Анализ эпизоотических и эпидемиологичских процессов при туберкулезе и совершенствование методов диагностики

Хруленко, Владимир Николаевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Анализ эпизоотических и эпидемиологичских процессов при туберкулезе и совершенствование методов диагностики
ВАК РФ 03.01.06, Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)

Автореферат диссертации по теме "Анализ эпизоотических и эпидемиологичских процессов при туберкулезе и совершенствование методов диагностики"

ХРУЛЕНКО ВЛАДИМИР НИКОЛАЕВИЧ

АНАЛИЗ ЭПИЗООТИЧЕСКИХ И ЭПИДЕМИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ ПРИ ТУБЕРКУЛЕЗЕ И СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ

03.01.06 - биотехнология (в том числе бионанотехнологии)

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

2 0 ЯНЗ 2011

Щелково - 2010 г.

004619283

На правах рукописи

ХРУЛЕНКО ВЛАДИМИР НИКОЛАЕВИЧ

АНАЛИЗ ЭПИЗООТИЧЕСКИХ И ЭПИДЕМИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ ПРИ ТУБЕРКУЛЕЗЕ И СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ

03.01.06 - биотехнология (в том числе бионанотехнологии)

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Щелково - 2010 г.

Работа выполнена в ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности» (ВНИТИБП) Российской академии сельскохозяйственных наук

доктор биологических наук Матвеева Ирина Николаевна

доктор биологических наук, профессор, лауреат Государственной премии СССР, Заслуженный ветеринарный врач РФ Скичко Николай Данилович

доктор биологических наук, профессор Безгин Вячеслав Михайлович

Ведущая организация: ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко» Россельхо-закадемии

Защита состоится 24 декабря 2010 года в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 006.069.01 при ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности» РАСХН по адресу: 141142, Московская область, Щелковский район, п/о Кашинцево, пос. Биокомбината, ВНИТИБП. E-mail: viiitibp@inail.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности» Россельхозакадемии

Автореферат разослан 23 ноября 2010 г.

Научный консультант:

Официальные оппоненты:

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук ^Г

Ю.Д.Фролов

1.0БЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Успех борьбы с туберкулезом зависит от полноты учета всех возможных источников возбудителя болезни и связана с видами микобактерий, патогенетическую роль которых изучают медицинские и ветеринарные исследователи (Г.А. ¡Один, 1974; И.А. Косилов, 1976; O.A. Благодарный, 1980; Н.П. Овдиенко, 1990; Т.Ф. Оттен, A.B. Васильев, 2005; Ю.И. Смолянинов, 1997; A.C. Донченко, 1997; H.A. Дон-ченко,1998; В.Г. Ощепкоз , 2000; А.П. Лысенко, 1994; Т.Н.Агеева, 2005).

Огромный опыт борьбы с туберкулезом позволил разработать систему профилактических, противоэпизоотических, противоэпидемических и лечебных мероприятий, вполне оправдавших себя в регионах России. Однако в настоящее время повысилась важность изучения и учета конкретных природно-географических и хозяйственно-экономических особенностей каждого региона, влияющих на динамику эпидемического процесса туберкулеза в сложившихся условиях.

Поэтому, актуальным является выяснение современных аспектов эпидемиологии и эпизоотологии туберкулеза, значения микобактериозов в патологии крупного рогатого скота, свиней и птиц, выявления источников и путей инфицирования животных нетуберкулезными микобактерия-ми для совершенствования системы противоэпидемических и противо-эпи-зоотических мероприятий в зоонозных очагах туберкулеза.

Одной из причин поддержания длительного неблагополучия по туберкулезу является инфицированность молодняка, обычно обладающего низкой реактивностью к туберкулину (H.A. Донченко, 2008). Поэтому актуальна разработка диагностики ареактивного к туберкулину молодняка сельскохозяйственных животных (H.A. Донченко, 2010; стандарт МЭБ (QIE Manual, Chapter 2.4.7, май 2009).

Для иммуноферментной диагностики туберкулеза у человека и животных испытывались микобактериальные антигены разной специфичности и степени очитки (Е.В. Маслов, 1986; J1.M. Ходун, 1990; Н.И. Цунская, 1988;

А.П. Лысенко, 1994., Fifís J. et al.,1994., M.Harboe et al., 1990; H.O Шимо-лина, 2000; A.A. Нуруллин, 1987; H.B. Демьяненко, 1993; Л.К. Шипина, 1997;Л.А. Таллер, 1995; Т.Р. Якупов, 1991). Использование высокоочищен-ных видоспеци-фических антигенов микобактерий не нашло широкого применения из-за их низкой чувствительности при выявлении больных животных в серологических тестах (Т.Н. Агеева 2005). Невысокая результативность методов серологической диагностики при туберкулезе связана с быстрым включением синтезирующихся антител в иммунные комплексы с антигенами возбудителя (М.М. Авербах, 1984, Л.К. Суркова, 1998, А.П. Лысенко и др., 1998).

Современные достижения в области биотехнологии делают вполне, возможным получение компонентов иммуноферментной тест-системы, позволяющих достичь максимальной чувствительности и специфичности. Целью исследовании являлось анализ проявлений эпидемического и эпизоотического процессов с усовершенствованием противотуберкулезных мероприятий, включая получение компонентов диагностических тест-систем.

Основные задачи исследований:

- изучить эпидемическую ситуацию при туберкулезе;

- провести бактериологические исследования биоматериала от сельскохозяйственных животных в Московской области;

- выяснить проявление микобактериозов среди поголовья крупного рогатого скота отдельных общественных хозяйств Московской области;

- исследовать объекты внешней среды на наличие нетуберкулезных микобактерий;

- оптимизировать систему медико-ветеринарных мероприятий в сельских очагах туберкулеза:

- выделить из клеточной стенки бактерий антигены, стимулирующие выраженный гуморальный ответ;

- получить специфические противотуберкулезные сыворотки;

- оптимизировать технологию получения коньюгата для иммуно-ферментного анализа;

- усовершенствовать метод диагностики туберкулеза ИФА (имму-ноферментный анализ) путем получения высокоспецифичных компонентов.

Научная новизна. Впервые проведен анализ результатов бактериологических исследований туберкулеза в Московской области за 20002007 гг. Изучена частота выделения и спектр возбудителей туберкулеза и нетуберкулезных микобактерий, персистирующих в организмах животных и среде их обитания на территории Московского области.

Впервые проведен сравнительный ан&чиз значения различных эпидемиологических и эпизоотологических показателей для характеристики сельских очагов туберкулеза. С учетом укачанных критериев охарактеризованы многолетняя динамика, тенденции и особенности проявлений эпидемического и эпизоотического процессов туберкулеза в Московской области.

Проанализирован видовой спектр микобактерий, персистирующих в организме животных и на объектах внешней среды.

Оптимизирована система медико-ветеринарных мероприятий в сельских очагах туберкулеза.

С помощью современных биотехнологических и иммунобиологических методов усовершенствованы способы получения компонентов, применяемых для постановки иммуноферментного анализа при туберкулезе животных.

Практическая ценность работы. Результаты исследований использованы при составлении: «Методических рекомендаций по диагностике микобактериальных инфекций у животных», утвержденных директором Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко (ВИЭВ), академиком Россельхозакадемии М.И. Гулюкиным 22 марта 2007 года; Методических рекомендаций «Сие-

тема медико-ветеринарных мероприятий в сельских очагах туберкулеза», утвержденных директором ВИЭВ, академиком РАСХН М.И. Гулюкиным, директором ВНИТИБП, академиком РАСХН АЛ. Самуйленко и директором «Центра ветеринарии» Л.К. Кишем 25 мая 2009 г., «Планов профилак-тическо-диагностических мероприятий по профилактике туберкулеза человека и животных в Московской области», утвержденных Главным врачом областного противотуберкулезного диспансера Московской области Г.Б. Касаткиным в 2008 г.

Апробация работы. Материалы работы доложены и обсуждены на совещании коллектива Московского областного противотуберкулезного диспансера (2007 г. ); в Министерстве сельского хозяйства Московской области (2007, 2008 гг.); на заседаниях ученого совета ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности» (2007, 2008 гг.).

Основные положения диссертации, выносимые на защиту -результаты анализа динамики проявлений эпидемического и эпизоотического процессов туберкулеза в Московской области за 2001-2007 гг., -результаты бактериологических исследований биоматериала сельскохозяйственных животных и проб объектов внешней среды в Московской области на наличие микобактерий и их видового состава;

-результаты исследований по проявлению микобактериозов животных в отдельных общественных хозяйствах Московской области;

-результаты эпидемиологических и эпизоотологических обследований очагов туберкулеза в сельской местности;

-система медико-ветеринарных мероприятий в сельских очагах туберкулеза;

-результаты исследований по усовершенствованию постановки им-муноферментного анализа для диагностики туберкулеза.

Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 4 статьи в рецензируемых изданиях, входящих в Пе-

речень ВАК Министерства образования и науки РФ.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 160 страницах компьютерного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы, практические предложения, список использованной литературы, приложения. Работа иллюстрирована 11 рисунками, 20 таблицами, 1 схемой. Список литературы включает 263 источника, из них 175 иностранных.

Автор выражает глубокую благодарность сотрудникам Московского областного и Щелковского противотуберкулезных диспансеров, Департамента ветеринарии Министерства сельского хозяйства Московской области, РНИУГТ Института Экспериментальной ветеринарии им. Вышелес-ского НАН Республики Беларусь.

2, СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Работа выполнена в период с 2005 по 2008 гг. в лаборатории микробиологии ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности» в рамках задания 01 Российской научно-технической программы приоритетных и прикладных научных исследований.

2.1. Материалы и методы

В работе использовали комплекс микробиологических, иммунологических, биотехнологических и молекулярно-биологических методов. Исследования проводили согласно стандарту МЭБ (QIE Manual, Manual of Standarts// Chapter 2.4.7., 2009.

Сводку, группировку и анализ собранной информации проводили с использованием методов по «Методическим указаниям по эпизоото-логическому исследованию» (И.А. Бакулов и соавт., 1982).

Исследование животных на туберкулез проводили совместно с ветеринарными специалистами в соответствии с Санитарными и Ветеринарными правилами «Профилактика и борьба с заразными болезнями для человека и животных», утвержденными Госкомсанэпиднадзором и Мин-

сельхозпродом России (1996), «Наставлением по диагностике туберкулеза животных», утвержденного Департаментом ветеринарии МСХ Российской Федерации 18.11.2002 г.; «Методам лабораторной диагностики туберкулеза», ГОСТ 26072-89; CT СЭВ 3457-81.

В исследованиях использовали эталонные музейные, официально зарегистрированные штаммы культур патогенных и атипичных микобакте-рий. Микобактерии выращивали на плотных и жидких средах (Левенштей-на-Иенсена, Финн-2, Сотона, Школьниковой, Павловского, В КГ), выделение антигена из клеточной стенки проводили по методике И.Н. Архипова, А.П. Лысенко и др. с модификациями, 1991.

Культурально-биохимические свойства изолированных кислотоустойчивых культур микобактерий изучали во второй генерации после накопления бактериальной массы, согласно методическим указаниям «Бактериологическая и биохимическая идентификация микобактерий» МЛ 981; учет и оценку выросших колоний проводили по схеме Г.Н. Першина (1971). Также использовали тесты согласно схеме дифференциации микобактерий, разработанной в ВИЭВ им. Я.Р. Коваленко с учетом модификаций, предложенных Н.М. Макаревич с соавт. 1985 и другими учеными. Отрицательным контролем служила эмбриональная сыворотка и сыворотка крови коров из благополучных по туберкулезу хозяйств Московской области.

Гуморальный иммунный ответ изучали по методике, разработанной сотрудниками РНИУП Института Экспериментальной ветеринарии им. Вышелесского HAH Республики Беларусь, в перекрестном иммуно-электрофорезе (ПИЭФ) с промежуточным гелем (ПГ). Результаты интерпретировали по Н. Аксельсен с соавт. (1974).

Специфические положительные противотуберкулезные сыворотки получали гипериммунизацией кроликов антигеном М. bovis. В качестве блокирующих антител при постановке непрямого жидкофазного варианта ИФА использовали противотуберкулезные антитела из сыворотки кро-

ви кроликов, иммунизированных иммунодоминантными антигенами М. bovis с адъювантом полиоксидонием, очищенных методом аффинной хроматографии на BrCN сефарозе с иммобилизованным на ней гомологичным антигеном, и активностью в ИФА не ниже 1:2560. Постановку блокирующего ИФА (Б-ИФА) проводили по стандартной методике (Gy Czifra, 1993).Оптимальную концентрацию блокирующих антител и антивидового конъюгата определяли путем постановки прямого варианта ИФА методом двукратных последовательных разведений по схеме «шахматный порядок». За рабочее разведение компонента принимали последнее разведение каждого, обеспечивающего оптическую плотность (ОП) равную 2,0 единицы. Рабочее разведение антигена для Б-ИФА определяли в непрямом варианте ИФА. Титром антигена считали последнее его разведение, при котором положительная контрольная сыворотка имела наивысший титр, определенный в реакции со стандартным контрольным антигеном. Удвоенное значение конечного разведения антигена считали рабочим. Полученные в результате реакции Б-ИФА значения ОП контрольных и исследуемых проб с блокирующими антителами переводили в значение процента блокирования (Б%).

Выделение и очистка IgG КРС. IgG КРС выделяли из нормальной и гипериммунных противотуберкулезных сывороток крови методом аффинной хроматографии на BrCN-Сефарозе 4В с иммобилизованным протеином А. Общий белок определяли по методу Лоури (1958) и спектрофотометри-чески на СФ-26 при длине волны 280 нм.

Коньюгат анти-igG КРС антител получали меткой антивидовых антител ферментом пероксидазой из хрена перйодатным методом по Р. Nakane и А. Kawaoi (1974).

2.2. Результаты исследований

Важным является вопрос о выяснении взаимного влияния в настоящее время эпидемического и эпизоотического процессов друг на друга и насколько оно выражено. Нами проведено сравнение основных эпидемио-

логических и эпизоотологических показателей туберкулеза на территории Московской области.

2.2.1.Анализ эпидемической ситуации по туберкулезу. Анализ показал, что в Российской Федерации (РФ) в 2000 г. отмечены высокие показатели заболеваемости и смертности населения от туберкулеза. С 2001 г. началось постепенное снижение значения показателя заболеваемости с 88,5 (2001г.) до 82,4 (2006г.) на 100 000 населения. Показатель заболеваемости туберкулезом сельских жителей превышал городских жителей на 11 %. Смертность среди больных туберкулезом увеличилась в 2,8 раза.

Показатели заболеваемости и смертности людей от туберкулеза в Московской области, представленные в сравнении с аналогичными данными по России (табл.1), ниже, чем в среднем по России, но остаются довольно высокими. В сельской местности заболеваемость выше, чем в городской на 28%. Резервуар туберкулезной инфекции продолжает расти, создались условия для возникновения новой популяции микобактерий туберкулеза, устойчивых к специфическим противотуберкулезным препаратам.

Таблица 1

Показатели заболеваемости и смертности населения туберкулезом за 2000-2006 гг. (на 100 тыс. населения).

№ п/п Годы Заболеваемость Смертность

МО* РФ МО РФ

1 2000 55,6 90,7 15,4 20,4

2 2001 56,7 88,5 15,8 19,9

3 2002 58,84 86,3 16,52 21,9

4 2003 57,0 82,7 16,8 22,0

5 2004 55,5 83,3 14,8 21,4

6 2005 53,6 84,0 17,2 22,6

7 2006 52,5 82,4 17,1 19,5

Примечание: МО* - Московская область; РФ - Российская Федерация

В Щелковском районе Московской области эпидемическая ситуация по туберкулезу все еще находится на достаточно высоком уровне (табл. 2). Если в 2000-2005 гг. наблюдалась тенденция к сближению показателей заболеваемости туберкулезом жителей городской и сельской местности, то в 2006 и 2007 гг. заболеваемость и смертность сельских жителей увеличилась, что потребовало поиск возможных источников заражения людей.

Таблица 2

Показатели заболеваемости и смертности населения туберкулезом в Щелковском районе Московской области за 2000-2007 гг (на 100 тыс. населения).

№ и/и Годы Заболеваемость Смертность

1ЦР МО ЩР МО

1 2000 42,6 55,6 5,1 21.9

2 2001 46,99 56,7 9,06 19,9

3 2002 49,68 58,84 12,13 21,9

4 2003 44.63 57,0 5,8 22,9

5 2004 34,9 55,5 6,35 21,4

6 2005 45,0 53,6 7,41 22,6

7 2006 Г 35,59 52,5 10,62 19,5

8 2007 38,31 5,85

Анализ эпизоотологической информации показал, что эпизоотическая ситуация по туберкулезу крупного рогатого скота в Российской Федерации проявляет тенденцию улучшения. Снижается количество эпизоотических очагов, уменьшается заболеваемость животных и количество туш с патологическими изменениями, характерными для болезни. Если на 01.01.92 г. было 1007 неблагополучных пунктов, то на 01.01.08 их осталось только 56, т.е. почти в 20 раз меньше. Коэффициент очаговости снизился с 64,9 в 1992 г. до 34.9 в 2007 г. Число случаев послеубойного выявления патологических изменений, характерных для туберкулеза, уменьшилось на 68,7%.

Широкомасштабные мероприятия по оздоровлению поголовья крупного рогатого скота Московской области начались с 1953 г. Однако в от-

дельных районах области вновь появились неблагополучные по туберкулезу пункты (табл.3). Это свидетельствует о том, что эпизоотический процесс туберкулеза в области не прерывался.

Таблица 3.

Динамика проявлений эпизоотического процесса туберкулеза крупного рогатого скота в хозяйствах Московской области за 2000- 2007гг.

№ Го- Кол-во Выяв- Сум- Оздо- Заболе- Выявле Оча-

п/ ды н/п на ление ма н/п ров- ло но гово-

п 01.01. новых лено живот- случаев сть

н/п н/п ных при

(гол.) убое

1 2000 - - - - - - -

2 2001 - 3 3 1 272 293 90,6

3 2002 2 - 2 - 278 195 139,0

4 2003 2 2 4 1 11 39 2,75

5 2004 3 - 3 3 - 1 -

6 2005 - - - - - - -

7 2006 - 2 - - 138 57 69,0

8 2007 2 2 4 1 109 312 27,25

Всего 9 9 16 6 808 897 328,6

Примечание: н/п - неблагополучный пункт

Следует отметить, что в неблагополучных хозяйствах была проведена запоздалая диагностика болезни с высокой заболеваемостью поголовья скота, и их оздоровление проводилось методом полной замены поголовья животных. Кроме того, среди убитых животных на мясокомбинатах выявляли туши с патологическими изменениями, характерными для туберкулеза. Это свидетельствует о несвоевременной диагностике и о невыясненной эпизоотической ситуации по туберкулезу среди поголовья скота области.

Замечено, что в период наибольшего распространения туберкулеза крупного рогатого скота в Московской области был широко распространен и туберкулез кур. При подтверждении диагноза поголовье ликвидировали, но остались инфицированные участки, и эпизоотический процесс

не прерывается. В него могли включаться синантропные виды диких птиц, домашние и дикие животные, и, возможно, человек. Это необходимо учитывать при эпидемиологическом и зпизоотологическом обследовании сельских очагов туберкулеза.

2.2.2. Бактериологические исследования биоматериала от крупного рогатого скота, свиней на наличие микобакгерий

Данные доступной литературы и материалы собственных наблюдений позволяли поставить вопрос о необходимости учета выделения разных видов микобактерий от животных и, соответственно, изучения их роли в эпидемическом и эпизоотическом процессах.

Результаты анализа показали, что ежегодно в ветеринарных лабораториях страны за 2001-2007гг. проводилось от 18 до 22,4 тыс. бактериологических исследований на туберкулез (в среднем за год 19,0 тыс.). Подавляющее количество выделенных культур из биоматериала от крупного рогатого скота приходится на М. bovis - в среднем 56,3% в год. Удельный вес изолированных из биоматериала от крупного рогатого скота культур М. tuberculosis составил в среднем 1,4% в год. Удельный вес М. avium в структуре видовой принадлежности культур микобактерий, изолированных от крупного рогатого скота, был ниже и составил в среднем 0,8% в год. Культуры нетуберкулезных микобактерий составили в среднем 41,7% в год. При дифференциации 1052 культур нетуберкулезных микобактерий установлено, что 40 из них (3,9%) отнесены к фотохромогенным (1 группа); 235 (22,3%) - к скотохромогенным (2 группа); 155 (14,7%) — к нефотохромо-генным (3 группа) и 625 (59,2%) - к быстрорастущим микобактериям (4 группа классификации Раниона).

2.2.3. Микобактериозы крупного рогатого скота в хозяйствах Московской области

Анализ статистических данных и результатов исследований показали, что на фоне выявления единичных неблагополучных пунктов по туберку-

лезу крупного рогатого скота, увеличилось число хозяйств и животных, у которых реакции на туберкулин обусловлены инфицированием нетуберкулезными микобактериями. Микобактериозы крупного рогатого скота выявлены в 44 хозяйствах 17 административных районов области. Степень их распространения в стадах варьировала от 0,08 до 2,5%, в среднем 0,2% в год. На 100 тысяч голов скота выявлялось от 107,6 до 340,3 случаев, в среднем 206,1 случаев микобактериозов. Максимальная частота инфицирования крупного рогатого скота нетуберкулезными микобактериями устанавливалась в ОПХ «Красная пойма» Луховицкого района и ОПХ «Щапо-во» Подольского района. Это крупные хозяйства, где на одной ферме находилось 1200-2300 голов скота. В этих хозяйствах при исследовании выявлено от 20 до 100 реагировавших животных. Реагировали на туберкулин в основном коровы. Среди телят до года и молодняка старше года выявляли лишь единичные случаи. Бактериологическим исследованием среди поголовья крупного рогатого скота ОПХ «Щапово» установлен микобактериоз, обусловленный M.avium, а среди поголовья ОПХ «Красная пойма» - ассоциацией нетуберкулезных микобактерий.

2.2.4. Микобактериозы свиней в хозяйствах Московской области

В отдельных хозяйствах Московской области регистрировали микобактериозы свиней, обусловленные в основном микобактериями комплекса М. avium, М. intracellulare. Массовое проявление микобактериозов выявляли при комплектовании откормочных комплексов свиней, завозимых из разных областей Российской Федерации и республик бывшего Советского Союза. Так, в комплексе совхоза «БД» и совхоза - комплекса «К» - при убое на мясокомбинате у 2866 из 4008 убитых свиней выявили патологические изменения, характерные для туберкулеза. При аллергическом исследовании 325 свиней в возрасте от 6 до 10 мес. туберкулином для млекопитающих и для птиц выявили 264 (81,2%) животных, реагировавших на туберкулин для птиц. В отдельных станках реагировали 100 % свиней. В ка-

честве добавок к основному рациону свиньям скармливали необработанный торф, завезенный из Эстонии, пудрет (куриный помет) и яйцо - бой с птицефабрики. Для выяснения источника заражения свиней микобакте-риями исследовали пробы торфа, пудрета и яйцо - бой. Одновременно исследовали и биоматериал от 4 свиней. В результате бактериологических исследований из двух проб биоматериала и из пробы торфа выделено 3 культуры кислотоустойчивых микобактерий. Изучение культурально-морфологических и биологических свойств (на морских свинках, кроликах и курах) культур, выделенных из биоматериала от свиней и из проб торфа, позволило идентифицировать микобактерии туберкулеза птичьего вида. Исключение торфа из рациона свиней позволило предотвратить появление туберкулеза среди свиней обеих хозяйств.

2.2.5. Эпидемиологическое и эпизоотологическое обследование сельских очагов туберкулеза

Туберкулез как общебиологическая проблема здравоохранения и ветеринарной медицины требует всестороннего обследования эпидемических и эпизоотических очагов болезни, выяснения всех источников возбудителей инфекции и конкретизации мер профилактики и оздоровления.

При обследовании 40 сельских очагов в Щелковском районе Московской области не выявлено реагирующих на туберкулин среди исследованных 90 кур, 16 свиней, 17 собак и 20 кошек. Из 15 обследованных коров реагировала на туберкулин для млекопитающих одна корова, у которой при комплексном исследовании было исключено инфицирование ее возбудителем туберкулеза.

В Подольском районе в индивидуальном секторе (7 населенных пунктов) обследование аллергической пробой на туберкулез проводили 45 голов крупного рогатого скота и 744 курицы. Среди крупного рогатого скота не выявили реагирующих на туберкулин животных, а среди кур реагировало на туберкулин для птиц 8 голов (1,0%). При убое этих кур у 6 голов в

печени обнаружены патологические изменения туберкулезного характера. При бактериологическом исследовании биоматериала от 4 из убитых кур выделили М. avium. Эти куры находились в одном очаге туберкулеза, где от больного человека, находящегося в этом очаге, был выделен возбудитель туберкулеза человеческого вида. В остальных очагах туберкулеза, реагирующих животных на туберкулин, не выявлено.

