Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Влияние алиментарного белкового фактора на процессы транспорта липидов в сыворотке крови и желчи

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Влияние алиментарного белкового фактора на процессы транспорта липидов в сыворотке крови и желчи"

Р Г Б ОД

1 г с>и

НАЦИОНАЛЬНАЯ АКАДЕМИЯ НАУК РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН

НАУЧНЫЙ ЦЕНТР РЕГИОНАЛЬНЫХ ПРОБЛЕМ ПИТАНИЯ

На правах рукописи

Л1АКСИМЕНКО Валерии Борисович

УДК 613.2:613.357 + 613.65

ВЛИЯНИЕ АЛИМЕНТАРНОГО БЕЛКОВОГО ФАКТОРА НА ПРОЦЕССЫ ТРАНСПОРТА ЛИПИДОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ II ЖЕЛЧИ

(03.00.(М — биологическая химия)

АВТОРЕФЕРАТ диссертации па соискание ученой степени доктора медицинских наук

Ллматы- 1994

Работа выполнена в научном центре региональных проблем питания HAH НС и Казахском .государственном институте усовершенствования врачей.

Научные консультанты: академик РАМН и HAH PK, доктор медицинских наук, профессор Т.Ш.Шарманов,

доктор медицинских наук, профессор А.А.Алдашев, доктор медицинских наук, профессор Ш.С.Тажибаев

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор С.М.Плешксша, доктор медицинских наук, профессор Р.Х.Мустафина, доктор биологических наук, профессор О.В.Есырев

Ведущее учреждение: Казахский научно-исследовательский институт экспериментальной и клинической хирургии им.акад.А.Н.Сызганова

)

Защита диссертации состоится " " I99ir.

в часов на заседании Специализированного Совета Д 53.28.01 при Научном центре региональных проблем питания HAH FK / 480008 Алматы, ул.Клочкова, 66 /

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НЦ РПП Автореферат разослан " " 1991г.

Ученый секретарь специализированного совета

доктор медицинских наук, профессор Ж.С.Нугманова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Питание оказывает значительное влияние на процессы транспорта липидов С A.A. Покровский, 1974; В.Ф. Маркелова, 1974; Ы.И. Левачев, 1978; Б.Г. Ляпков, 1982). Эпидемиологическими и биохимическими исследованиями установлена связь избыточного потребления углеводов и аиров пищи с нарушениями обмена липвдов и метаболическими болезнями ( атеросклероз, оаирение, сахарный диабет, аелчекаменная болезнь). В этом отношении менее изученным остается значение алиментарного белкового фактора. Между тем;протеины пищи являются основным нут-риентом, а их недостаток возникает в организме не только при несбалансированности питания, но и при различных заболеваниях и патологических состояниях ( Т.Ш. Шарманов, 1985).

Несмотря на то, что установлены существенные различия в метаболизме липидов при потреблении белков животного и растительного происхоздения ( Q-KiitcKetrsiy , 1976) и выявлены особенности влияния отдельных алиментарных протеинов ( Б.Г Ляпков и соавт., 1986;NS.Scximskaur eta£. . I9Ö9; JlSupano ni aß. 1990), однако многие стороны влияния белков пищи на обмен липидов остались малоизученными.

Одним из ключевых этапов метаболизма липвдов является их транспорт в сыворотке крови и желчи. Эти биологические явдкос-ти представляют собой водную среду и для переноса гидрофобных липидов в организме существуют надмолекулярные образования: липопротеццы (Ш ) в сыворотке крови и аелчныэ мицеллы. Центральное место в формировании этих образований занимает эндо-плазматический ретикулум гепатоцита ( D.M. Лоцухин, 1983). Здесь происходит синтез белкового и липвдного компонентов ЛП

микросомальными монооксигенаэами, осуществляется окисление холестерина в желчные кислоты, реализуется взаиморегулирующее влияние отдельных компонентов системы транспорта липедов. Это позволило рассмотреть ЛП сыворотки крови, пелчную мицеллу и эндо-плазматический ретикулум гепатоцита в качестве единой саморегулирующейся системы ( Т.III. Шарманов, 1984), что. явилось основой для исследования влияния белкового питания на процессы транспорта липицов. Представлялось, что тщательное изучение липидного состава сыворотки крови, отдельных Ш, келчи, микросомальной фракции печени, спектра аелчных кислот с последующим корреляционным и регрессионным анализом позволит определить основные пути взаимодействия данной саморегулирующейся системы. В свою очередь^оценка состояния некоторых ключевых ферментов метаболизма ЛП и желчных кислот даст возможность выяснить направленность влияния белкового питания на процессы транспорта липвдов.

Белковая недостаточность проявляется многочисленными биохимическими признаками, включающими нарушения липвдного обмена, например, жировым гепатозом ( А.А Покровский, 1978; A.C. Логинов, Ю.Е.Блок,, 1987; Б.А. Салханов, 1982; T.Oilamadc£. ,1991).

Не вызывает сомнения, что и длительное ограничение двигательной активности, столь характерное для современного человека, обусловливает возникновение белковой недостаточности в организме вследствие активации катаболических процессов С О.Г. Гаэенко, 1980; Е.А. Коваленко, H.H. Г^ровский, 1980; И.В. Федоров,- 1982; Т.Ш. Шарманов, 1984; A.A. Алдашев,' 1989; К.В. Смирнов, 1990 ).

Особый интерес представляло определение значения алиментарного белкового фактора при интоксикации ксенобиотиками.

Среди них следует ввделить как индукторы эвдоплазматического ретикулума, так и контаминанты?неоказиваидие непосредственного воздействия на эту субклеточную органеллу гепатоцита. С одной стороны,данная экспериментальная модель позволяла оценить значение печеночных микросом для функционирования системы транспорта липидов, а с другой - экспериментально биохимически оценить возмояности модификации белкового компонента пищи при разработке лечебно-профилактического питания ( Т.Ш. Шарманов, 1935; В.А. Доценко и соавт., 1987; Г.А. Нулкыбаев, 1989 ).

Цель исследования: изучить некоторые биохимические механизм.! влияния алиментарного белкового фактора на процессы транспорта липидов в сыворотке крови и аелчи.

Задачи, исследования:

1. Изучить биохимические пути воздействия экспериментальных диет с различными пищевыми протеинами ( казеином, белкой хлопчатника, тетчноП кпейкотшой, сбачоксированной смесь» аивотного-и растительного белка ) на процессы транспорта липи-доз.

2. Исследовать хекаиизш) нарушения процессов транспорта липидов при дефглите протеинов. Разруб о? ать классификация синдрома болховоЯ недостаточности.

3. Определить дуги влияния алиментарного белкового фактора на процессы транспорта липидов пря интоксикации ксенобиотиками.

4. Оценить возисшюсть использования нвяоторых показателей процессов транспорта липидов для диагностики обеспеченности организма белком.

5. Разработать методику количественной тонкослойной хроматографии липидов и аелчных кислот с применением денситометрии.

Научная новизна

I. Использование модели единой саморегулирующейся системы транспорта липидов в сыворотке крови и желчи позволило установить факт воздействия белков пици на биосинтез желчных кислот через изменение уровня цитохрома Р-450 и свободного холестерина в микросомальной фракции печени. Определено функционирование механизма,поддерживающего постоянство концентрации мицеллообра-эующих компонентов желчи ¡желчных кислот и фосфолипидов, включающего реципрокную секрецию их печеньюи процессы накопления свободных жирных кислот в аелчи, вероятно, вследствие распада фосфолипидов. Белки пищи в основном воздействуют на процессы секреции.

2. Изученные алиментарные и неалиментарные формы синдрома белковой недостаточности приводят к перераспределению протеинового фонда организма с мобилизацией внепеченочных источников и поддержанием уровня печеночного микросомального белка.

Существующее представление о механизмах развития жировой инфильтрации при синдроме белковой недостаточности дополнены сведениями об ингибировании процессов окисления холестерина в желчные кислоты, а также о подавлении липолитических механизмов в микросомальной фракции печени.

Нарушение коньюгирования желчных кислот глицином является одним из биохимических признаков белковой недостаточности различного происховдения.

Длительная гипокинезия является неалиментарной катаболи-ческой формой синдрома белковой недостаточности. Полноценные пищевые белки в определенной мере уменьшают, а неполноценные усугубляют патогенный эффект ограничения подвижности на процессы транспорта липвдов.

3. Для возникновения дислипопротеинеыии при экзогенной интоксикации имели значение:индукция печеночных микросом, ин-гибирование сывороточного липолиэа, а при затравке Н -нитро-зопипервдином - увеличенное поступление Ш из стенки кишечника. Изученные алиментарные формы синдрома белковой недостаточности усугубляли эффект ксенобиотика.

Алиментарный белковый фактор изменял степень индукции эндоплазматического ретикулума гепатсцитов, печеночных моно-оксигеназ ксенобиотиком и вследствие этого интенсивность синтеза желчных кислот. На фоне белковой недостаточности значительно активировались гидролитические процессы в печени, обусловленные ксенобиотиком, вероятно, вследствие образования вторичных лизо-сом. Одним из проявлений этого было увеличение содерзания свободных «ирных кислот в жедчи.

Научно-практическая значимость

1. Данные о влиянии белков пищи на процессы биосинтеза желчных кислот путем изменения содерзания цитохрома Р-450 в

печени и установление корреляционной зависимости мееду ним и количеством первичных аелчных кислот в желчи позволили использовать определение последних для подсчета уровня этого фермента в печени с помощью уравнения регроссии. Использование данного подхода возможно при отсутствии других факторов, оказывающих воздействие на эадоплазыатический ретицулум гепатоцига.

2. Для биохимической диагностики синдрома белковой недостаточности предложено использование определения концентраций свободных жирных кислот и триглицерздов сыворотки крови с подсчетом их соотношения ( свободные жирные кислоты/триглицериды), характеризующим липолитическио процессы в организме; уровня суммарных холатов, первичных желчных кислот, гликотриоксихола-

тов и фосфолипидов / Оценка адекватности рациона питания по белку с помощью биохимических тестов // Информ.листок.-Алма-Ата, КазНШНТИ, 1985,- 6.С. /.

Рассмотрение длительной гипокинезии в качестве неалиментарной формы сивдрома белковой недостаточности позволило рекомендовать для его диагностики наряду с перечисленными показателями определение уровня жёлчеотделения и степени насыщенности жёлчи холестерином / концентрация, холато-холесте-риновый коэффициент, триангулярная система координат /. Полученные результаты, свидотельствущие об уменьшении выраженности патогенного эффекта гипокинезии на процессы транспорта липидов при использовании полноценных пищевых белков, являются экспериментальной основой для разработки лечебного и лечебно-профилактического питания лиц с данной формой синдрома белковой недостаточности / 0 новых результатах изучения метаболических эффектов гипокинезии на фоне разнохарактерного питания // И., ИМБЛ, 1985,- 13 С./. Изученные показатели транспорта липидов предложено использовать для характеристики состояния лиц, пребывающих в экстремальных условиях внешней среды / Питание спортсменов в горах// Алма-Ата, Министерство здравоохранения Казахской ССР, 1984,30 С,/; оценки белкового питания / Способ оценки сбалансированности рационов питания по белку и витаминам путём определения лшидного состава сыворотки крови и жёлчно-кислотного' состава жёлчи // Алма-Ата, КазНШНТИ, 1985.--б С. Оценка адекватности рациона питания по белку с помощью биохимических тестов // Алма-Ата, КазНИШТИ, 1985,-б С. /; диагностики жёлчакаменной болезни / Способ определения литогенности жёлчи у больных с заболеванием жёлчных путей,-

А.С. Р 1486931 от 28 марта 1988 г. /, ишемической болезни сердца / Диагностическая ценность изучения лштвдного состава сыворотки крови у больных о заболеваниями сердечно-сосудистой системы // Пробл. совр. кардиологии в Казахстане: Сб. науч. тр. Алма-Атинского гос. мед. ш-та, Каз.НИИ кардиологии. Алма-Ата, 1982,- С.56-62 /; хрошгческого энтерита / Использование показателей, характеризующих жёлчнокислотный состав жёлчи, липидный и эфирнохолестериновый спектры снворотки крови для диагностики некоторых заболеваний и патологических сиидромов // Инрорм, письмо.- Алма-Ата, I(аз.филиал Ии-та питания АШ СССР, 1985, 7 с.

