Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Устойчивость L-форм микобактерий туберкулеза к физическим и химическим факторам

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Устойчивость L-форм микобактерий туберкулеза к физическим и химическим факторам"

НАЦИОНАЛЬНАЯ АКАДЕМИЯ НАУК РЕСПУБЛИКИ КАЗАХСТАН ИНСТИТУТ МИКРОБИОЛОГИИ И ВИРУСОЛОГИИ

ПБ О*

г 8 т ^

На правах рукописи УДК 619: 579. 873. 21: 615. 23

АВИМУЛЬДИНА Сауле Токтасыновна

УСТОЙЧИВОСТЬ Ь-<ЮРМ МИКОБАКТЕРИЙ ТУБЕРКУЛЕЗА К ФИЗИЧЕСКИМ И ХИМИЧЕСКИМ ФАКТОРАМ

03.00.07 - МИКРОБИОЛОГИЯ

Автореферат на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Алматы 1994

Работа выполнена в Семипалатинском зооветеринарном институте

НАУЧНЫЕ РУКОВОДИТЕЛИ: доктор ветеринарных наук,

I-1

профессор | В. С.Федосеев |,

I_I

кандидат биологических наук, доцент И. Е Рубцова

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ: доктор ветеринарных - наук

Б. Ф. Керимжанова, доктор биологических наук, профессор Е. 7. Никитина

ВЕДУЩЕЕ УЧРЕЖДЕНИЕ: Алматинский зооветеринарный

институт

Защита состоится " ^ " ^Icdf^id 1994 г в У часов на заседании специализированного Совета Д 53.24. 01 по защте диссертаций на соискание ученой степени доктора (кандидата) биологических наук при Институте микробиологии и вирусологии HAH PK.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института микробиологии и вирусологии HAH PK по адресу: 480100, г. Алматы. ул. Богепбай батыра, 103.

Автореферат разослан " ö " IsCQ^&juJL- 1994 г.

Ученый секретарь специализированного Совета доктор биологических наук

а А. АЙТХОЖИНА

- 1 -

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. Ни одно заболевание из зооантропонозов не оказалось таким трудным при его ликвидации как туберкулез. Многолетние попытки внедрить радикальные способы профилактики, оптимальные варианты оздоровления не были успешными в прошлом, недостаточно эффективны они и в настоящее время.

Достигнутые успехи по оздоровлению животных в ряде регионов республики и других странах сопровождались большими экономическими затратами и прежде всего за счет убоя продуктивного поголовья, где выявлялись больные или подозреваемые в заболевании. В настоящее время из-за несовершенства диагностики ежегодно подвергаются убою десятки тысяч, преимущественно коров, из хозяйств оздоравливаемых от туберкулеза или ранее оздоровленных, где выявляются реагирующие на туберкулин животные. Это связано с тем, что система оздоровительных мер при туберкулезе сельскохозяйственных животных, в отличие от медицинской практики, строится по принципу полной ликвидации носителей возбудителя. Такой принцип в животноводстве оправдан, но он сопряжен с огромными экономическими затратами. Отсюда при реализации противотуберкулезных мероприятий специалисты ветеринарии и хозяйственники вступают в противоречие, с одной стороны, чтобы быстрее оздоровить стадо нужно выявить и уничтожить всех носителей возбудителя и провести надежную санацию окружающей среды. При этом создается необходимость полной замены всего неблагополучного поголовья. С другой стороны убой продуктивного поголовья приводит, хотя и к временным, но большим экономическим затратам.

Затруднения при оздоровлении от туберкулеза животных возникают не только при выявлении носителей возбудителя болезни, но и обезвреживании обсемененных им продуктов животноводства и окружающей среды. По меткому выражению профессора В. Добина (1993)

туберкулезная палочка "учится на своих ошибках". За время своего существования она изменялась и приспосабливалась к среде обитания многократно и всегда "опережала" на шаг ученых.

Известно, что латентный микробиэм может поддерживаться в организме не только и не столько возбудителем в бактериальной форме, но и непатогенными или слабо патогенными микобактериями: атипичными, ультраструктурными элементами и другими измененными формами, роль которых в эпизоотическом процессе представляет большой научный и практический интерес.

Среди измененных микобактерий особый интерес представляют Л -формы - микроорганизмы частично или полностью утратившие клеточную стенку. Повреждения, связвнные с дефектом или частичной утратой клеточной стенки, вызывают глубокие морфологические и функциональные изменения микроба, при этом он сохраняет способность длительно персистировать, а также реверсировать в исходный микробный вид. Факторы индукции Л-форм микобактерий многочисленны, они представлены различными химическими соединениями, биологическими агентами, физическими воздействиями.

Установлено, что Л-формы микобактерий, как и бактериальные, выделяются из организма с молоком, мокротой, мочей, фекалиями (М. И. Гертман, Л. а Галатова, А. А. Петров, 1990,1991; А. Г. Хоменко, В. Б. Муратов, 1993). Имеются наблюдения, свидетельствующее об образовании Л-форм в природных условиях (Е И. Гертман, 1988, А. К. Абрамовская, Г. л. Гурьевич, Г. В. Шестник, 1991). Как отмечает Б. К Громов (1985) в этой форме они менее активны, но более устойчивы и обладают селективным преимуществом. Это ставит в зависимость как надежность санации объектов окружающей среды,продукции животноводства, так и инфицированного организма. В этой связи отношение Л-форм возбудителя туберкулеза к различным фак-

торам окружающей среды представляет не только теоретический, но и практический интерес. Исследования такого направления практически не проводилось и изучение этого вопроса представляет, несомненно, большую актуальность.

Цель и задачи исследования. Целью нашей работы было изучение воздействий некоторых физических факторов, химических веществ и туберкулостатических препаратов на Л-формы микобактерий туберкулеза.

В этой связи перед наш были поставлены следующие задачи:

- выявить формы персистирования микобактерий туберкулеза в организме крупного рогатого скота благополучных и неблагополучных по туберкулезу хозяйств;

- установить частоту выделения Л-форм микобактерий от реагирующих на туберкулин животных;

- определить отношение Л-форм микобактерий туберкулеза к воздействию некоторых физических факторов;

- изучить чувствительность Л-форм микобактерий туберкулеза к некоторым химическим веществам и туберкулостатическим препаратам.

Научная новизна. Установлено, что частота выделения Л-форм микобактерий туберкулеза находится в прямой зависимости от эпизоотической ситуации хозяйств. Впервые доказано, что стабильные Л-формы возбудителя туберкулеза проявляют более высокую резистентность к действию высоких температур в сравнении с бактериальными. Определена устойчивость стабильных и нестабильных Л-форм туберкулеза к некоторым химическим веществам и к туберкулостатическим препаратам, наиболее часто применяемых в практике при туберкулезе.

Практическая значимость. Подтвержден факт персистенции и. выделения Л-форм микобактерий из организма крупного рогатого скота. Данные о высокой резистентности стабильных и нестабильных Л-форм микобактерий туберкулеза к воздействию высокой температуры в молоке, водопроводной воде и физиологическом растворе, их выживаемость в условиях высоких концентраций хмимческих веществ и туберкулостатических препаратов, наиболее часто применяемых при работе с возбудителем туберкулеза использованы ветеринарным отделом Семипалатинского сельского хозяйства в организации противотуберкулезных мероприятий на молокоперерабатывающих пунктах области, в областной ветеринарной лаборатории при диагностике туберкулеза у животных, а также включены и используются при лечении больных и проведении профилактических мероприятий в туб-диспасере и очагах туберкулезной инфекции в Семипалатинском тубдиспансере.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Зависимость частоты выделения Л-форм микобактерий туберкулеза из хозяйств с различной эпизоотической ситуацией.

2. Высокая резистентность стабильных и нестабильных Л-форм микобактерий туберкулеза к действию высокой температуры в молоке, водопроводной воде и физиологическом растворе в сравнении с бактериальными.

3. Выживаемость стабильных и нестабильных Л-форм микобактерий туберкулеза в различных концентрациях химических веществ и туберкулостатических препаратов.

'Апробация работы. Материалы диссертации доложены на итоговой научной конференции профессорско-преподавательского состава СЗВИ (г.Семипалатинск, 1990), на 1-ой конференции молодых ученых и специалистов, посвященной 60-летию образования Киргизского сельскохозяйственного института (Бишкек, 1992), на I Международной научно-практической конференции по аграрным проблемам (Алма-ты, 1993).

Публикации. По материалам исследования опубликовано 7 научных работ в республиканской печати и СНГ.

Структура и объем диссертацтонной работы. Диссертационная работа изложена на страницах машинописного текста, иллюстрирована 10 таблицами и 12 рисунками. Состоит из следующих разделов: введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений и приложений. В списке литературы источников 400, из них - 131 стран дальнего зарубежья.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена в лаборатории кафедры микробиологии и вирусологии Семипалатинского зооветеринарного института и на Семипалатинском мясокомбинате.

Всего исследовано 1169 проб от крупного рогатого скота. В том числе 677 от положительно реагирующих на туберкулин животных из хозяйств с различным эпизоотическим состоянием. Для бактериологического исследования от крупного рогатого скота брали: лимфатические узлы (подчелюстные, заглоточные, бронхиальные, брыжеечные, предлопаточные, коленной складки, надвыменные). Общепринятые бактериологические исследования дополнены изоляцией Л-форм микобактерий путем посева на специальную питательную сре-

. - б -

ду Школьниковой в модификации И. Р. Дорожовой. Результаты обработаны математическим способом.

Реверсирующие свойства Л-культур изучали путем 5-6 кратного пассажа на питательные среды Левенштейна-Иенсена и среду иколь-никовой. Кроме того, был использован метод ускоренной реверсии на куринных эмбрионах, разработанный на кафедре микробиологии и вирусологии Семипалатинского зооветеринарного института.

Для изучения действия высокой температуры в опыте использованы стабильные и нестабильные культуры JI-форм микобактерий туберкулеза, контролем служил эталонный штамм М. bovis (Vallee-IV). Взвесь испытуемых культур готовили по оптическому стандарту мутности, затем вносили в пробирки с молоком, водопроводной водой физиологическим раствором в соотношении 1:1. Подготовленные таким образом образцы подвергались воздействию высокой температуры +50 С, +80 С, +100 С, +112 С при экспозиции 15, 30, 45 и 60 минут в водяной бане. Для создания режима +112 С пробирки с культурами выдерживали в автоклаве при 0,5 атм.

Сроки выживаемости Л-культур при низкой температуре проводили в низкотемпературном отделении холодильника с температурой -12 С, с экспозицией 2-4-6-10-15-20 суток, 1- 2-3- 6-8-12 месяцев.

Для изучения действия лазера гелий-неонового мощностью 2 мкват/кв. см проводили в боксе лаборатории кафедры микробиологии. Пробирки с культурами в открытом виде подвергались дробному действию - 3, 5, 15 и 20 минут. Результаты эксперимента учитывались путем визуального наблюдения, а также данных фазоконтраст-ной микроскопии.

Проходимость Л-культур через мелкопористые бактериальные фильтры проводили с использованием фильтра Зейтца с фильтроваль-

ными пластинками диаметром 335 мм, толщиной 3,5 мм, пропускной способностью 0,1 л/час. Разницу давления создавали при помощи насоса Камовского.

Отношение Л-культур к химическим веществам определяли путем воздействия на них серной, щавелевой, карболовой кислот; формалина и хлорной извести. Контролем служили: М. bovis (Vallee-IV).

При изучении устойчивости Л-форм микобактерий туберкулеза к туберкулостатическим препаратам использовали: изониазид, этамбу-тол и стрептомицин. Для этого в питательные среды с соответствующими концентрациями препаратов производили посевы испытуемых культур. Посевы инкубировали в термостате при +37 С и вели за ними наблюдения.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Формы персисгирования микобактерий в организме крупного рогатого скота и частота выявления Л-форм.

В результате исследований биопатологического материала от животных из благополучных и неблагополучных по туберкулезу хозяйств были изолированы как бактериальные (типичные и атипичные) так и Л-формы (условно-стабильные и нестабильные) микобактерии туберкулеза, данные полученные нами отражены в таблице 1.

Математический анализ полученных данных показал, что в благо получных по туберкулезу хозяйствах выделение бактериальных форм составило 18,1%,тогда как из неблагополучных ферм она равна 57,5%. И этот факт является закономерным, так как в неблагополучных хозяйствах эпизоотический процесс протекает активно и число бактериальных форм увеличивается. И наоборот, выделение Л-форм из благополучных хозяйств составило 43,7%, в неблагополучных - 20,0 I то есть в благополучных пунктах персистенция Л-форм туберкуле-

Таблиц« 1

Формы переистирования микобактерий выделенные от крупного рогатого скота и-3 благополучны*

и неблагополучных хозяйств по туберкулезу.

Годы Количество проб Ба кг е и яа л £ н ы? фо р м « Л-фпПуЫ П'.'лучеНй Виды риаяьяых форм

нбеол : но1: ом. : 7

абсо.':.: А типичные : ^типичные

: 7 : аб1.'. : "

ИЗ ОЛаГО- 1968 68 12 17,6 13 26.4 5,3: г, о > 8 10 14,™

0олучных 1989 111 • 39 35, Г 48 421.2 я б' 4: 15 16, 2 27 24.3

по '1'убеу- 1990 144 22 15,2 89 61,8 - 16 11,1: 27 13, 7 11 7,6

кул?еу 1991 162 22 13,5 69 42,5 14 8,6: г. г.. р, Ч 8.6

хозяйств 1992 191 37 о, :• 7 Г, 39,7 А 4,1: 22 1 о 12,0

1993 86 7 б, 1 ■."■Г? 40,6 з 3,4: 9 1 4 1 1.1

Всего: 766 139 18,1 Зоо 4Я 7 51 0,6: ' ги гг У.п

Из н>ебла- 1988 25 13 52, ¡~ г, 24,0: 4 ; 6,0: 7 : 23, Г, п г. й г, - -

получных 1989 35 21 60,0 12 34,2 25^ 9 : 25, 7 3 8,5

по тубер- 1990 46 29 63,0 9 19,5 12 26,0: 11 : 23, 9 п 13,0

кулуьу 1991 вг 43 52,4 ¡4 17.0 12 26,3: ! 2 : 14, Я 3 10,9

хозяйств 1992 120 67 55, ; 21 17,5 33 31,6: : 17, 5 6.6

1993 95 59 1 19 20,0 29 30, 5: 19 : 7Г> п и!?

Всего 403 232 57. Г ■31 20,0 114 23,2: 79 О 39 9,6

за в 2 раза выше. Это■свидетельствует о латентном течении туберкулеза в благополучных хозяйствах.

Персистенция возбудителя туберкулеза в JI-форме создает потенциальную возможность его реверсии в исходный бактериальный вид, о чем свидетельствуют результаты наших исследований. Процентное отношение реверсирующих культур составило в благополучных по туберкулезу хозяйствах 6,6%, в неблагополучных - 28,2%. Большое количество выделения Л-форм, реверсирующих на питательных средах или куринных эмбрионах служит показателем наличия больных туберкулезом животных в стаде и отсюда дальнейшее его участие в эпизоотическом процессе.

Идентификация изолированных микобактерий позволяет нам более объективно оценить эпизоотическую ситуацию по туберкулезу крупного рогатого скота в оздоровленных и неблагополучных хозяйствах. При идентификации культур нами из благополучных хозяйств выделены 13,5% культур М. bovis и 11,2% - атипичных, тогда как из неблагополучных хозяйств выделение типичных форм составило 19,6%, атипичных - 9,6%.

Большое количество выделения возбудителя в типичной форме или быстрая реверсия Л-форм свидетельствует о высокой напряженности эпизоотического процесса. И наоборот, выделение в больших-процентных случаев стабильных Л-форм показывает о его спаде.

Таким образом, для правильной оценки эпизоотического состояния хозяйств по туберкулезу крупного рогатого скота бактериологическое исследование необходимо проводить одновременно на выделение не только бактериальных культур, но и Л-форм микобактерий туберкулеза с последующей идентификацией культур-ревертан-тов.

В соответствии с задачами исследования мы акцентировали свое

. - 10 -

внимание на частоту выявления JI-форм микобактерий туберкулеза от реагирующих на туберкулин животных в зависимости от наличия или отсутствия специфических для туберкулеза видимых патоморфологи-ческмх изменений.

Исследовано от реагирующих животных 708 проб, из них с изменениями - 128, без таковых - 580. При полном лабораторном исследовании было выделено из лимфатических узлов с изменениями, характерными для туберкулеза 39 культур M bovis, что составило 30,5%, 8 (6,2%) - атипичных и 41 (32,0%) - Л-форм микобактерий туберкулеза.

Из лимфатических узлов без изменений выделены культур M bovis - 19 (3,3%), атипичных - 61 (10,5%), Л-форм - 232(40,0%).

Проведенный нами математический анализ показал четко выраженную зависимость частоты выявления Л-фсрм микобактерий туберкулеза от реагирующих на туберкулин животных с учетом патоморфо-логических изменений.

Данные полученные нами отражены в таблице 2.

Таким образом, выявление большого числа реагирующих на туберкулин животных, при убое которых не находят изменений, свойственных туберкулезу можно объяснить: во-первых - незавершившимся туберкулезным процессом при выраженной защите макроорганизма; во-вторых - наличием в организме персистирующих измененных форм возбудителя - Л-форм.

Анализируя полученные нами результаты следует отметить, что частота выделения Л- и бактериальных форм от реагирующих на туберкулин животных зависит от степени выраженности туберкулезного процесса. Длительная персистенция в организме измененных форм возбудителя туберкулеза обеспечивает латентное течение болезни, не диагностируемое рутинными методами. Это указывает на необходи-

Таблица

Частота выделения Л- и бактериальных форм миксОака-ерий от реагирующих на туберкулин животных

в завис умости от- рораченности туберкулезом

Исследуемое : Выделены к у л ь т у р ы

Гиды • про'^ы :------------- -------------------------------------------------------------

:-------------------: via ляу^'ическях у.нлов и материал*: Кб лимфатических углов без

: с маг.ро-: бчь W"..1"-: и мдеро.ч "«"«"••.Ияму! : макроивменений

: скоси- : роокояк-: -------------------------------------------:--------------------------ч------

: чески ми : чески* : in. bovis : Атийи*»чч? : Л-формы : «.bovis : Атиничньй : Л-формы

: изменен : :------ -------:----— —: - •- ------- :------------:------------:-----------

: : : ч : абсо м: % : абс. : X : абс-од: % : абсил: 7. : абе. : - %

1569 9 : 97 0

1990 ■ 1Ö9

1991 Н.1 : 171 13

mz 51 : ! 42

1993 4-3 : 31 Г>

ВСЕГО: : 128 : 530

: 55, о: 1 : 11,1: 2 :2?..Z

■ - ■ - : - : ] -25,0

: 5Z, 3: 1 : 4 ,7: 7 ;33,3

: 35.2: б : 11,7: 13 :37,2

: 11.6: ■ : - : 17

: 30,5: S : б, 2: 4'1 : 32,0 :

я 1 : 29 о 36 <Sf, 1

Г, • .л г. , 8 7 75 53, 9

4 : 2, я . Я 4 о 63 36, Р,

: 2, 3 : 16 11 2 48 33, о

1 : 3 2 : - 10 : 32. Г^ «С

9 3 : 61 10 5 232 :40

моеть постоянного бактериологического мониторинга с дополнением общепринятых бактериологических исследований изоляцией Л-форм ми-кобактерий туберкулеза.

Полученные наш данные о длительной персистенции и выделении Л-форм микобактерий туберкулеза от крупного рогатого скота внедрены в ветеринарную практику Семипалатинского областногоуп-равления сельского хозяйства.

Отношение Л-форм микобактерий туберкулеза к воздействию

некоторых физических факторов В качестве физических факторов воздействия на Л-формы микобактерий тубекулеза нами были изучены следующие: высокая и низкая температуры (в молоке, водопроводной воде и физиологическом растворе), действие лазера гелий-неонового мощностью 2 мкват/кв. см и проходимость через бактериологические фильтры.

Таблица 3

Выживание Л-форм туберкулеза при воздействий высокой температуры в водопроводной воде.

Температура и время : Л-формы туберкулеза :

экспозиций. :---------------------- : М. bovis

: стабильные: нестабильные:

1 : 2 : 3 : 4

+50 С - 15 МИН : + : + +

+50 С - 30 МИН : + : + : +

+50 С - 45 МИН : + : + : +

1 : 2 : 3 4

+50 С - 60 МИН : + : + -

+70 С - 15 МИН : + : + +

+70 С - 30 МИН : + : + +

+70 Q - 45 мин : + + -

+80 С - 15 мин : + : + -

+80 С - 30 МИН + ; + -

+80 с - 45 мин : + : + -

+100 с - 15 мин : + : + -

+100 с - 30 мин + : - -

+100 с - 45 мин : +■ ; - -

+100 с - 60 мин : : - -

+112 с - 5 мин : + ; - -

+112 с - 15 мин : : - -

+112 с - 30 МИН : : - -

+112 с - 45 мин : - -

Примечание : (+ есть рост, - нет роста).

Опыты показали высокую резистентность стабильных Л-форм мико-актерий туберкулеза к температуре +50 ,+70 ,+80 ,+100 С при экс-ззиции 15, 30, 45 минут и к температуре +112 С в течение 5 ми-)гг. Губительная температура для стабильных Л-форм явилась +100 С ри экспозиции 60 минут и +112 С в течение 15 минут.

Культура нестабильных Л-форм оказалось менее устойчивой,они ибли при +100 С экспозиции воздействия 30 минут.

При сравнительном изучении устойчивости Л-культур в молоке,

водопроводной воде и физиологическом растворе разницы не отмечено.

В опытах с контрольной культурой (М. bovis) при температуре +50 С в водопроводной воде и молоке гибель наступала через 60 минут.

Анализ полученных данных показывает, что испытанные нами стабильные культуры микобактерий в Л-форме оказались устойчивыми к воздействию высокой температуры. Она сохраняла свою жизнеспособность в условиях от +50 С до +100 С при экспозиции от 15 до 45 минут и только температура +100 С - 60 минут и + 112 С в течение 15 минут действовала на нее губительно.

В следующей серий экспериментов мы определяли отношение Л-культур к низкой температуре. Контролем был также эталонный штамм М. bovis (Vallee -IV).

Было установлено, что как бактериальная форма , так и Л-культуры при температуре -12 С во взятые нами сроки выдержки: 2, 4, 6, 10, 15, 20 суток и 1, 2, 3, 6, 8, 12 месяцев сохраняли свою жизнеспособность.

Таким образом, низкая температура -12 С в течение 12 месяцев (срок наблюдения) не вызывала в наших опытах гибели бактериальных и Л-форм микобактерий туберкулеза. Что свидетельствует о их резистентности к низким температурам.

Нами также было изучено дробное воздействие на культуру М. bovis и Л-форму микобактерий туберкулеза лазера гелий-неонового (ГН-7) мощностью 2 мкват/кв. см.

В результате дробного воздействия лазера при экспозиции 3, Б, 15 и 20 минут, Л-формы и культура М. bovis оставались жизнеспособными.

Следующим этапом в работе было выяснение возможности прохож-

дения JI-форм , содержащихся в молоке , через мелкопористые фильтры. Исследования показали, что Л-формы микобактерий туберкулеза проходят через бактериологические фильтры диаметром 335 мм, толщиной 3,5 мм, сохраняя свою жизнеспособность. Бактериальные формы микобактерий через мелкопористые фильтры не проходили, в фильтрате не было обнаружено наличие микроорганизмов.

Полученные данные свидетельствуют о том, что Л-формы микобактерий туберкулеза обладают высокой пластичностью.

Полученный материал свидетельствует, что Л-формы микобактерий туберкулеза обладают высокой жизнеспособностью к воздействию физических факторов внешней среды. Это ставит под вопрос надежность режима пастеризации молока и другой молочной продукции.

По данным полученных результатов исследования нами рекомендован режим пастеризации молока , внедренный на молокоперерабаты-вающих пунктах города Семипалатинска.

Чувствительность Л-форм микобактерий к химическим веществам и туберкулостатическим препаратам.

В опыте были использованы - щавелевая, серная, карболовая кислоты; формалин и хлорная известь. Вещества наиболее часто используемые при работе с возбудителем туберкулеза.

Культуры Л-стабильные и нестабильные микобактерий туберкулеза, и бактериальная М. bovis после 15 минутной экспозиции воздействия химическими веществами высевали на соответствующие им питательные среды. Рост учитывали путем визуального наблюдения, а также на основании данных фазовоконтрастной микроскопии.

Результаты опытов показали, что стабильные Л-формы микобактерий туберкулеза оказались более устойчивыми ко всем концетра-

• - 16 -

циям серной и щавелевой кислот, взятых нами в эксперимент. И лишь к 10%-ным растворам карболовой кислоты, формалина, хлорной извести стабильные JI-формы туберкулеза проявили чувствительность.

Нестабильные Л-формы менее стойки они не росли после воздействия 50%-ных растворов серной и щавелевой кислот: 7, 10 %-ных концентраций карболовой кислоты, формалина и хлорной извести. Контрольная культура М. bovis проявила чувствительность к 40; 50%-ным растворам серной, щавелевой кислот , а также к 3; 5; 7;- 10 %-ным растворам карболовой кислоте и 1; 3; 5; 7; 10%-ным концетрациям формалина и хлорной извести.(рис. 1.)

50

40

30

20

10

0

1 - серная кислота 2 - щавелевая кислота 3 - карболовая кислота 4 - формалин 5 - хлорная известь

Рис. 1. Выживаемость испытуемых культур при 15 минутной экспозиции воздействия химическими веществами.

Обозначения: белые столбики - стабильные Л~формы микобакте-рий туберкулеза, заштрихованные - нестабильные л-формы, затушеванные - культура М. bovis.

концентрация

Щк е

Л'(\тт_

4 5

хим. вещества

Щ 5 w(L*я

з

Подводя итоги воздействия химических веществ на измененные формы микобактерий туберкулеза, находящиеся временно или постоянно а Л-форме, вопреки рутинным представлениям, следует прежде всего отметить их необычайно высокую терпимость к химическим агентам по сравнению с бактериальной формой.

Учитывая широкое применение в последние годы химиопрофилак-тичееких препаратов нашей задачей стало изучение устойчивости Л-форм микобактерий туберкулеза к туберкулостатическим препаратам (изониазид, этамбутол стрептомицин).

Полученные нами результаты отражены на рис. 2.

концентрация, %

1 2 3

препараты

1 - изониазид 2 - этамбутол 3 - стрептомицин

Рис.2. Жизнеспособность испытуемых культур на питательной среде, содержащей туберкулостатические препараты

Обозначения: белые столбики - стабильные Л-формы микобактерий туберкулеза, заштрихованные - нестабильные Л-формы, затушеванные - культура М. bovis.

Изониазид в концентрации 0,1 и 0,5 мкг/мл не задерживал рост бактериальной формы М. bovis и только начиная с дозы 1 мкг/мл мы отмечали его бактериостатическое дейчтвие. Л-формы при этих концентрациях проявили высокую резистентность. В наших опытах стабильные и нестабильные Л-формы микобактерий туберкулеза оставались жизнеспособными при концентрации изониазида в дозе 25 мкг/мл.

Также высокая устойчивость в сравнении с бактериальной формой установлена у Л-форм туберкулеза к зтамбутолу. Так, если бактериальная форма М. bovis выдерживали концентрацию 5 мкг/мл, то для Л-форм она проявлялась в дозе 20 мкг/мл.

К стрептомицину Л-формы туберкулеза оказались резистентны при концентрации до 50 ЕД/мл и только концентация 100 ЕД/мл задерживала рост бактериальных форм, тогда как Л-формы оставались живыми к такой концентрации антибиотика.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что Л-формы микобактерий туберкулеза проявляют высокую резистентность к тубер-кулостатическим препаратам во много раз превышающих таковые у бактериальных форм.

Таким образом, успешная профилактика инфекционного заболевания требует глубокого знания всех закономерностей возникновения и исхода процесса заболевания с учетом широкой изменчивости возбудителя. :

Данные о резистентности Л-культур туберкулеза к химическим веществам и туберкулостатическим препаратам, наиболее часто прменяемых в практике, предложены при проведении бактериологических исследовании на туберкулез в районных и областных ветеринарных лабораториях г. Семипалатинска.

Результаты исследований об устойчивости Л-форм к высокой

температуре, хлорной извести, а также к противотуберкулезным препаратам включены и используются при лечении больных и проведении профилактических мероприятий в тубдиспансере и очагах туберкулезной инфекции.

ВЫВОДЫ

1. Для правильной оценки эпизоотического состояния хозяйств по туберкулезу крупного рогатого скота в комплекс бактериологических исследований необходимо включать выделение бактериальных и Л-форм микобактерий туберкулеза с последующей их идентификацией.

2. Реакция на туберкулин животных не имеющих характерных для туберкулеза видимых патоморфологических изменении может быть обусловлена персистенцией в организме измененных форм возбудителя.

3. Изолированные из организма животных Л-формы микобактерий реверсируют в большенстве своем в кислотоустойчивые микроорганизмы, имеющие широкий диапазон свойств, от типичного возбудителя туберкулеза до атипичных.

4. Установлена высокая резистентность стабильных Л-форм микобактерий туберкулеза к температуре +100 С при экспозиции 45 минут и к +112 С в течение - Б минут. Нестабильные Л-формы оказались менее устойчивыми их гибель наступала при +100 С в течение 30 минут. Температура -12 С в течение 12 месяцев не оказывает губительного действия на стабильные, нестабильные и бактериальные формы микобактерий туберкулеза. Гелий-неоновый мощностью 2 мкват/кв. см при четырехкратном воздействии не обладает бактериостатичееким действием на измененные так и на типич-

■ • - 20 -

ные формы микобактерий туберкулеза.

5. Стабильные Л-культуры микобактерий туберкулеза сохраняют жизнеспособность в сравнение с бактериальной в условиях высоких концентрации серной, щавелевой кислот (растворы 50%-ной концентрации 15 минутная экспозиция), 7%-ные растворы карболовой кислоты, формалина и хлорной извести. Нестабильные формы выдерживают 40%-ную концентрацию серной и вдвелевой кислот и 5%-ные растворы карболовой кислоты, формалина и хлорной извести.

6. Л-формы микобактерий туберкулеза как стабильные так и нестабильные проявляют высокую резистентность к туберкулостати-ческим препаратам. Изониазид задерживает рост М. bovis при концентрации 1 мкг/мл, Л-формы выдерживали концентрацию 25 мкг/мл. Этамбутол в дозе 10 мкг/мл губительно действут на М. bovis на Л-формы доза лишь 25 мкг/мл. Стрептомицин в концентрации 100 ЕД/ мл не задерживает рост Л-форм, тогда как бактериальная культура проявляет к ней чувствительность.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ 1. В хозяйствах, в которых выявляются животные реагирующие на туберкулин, а диагноз на туберкулез патологоанатомическими и бактериологическими методами не подтверждается, исследования патологического материала целесообразно проводить и на выделение Л-форм микобактерий с последующей идентификацией культур-ревер-тантов.

Данные внедрены в ветеринарную практику Семипалатинского областного управления сельского хозяйства.

2. Полученные данные о длительном персистировании Л-форм микобактерий туберкулеза и устойчивости к воздействию высокой температуры рекомендованы к использованию на молокоперерабатыва-

- 21 -

ющих пунктах Семипалатинской области.

3. Данные об устойчивости Л-форм микобактерий туберкулеза к химическим веществам и туберкулостатическим препаратам предложены при проведении бактериологических исследовании на туберкулез в районных и областных ветеринарных лабораториях г. Семипалатинска.

4. Длительное персистирование Л-форм микобактерий туберкулеза в организме животных с учетом их высокой резистентности к физическим и химическим факторам в сравнении с бактериальными культурами получили отражение при проведении учебного процесса на соответствующих кафедрах - микробиология, эпизоотология, патологическая апатомия, ветеринарно-санитарная экспертиза.

б. Результаты исследования об устойчивости Л-форм микобактерий туберкулеза к высокой температуре, хлорной извести, а также противотуберкулезным препаратам (изониазид, этамбутол, стрептомицин) включены и будут использованы при лечении больных и проведении профилактических мероприятий в тубдиспансере и очагах туберкулезной инфекции.

По материалам диссертации опубликованы следующие работы:

Байгазанов А. Е , Абимульдина С. Т. Бактериологический надзор в системе противотуберкулезных мероприятий//Вклад молодых ученых в интенсификацию промышленного комплекса. Тезисы докладов Республиканской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов. Алма-Ата, 1988. - С. 13-14.

Федосеев В. С. , Рубцова И.Е , Байгазанов А. Е , Абимульдина С.

. - 22 -

Т. Бактериологический надзор в системе противотуберкулезных мероприятий в животноводстве//Актуальные проблемы ветеринарной и зоотехнической науки в интенсификации производства. Москва, 1990. - С. 90-95.

Байгазанов А. Е, Зайнуллина Р. X. , Абимульдина С. Т. Чувствительность JI-форм микобактерий к некоторым лекарственным препаратам. //Научные достижения молодых ученых и специалистов животноводству: Тезисы докладов Республиканской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов. Семипалатинск, 1991. - .С. 5-6.

Абимульдина С. Т., Байгазанов А. Е Устойчивость Л-форм микобактерий к воздействию высокой температуры//Теэисы докладов III Межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых и специалистов, посвященной 60-летию образования Киргизского сельскохозяйственного института. Бишкек, 1992. -С. 67-68.

Абимульдина С. Т. Действие некоторых физических факторов и химических веществ на Л-формы микобактерий туберкулеза, выделенных от животных. //Тезисы докладов I Международной научно-практической конференции по аграрным проблемам. Алматы, 1993.

Абимульдина С. Т. Выживаемость Л-форм микобактерий туберкулеза к действию химических веществ//Сборник научных трудов Республиканской научно-практическогой конференции по животноводству, посвященной 150-летию Абая. Семипалатинск, 1994.

Абимульдина С. Т. Определение устойчивости Л-форм туберкулеза к действию высокой температуры//Сборник научых трудов Республиканской научно-практической конференции по животноводству, посвященной 150-летию Абая. Семипалатинск, 1994.

тужырым

Абимульдина Сэуле Тоятаешщызы

"Туберкулез микробактерияларыныц L-формаларышщ физикалын жэнэ химиялын; факторларга тоз! мда Л1 п ".

Туберкулез микробактерияларынъщ ерекшел1п олардац полимор-физмд1к касиеи . Соныц тиинде коп кощл болеетн микобактерия-лардьщ клетка щабыгынсыз, кобею мулектнш Л1 и бар жэнэ алгашкя к;алпына кайтып келу касиет! бар ь-формасы.

Автор, туберкулез микобактерияларынщ L-формаларыныц болшу ЖИ1Л1П шаруашшпщтнц эпизоотиялыц жагдайына Т1келей байланысты екенд1 ин тужирымдагвн.

Алгашкы рет, туберкулез коздаргышыныц туракты L-формасыныц сутте жэнэ су адбырындагы суда жогары температурага тоз!МД1Л1К корсетерюти аныктаган.

Сонымен катар туберкулез микобактерияларынщ туракты жэнэ ту-ракты емес L-формаларыныц химиялын; заттардыц жогаргы концентра-циясына жэнэ туберкулезд1 емдеу тэт1рибесенде колданылытын дэр1-лергетоз1мд1 Л1пн аныктаган.

Summary

Abimuldina Saule Toktasynovna

"The Stability of L-forms of Mycobacteria of Tuberculosis to

Phisical and Chemical Factors".

The micobacteria of tuberculosis possess a wide polymorphism and this is one of the typical peculiarities of the given species of microorganisms. Special attention is paid to L-forms of micobacteria-microorganisms without a cellular wall capable of reproduction and reversing.

It is established that the frequency of the discharge of L-forms of micobacteria depends directly on a epizootic situation of the farms.

For the first time it was proved that stable L-forms of the stimulus of tuberculosis display resistance to the influence of a high temperature in the milk and running water. It is defined that there is resistence of stable and non stable L-forms of tuberculusis to a high concentration of chemicals and tuberculostatic in when preparations often used in practice when tuberculosis.