Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Эпизоотологические и эпидемиологические особенности туберкулеза в Якутии, усовершенствование методов диагностики и специфической профилактики
ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов
Автореферат диссертации по теме "Эпизоотологические и эпидемиологические особенности туберкулеза в Якутии, усовершенствование методов диагностики и специфической профилактики"
На правах рукописи
ПРОТОДЬЯКОНОВА ГАЛИНА ПЕТРОВНА
ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ И ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКИЕ
ОСОБЕННОСТИ ТУБЕРКУЛЕЗА В ЯКУТИИ, УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕТОДОВ ДИАГНОСТИКИ И СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ
06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени - доктора ветеринарных наук
3 и СЕН 2015
Новосибирск 2015
005562709
Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего образования «Якутская государственная сельскохозяйственная академия»
Научный консультант:
Неустроен Михаил Петрович,
доктор ветеринарных наук, профессор
Официальные оппоненты:
Давко Юрий Юрьевич,
доктор ветеринарных наук, доцент, ФГБОУ ВПО «Санкт- Петербургская государственная академия ветеринарной медицины», профессор кафедры;
Власенко Василий Сергеевич,
доктор биологических наук, доцент, ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулеза животных», заведующий лабораторией;
Линева Зинаида Ефремовна,
доктор медицинских наук, профессор ФГАОУ ВПО «Северо-Восточный федеральный университет им. М.К. Аммосова», заведующая кафедрой
Ведущая организация:
ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко»
Защита состоится
«У
» декабря 2015 г. в
НО
часов на заседании
диссертационного совета Д.006.045.01, созданного на базе ФГБНУ «Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока» по адресу: 630501, Новосибирская область, Новосибирский район, п. Краснообск, ФГБНУ ИЭВСиДВ, а/я 8, тел./факс (383) 348-44-62, E-mail: dis.ievsidv@list.m
С диссертацией можно ознакомиться в Сибирской научной сельскохозяйственной библиотеке и на сайте ИЭВСиДВ: www.ievsidv.ru: автореферат размещен на сайте ВАК РФ: www.vak2.ed.gov.ru
/О
Автореферат разослан « »
ша?ь 2015 г.
Ученый секретарь диссертационного совета, канд. ветеринар, наук, доц.
Стеблева Галина Михайловна
1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. Несмотря на достигнутые успехи, туберкулез, как животных, так и человека, остается одним из наиболее сложных, социально опасных и экономических значимых инфекций в мире, в том числе в России, и включен в перечень карантинных и особо опасных болезней животных (Приказ МСХ РФ № 81 от 17.05.2005).
Экстремальные природно-климатические условия Республики Саха (Якутия) в значительной мере влияют на гомеостаз сельскохозяйственных животных и обуславливают особенности проявления эпизоотического процесса инфекционных болезней, в том числе туберкулеза крупного рогатого скота.
В настоящий период в Якутии при содержании крупного рогатого скота в крестьянских, фермерских хозяйствах и подворьях граждан многократно возрос контакт населения с животными, что повысило риск взаимного заражения возбудителями болезней, свойственных животным и человеку, в том числе туберкулеза. При этом продукты питания не подвергаются ветеринарно-санитарному контролю и обработке, что приводит к заражению населения, особенно детей. И, наоборот, животным постоянно скармливаются остатки пищи, контаминиро-ванные возбудителем туберкулеза, если семья представляет собой эпидемический очаг, в котором проживают больные люди. Взаимное заражение туберкулезом крупного рогатого скота и их владельцев в период относительного эпизоотического благополучия вызывает необходимость постоянного мониторинга за эпизоотическим и эпидемическим состоянием в тесном взаимодействии медицинской и ветеринарной служб.
В настоящее время в эпизоотологии туберкулеза на территории региона актуальной остается проблема неспецифической реактивности крупного рогатого скота к туберкулину, обуславливающей необоснованный убой продуктивных животных и большие экономические потери, что требует разработки методов дифференциальной диагностики.
В проблеме туберкулеза не до конца решены вопросы прижизненной диагностики для некоторых видов животных (северные олени, лесные бизоны), бактериологической, молекулярно-генетической на фоне неспецифической реактивности животных к туберкулину, а также специфической профилактики с использованием вакцины БЦЖ, решение которых актуально для науки и практики. В последние годы сформировалось новое направление профилактики инфекционных болезней с помощью пробиотиков, являющихся антагонистами ряда возбудителей, в том числе микобактерий, в связи с чем актуально развитие этого направления
Степень разработанности проблемы. Неоспоримо доказана тесная взаимосвязь заболеваемости туберкулезом животных, в том числе крупного рогатого скота, и человека (Р.В. Тузова, 1975; Я.А. Благодарный, 1984; A.C. Донченко, 1992; E.H. Писаренко, 1992; D. Cousins, D. Dawson, 1999; A. Sanami, 1999; L. Legout., 2001; I. Pavlic, 2004; I. Kanter, 2004). С учетом новых условий хозяйствования требуется разработка комплексных региональных программ профилактики взаимного заражения патогенными возбудителями туберкулеза.
Одним из основных звеньев эпизоотической цепи при инфекционных болезнях является восприимчивое животное, в связи с чем ведущую роль играет специфическая профилактика (А.И. Бакулов, 1979), основы которой при туберкулезе животных с применением вакцины БЦЖ заложены М.М. Авербахом (1970), Б.Я. Хайкиным (1972), М.А. Сафиным (1981), В.И. Пионтковским (1982). Однако, как показала практика, ее эффективность не превышает 70%.
Предприняты попытки повышения иммуногенности вакцины БЦЖ с помощью иммуностимулирующих и иммунокоррегирующих препаратов (В.И. Литвинов и др., 1982; Б.М. Туякбаева и др., 1986; Л.А. Шарашенидзе, 1988; Г.Н. Спиридонов, 1988; С.Д. Басыбекова, 1995; A.C. Жумаш и др., 1995; 1995-2000; 2001; P.A. Хамзин, 2006), но они не нашли практического применения. Перспективным является повышение протективных свойств вакцины БЦЖ с сочетанным применением иммуномодуляторов (Ю.С. Аликин, 1988; H.A. Александров и др., 1995-2000; A.C. Донченко, H.A. Донченко, 2000; И.П. Хабузов, 2001), в том числе препаратов РНК, способных усиливать специфический иммунитет (Э.Н. Шляхов, 1984; М.Н. Блинов, 1987; В.А. Фадина и др., 1988; А.М. Земсков и др., 1989; Ю.С. Аликин, 1998; A.C. Донченко, 2004).
Установлено антагонистическое действие пробиотиков на возбудителей ряда инфекционных болезней (И.Б. Павлова, 2005; А.Л. Лазовская и др., 2009; Н.Д. Архипова, 2009; М.П. Неустроев и др., 2010; А.Н. Панин, 2012), а также предложен способ повышения антагонистической активности пробиотика из штамма бактерий Bacillus subtilis к патогенным микобактериям туберкулеза (М.А. Кульчицкая и др., 2008), однако способ предусматривает определение активности путем установления индекса блокирования роста микобактерий в течение длительного времени и отличается трудоемкостью.
Цель и задачи исследований. Целью исследований явилось эпизоотоло-гическое и эпидемиологическое обоснование и разработка комплекса мероприятий по профилактике взаимного заражения туберкулезом животных и человека в Якутии, усовершенствование методов диагностики и специфической профилактики туберкулеза.
В задачи исследований входило:
— изучить особенности эпизоотического процесса туберкулеза крупного рогатого скота в природно-климатических условиях Якутии;
— усовершенствовать комплекс диагностических мероприятий при туберкулезе животных;
— определить взаимосвязь заражения крупного рогатого скота и населения возбудителями туберкулеза М. bovis и М. tuberculosis, разработать медико-ветеринарные мероприятия в эпидемических очагах риска туберкулеза;
— разработать способ профилактики туберкулеза животных с использованием вакцины БЦЖ и иммуномодулятора полирибоната;
— изучить антагонистическое действие бактерий Bacillus subtilis к патогенным микобактериям.
Научная новизна. Дан ретроспективный анализ эпизоотической и эпидемической ситуации по туберкулезу Республики Саха (Якутия). Установлена взаимосвязь заболеваемости крупного рогатого скота и населения туберкулезом
в PC (Я). Определены и взяты на учет эпидемические очаги туберкулеза, как потенциальные источники заражения крупного рогатого скота М. tuberculosis.
Предложены оптимальные технологические методы прижизненной диагностики туберкулеза северных оленей и лесных бизонов при содержании в природных парках.
Изучено влияние аэрации питательных сред на скорость роста разных видов патогенных и атипичных микобактерий, дана оценка информативности плотных и жидких питательных сред при культивировании микобактерий.
Определена диагностическая ценность детекции ДНК микобактерий туберкулеза методом ПЦР в биоматериале от крупного рогатого скота благополучных по туберкулезу хозяйств, ранее являвшихся неблагополучными, а также информативность теста при исследовании разного вида биоматериала.
Впервые установлена активизация эпизоотического процесса туберкулеза и неспецифической реактивности животных к туберкулину через 6-8 лет после всплеска солнечной активности, выраженной в числах Вольфа.
Установлена взаимосвязь неспецифических реакций на туберкулин с рядом болезней и патологическими процессами во внутренних органах.
Дано теоретическое обоснование и экспериментально установлена возможность повышения иммуногенных свойств вакцины БЦЖ при сочетанном применении с иммуномодулятором полирибонатом.
Экспериментально испытаны штаммы бактерий Bacillus subtilis, выделенных из мерзлотных почв Якутии. Установлены их антагонистические свойства к микобакгериям туберкулеза обуславливающие снижение вирулентности за счет задержки образования корд-фактора.
Научная новизна исследований подтверждена патентами РФ на изобретения: «Способ профилактики туберкулеза животных» № 1790414 от 23.01.1993 г. и «Способ подавления корд-фактора микобактерий туберкулеза», № 2422150 от 27.06.2011 г.
Теоретическая и практическая значимость. Установленные региональные особенности эпизоотического процесса туберкулеза крупного рогатого скота во взаимосвязи с эпидемической ситуацией в PC (Я) дополняют и расширяют имеющиеся данные и вносят определенный вклад в теорию и практику проблемы профилактики и ликвидации туберкулеза. Результаты исследований могут быть реализованы в системе противоэпизоотических и противоэпидемических мероприятий, а также в учебном процессе ВУЗов и нашли отражение в нормативно-технических и научно-методических документах, регламентирующих мероприятия при туберкулезе.
Комплексные медико-ветеринарные мероприятия в очагах туберкулезной инфекции реализуются во всех подсобных и крестьянских хозяйствах (подворьях) Якутии, в которых при профилактических аллергических исследованиях на туберкулез выявляются реагирующие на туберкулин животные или, по данным Роспотребнадзора - больные туберкулезом люди.
Мероприятия по дифференциальной диагностике туберкулеза крупного рогатого скота с применением уменьшенной дозы ППД туберкулина для млекопитающих и ПЦР-диагностики внедрены в хозяйствах улусов Якутии.
Схема специфической профилактики туберкулеза с использованием вакцины БЦЖ и иммуномодулятора полирибоната (использована при разработке «Наставления по применению полирибоната в ветеринарии в качестве иммуномодулятора») позволяет эффективно защитить молодняк крупного рогатого скота от заражения. Схема внедрена на 37 фермах (21,1 тыс. телят) модельного района Новосибирской области.
Результаты исследований явились основой учебно-методических пособий «Краевая эпизоотология Республики Саха (Якутия)» и «Лабораторная диагностика туберкулеза крупного рогатого скота», рекомендованных УМО высших учебных заведений РФ по образованию в области зоотехнии и ветеринарии, а также учебного пособия «Диагностика туберкулеза крупного рогатого скота», зарегистрированного в качестве электронного ресурса Российской Академией образования, как отвечающее требованиям новизны и приоритетности.
Методология и методы исследований. Объектом исследований явились статистические данные, экспериментальные препараты, лабораторные и сельскохозяйственные животные, биологический материал, культуры патогенных и атипичных микобактерии, питательные среды для культивирования микобакте-рий, методы диагностики туберкулеза. Предмет исследований — научное обоснование, разработка и усовершенствование методов диагностики, специфической профилактики и взаимодействия ветеринарной и медицинской служб в системе противоэпизоотических мероприятий при туберкулезе.
В работе использовали аналитический, эпизоотологический. эпидемиологический, аллергический, патологоанатомический. бактериологический, серологический, иммунологический, гематологический, молекулярно-генетический, статистический и экономический методы исследований.
Основные положения, выносимые на зашиту:
- особенности эпизоотического и эпидемического процесса туберкулеза на территории Республики Саха (Якутия), их взаимосвязь и мероприятия по профилактике;
— усовершенствованный комплекс диагностических исследований при туберкулезе животных;
- способ профилактики туберкулеза крупного рогатого скота с сочетанным применением вакцины БЦЖ и иммуномодулятора полирибоната;
— антагонистическое действие пробиотика «Сахабактисубтил» на биологические свойства микобактерий туберкулеза.
