Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Влияние антигенов Главного комплекса гистосовместимости на заболеваемость лейкозом у коров айрширской и черно-пестрой пород

ВАК РФ 06.02.01, Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

Автореферат диссертации по теме "Влияние антигенов Главного комплекса гистосовместимости на заболеваемость лейкозом у коров айрширской и черно-пестрой пород"

На правах рукописи

ИЗМЕСТЬЕВ СЕРГЕЙ ВИКТОРОВИЧ

Влияние антигенов Главного комплекса гистосовместимости на заболеваемость лейкозом у коров айрширской и черно-пестрой пород

06.02.01. — разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных

АВТОРЕФЕРАТ

Диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 2006

Работа выполнена на кафедре генетики и разведения животных в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина»

Научный руководитель:

доктор сельскохозяйственных

наук, профессор, академик РАСХН Эрнст

Лев Константинович

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор, Марзанов Нурбий Сафар-биевич

кандидат сельскохозяйственных наук, доцент Попов Владислав Павлович

Ведущая организация: ФГНУ Всероссийский научно-

исследовательский институт племенного дела.

Защита состоится «.^¿^ » ¿п^г/', ^ >» 200бг. в ^^^'^часов на за-

седании Диссертационного совета Д220.042.03 в ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина» по адресу: 109472, г. Москва, ул. Академика Скрябина, 23.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина»

Автореферат разослан « » р ¿'¿-г'Рге^г'Л*-/? 2006

года.

Ученый секретарь диссертационного совету,

Г.Г.Скрипниченко

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. Среди инфекционных болезней крупного рогатого скота в России (по статистическим данным Министерства сельского хозяйства РФ) гемобластозы занимают первое место. Отсутствие ранней диагностики, лечения и эффективных мер профилактики выдвигает проблему лейкозов в число важнейших биологических и социальных задач.

В последнее время стала очевидна необходимость разработать методические подходы, и получить достоверные критерии, позволяющие судить о генетической предрасположенности животного к заболеванию и об изменении его иммунологического состояния при развитии патологического процесса. Однако следует отметить, весьма ограниченные возможности использования изучаемых авторами полиморфных систем (эритроцитарные антигены, белки сыворотки крови и т.д.) при прогнозировании устойчивости сельскохозяйственных животных к болезням. Так как в каждом стаде, в каждом случае частота встречаемости тех или иных аллелей у больных и здоровых животных различна.

Все сказанное выше говорит о несомненной актуальности иммуногене-тической проблемы лейкоза.

Цели и задачи исследований. Целью работы было — изучить генетическое разнообразие по антигенам классов I и II системы BoLA (Bovin leicocite antigens) айрширокой и черно-пестрой пород крупного рогатого скота, и дать сравнительную характеристику; выявить ассоциации полиморфных вариантов фенотипов антигенов классов I и II Главного комплекса гистосовместимости с устойчивостью к лимфолейкозу; на основе полученных результатов дать оценку возможности использования антигенов системы BoLA в качестве маркеров устойчивости крупного рогатого скота к лейкозу.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи: -изучить полиморфизм антигенов системы BoLA в популяциях крупного рогатого скота айширокой и черно-пестрой пород;

-провести сравнительный анализ исследованных популяций по частоте встречаемости различных антигенов Главного комплекса гистосовместимости (классов I и II);

-на основе популяционных исследований определить риск заболевания лейкозом коров изучаемых пород;

-определить возможные ассоциации антигенов системы ВоЬА с восприимчивостью к лимфолейкозу;

-разработать и обосновать применение антигенов гистосовместимости в качестве маркеров устойчивости к заболеваниям.

Научная новизна проводимых исследований. Впервые в ГГТПЗ «Смена» и колхозе им. Кирова изучен полиморфизм антигенов системы ВоЬА у коров, соответственно айрширской и черно-пестрой пород . Изучены внутри- и межпородные различия, дана сравнительная характеристика пород, по частоте встречаемости антигенов классов I и П Главного комплекса гистосовместимости, получены интегральные формулы устойчивости в связи с ассоциацией с восприимчивостью к лимфолейкозу на основе применения метода статусмет-рии.

Научное и практическое значение исследований. В результате проведенных исследований определены возможности использования антигенов гистосовместимости в качестве прогностических маркеров устойчивости к заболеваниям при формировании племенного ядра стад и решении судьбы высокопродуктивных животных — вирусоносителей ВЛКРС. Использование иммуно-генетических параметров в качестве дополнительных мер, в оздоравливаемых от лейкоза популяциях крупного рогатого скота, позволяет существенно ускорить процесс оздоровления хозяйства и снизить экономические потери от этого заболевания.

На защиту выносятся следующие положения;

- результаты сравнительной характеристики полиморфизма Главного комплекса гистосовместимости в стадах крупного рогатого скота айширской и черно-пестрой пород.

- сведения о генетической устойчивости к лимфолейкозу на основе изучения антигенов системы ВоЬА классов I и И.

- на основе метода статусметрии получена интегральная формула оценки устойчивости к лейкозу.

- использование выявленных антигенов ВоЬА в качестве прогностических иммуногенетических маркеров при проведении оздоровительных противолей-козных мероприятий.

Апробация работы. Основные положения полученных результатов исследований доложены на научно-практических конференциях факультета Зоо-технологий и агробизнеса ФГОУ ВПО «Московская Государственная Академия Ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина» в 2003 году и на международной научно-практической конференции в Калининграде, 2002 г.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 4 работы.

Структура н объем работы. Диссертация изложена на 127 страницах, содержит 28 таблиц, 12 рисунков, 8 диаграмм; состоит из введения, обзора литературы, материалов исследований, выводов, обсуждения, сведений о практическом использовании научных результатов, рекомендаций по использованию научных выводов. Список литературы включает 177 источников.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материал и методы исследований

Изучение устойчивости и восприимчивости к гемобластозам проведено в популяциях крупного рогатого скота айрширской породы (п=129), принадлежавшей ГППЗ «Смена» Сергиев Посадского района Московской области и черно-пестрой породы (п=57) — колхоз им. Кирова Балашихинского района Московской области.

Исследования проводились на коровах от 4-х лет и старше, с уровнем продуктивности 4500 кг молока и выше. Материалом для исследования антигенов ВоЬА-системы служили лимфоциты, выделенные из переферической крови животных. Гематологические исследования крови (подсчет общего количества

Схема опыта.

лейкоцитов, выведение лейкоцитарной формулы) проводили по общепринятым методикам.

Все исследования проводились согласно схеме опыта.

2.1.1. Методика выделения суспензии лимфоцитов.

1. З мл крови коров наслаивали на градиент плотности (2,5 мл) фикол-верографииа с плотностью 1,076 — 1,077 и центрифугировали в течении 20 минут при 600 g.

Приготовление градиента плотности: к 1 ампуле 76 %-ного верографина добавляли 24,7 мл дистиллированной воды для получения 33,9%-ного раствора верографина, затем 9 %-ный раствор фикола смешивали с 33,9 %-ым раствором верографина в соотношении 24:10. плотность полученного раствора проверяли с помощью ареометра, в случае необходимости доводили ее до 1,076 — 1,077.

Кровь от коров с повышенным лейкоцитозом, а также от телят моложе 6-ти месяцев предварительно разбавляли забуференным физиологическим раствором в соотношении 1:2.

Забуференный физиологический раствор готовили по стандартной методике (рН = 7,2 - 7,4).

После центрифугирования получали следующие фракции: на дне четкий слой эритроцитов, содержащий также и гранулоциты; над ним матовый слой, состоящий из тромбоцитов и лимфоцитов; далее четкое белое кольцо, содержащее в основном лимфоциты; самый верхний слой — плазма крови.

2. Осторожно снимали плазму, которую использовали для постановки реакции бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови и содержание общего белка и его у-глобулиновой фракции, а кольцо лимфоцитов переносили в чистую центрифужную пробирку с забуференным физиологическим раствором или раствором Хенкса, центрифугируя при 100g в течение 7 минут до максимального освобождения от тромбоцитов. Присутствие тромбоцитов в суспензии лимфоцитов периодически контролировали в камере Горяева под микроскопом (отмывку лимфоцитов проводили три раза в забуференном физиологическом растворе).

В случае наличия эритроцитов в лимфоцитарной суспензии последнюю обрабатывали 0,83 %-ным раствором хлористого аммония в течение 1 минуты при периодическом легком встряхивании, после чего дважды промывали суспензию PBS.

3. После удаления надосадочной жидкости осадок ресуспендировали в PBS, доводя концентрацию лимфоцитов до 4 — 6 х Ю3 кл/мл. такая суспензия лимфоцитов готова для разделения ее на субпопуляции.

2.1.2. Постановка микроцитотоксического теста.

1. Луночки пластиковых микрокамер для иммунологичесских реакций заполняли вазелиновым маслом для предотвращения высыхания сывороток и суспензии клеток. К 1 мкл тестируемой сыворотки, помещенной под вазелиновое масло, добавляли 1 мкл суспензии лимфоцитов и инкубировали в термостате при температуре 26 — 27°С.

2. В каждую луночку добавляли 5 мкл кроличьего комплимента и снова ставили в термостат на 1 час. Усиление цитотоксической реакции при использовании кроличьего комплимента связано с синергическим действием ксено-генных антител.

3. Окрашивание проводили эозином, внося в лунки на 3 -5 минуты по 5 мкл 1 %-ного раствора, приготовленного на дистиллированной воде. По истечении указанного срока вносили 5 мкл 40 %-ного формалина для фиксации микроцитотоксического теста. После этого лунки накрывали покровным стеклом.

Микроцитотоксический тест, подготовленный таким способом, позволяет производить чтение реакции в течение 2 — 4 дней.

4. При чтении реакции учитывали клетки, «убитые» цитотоксическими антителами, окрашенные в розовый цвет и имеющие нечеткие контуры вследствие начавшегося лизиса.

Силу реакции оценивали по количеству мертвых клеток по восьми бальной шкале:

1=0-10% мертвых клеток

2 = 10 - 20 % мертвых клеток 4 = 20 - 40 % мертвых клеток 6 = 40 - 60 % мертвых клеток 8= > 80 % мертвых клеток

За положительную реакцию принимали оценки 6 — 8 баллов. В качестве контроля жизнеспособности лимфоцитов вместо типирующей сыворотки использовали физиологический раствор.

В случае сомнения наличия у обследуемого животного того или иного антигена гистосовместимости, типирование проводили повторно.

