Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Усовершенствование средств диагностики и идентификации возбудителя сибирской язвы

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Буерова, Светлана Васильевна

Введение

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Современные представления о возбудителе сибирской язвы

1.2. Химический состав и антигенная структура возбудителя сибирской язвы

1.3. Лабораторная диагностика возбудителя сибирской язвы

1.4. Современное состояние и перспективы совершенствования иммуноферментного анализа

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы

2.2. Сравнительный анализ полипептидного состава экстрактов клеток возбудителя сибирской язвы и аэробных спорообразующих бактерий

2.2.1. Изучение полипептидного профиля возбудителя сибирской язвы и аэробных спорообразующих бактерий в различных системах ПААГ

2.2.2. Анализ электрофореграмм полипептидного спектра возбудителя сибирской язвы и аэробных спорообразующих бактерий, окрашенных азотнокислым серебром

2.3. Выявление и выделение специфических антигенов возбудителя сибирской язвы

2.3.1. Разработка способов экстракции соматических антигенов Вас. anthracis

2.3.2. Выявление специфических антигенных структур Вас. anthracis методом иммуноблотинга

2.3.3. Выделение и очистка специфического соматического антигена возбудителя сибирской язвы с Мм 92 кД

2.3.4. Определение активности и специфичности сибиреязвенного

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ИФА - иммуноферментный анализ

РА - реакция агглютинации

ПЦР - полимеразная цепная реакция

АГ - антиген

РН - реакция нейтрализации

РИГА - реакция непрямой гемагглютинации

РДП - реакция диффузионной преципитации

МПА - мясо-пептонный агар

МПБ - мясо-пептонный бульон

ДПК - дипиколиновая кислота

ИПК - иммунопероксидазный конъюгат

ДСН - додецилсульфат натрия

ПААГ - полиакриламидный гель

ПА - протективный антиген

АЭ - антиген-экстракт

АТЭ - антиген-термоэкстракт

БМВ - белки внешней мембраны

Введение Диссертация по биологии, на тему "Усовершенствование средств диагностики и идентификации возбудителя сибирской язвы"

Актуальность темы. Несмотря на достигнутые успехи в изучении проблемы сибирской язвы, до сих пор эта инфекция имеет довольно широкое распространение во многих странах мира и на территории бывшего СССР. Эпизоотические вспышки, нередко наблюдаемые по настоящее время в животноводческих хозяйствах многих регионов России, наносят большой экономический ущерб в связи с гибелью сельскохозяйственных животных, а также необходимостью проведения широкого комплекса трудоемких мероприятий по ликвидации последствий эпизоотий, требующих больших материальных и физических затрат. В свою очередь, возникновение и распространение сибирской язвы среди животных создает реальную угрозу поражения людей этой инфекцией. При этом заболевание сибирской язвой продолжает характеризоваться высокой летальностью даже в условиях применения современных лекарственных препаратов, достаточно эффективных при других инфекциях.

В последние годы эта проблема приобрела особую актуальность в связи с возможностью осуществления биотерроризма. По мнению некоторых исследователей, современный уровень развития биотехнологии и генетики, относительная дешевизна производства биологических процедур и чрезвычайно высокая поражающая способность и устойчивость к факторам внешней среды делают этот возбудитель одним из наиболее привлекательных для использования его в качестве биологического диверсионного агента для террористов (Heselson N., Guilemin J., Hugh J. и др., 1993).

Все это определяет актуальность работ по дальнейшему более углубленному изучению сибиреязвенной инфекции. В первую очередь, это касается установления таксономического статуса большой группы микроорганизмов, близких по своим основным свойствам к возбудителю сибирской язвы, что позволит более надежно осуществлять дифференциальную диагностику при проведении идентификации сибиреязвенного микроба.

Общеизвестно, что одним из возможных современных путей усовершенствования противосибиреязвенных препаратов является использование так называемых субъединичных, расщепленных или молекулярных вакцин. Однако, для создания их необходимо прежде всего выявить структурный антиген, несущий протективную функцию, который потенциально пригоден для совершенствования химической вакцины в качестве компонента, обеспечивающего формирование антибактериального иммунитета (Little и др., 1986; Turnbull и др., 1988; Perard и др., 1995).

Таким образом, представляется актуальным изучение антигенной структуры сибиреязвенного и близкородственных микробов, установление их таксономического статуса, разработка методов выделения и очистки видоспецифических активных диагностических препаратов и изыскание возможности их применения для усовершенствования методов диагностики и идентификации возбудителя сибирской язвы.

Цель и задачи исследований. Основной целью исследований являлось сравнительное изучение полипептидного состава и антигенной структуры возбудителя сибирской язвы и аэробных спорообразующих бактерий, оценка возможности использования выделенных очищенных антигенов сибиреязвенного микроба для конструирования диагностических препаратов.

В связи с этим при выполнении работы решались следующие задачи:

- изучить полипептидные профили производственных и музейных штаммов возбудителя сибирской язвы и близкородственных бактерий с целью установления их таксономической принадлежности.

- провести сравнительное изучение антигенного состава экстрактов клеток музейных штаммов возбудителя сибирской язвы и близкородственных бактерий с целью выявления видоспецифических антигенов.

- разработать высокоэффективные способы изоляции и очистки поверхностного белкового антигена с Мм 92 кД.

- выделить Р(аЬЛ)2-фрагменты иммуноглобулинов класса G сыворотки крови и получить высокоспецифичные иммунопероксидазные конъюгаты на их основе.

- оценить пригодность очищенных антительных и антигенных компонентов для конструирования диагностических ИФА тест-систем с целью идентификации возбудителя сибирской язвы.

Научная новизна работы.

- впервые проведен сравнительный анализ полипептидного профиля и антигенного состава экстрактов клеток производственных и музейных штаммов Вас. anthracis в зависимости от видовых, вирулентных и штаммовых особенностей возбудителя.

- оптимизирована технология экстракции и очистки поверхностного сибиреязвенного антигена с Мм 92 кД, что позволило использовать его для разработки эффективных средств диагностики возбудителя сибирской язвы.

- впервые в ветеринарной практике сконструирована диагностическая ИФА тест-система на основе F(afcT )2-фрагментов антител.

Практическая значимость работы.

- результаты сравнительного изучения антигенной структуры Вас. anthracis и близкородственных сапрофитов рекомендуется учитывать при их идентификации.

- разработанный препаративный метод позволяет получать очищенный ви-доспецифический сибиреязвенный антиген с Мм 92 кД в количествах, достаточных для его практического применения.

- сконструированная иммунопероксидазная тест-система на основе F(ab')2-фрагментов антител рекомендуется для использования в ветеринарной практике в целях идентификации возбудителя сибирской язвы.

Апробация работы. Результаты выполненных исследований доложены и обсуждены на заседаниях лаборатории по хранению и изучению штаммов возбудителей особо опасных болезней животных ВНИВИ (г.Казань). А также основные 8 положения диссертации доложены на 2-ой республиканской конференции молодых ученых «Молодые ученые - агропромышленному комплексу» (Казань, 2000), на Всероссийской научно-практической конференции «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов», посвященной 30-летию ВНИИТиБП (Щелково, 2000), на научно-производственной конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии (Казань, 2001).

Публикация. По материалам диссертации опубликовано 7 научных работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 168 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка использованной литературы. Работа иллюстрирована 9 таблицами, 22 рисунками. Список использованной литературы включает 288 наименований, из них 125 источников отечественных авторов, 163 - зарубежных.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Буерова, Светлана Васильевна

выводы

1. Экспериментальным путем подобраны оптимальные условия для анализа методом электрофореза в ПААГ полипептидов клеточных лизатов штаммов возбудителя сибирской язвы и аэробных спорообразующих бактерий, позволяющие характеризовать их по видовой принадлежности.

2. Разделение полипептидов в градиентной концентрации ПААГ обладает более высокой разрешающй способностью по сравнению с однородной системой. Метод импрегнация пластин геля азотнокислым серебром является более чувствительным по сравнению с окраской Кумасси голубым R-250 и позволяет выявлять дополнительные компоненты (до 20 фракций) у штаммов возбудителя сибирской язвы и аэробных спорообразующих бактерий.

3. Штаммы возбудителя сибирской язвы имеют характерные полипептиды, выраженные в виде триплета 87-90-92 кД, которые отсутствуют у аэробных спорообразующих бактерий, за исключением Вас. cereus, содержащего фракцию Мм 87 кД, что служит доказательством их близкого генетического родства. Вирулентные штаммы возбудителя сибирской язвы содержат мажорный полипетид Мм 42 кД.

4. Споровые формы возбудителя сибирской язвы и аэробных спорообразующих бактерий содержат меньшее количество полипептидов по сравнению с вегетативными формами, вследствие чего являются более эффективной моделью для получения высокоспецифичных диагностических препаратов.

5. Методом иммуноблота установлено наличие до 15 общих антигенных детерминант у возбудителя сибирской язвы и аэробных спорообразующих бактерий. Наиболее близким антигенным родством характеризуются Вас. anthracis и Вас. cereus.

6. Оптимизирована технология выделения и очистки поверхностного серо-активного полипептида с Мм 92 кД споровой и вегетативной форм возбудителя

137 сибирской язвы, позволяющего получать высокоспецифичные диагностические препараты.

7. Предложены эффективные способы выделения иммуноглобулинов класса G из гипериммунных сывороток крови. Разработана технология выделения Р(аЬГ)2-фрагментов антител из высокоспецифичных диагностических сывороток.

8. Применение в иммуноферментном анализе иммунопероксидазных конъюгатов на основе Р(аЬГ)2-фрагментов антител IgG гипериммунных сывороток повышает чувствительность и специфичность ИФА возбудителя сибирской язвы.

138

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

На основании проведенных исследований разработаны:

1. «Временная инструкция по изготовлению и контролю антигена сибиреязвенного субъединичного», утвержденная директором ВНИВИ и рассмотренная Ветфармсоветом ДВ Минсельхоза России.

2. «Временное наставление по применению антигена сибиреязвенного субъединичного для определения поствакцинального иммунитета животных в ИФА», утвержденное директором ВНИВИ и рассмотренное Ветфармсоветом ДВ Минсельхоза России.

3. «Временное наставление по применению антигена сибиреязвенного субъединичного для получения диагностических сывороток», утвержденное директором ВНИВИ и рассмотренное Ветфармсоветом ДВ Минсельхоза России.

4. «Технические условия на антиген сибиреязвенный субъединичный», утвержденные директором ВНИВИ и рассмотренные Ветфармсоветом ДВ Минсельхоза России.

5. «Методические рекомендации по изготовлению противосибиреязвен-ных иммунопероксидазных конъюгатов на основе Р(аЬ')2-фрагментов иммуноглобулинов G», одобренные НМС ВНИВИ и утвержденные директором института.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Буерова, Светлана Васильевна, Казань

1. Абалакин В. А. Оценка антитоксического противосибиреязвенного иммунитета. // ЖМЭИ.-1990.-№ 12.-С.78-82.

2. Абалакин В. А., Буравцева Н. П., Черкасский Б. Л. Влияние летального сибиреязвенного токсина на функциональную активность перитонеальных моно-нуклеарных фагоцитов и полиморфноядерных нейтрофилов. // ЖМЭИ.-1990.-№ 2,- С.62-67.

3. Абалакин В.А. Влияние протективного антигена Вас. anthracis на формирование иммунитета под действием сибиреязвенных живых вакцин. // ЖМЭИ.-1990.-№ 5.-С.72-75.

4. Абалакин В. А., Черкасский Б.Л. Использование твердофазного иммунофер-ментного метода (ТИФА) для изучения специфической антигенемии при сибирской язве. // Актуальные вопросы иммунодиагностики особо опасных инфекций.-Ставрополь.- 1986.-Вып. 1 .-С.5-7.

5. Абдуллин X. X. Эволюция возбудителя сибирской язвы. // Ученые записки Казан. вет. ин-та.-1976.-Т.122.-С.10-13.

6. Абдуллин Х.Х. О переходе сибиреязвенного микроба в ложносибиреязвенный. //Ученые записки Казан, вет. ин-та.-1952.-Т.59.-С. 15-16.

7. Авакян А. А., Кац Л. Н., Павлова И. Б. Атлас анатомии бактерий, патогенных для человека и животных. // Москва.-1972.-С.70.

8. Агбарян А. Г., Еременко Е. И., Саркисова Н. В. Возможности использования некоторых праймеров в ПЦР для индикации сибиреязвенного микроба. // Материалы юбилейной науч. конф., посвященной 70-летию НИИ микробиологии МО РФ.-Киров.- 1998.-С.40.

9. Азизбекян Р. Р., Белых Р. А., Нетыкса В. Р. Сравнительная характеристика штаммов Bacillus thuringiensis, образующих R- и S-формы колоний. // Тез. докл. 3 семинара.-Вильнюс.-1976.-С.21.

10. Ю.Аксенов М. Ю., Гинцбург A. JI. Диагностика инфекционных заболеваний с помощью метода полимеразной цепной реакции. // Молекул. Генетика, микро-биол. и вирусол.- 1993.-№ 4.-С.З-8.

11. Алимов А. М., Коксин В. П., Галиуллин А. К., Табакова Н. И. Иммунологическая оценка антигенов болезни сибирской язвы. / В книге: 100 лет Курской биофабрике и агробиологической промышленности России: Тез. докл. науч.-произв. конф. //Курск.-1996.- С. 12.

12. Алимов А. М., Садыков Н. С., Капарович Т. В. Аллергическая диагностика сибирской язвы и бациллоносительства у животных. // Диагностика зараз, заболеваний с.-х. животных.-Казань.-1982.-С. 3-10.

13. Алимов А. М., Фаизов Т. X. Биотехнологические аспекты повышения эффективности диагностики и профилактики инфекционных болезней животных. // Материалы междунар. науч. конф., посвященной 125-летию академии (28-30 мая 1998г.).-Казань.-1998.-С.-11.

14. Бадашкеева А. А., Кнорре Д. Г. Олиго- и полинуклеотидные зонды. Метод молекулярной гибридизации. // Молекулярная биология.-1991.-Т.25,вып.2.-С.309-324.

15. Бакулов И. А., Гаврилов В. А., Селиверстов В. В. Сибирская язва (антракс): новые страницы в изучении «старой болезни». // Владимир: «Посад».-2000.-С.85-86.

16. Безносов М. В., Петров Г. А., Соркин Ю А. Выделение поверхностного антигена из вегетативных клеток Bacillus anthracis СТИ-1. // ЖМЭИ.- 1997.-№ 1.-С. 9-13.

17. Безносов М. В., Петров Г.А. Получение и характеристика специфических соматических белковых антигенов сибиреязвенного микроба. // Бактериальные токсины: Тез. докл. 2-ой Всесоюз. конф. 27-30 ноября 1989.- Юрмала.-1989.-С.8.

18. Белоконов И. И. Электронно-микроскопические исследования сибиреязвенной бациллы в процессе образования и прорастания спор. // Автореф. дисс. . канд. биол. наук.-Харьков.-1970.-С.18.

19. Бургасов П. Н., Рожков Г. И. Сибиреязвенная инфекция. // Москва: «Медицина»,-1984.-С.208.

20. Бургасов П. Н., Черкасский Б. Л., Марчук Л. М., Щербак Ю. Ф. Сибирская язва. // Москва: « Медицина».-1970.-С.128.

21. Бусыгин К. Ф. К дальнейшему совершенствованию методики использования флюоресцирующих антител для ускоренного обнаружения возбудителя сибирской язвы в почве и воде. // Учен. зап. Казанского вет. ин-та.-1962.-Т.84.-С.65-68.

22. Ванеева Л. И., Цветкова Н. В. Иммуноферментный метод, его настоящее и будущее. // Иммунология.-1980.-№ 2.-С.13-19.

23. Ванеева Н. П., Цветкова Н. В., Руднева Р. Г. и др. Диагностика стафилококковых заболеваний с помощью иммуноферментной реакции. // ЖМЭИ.-1984.-№ 6.-С.61.

24. Васильев П. Г. Актуальные проблемы сибирской язвы: биология и индикация возбудителя, клиника, патоморфология и диагностика заболевания. // Автореф. дис. . доктора биол. наук.-Казань.-2000.-С.З-6.

25. Великорецкий А. Н., Нечаев Н. С. Сибирская язва. // Новочеркасск,-1914.-С.23.

26. Волкова В. П., Вернер О. М., Синяк К. М. Спорообразование у возбудителя сибирской язвы в модельных почвенных условиях. // Микробиология.-1988,-Т.50.-№ 6.-С.31-36.

27. Гааль Э., Медьеши Г., Верецки JI. Электрофорез в разделении биологических макромолекул. //Москва: «Мир».-1982.-С.25-34.

28. Галиуллин А. К., Коксин В. П., Салмаков К. М., Алимов А. М. Диагностическое значение субъединичного сибиреязвенного антигена. // Ветеринария.-1996.-№1.-С.17-19.

29. Гинсбург Н. Н. Сибирская язва. // Москва: «Медицина».-1975.-С. 152.

30. Гинсбург Н. Н., Левина Е. Н., Федотова Ю. М. Современная характеристика возбудителя сибирской язвы. // В кн: Сибирская язва.-1975.-С.6-39.

31. Голубинский Е. П., Меринов С. П., Рудник М. П. Разработка и внедрение в практику иммуноферментного метода диагностики особо опасных инфекций. // Современные аспекты профилактики зоонозных инфекций.-Иркутск.-1984,-№ 2.-С.127-130.

32. Дацюк И. М., Коструба М. Ф. Электрофоретическое исследование пропионо-вокислых бактерий при разных условиях культивирования. // Микробиол. журнал,-1975.-№ 6.-С.688-692.

33. Дегтева Г. К., Носова Т. В., Казанская Г. М. Расследование пищевых токсико-инфекций стафилококковой этиологии с использованием сопоставления спектра внеклеточных белков выделенных возбудителей. // ЖМЭИ.-1990.-№ 3,-С.31-34.

34. Дунаев Г. В. Люминесцентно-микроскопическое изучение ядерного аппарата и митохондрий сибиреязвенной бациллы. // Ветеринария.-Вып.12.-Киев: УАСХН.-1967.-С.25-27.

35. Дунаев Г. В., Белоконов И. И. Электронно-микроскопическое изучение сибиреязвенной бациллы в процессе образования протективного антигена. // Актуальные вопросы профилактики сибирской язвы в СССР.-Москва.-1971.-С.76-78.

36. Дыхно М. М., Фадеева Н. И., Першин Г. Н., Сарычева И. М. Характеристика белковых спектров отдельных представителей микобактерий. // ЖМЭИ.-1975.-№ 1.-С.108-112.

37. Егоров А. М. Современное состояние и перспективы развития иммунофер-ментного анализа. // Методы иммуноферментного анализа в биологии и меди-цине.-Москва.-1983 .-С.З -24.

38. Егоров А. М., Осипов А. П., Дзантиев Б. Б., Гаврилов Е. М. Теория и практика иммуноферментного анализа. // Москва: Высшая школа.-1991.-С.64-79.

39. Егоров В. И., Спицын Н. А. Некоторые особенности газообмена и азотистого обмена в процессе роста и развития сибиреязвенного микроба. // Ветерина-рия.-1961.-№ 2.-С.45-47.

40. Езепчук Ю. В. Биохимические основы иммуногенности Вас. anthracis. Некоторые аспекты физиологии Вас. anthracis в связи с биосинтезом протективного антигена. //Автореф. дис. . докт. биол. наук.-Москва.-1968.-С.22-24.

41. Езепчук Ю. В. Протективный антиген Вас. anthracis и его взаимоотношения с другими антигенами этого микроба. (Обзор). // ЖМЭИ.-1968.-№ 11.-С.37-42.

42. Езепчук Ю. В., Бобкова Е. Д., Просветова Н. К. О токсических и некоторых биохимических свойствах фильтратов Вас. anthracis и cereus. // ЖМЭИ.-1969.-№6.-С.119-123.

43. Еременко В. В., Николаев A. JI. Катаболитная репрессия образования ферментов у микроорганизмов. // Проблемы регуляции обмена веществ у микрорга-низмов.- Пущино на Оке.-1973.-С.62-63

44. Звягинцева И. С., Быкова С. А., Гальченко В. Ф. Таксономическая структура галоархей, выявленная методом гель-электрофореза клеточных белков. // Микробиология,-1999.-Т.68.-№ 2.-С.283-288.

45. Ивашкевич П. А., Михайлов Б.Я., Рожков Г. И., Тамарин А. Л. Определение жизнеспособности спор в сибиреязвенной вакцине СТИ с помощью микрокультур. //Микробиология.-1959.-№ 10.-С.28-30.

46. Ипатенко Н. Г. Дифференциально-диагностическая питательная среда для выращивания Вас. anthracis. // Сб. научн. тр. ВГНКИ.-Т.55.-1994.-С.40-41.

47. Ипатенко Н. Г. Изучение культурально-морфологических и вирулентных свойств Вас. anthracis. // Ветеринария.-1967.-№ 3.-С.21-22.

48. Ипатенко Н. Г., Гаврилов В. А., Зелепукин В. С., Маничев А. А., Бахтаров С. И., Сайиткулов Б. С., Татаринцев Н. Т. Сибирская язва. // Москва: «Колос».-1996.-С.335.

49. Ипатенко Н. Г., Маничев А. А., Шморгун Б. И., Тихонов В. Л., Калунов Ю. А. Дифференциация Вас. anthracis от спорообразующих почвенных бацилл. // Ветеринария." 1995.-№ 7.-С. 19-22.

50. Ипатенко Н. Г., Седов В. А., Зелепукин В. С. Сибирская язва сельскохозяйственных животных. //Москва: «Агропромиздат».-1987.-С.256.

51. Ипатенко Н. Г., Федоров Ю. А., Филлипов Н. В. Особенности развития сибиреязвенного процесса. // Ветеринария.-2000.-№ 2.-С.22-25.

52. Калашник Н. М. Сибиреязвенные антигены для реакции диффузионной преципитации в геле. // Ветеринария.-Киев.-1967.-Вып.12.-С.96-99.

53. Калашник Н. М., Дунаев Г. В. Токсинообразование бациллы цереуса как критерий для дифференциации возбудителя сибирской язвы. // Вопр. эффективности противосибиреязвенных мероприятий: Материалы Всесоюз. науч. симпоз.-Москва.-1974.-С. 136-138.

54. Калинин Н. JL, Шаханина К. JL, Кулякина М. Н. Количественный анализ Вас. anthracis с использованием конъюгата агглютинина сои. // Молекул, генетика, микробиол. и вирусол.-1993.-№ 6.-С.27-66.

55. Калинин Н.Л. Лектины в микробиологических диагностику мах: универсальное средство или всего лишь проба на гликозилированность. // Молекул, генетика, микробиол. и вирусол.-1995.-№ 1.-С.З-8.

56. Климова Н. Е., Златкин И. В., Никитин Д. И. Таксономическая характеристика олиготрофных бактерий на основании изучения белкового компонента мембран. // Микробиология,-1993 .-Т.62.-Вып.2.-С.276-282.

57. Колесник Р. С., Петров Г. А., Саппо С. Г., Безносов М. В. Экспериментально-морфологические данные к оценке иммуногенности антигенных препаратов из Bacillus anthracis СТИ-1. // Деп. в ВИНИТИ 12.06.94, № 1087-В-94.-Иркутск,-1994.-С.6.

58. Колесов С .Г. Сибирская язва. // Москва: «Колос».-1976.-С.22.

59. Коротич А. С., Погребняк Л. И. Сибирская язва. // Киев: «Урожай».-1976.-С.17-18.

60. Краминский В. А., Соркин Ю. И. Некоторые вопросы палеоэпизоотологии и палеоэпидемиологии сибирской язвы. // Сиб. язва в СССРи перспективы ее ликвидации: Материалы Всесоюз. совещ.-Москва.-1968.-С.51-54.

61. Красов В. М. Зависимость протеолитических свойств Bacillus anthracis от структуры азотистого субстрата среды. // Ветеринария.-1940.-№ 4.-С.З-10.

62. Кулаков Ю. К., Желудков М. М., Лаврова В. А. и др. Сравнительный анализ антигенов различных видов Brucella методом иммуноблота с антисыворотками иммунизированных кроликов. // Микробиология.-1998.-С.7-17.

63. Леви М. И., Венгеров Ю. Ю., Волков Д. В. и др. Использование моноклональ-ных антител в иммуноферментном анализе для доказательства одновалентности антигена. // ЖМЭИ.-1984.-№ 11.-С.84-88.

64. Леви М. И., Смирнова Э. И. Теоретическая схема иммуноферментного анализа (вариант «сандвич»). // ЖМЭИ.-1989.-№ 4.-С.42-44.

65. Левина Е. Н., Архипова В. Р. Изучение сибиреязвенных бактериофагов. // ЖМЭИ.-1967.- № 9.-С.32-36.

66. Левина Е. Н., Кац Л. Н., Авакян А. А. Люминесцентно-серологический метод выявления бацилл сибирской язвы. // Люминесцирующие антитела в микро-биологии.-Москва.-1962.-С.34-35.

67. Лесняк О. Т., Салтыков Р. А. Получение экзотоксина сибиреязвенного вакцинного штамма СТИ-1. // ЖМЭИ.-1974.-№ 2.-С.110-112.

68. Маренникова С. С., Хабахпашева Н. А., Мальцева Н. Н. Получение и сравнительная оценка пероксидазных конъюгатов на основе чистых антител и Fab-фрагмента IgG. // ЖМЭИ.-1982.-№ 9.-С99-109.

69. Машков А. В. Антигенные свойства сибиреязвенных культур в капсульной и бескапсульной формах и диагностическое значение соответствующих им сывороток. // Тез. науч. работ ВНИИ вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова. -1956.-С.98-99.

70. Мещеряков А. Я. Опыт получения высокоспецифичной преципитирующей сибиреязвенной сыворотки. // Труды ВИЭВ.-1961.-Т.25.-С.384-398.

71. Михайлов Б. Я., Рожков Г. И., Тамарин А. Л. Экспрессный метод диагностики и инфекции возбудителя сибирской язвы. // Микробиология.-1960.-№ 11.-С.10-15.

72. Михин Н. А. Сибирская язва человека и сельскохозяйственных животных. // Москва: «Медгиз».-1942.-С.-98.

73. Михин Н. А., Леонов Н. И. Курс ветеринарной микробиологии. // Москва: «Сельхозгиз».-1938.-С.212-218.

74. Мнацаканян А. Г. К вопросу эпидемиологии и эпизоотологии сибирской язвы. // В кн: Бруцеллез, туляремия и сибирская язва на Кавказе. Тез. докл., Ставро-поль.-1967.-№ 7.-С.41-45.

75. Нго Т. Т., Ленхофф Г. Электрофоретический перенос в сочетании с иммуно-ферментным анализом. // В кн: Иммуноферментный анализ.-Москва: «Наука».-1987.-С.341-350.

76. Орлов А. Б. Характеристика иммуноферментного метода и оценка его возможностей с позиций экспресс-диагностики. // Препараты для экспресс- диагностики.^-Ленинград.-1981.-С.55-59.

77. Остерман Л. А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот. Электрофорез и ультрацентрифугирование. // Москва: «Наука».-1981.-С. 114-119.

78. Райхер И. И. Очищенные антитоксины (выделение из противодиф. и противостолбн. сывороток с помощью иммуносорбции, изучение , перспективы практического применения). //Дис. . докт. биол. наук.-Пермь.-1973.

79. Райхер И. И., Райхер Л. И., Пагнуева Л. Ю. и др. Проблема чистых антител и ее реализация по созданию иммуноферментных тест-систем. // ЖМЭИ.-1998.-№ 2.-С.12-15.

80. Райхер Л. И., Райхер И. И., Смурова Л. Ю. и др. Способ иммуноферментного определения антигенов. // А. с. 1337775.-1987.

81. Рево М. В., Жукова М. Д. Возбудитель сибирской язвы. // Вет. микробиология.-Москва.-1958.-С.246-251.

82. Ромаскевич А. И., Штепа О. С. Изучение растворимых белков клеточных гомогенатов коринебактерий методом диск-электрофореза. // Труды Крымского мед. ин-та.-1974.-С.32-34.

83. Салтыков Р. А., Бакулов И. А., Гаврилов В. А. Характеристика сибиреязвенного вакцинного штамма СТИ-1, хранившегося 30 лет в виде лиофилизиро-ванных спор. // ЖМЭИ.-1976.-№ 6.-С.62-65.

84. Семина Н. А., Фикс Л. И., Мусина Л. Г. и др. // ЖМЭИ.-1995.-№ 3.-С.96.-99.

85. Синяк К. М., Вернер О. М. Вегетация и спорообразование у возбудителя сибирской язвы (вакцинный штамм СТИ) при различных значениях рН среды культивирования. // Изв. АН СССР, сер. биолог.-1983.- № 5.-С.686-692.

86. Соркин Ю. И. Сибирская язва в Восточной Сибири (1960-1967 г.г.). // Авто-реф. дис. . канд. мед. наук.-Саратов.-1972.-С. 19-22.

87. Степанов А. С., Пузанова О. Б., Гаврилов С. В., Брандзишевский Ю. В., Бра-гин И. В. Анисимов П. И. Трансдукционная и конъюгационная передача плазмиды рХ02 Bacillus anthracis. // Молекул. Генет., микробиол. и вирусол. -1989.-№ 12.-С.39-43.

88. Тимошин В. Б., Замараев В. С., Антонов В. А. и др. Видоспецифический ДНК-зонд для идентификации токсигенных штаммов возбудителя сибирской язвы. //Молекул, генетика, микробиол. и вирусол.-1994.-№1.-С.30-33.

89. Тимошин В. Б., Замараев В. С., Липницкий А. В. Конструирование рекомби-нантного фага fZAT 6 - продуцента одноцепочечного ДНК-зонда для идентификации штаммов Bacillus anthracis, несущих плазмиду рХО 1. // Биотехнология,- 1995.-№ 5.-С.6-11.

90. Тржежецкая Т. А., Куликовский А. В. Тонкое строение вирулентного штамма Вас. anthracis. // ВНИИ вет. санитарии.-1972.-Т.42.-С.144-151.

91. Трусов В. И., Рыбалко С. Л. Использование F(atf)2-фрагментов для постановки иммуноферментного анализа с бакуловирусами. // Новое в лабораторной диагностике внутренних болезней.-Киев,-1988.-С.22-24.

92. Федотов В. С. Выживаемость возбудителя сибирской язвы в тундровых почвах. Тез. плен, засед. Межвед. комиссии по сибирской язве. // Москва,-1978,-С.148-150.

93. Федотова Ю. М., Уланова А. А. Изучение специфичности полученного in vitro сибиреязвенного токсина. // ЖМЭИ.-1970.-№ 3.-С.111-113.

94. Цуверкалов Д. А. Влияние концентрации белка на рост и протеолитические способности микробов (Вас. anthracis). // Тр. ВИЭВ.-1935.-Т.10.-Вып.1.-С.105-110.

95. Цуверкалов Д. А., Красов В. М. Протеолитические способности Вас. anthracis. //Тр. ВИЭВ.-1935.-Т.10.-Вып.1.-С.122-128.

96. Цыдыпов В. Ц. Показатели серо-аллергических реакций у вакцинированных и искусственно зараженных коров сибирской язвой. // Дис. . канд. вет. наук,-Казань.-1975.

97. Чард Т. Радиоиммунологические методы. // Москва.-1981.-С.27-29.

98. Чернявская Е. Г., Свешникова П. Г., Василенко Н. Ф. и др. Иммунофермент-ная тест-система для определения антигенов и антител в диагностике туляремии. // Актуальные вопросы иммунодиагностики особо опасных инфек-ций.-Ставрополь.-1986.-Ч.2.-С. 166-168.

99. Чуйская Г. Я. Почва как среда сохранения и размножения возбудителя сибирской язвы. //Актуал. вопр. проф. сиб. язвы в СССР.-Москва.-1971.-С.72-73.

100. Шабалина С. В., Райхер Л. И., Райхер И. И. Диагностическая тест- система для выявления менингококкового антигена иммуноферментным методом. // ЖМЭИ.-1987.-№ 2.-С.70-73.

101. Шагинян И. А., Гинцбург A. JI. Геномный полиморфизм возбудителей бактериальных инфекций. // Молекул. Генетика, микробиол. и вирусол,- 1991.-№ 2.-С.З.

102. Шахбанов А. А. Ультраструктура Вас. anthracis и Вас. cereus. // ЖМЭИ.-1975. № 6.-С.22-24.

103. Юсупов P. X., Ильясова Г. X. Мониторинг при классической чуме и болезни Ауески свиней. // Ветеринарный врач.-2000.-№ 1 .-С.47-50.

104. Яковлев А. Т., Зыкин JI. Ф., Рыбкин В. С. Иммуноферментный анализ в микробиологии. // Изд-во Саратовского Университета.- 1990.-С. 13-34.

105. Aubertin А. М., Tondre L., Lopez С. et. al. Sodium dodecyl sulfate-mediated transfer of electrophoretically separated DNA-binding proteins. // Anal. Biochem.-1983.-131.-P. 127-134.

106. Baba T. Serological and chemical properties of immuoispecific and nonspecific substance. //Jap. J. Bacterid.- 1964a.-19; 2.-P.58-60.

107. Baba T. Studies on the immunospecific and nonspecific substanse of Bacillus anthracis. I The preparation of an antigen polisaccaride from the heated cell extract of Bacillus anthracis. //Jap. J. Bacteriol.-1963.-18; 12.-P.455-457.

108. Baba T. Studies on the immunospecific and nonspecific substanse of Bacillus anthracis. II Preparation of immunospecific substanse. // Jap. J. Bacteriol.-1964.-19; 1.-P.1-3.

109. Beall F. A., Taylor M., Thorne С. B. Rapid lethal effect in rats of a third component found upon fractionasing the toxin of Bacillus anthracis. // J. Bacteriol.-1962.-83.-P.6.

110. Beall F. A., Taylor M., Thorne С. B. Rapid lethal effect in rats of a third component found upon fractionasing the toxin of Bacillus anthracis. // J. Bacteriol.-1962.-83,-P.6.

111. Berdjis С. C., Gleiser C. A., Hartman H. A. et. al. Pathogenesis of respiratory anthrax in Macaca mulatta. // Brit. J. Exptl. Pathol.-1962.-V.43.-№ 5.-P.15-18.

112. Bergey M. Manual of Systematic Bacteriology.-1986.-V.2.

113. Bittner M., Kupferer P., Morris C. F. Electrophoretic transfer of proteins and nucleic acids from slab gels to diazobenzyloxymethyl cellulose or nitrocellulose sheets. // Anal. Biochem.-1980.-102.-P. 127-134.

114. Bohm R. PCR-ELISA for detection of Bacillus anthracis in environmental samples. // 3rd Int. Conf.Anthrax. Abstract book, Univer. Plymouth 7-10 Sept.-1998.-P.l 1.

115. Brachman P. S. Anthrax. // In: Infectious Disease, Edited by Hoeprich P. D., New York, Harper and Row.-1960.-P.577-582.

116. Brewer C. R., Mc. Cullough W. G., Mills R. C. et. al. Application of nutrional studies for development of practical culture media for Bacillus anthracis. // Arch. Biochem.-1946.-V. 10.-P.77-80.

117. Brewer C. R., Mc. Cullough W. G., Mills R. C. Studies on the nutritional requirements of Bacillus anthracis. // Arch. Biochem.-1946a.-V. 10.-P.65-67.

118. Brown E. R., Cherry W. B. Specific identification of Bacillus anthracis by means of a variant bacteriofage. // J. Jnfect. Diseases.-1958.-96; 1.-P.34.

119. Brown E. R., Cherry W. B. The iduction of motility in Bacillus anthracis by means of bacteriophage lysates. //J. Bacteriol.-1955.-69; 5.-P.590-603.

120. Brown E. R., Moody M. D., Treece E. L., Smith C. W. Differential diagnosis of B. cereus, Bacillus anthracis and B. cereus var. mycoides. // J. Bacterid.-1958.-V.75.-№ 5.-P.499-509.

121. Carlsson H. E., Giebink G. K., Spika J. S. et. al. Measurement of immunoglobulin G and M antibodies to type 3 pneumococcal capsular polysaccharide by enzime-linked immunosorbent assay. // J. Clin. Microbiol.-1982.-V.16.-№ 1.-P.63-69.

122. Carlsson H. E., Lindberg A. A. Application of enzime-immunoassay for diagnosis of bacteria and mycotic infections. // Scand. J. Immunol. 1978.-№ 8.-P.97-110.

123. Charlton S. Exosporium characterisation. // 3rd Int. Conf. Anthrax. Abstract book, Univer. Plymouth 7-10 Sept.-1998.-P.13.

124. Chart H., Shaw D. H., Ishiguro E. E., Trust T. J. Structural and immunochemical homogeneity of Aeromonas salmonicida lipopolysaccharide. // J. Bacteriol.-1983.-158.-P. 16-22.

125. Chu H. P. Variation of Bacillus anthracis with special reference to the noncapsulated avirulent variant. // J. Hygiene.-1952.-50; 4.-P.433-444.

126. Cousland G., Poxton I. R. Analysis of lipopolysaccharides of Bacteroides fragilis by sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis and electroblot transfer. //FEMS Microbiol. Lett.-1983.-20.-P.461-465.

127. Davies D. G. The influence of temperature and humidity on spore formation and hermination in Bacillus anthracis. //J. Hyg.-1960.-58; 2.-P.177-186.

128. Doyle R. J., Keller K. F., Ezzell J. W. Bacillus. // In: Manual of Clinical Microbiology. 4 th ed. Am. Soc. Microbiology, Washington.-1990.-P.211-215.

129. Edelman G. M., Poulik M. D. Studies on Structural Units Of the Y-Globulins. // J. exp. Med.-1961.-113 .-P.861 -884.

130. Ezzell J. M., Abshire T. G., Little S. F. et. al. Identification of Bacillus anthracis by using monoclonal antibody to cell wall galactose-IV-acetyl-glucosamine polysaccharide. // J. Clin. Microbiol.-1990.-28; 2.-P.223-231.

131. Ezzell J. W., Abshire T. G. Immunological analysis of cell-associated antigens of Bacillus anthracis. //Jnfect. Immun.-l988.-56; 2.-P.349-156.

132. Ezzell J. W., Abshire T. G., Little S. F. et. al. Identification basis of the virulence of Bacillus anthracis. IX. Its aggressins and theire mode of action. // Brit. J. Exp. Pathol.-1963.-44; 4.-P.446-453.

133. Ezzell J.W. The capsule of B. anthracis, a review. // 3rd Int. Conf. Anthrax. Abstract book, Univer. Plymouth 7-10 Sept.-1998.-P.15.

134. Farchans J. W., Ribot W. J., Downs M. D. et. al. Purification and characterisation of the major surface array protein from the avirulent Bacillus anthracis Delta Sterhe-1. //J. Bacteriol.-1995.-177; 9.-P.2481-2489.

135. Fernelius A. L. Comparison of two heat-shock methods and aphenol treatment method for determining germination rates of spores of Bacillus anthracis. // J. Bacte-riol.-1960.-P.755-756.

136. Fish A. J., Lockwood M. C., Wong M., Price R. G. Detection of Goodpasture antigen in fractions prepared from collagenase digests of human glomerular basement membrane. // Clin. Exp. Immunol.-1984.-55.-P.58-66.

137. Fish D. C., Lincoln R. E. In vivo produced-anthrax toxin. // J. Bacteriol.-1968.-95; 3.-P.919-924.

138. Fish D. C., Mohlandt B. G., Dobbs J. A., Lincoln R. E. Purification and properties of in vibro-produced anthrax toxin components. // J. Bacteriol.-1968.-95; 3.-P.907-918.

139. Fleischmann J. В., Pain R. H., Porter R. R. Reduction of Globulins. // Arch. Bio-chem. Biophisics, Suppl.-1962.-1.-P. 174-180.

140. Fouet A. Bacillus anthracis S-layer. // 3rd Int. Conf. Anthrax. Abstract book, Univer. Plymouth 7-10 Sept.-1998.-P.16.

141. Fouet A., Mesnage S., Tosi-Couture E. et. al. Bacillus anthracis surface: capsule and S-layer. // J. Appl. Microbiol.-1999.-V.87, №2.-P.251-255.

142. Freese F., Oh G. K., Freese E. B. et. al. Suppresion of sporulation of Bacillus subti-lis. / In: Spores Pap. 5 th Int. Spore Conf. Fontana (Wise.), 1971. // Washington.-1972.-P.212-221.

143. Gerhardt P. Cytology of Bacillus anthracis. // Federation Proceed.-1967.-V.26.-№ 5.-P.1504-1517.

144. Gershoni J. M., Palade G. E. Electrophoretic transfer of proteins from sodium dode-cyl-sulphate-polyacrylamide gels to a positively charged membrane filter. // Anal. Biochem.-1982.-131 .-P.396-405.

145. Gladstone G. R. Inter -relationships between amino-acid in the nutrition of Bacillus anthracis. //Brit. J. Exp. Path.-1939.-V.20.-№ 2.-P.161.

146. Glass W. F., Briggs R. C., Hnilica L. S. Use of lectina for detection of electrophore-tically separated glycoproteins transferred onto nitrocellulose sheets. // Anal. Bio-chem.-1981.-l 15.-P.219-224.

147. Glynn P., Gilbert H., Newcombe J., Cuzner M. L. Rapid analysis of immunoglobulin isoelectric focusing patterns with cellulose nitrate sheets and immunoperoxidase staining. //J. Immunol. Methods.-1982.-51.-P.251-257.

148. Gordon M. A., Moody M. D., Barton A. M. et. al. Industrial airsanepling for anthrax bacteria. Arch. Ind. Hyg. and Occup. // Med.-1954.-10; 1.-P.16-22.

149. Graham K., Keller K., Ezzell J. et. al. Enzime-linked lectinosorbent assay (ELISA) for detecting Bacillus anthracis. // Eur. J. Clin. Microbiol.-1963.-117; 3.-P. 497-508.

150. Green B. D., Battisti L., Thorne С. B. et. al. Demonstration of a capsule plasmid in Bacillus anthracis. // Infect. Immun.-1985.-49; 2.-P.291-297.

151. Grelet N. Growth limitation and sporulation. // J. Appl. Bacterid.-1957.-V.20,-P.315-324.

152. Grelet N. Le determinisme de la sporulation de Bacillus megaterium. // IY Constitu-ants minerauxs du milien synthetique necessaries a la sporulation. // Ann. Inst. Pasteur.-1952.-V.83.-P.71-79.

153. Gross С. S., Fercuson D. A., Cummins C. S. Electrophoretic protein patterns and enzyme mobilities in anaerobic coryneforms. // Appl. Environ. Microbiol.-1978.-35;6.-P.l 102-1108.

154. Guesdon G. L., Avrameas S. Solid phase enzyme-immunoassays. // J. Histochem. Cytochem.-1981 .-№ 3.-P.207-232.

155. Guesdon J. L., Ternynck Т., Avrameas S. The use of avidinbiotin interaction in im-munoenzymatic techniques. // Appl. Biochem., Bioeng.-1979.-V.27.-№ 3.-P.1131-1139.

156. Hadson B. W., Quan T. J., Bailey R. E. Electrorhoretic studies of geographic distribution of Iersinia pestis protein variants. // Intern. J. System. Bacter.-1976.-26;1.-P.l-16.

157. Halvorson H.O. Simposium on initiation of bacterial growth IY Dormancy germination and outgrowth. // Bact. Rev.-1959.-V.23.-P.267-272.

158. Harris-Smith P., Smith H., Keppy I. Production in vitro of the anthrax toxin previously recognized in vivo. III. Gen. Microbiol.-1958.-19; 1.-P.91-103.

159. Hattori R. Growth and spore formation of Bacillus subtilis adsorbed on an anionex-change resin. // J. Gen. Appl. Microbiol.-1976.-V.22.-№ 4.-P.216-226.

160. Hawkes R. Identification of concanavalin-A binding proteins after SDS-gel electrophoresis and protein blotting. // Anal. Biochem.-1982.-123.-P. 143-146.

161. Henderson J., Duggleby C. J., Turnbull P. C. Differentiation of Bacillus anthracis from other Bacillus cereus group bacteriace with the PCR. // Intern. J. System Bacteriology.-1 996.-44.-P.99-105.

162. Hersh L. В., Wainer В. H., Andrews L. P. Multiple isoelectric and molecular weight variants of choline acetyltransferase. Artifact or real? // J. Biol. Chem.-1984.-259.-P.1253-1258.

163. Heselson N., Guilemin J., Hugh J. et. al. Office of Technology Assessment. // United States of Congress.-1993.

164. Hoch J.A., Mathews J. L. Chromosomal location of pleutropic negative sporulation mutation in Bacillus subtilis. // J. Genetics.-1973.-V.73.-№ 2.-P.215.

165. Ivanovics G., Bruckner V. Chemical and inmmunological studies on the mechanisms of anthrax infection and immunity. // Z. F. Jmmunitats forsch.-1938.-93.-P.l 19-136.

166. Ivanovics G., Erdos L. Ein Beitrag xum Wesender Kapselsubstanz des Milzbrand-bazillus. HZ. F. Jmmunitatsforsch.-1937.-90.-P.5.

167. Ivanovics G., Foldes J. Problems concerming the phylogenises of Bacillus anthracis. // Acta Microbiol. Acad. Sci. Hung.-1958.-5; 4.-P.89-109.

168. Ivanovics G., Horvath S. On the chemical srtucture of the capsulae of Bacillus anthracis and B. megaterium. // Acta Physiol. Sci. Hing.-l953.-4.-P.401-408.

169. Ivins В. E., Fellows P.E., Nelson G. 0. Efficacy of a standart human anthrax vaccine against Bacillus anthracis spore challenge in guinea pigs. // Vaccine.-1994.-12; 10.-P.872-874.

170. Ivins В. E., Welkos S. 1., Little S. F. et. al. Immunization against anthrax with Bacillus anthracis protective antigen combined with adjuvants. // J. Jnfect. Jmmunity.-1992.-V.60.-№ 2.-P.662.

171. Johnson A. D., Spero L. Conepareson of growth and toxin production in 2 vaccine strains of Bacillus anthracis. // Appl. Environ. Microbiol.-1981.-41; 6.-P.1479-1481.

172. Kato K., Hamaguchi Y., Fukui H. et. al. Coupling F-ab fragment of rabbits antihu-man IgG antibody to b-D-galactosidase and a highly sensitive immunoassay of human IgG. // FEBS Letters.-1975.-V.56.-P.370-372.

173. Keppie J., Smith H., Harris-Smith P. The chemical bases of the virulence of Bacillus anthracis. II. Some biological properties of bacterialproducts. // Brit. J. Exp. Pathol.-1953.-34; 5.-P.486-453.

174. Klein F. Changes in anthrax treatment suggested. // Sci. News Lett.-1963.-83; 1.-P.9.

175. Knaysi G. Structure of the endospore and the cytological processes involved in its formation and germination with remarks on criteria of germination. // J. Appl. Bac-teriol.-1957.-V.20.-P.425-430.

176. Kramar E., Roth J. Colon Bacilli agglutinins. // Zbl. Bact.-1922.-1; 88.-P.401.

177. Laemmli U. K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage TU. //Nature (London).-1970.-V.222.-P.680-685.

178. Lamanna C., Fisher D. Comporative study of the aggalutinogen of endosporess of Bacillus anthracis. //J. Bacterid.-1960.-79; 3.-P.435-441.

179. Larson D. K., Calton G. J., Little S. F. et. al. Seperation of 3 exotoxic factors of Bacillus anthracis by sequential immunosorbent chromatography. // Toxicon.-1988.-26; 10.-P.913-921.

180. Lee M. Fluorescent techniques for real time multiplex strand specific detection of Bacillus anthracis using rapid PCR. // 3rd Int. Conf. Anthrax book, Univer. Plymouth 7-10 Sept.-1998.-P.9.

181. Legocki R. P., Verna D. P. S. Multiple immunoreplica technique: screening for specific proteins with a series of different antibodies using one polyacrylamide gel. // Anal. Biochem.-1981.-111 .-P.3 85-392.

182. Leise J. M., Carter С. H., Friedlander H., Frud S. W. Criterie for the identification of Bacillus anthracis. //J. Bacterid.-1959.-77.-P.655-660.

183. Leppla S. H. Anthrax toxin edema factor: a bacterial adenylate cyclase that increases cyclic AMP concentrations in enkaryotic cells. // Proc. Natl. Acad. Sci.-1982.-79; 10.-P.3162-3166.

184. Leppla S. H. The anthrax toxin complex. // In: Sourcebook of bacterial toxins. Ed. by G. F. Alouf, J. Freer. Acad. Press, New York.-1991.-P.277-298.

185. Leppla S. H., Friedlander A. M., Cora E. M. Proteolytic activation of anthrax toxin bonnd to cellular receptors. // In: Bacterial protein toxins. Ed. by F. Fehrenbach et. al. Qustav Fischer, Stuttgart, Federal Republic of Germany.-1987.-P.111-112.

186. Leppla S. H., Klimpel K. R., Gordon V. M. et. al. Binding and uptake of anthrax toxin components and fusion proteins by eucaryotic cells. // Toxicon.-1996.-34; 3,-P.296.

187. Lin W., Kasamatsu H. On the electrotransfer of polypeptides from gels to nirtocel-lulose membranes. // Anal. Biochem.-l983.-128.-P.302-311.

188. Lincoln R. E., Fish D. C. Anthrax toxin. // In: Microbial Toxins.Vol.3. N. Y. London. Acad. Press.-1970.-P.362-408.

189. Little i. F., Knudson G. B. Comparative efficacy of Bacillus anthracis live spore vaccine and protective antigen vaccine against anthrax in guinea pigs. // J. Jnfect. Immun.-1986.-52; 2.-P.509-512.

190. Lorez I., Wong В., Freese E. Bacterial sporulation is not under the same control as catabolite represion of enzimes. // Abstrs. 79. Th. Ann. Meet. Amer. Soc. Microbiol. / Los Angeles, Colif., 1979/ Washington D. C.-1979.-P.111.

191. Mandrell R. E., Zollinger W. D. Use of a zwitterionic detergent for the restoration of the antibody-binding capacity of electroblotted meningocoecal outer membrane proteins. // J. Immunol. Methods.-1984.-67.-P. 1-11.

192. Marandian M. H., Kamali A. Meningite charbonneusse: un cas en apparence primi-tif. // La Nouvelle Presse Medicale.-1981.-V.10.-№ 21.-P. 1747-1748.

193. Matthews-Greer J. M., Gilleland H. E. Protective activity of Pseudomonas aeruginosa outer membrane proteins. // J. Infect. Disease.-1987.-V. 155.-№ 6.-P.1282-1291.

194. Mesnage S., Tosi-Couture E., Gounon P. et. al. The capsule and S-layer: two independent and compatible macromolecular structures in Bacillus anthracis. // J. Bacte-riol.-1998.-V/180,№l.-P.52-58.

195. Mikesell P., Ivins В. E. Plasmids, Pasteur and anthrax. // ISAMRIID. INTERIM Rep. Nad-A. 1275 n. ASM Neus.-1983.-49.-P.320-322.

196. Ngo Т. Т., Lenhoff H. W. A sensitive and versalite chromogenic assay for peroxidase and peroxidase-coupled reactions. // Anal. Biochem.-1980.-105.-P.389.

197. Nisonoff A., Palmer J. L. Hybritisation of Half Molecules of Rabbit Gamma Globulin. // Science.-1964,-143.-P.376-379.

198. Ochs D. Protein contaminants of sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gels. // Anal. Biochem.-1983.-135.-P.470-474.

199. Partanen P., Turunen H. J., Paasinuo R. A., Leinikki P. O. Immunoblot analysis of Toxoplasma gondii antigens by human immunoglobulins G, M and A antibodies at different stages of infection. // J. Clin. Microbiol.-1984.-20.-P. 133-135.

200. Patra G., Sylvestre P., Ramisse V. et. al. Isolation specific chromosomic DNA sequence of Bacillus anthracis and its possible use in diagnosis. // FEMS Immunol. Med. Microbiol.-1996.-V.15.-№ 4.-P.221-223.

201. Patra G., Sylvestre P., Ramisse V. et. al. Specific ologonucleotide primers for rapid identification of Bacillus anthracis strains. // Proc. Int. Workshop on Anthrax, Winchester, England, Sept. 19-21. Salisbury Med. Bul.-1996.-№ 87.-P.45-46.

202. Pezard C., Sirard J. C., Mock M. Protective immunity induced by Bacillus anthracis toxin mutant strains. // Advanc. Exper. Med. Biol.-1996.-V.397.-P.69-72.

203. Pezard C., Weber M., Sirard J. C. et. al. Protective immunity induced by Bacillus anthracis toxin-deficient strains. // J. Infect. Immun.-1995.-V.63.-№ 4.-P.1369-1372.

204. Porter R. R. Separation and Isolation of Fractions of Rabbit Gamma-Globulin Containing the Antibody and Antigenic Combining Sites. // Nature.-1962.-182.-P.670-671.

205. Powell J. F., Strang R. E. Biochemical changes occuring during sporulation in Bacillus species. // Biochem. J.-1956.-V.63.-P.661-668.

206. Puziss M., Uright L. VII. Corbohydrate metabolism of Bacillus anthracis in relation to laboration of protective antigen. // J. Bacteriol.-1959.-78.-P. 137-145.

207. Raamsdonk W. V., Pool C. W., Heyting C. Detection of antigens and antibodies by an immuno-peroxidase method applied on thin longitudinal sections of SDS-polyacrylamide gels. // J. Immunol. Methods.-1977.-62.-P. 15-22.

208. Ramirez P., Bonilla J. A., Moreno E., Leon P. Electrophoretic transfer of viral proteins to nitrocellulose sheets and detection with peroxidase-bound lectins and protein A. //J. Immunol. Methods.-1983.-P.15-22.

209. Ramisse V., Patra G., Garrique H. et. al. Identification and characterization of Bacillus anthracis by multiplex PCR ahalisys of sequences on plasmids pXOl and pX02 and chromosomal DNA. //FEMS Microbiol. Lett.-1996.-V.145.-№ 1.-P.9-16.

210. Reen D. J. New developments in immunoblotting and associated detections systems. //J. «Biochem. Soc. Trans.».-1988.-16.-№ 2.-P. 131-134.

211. Reiser J., Wardale J. Immunological detection of specific proteins on total cell extracts by fractionation on gels and transfer to diazophenylthioether paper. // Eur. J. Biochem.-1981.-114.-P.5'69-575.

212. Renart J., Reiser J., Stark G. R. Transfer of proteins from gels to diazobensy-loxymethyl-paper and detection with antisera: A method for studying antibody specificity and antigen structure. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1979.-76.-P.3116-3120.

213. Roth I. L., Williams R. P. Comparison of the fine structure of virulent and avirulent spores of Bacillus anthracis. Texas. Rep. Biol. Med.-1963 .-21; 3.-P.394-399.

214. Roth I. L., Williams R. P. Electromicroscopic study of developing Bacillus anthracis infection in the mouse spleen. // Texas. Rep. Biol. Med.-1962.-20; 1.-P.143.

215. Roth N. Y., Lively D. H., Hodge H. M. Influence of oxygen uptake and culture on sporulation of Bacillus anthracis and Вас. gloligii. // J. Bacteriol.-1955.-69; 4,-P.455.

216. Sandstrom G., Tarnvic A., Wolf-Watz H. Francisella tularensis outer membrane proteins. //J. clin. Microbiol.-1987.-V.25.-V.25.-№ 4.-P.641-644.

217. Sargeant К. В., Stenley I. L., Smith X. The serological relationship between purified preparations of factors 1 and 11 of the anthrax toxin produced in vivo and vitro. // J. Gen. Microbiol.-1960.-22; 1.-P.219-228.

218. Schott K. J., Neunoff V., Potter U., Schroter J. Staining of concavalin A. Reactive glycoproteins on polyacrylamide gels with horseradish peroxidase A critical evaluation. // Electrophoresis.-1984.-5.-P.77-83.

219. Seidel G., Strasman R. Zur Bacteriologischen und Serologischen diagnose des Mil-zbrandes. // Arch. Exptl. Veterinarmed.-1956.-10; 3.

220. Sharma S. D., Mullenax J., Araujo F. G. et. al. Western blot analysis of the antigens of Toxoplasma gondii recognized by human IgG and IgM antibodies. // J. Immu-nol.-1983.-131.-P.977-983.

221. Sirisanthana Т., Navachareon N., Tharavichitkul P. et. al. Ontbreak of oral-oropharyngeal anthrax: An unusual manifestation of human infection with Bacillus anthracis. // Am. J. Trop. Med. Hug.-1984.-V.33.-№ 1.-P.144-150.

222. Sisson P. R., Lightfoot N. F. Fingerprinting of Bacillus anthracis by pyrolis mass spectrometry. // Proc. Int. Workshop on Anthrax, Winchester, england, Sept. 19-21, 1995. Salisbury Med. Bul.-1996.-P.52-54.

223. Smith H. F. Chemical basis of virulence of Bacillus anthracis. 1. Properties of bacteria groun in vivo and preparation of extracts. Brit. J. Exp. Pathol.-1953.-34; 5.-P.460-472.

224. Smith H. F. The uptake of aminoacids during the terminal bacteriomia in guinea pigs infected with Bacillus anthracis. // J. Gen. Microbiol.-1957,-17; 3.-P.731-738.

225. Smith H. F., Keppie J., Stanley J. L. Demonstration of the presense of a specific lethal edema producing toxin in the plasma of quinea pigs dying of anthrax. // Brit. J. Exp. Pathol.-1955.-36.-P.460-472.

226. Smith H. F., Zwartouw H. Т., Harris-Smith P. W. The chemical basis of the virulence of Bacillus anthracis. VII. Two components of anthrax toxin: their relation ship with known immunizing aggressins. //Brit. J. Exp. Pathol.-1956.-37.-P.263-271.

227. Southern E. M. Detection of specific sequences among DNA fragments separated by gel electrophoresis. //J. Mol. Biol.-1975.-98.-P.503-517.

228. Stamatin N., Belframi P. L/antagonisme entre denx varietes de Bacillus anthracis. // Arch. Veter.-1935.-25.-P.5-6.

229. Stanley G. L., Sargeaut K., Smith H. Purification of factors I and recognition of a Thiold factor of anthrax toxin. //J. Gen. Microbiol.-1961.-26; 1.-P.49-66.

230. Strange R. E., Belton F. C. Studies on a protective antigen produced in vitro from Bacillus anthracis: purification and chemistry of the antigen. // Brit. J. Exp. Pathol.-1954.-35.-P.153-163.

231. Sutton R., Wrigley C. W., Baldo B. A. Detection of IgE- and IgG-binding proteins after electrophoretic transfer from polyacrylamide gels. // J. Immunol. Methods.-1982.-52.-P. 184-194.

232. Takahashi Y. Etude sur la variabilite de B. anthracis a partir de germesisoles au mi-cromanipulateur. // Ann. Inst. Pasteur.-1939.-V.62.-№ 4.-P.407-446.

233. Takahashi Y. Etude sur la variabilite de B. anthracis a partir de germes isoles au micromanipulateur. // Ann. Inst. Pasteur.-1939.-V.62.-№ 4.-P.407-446.

234. Thoen C. A., Bruner G. A., Luchsinger D. W. Detection of Brucella antibodies of different immunoglobulin class in cow milk by enzime-linked immunoassay. // J. Vet. Res.-1983.-V.44.-№ 2.-P.306-308.

235. Thorne S. В., Belton F. C. An agar-diffusion method for titrating Bacillus anthracis and its application to study of antigen production. // J. Gen. Microbiol.-1957.-17,-P.505.

236. Thorne С. B. Biochemical properties of virulent and avirulent strains of B. anthracis. //Ann. N. Y. Acad. Sci.-1960a.-V.88.-№ 5.-P.1024-1033.

237. Thorne С. В., Molnar D. M., Strange R. E. Production of toxin in vitro in Bacillus anthracis and its separation in to two components. // J. Bacterid.-1960.-79.-P.450-455.

238. Tomcsik J., Szongott H. Ueber ein spezifisches. Protein der Kapsel des Milzbrand-bazillus. //Z. Immunitatsf.-1933.-P.129-144.

239. Tomscik J., Szongott H. Ueber ein spezifischen Polisaccharidi der Milzbrandbazil-len. //Z. Immunitatsf.-1933.-78.-P.76-214.

240. Towbin H., Gordon J. Immunoblotting and dot immunobinding current status and outlook. //J. Immunol. Methods.-1984.-73 .-P.313-340.

241. Tsang V. C. W., Hancock K., Kelly M. A. et. al. Quantitative capacities of glutaral-dehyde and sodium m-periodate coupled peroxidase-anti-human IgG conjugates in enzyme-linked immunoassays. //J. Immunol. Methods.-1984.-70.-P.91-100.

242. Tsang V. C. W., Hancock K., Simons A. R. Calibration of prestained protein molecular weight standards for use in the "Western" or enzyme-linked immunoelectro-transfer blot techniques. // Anal. Biochem.-1985.-143 (in press).

243. Tsang V. C. W., Peralta J. M., Simons A. R. Enzyme-linced immunoelectrotransfer blot techniques (EITB) for studying the specificities of antigens and antibodies separated by gel electrophoresis. // Methods, Enzymol.-1983.-92.-P.377-391.

244. Turnbull P. C. Anthrax vaccine past, present and future. // Vaccine.-1991.-9.-P.533-539.

245. Uchida J., Sekizaki Т., Hasimoto K. et. al. Association of the encapsulation of Bacillus anthracis with a 60 megadalton plasmid. // J. Gen. Microbiol.-1985.-V. 131.-P.363-367.

246. Udhayakumar V., Muthukkaruppan V. R. Immunogenic and protective properties of Salmonella typhimurium. // Infect, and Immun.-1987.-V.55.-№ 3.-P.816-821.

247. Van Weeman В. K., Schuurs A. N. Immunoassay using antibody-enzyme conjugates. //FEBS Lett.-1974.-V.41 .-№ 3.-P.215-218.

248. Van Wyke K. L., Yewdell J. W., Reck L. J. et. al. Antigenic characterization of influenza A virus matrix protein with monoclonal antibodies. // J. Virol.-1984.-49,-P.248-252.

249. Vick D., Lincoln R. E., Klein F. et. al. Neurological responses of the primate to anthrax toxin. //J. Infect. Diseases.-1966.-118; 1.-P.85-96.

250. Voller A., Draper С. C., Bidwell D. E. et. al. Microplate enzime-linked immunosorbent assay for Chagas disease. // Lancet.-1977.-№ 1.-P.426-427.

251. Waart M., Schuurs A. The sensitivity of enzyme immunoassay some factors and figues. // Bull. Schweiz. Gen. Klin. Chem.-1980.-№ 7.-P.9-16.

252. Walker I., Lincoln R., Klein F. et. al. Temperature response in animals, infectied with Bacillus anthracis. // J. Bacterid.-1967.-94; 3.-P.552-556.

253. Warren R., Bartlett A., Bidwell D. et. al. Diagnosis of invasive candidasis by enzyme immunoassay of serum antigen. // Brit. Med. J.-1977.-№ l.-P.l 183-1185.

254. Watson D. W., Cromatrie W. J.,Bloom W. L. et. al. Chemical and immunological properties of the protective antigen in crude extracts of skin lesions of Bacillus anthracis. //J. Infect. Diseases.-1947.-80; 1.-P.28-40.

255. Wright G. G., Slein J. B. Studies of immunity in anthrax. I. Variation in serum T-agglutinin during anthrax infection in the rabbit. // J. Exp. Med.-1951.-93.-P.523-527.

256. Xu Z. K. Experimental study on enzyme-labelled antibody and enzime-labelled Sp. A. Staining test for rapid detection of capsula antibody in patients with anthrax. // J. Clin. Microbiol. Immunol.- 1982.-V.2.-№ 4.-P.253-255.

257. Yolken R. H., Leister F. J., Whitsomb L. S. et. al. Enzyme immunoassay for the detection of bacterial antigens utilizing biotin-labelled antibodies and peroxidase biotin-avidin complex.- // J/ Immunol. meth.-1983.-V.56.-№ 3.-P.319-327.167

258. Yolken R., Leister F. L. Comparison of fluorescent and colorogenic subatrates for enzyme immunoassays.-//J. Clin. Microbiol.-1982.-V.15.-P.757-760.

259. Zlotnic H., Diez J. L., Estrada J. S. Comparison of cytoplasmic proteins from two difference species of Nocardia. // Abstr. Immun. Meet. Amer. Soc. Microbiol. 1986, Amun. Test Washington D. C. 23-28 March.-1986.-P.69-77.

260. МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

261. ДЕПАРТАМЕНТ ВЕТЕРИНАРИИ ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ВЕТЕРИНАРНЫЙ1. ИНСТИТУТ1. УТВЕРЖДАЮ

262. Директор ВНИВИ академик АН РТ1. Равилов 2001 г.

263. ВРЕМЕННО ИНСТРУКЦИЯ по изготовлению и контролю антигена сибиреязвенногосубъединичного1. Казань 2000 год

264. МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ДЕПАРТАМЕНТ ВЕТЕРИНАРИИ1. СОГЛАСОВАНО1. УТВЕРЖДАЮ

265. Заместитель руководителя Департамента ветеринарии МСХ РФ1. Е.А. Непоклонов" 200 г.

266. Директор Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института, академик АНТ1. А.З. Равилов" 200 г.1. АНТИГЕН

267. СИБИРЕЯЗВЕННЫЙ СУБЪЕДИНИЧНЫЙ1. ТЕХНИЧЕСКИЕ УСЛОВИЯ ТУ

268. На опытную партию Срок введения ""200 г.1. СОГЛАСОВАНО

269. Директор Всероссийского Государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов1. А.Н. Панин" 200 г.

270. Продолжение титульного листа на следующей странице

271. МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ (Минсельхоз России)1. ДЕПАРТАМЕНТ ВЕТЕРИНАРИИ107139, Москва, Орликов пер., 1/11 Телефон: (095) 207-86-55 Телетайп: 417738 Лен№на№

272. ВРЕМЕННОЕ НАСТАВЛЕНИЕ по применению антигена сибиреязвенного субъединичного для определения поствакцинального иммунитета у животных в ИФА1. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ

273. Заместитель руководителя Департамента ветеринарии МСХ РФ1. Е.А- Непоклонов" 200 г.

274. Антиген сибиреязвенный субъединичный ММ 90 кДа предназначен для гипериммунизации животных с целью получения диагностических сывороток.12. .Антиген сибиреязвенный субъединичный сухая гомогенная масса белого цвета - 0,25 мл, 10 ампул.

275. На ампулы с антигеном наклеивают этикетки, на которых указывают название препарата, номер серии, номер контроля, объем в мл, рабочее разведение.

276. Антиген упаковывают в картонные коробки.

277. При отсутствии маркировки (этикетки) на ампуле с препаратом, изменении цвета и консистенции содержимого, наличии посторонних примесей препараты бракуют.

278. Антиген пригоден для применения в течение 2-х лет с даты изготовления при условии хранения в темном сухом месте при температуре 4±2°С.

279. Антиген расчитан для гипериммунизации 10 кроликов.

280. Зам естител ь руко водител я Департамента ветеринарии МСХ РФ1. Е.А. Непоклонов" 200 г.1. АК