В населенном пункте, где находился молочный комплекс «Щапово», при аллергическом исследовании из 1917 коров выявили 252 головы, реагирующих на туберкулин для млекопитающих (13,1%). Проведенные дополнительные аллергические исследования симультанной пробой с туберкулином для млекопитающих и KAM, а также бактериологические исследования биоматериала от 26 коров установлено, что причиной аллергических реакций было инфицирование животных М. avium.

В одном из районов исследовали на туберкулез 1737 голов крупного рогатого скота в 194 населенных пунктах, и выявили 18 реагирующих на туберкулин животных (1,0%). У одного из 8 убитых, реагирующих на туберкулин животных, при осмотре органов и туш выявили изменения, характерные при туберкулезе. При бактериологическом исследовании биоматериала выделена культура М. bovis. Как оказалось, эта корова находилась в очаге туберкулеза и была приобретена в неблагополучном по туберкулезу хозяйстве.

Аллергическим исследованием 207 голов крупного рогатого скота, 57 свиней, 1507 кур и 67 гусей личных хозяйств 7 населенных пунктов (55 дворов) выявили 48 коров, 1 быка и 6 телок (26, 8%), реагирующих на туберкулин. В 25 дворах (45,4%), где был выявлен реагирующий на туберкулин крупный рогатый скот, установили наличие больных туберкулезом кур (45 голов), а в одном дворе - и больных туберкулезом гусей. Также выявили 15 случаев микобактериоза свиней, обусловленного М. avium. Свиньи выявлены во дворах, где содержалась больная туберкулезом птица.

Таким образом, результаты исследований показывают, что в сельских

очагах туберкулеза в отдельных случаях выявляли животных, инфицированных возбудителем туберкулеза бычьего вида, з некоторых случаях - ми-кобактериозы свиней и туберкулез птицы. По-видимому, целесообразно ввести понятие «сельский дворовый смешанный очаг туберкулеза» при наличии больного человека и больных туберкулезом или микобактериозом животных.

2.2,6. Совершенствование системы противотуберкулезных мероприятий в сельских очагах туберкулеза

В нормативных документах недостаточно освещены вопросы эпидемиологического и эпизоотологического обследования очагов туберкулеза, а так же отсутствует понятие микобактериоз как нозологическая единица. Поэтому актуальным является проведение эпидемиолого-эпизоото-логического обследования сельских очагов туберкулеза, которое должно осуществляться при выявлении каждого случая инфекции. Это обследование предусматривает разрешение нескольких задач:

-. необходимо выяснить причины возникновения инфицирования, выявить источник возбудителя инфекции, пути его передачи и факторы, способствовавшие заражению макроорганизма. Для этого проводят осмотры граждан и аллергические исследования всех видов животных, находящихся в очаге туберкулеза. Медицинские и ветеринарные службы взаимно извещают вышестоящие органы о каждом случае вновь выявленных больных туберкулезом людей и животных, совместно проводят обследование очага;

- необходимо определить степень эпидемической и эпизоотической опасности источника возбудителя инфекции, находящегося в очаге туберкулеза, определить возможности его локализации и предупреждения распространения заболевания, т.е. установление границы очага, объекты внешней среды, которые могли быть заражены, при этом следует учитывать, что по степени эпидемической и эпизоотической опасности следует обозначить «сельский дворовый смешанный очаг туберкулеза» с выявлен-

ным больным или инфицированным человеком, животным, птицей и источником инфицирования (вид микобактерий);

- результатом обследования должна быть разработка комплексного плана санитарно-противоэпидемических и противоэгшзоотических мероприятий, в которых определяют порядок и время проведения текущей и заключительной дезинфекции, ревакцинации БЦЖ и химиопрофилактики. В плане также должны быть определены меры по обеззараживанию помещений и прилегающей территории, где находились больные туберкулезом животные. Результаты обследования и планируемые мероприятия учитываются в карте.

Проведение комплексных медико-ветеринарных мероприятий в очаге позволит устранить действие возможных дополнительных источников инфицирования человека и животных, повысить их эффективность.

2.2.7. Получение микобактериального антигена.

Учитывая эффективность использования иммуноферментного анализа при диагностике инфекционных заболеваний и результаты, полученные рядом исследователей, совместно с сотрудниками РНИУП Института экспериментальной ветеринарии им. Вышелесского НАН Республики Беларусь проводили исследования по совершенствованию методик получения компонентов, используемых в тест-системе конкурентного иммуноферментного анализа. (Т.Н. Агеева, 2005).

С помощью перекрестного электрофореза удалось обнаружить 20 антигенов, стимулирующих выраженный гуморальный ответ.

При постановке серологических тестов с антигенами, полученными из разных клеточных структур микобактерий, было установлено, что наибольшую активность в реакциях проявляют препараты, содержащее компоненты клеточных стенок. Нами были обнаружены и идентифицированы ряд антигенов микобактерий, выявляющих антитела у инфицированньх животных, которые затем были получены в частично очищенном виде и названы как иммунодоминантные (ИДА). Методом ультразвуковой дезин-

теграции клеточных стенок микобактерий с последующим фракционированием на сефадексе G-100 и G-200 были выделены наиболее активные ИДА, которые находились во фракциях с молекулярной массой более 100 кДа.

Изучение свойств иммунодоминантных антигенов подтвердило их преимущественную локализацию в клеточной стенке, и были получены ИДА разных видов микобактерий (М. bovis, М. tuberculosis и смеси четырех штаммов атипичных микобактерий). Несмотря на то, что большая часть иммунодоминантных антигенов являлась общеродовой, с помощью очищенных антител бычьей антисыворотки М. bovis, не дававших перекрестных реакций с антигенами атипичных микобактерий, выявлены имеющиеся на них видоспецифические эпитопы. Диагностическое значение ви-доспецифических эпитопов ИДА было подтверждено в дальнейшем иммунологическими тестами с сыворотками крови коров, инфицированных возбудителем туберкулеза и атипичными микобактериями.

Так как специфические антитела на ИДА диагностируются раньше в серологических тестах, чем развивается аллергия к туберкулину, то для выявления инфицированных возбудителем туберкулеза животных, не реагирующих на туберкулин, и установления причин реакций на туберкулин у реагирующего крупного рогатого скота был разработан вариант ИФА с использованием ИДА М. bovis, М. tuberculosis и атипичных микобактерий.

2.2.8. Оптимизация технологии получения конъюгата для имму-ноферментного анализа при диагностике туберкулеза.

Для успешной постановки ИФА имеет качество конъюгата. Основным условием высокой специфичности конъюгатов является использование очищенной фракции и иммунизация животных без использования вакцины БЦЖ (полный адъювант Фрейнда).

Получение анти-IgG КРС иммунопероксидазного коньюгата проводили по усовершенствованной схеме: выделение IgG из нормальной сыво-

ротки крови КРС аффинной хроматографией на протеин-А Сефарозе 4В в один этап; получение антивидовых сывороток на кроликах и баранах; выделение анти- IgG антител на протеин-А Сефарозе 4В; мечение антивидовых антител ферментом пероксидазой. Для получения специфических антивидовых сывороток крови иммунизировали здоровых кроликов и баранов раствором иммуноглобулина lg G (0,5 мг/мл) и смесью равных частей иммуноглобулина с препаратом полиэлектролита - полиоксидония по методике, разработанной в отделе иммунологии ГНУ ВНИТИБП доктором, профессором В.И. Клюкиной. Выделение фракции анти- IgG КРС антител проводили на протеин-А Сефарозе 4В.

Анти-IgG пероксидазный коныогат с рабочим разведением 1:10000, концентрацией по ПХ 210 мкг/смЗ и 01Т450 1,1730+0,011 в гомологичной системе, был использован в тест-системе для выявления специфических противотуберкулезных антител к антигенам в непрямом варианте ИФА. Аналогично разработали технологию получения другого коньюгата: меченые пероксидазой бараньи антивидовые IgG -антитела к IgG кролика. Этот коньюгат использован в дальнейших исследованиях при постановке конкурентного варианта ИФА.

2.2.9. Получение специфической противотуберкулезной сыворотки

Для получения иммунной сыворотки использовали иммунодоминант-ные антигены возбудителя туберкулеза.

Качество и специфичность полученных противотуберкулезных сывороток изучали в непрямом методе ИФА с гомологичным микобактериаль-ным антигеном. При иммунизации кроликов получали гипериммунные сыворотки примерно с равными титрами специфических антител (средний титр в ИФА 1:30000-50000). С помощью аффинной хроматографии выделяли пул антител к М. bovis, которые в последующем использовали в качестве блокирующей тест-сыворотки при постановке Б-ИФА.

2.2.10. Изучение эпизоотической ситуации с помощью жидкофаз-

ного блокирующего варианта иммуноферментного анализа.

Методом последовательных разведений определили рабочие концентрации блокирующих антител (БА)-1:1000; антивидового конъгата -1:3000, антигена 1:200. Для количественного анализа установили позитивно-негативный порог и для повышения специфичности системы с учетом возможных погрешностей выделили сомнительную зону (Б %=30-40).

По уровню снижения оптической плотности кроличьих тест-антител в Б-ИФА сыворотками крови коров, реагировавших на туберкулин, определяли наличие в них антигенов возбудителя и судили об инфицированно-сти животных. Процент блокирования кроличьих тест-антител к М.Ыпчэ положительными контрольными сыворотками по сравнению с процентом блокирования (Б %) отрицательным контролем составили: сывороткой крови заведомо известной больной коровы 66+1,1%, положительной контрольной сывороткой - 51+1,7%, гипериммунной антисывороткой МЛхмб-48+2,2 %, гипериммунной сывороткой к антигенам атипичных микобакте-рий - 29—39%.

В стадах угрожаемой и неблагополучной ситуации по туберкулезу в Московской области (345 обследованных коров) выявили 21% из исследованных проб сыворотки крови, показавших явно положительную реакцию с высоким процентом блокирования. В среднем процент Б % составил по стаду 50,2+2,7 с колебаниями от 42% до 64%. Такой высокий уровень блокирования свидетельствовал о наличии активного туберкулезного процесса.

3. ВЫВОДЫ

1. Ретроспективный анализ динамики проявления эпидемического процесса туберкулеза подтвердил тенденцию к увеличению показателей заболеваемости населения Московской области. Эпизоотический процесс туберкулеза крупного рогатого скота в Московской области не прерывается, о чем свидетельствуют появление новых очагов с выявлением больных туберкулезом животных. Это объясняется несвоевременной диагностикой.

2. Анализ результатов бактериологических исследований биоматериала. от сельскохозяйственных животных подтверждает особенности туберкулеза как межвидовой инфекции. Установлена миграция возбудителей туберкулеза среди разных видов животных, но не выявлена их миграция на человека. Это свидетельствует о самостоятельном развитии эпидемического и эпизоотического процессов туберкулеза.

3. Подтверждена убиквитарность нетуберкулезных микобактерий, которых выявляли из объектов внешней среды и из биоматериала реагировавшего на туберкулин крупного рогатого скота.

4. Микобактериозы свиней регистрировали в отдельных свиноводческих комплексах Московской области с пораженностью от 71,2% до 81,2% животных. Источником заражения свинопоголовья являлся торф, исключение которого из рациона предотвратило в дальнейшем появление аллергических реакций на туберкулин и патологию у животных.

5. Усовершенствована система противотуберкулезных мероприятий в сельских очагах туберкулеза, объединяющая усилия медицинских и ветеринарных специалистов, позволяющая предотвратить появление и распространение туберкулеза и микобактериозов.

6. При постановке серологических тестов с антигенами, приготовленными из разных клеточных структур микобактерий, было установлено, что наибольшую активность в реакциях ИФА проявляют препараты, содержащее компоненты клеточных стенок. Были обнаружены и идентифицированы ряд антигенов микобактерий, выявляющих антитела у инфици-рованньх животных, которые затем были получены в частично очищенном виде и названы как иммунодоминантные (ИДА).

7. При иммунизации кроликов иммунодоминантными антигенами М. bovis получали гипериммунные сыворотки с титрами специфических антител (средний титр в ИФА 1:30000-50 000). Выделенный пул антител к M.bovis использовали в качестве блокирующей тест-сыворотки при постановке Б-ИФА.