2.1.3. Определение полнмеразной цепной реакции (ПЦР). Для постановки полнмеразной цепной реакции использовали олигонук-леотидные праймеры. Количество используемых праймеров представлено в таблице 1.

Таблица 1. Количество праймеров используемое для ПЦР.

Исходная концентрация праймеров (ОЕ/мл) Количество праймеров на 50 мкл амплифнкационной смеси (мкл)

HLO 30 (5'-TCCTCTCTCTGCAGCACATTTCC-3') -3,7 1,5

HLO 31 (5-ATTCGCGCTCACCTCGCCGCT-3') —4,2 1,5

HLO 32 (5-TCGCCGCTGCACAGTGAAA СТСТС-3') -4,4 1,2

Полимеразную цепную реакцию проводили (реактивы "Биоком", г. Москва) с использованием термофильной ДНК-полимеразы из Thermus aquaticus (Taq-полимераза). Буфер для Taq-полимеразы (10х) содержал: 67мМ трис-НС1, рН 8,8; 16,6мМ (NH^SO,»; 0,01 % твин-20. Реакция ставилась в объемах 50 и 25мкл. Инкубационная смесь объемом 50мкл содержала 5мкл 10х буфера для полимеразы, прямой и обратный праймеры (по 150нг каждого), 4 дезоксинук-леозидтрифософата (dNTP) по 0.25мМ каждого (4мкл смеси dNTP), 2-2,5 мМ MgCl, 10-20 нг/мкл геномной ДНК. В пробирку с инкубационной смесью, для предотвращения испарения, наслаивали 30 мкл парафинового масла (Din Oil). Полученную смесь денатурировали 4-5 минут при 94°С, добавляли 1 ед. активности Taq-полимеразы. Амплификацию начинали с денатурации 94° С, 5 мин и заканчивали на стадии синтеза (72°С, 7 мин.). Всего проводили 30-35 циклов.

ПЦР ставили в два раунда, используя праймеры: HL030 -HL031-1-й раунд (10 циклов) и HL030 - HL032 - 2-й раунд (25 циклов), а также в один раунд, используя праймеры HL030 - HL032.

"Hot Start" в ПЦР (Mullis К.В.,1991). Для повышения чувствительности и специфичности амплификации при проведении полимеразной цепной реакции, применяем так называемый "Hot Start" PCR ("горячий старт»). В работе применялся механический способ разделения компонентов реакционной смеси, когда вместо обычно используемого жидкого минерального масла, использовалось специальное парафиновое масло " DinOil" в качестве барьера, первоначально разделяющего реакционную смесь на две неактивные части (в нижней -ДНК, нуклеотиды, и в верхней - буфер, праймеры, Taq-полимераза и вода) до начала ПЦР, а далее играющего роль барьера против испарения смеси. При температуре 75°С -80°С, парафиновый слой плавится и всплывает, а две искусственно разделенные фазы одной реакционной смеси перемешиваются и реакция стартует при 80°С.

2.1.4. Исследование рестрикции продуктов амплификации К раствору ДНК в эппендорфе добавляли воду до объема 15-20 мкл. Затем добавляли 2 мкл соответствующего буфера 10-кратной концентрации, смесь перемешивали и в нее добавляли 1 ед. фермента. Инкубировали смесь при соответствующей температуре работы фермента, в течение необходимого времени. Использованные в работе рестриктазы приведены в таблице 2. Рест-риктазы Rsal, Haelll и Xho И были получены на фирме "Promega"; ДНК плазми-ды pBR322 - (МПО "Бион" г. Москва).

Таблица 2. Характеристики эндонуклеаз, используемых в работе и условия ре-

стрикции.

Рестриктаза Ионная сила буфера Температура инкубации, °С Сайт узнавания

Rsal средняя 37 GGICC

Нае III средняя 37 GT!AC

Xho II средняя 37 (T/C)!GATC(T/C)

2.1.5. Электрофорез продуктов амплификации.

Анализ амплифицированных фрагментов проводили в 6% полиахрила-мидном геле или в 2% геле агарозы (агароза Low фирма "Bio-Rad", США) в стандартных условиях (Маниатис и др., 1984), после амплификации из инкубационной смеси отбирали 5-10 мкл пробы смешивали с 2 мкл маркерной краски,

которой служил бром-феноловый синий (0,05%) в буфере, содержащем 5 х TBE

ш

и 40% сахарозы и наносили на гель. Электрофоретический анализ рестрициро-ванных эндонуклеазами Rsa I, Нае III, Xho II фрагментов ДНК проводили в 9% -ном полиакриламидном геле. В качестве маркеров молекулярных весов использовали рестрикт плазмиды pBR322 no Mspl или по Alul. Маркерной краской служила смесь: бром-феноловый синий (0,01%), 25% фиколла, 10 мМоль ЭДТА и 1% SDS. Гель после проведения электрофореза окрашивали бромистым этидием, просматривали на хемиоскопе "Desaga-UVIS" (ФРГ) в ультрафиолете (длина волны 254 нм) с оранжевым фильтром.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1.1. Распределение антигенов BoLA-A в популяциях айршнрской породы крупного рогатого скота В результате проведенных исследований установлена частота антигенов BoLA-A класса I у коров айрширской породы.

Распределение антигенов BoLA-A было следующим: наибольшее распространение в популяции получили антигены MSUA15 (£=0,504; р=0,29б), MSUA24 (£=0,444; р=0,253), MSUA1 (£=0,419; р=0,238), W15 (£=0,405; р=0,238), MSUA11 (£=0,349; р=0,193) и MSUA12 (£=0,333; р=0,183), в тоже время наименьшее отмечено в равной степени для W14 и W31 (1=0,085; р=0,043).

Изучено непосредственное распределение частот антигенов BoLA-A и контролирующих их генов у здоровых, инфицированных и больных животных. У животных здоровой группы наиболее часто встречаются антигены MSUA15 (f=0,500, р=0,293), MSUA24 (£=0,397, р=0,223) и MSUA18 (f=0,379, р=0,212) и наименее встречающиеся W14 (£=0,086, р=0,044).Наиболыыее распространение у вирусоносителей имеют BoLA-A антигены MSUA15 (f=0,484, р=0,282), W15 (f=0,419, р=0,238), MSUA12 (£=0,387, р=0,217) и MSUA24 (f=0,387, р=0,217) и наименьшее MSUA13 и MSUA14 (£=0,065, р=0,033).В группе больных животных наиболее часто встречаются антигены MSUA1 и MSUA24 (f=0,550, р=0,329), MSUA15 (£=0,525, р=0,311) и W15 (£=0,450, р=0,286) и менее встречающиеся антигены MSUA7 (£=0,025, р=0,013) и MSUA2 (£=0,050, р=0,025).

3.1.2. Характеристика антигенов гистосовместимости в связи с заболеваемостью лейкозом

ВоЬА-А антигены, определяемые на лимфоцитах периферической крови у восприимчивых и устойчивых к лейкозу коров айрширской породы показали, что антигены МБиА21 (ИК=2,842; =5,248; Р<0,05; 5=0,260) и МБХШ (М1=2,320; ^=4,069; Р<0,05; 5=0,310) имели положительную связь с заболеваемостью лейкозом, таблица 3. Установлена достоверная связь с устойчивостью к лейкозам антигена МБиА7 (Ш1=0,073; 458; Р<0,01; 5 ==-0,320), который имел достоверно низкую частоту встречаемости в группе больных лейкозом по

сравнению со здоровыми животными.

Таблица 3. Частота антигенов ВоЬА-А у больных, здоровых и инфицированных коров айширской породы в связи со степенью риска заболевания.

Антигены Частота антигена, (0 Критерий соответствия Степень риска Этиолгиче-ская фракция Атрибутивный риск

BoLA Больные (в=40) Здоровые (п=58) Вирусоно-сители (п=31) (х2) (RR) (EF) (5)

А1 0,550 0345 0^87 4,069* 2320 0,225 0310

А7 0,025 0,259 0,129 9,458** 0,073 -0,154 -0J20

А21 0,400 0,190 0,129 5,248* 2,842 0,211 0,260

В популяции черно-пестрого скота наибольшая ассоциация с заболеваемостью лейкозом была установлена у антигенов MSUA8 и W19 (RR=14,933; =6,942; Р<0,05; 5=0,450), W15 (RR=13,837; = 3,919; Р<0,05; 5=0Д76) и W21 (RR=11,294; =5,025; Р<0,05; 6=0,377), таблица 4. Также выявлена связь антигенов MSUA24 (RR=0,174; •£ =7,869; Р<0,05; 5=-2,126), W8 (RR=0,375; ^ =2,650; Р<0,05; 6=-0,172) и MSUA23 (RR=0,544; ^ =1,625; Р<0,05; 5=-0,231) с устойчивостью к заболеванию лейкозами.

Наибольшее положительное значение относительного риска было определено для антигенов MSUA21 (RR=2,842), MSUA8 (RR=2,336) и MSUA1 (RR=2,320) у животных айрширской породы и MSUA8 (RR=14,933), W19 (RR=14,933), W15 (RR=13,837) и W21 (RR=11,294) у черно-пестрых коров. Наиболее значимая отрицательная величина относительного риска (RR<0,5) у коров айрширской породы установлена для антигена MSUA7 (RR=0,073) и для антигенов MSUA24 (RR=0,174) и W8 (RR=0,375) у животных черно-пестрой породы.

Таблица 4. Сравнительная характеристика антигенов системы ВоЪА-А в популяции крупного рогатого скота черно-пестрой породы по степени риска заболеваемости лейкозом.

АНТИГЕНЫ КЛАССА I Частота антигена, 10 * RR EF 8

Здоровые (п=17) Больные <п=29) Вирусо носители (п=11>

W8 0,235 0,103 0,454 2,650 0,375 -0,057 -0,172

W21 0,059 0,414 0,273 5,025* 11Д94 0,183 0,377

W19 0,059 0,483 0,182 6,942** 14,933 0,232 0,450

WIS 0 0,276 0,182 3,919* 13,837 0,123 0,276

А8 0,059 0,483 0,091 6,942** 14,933 0,232 0,450

А23 0,412 0,276 0,364 1,625 0,544 -0,074 -0,231

А24 0,823 0,448 0,454 7,869 0,174 -0,336 -2,126

Самое высокое значение атрибутивного риска у животных айрширской породы имел антиген MSUA1 (8=0,310), таблица 3. По мере убывания антигены располагались следующим образом: MSUA21 (5 =0,260), MSUA24 (8 =0,250), MSUA8 (8 =0,170) и W8 (8 =0,100), таблица 3. В популяции крупного рогатого скота черно-пестрой породы самое высокое значение атрибутивного риска было выявлено для антигенов W19 и MSUA8 (8=0,450), также высокое значение атрибутивного риска установлено для антигенов W21 (8=0,377) и W15 (8=0,276), таблица 4.