3. Разработана методика количественной тонкослойной хроматографин липццов и жёлчных кислот / 8 рационализаторских предложений /, которая внедрена в работу Научного центра региональных проблей питания НАЛ Ш, Казахского государственного института усовершенствования врачей, 1{арагацдинского государственного медицинского инстиута, 1Сарагандиского государственного педагогического шститута, Казахского НИИ онкологии и радиология, Для врачей-лаборантов г.Алмати проведен семинар-конференция "Применение методов тонкослойной хроматографии липидов, эфиров холестерина и иёлчных кислот э диагностика некоторих заболеваний и патологических синдромов" / Протокол заседания городского научного общества врачзй-лаборантоз г.Алматы

о? 18 декабря 1984 г./.

4. Полученные результаты используются в учебном процессе кафедры питания и гастроэнтерологии Каэ.ГЙУВ,

Положения, вшосшяле на защиту

I, Алиментарный белковый фактор оказывает воздействие на процессы образования и секреции 'ЛП, активность липолитическкх ферментов сыворотки крови. Воздействие на образование жёлчных кислот реализуется через изменение содержания цитохрома Р-450

и СХС в ¡лпфосомальной фракции печени. -Установлено функционирование механизма, поддерживающего постоянство суммарной концентрации жёлчных кислот и 01 в жёлчи. Он включает реципрокную секрецию печенью и фосфолиполиз. Белки пищи заметно воздействуют на процессы секреции и в значительно меньшей степени на распад $Л.

2. Разработана классификация сиццрома белковой недостаточности. Нарушения процессов транспорта липидов при различных алиментарных формах синдрома включают повреждения секреции ЛП печенью, шгибирование лияопротеидлипазы и печеночной тригдицерид-липазы сыворотки крови, снижение уровня образования и секреции жёлчи. В сочетании с подавлением липолитических процессов в печени перечисленное приводило к развитию жирового гопатоза. Для некоторых алиментарных форм сшщрома характерно повышенное использование звдогенных источников белка. В основе указанных нарушений лежат изменения состояния мембранных структур гепатоци-тов, в частности, микросомальных.

3. Ограничение двигательной активности является неалиыентар-ной катаболическо;: формой синдрома белковой недостаточности.

При сочетании нарушений белкового питания и гипокинезии установлено перераспределение белкового фонда организма, поддерживающее постоянный уровень микросомального белка и цитохрома Р-450 в печени. Повышение качества лицевого белка уменьшало, а снижение -усугубляло патогенное влияние ограничения подвижности на транспорт липвдов. При гипокинезии нарушался компенсаторный мехшшзы секреции жёлчных кислот и ФЛ.

4. Интоксикация ксенобиотиками приводила к возникновению дислипопротеидемии. Интенсивность биосинтеза жёлчных кислот и секреции липидов с яёлчью определялась способностью контаминан-тов индуцировать печеночные микросомы и цитохром Р-450. Алиментарный белковый фактор оказызал воздействие на интенсивность всасывания ксенобиотиков,, шгибирование липолитических ферментов сыворотки, степень индукции печеночных монооксигеназ и вседствие этого интенсивность синтеза жёлчных кислот.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены на Всесоюзной конференции "Теоретические и практические аспекты изучения питания человека" / Москва, 1980 /; 3 и 5 Всесоюзных симпозиумах по биохимии липидов /Ленинград, 1978;Алма-Ата,1987/;хонф."Гигае1Шч.аспекты пита-

ния здорового и больного человека" ( Киев, 1982); 4 Всесоюзном съезде геронтологов и гериатров ( Кишинев, 1982); 4 Конгрессе по гигиене ( София, 1982 ); 4 Всесоюзном симпозиуме по медицинской эняимологии ( Алма-Ата, 1983); на советско-американском симпозиуме по проблеме медико-биологической оценки новых видов продуктов с использованием.изолятов соевого белка и других источников ( Алма-Ата, 1983); Республиканском симпозиуме "Фундаментальные науки - практике ( Алма-Ата, 1985); 4 объединенном съезде гигиенистов, эпидемиологов, микробиологов, паразитологов и инфекционистов Казахстана (Чимкент, 1985); Международной конференции по профилактической кардиологии ( Москва, 1985); 4 конференции биохимиков Средней Азии и Казахстана ( Ашхабад, 1986); 4 Международном симпозиуме "Лизосомы - биология, патология, биотехнология" ( София, 1986 ); 5 Всесоюзном биохимическом съезде ( Киев, 1986); 2 Всесоюзной конференции "Биоантиоксидант" ( Москва, 1966); Всесоюзной пколе "Актуальные проблемы биохимии в прилояении к задачам биотехнологии, сельского хозяйства и медицины" ( Ульяновск, 1988); Всесоюзной конференции "Актуальные вопроси стандартизации лабораторных яивотных для медико-биологнчзских исследований" ( Москеэ, 1938); Межреспубликанских конференциях "Питание здорового и больного человека" ( Анхабад, 1689; Карми, 1990 ).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 35 юногратм,

работ, в том числёЯб нурнальких статей, 22 тезисов в материалах Всесоюзных, республиканских, м$адународньпс съездов, конференций, симпозиумов, I методическая рекомендация, I методическое, I информационное письма, I авторское свидетельство, сдельно 9 рационализаторски предложений.

Настоящая работа ^аляется фрагментом заказных ШР Госу-

- 12 -

дарственного комитета по науке и технике СССР, Министерства здравоохранения СССР и АМН СССР / гос.регистрации 01.81.81092196} 01.83.0011863} 01.85.0076937 /.

Структура диссертации. Диссертация состоит из введения, четырёх глав результатов собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы, включахщэго 205 отечественных и 394 иностранных источников. Диссертация изложена на 459 страницах машинописи, иллюстрирована 136 таблицами и 31 рисунками.

Автор выражает глубокую благодарность академику РАМН и HAH FH, профессору 'Г.Ш.Шарманову, профессору А.Л.Ллдашеву, профессору Ш.С.Талсибаеву ва научную консультацию и практическую помощь в выполнении данной работы. Тшсже выражает искреннюю признательность сотрудникам кафедры^питания и гастроэнтерологии Казахского государственного института усовершенствования врачей и лаборатории молекулярных основ > защитного действия нутриентов Научного центра региональных проблем питания HAH PIC за практическую помощь в выполнении отдельных фрагментов работы.

СОДЕРЖАНИЯ РАБОТЫ Материал и мзтоды исследования. Экспериментальные исследования проведены в 4 сериях экспериментов, 35 группах крыс

линии Вистар Альбино Глазго / ВАГ / и Август обоего пола.

со

Всего в работе использовано 417 животных. !Срыс\деркали по 4-6 особей в пластиковых клетках при свободном доступе к корму

о

и питьевой воде. Крмление животных проводили мезду 9 и 10 . часами утра. Корм давали исходя из расчёта 24 г готовой диеты на одно животное. Длительность содержания на экспериментальных диетах для изучения влияния различных пищевых белков составляла 30 дней.

■ В первой серии было изучено влияние белкового алиментарно-

го фактора на процессы транспорта липидов в сыворотке крови и нелчи. С этой целью скармливались полусинтетические диеты, содержавшие в качестве источника белка казеин ( та , США), изолят белка хлопчатника и сбалансированную по аминокислотному составу смесь животного ( казеин ) и растительного ( пшеничная клейковина ) протеинов, составлявшего 25& от массы суточного рациона. Остальные нутриенты были представлены в диете в одинаковых количествах: крахмал картофельный 53,55^, декстроза 5,95^, лярд 8,Сй, линетол 2,Склетчатка 2,1%, солевая смесь 3,2%, витаминная смесь 0,2^ массы суточного рациона.

Во второй серии экспериментов исследовалось влияние различных форм алиментарной белковой недостаточности, для чего использовались диеты с пшеничной клейковиной, дефицитом токоферола, ретинола, аскорбиновой кислоты и сочетанием этих алиментарных факторов.

В третьей серии экспериментов изучалось влияние белков пищи при ограничении двигательной активности. Для моделирования гипокинезии животные содержались в индивидуальных дюра-лево-плаксиглассовых клетках-пеналах размерами 7 х 15 см в течение 60 дней. Проводилось кормление экспериментальными диетами со сбалансированным белковым компонентом, казеином, ияолятом белка хлопчатника, пшеничной клейковиной, дефицитом витаминов А, Е, С, а также сочетанием двух последних алиментарных факторов.

Четвертая серия экспериментов была посвящена исследованию значения белкового питания при интоксикации ксенобиотиками. Было использовано три контаминента: распространенный пестицид-

^ - гексахлорциклогексан ( $ — ГХЦГ _ , линдан),

афлатоксин и N - нитрозопиперидин ( Ы~ИПИП ).

Изучалась острая, подострая и хроническая интоксикация этими чужеродными веществами. Острую затравку пестицидом, растворенным в линеголе, производили с помощью желудочного зонда в дозе 1/6 JUÍgQ ( 18 мг/кг массы тела ). Контрольные животные получали только масло. Объем вводимого растворителя составлял 0,5 мл на на 200 г массы тела. Хроническое отравление лиеданом производили цутем добавления его в корм в количестве обеспечивающем ежесуточное поступление в организм 1/100 ДЦзд ( 0,9 мг/кг массы тела). N - НПИП при острой затравке вводился в ввде водного раствора через желудочный зонд из расчета 1/20 ДД^ на I кг массы тела. При подострой затравке животные в течение двух месяцев получали ксенобиотик с питьевой водой из расчета 0,02 мкг на одно животное. Острая затравка афлатоксином Bj-проводилась из расчета I мг/кг массы тела,*а подострая по схеме Uloc^aл. , Netii^exru (1967 ) из расчета 100 мкг/кг массы тела.

Значение алиментарного белкового фактора изучалось использованием диет со сбалансированным белковым компонентом, пищевой клейковиной, а также сочетанием качественной белковой недостаточности и дефицита витаминов А, Е, С.

Дня получения желчи производился дренаж общего желчного протока в течение 2 часов ( С.Ы. Дроговоз, 1972). Животные забивались декалитацией.

Вьщеление микросомальной фракции печени осуществляли по методу А И. Арчакова (1976) с помощью ультрацентрифугиV\MC -602.(Германия) при 105000^ в угловом роторе. В части

экспериментов использовался метод быстрого выделения общей микросомальной фракции печени низкоскоростным центрифугированием ( S./?,Kamath ,Е.Иийл , 1972). Полученные обеими

методами препараты микросом сопоставлялись по содержанию, белка, оксидаз со смешанной функцией, отдельных классов липвдов, а также электронномикроскопически. Существенных различий обнаружено не было.

Содержание белка в образцах проводили по О-Ло&ху. & а£. (1951), биуретовым методом и при сканировании в спектре 4 производной от 310 до 260 мм ( С.М.Заскол г£а£„ 1981) на спектрофотометре "НОасАс - 330" (Япония ).

Активность липопротеинлипазы (ЛПЛ) и печеночной триглице-ридлипазы (П-ТГЛ) определяли с помощью наборов фир.ш8се1гспргг «МалпНим (Германия). Сыворотку крови инкубировали в течение 30 минут на во^юй бане при 37°С до и после внесения МаСб до конечной концентрации I М. При этом считали, что инкубация активировала ШЛ, а добавление I Ы Уо-бХ - ( конечная концентрация ) - П-ТГЛ ( И.Б. Солитернова, Ц.Г. Никульчева, 1982). Активность ферментов вырааали в условных единицах, используя стандарт липазы, прилагаемый к наборам.

Содержание цитохромов Р-450 и в§ в микросомах печени определяли по методу Т.Отила, (1964) на двухлучевоы спектрофотометре " ИЦаеЛи - 330" (Япония ).

Спектр липопротеидов (ЛП) сыворотки крови определялся методом диск-электрофорзза в полиакриламндном геле поЕ.Я.Награче&ой (1973). Состав ЛП (%) оценивался с помощью интегрирующего денситометра ( %ел1сЪте{г-Ь7? . , США ).

Выделение отдельных классов ЛП осущестачяли преципитацион-ным методом ( её а£. , 1978 ) путем последователь-

ного осазщения частиц с помощью растворов гепарина, &!* , Мп.аг и декстрансульфата в рефркзераторной центрифуге.

Полнота осаждения отдельных фракций проверялась электрофорети-

чески. В части экспериментов для вьщеления отдельных классов ЛИ применялось ультрацентрифугирование ( ДВ. Попов, 1977 ).

Изучение липидного состава образцов проводилось методом тонкослойной хроматографии с последующей денситометрией, усовершенствованным в процессе выполнения данной работы, Экстракция липвдов сыворотки крови, желчи, микросом печени проводилась по методу З.Зовсй (1957), а фракций ЛП по модификации Вюи/п е€ а£. ( 1969 ). Хроматографическое разделение липвдов осуществлялось на листах в смеси растворителей гексан-эфир (диэтиловый)-уксусная кислота ( 80:20:1, объем/объем),а липидов микросом в системе петролейный эфир ( темп. кип. 40-60°С)~ эфир (диэтиловый) - муравьиная кислота-вода ( 80:20:2:2, объем/объем). Сжигание липвдов проводилось на пластинах, предварительно обработанных сернокислым ам -монием, нагреванием до 180-200°С. Полученные хроматограммы денситометрировались на денситометре ЕИАН-170. Количественная оценка осуществлялась с помощью внешнего и внутреннего стандартов. Проверялась чувствительность с помощью стандартной сыворотки I " Ргесь£ср ", Германия) и воспроизводимость метода.

Полученный экстракт липидов использовался для изучения состава эфиров холестерина сыворотки крови и отдельных классов Ш. Дня разделения использовалась система растворителей гептан- толуол ( 80:20, объем/объем). Липиды на пластине обнаруживались с помощью фосфорно-ыолибденовой кислоты. Количественная оценка проводилась с помощью денситометрии с внешним и внутренним стандартом. Проверялись чувствительность и воспроизводимость метода.

Глицериды сыворотки крови разделяли в системе петролейный

эфир ( темп.кип. 40-60°С ) - эфир (диэтиловый) - уксусная кислота ( 60:10:5, объем/объем) 1978), обнаружение липидов осуществляли фосфорно-молибденовой кислотой с последующей денситометрией.

Экстракция желчных кислот желчи проводилась 96° этанолом. Их хроматография проводилась в смеси растворителей хлороформ-метанол- уксусная кислота --вода ( 65:25:10:5, объем/объем). Идентификация холатов осуществлялась фосфорно-молибденовой кислотой и внешним стандартом. Количество определялось денсито-метрически. Проводилась оценка чувствительности и боспроизводи Мости метода.

Содержание малонового диальдегвда в желчи определяли с помощью тиобарбцтуровой кислоты.

При статической обработке полученных данных подсчитыва-лись выборочная средняя, её ошибка, коэффициент линейной корреляции ( Г" ), достоверность которого оценивалась отношением его величины к ошибке. Использовался также подсчет непараметрического коэффициента корреляции рангов Спирмена ( ^ ). Дулевая гипотеза проверялась с помощью Ь -критерия

Стъюдента. В некоторых случаях корреляционная зависимость описывалась с помощью управления регрессии. Для оценки зависимости вариации изучаемого биохимического показателя от регулируемых и нерегулируемых в опыте факторов использовался одно- и двух-факторный дисперсионный анализ. В работе использовался калькулятор "Электроника МК-51" и ЭВМ.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И СБСУЗДЕШЕ

I. Влияние алиментарного белкового фактора на процессы транспорта липидов.

Воздействие белков пищи на перенос липидов в сыворотке

крови и жёлчи весьма существенно и развивается по сходным биохимическим путям. Презде всего обращают внимание изменения процессов транспорта липидов в жёлчи. Так, основной путь выделения холестерина из организма - его окисление в жёлчные кислоты -в значительной мере зависит от пищевого белка. О состоянии последнего судили по уровню первичных жёлчных кислот / тауро- и гликотриоксихолановых / в жёлчи. Дисперсионный анализ показал, что сила влияния * $йх / белкового фактора на их секрецию была существенной и достоверной / 95,0 + 1,2%т /. В проведенных исследованиях с понижением качества пищевого белка, т.е. его усвоязмости и сбалансированности аминокислотного состава, уменьшалось покличзство первичных холатов, продуцируемых печенью / рисЛ А /. Рассматривая причины указанной тенденции, прежде всего обращает внимание её связь с изменениями уровня цитохрома Р-450 в печеночных микросомах / рис. I Б /. Ключевой фермент биосинтеза холатов - холестерин- -гидроксилаза является одной из изоформ данного цитохрома / В.М.Лопухин и соавт., 1983 /. Подсчет коэффициентов корреляции между изменениями уровня цитохрома Р-450 и первичных жёлчных кислот, приходящихся на массу печени крас этой серии экспериментов, установил достоверную.пря)цую зависимость /г = 0,66й51/, что описывалось уравнением регрессии /у » - 19,3 + 17,1 х / / рис. I В /. В отдельных группах обнаружена достоверная корреляция величины данного цитохрома с уровнем глшсотриоксихолановой кислоты А- = -0,95х/ /сбалансированная диета/, тауротриоксихо-лановой кислоты /г = 0,95*; г = 0,821 / / диета с казенной, сбалансированная диета у крыс линии ВАГ /.

Белковый компонент диеты оказывал непосредственное влияние как на содержание шкросомального белка, так и цитохрома Р-450.

Особенно наглядно это видно при пересчете их содержания на массу печени.В этом отношении наиболее эффективными оказались белки с хорошим аминокислотным составом ( М.П. Черников, 1987 ) - молочный и хлопчатника ( рис-. I Б ). При пересчете содержания первичных желчных кислот желчи на единицу цитохрома Р-450 оценивалась активность данного фермента в биосинтезе холатов. Установлено, что производительность единицы цитохрома в этом процессе была приблизительно одинаковой при скармливании сбалансированной и казеиновой диет и достоверно низкой при использовании белка хлопчатника ( рис. I Г )

Следовательно, обусловленный белковым компонентом уровень цитохрома Р-450 не всегда отражает его активность в биосинтезе желчных кислот. Однако и при низкой активности фермента продукция желчных кислот на достаточно высоком уровне поддерживалась увеличением ( диета с болкоы хлопчатника) содержания фермента.

Наряду с этим была обнаружена еще одна, вероятно, существенная связь биосинтеза аелчнцх кислот и уровня свободного холестерина в печеночных микросоках. Возрастание содержания тауро-и гликотриоксихолатов о гелчи отиечаяось при одновременном повышении количества, активности цитохроиа Р-450. и содержания свободного холестерина иккросои ( табл. I ). В то же время не было обнаружено единой направленности иезду изменениями уровня холестерина Ж1 высокой плотности ( Л1Ш), общего холестерина сыворотки крови и продукцией пврвачшх гелчных кислот в желчи. Этот факт представлялся вазнг-1, тек как в дополнение я существующим представлениям о субстратной обеспеченности синтеза желчных кислот, указывающим на преимущественное значение вновь синтезированного Ы ИаССога-г а£. , 1978 ) и ( или) транспортируемого ЛПШ холестерина (£5. &оус1 >А.е1гигеп/1аир1

- 20 -

1979 ) можно указать на необходимость достаточного уровня микросомального свободного холестерина для данного процесса, не только общего холестерина микросом , 1980 ).

Таблица I

Влияние алиментарного белкового фактора на содержание белка ( мг/г печени)»цитохромов г-450, Вс (нм/мг белка микросом) и состав липвдов Ш микросомальной фракции печени

Изученные показатели

Диета с

: Диета с изолятом

ная диета ¡казеином : белка хлопчат : : ника

8,0 + 0,84 23,4 ± 3,3** 28,3 ± 4,3**

0,44 + 0,036 1,35 ± 0,1*** 0,44 ± 0,048

0,36 + 0,021 0,66 ±0,066***0,37 ± 0,019

56,9 + 4,97 36,3 ± 3,4** 34,8 ± 0,4**

2,6 + 0,30 3,5 ± 0*,18* 1,7 ± 0,36

Белок Р-450

в5

Фосфолипиды

Свободный холестерин

Эстерифици-рованный холестерин

Триглицериды

Свободные

жирные

кислоты

5,3 ± 1,16 3,4 ± 0,25

2,2 ± 1,1 15,7 ± 4,1* 3,0 ± 0,40

33,1 ± 3,85 42,3 ± 2,7 57,8 ± 9,9

- в этой и- последующих таблицах достоверно по сравнению с группой животных, получавших сбалансированное питание

Дисперсионный анализ результатов показал, что-алиментарный белковый фактор оказывает существенное влияние на секрецию гликоконъюгатов ( 91,5 ± 4,2 %ш ). Так, при скармливании диеты с белком хлопчатника и казеином их уровень в желчи-был выше, чем при потреблении сбалансированной диеты. Влияние пищевого белка на процессы конъюгирования глицином, по-видимому, реализовались и через изменения уровня микросомального белка. Об этом

а

свидетельствовало соответствие между содержанием микросомалыю-го белка в I г печени, во всем органе и содержанием гликотри-оксихолата в желчи.

Можно предполагать, что у крыс функционирует реципрокный механизм,поддерживающий постоянство мицеллообразующих компонентов желчи: желчных кислот и фосфолипадов С рис. 2.Д). Этот процесс был взаимозависимым ( г = - 0,87**). Белки пищи, воздействуя на процессы синтеза холатов, изменяют их уровень в желчи, что компенсируется модификацией секреции фосфолипвдов. В желчи оптимальное содержание последних, по-ведимому, регулируется липолитическими процессами. На это указывает достоверный отрицательный коэффициент корреляции между фосфолипидами и свободными жирными кислотами желчи ( г «-0,95**).

Белковый компонент диеты, по-видимому, не может быть фактором, нарушающим растворимость холестерина в желчи, так как величина холато-холестеринового коэффициента и оценка его растворимости с помощью триангулярной системы координат не выявили заметных изменений солюбилияации при модификации протеинов пищи. Наряду с этим установлено,что секреция холестерина зависела от степени ицдукции печеночных микросом.

Белковый компонент диеты оказывает воздействие и на секрецию жидкой части желчи. Это, по-видимому, осуществляется цутрм изменения ввделения желчных кислот, так как между суммарным содерканием холатов и объемом ввделенной за 2 чпса желчи обнаружена достоверная положительная корреляция ( г = 0,522*;

^ = 1,0 ± 0,06 х ). Уравнение регрессии указывает на преобладание желчеоттока,зависимого от желчных кислот (рис. 2

Белки пищи являются фактором возникновения дислипопротеи-немии. Протеины с хорошим аминокислотным составом увеличивали

содержание ЛИ очень низкой плотности (ЛПОШ ) без заметного уменьшения ЛПВП, что свидетельствовало об увеличении секреции ЛП. При этом в сыворотке снижалась ( табл. 2 ), а в печеночных микросомах возрастете концентрация триглицеридов I табл. I ).

Таблица 2

Влияние алиментарного белкового фактора на состав ЛП Ш, ^ипидов и эфиров холестерина ( мг/100 мл) сыворотки крови

Изученные :Сбалансирован-пока.чатели :ная диета

: Диета с казеи-: ном

: Диета с изолятом :белка хлопчатника

ЛПОШ

ЛПШ

ЛПШ

5,7 + 0,32 23,9 ± 2,0

59,2 ± 2,26

Фосфолипвды 237,6 ± 19,8 Свободный

холестерин 20,6 - 1,63

Эстерифици-рованный

холестерин 155,0 £ 6,23

Триглицервды 44,4 - 6,38

54,3 ± 4,64

Свободные

жирные

кислоты

Эфиры холестерина с:

16

18 18 18

0

1

2 3

20 : 4 и более ненасыщенными жирными кислотами

9,5 ± 1,09*

33,6 ± 2,17

48'6 ± 0,84*

221,5 ± 11,7

9,1 ± 1,-га*

23,8 £ 2,18

57,2 ± 2,49

159,9 ± 14,2*

7,6 ± 0,62*** 7,4 ± 0,2***

84,8 ± 10,1** 8,3 ± 0,81**

52,5 ±4,11

115,5 ± 14,5 20,7 ± 2,35^

31,4 ± 4,35**

7,7 + 0,59 5,3 + 0,69* 7,9 + 0,76

9,7 + 1,52 4,3 ± 0,84 8,0 + 0,57

94,4 + 3,8 52,9 ± 6,31** 72,2 + 8,63

11,5 + 1,40 22,2 ± 2,43** 25,4 + 3,63*

11,0 + 1,22 - 15,6 + 2,86

Уровень последних в ЛОШ и Ш низкой плотности ( ЛПНП ) уменьшался, а в ЛВП они не обнаруживались. Скорее всего.изученные пищевые белки активировали микросомальыый синтез триглицеридов и ЛП ( ЛПОШ и ЛШ ), одновременно в сыворотке интенсифицировался их липолия. О последнем свидетельствовала достоверная отрицательная корреляция меэду триглицеридами и коэффициентом липолиза ( свободные жирные кислоты / триглицервды ) ( ? = —0,81**), ЛПОШ и Л1Ш ( г « - 0,92*), ЛПОШ и ЛПШ ( ' >= « - 0,991*).

Изученные полноценные белки окапали гипохолестеринемичес-кий эффект, который происходил за счет всех фракций ЛП для свободного и за счет ЛПОШ и ЛПШ для эстерифицированного холестерина. Последний преимущественно уменьшался за счет производных 18 : 2, 20 : 4 и более ненасыщенных жирных кислот. Эти результаты совпадают с данными литературы ОЛ.А, ¡san Zanjei ai. ,1981;

C.í.Ufest , 1989 ) о снижении уровня холестерина сыворотки

при потреблении казеина. При этом важное значение имеет квота белка в рационе.

2. Влияние синдрома белковой недостаточности на процессы транспорта липидов.

Исходя из современных постулатов нутрициологии ( A.A. Покровский, 1975 ), дефицит пищевых веществ в организме может возникать как при их недостаточном поступлении с пищей, так и вследствие нарушения механизмов их ассимилляции и метаболизма. Недостаточная обеспеченность белком возникает в организме весь ма часто, но не является самостоятельной нозологической единицей, а скорее синдромом. Степень его биохимических признаков вариабельна, хотя имеются определенные биохимические признаки, включающие нарушение транспорта липидов. Представлялось, что

для анализа механизмов возникновения и развития синдрома белковой недостаточности может оказаться полезной его классификация.

Классификация синдрома белковой недостаточности.

I. Алиментарная форма

1) количественная ( при уменьшении количества пищевого белка в рационе );

2) качественная ( при нарушении сбалансированности белкового компонента пищи, преобладании некоторых протеинов растительного и животного происхождения);

3) дисбалансная ( при несбалансированности углеводного, витаминного и других компонентов питания).

П. Неалиментарная форма

1) пищеварительная ( при нарушениях процессов переваривания и всасывания пищевого белка);

2) синтетическая ( при подавлении процессов биосинтеза белка вследствие повреждения органов и тканей);

3) регулягорная I при подавлении процессов биосинтеза белка и активации тканевого протеолиза, обусловленных изменением нейро-эндокринного статуса организма);

4) катаболическая ( при распаде органов и тканей, значительных потерях белка организмом).

Ш. Смешанная форма

При выполнении данного исследования были рассмотрены алиментарная качественная ( диета с пшеничной клейковиной), алиментарная дисбалансная ( дефицит токоферола, ретинола, аскорбиновой кислоты), алиментарная смешанная ( диета с пшеничной клейковиной и дефицитом витаминов А,Е,С), неалиментарная . катаболическая ( гипокинезия) и диеты с казеином, изолятом белка хлопчатника , смешанные алиментарно-неалиментарные ( гипокинезия и диеты: с пшеничной клейковиной; дефицитом витами-

нов А,Е,С; пшеничной клейковиной и дефицитом витаминов А,Е,С) формы синдрома белковой недостаточности.

2.1. Алиментарные формы синдрома белковой недостаточности.

Изученные формы синдрома оказали существенное влияние на биосинтез желчных кислот, которое было связано с изменением уровня цитохрома Р-450 в печеночных микросомах ( Ы.и.ГаппароЗ 1967).Алиментарная качественная форма характеризовалась достоверным снижением содержания этого фермента во всей печени, тогда как алиментарная смешанная - его увеличением. Последнее происходило при возрастании содержания микросомального белка ( рис. I Б). Ранее ( Г.А.Нулкыбаев, 1989; П.С. Ников,1989) электронно-микроскопически обнаружили на этой модели индукцию печеночных микросом. Однако^активность цитохрома P-45Ü в биосинтезе холатов была достоверно снижена С рис. I Г). Ингибирование микросомального окисления приводило к накоплению свободного холестерина в микросомах. Наиболее заметным при алиментарной качественной и смешанной белковой недостаточности было накопление триглицеридов в этой печеночной фракции ( табл. 3 ). Наряду с известным механизмом жировой инфильтрации печени при белковой недостаточности, связанным с нарушением их транспорта в составе ЛП ( A.A. Покровский, 1978; В.Н.£цевм1 • СХМоп^отгу, 1982 ), обнаруженными в данном исследовании, можно указать на возможное ингибирование липолитического процесса. Установлено значительное уменьшение коэффициента липолиза и отрицательная корреляционная зависимость между свободными жирными кислотами и триглицервдами микросом. Для алиментарной качественной формы fj = - 0,987* и для алиментарной смешанной rs = - 1,0***. Обнаружена также отрицательная корреляция между фосфолипвдами и триглицервдами, вероятно, указывающая на альтернативность

оомена этих классов липидов в микросомах.

Таблица 3

Содержание белка ( мг/г печени).цитохромов Р-4Ь0 и в^ ( нМ/мг белка микросом) и состав липидов Ш микро-сомалыюй фракции печени при алиментарных формах синдрома белковой недостаточности

Изученные показатели

Алиментарная ¡Алиментарная : Алиментарная качественная :смешанная(бел~: дисбаланс.ная

форма :ково-:ная) витамин- : форма : форма

Белок 10,4 ± 1,13 13,5 ± 0,65*** 14,3 + 1,3**

Р-450 0,27 + р 022***0,36 ± 0,021 0,36 + 0,027

в5 0,35 ± 0,032 0,4 3: 0,02 0,4 + 0,02

Фосфолипиды 46,6 ± 2,63 54,4 ± 6,8 46,8 + 10,8

Свободный холестерин 21,5 ± 0,53?» 5,1 ± 1,6 1,4 + 0,36*

Эстерифициро-ванный холестерин 3,7 ± 0,91 4,2 ± 0,57

Триглицериды 16,5 ± 3,9** 15,7 ± 7,6 -

Свободные жирные кислоты 11,8 ± 0,76 26,0 ± 7,6 51,8 + 11,0

При сивдроме белковой недостаточности сохранялся механизм, поддерживающий постоянство концентрации мицеллообраяующих компонентов. Секреция холестерина желчи заметно увеличивалась, что приводило к уменьшению величины холато-холестеринового коэффициента, который,однако,не был ниже, чем при сбалансированном питании и критического уровня конкрементообразования.

Дислипопротеадемия при алиментарной качественной и смешанной формах синдрома белковой недостаточности отличалась возрастанием уровня ЛПН1, снижением ЛПВП за счет ЛПШ^, Происходило перераспределение холестерина во фракциях Ж] со снижением в

ЖЮНП, ЛПШ и увеличением в ЛПШ, что указывало на подавление продукции и элиминации ЛП. Скорее всего это было обусловлено

неполноценностью пищевого белка, так как при дефиците витамина А,Е,С содержание ТГ в печеночных микросомах уменьшалось. Одновременно отмечена тенденция к ингибированию сывороточного липо-лира.

2.2. Неалименгарная. и алиментарно-неалиментарная формы синдрома белковой недостаточности.

Интегральным выражением формирования неалиментарной ката-болической формы при гипокинезии было уменьшение массы тела вне зависимости от белкового компонента диеты ( рис. ЗА). Также достоверно уменьшалась и масса печени ( рис. 3 Б ). Однако при гипокинезии и алиментарной смешанной форме масса печени не изменялась, что, вероятно, указывает на перераспределение белкового фонда организма, связанное с дефицитом витаминов I A.A. Алдашев, 1986; Ш.С. Тажибаев, 1986 ). Несмотря на это, во всех экспериментальных группах обнаружено увеличение печеночного секрета, зависевшее от количества растворенных в нем желчных кислот ( г « 0,588*; у » 1,0 - 0,05х) ( рис. 4 А).

Скармливание полноценных белков при гипокинезии не способствовало поддержанию уровня цитохрома Р-450 в печени ( рис. 4Б), тогда как алиментарная качественная и смешанная формы обусловливали его возрастание, достоверное в последнем случае. По-видимому, это указывает, что при алиментарно-неалиментарной форме синдрома белковый фонд организма используется для поддержания процессов микросомального окисления. Об этом свидетельствовали изменения содержания первичных холатов в желчи ( рис. 4 В ). Реципрокно количеству цитохрома Р-450 изменялась его активность в синтезе желчных кислот ( рис. 4 Г). При гипокинезии также обнаружена достоверная корреляция мевду содержанием цитохрома Р-450 и уровнем первичных холатов в желчи

- 28 -

( г - 0,554*; у- = 8,7 + 5,5 х).

На всех изученных рационах питания при гипокинезии отмечено снижение уровня гликоконъюгатов и увеличение тауроконъюгатов. Возможно^глицин используется в качестве субстрата глюконеоге-неза, активирующегося при белковой недостаточности ( Э.К. Му-хамеджанов, 1990) и, в частности, при гипокинезии ( А..С.Ушаков и соавт.,1975 ). Возрастание содержания диоксихолатов в желчи, по-ввдимому, указывает на интенсификацию процессов в энтеро-гепатической циркуляции при ограничении подвижности ( К.В. Смирнов, 1990; A. f. Hoffman . И80). Двухфакторный анализ продемонстрировал, что изолированное влияние гипокинезии было достоверным только на секрецию суммарных желчных кислот и гликотриоксихолатов. Выделение остальных компонентов зависело от воздействия алиментарного белкового фактора и совместного влияния белков пищи и гипокинезии ( табл. 4 ). Следовательно, адекватное белковое питание в состоянии значительно изменить неблагоприятное воздействие гипокинезии на секрецию желчи и ее компонентов.

При ограничении подвижности секр еция фосфолипидов коррелировала с выделением холестерина ( г = 0,588*; у- = 1,0 + 0,05х) В ряде экспериментальных групп холато-холестериновый коэффициент был весьма низким. Оценка растворимости холестерина по три-ангулярной системе координат согласуется с данными выводами. Это поддерживает мнение К.В. Смирнова (1990 ) о том, что гипокинезия может быть одним ия факторов конкрементообразования.

Биохимические механизмы изменения липедного состава мик-росомальной фракции печени при гипокинезии включали модификацию липолитического распада фосфолипидов., триглицеридов и окисления холестерина, нарушение образования и секреции Ш.

Таблица 4

Двухфакторный дисперсионный анализ влияния белкового компонента диеты и гипокинезии на секрецию желчи, желчных кислот и липидов

Анализируемый:Сила влияния покапатель ¡алиментарного

Сила влияния гип^кунезии

Сила совместного влияния

Секреция желчи 41,5 (мкл/мин/ /ЮОг массы тела) ± 15 12,4 + 9,2 40,7 + 15,4

Секреция сум- 60,5 мы желчных кислот (нм/мин/ /ЮОг массы тела) ± 4,95** 10,1 ± 2,53* 27,5 ± 8,3*

Секреция суммы первичных желчных кислот 42,7 ± 1,4* 8,6 ± 9,0 44,4 ± 5,6**

Секреция тау-ро триоксихо-латов 30,5 ± 7,7 ± 6,9 38,6 ± 3,1**

Секреция гли-, котриоксихо-латов 62,5 ± 0,9** 26,4 ± 7,4* 7,2 ± 9,2

Секреция тау- родиоксихо- латов 35,6 ± 1,6** 7,6 ± 9,2 40,6 ± 5,9**

Секреция фос-фолипвдов 28,3 ± 7,2* 5,7 ± 2,6 28,3 ± 7,2

Секреция холестерина 41,4 ± 1,6** 26,6 ±8,1 22,7 ± 8,5

Секреция сво- 52,2 ± 1,5** 0,7 ± 12,4 52,9 ± 5,9**

кислот

Неалиментарная катаболическая форма синдрома белковой недостаточности, особенно в сочетании с алиментарными формами, ингибировала активность липопротевдлипазы и печеночной тригли-церидлипазы, сопровождавшееся возникновением дислипопротеиде-мии. Это приводило к увеличению содержания ШОНП, ЛПШ.

Полноценные пищевые белки уменьшали данный эффект. При этом в сыворотке во всех случаях увеличивалось содержание свободных жирных кислот. Ложно полагать, что последние поступали в кровь из тканевых источников, где липолиз активировался стрессорными гормонами ( И.В. Федоров, IS8I; C.B. Самратова, 1984). Следовательно^ подсчет коэффициента липолиза не может использоваться для оценки интенсивности сывороточного липолиза при гипокине -эии. Обнаружена достоверная обратная корреляция между ЛПОШ и ЛВП ( Г «-0,419*; У ■ 68,2 - 1,02х), что, по-вццимому, является доказательством сохранения процессов гидролитического распада липвдов в сыворотке крови.

Необходимым условием для реализации гиперхолестеринеми-ческого эффекта гипокинезии является ее сочетание с алиментарными формами синдрома белковой недостаточности. При этом преимущественно увеличивалось содержание эстерифицированного холестерина в основном па счет производных полиненасыщенних жирных кислот. £ирнокислотный состав диет был постоянном, в связи с этим нз исключено, что для эстерификации привлекались эндогенные источникй. Это подтвервдается тем,что в группах с дефицитом антиоксидантных витаминов увеличивалась концентра-4ция в сыворотке и производных 16 : 0 кислот, а при отсутствии дефицита витаминов только полиненасьлценных. Определенных закономерностей в перераспределении эфиров холестерина во фракциях ЛП обнаружено не было. Известно, что процессам пероксвдации в основном подвергаются полиеновые жирные кислоты ( В.Б. Спири-чев, 1975 ). Полноценный белковый компонент диеты ( сбалансированная и казеиновая диеты),напротив, оказал гипохолестеринемиче-ское воздействие при гипокинезии. Оно происходило за счет свободной и эстерифицированной форм. Среди последней достоверно

- 31,-

уменызалось содержание всех фракций эфиров.

5. Влияние алиментарного белкового фактора на процессы транспорта липидов при интоксикации ксенобиотиками

Для питания современного человека характерно загрязнение различными чужеродными примесями. Они могут попадать а пищу антропогенным путем, как, например, в случае с пестицидами / У.Л.Кузьминская и соавт., 1981 /; быть продуцентами патогенных микроорганизмов / А.Л.Покровский и соавт., 1977 / - афлаток-сины; являться результатом неправильного хранения и кулинарной обработки пищевых продуктов - нитрозамкны / Б.И.Рубецчик и соавт., 1985; Г.Ф.Жукова и соавт., 1990/-. В сельском хозяйстве наиболее распространено применений /-гоксахлорциклогексана // - ГЩГ, линдана /. Одним из наглых бкохииических проявлений интоксикации считается ивдукция печеночных мшсросом, многоцелевых микросомальных окседаз, для которых У-ГХЦГ является индуктором фенобарбиталового типа / Б.Б.А}гиров, 1535', А.И. Арчаков, 1975; В.В.Ляхосяч, И.Б.1£фЛов, 1991 /. Тагасе, кок и большинство хлорорганичэсннх пестицвдоз лквдан является липофильным соединением, в связи о чзу он склонен накапливаться в жировой ткани и внутриклеточных липидах.

К гидрофобным ксенобиотикам относится и е$латоксш Вр Для реализации токсических мутагенных и кгнцэрогенных свойств афлатоксинов необходима мэтаболичаскал активами печеночными минросомальными оксидаэаии. Основой слияния ефяатокснна на метаболизм считается ингнбиройанио белкового синтеза, связанное с нарушением образования ДМС-зависимой ГШ-полимаразы и лабили-зация лизосомалькых мембран с посладущзй двотрукцкзй внутриклеточных органелл. / А.Л.Покровский, В.А.Тутельяи, 1286 /.

Метаболизация растпор;э/ых а еодо И-нитрозаминов такле проирходит при участии мнкросомалького окисления в печени / Т.И.Давыдэнко и соавт., 1990 /. При этом гштрозосоединения не ивдуцируют, а уменьшают содержание цитохрома Р-450 / А.Ю.Холдес и соавт., 1980 /. По-видшоцу, это обусловлено значительными поврелдениями обмена нуклеиновых кислот и белка за счет активации их распада и подавления биосинтеза / Т.С.Хайдарова, 1984; Т.Ш.Шарманов, 1985 /.

Изменения биосинтеза жёлчных кислот при острой интоксикации X-ГХЦГ были связаны с уровнем цитохрома Р-450 в печеночных

микросомах. Данный индуктор увеличивал содержание мшсросомаль-ного белка, монооксигеназ, массу печени. Это сопровождалось возрастанием печеночного коэффициента. Особенно заметным , увеличение было при 12-часовой экспозиции пестицида / рис.5 А,ЕЙ. На этом сроке секреция жёлчи и первичных холатов также била максимальной / рис. 5 В /. Указанные изменения происходили при снижении содержания #-ГХЦГ в печеночных микросомах / Ш.А.Баканов и соавт., 1977 /. Не исключено, что интенсификация жёлчеотделения является одним из адаптивных путей выведения линдана из печени. При суточной экспозиции сохранялась индукция цитохро-ма Р-450 и максимального окисления холестерина / рис. 5 /, тогда как уровень ксенобиотика б печени существенно снижался / Ш.А.Баканов, 1977 /. Уровзнь циуохрома Р-450 и секреция первичных холатов достоверно коррелировали /г = О.ЭЗ504 /.

На фоне алиментарной смешанной белково-витаминной формы синдрома белковой недостаточности острая затравка пестицццом также шдзщировала микросомалькые оксцдазн / рис. б А,Б /. Тогда как при 12- и 24-часовой экспозиции секреция первичных жёлчных кислот была снижена / рис. 6 В /, Необходимо отметить, что при этом первичные холаты доминировали в кёлчи, тогда как вторичные - диоксихолановые кислоты в жёлчи практически но обнаруживались / рис. 7 /. Это, вероятно, указывает на существенное повреждение энтеро-гепатичзской циркуляции иёлчиш: кислот линданом, что подтверждается данными Ш.А.Баканова и соавт. / 1977 / о значительном увеличении концентрации пестицида в кишечном содержимом при белковой недостаточности. Не исключено, что это обусловлено снижением всасывания. Преобладающей первичной жёлчной кислотой была тауротриоксихолановая, мезду ней и гликотриокскхолатом была обнаружена обратная корреляционная зависимбсть.

Как при сбалансированном, так и при дисбалансном питании секреция жёлчи коррелировала с ввдвлениеы суммарных холатов, что указывает на сохранение зависимого от жёлчных кислот жёлчевцделения при интоксикации линдаком.

Подострая и хроническая затравка у-ГХЦГ на фоне сбалансированного и дисбалансного питания индуцировали микросомалькые монооксигеназы. Тогда как интенсификация биосинтеза жёлчных кислот обнаруживалась только при полноценном белковом питании.

При этом в мшсросомалыюй фракции накапливался холестерин как в свободной, так и эстерифицированной форме. Одновременно имелась тенденция к уменьшению содержания фосфолипидов, возрастанию содержания триглицервдов. Манду содержанием фосфолипидов и свободных лсирних кислот сохранялась отрицательная корреляция /г = -0,9* /. По-видимому, алиментарная смешанная форма синдрот белковой недостаточности способствовала повреждению процессов микросомального окисления холестерина при интоксикации ¿'-ГХЦГ путем нарушения всасывания, элиминации ксенобиотика, изменения изоферментного спектра цигохрома Р-450 и физш<о-хими-ческих свойств печеночных микросом. Сходные механизмы нарушения биосинтеза желчных кислот в печеночных микросомах и энтеро-ге гс а ти чеснет"! циркуляции холатов, по-вцдимому, были характерны для интоксикации гидрофобным афлатоксином и гидрофильным И-ШШ. Существенное значение, вероятно, тлела'способность ксенобиотиков индуцировать изофермент цитохрома Р-450 - холесте-рин-7д.-гидроксилазу. Для реализации их действия на фона белко-во-витаиинной недостаточности на процессы конъюгации имело значение шгибирование биосинтеза белка и активирование его распада, приводящее к уменьшению субстратной обеспеченности процесса глицином. В нарушении энтеро-гепатической циркуляции жёлчных кислот, по-видимому, имеет значение нарушение состава кишечной микрофлоры ксенобиотиком. Кроме того изменяется секреция жёлчи, повреждается кишечная стенка, ингибируется гидроксилирование, вторичных холатов в печени. Реализация действия алиментарного ¿актора, вероятно, также. происходит по этим путям. Белково-витаминная недостаточность прологирует пребывание ксенобиотика в просвете кишечника и его контакт с микрофлорой.

Установлено, что изученные ксенобиотики обладали различным эффектом на уровень секреции липидов с жёлчью. Так, ксенобиотик фенобарбиталового типа - у -ГХЦГ при суточной экспозиции увеличивал, афлатоксин В^ не изменял, а растворимый в воде N-¡ШИП уменьшал содержание липидов в жёлчи. Для действия гидрофобных ксенобиотиков на фоне сбалансированного питания была также характерна определённая реципрокность в секреции суммарных жёлчных кислот и липидов жёлчи, хотя корреляционный анализ не обнаружил достоверной зависимости. Есть основания полагать, что интоксикация ксенобиотикам* приводит к формированию везикулярной формы

транспорта липидов, независимой от кёлчных кислот ,

1930 /. Обращало внимание, что на обоих экспериментальных рационах питания при суточной экспозиции пестицида обнаруживалась достоверная положительная корреляция между объектам желчи и её липидшш, а также отрицательная - между суммарными жёлчными кислотами и отдельными липидами. Кроме того, обнаружены достоверные положительные коэффициенты корреляции между отдельными классами липидов жёлчи, по-видимому, указывающие па взаимозависимость их секреции печенью. Причем, если при сбалансированном питании такая корреляция была характерна для фосфолипидов и свободных жирных кислот, то при полидисбалансном питании - ещё и для холестерина. Не исключено, что основной причиной формирования везикулы была необходимость элиминации гидрофобного ¿С-ГХЦГ и его метаболитов с жёлчью. Известно, что определённую роль в транспорте липидов жёлчи выполняют белки, в том числе и апопротеины /А,Лги£ел , 1984;0Ми.2?с:1е1 о£, 1985 /, по-видимому, участвулцие в образовании везикулы жёлчи, С уменьшением секреции жёлчных кислот в жёлчи увеличивалось содержанке белка, при этом оно положительно коррелировало с уровнем липидов /г 0,94**/. Аналогичный процесс, вероятно, имел место и при интоксикации на фоне алиментарной смешанной формы синдрома белковой недостаточности. Однако, секреция белка и липадов возрастала в меньшей степени, а секреция жёлчи и жёлчных кислот но уменьшалась, а увеличивалась. Ваделение белка коррелировало с секрецией холестерина.

Наряду с индукцией шшросомальных мембран, к механизмам модификации липвдного состава жёлчи, по-видимому, следует отнести липолиз мембранных и жёлчных липидов. Так, на фоне сбалансированного питания при максимальной индукции печеночных микросом, оксидаз со смешанной функцией, наиболее значительном печеночном коэффициенте / 12-часовая экспозиция /, секреция жёлчи и липидов была минимальной, а уменьшении степени индукции / 24-часовая экспозщия / соответствовало нарастание жёлчеотдзления, секреции липидов / рис. 8 А /. Причем, среди последних значительно увеличивалась доля свободных жирных кислот, резко вырос коэффициент липолиза, также, как и на других сроках экспозиции обнаружена достоверная отрицательная корреляция /г = -0,89х / между ними и фосфолипидами. Не исключено, что липолитическио процессы

в печени при суточной экспозиции /-ГХЦГ реализуются благодаря образованию вторичных лизосом / З.А.Шкурупий, 1989 /, необходимых для секреции липидов жёлчи / Б.К.Безпрозванный, 1975 /. Из приведённых результатов также следует, что секреция липидов жёлчи участвует в компенсаторных механизмах поддержания массы печени при интоксикации линданом. На фоне белково-витамшшой недоступности максимальная индукция микросомальных ыонооксиге-наз и увеличение печеночного коэффициента происходило позже -через 24 часа после затравки у-ГХЦГ. Это также сопровождалось уменьшением секреции липидов жёлчи / рис. 8 Б /, тогда как коэффициент липолиза и уровень свободных жирных кислот в жёлчи были весьма значительными, содержание фостюлипидов уменьшалось, а мевду ними обнаружен достоверный отрицательный коэффициент корреляции /г = -0,98**/. Значительное преобладание содержания в жёлчи свободных жирных кислот над фосфолипидами обнаружено на кратких сроках экспозиции /3-й 6-часовая / пестицида, что, вероятно, указывает на раннюю активацию липолитичесхих процессов в печени при белково-витаминной недостаточности. Ещё одним доводом в пользу мембранолитического действия линдана являются результаты изучения динамики выделения ВДА - продукта перекис-ного окисления липидов, содержание которого в жёлчи при острой затравке нарастало. Кинетика секреции !Щ\ за 2-часовой период также подтверждает деструкцию печеночных мембран. Если в контроле нет существенной разницы в концентрации данного метаболита между первым и вторым часом исследования, то по мере увеличения экспозиции пестицида его уровень в жёлчи, секретируемой за 2 часа исследования, нарастал. По-ввдимому, причиной этого явилось снижение устойчивости печеночных мембран к нарушению жёлчеотто-ка. При подострой и хронической интоксикации увеличения секреции ВДА обнаружено не было.

Проведённый двухфакторный дисперсионный анализ / табл.5 / показал, что интоксикация линданом является ведущим фактором, изменяющим секрецию жёлчи и её липвдных компонентов. В этих условиях воздействие изолированного алиментарного фактора оказалось незначительным. В то же время питание существенно изменяло силу воздействия ксенобиотика, что, вероятно, является доказательством важности модификации белкового состава рациона у лиц, имеющих контакт с ¿Г-ПХДГ. Интоксикация ксенобиотиками приводила к возникновению дислипопротевдемии, которая формировалась

в основном за счёт изменения уровня ЛПОНП и ЛПНП. При воздействии гидро.£юбных ксенобиотиков подавлялся синтез эфиров холестерина, снижалось их содержание, что приводило к значительному увеличению концентрации свободного холестерина / табл. 6 /. Затравливание на фоне белково-витаминной недостаточности приводило к ингибироваяшо липолиза и увеличению концентрации тригли-царидов сыворотки. Сопоставление изменений липидного состава сыворотки крови и печеночной микросомальной франции при интоксикации N-НШШ на фоне сбалансированного питания показало, что накоплении глкцеридов в микросомах соответствует увеличение их концентрации в сыворотке крови и во фракции ЛПНП, учитывая,

Таблица 5

Двухфакгорный дисперсионный анализ влияния белкового компонента диеты и интоксикации у-ГЩ1 на секрецию жёлчи, жёлчных кислот и липидов

Анализируемый :иила влияния :Сила влияния :Сила совместного показатель :алиментарного : ¿г-ПХПГ :влияния

:фактора / % ( : / % / :факторов / % /

Секреция жёлчи /мхл/ыин/100 г массы тела/ 8,7 + 1,4** 42,1 + 4.3КН 40,2 + 4(4®Е

Се1феция суммы жёлчных кислот /нмоль/мин/ ЮОгыассы тела/ 8,8 + 1,3® 29,0 + 9,4х 39,0 + 8,0^

Секреция суммы первичных жёлчных кислот 8,6 + 1,4й1 39,9 + 4,5хзг 44,8 + 4,1ю4

Секреция тауро-холево.й кислоты 8,7 + 1,4** 41,Г + 4,4яэг 43,0 + 4,2®

Секреция глико-холевой кислоты 8,4 + 1,4*« 37,4 + 4,7Ж 30,2 + 5,2х

Секреция тауро- дезоксихолевой кислоты 9,1 + 1,4;зг 44,3 + 4,2КК 38,2 + 4,6х«

Секреция фосфо-лшидов 7,9 + 1,4К 35,8 + 4,8КН 39,0 + 4,6КК

Секреция свободных жирных кислот 9,1 + г,з 43,0 + 4,3ю1 27,0 + 5,б5®

Секреция холестерина 7,6 + 1,4" 36,9 ± 4,7** 41,1 + 4,4ю5

- 37 -

что при этом активность липолитических ферментов сыворотки достоверно не изменялась, можно полагать, что возрастание уровня триглицеридов обусловлено увеличением их синтеза. Изменений спектра ЛП обнаружено не было. При подострой затравке среди ЛП сыворотки появились хиломикроны / ХМ /, имеющие, как известно, кишечное происхождение / А.Н.Климов, 1986 /, поэтому три-глицериды сыворотки имели и алиментарное происхождение. В крови снижалась липолитическая активность.

Таблица 6.

Влияние острой интоксикации ксенобиотиками на состав ЛП / % / и липидов / мг/100мл / крови на фоне сбалансированного питания.

Изученные ¡Сбалансиро* показатели :ванное ! ¿"-ГХЦГ :питание :

Афлатоксин :

В^ . ! N -НИИ

ЛПОНП 11,3 + 1,0 22,9 + 1,3**17,6+ 0,12еег 15,5 + 3,0 ЛПНП 17,7 + 1,7 9,4 + 0,6* 30,7+ Г.Т3001 14,9 + 1,9 ЛПВП 62,5 + 1,3 60,0 + 1,0 37,9+2,б10* 65,7 + 3,6 $осфолипвды180,0 +12,5 124,5 ¿0,2й 62,зТ 0,7:сст238,3 + 1,3ЗКЯ Свободный ,,

холестерин 30,8 + 7,7 96,7 + Т.Э'1 18,0+ 2,6 .10,5 + 1,2^

Эстерифици-

рованный „„ т„

холестерин 58,4 + 7,8 34,8 + 8,7 6,6+ 0,2** 127,7 + 16,8^и

Триглицери- ,„ ,,

да . 43,7 + 3,5 27,1.+ 0,9зе{26,2+ 0,9^ 10,4 + 0,9"!

Свободные

жирные „

кислоты 30,8 + 7,7 23,1 + 0,3 18,0+ 2,6 20,4 + 2,8

Алиментарная качественная форма синдрома белковой недостаточности при острой затравке П-НПИП также характеризовалась увеличением доли ЛПОНП и ЛПНП. Причем в последней содержание . триглицеридов увеличивалось, а в ЛПОНП - уменьшалось. При подострой затравке в составе ЛП появились ХМ, липолитическая . активность уменьшалась преимущественно за счёт липопротеидлипа-зы, а в печеночных микросомах триглицериды не обнаруживались. Следовательно, этот класс липидов в ХМ, ЛПОНП и ЛПНП имел, в основном, кишечное происхождение.

Остр<*л затравка М-НПИП на фоне алиментарной смешанной формы синдрома белковой недостаточности приводила к появлению

ЛП промежуточной плотности / ЛГШП /, доля ЛПОНП при этом заметно не изменялась. Содержание триглицеридов в цельной сыворотке и фракции ЛППП - ЛПНЛ было значительно увеличено, а в ЛЛОПЛ - уменьшено относительно контроля. Причиной этих изменений, по-видимому, было снижение липолитической активности сыворотки. В печеночных микросомах триглкцериды но определялись, что скорее всего указывает на кишечноо происхо:вдешю ЛП.

При ггодострой затравке на этом алиментарном фоне, в связи с появлением ХМ, содержание триглицеридов увеличивалось в сыворотке, объединённой преципитацией фракции ХМ-ЛПОПП, а также в ЛППП. Хотя общее содержание последних было снижено,а ЛППП не определялись электрофоретически. Лшолитичоская активность сыворотки была минимальной, а среди липццов микросом было повышено содержание глицерццов. Следовательно, при нитрозаминовой интоксикации нарушались процессы секреции ЛП печенью и основным поставщиком их в кровь, вероятно, становился кишечник. Рассмотренные фор;гы алиментарной белковой недостаочности усугубляли нарушение выделения ЛП почонью, а тате ингиб]грование сывороточного липолиза.

ВЫВОДЫ

I. Белковый алиментарный фактор оказывает влияние на процессы транспорта липццов в сыворотке крови и жёлчи. Для переноса липидов в сыворотке имеют значение изменение процессов синтеза в печени болкового и липщщого коипснентоз ЛП, их секреции, активности липолктичаекцх ферментов. Воздействие на транспорт жёлчных кислот в жёлчи реализуется чероз изменение интенсивности процесса синтеза, зависящего от содержания цитохрома Р-150 и свободного холестерина в 1.ип:росомальной фракции печени, конъюгации жёлчных кислот глицином. Содержание перви>иых жёлчных кислот в жёлчи может использоваться для оценки уровня цитохрома Р-450 в печени.

Я. Установлено функционирование механизма, поддерживающего постоянство суммарной концентрации основных м; ще л л о о б раз ующтс компонентов яелчи: жёлчных кислот и фосфозипцдов, О: включает их реципрокную секрецию печэнью и процессы накопления свободны;: жирных кислот в жёлчи, по-видимому, вследствие распада фосфо-липидов. Протеиновый компонент пищи заметно вменяя процессы секреции и в значительно неньиой степени влиял на липолиз.

3. В результате изучения различных алиментарных форм синдрома белковой недостаточности установлено нарушение секреции

ЛП печенью, ннгибирование липолитических ферментов сыворотки крови, уменьшение образования и секрецш желчи. Перечисленное, а также подавление липолитических процессов в печени приводило к накоплению триглицеридов з этом органе, что является основой для возникновения жирового гепатоза при нарушениях белкового питания. Особенностями алм-кнтарной смешшшой / белково-витамин-ной / формы синдрома белковой недостаточности является увеличенное использование эвдогвшшх источников белка, о чем свидетельствовало изменение печеночного коэффициента, содержания микро-сомального белка. Изменения структурно-функциональных свойств мембранных образований иикроссыальной фракции печени определяли особенности формирования и секреции как ЛП, так и яёлчи.

4. Ограничение двигательной активности приводило' к возникновении неалиментарной катаболической формы синдрома белковой недостаточности. В связи с этим протеиновый алиментарный фактор оказывал существенное влияние на процессы транспорта липидов в этих условиях. Изученные алиментарные формы синдрома белковой недостаточности при гипокинезии способствовали перераспределения белкового фоцца организма, поддержании уровня микросомального белка и цитохрома Р-450 в печени. Отмечено подавление синтеза, секреции ЛП и замедление их деградации липолитическими ферментами. Полноценное белковое питание уменьшало, неполноценное -усугубляло этот патогенный эффект. При ограничении двигательной активности белковый компонент пищи определял интенсивность биосинтеза жёлчных кислот. От алиментарного белкового фактора не зависели: увеличение объёма секретируемой жёлчи, процесс конъюгации жёлчных кислот глицином, а также энтеро-гепатическая ' циркуляция холатов. При гипокинезии нарушался компенсаторный механизм, поддерживающий постоянство концентрации мицеллообра-зузадих компонентов жёлчи, увеличивалась секреция холестерина. Причем указанные нарушения в незначительной степени зависели

от белкового питания.

5. Интоксикация ксенобиотиками приводила к возникновению дислипопротеидемии. В её основе лезат индукция печеночных микро-сом, увеличение доли ХМ, ЛПОНП и ЛПНП, имеющих кишечное происхождение, ннгибирование сывороточных липолитических ферментов, нарушение элиминации ЛП из крови. Повреждешш процессов эстери-фикации холестерина в значительной мере зависели от особенностей дест '/кции печени ксенобиотика.™. Интенсивность биосинтеза

жёлчных кислот в значительной маре определялась способностью конташнантов индуцировать цитохром Р-450. Taie, линдан, увеличивавший количество макросом и анатоксин Bj, шадуцировавший цитохром Р-450, приводили к увеличению содержания первичных жёлчных кислот в жёлчи, а при интоксикации N-НПИП этого не отмечалось. Увеличение секреции липидов с жёлчью также зависело от индукции печеночных макросом.

6. Отмеченные различия в транспорте липидов при нарушениях белкового питания определялись замедлением всасывания ксенобиотиков в желудочно-кишечном тракте. При несбалансированности белкового компонента пищи отмечено усугубление ингибирования ли-полиза и элиминации ЛП, обусловленное ксенобиотиком. Алиментарный белковый фактор изменял степень индукции печеночных моноок-сигеназ и вследствие этого интенсивность синтеза жёлчных кислот. При неполноценности белкового питания и действии ксенобиотиков значительно возрастало содержание свободных жирных кислот в жёлчи, изменялось их соотношение с фосфолипвдами. Вероятно,

это обусловлено активацией гидролитических процессов в печени вследствие образования вторичных лиэосом.

7. Разработаны и внедрены методики количественной тонкослойной хроматографии общих липидов, эфиров холестерина, глицеридов, еолчных кислот, основанные на применении денситометрш:.

8. Методики количественной оценки липидного состава сыворотки irpoBïi и кёлчи использованы для разработки способов диагностики обеспеченности организт белком, литогенцости жёлчи, хронического энтерита, ааиической болезни сердца.

РЕКСШЩАЦЙИ И ПУТИ ВНЕДРЕНИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССВДОЗАНИЯ

1. Разработаны методики количественной оценки состава общих лшзвдов, эфкров холестерина, глкцеридоа, жёлчных кислот сыворотки крови, жёлчи, печеночных микросоц, Модифицировшы методы ввделенкя микросомальной фракции печени и отдельных классов

ЛП крови.

2. Экспериментально доказана возможность подсчёта содержания цитохрома Р-450 в печени по уравнению регрессии с предварительным определением уровня первичных холатов жёлчи.

3. Для оценки сбалансированности белкового компонента диеты предложено использование определения концентраций свободных жирных кислот и триглицервдов сыворотки крови с подсчётом их соотношения / свободные жирные кислот/триглщерзды /, содержания

- 41 л .

суммарных холатов, первичных жёлчных кислот, гликохолатов и фос-фолипццов в жёлчи.

4. Разработана классификация синдрома белковой недостаточности. Экспериментально обоснована необходимость модификации белкового компонента диеты доя устранения изменений лкпидного обмена при длительной гипокинезии.

5. Экспериментально обоснована необходимость оценки липид-ного, липопротеидного состава сыворотки крови и показателей секреции жёлчных кислот, липидов с зёлчью для диагностики интоксикации ксенобиотиками.

6. Определение липидного состава сыворотки крови и -ёлчи методом тонкослойной хроматографии использовано для разработки биохимической диагностики ряда заболеваний.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ЖЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. О морфогенезе гепатомы, индуцированной п-ДАБ в нормальной и предварительно денервированной печени // Здравоохр. Казахстана.- 1976.- ¡¡59.- С.82-86.

2. Уровень синтеза холестерина и морфогенез экспериментальной гепатомы, индуцированной пара-диметиламиноазобензолом'// ,Тр. ют-та / Каз.НИИ онкол. и радиол. 1975. т.Ю. С.249-253.

3. К вопросу об обмене холестерина при нейрогенной дистрофии печени // Патология пищеварения и проблемы питания: Сб. научктр.Актюб.гос.мед.ин-та. Актюбинск, 1977,- С.24-26.

4. Липидшй состав крови у детей, больных вирусный гепатитом // Здравоохр.Казахстана.- 1980.- 1311.- С.54-56 / в соавт.

с Т.Х.Карибдяановой, Ш.А.Бейсембаевой /.

5. Об участии пищевых липидов в регуляции синтеза холестерина // Вопр.питания.- Г4,- 1981.- С.З-б / в соавт. с Т.Ш.Шарма-новым /.

6. Состояние процессов образования и вцделения жёлчи у больных ожирением // Акт.вопр.пробл.питания: Сб.науч.тр. Каз.филиала Ин-та питания АМН СССР. Алма-Ата, 1982.- С.147-151 / в соавт. с Р.Х.Кадыровой, Б.А.Салхановыл, Р.А.Шаниевой /.

7. Гипокинезия и питание. Влияние рациона с пшеничной клейковиной в качестве источника белка на системы транспорта , липидов в организме при длительном ограничении подвижности // Акт.вопр.пробл.питания: Сб.науч.тр.Каз.филиала Ин-та питания АМН СССР. Алма-Ата, 1982,- С.63-67 / в соавт. с Ш.С.Таяибаевым, Э.Х.Абдрашитовой, М.К.Биряановым и др. /.

8. Диагностическая ценность изучения липидного состава сыворотки крови у больных с заболеваниями сердечно-сосудистой системы// Пробл.совр.кардиологии в Казахстане: Сб.науч.тр. Алма-Атинского гос.мед.ин-та, Каз.НИИ кардиологии. Алма-Ата, 1982,- С.56-62.

/ в соавт. с Ш.С.Талибаввым, Э.Х.Абдрашитовой, В.Г.Шипулиной /.

9. Количественная тонкослойная хроматография липидов и эфиров холестерина // Лабор.дело,- 1983,- Н?12.- С.17-18.

10. Нарушения липидного обмена в организме при длительном потреблении рациона с пшеничной клейковиной в качестве источника белка // Вопр.питания.- 1983.- С.28-32 / в соавт.с Ш.С.Та-жибаевыы, В.А.Писаревым, Ж.С.Сисемалиевой и др. /.

11. Гипокинезия, питание и метаболизм липидов. Липиды и липопро-теиды сыворотки крови // Вопр.ыед.химш,- 198-4,- К>,- С.114-118

/ в соавт. с Т.Ш.Йармановым, С.М.Абдраимовой, Э.Х.Абдрашитовой /.

12. Гипокинезия; питание и метаболизм лицидов. Влияние белково-витаминной недостаточности на липиды и липопротеиды сыворотки крови при гипокинезии // Вопр.мед.химии,- 1985,- N-5,- С.87-91

/ в соавт. с С.М.Абдрашовой, Б.Х.Кошкенбаевим.И.С.Таяибаевым /.

13. Питание спортсменов в горах.// Метод.рекоыенд,- Алма-Ата, Мин.здравоохр.Каз.ССР, 1984.- 29 с. / в соавт. с С.М.Цусабеко-вым, Г.Г.Еумабаевой, Т.Ш.Шармановым и др. /.

14. Влияние белково-витаминной недостаточности на активность ферментов липолиза и синтеза зфиров холестерина в условиях гипокинезии // Вопр.питания,- 1985,- К,- С.53-57 / в соавт. с

Б.X,Копкенбаевыи, Ш.С.Таяибаевш, Н.С.Сисемалиевой /.

15. К характеристике липидограш и холеацццограмм гёлчи здоровых и больных с хронический калькулёзнш холециститом. М., *1985,- 8с,- Деп. во ВНИИМИ Мин.эдравоохр.СССР.- ¡¡50301-85

/ в соавт. с М.М.Массалиньи, Г.К.Сейдыхановой /.

16. Состав жёлчи и липиды сыворотки крови у больных хроническим энтеритом // Лабор.дело,- 1985,- Р9,- С.525-527 / в соавт. с

• С. В. Суховым, М.К, Баркановый /.

17. Влияние различных пищевых белков на процессы транспорта липидов в сыворотке крови // Вопр.питания.- 1988.- ¡24.- С.45-48 / в соавт. с Т.Ш.Шармановыы, Г.К.Серветник-Чалой, С.М.Абдра-имовой /.

18. Свободные жирные кислоты жёлчи и сыворотки крови в диагностике холелитиаза // Лабор.дело,- 1989,- <¡96,- С.32-34.

- 43-19. Синдром белковой недостаточности. Учебная монография. Алматы, 1994.- 158 е.- Деп. в КазгосЖЩ 24.06.94, И? 5116 - Ка94 / з соавт. с Т.Ш.Шармановым /. 20. К характеристике обмена холестерина в печени с индуцированной опухолью // Структ., биосинтез и превращение липидов в орг-ме: 3 Всесоюзн.симп.: Тез.докл.- Ленинград, 1978, С.53-54, 21 • ¥ ¿¡■пг&у&ипепоахоёгк-хпй сп ¿^ц'Леш мсшимЫит.

Т *** ¿и<ц,р'ос.19£Мип*.Апы.

Мги.Bt.ee/letn,-Ьискреу^ 19П,-р 51-5Х. ■ '

22. Жёлчшге кислоты жёлчи при экспериментальном раке печени // Теорет. и практ. аспекты изучения питания человека: ?Лат-лы Всесоюз. конф.- ГЛ., 1980, 0.50-51.

23. Дефицит витаминов и белка в диете и жёлчеотделение у крыс при длительном ограничении подвижности // Гигаенич. аспекты питания здорового и больного человека: Респ.конф.: Тез.докл.-Киев, 1982, С.32 / в соавт. с Ш.С.Тажнбаевым, М.К.Биржановым /.

24. Состояние систеш транспорта липидов в организме и развитие атеросклероза. Влияние пищи, возраста, пола // 4 Всесоюз.съезд геронтологов и гериатров: Тез. симп. докл.- Киев, 1982, С.428

/ в соавт. с Т.Ш.Шармановым, Ш.С.Таяибаевым, В.А.Писаревым и др./

25. Влияние неблагоприятных факторов среды на систеш транспорта липидов в организме на фоне разнохарактерного питания //

4 конгресс по гигиене: Тез. докл.- София, 1982, С.45-46 / в соавт. с Т.Ш.Шармановым, Ш.С.Тажибаевым, Э.Х.Абдрашитовой /

26. Ферменты микросомального окисления и жёлчнокислотный состав нёлчи при гипокинезии и пищевом дисбалансе // 4 Всесоюз. сиш. по мед. энзимологаи: Тез.докл,- Алма-Ата, 1983, С.37-38

/ в соавт с М.К.Биржановым,. Ф.Х.Ахметатной, А.С.Ушаковым и др. /.

27. Изучение состава жёлчи у больных хроническим энтероколитом при диетотерапии кисломолочными продуктами //3 Всесоюз.съезд гастроэнтерол.: Тез.докл.- т.1,- М.Л., 1984, С.8-9 / в соавт. с С.В.Суховым, Е.А.Изатуллаевым /. /

28. Механизмы формирования потребности организма в пищевых / веществах и энергии при некоторых экстремальных условиях // фундаментальные науки - практике: Респ.симп.: Тез.докл.-. Алма-Ата, АН Каз.ССР, 1985, С. 18-19 / в соавт. с А.А.Алдшзевш, 'Э.Г.Заркешевым," М.К.Биржановым /.

29. Биохимические основы рационализации питания в экстремальных условиях // 4 объед.съезд гигиенистов, эпидемиологов, микробио-

- 44 -

логов, паразитологов и инфекционистов.Казахстана: Тез.докл.-т.Г.- Чимкент, 1985, С.154-155 / в соавт. с А.А.Аздашевим, М.К.Биржановым /.

30. Влияние М-нитрозопиперидина на показатели липццного обмена сыворотки крови и жёлчнокислотный состав жблчи у крыс в условиях белково-виташшной недостаточности // 4 объед, съезд гигиенистов, эпидемиологов, микробиологов, паразитологов и инфекционистов Казахстана: Тез. докл.- т.1.- Чимкент, 1505, 0.186-187

/ в соавт. с Б.Х.Кошкенбаевш, Е.К.Ауйакировым /.

31. Экспериментальные основы алиментарной профилактики дислипид-емю1 // Мездунар. конф. по профилакт. кардиологии: Тез. докл.-

М., 1985, С.139-140 / в соавт. с Т.Ш.Шармановш, Г.А.Кулкнбаэвым, Ш.С.Тахибаевым и др. /.

32« Процессы транспорта липццов в сыворотке крови и жёлчи при экстремальных условиях // 4 конф. биохимиков Ср.Азии н Казахстана: Тез. докл.. - Апхабад, 1936, С.303-384.

33. Лнзосо!лы и мшсросош гепатоцитов при алиментарных нарушениях и экстремальных условиях внешней среды // Лизосомн - биология, патология, б;:отэлнолопм: 4 ыаздунар. симп.: Тез. докл,-

София, 1935, С.56 / в соавт. с А.А.Алдашевым, Ш.С.Таяибаевш /.

34. Влиянии характера питания на обменные процессы при гипокиг нэзии // б Есесояз,съезд биохш.з Тез.стенд.сооб,- т.1,- 1 М,, Наука, 1986, С.350-351 / в соавт. с Э.К.Цухамедтлнопым, Т.Ш.Шармановам /.

35. Значение белков к вигашглов в регуляции процессов транспорта липццов при гипокинезии // 5. Всесоюз.съезд биох1ы.: Тез. мая. докл.- т.1,- М., Наука, 1985, С.281-262 / в соавт. с П.С.Таг.ибасшл: /.

36. Ечияниз дсф;щ1г-а некоторых апгиокеццантных витаминов на мзтаболизм липццов при воздействии ксенобиотиков // Биоэлтиокси-дант: 2 Всесоюз. конф.: Тез.докл., т.1.- М., 1986, С.91-95.

/ в соавт.' с И.С.Тачсибаевым, Г.А.Кулкыбдевнм, В.Х.Кошкенбаевым /.

37. Влияние гипокинезии на показатели метаболизма липццов в условиях белково-вихаминиой недостаточности //4 конф. биохш, Ср.Азии и Казахстана: Тез.докл.- Аигхабад, 1986, С.389-390

/ в соавт, с И.С.Тажибаевым, Б.Х.Кошкенбаевш, Е.А.Изатуллаевым/.

38. Белки, транспортируете липидн в жёлчи II 5 Всесоюз. симл. по биохим. липидов: Тез.дою:.: Алма-Ата, 1987, С.195-195.

39. Питание и транспорт липидов в организме // Акт.пробл.биохимии в приложении к задачам биотехнологии, сельск.хоз-ва и

медицины: Тез.докл. Всесоюз,школы 28 июяя - 7 ишя 1988.-Ульяновск, АН СССР, 1988, С.б.

40. Транспорт липидов п характеристике обеспеченности организма белком // Питание здорового и больного человека: Тез.докл. Межресп. копф,- Ашхабад, 1989, C.I05.

41. Влияние распространённых пищевых дисбалансов на метаболизм липидов при воздействии N-нитрозопипервдина 7/ Питание здорового и больного человека: Тез.докл. Межресп.конф.- Ашхабад, 1989, С. 46-47 / в соавт.с С.М.Абдраимовой, В.Х.КоаиенбаевЕМ /.

42 Экспериментальное токсическое поражение печени при белково-витаминной недостаточности // Акт. вопр. питания и проблемы алиментарнозависимых заболеваний в респ. Ср.Азии и Казахстане: Тез.докл.Межресп.конф.- Парши, АШ СССР, [990, С. [08-109 / в соавт. с Е.К.Лргымбаевым, Е.А.Изатуялаевым /.

43. О новых результатах изучения метаболических эффектов гипокинезии на фоне разнохарактерного питания // Метод.письмо,- М,-Алма-Ата, Ин-т мед.-биол. пробл. Мин.здравоохр.СССР, Каз.филиал. Ин-та питания Af.TH СССР, Т985.- 13 с. / в соавт. с Т.Ш.Шармановым,

A.А.Алдашевым, В.П.Власовым и др. /.

44. Использование показателей, характеризующих пёлчнокислотный состав иёлш, лшидный и офирнохолестершговиЛ спектры сыворотки крови для диагностики некоторых заболеваний и патологических 1 синдромов // Информ.письмо,- Алма-Ата, 1Саз.филиал Ил-та питания АМН СССР, 1985, 7 с. / в соавт. с А.К.Нангабнловш, С.В.Суховым, Э.Х.Абдрашитовой и др. /. . ,

45. Оценка адекватности рациона питания по белку с помощыэ биохимических тестов // Информ.листок.- Алма-Ата, КазНЙИНТИ, 1985.- 6 с. / в соавт. с Э.К.Мухамедашовъм, М.П.Иониной, Э.Х.Абдрашитовой и др. /.

46. Способ оценки сбалансированности рационов питания по белку и витаминам путём определения лнпндного состава сыворотки крови и лёлчнокислотного состава жёлчи// Информ.листок,- Алма-Ата, КазНШНТИ, 1985,- 6 с. / в соавт. с Э.Х.Абдрашитовой, Ы.К.Еир-яановым, В.А.Писаревш и др. /. /

Изобретение и рационализаторские предложения

1. Способ определения литогешости жёлчи у больных с заболеваниями жёлчных путей: A.c. Ii? 1186931, СССР, ШИ А 61 В 10/00 / .

B.Б.Максименко, М.М.Массалин, Г.К.Сейдиханова / СССР /.- 3 с.

2. Устройство для подбора систем растворителей, применяемых в тонкослойной хроматографии / ТСХ / // Рац.предл. IPI2, выданное 2,06.80 г. Каз.филиалом Ин-та питания АМН СССР

3. Способ количественной оценки жёлчных кислот жёлчи // Рац. предл. !Р 18, веданное 2.06.81 г. Каз.филиалом Ин-та питания АМН СССР / в соавт. с М,К.Баркановым /.

4. Способ изучения состава эфиров холестерина сыворотки крови с помощью тонкослойной хроматографии на Силуфол // Рац.предл. № 19, виданное 2.06.81 г. Каз.филиалом Ин-та питания АМН СССР / в соавт. с М.К.Шржановыы, Э.Х.Абдрашитовой /.

5. Метод сжигания липвдов на ТСХ-пластинах // Рац.предл. № 20, выданное 19.11,82 г. Каз.филиалом Ин-та питания АМН СССР

6. Метод количественного определения фракций общих липидов микросом с помощью тонкослойной хроматографии // Рац.предл. Р 21, веданное 4.01.82 г. Каз.филиалом Ин-та питания АШ СССР

/ в соавт. с М.К.В{ркановыы, Б. С.Найшибековш /.

7. Модификация метода экстракции жёлчных кислот кала // Рац. предл. № 34, веданное 5.07.82 г. Каз.филиалом Ин-та питания АШ СССР / в соавт. с М.К.Бириановьш, Г. Б1Дурмухамедовой /.

8. Способ количественного определения глщеридных фракций в сыворотке йрови // Рац.предл. № 232, веданное 20.11,85 г. Алиа-Атинск. гос. ин-том усов, врачей / в соавт. с Ш.С.Та^ибае-вым, Б.Х.Кошкенбаэвым /.

9. Устройство дяя разделения многофазовых жидкостей // Рац. предл. № 64, выданное 10.03.86 г. Каз.филиалом Ин-та питания АШ СССР / в соавт. с Е.А.Изатуллаевым, Б.Х.Кошкенбаевым /.

10. Способ ввделенкя микросом с помощью низкоскоростного центрифугирования // Рац.предл. К' 271, выданное 30.12.86 г. Алиа-Атинск. ин-том усов, врачей / в соавт с Ш.С.Тажибаевык /.

Подписано в печать 27.07.94. Формат 60x84 1/16. Бум.тип. № 2. Печать офоетная. Усл.печ.л. 2,61. Усл.кр.-отт. 2,78. Уч.—изд.л. 1,8. Заказ 851. Тираж 100. Типография КазгооИНТИ,480096,г.Алматы.Богенбай батыра,221.

Максииенпо Валерий Борисович

сарсуа иен оттс 5ура?1н липидтерд1 тасы-малдау процесстерте аламентарлыц белох фах-торнниц зсер1"

К|айсыб1р таргкдыц белоктардиц /казеин, ыацта белогн, бидай улпасц, амин^ыа^ьидар цураии тузст1лген казин «ен бидай рпасшшц зоспаси/ сарсуыныц липидтер1н. лиаопротеидтердщ /ДП/ эртгри класстарнн, баунр клегкасынид микросоидьц фргхциясын жэне п ^ив^алдарынич акш;-

тау барысында 1П-ге ткпзвтш асер1 тэа!рибе *уз1нде зерттелд1. Элг1 лк-пидтерд1 ашцтауга беГЦцделген ^а€аттн хроматография тэс1л1 хет1л-

д1р1лл1. Белой тапаалыры синдрониныц классифихациясн уснацлди. Гипокинезия хэне ксенабиотиктерхен уланган хардайда алииентарлш; фаяорднц ли-пидтерд! гасыиалдаура тиг1зет1н зсер1 анщталдв.

Алиментарлыц белок ^акторыныц ЛП-ге, липолизд1х знзнидерд1ц белсенд1-д 1 г 1 но, Р-450 цитохроны мен баси бос холестерин малверлео1н взгеоту ат>-дылы ат циацалдарынып сш!?эз1ел1иу1не эсер1 бзры байцалды.

Гипокинезия - алименгарльц емес белок таапылцры еиндроныныц хатабол- . , кзид1х хгйа. Беяохпен коректену1 бузылран хардайда арганизаде оси зат ' корынац цайта бвл1н1п взгеше таратылуы орын алади. Сапали белок сапасиз-ра караранда гипокинезияныц липидтерд1 тасымалдау процесстер1не тиПзе-т1н ха?ымсаз эсер1н б1рпама азаЗтадн.

Ксенобиотиптермен улану дислипопротемнемияныц пайда болунна эхеп сод-шрады. Э7 ^иш^илдарыныц биосинтезделу1 контаиинаниарднц бауыр ¡еикрос-омдари мен Р-450 цатохроиын индухцпялау цаб1лет1не тнрцз байланысты. Алиментарлац белок факторы ксенобиотиктердщ 1шек-царында С1ВД1Н хедел-детуге, к2Н сарсуынац липолизд1к ферментггр1н. злс1регуге, бауцр ыоноок-сигеназала"рынац индуициялануына, суйт1п вт ципцылдарыныч тез1рек снн-?езделу1не нэп эсер1н ?иг1зед1.

Uarlmenko Valery ( Borla )

Effect oi alimentary proteins factor oa processes of lipids transportation in serum and bile

Experiments were conducted to study effects of various food proteins ( casein, cotton seed protein, wheat gluten, a mixture of casein and wheat gluten enriched with essential aminoacids ) on lipoproteins ( LP)f lipids spectrum of blood serum, of separate LP classes; of bile, of microsomal fraction of the liver; bile acides. Thin-layer chromatography of quantitative determination of lipids of those classes. A classification of protein defficiency syndrome has been presented. Effect of the alimentary factor on transportation of lipids in hypokynesia, in xenobithal intoxications wore studied. It has been demonstrated, that food proteins effects synthesis and secretion of LP, activity of lipolytic enzymes, and on the 1

synthesis of bile acids via cytochrome P-450 and free cholesterol of microsomes.

Hypokynesia is a non-alimentary katabolic type of protein defficiancy syndrome. In condition with distorbance of protein nutrition, hypokynesia leads to redistribution of the protein fund of the body. Improvments of the quality of food proteins the negative impact of it on lipids transportation, whereas poor quality of food protein enhanced the latter.

Intoxication with xenobiotics leads to dislipoproteinemia. The ir.tensivity of the biosynthesis of bile acids dependeits on -the efficiancy of the foreign substences to induced hepatic microsomes P-450. Pood protein factor influenced the absorbtion rate of foreign substances, inhibited lypolitic enzymes of blood serum, Induction rate of hepatic monoozygenases and an a result of, intensivity of bile acids synthesis.