Степень достоверности и апробация результатов. Достоверность результатов обусловлена большим объемом статистического и экспериментального материала, использованием современных методов и методик исследований, производственным испытанием и статистической обработкой данных.
Результаты исследований доложены на международных, всероссийских и региональных научно-практических конференциях и симпозиумах: «Новые фармакологические средства в ветеринарии» (Л., 1989), III Всесоюзной конференции по эпизоотологии (Новосибирск, 1991), «Основные научные исследования по туберкулезу с.-х. животных в Сибири» (Новосибирск, 1995), «Актуальные проблемы ветеринарно-санитарного контроля сельскохозяйственной про-
дукции» (М., 1997). «Региональные проблемы сельскохозяйственного производства в РС (Я)» (Якутск, 1999), «Современные проблемы туберкулеза XXI века» (Томск, 1999), «Проблемы стандартизации и развития сельского хозяйства Казахстана, Сибири и Монголии» (Алма-Ата, 2000), молодых ученых аграрных ВУЗов России (Якутск, 2003), симпозиуме Японо-Российского медицинского обмена (Ниигата, 2004), «Актуальные вопросы ветеринарной медицины» (Новосибирск, 2004), «Современные проблемы эпизоотологии» (Новосибирск, 2004), «Проблемы и перспективы ветеринарии в XXI веке» (Улан-Удэ, 2005), «Наука в аграрном вузе: инновации, проблемы и перспективы» (Якутск, 2006), «Энтузиазм и творчество молодых ученых в развитии фундаментальной и прикладной науки» (Троицк, 2006), XII Международной конференции по арктическим животным (Якутск, 2007), «Актуальные проблемы инфекционных болезней животных, рыб и пчел» (М., 2011), «Высокие технологии, фундаментальные и прикладные исследования в физиологии и медицине» (С.-Пб., 2011), Польша (Пшемысль, 2012), «Здоровьесбережение народа: интеграция Восток-Запад» (Якутск, 2014), «Найновите научни постижения» (София, 2014).
Публикация материалов исследований. По теме диссертации опубликованы 63 научные работы, в том числе 14 статей, в журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ («Аграрная наук», «Ветеринарная патология», «Сибирский вестник сельскохозяйственной науки», «Зоотехния», «Аграрный вестник Урала». «Вестник ветеринарии». «Вестник РАСХН», «Ветеринарная медицина», «Якутский медицинский журнал»). Получено 2 патента на изобретения РФ.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 305 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 49 таблицами, 21 рисунком и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, заключения, списка использованной литературы (664 источника, из них 104 зарубежных авторов) и 15 приложений.
2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1 Материал и методы исследований
Работа выполнена в 1985-2014 гг. на кафедре «Паразитология и эпизоотология животных» ФГБОУ ВПО «Якутская государственная сельскохозяйственная академия» Министерства сельского хозяйства Российской Федерации в соответствии с тематическими планами НИР 02.02.03. «Усовершенствовать бактериологический метод диагностики туберкулеза животных»; 08.02.02. «Разработать систему контроля за проявлением микобактериозов крупного рогатого скота в Якутии». Отдельные исследования проведены в ГНУ Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока и ГНУ Якутский научно-исследовательский институт сельского хозяйства Россельхозакадемии, а также совместно с НПО «Фтизиатрия» МЗ РС (Я), территориальными управлениями «Роспотребнадзора» в рамках целевых республиканских программ «Комплексный план мероприятий по обеспечению ветеринарного благополучия животноводства Республики Саха (Якутия) на 1997-2000 годы», «Неотложные меры борьбы с туберкулёзом в Якутии на 1998-2004 годы» и «Неотложные ме-
ры борьбы с туберкулёзом в Якутии на 2005-2011 годы», в разработке которых мы приняли непосредственное участие.
В процессе работы использовали следующие экспериментальные препараты: вакцина БЦЖ производства Ставропольского НИИ вакцин и сывороток; иммуномодулятор полирибонат — односпиральная РНК (получен в НИКТИ БАВ ГНЦ БВ «Вектор», г. Бердск); пробиотики из штаммов бактерий Bacillus subtilis, выделенных из мерзлотных почв Якутии. В опытах использовали музейные штаммы патогенных М. bovis (шт. 14, ВНИИБТЖ: шт. 8), М. tuberculosis (шт. H37R.V и шт. 492, изолированный от больного туберкулезом человека), М. avium (шт. 19) и атипичных M. smegmatis, M. fortuitum, M. intracellular, белый стафилококк (шт. 209 Р) культур микобактерий.
В общей сложности в экспериментах использовали 1130 голов крупного рогатого скота разного возраста, 150 северных оленей, 25 лесных бизонов. 490 морских свинок, 54 кролика, 60 белых мышей, 28 кур.
В исследованиях использовали следующие методы:
Аналитический и монографический — при анализе научной литературы по проблеме туберкулеза животных и человека, написании учебно-методических пособий и рекомендаций, включающих материалы диссертации.
Эпизоотологический и эпидемиологический - при анализе эпизоотической и эпидемической ситуации по туберкулезу по интенсивным и экстенсивным показателям в пространственно-временном диапазоне (В.Д. Беляков, 1979; С.И. Джупина, 1991; Л.Б. Черкасский, 1994; И.А. Бакулов и др., 2001).
Сведения по эпизоотологии и эпидемиологии туберкулеза получены в Департаменте ветеринарии МСХ PC (Я), МЗ PC (Я), Якутском НИИ туберкулеза МЗ РФ. Использованы также результаты собственных аллергических, патоло-гоанатомических, иммунологических и бактериологических исследований.
Аллергический - на лабораторных животных, крупном рогатом скоте и северных оленях в соответствии с «Наставлением по применению (ППД) тубер-кулинов для млекопитающих и для птиц» (1999) с туберкулинами различных серий ФГУП «Курская биофабрика».
Патологоанатомический. На крупном рогатом скоте - для послеубойной экспертизы реагирующих на туберкулин, на лабораторных животных - в опытах с заражением культурами микобактерий и суспензией биоматериала согласно «Наставлению по диагностике туберкулеза животных» (1986, 2002). Экспертизе подвергали внутренние паренхиматозные органы, кишечник и лимфатические узлы. Индекс пораженности туберкулезом органов определяли по методикам В. Войтека (1963), А.И. Тогуновой (1965), A.A. Триус (1976).
Бактериологический (микроскопический, культуральный, биологический) - согласно «Наставлению по диагностике туберкулеза животных» (2002) и «Методам лабораторной диагностики туберкулеза», ГОСТ 26072—89. CT СЭВ 3457-81). Биологическую пробу ставили на морских свинках, кроликах и курах.
Мазки для прямой микроскопии окрашивали по Цилю-Нильсену и просматривали под микроскопом «Микмед 6» (увеличение х 1000). Препараты фотографировали с помощью цифровой камеры микроскопа (модель DCM 500,
5 МПикс., USB 2.0) в программе MiniSee. В люминесцентной микроскопии препараты окрашивали аурамином.
Для культивирования микобактерий использовали плотные (Левенштейна-Иенсена, Финн-2, Гельберга, Павловского) и жидкие (ВКЛ, Сотона, Моделя, ГДР, Школьниковой) питательные среды. Суспензии различных концентраций микобактерий готовили методом последовательных разведений биомассы в физиологическом растворе (Методические рекомендации «Современные методы микробиологической диагностики туберкулеза». М., 1975). Учет и оценку колоний культур микобактерий проводили по схеме Г.Н. Першина (1971).
Серологический, Использован для определения содержания в сыворотке крови экспериментальных животных комплементсвязывающих антител в РСК с комплексным туберкулезным антигеном Украинского НИИЭВ. Титры антител учитывали в крестах и натуральных логарифмах (В.И. Левенсон, 1969).
Иммунологический — при изучении клеточного иммунитета в реакции бластгрансформации лимфоцитов (М.М. Авербах, 1974; М.А. Сафин, 1980); реакции специфического лизиса лейкоцитов (А.Д. Адо, 1963); опсоно-фаго-цитарной реакции (С.И. Плященко, В.Т. Сидоров, 1980; П.Н. Смирнов и др., 1989); уровня общего белка (рефрактометрически) и его фракций (электрофорез в геле агарозы по В.М. Чекишеву, 1977).
Гематологический. Морфологический состав крови изучали на гематологическом анализаторе «Coeas Minos Stex» (Австрия). Лейкограмму выводили путем подсчета относительного содержания клеток в мазках крови, окрашенных по Романовскому-Гимза. Содержание Т- и B-лимфоцитов определяли методом Е-ЕАС-розеткообразования (П.Н. Смирнов и др., 2003).
Молекулярно-генетический. Использовали метод ПЦР при исследовании цельной крови, сыворотки крови, носовой слизи, молока, паренхиматозных органов и лимфатических узлов согласно «Наставлению по применению тест-системы для выявления и дифференциации М. bovis и М. tuberculosis методом полимеразной цепной реакции (ПЦР)» (2002) с тест-системами производства НПО «Нарвак» (2004, 2005) и ООО «Ветбиохим» (2010).
Экономический — при разработке методики и расчете экономического ущерба, причиняемого туберкулезом крупного рогатого скота, неспецифическими реакциями на туберкулин и экономической эффективности схемы дифференциальной диагностики туберкулеза в благополучных по туберкулезу хозяйствах.
Производственное испытание и внедрение. Противоэпизоотические и противоэпидемические мероприятия, разработанные на основе экспериментальных данных, испытаны и внедрены в хозяйствах различных форм собственности Новосибирской области и Республики Саха (Якутия), резервате северных оленей «Табсылын» Якутской государственной сельскохозяйственной академии, питомнике-бизонарии «Усть-Буотама» природного парка «Ленские столбы);.
Математическая обработка. Цифровой материал обрабатывали в среде программных приложений «Microsoft Excel» и «StatSoft Statistica 6» по показа-
телям средних значений (М±т), достоверности статистической разницы опытных и контрольных показателей (Р) и коэффициента корреляции (г).
2.2 Результаты исследований 2.2.1 Особенности эпизоотического процесса туберкулеза крупного рогатого скота в природно-климатических условиях Якутии
Краткая характеристика территории. Территория Якутии составляет 3083,5 тыс. кв. км и занимает 18,1% территории России. Расположена в зонах многолетней мерзлоты в экстремальных природно-климатических условиях горной, тундровой и таёжной местности. Свыше 40% территории находится за полярным кругом в тундровой зоне. Климат - резко континентальный. Зима продолжительная, суровая. Средняя температура января составляет -40 - -50°С. Лето короткое, но теплое. Средняя температура июля в Центральной Якутии составляет от + 18 до +35° С.
Сельское хозяйство Якутии имеет животноводческое направление. Наиболее развиты мясное и мясомолочное скотоводство, табунное коневодство и оленеводство. Используется пушной, рыбный промысел и клеточное звероводство. В республики разводят две основные породы крупного рогатого скота: симментальская и холмогорская, а также местный якутский скот. Сельское хозяйство региона - уникальная, особо сложная производственная, социально-экономическая и экологическая система, в которой животноводство развивается в чрезвычайно суровых природно-климатических условиях.
Естественная резистентность крупного рогатого скота в Якутии. Показатели естественной резистентности определяли в крови и сыворотке крови коров и телят симментальской и холмогорской пород ОГТХ «Красная Звезда». По показателю фагоцитарной активности макрофагов крови у коров и телят проявилась определенная сезонная динамика. Низкий уровень фагоцитоза животных обеих пород выявлен в апреле, высокий - в октябре (табл.1). Уровень фагоцитоза и лизоцимной активности сыворотки крови был выше у симментальского скота во все сезоны года. Комплементарная и бактерицидная активность сыворотки крови животных обеих пород находились на одном уровне.
Полученные данные свидетельствуют, что организм крупного рогатого скота, районированного в Якутии, характеризуется относительно высокой фагоцитарной активностью крови. Так, если в Западной Сибири этот показатель составляет 28,6-39,5% (Н.В. Попова, 1998), то у животных Якутии он оказался выше в 2-2,5 раза, что, по всей вероятности, связано с активацией макрофагаль-ного звена иммунной защиты в экстремальных природно-климатических условиях. Показатели естественной резистентности у телят были достоверно выше, чем у взрослых животных. По уровню комплементарной активности сыворотки крови возрастной разницы не выявлено, но установлено достоверное преимущество у потомства симментальской породы в летний период. Лизоцимная и бактерицидная активность сыворотки крови в осенний период была достоверно выше у животных симментальской породы.
