Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Вирус Y картофеля в Северо-Западном регионе РФ

ВАК РФ 06.01.11, Защита растений

Автореферат диссертации по теме "Вирус Y картофеля в Северо-Западном регионе РФ"

На правах рукописи

созонов

Андрей Николаевич

ВИРУС У КАРТОФЕЛЯ В СЕВЕРО-ЗАПАДНОМ РЕГИОНЕ РФ: РАСПРОСТРАНЕНИЕ, ШТАММОВЫЙ СОСТАВ И ПРОФИЛАКТИКА ВЫЗЫВАЕМЫХ ИМ ЗАБОЛЕВАНИЙ

Специальность: 06.01.11 - Защита растений

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Санкт-Петербург, 2005

Диссертационная работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте защиты растений.

Научный руководитель: кандидат биологических наук Козлов Леонид Петрович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук Колобаев Владимир Александрович

кандидат сельскохозяйственных наук Шелабина Тамара Алексеевна

Ведущая организация: ГНЦ РФ Всероссийский научно-исследовательский институт растениеводства им.Н.И.Вавилова

Защита диссертации состоится 23 июня 2005 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 006.015.01 во Всероссийском научно-исследовательском институте защиты растений по адресу: 196608, Санкт-Петербург, Пушкин, шоссе Подбельского, д. 3 Факс (812) 470-51-10, e-mail: vizrepb@mail333.com

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского НИИ защиты растений

Автореферат разослан 2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат биологических наук Г.А.Наседкина

АОО£Х 2^4405.9

узил

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Картофель является традиционной культурой для Северо-Запада России. Среди областей этого региона Ленинградская область была и остается лидером в производстве семенного картофеля. Область, к сожалению, не избежала негативных общероссийских тенденций, связанных с сокращением посевных площадей и уменьшением доли крупных производителей картофеля. Значительно ухудшилось фитосанитарное состояние семеноводческих хозяйств. Некоторые из них, созданные в середине прошлого века, оказались вблизи городской черты или крупных населенных пунктов, как правило, окружены приусадебными участками с посадками продовольственного картофеля. В этих условиях оздоровленный семенной картофель быстро поражается вирусами.

К числу наиболее патогенных вирусов на картофеле относится У-вирус (УВК), вызывающий полосчатую и морщинистую мозаики. Он способен вызывать массовое заражение картофеля, при этом снижение урожая может достигать 70% (Чесноков, 1961; Ганжина, 1980). Эпифи-тотии УВК на картофеле периодически возникают в разных странах и регионах, в том числе и на Северо-Западе России. Исследователи связывают их с появлением новых вирулентных штаммов вируса.

Исследования, проведенные в 70-80-х годах, показали неукЛонный рост полосчатой и морщинистой мозаик в Северо-Западном регионе (Ефимова, 1972; Шелабина, 1989), в связи с чем авторы отмечали необходимость постоянного контроля над ситуацией с вирусными заболеваниями картофеля в регионе.

В последние 15 лет исследовательских работ по изучению распространения и штаммового состава УВК на Северо-Западе не проводилось, в связи с чем возникает необходимость изучения структуры штаммового состава, с учетом смены районированных сортов картофеля.

УВК, как и многие другие вирусы картофеля, легко передается различными видами тлей, поэтому мониторинг динамики численности и видового состава тлей- необходимый элемент семеноводческой работы, позволяющий не только сигнализировать и прогнозировать ситуации с вирусными болезнями растений, но и вести борьбу с ними.

Эффективным приемом в борьбе с вирусами является селекция сортов, обладающих высокой полевой устойчивостью. В коллекционном питомнике ВИР имеется ряд доноров устойчивости к У, которые необходимо оценить на устойчивость к штаммам вируса в условиях Северо-Западного региона.

Цель и задачи исследований. Цель работы - изучить особенности распространения У-вируса, изменения в структуре штаммового состава, используя современные методы диагностики и усовершенствовать меры по ограничению заражения картофеля УВК в семеноводческих хозяйствах Северо-Западного региона РФ.

Для выполнения цели исследованй^^^щд^^'Дд^до решить

БИБЛИОТЕКА ] СПмИ(Г л

о»

зам

следующие задачи:

1. Определить распространение УВК в семенном картофеле Северо-Западного региона, с уточнением проявления инфекции патогена на отдельных сортах.

2. Исследовать штаммовый состав У-вируса с апробацией современных методов дифференциации штаммов.

3. Осуществить мониторинг лета тлей-переносчиков УВК, с целью сигнализации и своевременного проведения защитных мероприятий.

4. Оценить устойчивость образцов картофеля селекции Всероссийского научно-исследовательского института растениеводства (ВИР) к штаммам У° и У№.

Научная новизна. Определена зараженность У-вирусом предба-зисного картофеля пяти районированных сортов в хозяйствах Северо-Запада. Выявлены различия у сортов по уровню полевой устойчивости к УВК. Уточнен видовой состав тлей-переносчиков в Ленинградской области и роль отдельных видов в переносе УВК. Определена структура штаммового состава вируса, обнаружена избирательность к заражению штаммами отдельных сортов картофеля, выявлены изоляты штамма YJVW,*l ранее не зарегистрированного на картофеле в Северо-Западном регионе. Рекомендовано новое тест-растение £.Ъгаскусагрит для дифференциации штаммов УВК. Выявлены четыре клона межвидовых гибридов картофеля, устойчивые к заражению штаммами У° и У^ из различных географических популяций. Усовершенствованы меры по ограничению повторного заражения вирусами оздоровленного семенного картофеля.

Практическая значимость работы. Выделенные штаммы У-вируса могут быть использованы для оценки устойчивости селекционных образцов. Рекомендации по ограничению заражения вирусами учитывают современные подходы к защите семенного картофеля и могут быть использованы хозяйствами по первичному и элитному семеноводству.

Апробация и публикация результатов исследование. Результаты работы были представлены на: конференции "Молодые биологи Санкт-Петербурга - 300-летию города" (СПб, 2003); международном рабочем совещании "Вредители, болезни и сорняки" (СПб - Пушкин, 2003); Годичной научной сессии ВИЗР (СПб - Пушкин, 2004); 12-м заседании вирусологической секции "Европейской ассоциации исследования картофеля" (Рене - Франция, 2004).

Публикации. По материалам работы опубликовано 5 печатных работ, одна работа находится в печати.

Структура и объем работы. Диссертационная работа изложена на 142 страницах машинописного текста и состоит из введения, 4 глав, списка литературы и приложения. Работа иллюстрирована 16 таблицами и 20 рисунками. Библиография включает 186 источников, из них 78" на';йй&¥ранных языках.

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ

Глава 1. Обзор литературы

Приведены литературные данные по общей характеристике YBK, способах и механизмах передачи инфекции, структуре штам-мового состава на картофеле, устойчивости картофеля к Y-вирусу, а также современные методы идентификации патогена.

Глава 2. Место, условия, материал и методы исследований

Лабораторные эксперименты, исследование биологического материала проводили в ГНУ "Всероссийский Научно-исследовательский Институт Защиты Растений" РАСХН (ВИЗР) в лаборатории вирусных, микоплазменных и нематодных болезней в течение 2001-2004 гг. Материалом для изучения распространенности YBK на семенном картофеле в Северо-Западном регионе РФ, служили сорта Елизавета, Невский, Луговской, Петербургский, Снегирь, Чародей.

Идентификация штаммов Y-вируса осуществлена на образцах суперэлиты сортов Елизавета, Невский, Петербургский и Снегирь из хозяйств Архангельской, Вологодской и Ленинградской областей, присланных в ГНУ Ленинградский Научно-исследовательский Институт Сельского Хозяйства РАСХН (ЛНИИСХ) для грунтового контроля. В оценке устойчивости к штаммам YBK были использованы образцы клонов межвидовых гибридов картофеля селекции ВИР.

Диагностика зараженности картофеля Y-вирусом проведена комплексом диагностических методов: визуальным, индикаторным и серологическим. Использовали следующие виды тест-растений: Nicotiana tábacum (сорта Samsun 47/10, Samsun 959, White Burley), A-6, TE-1, TE-2, Solanum brachycarpum, Physalis floridana, Physalis ixocapa. Штаммовые группы YBK определены по реакции на Nicotiana tábacum.

Для серологического анализа использован метод DAS-ELISA (диагностические наборы производства Научно-исследовательского Института Картофельного Хозяйства, Россия и "BIOREBA", Щвейцария) и TAS-ELISA с диагностическими наборами моноклональных антител к штаммам Y° и YN (производство фирмы "ADGEN", Шотландия).

Устойчивость селекционных образцов ВИР (на основе Solanum stoloniferum и S. andigenum) к штаммам Y°~elyz, YN~nsk, выделенными в Ленинградской области, оценена методом искусственного заражения листьев среднего яруса; к штамму YNTN, выделенному в Германии, методом прививок (Chzranowska, Zagorska, 1993), повтор-ность пятикратная.

Отлов крылатых тлей осуществляли методом желтых водных ловушек Мерике установленных на поле семенного картофеля ЛНИИСХ (п. Белогорка, Гатчинский р-н Ленинградской области), а также на

опытном поле ВИЗР (Пушкинский р-н г. Санкт-Петербурга) в период с первой декады июня по вторую декаду августа.

Статистическую обработку результатов исследований проводили общепринятыми методами с использованием программ STATGRAPHICS и Microsoft Excel.

Глава 3. Результаты исследований

3.1. Распространенность У-вируса на семенном картофеле и симптомы его проявления на районированных сортах

Тестирование образцов семенного картофеля из 10 хозяйств Ленинградской области в 2002-2004 гг., показало широкое распространение Y-вируса на районированных сортах. Наиболее высоким средним уровнем зараженности супер-суперэлиты картофеля отличался сорт Луговской - 53%, причем его зараженность YBK в классах элиты и 1-й репродукции достигала 100%. Средняя зараженность сортов Петербургский, Невский и Елизавета составила соответственно 13%, 11% и 7%. Наименьшие средние показатели зараженности были отмечены на сортах Снегирь - 5% и Чародей - 0,3%.

Исследование распространенности YBK в северных территориях Северо-Западного региона-Архангельской области, показало, что образцы супер-суперэлиты и суперэлиты сорта Невский, оказались заражены Y-вирусом в среднем на 24%). Аналогичная ситуация была отмечена и в Карелии, где зараженность супер-суперэлиты сортов Нида и Пушкинец в среднем составила 8%.

Были отмечены случаи заражения предбазисного картофеля в хозяйствах, ведущих оздоровление на основе метода апикальной меристемы. Так, в 2003 г. распространенность YBK на сортах Петербургский и Невский 1-го полевого поколения в одном из хозяйств Ленинградской области составила соответственно 5% и 15%, а на сорте Луговской - 63%.