Наиболее слабая связь между заболеванием и "disease''-аллелем, у айр-ширского скота, установлена для антигенов MSUA7 (8 =-0,320), MSUA18 (8 =-0,210), MSUA6 (8 =-0,160), W21 (8 =-0,140), MSUA9 (8 = -0,130), MSUA13 (8 =-0,130) и MSUA23 (8=-0,120), а у черно-пестрого скота, для MSUA24 (8=-2,126), MSUA23 (8=-0,231) и W8 (8=-0,172).

В результате анализа полученных данных установлено, что наиболее благоприятными антигенами с точки зрения устойчивости животных к заболеванию лейкозом крупного рогатого скота являются: для айрширской породы -MSUA 7 (х2=9,458; RR=0,073; Р<0,01; EF=-0,154; 8=-0,320) и для черно-пестрого скота - MSUA24 ( у? =7,869; RR=0,174; Р<0,05; EF=-0,336; 8=-2,126). 3.1.3. Анализ аллелей гена BoLA-DRB3 ассоциированных с устойчивостью н чувствительностью к гемобластоэам крупного рогатого скота. В работе с группами животных больных гемобластозами, вирусоносите-лей и здоровых животных айрширской и черно-пестрой пород крупного рогатого скота было изучено распределение аллелей гена BoLA-DRB3 в связи с устойчивостью и восприимчивостью к гемобластоэам (таблицы 5 и 6).

Установлено, что в выборке айрширского скота распространены аллели BoLA-DRB3.2*7 (0,376), *28 (0,136), *8 (0,112),* 10 (0,093) и *24 (0,054). Среди

которых, наиболее часто встречается аллель ВоЬА-ОШ33.2*7, особенно широко он распространен у вирусоносителей (0,548). Частоты аллелей, которые были описаны как аллели, обуславливающие чувствительность к лейкозу (*8 и "'24), в выборке животных больных лейкозом в 1,4 раза выше (0,163 и 0,088), чем в выборке здоровых животных (0,103 и 0,043), соответственно.

У животных черно-пестрой породы чаще встречаются аллели ВоЬА-БИВ3.2*22 (0,250), *18 (0,152), *24(0,111), *10 и 23 (по 0,063). С наибольшей частотой, распространен аллель ВоЬА-ЭЯВЗ .2*22, особенно широко он представлен у больных животных (0,331). Следует отметить, что аллель ОЯВ3.2*7 у исследуемых животных черно-пестрой породы не встречается.

У больных гемобластозами, вирусоносителей и здоровых животных айр-ширской породы проанализированы генотипы этих животных по локусу ВоЬА-Б1ШЗ. В результате установлено, что наиболее часто в группе вирусоносителей встречается генотип ОКВ3.2*7-ОКВ3.2»28 (7/28) (45,3%), в то время как у больных и здоровых он присутствует у отдельных коров, его доля составляет 7,5% и 1,7%, соответственно. Генотип В1Ш3.2*7-БКВ3.2*7 (7/7) широко представлен у вирусоносителей (25,8%) и в равной мере как у больных, так и у здоровых животных (около 15%).

Таблица 5. Распределение аллелей ВоЬА-БКВЗ в группах больных, вирусоносителей и здоровых животных айрширской породы.

Аллели ВоЬА-БИВЗ* ДНК-паттерны Группы животных Общая популяция (N=129)

больные (N=40) здоровые (N=58) вирусоио-сители (N=31)

Яяа! НаеШ п Р п Р в Р п Р

Аллели, ответственные за чувствительность к лейкозу 1 Ч)**

8 { а 13 0,163 12 0,103 4 0,065 29 0,112

24 п Ь 7 0,088 5 0,043 2 0,032 14 0,054

Аллели, ответственные за устойчивость к лейкозу (Р)

28 о Ь | 7 | 0,088 13 0,112 15 0,243 35 0,136

Нейтральные аллели (Н)

7 е с 22 0,275 41 0,354 34 0,548 97 0,376

10 а 10 0,125 12 0,103 2 0,032 24 0,093

У больных животных наиболее распространен генотип 01Ш3.2*8 -01Ш3.2*10 (8/10) с частотой - 17,5%, а генотип DRB3.2n-DRB3.2M0 (7/10) с частотой 12,1% встречается только у здоровых животных. Генотип БШ33.2*7-ОИВ3.2*26 (7/26) присутствует у больных коров с частотой 12,5%.

Таблица 6. Распределение аллелей ВоЬА-ОЮЗЗ в группах больных, виру-

соносителей и здоровых животных черно-пестрой породы.

Аллели ВоЬА-БКВЗ* ДНК-паттерны Группы ЖИВОТНЫХ Общая популяция (N=57)

больные (N=29) здоровые (N=17) вирусоно-сители (N=11)

Ива! НаеШ п Р п Р п Р п Р

Аллели, ответственные за чувствительность к лейкозу 1 Ч)**

22 ш т 16 0,331 6 0,196 3 0,147 25 0,250

24 п й 8 0,149 3 0,092 1 0,047 12 0,111

Аллели, ответственные за устойчивость к лейкозу (Р)

23 о Ь - 6 0,196 1 0,047 7 0,063

Нейтральные аллели (Н)

10 Г а 3 0,053 - - 4 0,202 7 0,063

18 1 { 8 0,149 2 0,061 6 0,325 16 0,152

У коров черно-пестрой породы, так же был проведен анализ генотипов ВоЬА-ОГШЗ. Было установлено, что у вирусоносителей чаще встречаются генотипы 011В3.2*18-01Ш3.2»22 (18/22) (18,2%) и ВКВ3.2*18-Б1Ш3.2*25 (18/25) (18,2%). У больных коров наиболее широко распространен генотип ОЯВ3.2*22-Б11В3.2*16 (22/16) (13,8%).

Таблица 7. Частоты генотипов, определяющих различную чувствительность к лейкозу в группах больных, вирусоносителей и здоровых животных айршир-

ской породы.

Гентип Группы животных

больные здоровые вирусоносители

% % %

Ч/Ч 2.5 - 3.2

Ч/Р 15.0 8.8 6.4

ч/н 30.0 32.3 6.5

Р/Н 7.5 10.6 48.5

р/р 2.5 - -

н/н 42.5 48.3 35.4

Сумма 100 100 100

Анализ генотипов, определяющих различную чувствительность к гемо-

бластозам у животных больных гемобластозами, вирусоносителей и здоровых животных айрширской породы, показал, что у больных и здоровых коров чаще встречаются генотипы с нейтральными аллелями (42,5% и 48,3%, соответст-

венно. У вирусоносителей наиболее распространен генотип с устойчивыми и нейтральными аллелями (48,5%), таблица 7.

Таблица 8. Частоты генотипов, определяющих различную чувствительность к лейкозу в группах больных, вирусоносителей и здоровых животных черно-пестрой породы.

Гентип Группы животных

больные здоровые вирусоносители

% % %

Ч/Ч 13,8 11,8 -

Ч/Р ■ - 11,8 9,1

ч/н 69 17,5 27,3

Р/Н - 47,1 9,1

Р/Р - - -

н/н 17,2 11,8 54,5

Сумма 100 100 100

В стаде коров черно-пестрой породы отмечено, что у животных больных лейкозом наиболее распространены генотипы с чувствительными и нейтральными аллелями (69%), у здоровых животных чаще встречаются генотипы с устойчивыми и нейтральными аллелями(47,1%), а у вирусоносителей наиболее широкое распространение имеют генотипы, несущие только нейтральные аллели (54,5%), таблица 8.

У коров айрширской породы установили генотипы гена ВоЬА-ОШЗЗ, имеющие в своем составе аллели гена ВоЬА-БКВЗ, ответственные за устойчивость и чувствительность к лейкозу. Выявлено, что у больных животных чаще встречается генотип ВКВ3.2*8-ОЛВ3.2*Ю (*8/*10-ч/н) (17.5%), *7/*7 (н/н) (15%), *7/*26 (12.5%) и *8/*28 (ч/у) (7.3%), а генотипы *3/*3 (н/н) и *23/*24 (ч/у) присутствуют в равной мере (5%). У здоровых животных наблюдается более равномерное распределение генотипов, среди которых наиболее распространены генотипы *7/*7 (н/н) (15.5%) и *7/*10 (12.3%). В данной группе встречаются единичные генотипы, которых нет в других группах: Б1Ш3.2*2-01Ш3.2*2 0»2/*2), *2/*7, *2/*18, *2/*21, *12/*13, *3/*7, *2/*22, *3/*8, *7/*8, *8/*18, *10/*28, *26/*28, *3/*28 и *8/*22. В группе инфицированных животных распространены генотипы *7/*28 (н/у) (43.5%) и *7/*7(н/н) (25.8%). Генотип *8/*10 присущ больной гемобластозами группе животных, что подтверждает влияние ВоЬА-В1Ш3.2*8 аллеля на восприимчивость к гемобластозам. Распространение в группе здоровых животных генотипов *7/*10 и *7/*7 указывает,

16

что в популяции айрширского скота аллель BoLA-DRB3.2*7 выступает в роли кандидата, ответственного за устойчивость к гемобластозам крупного рогатого скота. Подтверждение этому может быть получено после увеличения объема исследуемой выборки.

4. ВЫВОДЫ

1. Изучение спектра антигенов BoLA-A в популяции айрширского скота позволило выявить антигены MSUA21 (f=0,400) и MSUA1 (f=0,550) (Р<0,05) достоверно чаще встречающиеся в группе больных животных по сравнению со здоровыми.

2. В группе черно-пестрых коров больных лейкозом антигены W21 (f=0,414) и W15 (f=0,276) (Р<0,05), а также W19 и MSUA8 (f4),483) (Р<0,01) имели более высокий показатель частоты встречаемости, чем в группе здоровых животных.