Таблица! — Естественная резистентность крупного рогатого скота в Якутии
1 Месяц 1 1 Симментальская порода Холмогорская порода
1 коровы 1 телята коровы телята
| Фагоцитарная активность, %
| Февраль | 55,3 ±0,08 | 80,8 ±0,17 49,6+0,09 72,5 ±0,08
| Апрель | 49,2 ±0,09 | 72,9 ±0,08 48,3 ±0,12 63,6 ±0,05
1 Июль | 56,7± 0,12 | 75,8 ±0,04 55,8±0,16 68,8 ±0,03
I Октябрь | 60,0±0,14 | 76,6 + 0,13 57,9 ±0,23 72,4 + 0,08
1 Комплементарная активность, %
| Февраль | 7,5 ± 1,02 | 5,3 ± 1,09 7,3 ±1,51 6,9 ± 1,03
| Апрель | 7,8± 1,55 1 6,6 ± 1,08 7,6± 1,01 6,4 ± 1,02
1 Июль I 7,3 ±1,53 1 6.8 ±1,77 7,9 ±1,22 6,0±0,34
I Октябрь | 8,4+1,02 | 7.0 ± 1,05 8,2+0,67 6,9 ±0,55
! Лизоиимная активность, мкг/мл
| Февраль | 2,5 ±0,03 1 5,8 ±0,03 1,5±0,12 5,5 ±0,03
|Апрель | 3,6 ±0,02 | 5,6 ±0,04 3,0 ±0,23 5,3 ±0,02
1 Июль | 4,5 ± 0,06 | 5,5 + 0,13 3,2±0,05 5,2±0,11
1 Октябрь | 4,0 ±0,07 | 5,3 ±0,06 3,8+0,05 5,0+0,04
■ Бактерицидная активность, %
| Февраль | 2,5 ±0,03 | 5,8 ±0,03 1,5 ± 0,12 5,5 ±0,03
|Апрель | 3,6 ±0,02 | 5,6 ±0,04 3,0 ±0,23 5,3 ±0,02
1 Июль | 4,5 ±0,06 | 5,5 ±0,13 3,2+0,05 5,2 + 0,11
| Октябрь | 4,0 ±0,07 | 5.3 ±0,06 3,8 ±0,05 5,0± 0,04
Таким образом, в экстремальных климатических условиях Якутии крупный рогатый скот симментальской породы обладает более высокой резистентностью, чем холмогорской, что свидетельствует о высокой адаптации первых и предрасположенности холмогорского скота к инфекционным болезням, в том числе туберкулезу.
Ретроспективный анализ эпизоотической ситуации. На территории Якутии туберкулез крупного рогатого скота впервые установлен в 1922 г., однако патологоанатомические признаки его отмечали еще до революции (A.B. Лысков и др., 1980). В 1893-1903 гг. на Якутской городской скотобойне ежегодно уничтожались с характерными для туберкулеза поражениями до 21,4% легких (арх. «Якутский Ветеринар»).
Динамика неблагополучия. В динамике неблагополучия с 1961 г. прослеживается относительная стабильность числа неблагополучных пунктов. В среднем ежегодно в эпизоотический процесс было вовлечено 13 неблагополучных ферм, а обшее их количество, с учетом повторяемости, составило 365.
Заболеваемость. Суммарно за анализируемый период выявлено 21,8 тыс. больного туберкулезом крупного рогатого скота, в основном коров. По относительному показателю заболеваемость составила 0,33% от числа исследованных животных. В отдельные годы этот показатель был в 2-3 раза выше (1964 г. -0,86%. 1979 г. - 0,67%, 1978 г. - 0,64%, 1973 и 1977 г. - 0,56%).
Очаговость. Интенсивный показатель проявления эпизоотического процесса (среднее количество заболевших животных в одном неблагополучном пункте) составил 90,1 гол. Пик показателя приходился на 1974-1979 гг.. а также на период, предшествующий официальному благополучию региона.
Пораженность туш. Установлена высокая пораженность туберкулезом туш больных животных, составившая за период анализа - 6379 гол. или 29.3% от числа убитых. В отдельные периоды показатель превышал 40 (1966, 1980, 1982, 1984 гг.) и даже 50% (1962, 1963 гг.). У 22,3% животных поражения носили генерализованный характер и были подвергнуты технической утилизации.
Взаимосвязь эпизоотического пуоиесса с солнечной активностью. Сопоставление заболеваемости и чисел солнечной активности Вольфа (интернет-ресурс www.sidc.be/silso/DATA/yearssn.dat) не выявило четкой периодической повторяемости туберкулеза крупного рогатого скота, однако хорошо выражены фазы низкого и высокого уровня показателя с волнообразным характером его динамики и наличие временного сдвига в фазах развития сопоставляемых процессов (рис.1).
Рисунок 1 - Сопоставление временных рядов заболеваемости крупного рогатого скота туберкулезом и чисел солнечной активности Вольфа
В корреляционном анализе установлено, что активизация эпизоотического процесса туберкулеза по показателям заболеваемости, очаговости и пораженно-сти туш проявляется с запаздыванием в 6-7 лет после вспышек солнечной активности, выраженной в числах Вольфа (г = 0,65-0,82). Полученные данные имеют важное значение для прогнозирования эпизоотической ситуации по крупным административным территориям.
Экономический ущерб. С учетом коэффициентов ущерба для региона Сибири (Ю.И. Смолянинов, 2006) и поправочных ценовых коэффициентов на продукцию животноводства определен экономический ушерб, причиненный туберкулезом крупного рогатого скота в Якутии за 1961-1988 гг. При выбытии из оборота стада 21,7 тыс. больного скота, экономика животноводства недополучила 61,6 тыс. т молока, 1284 т мяса в живой массе и 12 тыс. голов приплода
1
180
с общим экономическим ущербом в сумме "583 млн. руб. В структуре преобладали потери молока от снижения качества (сортности) - 64,2%, сокращения срока продуктивного использования коров (10,9%) и вынужденного обеззараживания молока в высокотемпературном режиме (7,1%).
Особенности проявления неспецифических реакций на туберкулин. Во многих хозяйствах при профилактических аллергических исследованиях на туберкулез выявляются реагирующие на туберкулин животные, при убое которых характерных для туберкулеза изменений не обнаруживают и диагноз не подтверждается при бактериологическом исследовании биоматериала. Проявление этих реакций вносит неопределенность в эпизоотическую ситуацию, обуславливает экономические потери от убоя реагирующих на туберкулин животных. Возникают проблемы при реализации племенных животных.
Динамику проявления изучали по материалам статистической ветеринарной отчетности за 1989-2012 гг., а также результатов собственных исследований. За этот период в благополучных по туберкулезу хозяйствах суммарно дали реакцию на туберкулин почти 14.6 тыс. голов крупного рогатого скота или 0,18% от числа исследованных животных, но в отдельные годы (1996, 2001) показатель превышал 0.4%.
Как и при туберкулезе выявлены фазы активизации неспецифической реактивности крупного рогатого скота к туберкулину, проявляющиеся с лагом запаздывания в 6-7 лет после всплеска солнечной активности (г = 0,62-0,76).
Сезонную динамику изучали в благополучных по туберкулезу хозяйствах Таттинского, Горного. Мегино-Кангаласского и Намского улусов Якутии (1529 гол.) с неспецифическим фоном сенсибилизации к туберкулину. Животных исследовали ППД туберкулином для млекопитающих ежемесячно в течение года. Результаты исследований не показали достоверной разницы в количестве реагирующих на туберкулин животных в различные месяцы, хотя в летний период (июнь, июль, август) реактивность была в 1,3-1,5 раз выше.
Возрастная динамика. Реагирующих на туберкулин животных (144 гол.) распределяли в группы по возрасту. Установлено, что молодняк в возрасте до одного года и коровы 7-9 лет и старше не проявляют реактивности к туберкулину. Невысокий показатель реагирующих (0,4%) установлен у животных в возрасте 1-2 года и наибольший - среди коров 3-7 лет (3,1-3,5%), что, очевидно, связано с более высокой естественной резистентностью в этом возрасте.
Интенсивность проявления. Среднее утолщение кожной складки в месте введения туберкулина у животных благополучных по туберкулезу хозяйств (359 гол.) составило 3,8±1,0 мм, причем основная масса реакций (80%) не превышала 3-4 мм. Утолщение складки на 7-8 мм выявлено у единичных животных (1,4-0,6%), а реакции с интенсивностью 9 мм и выше отсутствовали. У больных туберкулезом животных (278 гол.) среднее утолщение кожной складки при введении туберкулина было достоверно выше (Р<0,05), чем у реагирующих животных благополучных стад - 5,3±0,9 мм. При этом у части больных животных интенсивность реакций составила 6-10 мм и выше.
Указанное обстоятельство, на наш взгляд, требует пересмотра параметров оценки реакций на внутрикожное введение ППД туберкулина для млекопи-
тающих в благополучных по туберкулезу хозяйствах. Реагирующим на туберкулин целесообразно считать животное с утолщением кожной складки не менее 5 мм, что снизит количество положительных туберкулиновых проб и позволит более объективно отобрать животных для диагностического убоя.
Гематологический и иммунный статус изучали в благополучных по туберкулезу хозяйствах улусов с развитым скотоводством — Амгинского, Горного, Мегино-Кангаласского, Таттинского и Сунтарского, расположенных в различных природно-климатических зонах PC (Я). Пробы крови (всего 200) реагирующих и не реагирующих (контроль) на туберкулин животных брали в период читки реакций в пластиковые гематологические контейнеры емкостью 0,5 мл с антикоагулянтом ЭДТА, нанесенным методом напыления.
Установлено, что гематологические показатели, лейкограмма и содержание субпопуляций лимфоцитов в периферической крови реагирующего на туберкулин крупного рогатого скота благополучных по туберкулезу хозяйств Якутии имеют свои особенности лишь на популяционно-территориальном уровне, однако значимых изменений опытных и контрольных животных не установлено.
Экономическое значение. Расчеты по разработанной нами методике показали, что вероятный экономический ущерб от необоснованного убоя реагирующих на туберкулин животных из благополучных по туберкулезу хозяйств Якутии за 1989-2012 г. составляет 414,8 млн. руб. При этом экономика животноводства могла потерять 17,5 тыс. т молока (384,5 млн. руб.) и 5,8 тыс. голов приплода (30,3 млн. руб.).
Факторы неспецифичсской реактивности к туберкулину. Исследования Н.И. Прокопьевой и др. (2006, 2007), Г.Г. Спиридоновой (1996), Н.А. Обоевой (2004) и результаты собственных исследований свидетельствуют, что в организме реагирующего на туберкулин крупного рогатого скота и внешней среде на территории PC (Я), кроме патогенных М. bovis и М. tuberculosis персистиру-ют 11 видов фотохромогенных, нефотохромогенных и быстрорастущих атипичных микобактерий I, II и VI групп по классификации Раньона, родококки, грибы рода Aspergillus и нокардии. Нами из 317 проб биоматериала от реагирующих на туберкулин животных благополучных по туберкулезу хозяйств Намского, Горного, Таттинского, Мегино-Кангаласского, Чурапинского и Сунтарского улусов Якутии изолированы 77 культур микобактерий, из которых 14, по комплексу культуральных, биологических и биохимических свойств, отнесены к М. bovis, 1 - к М. tuberculosis, и 62 (80,5%) - к атипичным.
Не отрицая роли атипичных микобактерий, как основной в проявлении неспецифических реакций на туберкулин, во многих случаях при бактериологическом исследовании биоматериала не удавалось их изолировать. Аллергические исследования в благополучных по туберкулезу хозяйствах 14 улусов республики показали высокое совпадение проявления туберкулиновых реакций и заболевания актиномикозом - 22,9%, лейкозом (гематологически больные) -16,7%, гиподерматозом (7,3%) и другими болезнями.
При ветеринарно-санитарной экспертизе 289 животных патологические процессы (12 видов) во внутренних органах обнаружены у 121, или у 41,9% реагирующих на туберкулин коров. Чаще выявляли склероз лимфатических уз-
лов (7,3%), лейкоз (6,8%) и лимфаденит (4,8%). Частота других патологических процессов, в том числе паразитарного характера, была незначительной.
Таким образом, определенную этиологическую роль в проявлении неспецифической реактивности крупного рогатого скота к туберкулину в благополучных по туберкулезу хозяйствах PC (Я) имеют некоторые заболевания и поражения внутренних органов.
Схема дифференциации туберкулиновых реакций. В основу схемы поло-жен объективный выбор животных для диагностического убоя с последующим бактериологическим исследованием биоматериала по взаимодействующим критериям: пониженная реактивность организма животных в стадах с неспецифическим фоном сенсибилизации к ППД туберкулину для млекопитающих в уменьшенной дозе - 5000 МЕ; выпадение при повторном исследовании через 30-45 дней реакций у большинства животных (до 70%), сенсибилизированных факторами нетуберкулезной этиологии; положительный результат ПЦР (обнаружение ДНК М. bovis или М. tuberculosis) из биоматериала от повторно реагирующих на туберкулин в уменьшенной дозе животных (рис. 2).
Профилакпмаски» аллергические исследования поголовья на туберкулез ППД туберкулином для млекепи i ihimiihw я дозе 1DOOO МЕ
•с
юе введение
TT
¿л
Оценка реакций на туберкулин. Учет совпадем им реакции
актиномикозом, лейкозом, гиподерматозом и др.
' в дозе боой МЕ перви««о реагирующим животным через 30-4& дней
Отбор и убой животных по совпадающим диап ю сти»«ес ним тостам: реагирующие повторно на туберкулин в дозе бООО МЕ + обнаружение ДНК микобакторий в ПЦР
Бактериологические исследования биоматериала на i туберкулез :: (посев суспензии на; питательные среды,; биопроба на лабораторным : ЖИВОТНЫХ)
Оценка реакций на туберкулем, отбор проб крови и сыворотки крови повторно реагирующих У^ на туберкулин жмотных ПЦР-диагностика . туберкулеза с пробами • крови
и сыворотками крови
П атологоанатом ич еск ие исследования, отбор проб биоматериала. Учет совпадения туберкулиновых реакций : с патологическими : процессами в органах
Да
Туберкулез установлен %
Оздоровительные мероприятия в соответствие с нормативно-законодательной регламентацией
Контроль благополучия по изложенной схеме 2 раза в год
Рисунок 2 - Схема диагностических исследований в хозяйствах с невыясненной этиологией туберкулиновых реакций
Противоэпизоотическая и экономическая эффективность. В результате внедрения схемы дифференциально-диагностических мероприятий в 19892012 гг. из 4518 гол. крупного рогатого скота (в основном коров), давших реакцию на туберкулин. 318 гол. или 7% по комплексу диагностических тестов под-
вергнуты убою с отбором проб биоматериала для бактериологического исследования. Остальные реагирующие на туберкулин животные оставлены в стаде, а продукция от них (молоко, мясо, приплод) использовалась без ограничений. Предотвращенный экономический ущерб, рассчитанный по разработанной методике, составил 119,3 млн. руб. При этом предупреждены потери 5027,4 тыс. т молока и 1680 голов приплода.
2.2.2 Усовершенствование диагностики туберкулеза
Влияние аэрации на эффективность культивирования микобактерий.
При культивировании микобактерий на питательных средах чаще всего используют ватно-марлевые пробки. При этом бактериологические пробирки с посевами культур микобактерий или биоматериала от животного закупоривают пробками с последующей герметизацией парафином для создания относительно анаэробных условий. Анализ научной литературы свидетельствует о единичных и разноречивых данных по эффективности культивирования на питательных средах микобактерий с использованием различных видов пробок.
Установлено, что первичный рост патогенных микобактерий (М bovis, М. tuberculosis и М. avium) сравнительно одинаков и не превышает 7 сут. Обильный рост наблюдали на 16-е сутки с использованием ватно-марлевых пробок под парафином и резиновых с желобком, обеспечивающих анаэробные условия культивирования. Наименьший срок обильного роста культуры М. tuberculosis (16 сут.) наблюдали в пробирках, закупоренных резиновыми пробками с желобком (аэробные условия) Условия аэрации не влияли на интенсивность роста культуры М. avium.
Отличительной особенностью роста атипичных микобактерий М. smegma-tis, М. fortuitum, М. intracellular) явился хороший первичный и обильный рост в пробирках под ватно-марлевыми и резиновыми с желобком пробками, способствующие аэрации питательной среды (аэробные условия).
Таким образом, для культивирования возбудителя туберкулеза бычьего вида оптимальными являются только анаэробные условия, для других видов микобактерий (как патогенных, так непатогенных ) — аэробные, что достигается использованием различных видов пробок.
Информативность питательных сред при культивировании микобактерий. В опытах использовали распространенные в бактериологической диагностике туберкулеза плотные и жидкие питательные среды. На каждую из сред (по 10 пробирок) высевали патогенные и атипичные культуры микобактерий.
Скорость роста культуры М. bovis была одинаковой при культивировании на плотных питательных средах Финн-2, Гельберга и Павловского. Первичный рост появлялся на 7-е сутки, обильный - на 25-е. Для М. tuberculosis наиболее информативной оказалась среда Финн-2, первые колонии на которой регистрировали на 7-е сутки, а обильный рост на 19-е. Примерно одинаковую эффективность для М. avium показали все испытуемые среды с некоторым преимуществом среды Левенштейна-Иенсена.
Эффективными для культивирования атипичных микобактерий М. smeg-matis и М. fortuitum оказались среды Финн-2 и Гельберга, на которых первичный рост регистрировали через 2-е сут., а обильный - через 7. Наилучшие ростовые свойства культуры М. intracellular проявлялись на среде Павловского.
Жидкие питательные среды, в отличие от твердых (для индикации микобактерий), используются в основном, для накопления биологической массы бактерий в промышленном производстве биопрепаратов и специализированных НИУ. В опытах на этих средах культура М. bovis лучше всего растет на среде Сотона и BKJI, образуя пышную толстую пленку. Для М. tuberculosis предпочтительней среда Моделя: М. avium - Моделя и Сотона; М. smegmatis и М. intracellular — ГДР; М. fortuitum - среда BKJ1.
Молекулярная диагностика туберкулеза. Целью исследований явилось определение диагностической ценности детекции ДНК микобактерий туберкулеза методом ПЦР в биоматериале (кровь, сыворотка крови) от реагирующего на туберкулин крупного рогатого скота ранее неблагополучных по туберкулезу хозяйств. В двухступенчатой «гнездовой» модификации ПЦР с использованием внутренних и внешних праймеров исследован биоматериал от 394 животных 15-ти улусов Якутии (Наставление по применению тест-системы для выявления и дифференциации М. bovis и М. tuberculosis методом полимеразной цепной реакции (ПЦР), 2002; тест-система производства НПО «Нарвак»),
В целом из биоматериала ДНК М. bovis и М. tuberculosis обнаружены в 114 пробах или в 28,9%. Контрольные образцы дали отрицательный результат. При этом ДНК М. bovis обнаружены в 82 пробах биоматериала (21,4%). Фрагменты ДНК М. tuberculosis регистрировали в 8,1% случаев.
Учитывая столь высокий уровень обнаружения ДНК микобактерий от реагирующего на туберкулин крупного рогатого скота благополучных по туберкулезу хозяйств. 40 положительных проб биоматериала исследовали еще в двух повторностях. Результаты ДНК-позитивности первичного исследования во всех случаях совпали с результатами повторных анализов.
Электрофорез в агаровом геле показал, что ПЦР наиболее информативна с сывороткой крови - 66.6% от числа исследованных проб, несколько ниже с цельной кровью (58,3%) и носовой слизью (50%). Из проб лимфатических узлов показатель составил 33,3%. молока - 16,7%.
Особенности прижизненной диагностики туберкулеза у северных оленей и лесных бизонов. Данные о прижизненной диагностике туберкулеза у северных оленей отрывочны (В.А. Поляков, 2006). Целью исследований явилась разработка технологии прижизненной диагностики туберкулеза у северных оленей в условиях паркового содержания. Исследования проводили на 150 северных оленях резервата «Табсылын» Якутской ГСХА.
Попытки внутрикожного введения (средняя треть шеи) оленям ППД туберкулина для млекопитающих с помощью безыгольного инъектора МБИ-7 «Овод» показали, что аллерген проникает через все слои кожи и локализуется в подкожной клетчатке и более глубоких мышечных тканях, что обусловлено создаваемым высоким давлением инъектора. Отметим, что кожа у северного оленя очень тонкая, а в области шеи ее толщина не превышает 1 мм (В.Г. Ше-
лепов и др., 2003). Технологически приемлемым оказалось внутрикожное введение туберкулина с помощью шприца с иглами для туберкулинизации. Технически возможно также использование пальпебральной и офтальмопробы.
В связи с реинтродукцией американских бизонов в Якутии, завезенных из Канады и содержащихся в питомниках природных парков, возникла угроза вспышек инфекционных болезней, в том числе туберкулеза. Ввиду агрессивности бизонов не представляется возможным аллергическая диагностика туберкулеза. С учетом методического наставления «Мониторинг благополучия диких животных по туберкулезу в зоопарках и цирках Российской Федерации» (М.И. Гулюкин и др., 2012) отобрано и исследовано в ПЦР 25 проб фекалий (Наставление по применению тест-системы для выявления и дифференциации М. bovis и М. tuberculosis методом полимеразной цепной реакции, 2002). ДНК микобактерий во всех пробах фекалий не обнаружена.
2.2.3 Взаимосвязь туберкулеза крупного рогатого скота и человека в Республике Саха (Якутия)
Эпидемическая ситуация. В период до и начала 20-го века в Якутии туберкулез имел крайне широкое распространение и приводил к гибели коренных жителей целых поселений (В.П. Николаев, 2005), что явилось причиной низкого естественного прироста населения (H.A. Попов. 1910). По архивным данным инфицированность населения палочкой Коха достигала 14%, в том числе детей — 60-100%, что характеризовало туберкулез как национальную катастрофу.
В современный период основные эпидемиологические показатели туберкулеза (заболеваемость, болезненность, бациллярность, смертность) в РС(Я) коррелируют с общероссийскими, однако особенностью процесса является высокая заболеваемость детей, превышающая данные по РФ в 2,3-3,6 раза (рис. 3).
! ЧЧ11 »<»!»*. 20QÖ 2Ü05 2ЧОЙ Z007 2&Ú& ZÓ0 3 2D П О 2011 201 2 2013
Рисунок 3 — Динамика заболеваемости детей туберкулезом в Якутии и Российской Федерации (на 100 тыс. населения)
Взаимное заражение крупного рогатого скота и людей. Патогенность для крупного рогатого скота и человека возбудителей туберкулеза бычьего и человеческого видов обуславливает межвидовую взаимосвязь эпизоотического и эпидемического процессов. Важным показателем этой взаимосвязи является
выделение от людей культур М. bovis, а от крупного рогатого скота - М. tuberculosis. В 50-80-е годы прошлого столетия от больных туберкулезом людей в Якутии изолировали до 20% культур М. bovis (В.П. Белогурова, 1958; Ю.П. Афанасьева, 1961; В.Т. Захаров, 1981; Г.И. Алексеева, 1994). В связи с ликвидацией туберкулеза крупного рогатого скота в Якутии, выявление возбудителя туберкулеза бычьего вида от людей, по данным МЗ РС(Я), не превышают 0,6%. М. tuberculosis от животных изолируют реже, но это не умаляет их потенциальной роли в эпизоотологии и эпидемиологии туберкулеза.
В результате комплексных, совместно с Якутским НИИ туберкулеза, медико-ветеринарных исследований выявлены случаи тесной взаимосвязи туберкулеза людей и животных. Так, впервые в регионе от реагирующей на туберкулин коровы частного сектора (Намский улус) мы изолировали и идентифицировали по комплексу тестов культуру возбудителя туберкулеза человеческого вида (М. tuberculosis). При этом хозяин животного состоял на учете в улусном противотуберкулезном диспансере (И группа).
Отметим важный в эпизоотолого-эпидемическом отношении случай изоляции М. tuberculosis от свиней в крестьянском хозяйстве «Алгыс» Намского улуса, в котором при аллергическом исследовании на туберкулез 96 свиней 16 или 16,7% дали реакцию на введение ППД туберкулинов для млекопитающих и для птиц. Из биоматериала от убитых животных нами изолирована и идентифицирована по биохимическим тестам и в биологической пробе на морских свинках и кроликах культура М. tuberculosis. Установлено, что поголовье свиней обслуживали 4 привлеченных больных туберкулезом человека.
Из биоматериала от реагирующей на туберкулин коровы одного из подворий Сунтарского улуса, в семье которых глава, две дочери и два сына являлись больными туберкулезом, мы изолировали культуру, представленную двумя видами микобактерий в ассоциации - М. bovis и М. tuberculosis. Исследование в ПЦР проб крови, сыворотки крови и носовой слизи показало наличие ДНК микобактерий туберкулеза у отца и двоих детей.
Характеристика эпидемических очагов риска туберкулеза для крупного рогатого скота. В классическом определении эпидемический очаг туберкулеза - это местонахождение источника инфекции антропонозного (М tuberculosis) или зоонозного (М bovis) характера, в пределах которого возможно распространение возбудителя и учитываемого по месту проживания больного. Мы, с учетом эпизоотологической направленности, использовали видоизмененное определение этого очага - эпидемический очаг риска туберкулеза для крупного рогатого скота, так как в таком очаге, кроме больного туберкулезом человека, должен содержаться восприимчивый к заражению крупный рогатый скот.
Для учета и характеристики очагов туберкулеза использовали данные Рос-потребнадзора, поселковых администраций о количестве крупного рогатого скота и подворного обхода мест проживания больных туберкулезом лиц по разработанной схеме. Эпидемические очаги риска туберкулеза за 2008-2012 гг. выявлены, в 19-ти сельских улусах Якутии, их количество по годам оставалось относительно постоянным - 136-145 (табл. 2). В одном очаге содержалось в сред-
нем 6,1 голов крупного рогатого скота, в том числе 2,3 коровы. Набольшее среднегодовое количество очагов зарегистрировано в подворьях владельцев скота Сунтарского (16,2), Мегино-Кангаласского (15,8), Верхневилюйского (12,8), Усть-Алданского (11,4), Намского (11) и Чурапинского (10,8) улусов.
Таблица 2- Динамика и характеристика эпидемических очагов риска туберкулеза для крупного рогатого скота в Якутии за 2008—2012 гг.
Количество очагов по годам Со- Забо- Заболело в очагах,0/»
Улус 2008 2009 2010 2011 2012 всего держится КРС, гол. лело людей (20082012)
Амгинский 7 5 7 3 2 24 206 43 55,8
Верхневилюйский 9 14 12 11 18 64 312 69 92,8
Верхоянский 5 3 3 4 2 17 102 62 27,4
Вшпойский - 2 - 3 1 6 44 76 7,9
Горный 8 2 4 2 5 17 98 26 65,4
Кобяйский 10 7 8 4 3 32 221 39 82,1
Ленский 5 6 4 9 5 28 175 111 25,2
М.-Кангаласский 9 11 20 23 16 79 512 115 68,7
Намский 14 12 10 14 5 55 341 65 84,6
Нюрбинский 7 12 5 7 10 41 217 69 59,4
Оймяконский 6 8 11 8 8 42 255 107 39,3
Олекминский 2 4 1 1 - 8 58 90 8,9
Среднеколымский 2 3 - 1 - 6 41 20 30,0
Сунгарский 20 26 12 12 И 81 532 88 92,0
Татгинский 3 4 7 5 8 27 184 31 87,1
Усть-Алданский 14 10 13 14 6 57 314 61 93,4
Хангаласский 4 2 - 3 4 13 97 127 10,2
Чурапчинский 12 9 14 9 10 54 472 59 91,5
Э.-Бытантайский 3 5 1 4 _ 12 104 17 70,6
ВСЕГО 136 145 138 137 114 670 4105 1994 33,6
В населенных пунктах остальных 15 улусов и городов республики также ежегодно выявляется большое количество больных туберкулезом людей, однако они не являются очагами риска согласно нашему определению, так как в них не содержался крупный рогатый скот.
Комплексные медико-ветеринарные мероприятия. С учетом большого количества эпидемиологических очагов во многих улусах Якутии нами, совместно с Якутским НИИ туберкулеза МЗ РФ разработаны «Комплексные противоэпидемические и ветеринарно-санитарные мероприятия в очаге туберкулезной инфекции животноводческих хозяйств», которые внедрены в работе сельских противотуберкулезных диспансеров и ветеринарных служб региона.
Противоэпидемические мероприятия предусматривают порядок, сроки и особенности диагностики туберкулеза животноводов и членов их семей, огра-
ничения к работе по обслуживанию животных, химиопрофилактику, диспансерный учет и лечение больных с привлечением территориальных улусных (городских) управлений Роспотребнадзора, центральных улусных больниц и противотуберкулезных диспансеров. Ветеринарно-санитарные мероприятия включают порядок диагностических исследований крупного рогатого скота и других видов животных на туберкулез, особенности экспертизы при подворном убое животных, организацию обеззараживания молока и молочного оборудования, санацию внешней среды, внедрение изолированного выращивания телят.
2.2.4 Антагонистическое действие пробиотиков из штаммов Bacillus subtilis к микобактериям туберкулеза
Якутским НИИСХ разработаны пробиотики из штаммов Bacillus subtilis (М.П. Неустроев и др., 2010), споровые формы которых, выделенные из мерзлотных почв, обладают чрезвычайной устойчивостью к низкой температуре. Целью исследований явилось изучение антагонистического действия бактерий Bacillus subtilis на биологические свойства микобактерий туберкулеза.
Одним из важных биологических свойств микобактерий является образование корд-фактора (образование в скоплении культивируемых в жидкой питательной среде микобактерий нитей, «кос» и «жгутов»), выступающего в роли основного фактора патогенности. Корд-фактор обусловлен наличием поверхностного антигена, защищающего микобактерии от фагоцитоза.
В опытах in vitro культуры штаммов бактерий Bacillus subtilis в концентрации 5-109 колониеобразующих единиц (КОЕ) в 1 мл (5 млрд клеток) и вирулентных штаммов М. tuberculosis (шт. 492) и М. bovis (шт. 14, ВНИИБТЖ) (5x108 КОЕ) высевали в жидкую питательную среду Школьниковой (по 10 пробирок) и инкубировали при температуре 37°С. В контрольные пробирки высевали только культуры микобактерий.
При микроскопии мазков кордообразование в контрольных пробирках как с М. tuberculosis, так и М. bovis особенно наглядно проявлялось на 14-й день культивирования. В мазках из опытных пробирок характерные для вирулентных штаммов «тяжи» были не сформированы, т. е. корд-фактор отсутствовал. Количество микобактерий не увеличивалось во все сроки наблюдения, что свидетельствовало об отсутствии процесса деления и размножения.
В опытах in vivo белым мышам 1-й группы (п=10) пробиотик «Сахабакти-субтил» выпаивали в дозе в 5x109 колониеобразующих единиц (КОЕ) в объеме 0,1 мл в течение 7 дней и внутрибрюшинно заражали культурой М. bovis. Мышам 2-й группы (п=10) дополнительно пробиотик задавали в течение 30 дней. Мышей контрольной группы (п=10) заражали без дачи пробиотика.
Продолжительность жизни мышей контрольной группы (только заражение) составила 68,9±3,1 дней, зараженных, с предварительной дачей пробиотика она достоверно увеличилась на 18,3±0,9 дня (Р<0,05). Еще большие различия получены во 2-й опытной группе (пробиотик + заражение + пробиотик), в которой все мыши остались живы в срок до 90-го дня наблюдения. Кроме того, если
у мышей контрольной группы снижение живой массы составило 16,1%, то у животных 1-й и 2-й опытной групп соответственно 9,1 и 3,7%.
Пробиотик оказал также влияние на способность микобактерий к росту и размножению. Индекс высеваемости микобактерий на питательной среде Финн-2 из легких павших белых мышей опытной группы (пробиотик + заражение) составил 20 КОЕ, а из селезенки не проявлялся. Из биоматериала контрольных животных (только заражение) высеваемость микобактерий составляла 100 и более КОЕ. В опыте с внутрибрюшинной инокуляцией мышам бикуль-туры из «Сахабактисубтила» и М. bovis при ассоциированном выращивании на питательной среде Школьниковой получены аналогичные результаты.
Кроме того, установлено, что пробиотик «Сахабактисубтил» повышает ан-тиоксидантную защиту организма белых мышей. Определение активности ферментов каталазы и пероксидазы, участвующих в антиоксидантной защите, в том числе против микобактерий туберкулеза (методика Е. Богена. Приказ МЗ РФ от 21.03.2003 № 109), показало низкую активность культуры М. bovis после пассажа на мышах, которым задавали «Сахабактисубтил».
Результаты исследований свидетельствуют о глубоком морфологическом изменении патогенных микобактерий М. tuberculosis и М. bovis при воздействии экспериментальных пробиотиков и открывают большие перспективы во фтизиатрии для повышения эффективности терапии больных туберкулезом людей путем сочетанного применения лекарственных препаратов и штаммов бактерий Bacillus subtilis. Полученные данные могут быть реализованы также в научных экспериментах для контролируемого ослабления вирулентности патогенных микобактерий, что необходимо для воспроизведения органного туберкулеза у лабораторных животных.
2.2.5 Специфическая профилактика туберкулеза крупного рогатого скота с использованием вакцины БЦЖ и иммуномодулятора полирибоната
Опыты на морских свинках. В опыте на 200 морских свинках (20 групп по 10 гол.) испытали различные схемы и дозы полирибоната, сроки и способы введения на фоне иммунизации БЦЖ и экспериментального заражения культурой М. bovis (шт. 14, ВНИИБТЖ) в предварительно оттитрованной дозе — 0,00001 мг на голову. Установлено, что наилучший защитный эффект достигается при сочетанном введении вакцины БЦЖ и полирибоната дробно дважды по схеме: первично в дозе 15 мг/гол. одновременно с БЦЖ и повторно через 14 дней также в дозе 15 мг/гол. как при внутрибрюшинном, так и внутримышечном введении - свинки оставались живы в течение 150 дней наблюдения, у которых после декапитации установлены наименьшие показатели индексов по-раженности туберкулезом печени, легких и селезенки.
В опыте на 180 морских свинках (12 групп по 15 гол.), иммунизированных БЦЖ в сочетании с полирибонатом (различные схемы, дозы и способы введения) и зараженных культурой М. bovis (шт. 14, ВНИИБТЖ) изучена аллергическая реактивность к ППД туберкулину для млекопитающих, характеризующая уровень Т-клеточного иммунитета. При использовании полирибоната в сочета-
нии с вакциной БЦЖ аллергические реакции на туберкулин выпадают раньше (особенно при дробном введении полирибоната), чем у животных, иммунизированных без иммуномодулятора.
Опыты на молодняке крупного рогатого скота. В опыте на 20 бычках 17-19-мес. возраста, искусственно зараженных вирулентной культурой М. bovis в дозе 6 мг на голову изучены протективные свойства вакцины БЦЖ. Телят всех групп предварительно иммунизировали БЦЖ в дозах 0,5; 1 и 3 мг на голову.
По уровню развития гиперчувствительности замедленного типа оптимальной дозой вакцины БЦЖ, при которой интенсивность аллергических реакций на внутрикожное введение туберкулина достоверно снижается больше всего, является 1 мг на голову. Характерные для туберкулеза поражения лимфатических узлов выявлены у четырех или у 67% бычков, искусственно зараженных культурой М. bovis и в дальнейшем иммунизированных БЦЖ в дозе 0,5 мг на голову. При иммунизации БЦЖ в дозе 3 мг этот показатель составил 60%, в дозе 1 мг - 40%, у контрольных животных (без БЦЖ) — 75%.
Таким образом, вакцина БЦЖ обладает определенными, однако невысокими протективными свойствами при экспериментальном туберкулезе молодняка крупного рогатого скота. Оптимальной, вызывающей наименьшее количество поражений туберкулезного характера в органах, является доза 1 мг на голову.
Во втором опыте из 15-ти не реагирующих на туберкулин бычков стационарно благополучного по туберкулезу хозяйства иммунизировали БЦЖ в дозе 1 мг на голову с одновременным введением внутримышечно полирибоната в дозе 1 мг/кг живой массы. Бычков 2-й опытной группы (4 гол.) вакцинировали БЦЖ с дробным введением иммуномодулятора - первично в дозе 0,5 мг/кг живой массы одновременно с БЦЖ и повторно через 14 дней в этой же дозе. Бычков 1-й контрольной группы (4 гол.) иммунизировали БЦЖ без применения полирибоната. Животным 2-й контрольной группы (3 гол.) вакцину БЦЖ и полирибоната не вводили. В условиях инфекционного изолятора всех бычков заразили культурой М. bovis перорально в составе болюсов, в дозе 0,15 мг/кг живой массы, двукратно с интервалом в одни сутки.
При убое через 5 мес. после заражения у всех контрольных бычков (без БЦЖ и полирибоната) обнаружены характерные для туберкулеза поражения в легких, печени, мезентериальных и заглоточных лимфатических узлах. У зараженных животных, иммунизированных БЦЖ без применения иммуномодулятора, туберкулез патологоанатомически и бактериологически установлен у 80%, то есть иммуногенные свойства не превышали 20%. Защитные свойства БЦЖ при одновременном применении полирибоната возросли до 80%. При дробном введении иммуномодулятора туберкулез не подтвердился у животных во всех диагностических тестах, то есть защитный эффект вакцины составил 100%.
Напряженность иммунитета. Исследования проб крови опытных и контрольных бычков на напряженность иммунитета в динамике до заражения и на 7-е, 14-е, 28-е, 60-е, 90-е и 150-е сутки после заражения культурой М. bovis показали следующие результаты. Иммунизация БЦЖ как отдельно, так и с поли-рибонатом приводит к активной выработке копмлементсвязывающих антител,
улавливаемой в РСК в срок до 1 мес. В дальнейшем реакции угасали и не проявлялись в течение 5 мес. Однако полирибонат значительно не влиял как на титр, так и на продолжительность синтеза комплементсвязывающих антител.
В реакции бласттрансформации лейкоцитов, реакции специфического лизиса лейкоцитов и опсоно-фагоцитарной реакции наиболее высокий уровень иммунного статуса организма установлен при сочетанном применении вакцины БЦЖ с дробным введение полирибоната (табл. 3).
Таблица 3 — Напряженность иммунитета у телят, вакцинированных БЦЖ в сочетании с полирибонатом, %
Срок исследования Группа (М±т)
БЦЖ + полирибонат, одновременно БЦЖ + полирибонат, дробно только БЦЖ (контроль) только заражение (контроль)
Реакция бластрансфорлшции лейкоцитов
До заражения 18,48±0,88 20,73±1,23 15,90±0,70 0,83±0,27
После заражения: - через 7 дней -через 14 дней - через 28 дней - через 60 дней - через 90 дней -через 150 дней 18,83±0,75 21,23±1,08 16,60±0,27 8,55±0,86
20,53±1,73 20,53±0,97 16,22±0,54 9,13±0,94
19,26±0,75 19,44±1,35 15,77±0,78 16,56±0,02
18,65±0,72 19,41±1,35 15,41±0,85 14,60±0,32
18,41±1,06 19,31±0,32 15,04±1,17 6,55±0,28
18,15±1,37 19,16±0,62 14,14±1,25 1,44±0,04
Реащии специфического лизиса лейкоцитов
До заражения 28,02± 11,73 22,49±4,04 36,29±12,62 5,84±1,02
После заражения: - через 7 дней -через 14 дней - через 28 дней -через 60 дней - через 90 дней -через 150 дней 21,60±10,69 24,73±8,32 34,49± 11,62 6,62±2,17
17,81±8,62 26,34±8,32 24,66±5,39 4,33±2,04
37,17±20,90 30,12±10,34 16,75±4,43 18,27±4,89
20,17±7,73 23,99±2,21 32,60±7,96 17,03±12,55
22,81±9,65 27,93±12,65 42,80±7,29 18,09±10,39
25,23±9,73 31.89±2,59 26,78±10,79 19,09±14,03
Опсоно-фагоцитарная реакция
До заражения 56,75±2,91 65,75±1,28 35,75±2,55 20,00±1,87
После заражения: - через 7 дней - через 14 дней - через 28 дней - через 60 дней - через 90 дней -через 150 дней 63,00±2,94 69,00±0,94 42,75±2,99 27,00±1,22
62,00±2,84 67,75±1,84 49,25±3,50 25,00±2,55
58,00±2,05 66,50±1,66 45,00±3,39 22,00±4,96
55,50±2,42 59,25±2,01 43,75±3,66 18,66±2,27
56,50±2,42 64,25±2,07 43,25±3,50 19,00±3,24
58,33±2,48 61,50±3,60 44,50±3,35 20,66±1,78
Протеинограмма показала повышение уровня общего белка и его фракций (альбумины, «/-глобулины, «¿-глобулины, р-глобулины, иммуноглобулины классса С^ иммуноглобулины класса С2) в сыворотке крови зараженных
M. bovis животных под влиянием вакцины БЦЖ, в том числе сочетало с поли-рибонатом, что свидетельствует о повышении защитных функций организма.
Производственное испытание. В неблагополучных по туберкулезу фермах Усть-Таркского района Новосибирской области телят (21,4 тыс.) иммунизировали БЦЖ в возрасте 7-12 дней, в дозе 1 мг на голову с дробным внутримышечным введением полирибоната по схеме: первично — при иммунизации в дозе 10 мг на голову, повторно — в этой же дозе через 14-15 дней. Телят содержали изолированно. До 7-10 дней их выпаивали молозивом и молоком матерей, в дальнейшем — заменителем цельного молока. Напряженность уровня иммунитета контролировали внутрикожным введением ППД туберкулина для млекопитающих через 45-60 дней после иммунизации БЦЖ.
Результаты производственного испытания подтвердили экспериментальные данные о высокой эффективности иммунизации телят БЦЖ с сочетанным применением полирибоната по разработанной схеме. Если количество не реагирующих на туберкулин иммунизированных БЦЖ (без иммуномодулятора) телят составляло 15,2%, то при использовании полирибоната не превышало 0,3%.
3 ЗАКЛЮЧЕНИЕ
В результате теоретического обоснования и экспериментальных исследований разработан комплекс ветеринарных и медицинских мероприятий по профилактике взаимного заражения туберкулезом животных и человека в Республике Саха (Якутия), усовершенствованы методы диагностики и специфической профилактики туберкулеза крупного рогатого скота, на основе чего сформулированы выводы и предложения для практического использования.
Выводы
1. В экстремальных природно-климатических условиях Якутии показатели естественной резистентности крупного рогатого скота имеют свои особенности, выражающиеся в высокой фагоцитарной активности нейтрофилов сыворотки крови. У животных симментальской породы, в сравнении с холмогорской, отмечены более высокие показатели лизоцимной и бактерицидной активности, свидетельствующие о лучшей адаптированности и устойчивости к хроническим инфекционным болезням, в том числе туберкулезу.
2. Эпизоотический процесс туберкулеза крупного рогатого скота на территории Якутии, вызываемый возбудителями М. bovis и М. tuberculosis (выявлен случай ассоциации этих видов и изоляции М. tuberculosis от свиней), в 1961— 1989 гг. характеризовался следующими среднегодовыми показателями: заболеваемость — 0,33%, уровень неблагополучия - 13 пунктов, очаговость - 90,1 гол., пораженность туш - 29,3%. При убое 21,7 тыс. больных туберкулезом животных недополучено 61,6 тыс. т молока, 1294 т мяса в живой массе и 12 тыс. голов приплода с общим экономическим ущербом 583,1 млн. руб.
3. Неспецифические реакции на туберкулин в благополучных по туберкулезу хозяйствах Якутии за 1989-2012 гг. проявились у 15,8 тыс. голов крупного рогатого скота или у 0,18% исследованного поголовья. Сезонность реакций не выражена, чаще реагируют коровы в возрасте 3-7 лет с интенсивностью 3,8 мм. Гематологические показатели, лейкограмма и содержание субпопуляций лимфоцитов в крови реагирующих на туберкулин животных имеют особенности лишь на территориальном уровне, но значимых изменений опытных и контрольных животных не установлено.
4. Эпизоотический процесс туберкулеза и неспецифическая реактивность крупного рогатого скота к туберкулину активизируется через 6-7 лет после всплеска солнечной активности, выраженной в числах Вольфа, что может быть использовано в прогнозировании эпизоотической ситуации.
5. Этиологическими факторами неспецифических реакций на туберкулин в Якутии являются атипичные микобактерии (11 видов), родококки, аспергиллы и нокардии. Проявление реакций совпадает с рядом заболеваний, в том числе актиномикозом (22,9%), лейкозом по гематологическому показателю (16,7%), гиподерматозом (7,3%), а также с патологическими процессами в организме и гельминтами (в целом 41,9%), что следует учитывать в дифференциальной диагностике туберкулеза. Вероятный экономический ущерб от убоя реагирующих на туберкулин животных составляет 448,3 млн. руб. с потерей 18,9 тыс. т молока и 6,2 тыс. голов приплода.
6. Схема дифференциации туберкулиновых реакций в благополучных по туберкулезу стадах крупного рогатого скота с повторным введением реагирующим животным через 30-45 дней ППД туберкулина для млекопитающих в дозе 5000 ME, использованием ПЦР и бактериологическим исследованием биоматериала позволяет исключить или подтвердить туберкулез. Внедрение схемы предотвратило необоснованный убой 4,2 тыс. коров, потерю 5027 т молока и 1680 голов приплода на сумму 119,3 млн. руб.
7. Для культивирования возбудителя туберкулеза М. bovis оптимальны анаэробные условия, для других видов (патогенных и не патогенных) - аэробные, что достигается использованием различных видов пробок. Скорость роста М. bovis одинакова при культивировании на плотных питательных средах Финн-2, Гельберга и Павловского - первичный рост появлялся на 7-е сутки, обильный - на 25-е. Для М. tuberculosis наиболее информативна среда Финн-2, М. avium - Левенштейна-Йенсена. Атипичные микобактерии (M smegmatis и M. fortuitum) лучше растут на средах Финн-2 и Гельберга, М. intracellular -Павловского. Для накопления биомассы М. bovis лучшими из жидких питательных являются среды Сотона и ВКЛ, М. tuberculosis - Моделя, М. avium - Моде-ля и Сотона, М. smegmatis и M. intracellulare - ГДР, M. fortuitum - ВКЛ.
8. Основные показатели эпидемического процесса туберкулеза в Якутии (заболеваемость, болезненность, бациллярность, смертность на 100 тыс. населения) коррелируют с данными по РФ, однако заболеваемость детей превышает общероссийский показатель в 2,3—3,6 раза. В прошлом столетии удельный вес возбудителя М. bovis в заражении туберкулезом населения составлял 11-22%.
9. На территории Якутии в организме крупного рогатого скота и человека циркулируют два вида возбудителей туберкулеза (М bovis и М. tuberculosis), обуславливающих межвидовую взаимосвязь эпизоотического, эпидемического и инфекционного процессов туберкулеза. Культуры М. tuberculosis изолированы и идентифицированы от крупного рогатого скота и свиней, принадлежащих больным туберкулезом владельцам.
10. Ежегодно в 34 сельских улусах Якутии выявляется 136-145 эпидемических очагов риска заражения крупного рогатого скота туберкулезом с преобладанием их количества в подворьях Сунтарского, Мегино-Кангаласского, Верх-невилюйского, Усть-Алданского, Намского и Чурапинского улусов. В среднем в одном очаге содержится 6,1 голов крупного рогатого скота. Разработан и реализуется комплекс медико-ветеринарных мероприятий в эпидемических очагах туберкулеза.
11. ДНК М. bovis из биоматериала от реагирующего на туберкулин крупного рогатого скота благополучных по туберкулезу хозяйств Якутии (ранее неблагополучных) выявляются в 21,4% случаев, М. tuberculosis - в 8,1%, личных подворий граждан - 41,1 и 8,6% соответственно. В биоматериале от северных оленей (кровь) и лесных бизонов (фекалии) фрагменты ДНК микобактерий не обнаружены. Наиболее информативным биоматериалом при детекции ДНК микобактерий является сыворотка крови и цельная кровь.
12. Внутрикожное введение туберкулинов северным оленям, ввиду морфологических особенностей кожи, с помощью механических безыгольных инъек-торов не приемлемо. Целесообразно использование шприца с иглами для ту-беркулинизации. Прижизненная диагностика туберкулеза у лесных бизонов возможна лишь при исследовании биоматериала (фекалии) методом ПЦР в качестве сигнального в эпизоотологическом мониторинге.
13. Вакцина БЦЖ в сочетании с иммуномодулятором полирибонатом снижает срок гибели и пораженность туберкулезом внутренних органов, а также срок проявления внутрикожной туберкулиновой реакции у морских свинок, зараженных вирулентной культурой М. bovis в оттитрованной дозе (0,00001 мг на голову). Эффективно дробное применение полирибоната при первом введении одновременно с БЦЖ, при повторном - через 14 сут.
14. Внутрикожное введение вакцины БЦЖ в дозе 1 мг на голову защищает от туберкулеза при искусственном заражении культурой М. bovis молодняк крупного рогатого скота не более чем в 40%. У животных, иммунизированные БЦЖ в сочетании с одновременным введением полирибоната защитный эффект повышается до 75%. Протективные свойства БЦЖ с дробным введением полирибоната (первично в дозе 0,5 мг/кг живой массы одновременно с БЦЖ, повторно в той же дозе через 14 сут.) возрастают до 100%. Эффективность метода подтверждается производственным испытанием.
15. Бактерии Bacillus subtilis, выделенные из мерзлотных почв Якутии, являются антагонистами к патогенным возбудителям туберкулеза М. bovis и М. tuberculosis, подавляют их рост, развитие и задерживают образования фактора вирулентности - корд-фактора. Зараженные М. bovis белые мыши с последующей дачей экспериментальных препаратов, в сравнении с контрольными,
меньше снижают живую массу, увеличивается срок их жизни и уменьшается летальность.
Предложения для практики
Результаты исследований использованы при разработке следующей нормативно-технической, научно-методической документации и учебной литературы:
1. Наставление по применению полирибоната в ветеринарии в качестве иммуномодулятора (утв. ДВ МСХ РФ, 2001 г.).
2. Выяснение причин туберкулиновых реакций у крупного рогатого скота в благополучных по туберкулезу хозяйствах Республики Саха (Якутия): рекомендации (утв. Коллегией ДВ МСХ РС (Я), протокол № 5 от 18.02.2002 г.).
3. Особенности подворного убоя животных и ветеринарно-санитарная экспертиза продуктов убоя крупного рогатого скота, реагирующего на туберкулин: методические рекомендации (утв. Коллегией ДВ МСХ РС (Я), протокол № 2 от 22.04.2003 г.).
4. Комплексные противоэпидемические и ветеринарно-санитарные мероприятия в очаге туберкулезной инфекции животноводческих хозяйств: методическое пособие (утв. НТС ДВ МСХ РС(Я), протокол № 250 от 20.01.2006 г.).
5. Краевая эпизоотология в Республики Саха (Якутия): учебное пособие (гриф УМО ВУЗов РФ по образованию в качестве учебно-методического пособия для студентов по специальности 310800 «Ветеринария», 2003 г.).
6. Система контроля за проявлением микобактериозов крупного рогатого скота в условиях Якутии: методические рекомендации (утв. подсекцией «Инфекционная патология животных в регионе Сибири и Дальнего Востока ветеринарной медицины Россельхозакадемии, протокол № 4 от 10.11.2009 г.).
7. Лабораторная диагностика туберкулеза крупного рогатого скота: учебно-методическое пособие (гриф УМО ВУЗов РФ по образованию в качестве учебно-методического пособия для студентов ВУЗов по направлению подготовки 111100 - «Зоотехния» и специальности 111801 - «Ветеринария», 2011 г.).
8. Диагностика туберкулеза крупного рогатого скота [Электронный ресурс] (Свид. о рег. № 15309 от 12.02.2010. МСХ РФ. Гос. академия наук Российской Академии образования).
9. Комплексный план мероприятий по обеспечению ветеринарного благополучия животноводства Республики Саха (Якутия) на 1997-2000 годы (утв. Коллегией ДВ МСХ РС (Я), протокол № 2 от 15.04.1997).
10. Республиканская целевая программа «Неотложные меры борьбы с туберкулёзом в Якутии на 1998—2004 годы» (утв. постановлением Правительства РС (Я) от 23.08.1998 г. № 477).
11. Республиканская целевая программа «Неотложные меры борьбы с туберкулёзом в Якутии на 2005-2011 годы» (утв. постановлением Правительства РС (Я) от 13.01.2005 г. № 11).
4 СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
Статьи в ведущих научных журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ
1. Протодьяконова, Г.П. Результаты производственных испытаний метода ПЦР при туберкулезе / Г.П. Протодьяконова // Аграрная наука. - 2004 -№ 12.-С. 24-25.
2. Протодьяконова, Г.П. Микобактерии туберкулеза человеческого вида в Якутии / Г.П. Протодьяконова // Аграрная наука. - 2005. - № 4. - С. 29.
3. Протодьяконова, Г.П. Комплексные медико-ветеринарные мероприятия в очаге туберкулезной инфекции животноводческих хозяйств / Г.П. Протодьяконова, Н.Г. Павлов // Ветеринарная патология. - 2007. - № 2. - С. 196-200.
4. Протодьяконова, Г.П. Показатели естественной резистентности организма животных разных пород Якутии / Г.П. Протодьяконова // Зоотехния -2007,-№8. -С. 28-29.
5. Донченко, A.C. Влияние сочетанного применения вакцины БЦЖ и по-лирибоната на показатели иммунобиологического состояния организма животных / A.C. Донченко, Г.П. Протодьяконова // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. - 2007. - № 10. - С. 64-69.
6. Протодьяконова, Г.П. Эпизоотология туберкулеза животных в Якутии / Г.П. Протодьяконова, Н.Г. Павлов //Аграрный вестник Урала. - 2008 - № 1 -С. 52-54.
7. Протодьяконова, Г.П. Биологическая характеристика крови крупного рогатого скота, реагирующего на ППД-туберкулин для млекопитающих / Г.П. Протодьяконова, Л.П. Корякина // Сибирский вестник сельскохозяйственной науки. - 2008. - № 8. - С. 97-103.
8. Неустроев, М.П. Изучение антагонистического воздействия пробиоти-ков на микобактерий туберкулеза / М.П. Неустроев, Н.П. Тарабукина, Г.П. Протодьяконова, Н.Г. Павлов, Н.И. Прокопьева, H.A. Обоева // Вестник ветеринарии. - 2010. - № 4. - С. 33-39.
9. Неустроев, М.П. Изучение воздействия пробиотика Сахабактисубтил на микобактерии туберкулеза / М.П. Неустроев, Н.П., Тарабукина Н.И. Прокопьева, Г.П. Протодьяконова, H.A. Обоева, Н.Г. Павлов // Вестник РАСХН. - 2011 - №4.-С. 59-61.
10. Прокопьева, Н.И. Нетуберкулезные (атипичные) микобактерии, выделенные от животных и людей / Н.И. Прокопьева, Г.П. Протодьяконова, Н.Г. Павлов, H.A. Обоева, Н.В. Гришина // Аграрный вестник Урала. - 2011 -№ 5. - С. 29-30.
11. Обоева, H.A. Эпизоотическая ситуация по туберкулезу крупного рогатого скота в Якутии / H.A. Обоева Н. А., Н.И. Прокопьева, Г.П. Протодьяконова // Аграрная наука. - 2011. - № 10. - С. 28-29.
12. Протодьяконова, Г.П. Действие штаммов бактерий Bacillus subtilis на биологические свойства микобактерий туберкулеза in vitro / Г.П. Протодьяко-
нова, М.П. Неустроев, Н.П. Тарабукина // Ветеринарная медицина. - 2012. -№2.-С. 15-17.
13. Прокопьева, Н.И. Оценка эффективности контроля благополучия по туберкулезу крупного рогатого скота / Н.И. Прокопьева, Г.П. Протодьяконова // Вестник ветеринарии. - 2013. - № 2. - С. 7-9.
14. Протодьяконова, Г.П. Эффективность различных видов пробок при культивировании микобактерий / Г.П. Протодьяконова, В.Н. Донченко // Якутский медицинский журнал. - 2014. - № 3 (47). - С. 85-86.
Патенты
15. Пат. 1790414 Российская Федерация, A3. Способ профилактики туберкулеза / A.C. Донченко, В.Н. Донченко, Ю.С. Аликин, Г.П. Протодьяконова, JI.C. Соколова.; заявитель и патентообладатель ГНУ ИЭВСиДВ СО Россельхо-закадемии. - № 4845502/13; заявл. 21.05.1990; опубл. 23.01.1993, Бюл. № 3 -4 с.
6. Пат. 2422150 Российская Федерация, А64К, G09B. Способ подавления корд-фактора патогенности микобактерий туберкулеза / М.П. Неустроев, Г.П. Протодьяконова, И.Б. Павлова, Н.Г. Павлов, Н.П. Тарабукина.; заявитель и патентобладатель ГНУ Якутский НИИСХ СО Россельхозакадемии. -№2009147566/15; заявл. 21.12.2009; опубл. 27.06.2011, Бюл. № 18.-4 с.
Научно-методическая литература
17. Краевая эпизоотология в Республики Саха (Якутия): учебное пособие. - Гл. 1.3.: Туберкулез / Н.И. Прокопьева, Г.П. Протодьяконова. - Якутск: Изд-во СО РАН, 2003. - С. 29-44.
18. Протодьяконова, Г.П. Лабораторная диагностика туберкулеза крупного рогатого скота: учеб.-метод. пособие / Г.П. Протодьяконова, Н.И. Прокопьева - М.: ВИНИТИ, 2011. - 80 с.
19. Протодьяконова, Г.П. Диагностика туберкулеза крупного рогатого скота [Электронный ресурс] / Н.И. Прокопьева, Г.П. Протодьяконова. Свид. о per. МСХ РФ № 15309 от 12.02.2010. - Код доступа: http://moodle.ysu.ru /course/view.php?id=788.
Работы, опубликованные в сборниках научных трудов, материалах конференций и других изданиях
20. Донченко, В.Н. Влияние условий культивирования на интенсивность роста микобактерий / В.Н. Донченко, E.H. Писаренко, Г.П. Протодьяконова // Диагностика и специфическая профилактика бруцеллеза и туберкулеза животных: сб. науч. тр. / Ин-т экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока. - Новосибирск, 1988. - С. 38-42.
21. Донченко, A.C. Эффективность методов иммунизации морских свинок вакциной БЦЖ / A.C. Донченко, В.Н. Донченко, Н.И. Воробьева, Г.П. Протодьяконова // Диагностика и специфическая профилактика бруцеллеза и туберкулеза животных: сб. науч. тр. / Ин-т экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока. - Новосибирск, 1988. - С. 28-32.
22. Протодьяконова, Г.П. Влияние иммуномодулятора на туберкулезный иммунитет телят / Г.П. Протодьяконова, A.C. Донченко // Общая и частная эпизоотология инфекционных болезней сельскохозяйственных животных: сб. науч. тр. / Ин-т экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока. — Новосибирск, 1990. - С. 39-46.
23. Протодьяконова, Г.П. Показатели аллергических реакций у животных, вакцинированных БЦЖ в сочетании с иммуномодулятором / Г.П. Протодьяконова, В.Н. Донченко, JI.C. Соколова // Инфекционные болезни животных. Эпизоотология, диагностика, профилактика и меры борьбы: сб. науч. тр. / Ин-т экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока. - Новосибирск, 1991.-С. 59-62.
24. Донченко, В.Н. Теория и практика повышения протективных свойств вакцины БЦЖ с помощью иммуномодулятора / A.C. Донченко, В.Н. Донченко, Г.П. Протодьяконова, JT.C. Соколова // Тезисы докладов III Всесоюзной конференции по эпизоотологии: материалы временных коллективов / Ин-т экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока. - Новосибирск, 1991. -С. 76-79.
25. Протодьяконова, Г.П. Способ профилактики туберкулеза у молодняка крупного рогатого скота / Г.П. Протодьяконова // Проблемы развития сельского хозяйства в условиях вечной мерзлоты: сб. материалов науч. экспедиции, (Якутск - Олекминск - Тикси - Якутск, 15-28 июля 1991 г.): в 2 т. / Сиб. отд-ние РАСХН, Науч.-произв. об-ние "Якутское" и др. - Новосибирск, 1993. - Т. 1. -С. 167-168.
26. Донченко, A.C. Повышение протективных свойств вакцины БЦЖ с помощью иммуномодулятора полирибоната при туберкулезе животных / A.C. Донченко, В.Н. Донченко, H.A. Донченко, Г.П. Протодьяконова, Ю.С. Аликин // Основные научные исследования по проблеме туберкулеза и бруцеллеза сельскохозяйственных животных, профилактика и организация мероприятий по ликвидации болезней в регионе в Сибири: тез. докл. науч.-практ. конф. / Ин-т экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока. -Новосибирск, 1995.-С. 54-55.
27. Протодьяконова, Г.П. Способ профилактики туберкулеза крупного рогатого скота / Г.П. Протодьяконова // Актуальные проблемы ветеринарно-санитарного контроля сельскохозяйственной продукции: тез. докл. 2-й между-нар. науч.-практ. конф. / Московский гос. ун-т прикладной биотехнологии. -М., 1997.-Ч. 1.-С. 73.
28. Протодьяконова, Г.П. Проблема туберкулеза крупного рогатого скота в PC (Я) / Г.П. Протодьяконова // Региональные проблемы сельскохозяйственного производства Республики Саха (Якутия): сб. тез. докл. науч.-практ. конф. -Якутск, 1999. - С. 62-63.
29. Протодьяконова, Г.П. Парааллергия при туберкулезе крупного рогатого скота / Г.П. Протодьяконова, A.A. Васильева // Региональные проблемы сельскохозяйственного производства Республики Саха (Якутия): сб. тез. докл. науч.-практ. конф. - Якутск, 1999. - С. 63-64.
30. Протодьяконова, Г.П. Эпидемиологическое значение микобактерий туберкулеза бычьего вида в PC (Я) / Г.П. Протодьяконова, В.Т. Захаров // Региональные проблемы сельскохозяйственного производства Республики Саха (Якутия): сб. тез. докладов науч.-практ. конф. — Якутск, 1999. — С. 65.
31. Протодьяконова, Г.П. Об очаговой рецидивности туберкулеза крупного рогатого скота в Якутии / Г.П. Протодьяконова, В.Ф. Чернявский, В.Т. Захаров // Современная фтизиатрия и проблемы туберкулеза XXI века: сб. тез. юбилейной науч.-практ. конф. фтизиатров, посвящ. 75-летию противотуберкулезной службы Томской области. - Томск, 1999. — С. 10-11.
32. Протодьяконова, Г.П. Вопросы взаимосвязи туберкулеза животных и человека в Якутии / Г.П. Протодьяконова, Г.И. Алексеева, В.Т. Захаров, Т.Д. Каратаева // Становление и зрелость сельскохозяйственной науки Якутии и пути ее развития в условиях рынка: сб. материалов науч.-практ. конф., посвящ. 60-летию организации в Якутии гос. селекционной и респ. животноводческой опытных станций / РАСХН, Сиб. отд-ние, Якутский науч.-исслед. ин-т сел. хоз-ва. - Новосибирск, 2000. - С. 320-322.
33. Протодьяконова, Г.П. Атипичные микобактерии — одна из причин сенсибилизации организма животных к туберкулину / Г.П. Протодьяконова, A.A. Васильева // Проблемы стабилизации и развития сельского хозяйства Казахстана, Сибири и Монголии: материалы 3-й междунар. науч-практ. конф. / РАСХН, Сиб. отд-ние и др. - Новосибирск, 2000. - С. 191-192.
34. Протодьяконова, Г.П. Прижизненная диагностика туберкулеза животных / Г.П. Протодьяконова // Научное сопровождение образовательного процесса агровуза: сб. материалов науч.-практ. конф., посвящ. 15-летию агро-вуза / Якутская гос. с.-х. акадеимя. - Якутск, 2001. - С. 27-28.
35. Протодьяконова, Г.П. Особенности туберкулезного процесса при новых условиях хозяйствования / Г.П. Протодьяконова, A.A. Васильева // Ветеринария Сибири. - 2002. - № 7-8. - С. 30-31.
36. Протодьяконова, Г.П. Вопросы диагностики и взаимосвязи туберкулеза крупного рогатого скота и человека в Якутии / Г.П. Протодьяконова, Н.Г. Павлов, Г.И. Алексеева // Научные труды молодых ученых аграрных вузов России : сб. ст. / Якутская гос. с.-х. акадеимя. - Якутск, 2003. — С. 64-67.
37. Протодьяконова, Г.П. Прижизненная дифференциальная диагностика туберкулеза крупного рогатого скота с применением полимеразной цепной реакции / Г.П. Протодьяконова, Н.Г. Павлов // Научные труды молодых ученых аграрных вузов России: сб. ст. / Якутская гос. с.-х. академия. — Якутск, 2003. -С. 71-74.
38. Прокопьева, Н.И. Туберкулез крупного рогатого скота: проблемы и перспективы научных исследований / Н.И. Прокопьева, Г.П. Протодьяконова, М.П. Неустроев // Роль сельскохозяйственной науки в стабилизации и развитии агропромышленного производства Крайнего Севера: сб. материалов науч.-практ. конф., посвящ. 45-летию Якут. НИИСХ СО РАСХН и 85-летию со дня рождения д-ра ветеринар, наук, проф., заслуж. ветеринар, врача ЯАССР, директора Якут. НИИСХ (1960-1988 гг.) М.Г.Сафронова / РАСХН, Сиб. отд-ние, Якутский науч.-исслед. ин-т сел. хоз-ва. - Новосибирск, 2003. - С. 332-336.
39. Протодьяконова, Г.П. Метод полимеразной цепной реакции для своевременного выявления и дифференциации микобактерий туберкулеза / Г.П. Протодьяконова, У.Н. Романова, A.A. Васильева, Л.И. Макарова // Роль сельскохозяйственной науки в стабилизации и развитии агропромышленного производства Крайнего Севера: сб. материалов науч.-практ. конф., посвящ. 45-летию Якут. НИИСХ СО РАСХН и 85-летию со дня рождения д-ра ветеринар, наук, проф., заслуж. ветеринар, врача ЯАССР, директора Якут. НИИСХ (19601988 гг.) М.Г.Сафронова / РАСХН, Сиб. отд-ние, Якутский науч.-исслед. ин-т сел. хоз-ва. - Новосибирск, 2003. - С. 336-338.
40. Протодьяконова, Г.П. Рецидивы туберкулеза животных в оздоровленных хозяйствах Якутии / Г.П. Протодьяконова // Ветеринария Сибири. - 2003. -№9-10.-С. 36-37.
41. Протодьяконова, Г.П. Диагностика туберкулеза у северных оленей / Г.П. Протодьяконова // Актуальные вопросы ветеринарной медицины: материалы Сибирской междунар. науч.-практ. конф. / Новосибирский гос. аграр. унт и др. - Новосибирск, 2004. - С. 141-142.
42. Егоров, Б.А. Взаимосвязь заболевания туберкулезом животных и человека в Якутии / Б.А. Егоров, Т.Д. Каратаева, Г.П. Протодьяконова, В.Т. Захаров, Г.И. Алексеева // Современные проблемы эпизоотологии: материалы междунар. науч. конф. / РАСХН, Сиб. отд-ние и др. - Новосибирск, 2004. - С. 85-86.
43. Павлов, Н.Г. Прижизненная диагностика туберкулеза крупного рогатого скота с применением полимеразной цепной реакции = The of polymerase chain reaction for life-time tuberculosis diagnosis in cattle / Н.Г. Павлов, Г.П. Протодьяконова, Г.И. Алексеева // Международный симпозиум Японо-Российского медицинского обмена (Ниигата, Япония, 10-11 авг. 2004 г.): сб. тез. докл. - Ниигата, 2004. - С. 269.
44. Павлов, Н.Г. Прижизненная дифференциальная ПЦР-диагностика туберкулеза крупного рогатого скота / Н.Г. Павлов, Г.П. Протодьяконова, Г.И. Алексеева // Проблемы туберкулеза в Якутии: эпидемиология, организация и лечение : сб. тр. 1П (XXVI): (по материалам республ. науч.-практ. конф. «Разработка и внедрение новых технологий по проблемам туберкулеза») / Якутский науч.-исслед. ин-т туберкулеза. - Якутск, 2004. — С. 141-142.
45. Прокопьева, Н.И. Проблемы обеспечения благополучия животноводства Республики Саха (Якутия) по туберкулезу / Н.И. Прокопьева, Г.П. Протодьяконова // Проблемы развития и научное обеспечение АПК Якутии: материалы совместного выездного заседания Президиума РАСХН, Президиума СО РАСХН и Совета ДВНМЦ РАСХН / РАСХН, Сиб. отд-ние, Якутский науч.-исслед. ин-т сел. хоз-ва. - Новосибирск, 2006. - С. 111-114.
46. Протодьяконова, Г.П. Опыт применения ПЦР в диагностике туберкулеза крупного рогатого скота / Г.П. Протодьяконова, Н.Г. Павлов // Энтузиазм и творчество молодых ученых в развитии фундаментальной и прикладной науки: материалы X междунар. науч.-практ. конф. молодых ученых и специалистов / М-во с/х РФ, Уральская гос. акад. ветеринар, мед. - Троицк, 2006. - С. 124-125.
47. Протодьяконова, Г.П. Эпизоотологическое значение микобактерий туберкулеза человеческого вида в Якутии / Г.П. Протодьяконова, Н.Г. Павлов //
Наука в аграрном вузе : инновации, проблемы и перспективы: материалы III междунар. науч.-практ. конф. к 50-летию высш. аграр. образования в PC (Я) / Якутская госуд. с.-х. академия. - Якутск, 2007. - С. 161.
48. Павлов, Н.Г. Эпизоотология туберкулеза крупного рогатого скота в Якутии / Н.Г. Павлов, Г.П. Протодьяконова // Проблемы туберкулеза в Якутии : эпидемиология, организация и лечение: сб. тр. V (XXVIII) / М-во здравоохранения PC (Я), ГУ НПЦ «Фтизиатрия». - Якутск, 2007. - С. 51-60.
49. Протодьяконова, Г.П. Использование электронных учебных пособий в образовательном процессе / Г.П. Протодьяконова, Н.И. Прокопьева // Организация образовательного процесса в современных условиях: материалы учеб.-метод. конф. / Якутская гос. с.-х. академия. - Якутск, 2009. - 164 с.
50. Прокопьева, Н.И. Мониторинг туберкулеза крупного рогатого скота в Республике Саха (Якутия) / Н.И. Прокопьева, Г.П. Протодьяконова // Женщины в реализации национальных проектов: материалы, науч.-практ. конф. -Якутск, 2009. - С. 320-323.
51. Неустроев, М.П. Мониторинг эпизоотической ситуации по туберкулезу крупного рогатого скота в PC (Я) / М.П. Неустроев, Н.И. Прокопьева, Г.П. Протодьяконова // Современные проблемы диагностики и профилактики хронических зооантропонозных инфекций: материалы Всерос. науч.-практ. конф. / РАСХН, Сиб. отд-ние и др. - Омск, 2009. - С. 143-145.
52. Неустроев, М.П. Итоги и перспективы научных исследований по профилактике и борьбе с туберкулезом крупного рогатого скота / М.П. Неустроев, Н.И. Прокопьева, Г.П. Протодьяконова, Н.Г. Павлов // Андреев Ефрем Николаевич: жизнь и деятельность выдающегося организатора здравоохранения и медицинской науки, видного государственного и общественного деятеля Якутской АССР: материалы науч.-практ. конф., посвящ. 100-летию со дня рождения / М-во здравоохранения PC (Я), ГУ НПЦ «Фтизиатрия». - Якутск, 2009.-С. 85-89.
53. Протодьяконова, Г.П. Ветеринарно-санитарная экспертиза при подворном убое реагирующих на ППД туберкулин животных в условиях Республики Саха (Якутия) / Г.П. Протодьяконова, М.Х. Малтугуева // Научные труды Уральской государственной академии ветеринарной медицины. - Троицк, 2009 - Т. XV. - С. 87-89.
54. Неустроев, М.П. Система контроля за проявлением микобактериозов крупного рогатого скота в условиях Якутии / М.П. Неустроев, Н.И. Прокопьева, Г.П. Протодьяконова, Н.П. Тарабукина, H.A. Обоева, Н.Г. Павлов // Научное обеспечение решения ключевых проблем развития г. Якутска: материалы науч. сессии / Акад. наук PC (Я) и др. - Якутск, 2010. - С. 235-239.
55. Прокопьева, Н.И. Диагностика туберкулеза крупного рогатого скота (электронное учебное пособие) / Н.И. Прокопьева, Г.П. Протодьяконова, Н.Г.Павлов, H.A. Обоева // Успехи современного естествознания. - 2010 -№ 2. - С. 32-33.
56. Прокопьева, Н. И. Эпизоотический мониторинг микобактериозов крупного рогатого скота в Якутии / Н.И. Прокопьева, Г.П. Протодьяконова, H.A. Обоева // Актуальные проблемы инфекционных болезней молодняка и
других возрастных групп сельскохозяйственных животных, рыб и пчел: материалы междунар. науч.-практ. конф., посвящ. 50-летию со дня основания лаборатории лейкозол огии, лаборатории ихтиопатологии и отдела охраны полезной энтомофауны / РАСХН и др. - Москва, 2011. - С. 194-196.
57. Протодьяконова, Г.П. Применение пробиотика при экспериментальном туберкулезе / Г.П. Протодьяконова, М.П. Неустроев, Н.П. Тарабукина, Н.И. Прокопьева, Н.Г. Павлов, H.A. Обоева // Новейшие IT-технологии : модернизация аграрного образования и внедрение инноваций в АПК: материалы междунар. науч.-практ. конф. / Якутская гос. с.-х. академия. - Якутск, 2011. -С. 109-113.
58. Тарабукина, Н.П. Перспективность использования штаммов бактерий Bacillus subtilis, выделенных из мерзлотных почв Якутии в медицине / Н.П. Тарабукина, М.П. Неустроев, М.П. Федорова, С.И. Парникова, С.Г. Петрова, Г.П. Протодьяконова // Высокие технологии, фундаментальные и прикладные исследования в физиологии и медицине: сб. ст. 2-й междунар. науч.-практ. конф. / Рос. акад. наук, Ин-т цитологии и др. - СПб., 2011. - Т. 3. - С. 76-77.
59. Протодьяконова, Г.П. Новый способ подавления патогенных свойств микобактерий туберкулеза / Г.П. Протодьяконова, М.П. Неустроев, Н.П. Тарабукина // Strategiczne pytania swiatowej nauki - 2012 : materialy VIII miçdzynaro-dowej naukowi - praktycznej konferencji. - Przemysl, 2012. - Vol. 25. Nauk biologicznych. Fizycna kultura i sport. - P. 21-24.
60. Протодьяконова, Г.П. Использование пробиотика при экспериментальном туберкулезе животных / Г.П. Протодьяконова // Результаты исследований получателей грантов Президента PC (Я) и государственных стипендий PC (Я) за 2011 год: сборник / Акад. наук PC (Я). - Якутск, 2012. - С. 107-110.
61. Протодьяконова, Г.П. Лабораторная диагностика туберкулеза крупного рогатого скота / Г.П. Протодьяконова, Н.И. Прокопьева // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. - 2013. - № 2. -С.16-17.
62. Протодьяконова, Г.П. Комплексные научные исследования по туберкулезной инфекции / Г.П. Протодьяконова // Здоровьесбережение народа [Электронный ресурс] : интеграция Восток - Запад: сб. материалов междунар. симпозиума, посвящ. 20-летней науч.-практ. деятельности в Республике Саха (Якутия) д-ра биолог, наук, канд. мед. наук, проф. тибетской медицины, духовного просветителя Буджав Баасансурэна / Якут. гос. с.-х. акад. - Электрон, текст, данные. - Киров: МЦНИП, 2014. - С. 193-204. - 1 электрон, опт. диск (CD-ROM). - ISBN 978-5-906223-86-9.
63. Протодьяконова, Г.П. Особенности диагностики туберкулеза у северных оленей и лесных бизонов / Г.П. Протодьяконова, Н.И. Прокопьева // Най-новите научни постижения - 2014: материали за X международна научна практична конференция. - София, 2014. - Т. 27. Селско стопанство. Ветеринарна наука. - С. 53-55.
Подписано в печать 01.09.2015 г. Формат 60x84 7i6. Объем 2 п. л. Заказ № 45. Тираж 100 экз.
Отпечатано в СибНСХБ 630501, Новосибирская обл., пос. Краснообск
-
Протодьяконова, Галина Петровна
-
доктора ветеринарных наук
-
Новосибирск, 2015
-
ВАК 06.02.02
- Ретроспективный анализ изменений эпизоотической ситуации по туберкулезу крупного рогатого скота в Российской Федерации за 1951-2009 гг.
- Анализ эпизоотических и эпидемиологичских процессов при туберкулезе и совершенствование методов диагностики
- Особенности диагностики туберкулеза крупного рогатого скота в общественном и частном секторе
- Эпизоотическое проявление острых (бешенство) и хронических (туберкулез) инфекций животных в условиях Волгоградской области
- Совершенствование диагностики, профилактики и мер ликвидации туберкулеза крупного рогатого скота в зоне длительного неблагополучия