Таким образом, установлено, что заражение растений Y-вирусом происходит уже на самых ранних этапах семеноводства картофеля, о чем свидетельствуют данные по зараженности супер-суперэлиты, полученной как на основе клонового отбора, так и метода культуры тканей. При этом зараженность предбазисного картофеля часто превышала нормативы ГОСТ (0,5%) в 10 и более раз.

В результате дисперсионного анализа данных по распространенности YBK на супер-суперэлите картофеля в 2002-2004 гг., были обнаружены статистически значимые (Р<0,0001) различия между сортами по среднему уровню зараженности (проценту зараженных растений), что было подтверждено квантильным анализом. Различия между сортами картофеля по уровню полевой устойчивости к Y-вирусу можно отобразить следующим образом:

1 Чародей (очень высокая полевая устойчивость),

2 Снегирь и Елизавета (высокая полевая устойчивость).

3. Невский и Петербургский (средняя полевая устойчивость).

4. Луговской (низкая полевая устойчивость).

Часто инфекция Y-вируса присутствовала в смеси с вирусом М (48%), S (24%), X (9%) и вирусом А (59%), при этом при оценке результатов ИФА отмечали перекрестные серологические реакции YBK с ABK. Оба вируса относятся к роду Potyvirus и являются близкими не только по морфологии вирионов, но и имеют серологическое родство между некоторыми географическими изолятами (Deltour, et al., 1987), чем и объясняется возникновение перекрестных серологических реакций при идентификации YBK и АВК методом иммуноферментного анализа.

3.1.1. Симптомы проявления инфекции Y-вируса на сортах картофеля

На растениях картофеля сортов Елизавета, Невский и Петербургский инфекция Y-вируса проявлялась в виде мозаичности и реже легкой морщинистости листьев (5-25% растений). На сорте Луговской YBK вызывал симптомы мозаичности и сильной морщинистости листьев, причем единичные симптомы (4-5%) наблюдали в фазу полных входов, а к моменту бутонизации-цветения отмечали уже массовое (60-75%) проявление инфекции Y-вируса. Для сортов Снегирь и Чародей была характерна латентная форма инфекции YBK.

У обследуемых сортов не обнаружено растений с симптомами полосчатой мозаики. Возможно, что для современных сортов картофеля полосчатая мозаика не является характерной формой проявления заболевания вызываемого YBK. В семенных посадках часто присутствовали растения с признаками морщинистой мозаики, что по литературным данным считается результатом смешанной инфекции Y и X вирусов. Однако при исследовании образцов методом ИФА Х-вирус был обнаружен лишь в единичных случаях. Поэтому мы полагаем, что проявление морщинистой мозаики можно рассматривать как симптом, вызванный присутствием в растении только YBK.

Сравнивая результаты исследований по зараженности семенного картофеля с данными лаборатории вирусологии ВИЗР за 19982000 гг., можно отметить, что за последние годы уровень зараженности семенного картофеля вирусами, в том числе и YBK, возрос в несколько раз Так, зараженность супер-суперэлиты картофеля Y-вирусом в 1998-2000 гг в среднем по хозяйствам Ленинградской области не превышала 5%.

Таким образом, интенсивность заражения растений картофеля Y-вирусом зависит от взаимодействия комплекса факторов, среди которых первостепенную роль играют устойчивость сортов картофеля, численность и активность переносчиков, своевременность проведения защитных мероприятий и изоляция семенных посадок от источников инфекции.

3.2. Мониторинг динамики численности и видового состава тлей-псреносчиков Y-вируса в Ленинградской области

Погодные условия 2002 г. благоприятствовали развитию и массовому распространению тлей-переносчиков. Теплая и сухая погода способствовала быстрому размножению популяций тлей и миграции их на картофель. Начало лета тлей и пик их численности на опытном поле ВИЗР зарегистрированы соответственно в первой и третьей декадах июня, на опытном поле ЛНИИСХ соответственно в третьей декаде июня-первой декаде июля (рис. 1). Общее количество тлей отловленных на опытном поле ВИЗР- 2016, на поле ЛНИИСХ - 342. Преобладающими по численности видами в обоих пунктах оказались Aphis fahae, соответственно 86% и 73% и Rhopa-losiphum padi соответственно 13% и 26%. Численность Acyrthosiphon pisum, Myzus cerasi и Macrosiphum euphorbiae не превышала 1% от общего числа переносчиков.

Рис. 1. Динамика лета тлей-переносчиков на опытных полях ВИЗР и ЛНИИСХ, 2002 г.

-ВИЗР

ЛНИИСХ

В 2003 г. неблагоприятные погодные условия оказали сильное влияние на развитие популяций переносчиков. Начало лета тлей на картофель в обоих пунктах наблюдений было зарегистрировано в третьей декаде июня (рис. 2). Пик численности крылатых тлей был отмечен на опытном поле ЛНИИСХ в первую декаду июля, а на поле ВИЗР во вторую декаду июля. Общее количество отловленных крылатых насекомых на полях ВИЗР и ЛНИИСХ соответственно 157 и 85. Преобладающим по численности в обоих пунктах оказался вид К. ра<И, численность которого на поле ЛНИИСХ составила 100%, а на поле ВИЗР - 70%. Численность А. fabae, BrevlCorгne Ьгав-ягсае и А. /гапди1ае составила соответственно 5%, 10% и 15%.

В 2004 г погодные условия резко отличались от двух предыдущих лет. Холодное начало лета и частые осадки задержали лет насекомых на картофель до конца июня (ВИЗР) — начала июля (ЛНИИСХ). Пик численности крылатых насекомых был отмечен в

первой (ВИЗР) - второй (ЛНИИСХ) декадах июля (рис. 3). Всего на опытном поле ВИЗР было отловлено 150 тлей, из них R. padi — 52%, A. fabae - 26%, A. frangulae - 9%, A. pisum- 6% и Sitobion avenae -3%. Доля В. brassicae, Myzus persicae не превышала 2% от общего числа переносчиков. На поле ЛНИИСХ было отловлено 106 особей тлей, из них на A. fabae приходилось 61%, В. brassicae- 16% и R. padi- 14%. Доля A. frangulae и A. pisum составила соответственно 6% и 3%.

—♦-ВИЗР - -♦•- -ЛНИИСХ

Таким образом, в зависимости от погодных условий начало лета тлей на картофель в Ленинградской области начинается в 1-2-й декадах июня, а пик численности наступает в третьей декаде июня-первой декаде июля Среди видового состава, отмеченного нами на картофеле, в Ленинградской области встречались крылатые мигран-

ты более 20 видов тлей. Основными векторами YBK являлись Rhopa-losiphum padi, Aphis fabae, A. frangulae и Acyrthosiphon pisum.

При осуществлении мониторинга тлей, одной из задач работы была своевременная рекомендация семеноводческим хозяйствам сроков проведения мероприятий по химической защите посадок картофеля. В 2002 году хозяства провели по 3-4 обработки против тлей, начиная с первой декады июня, так как устойчивая жаркая погода способствовала сильному развитию популяций тлей, а на полях к тому времени появились всходы. В 2003-2004 гг. ситуация была несколько иной: неблагоприятные погодные условия не давали возможности полноценно развиваться популяциям тлей; частые дожди ограничивали их поисковые полеты. Кроме того, полные всходы карофеля появились позже - в 2003 г. во второй декаде июня, а в 2004 г. - в третьей декаде июня. В связи с этим, делая поправку на позднее начало всходов и низкую численность переносчиков, мы рекомендовали проводить 2-3 обработки инсектицидами начиная со второй декады июня.

3.3. Исследование штаммового состава Y-вируса

Результаты тестирования изолятов Y-вируса выделенных с использованием индикаторного и серологического методов, совпадали, что говорит об их высокой специфичности. Исключение составили 3 изолята, выделенных в Ленинградской области с сортов Елизавета и Невский и проявивших себя на тест-растениях как некротические* (табл. 1).

Таблица 1. Результаты индикаторной и серологической диагностики _выделенных изолятов YBK, 2002-2004 гг._

Регион Сорт Кол-во изолятов, ■ шт. Тест-растения yo yN TAS-ELISA уО yN Смешанная инфекция штаммов, шт.

Елизавета* 18 7 7 9 5 4

Ленинград- Невский* 35 22 8 23 7 5

ская обл Петербургский 27 19 8 19 8 0

Снегирь 25 13 8 13 8 4

Елизавета 18 2 11 2 11 5

Архангель- Невский 6 1 5 1 5 0

ская обл Петербургский 18 12 2 12 2 4

Снегирь 21 4 14 4 14 3

Вологод-

ская обл Невский 20 13 6 13 6 1

При этом следует отметить, что данные изоляты вызывали слабые некрозы на Nicotiana tabacum. При исследовании их методом TAS-ELISA они показали положительную реакцию на штамм Y°. Данные изоляты мы отнесли к подгруппе YNWi

Подобная ситуация была описана в работе А. М. Chachulska et al. (1997): выделенные изоляты YBK проявляли на тест-растениях некротическую реакцию, однако при тестировании их TAS-ELISA эти же изоляты положительно прореагировали на штамм Y°. Исследование автором таких аномальных изолятов молекулярно-генетическими методами показало, что они относятся к некротической группе штаммов, в частности, к Y™1. Характерной его особенностью является гомологичность аминокислотного состава (на 99%) с обыкновенной группой штаммов.

В наших исследованиях на тест-растениях Nicotiana tabacum не было обнаружено симптомов, характерных для штамма YRBV, широко распространенного на картофеле в 60-80-е годы прошлого века. Не обнаружено и характерных для данного штамма симптомов на растениях картофеля. В связи с этим мы полагаем, что в настоящее время инфекция YKBV отсутствует или в единичных случаях может встречаться в коллекционных посадках картофеля.

По результам 3-х летнего исследования структуры популяций штаммов YBK были выделены две группы регионов, характеризующихся достоверными различиями (Р >0,95, t£ > tst; tst=l,96) во встречаемости штаммов У° и YN (рис. 4, 5).

Q штамм Y-O В штамм Y-N

Рис. 4. Структура популяций штаммов У-вируса в Вологодской и Ленинградской областях, 2002-2004 гг

100

80 60

X

3

5 * АП

а> m 40 ^ >

ш

?

S

о

20 0

а штамм Y-O в штамм Y-N

JBBL

# ¿Г J"

' S / /

Рис 5 Структура популяций штаммов У-вируса в Архангельской области, 2002-2004 гг

К первой группе отнесена Архангельская область, где на сортах Елизавета, Снегирь, Невский доминирует некротическая группа штаммов, в то время как на сорте Петербургский преобладает инфекция обыкновенной группы штаммов YBK. Ко второй группе- Вологодская и Ленинградская области, где прослеживается тенденция к увеличению встречаемости штамма Y0.

В последние годы в связи с возросшим сортообменом картофеля появилась реальная угроза проникновения и распространения на территории России, в том числе и на Северо-Западе, нового сильно вирулентного штамма - YNTN. Заражение этим штаммом вызывает появление кольцевых некротических пятен вокруг глазков клубней, а на более поздних стадиях инфекции происходит их некротизация и усыхание. В результате обследований клубней картофеля в семеноводческих хозяйствах Северо-Запада, клубни с признаками поражения Yntn не обнаружены.

Сравнивая полученные данные с результатами обследований, проведенных в 1970-1980-е годы, можно отметить, что произошедшая смена сортов картофеля привела к изменению штаммового состава YBK в Северо-Западном регионе, поскольку предыдущие исследователи отмечали превалирующее распространение инфекции некротической группы штаммов.

Таким образом, Y-вирус характеризуется разнообразием структуры популяций штаммов и высокой способностью к образованию новых вариантов, причем наиболее подвержена этим изменениям группа штаммов YN. Внутри некротической группы постоянно происходят микроэволюционные процессы, результатом которых являются новые варианты штаммов, отличающиеся, как правило, большей вирулентностью, чем ранее известные. Возможно, одним из главных факторов, влияющих на образование новых вариантов штаммов, является селекция, направленная на получение новых устойчивых сортов картофеля. Многие сорта картофеля являются высокоустойчивыми к заражению YBK (Сантэ, Бизон, Бобр и др.). В связи с этим можно допустить, что при широком возделывании таких сортов происходит постепенное "приспосабливание" к ним вируса, что и приводит к образованию новых вариантов в результате мутаций, рекомбинаций при смешанной инфекции штаммов и т.п. Однако, если новым вариантам все же не удается вызвать патологический процесс у высокоустойчивых сортов, они могут быть опасны для средне- и слабовосприимчивых сортов картофеля, так, как это было в 70-е годы со штаммом YRBV, вызывавшим многочисленные эпифитотии на сортах Приекульский ранний и Столовый 19.

3.3.1. Испытание Solanun brachycarpum для дифференциации штаммов YBK

Вид Solanum brachycarpum был предложен в качестве тест-

растения на YBK М. Singh, R. Р. Singh (1994).

В наших исследованиях растения S. brachycarpum, зараженные штаммом У°, реагировали мозаикой листьев на 10-12 день после заражения. На инфекцию штамма YN растения реагировали закручиванием листьев, некрозами на листьях и стеблях с последующим их отмиранием. Реакция на заражение YN появилась позднее - на 15-17-й день. Четкое проявление симптомов происходит только при оптимальной температуре 20-25°С; при более низких температурах симптомы появляются значительно позже. К достоинствам данного индикатора следует отнести то, что при инокуляции вирусами М, S и X, видимых симптомов на растении не образуется, что облегчает диагностику YBK при смешанной инфекции. Получение клубней и семян S. brachycarpum в наших условиях возможно лишь при создании растениям условий короткого светового дня.

Таким образом, Solanum brachicarpum, может быть использован для определения штаммов YBK как дополнительный индикатор.

3.3.2. Устойчивость селекционного материала картофеля к штаммам Y-вируса

В результате осмотра исследуемых селекционных образцов через 4, 7 и 10 дней после инокуляции, симптомов заражения YBK не обнаружено. Тестирование образцов методом TAS-ELISA показало, что один из них (97-153) является зараженным штаммом YN'nsk (табл. 2). При последующей проверке растений индикаторным методом с использованием ТЕ-1, ТЕ-2 обнаружено, что оба индикатора прореагировали на заражение инокулюмом образца 97-153 точечными некрозами, что подтвердило результаты серологического анализа о присутствии Y-вируса в латентной форме. Подобной реакции на другие образцы не наблюдали.

Таблица 2. Результаты оценки селекционного материала ВИР __на устойчивость к штаммам YBK, 2003-2004 гг._

Инокуляция листьев_Метод прививок

Образец ELISA TE-1 ELISA TE-1

yO-eíyz yN-nsfc yU-elyz yJV-nsfc yNTN ' yNTN

97-162 0 0 0 0 X X

97-153 0 + 0 + X X

97-80 0 0 0 0 X X

98-38 0 0 0 0 0 0

90-7 0 0 0 0 0 0

97-159 0 0 0 0 0 0

97-155 0 0 0 0 0 0

Контроль

Bobr 0 0 0 0 0 0

N tabacum + + + + + +

Условные обозначения: х - заражение не проводилось, 0- инфекция УВК не обнаружена, + положительная реакция на УВК

Таким образом, по данным испытания гибридов методом искусственной инокуляции листьев, предполагается наличие сверхчувствительной штаммоспецифичной реакции у образцов 97-155, 97-80, 98-38, 90-7, 97-159, 97-162 Образец 97-153 был выбракован как неустойчивый к заражению штаммом YN, остальные гибриды по результатам предварительного испытания имеют бал устойчивости 8.

В 2004 году, образцы, устойчивые к заражению Y°'elyz и yN'nsk были оценены на устойчивость к некротическому штамму YNTN методом прививок. К молодым растениям томатов сорта Rutgers, достигшим 3-4 пар настоящих листьев и предварительно инфицированных Yntn, прививали черенки исследуемых растений картофеля.

При осмотре привитых растений картофеля, симптомов мозаики и некротических поражений листьев не обнаружено. Через две недели после прививки гибриды картофеля были протестированы методом TAS-ELISA и тест-растений. По результатам серологической и индикаторной диагностики образцы 97-155, 98-38, 90-7, 97159 показали устойчивость к заражению некротическим штаммом yJVT N

Таким образом, у четырех селекционных образцов картофеля предполагается наличие крайней устойчивости к заражению штаммами YBK.

4. Защита семенного картофеля в Северо-Западном регионе РФ от вирусов, передаваемых тлями

Сохранение здоровых посадок от вирусного заражения одна из важнейших задач при выращивании семенного картофеля. Одной из причин неудовлетворительного состояния семеноводства в СевероЗападном регионе РФ, является недооценка современных методов диагностики при оздоровлении предбазисного картофеля. В настоящее время основным методом оздоровления практически всех семеноводческих учреждений, является визуальный отбор, не позволяющий провести выбраковку растений с латентной вирусной инфекцией, в то время как для большинства сортов Северо-Запада характерны скрытые формы вирусных инфекций.

Улучшить качество семенного материала, возможно только вводя в систему клонового отбора высокочувствительные методы диагностики, в частности иммуноферментный анализ (ИФА), позволяющий выявлять скрытую вирусную инфекцию и получать качественный семенной материал.

Как известно, в принятой на Северо-Западе пятилетней схеме выращивания элиты, первые три года предназначены для индивидуального отбора, тогда, как последующие этапы размножения направлены на защиту семенного материала от повторного заражения. Если на первом этапе допущены ошибки и клоновый материал оздоровлен не достаточно хорошо, то исправить его на последующих

этапах не удается Кроме того, оставшиеся зараженные растения в клонах, являются основным источником инфекции для здоровых растений. Эффективность защитных мероприятий напрямую зависит от степени зараженности растений. Опыт показывает, что при зараженности растений (20-30%), сдержать развитие инфекции в поле не удается даже в том случае, когда обработки инсектицидами практически полностью подавляют тлей-переносчиков. В этом случае дальнейшее распространение вирусов происходит контактным путем, во время агротехнических мероприятий.

Высокая зараженность вирусами характерна и для семенного материала полученного на основе метода апикальной меристемы. Одна из причин связана с несовершенством диагностики при отборе линий свободных от вирусов. Принятая в настоящее время диагностика вирусов с помощью метода ИФА, не всегда позволяет сделать это с высокой точностью. В результате растения, выращенные из меристемы, оказываются зараженными вирусами, при этом симптомы болезни проявляются не сразу, а по прошествии длительного времени.

Низкие концентрации вирусов в исходных пробирочных растениях нередко обусловлены введением в питательную среду различных химических добавок, направленных на ингибирование вирусных патогенов. В этом случае концентрации вирусов в растении могут находиться за пределами чувствительности ИФА и при тестировании давать отрицательную реакцию. Такой важный этап как диагностика вирусов в исходных растениях, полученных в культуре in vitro из микрочеренков, следует проводить комплексом методов, включающих- ИФА, растений-индикаторов, электронной микроскопии и ПЦР. Последние два метода, безусловно, применимы не везде, но метод растений-индикаторов прост, и может быть воспроизведен в любом семеноводческом учреждении. Мы предлагаем использовать томаты сорта Невский как тест-растения, которые легко заражаются вирусами X, S, М, Y и накапливают их в высокой концентрации В качестве примера приводим данные оригинальных исследований, полученных по результатам проверки 15 линий исходных пробирочных растений картофеля ЛНИИСХ на скрытую вирусную инфекцию. Все линии были предварительно протестированы ИФА и дали отрицательный результат на вирусы X, S, М, Y Растения томатов были инокулированы соком изучаемых образцов в фазу 4-5 настоящих листьев При повторном исследовании образцов иммунофер-ментным анализом были обнаружены 7 линий зараженных вирусами М и Y (табл 3) Таким образом, использование томатов сорта Невский, в качестве растений-накопителей вирусов в полной мере позволяет достоверно провести диагностику вирусов Данные наших исследований еще раз подтверждают необходимость исследования исходных пробирочных линий картофеля комплексом диагностических методов

Одним из важных звеньев в семеноводстве картофеля является химическая защита от переносчиков вирусов. Среди афицидов разрешенных для борьбы с тлями на семенных посадках картофеля, следует отметить препарат "Конфидор", который успешно прошел испытания в России.

Исходя из проведенных наблюдений за динамикой лета тлей, мы считаем целесообразным проведение превентивных обработок, против переносчиков начиная с фазы полных всходов растений картофеля. По нашему мнению, в борьбе с тлями-переносчиками вирусов не может быть порогов вредоносности в силу невозможности отличить тлю, несущую вирус на стилете, от таковой без вируса.

Таблица 3. Результаты анализа исходных пробирочных растений картофеля методом ИФА, с использованием томатов сорта Невский, 2002 г.

Реакция ИФА

Линии сортов

МВК УВК

Сказка-4 - +

Сказка-5 - +

Чародей + -

Снегирь-2 - -

Снегирь-3 - -

Петербургский - -

Елизавета - +

Память Осиповой + -

Луговской-4 - -

Луговской-5 - -

Рождественский - -

Холмогорский-2 - +

Холмогорский-3 - -

Холмогорский-4 - -

Латона + +

Первое опрыскивание рекомендуем проводить примерно через 2 недели после начала всходов картофеля, но не позже появления первых крылатых особей тли. В зависимости от погодных условий опрыскивания нужно проводить через каждые две недели, а последнюю обработку за 2-3 недели до удаления ботвы.

Количество химических обработок зависит от вегетационного периода сорта. На ранних и среднеспелых сортах следует проводить 2-3 обработки. Если лет растянут, и численность бескрылых тлей продолжает оставаться высокой, то можно провести еще одну дополнительную обработку.

Основными переносчиками вирусов в Ленинградской области являются бобовая, крушинниковая и черемухо-злаковая тля. Следует отмстить, что черемухо-злаковая тля вид не характерный для энтомофауны картофельного поля и не образует колоний на картофеле при миграциях с зимних растений-хозяев, однако насекомые

могут посещать растения картофеля и совершать пробные уколы, что увеличивает количество зараженных растений. Кроме того, начало весеннего лета у К. ра<И происходит очень рано- в конце апреля - начале мая, а в 3-ю декаду мая - 1,2 -декады июня отмечается начало массового лета тлей на злаковые, которое совпадает с фазой полных всходов растений картофеля.

В связи с вышеперечисленными оригинальными данными мы считаем, что К. расИ следует отнести к переносчикам УВК тем более, что по данным К^^уаЫ (1984) существует строгая корреляция между распространением черемухо-злаковой тли и количеством инфицированных УВК клубней картофеля.

В борьбе с вирусными болезнями большое значение имеет предуборочное уничтожение ботвы и ранняя уборка клубней. Сочетание этих приемов препятствует проникновению вирусной инфекции в клубни. Для Северо-Запада России показатели "критического порога" численности тлей для предуборочного удаления ботвы в настоящее время не установлены. Хозяйства области проводят удаление ботвы обычно во в 2-й декаде августа, при этом численность переносчиков никак не учитывается. Этот вопрос до сих пор является открытым и требует проведения дополнительных исследований.

Особо следует выделить роль устойчивости сортов, являющейся одним из главных факторов ограничивающих распространения вирусной инфекции. Выявление устойчивых форм картофеля и создание сортов с высокой полевой устойчивостью, является важной задачей селекции. Для этого необходимо проведение постоянных исследований устойчивости исходного селекционного материала к местным штаммам УВК с использованием точной диагностики вируса

Выводы

1. Y-вирус широко распространен на основных районированных сортах картофеля в 13 хозяйствах первичного семеноводства Архангельской, Ленинградской областей и республики Карелия. Особенностью инфекции YBK на районированных сортах является латентное вирусоносительство.

2. Интенсивность заражения семенного материала YBK определяется устойчивостью сортов и численностью тлей-переносчиков. Обнаружены различия по уровню полевой устойчивости сортов к Y-вирусу: 1- Чародей (очень высокая полевая устойчивость), 2- Снегирь, Елизавета (высокая полевая устойчивые), 3- Невский, Петербургский (средняя полевая устойчивость), 4- Луговской (низкая полевая устойчивость).

3. Выявлены две различные территориальные группы в распространении штаммов YBK: в первую группу входит Архангельская область, где на сортах доминирует YN; во вторую -Вологодская, Ленинградская области, где преобладает штамм Y°.

4. Обнаружены изоляты штамма YNWi ранее не зарегистрированного на картофеле в Северо-Западном регионе России. При исследовании штаммового состава признаков поражения растений штаммами YRBV и YNTN не выявлено.

5. Впервые апробировано новое тест-растение Solanum brachicarpum для дифференциации обыкновенного и некротического штаммов YBK.

6. Выделены 4 клона межвидовых гибридов картофеля селекции ВИР, устойчивые к штаммам Y°, YN и YNTN. Эти образцы могут быть рекомендованы для селекции устойчивых сортов.

7. Уточнен видовой состав тлей, основными видами переносчиков YBK являются бобовая, черемухо-злаковая, крушинниковая и гороховая тли; другие виды тлей встречались единичными особями. Установлена зависимость от погодных условий развития массовой вспышки (2002) и депрессивного (2003, 2004) состояния популяций тлей на картофеле. Начало массового лета тлей отмечали в конце июня - начале июля.

8. Виды Rhopalosiphum рadi, Breviconne brassicae, Sitobion ave-nae целесообразно включить в число переносчиков вирусных заболеваний картофеля и учитывать при проведении мониторинга динамики численности.

9. Учитывая сроки лета тлей на картофель в Северо-Западном регионе химическую защиту семенных посадок против переносчиков вирусов, следует проводить с фазы всходов, сочетая контактные и системные препараты.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Рекомендовать метод иммуноферментного анализа для отбора исходного семенного материала в хозяйствах первичного семеноводства.

2. Оценку зараженности исходных пробирочных растений картофеля целесообразно применять ИФА в сочетании с методой растений-индикаторов, используя в качестве тест-растений томаты сорта Невский.

3. Для определения обыкновенного и некротического штаммов Y-вируса использовать Solanum brachicarpum в качестве дифференциатора.

4. Рекомендовать образцы 98-38, 90-7, 97-159, 97-155 устойчивые к штаммам Y°, YN для селекции сортов картофеля.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Созонов А.Н., Козлов Л.П., Якуткина Т.А. Мониторинг лета тлей — важный этап защиты картофеля от вирусов// Картофель и овощи, 2003,- №2.- С.17-18.

2. Созонов А.Н., Солянкина Л.В., Тарасов АБ. Распространенность вируса У на районированных сортах картофеля в Ленинградской области // Молодые биологи Санкт-Петербурга - 300-летию города: Докл. Конф. Санкт-Петербург, 2003- С.103-104.

3. Созонов А.Н., Козлов Л.П., Якуткина Т.А. Защитим семенной картофель от заражения вирусами//Сельскохозяйственные вести -2003.- №3.- С.53-54.

4. Kozlov L.P., Yakutkina Т.А., Sozonov A.N. The occurrence and strain structure of potato virus Y in NW Russia//Proc. Crop Protection Conf. Pest, diseases and weeds. St.-Peterburg - Pushkin, 2003.-P.26-27.

5. Sozonov A., Kozlov L., Rogozina E. Resistance of some potato clones to infection by potato virus Y// Proc. 12th EARP Virology Section Meeting, Rennes, 2004 - p.90.

Научное издание. ЩЩ-печать ООО "ИННОВАЦИОННЫЙ ЦЕНТР ЗАЩИТЫ РАСТЕНИЙ" Лицензия ПЛД X» 69-253. Подписано к печати 4 мая 2005 г., тир 100 экз

-9897

РНБ Русский фонд

2006-4 7320

ß

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Созонов, Андрей Николаевич

ВВЕДЕНИЕ.

1. Обзор литературы.

1.1.1. Заболевания, вызываемые У-виру сом картофеля. 1.1.2. Вредоносность УВК.

1.2. Штаммы вируса У.

1.3. Устойчивость картофеля к УВК.

1.3.1. Иммунность.

1.3.2. Сверхчувствительность.

1.3.3. Полевая, или относительная устойчивость.

1.3.4. Толерантность.

1.3.5. Устойчивость и проблемы селекции.

1.4. Тли-переносчики УВК.

1.4.1. Биологические особенности тлей.

1.4.2. Видовой состав и численность популяций тлей на Северо-Западе.

1.4.3. Методы учета тлей на посадках картофеля.

1.5. Методы диагностики УВК.

1.5.1. Визуальный метод.

1.5.2. Метод растений-индикаторов.

1.5.3. Метод электронной микроскопии.

1.5.4. Серологический метод.

1.5.4.1. Капельный метод.

1.5.4.2. Тест виробактериальной агглютинации.

1.5.4.3. Иммуноферментный анализ.

1.5.5. Методы молекулярно-генетического анализа.

2. МЕСТО, УСЛОВИЯ, МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Место и условия проведения работы.

2.2. Материал и методы исследований.

3.РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Распространенность Y-вируса на семенном картофеле и симптомы его проявления на районированных сортах.

3.1.1. Симптомы проявления инфекции Y-вируса на сортах картофеля. л 3.2. Мониторинг динамики численности и видового состава тлейпереносчиков Y-вируса в Лениградской области.

3.3. Исследование структуры штаммового состава Y-вируса.

3.3.1. Испытание Solanum brachycarpum для дифференциации штаммов YBK.

3.3.2. Распространение штамма

3.3.3. Устойчивость селекционного материала картофеля к штаммам Y-вируса.

4. Защита семенного картофеля в Северо-Западном регионе РФ от вирусов, передаваемых тлями.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Вирус Y картофеля в Северо-Западном регионе РФ"

Актуальность темы. Картофель является традиционной культурой для Северо-Запада России. Входящие в него Архангельская, Вологодская, Калининградская, Ленинградская, Новгородская, Псковская области и республика Карелия, по мнению специалистов, являются наиболее благоприятными по почвенно-климатическим условиям для производства семенного картофеля. Среди областей этого региона Ленинградская область была и остается лидером в производстве семенного картофеля, снабжая им не только Северо-Запад, но и другие регионы России. Ленинградская область известна также и как центр селекции многих высокопродуктивных сортов картофеля. Не случайно созданные здесь такие сорта, как Елизавета, Невский, Петербургский, Пушкинец стали популярными и районированы по всей России. Сорт Невский в настоящее время занимает более 40% в общем объеме производства элиты.

Область, к сожалению, не избежала негативных общероссийских тенденций, связанных с социально-экономическим положением в стране: сокращением посевных площадей и уменьшением доли крупных производителей картофеля. В результате производство картофеля оказалось сосредоточено в частном секторе, где распространена монокультура картофеля, отсутствуют элементарные меры профилактики и защиты растений от вредителей и болезней.

Значительно ухудшилось фитосанитарное состояние семеноводческих хозяйств. Некоторые из них, созданные в середине прошлого века, оказались вблизи городской черты или крупных населенных пунктов, как правило, окружены приусадебными участками с посадками продовольственного картофеля, что не соответствует требованиям к производителям семенного материала.

В этих условиях оздоровленный картофель быстро поражается различными возбудителями болезней: грибными, бактериальными и вирусными. Последние, являясь внутриклеточными патогенами, способны изменять метаболизм растений, вызывать вырождение картофеля, которое характеризуется резким снижением урожая, ухудшением пищевой и сырьевой ценности клубней.

К числу наиболее патогенных вирусов на картофеле относится У-вирус, вызывающий полосчатую и морщинистую мозаики. Среди вирозов эти заболевания являются наиболее вредоносными, снижающими урожай на 3070%. Учитывая это, Государственные стандарты европейский стран и России предъявляют особые требования к зараженности У-вирусом каждого класса семян. Так, предбазисный картофель должен быть полностью свободен от этого вируса.

Исследования, проведенные в 70-80-х годах, показывают неуклонный рост полосчатой и морщинистой мозаик на сортах картофеля СевероЗападного региона. Если в 60-х годах морщинистую и полосчатую мозаики отмечали лишь в отдельные годы, и количество пораженных растений было не более 15% (Осипова Е.А., 1966), то в 70-х годах оно составило 26-28% (Ефимова Г.Г., 1972), а в 80-х годах на отдельных сортах распространенность УВК достигала 60% (Шелабина Т.А., 1989).

За последние 15 лет исследовательских работ по изучению распространения и штаммового состава У-вируса в Северо-Западном регионе не проводилось, тогда, как за рубежом продолжались всесторонние исследования по штаммовому составу УВК, территориальной и сортовой приуроченности отдельных штаммов и их групп, динамики зараженности картофеля в зависимости от ряда биотических (численность насекомых-переносчиков и др.) и абиотических факторов (колебания температуры, освещенности, влажности). В последние годы в Европе был обнаружен новый штамм У™, поражающий не только надземную часть растений, но и клубни, вызывая их гниение при хранении. Сведения о поражении У/Ут отечественных сортов до сих пор отсутствуют, т.к. общепринятыми методами вирусологии невозможно отличить штамм от других штаммов этой группы. Идентифицировать этот штамм можно лишь молекулярно-генетическими методами.

В системе рыночной экономики с ее широким обменом сортов между странами и регионами опасность занесения в Россию новых штаммов УВК многократно возрастает.

Все исследователи отмечают необходимость постоянного контроля над ситуацией с вирусными заболеваниями в данном регионе. В связи с сортосменой картофеля возникает необходимость в изучении реакции новых сортов на вирусную инфекцию, в том числе на вирус У и его штаммы, что позволит вести качественный отбор здорового семенного материала картофеля.

Следует учесть, что УВК, как и многие другие вирусы картофеля, легко передается различными видами тлей. При благоприятных условиях тли быстро размножаются и, перенося инфекцию с больных растений на здоровые могут вызывать массовое заражение растений картофеля возбудителем полосчатой и морщинистой мозаик. Такие годы периодически повторяются в разных странах мира, в том числе и на Северо-Западе России, нанося значительный ущерб семеноводству.

Мониторинг лета тлей- необходимый элемент семеноводческой работы, позволяющий не только сигнализировать, но и прогнозировать ситуации с болезнями растений. Для предупреждения распространения вирусных инфекций, страны, входящие в Европейский Союз, объединены в единую систему мониторинга за поведением тлей (АОЯОРШ), используя для этого самые современные способы контроля. Такая система позволяет им с большей точностью вести мониторинг лета тлей и определять время обработок против заражения семенных посадок. Такой системы в России нет, обработки против тлей часто проводят несвоевременно, открывая пути к перезаражению здорового семенного материала. Создание в нашей стране мониторинга за тлями является в настоящее время насущной задачей.

Прежде всего такую систему необходимо организовать на Северо-Западе, в Ленинградской области.

Радикальным приемом в борьбе с вирусными болезнями является введение в практику семеноводства сортов, устойчивых к вирусам.

В коллекционном питомнике ВИР имеется ряд доноров устойчивости к УВК, которые необходимо проверить на устойчивость к штаммам У-вируса в условиях Северо-Западного региона прежде, чем они будут использованы в селекции новых сортов картофеля.

Учитывая важную роль У-вируса как возбудителя тяжелых форм вирозов на семенном картофеле в Северо-Западном регионе Российской Федерации, нами определены цель и задачи исследований.

Цель - изучить особенности распространения У-вируса, изменения в структуре штаммового состава, используя современные методы диагностики и усовершенствовать меры по ограничению заражения картофеля УВК в семеноводческих хозяйствах Северо-Западного региона РФ.

Для выполнения цели исследований необходимо было решить следующие задачи:

1. Определить распространение УВК в семенном картофеле СевероЗападного региона, с уточнением проявления инфекции патогена на отдельных сортах.

2. Исследовать штаммовый состав У-вируса с апробацией современных методов дифференциации штаммов.

3. Осуществить мониторинг лета тлей-переносчиков УВК, с целью сигнализации и своевременного проведения защитных мероприятий.

4. Оценить устойчивость образцов картофеля селекции Всероссийского научно-исследовательского института растениеводства (ВИР) к штаммам и*".

Научная новизна:

Определена зараженность У-вирусом предбазисного картофеля пяти районированных сортов в хозяйствах Северо-Запада. Выявлены различия у сортов по уровню полевой устойчивости к УВК. Уточнен видовой состав тлей-переносчиков в Ленинградской области и роль отдельных видов в переносе УВК. Определена структура штаммового состава вируса, обнаружена избирательность к заражению штаммами отдельных сортов картофеля, выявлены изоляты штамма ранее не имевшего зарегистрированного на картофеле в Северо-Западном регионе. Рекомендовано новое тест-растение Б.Ьгаскусагрит для дифференциации штаммов УВК. Выявлены четыре клона межвидовых гибридов картофеля, устойчивые к заражению штаммами уО

Г" из различных географических популяций. Усовершенствованы меры по ограничению повторного заражения вирусами оздоровленного семенного картофеля.

Практическая ценность:

Выделенные штаммы У-вируса могут быть использованы для оценки устойчивости селекционных образцов картофеля. Рекомендации по ограничению повторного заражения вирусами учитывают современные подходы к защите семенного картофеля и могут быть использованы хозяйствами по первичному и элитному семеноводству.

Апробация работы:

Результаты работы были представлены на: конференции "Молодые биологи Санкт-Петербурга - 300-летию города" (Санкт-Петербург, 2003); международном рабочем совещании "Вредители, болезни и сорняки" (Санкт-Петербург - Пушкин, 2003); Годичной научной сессии ВИЗР (Санкт-Петербург — Пушкин, 2004); 12-м заседании вирусологической секции "Европейской ассоциации исследования картофеля" (Рене - Франция, 2004).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 работ и 1 находится в печати.

Диссертация изложена на 140 страницах машинописного текста, состоит из введения, 4 глав, выводов, практических рекомендаций, списка литературы и приложения. Работа иллюстрирована рисунками, фотографиями, таблицами и графиками. Список литературы включает 186 наименований, из них 78 на иностранных языках.

Заключение Диссертация по теме "Защита растений", Созонов, Андрей Николаевич

ВЫВОДЫ

1. Y-вирус широко распространен на основных районированных сортах картофеля в 13 хозяйствах первичного семеноводства Архангельской, Ленинградской областей и республики Карелия. Особенностью инфекции YBK на районированных сортах является латентное вирусоносительство.

2. Интенсивность заражения семенного материала YBK определяется устойчивостью сортов и численностью тлей-переносчиков. Обнаружены различия по уровню полевой устойчивости сортов к Y-вирусу: Чародей (очень высокая полевая устойчивость), Снегирь, Елизавета (высокая полевая устойчивые), Невский, Петербургский (средняя полевая устойчивость), Луговской (низкая полевая устойчивость).

3. Выявлены две различные территориальные группы в распространении штаммов YBK: в первую группу входит Архангельская область, где на сортах доминирует во вторую - Вологодская, Ленинградская области, где преобладает штамм

4. Обнаружены изоляты штамма ранее не зарегистрированного на картофеле в Северо-Западном регионе России. При исследовании штаммового состава признаков поражения растений штаммами и \NTN не выявлено.

5. Впервые апробировано новое тест-растение Solanum brachicarpum для /дифференциации,обыкновенного и некротического штаммов.

6. Выделены 4 клона межвидовых гибридов картофеля селекции ВИР, устойчивые к штаммам и jATTV

Эти образцы могут быть рекомендованы для селекции устойчивых сортов.

7. Уточнен видовой состав тлей, основными видами переносчиков YBK являются бобовая, черемухо-злаковая, крушинниковая и гороховая тли; другие виды тлей встречались единичными особями. Установлена зависимость от погодных условий развития массовой вспышки (2002) и депрессивного (2003, 2004) состояния популяций тлей на картофеле. Начало массового лета тлей отмечали в конце июня - начале июля.

8. Виды Ккора1о51ркит расИ, Вгеугсоппе Ъга$51сае, БиоЫоп акепае целесообразно включить в число переносчиков вирусных заболеваний картофеля и учитывать при проведении мониторинга динамики численности.

9. Учитывая сроки лета тлей на картофель в Северо-Западном регионе химическую защиту семенных посадок против переносчиков вирусов, следует проводить с фазы всходов, сочетая контактные и системные препараты.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Рекомендовать метод иммуноферментного анализа для отбора исходного семенного материала в хозяйствах первичного семеноводства.

2. Оценку зараженности исходных пробирочных растений картофеля целесообразно применять ИФА в сочетании с методом растений-индикаторов, используя в качестве тест-растений томаты сорта Невский.

3. Для определения обыкновенного и некротического штаммов Y-вируса использовать Solanum brachicarpum в качестве дифференциатора.

4. Рекомендовать образцы 98-38, 90-7, 97-159, 97-155 устойчивые к штаммам уО ^ для селекции сортов картофеля.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Созонов, Андрей Николаевич, Санкт-Петербург

1. Абрамова Р.Н. Биологическое обоснование и разработка некоторых мероприятий по борьбе с мозаичными вирусными болезнями картофеля: Автореф. дис. на сиоск. учен. степ, к.с.-х. наук. Л., 1974.-19с.

2. Агур М.О., Виллемсон С.В. Об индикаторных видах Nicotiana tabacum, Nicotiana glutinosa и их роли в передаче семенами некоторых мозаичных вирусов// Защита растений в республиках Прибалтики и Белоруссии.-Вильнюс, 1981., С.3-4

3. Амбросов А.Л. Вирусные болезни картофеля и меры борьбы с ними.-Мн.: Ураджай, 1975.- 207с.

4. Амбросов А.Л., Блоцкая Ж.В. Вредоносность вируса У картофеля/ЛСартофель и овощи. М., 1971.- №8.- С.40.

5. Ахатова Ф.Х. О резерваторах Y-вируса картофеля. В кн.: Вирусные болезни сельскохозяйственных растений и меры борьбы с ними. М., 1978.-С.95.

6. Бемстер Б, Розендаль А. Вирусы картофеля: свойства и симптомы. В кн: Вирусные болезни и семеноводство картофеля. М., 1976.- С. 131-166.

7. Блоцкая Ж.В. Биология Y-вируса картофеля и меры борьбы с ним в условиях Белоруссии. Автореф. дис. на сиоск. учен. степ, к.б.н. Л., 1972.-19с.

8. Блоцкая Ж.В. Биологические основы устойчивости картофеля к вирусным болезням: Автореф. дис. на соиск. учен. степ. д.б. наук.- Л., 1984а.-24с.

9. Блоцкая Ж.В. Методы селекции картофеля на устойчивость к вирусным болезням. Мн.:Ураджай, 19846.- 93с.

10. Блоцкая Ж.В. Вирусы картофеля.- Мн.: Ураджай.- 1989.-С.21-53.

11. Блоцкая Ж.В., Жукова М.И. Биоразнообразие вирусов картофеля//Защита и карантин растений. 1998.- №7.- С.41.

12. Блоцкая Ж.В. Вирусные, вироидные и фитоплазменные болезни. Мн.гТэхналопя, 2000.-119с.

13. Бобкова А.Ф., Нацшвлишвили Н.М., Дзантиев Б.Б., Егоров А.М., Атабеков И.Г. Диагностика Y-вируса картофеля методом иммуноферментного анализа//Известия АН СССР. Сер.биол.- 1985.- №1.-С.128-133.

14. Брянцева Е.В. К оценке энтомофауны картофеля в Ленинградской области на наличие переносчиков вирусов. // Науч. тр. «Семеноводство и сортовая агротехника сельскохозяйственных культур» Л., вып.36.-1976. -С.98.

15. Букасов С.М. Новое в семеноводстве картофеля. Бюл. ВИЗР, 1956, №1,С.913.

16. Букасов С.М. Задачи семеноводства картофеля на Дальнем Востоке.- В кн: Селекция и семеноводство картофеля. М., 1966.-С.5-15.

17. Букасов С.М., Камераз А.Я. Селекция и семеноводство картофеля. Л., Колос, 1972. -528с.

18. Вайдеманн Х.Л., Шпаар Д., Блоцкая Ж.В. Новый опасный штамм вируса У-картофеля в Европе.// Весщ ААННРБ. -1999.-№1.- С.48-51.

19. Верещагин Б.В., Андреев A.B., Верещагина А.Б. Тли Молдавии. -Кишинев.- 1985.- С.25-31.

20. Вирусные болезни и семеноводство картофеля/ Под ред. Власова Ю.И. М.: Колос, 1976.- 824с.

21. Власов Ю.И., Ларина Э.И. Сельскохозяйственная вирусология.-М.:Колос, 1982.- 238с.

22. Галецка З.Б. Экологический анализ динамики численности тлей на полях картофеля.- М., 1975,- С.60-65

23. Гаммадов К.А. Вирусные болезни и урожай картофеля//Сельское хозяйство России. 1973.- №9.- С.31.

24. Ганжина Е.П. Влияние вирусов мозаичной группы на урожай и качество сортов картофеля, районированных в условиях северо-Западной зоны РСФСР: Автореф.дис. на соиск. учен. степ, к.с.-х. наук,- Л., 1980.- 20 с.

25. Гнутова Р.В. Таксономия семейства Potyviridae. В кн: Актуальные проблемы фитовирусологии и защиты растений,- Мн., 1997.-С.13-15.

26. Гнутова Р.В., Сибирякова И.И., Варинцев Ю.А., Корж В.Г. Антигенная характеристика Y-вируса картофеля (штаммовый состав)//Биологические науки. 1992.- №5.- С. 16-20.

27. Гольдин М.И., Федотина B.JI. Диагностика вирусов картофеля по вирусным включениям. В кн.:Вирусные болезни картофеля. М., 1966.-С.8-13.

28. Гончаров Н.Д., Ященко Н.П. Особенности заселения картофеля тлями.// Труды Латв.с.-х. акад. Рига. Вып.153, 1977. С.83.

29. Гордейчук А.И. Характеристика некоторых штаммов вируса у картофеля, распространенных в различных почвенно-климатических зонах СССР//Извстия ТСХА. 1967.- №6.- С.141-146.

30. Грига Г. Вирусные болезни и семенные качества картофеля// Картофель и овощи. М., 1970.- №1.- С.41-42.

31. Дамрозе И.П. Выбор кормовых растений крушинниковой тли.//Вирусы растений и насекомых. Труды Латв.с.-х. акад. Рига. Вып.40, 1971.- С.60-64.

32. Дамрозе И. Крылатые тли на ботве картофеля// Труды Латв.с.-х. акад. Рига. Вып. 118, 1977. С.70-73.

33. Дамрозе И.П. Динамика лета тлей-переносчиков вирусов картофеля (отчет за 1986 год). Елгава, 1987.- С.5-11.

34. Дамрозе И.П. Вирусы растений и насекомых// Труды ЛСХУ., вып.276. Елгава, 1993.-С.56.

35. Дьяков Ю.Т. Фитопатогенные вирусы. М., 1984.-128с.

36. Дьяконов К.П. Основные и потенциальные переносчики вирусов картофеля из семейства Aphididae(Homoptera) в условиях Приморского края. В кн: Тезисы докладов 6-го Всесоюзного совещания по вирусным болезням растений.- Ч.2.-М., 1971.-С.ЗЗ.

37. Дьяконов К.П. Учет неспецифических видов как корректировка "критического порога" в лете тлей-переносчиков вирусов. В кн: Теория и практика использования иммунитета сельскохозяйственных культур к вирусным болезням. Вильнюс, 1984.- С.49-51.

38. Дьяконов К.П., Романова С.А., Леднева В.А. Новый интерес к большой картофельной тле//3ащита растений. М., 1994. -№5. -С.40-41.

39. Дьяконов К.П. Итоги изучения насекомых-переносчиков вирусов растений Дальнего Востока России.// Становление и развитие фитовирусологии на Дальнем Востоке России.- Владивосток, 2002.- С. 16-18.

40. Егураздова A.C. Мониторинг тлей-вредителей и переносчиков вирусных болезней сельскохозяйственных культур (зарубежныйопыту/Агропромышленное производство: опыт, проблемы и тенденции развития. М., 1990.- №1.- С.68-77.

41. Ефимова Г.Г. Распространение мозаичных вирусов картофеля и обоснование выбора благоприятных для семеноводства районов Ленинградской области: Автореф. дис. на соик. уч. степ. к.б. наук. Л., 1972. -21 с.

42. Жеребчук Л.К. Научные основы оздоровления картофеля от вирусных болезней при двухурожайной культуре: Автореф. дис. на соиск. уч. степ. д.б. наук. Мн., 1985.- с. 19-21.

43. Жукова М.И., Тимофеев H.H. Испытание Конфидора против тлей-переносчиков вирусных болезней картофеля.//Защита растений. Сб. научн. трудов Вып.ХХН, Мн.1998. С.57-61.

44. Жукова М.И. Эффективное средство против тлей// Защита и карантин растений. М., №6, 1999. -С.2-9.

45. Жукова М.И. Тли на картофеле в Беларуси и средства борьбы с ними.//Ахова Раслш. Мн., 2000.- №4, С. 16-18

46. Зыкин А.Г. Тли-переносчики вирусов картофеля. Л.:Колос, 1970. - 71с.

47. Зыкин А.Г. Научные основы выращивания семенного картофеля свободного от вирусов и микоплазм: Автореф. дис. на соиск. уч. степ. д. с.-х. наук. Л., 1974.-26 с.

48. Зыкин А.Г. Вирусные болезни картофеля. Л., 1976.-152с.

49. Зыкин А.Г. Устойчивость сортов картофеля к повторному заражению вирусами в условиях Ленинградской области. В кн: Теория и практика использования иммунитета сельскохозяйственных культур к вирусным болезням. Вильнюс, 1984. С.- 53-54.

50. Зуева О.И. Создание исходного материала для селекции картофеля на устойчивость к штаммам У вируса: Автореф. дис. на соиск. уч. степ, к.с.-х. наук. Л., 1986.-18с.

51. Икауниеце Л.К. Штаммы вируса у картофеля в Латвийской ССР. //Труды Латв.с.-х. акад. Рига. Вып.40, 1971.- С.25-29.

52. Капица С.С., Андреева Э.Н. Оздоровление вегетативно размножаемых растений от вирусных болезней.//Труды института генетики АН СССР. -1965.-№35.-С. 18-35.

53. Картофель. Вирусные, бактериальные и грибные болезни. Альбом характерных признаков и симптомов//Под ред. В.В. Дынник. Пущино, 1997.- С.11-12.

54. Келдыш М.А., Помазков Ю.И. Вирусные и микоплазменные болезни древесных растений. М., 1985.- 135с.

55. Кирюхин В.П., Ладыгина Е.А., Галеева Ф.М. Выявление вируса У на углеводно-ферментативный комплекс и крахмало-накопление в картофеле.//Труды НИИКХ. М. Вып. 9,1971. С.39.

56. Козлов Л.П., Хазенсон С.Л., ОбручковВ.С., Шосталь В.П. АБВ-тест-высокочувствительная реакция для быстрой диагностики вирусов картофеля и овощных культур//Биологические науки.- 1983.-№5.-СЛ 09-111.

57. Колобаев В.А. Методические указания по отбору устойчивых к вирусам сеянцев картофеля с помощью искусственного заражения пистолетом распылителем. Л.,1970. — 13с.

58. Колобаев В.А., Патрикеева М.В. Методические указания по отбору сеянцев картофеля, устойчивых к вирусу У и фитофторозу. Л., 1985. - 12с.

59. Крылов A.B. Вирусы растений Дальнего Востока. М., 1992.- С. 24-26.

60. Крылов A.B., Горовой П.Г. Растения-индикаторы вирусов картофеля. -Владивосток, 1968.-С.54-59.

61. Кюрцингер В., Шпаар Д. Опыт борьбы с тлями-переносчиками вирусов в картофелеводстве Германии.//Ахова Раслш. Мн., 2000. -№ 4.- С. 14-16.

62. Лайнгер Б.Б. Тли-переносчики и прогнозирование сроков их появления на семеноводческих посадках картофеля: Автореф. дис. на соиск. учен. степ, к.с.-х. наук. М., 1977.- 21с.

63. Лебедева Е.Г., Дьяконов К.П., Немилостива Н.И. Насекомые-переносчики вирусов растений на Дальнем Востоке. Владивосток, 1982.-195с.

64. Лебедева Е.Г., Рейфман В.Г. Выращивание элиты на безвирусной основе для изолированного района семеноводства картофеля в Приморском крае.//Труды Биол.-почв.ин-та. Владивосток, 1971.- С.151-163.

65. Лигай Г.А. Использование дикого вида Solanum stoloniferum Schlechtd. в селекции картофеля на устойчивость к фитофторозу и вирусу У: Автореф. дис. на соиск. уч. степ.к.с.-х. наук. Л., 1979. 19с.

66. Лытаева Г.К. Растения-резерваторы Y-вируса картофеля// Бюллетень Всесоюзного Научно-Исследовательского Института Защиты Растений. Л., 1971.- №20.- С.42.

67. Методические указания по отбору растений суперэлиты и элиты картофеля, свободных от вирусной инфекции. Л., 1957, С.5-9

68. Методические рекомендации по учету важнейших переносчиков вирусов и микоплазм, поражающих картофель. М., 1975.С.7-10

69. Методические указания по векторной передаче вирусов, поражающих сельскохозяйственные культуры. JI, 1990. С. 16-19

70. Методические указания по защите семеноводческих посадок картофеля от вирусов, переносимых тлями. М, 1971. С. 12-23

71. Методические указания по учету насекомых-переосчиков вирусных болезней картофеля./Сост: Банадысев С.А., Ященко Н.П., Малиновский C.B., Дударевич В.И.- Мн., Самохваловичи, 2000. 34с.

72. Михайлов A.A. Пути распространения Y-вируса картофеля и обоснование мер борьбы с ним в условиях Куйбышевской области: Автореф. дис. на соиск. уч. степ, к.б.наук. JL, 1972.-19с.

73. Обручков B.C. Биологические особенности YBK и способы его идентификации на основных пасленовых культурах: Автореф. дисс. на соиск. уч. степ. к. б. наук. СПб., 1993.- 23с.

74. Определитель насекомых европейской части СССР/ Под ред. Г.Я. Бей-Биенко.- М.-Л.: Наука, 1964.- Т.1.- 936с.

75. Писарев Б.А., Трофимец Л.Н. Семеноводство картофеля. М.: Россельхозиздат, 1982.- 239с.

76. Попов М.Ф. Возраст растений и восприимчивость их к вирусным болезням //Труды НИИКХ, 1971.Вып.8.- С.283-286

77. Рейфман В.Г., Крылов A.B., Андреева В.А. Исследование картофеля, пораженного морщинистой мозаикой. В кн.: Вирусные болезни картофеля. М., 1966. С.86-89.

78. Романова С.А. Итоги изучения вирусных, вироидных и микоплазменных болезней Дальнего Востока России.// Становление и развитие фитовирусологии на Дальнем Востоке России. Владивосток, Дальнаука, 2002. С. 178.

79. Русецкий Н.В. Особенности развития вирусов картофеля M(PVM), Y(PVY), X(PVX) в условиях комплексной инфекции и скрининг устойчивых форм. Автореф. дис. на соиск. уч. степ, к.б.наук. Минская обл., п. Прилуки, 2001.- 24с.

80. Садовникова В.И., Ефимова Г.Г. Новый штамм вируса У//Картофель и овощи. М., 1971. №1. - С.41.

81. Семеноводство картофеля контроль качества и сертификация/ Под ред. A.B. Коршунова, Б.В.Анисимова. М., 2002.- 291с.

82. Синцова Н.Ф. Выделение исходного материала для селекции картофеля на устойчивость к фитофторозу и вирусам X и У. Автореф. дис. на соиск. уч. степ, к.с.-х. наук., Киров, 1999. 19с.

83. Смит К. Вирусные болезни растений. М., 1960. - 391с.

84. Соколова М.А., Пугин М.М., Шульга O.A., Скрябин К.Г. Получение трансгенных растений картофеля, устойчивых к Y-вирусу картофеля// Молекулярная биология, -1994.- 28, №5.- С. 1002-1008

85. Стасявичус З.Б. Штаммовый состав вируса У в Литве.//У1 Всесоюзное совещание по вирусным болезням растений. Тезисы докладов. 4.II, М., 1971. С.65-66.

86. Сухов К.С. Вирусные болезни раннего картофеля в Московской области и борьба с ними. М., 1964.- 77с.

87. Тертяк Д.Д. Возбудители вирусных болезней томатов в Молдове и усовершенствование методов их диагностики: Автореф. на соиск. учен. степ, к.б.наук. Л., Пушкин, 1991.- 23с.

88. Трофимец Л.Н. Биотехнология в растениеводстве. М., 1989.-38с.

89. Трофимец Л.Н. Вирусные болезни картофеля. М., 1990.- 79с.

90. Уайтхед Т., Макинтош Т., Финдлей У. Картофель, здоровый и больной. -М., 1955,- 146с.

91. Федотина В.Л. Тяжеобразные включения как диагностический признак вирусного заболевания картофеля. В кн: Вирусные болезни сельскохозяйственных растений и меры борьбы с ними.- Киев, 1966.- С.221-227.

92. Фолимонова С.Ю., Фолимонов A.C., Аграновский A.A., Атабеков И.Г. Идентификация Y-вируса картофеля, вызывающего кольцевой некрозклубней (YBK-NTN), с помощью иммуноспецифической полимеразной цепной реакции (ИС-ПЦР)//Доклады РАСХН. М., 1998.- №5.

93. Черепанова Р.В. Распространение штаммов yRBV на сортах картофеля. В кн: Тезисы докладов б-го Всесоюзного совещания по вирусным болезням растений. 4.2, М., 1971.- С. 109.

94. Чесноков П.Г. Болезни вырождения картофеля в СССР и борьба с ними. Л.-М., 1961.-320с.

95. Чирков С.Н. Оловников A.M., Сургучева H.A. Виробактериальная агглютинация (АБВ-тест) новый метод иммунодиагностики вирусов сельскохозяйственных растений//Доклады ВАСХНИЛ.- 1981.- №7.- С.9-11.

96. Шелабина Т.А. Устойчивость к вирусам районированных сортов картофеля и особенности защиты их в Северо-Западном регионе Нечерноземья: Автореф. дис. на соиск. уч. степ. к. с.-х. наук. Л., 1989.- 19с.

97. Шелабина Т.А., Колобаев В.А., Ефимова Г.Г. Два штамма Y-вируса картофеля//Защита растений.- 1985.-№2.-С.53.

98. Шмыгля В.А., Абрамова Р.Н., Литвер H.H. Тли-переносчики вирусов картофеля в Московской области. В кн: Тезисы докладов 6-го Всесоюзного совещания по вирусным болезням растений. 4.2, М., 1971.- С.104

99. Шпаар Д. Новый штамм вируса У картофеля.//Защита растений. М., 1995.-№6.- С.43.

100. Шпаар Д. и др. Картофель. Мн.:ФУА информ, 1999. 270с.

101. Шпаар Д. Посевной и посадочный материал сельскохозяйственных культур. Книга 1. Берлин, 2001. 392с.

102. Штернис М.В. Биотехнология в защите растений. Новосибирск, 2001.-С.27-32.

103. Шуберт И., Рабенштайн Ф., Хрцановска М., Шпаар Д. К проблеме диагностики штаммов Y-вируса картофеля (PVYy/Вестник защиты растений.- СП6.-2004.- №3.- С.3-10.

104. Шуцкая О.В., Иоселевич Е.И. физиолого-биохимическая природа защитных реакций картофеля против вирусной инфекции//3ащита растений. -Мн., 1983.-Вып.8. -С. 17-28.

105. Яшина И.М. Генетические основы селекции картофеля на устойчивость к фитофторе и вирусам.//Селекция и семеноводство картофеля, овощных, плодовых культур и винограда. М., 1972. -С. 14-21.

106. Яшина И.М., Склярова Н.П. Использование природных источников экстремальной устойчивости к вирусу для целей селекции картофеля//Агро XXI, М., 1997. №2.- С.6-7.

107. Яшина И.М., Склярова Н.П., Симаков Е.А. Оценка эффективности использования исходного материала картофеля по результатам селекционной работы на устойчивость к вирусам и фитофторе//Докл. РАСХН. М., 1998 -№5.- С.5-9.

108. Arenz В, Hunnius W. Weiter Untersuchugenuber die Sorten-resistenz gegen verchiendener Y-Vimsstammgruppen//Zuchter.-1961.- Bd 31, H.6, P.281-287.

109. Barnett O.W. A summary of potyvirus taxonomy and definitions. Potyvirus Taxonomy. New York, 1992. P.43 5-444.

110. Basky Z. The relationship between aphid dynamics and two prominent potato viruses (PVY and PLRV) in seed potatoes in Hungary// Crop protection.- 2001. -Vol 219, №9. P.823-827.

111. Bawden F.C., Kassanis B. Serologically related strains of potato virus Y that are not mutually antagonistic in plants. Annals of Applied Biology 38, 1951.P. 402-410.

112. Beczner L., Hovarth J., Romhanyi I, Forster H. Studies on the etiology of tuber necrotic ringspot disease in potato// Potato Research.-1984. Vol 27. p. 339352.

113. Aphids their biology, natural enemies and control/ Edit. Minks A.K., Harrewijn P. -Amsterdam: Elsevier, 1984.- Vol.A. 450p.

114. Bokx J.A. de. Waardplanten van het aardaptel-Y-n-virus// Tijdschift over Plantenziekten.- 1961.-Vol. 67, p.273-277

115. Bokx de J.A. Some remarks on the use of TE-l(Solanum chacoense) as a test plant for potato virus Y//Potato Res.- 1974.- Vol.17.- p.323-326.

116. Bokx de J.A., Kratchanova B, Maat D.Z. Some properties of deviating strain of potato virus Y.// Potato Res. 1975.- Vol.18, p.38-51.

117. Bokx de J.A., Maat D.Z. Detection of porato virus Y-n in tubers with the Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)//Med. Fac. Landbouww. Rijksuniv.Gent.-1979.-Vol.44.-№2.- p.635-644.

118. Bokx de J.A., Pirón P.G.M. Effect of temperature on symptom expression and relative virusconcentration in potato plants infected with potato virus Yn and Yo.//Potato res.-l 977.-Vol.20.-p.207-213.

119. Bokx de J.A.,Huttinga H. Potato virus Y//CMI / AAB Descriptions of Plant Viruses. 1981.-№242.

120. Bokx de J.A., Want J. P. H. Viruses of potatoes and seed potato production. Pudoc Wageningen. 1987 p.88-91.

121. Borchart G., Bode O., Bartels R., Holz W. Untersuchungen Uber die Minderung des Ertrages von Kartoffelplanzen durch Virusinfectionen//Nachr. bl.Dt. Pflanzenschutdienst. 1964 Bd 16 s. 150-156.

122. Boonham N., Walsh K., Hims M., Preston S., North J., Barker I. Biological and sequence comparisions of potato virus Y isolates associated with potato tuber necrotic ringspot disease. //Plant Pathol. 2002a- Vol.51, p. 117-126.

123. Browning I, Charlet K., Chrzanowska M., Dedic P., Kerlan C., K., Kryszczuk

124. A., Schubert J., Varveri C., Werkman A., Wolfl. What is PVYNTN? The reaction of• thpotato cultivars to inoculation with a range of PVY isolates// Proc. 12m EARP Virology Section Meeting, Rennes, 2004.- p.51-53.

125. Chachluska A.M., Chzranowska M., Robaglia C., Zagorski W., Tobacco vienal necrosis determinants are unlikely to be located within the 5' and 3' terminals sequences of the potato virus Y genome.// Arch. Virol. 1997.- Vol. 142, p.765-769.

126. Chzranowska M. Differentiation of potato virus Y (PVY) isolates//Phytopathology Polonica.- 1994. №8, p. 15-20.

127. Chzranowska M., Doroszewska T. Comparison between PVY isolates obtained from potato and tobacco plants grown in Poland// Phytopathology Polonica.- 1997.-№13, p.63-71.

128. Chzranowska M., Zagorska H. Metoda oceny iselekcji rodow ziemniaka odpornich na wirus Y.// Biuletyn Instytutu Ziemniaka. 1993.- Nr.43, p.17-22.

129. Dedic P., Ptacek J. Imunoenzymaticka diagnoza viru Y bramboru (PVY) v potomstvu primarne infikovanych rostlin. //Rostl. vyroba.-1995.-41,N4,c.l57-161.

130. Delago-Sanchez S., Grogan R.G. Purification and properties of potato virus Y.// Phytopath.-1966.-Vol.56.-p. 13 97-1404.

131. Deltour A., Guillou M., Cerlan C. Trends in France for use of the ELISA method in routine seed-potato testing and problems of cross reactions between viruses A and Y// Bulletin EPPO.- 1987.- Vol.17, №1, p.69-72.

132. Derrick K.S. Quantitative assay for plant viruses using serologically specific elecron microscopy//Virology.-1973.- Vol.56., p.652-653.

133. Dolenc J., Vilnar B., Dermastia M. Systemic infection with potato virus Yntn alters the structure and activity of the shoot apical meristem in a susceptible potato cultivar.// Physiological and Molecular Plant Pathology. 2000. -Vol .56, p.33-38.

134. Ellis P., Stace-Smith R., Villiers G. Identification and geographic distribution of serotypes of potato virus Y. //Plant disease.- 1997, №8. p.481-484.

135. Fiedorov Z. Separation of Y-o,Y-n and X-Viruses of potato from the complex by means of test plants. Rocznici Nauk Roniczych, 1974.p. 197-228.

136. Fils B. Inheritance of extreme resistance to potato virus Y in potato .//Potato research. 1995.- Vol. 38, p. 199-210.

137. Gugerli P. The detection of two potato viruses by Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)//Phytopath.Z.-1978.-v.92.-№l .-p.51-56.

138. Gugerli P. Le test immuno-enzymatique(ELISA) et son application pour le diagnostic rapid des viruses de la pomme de terre//Revue suisse Agric.-1979.-Vol.l l.-p.253-260.

139. Gugerli P., Gehringer W. Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) for dtection of potato leaf roll virus and potato virus Y in potato tubers after artifical break of dormancy//Potato Res.-1980.-v.23.-p.353-359.

140. Glais L., Colombel A.S., Tribodet M., Kerlan C. PVYn-605 the reference PVY" isolate, displays a PVYntn non-recombinant genome. //Proc. 12th EARP Virology Section Meeting, Rennes, 2004. p.54.

141. Hovarth J. Compatible and incompatible relations between Capsicum Species and viruses. I Reweiw//Acta Phytopath.Hung. 1986.- v.21. - №1-2. - p.35-49

142. Jeffries C.K. Potato. FAO/IPGRI Technical Guidelines for the Safe Movement of Gerplasm. 1998.-№19.

143. Kahn R.P., Monroe R. Datura metel L. as a virus indicator plant/ZPhytopath.-1970.-v.60.-№8.- p.l 183-1185.

144. Kamenkova L. Efektivnost ruznych zpusobu inokulace branboru kmeny Yo a Yn viri bramboru// sbornik UVTIZ. Genetica a slechteni.-1987.-v.23.№2-p.l41-146.

145. Kerlan C. Evolution in potato virus Y: from recombination in the genome to emergence and spreading of variants.// Proc. 12th EARP Virology Section Meeting, Rennes, 2004. P.26-30.

146. Khan J.A., Dijkstra J. Plant viruses as molecular pathogens. New York : Food Products Press, 2002.- 537p.

147. Kim J.S., Kuo Y.J., Green S.K. An unusual potyvirus from pepper in Tai wan//Korean Journal of Plant Pathology .-1987.-v.3.-№4.-p.261-269.

148. Köhler E. Der Solanum demissum Bastard "A-6" als Testpflanze verschiedener Mosaikviren//Zuchter.-1953.-Bd 23.-H.6-S.173-176.

149. Kostiw M. Transmission of potato virus Y by Rhopalosiphum padi L//Potato Research.- 1979. Vol. 22, p. 237-238.

150. Krishna R., Srivastava M., Singh B.P. Carriage of a distinct isolate of potato virus Y in Solanum nigrum L.//Curr.Sci.-1979.-v.48-№15.-p.701-702.

151. Kürzinger W. Viruskrankheiten der Kartoffel.//Kartoffelbau. 1995.- №46, p.312-317

152. Kus M.: Potato tube necrosis disease (PTRND) in Slovenia.//Proc. 11th Triennial Conf. Eur. Ass. Potato Res., Edinburgh, UK, 196, 8-13. June 1990.

153. Kus M.: The epidemic of the tuber necrotic ringspot strain of potato virus Y (PVYntn) and its effect on potato crops in Slovenia. Abst. Viol. Meet. Eur. Ass. Potato Res. (EAPR), Bled/Slovenia, 45-46, June 18-22, 1995.

154. Maat D.Z., de Bokx J.A. Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) for the detection of potato viruses A and Y in potato leaves and spouts//Neth.J.Pl.Path.-1978.-v.84.-p. 167-174.

155. Makkouk K.M., Gumpf D J. Characterization of the protein and nucleic acid of potato virus Y strains isolated from peper. //Virology. 1974 -v. 63, №2, p.336-344.

156. Manoussopoulos I. N. Aphid Transmission of Potato aucuba mosaic virus Strains Mediated by Different Strains of Potato virus Y//Journal of hytopathology.-1999.V. 148(6), 327-331.

157. Munzert M., Daniel G., Hunnis W. Nachweis des Kartoffel-Y-Virus (PVY)in Sekundärinfizirten Kartoffelpflanzen mit (ELISA) Enzyme-Linked Immunosorbent Assay//Potato Res.-1981 .-v.24.-p.245-254.

158. Ohshima K., Hataya T., Sano T. Comparison of biological properties, serological characteristics and amino acid sequences of coat protein between potato virus Y ordinary strain and necrotic strain.// Ann.Phytopath. Soc.Japan.-1991.-v.57.№57, p.615-622.

159. Piron T.P., Thornburry D.W. Quantity of virus required for aphid transmission of a potyvirus//Phytopath.-1988.v.78.-№l.-p.l04-107.

160. Podelleck R., Schenk G. Stamme des potato virus Y in pflanzekartoffelproduction auf dem Gebiet det ehemaligen DDR.// Arch. Phytopathol. u Pflanzenschulz.-1991-Bd.27-H.5- s.347-351.

161. Reichenbächer D., Kalinina I., Weidemann H.L. Mechrjährige Ergebnisse zur Diagnose von drei Kartoffelviren mit dem ELISA//Arch. Phytopathol. u. Pflanzenschutz.-1987.- bd.23.- H.2.- s.l 17-125.

162. Ross H. Physalis floridana as a local lesion test plant for potato virus Y.// Phytopath. 1953v.43№l p. 1-8.

163. Ross H. Uber die Verbreitung der Tabakrippenbraune stamme des Y virus der kartoffel in Dutschland und anderen Landern.//Phytopath.z. -1959.-Bd.35-H.l-s.97-102.

164. Rouze-jouan J., Glais L., Crocq G., Gauthier J.-P., Kerlan C. Study of aphidth ——transmissibility of a set of isolates of potato virus Y// Proc. 12 EARP Virology Section Meeting, Rennes, 2004.- p.22.

165. Silberschmidt K.M. Types of potato virus Y necrotic to tobacco: History and recent observation. American Potato Journal 1960, 37. p. 151-159.

166. Smith K.M., Dennis R.W. Some notes on a suspected variant of Solanum virus 2 /Potato virus Y/. //Ann. Appl.Biol. -1940, v.27. p.65-70.

167. Sigvald R. The relative efficiency of some aphid species as vectors of potato virus Y°(PVY°). //Potato Research. 1984.- Vol. 27. p.285-290.

168. Sigvald R. Mature-plant resistance of potato plants against potato virus Y° (PVY°). //Potato Research. 1985. - Vol.28, p. 135-143.

169. Sigvald R. Aphid migration and the importance of some aphid species as vectors of potato virus Y°(PVY°) in Sweden. // Potato Research.-1987. vol.30. p.267-283.

170. Sigvald R., Hulle M. Aphid- vector management in seed potatoes: monitoring and forecasting//Proc. 12th EARP Virology Section Meeting, Rennes, 2004.-p.10-13.

171. Singh M., Singh R.P. A fastreacting bioassay for the tobacco veinal necrosis strain of potato virus Y(PVY).// Plant Disease.- 1994. 78 №8. p.775-778.

172. Singh M., Singh R.P. Host dependent cross-protection between PVYn, and PVYo in potato cultivars and Solanum brachycarpum//Can.-Jplant-pathol.-1995 v,17(l) p.82-86.

173. Singh R.P. The emergence and spread of PVY" (strain and variants) in North America// Proc. 12th EARP Virology Section Meeting, Rennes, 2004.- p.2.

174. Spetz C., Rajamaki M.-L., Paalme V., Ala-poikela M., Haikonen T., Valkonen J.P.T. Host adaptation and evolution of potato-infecting potyviruses// Proc. 12th EARP Virology Section Meeting, Rennes, 2004.- p.31-35.

175. Thompson G.J., Hoffman D.C.A., Prins P.J. A deviant strain of potato virus Y infecting potatoes in South Africa//Potato Res.-1987.-v.30-№2.-p.219-228.

176. Vetten H.L., Ehlers U., Paul H.L. Detection of PVY and PVA tubers by Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) after natural and artifical break of dormancy//Phytopath.Z.-1983 .-Bd. 108.-H. 1 -s.41 -53.

177. Walter C., Sander E. Vergleich des enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) zum Nachweis von Kartoffel-Y-virus mit dem konventionellen Biotest auf Solanum demissum A-6//Z.pflanzenkrnkh.-1979.-Bd.86.-H.l 1.-S.662-666.

178. Weidemann H.L. Die Kartoffel-Virus Y(PVY-n)- Konzentration in Knollen verschiedener Kartoffelsorten//Nachr.-bl. Dt. Pflanzenschutzdienst.-1984.-Bd 36.-H.2.-S.25-27.

179. Weidemann H.L. Importance and control of potato virus Yn (PVYN) in seed potato prodaction//Potato Research.- 1988.- Vol. 31. p.85-94.

180. Weidemann H.L. Kartoffelvirus Y: Vorkommen der Stammgruppen PVY°und PVY" in Kartoffelsorten.//Nachrichtenblatt des Deutschen Pflanzenschutzdienstes.Band 43(7), Juli 1991.

181. Weidemann H.L., Maiss E. etection of the potato tuber necrotic ringspot strain of potato virus Y (PVYNTN) by reverse transcription and immunocapture polymerase chain reaction.// Journal of Plant Diseases and Protection.- 1996.- Vol. 103(4). p. 337-345.

182. Weilguny H., Singh R. P. Separation of Slovenian isolates of PVYNTN from the North American isolates of PVYN by a 3-primer PCR// Journal of Virological Methods.- 1998.- Vol.71.-№ l.p. 57-68.