3. Анализ частот аллелей гена BoLA-DRB3, определяющих устойчивость к лейкозу, показал, что в исследуемой выборке айрширского скота отсутствует аллель *11, ответственный за резистентность к лейкозу. Аллель*28, у инфицированных животных встречается с частотой f=0,228, в то время как у больных лейкозом животных частота встречаемости этого антигена равна f=0,097

Р<0,05), а величина относительного риска имеет низкое значение (RR=0,875). Это свидетельствует о том, что аллель *28 выполняет «защитную» функцию по отношению к лейкозу крупного рогатого скота.

4. У аллелей BoLA-DRB3.2*8 и *24, ответсвенных за чувствительность к лейкозу, отмечено высокое значение относительного риска (RR=1,188 и RR=2,736, соответственно), что подтверждает наибольшую вероятность развития лейкоза у животных, содержащих данные аллели.

5. В популяции айрширского скота выявлено снижение уровня гетерози-готности (0,770) по сравнению с черно-пестрым скотом (0,877). В группах больных животных обеих пород наблюдается снижение уровня наблюдаемой гетерозиготности (0,720 и 0,828, соответственно) по отношению к ожидаемому (0,854 и 0,836). Гетерозиготность может рассматриваться, как неспецифический фактор, влияющий на устойчивость животных к лейкозам.

5. СВЕДЕНИЯ О ПРАКТИЧЕСКОМ ИСПОЛЬЗОВАНИИ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

Полученные результаты используются при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий для студентов ФГОУ ВПО МГАВМиБ им. К.И. Скрябина.

б. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

1. Хозяйству ПТПЗ «Смена» Сергеев Посадского района Московской области, которому принадлежит исследованная популяция айширской породы, представлена характеристика больных лейкозом, инфицированных и здоровых животных по антигенам BoLA-A и аллелям гена BoLA-DRB3 в связи с устойчивостью и восприимчивостью к гемобластозам. Хозяйству рекомендуется ввести в селекционную работу быка-производителя, генотип которого содержал бы устойчивый аллель BoLA-DRB3.2* 11.

2. Выявленные фенотипы устойчивых к лейкозу животных по классу I и II BoLA-системы рекомендуются для использования в селекционных программах.

Список опубликованных по теме диссертации работ

1. Изместьев C.B., Связь антигенов класса I Главного комплекса гистосов-местимости с устойчивостью и восприимчивостью к лейкозу у крупного рогатого скота айрширской породы. /Изместьев C.B. //Сб. науч. Тр. «Современные проблемы зоотехнии и агробизнеса» - Москва: 2003, стр. 13-16.

2. Изместьев C.B., Анализ антигенного спектра класса I Главного комплекса гистосовместимости и распространение генотипов BoLA DRB 3.2 в популяции айрширского скота в связи с устойчивостью клейкозу /Изместьев C.B. //Сб. науч. Тр. «Современные проблемы зоотехнии и агробизнеса» - Москва: 2003, стр. 16-18.

3. Старостин Д.М. Частота анеуплойдных клеток у коров различных генотипов в связи с их продуктивностью и предрасположенностью к некоторым заболеваниям /Старостин Д.М., Изместьев C.B. //Задепонировано в ВИНИТИ 2001 год.

4. Павленко С.П. Распространение генотипов BoLA DRB 3.2 в популяции айрширского скота в связи с устойчивостью к лейкозу. /Павленко С.П., Изместьев C.B. //Материалы международной научно-практической конференции 1-2 ноября 2002 год. Калинишрад.

Отпечатано в ООО «Компания Спутник+» ПД № 1-00007 от 25.09.2000 г. Подписано в печать 20.09.06 Тираж 100 экз. Усл. п.л. 1,13 Печать авторефератов (495) 730-47-74,778-45-60

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Изместьев, Сергей Викторович

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Главный комплекс гистосовместимости (МНС)

Major Histocompatibility complex).

2.1.1. Функциональная роль главного комплекса гистосовместимости.

2.1.2. Антигены Главного комплекса гистосовместимости и болезни.

2.1.3. Главный комплекс гистосовместимости крупного рогатого скота.

2.1.4. Связь антигенов Главного комплекса гистосовместимости сельскохозяйственных животных и восприимчивости к заболеваниям.

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИСЛЕДОВАНИЯ.

3.1.Методика выделения суспензии лимфоцитов.

3.2. Постановка микроцнтотоксического теста.

3.3. Определение полимеразной цепной реакции (ПЦР).

3.4. Исследование рестрикции продуктов амплификации.

3.5. Проведение ПЦР с аллельспецифическими праймерами VD-19 и ER-17.

3.6. Электрофорез продуктов амплификации.

3.7. Методы генетико-статистического анализа.

4. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

4.1. Распределение антигенов BoLA-A в популяциях айрширской породы крупного рогатого скота.

4.2. Характеристика антигенов гистосовместимости в связи с заболеваемостью лейкозом.

4.3. Оценка коров на устойчивость и восприимчивость к гемобла-стозам крупного рогатого скота методом статусметрии.

4.4. ПЦР-ПДРФ типирование больных гемобластозами, вирусоносителей и здоровых животных по локусу BoLA -DRB3.

4.4.1. Амплификация экзона 2 гена BoLA-DRB3.

4.4.2. Анализ рестрикционного полиморфизма экзона 2 гена BoLA-DRB3.

4.4.3. Анализ аллелей гена BoLA-DRB3 ассоциированных с устойчивостью и чувствительностью к гемобластозам крупного рогатого скота.

4.4.4. Анализ аллелей гена BoLA-DRB3 ассоциированных с устойчивостью и чувствительностью к лейкозу крупного рогатого скота у коров в возрасте 5 лет и старше.

4.4.5. Определение аллельных вариантов гена BoLA-DRB3, ассоциирующихся с устойчивостью или чувствительностью к лейкозу, с помощью аллельспецифичной полимеразной цепной реакции.

4.5. Наблюдаемая и ожидаемая гетерозиготность в популяции айр-ширского скота.

4.6. Продуктивность коров айрширской породы и ее связь с устойчивостью и восприимчивостью к гемобластозам крупного рогатого скота.

5. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ.

6. ВЫВОДЫ.

7. СВЕДЕНИЯ О ПРАКТИЧЕСКОМ ИСПОЛЬЗОВАНИИ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ.

8. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ПРИМЕНЕНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Влияние антигенов Главного комплекса гистосовместимости на заболеваемость лейкозом у коров айрширской и черно-пестрой пород"

Актуальность проблемы. Лейкозы человека, животных и птиц относительно широко распространены и встречаются почти во всех странах мира. Среди инфекционных болезней крупного рогатого скота в России (по статистическим данным Министерства сельского хозяйства РФ) гемобластозы занимают первое место. Отсутствие ранней диагностики, лечения и эффективных мер профилактики выдвигает проблему лейкозов в число важнейших биологических и социальных задач.

Многочисленные исследования, проводимые как в России, так и за рубежом (Miller Y. et al., 1969; Calafat Y. et al., 1974; N.Sagata et al., 1985; Straub, 1984; J.L.Heeney, V.E.O.Valli, 1990; J.Coulston et al.,1991; Надточей Г.В., Валихов А.Ф., 1972; Валихов А.Ф., 1978, 1991; Шишков В.П. и соавт., 1984, 1989; В.В.Разумовская и соавт., 1997; Ломакин А.И. и соавт., 1998; В.И.Колесников и соавт., 1999; Р.С.Москалик и соавт., 1999; С.В.Новицкий и соавт., 1999; ГулюкинМ.И. и соавт. 1998, 1999, 2000), направленные на изучение эпизоотологии, этиологии и биологических особенностей лейкозного процесса, позволили установить вирусную природу этого заболевания и разработать доступные и чувствительные методы диагностики. Установлено, что лейкоз крупного рогатого скота - хроническое инфекционное заболевание опухолевой природы, вызываемое РНК-содержащим вирусом семейства Retroviridae - вирусом лейкоза крупного рогатого скота (ВЛКРС), поражающим лимфоидную ткань, то есть являющимся лимфотропным.

Согласно вирусоиммуногенетической концепции этиопатогенеза гемо-бластозов, выдвинутой В.П.Шишковым, клиническому и патоморфологическо-му проявлению болезни, кроме вирусного инфицирования, способствуют генетическая предрасположенность и иммунологическая недостаточность организма.

Лейкозы наносят значительный экономический ущерб вследствие гибели и вынужденной выбраковки животных, утилизации органов и туш при убое; расходов, связанных с ограничительными мероприятиями.

Широкая распространенность инфекции наносит урон генофонду племенного молочного животноводства, так как гематологические признаки заболевания лейкозом более часто регистрируется у высокопродуктивных животных ценных молочных пород (Эрнст JI.K., Шишков В.П., 1983).

В последнее время стала очевидна необходимость разработать методические подходы, и получить достоверные критерии, позволяющие судить о генетической предрасположенности животного к заболеванию и об изменении его иммунологического состояния при развитии патологического процесса. Существует большое количество работ, посвященных этому вопросу, выполненных как отечественными (Никитенко И.Н. и др., 1983, Сулимова Г.Е. и соавт., 1995; Эрнст JI.K. и соавт., 1998), так и зарубежными учеными (Вегпосо, 1991; Stear M.J. et al.,1982, 1988; Lewin H.A. et al., 1988; Xu A., 1992). Однако анализ данных литературы показывает весьма ограниченные возможности использования изучаемых авторами полиморфных систем (эритроцитарные антигены, белки сыворотки крови и т.д.) при прогнозировании устойчивости сельскохозяйственных животных к болезням. В каждом стаде, в каждом случае частота встречаемости тех или иных аллелей у больных и здоровых животных различна.

К сожалению, этим и ограничивается материал, по которому сходятся мнения большинства исследователей. Причиной может быть недостаточное количество данных, или ошибки в методическом подходе, заключающиеся в проведении исследования по частоте встречаемости в стаде отдельных факторов или аллелей, но не по оценке комплексного генотипа. Кроме того, ни одна изученная ранее полиморфная система групп крови или белков не ответственна непосредственно за резистентность организма к тому или иному заболеванию.

Совершенно иначе следует рассматривать гены Главного комплекса гис-тосовместимости (МНС - Major histicompatibility complex), который присутствует у всех позвоночных, в том числе и крупного рогатого скота, и обеспечивает иммунный ответ на чужеродные антигены, что обусловливает наличие ассоциаций с устойчивостью и восприимчивостью к различным болезням: к лейкозу (Эрнст Л.К. с соавт, 1997; Stear MJ. et al., 1988; Levin H.A., 1989), паразитарным заболеваниям (Stear et al., 1988; Williams et al., 1991), маститам (Ложкин Э.Ф. с соавт., 1996; Spooner et al., 1987, 1987; Meidell et al., 1994). Однако и в этом случае у разных пород и популяций животных в ассоциации с одним и тем же заболеванием могут быть вовлечены разные антигены (Слеп-ченко А.Р., 1994; Stear et al., 1988; Levin et al., 1988), что, вероятно, связано с полигенным типом наследования устойчивости к болезни. В некоторых случаях ассоциативные связи обнаруживаются не только к патологическому процессу, но и к особенностям патогенеза.

Все сказанное выше говорит о несомненной актуальности иммуногене-тической проблемы лейкоза.

Цели и задачи исследований Целью работы было - изучить генетическое разнообразие по антигенам классов I и II системы BoLA (Bovin leicocite antigens) айрширской и черно-пестрой пород крупного рогатого скота, и дать сравнительную характеристику; выявить ассоциации полиморфных вариантов фенотипов антигенов классов I и II Главного комплекса гистосовместимости с устойчивостью к лимфолейкозу; на основе полученных результатов дать оценку возможности использования антигенов системы BoLA в качестве маркеров устойчивости крупного рогатого скота к лейкозу.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи: -изучить полиморфизм антигенов системы BoLA в популяциях крупного рогатого скота айширской и черно-пестрой пород;

-провести сравнительный анализ исследованных популяций по частоте встречаемости различных антигенов Главного комплекса гистосовместимости (классов I и И);

-на основе популяционных исследований определить риск заболевания лейкозом коров изучаемых пород;

-определить возможные ассоциации антигенов системы BoLA с восприимчивостью к лимфолейкозу;

-разработать и обосновать применение антигенов гистосовместимости в качестве маркеров устойчивости к заболеваниям.

Научная новизна проводимых исследований

Впервые в Г1П13 «Смена» и колхозе им. Кирова изучен полиморфизм антигенов системы BoLA у коров, соответственно айрширской и черно-пестрой пород . Изучены внутри- и межпородные различия, дана сравнительная характеристика пород, по частоте встречаемости антигенов классов I и II Главного комплекса гистосовместимости, получены интегральные формулы устойчивости в связи с ассоциацией с восприимчивостью к лимфолейкозу на основе применения метода статусметрии.

Научное и практическое значение исследований

В результате проведенных исследований определены возможности использования антигенов гистосовместимости в качестве прогностических маркеров устойчивости к заболеваниям при формировании племенного ядра стад и решении судьбы высокопродуктивных животных - вирусоносителей BJIKPC. Использование иммуногенетических параметров в качестве дополнительных мер, в оздоравливаемых от лейкоза популяциях крупного рогатого скота, позволяет существенно ускорить процесс оздоровления хозяйства и снизить экономические потери от этого заболевания.

На защиту выносятся следующие положения:

- результаты сравнительной характеристики полиморфизма Главного комплекса гистосовместимости в стадах крупного рогатого скота айширской и черно-пестрой пород.

- сведения о генетической устойчивости к лимфолейкозу на основе изучения антигенов системы BoLA классов I и II.

- на основе метода статусметрии получена интегральная формула оценки устойчивости к лейкозу.

- использование выявленных антигенов BoLA в качестве прогностических иммуногенетических маркеров при проведении оздоровительных противолей-козных мероприятий.

Апробация работы

Основные положения полученных результатов исследований доложены на научно-практических конференциях факультета Зоотехнологий и агробизнеса ФГОУ ВПО «Московская Государственная Академия Ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина» в 2003 году и на международной научно-практической конференции в Калининграде, 2002 г.

Публикации По материалам диссертации опубликовано 4 работы.

Структура и объем работы Диссертация изложена на 127 страницах, содержит 28 таблиц, 12 рисунков, 8 диаграмм; состоит из введения, обзора литературы, материалов исследований, выводов, обсуждения, сведений о практическом использовании научных результатов, рекомендаций по использованию научных выводов. Список литературы включает 177 источников.

Заключение Диссертация по теме "Разведение, селекция, генетика и воспроизводство сельскохозяйственных животных", Изместьев, Сергей Викторович

6. выводы

1. Изучение спектра антигенов BoLA-A в популяции айрширского скота позволило выявить антигены MSUA21 (f=0,400) и MSUA1 (f=0,550) (P<0,Q5) достоверно чаще встречающиеся в группе больных животных по сравнению со здоровыми.

2. В группе черно-пестрых коров больных лейкозом антигены W21 (£=0,414) и W15 (f=0,276) (Р<0,05), а также W19 и MSUA8 (f=0,483) (Р<0,01) имели более высокий показатель частоты встречаемости, чем в группе здоровых животных.

3. Анализ частот аллелей гена BoLA-DRB3, определяющих устойчивость к лейкозу, показал, что в исследуемой выборке айрширского скота отсутствует аллель *11, ответственный за резистентность к лейкозу. Аллель*28, у инфицированных животных встречается с частотой f=0,228, в то время как у больных лейкозом животных частота встречаемости этого антигена равна f=0,097 (% =5,802; Р<0,05), а величина относительного риска имеет низкое значение (RR=0,875). Это свидетельствует о том, что аллель *28 выполняет «защитную» функцию по отношению к лейкозу крупного рогатого скота.

4. У аллелей BoLA-DRB3.2*8 и *24, ответсвенных за чувствительность к лейкозу, отмечено высокое значение относительного риска (RR=1,188 и RR=2,736, соответственно), что подтверждает наибольшую вероятность развития лейкоза у животных, содержащих данные аллели.

5. В популяции айрширского скота выявлено снижение уровня гетерозигот (0,770) по сравнению с черно-пестрым скотом (0,877). В группах больных жив< обеих пород наблюдается снижение уровня наблюдаемой гетерозиготности (О, 0,828, соответственно) по отношению к ожидаемому (0,854 и 0,836). Гетерозипл может рассматриваться, как неспецифический фактор, влияющий на устойчивое! вотных к лейкозам.

7. СВЕДЕНИЯ О ПРАКТИЧЕСКОМ ИСПОЛЬЗОВАНИИ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

Полученные результаты используются при чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий для студентов ФГОУ ВПО МГАВМиБ им. К.И. Скрябина.

8. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ПРИМЕНЕНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

1. Хозяйству ГППЗ «Смена» Сергиев Посадского района Московской области, которому принадлежит исследованная популяция айширской породы, представлена характеристика больных лейкозом, инфицированных и здоровых животных по антигенам BoLA-A и аллелям гена BoLA-DRB3 в связи с устойчивостью и восприимчивостью к гемобластозам. Хозяйству рекомендуется ввести в селекционную работу быка-производителя, генотип которого содержал бы устойчивый аллель BoLA-DRB3.2* 11.

2. Выявленные фенотипы устойчивых к лейкозу животных по классу I и II BoLA-системы рекомендуются для использования в селекционных программах.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Изместьев, Сергей Викторович, Москва

1. Архангельский И.И. Естественная резистентность животных и методы ее определения./ И.И. Архангельский- Ветеринария, 1976, N.8, С. 107 — 108.

2. Бакай А.В. Генетика. /А.В.Бакай, И.И. Кочиш, Г.Г. Скрипниченко М.: КолосС, 2006. - 448 е.: ил. - (Учебники и учеб. пособия для студентов высш. Учеб. заведений).

3. Битюков З.А. Зависимость между показателями крови и естественной резистентностью у крупного рогатого скота./ З.А. Битюков- Тр. Целиногр. СХИ, 1970, Т. 8 вып. 10 С. 73 94.

4. Бороздин Э.К. Роль генетического фактора в эпизоотическом процессе/ Э.К. Бороздин -В кн.: Генетическая устойчивость сельскохозяйственных животных к заболеваниям М.: 1983, С. 8 9.

5. Бочков Н.П. Медицинская генетика. /Бочков Н.П., Захаров А.Ф., Иванов В.И. (Руководство для врачей) //АМН СССР. М. Медицина, 1984, 368.

6. Браунли К.А. Статистическая теория и методология в науке и технике./ К.А. Браунли-М.: Наука, 1977.409 С.

7. Брем Г. Экспериментальная генетика в животноводстве. /Брем Г., Кройс-лих X., Штранцингер Г. перевод и специальная редакция Н. Зиновьева. Москва. 1995,326 с.

8. Вардосандзе Д. Г. Белки и основные показатели белкового обмена крови у буйволов, коров, лошадей., овец и свиней в норме и при некоторых заболеваниях: автореф./ В ардосандзе Д. Г. дис. докт. с.-х. наук, Казань, 1963. 32 С.

9. Волгин А.Ю. Изменение выявляемое™ HLA-антигенов на субпопуляциях лимфоцитов под влиянием митогенов и кортикостероидов./ Волгин А.Ю., Павницкий Л.Ф. //Бюл. экспер. биол. и мед. 1982. №.1. С. 45 47.

10. Ю.Волгин В.И. Определение общего белка в сыворотке крови //В.И. Волгин, Л.С. Жебровский. В кн.; Изучение состава крови, молока и кормов (Методические указания ВНИИРГЖ) Л.; 1974, С. 4 5.

11. И.Гаврилов O.K. Состояние и перспективы развития лейкозологии./ Гаври-лов O.K., Шишков В.П. //Вестник с.-х. науки. 1983. N.2. С. 69 76.

12. Гаврилова B.C. Влияние лизоцима и тетрациклина на изменения чувствительности пастарелл к тетрациклину./ Гаврилова B.C. Сб. науч. тр. //ВНИИТИП, 1976, Т. 42, С. 131-134.

13. Гевертовский А.П. Определение белковых фракций сыворотки крови у крупного рогатого скота ускоренным методом./Гевертовский А.П., Син-кевич В. А., Стрельцова В кн.: Зооветеринарная наука - производству. Минск: Урожай, 1968, С. 228-230.

14. Н.Гизатулин Х.Г. Проблемы сохранения общей резистентности на этой основе поствакционального иммунитета против ящура и других инфекций./ Гизатулин Х.Г. Уч. зап, //Казанск. вет. инст., 1972, Т. 113, С, 3 -13.

15. Грант Х.Я. Сравнительная оценка некоторых методов количественного определения лизоцима в сыворотке крови./Грант Х.Я., Яворский Л.И., Глумберг И.Я. Лабораторное дело, 1973, С. 300 - 304.

16. Емельяненко П.А. Методические указания по тестированию естественной резистентности телят /П.А. Емельяненко М.; 1980, 64 С.

17. Карликов Д.В. Заболеваемость лейкозами крупного рогатого скота при скрещивании, чистопородном и родственном разведении./Карликов Д.В., Клабуков П.Г., Якушенков A.M. Бюлл. науч. раб. /ВНИИЖИВ, 1978, вып. 54, С. 56 - 58.

18. Коваленко Я.Р. Действие факторов стресса на иммунобиологические процессы при вакцинации против рожи и чумы свиней./ Коваленко Я.Р. -В кн.: Профилактика болезней с.-х. животных в промышленном животноводстве. М., 1975, С. 26-37.

19. Кондрахин И.П. Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии. /Кондрахин И.П., Курилов Н.В., Малахов А.Г. и др. ВО «Агропромиз-дат», Ярославль. 1984,287 с.

20. Матусевич В.Ф. Значение естественной резистентности в животноводстве./ Матусевич В.Ф. Целиноград, 1970, 30 С.

21. Мочаловский А.Н. Повышение естественной устойчивости животных./ Мочаловский А.Н. Агробиология, 1961, №. 4, С. 561 - 565.

22. Никольский В.В. Природа естественной резистентности животных к заболеваниям./ Никольский В.В. Сельскохозяйственная -биология, 1966, T.1,N.5, С. 753 -759.

23. Никольский В.В. Возрастные изменения иммунологической реактивности животного организма./ Никольский В.В. В кн.: Проблемы иммунитета сельскохозяйственных животных. М., 1966, С. 404 - 510.

24. Никоноров П.Н. Влияние уровня белкового обмена на естественную резистентность коров и телок на промышленных комплексах./ Никоноров

25. П.Н. Науч.-техн. бюлл. /ИЭВ Сибири и Дальнего Востока, 1978, вып. 10, С. 13-17.

26. Никоноров П.Н. Повышение резистентности стада в промышленном скотоводстве./ Никоноров П.Н. Науч.-техн. бюлл. /ИЭВ Сибири и Дальнего Востока, 1980, вып. 17, С. 23-25

27. Никоноров П.Н. Теоретические основы профилактики болезней животных в условиях промышленных технологий./ Никоноров П.Н. Науч.-техн. бюлл. /ВАСХНИЛ, 1982, вып. 12, С. 3 - 7.

28. Никоноров П.Н. Естественная резистентность черно-пестрого скота и возможности ее прогнозирования./ Никоноров П.Н. В кн.: Генетическая устойчивость сельскохозяйственных животных к заболеваниям. М.; 1983, С. 17-18.

29. Павницкий Л.А. Статистическая оценка ассоциации HLA-антигенов с заболеваниями./ Павницкий Л.А.//Вест. АМН СССР. 1988. N.7. С. 48 51.

30. Петухов П.Л. Широкая норма реакции устойчивости животных к заболеваниям./ Петухов П.Л. В кн.: Генетическая устойчивость сельскохозяйственных животных к заболеваниям. М.: 1983, С. 9 - 10.

31. Пигаревский В.Е. Зернистые лейкоциты и их свойства./ Пигаревский В.Е. М.: Медицина, 1978,127 С.

32. Пляшенко С.И. Влияние факторов внешней среды на резистентность животных в условиях современной технологии. /С.И. Пляшенко, В.Т. Сидоров, В.И. Сопего и др. Белор. НИИНТИ, Сер. Животноводство и ветеринария. Минск, 1980,40 С.

33. Плященко С.И. Естественная резистентность организма живот-ных./Плященко С.И., Сидоров В.Т.-Л., Колос, 1979,184 С.

34. Сидоров В.Т. Возрастная особенность естественной резистентности телят голландской породы./ Сидоров В.Т. В кн.; Матер. 8 Всес. науч.- метод, конф. по зоогигиене и основам ветеринарии. М., 1971, Ч. 2, С. 87-88.

35. Симонян Г.А. Ветеринарная гематология. /Симонян Г.А., Хисамтдинов Ф.Ф. М.: Колос, 1995-256 с.

36. Слепченко А.Р. Получение иммунных сывороток против лимфоцитарных антигенов крупного рогатого скота./Слепченко А.Р., Иткин Б.З. //Сообщение I/ Труды MB А. 1978, Т. 99.

37. Слепченко А.Р. Антигены Гистосовместимости крупного рогатого скота и их связь с лейкозами //Лейкозы крупного рогатого скота./Слепченко

38. A.Р., Орешника С.П., Виль Т.М. Сб. науч. тр. // М.: MB А, 1985. С. 60 -63.

39. Смирнова О.В. Определение бактерицидной активности сыворотки крови методом нефелометрии./Смирнова О.В., Кузьмина Т.А. Микробиология, эпидемиология и иммунология, 1966, N. 4, С. 8 - 12.

40. Стародубцов В.М. Факторы, влияющие на устойчивость коров черно-пестрой породы к заболеванию маститами./Стародубцов В.М., Захаров

41. B.А. Животноводство, 1983, N.4, С. 43 - 45.

42. Тихонов В.Н. Иммуногенетика и биохимический полиморфизм домашних и диких свиней. /Тихонов В.Н. Новосибирск «Наука» Сибирское отделение, 1991-304 с.

43. Хатт Ф.Б. Наследственная устойчивость домашних животных к заболеваниям./ Хатт Ф.Б. М.: Сельхозиздат, 1963,239 С.

44. Хатт Ф.Б. Генетика животных М.: 1969,445 С.

45. Шабалин В.Н. Клиническая иммуногематология. /Шабалин В.Н., Серова Л.Д. Л.: Медицина, 1988 312 с.

46. Шебалин В.П. Клиническая иммуногематология./Шебалин В.П., Серова Л.Д. Л.: Медицина, 1988.312 С.

47. Эрнст JI. К. и др. Современные проблемы селекции животных на резистентность к болезням. Сельскохозяйственная биология, 1979, Т. 14, №.3,С. 345-348.

48. Эрнст Л.К. Новые аспекты селекции крупного рогатого скота на устойчивость к лейкозу ./Эрнст Л.К., Шишков В.П. //Сельскохозяйственная биология. 1984. №.2 С. 96-104.

49. Эрнст Л.К. Изучение генетической устойчивости к лейкозу животных бурой латвийской породы при разведении их по линиям./., Клабуков П.Г., Карликов Л.В и др. Бюлл. науч. раб. /ВНИИЖИВ, 1976, вып. 48, С. 3 -7.

50. Эрнст Л.К. проблемы селекции и биотехнологии сельскохозяйственных животных. /Эрнст Л.К. Москва. 1995,359 с.

51. Эрнст Л.К. Генетические маркеры в селекции животных. /Эрнст Л.К. М.: Наука, 1980,315 с.

52. Anonymue В. Proceedings of the second international bovine lymphocyte an-tigen./Anonymue B. /BoLA/workshop //Animal Blood Groups Biochem. Genet, 1982. N13. P.33-53.

53. A Genetic study of BoLA antigen and their frequency in several British breeds. /Oliver R.A., Morgan A.L.G., Miller P., Spooner R.L. //Thes XVII Conf. Anim. Blood Groups and Bioch. Polymorphisms. Wegeningen. 1980. P. 4548.

54. A genetic study of bovine lymphocyte antigens (BoLA) -and their frequency in several breeds. /Oliver R.A., MoCoubrey C.M., Miller P., Morgan A.L.G., Spooner R.L. ^mmunogenetics 1981. N.13. P.127-132.

55. Adams Т.Е. The potential of the I region of the Bovine Major Histocompatibility Complex. /Adams Т.Е., Brandon N.R., Morris В //Anim. Blood Grps. Biochem. Genet. 1979. N.3. P.155-163.

56. Amorena B. Serologrically defired locus in cattle./Amorena В., Stone W.H. //Science. 1978. N.201. P.159-160.

57. Amorena В. Bovine Lymphocyte Antigens /Во LA/: Aserologie, genetic and histocompatibility antigen./Amorena В., Stone W.H. //Tisaue Antigens. 1980. Vol. 16. N,3. P.212-225.

58. Andersen E. Association of BoLA antigens with virus diareea in Dutch milk cattle. /Andersen E., Dam L., Christensen I.//European Workshop on Bovine Histocompatibility (Jouy-en Josas /France/, 21-22 Juin 1982) / Ed INRA Publ., 1988 P. 12-20.

59. Association between BoLA and subclinical bovine leukemia virus infection in a herd of Holstein-Friesian cows. /Lewin H.A., Wu M.-C., Stewart J.A., and Nolan T.J. //Immunogenetics. 1988. N.27., P.338-344.

60. Association of BoLA antigens with production traits in cows. /Batra T.R., Stear M.J., Lee A.J., Gavora J.S. //Thes. XXI Int. Conf. on Animal Blood Groups and Biochem. Polymorphism (Turin, July 4-8,1988) 1988, P.45.

61. Benacerraf B. The immune respense genes of the Major Histocompatibility Complex./Benacerraf В., Germtain R.M. //Immunol. Rev. 1978, N.36. P.71-119.

62. Вегпасо D. Genetic aspects of bovine leukemia virus infection and disease progression // Bernaco D., Lewin H.A. Thes. XXI Int. Conf. on Animal Blood Groups and Biochem. Polymorphisms (Turin, July 4-8,1988). 1988. P. 18.

63. Bernaco D. Role of the bovine major histocompatibility complex in infection and transformation by bovine leukemia virus. /Bernaco D., Lewin H.A., Howland J.//Anim. Blood Grps. and Biochem. Genet. 1985. N.16, Suppl. 1. P. 87.

64. Bevan M.J. Interaction antigens detected by cytotoxic T cells with the major histocompatibility complex as modifier./Bevan M.J. //Nature 1976. N.256. P. 418- 421.

65. Biochemical characterization of class I bovine major histocompatibility complex antigens using cross-species reactue antibodies. /Hoang-Xuan M., Char-ron D., Zilber M.T., Levy D. //Imunogenetics 1982. N.15. P.621.

66. Biozzi G. Genetic of responsiveness to natural antigens in the mouse. /Biozzi » G., Mouton D.A., Sant' Anna 0.// Gurr., Top. Microbiol immunol. 1979. Vol.85.P.31.

67. Bodmer W.F. HLA structure and function: A contemporary view./Bodmer W.F. //Tiasue Antigens, 1981. N. 17. P. 9

68. Borovska M. Specificity of cytotoxic antibodies in typing sera against cattle blood group antigens./Borovska M., Demant P. //Fol. Biol. 1967. N.13. P. 473.

69. Bortolossi J. Antigenos limfocitaros e resistencia ao virus da leucose bo-vine./Bortolossi J., Hines H.//Prescuisa Agropec, Bras. 1985, Vol.20. N,2. P.235-239.

70. Breed differencies in frequency of BoLA Specificities. /Caldwell J., Cumberland P.A., Weseli D.F., Williams J.D.//Anim. Blood Grps. and Biochem. Genet. 1979. P.93-98.

71. Brewerton D.A.Ankylosing spondylitis and HLA. /Brewerton D.A., Caffrey M., Hart F.-27 // Lancet. 1973, Vol.1. P. 904-997.i

72. Brindani F. Azione del lisozime su batteri isolati dal sacco cougiuntivale del cavall./Brindani F., Gattabioni F.- Clin, veter., 1975. V.98. N. 12. P.539-545.

73. Brostrom H. Cell-mediated immunity in sarcoid horses against sarcoid cells in vitro and association to MHC gene products. /Brostrom H., Dubath M.L., Lazary S.//Animal Genetics, 1987. Vol. 18, Suppl.l. P.24.

74. Caldwel J., et al Serologically detected lymphocyte antigens in Holstein cattle./ Caldwel J., et al//Anim.Blood Grps. and Biochem. Genet. 1977. N.8. P. 187207.

75. Clinical implications of associations between HLA and disease. /Svejgaard A., Morling N., Platz P., Ryder L.P., Thomsen M. // Clin. Immunol, and Allergol. Amsterdam.e.a. 1981. P.121-128.

76. Cohn M. T cell inhibition of humoral responsiveness II. Theory on the role of restrictive recognition in immune regulation./Cohn M. and Epstein R.Cell Immunol. 1978. N.39. P.125-163.

77. Cutie~Cjhen M. Transitivity of response in the mixed lynphocyne culture test. /Cutie-Cjhen M., Usenger W.R., Stone W.H.//Tissue Antigens 1978. N.12. P. 170-178.

78. Dausset J. Is the MHC a general self-recognition system playing a major unifying role in an organism?/Dausset J., Contu L.//Human Immunol. 1986. N.l. P.5-17.

79. Degos L. Le systeme HLA et ses applications en pathologie humaine./Degos L., Lepage V.//Rev. med. (France). 1981. Vol. 22. N.24. P.1487-1472.

80. Depeichin A.Le controle genetique de l'immunite antiinfectieuse./Depeichin A., Bruyere D.//Ann.Med.Vet. 1980. Vol.124. P. 329-343.

81. Dodd X., Bernoco D., Stormont C. //Anim.Blood Grps. and Biochem.Genet. 1980. N.l l.Suppl. 1. P.20-29.

82. Dudath M.L. Association between susceptibility to equine sarcoid and ELA haplotypes in multiple-case families. /Dudath M.L., Gerber H., Lazary S. //Animal Genetics 1987. Vol.18. P. 25.

83. Dusinsky R. Study of bovine lymphocyte antigens in the Slovak pied breed population. /Dusinsky R., Simon M., Nouzovska D. //Annual report of the Institute of Animal Physiology (Slovak Academy of Sciences). 1987, Vol. 7. P. 35-43.

84. Evolution of MHC polymorphism: extensive sharing of polymorph sequence motifs between human and bovine DRB alleles. /Andersson L., Sigurdardottir S., Borsch C., and Gustafsson K. //Immunogenetics 1991 N.33 P.235-243.

85. Fleming A. On remarkable bacteriolytic element found in tissues and secretions./ Fleming A. Prjc. Roy. Soc. London Series Biol. 1922, N.93. P.306-317

86. Folger R.L.Bovine lymphoyte antigen: serological relationships with erythrocyte and spermatosoan antigens./Folger R.L., Hines H.C. //Anim. Blood Grps. Biochem. Genet. Vol.7. P. 137- 145.

87. Fries R. Tentative chromosomal localization of the bovine Major histocom-• patibility complex by in situ hybridization. /Fries R., Hediger R. and

88. Stranzinger G.//Animal Genetic 1986. V01.17. P. 287-294,

89. Genetic aspects of BLV-infect ion and development disease progression. /Palmer C., Thurinond M., Pesando.J., Bernoco D., Lewin H.A. //Thes. XXI-st Int. Conf. on Anim. Blood Groups and Biochem. Polymorphisms (Turin, July 4-8. 1988) 1988 P. 18.

90. Genomic hybridisation of Bovine class II Major histocompatibility genes; I. Extensive polymorphism of DR and DQ genes. /Andersson L., Bohme J., Rask., Peterson P. A. //Animal Genetics 1986. Vol.17, N.2. P.95-112.

91. Giles R.C. Structure function and genetics of human class II molecules./Giles R.C. and Capra J.D. //Immunol 1985. N.37. P. 1-71.

92. Grosclaude F. 1st world confess on genetice applied to livestock production. /Grosclaude F. Madrid. I: plenary sessions. 1974. P. 229-241.

93. Grosclaude F. Studies on the 5 blood-group system in French cattle breede.i

94. Grosclaude F. //Free. 9th Eur. Anim. Blood Group Conf. 1964. Prague. P. 9.

95. Harrison Y., Bull R. //Animal Blood Groups Biochem. Genet. 1980 Vol.11. Suppl. 1. P.32-33.

96. Hate if staphylocoooi in fresh rabbit blood and serum./Joos R.W., Hall W.H.-Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 1968. V.128, N. 1. P. 49-50.

97. Hawkins B.R. //Tissue Antigens. 1981. Vol. 17. P.234-244.

98. Hines H.C. The association of BoLA antigens with milk production and animal blood groups arid biochemical polymorphisms./Hines H.C. // Gottin-gen. 1984. P. 112.

99. Histocompatibility of chickens selected for resistance to Marek's disease. /Pazderka R., Longeneker В., Law G., Stone W., Ruth R. //Immunogenet. 1975. N.2. P.93-100.

100. HLA and Disease Associations. /Svejgaard A., Morling N., Platz P., Ryder L.P., Thomsen M. //Immunobiology of the Major Histocompatibility Cornelplex, 7-th Int. Conv. Imnunol., Niagara Falls, N.4,1980, P.329-337.

101. Hoff Charles Chi-squaretred analysis in antigen charing studies // Tissue Antigens. 1985. Vol.26. N.3. P.212-213.

102. Influence of allelic polymorphism on the assembly and surface expression of class IIMHC (la) molecules. /Germain R.N., Bentley D.M. & Quill H. //Cell, 1985. N.43. P. 233- 242.

103. Isotypic and allotypic variation of human class II histocompatibility antigen a-chain genes. /Auffray C., Lillie J.W., Arnot D., Grossberger D., Kap-pes D. & Strominger J.L. //Nature 1984, N. 308. P.327-328.

104. Ivani P. The Major Histocompatibility Antigen in Various Species./ Ivani P. //Current Topics in Microbiology and Immunology. 1970. N.2. Springer Verlag, Berlin.

105. Johannsen R. HLA and disease associations./Johannsen R. //Immunol. Pol. 1981. Vol.5. N. 4. P.331-345.

106. Joint inheritance of bovine Major histocompatibility system antigene W6 and Wll. /Stear M.J., Hackle J.T.//Animal Genetics. 1987. Vol.18. N. 1. P.71-74.

107. Joint report of the third international bovine lymphocyte antigen (BoLA) workshop. /Bull R. W., Lewin H.A., Wu M.C., Peterbaugh K., Antezak D., Bernoca D., Cwik S., Dam L., et al, Animal Genetics. 1989. Vol. 20 P.109.

108. Kamp S.J., Tucker R.N., Alberti S., Machugh N.D., Toye P., et al. //XXI International Conference on Animal Blood Groups and Biochemical Polymorphisms. 1988. July 4-8.

109. Lasari S. Equine leukocyte antigen system. Serologic studies. /Lasari S., de Week A.L., Bullen S., et al. //Transplantation. 1988. N.30. P.203-209.

110. Lasari S. Equine leukocyte antigens in sarcoid-affected horses. /Lasari S., Gerber H, Glatt P., et al. //Equine Vet. J. 1985. N.17., P.283-286.

111. Leveziel H. Essay De mise evidence d'un complexe d'histocompatibilite majour chez les bovina./Leveziel H. //These Docteur-ingenieur Paris VI. 1978.

112. Levry D. Immunochemical characterization of major histocompatibility antigens in bovine cattle. /Levry D., Hoang~Xuan M., Leveziel H., etal.//Reunion Europenne d'Histocompatibilite Bovine. Les Colloques INRA, 1982. N.14. P. 89-96.

113. Lewin H.A. Evidence for BoLA- linked resistance and susceptibility to subclinical progression of bovine leukaemia virus infection./Lewin H.A., Ber-noco D. //Animal Genetics. 1986. Vol. 17. P. 197-207.

114. Lewin H.A.Association between the bovine lymphocyte antigen (BoLA) system and susceptibility progression of bovine leukaemia virus infec-tion./Lewin H.A., Stewart J.A. //Animal Genetics. 1986. N.17. P.17-18.

115. Lewin H.A. Crosse- reactivity of monoclonel antibody with bovine, equine, ovine and poreine peripheral blood В lymphocytes. /Lewin H.A., Calvert C.C., Bernaco D. //Amer. J. Vet. Res. 1985. N. 46. P. 785-788.

116. Lewin H.A. Monoclonal antibodies that recognine bovine T and В lymphocytes. /Lewin H.A., Davis W.C., Bernaco D. //Vet. Immunol. Immunopa-thol. 1985. N.9. P.87-102.

117. Lewin H.A. Antigen presenting cells: diversity, differentiation and regulation. /Lewin H.A., NolanT.J., Schock L.B. //New Jourk: Alan R. Liss. 1988. P. 211-220.

118. Lewin H.A. Peripheral В lymphocyte percentage as an indicator of subclinical progression of bovine leukemia virus infection. /Lewin H.A., Wu M.-C., NolanT.J., et al. //J. Dairy Sci. 1988. Vol. 27. P. 338.

119. Lilly F. The inheritance of susceptibility to the gros leukaemia virus in mice./ Lilly F. //Genetics. 1966. N 53. P.529.

120. Lysozyme and immune bacteriolyses./Glunn A. A., Milne C.M -J. Nature, 1965. V.207. P. 1309- 1310.

121. Mackic TJ. Natural bactericidal antibodies: observations on the bactericidal mechanism of normal serum./Mackic T.J., Finkelstein M.H.- J. Hygiene, 1931. V.31. N.l. P.35-55.

122. Mapping of bovine prolactin and rhodopsin genes in hybrid somatic cells./Halleman E.M., Theilman J.L. Beckmann J.S., Soller M. and Womack J.E.Animal Genetic 1988. Vol.19. P.123-131.

123. Marek's disease resistance in chicken affected by complementation of В alloalleles in a cross of commercial parent stocks. /Briles W.E., Briles R.W., Pollock D.L., Pettison N. //Anim. Blood Grps. and Biochem. Genet. 1980. N. ll.Supl. 1. P.14.

124. Mayr A. Resistenz und Imnunitat./Mayr A. Berliner und Munchener Tierarztl. Wochenschrift. 1963. Bd.76. N.20. S.417-421.

125. McGary. Blood groups and disease./ McGary.//Am. J. Hum. Genet. 1974. Vol. 1.P.249.

126. Meridith D. Equine Leukocyte Antigens: relationships with sarcoid tumors and lominitis in two pure breeds. /Meridith D., Elser A.H., Wolf В., et al, //Immunogenetics. 1986. Vol.23. P.221-225.

127. Mewman M. J., Greaves M.F. Characterisation of HLA-DR antigens on leukaemic cells./Mewman M. J. //Clin. Exp. Immunol. 1982. Vol.5. N.50. P.341.

128. Millesk J. Immunologie mechanisms in the defensse against Bacterial infections./ Millesk J. Dteh.Gesundheitsw., 1970. N.25. P. 1536 -1542.

129. Newman M.J. Serological and genetic identification of Bovine В lymphocyte alloantigen system. /Newman M.J., Adams Т.Е., Branden N.R.//Anim. Blood Grps. Biochem. Genet. 1982. N.13. P.123.

130. Ocsterlee C.C. Structure of loci in animal blood groups./Ocsterlee C.C., Bouv J.//Thes. of the 1st World Congress on genetice applied to livestock production. Madrid. 1974. P.243-252.

131. Osserman F.F. Serum und urinary lysozyme (muramiolose) und mono-myelocytic leukemia. /Osserman F.F., Lawlor D.P.- J. Exp. Med., 1966. V.124. P.921-952.

132. Ostergard H.Statistical analysis of associations between cattle MHC (BoLA) and subclinical mastitis./Ostergard H., Jehsen N.E.//XXIst Internat. Conf. on Animal Blood Grps. and Biochem. Polymorphisms- ( Turin, July 48., 1988) 1988. P. 12-14.

133. Ostrand-Rosenberg S. Bovine Leucocyte Antigens./Ostrand-Rosenberg S., Stormont C.//Anim. Blood Grps. Biochem. Genet. 1974. N.5. P.231.

134. Parasite resistance and the major histocompatibility system in cattle. /Hetzel D.J., Stear N.J., Micholas F.W., Mackinnon M.J., Brown S.C. //XXI Intern.Gonf. on Animal Blood Groups and Biochem. Polymorphisms (Turin. July 4-8, 1988). 1988. P.43.

135. Peptide -induend Conformational Change of the Class I Heavy Chain. /Elliott Т., Cerundolo V., Elvin J., Townsend A. //Nature 1991, H.351. P. 402406.

136. Petrovska, J. Variabilita ovoalbuminu u slepik plemene./Petrovska, J. -Zivoc. Vyroba, 1970. N.6. P.387-392.

137. Pringnits D.J. A simple technique to produce BoLA typing./Pringnits D.J. //Anim. Blood Grps. Biochem. Genetics 1982. Vol.13 P.91-95.

138. Relationship between lymphosarcoma and persistent lymphocytosis in cattle: a review. /Ferrer J.F., Marshak R.R., Abt D.A., Ekenyon S.J. //J. Amer, Vet. Med. Ass, 1979. Vol. 175. P. 705- 708.

139. Sachs D.H. Complementation between I region genes is revealed by a hybridoma anti-la antibody. /Sachs D.H., El-Gamil M., Arn J.S. et al. //Transplantation. 1981. Vol.31. P. 308-310.

140. Sagata N. Complete nuebotide sequence of the genomen of bovine leukemia virus: it's evolutionary relationship to other retroviruses. /Sagata N., Ya-sunaga Т., Tatisuku-Kawamura J., et al. //Prec. Nat. Acad. Sci. USA. 1985. Vol.82. P. 677-681.

141. Schiefer H.G. Physiologie und Pathophysiologie der antibacteriellen Phagozytoze./Schiefer H.G. J. Physiologie, Klin. Med. (Wien), 1975, V.70, N.41. P.1616-1621.

142. Schlieben S. DNA polymorphisms in the BoLA-system and associationwith mastitis. /Schlieben S., Seyfert H.M., Erhardt G., et al.,//Thes. XXI-st Int. Conf. on Anim. Blood Groups and Biochem. Polymorphisms (Turin, July 4-8, 1988) 1988 P.44.

143. Schmid D.O. On leukocyte serology in the pig and cattle./Schmid D.O., Cwik S.//Animal Blood Grps. Biochem. Genet. 1972. N.3. P.l 1-12.

144. Schubertn H.J. Serological evidence for additional polymorphic bovine MHC loci. /Schubertn H.J., Bachem-Driessen В., Leibold., et al. //XXI-st Int. Conf. Animal Blood Grps. Biochem. Polymorphisms (Turin, July 4-8, 1988) 1988. P.45.

145. Sequence of gene and cDNA encoding murine major histocompatibility complex class II gene A(32- /Larhammar D., Hammerling U., Rask L. and Peterson P. A. //J.Biol.Chem. 1985.N.260. P. 14111-14119.

146. Sigurdardettir S. Cloning and characterization of highly polymorphic class II in cattle. /Sigurdardettir S., Anderssen L. //Thes. XXI Int. Conf. Animal Blood Grps. Biochem. Polymorphisms (Turin, July 4-8, 1988). 1988. P. 122.

147. Simons M. Detection of Immune-associated Genetic Marker of Human Disease. /Simons M., Tait B.//Edinburgh, 1984. P. 356.

148. Snell G. Histocompatibility. /Snell G., Dausset J., Nathenson V., //Academic Press: N.Y. San Francisco London, 1976. P. 502.

149. Spies F. Restored Expression of Major Histocompatibility Class I Molecules by Gene Transfer of a Putative Peptide Transporter. /Spies f., DeMars R.//Nature, 1991. N.351 P. 328-324.

150. Spooner R.L. Evidence for a possible major histocompatibility complex (BoLA) in cattle. /Spooner R.L., Leveziel H., Groscleuce F., et al.//J. immuno-genetics. 1978. N. 6. P. 335-346.

151. Spooner R.L. Analysis of alloantisera against bovine lymphocytes. Joint report of the I-st International Bovine Lymphocyte Antigen (BoLA). /Spooner R.L., Oliver R.A., Sales D.I. //Animal Blood Grps. Biochemic. Genetics 1979. N.10. P.63-86.

152. Stear M.J. Breed and herd differencies in the frequency of BoLA class I antigenes./Stear M.J. //Animal Blood Groups and Biochemical Genetics, 1982. Vol. 13. P. 33.

153. Steimetz M. Clusters of genes encoding mouse transplantation antigens. /Steimetz M., Winoto A., Minard K., et al.//Cell. 1982, Vol.28. P.489.

154. Sveigaard A. HLA antigens and disease. Statistical and genetic consideration. /Sveigaard A., Jersild C., Nielsen L.S., et al.//Tissue Antigens . 1974.1. Vol.4. P.95-108.

155. Takashima I. preliminary study./Takashima I., Olson C. A. // Ann. Rech. Vet. 1982, Vol. 9. N 4. P.821-823.

156. Tamaki S. Increase in sensitivity to antibiotics and lysozyme on deletion of lipopolysacharides in Escherichia cjli strains. /Tamaki S., Matsuhashi M.- J. Bact., 1973, V.114. N.l, P. 453-454.

157. Teale A.J., et al. Bovine alloreactive cytotoxic cells generated in vitro; » target specificity in relation to BoLA phenotype./Teale A.J., et al.1.munology 1985. Vol.55, N.2. P. 355-362.

158. Teale A.J. A product, of a second BoLA class I locus defected by a bovine monoclonal antibody. /Teale A.J., Kemp S. J.// Thes. XXI-st Int. Conf. Animal Blood Grps. and Biochem. Polymorphisms (Turin, July 4-8, 1988) 1988 P.71.

159. Teale A.J. A study of BoLA class II antigens with BoLA+ T lymphocyte clones./Teale A.J., Kemp S.J. //Anim. Genet. 1987. Vol.18 P.17- 28.

160. Teodore L.G., et al. Immunochimical and electrophoretic analysis of BoLA class I antigens./Teodore L.G., et al. //Thes. XXI Int. Conf. on Animal Blood Groups and Biochem. Polymorphisms (Turin, July 4-8., 1988). 1988. P. 21.

161. Tew J.G. Plasma B-Lysin and Lysozime Following Endotoxin and the Generalized Schwarsman Remetion. /Tew J.G., Beott R.Z., Donalson D.M.-Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 1971, N. 136, P.473-478.

162. The bovine gene map. /Fries R., Beckman J.S., Georges M. , Soller M. and Womack J. Animal Genetics. 1989. Vol. 20. P.3-29.

163. Thompson G. //Thecret. popul. Biol. 1981. Vol.20. P. 168-208.

164. Usinger W.R. Two moleculary independent surface receptors identify bovine T lymphocytes. /Usinger W.R., Splitter G. A.//J. Immunol. Methods. 1981. Vol.45. P.209-219.

165. Walford R.L. Antibody diversity, histocompatibility systems, disease states and ageing./Walford R.L. //Lancet. 1970. Vol.2. P.1226-1229.

166. Walford R.L. Acute childhood leukaemia in relation to the HLA human transplantation genes. /Walford R.L., Rinkelstein S. Neerhout R. //Nature (Lond.). 1970. Vol.225. P.461-461.

167. Washburn K.W. Association of hemoglobin tyne with resistance to Mareka disease -Poultry. /Washburn K.W., Kidison C.S., Zow R.H. Sci., 1971, N.5, P. 90.

168. Wu M.-C. Milk and fat production in dairy cattle influenced by advanced subclinical bovine leukemia infection. /Wu M.-C., Shanks R.D., and Lewin H.A. //Froc. Nat. Acad. Sci. USA 1989. K.86. P. 993-996.