8. В стадах угрожаемой и неблагополучной ситуации по туберкулезу в Московской области (345 обследованных коров) выявили 21% из исследованных сывороток крови, показавших положительную реакцию с высоким процентом блокирования в ИФА. В среднем процент Б% составил по стаду 50,2+2,7 с колебаниями от 42% до 64%. Такой высокий уровень блокирования свидетельствовал о наличии активного туберкулезного процесса.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Предлагаются для практики:

- методические рекомендации «Система медико-ветеринарных мероприятий в сельских очагах туберкулеза», утвержденных директором ВИЭВ, академиком РАСХН М.И. Гулюкиным, директором ВНИТИБП, академиком РАСХН А.Я. Самуйленко и директором «Центра ветеринарии» Л.К.Кишем 25 мая 2009г.;

- «Методические рекомендации по диагностике микобактериальных инфекций у животных», утвержденные директором ВИЭВ, академиком РАСХН М.И.Гулюкиным 22 марта 2007г.:

- «Планы профилактических и диагностических мероприятий по профилактике туберкулеза в Московской области», утвержденные Главным врачом областного противотуберкулезного диспансера Московской области Г.Б. Касаткиным в 2008 г.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ НО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1, Хруленко В.Н. Бактериологическая диагностика туберкулеза животных /Н.П. Овдиенко, А.Х. Найманов, Ю.И. Смолянинов, Н.С. Боганец, М.В.Калмыков, Е.Э. Соколова, Н.В. Мельник, С.А. Коломыцев// Ветеринария. - 2006.-№12,- С.3-5.

2. Хруленко В.Н. Туберкулез как международная и национальная медико-ветеринарная проблема в современных условиях / Н.П. Овдиенко, А.Х. Найманов, Н.Г. Толстенко, H.A. Яременко, П.ГТ. Рахманин, Н.В.Мельник, С.В.Крюков, В.Н.Боровой // Ветеринарный врач.-2009-№2-С,-14-17.

3. Хруленко В.Н. К вопросу взаимовлияния эпидемического и эпизоотического процессов туберкулеза и микобактериозов в Московской области / Н.П.Овдиенко, А.Х. Найманов, Н.Г.Толстенко, Е.А.Касьянова, Е.Э.Соколова, М.А.Аникеев //Ветеринарный врач,- 2009.-№6. -С. 17-20.

4. Хруленко В.Н. Совершенствование системы противотуберкулезных

мероприятий в сельских очагах туберкулеза / Н.П. Овдиенко, А.Х. Найманов, Н.Г. Толстенко, C.B. Крюков, Н.В. Мельник, Т.Х. Фаизов, Е.Э.Соколова //Ветеринарный врач.- 2009.- №4 -С.37-39.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Хруленко, Владимир Николаевич

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Туберкулез как международная и национальная проблема.

1.2. Возбудители туберкулеза и их патогенность для человека и животных.

1.3. Нетуберкулезные микобактерии, их эпидемиологическая и эпизоотологическая значимость.

1.4. Эпизоотологическая значимость туберкулеза людей.

1.5. Факторы и пути передачи возбудителей туберкулеза животных и микобакгериозов

1.6. Эпидемический и эпизоотический процессы туберкулеза

1.7. Роль M.bovis и М. avium в этиологии туберкулеза человека.

1.8. Эпидемический и эпизоотический очаги туберкулеза

1.9. Противоэпидемические и противоэпизоотические мероприятия в зоонозных очагах туберкулеза.

1.10. Механизм иммунного ответа при туберкулезе

1.12. Место ИФА в системе общепринятых методов диагностики туберкулеза.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Анализ эпизоотических и эпидемиологичских процессов при туберкулезе и совершенствование методов диагностики"

Актуальность темы. Успех борьбы с туберкулезом зависит от полноты учета всех возможных источников возбудителя болезни и связан с видами микобактерий, патогенетическую роль которых изучают медицинские и ветеринарные исследователи (Г.А. Юдин, 1974; И.А. Косилов, 1976; O.A. Благодарный, 1980; Н.П. Овдиенко, 1990; Т.Ф. Оттен, A.B. Васильев, 2005; I

Ю.И. Смолянинов, 1997; A.C. Донченко,1997; H.A. Донченко,1998; В.Г. Ощепков ,2000; А.П. Лысенко, 1994; Т.Н.Агеева, 2005).

Огромный опыт борьбы с туберкулезом позволил разработать систему профилактических, противоэпизоотических, противоэпидемических и лечебных мероприятий, вполне оправдавших себя в регионах России. Однако в настоящее время повысилась важность изучения, учета конкретных природно-географических и хозяйственно-экономических особенностей каждого региона, влияющих на динамику эпидемического процесса туберкулеза в сложившихся условиях.

Поэтому, актуальным является выяснение современных аспектов эпидемиологии и эпизоотологии туберкулеза, значения микобактериозов в патологии крупного рогатого скота, свиней и птиц, выявления источников и путей инфицирования животных нетуберкулезными микобактериями для совершенствования системы противоэпидемических и противоэпизоотических мероприятий в зоонозных очагах туберкулеза.

Для иммуноферментной диагностики туберкулеза у человека и животных испытывались микобактериальные антигены разной специфичности и степени i очитки (Е.В. Маслов, 1986; Л.М. Ходун, 1990; Н.И. Цунская, 1988; А.П. Лысенко,1994., Fifis J. et al.,1994., M.Harboe et al.,1990; H.O Шимолина, 2000; А.А. Нуруллин, 1987; H.B. Демьяненко, 1993; Л.К. Шипина, 1997;Л.А. Таллер, 1995; Т.Р. Якупов, 1991). Использование высокоочищенных видоспецифических антигенов микобактерий не нашло широкого применения из-за их низкой чувствительности при выявлении больных животных в серологических тестах (Т.Н. Агеева 2005). . Невысокая результативность методов серологической диагностики при туберкулезе связана с быстрым включением синтезирующихся антител в иммунные комплексы с антигенами возбудителя (М.М. Авербах, 1984, Л.К. Суркова, 1998, А.П. Лысенко и др., 1998). i

Целью исследований являлось анализ проявлений эпидемического и эпизоотического процессов с усовершенствованием противотуберкулезных мероприятий, включая получение компонентов диагностических тест-систем. Основные задачи исследований:

- изучить эпидемическую ситуацию при туберкулезе; i

-провести бактериологические исследования биоматериала от сельскохозяйственных животных в Московской области;

-выяснить проявление микобактериозов среди поголовья крупного рогатого скота отдельных общественных хозяйств Московской области; i

-исследовать объекты внешней среды—на наличие—нетуберкулезных микобактерий;

-оптимизировать систему медико-ветеринарных мероприятий в сельских j очагах туберкулеза;

- выделить из клеточной стенки бактерий антигены, стимулирующие выраженный гуморальный ответ;

- получить специфические противотуберкулезные сыворотки; i 1

-оптимизировать технологию получения коньюгата для иммуноферментного анализа;

-усовершенствовать метод диагностики туберкулеза ИФА (иммуноферментный анализ) путем получения высокоспецифичных компонентов. 1 I

Научная новизна. Впервые проведен анализ результатов бактериологических исследований туберкулеза в Московской области за 2000-2007гг. Изучена частота выделения и спектр возбудителей туберкулеза и нетуберкулезных микобактерий, персистирующих в организмах животных и среде их обитания на территории Московского области.

Впервые проведен сравнительный анализ значения различных 1 эпидемиологических и эпизоотологических показателей для характеристики сельских- очагов туберкулеза. С учетом указанных критериев-охарактеризованы многолетняя динамика, тенденции и особенности проявлений эпидемического и эпизоотического процессов туберкулеза в Московской области. I

Оптимизирована система медико-ветеринарных мероприятий в сельских очагах туберкулеза.

М.И. Гулюкиным 22 марта 2007 года; Методических рекомендаций «Система медико-ветеринарных мероприятий, в сельских, очагах туберкулеза», утвержденных директором ВИЭВ, академиком РАСХН М.И. Гулюкиным, директором ВНИТИБП, академиком РАСХН А.Я. Самуйленко и директором

Центра ветеринарии» Л.К. Киш 25 мая 2009 г., «Планов профилактическо-диагностических мероприятий по профилактике туберкулеза человека и животных в Московской области»,утвержденных Главным врачом областного противотуберкулезного диспансера Московской области Г.Б. Касаткиным в 2008 г.

Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 4 статьи в рецензируемых изданиях, входящих в Перечень ВАК Министерства образования и науки РФ.

-результаты бактериологических исследований биоматериала сельскохозяйственных животных и проб объектов внешней среды в Московской области на наличие микобактерий и их видового состава;

-результаты эпидемиологических и эпизоотологических обследований очагов туберкулеза в сельской местности; 1

-система медико-ветеринарных мероприятий в сельских очагах туберкулеза; ■ ;

-результаты исследований по усовершенствованию постановки иммуноферментного анализа для диагностики туберкулеза.

Автор выражает глубокую благодарность сотрудникам Московского областного и Щелковского противотуберкулезных диспансеров, Департамента ветеринарии Министерства сельского хозяйства Московской области, РНИУП Института Экспериментальной ветеринарии им. i

Вышелесского HAH Республики Беларусь.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ i

1.1. Туберкулез как мезвдународная и национальная проблема

В XXI туберкулез остается важной национальной и международной i проблемой. Высказанный экспертами Всемирной организации здравоохранения в 1960 г. прогноз о возможности искоренения туберкулеза в i ближайшем будущем не оправдался как в глобальном масштабе, так и в i отдельных регионах и отдельных странах. Период длительного снижения и стабилизации показателя заболеваемости туберкулезом в экономически развитых странах после 2-й мировой войны в последние годы сменился повсеместным увеличением заболеваемости и проявлением остро прогрессирующих форм туберкулеза. Это заболевание не удалось ликвидировать ни в одной стране мира. В мире ежегодно заболевают туберкулезом более 8 млн. человек и почти 1/3 из них умирает. В ближайшее

10-летие от туберкулеза на планете погибнет около 30 млн. человек (A.JI.

Кучеров 1995, А.А, Приймак, А.Г.Хоменко, 1997; М.И. Перельман, 2002. П.П.

Сельцовский, В.И. Литвинов, 2004; A.Bahadur, G. Ortakoyli et al., 2005;

G.Gombos, M.Pop, 2005; M. Jlic, V. Kuruk et all., 2005).

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)", Хруленко, Владимир Николаевич

5. ВЫВОДЫ

2. Анализ результатов бактериологических исследований биоматериала от сельскохозяйственных животных подтверждает особенности туберкулеза как межвидовой инфекции. Установлена миграция возбудителей туберкулеза среди разных видов животных, но не выявлена их миграция на человека. Это свидетельствует о самостоятельном развитии эпидемического и эпизоотического процессов туберкулеза.

6. При постановке серологических тестов с антигенами, приготовленными из разных клеточных структур микобактерий, было установлено, что наибольшую активность в реакциях ИФА проявляют препараты, содержащее компоненты клеточных стенок. Были обнаружены и идентифицированы ряд антигенов микобактерий, выявляющих антитела у инфицированньх животных, которые затем были получены в частично очищенном виде и названы как иммунодоминантные (ИДА).

6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Предлагаются для практики: методические рекомендации «Система медико-ветеринарных мероприятий в сельских очагах туберкулеза», утвержденных директором ВИЭВ, академиком РАСХН М.И.Гулкжиным, директором ВНИТИБП, академиком РАСХН А .Я. Самуйленко и директором «Центра ветеринарии» Л.К.Киш 25 мая 2009г.;

- «Методические рекомендации по диагностике микобактериальных инфекций у животных», утвержденные директором ВИЭВ, академиком РАСХН М.И.Гулкжиным 22 марта 2007г.;

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Приведенные литературные данные показывают, что уже достаточно изучены биология возбудителей туберкулеза, выделения и культивирования, источники возбудителя, факторы его передачи и пути распространения, разработаны методы борьбы с болезнью. В то же время до сих пор туберкулез остается единственным в своем роде фактором значительной заболеваемости и

I , смертности людей во многих странах мира, в т.ч. в Российской Федерации.

В этих условиях важно оптимизировать мероприятия по борьбе с I туберкулезом людей и животных, что может быть осуществлено при изучении региональных особенностей 'эпидемической и эпизоотической обстановки. Требуют конкретизации понятия «Эпизоотический очаг» при зоонозном туберкулезе в связи с меняющейся структурой животноводства. Естественно, важен ретроспективный анализ эпидемической и эпизоотической ситуации туберкулеза в регионе. I

В последние десятилетия повсеместно отмечается рост заболеваемости, вызванной нетуберкулезными микобактериями. Роль этих микроорганизмов в патологии человека и сельскохозяйственных животных недостаточно изучена. Требует изучения эпидемиология и эпизоотология микобактериозов.

Результаты проведенных исследований, по нашему мнению, способствовали усовершенствованию противотуберкулезных мероприятий в новых экономических условиях.

Ряд зарубежный исследователей рекомендуют использовать ИФА в сочетании с аллергической пробой для оценки эпизоотической ситуации в стаде по туберкулезу.

Таким образом, стал необходимым постоянный мониторинг не только эпизоотологической, но и эпидемиологической ситуации, что позволит

I , обеспечить раннее выявление потенциальной опасности и провести соответствующие профилактические мероприятия.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы [

Работа выполнена в период с 2005 по 2008 гг. в лаборатории микробиологии ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности», в Государственном учреждении здравоохранения Московской области «Щелковский противотуберкулезный диспансер» в рамках задания 01 Российской научно-технической программы приоритетных и прикладных научных исследований.

Банк статистической информации, необходимой для анализа динамики проявления эпидемического и эпизоотического процессов туберкулеза на территории РФ и Московской области, сформирован по данным официальной медицинской и ветеринарной отчетности за 2000-2007 гг. Динамику проявления туберкулеза оценивали по абсолютным и относительным показателям его проявления. В частности, были проанализированы изменения годовых I показателей заболеваемости, болезненности, бациллярности и смертности при 1 изучении проявлений эпидемического процесса, и показателей выявления и оздоровления неблагополучных пунктов; данные о количестве исследованных и реагирующих на туберкулин животных в течение года; число реагирующих на туберкулин в расчете на 100 ООО голов скота, процент животных с патологоанатомическими признаками болезни, результаты лабораторных исследований биологического материала, - при анализе проявлений эпизоотического процесса.

Были собраны данные официальной ветеринарной отчетности по формам:

- отчеты о заразных болезнях животных (форма 1-вет);

- отчеты о противоэпизоотических мероприятиях (форма 1-вет А);

- отчеты о работе ветеринарных лабораторий (форма 4-вет);

- отчеты о ветеринарно-санитарнном надзоре1 на мясоперерабатывающих предприятиях (форма 6-вет); 1

- отчеты о ветеринарно-санитарном надзоре на убойных пунктах хозяйств I и организаций, в лабораториях ветсанэкспертизы (форма 5-вет).

Сводку, группировку и анализ собранной информации проводили соответственно с использованием методики анализа деятельности противотуберкулезных диспансеров, описанной в справочнике врача-фтизиатра, изданного под общей редакцией академика АМН СССР Н.А.Шмелева и заслуженного деятеля науки РСФСР, проф. В.Л.Эйниса (М., 1963), и методов из «Методических указаний по эпизоотологическому исследованию» (И.А.Бакулов и соавт.,1982).

Проявления микобактериозов у свиней и крупного рогатого скота изучали по данным ветеринарной отчетности Министерства сельского хозяйства Московской области. Использовали и данные публикаций отечественных исследователей, в разное время изучавших вопросы туберкулеза и микобактериозов (работы М.В. Шиловой, В.Е. Щуревского, В.А. Шарова, В.И.Косенко, О.В.Якушевой, Н.П.Овдиенко, А.Х.Найманова, Н.Г.Толстенко и других).

В населенных пунктах, где выявили эпидемические очаги, проводили эпидемиологическое обследование и наблюдения за очагом, а также с участием ветеринарных специалистов - эпизоотологическое обследование с проведением аллергических исследований животных и в отдельных' случаях бактериологических исследований биоматериала от убитых животных и проб объектов внешней среды на наличие микобактерий. I

Исследования животных на туберкулез проводили совместно с ветеринарными специалистами в соответствии с Санитарными и Ветеринарными правилами «Профилактика и борьба с заразными болезнями для человека и животных», утвержденными Госкомсанэпиднадзором и

Минсельхозпродом России (1996), «Наставлением по диагностике туберкулеза животных», утвержденного Департаментом ветеринарии МСХ Российской Федерации 18.11. 2002г.; «Методам лабораторной диагностики туберкулеза», ГОСТ 26072-89; СТ СЭВ 3457-81.

При статистической обработке собранных данных в процессе эпидемиологического и эпизоотологического анализов использовали методы, описанные в книге Меркова и Полякова «Санитарная статистика» (1974) и в Практикуме по общей теории статистики и сельскохозяйственной статистике (1974).

В исследованиях использовали эталонные музейные, официально зарегистрированные штаммы культур патогенных и атипичных микобактерий. Микобактерии выращивали на плотных( и жидких средах (Левенштейна-Йенсена, Финн-2, Сотона, Школьниковой, Павловского, ВКГ), выделение антигена из клеточной стенки проводили по методике И.Н.Архипова, А.П. Лысенко и др. с модификациями.

Культурально-биохимические свойства изолированных кислотоустойчивых культур микобактерий изучали во второй генерации после накопления бактериальной массы, согласно методическим указаниям «Бактериологическая и биохимическая идентификация микобактерий» М.1981; учет и оценку выросших колоний проводили по схеме Г.Н. Першина (1971). Также использовали тесты согласно схеме дифференциации микобактерий, разработанной в ВИЭВ им. Я.Р. Коваленко с учетом модификаций, предложенных Н.М. Макаревич с соавт. 1985 и другими учеными. Отрицательным контролем служила эмбриональная сыворотка и сыворотка крови коров из благополучных по туберкулезу хозяйств Московской области.

Гуморальный иммунный ответ изучали по методике, разработанной сотрудниками РНИУП Института Экспериментальной ветеринарии им. Вышелесского ПАН республики Беларусь, в перекрестном иммуноэлектрофорезе (ПИЭФ) с промежуточным гелем (ПГ), в который включали сыворотки крови животных с разным статусом по туберкулезу.

ПИЭФ ставили на пластинках 9x12 см в 1,5% агарозе Sigma в веронал-мединаловом буфере pH 8,6. Электрофорез антигенов (1мг/100 мкл) проводили в первом направлении при 10 в/см. В ПГ вносили по 200 мкл исследуемых сывороток.

В гель для электрофореза во втором направлении вносили сыворотку крупного рогатого скота, гипериммунизированного комплексами негретых

2\ антигенов М. bovis (11 мкл/см ), и проводили его при 2 в/см в течении 14-16 часов.

После завершения электрофореза гели отжимали, промывали, высушивали и окрашивали 0,2% раствором Кумасси голубого. Результаты ПИЭФПГ I интерпретировали, исходя из номенклатуры антигенов M.bovis, предложенной А.П.Лысенко (1994). I

Исследуемые сыворотки по 0,2 мл включали в промежуточный гель и регистрировали их влияние на формирование преципитатов. Результаты интерпретировали по Н. Аксельсен с соавт. (1974).

Специфические положительные 1 противотуберкулезные сыворотки получали гипериммунизацией кроликов антигеном М. bovis.

Выделение и очистка IgG ,КРС. IgG КРС выделяли из нормальной и гипериммунных антивирусных сывороток крови методом аффинной хроматографии на BrCN-Сефарозе 4В с иммобилизованным протеином А. t

Общий белок определяли по методу Лоури (1958) и спектрофотометрически на СФ-26 при длине волны 280нм.

Коньюгат анти-IgG КРС антител получали меткой антивидовых антител ферментом пероксидазы из хрена перйодатным методом по Р. Nakane и А. Kawaoi (1974).

Специфические положительные противотуберкулезные сыворотки получали гипериммунизацией кроликов антигеном lyi. bovis. В качестве блокирующих антител при постановке непрямого жидкофазного варианта ИФА использовали противотуберкулезные антитела из сыворотки крови кроликов, иммунизированных иммунодоминантными антигенами M.bovis с адъювантом полиоксидонием, очищенных методом аффинной хроматографии на BrCN сефарозе с иммобилизованным на ней гомологичным антигеном, и активностью в ИФА не ниже 1:2560. Постановку блокирующего ИФА (Б-ИФА) проводили по стандартной методике (Gy Czifra, 1993).Оптимальную концентрацию блокирующих антител и антивидового конъюгата определяли путем постановки прямого варианта ИФА методом двукратных последовательных разведений по схеме «шахматный порядок». За рабочее разведение компонента принимали последнее разведение каждого, обеспечивающего оптическую плотность (ОП) равную 2,0 единицы. Рабочее разведение антигена для Б-ИФА определяли в непрямом варианте ИФА. Титром антигена считали последнее его разведение, при котором положительная контрольная сыворотка имела наивысший титр, определенный в реакции со стандартным контрольным антигеном. Удвоенное значение конечного разведения антигена считали рабочим. Полученные в результате реакции Б-ИФА значения ОП контрольных и исследуемых проб с блокирующими антителами переводили в значение процента блокирования (Б%).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1. Анализ основных показателей проявления эпидемической и эпизоотической ситуации туберкулеза в Российской Федерации за 1990 - 2006 гг.

Проблема взаимосвязи туберкулеза человека и животных и в настоящее время остается актуальной. Для человека крупный рогатый скот может быть источником как М. bovis, так и М. tuberculosis и больной туберкулезом человек также может быть источником возбудителя крупного рогатого скота человеческого и бычьего видов микобактерий. Важным является вопрос о выяснении взаимного влияния в настоящее время эпидемического и эпизоотического процессов друг на друга и насколько оно выражено. Нами проведено сравнение основных эпидемиологических и эпизоотологических показателей туберкулеза на территории Российской Федерации, в т.ч. и Московской области. i

3.1.1. Динамика проявлений эпидемического процесса при туберкулезе

Для оценки эпидемической ситуации туберкулеза использованы показатели заболеваемости и смертности населения. Наиболее важным эпидемиологическим показателем, характеризующим ситуацию по туберкулезу, является заболеваемость, т.е. число больных активной формой туберкулеза, зарегистрированных впервые в календарном году, исчисленных на 100 000 населения:

Число зарегистрированных больных

ПЗ = --------------------------------------------------- х 100 000

Численность населения

Число случаев активного туберкулеза в стране в любой данный момент ' принято называть болезненностью. Она включает в себя заболевших как в i текущем, так и предыдущие годы. Показатель болезненности также исчисляется на 100 000 населения:

Число больных активным туберкулезом '

ПБ = ------------------------------------------------------ х 100 000 i

Численность населения

Смертность от туберкулеза - число умерших от туберкулеза в течение года в расчете на 100 ООО человек живущих.

Для исследования использовали данные государственной статистики по туберкулезу в Российской Федерации за 1990-2007гг. (Годовая отчетная форма № 8, утвержденная постановлением Госкомстата России от 29.06.99г. № 49 и постановлением Росстата 11.11. 05. № 80) и данные Росстата Российской Федерации о числе населения).

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Хруленко, Владимир Николаевич, Щелково

1. Авербах М.М. Иммунология и иммунопатология туберкулеза. М.: Медицина, 1976.-312 с.

2. Авилов В.М., Больше внимания профилактике и борьбе с туберкулезом животных В.М. Авилов, В.Ф.Пылинин, Н.П.Овдиенко, В.А.Ведерников // Ветеринария. 1997.- № 8. - С.З -9.

3. Александров H.A. Эпизоотология туберкулеза крупного скота и организационные формы искоренения в длительно неблагополучных хозяйствах северной зоны Нижнего Поволжья: Автореф. дис. докт. ветеринарных наук. Саратов, -1973.-38 с.

4. Архангельский И.И., Карташова В.М. Ускоренные методы определения в молоке туберкулезных бактерий // Ветеринария. 1962. № 1. -С. 73 -77.

5. Бабин Н.П. Туберкулез животных и меры борьбы с ним. Киев, 1990.-51 с.

6. Бакулов И.А., Юрков Г.Г., Ведерников В.П., Орлов Ф.М. Эпизоотический словарь справочник. - М.: Россельхозиздат, 1986. - 189 с.

7. Бакулов И.А. Метод эпизоотологического исследования И.А.Бакулов, В.А.Ведерников // Руководство по общей эпизоотологии / Под. Ред. И.А. Бакулова и А.Д.Третьякова. 1979. С.89-110.

8. Бакулов И.А. География болезней животных зарубежных стран / И.А.Бакулов, М.Г. Таршис. -М.:Колос, 1971.-200с.

9. Бакулов И.А. Развитие учения об эпизоотическом процессе в свете современных эпидемиологических воззрений / И.А.Бакулов, В.В.Макаров // ветеринария. 1986. - №11. - С.32-35.

10. Бакулов И.А. Эпизоотический процесс: иеоретические аспекты проблемы./ И.А.Бакулов, В.В.Макаров//Вестник с.-х. науки. 1986.- №11.-С. 111-118.

11. Басыбеков С.Д. Сельскохозяйственные и домашние животные как источники микобактериозов у человека / С.Д. Басыбеков: Автореферат, дисс. Канд.вет наук. Новосибирск., 1982. - 24с.

12. Басыбеков С.Д. Животные источники микобактериозов у человека / С.Д. Басыбеков: Автореферат, дисс. канд. вет наук. - Новосибирск., 1982. - 24с.

13. Благодарный Я. А. Туберкулез животных как зооантропоноз / Я.А.Благодарный. Алма-Ата: «Кайнар», 1972.- 200с.

14. Благодарный Я.А. Источники туберкулеза и меры профилактики // Я.А.Благодарный. Алма-Ата: «Кайнар», 1980.- 245с.

15. Бойко A.A. Туберкулез крупного рогатого скота (биолого-экологическийIи технологический аспект проблемы) /А.А.бойко, Е.П.Сапегина — М. 1991.- 92с.

16. Бойко A.A. Самуйленко А.Я. Закономерности сохранения в природе микобактерий туберкулеза.// Сб. научных трудов ВНИИБТЖ, актуальные проблемы бруцеллеза и туберкулеза животных. Омск. 2000. с. 59-61.

17. Балгужинов Д.Б. Эпизоотическое, значение больного туберкулезом человека для крупного рогатого скота // Организация противотуберкулезных мероприятий на эпизоотически неблагополучных территориях: Тез. докл. зон. совеш. Новосибирск, 1987. - С. 24 - 25.

18. Белов А.Б., Огарков П.И. // Эпидемиология и инфекционные болезни. -2005. -№ 6. -с. 51-55

19. Беляков В.Д., Яфаев Р.Х. Эпидемиология. — М.1989.

20. Беляков В.Д. // Эпидемический процесс: теория и метод изучения. JL, 1964.- с.243.21. беляков В.Д. Качество и эффективность противоэпидемических мероприятий.- / В.Д. Беляков, А.А.Дегтярев, Ю.Г. Иванников.- JL: «Медицина», 1981. с. 304.

21. Благодарный Я.А. Туберкулез у животноводов, вызванный микобактериями туберкулеза бычьего вида / Я.А. Благодарный, Ж.Ж. Бекмагамбетова, Э.В. Сидоркина // Прбл. Туберкулеза. 1975. - № 10. - С. 7275.

22. Бокун А.О. Особенности и основные причины неблагополучия по туберкулезу животных в зоне Ставропольского края. // Основные проблемы ветеринарии Северного Кавказа. Махачкала. 1979. С. 31 - 32.

23. Варбанец Л.Д. Структура и биологическая роль полисахаридов Micobacterium, Corinebacterium, Nocardia // Микробиол. Жур. 1988.- Т.50.5.-С. 98-107.

24. Василев В.Н. Микобактериозы и микозы легких. София: Медицина и физкультура, 1971. - 382 с.

25. Вейсфейлер Ю.К. Биология м изменчивость микобактерий туберкулеза и атипичных микобактерий / Ю.К.ВейсфеЙлер Будапешит. Академия наук Венгрии. - 1975. - С.15-19.

26. Вишневский П.П. Туберкулез крупного рогатого скота. М: Сельхозгиз, 1935.- 172 с.

27. Вишневский П.П. Туберкулез / П.П.Вишневский // Болезни птиц М., «Сельхозиздат». -1951.

28. Василенко К.Ф. О миграции возбудителя туберкулеза птиц на крупный рогатый скот. // Ветеринария. 1984. №3 с. 26-28.

29. Вартанян Ф.Е. Туберкулез, ассоциированных с ВИЧ-инфекцией, в странах мира / Ф.Е. Вартанян, К.П. Шаковский // Эпидемиология и инфекционные болезни. 2007, №4 - с .42-45.

30. Васильев В.Н. Микобактериозы и микозы легких. |София: Медицина и физкультура, 1771.— 382 с. 1

31. Голышевская В.И. Микробиологические методы выявления авизуальных форм микобактерий. X Всесоюзный съезд фтизиатров // Тез. докл.-Киев. 1986.-С. 101-102.

32. Горбач Л. А. Современный медико-социальный портрет больного туберкулезом органов дыхания // Мат. И (XII) съезда врачей фтизиатров. -Саратов, 1994.-С. 16-17.

33. Григорьева М.П., Копелян И.Н. Разработка микромодификаций ультивирования крови человека // Бюлл. эксперим. биол. 1972. - № 8. - С. 119122.

34. Гусейнов Г.К., Мамаев К.А. Эпидемиология и эпизоотия туберкулеза в Дагестане // Мат. выездн. зас. Президиума РАМН в Дагестане (спец. вып.). -Махачкала, 1999. С. 30 - 31.

35. Гусейнов Г .К. Типовая структура микобактерий туберкулеза и ее связь сэпидемиологией и эпизоотией // Материалы научно практической конф. «Актуальные проблемы туберкулеза». Махачкала. - 2002. - С. 55 - 60.

36. Громашевский JI.B. // Общая эпидемиология . — М., 1965. -с.287

37. Гаспарян И.Г. Проблемы типов туберкулезной палочки в Узбекистане / И.Г. Гаспарян. АН УзССР, Ташкент, 1950, с. 87-95.

38. Данко Ю.Ю. Эпизоотологический надзор при туберкулезе крупного рогатого скота.: Автореф. дис. д-ра. Веет. Наук / Санкт-Петербург. 2000.46.С.

39. Дидовец СР., Хоменко В.И. Задачи ветеринарной службы и науки в оздоровлении животноводства Украинской ССР от туберкулеза // Тез. докл. 1 республ. научн.-практ. конф. «Эффективность мероприятий по борьбе с туберкулезом животных» Киев, 1982. - С. 4 - 10

40. Драбкина P.O. Микробиология туберкулеза. М, Медгиз. 1963, -255 с. !

41. Должанский В.М. Современные методы лабораторной диагностики туберкулеза (методические рекомендации). Москва. 1992. - 22 с.

42. Донченко A.C. Молоко один из источников распространения туберкулеза // Мат. научн. конф. молодых уч-х. - Алма - Ата, 1972. - 662 с.

43. Донченко А.С, Писаренко E.H. Вопросы взаимосвязи туберкулеза человека и животных и их практическая реализация при оздоровлении стад крупного рогатого скота от туберкулеза // Тез. докл. зонального совещания. Новосибирск, 1987.-С. 11-12.

44. Донченко А.С, Донченко В.Н. Туберкулез крупного рогатого скота, верблюдов, яков, овец и пантовых оленей. Новосибирск, 1994. - 353 с. i

45. Ерохин В.В., Земскова 3. С, Дорожкова И.Р., Видин Н. Ультраструктура вирулентных туберкулезных микобактерий // ЖМЭИ. № 11.-С.80-84.

46. Жданов В.М. Эволюция возбудителей инфекционных болезней , / В.М.Жданов, Д.К. Львов М.: Медицина, 1984. - 221 с.

47. Земскова З.С, Дорожкова И.Р. Скрыто протекающая туберкулезная инфекция. М.: Медицина, 1984.-221 с.

48. Зыков М.П., Ильина Т.Е. Потенциально патогенные микобактерий илабораторная диагностика микобактерйозов. М.: Медицина, 1978.-174 с.

49. Ильина Т.О., Данко Ю.Ю. Распространение потенциально патогенных и сапрофитных микобактерий в природе и среди домашних животных // Сб.Iнаучн. тр. Лен. вет. инст. Л., 1982. - В. 72. - С. 46 - 52.

50. Ильина Т.Б О патогенности так называемых атипичных микобактерий // Проблемы туберкулеза. 1967. №1. 72.

51. Ильина Т.О., Данко Ю.Ю. микобактериозы человека, вызаваемыеI

52. M.xenopi, и источники этих микобактерий // Проблемы туберкулеза. 1983. №11. 52-55.

53. Иртуганова O.A. Современные возможности микобактериологической лаборатории / O.A. Иртуганова // Клиническая лабораторная диагностика. -2006 №1. - с.21-35. ,

54. Исмаилов З.И. Виды микобактерий, выделенных от крупного рогатого скота личных подсобных хозяйств населения: 'Автореф. дис. канд. вет. наук. -М., 1985.-21 с. I

55. Каграманов А.И. Об атипичных кислотоустойчивых микобактериях Пробл. туберкулеза. 1963. - № 7. - С. 69 - 75.

56. Каграманов А.И. О взаимосвязи туберкулеза человека и сельскохозяйственных животных // Пробл. туберкулеза^ 1968. - № 2. - С 69

57. Карманбаев К.К., Азгамова P.A., Ипаткин В.Ф. // Вопросы взаимосвязи туберкулеза человека и ясивотных. Алма-Ата, 1981.-С. 29- 33.1

58. Клебанова A.A. К вопросу о влиянии физических факторов на жизнеспособность бактерий//Вопр. туб -за. 1931. - .42 2 . - С. 202 - 204.

59. Клебанова A.A. Л Проблемы туберкулеза -11961. № 5. - С. 102 -105.

60. Козло ПГ. Дикий кабан. Минск: Урожай, 1975. - 223 с.

61. Козлов B.C. Биологические свойства микобактерии разных видов, выделенных из почвы // Пробл. туб-за. 1982. -'№ 3. - С. 65 - 68.

62. Кельдыбаев С., Туркебаева К.А. Распространение туберкулеза среди овец и коз // Ветеринария. 1969. № 9 С. 38

63. Кадочкин A.M. Изучение атипичных нефотохромогенных микобактерий комплекса авиум-интрацеллюларе и их патогенности для лабораторных животных и крупного рогатого сота: Автореф. дис. .канд. вет. наук.-М, 1979.-13с.

64. Кадочкин A.M. Атипичные микобактерий их роль в сенсибилизации животных к туберкулину ХА.М.Кадочкин, А.В.Ткачев-Кузьмин \\Бюл.ин-та \ Всесоюзн. н.-и. ин-т эксперимент, вет. им.Я.Р.Коваленко.-1983.-Вып. 51 .-С.50-52. '

65. Коваленко Я.Р. Состояние ветеринарии в России до Великой Октябрьской социалистической революции / Коваленко Я.Р.// Труды Всеросс н.-и. института эксперим. ветеринарии М., 1967. — Г.ХХХ1У — С. 8 — 43.

66. Киселев B.C. Вопросы диагностики и профилактики туберкулеза крупного рогатого скота / Киселев B.C. // Труды Всерос. Н.-И. института эксперим. Ветеринарии.-М., 1957. Т.ХХ. - с. 106-119.

67. Капков Л.П. Эпидемическая ситуация по туберкулезу в России и пути ее стабилизации / Л.П.Капков // Вет. Патология. М., - 2004. - № 1-2 (9). - с.24-28

68. Кассич Ю.Я. Туберкулез и меры борьбы с ним \ Ю.Я.Кассич, А.Ф.Борзяк, А.Ф.Кочмарский, О.В-Мартма, И.Т.Нечваль, Н.П.Овдиенко, М.Павлас, А.Н.Шаров, В.ЕТЦуревский .-Киев.-Урожай, 1990.- 304с.

69. Кассич В.Ю. Микобактериозы как паразитозы и сапронозы \В.Ю.Касич \\Ветеринарная патология .- 2004.- №1-2.- С.127-129

70. Кудяков В.Н. Атипичные быстрорастущие микобактерий и их роль патологии крупного рогатого скота\В.Н.Кудяков.: Автореф. дисс. .канд. вет.наук.-М., 1984.-24с.

71. Кузин А.И. Оздоровление животноводческих хозяйств от туберкулеза .-М.: «Россельхозиздат» ,1982.- 103с.

72. Косёнко В.И., Павлович JI.A. Изучение этиологии туберкулезоподобных заболеваний у свиней // Ветеринария. 1978. 7. С. 51-53.

73. Конблюм О.И.Санитарная профилактика туберкулеза / О.И. Корнблюм, С.В .Моссино //Туберкулез. Руководство для врачей. М.; Медгиз-, с.623-625.

74. Кривохиж В.М. Организация противотуберкулезной работы в сельской местности. / В.М. Кривохиж III Туберкулез у детей и подростков. Руководство для врачей. JL; Медицина . 1987.- с. 263 - 272.

75. Курманбаев К.К. Лабораторная диагностика нефротуберкулеза у животноводов и меры профилактики / К.К. Курманбаев, Я.А.Благодарный, Ж.Д. Бекмагамбетова. Алма-Ата: «Наука», 1983. - 136с.

76. Каграманов А.И. Проблема микобактериозов и атипичных микобактерий на XVI французском конгрессе по туберкулезу и легочным заболеваниям / А.И. Каграманов // Проблемы туберкулеза. — 1971. -№. ll. — c. 90-92.

77. Колокшанская Л.Б. Апатогенные микобактерии у крупного рогатого скота. Сел. хоз. Молдавии. 1969. - № 2. - С. 4 - 42.

78. Кочемасова СМ., Дыхно М.М.; Дорожкова И.Р. и др. L-формы микобактерии туберкулеза. М., Медицина, - 1980. - 174 с.

79. Кучеров А.Л. Эпидемиология туберкулеза (лекция) // Проблемы туберкулеза. 1990. -N3. -С.54-58

80. Кчеров А.Л. Рамки ВОЗ для эффективной борьбы с туберкулезом: проблемы ли они для России? // туберкулез и экология 1995. №2. с. 38-48. '

81. Лазовская А.Д., Пинчук Л.М., Финкилыптейн Л.С. Идентификациякультур микобактерии, выросших на среде с салицилатом натрия // Проблемыiтуберкулеза. 1994. - N5, - С. 45-46.

82. Левченко И.Д. Изучение выживаемости микобактерии туберкулеза птичьего типа в почве, воде, помете и глубокой подстилке.: Автореф. дис. канд. вет. наук. Харьков, 1965. - 21 с.

83. Левченко Т.А. Ультраструктурная организация микобактерии туберкулеза // Проблемы туберкулеза. 1991. -N.12. - С. 42-46. , 1

84. Луницын В.Г. Туберкулез пантовых оленей: Автореф. дисс. д-ра вет. наук. -Новосибирск, 1993.

85. Лященко К.П., Бобровник С.А., Комиссаренко С.В. Формирование ГЧЗТ микобактериальным антигенам // ЖМЭИ. -1991. -N4. С. 66-68.

86. Макаров В.В., Воробьев A.A. Ветеринарное здравоохранение и егозначение в инфекционной патологии человека // Микробиология 1999- №4 -С. 111-115.

87. Мартма О.В., Тяхнас К.К. Эпидемиологическое значение молока коров, зараженных атипичными микобактериями // Тез. докл. зон. совет. Новосибирск, 1987. -С. 14-15.

88. Мартма О.В. О наследственной устойчивости крупного рогатого скота к микобактериозу \ О.В.Мартма, К.К.Тяхнас \\Тез. докл. ХВсесоюзн. Конф. По бруцеллезу и туберкулезу.- С)мск.-1980.-С.51-52.

89. Мартма О.В. Современное состояние проблемы атипичных микобактерийIв ветеринарии \О.В.Мартма\\Ветеринария.- 1982.-№5.-С.22-27.

90. Мартма О.В. О возбудителях и течении микобактериоза \ О.В.Мартма, К.К.Тяхнас \\В кн.:Туберкулез крупного рогатого скота и меры борьбы с ним.-Новосибирск.-1986.- С.78-82.

91. Мартма О.В. Характеристика и патогенность для крупного рогатого скота микобактерий, выделенных из торфа Ю.В.Мартма \\Ветеринария.-1967.-№6,-С.35-38.

92. Мартма О.В. Об атипичных микобактериях, выделенных из молока коров Ю.В.Мартма \\Мат.конф.вет.врачей Прибалтийских республик -Рига.-1968.-С.87-88.

93. Матвеев В.Н. О взаимоотношении туберкулеза человека и животных Вопросы туберкулеза. 1925. - N2. - С. 48-59

94. Модель Л.М. Биология туберкулезных микобактерий и иммунобиология туберкулеза М., Медгиз, 1958. 315 с.

95. Мурашкина Г.С, Донченко А.С. Влияние эпизоотического неблагополучия на основные эпидемиологические показатели по туберкулезу // ПроблемыIтуберкулеза. 1992. -К 11-12. - С. 12-15.

96. Найманов А.Х. Дифференциация аллергических реакций ( на туберкулин // Ветеринария 2002 -№3 - С. 10-13.

97. Незлин С.Е. Санитарная профилактика туберкулеза ) С.Е. Незмин //I

98. Многотомное руководство по туберкулезу т.1У. / Эпидемиология иорганизация борьбы с туберкулезом. — Медгиз.М. 1962. — С. 107-132.

99. Незмин С.Е. Противотуберкулезный диспенсер: / С.Е. Незмин, М.С. Греймер, Н.М.Протопопова. 2-е изд., перераб. И доп. -М.Медицина, 1989. -223с.

100. Общая и частная эпидемиология // Елкин И.И. Уеные об эпидемическом процессе: Руководство для врачей / Елкин И.И., Яшкуль В.К. М.;N

101. Медицина», 1973.-т. 1 . С.59-65.

102. Овдиенко Н.П. Эпизоотология, и диагностика туберкулеза крупного рогатого скота в условиях интенсификации животноводства: Автореф. дис. Д-ра веет. Наук: 16.00.03 / Н.П. Овдиенко; М.; 1990. - 49с.

103. Эпизоотология туберкулеза // Овдиненко Н.П. Туберкулез с.-х. животных:. Научн. Труды ВАСХНИЛ / Под ред Шишкова В.П., УрбанаВ.П. М.,1991.- с. 42-63.

104. Овдиенко Н.П. Достижения науки и практики в борьбе с туберкулезом крупного рогатого скота в СССР и зарубежных странах // Соврем. Пробл. Профилактики зооноз. Болезней и пути их решения.- Минск, 1987.- С.69-71.

105. Овдиенко Н.П. Эпизоотическая обстановка по туберкулезу крупного рогатого скота в зарубежных странах в начале XXI века / Н.П. Овдиенко, А.Х. Найманов, И.В. Солодова // Веет. Патология. М., 2-004. - №1-2 (9). - с. 51-54.

106. Овдиенко Н.П., Кадочкин A.M., Иванова И.А. Козин А. И., Ткачев

107. Кузьмин А. В., Косенко В. П., Найманов А. X. Выделение микобактерий и чувствительность крупного рогатого скота к туберкулинам // Ветеринария.1989-№9-С. 26-28. , ¡i

108. Овдиенко Н.П. Эпидемиологическое значение туберкулеза животных // В кн. Туберкулез животных и меры борьбы с ним. Под ред. Ю.Я. Кассич Киев «Урожай», 1990 - С. 48-52.

109. Овдиенко Н.П. Эпизоотология и диагностика туберкулеза крупного рогатого скота в условиях, интенсификации животноводства.: Автореф. дисс. д-ра вет. наук. М., 1990. - 49 с.

110. Овдиенко Н.П., Найманов А.Х., Ведерников В.А. Никакого перемирия в борьбе // Вет. газета 2002. - №6 - С. 4-5.

111. Оттен Т.Ф. Характеристика нетуберкулезных микобактерий потенциальных возбудителей заболеваний человека // Проблемы туберкулеза 1994.-С. 56-59.

112. Оттен Т.Ф. Микобактериоз / Т.Ф. Оттен, A.B. Васильев. СПб: Медицинская пресса, 2005. - 224 с.

113. Покровский В.И. Эпидемический процесс: терминология, содержание иiопределение понятия / В.И. Покровский, Л.А.Ряпис // эпидемиология и инфекционные болезни. 2008. №1. С.4-7. |

114. Протодьякова Г.П. Комплексные медико-ветеринарные мероприятия в очаге туберкулезной инфекции животноводческих хозяйств / Г.П, Протодьякова, Н.Г. Протодьякова, Н.Г. Павлов // Ветеринарная патология. 2007. №2. С. 196-199.

115. Писарев А.И. К вопросу совершенствования специфической диагностики туберкулеза крупного рогатого скота // Аграрный вестник Причерноморья. Ветеринарная наука. 1999. №2 (7). С 79-80.

116. Писаренко E.H. Туберкулез животных, вызванный М; tuberculosis. / Автореф. дисс. Канд биол.наук. Новосибирск, 1992.19

117. Поддубский И.В. Методы борьбы с туберкулезом крупного рогатогоскота с GGGP//Вестник с.-х. наук. 12857. №5. С. 67-73.i

118. Приймак A.A. Концепция организации противотуберкулезной помощи населению, России / А.А.Приймак, A.JI. Кучеров // Проблемы туберкулеза. -1995ю №6. G. 2-4.

119. Приймак A.A., Кучеров A.J1. Современная концепция организации противотуберкулезной помощи населению России // Туберкулез и экология. 1995. №3. с.5-7.

120. Посохин Е.Г. Выживаемость туберкулезных бацилл птичьего типа в почве усадебных территорий // Сб. научн.-исслед. вет. инст. Новосибирск, 1952.-Вып. 4. с i

121. Рабухин A.E. Микобактериоз, вызванный M.fortuitum А А.Е.Рабухин, Н.М.Макаревич, Д.Я.Баканова \\Пробл. туб.- 1972.-№10.- С. 58-61

122. Ротов В.И. Туберкулез сельскохозяйственных животных \\ В.И.Ротов, П.И.Кокуричев, П.Е.Савченко, Ю.А.Трач .-Киев.: Урожай,1978.- С.237.

123. Ридала В .И. О туберкулезе свиней в Эстонской ССР// Труды 2-й Всесоюзной конференции по патанатомии животных. 1964. С. 338.

124. Роль типовой структуры микобактерий во взаимосвязи эпидемиологии и эпизоотии туберкулеза / Гусейнов ПК. и др. // Сб. науч. тр. Махачкала, ДГМА, 1996.-С. 48-50.

125. Рубцова И.Н. Измененные формы микобактерий в организме животных и их значение в бактериологической диагностике туберкулеза // Бюлл. ВИЭВ. 1983: - Вып. 51. - С. 32-36.

126. Ссльцовский П.П. Социальные аспекты эпидемиологической ситуации, по туберкулезу: / П.П. Сельцовский, В.И.Литвинов М.: МНПЦБП. - 2004. - 224 с.t ■

127. Синева СП. Туберкулез у животноводов в регионах с различным уровнем пораженности крупного рогатого скота// Тез. док. зон. сов: -Новосибирск 1987.-С. 26-21.

128. Соколова Г., Куничан А., Соловьева И., Корякин В. // Врач. 1997. -N7.-С.32-33

129. Сон И.М. // Новости науки и техники. Сер. Медицина. Вып. Туберкулез / О распространении туберкулеза в мире. 1997. - T.XTV - N6.

130. Сосновская A.B. Идентификация туберкулезных и нетуберкулезных микобактерий. // Проблемы туберкулеза. 1991. - N3. - С. 65-67.

131. Тимаков В.Д. Микробиология. —М.: Медицина- 1973. 430 с.

132. Урбан В.П., Широкобокова М.М., Данко Ю.Ю., Вяльт Т.В. Эпизоотическая вспышка туберкулеза овец // Сб. науч. тр. ЛВИ. Л., 1980. -Вып. 63 .-С. 104-109.

133. Урбан В.П. Современные проблемы борьбы с туберкулезом животных // Тез. научн. произв. конф. посвящается 100-летию Курской биофабрики. Курск, 1996.-328 с.

134. Федосеев B.C. Роль скота и птицы личных подсобных хозяйств в . эпизоотологии и эпидемиологии туберкулеза // Организация противотуберкулезных мероприятий на эпизоотически неблагопполучных территориях. / Тез. докл. зон. совещ. 1987. - С. 32-33.

135. Хоменко А.Г. Туберкулез на рубеже ХХ1века. / А.Г.Хоменко // медицинская газета. 1997 №13. С.2-8. '

136. Черкасский Б.Л. Руководство по общей эпидемиологии М. 2001.

137. Шаров В.А. Туберкулез // Болезни овец и коз.- М.: Колос, 1973. С. 166171.

138. Шишков В.П., Урбан В.П. Введение // В кн.: Туберкулез сельскохозяйственных животных. М, Агронромиздат, 1991. С.3-8.

139. Шмелев H.A., Макаревич Н.М., Дюканова М.А. Поражения легких и лимфатических узлов, вызванные M.avium // Проблемы туберкулеза. 1973. №3. С. 19-23.

140. Шилова М.В. Туберкулез в России в 2004 году / М.В. Шилова. М.: Фолиум, 2005.-108 с.

141. Шилова M.B. Особенности распространенности туберкулеза в разных Федеральных округах России.I

142. Шкиль H.A. Эпизоотический процесс туберкулеза крупного рогатого скота и оптимизация системы его контроля Диссертация д. в. н. Новосибирск, 1995.

143. Шуцкая E.H. О взаимосвязи туберкулеза сельскохозяйственных животных, птиц и человека // Тез. докл. зон. совещ. Новосибирск. 1987. - С. 7-8.I

144. Щуревский В.Е., Якушева О.В., Овдиенко Н.П., Шаров В.А. Патологоанатомическая диагностика туберкулеза// Ветеринария. 1980. № 10. С. 31-33.

145. Щуревскцй В.Е. Туберкулез крупного рогатого скота и его взаимосвязь с туберкулезом человека. В кн.: Вопросы взаимосвязи туберкулеза человека и животных. Алма-Ата, 1981. С. 8 13.I

146. Эпидемиология туберкулеза / И.М.Сон, В.И. Литвинов, В.И Стародубов, П.П. Сельцовский. -М.: МНПЦБТ. 2003.-286 с.

147. Юсковец М.К. Туберкулез домошних животных и методы борьбы с ним. -М.:Сельхозгиз, 1948. 240 с. !

148. Янович Т.Д. Эпидемиология туберкулеза на современном этапе 7 Т.Д. Янович, А.П. Рачковский // Вопросы эпидемиологии и дезинфекции при туберкулезе : Материалы II Всероссийской конференции фтизиатров. — М., 1968. С.14-20.

149. Ярных B.C. Санитарные мероприятия в системе противоэпизоотической защиты // Ветеринария. 1985. - № 11. - С. 26 - 30.

150. Anastasis D., Pillai G., Rambiritch V., Abdool S.S // Jnt. J. Tuberc. Lung Dis.-1997.-V.I.-P. 220-224.

151. Animal Health Vearbook. 1972-1987. -WHO- OIE.

152. Asselineau C, Asselineau I. Trehalose-containg glicolipids I I Prog. chem. Fats Lipids. -1978. N16. - P. 59-99.

153. Ausina V., Riutori N., Vinado et al. Prospective study of drug-resistant tuberculosis in a Spanish urban population including patients at risk for HJV infection // Europ. G. Clin, microbiol. infect. Dis. 1995. - V.14. - N2. -P.105-110.

154. Barksdale L., Kirn K-S. Mycobacterium // Bacteriol. Revs. -1977. V.41. -N2. -P. 217-372.I

155. Barrow P.A. Aspects of the epidemiology of bovine tuberculosisin badgers and cattle. II. The development use of a typing system for Mycobacterium bovis // J. Hyg. -1981. -V.86. -N3. -P. 247-257.

156. Beaman B.L. Possible machanisms of nocardial pathogenesis // In: The biology of nocardiae. London etc.: Acad, press. 1976. - P. 386-417.

157. Becol O. et al (1970) Цит.: Черкасский Б.П. Туберкулез зоонозный. -М: Медицина, 1983. С. 220-224.

158. Besta В. Atipical mycobacteria // Clinical and bacteriological studies. Bull. Union Int. contre Tubercl. -1959. V.29. -N4. - P. 308-322.

159. Bergey's manual of determicative bacteriology. 8 ed. - Baltimore: Williams and Wilkins Co, 1974. - 1268p.

160. Bergey's manual of sistematic Bacteriology. Vol. 2. 1985. - P. 1435-1507.

161. Bergman R., Moreno-Lopes J. Lymphocyte stimulation and leukocyte migration inhibition of diagnostic tools for the detection of M. avium infection in cattle //Acta Veter. scand. 1976. -17. - N2. - P. 258-260.

162. Berastand S // Scand J. Infect. Dis. 1974. - V.6. - 241 p. i

163. Braun Met al // J. A. M. A. 1987. - V. 257. - N1. - P. 1471-1472

164. Beerwerth W. Ziir Ökologie der Mykobacterien . Zbl. Bacterid. Parasitenkunde. Infektionskrankh. Hyg. -W. Beerwerth, J. Schurmann J. Abb. Orig.-21L- 1969.- 1.-58-69.

165. Beerwerth W. Zur epizootologischen Bedeutung der Sagemehleinstren fur das Auftreten der Schweinetuberkulose \ W.Beerwerth, K.PoppWZbl. Veter.-Med.-(West)- Berlin.- 1971.- 18.- 8.- 634-645.

166. Chapman J., Dallas M. The Ecology of the Atipical Mycobacteria // Arch. Environ Health. -1971. 22,1. - P. 41 - 46.

167. Chaulet P., Bonlahbal F., Crosset S // Int. J. Tuberc. Lung Dis. 1996 - V 78 - P. 487-492

168. Collins F.M. Tuberculosis: The return of an old enemy / F.M. Collins // Crit. Rev. Microbiol. 1993. - 19. - № 1. - P. 1-16.

169. Corper H.L., Cohn M.L // Am. Rev. Tbc. -1942. N45. - 200 p.

170. Cummins C.S., Harris H. Studies on the cell-wall composition and taxonomy of Actimomycetales and related groups // J. Gen. Microbiol. 1958. -V.18.-N1-P. 173189.

171. Dalovisio I.R., Rankey LA„ Wallace R.I., Jones D.H // Rev. Infect. Dis. -1981-N3.-P. 1068.

172. Devulder В. Микобактериозы человека. Клинические фромы и лечение В. Devulder, JDebrune, F. Tacquet, С. Gernez-Rieux. // Тр. XXI междунар. конф. по туберкулезу. -М., 1972. С. 135-143.

173. Feinberg К.А., Schneierson S.S // J. Mount. Sindi Hospital. 1969. - V. 38.-N5.-375p.

174. Godlee F //Brit. Med. J. 1993. - V.306 - 1147 p.

175. Goren M.B., Cernich M, Brokl О. Some observations on mycobacteriol acid-fasthness // Amer. Rev. Respirat. Disease. 1978. -118. -Nl. - P. 151-154.

176. Goodfellow M, Minnikin D.E. Nocardioform bacteria //Ann. Rev. Microbiol. -1977.-V.31 .-P .159-180.

177. Harbol M., Nagai S // Amer. Rev. Dis. 1984. - V. 129. - P. 444-452.

178. Hattikudur S., Kamat R// J. med. Microbiol. 1984. - V. 18. - P. 17-25.

179. Hosty T.S., MsDurmont C.I // Health. Lab. Sei. -1975. V.12. -P. 161.

180. Hulbner R.E., Castro K.G. The changing face of tuberculosis // Ann. Rev. Med. -1995.-V.46.-P. 47-55.

181. Imadea Т., Kanetsuna F., Galinolo D. Ultrastructure of cell walls of genus Mycobacterium // J. Ultras. Res.- 1968. V.25. - N1. - P. 46-63.

182. Kaiser R. Chemische und immunologische differenzierug des Kulturfiltrates humanes mycobakterien // J. Immun. Forsch. - 1969. - V.137. - P. 144-150.

183. Keololie R.M., Cure G.L. The cell wall composition and distribution of free mycolic acid in named strains of corineform bacteria and in isolates from various natural sources // J. Appl. Bacteriol. 1977. - V.42. - N2. - P. 229-252.

184. Khuller G.K., Subrahmanyam D. Antibodies to phospholipids in human tubaerculosis sera // Indian. J. Med. Res. -1972. V.60. - P. 1794-1799.

185. Klebberg H.H. Human tuberculosis of bovine origin in relation to puble health // Rev. Sei. et techn. offmt epizoot. 1984. - 3. - NL - P. 11-32.

186. Kubica Q.P., Baess J., Gordon R.E. et al. A co-operative numerical analysis of rapidly growing mycobacteria // J. Gen. Microbiol. 1972. - V.73. - N1. - P. 5*5-70.

187. Kuwabara S // J. Biol. Chem. 1975. - V. 250. - P. 2563-25,68.

188. Lechevalier M.P., Lechevalier H.A. Chemical compositional as a criterios in the classification of aerobic actinomycetes '// Int. J. Sist. Bacteriol. -1970. V.20. -N44 .-P.435-443.

189. Misaki A., Seto N., Azuma I. Structure and immunological propertiaes of D-arabino-D-galactans isolated from cell walls of Mycobacterium species // J. Biochem. 1974. - V.76. -Nl. - P. 15-27.

190. Minden P., Kelleher P., Freed I. et al // Infect, and Immun. 1984. - V.46. -P. 519-525. '

191. Miura K., Nagai S., Kimamoto M. et al // Infect, and Immun. 1983. -V.39. - P. 540-545.

192. Mordarska H., Mordarski M., Goodfellow M. Chemotaxonomic characters and classification of some nocardioform bacteria // Gen. Microbiol. -1972.-V.71.-NI.-P. 77-86.

193. Nogai S., Matsumoto I., Nagasuga T // Infect, and Immun. 1981. - V.31. -P. 1152-1160.

194. Niculescu D., Starvi H. et al // Arch, roihn. Path. exp. 1983.-V.42. -P.213-219.

195. Peterson K.I//J. Amer. Veterin. Med. Assoc. -1965. -V.15.- P.1600.

196. Ratledge L. The Mycobacteria // Meadowfield press. -1977. -130 p.

197. Ratledge L. Nutrition growth and metabolism // London etc.: Acad press.-1982.-V.I.-P. 185-271.

198. Reichenback-Klinke H., Elkan E // Symposia of the zoological Society of London. N.Y.L, Acad, press. -1965. 220 p.

199. Rogers H.L., Perkins H.R., Ward L.B. Micobacterial cell walls and membranes // London, New York: Chapman and hall. -1980. 564 p.

200. Romein F., Versmisse E., Peseher P. et al // Ann Inst. Pasteur Microbiol.-1985. V. 136-P. 235-248.

201. Sarkany I. Lymphocyte transformation in drag hypersensitivity // "Lancet. 1967.-P. 743-745.

202. Savroda I // Infect, and Immun. -1983. V.40. - P. 1163-1169.

203. ScMlifer K. H., Kandier O. Peptidoglycan types of bacterial cell walls and taxonomic implication // Bactenol Revs. -1972. V.36. - N4. - P. 407-477.

204. Schneider E. et al // Schweiz. Arch. Tierheil-Kundl. 1978. - Bdv.120. -171 p.

205. Selwyn P.A. et al // New Engl. J. Med. 1989. - V.320. - N9. - P. 545-550.

206. Stavri D., Stavri H., Claiciu I. et al // Zbl. Bact. J. Abt. Orig. 1982. -Bdv.251.-P. 399-401.

207. Sunderman G. et al // J.A.M.A. 1986. - V. 245.-N3.-P. 362-366.

208. Tadao S // TB. and HJV. 1995-N9. -P. 2.

209. Takachashi V. Immunological aspects of the different antigenic substances of the tubercle bacillus with special reference to their roles in the development of allergy and immunity in tuberculosis // J. Immun. - Forsch. - 1969. -V.137.-P. 10-36.

210. Thoen CO. et al // Amer. J. Veterin. Res. -1977. V.38. - N7. - 577 p.

211. Thorel M.F. Tuberculose delà chevre: diagnostics biologique // Ann. Rech'. Vet. -19S0-V.U. -3.-P. 251-257.

212. Thole I., Dawwerse H., Das P // Infect, and Immun. 1985.- V.50. - P. 800-806.

213. Toida I., Yamamoto S., Tockuma S. et al // Infect, and Immun. 1985. -V.50.-P. 614-619.

214. Tsukamura M. Proposal of a new genus, Gorolona, for slightly acid-fast organisms occuring in sputa of patients with pulmonary disease and soil // J. Gen.

215. Microbiol. 1971. - V.68. -Nl. -P. 15-26.

216. Tsukamura M. Numerical classification of slowly growing mycobacteria // J. Syst. Bacteriol. 1975. - V.25. - N4. - P. 329-335.

217. Wallace K.I // J. Clin. Microbiol. -1983. V.71- N16-P. 1003.

218. Wayne L.G. Таксономические и генетические аспекты мирового распространения атипичных микобактерий: Тр. 21-й Междунар. конф. по туберкулезу.-М., 1971.-С. 145-147.

219. Wayne L.G. Agents of newly recognized or infreguently encountered mycobacterial diseases / L.G.Wayne, H.A. Sramek// Clin. Microbiol. Rev.- 1992.-Vol.5,№l.-P. 1-25.

220. Wolinsky E. Mycobacteria in soil and their relation to disease associated atrains,- Amer. Rev. Resp. Dis.- 1968.- 97.- 1032.

221. Wallace R.J. Human disease due to mycobacterium smegmatis / R/J/ Wallace // J/ infect. Dis/ 1987. - Vol. 158, №1. - p. 52 - 60

222. Wallace R.J., O'Brein R.,Glassroth J. et al. Diagnosis and treatment of disease by nontuberculous mycobacteria (ATS Statement) / R/J/ Wallace, R.O'Brein, J. Glassrjth et al. // Amer.Rev. resp.Dis.-1990.-Vol.l42.-P.940-953.

Информация о работе

Хруленко, Владимир Николаевич
кандидата биологических наук
Щелково, 2010
ВАК 03.01.06

Диссертация

Анализ эпизоотических и эпидемиологичских процессов при туберкулезе и совершенствование методов диагностики - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы