ран после вторичной хирургической обработки или в системах пункционного дренирования гнойных очагов двухпросветными дренажными трубками, проводимых согласно рекомендаций М.И. Кузина (1981) и Н.Н. Каталина (1977).

Клинические испытания по оценке эффективности использования НАЛ при лечении гнойно-воспалительных процессов у больных были проведены во Владивостокском Государственном медицинском университете на кафедрах общей хирургии совместно с канд. мед. наук В.В. Усовым (зав. -профессор А.Ф. Малышев) и дерматовенерологии совместно с канд. мед. наук доцентом Л.Г. Сингур (зав. - профессор А.Д. Юцковский).

В основную группу вошли 28 больных с раневыми и 156 человек с урогенитальными инфекциями, а также 30 пациентов - с микробной экземой. При лечении заболеваний больным основной группы в качестве антисептического средства местно применяли препарат из липидов морских рыб. Контрольную группу составили по численности 180 больных, получавших традиционное лечение.

Все пациенты основной группы наблюдения отмечали хорошую переносимость процедуры при местном лечении. Также было установлено, что НАЛ значительно ускоряет процессы очищения гнойно-воспалительных очагов от микроорганизмов (рис. 3), сокращает сроки освобождения ран от гнойно-некротических тканей, стимулирует развитие грануляционной ткани. Под влиянием НАЛ исчезают быстро явления воспаления, гиперемии, отеки.

Применение НАЛ позволяет сократить сроки лечения местных гнойно-воспалительных инфекций 4-8 дней, обеспечить полную излеченность пациентов, исключить осложнения в виде кандидоза мочеполовых органов. Использование препарата при лечении микробной экземы в острой стадии способствует, по заключению клиницистов, быстрому исчезновению клинических симптомов заболевания основной группы больных и сокращению сроков выздоровления по сравнению с контрольной группой пациентов почти в 2 раза.

Время лечения, сутки

Рис. 41. Динамика изменения микробной обсемененности гнойных ран у больных основной группы, леченных с применением ПАП, и контрольной

Таким образом, результаты клинических испытаний НАЛ из липидов морских рыб показали высокую его эффективность при использовании в комплексном лечении локальных гнойно-воспалительных процессов кожи, слизистых оболочек и мягких тканей.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Бактериологическим методом обследовано 716 больных с местными гнойно-воспалительными инфекциями. Преобладающими возбудителями являются условно-патогенные микроорганизмы. Они обнаружены в монокультуре в 38,8% (278 случаев) заболеваний, в виде микробных ассоциаций - в 61,2%, включая микст-формы и разные сочетания бактерий, микроскопических грибов и простейших.

2. Возбудители гнойно-воспалительных локализованных процессов обладали устойчивостью к антибиотикам в 66,3% случаев. Одним из механизмов антибиотикорезистентности клинических изолятов является способность продуцировать р- лактамазы, разрушающие препараты группы р- лактамных антибиотиков. Число уЗ-лактамазоактивных штаммов составило 25,0±3,6% от числа изученных.

3. Клинические изоляты обладают высокой способностью вызывать инфекционный процесс за счет продукции экзотоксинов и ферментов патогенности, в чпстности, гемолизинов, плазмокоагулазы, фосфатазы, лецитиназы, нуклеаз и протеаз. Они явились моделью для контроля и испытания ингибиторной активности антимикробного препарата го липидов морских рыб на экзоферменты.

4. НАЛ характеризуется высоким уровнем и широким спектром антимикробного действия в отношении бактерий, дрожжеподобных грибов и простейших. Рабочей его концентрацией является исходная. Она отличается безвредностью в отношении человека и животных.

5. Минимальная ингибирующая концентрация (МИК) препарата из жира морских рыб зависит от вида и индивидуальной чувствительности микроорганизмов. Сумма активных компонентов НАЛ, обеспечивающих МИК для микроскопических грибов, составляет 40,5 мкМ, для простейших — 27,0 мкМ, для бактерий - от 23,1 до 32,4 мкМ. Индекс активности препарата составляет более 2, что характеризует высокую статическую концентрацию антисептика в условиях клинического биотопа.

6. НАЛ характеризуется антиферментным механизмом действия. Влияние препарата на экзоферменты, обусловливающие патогенностъ клинических изолятов, доказано серией экспериментов по ингибиторному действию на лецитиназу (74 пробы), плазмокоагулазу (43 пробы), гемолизин (177 проб), фосфатазу (162 пробы), нуклеазы (323 пробы) и протеазы (197 проб).

7. Серией клинических испытаний НАЛ достоверно доказана высокая эффективность его использования в качестве наружного антисептика в комплексной терапии местных гнойно-воспалительных заболеваний кожи, мягких тканей и слизистых оболочек. Применение препарата обеспечивает ингибирование микрофлоры, снижение бактериальной обсемененносги гнойно-воспалительных очагов, сокращает сроки лечения заболеваний на 3-8 суток, стимулирует развитие грануляционной ткани и процессы

эпителизации раневых поверхностей. НАЛ универсален по своему действию вне зависимости от этиологии, характера патологии и ее локализации по биотопам. Он эффективен при гнойно-воспалительных раневых процессах, урогениталъных заболеваниях и микробной экземе.

Рекомендации для внедрения результатов исследований в практику

На основе результатов проведенных исследований нами в соавторстве с клиницистами были разработаны следующие рекомендации для внедрения в практическое здравоохранение:

1. Методические рекомендации «Антимикробный препарат из липидов рыб в терапии и профилактике местных инфекционных заболеваний», утвержденные ректором ВГМУ и руководителем Департамента Здравоохранения Администрации Приморского края 10-19 июня 2000 г.

2. Установлены минимальные и клинические концентрации НАЛ из жира морских рыб и способы его введения в гнойно-воспалительные очаги.

3. Разработан «Способ лечения инфекций, передаваемых половым путем», предназначенный для использования НАЛ при комплексной терапии гнойно-воспалительных заболевашш урогенитальных путей. Способ заявлен как изобретение и защищен приоритетной справкой НИИГПЭ Комитета РФ по патентам и товарным знакам (№ 20001035393/14(003534) от 14.02.2000).

4. Разработан «Способ лечения гнойных ран», предназначенный для использования препарата из липидов рыб в комплексном лечении гнойно-воспалительных раневых инфекций. Способ заявлен как изобретение и защищен приоритетной справкой НИИГПЭ Комитета РФ по патентам н товарным знакам (№2000117528/14(018405) от 03.07. 2000)

5. Разработан «Способ лечения микробной экземы», предназначенный для использования НАЛ из рыбных жиров при местном лечении микробной экземы в острый период. Способ заявлен как изобретение и защищен приоритетной справкой НИИГПЭ Комитета РФ по патентам и товарным знакам (№ 2000117402/14(018405) от 03.07. 2000).

6. Внедрены в практическое здравоохранение «Метод местного лечения уреаплазмоза» и «Метод лечения гнойных ран».

Материалы диссертации отражены в следующих публикациях:

1. Лаженцева Л.Ю., Мотав кипа Н.С. Антибиотикорезистенгность возбудителей локальных гнойно-воспалительных инфекций и их ß-лактамазная активность // Дальневосточный медицинский журнал, 2000, № 4. - с. 42-46.

2. Лаженцева Л.Ю., Шульгина Л.В., Бывальцева Т.М., Стефанович Я.А., Сингур Л.Г. Чувствительность к антимикробным препаратам возбудителей урогенитальных инфекций // Антибиотики и химиотерапия, 2000, № 10 (принята к печати).

3. Лаженцева Л.Ю., Юцковская Я.А., Шульгина Л.В., Бывальцева Т.М., Сингур Л.Г. Влияние антимикробного препарата на ферменты патогенности возбудителей гнойных инфекций и сопутствующей микрофлоры// Сибирский медицинский журнал, 2000 (принята к печати).

4. Сухотская (Лаженцева) Л.Ю., Усов В.В., Бывальцева Т.М. Применение водного экстракта в лечении гнойных ран // Тезисы докладов Международной конференции молодых ученых-медиков. - М.: ММА им. И.М. Сеченова, 1998,- с. 53-54.

5. Сухотская (Лаженцева) Л.Ю., Сингур O.A., Сингур Л.Г. Изучение бета-лактамазной активности микрофлоры больных венерическими заболеваниями. - Там же. - с. 110-111.

6. Сингур Л.Г., Сухотская (Лаженцева) Л.Ю., Юцковский А.Д., Сингур O.A., Максименко Н.В.. Оценка чувствительности гонококка к антимикробным препаратам // Материалы X научно-практической конференции дерматологов и венерологов Амурской области с Всероссийским участием «Актуальные вопросы дерматологии и венерологии». - Благовещенск, 1998.-е. 154-155.

7. Сингур Л.Г., Бывальцева Т.М., Сухотская (Лаженцева) Л.Ю., Юцковский А.Д., Максименко Н.В. Использование водного экстракта из

липидов рыб в комплексном лечении хронических уретритов. - Там же. - с. 153-154.

8. Лаженцева Л.Ю., Сингур O.A., Рыбин В.Г. Влияние препарата из липидов рыб на патогенные грибы // Тезисы докладов 1-й Тихоокеанской научно-практической, конференции студентов и молодых ученых медиков с международным участием «Актуальные проблемы экспериментальной, профилактической и клинической медицины». - Владивосток, ВГМУ, 2000. -с. 15.

9. Лаженцева Л.Ю., Усов В.В., Бывальцева Т.М. Ингибирующее действие водного экстракта из липидов морских рыб на возбудителей гнойных ран // Тезисы докладов 1-й Тихоокеанской научно-практической, конференции студентов и молодых ученых медиков с международным участием «Актуальные проблемы экспериментальной, профилактической и клинической медицины». — Владивосток, ВГМУ, 2000. - с. 242-243.

10. Атюшев Г.П., Нагорный В.М., Бывальцева Т.М., Лаженцева Л.Ю„ Перова O.A. Значение культурального метода в диагностике и комплексной терапии инфекционных форм хронического простатита // Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Современные аспекты диагностики и лечения хронического простатита». - Курск, 2000. - с. 9-10.

11. Атюшев Г.П., Нагорный В.М., Лаженцева Л.Ю. Влияние антимикробного препарата из липидов рыб в местной терапии на возбудителей хронического уретропростатита // Тезисы докладов Всероссийской научно-практической конференции «Внутриутробные и урогенитальные инфекции в условиях Сибири и Севера». - Красноярск, 2000. - с. 6-7.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Лаженцева, Любовь Юрьевна

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1. ВОЗБУДИТЕЛИ ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ПРОЦЕССОВ И ИХ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ К АНТИМИКРОБНЫМ ПРЕПАРАТАМ. Ю

1.1. Микроорганизмы, обусловливающие развитие локальных гнойно-воспалительных инфекций.

1.2. Антимикробные препараты и их воздействие на возбудителей местных инфекционных заболеваний.

1.3. Антимикробное действие продуктов окисления липидови водного экстракта рыбных жиров.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ, НАПРАВЛЕНИЯ И МЕТОДЫ

ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Направления и материал для исследований

2.2. Методы исследований.

ГЛАВА 3. БИОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЕЙ

ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ИНФЕКЦИЙ КОЖИ, МЯГКИХ

ТКАНЕЙ И СЛИЗИСТЫХ ОБОЛОЧЕК ЧЕЛОВЕКА.52'

3.1. Биологическая характеристика возбудителей раневых инфекций и особенности ферментативной активности клинических изолятов.

3.2.Этиологическая структура, биологическая активность и факторы патогенности возбудителей гнойно-воспалительных дермато-урологических заболеваний.

3.3. Биологическая активность и факторы патогенности монокультур, изолированных со слизистой глаз, среднего уха и миндалин.

ГЛАВА 4. ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ К АНИМИКРОБНЫМ ПРЕПА

РАТАМ.

4.1. Устойчивость возбудителей гнойно-воспалительных процессов к традиционным антимикробным препаратам.

4.2. (3 -лактамазная активность штаммов - возбудителей гнойно-воспалительных процессов.

4.3. Спектр и уровень влияния препарата из липидов морских рыб на возбудителей локальных гнойно-воспалительных процессов.

ГЛАВА 5. АНТИМИКРОБНОЕ ДЕЙСТВИЕ ПРЕПАРАТА ИЗ ЛИПИДОВ РЫБ НА ФАКТОРЫ ПАТОГЕННОСТИ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ.

5.1. Методическое решение задачи.

5.2. Антиферментная активность липидного препарата.

ГЛАВА 6. ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ПРЕПАРАТА ИЗ ЛИПИДОВ МОРСКИХ РЫБ В КОМПЛЕКСНОМ ЛЕЧЕНИИ ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ИНФЕКЦИЙ.

6.1. Формы и способы введения антимикробного препарата в биотопы локальных воспалительных очагов.

6.2. Лабараторно-клиническая эффективность антимикробного препарата для местного лечения хирургических больных с гнойными ранами.

6.3. Лабораторно-клиническая эффективность антимикробного препарата из липидов рыб в комплексной терапии урогени-тальных инфекций.

6.4. Лабораторно-клиническая эффективность антимикробного препарата из липидов рыб при лечении микробной экземы

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние антимикробного препарата из липидов морских рыб на возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний"

Появление антибиотиков и синтетических химиотерапевтических препаратов в середине XX столетия произвело революцию в лечении инфекционных заболеваний. Под их влиянием была резко сокращена заболеваемость инфекционными заболеваниями, летальность и снижено распространение их, предупреждены хронизация патологических процессов и возможная инвалидизация больных.

Вместе с тем, широкое использование в клинической практике антибактериальных препаратов привело к изменчивости их возбудителей, усилению известных и появлению новых механизмов резистентности, ингибированию нормальной для организма человека аутомикрофлоры и созданию условий для развития устойчивых, патогенных и потенциально-патогенных микроорганизмов (Красильников А.П., 1995). Обнаружены также иммунодепресивные и сенсибилизирующие свойства антимикробных лекарственных средств, ведущие к развитию различных иммунодефицитов состояния аллергии (Власова Е.В., 1989; Лисицина Е.В., 1989; Мель Н.П., 1990).

Условно-патогенные микроорганизмы, в том числе и резидентные для человека формы, находящиеся на кожных покровах и слизистых оболочках, при снижении иммунной защиты организма способны как самостоятельно вызывать инфекционные процессы различной тяжести, так и принимать участие в развитии смешанных и вторичных инфекций (Петровская В.Г., Марко О.П., 1976; Воробьев А.А., Лыкова А.Е., 1999).

Развитие локальных гнойно-воспалительного процессов обеспечивают высокая концентрация условно-патогенных микроорганизмов, их выраженная колонизационная способность и множественные факторы патогенности (Костюкова Н.Н., 1989; Бухарин О.В.; Агапова О.В. с соавт., 1999; Бондаренко В.М., 1999).

В последующие годы, несмотря на значительный опыт применения, антибиотиков, медицина не смогла воспрепятствовать широкому и повсеместному распространению внутрибольничных инфекций с формированием множества устойчивых к антибиотикам вариантов бактерий (Планельес Х.Х., Харитонова A.M., 1955; Красильников А.П., 1990; Красильников А.П. , Гудкова Е.И., 1993; Rotter М. L., 1993). Антибиотики вызвали ряд нежелательных явлений - развитие дисбактериозов, кандидамикозов, лекарственной болезни, в том числе с летальными исходами (Реброва Р.Н., 1979; Мель Н.П., 1990).

На фоне монопольного положения антибиотиков была отмечена недооценка роли антисептических препаратов в системе противомикробных мероприятий. И только в последние годы интерес к последним вновь возродился, так как многими исследователями было доказано, что эффективность лечения местных инфекций зависит не только от общего действия антибиотиков, но и от препаратов локального применения (Кузин М.И., 1986; Valland R. et al., 1982; Larsen R. et al., 1989).

Однако, несмотря на значительное количество антимикробных препаратов местного действия, наблюдаются случаи отсутствия их эффекта, рецидивы инфекционных заболеваний, непереносимость и побочные осложнения от лекарственных веществ (Юцковский А.Д. с соавт., 1999). В этой связи, разработка, поиск и изучение новых препаратов, обладающих высоким антимикробным действием, обеспечивающих выраженный клинический эффект и отсутствием различных осложнений, является актуальным научно-практическим направлением в микробиологии, а для отечественной - в особенности.

Ежегодно появляются новые виды антибактериальных препаратов для наружного применения, в том числе и несколько классов новых химических антисептиков. Однако, наиболее важны биологические антисептики, препараты природного происхождения, обладающие выраженным антимикробным действием. К сожалению, они практически отсутствуют. В этой связи особого внимания заслуживают липиды морских рыб и их соединения, характеризующиеся выраженными антимикробными свойствами (Kabara J.J., 1984; 1987; EsterbauerH, 1993; TakamuraH., Gardner H.W, 1996).

В ТИНРО-центре получен новый антимикробный препарат (НАП) из жиров морских рыб, представляющий собой комплекс низкомолекулярных продуктов деградации полиненасыщенных липидов с высокой реакционной способностью (Патент N 2043725, ТУ N 9281-021000472012-96, ТИ N 36-2096). Изучение биологического действия этого раствора позволило установить выраженный консервирующий эффект на микрофлору рыбных продуктов (Шульгина JI.B. с соавт., 1995; Бывальцева Т.М., 1997). Исследованиями Рыбина В.Г. (2000) установлены состав НАП и структура наиболее активных его компонентов. Однако влияния его на возбудителей локальных гнойно-воспалительных процессов не исследовано. Это и определило выбор темы настоящей работы, ее цели и задачи.

Целью диссертационной работы явилась оценка биологического действия НАП из липидов морских рыб на возбудителей локальных гнойно-воспалительных заболеваний и обоснование перспективности его использования в клинической практике для лечения больных с местной инфекционной патологией.,

Для достижения указанной цели были поставлены и решены следующие задачи:

1. Проведение анализа литературы об антисептических препаратах, применяемых в этиотропной терапии гнойно-воспалительных инфекций мягких тканей, кожных покровов и слизистых оболочек у человека.

2. Выделение из локальных воспалительных очагов в моно-культурах возбудителей и их идентификация.

3. Изучение антибиотикорезистентности микробных изолятов из локализованных воспалительных поражений и одного из ее механизмов - /? -лактамазной активности.

4. Исследование спектра влияния водного экстракта из липидов рыб на выделенные штаммы бактерий, простейших и микроскопических грибов in vitro.

5. Определение количественных характеристик биологического действия липидного препарата на возбудителей гнойно-воспалительных инфекций in vitro и в биотопах.

6. Выяснение возможного действия липидного препарата на некоторые факторы (ферменты) патогенности микробов.

7. Проведение анализа эффективности антимикробного препарата из липидов морских рыб на основе результатов клинико-лабораторных испытаний.

Научная новизна и теоретическая ценность работы

Установлено выраженное антимикробное действие НАЛ из липидов морских рыб на возбудителей гнойно-воспалительных инфекций in vitro. Установлен механизм антибактериального и противогрибкового действия препарата из рыбного жира. Впервые доказано ингибиторное влияние НАЛ на ферменты патогенности микроорганизмов.

Научно, теоретически и практически обоснована перспективность эффективного использования НАЛ из липидов морских рыб как антисептического средства для наружного применения в комплексном лечении больных с гнойными, термическими и травматическими ранами, а также дермато-венерическими заболеваниями.

Новизна исследований подтверждена заявками на патенты РФ «Способ лечения инфекций, передаваемых половым путем» (приоритетная справка № 2000103593/14(003534) от 14.02. 2000 г), «Способ лечения микробной экземы» (приоритетная справка N 2000117402/14(018405) от 03.07. 2000 г), «Способ лечения гнойных ран» (приоритетная справка N 2000117528/14(018439) от 05.07. 2000 г).

Практическая значимость работы

На основе анализа и обобщения результатов научных экспериментальных исследований автором и в соавторстве разработаны и предложены:

- новый антисептический препарат из липидов морских рыб для наружного применения в клинической практике;

- действующие концентрации НАЛ на возбудителей гнойно-воспалительных инфекций;

- способы, применения НАЛ из липидов рыб при местном лечении гнойно-воспалительных очагов;

Метод местного лечения уреаплазмоза» с применением НАЛ внедрен для практического использования на кафедре дерматовенерологии ВГМУ и в клинике Владивостокского городского кожно-венерического диспансера, «Метод лечения гнойных ран» - в клинике Дальневосточной центральной клинической бассейновой больнице (ДЦКББ).

Материалы научных разработок внедрены в учебный процесс кафедры микробиологии, вирусологии с иммунологией ВГМУ (г. Владивосток). Апробация результатов исследований

По теме диссертации опубликовано 9 работ, находятся в печати 2 статьи.

Основные фрагменты работы были представлены и доложены на X научно-практической конференции дерматологов и венерологов Амурской области с всероссийским участием (г. Благовещенск, БГМИ. 1998); Всероссийской научной конференции молодых ученых (г. Москва, Медицинская Академия им. И.М. Сеченова, 1998), на 1-й Тихоокеанской научно-практической конференции студентов и молодых ученых медиков с международным участием «Актуальные проблемы экспериментальной, профилактической и клинической медицины (Владивосток, ВГМУ, 2000). Структура диссертации

Диссертация размещена на 189 страницах без Приложения и подчинена традиционной структуре. Она включает введение, обзор литературы (1 глава с 3 разделами), собственные исследования (5 глав), заключение, общие выводы, рекомендации для внедрения в практику, указатель литературы из 255 источников, в том числе 162 - отечественных и 93 - иностранных.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Лаженцева, Любовь Юрьевна

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

2. Возбудители гнойно-воспалительных локализованных процессов обладали устойчивостью к антибиотикам в 66,3% случаев. Одним из механизмов антибиотикорезистентности клинических изолятов является способность продуцировать р - лактамазы- разрушающие препараты группы (3- лактамных антибиотиков. Число /? -лактамазоактивных штаммов составило 25,0 ± 3,6% от числа изученных.

3. Клинические изоляты обладают высокой способностью вызывать инфекционный процесс за счет продукции экзотоксинов и ферментов патогенности, в чпстности, гемолизинов, плазмокоагулазы, фосфатазы, лецитиназы, нуклеаз и протеаз. Они явились моделью для контроля и испытания ингибиторной активности антимикробного препарата из липидов морских рыб на экзоферменты.

4. НАП характеризуется высоким уровнем и широким спектром антимикробного действия в отношении бактерий, дрожжеподобных грибов" и простейших. Рабочей его концентрацией является исходная. Она отличается безвредностью в отношении человека и животных.

5. Минимальная ингибирующая концентрация (МИК) препарата из жира морских рыб зависит от вида и индивидуальной чувствительности микроорганизмов. Сумма активных компонентов НАП, обеспечивающих МИК для микроскопических грибов, составляет 40,5 мкМ, для простейших -27,0 мкМ, для бактерий - от 23,1 до 32,4 мкМ. Индекс активности препарата составляет более 2, что характеризует высокую статическую концентрацию антисептика в условиях клинического биотопа.

161

6. НАП характеризуется антиферментным механизмом действия. Влияние препарата на экзоферменты, обусловливающие патогенность клинических изолятов, доказано серией экспериментов по ингибиторному действию на лецитиназу (74 пробы), плазмокоагулазу (43 пробы), гемолизин (177 проб), фосфатазу (162 пробы), нуклеазы (323 пробы) и протеазы (197 проб).

7. Серией клинических испытаний НАП достоверно доказана высокая эффективность его использования в качестве наружного антисептика в комплексной терапии местных гнойно-воспалительных заболеваний кожи, мягких тканей и слизистых оболочек. Применение препарата обеспечивает ингибирование микрофлоры, снижение бактериальной обсемененности гнойно-воспалительных очагов, сокращает сроки лечения заболеваний на 3-8 суток, стимулирует развитие грануляционной ткани и процессы эпителизации раневых поверхностей. НАП универсален по своему действию вне зависимости от этиологии, характера патологии и ее локализации по биотопам. Он эффективен при гнойно-воспалительных раневых процессах, урогенитальных заболеваниях и микробной экземе.

РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ ВНЕДРЕНИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ В НАУКУ И ПРАКТИКУ

На основе результатов проведенных исследований нами совместно с клиницистами были разработаны следующие рекомендации для внедрения в науку и практическое здравоохранение:

1. Методические рекомендации «Антимикробный препарат из липидов рыб в терапии и профилактике местных инфекционных заболеваний», утвержденные ректором ; ВГМУ и руководителем Департамента Здравоохранения Администрации Приморского края 10-19 июня 2000 г.

2. Установлены минимальные и клинические концентрации НАП из жира морских рыб и способы его введения в гнойно-воспалительные очаги.

3. Разработан «Способ лечения инфекций, передаваемых половым путем», предназначенный для использования НАП при комплексной терапии гнойно-воспалительных заболеваний урогенитальных путей. Способ заявлен как изобретение и защищен приоритетной справкой НИИГПЭ Комитета РФ по патентам и товарным знакам (№ 20001035393/14(003534) от 14.02.2000).

4. Разработан «Способ лечения гнойных ран», предназначенный для использования препарата из липидов рыб в комплексном лечении гнойно-воспалительных раневых инфекций. Способ заявлен как изобретение и защищен приоритетной справкой НИИГПЭ Комитета РФ по патентам и товарным знакам (№2000117528/14(018405) от 03.07. 2000)

5. Разработан «Способ лечения микробной экземы», предназначенный для использования НАП из рыбных жиров при местном лечении микробной экземы в острый период. Способ заявлен как изобретение и защищен приоритетной справкой НИИГПЭ Комитета РФ по патентам и товарным знакам (№ 2000117402/14(018405) от 03.07. 2000).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Широкое распространение антибиотикорезистентных штаммов среди возбудителей локальных гнойно-воспалительных процессов явилось причиной затруднения лабораторной диагностики, возникновения тяжелых госпитальных инфекций, появления хронических форм заболеваний и лекарственной аллергии, снижения иммунитета среди населения (Планельес Х.Х., Харитонова A.M., 1955; Мель Н.П., 1990; Гудкова Е.И., 1993; Емельянова И.Н., 1999).

Приобретение выраженной устойчивости микроорганизмов к антимикробным препаратам обусловлено появлением различных механизмов защиты. Одним из ведущих факторов защиты у возбудителей является способность образования различных эписомальных структур и ферментов, разрушающих антибиотики (Планельес Х.Х., 1956; Кудлай Д.Г., 1969; Livermole D.M., 1995) или нейтрализующих их действия.

На этом фоне особое значение для комплексного лечения локальных гнойно-воспалительных процессов приобретает поиск и применение безвредных антисептических препаратов широкого или универсального спектра действия (Кузин М.И., 1986; Larsen R. Et al., 1989). Некоторыми исследователями были они применены и для лечебно-профилактических целей (Горгиев Т.Б., 1958; 1960; Грбунова Е.С., 1966).Однако, дальнейшего развития, судя по данным литературы, эта находка, к сожалению, не получила.

Перспективным направлением в этом плане является создание и разработка новых антимикробных препаратов природного происхождения. В качестве потенциальных источников таковых наибольшее внимание привлекают жиры морских объектов, в частности рыб, антимикробные свойства которых давно известны (Kabara J.J., 1987; Esterbauer Н., 1993; Takamura Н., Gardner H.w., 1996).

В ТИНРО-центре получен новый антимикробный препарат из липидов морских рыб (Патент 2043725), обладающий высокой биологической активностью в отношении возбудителей порчи рыбных продуктов и возбудителей пищевых токсикоинфекций. Изучение химического состава консерванта позволило установить наиболее активные его компоненты, которыми оказались продукты окислительной деградации липидов (Рыбин В.Г., 2000).

Медико-биологические исследования в Институте питания РАМН (г. Москва) показали абсолютную безвредность препарата при использовании его в качестве пищевого антисептика, контрольные исследования на кафедре микробиологии, вирусологии и иммунологии ВГМУ подтвердили его безопасность при парентеральном использовании.

На основании сказанного и была поставлена цель микробиологического и клинического изучения влияния препарата на возбудителей местных гнойно-воспалительных процессов. При этом были учтены ряд сопутствующих моментов: характеристика возбудителей локальных гнойно-воспалительных инфекций и сопутствующей им микрофлоры, резистентность к антибиотикам, способность продуцировать различные факторы патогенности, в частности, ферменты, которые могут влиять на чувствительность к антимикробным препаратам, в том числе и антибиотикам, либо разрушая, либо преобразуя их состав и функции.

Для определения влияния препарата на возбудителей гнойно-воспалительных инфекционных заболеваний нами были выделены в чистом виде микроорганизмы от больных из гнойно-воспалительных локализованных очагов. Всего бактериологическому обследованию было подвергнуто 716 больных, в том числе с различными урогенитальными заболеваниями - 630 (87,9 ±1,2 %), пациентов с гнойно-воспалительными раневыми инфекциями - 56 (7,8 ±3,5 %) больных и с гнойно-воспалительными заболеваниями уха, горла и глаз -10 (1,3 %).

Из 56 микробных штаммов, выделенных от больных с раневой хирургической патологией почти половина (46,4 ±6,6 %) изолятов идентифицирована как S. aureus. К виду P. aeruginosa отнесено только 12 (21,4 ±5,48 %) штаммов возбудителей. Несколько меньшая группа заболеваний (16,07 ±4,5 %) была обусловлена P. vulgaris. Всего 5 штаммов (8,9±3,8 %) составили стрептококки вида P. pyogenes и 4 штамма (7,14 + 3,44 %) - E.coli.

Бактериологическое исследование патологического материала показало, что из 650 больных с урогенитальными заболеваниями в 32,6 + 3,1% случаев (212 человек) последние были вызваны моно-культурами. Из них 25,8±3,0 % составляли возбудители специфических заболеваний (U. urealyticum - 17,9 ±2,6 %, N. gonorrhoae - 4,2 ±1,3 %, Т. vaginalis - 4,7+1,3 %). 57,3 ±3,4 % моно-культур составили условно-патогенные аэробные и анаэробные бактерии. В 16,9 ±2,5 % случаев урогенитальные заболевания были обусловлены грибами С. albicans.

Из материала 438 больных с урогенитальными заболеваниями довольно часто (67,3 ±2,2 %) выделялись микробные ассоциации в виде двух и более видов культур, которые обусловливали смешанные инфекции. Микробные ассоциации были представлены различными сочетаниями, в том числе анаэробных и аэробных бактерий (82,5 ±1,8 %), бактерий и грибов (8,9+1,8 %), бактерий и простейших (2,7 ±0,7 %), грибов и простейших (5,9 ± 1,1 %).

Для оценки способности вызывать инфекционный процесс нами была изучена биологическая активность ферментов и токсинообразования у выделенных возбудителей, в том числе лецитиназная, плазмокоагулазная, гемолитическая, фосфатазная, нуклеазная и протеолитическая. Выбор указанных направлений обусловлен необходимостью определения влияния нового антимикробного препарата липидной природы на микробные экзоферменты и токсины. В результате была установлена высокая способность возбудителей гнойно-воспалительных раневых и урогенитальных инфекций продуцировать токсины и различные ферменты патогенности. Все биологически активные штаммы были отобраны для дальнейших исследований, поскольку могли служить превосходной моделью для контроля и испытания влияния нового антимикробного препарата из липидов морских рыб.

У всех микробных штаммов была исследована резистентность к лекарственным веществам, широко используемым в лечебной практике.

При анализе общей чувствительности клинических изолятов к антибиотикам вне зависимости от вида было установлено, что для последних весьмахарактерна выраженная устойчивость к традиционным антимикробным препаратам, в том числе последнего поколения. Наиболее эффективными в отношении возбудителей различных групп являются препараты из группы фторхинолонов, чувствительность к которым проявляли около половины возбудителей, изолированных от больных, (к офлоксацину - в 49,2 + 0,8 % случаев), к ципрофлоксацину - в 44,5 ±0,8 % случаев).

Относительно высокой ингибирующей активностью отличаются препараты из группы аминогликозидов, например, гентамицин. К нему выявлено в среднем 31,9 ±0,7 % чувствительных изолятов. Из группы макролидов клинические штаммы наиболее чувствительны к мидекамицину -макропену (в 31,9 ±0,7 % случаях), а к спирамицину, азитромицину и рокситромицину они остаются малочувствительными (соответственно 16,2±0,5 %, 16,4±0,5 % и 1,1 ±0,5 % штаммов). Около трети изученных клинических изолятов проявляли чувствительность к препаратам из группы пенициллинов, в том числе по отношению к амоксициллиину - 36,9 ± 0,7 % и к ампициллину - 28,0 + 0,7 % штаммов. Малочувствительными возбудители гнойно-воспалительных заболеваний оказались к препаратам группы тетрациклинов. Всего 9,4 ±0,3 % изученных штаммов показали чувствительность к доксициклину. К антибиотикам резерва клинические изоляты проявляли различную активность. 36,6 + 0,7 % штаммов были чувствительными к ванкомицину и 8,3 ±0,3 % подопытных культур - к клиндамицину.

В целом, нами установлено, что 66,3 ±1,7 % клинических изолятов обладают антибиотикорезистентностью, что, по-видимому, нередко обусловливает низкую эффективность лечения и рост заболеваемости, а также переход в подострые и хронические формы.

Одним из факторов устойчивости микроорганизмов к антимикробным препаратам является способность выделять ферменты р -лактамазы (пенициллиназы, цефалоспориназы и т.д.), разрушающие антибиотики, имеющие в своем составе /?-лактамное кольцо. Бактериальные р -лактамазы расщепляют р -лактамное кольцо антибиотиков с образованием неактивных соединений. Так, при разрушении пенициллинов под действием ферментапенициллиназы происходит образование неактивной пенициллановой кислоты.

В этой связи, нередко терапевтический эффект от антибиотикотерапии не достигается в результате разрушения антибиотиков за счет продукции р -лактамаз возбудителями гнойно-воспалительных инфекций или сопутствующей микрофлорой. Поэтому параллельно с изучением антибиотикорезистентности клинических штаммов возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний мы определяли у изолятов способность вырабатывать у?-лактамазы.

Всего было произведено 680 определений наличия антибиотико-разрушающих ферментов. Результаты исследований показали, что способностью разрушать -лактамные антибиотики обладают довольно большое число микроорганизмов (25,0%±3,6%), как возбудителей гнойно-воспалительных процессов, так и сопутствующих им. В смешанных культурах, активность проявляется, вероятно, за счет взаимной стимуляции бактерий или обмена R-плазмидами, кодирующими способность к продукции /?-л актам аз.

На основании представленных результатов исследований можно предположить, что лечение каждого четвертого больного, получающего указанные антибиотики, может быть неэффективным за счет их разрушения р -лактамазоактивными культурами. Подобная ситуация, вероятно, имеет место и в отношении других этиотропных средств.

Для оценки признака чувствительности/устойчивости бактерий к антисептическим препаратам и терапевтической значимости антимикробных средств имеется комплекс показателей, в связи с чем нами и были проведены определения максимальных и минимальных ингибирующих концентрации препарата из липидов морских рыб в отношении выделенных клинических изолятов, а также штаммов дерматофитов, в том числе Т. rubrum (Castellane), Т. mentagrophytes var. interdigitele и M. canis, любезно предоставленные для проведения экспериментальных исследований заведующим кафедрой дерматовенерических заболеваний, профессором А. Д. Юцковским. Наряду с этим была предпринята попытка оценить терапевтические концентрации препарата, для чего были проведены исследования и расчеты показателя клинической устойчивости микроорганизмов к последнему, определяли индекс его активности.

В результате проведенных исследований было установлено, что максимальная концентрация препарата, действующая на все виды возбудителей, является исходная. Микробоцидный эффект липидного препарата в исходном состоянии обеспечивается в зависимости от вида возбудителя с плотностью культуры 108 - 109 КОЕ/мл в течение 1-5 минутной экспозиции.

Минимальная ингибирующая концентрация в антисептическом растворе (эмульсионной, гелевой или мазевой форме) зависит от вида микроорганизма и его чувствительности/устойчивости, но не превышала 1/3 от исходной. Наиболее чувствительными к антимикробному препарату оказались грамнегативные как палочковидные, так и кокковые бактерии. Более устойчивыми явились грампозитивные формы бактерий и все микроскопические грибы. Простейшие Т. vaginalis характеризовались высокой чувствительностью к липидному препарату.

МИК отражает активность антисептических препаратов по отношению к бактериальной культуре, причем, независимо от используемых в практике доз. Значение МИК не может явиться основанием для назначения практической его концентрации, так как лечебный эффект препарата может не всегда проявляться, поскольку после введения в биотоп его концентрация может снизиться за счет взаимодействия с белками плазмы и некротического материала.

Результаты определения ингибирующего действия антимикробного липидного препарата в присутствии избыточного содержания белковых соединений (альбумина) показали, что для подавления развития возбудителей в биотопах необходимо увеличение концентрации препарата не менее, чем в 2 раза. Время экспозиции при этом увеличивается в 4-10 раз.

В связи с этим, терапевтические концентрации липидного препарата должны составлять не менее 1/2 от исходной, а время экспозиции контакта -увеличено до 5-50 мин.

Индекс активности антисептического препарата (ИАА) характеризует количественно оценку активности антисептических препаратов и чувствительности к ним бактерий. Под ним следует понимать отношение рабочей концентрации антисептика к его минимально ингибирующей концентрации для конкретного штамма бактерий (штамм овая чувствительность) или для одной популяции, рода, вида или группы близкородственных видов бактерий (популяционная, вариантная, видовая или групповая чувствительность).

На основании результатов расчета показателя ИАА с использованием различных групп микроорганизмов, в том числе бактерий, микроскопических грибов и простейших было установлено, что антимикробный препарата обладает не только широким спектром действия, но и высоким уровнем антимикробной активности, так как индекс его активности к клиническим изолятам составляет не менее 2. При наружном использовании неразведенного препарата его микробоцидный эффект будет гарантировать излеченность больного.

Для подтверждения выдвинутого В.Г. Рыбиным (2000) предположения об антиферментном механизме действия липидного антисептического препарата нами прослежено in vitro его влияние на экзоферменты и токсины (гемолизин) микроорганизмов.

Всего было проведено 933 опытов на способность микробных штаммов терять свою ферментативную активность под воздействием липидного препарата при индикации этого эффекта в присутствии разных тест-систем.

Для оценки влияния антимикробного препарата на микробные ферменты были использованы усовершенствованные нами традиционные методы исследования ферментативной активности микроорганизмов. Внесение в параллельные пробирки с культуральной жидкостью ферменто-активных микробных штаммов липидного экстракта (опытные) или обработка культуральной жидкости каждого изолята этим препаратом до постановки эксперимента показало отсутствие ферментативной активности в всех пробах, в том числе в 74 пробах - лецитиназ, 43 - плазмокоагулазы, 177 - гемолизина, 162 - фосфатазы, 165 - РНК-азы, 158 - ДНК-азы, 197 — протеаз. В число последних вошли желатиназы - 116 и казеиназы - 81 продолжительных проб. Отсутствие реакции на присутствие активного фермента говорит о его инактивации.

Раздельный анализ показателей • позволил установить четкую зависимость результата от концентрации активного начала в липидном препарате и его соотношения с ферменто- и токсиносодержащим субстратом. В конечном итоге это зависит от вида бактерий-продуцентов и характера испытаний.

Средняя действующая концентрация суммы активных компонентов в липидном препарате составила 29,7 мкМ, а оптимальное соотношение его со средой -1:4,5. Средняя ингибирующая доза суммы компонентов 4-HNE и 4-HNDE в отношении гемолизинов всех испытанных гемолизиноактивных штаммов микробов составила 32,15 мкМ, а среднее соотношение с основой -1:4,1. Для РНК-азы и ДНК-азы этот показатель соответственно составил 26,78 и 28,47 мкМ, а кратность разведения препарата со средой - 1:5,1 и 1:4,7. Ингибирующая доза липидного препарата в отношении фосфатазы в среднем составила 31,42 мкМ, при этом соотношение препарата и среды равнялось 1:418. Средняя подавляющая доза активных соединений препарата в отношении - желатиназы составила 29,45 мкМ, а кратность разведения средой, сохранившая активность его, - 1:4,55. Средняя доза компонентов, инактивирующая активность казеиназы у клинических изолятов, составила 25,94 мкМ, соотношение препарата и среды при этом составило 1:5,27.

Важным наблюдением явилось то, что при универсальности подавляющего действия на протеолитические и ферменты патогенности условно-патогенной микрофлоры липидный препарат из морских рыб обнаружил индивидуальное отношение к его активным компонентам у представителей разных родов и видов.

Таким образом, на основании многочисленной серии опытов по активности водного липидного экстракта в отношении экзоферментов подтверждено предположение о способности препарата из рыбного жира необратимо инактивировать ферменты.

Инактивация протеолитических ферментов липидным препаратом позволит уменьшить доступность бактериям к питательным компонентам среды, что приведет к снижению скорости колонизации клеток микробными популяциями и ингибирует образование целого ряда медиаторов воспаления.

Антинуклеазная и антикоагулазная активность липидного препарата может оказаться полезной в исключении негативного влияния условно-патогенных микроорганизмов на генетический аппарат клеток хозяина, антителообразующие и фагоцитирующие функции макроорганизма, а антифосфатазная - поможет сохранить его клеточные мембраны.

Отмечена четкая зависимость эффективности действия липидного препарата от вида и рода микробов, характера ферментов. Самым стабильным и менее подверженным действию препарата являются ферменты патогенности С. albicans. Устойчивость его выражалась максимальной величиной содержания активных компонентов в препарате - 40,5 мкМ.

Наиболее чувствительными к действию липидного препарата оказались РНК-аза у Е. coli и P. vulgaris, а также казеиназа у S. aureus и S. pyogenes, у которых инактивацию вызывал препарат, содержащий в сумме 23,1 мкМ активных компонентов.

Средние ферментоподавляющие эффекты по видам микробов-продуцентов показатели содержания активных соединений в действующей дозе препарата составили следующий убывающий ряд: С. albicans (32,0мкМ), A. hydrophila (30,8 мкМ), P. aeruginosa (30,1 мкМ), S. pyogenes (29,5 мкМ), Acinetobacter и Klebsiella (по 29,3 мкМ), S. aureus (27,4 мкМ), P. vulgaris (27,2 мкМ), Е. coli (26,3 мкМ). Такая последовательность отражает степень снижения чувствительности ферментов разной микробной природы к препарату. Чем выше были количества активных компонентов (их сумма) в действующей дозе, тем ниже оказываласьчувствительность к ним ферментов данного вида микробов.

Полученные наблюдения по изучению действия липидного препарата на один из наиболее важных механизмов патогенеза инфекционной патологии - ферменто-токсические факторы патогенности микробов, показывают его универсальность и перспективность в лечении гнойно-воспалительных заболеваний.

На основании результатов проведенных исследований антимикробной активности водного экстракта из рыбного жира нами было выдвинуто предположение о перспективном его использовании для наружного применения при лечении гнойно-воспалительных процессов. Для этого нами было рекомендовано применение антимикробного препарата из рыбного жира в виде раствора в нативном виде и исходной концентрации, а также после разведения стерильными дистиллированной водой, растворами физиологическим, 0,5 % глюкозы, глицерином и другими нейтральными гомогенизирующими растворяющими средствами, а также в форме мазей и эмульсий на его основе.

Исследования антимикробной активности препарата при его разведении- указанными веществами - растворителями показали, что биологическое действие при этом не изменяется.

Антимикробный препарат из липидов рыб был рекомендован в качестве антисептического средства для местной терапии и профилактики гнойно-воспалительных инфекций, для антисептической защиты кожных покровов среднего уха, полости носа, рта и слизистых влагалища, мочеиспускательного, цервикального каналов, пуповины, травматических, операционных и ожоговых ран, а также гнойно-воспалительных процессов мягких тканей - абсцессов, флегмон и других.

Местное введение препарата рекомендовано в виде асептической обработки ран, ванночек, дренирования, вливания, закапывания, инстиляций, клизм, компрессов, антисептического обмывания, замачивания, орошения, повязок, полоскания, смазывания, тампонад, а также при введении в полость ран через пассивные трубчатые дренажи, в системах проточного дренирования в случае ушивания ран после вторичной хирургической обработки или в системах пункционного дренирования гнойных очагов двухпросветными дренажными трубками, проводимых согласно рекомендаций М.И.Кузина (1981) и Н.Н. Каншина (1977).

Лабораторно-клинические испытания по оценке эффективности использования липидного препарата при лечении гнойно-воспалительных процессов у больных были проведены на кафедрах общей хирургии и дерматовенерологии Владивостокского государственного медицинского университета.

В основную группу наблюдениявошли 28 больных с раневыми и 156 человек с урогенитальными инфекциями, а также 30 пациентов - с микробной экземой. При лечении заболеваний больным основной группы в качестве антисептического средства местно применяли антимикробный препарат из липидов морских рыб. Контрольную группу составили по численности столько же больных, получавших традиционное лечение.

Все пациенты основной группы наблюдения отмечали хорошую переносимость процедуры при местном лечении. Было установлено, что препарат значительно ускоряет процессы очищения гнойных очагов от микроорганизмов. Применение препарата обеспечивает ингибирование грамотрицательной и грамположительной микрофлоры, снижение бактериальной обсемененности раны. Он сокращает сроки очищения ран от гнойно-некротических разрушенных тканей. Отмечена достоверная стимуляция в развитии грануляционной ее замены, действие на процессы эпителизации эрозий и поверхности очищенных гнойных ран. Значительно быстрее под влиянием липидного препарата исчезали явления воспаления, гиперемии, отеки.

Применение водно-липидных экстрактов в хирургической практике позволило сократить сроки лечения гнойных ран на 4-5 дней. Комплексная терапия больных урогенитальными инфекциями с применением антимикробного препарата позволила достичь полную излеченность всех пациентов основной группы, исключить осложнения в виде кандидозов мочеполовых органов. Использование липидного препарата при лечении

159 микробной экземы в острой стадии способствовало быстрому исчезновению клинических симптомов заболевания основной группы больных и сокращению сроков выздоровления по сравнению с контрольной группой пациентов почти в 2 раза.

Результаты клинических испытаний антимикробного препарата из липидов морских рыб показали высокую эффективность его при использовании в комплексном лечении локальных гнойно-воспалительных процессов кожи, слизистых оболочек и мягких тканей.

Материалы диссертации указывают на перспективность применения НАП из липидов морских рыб для борьбы с возбудителями гнойно-воспалительных заболеваний самой различной локализации.

160

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Лаженцева, Любовь Юрьевна, Владивосток

1. Абудуев Н.К., Алиева П.М., Аванесов А.А. К вопросу о динамике заболеваемости урогенитальными инфекциями // В сб. «Актуальные вопросы дерматовенерологии и косметологии». Владивосток, 1999. - С. 44-45.

2. Агапова О.В., Бондаренко В.М. Бактериальные IgA протеазы // Журн. микробиол., 1998. №2:-С. 121-125.

3. Адарченко А.А., Красильников А.П., Собещук О.П. Сравнительное исследование антибиотиков и антисептиков в отношении S. aureus // Антибиотики и химиотерапия, 1991. № 2. - С. 21-24.

4. Алексеев П.А., Панкратова JI.C. О влиянии дисбактериоза и кандидоза на характер течения тифо-паратифозных инфекций // Тр. Кирг. науч.-исслед. ин-та эпидемиол., микробиол. и гигиены, 1973. Т. 11, ч. 1.-е. 28-40.

5. Ариевич A.M., Степанищева З.Г. Кандидамикозы и другие микозы как осложнение антибиотикотерапии. М.: Медицина, 1965. - 299 с.

6. Ариевич A.M., Степанищева З.Г. Об ошибках диагностики висцеральных кандидамикозов // Клин, мед., 1971. № 3.-е. 137-139.

7. Аркадьева Г.Е. Биологическая активность некоторых микробных полисахаридов. Автореф. дисс. на соиск. учен. степ. докт. биол. наук. - Л., 1974.-32 с.

8. Арустамова С.В. Особенности клиники смешанной кандидо-трихомонадной инфекции женских гениталий // Венерические и кожные заболевания. Алма-Ата, 1975. - с. 308-309.

9. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. Л.: Медгиз, 1962. - 180 с.

10. Багирова М.Ш., Коршунова О.В., Кафарская Л.И., Минкина Г.Н. Микрофлора генитального тракта у больных с папилломавирусной инфекцией // Журн. микробиол., 1995. № 3. - С. 113-116

11. Бажукова Т.А. Этиологическая значимость грибов рода Candida при гнойно-септических заболеваниях // Журн. микробиол., 1997. № 3. - С. 101-102.

12. Базыка А.П., Логунов В.П., Федотов В.П. К этиологии хронических гнойных поражений кожи и подкожной клетчатки. // Вопросы микологии. -Свердловск, 1974. вып. 9. - с. 167-170.

13. Бароян О.В., Портер Д.Р. Международные и национальные аспекты современной эпидемиологии и микробиологии. М.: Медицина, 1975.520 с.

14. Беднова В.Н., Яцуха М.В. Приготовление и применения безасцитных питательных сред для диагностики гонореи // Лаб. дело, 1975. -N 1 с. 35-37.

15. Беднова В.Н., Яцуха М.В. Лиофильно высушенная безасцитная питательная среда в культуральной диагностике гонореи // Вестник дерматологии и венерологии, 1978. -N 2 с. 25-28.

16. Беднова В.Н., Яцуха М.В., Данилова Т.Н., Канцева Г.С, Засыпкина Г.Б., Фанштейн С.Л. и др. Результаты научно-практической апробации сухих питательных сред для выращивания гонококков // Вестник дерматологии и венерологии, 1981. N 3 - с. 38-41.

17. Белова Т.Н. Влияние кандид на брюшнотифозную инфекцию у мышей // Иммунология, природно-очаговые и кишечные инфекции, -Воронеж, 1967. с. 26-29.

18. Вельский В.В., Шаталова Е.В. Взаимное влияние возбудителей при смешанной инфекции ожоговой травмы // Журн. Микробиол., 1999. № 4. -С. 3-7.

19. Билибин А.Ф. Дисбактериоз, аутоинфекция и их значение в патологии и клинике человека // Клин, мед., 1970. № 2. - с. 7-12.

20. Билибин А.Ф., Грачева Н.М. Лекарственная болезнь в клинике инфекционных заболеваний. Сов. Мед., 1974. - N 7. - с, 3.

21. Билик В.Г., Хайдарлы И.Н. Морфлогические и гистохимические изменения в слизистой оболочке мочеполовых путей при гонорее, трихомонозе и кандидозе // Вестн. дермотол., 1971. № 5. - с. 50-53.

22. Биргер М.О. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования. М.: Медицина, 1982. 463 с.

23. Блохина И.Н., Дорофейчук В.Г. Дисбактериозы. Л., 1979. 239 с.

24. Бондаренко В.М. Общий анализ представлений о патогенных и условно-патогенных бактериях // Журн. микробиол., 1997. № 4. -С. 20-26.

25. Бондаренко В.М. Факторы патогенности бактерий и их роль в развитии инфекционного процесса // Журн. микробиол., 1999. № 5. - С. 3439.

26. Бойко А.В., Бойко О.В. Рибонуклеазная активность как фактор персистенции некоторых возбудителей сапронозных инфекций // Журн. микробиол., 1997. № 4. - С. 71-73.

27. Борисенко К.К. Диагностика, лечение и профилактика инфекций, передаваемых половым путем. М.: Медицина, 1996.

28. Бурая О.А. Микробиология, иммуногенетика, клинико-иммуно-логическая характеристика пиелонефрита у детей и эффективность комплексной терапии с иммунокоррекцией в катамнезе. Автореф. канд. дисс. - Владивосток. 1993. - 24 с.

29. Бурая О.А. Микробный пейзаж мочи и антибиотикограмма при пиелонефрите у детей // В кн. «Инфекционная патология на Дальнем Востоке». Владивосток, 1993. - С. 16.

30. Бухарин О.В. Персистенция бактериальных патогенов как результат отношений в системе паразит-хозяин // Журн. микробиол., 1997. С. 3-9.

31. Бухарин О.В., Дерябин Д.Г. Таксономическое значение способности бактерий рода Staphylococcus к инактивации ряда факторов естественной противоинфекционной резистентности // Журн. микробиол., 1996. № 4. - С. 30-33.

32. Бухарин О.В., Фадеев С.Б. Исайчев Б.А. Динамика видового состава, антилизоцимной активности и антибиотикорезистентности возбудителей хирургической инфекции мягких тканей // Журн. микробиол., 1997. -№ 4.-С. 51-54.

33. Бухарин О.В., Бойко А.В., Журавлева JI.A. Факторы персистенции и (или) патогенности вибрионов и аэромонад различной этиологической принадлежности // Журн. микробиол., 1998. № 5. - С. 30-33.

34. Бухарин О.В., Курлаев ПЛ., Чернова O.JL, Матюшина С.Б. Факторы персистенции стафилококков в прогнозировании течения гнойно-воспалительных заболеваний//Журн. микробиол., 1998. № 5. - С. 27-30.

35. Бывальцева Т.М. Изучение бактерицидных свойств водного экстракта из липидов рыб как основы пищевого консерванта. Автореф. дисс. На соиск. учен. степ, канд биол. наук. - Владивосток, 1997. - 25 с.

36. Бывальцева Т.М., Давлетшина Т.А., Шульгина Л.В., Блинов Ю.Г., Рыбин В.Г. Влияние антимикробного препарата из липидов рыб надрожжеподобные и плесневые грибы в рыбной продукции // Изв. ТИНРО. -1999.-т. 125.-С. 321-324.

37. Вашетко З.В., Полонская Е.В. Кандидоз в сочетании со стафилококковой инфекцией с преимущественным поражением мочевыводящих путей // Тр. Ленингр. научн. общ. патологоанатомов, 1975. -вып. 16.-С. 219-221.

38. Вербицкая А.И. Активность энергетических и биосинтетических процессов у грибов рода Candida. Автореф. дисс. на соиск. учен. степ. канд. биол. наук. - Саратов, 1976. - 26 с.

39. Вильшанская Ф.Л., Штейнберг Г.Б. Влияние длительного контакта с антибиотиками на формирование дисбактериоза // Антибиотики, 1965. № 8. - С. 755-760.

40. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М:. Наука, 1972. - 252 с.

41. Воробьев А.А., Быков А.С., Пашков Е.П., Рыбакова A.M. Микробиология. М.: Медицина, 1994. - 288 с.

42. Воробьев А.А., Лыкова Е.А. Бактерии нормальной микрофлоры: Биологические свойства и защитные функции // Журн. микробиол., 1999. № 6.-С. 102-105.

43. Глазкова Л.К. Урогенитальный кандидоз у женщин. Автореф. дисс. на соиск. учен. степ. канд. мед. наук. - Уфа, 1975. - 18 с.

44. Горгиев Т.Б. К усовершенствованию методов изготовления аутовакцин. Термические и практические вопросы иммунологиию Киев. Здоровье, 1958.-С. 309.

45. Горгиев Т.Б. О пригодности аутовакцин с применением бактерицидных факторов рыбьего жира // Лаб. дело. I960. - Т. 1. - С. 43-44.

46. Горбунова Е.С. Исследование эффективности различных дизентерийных вакцин и стимулирующего влияния ацетоксана на дизентерийный иммуногенез // Автореф. канд. дисс. На соиск. учен. Степ, канд. мед. наук. Владивосток, 1966. - 15 с.

47. Горшкова Г.И., Богомолова Т.С., Корнев Н.Р., Пахомова Е.Н., Лабунец И.А. Методические вопросы биотипирования Candida albicans // Журн. микробиол., 1989. № 9. - С. 7-10.

48. Давлетшина Т.А., Блинов Ю.Г., Шульгина Л.В., Бывальцева Т,М. Получение нового пищевого консерванта на основе липидов рыб // Тез. докл. конференции «Экология пищи: химические взаимодействия в пищевых системах». Ставрополь, 1996а. - 119-120.

49. Давлетшина Т.А., Шульгина Л.В., Блинов Ю.Г., Бывальцева Т.М., Будаева Г.В. Использование нового пищевого консерванта при изготовлении соленой лососевой икры // Там же, 1996д. 117-118.

50. Дерябин Д.Б., Курлаев П.П., Брудастов Ю.А. Роль персистентных характеристик возбудителя в определении затяжного течения гнойно-воспалительного процесса // Журн. микробиол., 1996. № 3. - С. 74-77.

51. Долгопольская A.M. Особенности влагалищных микозов у беременных женщин // Акуш. и гин., 1971. № 11. - С. 143-145.

52. Домарадский И.В. Вирулентность бактерий как функция адаптации //Журн. микробиол., 1997. № 4. - С. 16-20.

53. Дюдюн А.Д. Местная терапия урогенитальных заболеваний, передаваемых половым путем. Днепропетровск, 1998. - 160 с.

54. Егоров Н.С. Основы учения об антибиотиках. М.: Высшая школа, 1986.-448 с.

55. Езепчук Ю.В. Биомолекулярные основы патогенности бактерий. -М.: Наука, 1973.-260 с.

56. Езепчук Ю.В. Патогенность как функция биомолекул. М.: Наука, 1985.-236 с.

57. Елинов Н.П. Общие закономерности строения и развития микробов-продуцентов биологически активных веществ. М.: Медицина, 1977. - 289 с.

58. Емельянова И.В. Микробиология хронических инфекционных простатитов. Автореф. дисс. на соиск. учен. степ. канд. мед. наук, -Владивосток, 1999. 23 с.

59. Жосан А.Я. Материалы по изучению гонореи, трихомоноза и кандидамикоза мочеполовой системы у женщин. Автореф. дисс. на соиск. учен. степ. канд. мед. наук. - Кишинев, 1974. - 21 с.

60. Жуков В.И. Венерические болезни. Рига: Звайгзне. - 1983.258 с.

61. Зоненберг А.А. Смерть больного от кандидасепсиса // Врач, дело, 1976.-№5.-С. 146-147.

62. Ильин И.И. Негонококковые уретриты у мужчин. М: Медицина. -1983.-254 с.

63. Имшенецкий А.А., Кондратьева Т.Ф. Частота возникновения мутантов с измененной активностью дыхания у полиплоидных штаммов Candida scottii // Микробиол., 1976. № 1. - С. 142-145.

64. Камаев М.Ф. Инфицированная рана и ее лечение. М.: Медицина, 1970,- 342 с.

65. Каплиева В.В., Юцковский А.Д. Распространение ИШТП среди населения Камчатской области // В сб. «Актуальные вопросы дерматовенерологии и косметологии». Владивосток, 1999. - С. 99-100.

66. Каплир Б.С. Гонорейные заболевания у женщин. JI: Медицина. -1976. - 152 с.

67. Кашкин П.Н., Шеклаков Н.А. Руководство по медицинской микологии. -М.: Медицина, 1978. 325 с.

68. Кивман Г.Я., Рудзит Э.А., Яковлев В.П. Фармакинетиика химиотерапевтических средств. -М., 1982. 302 с.

69. Кожные и венерические болезни /Под редакцией Ю.К. Скрипкина/ -М: Медицина. 1996. - т. 4. - 348 с

70. Колб З.К. Течение вирусной инфекции на фоне экспериментального кандидоза // Журн. микробиол., 1971. № 3. - С. 143-144.

71. Кожные и венерические болезни / Под ред. Ю.К. Скрипкина. М.: Медицина, 1996. - Т. 4. - 348 с.

72. Колесникова Н.М. Изменение микрофлоры очагов поражения под влиянием местного лечения антибиотиками // Венерические и кожные заболевания. Алма-Ата, 19975. - С. 194-197.

73. Комов О.П., Яговдик Н.З. Венерические заболевания. М: Беларусь. - 1981. - 176 с.

74. Коликова Т.Г., Беднова В.Н., Данилова Т.Н., Яцуха М.В. Желточная среда для определения ферментативных свойств гонококка // Вестник дерматологии и венерологии, 1978. N 12. - с. 59-62.

75. Коликова Т.Г. Методика приготовления среды с желтком куриного яйца для определения сахаролитических свойств нейссерий // Тезисы докладов X научно-практической конференции врачей дерматовенерологов. -Рига, 1980.-с. 66-69.

76. Коликова Т.Г. Модификация методики определения сахаролитических свойств нейссерий // Тезисы докладов на юбилейной научно-практической конференции. Ашхабад, 1982. - с. 64-66.

77. Костюкова Н.Н. Начальный этап инфекционного процесса -колонизация и пути ее предотвращения // Журн. микробиол., 1989. № 9,- С. 103-110.

78. Красильников А.П. Основные принципы местного применения антимикробных препаратов // Химиотерапия бактериальных инфекций. М.; Медицина, 1979.-С. 126-127.

79. Красильников А.П. Цели, методы и условия эписомального применения противомикробных препаратов // Здравоохр. Белоруссии., 1981. -№2.-С. 52-55.

80. Красильников А.П. Химиотерапия и антисептика // Антибиотики и химиотерапия, 1990. № 10. - С. 24-29.

81. Красильников А.П. Проблема безопасности медицинской помощи // Неблагоприятные эффекты современных методов лечения. Минск, 1993. -С. 14-22.

82. Красильников А.П., Адарченко А.А. Клиническое значение и методические подходы к определению чувствительности-устойчивости бактерий к антисептикам // Антибиотики и химиотерапия, 1991. № 9. - С. 39-44.

83. Красильников А.П., Адарченко А.А., Абаев Ю.К. Современные проблемы антисептики // Здравоохр. Белоруссии, 1990. № 11. - С. 39-44.

84. Красильников А.П., Гудкова Е.И. Лекарственные инфекции // Акт. вопр. микробиологии, эпидемиологии и клиники инфекционных болезней. Харьков, 1993.-С. 194.

85. Кудлай Д.Г. Эписомы и инфекционная наследственность бактерий. М.: Медицина, 1969. - 223 с.

86. Кузин М.И. Антисептика и асептика от Н.И. Пирогова до наших дней // Тр. пироговских чтений. М., 1986. - Т. 2. - С. 227-251.

87. Кузнецов В.Г., Багряянцев В.Н. Определение липазной активности кишечных иерсиний // Лаб. клин, диагн., 1992. № 9-10. - С. 57-59.

88. Курбангалеев С.М. Гнойная инфекция в хирургии. М.: Медицина, 1985.-272 с.

89. Мавров И.И. Половые болезни. Киев: Москва, 1984. - 478 с.

90. Малова И.О., Сокольникова Н.В. Структура урогенитальных инфекций у мальчиков пациентов детского урологического кабинета //В сб. «Актуальные вопросы дерматовенерологии и косметологии». -Владивосток, 1999. - С. 60-61.

91. Машковский М.Д. Лекарственные средства: В 2 частях. М.: Медицина, 1994. - 736 с (1), 688 с (II).

92. Медицинская лабораторная диагностика /Под редакцией проф. А.И. Карпищенко/ Санкт-Петербург: Интермедицина, 1997. - 304 с.

93. Мель Н.П. Влияние антибиотиков на систему мать-плод и здоровье новорожденных. Автореф. канд. дисс. на соиск. учен. степ. канд. мед. наук. - Владивосток, 1990. - 24 с.

94. Мосолов В.В., Ванцева Т.А. Растительные белковые ингибиторы протеолитических ферментов. М., 1993. - 207 с.

95. Медицинская микробиология /Под редакцией В.И. Покровского и O.K. Поздеева / М: ГЕОТАР Медицина, 1999. - 1200 с.

96. Никитин В.М. Справочник методов биохимической экспресс-индикации микробов. Кишинев, 1986. - 294 с.

97. Никифорова А.А., Матвеева И.М., Терешин И.М. Действие полиеновых антибиотиков на включение аминокислот в белки Candida albicans // Антибиотики, 1970. № 1. - С. 31-34.

98. Овчинников Н.М., Беднова В.Н., Делекторский В.В. Лабораторная диагностика заболеваний, передающихся половым путем. М: Медицина, 1987.-304 с.

99. Омаров М.О., Арустамова С.В. Клиника сочетанных поражений мочеполового тракта у женщин, вызванная влагалищными трихомонадами и грибами кандида // Венерические и кожные заболевания. Алма-Ата, 1973. -С. 287-288.

100. Патент N 2043725. Способ получения пищевого консерванта из природного сырья и способ приготовления рыбных продуктов с его использованием. Авт.: Блинов Ю.Г., Шульгина Л.В., Горшкова М.М., Акулин В.Н., Давлетшина Т.А., Бывальцева Т.М. Опубл.

101. Патент N 2031584. Способ получения зернистой лососевой икры. Авт.: Горшкова М.М., Блинов Ю.Г., Шульгина Л.В., Бывальцева Т.М. Опубл.

102. Патент N 2090103. Способ приготовления икры рыб. Авт.: Пивненко Т.Н., Эпштейн Л.М., Шульгина Л.В., Блинов Ю.Г., Бывальцева Т.М., Давлетшина Т.А., Серых А.В. Опубл.

103. Петровская В.Г., Марко О.П. Микрофлора человека в норме и патологии. М.: Медицина, 1976. - 231 с.

104. Пехов А.П., Кусакин А.А., Пантюхова В.В. Индуцированные мутанты фактора F-lac+ в Е. coli К-12 // Бюлл. эксп. биол. и мед., 1967а, № 11.-С. 130.

105. Пехов А.П., Юдин Е.В. Дефектные мутанты полового фактора в клетках Е. coli К-12 // Бюлл. эксп. биол. и мед., 1967 б. № 10. - С. 93.

106. Планельес Х.Х. О классификации антибактериальных веществ // Журн. микробиол., эпидемиол., иммунол., 1952. № 5. - С. 584-587.

107. Планельес Х.Х., Харитонова A.M. Побочные явления антибиотикотерапии бактериальных инфекций. М.: Медицина, 1955 - 340 с.

108. Платова Н.Г. Влияние грибов рода кандида на чувствительность к фуразолидону у стафилококков, выделенных от больных вирусным гепатитом // Науч. труды Рязанск. мед. ин-та, 1976. Т. 56. - С. 80-82.

109. Покровский В.И., Ковалева Е.П., Семина Н.А. Эпидемиология и профилактика гнойно-септических внутрибольничных инфекций // Эпидемиология и микробиология раневых инфекций. М.: Медицина, 1986. -С. 3-6. \

110. Поляк С.М. Определение чувствительности микроорганизмов к противомикробным препаратам методом дисков. Санкт-Петербург: Научно-исследовательский центр фармакологии, 1997. - 21 с.

111. Прозоровский С.В., Генчиков Л.А., Семина Н.А. Эпидемиология и профилактика внутрибольничных инфекций // Материалы XYIII съезда микробиологов, эпидемиологов и паразитологов. М.; Алма-Ата, 1989. - С. 88-95.

112. Пылаева С.И., Гординская Н.А., Вазина И.Р., Сидоркин В.Г., Бушуев Ю.И. Профилактика гнойно-септических осложнений при тяжелых ожогах с помощью иммунотропных лекарственных препаратов в эксперименте // Журн. микробиол., 2000, № 1. С. 72-75.

113. Пьянкова З.П., Колесникова Н.М. Лечение леворином и морфоциклином больных кандидозами кожи и слизистых, осложненными стафилококковой инфекцией // Венерические и кожные заболевания. -Алма-Ата, 1975.-С. 190-1193.

114. Раны и раневая инфекция / Под ред. М.И. Кузина и Б.М. Костюченок. -М.: Медицина, 1990. 688 с.

115. Реброва Р.Н. Особенности течения смешанной инфекции у морских свинок, зараженных дифтерийной палочкой с грибком С. albicans // Журн. микробиол., 1965. № 5. - С. 66-70.

116. Реброва Р.Н. Лечение экспериментальной инфекции, вызванной дифтерийной палочкой в ассоциации с грибом Candida albicans // Журн. микробиол., 1967. № 6. - С. 84-88.

117. Реброва Р.Н. Грибы рода кандида при бактериальных инфекциях. -М.: Медицина, 1979. 256 с.

118. Реброва Р.Н., Зималонг Г.М. Морфологические изменения некоторых органов морских свинок при смешанной инфекции, вызванной дифтерийной палочкой в ассоциации с грибом Candida albicans // Журн. микробиол., 1967. № 2. - С. 103-107.

119. Реброва Р.Н., Чистякова И.С. О значении грибов рода Candida и их ассоциаций с патогенными стафилококками при хроническом тонзиллите //Журн. микробиол., 1971. № 9. - С. 48-51.

120. Роминсон Г.Н. Устойчивость бактерий // Антибиотики, 1971. N 6. - с.519.

121. Рыбин В.Г. Исследование факторов, определяющих антимикробную активность нового антимикробного препарата из рыбных жиров. Автореф. канд. дисс. - Владивосток, 2000,- 24 с.

122. Рыбин В.Г., Бывальцева Т.М., Шульгина Л.В., Давлетшина Т.А., Блинов Ю.Г., Акулин В.Н. Зависимость антимикробной активности водногоэкстракта продуктов окисления рыбных жиров от степени их ненасыщенности // Изв. ТИНРО. 1999а. - т. 125. - с. 232-237.

123. Рыбин В.Г., Куклев Д.В., Бывальцева Т.М., Акулин В.Н., Блинов Ю.Г. (2Е, 6Z) -4-гидрокси-2,6-нонадиеналь активный компонент антимикробного препарата // Изв. ТИНРО. - 19996. - т. 125.-е. 238-243.

124. Рыбин В.Г., Куклев Д.В. Определение 4-гидрокси-2Е-ноненаля в смеси продуктов окисления полиненасыщенных липидов методом газожидкостной хроматографии // Изв. ТИНРО. 1999в. - т. 125.-е. 115-121.

125. Рыбин В.Г., Куклев Д.В., Бывальцева Т.М., Блинов Ю.Г., Акулин В.Н. (2Е) -4-гидрокси-2-ноненаль активный компонент нового природного антимикробного препарата // Биоорганическая химия. - 1999г. - т. 25. - N 9. -с. 716-720.

126. Ряпис Л.А., Липницкий А.В. Микробиологические и популяционнО-генетические аспекты патогенности бактерий // Журн. микробиол., 1998. № 6. - С. 109-113.

127. Сиволодский Е.П. , Герасименко Л.М., Копейка А.А. Питательная среда Proteus-PPM для одноэтапного выделения и идентификации бактерий Proteus, Providenccia, Morganella // Клин. лаб. диагн., 1992. № 9-10. - С. 5961.

128. Сидоренко С.В., Рензван С.П., Стерхова Г.А., Гридинина С.А. Госпитальные инфекции, вызванные Pseudomonas aeruginosae. Распространение и клиническое значение антибиотикорезистентности // Антибиотики и химиотерапия, 1999. № 3. - С. 25-33.

129. Сидоренко С.В., Страчунский Л.С., Ахмедова Л.И., Белобородов В.Б., Богомолова Н.С., Большаков Л.В., Дехнич А.В., Карабак В.И., Маликов

130. Сингур Л.Г. Микрофлора вагины и местный иммунитет при гонорее у женщин разных изогеногрупп. Автореф. дисс. на соиск. учен, степ. канд. мед. наук. - Челябинск, 1986. 24 с.

131. Сингур Л.Г., Максименко Н.В., Прохоренко Г.Г., Извеков А.А., Сингур О.А., Стефанович Я.А. Анализ микрофлоры урогенитального тракта жителей Приморья // В сб. «Актуальные вопросы дерматовенерологии и косметологии». Владивосток, 1999. - С. 67-68.

132. Синькова В.П. Изучение влияния грибов кандида альбиканс на течение туберкулезной инфекции в эксперименте // Сб. научн. работ Кирг. мед. ин-та. Фрунзе, 1970. - Т. 59. - С. 84-90.

133. Скрипкин Ю.К., Кубанова А.А. Кожные и венерические болезни. -М.: Медицина, 1995. Т. 2. - С. 28-45.

134. Скрипкин Ю.К., Козлова В.И., Пухнер А.В. Вирусные, хламидийные и микоплазменные заболевания гениталий. М.: Информационно-издательский дом «Филинъ», 1997. - изд. 4. - 466 с.

135. Соловьев В.Н. Стратегия современной химиотерапии бактериальных инфекций. М.: Медицина, 1973. - 342 с.

136. Степанова Ж.В., Лещенко В.М., Ильченко Л.С. Иммунологические исследования у больных кандидозом // Вестн. дерматол., 1976. № 9. - С. 3135.

137. Стручков В.И. Профилактика нагноений и лечение гнойных ран. Автореф. дисс. на соиск. учен. степ. канд. мед. наук. -М., 1982,- 23 с.

138. Торганова Е.Н., Абдуллаева С.А., Бойченко М.Н. Бактериальный вагиноз // Журн. микробиол., 1999. № 4. - С. 100-103.

139. Тимаков В.Д., Каган Г.Я. L формы бактерий и семейство Mycoplasmataceae в патологии. - М.: Медицина, 1973. - 392 с.

140. Фадеев С.Б., Бухарин О.В. Микробиологические особенности хирургической инфекции мягких тканей // Журн. Микробиол., 1999. № 4. -С. 11-14.

141. Тамзаев Б.Д., Альджамбаев Ш.Ю., Синькова В.П. Некоторые показатели естественной иммунологической реактивности у больных с туберкулезом легких в сочетании с кандидозом // Здравоохр. Киргизии, 1976. -№ 4.-С. 41-43.

142. Цимбалистова М.В., Павлович Н.В. Фосфатазная активность у представителей Francisella//Журн. микробиол., 1988. № 1. - С. 10-13.

143. Чернова О.Л., Матюшина С.Б., Иванов Ю.Б., Райцелис И.В. Роль факторов персистенции Staphylococcus epidermidis в инфекционном процессе // Журн. микробиолюЮ 1997. № 4. - С. 81-84.

144. Шендеров Б.А. Микроэкологическая токсикология: Реальность, проблемы и перспективы // Антибиотики и микроэкология человека. М., 1988.-С. 37.

145. Шульгина Л.В., Загородная Г.И., Шульгина Ю.П., Бывальцева Т.М., Галкина Л.М. Микрофлора дальневосточных морей и ее влияние на продукцию из промысловых гидробионтов // Гигиена и санитария, 19956. N 1. — с. 14-16.

146. Яговдик Н.З., Качук М.В., Сосновский А.Г., Белугина И.Н. Венерические болезни. Мн: Беларусская навука, 1998. - 342 с.

147. Яцуха М.В. О диагностической ценности оксидазной реакции в культуральной диагностике гонореи // Вестник дерматологии и венерологии., 1975.-N12.-с. 34-36.1. Иностранная литература

148. Ababouch L., Chaibi A., Busta F.F. Inhibition of bacterial spore growth by fatty acids and teir sodium salts // J. Food. Prot. 1992. - V. 55. - N 12. -P. 980-984.

149. Akabane H. Synthesized leukotoxin: its biological activity and establishment of radioimmunoassay // Hokkaido J. Med. Sci. 1991. - V. 66. - N 4.- P. 510-521.

150. Asada Т., Ishimoto Т., Sakai A., Sumiya K. Insecticidal and antifungal activity in Hinoki-Asunaro leaf oil // Mokuza Igakkaishi. 1989. - V. 35. - N 9. -P. 851-855.

151. Babic I., Nguyen-the C., Amiot M.J., Aubert S. Antimicrobial activity of shredded carrot on food-borne bacteria and yeast // J. Appl. Bacteriol. 1994. -V. 76.-N2.-P. 135-141.

152. Bayliss M. Effect of the chemical constitution of soaps upon their gerbicidal properties // J. Bacteriol. 1936. - V. 31. - P. 489-497.

153. Baker Z., Harrison R.W., Miller B.F. Action of synthetic detergent on the metabolism of bacteria // J. Exp. Med. 1941a. - V. 73. - P. 249-255.

154. Baker Z., Harrison R.W., Miller B.F. Inhibition by phospholipids of the action of synthetic detergents on bacteria // J. Exp. Med. 1941b. - V. 47. - P. 621-632.

155. Beckman J.K., Howard M.J., Greene H.L. Identification of hydroxyalenals formed from omega-3 fatty acids // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1990. - V. 31. - P. 39-45.

156. Benesova M., Benes L. Inhibitori proteas leciva budoucnosti? // Farm1 obz., 1993. - Vol. 62, # 10. - P. 433-439.

157. Benyagoub M., Rhlid R.B., Belanger R.R. Purification and characterization of new fatty with antibiotic-activity produced by Sporothrix flocculosa // J. Chem. Ecol. 1996. - V. 22. -N 3. - P. 405-413.

158. Birk V. Hydrolytic Enzymes/ Eds A. Neubergen, K. Brocklenursk. -Amsterdam New York - Oxford: Elsevir, 1987. - P. 257-300.

159. Boisen S., Djurtoff R. Protease inhibitor from balery embryo in the biting tripsin and tripsin-like microbial proteases. Purification and cnaracterization microbial isoforms // J. Sci Food and Ags., 1982. -Vol. 33, № 5. P. 431-440.

160. Buchanan R.E., Gibbons N.E., Cowan S.T. Bergoy's manual of determinative bacteriology, Sth. Baltimore: The Williams and Wilkins Co., 1974. - 1268 p.

161. Carballeira N.M., Reyes E.D., Sostre A., Rodriguez A.D., Rodriguez J.L, Gonzalez F.A. Identification of the novel antimicrobial fatty acid (5Z,9Z)-14-methyl-5,9pentadecadienoic acid in Eunicea succinea // J. Nat. PROD. 1997. -V. 60,-N5. -P. 502-504.

162. Chattaway F.W., Thompson C.C., Barlow A.J.E. Action of inhibitors on dermatophytes // Biochem. J. 1956. - V. 63. - P. 648-657.

163. Clark J.R. On the toxic effect of deleterious agents on the germination and development of certain filamentous fungi // Bot. Gaz. 1899. - V. 28. - P. 289-314.

164. Classman H.N. Surface-active agents and application in bacteriology // Bacterid. Rev. V. 12.-P. 105-117.

165. Croft K.P.C., Juttner F., Slusarenko A.J. Volatile products of the lipoxygenase pathway evolved from Phaseolus vulgaris (L) leaves inoculated with Pseudomonas syringae PV Phaseolicola // Plant physiol. - 1993. - V. 101. — N 1, -P. 13-24.

166. Czeizzel A. Teratology of Antiseptics // Handbuch der Antiseptik Berlin, 1985,-S. 327-373.

167. Dellar J.E., Cole M.D., Waterman P.G. Antifungal polyoxygenated fatty acids from Aellanthus parvifolius // J. Chem. Ecol. 1996. - V. 22. - N 5. -P. 897-906.

168. Dube S., Upadhyay P.D., Tripathi S.C. Antifungal, physicochemical and insectrepelling activity of the essential oil of Ocimum basilicum // Can. J. Bot. 1989. - V. 67. - N 7. - P. 2085-2087.

169. Dube S., Kumar A., Tripathi S.C. Antifungal and insect-repellent activity of essencial oil of Zanthoxylum-Alatum // Ann. Bot. 1990. - V. 65. - N 4. - P. 457-459.

170. Dubey P., Tripathy S.C. Studies antifungal, physicochemical and phytotoxic properties of the essential oil of Piper-Betle // Journal of Plant Diseases and Protection. 1987. - V. 94. -N 3. - P. 235-341.

171. Dwivedi S.K., Dubey N.K. Potential use of the essential oil of Trachyspermum ammi against seed fungi of Guar (Cyamopsis tetragonoloba L (Taub) // Mycopathologia. 1993. - V. 121.-N2.-P. 101-104.

172. Esterbauer H. Cytotoxicity and genotoxicity of lipid-oxidationproducts // Am. J. Clin. Nutr. 1993. - V. 57. - N 5. - P. 779-786.

173. Esterbauer H., Schaur R.L., Zollner H. Chemistry and biochemistry 4-hydroxinonenal, malonaldehyde and related aldehydes // Free Rad. Biol. Mtd. -1991.-V. 11.-P. 81-128.

174. Feldlaufer M.F., Knox D.A., Lusby W.R., Shimanuki H. Antimicrobial activity of fatty acids against Bacillus larvae, the causative agent of american foulbrood disease // Apidologie. 1993. - V. - 24. - N 2. - P. 95-99.

175. Fuller R., Moore J.H. The inhibion of the growth of Clostridium welchii by lipids isolated from the contents of the small intestine of the pig //J. Gen. Microbiol. 1967. - V. 46. - P. 23-28.

176. Garg A.P., Muller J. Fungitoxicity of fatty acids against dermatophytes // mycoses. 1993. - V. 36. - N. 1,2. - P. 51-63.

177. Garg S.C., Dergre S.I. Antifungal efficacy of some essential oils // Pharmazic. 1988. - V. 43. - N 2. - P. 141-142.

178. Garg S.C., Siddiqui N. Antifungal activity of some essential oil isolates // Pharmazic. 1992. - V. 47. - N 6. - P. 467-468.

179. Gershon H., Parmegiani R. Organic Fluorine compounds II. Synthesis and antifungal properties of 1-fluoro fatty acids // J. Med. Chem. 1967. - V. 10. -P. 186-198.

180. Gilbert P. Resistencio no plasmidica a desinfectantes у antisepticos // Laboratorio, 1984. № 464. - S. 95-131.

181. Hamberg M., Hamberg G. Peroxygenast-catalyzet fatty acid epoxidation in cereal seeds sequential oxidation of linoleic acid into 9(S), 12(S), 13(S)-trihydroxy-10(E)-octadecenoic acid // Plant Physiol. - 1996. - V. 110. - N 3. -P. 807-815.

182. Hammerschmidt F.J., Clark A.M., Soliman F.M., Elkashoury E.S.A., Elkawy M.M.A., Elfishawy F.M. Chemical-composition and anrimicrobial activity of essential oils of Jasonia and J-Montana // Planta Medica. 1993. - V. 59. - N 1. -P. 68-70.

183. Hilton A.L., Wamock D.W. Vaginal candidosis and the role of the digestive tract as a source of infection // Brit. J. Obstet. Gynaec., 1975. V. 822. -P. 922-926.

184. Hoffman C., Schweizer T.R., Dalby G. Fungistatic properties of the fatty acids and possible biochemical significance // Food. Res. 1939. - V. 6. - P. 539-551.

185. Hogan J.S., Pankey J.W., Duthie A.H. Growth inhibition of mastitis pathogens by long-chain fatty acids // J. Dairy Sci. 1987. - V. 70. - N 5. - P. 927-934.

186. Hogan J.S., Smith K.L., Todhunter D.A., Schoenberger P.S. Growth responses of environmental mastitis pathogens to long-chain fatty acids // J. Dairy Sci. 1988. - V. 71. - N 1. - Р/ 245-249.

187. Kabara J.J. Fatty acids and derivatives as antimicrobial agents // ACS Symposium Series. 1978. - P. 203-210.

188. Kabara J.J. Antimicrobial agents derived from fatty acids // J. Amer. Oil Chem. Soc. 1984. - V. 61. - N 2. - P. 397-403.

189. Kabara J.J. Fatty acids and esters as antimicrobial insecticidal agents // ACS Symp. Series. 1987. - P. 220-238.

190. Капеко Т., Honda S., Nakano S.5 Matsuo M. Lethal effects of a linoleic acid hydroperoxide and its autoxidation products, unsaturated aliphatic aldehydes, on human diploid fibroblasts // Chemico-Biological Interactions. 1987. - V. 63. -N2.-P. 127-137.

191. Kitajama K., Kawumura J. Antiseptic action of higher fatty against wood-attacking fungi // Bull. Imp. Forestry Exp. Sta. Japan. 1931. - V. 31. - P. 108-119.

192. Kodicek E. The effect of unsaturated fatty adds on gram-positive bacteria // Soc Exp. Biol. Symp. 1949. - V. 3. - P. 217-224.

193. Kodicek E., Worden A.N. Effect of unsaturated fatty acids on Lactobacillus helveticus and other gram-positive microorganisms // Biochem. J. -1945,-V,-39.-P. 78-91.

194. Kolmer J.A., Rule A.M., Madden B. Chemotherapeutic studies with sodium ricinolete // J. Lab. Clin. Med. 1934. - V. 19. - P. 972-980.

195. Kono Y. Apparent antibacterial activity of catalase role of lipid hydroperoxide contamination // J. Biochem. - 1995. -V. 117. - N 1. - P. 42-46.

196. Kramer A., Zbinden G., Stephan U. Akute toxizitat von Antiseptica // Handbuch der Antiseptik. Berlin, 1985a. - Bd. 1/5. - S. 79-121.

197. Kramer A., Groschel D., Heeg P. Bergiffsbestimmung der Antiseptik und Zielstellung der Klinischen Anwendung von Antiseptica // Klinischhe Antiseptik. Berlin, 1993. - S. 1-22.

198. Krasilnikow A.P., Adartschenko A.A., Smuscko L.S. Variabilitat der Erregerpopulationen von Hospitalinfectionen // Handbuch der Antiseptic. Berlin, 1984.-Bd. Vi. -S. 34-67.

199. Larsen R., Scott R., Barke S. Improved Perioperative Antibiotic use II Infect. Contr., 1989. T. 10. - № 7. - P. 316-320.

200. Larson W.P. The influence of the surfacc tension of the culture medium on bacterial growth // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1921. - V. 19. - P. 62-78.

201. Larson W.P., Nelson E. The antigenic properties of pneumococci and streptococci treated sodium ricinoleate // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1925. - V. 22.-P. 357-368.

202. Levine A.S., Fellers C.R. Action of acetic acid on food-spoilage microorganisms // J. Bacteriol. 1940. - V. 39. - P. 499-511.

203. Livermole D.M. ^-lactamases in laboratory and clinical resistance // Clin Microbiol Rev, 1995. № 8. - P. 557-584.

204. Mallea M., Anfosso F., Charpin J., Soler M. Antifungal activity of aromatic Essential Oils // Pathologie Biologie. 1979. - V. 27. - N 10. - P. 597602.

205. Miller C.P., Castler R. The effect of sodium ricinoleate jn the gonococcus //J. Bacteriol. 1931. V. 22. - P. 339-352.

206. Нейчев С. Клиническая микробиология. София: Мед и физкульт., 1977.-317 с.

207. Misra T.N., Singh R.S., Pandey H.S., Prasad С., Singh B.P. Antifungal essential oil and a long-chain alcogol from Achyranthes aspera //Phytochem. -1992.-V. 31.N5.-P. 1811-1812.

208. Nieman C. Influence of trace amounts of fatty acids the growth of microorganisms // Bacteriol. Rev. 1954. - V. 18. - P. 147-161.

209. Nielsen R., Sondergaard J., Ullman S. Simultaneous occurrence of Neisseria gonorrhoeae, Candida albicans and Trichomonas vaginalis // Acta derm.-venereol. (Stockh.), 1974,-V. 54. P. 413-415.

210. Obcbiyi O.O. Isolation of a new flavone and some essential oils with antimicrobial and antifungal properties from the Stem Bark of Jatropha podagrica // Planta Medica. 1982. - V. 45. - N 3. - P. 138.

211. Orafidiya L.O. The effect autooxidation of lemon-grass oil on its antibacterial activity // Phytotherapy Research. 1993. - V. 7. - N 3. - P. 269-271.

212. Ориэл ДЖ.Д., Риджуэй Дж.Л. Хламидиоз. Мн: Медицина, 1984. -с. 84-156.

213. Parker M.T. Резистентность патогенных бактерий к антибиотикам // Хроника ВОЗ. Женева, 1982. - № 6ю - С. 18-24.

214. Paterson D. Clinical conseguences of extended-spectrum beta-lactamases // Ibid., 1999. № 44. - P. 16/

215. Petrowitz H.J., Wagner S. Thin-layer chromatography of insecticidal and fungicidal agents in oil-borne wood preservatives // Fresenius Zeitschrift fur Analytische Chemie. 1981. - V. 305. -N3. - P. 196-199.

216. Reid J.D. The disinfectant action of certain acids // Am. J. Hyg. 1932. -V. 16.-P. 510-525.

217. Rice L.B., Yaou J.D.C., Klimm K. Efficacy of different /?-lactams against an axstended-spectrum /? -lactamase producing Klebsiella pneumoniae in the rat intra-abdominal sepsis model // Antimicrob Agents Chemother., 1991. № 35,-P. 1243-1244.

218. Rotter M.L. Chirurgische Handdesinfection // Klinische Antiseptik. -Berlin, 1993. S. 67-82.

219. Prince H.N. Effects of pH on the antifungal activity of undecylenic acid and its calcium salt // J. Bacterid. 1959. - V. 78. - P. 788-796.

220. Seebacter C. Antimicotica // Handbuch der Antiseptic. Berlin, 1987. -Bd. II/3.-S.- 25-97.

221. Selley M.L., McGuiness J.A., Jenkin L.A., Bartlett M.R., Ardlie N.G. Effect of 4-hydroxy-2,3-trans-nonenal on platelet function // Thrombosis @ Haemostasis. 1988. - V. 59. - N 2. - P. 143-146.

222. Sidorova O.A., Maksimova I.V. The effect medium acidity on the light-dependent antibacterial activity of fatty acids // Mikrobiologiia. 1998. - V. 58,-N6.-P. 985-989.

223. Shukla H.S., Tripathi S.C. Antifungal substance in the essential oil of anise (Pimpinella-anisum L) // Agrical. Biol. Chem. 1987. - V. 51. - N 7. - P. 1991-1993.

224. Soon-Yeong Cho, Byeong-Jin Yon, Mi-Hwa Chang, Soo-Jung Lee, Nak-Ju Sung, Eung-Ho Lee. Screening for antimicrobial compounds in unused marine resources by the paper disk method // Korean J. Food Sci. Technol. 1994. - V. 26.-N3.-P. 261-265.

225. Srark G.K., Barlett P.A. Design and use of potent, specific enzyme inhibitors // Pharmacol, and Ther., 1983. Vol. 23, # 1. - P. 45-78.

226. Stock C.C., Francis T. The inactivation of the virus of epidemic influenza by soaps // J. Exp. Med. 1940. - V. 71. - P. 661-669.

227. Stock C.C., Francis T. The inactivation of the virus of lymphocytic choriomeningitis by soaps // J. Exp. Med. 1943a. - V.- 77. - P. 323-331.

228. Stock C.C., Francis T. Additional studies of the inactivation of the virus of epidemic influenza by soaps // J. Immunol. 1943b. - V. 47. P. 303-311.

229. Takamura H., Gardner H.W. Oxygenation of (3Z)-alkenal to (2E)-4-hydroxy-2-alkenal in soybean seed (Glycine-Мах L) // Biochim. Biophys. Acta. -1996,-V. 1303,-N2.-P. 83-91.

230. Tetsumoto S. Sterilizing action of acids. II. Sterilizing action of saturated monobasic fatty acids // J. Agric. Chem. Soc. Japan. 1933a. - V. 9. - P. 38-401.

231. Tetsumoto S. Sterilizing action of acids. III. Sterilizing action saturated monobasic fatty acids // J. Agric Chem. Soc. Japan. 1933b. - V. 9. - P. 563-571.

232. Thornton R.H. Antifungal activity of fatty acids to Pithomyces chartatum (Berk and Curt) M.B. Ellis and other fungi // N.Z. J. Agric. Res. 1963. -V. 6.-P. 469-481.

233. Vavelow J., Becck K., Lyvitz M., Troll W. In vitro effect of thesoybean'protease inhibitors // Symp. 187 Meet Americ. Chem. Soc. St. Louis. Mo. «Xenobiotic Metab. Nutr. Effekts». Waschington, 1984. - P. 283-292.

234. Wang L.L., Johnson E.A. Ingibition of Listeria monocytogenes by fatty acids and monoglycerides // Applied @ Enviromental Microbiology. 1992. - V. 58. -N2.-P. 624-629.

235. Weuffen W., Kramer A., Grosehel D. Begriffbestimmung der Antiseptik.'- Berlin, 1981. Bd. 1/1. - S. - 7-286.

236. Winblad B. Experimental renal candidiasis in mice and guinea pigs // Acta path, microbial, scand., 1975. V. 83. - P. 406-414.263'. Вудруфф X., Мак-Даниэль JI. Антибиотики и пути химиотерапии/ Перевод с англ./. М.: Медицина, 1960. - С. 41-62.

237. Ziegler V. Cnmdlagen irnd Nachweismoglichkeiten allergener Nebenwirkungen vom Ekzemtyr durch Antiseptica // Handbuch der Antiseptic. -Berlin, 1985. Bd. 1/5. - S. 67-83. .189

238. Valland R., Heine K., Trachtenberg S. Reduction of surgical wounal infection rates in contaminated Wounds treated with antiseptics combinal with systemics antibiotics /Surgery, 1982. № 3. - P. 329-332.

239. Департамент здравоохранения Администрации Приморского края

240. Владивостокский государственный медицинский университет1. УТВЕРЖДАЮ1. УТВЕРЖДАЮ1. РУКОВОДИТЕЛЬ

241. ЩЦАРТАМЕНТА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ — ^nitVortJT/rrTD »т тъгм 1/и а а1. СТРАЦИИ КРАЯ1. В.Н.ПРИХОДЬКО2000 г.1. В.КАМИНСКИИ2000

242. АНТИМИКРОБНЫЙ ПРЕПАРАТ ИЗ ЛИПИДОВ РЫБ В ТЕРАПИИ И ПРОФИЛАКТИКЕ МЕСТНЫХ ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

243. Методические рекомендации N1. Владивосток, 20001. УТВЕРЖДАЮ

244. Проректор по научной части ВГМУ, профессор1.Б .И. Гельцер1. ЗАКЛЮЧЕНИЕо проведении клинических испытаний антимикробного препарата из липидов морских рыб при лечении микробной экземы на кафедре дерматовенерологии ВГМУ

245. Клинические испытания антимикробного препарата из липидов морских рыб проведены на кафедре дематовенерологии ВГМУ доцентом кандидатом медицинских наук Сингур Л.Г. и старшим лаборантом Каменской О.Г.

246. В таблице приведены результаты по оценке эффективности лечения микробной экземы с использованием антимикробного препарата и традиционных антисептических средств.

Информация о работе

Лаженцева, Любовь Юрьевна
кандидата биологических наук
Владивосток, 2000
ВАК 03.00.07

Диссертация

Влияние антимикробного препарата из липидов морских рыб на возбудителей гнойно-воспалительных заболеваний - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы