Ветеринарно-санитарная оценка кормов для сельскохозяйственной птицы и совершенствование методов определения в них водорастворимых витаминов

Сатюкова, Людмила Павловна

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Ветеринарно-санитарная оценка кормов для сельскохозяйственной птицы и совершенствование методов определения в них водорастворимых витаминов
ВАК РФ 06.02.05, Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза

Автореферат диссертации по теме "Ветеринарно-санитарная оценка кормов для сельскохозяйственной птицы и совершенствование методов определения в них водорастворимых витаминов"

На правах рукописи

4040•—■

Сатюкова Людмила Павловна /¡•^/¿^¿'¿'^ /

ВЕТЕРИНАРНО-САНИТАРНАЯ ОЦЕНКА КОРМОВ ДЛЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННОЙ ПТИЦЫ И СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ В НИХ ВОДОРАСТВОРИМЫХ

ВИТАМИНОВ

06.02.05 - ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

2 6 МАЙ 2011

Москва-2011

4848137

Работа выполнена на кафедре «Ветеринарно-санитарная экспертиза» ГОУ ВПО «Московский государственный университет прикладной биотехнологии» Научный руководитель:

доктор ветеринарных наук, профессор Смирнова Ирина Робертовна

(МГУПБ)

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, профессор Долгов Виктор Андреевич

(ГНУВНИИВСГЭ)

кандидат ветеринарных наук, профессор Боровков Михаил Федорович

(ГОУ ВПО МГАВМиБ)

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Российский университет дружбы народов»

Защита состоится «17» июня 2011 г. в 14°° часов на заседании диссертационного совета Д 212.149.03 при ГОУ ВПО «Московский государственный университет прикладной биотехнологии (МГУПБ) по адресу: 109316, г. Москва, ул. Талалихина, д. 33.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Московский государственный университет прикладной биотехнологии» и на веб-сайте www.msabb.ru

Автореферат разослан оСО^сЦ 2011г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук, доцент

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. В последние годы для интенсификации птицеводства предложены различные способы коррекции защитных свойств организма птиц. Особое место в технологии выращивания птицы занимают полноценные корма с наличием биологически активных веществ: витаминов, микроэлементов, пробиотиков, антиоксидантов. Большинство витаминов не синтезируются в организме и поэтому являются обязательной частью пищевого рациона. Физиологический баланс всех необходимых организму витаминов обеспечивается их поступлением в соответствии с суточной потребностью. (Околелова Т.М., Сергеева A.M., 1988г.).

Для достижения полноценного биологического питания птицы следует в рацион вводить правильно подобранные в количественном соотношении между собой и с другими пищевыми веществами витаминные комплексы. В организм птиц витамины поступают с кормами в виде готовых соединений или провитаминов. (Маслиева О.И., 1975г.).

Недостаточное поступление витаминов резко снижает усвоение питательных веществ из кормов, что приводит к нарушению функции отдельных органов, снижению устойчивости организма к различным инфекционным заболеваниям. Развиваются патологические процессы, которые приводят к скрытым формам - гиповитаминозам, а затем к авитаминозам (Имангулов Ш.А., Егоров И.А. и др., 2006г.).

В настоящее время получено большое количество новых данных по питательности кормов для сельскохозяйственной птицы, уточнены их параметры по обменной энергии, доступному фосфору, которые включены в таблицы питательности и химического состава кормов. Разработана концепция регламентирования качественных показателей комбикормов.

Все перечисленные факторы обусловливают необходимость по-новому оценивать питательную и энергетическую значимость каждого компонента, изменять нормы кормов с учетом потребностей различных возрастных групп птицы. (Войтов Л.И., Федорова Н.М., Бездверный В.П. и др.,1989г.).

Известны традиционные методы определения витаминов группы В в биологических объектах, препаратах, премиксах и комбикормах. Они основаны на спектрофотометрических, флюориметрических и колориметрических методах, тонкослойной и газожидкостной хроматографии. (Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф., 1982г.).

Современными методами исследования являются метод иммунофер-ментного анализа с использованием микробиологической тест-системы Vita Fast® и конкурентной тест-системы Ridascreen Fast®, высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) с предварительной иммунноаф-финной очисткой на колонках EASY-EXTRACT®, применяемые для анализа кормовых смесей и биологических объектов.

Однако данные по ветеринарно-санитарной оценке качества кормов для сельскохозяйственной птицы весьма ограничены, современных методов определения водорастворимых витаминов в полнорационных комбикормах мало, имеются только методы флюориметрический и ВЭЖХ для определения витаминов в премиксах. Поэтому совершенствование методов определения водорастворимых витаминов и применение их в практических лабораториях является весьма актуальным.

Цель и задачи исследований. Целью работы является сравнительная оценка и совершенствование современных методов определения витаминов в кормах, инкубационном яйце и биоматериале (печень) сельскохозяйственной птицы.

В задачи исследований входило:

• дать характеристику кормовой базы и особенностей питания сельскохозяйственной птицы различных возрастных групп;

• изучить показатели качества и безопасности кормов для выращивания сельскохозяйственной птицы различных возрастных групп;

• изучить возможность использования метода ИФА с помощью микробиологической тест-системы Vita Fast® для определения витаминов группы В в комбикормах, инкубационном яйце и биоматериале (печень);

•изучить возможность использования метода ИФА с помощью конкурентной системы Ridascreen Fast® для определения витаминов группы В в комбикормах;

• изучить возможность использования хроматографического анализа (ВЭЖХ) с предварительной иммунноаффииной очисткой на колонках EASY-EXTRACT® для определения витаминов В9, В,2 в комбикормах;

• дать сравнительную оценку методов ИФА Vita Fast® и Ridascrecn Fast®, а также ВЭЖХ для определения водорастворимых витаминов;

• разработать методические рекомендации по определению витаминов группы В в комбикормах, сырье для производства комбикормов, ингредиентах, премиксах, печени и яйце методом иммуноферментного анализа, микробиологическим методом и методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.

Научная новизна. Дана комплексная оценка физико-химических показателей, пищевой ценности, качества и безопасности полнорационных комбикормов для выращивания сельскохозяйственной птицы различных возрастных групп, с различным содержанием протеина, жира, углеводов, витаминов, макро- и микронутриентов. Модифицированы методы ИФА с помощью микробиологической тест-системы Vita Fast® и конкурентной тест - системы Ridascrecn Fast® для обнаружения витаминов группы В в полнорационных комбикормах, инкубационном яйце и биоматериале (печень). Предложена предварительная иммунноаффинная очистка на колонках EASY-EXTRACT® для проведения ВЭЖХ при обнаружении витаминов В9, В12 в комбикормах.

Практическая значимость работы. Разработаны «Методические рекомендации по определению витаминов группы В в комбикормах, сырье для производства комбикормов, ингредиентах, премиксах, печени и яйце методом иммуноферментпого анализа, микробиологическим методом и методом высокоэффективной жидкостной хроматографии» ,утвержденные методической комиссией ФГУ ЦНМВЛ, протокол №11 от 16.03.2009г. и секцией «Ветеринарно-санитарная экспертиза» Отделения ветеринарной медицины РАСХН от 26.04.2011г.

Основные положения, выносимые на защиту На защиту выносятся следующие основные положения:

• характеристика кормовой базы и особенности питания сельскохозяйственной птицы различных возрастных групп;

• показатели пищевой ценности, качества, и безопасности полнорационных комбикормов различных возрастных групп птицы;

• использование модифицированного метода ИФА с помощью микробиологической тсст-системы Vita Fast® и конкурентной системы Ri-dascreen Fast®, для обнаружения витаминов группы В в полнорационных комбикормах, инкубационном яйце и биоматериале (печень).

• использование хроматографического анализа ВЭЖХ с предварительной иммунноаффинной очисткой на колонках EASY-EXTRACT® для обнаружения витаминов В? и B]2. в комбикормах.

Апробация работы. Основные результаты научных исследований доложены и обсуждены на VI Международной научной конференции студентов и молодых ученых «Живые системы и биологическая безопасность населения» (М.: МГУПБ, 2007г.), на Международной научно-практической конференции преподавателей, молодых ученых и аспирантов аграрных вузов РФ «Актуальные проблемы современного аграрного производства» (М; РУДН, 2008г.), а также на расширенном заседании кафедры ветери-нарно-санитарной экспертизы МГУПБ (2011г).

Публикации. По результатам исследования опубликовано 6 научных работ, в том числе 3 статьи в журналах, рекомендованных ВАК.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 133 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений, списка литературы и приложений. Работа иллюстрирована 10 рисунками, 30 таблицами. Список литературы включает 112 источников, в том числе 22 иностранных авторов.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы и методы исследований

Работа выполнена на кафедре ветеринарно-санитарной экспертизы ве-теринарно-санитарного факультета ГОУ ВПО Московский государственный университет прикладной биотехнологии в период с 2006 - 2011 гг.,

отдельные исследования проводились также в лаборатории диагностики токсикозов и биохимических исследований ФГУ ЦНМВЛ.

Материалом для исследований служили 5 кормовых смесей в соответствии с рецептурой для различных возрастных групп сельскохозяйственной птицы: ПК-2-0 (для бройлеров 1-4 дней), ПК-5К СТАРТ (для бройлеров 11-20 дней), ПК-6Н РОСТ (для бройлеров 15-28 дней), ПК-6К ФИНИШ (для бройлеров старше 33 дней), ПК-1 (для кур-несушек от 21 до 47 дней); инкубационное яйцо и биоматериал (пробы печени).

Все исследуемые материалы поступали из хозяйств различных регионов РФ: ЗАО «Элинар-Бройлер», ООО «Ново-Петровская», ЗАО «Пете-линская птицефабрика», ОНО ППЗ «Кучинский» Московской области, ЗАО «Краснояружский бройлер» Белгородской области и ООО «Птицефабрика Акашевская» Республика Марий-Эл.

Бактериологические исследования комбикормов проводили в соответствии с «Правилами бактериологического исследования кормов» (утв. ГУВ МСХ СССР 10.06.1975г.) по показателям: количество мезофильных аэробных и факультативно -анаэробных микроорганизмов (КМАФАнМ), наличие энтеропатогенных типов кишечной палочки, сальмонелл и токси-генных анаэробов. Содержание в комбикормах ртути определяли по ГОСТ 26927-86, кадмия - по ГОСТ 26929-86, свинца - по ГОСТ 26932-86, мышьяка - по ГОСТ 26930-86. Определяли кислотное и нерекисное число жира в соответствии с «Методическими указаниями по определению качества кормов для сельскохозяйственной птицы по степени окисления и гидролиза» (утв. Департаментом Ветеринарии №13-5-02/0657 от 27.01.03г.). Массовую долю влаги определяли методом высушивания навески до постоянной массы в соответствии с ГОСТ 13496.3-92, сырого жира определяли - методом Сокслета, (ГОСТ 13496.25), сырого протеина -методом Къельдаля (ГОСТ 13496.4), золы - методом озоления навески в муфельной печи (ГОСТ Р 50852), аминокислотный состав - методом ионообменной хроматографии на автоматическом аминокислотном анализаторе фирмы «Beckman 119 GL», массовую долю триптофана определяли после щелочного гидролиза навески по ГОСТ 13496.21-87,13496.22-90. Содержание радионуклидов цезия - 137 и стронция - 90 определяли согласно «Инструкции о радиологическом контроле качества кормов № 13-7-2/216 от 01.12.1994г.». Для определения водорастворимых витаминов группы В в кормах, инкубационном яйце, биоматериале (печени) использовали современный метод исследования ИФА с помощью микробиологической тест-системы Vita Fast®. На микротитровальные планшеты были нанесены различные штаммы (виды) бактерий рода Lactobacillus: для витамина В] -Lactobacillus fermentum; для витамина Bj - Lactobacillus rhamnosus; для В6 - Saccharomyces cerevisiae; для В9 - Lactobacillus rhamnosus. Скорость роста бактерий прямо пропорциональна концентрации витаминов в исследуемых объектах. Все анализы проводились в стерильных условиях. Также были предложены конкурентный метод ИФА Ridascreen Fast® и ВЭЖХ с

предварительной иммунноаффинной очисткой на колонках EASY-EXTRACT* для определения водорастворимых витаминов группы В в комбикормах.

Количественные показатели результатов исследований подвергали вариационно-статистическому анализу с использованием программного обеспечения PC Microsoft Excel 2003.

Результаты исследований

Характеристика кормовой базы и особенности питания сельскохозяйственной птииы различных возрастных групп

Нами были проанализированы и изучены состав и нормы ввода премиксов в полнорационные кормовые смеси для различных возрастных групп птицы. Эти данные представлены в таблице 1.

Установлено, что все комбикорма были полнорационными, сбалансированными и по своему составу относились к пшеничному виду. Содержание пшеницы в кормах находилось в пределах от 33,37% до 57,75%, мелкой пшеницы (мучка пшеничная) от 4% до 15%, а кукурузы от 10.00% до 25,00%. В комбикормах для бройлеров в возрасте от 33 дней и старше и у кур-несушек преобладали белковые корма: шрот соевый - 7,14-27,0%; шрот подсолнечный-от 4,58 до 13,0%. Во всех кормах присутствовала мука рыбная - от 3 до 5%, мука известняковая от 0,62 до 4,16% в кормах для кур-несушек, а в кормах ПК-6К ФИНИШ (для бройлеров свыше 33 дней), ПК-6 (для бройлер от 5 недель и старше) и ПК-1 (для кур-несушек) - мясная мука- от 2,0% до 5% и костная мука- 5%.

Определение показателей качества и безопасности кормов для выращивания сельскохозяйственной птицы различных возрастных групп

В результате исследований было установлено, что все комбикорма несколько отличались друг от друга по составу, валовому количеству питательных веществ и энергии (таблица 2).

Кормовая ценность любого комбикорма зависит от содержания в нем протеина, набора лимитирующих и незаменимых аминокислот, жира, углеводов, витаминов, макро- и микроэлементов и других питательных веществ. Нами было установлено, что для кормовых смесей ПК-5К СТАРТ, I1K-6H РОСТ, ПК-6К ФИНИШ лимитирующими являлись линоленовая кислота, триптофан, аргинин, треонин. Химический состав и пищевая ценность исследуемых комбикормов представлены в таблице 2, из которой видно, что соотношение лизина, метионина, метионина + цистина во всех комбикормах одинаковое, хотя абсолютное их количество разное.

Таблица 1

Состав исследуемых полнорационных комбикормов, %

Состав рецепта Номера рецептов

ПК-2-0 ПРЕДСТАРТЕР бройлеры 1-4 дня ПК-5К СТАРТ бройлеры 11-20 дней ПК-6Н РОСТ бройлеры 15-28 дней ПК-6К ФИНИШ бройлеры свыше 33 дней ИК-6 бройлеры 5 недель и старше ПК-1 куры-несушки 21-47 недель

Пшеница 33.37 49.40 53,25 57,75 38,85 40,00

Мелкая пшеница 5,00 4,00 4,00 3,5 8,00 15,00

Шрот соевый 21,00 27,00 21,00 24,50 12,00 7,14

Шрот подсолнеч-никовый - - - - 8,00 4,58

Соя полножировая - - - - 7,17 8,59

Кукуруза 25,00 10,00 5,00 13,5 17,10 19,99

Мука рыбная 5,00 3.00 3,00 - 3,5 5,20

Мука травяная 5,00 - - - - -

Мука известняковая 0,90 0,64 0,62 0,70 0,80 4,16

Мука мясная - - - 5,00 - 2,00

Мука костная - - - - - 5,09

Фосфат кормовой 1,30 1,49 1,23 1,60 0,60 +

П5-1ВМС-СТАРЦ 0,50 0,50 0,50 0,50 1,00 1,00

Метионин 0,36 0,13 0,10 0,21 0,27 0,09

Лизин 0,37 0,32 0,27 0,21 0,30 +

Треонин 0,14 0,15 0,09 0,08 0,11 +

Микофикс + 0,05 0,06 0.08 0,02 +

Соль поваренная 0,18 0,11 0,15 0,17 0,25 0,33

Сода питьевая 0.04 0,04 0,04 0.10 0.01 0,04

Ячмень - - - - 6,95 -

Жмых подсолнечника 2,50 - 5,30 - - 12,73

Масло подсолнечное 1,00 2,45 4,70 5,30 1,00 2,89

Наибольшее количество сырого протеина отмечалось в комбикорме ПК-5К СТАРТ (бройлеры 11-20 дней) - 23,03%, в комбикормах ПК-2-0 ПРЕДСТАРТЕР (для цыплят 1-4 дней) - 21,52% и ПК-6Н РОСТ (бройлеры 15-28 дней)-21,06%.

Меньше всего протеина в комбикорме ПК-1 (для кур-несушек) -17,40%. Наименьшее количество жира (4,1%) и сырой клетчатки (2,98%) отмечалось в комбикорме ПК-2-0 ПРЕДСТАРТЕР (для цыплят 1-4 дней). В других видах комбикормов соотношение жира и клетчатки было примерно на одном уровне.

При нормировании комбикормов для птицы особое внимание необходимо уделять наличию в них витаминов и нутриентов, так как они относятся к жизненно необходимым веществам. При их недостатке у сельскохозяйственной птицы нарушается обмен веществ, снижается устойчивость

к заболеваниям, замедляется рост, ухудшаются воспроизводительные качества. Потребность птицы в витаминах и нутриентах за счет компонентов комбикормов удовлетворяется лишь частично, поэтому их вводят дополнительно.

Нами было изучено содержание витаминов, макро- и микроэлементов в комбикормах (таблица 3). Из представленных данных видно, что все корма по содержанию этих компонентов были сбалансированными. Однако комбикорм ПК-5К СТАРТ (для бройлеров 11-20 дней) содержал несколько большее количество витаминов: витамина А - 15,00 тыс.МЕ и витаминов группы В: В1 - 3,00мг, В2 - 8,00мг, В3 - 15,00мг, В5 - 4,00мг (что способствовало улучшению качества инкубационных яиц).

Таким образом, полученные нами данные указывают на высокую питательную ценность исследованных кормовых смесей ПК-2-0 ПРЕД-СТАРТЕР (для цыплят 1-4 дней). ПК-5К СТАРТ (бройлеры 11-20 дней), ПК-бН РОСТ (бройлеры 15-28 дней), ПК-6К ФИНИШ, ПК-1 (для кур-несушек). Все они содержали достаточное количество протеина, в составе которого имелись незаменимые аминокислоты, жира, углеводов, витаминов, микро- и макронутриентов.

Для определения безопасности кормовых смесей были проведены бактериологические исследования кормов из различных хозяйств. Установлено, что количество КМЛФАнМ (КОЕ/г) обнаруживалось в пределах от 1,0х103 до 4,Зх103 в кормах из ЗАО «Элинар-Бройлер», ООО «НовоПетровская» Московской области, ЗАО «Краснояружский бройлер» Белгородской области; от 1,0х104 до 1,7х104 в кормах из ЗАО «Петелинской птицефабрики» Московской области.

На ОНО ППЗ «Кучинский» Московской области показатели колебались от 1,3х104 до 4.3х105. Худшие результаты были получены при исследовании комбикормов из ООО «Птицефабрика Акашевская» (Марий-Эл). КМАФАнМ находилось в пределах от 2,4х105 до 5.7х106 КОЕ/г.

Таким образом, данные показатели находились в пределах МДУ во всех кормах из 5 хозяйств: ЗАО «Элинар-Бройлер». ОНО ППЗ «Кучинский», ЗАО «Петелинская птицефабрика», ООО «Ново-Петровская» Московской области и ЗАО «Краснояружский бройлер» Белгородской области.

Комбикорма из ООО «Птицефабрика Акашевская» (Марий-Эл) имели общую микробиологическую обсемененность значительно больше максимального допустимого уровня. Кислотное перекисное число жира в комбикормах было в пределах нормы.

Исследования кормовых смесей из всех хозяйств на содержание в них токсичных элементов показали, что концентрации этих веществ во всех комбикормах были на фоновом уровне (мг/кг): ртуть - 0,1, кадмий - 0,001, свинец - 0,007, мышьяк - 0,006 и находились в пределах МДУ, так же как и содержание радионуклидов.

Химический состав к пищевая ценность исследуемых комбикормов для различных возрастных групп

сельскохозяйственной птицы

№ п/п Показатели качества Единицы измерения Номер рецепта и возраст птицы

ПК-2-0 ПРЕДСТАРТЕР цыплята 1-4 дня ПК-5К СТАРТ бройлеры 11-20 дней ПК-6Н РОСТ бройлеры 15-28 дней ПК-6К ФИНИШ бройлеры свыше 33 дней ПК-6 бройлеры 5 недель и старше ПК-1 курицы-несушки 21-47 недель

1 Влажность % 12,90 12,00 11,00 12,00 12,80 12,00

2 Сырой протеин % 21,52 23.03 21,06 19,34±0,5 19,19 17,40

3 Сырой жир % 4,1 4,98 9.20 9,51 9,70 5,92

4 Сырая клетчатка % 2,98 3,98 4,24 4,44 4,50 4,90

5 Линолевая кислота % - 2,17 4,58 4,81 - -

6 Лизин % 1.42 1,44 1.25 1,00 1,12 0,80

7 Метионин % 0.36 0,66 0,71 0.54 -

8 Метионин + цистин % 1,03 0,93 0,97 0,80 0,88 0,65

9 Триптофан % - 0,28 0.25 0,23 -

10 Аргинин % - 1,39 1,36 1,25 - -

И Треонин % - 0,86 0,81 0,78 - -

12 Обменная энергия птиц ккал/100г 303,00 300,33 312,09 315,03 308,00 -

Витаминный и нутриентный состав комбикормов для различных возрастных групп сельскохозяйственной птицы

№ п/п Наименование Единицы измерения Номер рецепта и возраст птицы

ПК-2-0 цыплята 1-4 дня ПК-5К СТАРТ бройлер 11-20 дней ПК-бН РОСТ бройлер 15-28 дней ПК-6К ФИНИШ бройлер свыше. 33 дней ПК-6 бройлер 5 недель и старше ПК-1 курицы-несушки 21-47 недель

1 Витамины: А тыс. МЕ - 15,00 12,50 10,00 10.00

2 В] мг - 3,00 2,00 2,00 1,0

3 в2 мг - 8,00 6,00 6,00 4,0

4 В5 мг - 15,00 10,00 10,00 10,0

5 в4 мг - 1000,00 1000,00 1000,00 6000,00

6 в5 мг - 60,00 40,00 40,00 20,0

7 в6 мг - 4,00 3,00 3,00 3,0

8 Вп мг - 0,02 0,01 0,01 0,02

9 С мг - 100,00 100,00 100,00 100,00

10 Е мг 75,00 75,00 75,00 30,0

Из тыс. МЕ - 5,00 4,50 4,00 3,0

11 Фолиевая кислота (флаво-мицин) мг - 40,00 40,00 - - -

12 Микроэлементы: Железо мг - 60,00 60,00 60,00 - 100,00

13 Марганец мг - 80,00 80,00 80,00 70,00

14 Цинк мг - 80,00 80,00 80,00 70,00

15 Медь мг 10,00 10,00 10,00 25.00

16 Иод мг - 1,00 1,00 1,00 7,00

17 Селен мг - 0.20 0,20 0,20 0,20

18 Магний мг - 58,00 58,00 58,00 -

19 Макроэлементы: Калий % 0,08 0,89 0,74 0,64 0,70 0,70

20 Кальций % 1,08 0,96 1,06 0,98 0,94 3,71

21 Натрий % 0,17 0,16 0,14 0,09 - 0,16

22 Фосфор % 0,78 0,79 0,79 0,73 0,67 0,74

23 ЫаСЬ % 0,18 0,31 0,36 0,00 0,26 0,33

Определение содержания витаминов г руппы В в комбикормах, инкубационном яйце и биоматериале методом ИФА с помощью микробиологической тест-системы Vita Fast®

Одним из наиболее современных методов определения витаминов в комбикормах является метод иммуноферментного анализа (ИФА).

Нами апробирован и рекомендован метод ИФА с использованием микробиологической тест-системы Vita Fast®, который предназначен для количественного и качественного определения витаминов группы В (в частности, В], В2, В6, В9) в комбикормах, инкубационном яйце и биоматериале и полностью соответствует международным требованиям.

Содержание витаминов группы В в комбикормах, определенное методом ИФА - Vita Fast®, представлено в таблице 4 и на рисунке 1.

Как видно из представленных данных, витамины группы В (Вь В2, В6, В9) приближались к норме в кормах из птицефабрики ЗАО «Краснояруж-ский бройлер» Белгородской области. Хорошие результаты были получены и в хозяйствах ЗАО «Петелинская птицефабрика» и ЗАО «Элинар-Бройлер» Московской области. Чуть ниже были показатели на ООО «Ново-Петровская» и ОНО ППЗ «Кучинский» Московской области. Значительно ниже нормы содержание витаминов группы В отмечалось в кормах из ООО «Птицефабрика Акашевская» (Марий-Эл).

Рисунок I - Содержание витаминов В1; В2, В6, В9 в комбикормах для сельскохозяйственной птицы из различных хозяйств (мкг/кг)

Содержание витаминов группы В в комбикормах

(метод ИФА-Vita Fast®)_

Кол- Витамины группы В, мкг/г

Наименование Вилы кормов

птицефабрик во проб в, в2 В„ В,

ЗАО «Элинар- 5 ПК-2-0 ПРЕДСТАРТЕР 2,9/3,0 7,7/8,0 3,5/4,0 0,92/1,0

Бройлер» 5 ПК-5К СТАРТ 1,8/2,0 5,7/6,0 2,7/3,0 0,78/0,8

Московская 5 ПК-6Н РОСТ 1,8/2,0 5,7/6,0 2,7/3,0 0,55/0,6

область 5 ПК-6К ФИНИШ 1,7/2,0 5,7/6,0 2,7/3,0 0,56/0,6

5 ПК-1 куры-несушки 1,8/2,0 5,5/6,0 2,5/3,0 0,9/1,0

ООО «Ново- 5 ПК-2-0 ПРЕДСТАРТЕР 2,4/3,0 7,5/8,0 3,0/4,0 0,83/1,0

Петровская» 5 ПК-5К СТАРТ 2,0/2,0 5,4/6,0 2,7/3,0 0,7/0,8

Московская 5 ПК-6Н РОСТ 1,7/2,0 4,7/6,0 2,6/3,0 0,6/0,6

область 5 ПК-6К ФИНИШ 1,7/2,0 5,0/6,0 2,6/3,0 0,6/0,6

5 ПК-1 куры-несушки 2,0/2,0 5,3/6,0 2,6/3,0 0,88/1,0

ООО «Красно- 5 ПК-2-0 ПРЕДСТАРТЕР 3,0/3,0 7,8/8,0 4,0/4,0 0,94/1,0

яружский 5 ПК-5К СТАРТ 2,0/2,0 6,0/6,0 3,0/3,0 0,75/0,8

бройлер» 5 ПК-6Н РОСТ 2,0/2,0 5,9/6,0 2,9/3,0 0.57/0,6

Белгородская 5 ПК-6К ФИНИШ 1,9/2,0 6,0/6,0 3,0/3,0 0,55/0,6

область 5 ПК-1 куры-несушки 1,9/2,0 6,0/6,0 3,0/3,0 0,90/1,0

ООО «Пете- 5 ПК-2-0 ПРЕДСТАРТЕР 2,5/3,0 7,6/8,0 3,5/4,0 0,88/1,0

линская 5 ПК-5К СТАРТ 1,5/2,0 5,6/6,0 2,6/3,0 0,76/0,8

птицефабрика» 5 ПК-6Н РОСТ 1,6/2,0 4,7/6,0 2,5/3,0 0,58/0,6

Московская 5 ПК-6К ФИНИШ 1,6/2,0 5,0/6,0 2,5/3,0 0,54/0,6

область 5 ПК-1 куры-несушки 1,6/2,0 4,7/6,0 2,0/3,0 0,83/1,0

ОНО ППЗ 5 ПК-2-0 ПРЕДСТАРТЕР 2,4/3,0 7,2/8,0 3,1/4,0 0,80/1,0

«Кучинский» 5 ПК-5К СТАРТ 1,5/2,0 5,3/6,0 2,2/3,0 0,70/0,8

Московская 5 ИК-6Н РОСТ 1,2/2,0 4,3/6,0 2,0/3,0 0,56/0,6

область 5 ПК-6К ФИНИШ 1,3/2,0 5,0/6,0 2,1/3,0 0,50/0,6

5 ПК-1 куры-несушки 1,3/2,0 5,1/6,0 2,0/3,0 0,65/1,0

ООО «Птице- 5 ПК-2-0 ПРЕДСТАРТЕР 0,9/3,0 2,0/8,0 1,2/4,0 0,20/1,0

фабрика 5 ПК-5К СТАРТ 0,7/2,0 3,0/6,0 1,4/3,0 0,16/0,8

Акашевская» 5 ПК-6Н РОСТ 0,9/2,0 2,0/6,0 1,0/3,0 0,27/0,6

Республика 5 ПК-6К ФИНИШ 0,8/2,0 1,9/6,0 1,1/3,0 0,12/0,6

Марий-Эл 5 ПК-1 куры-несушки 1,0/2,0 2,2/6,0 2,1/3,0 0,20/1,0

Примечание: числитель- определенное содержание витаминов в комбикормах; знаменатель - норма содержания витаминов в комбикормах.

Количество витаминов группы В в кормовых смесях может варьировать в значительных пределах и определяется по их содержанию в курином яйце (в основном, в желтке). Содержание витаминов группы В в инкубационном яйце от кур-несушек из различных хозяйств, которым скармливались изученные нами ранее комбикорма, определенное с помощью микробиологического метода ИФА-Vita Fast® представлено на рисунке 2.

Анализируя данные рисунка 2, мы видим, что среднее значение содержания витаминов В[, Вб, В9 было наибольшим в инкубационном яйце с птицефабрики ЗАО «Краснояружский бройлер» Белгородской области. Затем, в порядке уменьшения содержания этих витаминов в инкубаци-

онном яйце, идут птицефабрики ЗАО «Элинар-Бройлер», ООО «НовоПетровская», ЗАО «Петелинская птицефабрика» и ОНО ППЗ «Кучинский» Московской области. Все они находились в пределах минимальной нормы по желтку, установленной для инкубационных яиц. Исключение составили инкубационные яйца из ООО «Птицефабрики Акашевская» (Марий-Эл), где содержание всех исследуемых витаминов было значительно ниже установленных норм.

7,8___

Рисунок 2 - Содержание витаминов группы В в инкубационном яйце (мкг/кг)

Полученные нами данные свидетельствуют о том, что чем меньше содержалось витаминов в комбикормах, тем меньше их отложилось в инкубационном яйце, и, в частности, в желтке.

Дальнейшие исследования были направлены на определение содержания витаминов группы В в биоматериале - печени различных возрастных групп сельскохозяйственной птицы. Исследованию подвергались пробы печени 10-ти, 20-ти, 30-ти дневных цыплят и кур-несушек. Результаты этих исследований представлены на рисунке 3. Было установлено, что содержание всех витаминов группы В в печени всех возрастных групп птицы напрямую зависело от их содержания в комбикормах.

Наилучшие результаты были отмечены при исследовании проб печени из хозяйств ЗАО «Краснояружский бройлер» Белгородской области и ЗАО «Элинар-Бройлер» Московской области и находились в пределах максимального уровня норм для всех витаминов. В пробах печени из хозяйств ООО «Ново-Петровская» и ЗАО «Петелинская птицефабрика» Мо-

сковской области содержание всех витаминов находилось на минимальном уровне нормы. В хозяйстве ООО «Птицефабрика Акашевская» Республики Марий-Эл во всех пробах печени, как и в кормах и в инкубационном яйце, содержание витаминов Вь В2, В6, В? было ниже установленной минимальной нормы.

Рисунок 3 - Содержание витаминов группы В в опытных пробах печени сельскохозяйственной птицы

Сравнительная оценка содержания витаминов группы В в комбикормах для различных возрастных групп птицы, инкубационном яйце и биоматериале, представленная в таблице 5 и на рисунке 4, указывает на прямую зависимость от их первоначального содержания в задаваемом птице корме. Те хозяйства, в которых в задаваемом птице корме все витамины группы В находились в пределах от минимальных до максимальных значений нормы, содержание этих витаминов было в пределах нормы и в яйце и биоматериале (печень). Таким образом, проведенные исследования показали, что с помощью метода ИФА с использованием микробиологической тест-системы Vita Fast® можно определять наличие витаминов группы В не только в комбикормах, но и в инкубационном яйце и биоматериале (печень). Процент их выявляемое™ высокий - 90-95%. Это позволяет осуществлять контроль за уровнем внесения витаминов в комбикорма непосредственно в хозяйствах.

Метод ИФА Vita Fast® высокочувствительный, быстрый (не более 4 часов), прост в исполнении, не требует высокой квалификации обслуживающего персонала и может использоваться во всех ветеринарных лабораториях.

Таблица 5

Сравнительная оценка содержания витаминов группы В в комбикормах, инкубационном яйце и биоматериале (микробиологический метод ИФА-Vita Fast®)

Наименование птицефабрик Витамины группы В, мкг/г

В [(тиамин) Bi(рибофлавин) Bs(пиридоксии) В<.)(фолиевая кислота)

Корма Печень Яйцо Корма Печень Яйцо Ко рма Печень Яйцо Кор ма Печень Яйцо

«Краснояруж-ский бройлер» Белгородская область 3,0 1,7 5,6 8,0 16,0 5,3 4,0 7,3 2,62 1,3 3,8 0,35

ЗАО «Элинар-Бройлер» Московская область 2,9 1,5 4,6 8,0 15,5 4,7 3,8 6,0 0,25 1,2 3,5 0,31

ООО «НовоПетровская» Московская область 2,5 1,4 3,4 7,6 14,5 4,0 3,5 5,5 0,23 1,1 3,1 0,23

«Петелинская птицефабрика» Московская область 2.4 1,3 3,3 7,5 14,3 3,8 3,3 4,4 0,22 1,0 2,4 0,23

ОНО ппз «Кучинский» Московская область 2,2 1,1 3,2 7,2 14,0 3,5 3,1 4,1 0,18 0,9 2,0 0,19

ООО «Птицефабрика Акашевская» Республика Марий-Эл 0,9 0,47 1,7 2,0 5,9 2,3 1,2 3,6 0,12 0,5 2,1 0,13

Нормы содержания витаминов 3,0 1,41,9 3,56,8 8,0 14,516,5 4,07,8 4,0 6,28,2 0,223,7 1,5 3,54,0 0,230,45

Рисунок 4 - Сравнительная оценка содержания витаминов группы В в комбикормах, инкубационном яйце и биоматериале (микробиологический метод ИФА-Vita Fast®)

■ В1 ПК в 91 Печень я S1 Яйцо

я 82 ПК И В2 Печень г В2 Яйцо

■ 69 П.-i ю В9 Печень : В9 Яйцо

№ Во ПК о 86 Печень S) Вб Яйцо

Определение содержания витаминов в комбикормах методом ИФА с помощью конкурентной тест-системы Ridascreen Fast®

Еще одним простым, высокочувствительным, специфичным, обладающим высокой скоростью выполнения анализа является разновидность метода ИФА с использованием конкурентной системы Ridascreen Fast®. Этот метод чаще всего используется для исследования комбикормов на наличие витаминов В7 (биотина), В12 (цианкобаламина) и В9 (фолиевой кислоты). Нами были проведены исследования 5 проб каждого вида комбикорма ПК-2-0 ПРЕДСТАРТЕР, ПК-5К СТАРТ, ПК-6Н РОСТ, ПК-бК ФИНИШ, ПК-1 куры-несушки из всех шести хозяйств на наличие витаминов В7, В9, В12. Полученные данные представлены в таблице 6 и на рисунке 5.

Анализируя полученные результаты, можно сказать, что метод ИФА -Ridascreen Fast®, по сравнению с ИФА - Vita Fast®, позволяет определить содержание витаминов только в комбикормах и с меньшей точностью - до 80-85%. Этот метод подтверждает данные по содержанию витаминов группы в комбикормах, полученные с помощью метода ИФА - Vita Fast®. Содержание витаминов В7, Bs и B)2 приближено к норме во всех видах комбикормов в хозяйствах ЗАО «Краснояружский бройлер» Белгородской области; ЗАО «Элинар-Бройлер», ООО «Ново-Петровская», ЗАО «Пете-линская птицефабрика» Московской области. В хозяйствах ОНО ППЗ «Кучинский» Московской области и ООО «Птицефабрики Акашевская» (Марий-Эл) содержание витаминов во всех пробах всех видов комбикормов значительно ниже нормы.

Таким образом, использование метода ИФА в модификации Vita-Fast® и Ridascreen Fast® , как показано на схеме 1. позволяет быстро и эффективно определять витамины в кормах и биоматериале. Эти методы не требуют больших материальных затрат и дорогостоящего оборудования. Использование безопасных реагентов, доступность, высокая чувствительность, простота и короткое время анализа определяют перспективность и возможность их широкого использования в лабораториях.

Пробопод готовка

1 минута

Экстракция

3 минуты

Фильтрование

2 минуты

Иммуноферментный анализ

15 минут

Схема 1 - Экспресс-анализ витаминов метом ИФА

Таблица 6

Содержание витаминов группы В в пробах комбикормов из различных хозяйств (метод ИФА-ШсЫсгеепРав!®)

Наименование птицефабрик Номера рецептов Витамины группы В

В7 (биотип), мкг/кг Ви, мкг/кг ВС(9), мг/кг

«Краснояружский бройлер» Белгородская область ПК-2-0 ПРЕДСТАРТЕР ПК-5К СТАРТ ПК-6Н РОСТ ПК-6К ФИНИШ ПК-1 для кур-несушек 91,0/100,0 58,0/60,0 55,0/50,0 48,0/50,0 90,0/100,0 28,0/30,0 18,5/20,0 14,5/15,0 14,0/15,0 28,0/30,0 0,87/1.0 0,70/0,8 0,52/0,6 0,5 0/0,6 0,85/1,0

ЗЛО «Элинар-Бройлер» Московская область ПК-2-0 ПРЕДСТАРТЕР ПК-5К СТАРТ ПК-6Н РОСТ ПК-6К ФИНИШ ПК-1 для кур-несушек $9,8/100,0 55,8/60,0 44,8/50,0 47,6/50,0 97,6/100,0 27,0/30,0 16,6/20,0 14,0/15,0 14,2/15,0 27,8/30,0 0,87/1,0 0,70/0,8 0.50/0,6 0,51/0,6 0,84/1,0

ООО «НовоПетровская» Московская область ПК-2-0 ПРЕДСТАРТЕР ПК-5К СТАРТ ПК-6Н РОСТ ПК-6К ФИНИШ ПК-1 для кур-несушек 89,0/100,0 52,0/60,0 40,0/50,0 47,0/50,0 94,0/100,0 27,0/30,0 16,4/20,0 10,6/15,0 12,8/15,0 27,2/30,0 0,72/1,0 0,66/0,8 0,38/0,6 0,48/0,6 0,76/1,0

«Петелинская птицефабрика» Московская область ПК-2-0 ПРЕДСТАРТЕР ПК-5К СТАРТ ПК-6Н РОСТ ПК-6К ФИНИШ ПК-1 для кур-несушек 86,4/100,0 58,2/60,0 48,0/50,0 49.2/50,0 98,4/100,0 29,0/30,0 19,2/20,0 14,4/15,0 14,0/15,0 27,4/30,0 0,82/1,0 0,70/0,8 0,50/0,6 0,52/0,6 0,76/1,0

ОНО ППЗ «Кучинский» Московская область ПК-2-0 ПРЕДСТАРТЕР ПК-5К СТАРТ ПК-6Н РОСТ ПК-6К ФИНИШ ПК-1 для кур-несушек 39,0/100,0 38,0/60,0 32,0/50,0 35,0/50,0 45,0/100,0 22,0/30,0 20,0/20,0 10,6/15,0 9,0/15,0 15,0/30,0 0,75/1,0 0,60/0,8 0,54/0,6 0,45/0,6 0,60/1,0

ООО «Птицефабрика Акашевская» Республики Марий-Эл ПК-2-0 ПРЕДСТАРТЕР ПК-5К СТАРТ ПК-611 РОСТ ПК-6К ФИНИШ ПК-1 для кур-несушек 22,0/100,0 14,4/60,0 23,0/50,0 17.2/50,0 29,0/100,0 12,6/30,0 6,8/20,0 9,2/15,0 4,8/15,0 11,0/30,0 0,17/1,0 0,11/0,80 0,24/0,60 0,09/0,60 0,15/1,0

Примечание: числитель- определенное содержание витаминов в комбикормах; знаменатель - норма содержания витаминов в комбикормах

Содержание витаминов В7 и Вп, мкг/кг в комбикормах (метод ИФА-Ш<1азсгеепРа518)

Содержание витамина ЕЬ, мг/кг в комбикормах (метод ИФА-ШёазсгеепРая!18')

Рисунок 5 - Определение содержания витаминов В7, В|2, В9 в комбикормах методом ИФА-ШсЬчвсгеепРаз!®

Определение содержания витаминов В, и Bi2 методом ВЭЖХ

Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) является современным физико-химическим методом исследования и применяется преимущественно для анализа водорастворимых витаминов в кормовых смесях.

Нами при использовании метода ВЭЖХ была предложена предварительная иммунноаффинная очистка на колонках EASY-EXTRACT® при проведении хроматографического анализа для обнаружения витаминов В9, В12 в комбикормах. Результаты исследований представлены на рисунке 6.

Витамин Вс (9). мг/кг

оно ппз

Кучинский» I/O

ООО "Птицефабрика

ООО «НовоПетрове кая>> 1,42

ЗАО чЭлинар-Бройлер»1,45

ЗАО

ООО «Ново

Петровская

ООО «Петелинская птицефабрика» 27,3

Витамин Вп.мкг/кг

Рисунок 6 - Содержание витаминов Вс(9) (мг/кг) и В12 (мкг/кг) в комбикормах из различных хозяйств

ооо

«Птицефабрик а Акашевскзя» 15

ООО и К рл с ноя рут с и ий бройлер» 29,1

ЗАО «Элинар-Бройлер»

Полученные данные при использовании метода ВЭЖХ для обнаружения витаминов в комбикормах подтверждают ранее полученные результаты при использовании метода ИФА Vita-Fast и RidascrcenFast®.

Наилучшие результаты при определении витаминов В9 и Bi2 в комбикормах для всех возрастов сельскохозяйственной птицы отмечены в хозяйствах ЗАО «Краснояружский бройлер» Белгородской области, ЗАО «Эли-нар-Бройлер», ЗАО «Петелинская птицефабрика» и ООО «НовоПетровская» Московской области. Ниже нормы содержание витаминов В? и В и отмечено в хозяйствах ОНО ППЗ «Кучинский» Московской области и ООО «Птицефабрика Акашевская» (Марий - Эл).

Сравнительная оценка и значение использования методов ИФА (Vita Fast® и Ridascreen Fast®) и ВЭЖХ

Особенно высокую информативность и достоверность при определении витаминов в комбикормах дает использование метода ВЭЖХ в сочетании с предварительной иммунноаффиниой очисткой на колонках EASY-EXTRACT®. Это видно при проведении сравнительного анализа содержания витамина В9 на рисунке 7.

На примере определения витамина В9 видно, что метод ВЭЖХ позволяет определять витамины в комбикормах с большей точностью и воспроизводимостью от 97 до 100%. Это эффективнее, чем при использовании методов ИФА- Vita Fast® и ИФА - Ridascreen Fast® . Поэтому ВЭЖХ является арбитражным методом, но возможность использования в ветеринарных лабораториях этого метода весьма ограничена, так как требует больших материальных затрат, дорогостоящего оборудования, нуждающегося в квалифицированном обслуживании, и может использоваться только в крупных лабораториях.

Рисунок 9 - Сравнительный анализ содержания витамина В9 в опытных пробах комбикормов методом ИФА- Vita Fast® , ИФА - Ridascreen Fast® и ВЭЖХ

выводы

1. Комплексная оценка кормовых смесей по химическому составу, пищевой ценности и калорийности показало, что все комбикорма были полнорационными, сбалансированными и по своему составу относились к пшеничному виду. Содержание пшеницы в кормах находилось в пределах от 33,37% до 57,75%, мелкой пшеницы (мучка пшеничная) от 4% до 15%, а кукурузы от 10,00% до 25,00%. В комбикормах для бройлеров в возрасте от 33 дней и старше, и у кур-несушек преобладали белковые корма: шрот соевый - 7,14-27,0%; шрот подсолнечный-от 4,58 до 13,0%. Во всех кормах присутствовала мука рыбная - от 3 до 5%, мука известняковая - от 0,62 до 4,16% в кормах для кур-несушек, а в кормах ПК-6К ФИНИШ (для бройлеров свыше 33 дней), ПК-6 (для бройлер 5 недель и старше) и ПК-1 (кур-несушек)-мясная мука- от 2,0% до 5% и костная-5%.

2. Бактериологические исследования комбикормов показали, что КМАФАнМ, находилось в пределах МДУ (от 1,0х103 до 4,Зх103 КОЕ/г) в кормах из всех хозяйствах, кроме ООО «Птицефабрика Акашевская» Республики Марий-Эл, где эти показатели были значительно выше максимально допустимого уровня.

3. Исследования кормовых смесей на содержание в них токсичных элементов показали, что концентрации этих веществ во всех комбикормах были на фоновом уровне (мг/кг): ртуть - 0,1, кадмий - 0,001, свинец -0,007, мышьяк -0,006 и находились в пределах МДУ.

Содержание в них радионуклидов цезия-137 и стронция-90, а также кислотное перекисное число жира находились в пределах нормы.

4. Усовершенствованный метод ИФА с использованием микробиологической системы Vita Fast® является специфичным, быстрым, высоко чувствительным и используется для определения содержания витаминов группы В в комбикормах, инкубационном яйце и биоматериале (процент выявляемое™ составляет 90-95%), и позволяет осуществлять контроль за уровнем внесения витаминов в комбикорма непосредственно в хозяйствах.

5. С помощью модифицированного метода ИФА с использованием микробиологической системы Vita Fast® установлена прямо пропорциональная зависимость содержания витаминов группы В в комбикормах, ин-кубацимшом яйце и биоматериале. Чем меньше содержалось витаминов в скармливаемых птице комбикормах, тем меньше их откладывалось в инкубационном яйце и биоматериале.

6. Установлено, что метод ИФА с конкурентной системой Ridascreen Fast®, в отличие от ИФА - Vita Fast®, подтверждает данные но содержанию витаминов группы В, но менее точешй (80-85%) и позволяет определять содержание витаминов только в комбикормах.

7. Для обнаружения витаминов В9 и В|2 в комбикормах предложено использовать метод ВЭЖХ с предварительной иммунноаффинной очисткой на колонках EASY-EXTRACT®, позволяющий обнаруживать витамины в пределах от 0,15 мг/кг до 0,95 мг/кг ± 0,01 -0.001.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Разработаны «Методические рекомендации по определению витаминов группы В в комбикормах, сырье для производства комбикормов, ингредиентах, премиксах, печени и яйце методом иммуноферментного анализа, микробиологическим методом и методом высокоэффективной жидкостной хроматографии» (Утверждены методической комиссией ФГУ ЦНМВЛ, протокол №11 от 16.03.2009г. и секцией «Ветеринарно-санитарная экспертиза» Отделения ветеринарной медицины РАСХН от 26.04.2011г.).

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Сатюкова Л.П. Роль грибов и микотоксинов в изменении качества кормов / B.C. Борисова, Л.П. Сатюкова, И.Р. Смирнова // Материалы VI Международной научной конференции студентов и молодых ученых «Живые системы и биологическая безопасность населения». - М. - МГУПБ -2007. - С. 270-272.

2. Сатюкова Л.П. Ветеринарно-санитарная оценка методов определения витаминов для птицеводства. / Смирнова И.Р., Михалев A.B., Сатюкова Л.П., Борисова B.C.// Ветеринария. - 2008. - №6 - С.41- 46.

3. Сатюкова Л.П. Современные методы определения качества и безопасности кормов в России. //Материалы Международной научно-практической конференции преподавателей, молодых ученых и аспирантов аграрных вузов РФ «Актуальные проблемы современного аграрного производства». - М,- РУДН - 2008. - С. 145 - 148.

4. Сатюкова Л.П. Современный иммуноферментный метод контроля витаминов в кормах, кормовых добавках и биоматериале.// Материалы Международной научно-практической конференции преподавателей, молодых ученых и аспирантов аграрных вузов РФ «Актуальные проблемы современного аграрного производства». - М. - РУДН - 2008. - С. 148 -150.

5. Сатюкова Л.П. Ветеринарно-санитарная характеристика основных видов кормов для прудовых рыб / Смирнова И.Р., Михалев A.B., Сатюкова Л.П., Борисова B.C. // Ветеринария. - 2009. - № 5 - С.30-35.

6. Сатюкова Л.П. Современные методы контроля витаминов в кормах, кормовых добавках и биоматериале/ Л.П. Сатюкова, Смирнова И.Р. // Ветеринария. - 2010. - № 11 - С. 37- 40.

Отпечатано в типографии ООО "Франтера" Подписано к печати 13.05.20Пг. Формат 60x84/16. Бумага "Офсетная №1" 80г/м2. Печать трафаретная. Усл.печ.л. 1,50. Тираж 150. Заказ 436.

www.frantera.ru

Содержание диссертации, кандидата ветеринарных наук, Сатюкова, Людмила Павловна

Введение

1.0бзор литературы

1.1. Краткие сведения о витаминах и их роли в организме птицы

1.1.1. Витамины, растворимые в жирах

1.1.2. Витамины, растворимые в воде

1.2. Потребность сельскохозяйственных животных и птицы в витаминах

1.3. Биохимия и физиология взаимодействия витаминов

1.4. Нормативы кормления сельскохозяйственной птицы

1.5. Нормирование витаминов и микроэлементов

1.6. Характеристика существующих методов определения витами- 52-54 нов

И. Собственные исследования

2.2. Результаты исследований

2.2.1. Характеристика кормовой базы и особенности питания сель- 70-73 скохозяйственной птицы различных возрастных групп

2.2.2. Определение показателей качества и безопасности кормовых 71-83 смесей для выращивания птицы различных возрастных групп

2.2.3. Определение содержания витаминов В^тиамина), В2 (ри- 84-97 бофлавина), В6 (пиридоксина), В9 (фолиевой кислоты) в комбикормах, инкубационном яйце и биоматериале методом ИФА с помощью микробиологической тест-системы Vita Fast®

2.2.4. Определение содержания витаминов В7 (биотина), В9 (фо- 98-107 лиевой кислоты), В]2 (цианкобаламина) в комбикормах методом

ИФА с помощью тест-системы Ridascreen Fast®

2.1. Место проведения исследований, материалы и методы

2.2.5. Определение содержания витаминов By и Bi2b комбикормах методом ВЭЖХ с предварительной иммуноаффинной очисткой на 108-118 колонках EASY-EXTRACT®

2.2.6. Сравнительная оценка и значение использования методов 119-123 ИФА (Vita Fast® и Ridascreen Fast®) и ВЭЖХ

III. Обсуждение результатов исследований 124

Выводы 132

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Ветеринарно-санитарная оценка кормов для сельскохозяйственной птицы и совершенствование методов определения в них водорастворимых витаминов"

В последние годы для интенсификации птицеводства предложены различные способы коррекции защитных свойств организма птиц. Особое место в технологии выращивания птицы занимают полнорационные корма с наличием биологически активных веществ: витаминов, микроэлементов, пробиотиков, антиоксидантов. Большинство витаминов не синтезируются в организме и поэтому являются обязательной частью пищевого рациона. Физиологический баланс всех необходимых организму витаминов обеспечивается их поступлением в соответствии с суточной потребностью. (3)

Для достижения полноценной биологической активности питания в рацион вводить правильно подобранные в количественном соотношении между собой и с другими пищевыми веществами витаминные комплексы. (5)

В организм птиц витамины поступают с кормами в виде готовых соединений или провитаминов, при этом некоторая их часть синтезируется микрофлорой кишечника. Авитаминозы развиваются в результате недостатка витаминов или провитаминов в рационе, введения в корма избыточного количества веществ (жиры, белки и др.), увеличивающих потребность птиц в отдельных витаминах, а также при применении антибиотиков, сульфаниламидов, кокцидиостатиков, угнетающих биосинтез витаминов кишечной микрофлорой. Потребность птиц в витаминах резко возрастает при инфекционных болезнях, заболеваниях органов пищеварения, сопровождающихся нарушением процесса их усвоения. Под воздействием стресс-факторов необходимость в витаминах А, Б, В2, В12, никотиновой и пантотеновой кислотах увеличивается примерно в 2 раза, а в витаминах Е, К — в 4 раза. Поэтому в кормовые смеси рекомендуется вводить до 11-12 витаминных препаратов. (3,5)

Раньше болезни витаминной недостаточности были следствием несбалансированности рациона и недостаточного содержания витаминов в кормах. В настоящее время, когда рационы для птиц обогащают в необходимом количестве витаминными премиксами, возникновение гиповитаминозов обусловлено следующими причинами: а) использованием кормовых ингредиентов, увеличивающих потребность организма птиц в витаминах (белки и жиры животного и растительного происхождения, содержащие высокий уровень непредельных углеводородов, госсипола, уреазы и перекисей липидов, а также грибковые токсины); б) введением в кормовые смеси или дачей с водой лекарственных препаратов, являющихся антагонистами витаминного обмена (антибиотики, кок-цидиостатики, сульфаниламидные и нитрофурановые препараты); в) действием на птиц неблагоприятных факторов, повышающих их потребность в витаминах (вакцинация, диагностические исследования, перевозка и пересадка, переуплотненность, загазованность помещений и др.); г) диспропорцией отдельных витаминов в кормах и неравномерным распределением витаминов и премиксов в кормовых смесях, чему способствуе г дополнительное обогащение кормов витаминами непосредственно в хозяйствах, без надлежащей эмульгации жирорастворимых витаминов и растворения в воде водорастворимых витаминов; д) снижением активности витаминов в премиксах и витаминных препаратах, имеющихся в хозяйстве. (9,13)

Систематический контроль за содержанием витаминов в организме п тиц позволяет выявить нарушение витаминного обмена на ранних стадиях, когда еще не наступили необратимые функциональные и морфологические изменения и их значительно быстрее можно вывести из такого состояния.

Обмен витаминов в организме птиц нестабилен и зависит от вида, породы, возраста, физиологического состояния, сезона года, условий содержания, сочетания питательных веществ и витаминов в рационе. Каждый из перечисленных факторов может изменять степень использования витаминов и, соответственно, влиять на зоотехнические и хозяйственные показатели.

Недостаточное поступление витаминов резко снижает усвоение питательных веществ из кормов, что приводит к нарушению функции отдельных органов, снижению устойчивости организма к различным инфекционным заболеваниям. Развиваются патологические процессы, которые приводят к скрытым формам — гиповитаминозам, а затем к авитаминозам.

Применительно к птице наиболее изученными являются витамины А, О, Е, К и ряд витаминов группы В (Вь В2, В3, В4, В5, В6, В7, В12). (3,5,9)

Одним из основных объектов биохимического контроля должна быть племенная птица, так как от ее физиологического состояния во многом зависит биологическая полноценность инкубационного яйца и жизнеспособность молодняка в первые дни жизни.

В настоящее время получено большое количество новых данных по питательности кормов для сельскохозяйственной птицы, уточнены их параметры по обменной энергии, доступному фосфору, которые включены в таблицы питательности и химического состава кормов и утверждены Министерством сельского хозяйства РФ, разработана концепция регламентирования качественных показателей комбикормов.

Специалисты вносят коррективы в программы кормления сельскохозяйственной птицы. Важнейшими причинами для этого являются: широкое распространение новых кроссов птицы, продуктивный потенциал которых требует улучшенного питания; сокращение в рационах доли кукурузы, соевого шрота и рыбной муки с использованием взамен их пшеницы, ячменя, ржи, рапсового, подсолнечного шротов, жмыха, гороха, мясокостной и перьевой муки; использование новых сортов зерновых и белковых кормов, требующих уточнения параметров питательности; изменение подходов к нормированию питательных веществ, а именно - с учетом их доступности, включение дополнительных показателей нормирования; включение в кормовые смеси адресных и неадресных белково-витаминно-минеральных концентратов (БВМК); расширение ассортимента добавок биологически активных веществ; производство комбикормов непосредственно в хозяйствах.

Все перечисленные факторы обусловливают необходимость по-новому оценивать питательную и энергетическую значимость каждого компонента, изменять нормы корма с учетом потребностей растущей и взрослой птицы, генетический потенциал продуктивности которых выше в 1,3-1,4 раза, чем у предыдущих кроссов.

Положительный эффект использования витаминов в птицеводстве гарантируется знанием физико-химических свойств каждого из них, физиологического значения и источников, норм потребления, технологии скармливания, взаимосвязи витаминов между собой и питательными веществами корма.

Новым направлением в птицеводстве является получение пищевых яиц и мяса птицы с заданными лечебными свойствами (йодированные яйца, продукты с повышенным содержанием отдельных витаминов, с низким содержанием холестерина и жира в мясе и др.). Для наших производителей очень важно освоить и усовершенствовать эти технологии, повышая, таким образом, рентабельность отрасли. При этом для питания птицы необходимы компоненты с высоким содержанием каротиноидов и витаминов. В связи с этим племенная птица должна быть одним из основных объектов биохимического контроля, так от ее физиологического состояния во многом зависят биологическая полноценность инкубационного яйца и жизнеспособность молодняка в первые дни жизни. (10)

Известны различные методы определения витаминов A, D, Е каротина в биологических объектах, препаратах, премиксах и комбикормах. Они основаны на спектрофотометрических и колориметрических методах, тонкослойной и газожидкостной хроматографии. Однако витамины в таких случаях подвергаются воздействию тепла, кислорода и света.

Современными физико-химическим методами исследования являются метод иммуноферментного анализа с использованием тест-систем Vita Fast® и Ridascreen Fast®, высокоэффективная жидкостная хроматография

ВЭЖХ), применяемые для анализа кормовых смеси и биологических объектов.

Цель и задачи исследований. Целью работы является ветеринарно-санитарная оценка кормов для сельскохозяйственной птицы, сравнительная оценка и совершенствование современных методов определения водорастворимых витаминов в кормах, инкубационном яйце и биоматериале (печень).

В задачи исследований входило:

• изучить возможность использования метода ИФА с помощью конкурентной системы Ridascreen Fast® для определения витаминов группы В в комбикормах;

• изучить возможность использования хроматографического анализа (ВЭЖХ) с предварительной иммуноаффинной очисткой на колонках EASY-EXTRACT® для определения витаминов В9, В12. в комбикормах;

• дать сравнительную оценку методов ИФА Vita Fast® и Ridascreen Fast®, а также ВЭЖХ для определения водорастворимых витаминов;

1.0Б30Р ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза", Сатюкова, Людмила Павловна

выводы

1. Комплексная оценка кормовых смесей по химическому составу, пищевой ценности и калорийности показала, что все комбикорма были полнорационными, сбалансированными и по своему составу относились к пшеничному виду. Содержание пшеницы в кормах находилось в пределах от 33,37% до 51,15%, мелкой пшеницы (мучка пшеничная) от 4% до 15%, а кукурузы от 10,00%) до 25,00%. В комбикормах для бройлеров в возрасте от 33 дней и старше, и у кур-несушек преобладали белковые корма: шрот соевый - 7,14-27,0%; шрот подсолнечный-от 4,58 до 13,0%. Во всех кормах присутствовала мука рыбная — от 3 до 5%, мука известняковая - от 0,62 до 4,16% в кормах для кур-несушек, а в кормах ПК-6К ФИНИШ (для бройлеров свыше 33 дней), ПК-6 (для бройлер 5 недель и старше) и ПК-1 (кур-несушек)- мясная мука - от 2,0% до 5% и костная-5%.

2. Бактериологические исследования комбикормов показали, что КМАФАнМ, находилось в пределах МДУ (от 1,0x103 до 4,3x103 КОЕ/г) в кормах из всех хозяйствах, кроме ООО «Птицефабрика Акашевская» Республики Марий-Эл, где эти показатели были значительно выше максимально допустимого уровня.

5. С помощью модифицированного метода ИФА с использованием микробиологической системы Vita Fast® установлена прямо пропорциональная зависимость содержания витаминов группы В в комбикормах, инкубационном яйце и биоматериале. Чем меньше содержалось витаминов в скармливаемых птице комбикормах, тем меньше их откладывалось в инкубационном яйце и биоматериале.

6. Установлено, что метод ИФА с конкурентной системой Ridascreen Fast®, в отличие от ИФА — Vita Fast®, подтверждает данные по содержанию витаминов группы В, но менее точный (80-85%) и позволяет определять содержание витаминов только в комбикормах.

7. Для обнаружения витаминов В9 и В]2 в комбикормах предложено использовать метод ВЭЖХ с предварительной иммуноаффинной очисткой на колонках EASY-EXTRACT®, позволяющий обнаруживать витамины в пределах от 0,15 мг/кг до 0,95 мл г/кг ± 0,01-0,001.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Сатюкова, Людмила Павловна, Москва

1. Абраров A.A. Эритроциты как удобный объект для исследования влияния жирорастворимых витаминов на клеточные мембраны // Тезисы докладов. ВНИИВСГЭ. М.- 1987.- С. 34-36.

2. Авцын А.П., Жаворонков A.A., Риш М.А., Строчкова Л.С. Микро-элементозы человека: этиология, классификация, органопатология. М.-Медицина.-1991.-С. 496-498.

3. Агеев В.Н., Алексеев Ф.Ф., Асриян М.А. и др. Промышленное птицеводство /Сост. В.И. Фисинин, Г.А. Тардатьян.- М.-Агропромиздат.-1985.- С. 59-63.

4. Акулов A.B., Апатенко В.М., Бесарабов Б.Ф. и др. Патолого-анатомическая диагностика болезней птиц.- М.- Колос.- 1978.- С. 98-111.

5. Алексеенко И.Ф. Железодефицитные состояния. М. - Медицина.-1996.-С. 192-194.

6. Аликаев В.А., Петухова Е.А., Халенева Л.Д и др. Справочник по контролю кормления и содержания животных. М.- Колос. -1982.- С. 320334.

7. Антонов Б.Н. Лабораторные исследования в ветеринарии // Биохимические и микологические методы / Справочник.- М. Агропромиздат. -1991.- С. 287-298.

8. Афанасьев Ю.И., Боронихина Т.В. Витамин Е; значение и роль в организме //Успехисовр. биол.- М. Наука. - 1987.- С. 400-411.

9. Бакулин В. А., Севастьянов Г. А., Коровин Р. Н. и др. Атлас ультраструктурной патологии вирусных болезней птиц.- СПб.: НИИХСПбГУ. -1999.- С. 87-101.

10. Балаховский С.Д. Витамины. 1956. - Сб. 2. 70.- С. 102-105.

11. Бауман В.К. Биохимия и физиология витамина Д. Рига. - Зинатне.-1989.- С. 23-29.

12. Бернхард С. Структура и функция ферментов. М. - Мир. - 1971.- С. 334-340.

13. Березовский В.М. Химия витаминов. М. - 1973.- С. 56-62.

14. Бессарабов Б. Ф. Болезни сельскохозяйственной птицы. М. - Колос.- 1973. - С. 78-83.

15. Болотников И.А., Конопатов Ю.В. Практическая иммунология с.-х. птицы. Санкт-Петербург.- Наука. -1993.- С. 208-212.

16. Вальдман А.Р. В сб. Биологически активные кормовые добавки,- Рига.- Зипатне. 1965. - С. 158-160.

17. Вальдман А.Р., Сурай П.Ф., Ионнов И.А., Сахацкий Н.И. Витамины в питании животных. Харьков.- РИП «Оригинал». -1993.- С. 21 - 42.

18. Вальдман А.Р. и др. Антиоксиданты в питании А-гипервитаминозных цыплят // Биохимия всасывания питательных веществ у животных.- Рига. Зинатне.- 1981. - С. 7-17.

19. Вейнберга 3., Андерсон П. Влияние антиоксидантов на рост птиц и некоторые биохимические показатели обмена веществ // Труды ЛСХА / Латвийской с.-х. академии. 1978.- вып. 144. - С. 28-34.

20. Венедиктов А.М. Справочник по кормлению с.-х. животных.- М.-Россельхозиздат. -1983.- С. 303-307.

21. Войнар А.И. Биологическая роль микроэлементов в организме животных и человека. М. - 1960,- С. 261-268.

22. Войтов Л.И., Кожевников Е.М., Ефимова М.Я. Гиповитаминозы Вь В2, В9, А, Б, Е, К у кур: диагностика и профилактика. Кишинев.- Картя Молдавеняскэ. 1976. - С. 76-81.

23. Войтов Л.И., Федорова Н.М., Бездверный В.П. и др. Система мероприятий по борьбе с болезнями витаминной недостаточности в промышленном птицеводстве. Методические указания ВНИИ НБЖ.- Воронеж.-1989.- С. 9-51.

24. Георгиевский В.И., Анненков Б.Н., Самохин В.Т. Минеральное питание животных. М.- Колос. - 1979. - С. 470-480.

25. Георгиевский В. И. Минеральное питание сельскохозяйственной птицы. М. - Колос. - 1970.- С. 156-160.

26. Гордон Р. Ф., Джордан Ф. Т. У. Болезни птиц.- М. Агропромиздат.-1985.- С. 123-130.

27. ГОСТ 13496.2-91. «Корма, комбикорма, кормовое сырье. Метод определения сырой клетчатки».- С. 19-25.

28. ГОСТ 13496.3-92 (ИСО 6496-83). «Комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения влаги».- С. 25-29.

29. ГОСТ 13496.12-98. «Комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения общей кислотности».- С. 79-86.

30. ГОСТ 13496.14-87. «Комбикорма, комбикормовое сырье, корма. Метод определения золы, не растворимой в соляной кислоте».- С. 88-91.

31. ГОСТ 13496.15-97. «Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения содержания сырого жира».- С. 91-106.

32. ГОСТ 13496.21-87. «Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения лизина и триптофана».- С. 143-154.

33. ГОСТ 13496.22-90. «Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Метод определения цистина и метионина».- С. 154-158.

34. Двинская Л.М. и др. Рекомендации витаминного питания с.-х. животных. М. - Агропромиздат. - 1989.- С. 91-95.

35. Двинская Л.М., Дудин В.И., Решетова Л.В. Жирорастворимые витамины и методы их определения в биологических субстратах // Методические указания. Боровск. - 1979. - С. 19-25.

36. Двинская Л.М., Иванов В.П. Окислительное фосфорилирование в тканях цыплят при дефиците витамина Е в рационе // Бюллетень ВНИИФ-БиП с.-х. животных. Боровск. -1978. - вып. 2(49). - С. 53-61.

37. Двинская Л.М. Витамин Е и его окислительная функция в организме животных // Сб. научн. трудов ВНИИФБиП с.-х. животных. Боровск. -1976. - т. XV. - С. 98-103.

38. Дмитриев Л.Ф., Иванова М.В. Взаимодействие токоферола с пере-кисными радикалами в липосомах не ведёт к образованию гидроперекисей // Доклады Академии наук. М. - Наука. -1992.- т. 324, №. 2. - С. 459-464.

39. Дудин В.И., Двинская Л.М. Метаболизм атокоферола в организме цыплят раннего возраста // Бюллетень ВНИИФБиП с.-х. животных. Боровск. -1983.- т. 4 (72).- С. 63-66.

40. Дудин В.И., Двинская Л.М. Участие атокоферола в синтезе кислых липидов в организме цыплят // С.-х. биология. М.- Агропромиздат.-1986.- С. 101-104.

41. Емелина Н.Т. и др. Витамины в кормлении с.-х. животных и птицы. М.- Колос. -1970.- С. 85-90.

42. Кабата-Пендиас А., Пендиас X. Микроэлементы в почвах и растениях.- М.- Мир.- 1989.- С. 439-443.

43. Калашников А.П., Клейменов Н.И. Нормы и рационы в кормлении с.-х. животных // Справочное пособие. М.- Агропромиздат. 1985.- С. 350355.

44. Кондрахин И.П. Алиментарные и эндокринные болезни животных.-М.- Агропромиздат,- 1989.- С. 256-264.

45. Кудряшов Б.А. Биологические основы учения о витаминах. М. -1948.- С. 157-163.

46. Котик А. Н. Микотоксикозы птиц. Борки. - 1999.- С. 46-54.

47. Коровин Р. Н., Зеленский В. П., Трошева Г. А. Лабораторная диагностика болезней птиц: Справочник. -М.- Агропромиздат.- 1989.- С. 79-83.

48. Луцюк Н.Б., Васильев Н.В. Витамины и иммунитет. Томск. -1979.-С. 214-220.

49. Маслиева О.И. Анализ качества кормов и продуктов птицеводства.-М.- Колос.- 1970.- С. 28-99.

50. Маслиева О.И. Витамины в кормлении птицы. М.- Колос. — 1975.-С. 206-210.

51. Микулец Ю.И., Наумов А.Д. Влияние разных уровней ретинола на перекисное окисление липидов и функцию щитовидной железы у цыплят-бройлеров разного возраста. // Тезисы докл. Научно-практической конф. «Радиация и эндокринная система». Мн. 2001.- С. 57-58.

52. Надиров Н.К. Токоферолы и их применение в медицине и сельском хозяйстве -М.- Наука.- 1991.- С. 336-340.

53. Натансон А.О. Витамин А и А-витаминная недостаточность. М.-1961.- С. 132-135.

54. Нейланд О.Я. Органическая химия. М.- Высшая школа. -1990.-С.751-755.

55. Нефедова H.H. Окислительно-восстановительные процессы в организме растущих цыплят // Сб. работ молодых ученых Всесоюзного НИИ птицеводства. М. -1964,- вып. 7.- С. 144-150.

56. Овчаров К.Е. Витамины растений.- М.- Изд. 2-е.- «Колос».- 1969. С. 328 -330.

57. Околелова Т.М., Сергеева A.M. Витаминное питание с.-х. птицы и инкубационные качества яиц.- М,- ВНИИТЭИагропром.-1988.- С. 52-58.

58. Околелова Т.М., Егоров И.А., Крюков B.C. Взаимодействие витаминов в организме птицы // Вестник с.-х. науки. М. -1982.- №11.- С. 102-108.

59. Орлов Ф.М. Болезни птиц.- М.- Колос.- 1971.- С. 39-44.

60. Петрович С. П. Микотоксикозы животных. -М.- Росагропромиздат.-1991.- С. 128-235.

61. Притуленко О.В., Жедек М.С. Взаимодействие витаминов в организме цыплят//Птицеводство. М. - Киев.-1984.- вып. 37.- С. 30-35.

62. Рязанов Т.П. Депонирование витамина Е в тканях кур и цыплят // Сб. науч. трудов Моск. вет. академии. -М. -1975.- т. 81.- С. 140-141.

63. Рысс СМ. Витамины. -Л. -1963.- С. 103-109.

64. Сидоров И. В. Лекарственные вещества в птицеводстве.- М.- Колос.-1976.- С. 15-21.

65. Скурихин В.Н., Шабаев C.B. Витаминное питание сельскохозяйственных животных и птиц. М.- 1997.- С. 39-46.

66. Смирнов М.И. Витамины. М.- Медицина. -1974.- С. 125-150.

67. Сопиков П.М. Болезни птиц. М-Л. -1953.- С. 288-291.

68. Спиричёв В.Б., Конь И.Я. Биологическая роль жирорастворимых витаминов // ВИНИТИ. Итоги науки и техники / Физиология человека и животных. М. -1989.- т. 37.- С. 160-194.

69. Спиричёв В.Б., Барашнев Ю.И. Врожденные нарушения обмена Битами» нов. М.- Медицина. -1977.- С. 216-220.

70. Строжа И.К., Вевере Л.К. К вопросу об экспериментальном Е-гипервитаминозе у цыплят // Усвоение пищевых веществ в организме животных. Рига.- Зинатне. -1977.- С. 69-74.

71. Строжа И.К., Озолс А .Я., Вевере Л.К. Ассимиляция токоферола и углеводов в тонкой кишке цыплят при гипервитаминозах А и Е // Транспортные И обменные процессы в кишечнике животного. Рига.- Зинатне,-1984.- С. 89-96.

72. Субботин В. И., Субботина С. Г., Александров И. Д. Современные Лекарственные средства в ветеринарии.- Ростов-на-Дону.- Феникс,- 2000.-С. 54-60.

73. Сурай П.Ф., Ионов И.А., Панченко и др. Межвитаминные взаимоотношения в организме цыплят-бройлеров при скармливании им повышенных доз витамина А, Е и Д // Научн. тех. бюллетень. Харьков.- 1990.- № 28.-С. 19-24.

74. Терруан Т. Взаимодействие витаминов.- М.- Мир. -1969.- С. 25-30.

75. Труфанов A.B. Биохимия витаминов и антивитаминов.- М.- Колос.-1972.-С. 122-128.

76. Фисинин В.И., Тардатьян Г.А. Промышленное птицеводство.- М,-Агропромиздат,- 1991.- С. 544-550.

77. Фисинин В.И., Столляр Т.А. Производство бройлеров,- М.- Агро-промиздат. -1989,- С. 184-190.

78. Фисинин В.И., Журавлёв И.В., Айдинян Т.Г. Эмбриональное развитие птицы // Научн. труды.- М.- Агропромиздат.- 1990.- С. 126-127.

79. Фисинин В.И., Имангулов Ш.А., Егоров И.А., Околелова Т.М. Рекомендации по кормлению сельскохозяйственной птицы.- Сергиев Посад. -2000.- С. 67-73.

80. Халмурадов А.Г., Тоцкий В.Н., Чаговец Р.В. Транспорт жирорастворимых витаминов. Киев.- Наукова думка.- 1980.- С. 213-220.

81. Хенниг А. Минеральные вещества, витамины, биостимуляторы в кормлении с.-х. животных. М.- Колос.- 1976.- С. 56-63.

82. Хеншен А., Хупе К.-Л., Лотшпайх Ф., Вёльтер В. Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии. М.- Мир.- 1988.- С. 668-671.

83. Чаговец Р.В., Кузнецова Л.Н., Лахно Е.В., Рыбина А.А. Некоторые проблемы обмена витаминов при избыточном их поступлении в организм // Витамины в эксперименте и клинике.- М.- Медицина.- 1970.- вып. 2.- С. 125-150.

84. Шнайдман Л.О. Производство витаминов.- М,- Пищевая про-сть.-1973.- С. 438-442.

85. Шпаков А.П., Назаров В.К., Певзнер И.Л., Маковский Б.С. Кормовые нормы и состав кормов // Справочное пособие. Мн.- Ураджай. -1991 .С. 384-394.

86. М., Groppel В., Ludke Н // Tierzucht. 1972.- р. 26, р. 56.

87. Battistini V. е. a. Erythrocyte delta-aminolaevulinic acid dehydrase activity in anemia / Brit. J. Haematol. 1971.- vol. 20.- p. 177-184.

88. Bayer R.C., Chawan СВ., Bird F.H., Musgrave S.D. Characteristics of the absorptive surface of the amall intestine of the chicken from 1 day to 14 weeks of age// Poultry Sciens. 1975.-vol. 54.-№ l.-p. 155-169.

89. BrFton Robert S., Bacon Brace R., Ruknagel Richard O. Lipid peroxidation and associated hepatic organelle dysfunction in iron overload // J. Chem. and Phys. Lipids. 1987.- vol. 45.- № 2-Я.- p. 207-239.

90. Brown E.G. Evidence for the involvement of ferrous iron in the biosynthesis of s-aminolaevulinic acid by chicken erythrocyte preparations // Nature. -1958.-vol. 182.- p. 313-316.

91. Burk Raymond R, Solomons Noel W. Trace elements and vitamins and bioavailability as related to wheat and wheat foods // Amer. J. Clin. Nutr. -1985.- vol. 45,- № 5.- p. 1091-1102.

92. Cadet J.L., Lohr J.B., Jeste D.V. Trends in Neurosci. 1986.- vol.9.- p. 107-108.

93. Corongui F.R, Dessi M.A. // Biochem Pharmacol.- 1987.- vol.36.- p. 2251-2253.

94. DiplockA.T. //Proc. Nutr. Sci., 1974,- vol. 33.- p. 315-322.

95. Diplock A.T. Optimale Aufnahman von antioxidativen Vitaminen und Caroti-noiden, Empfehlungen fur die optimale Aufnahme zur Krank-hcitsvorsorge // Vitamin, Minerals, Spurenelem, -1993.- vol.8.- №1.- p. 11-17.

96. Dwivedi P. N. Prevent your birds from deficiency diseases // J. Poultry Guide,-1986.-vol. 23.-№ 11.-p. 137-161.

97. Fritz Rupert. Pathobiochemical mechanisms of hepatocllular damage following lipid peroxidation Ungemach // J. Chem. and Phys. Lipids. — t 1987.-vol.45.-№ 2-4.- p. 117-205.

98. Glascott P.A., Gilfor E., Farber J.L. Relationship of the metabolism of vitamin C and vitamin E in cultured hepatocytes treated with tert-butyl hydroperoxide // J. Mol. Pharmacol. 1995.- v. 48.- № 1.- p. 80-88.

99. Goldberg A. Porphyrin metabolism in relation to iron deficiency // In: Iron deficiency, Colloquia Geigy. 1970.- p. 481-498.

100. Heilmeyer L. Disturbances in heme synthesis // Thomas. Springfield.-1966.-p. 98-113.

101. Heller S.R., Lable R.F., Nutfer J. Asimplifled assay for porphyrins in whole blood//Clin. Chem.-1971. -vol. 17.-p. 151-159.

102. March B.E., Wong E., Seier L e. a. Hypervitaminosis E in the chick // J. Ntttrit., 1973.- vol. 103.- № 3.- p. 371-377.

103. Mejia L.A. et all. Role of vitamin A in the absorption, retention and distribution of iron in the rat // J. Nutr. 1979.- 109.- 129-137.

104. Nielsen F.N. The ultratrace elements // Trace Minerals in Foods / Ed. K.T. Smith. -New York, Marcel Dekkor. 1988.- p. 357-428.шщические рекомендации рассмотрены >^на ученом совете ФГУ ЦНМВЛ 16 марта 2009 года

105. Настоящие методические рекомендации устанавливают методы определения витаминов группы В в комбикормах, сырье для производства комбикормов, ингредиентах, премиксах, печени и яйце.

106. В отличие от белков, жиров и углеводов, витамины не являются источниками энергии или пластического материала для построения клеток организма, но они активируют и

107. Назначение и область применения.2. Общие положения.1 Выписка из ПротоколаI

108. Ф|ГУ Центральная научно-методическая ветеринарная лабораторияот 16.03.2009 года №11I

Информация о работе

Сатюкова, Людмила Павловна
кандидата ветеринарных наук
Москва, 2011
ВАК 06.02.05

Диссертация

Ветеринарно-санитарная оценка кормов для сельскохозяйственной птицы и совершенствование методов определения в них водорастворимых витаминов - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы