Биологические свойства штаммов Bacillus anthracis, выделенных в очагах сибирской язвы Ставропольского края

Лысогора, Елизавета Вильевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Биологические свойства штаммов Bacillus anthracis, выделенных в очагах сибирской язвы Ставропольского края
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Биологические свойства штаммов Bacillus anthracis, выделенных в очагах сибирской язвы Ставропольского края"

РГБ ОД

1 1 MAP 2002

Лысогора Елизавета Внльевна

БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ШТАММОВ BACILLUS ANTHRACIS, ВЫДЕЛЕННЫХ В ОЧАГАХ СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ СТАВРОПОЛЬСКОГО КРАЯ

03.00.07 - микробиология 14.00.30. - эпидемиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Ростов-на-Дону 2002

Работа выполнена в Ставропольском научно-исследовательском противочумном институте

Научные руководители: доктор медицинских наук Ерёменко Е.И.

доктор медицинских наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ Буравцева Н.П.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор Васильева Г.И. кандидат медицинских наук Киреев Ю. Г.

Ведущая организация:

Ростовский научно-исследовательский противочумный институт

Защита состоится ' • ^ V-/ с/А Сг л./2002 г. в /^ час, на заседании диссертационного совета'Д 208.082.01 при Ростовском государственном медицинском университете (344022, г.Ростов-на-Дону, Нахичеванский пер., 29)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ростовского государственного медицинского университета

Автореферат разослан*'7'/ "•■/< А/У.1 2002 г.

(

Ученый секретарь

диссертационного совета, доцент Н.Я.Корганов

Актуальность проблемы

Сибирская язва — особо опасное инфекционное заболевание. Актуальность изучения свойств возбудителя, усовершенствования методов его выделения и идентификации вызвана возникновением в последнее время опасности, связанной с актами биологического терроризма в США. Возбудитель сибирской язвы еще со времен II мировой войны считался наиболее вероятным потенциальным агентом биологического оружия (Беляков В.Д., Жук Е.Р., 1988; Смирнов Е.И. с соавт., 1988; Crenn Y., 1992; Meselson М. et al., 1994).

Широкое распространение сибирской язвы отмечается во многих странах Европы, Азии и других регионах земного шара. Наибольшее число заболевших людей зарегистрировано в Китае: 2799 случаев сибирской язвы за периол 1990-1994 гг., из них 380 смертельных (Xudong L. et al., 1995). Проблема сибирской язвы постоянно существует в Индии (Stephen G. et at., 1994; Lalitha M.K. et al., 1995), Турции (Doganay M., 1995), Судане (Musa М.Т. et al, 1993), Непале (Joshi D.D. et al., 1995), Танзании (Jiwa S.F.H., 1995), Замбии (Bbalo G., 1995). После долгого перерыва сибирская язва появилась в Австралии (Turner AJ. et al., 1998).

В России продолжают ежегодно отмечаться случаи сибирской язвы как среди сельскохозяйственных животных (100-300 гол), так и среди людей (1020 человек) (Черкасский Б. Л., 1997 ).

Основной эпизоотологической и эпидемиологической особенностью сибирской язвы в настоящий период является неравномерность территориального распределения заболеваний сибирской язвой, преобладающие иа Юге России, в Казахстане и республиках Средней Азии -Узбекистане, Таджикистане, Туркменистане, Киргизии ( Камышева В.Ф. с соавт., 1993; Черкасский БЛ. с соавт., 1993; Федякин Ю.П., Хотько Н.И., 1994; Галсанова Г.Д. с соавт.,1995; Пекова JI. с соавт., 1995; Турсункулов Ж.Ш. с соавт:, 1997; Монисов А.А. с соавт., 1997; Абакарнмов С.Т. с соавт., 1997; Маткаримов Б.Д., 1997; Буравцева Н.П. с соавт. 2000).

К неблагоприятным по сибирской язве территориям относится и Северный Кавказ, хотя в 60-80 гг. удалось резко снизить заболеваемость людей и животных в результате широко проводимых профилактических мероприятий. О&нако изменения социально-экономических отношений в сельском хозяйстве после 1991 г. как внутри региона Северного Кавказа, так и в сопредельных государствах Закавказья, предопределяют существенные изменения в эпизоотической и эпидемической ситуации по сибирской язве (Буравцева Н.П. о соавт., 1994; Ярощук В.А. с соавт., 1996; Монисов А.А. с соавт., 1997; Гкпров С.П. с соавт., 1997). Зарегистрированы крупные групповые вспышки людей в 1992 г. в Карачаево-Черкессии (Агапитов Д.С. с соавт.,1994; Петрюк В.А. с соавт.,1997), в 1993 г. и 1998 г. в Кабардино-Балкарской республике (Урусбамбетов З.Х. с соавт., 2000), в 1998 г. в Калмыкии.

Вопрос об экологии возбудителя сибирской язвы в почве не может считаться решенным, так как по этому поводу существуют разные точки зрения. H.H. Гинсбург (1975), A.C. Корогич и Л.И. Погребняк (1976), В.А. Ярощук, Н.П. Буравцева (1990) считают, что размножение сибиреязвенного микроба в почве сопровождается необратимой утратой его патогенных свойств. Такая концепция подтверждается фактами выделения из старых скотомогильников культур Bacillus anthracis, не способных' образовывать капсулу, а так же культур, образующих мукоидные колонии на воздухе (Колонии Г.В., 1969,1971; Гулый A.C., 1982; Буравцева Н.П. с соавт., 1983). Однако в последнее время появились данные о том, что некоторые из таких атипичных штаммов способны в определенных условиях эксперимента восстанавливать и даже повышать свою вирулентность с соответстующим измененением генотипа (Еременко с соавт., 1992, 1998, 1999).

Ряд исследователей полагает, что стойкость почвенных очагов связана не только с биологической устойчивостью спор сибиреязвенного микроба, но главным образом с накоплением возбудителя в почве за счет вегетации (Чуйская ГЛ.,1971; Иванова Д.П. с соавт.,1980; Соркин Ю.И. с соавт.,1980; Завирюха А.И.,1990; Ипатенко Н.Г. с соавт.,1990 ).

Фактические данные позволяют некоторым авторам считать, что состояние инфицирован'. хгги почвы возбудителем сибирской язвы есть явление динамическое, подверженное изменчивости во времени в количественном и качественном отношениях под влиянием меняющихся условий внешней среды. Неблагоприятно сложившиеся условия внешней среды могут вести к уменьшению вирулентности В. anthracis, либо к полной гибели возбудителя. Вместе с тем, благоприятные гидрометеорологические и биоценотические условия могут способствовать накоплению возбудителя в почве на основе многократных вегетации и обусловить стойкое стационарное неблагополучие сибиреязвенного очага (Владимиров A.A.,1936; Ломаковская В.М., 1956; Прометной В.И., Богданова Т.Ф., 1984; Соркин Ю.И., Родзиковский A.B., 1984; Киреев Ю.Г., 1994 ).

Однако в настоящий период как отечественными, так и зарубежными исследователями недостаточно уделяется внимания вопросам экологии возбудителя сибирской язвы. Основная тенденция в изучении эпидемиологии сибирской язвы сводится к описанию вспышек сибирской язвы, причин их возникновения и проводимых противоэпидемических мероприятий.

Характеристике биологических свойств возбудителя сибирской язвы в отечественной и зарубежной литературе посвящено достаточное количество научных работ и рекомендаций. Наряду с типичными штаммами в природных условиях довольно часто встречаются атипичные, для характеристики которых не достаточно использование только традиционных лабораторных способов исследования. Особый интерес представляют штаммы с ослабленной вирулентностью, эпидемическая и эпизоотическая значимость которых не вполне очевидна (Калиновский А.И. с соавт., 1986; Неляпин Н.М. с соавт., 1986; Черкасский Б_П. с соавгг.,1978; Ипатенко КГ. с

соавт.,1991; Цыганкова О.И.с соает., 1995; Tumbull Р.С.В. et al., 1992). Отечественными и зарубежными исследователями предложено целый ряд методик и приемов, позволяющих не только обнаружить атипичные штаммы в объектах исследования, но и изучить характер их изменчивости (Цыганкова О.И., 1993; Еременко Е.И., 1997 и др.)

Для определения таксономической принадлежности некоторых атипичных штаммов предложено учитывать также рестрикционный профиль плазмид и результаты ПЦР с праймерами к последовательностям генов факторов вирулентности ( Еременко Е.И. с соавт.,1999; Ramisse V.et al., 1996; Patra G. et al., 1998; Staritzyn N. A. et al.,1999).

Первые попытки различить штаммы бацилл внутри вида, в том числе и сибиреязвенные, основывались на самых отличительных фенотипических признаках. Е.И. Ерёменко (1997) предложил использовать в качестве критериев для внутривидовой таксономии ряд показателей, в том числе протесшитическую активности in vitro, плазмндный состав, питательные потребности, однородность популяций и вирулентность для лабораторных животных. Изучение внутривидовой таксономии сибиреязвенного микроба при достаточно точном разделении всех дггаммов на группы с определением фено- и - плазмидотипов дает возможность проследить закономерные взаимопереходы между ними и определить эпидемическую значимость того или иного штамма В. anthracis.

Таким образом, все вышеизложенное обусловливает необходимость получения новых данных о биологических свойствах штаммов сибиреязвенного микроба, выделяемых из различных почвенных очагов, о локальных особенностях экологии возбудителя, заболеваемости людей и животных с целью определения территорий и природных объектов, представляющих эпидемическую опасность и подлежащих

эпидемиологическому надзору.

Цель работы: Сравнительная характеристика штаммов В. anthracis из сибирс-язвеных почвенных очагов и создание кадастра стационарно неблагополучных по сибирской язве пунктов в Ставропольском крае

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи;

- изучить фенотипические особенности штаммов В. anthracis, выделенных в очагах сибирской язвы на территории Ставропольского края;

- определить гены патогенности у штаммов В. anthracis в ПЦР;

- определить у штаммов В. anthracis чувствительность к антибиотикам, в том числе к цефалоспоринам;

- усовершенствовать метод определения капсуло- и- токсинообразования штаммов сибиреязвенного микроба in vitro;

- на основании зпизоотолого-эпидешюлогаческош анализа сибирской язвы в Ставропольском крае выявить стационарно неблагополучные по сибирской язве пункты с последующей оценкой их эпидемической опасности;

- определить зависимость активности почвенных сибиреязвенных очагов на территории Ставропольского края от характера почвенно-климатических условий и выявить факторы, провоцирующие эпизоотии сибирской язвы;

- создать атлас-кадастр стационарно неблагополучных по сибирской язве пунктов Ставропольского края.

Научная иовизна работы. Впервые комплексно изучены сибиреязвенные штаммы, выделенные в крае из различных объектов в очагах сибирской язвы за 45-летний период. При характеристике штаммов использованы современные методы исследования такие, как определение гемолитических свойств по отношению к отмытым эритроцитам барана, протеолитических свойств по отношению к гемоглобину, альбумину, казеину и желатине, питательных потребностей на синтетической среде "9АТ" и выявление генов токсино-и-капсулообразования в ПЦР. Определена чувствительность штаммов к 37 антибиотикам, впервые установлена устойчивость к некоторым цефалоспоринам (цефуроксиму, цефотаксиму, цефтазидиму, цефиксиму), что необходимо учитывать при лечении и профилактике сибирской язвы.

Разработан более простой и надежный метод определения токсино- и-капсулообразования на агаре с помощью реакции иммунопреципигации с использованием индикаторных бумажек, пропитанных иммуноглобулином противосибиреязвенным лошадиным жидким

Впервые в Ставропольском крае проведен ретроспективный анализ эпизоотологической и эпидемиологической обстановки за более, чем 100-летний период и выделено четыре периода заболеваемости людей и животных, связанных с особенностями вакцинации: период нерегулярной вакцинации животных (1896 -1950 гг.), однократной вакцинации сельскохозяйственных животных (1951-1970 гг.), двукратной (1971-1990 гг.) и однократной вакцинации новой сибиреязвенной вакциной 55 ( 1991- 2001 гг).

Установлено снижение заболеваемости людей и животных до спорадических случаев к концу 90 годов, в последнем же десятилетии прослеживается тенденция к увеличению заболеваемости животных в отдельных неблагополучных пунктах. Заболеваемость людей носит бытовой характер, полностью исключен промышленно-индусгриальный тип заболеваемости в крае.

Впервые изучены особенности экологии возбудителя сибирской язв^ в почвенных очагах на территории Ставропольского края. Проведен анализ зависимости активности стационарно неблагополучных по сибирской язве пунктов от почвенно-климатических условий и хозяйственного освоения этих территорий. В результате проведенного районирования территория Ставропольского края разделена на зону устойчивого проявления заболеваний людей и животных и зону спорадических проявлений инфекции. Установленные экологические особенности возбудителя

сибирской язвы позволят проводить дифференцированные профилактические мероприятия на изучаемых территориях.

Впервые создан атлас-кадастр стационарно неблагополучных по сибирской язве пунктов в Ставропольском крае.

Практическая значимость работы. Установленные эпизоото-логические и эпидемиологические особенности сибирской язвы позволяют проводить дифференцированные противоэпидемические мероприятия в районах Ставропольского края. Материалы по эпизоотолого-эпидемиологаческому районированию нашло отражение в целевой комплексной программе "Обеспечение эпидемиологической безопасности по особо опасным и природно-очаговым инфекциям и улучшение медико-экологической обстановки на Юге России (1999-2002 гг.)", одобренной решением Совета ассоциации республик, краев и областей Северного Кавказа.

Результаты исследований отражены также в следующих документах, нашедших применение в научно-исследовательской работе и в практическом здравоохранении:

1. Методические рекомендации "Определение токсинообразования и калсулообразования у сибиреязвенного микроба "(Утверждены Ученым Советом СтавНИПЧИ, протокол № 5 от 31 мая 2001 г.)

■ 2. "Кадастр стационарно неблагополучных по сибирской язве пунктов в Ставропольском крае" (Утвержден Ученым Советом СтавНИПЧИ, протокол № 8 от 21 сентября 2001 г.)

Диссертация выполнялась в рамках НИР СтавНИПЧИ "Изучение эпидемиологических, эпизоотологических и экологических особенностей сибирской язвы на Северном Кавказе" № ГР 01960001795.

Основные положения, выносимые иа защиту-'

1. Сравнительное изучение сибиреязвенных штаммов традиционными и современными методами, в том числе генетическими, разработанными в последние годы, свидетельствует о типичности свойств всех культур, выделенных в различных почвенных очагах Ставропольского края. Усовершенствованный метод определения токсино-и-капсулообразования способствует ускорению и упрощению лабораторной диагностики возбудителя.

. 2.0пределение чувствительности ставропольских штаммов к антибиотикам свидетельствует о высокой их чувствительности к Золышшству антибиотиков. Однако обнаруженная устойчивость к некоторым цефалоспоринам, широко используемым в настоящее время в течебной практике, дает основание для рекомендаций об обязательной фоверке чувствительности к антибиотикам при лечении больных сибирской

13ВОЙ.

3. Территориальное распределение неблагополучных по сибирской язве [унктов в Ставропольском крае зависит от характера почвенно -

лиматических факторов и хозяйственного освоения этих территорий.

' •' - " -

4. Данные эптаоотолого-эпидемиологического анализа сибирской язвы позволяют научно обосновать прогнозирование эпидемической ситуации по сибирской язве на основе разработанного кадастра стационарно неблагополучных по сибирской язве пунктов в Ставропольском крае.

Апробация результатов работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на научно-практических конференциях Ставропольского научно-исследовательского противочумного института и Ставропольской государственной медицинской академии в 1998-2001 гг.

Публикации. Основное содержание диссертации отражено в 8 опубликованных работах и в заключительном отчете.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 4 глав собственных исследований, заключения, выводов, списка используемых источников (154 отечественных и 75 иностранных авторов) и приложения А. Работа изложена на 237 страницах компьютерного текста, включает 37 таблиц и 32 рисунка.

Организация работы и методы исследования. В качестве материалов для изучения динамики заболеваемости людей и животных сибирской язвой в Ставропольском крае за длительный период были использованы: материалы государственного архива по Ставропольскому краю с 1896 г. (отчеты, обзоры, статистические материалы, карты эпидемиологического обследования, истории болезни и др.); архивная и оперативная документация медицинских и ветеринарных учреждений; материалы краевого центра Госсанэпиднадзора отдела ООИ.

При обработке материалов были использованы описательно-исторический, статистический, картографический методы, используемые в эпидемиологии, эпизоотолоп -1, экологии и краевой патологии. Использовались данные экспедиционных выездов краевого центра Госсанэпиднадзора и СтавНИПЧИ, а также результаты собственных наблюдений (1998-2001 гг.)

Природно-климатическая :саракгеристика ландшафтно-географических зон выполнена по материалам краевого управления по гидрометеорологии и контролю природной среды. Исследования по влиянию отдельных компонентов природной среды на заболеваемость сибирской язвой, а следовательно на активность неблагополучных пунктов, проводили с использованием Ставропольской гидрометеорологической службы.

Объектом изучения были 30 штаммов В. anthracis, выделенных в очагах сибирской язвы в Ставропольском крае. Все они получены щ коллекционного центра СтавНИПЧИ. Помимо этого, использовали один атипичный штамм 644/268, выделенный из старого скотомогильника в Сумской области (Украина). Штаммы изучались в лаборатории сибирской язвы СтавНИПЧИ не только принятыми в лабораторной практике методами, но с использованием новых, таких как: определение гемолитических свойств по отношению к отмытым эритроцитам барана, протеодитических свойств по отношению к гемоглобину, альбумину, казеину и желаттше, питательных

потребностей на синтетической среде "9АТ" и выявление плазмид токсико-и-капсулообразования в ПЦР.

Результаты исследований. При изучении штаммов сибиреязвенного микроба, выделенных в Ставропольском крае, нами были поставлены следующие задачи: а) охарактеризовать методы выделения сибиреязвенного микроба из различных объектов, в том числе га объектов внешней среды;б) изучить штаммы сибиреязвенного микроба, длительно хранившиеся в лабораторных условиях и свежевыделенные, при этом использовать новые методы исследования; в) выявить гены патогенности у сибиреязвенных штаммов в ПЦР с использованием различных праймеров.

Впервые были изучены 30 штаммов сибиреязвенного микроба, выделеных из различных очагов сибирской язвы в Ставропольском крае за 45 летний период. Штаммы были выделены из различных объектов: 10 штаммов от больных из содержимого язвы или пунктата, 1 - из крови, 1 - из трупа; 2 штамма выделены из проб почвы и 2 - с места прирезки больного животного; 8 штаммов - из смывов самых разнообразных объектов (холодильников, с оборудования, с ножа, с брички); 5 штаммов выделены от КРС и 1 - из кожи.

При исследовании первичного материала в лаборатории сибирской язвы, начиная с 1983 г., наряду с биопробой, для выделения возбудителя использовали селективную дифференциально-диагностическую питательную среду, разработанную в СтавНИПЧИ и выпускаемую в сухом виде ФГУП "Аллерген" (Буравцева Н.П. с соает., 19&3). Благодаря использованию селективной среды упрощена схема выделения сибиреязвенного микроба из объектов внешней среды и увеличен процент выделенных культур. За указанный период во время вспышек сибирской язвы в Ставропольском крае было исследовано 290 проб, из них 39 проб больных людей, 5 животных, 36 почв и места прирезки больного животного, 147 смывов, 56 мяса и колбасы, 7 кожи и шерсти. Из исследуемых проб был выделен 21 штамм сибиреязвенного микроба. Обращает внимание высокий процент обнаружения сибиреязвенного микроба из таких ■ объектов, как почва и смывы, значительно обсеменённых посторонней микрофлорой.

При изучении культур традиционными методами нам не удалось обнаружить фенотипических различий между штаммами. Это послужило основанием для использования новых методов, предложенных в последние годы в лаборатории сибирской язвы СтавНИПЧИ.

Усовершенствованию лабораторной диагностики способствовало изучение ферментов сибиреязвенного микроба - гемолитической и протеолитической активности. Устарелые представления, что сибиреязвенный микроб в отличие от сапрофитов не образует гемолизины, были опровергнуты исследованиями О.И.Цыпшковой (1993). В результате проведенных исследований было выявлено, что такие белки как желатин и казеин, а также альбумин и гемоглобин очень активно расщепляются всеми изученными нами штаммами. По данным некоторых авторов (Цыганкова

О.И., 1993; Еременко Е.И., 1987) штаммы с атипичными свойствами, с пониженной вирулентностью не способны разлагать эти белки. Способность расщеплять указанные белки совпала со способностью сибиреязвенных штаммов лизироватъ эритроциты барана.

Питательные потребности изучали на синтетической среде "9АТ", содержащей 9 аминокислот, тиамин, глюкозу и необходимый набор солей (Ерёменко Е.И., 1986). Все ставропольские культуры не нуждались в дополнительных аминокислотах или других питательных веществах.

Штаммы сибиреязвенного микроба чувствительны к большинству антибиотиков, используемых в медицинской практике, о чём свидетельствуют многочисленные литературные данные (Буравцева Н.П., Кулешова Л.И., 1972; Проскурина В.А. с соавт. 1984, 1985; Schiersmann G. et al., 1964). Однако, отсутствуют данные о чувствительности сибиреязвенного микроба к цефалоспоринам, широко используемым в настоящее время в клиниках.

В наших опытах чувствительность ставропольских штаммов к антибиотикам определяли методом диффузии в агар с использованием дисков и методом двукратных разведений препаратов на плотной среде. Установлено, что штаммы сибиреязвенного микроба, выделенные в Ставропольском крае, чувствительными к большинству используемым в практике антибиотикам.: беталактамным препаратам, аминогликозидам, тетрациклинам, фторхинолонам. Однако к некоторым цефалоспоринам (цефуроксиму, цефатегссиму, цефтазидиму, цефиксиму) была выявлена у всех штаммов устойчивость. Учитывая появления в продаже в широком ассортименте новых цефалоспоринов, необходимо при выборе более эффективных препаратов для профилактики и лечения сибирской язвы проводить проверку к ним чувстствительносги.

Известно, что пдтогенность возбудителя сибирской язвы обусловлена способностью микроба продуцировать экзотоксин и капсулу. Эти два основных фактора патогенности детерминированы плазмидами рХ01 и рХ02 (Uchida I. et al., 1985; Kaspar R.L., Robertson D.L., 1987). Гены pag и lef, детерминирующие ПА и ЛФ, располагаются на плазмиде рХ01 рядом друг с другом, а ген суа, детерминирующий ОФ, в некотором расстоянии от них.

Обнаружение генов факторов патогенности используется в настоящее время не только как метод для индикации возбудителя сибирской язвы в различных объектах, но и для идентификации штаммов (Ефременко В.И. с соавт., 1998). Отсутствие или нарушение экспрессии тех или иных генов характеризует штамм, как атипичный.

В наших опытах в ПЦР изучали ДНК 17 штаммов сибиреязвенного микроба, из них штамм 81/1 использовался как тест-ппамм, а ппамм 644/268, как атипичный, не образующий капсулу in vitro и in vivo. Исследование штаммов на наличие генов pag, суа, lef и cap С проводили методом ПЦР с праймерами pag 67-68, суа 25-26, lef 34, cap С 57-58, синтезированными фирмой «Литех», последовательность которых описана

V.Ramisse et a!. (1996). Оказалось, что гены pag, cya и lef выявлены у всех без исключения штаммов. Ген cap С не выявлен только у штамма 644/268, "что соответствует его фенотипу (таблица 1).

Таким образом, по фенотипическим и генетическим признакам все штаммы, выделенные в Ставропольском крае, независимо от сроков хранения и объектов выделения, оказались типичными вирулентными сибреязвенными культурами.

Экспрессия одного из признаков патогенности - способности образовывать капсулу, в лабораторных условиях выявляется лепсо с помощью содовой среды при инкубировании микроба при повышенном содержании углекислоты. В тоже время определение способности микроба к токсинообразованию яь. лется затруднительным процессом в связи с особенностями сибиреязвенного токсина. Разработана синтетическая питательная среда СОПЭК (Еременко Е.И., 1997), на которой можно установить способность микроба к токсинообразрвашпо. В состав этой среды входят в определённых соотношениях 18 аминокислот, соли, агароза, бикарбонат натрия и иммуноглобулин прогивосибиреязвенный лошадиный жидкий (коммерческий).

Таблица 1

Наличие в штаммах B.anthracis генов токсино- и - капсулообразовшпш

вПЦР

№ п/п № штамма РХ01 PX02

pag cya lef cap С

1 8/1 + + + +

2 9/2 + + + +

3 10/3 • + + + +

4 78/649 + + -r +

5 80/1112 -f + + +

6 81/1 + + + +

7 952/64Д + + + +

8 1056/1 + + + +

9 * 1173 + + + +

10 1174 + + + +

11 1190 + + + +

12 1191 + + + +

13 1192 -t- + + +

14 , 1193 + + + +

15 ' 1194 + + + +

16 1195» + + + +

17 644/268 + + + -

Среда СОПЭК имеет существенные недостатки: во-первых, сложный состав питательной среда, сложность её приготовления и дороговизна; во-вторых, большой объём введения дорогостоящего иммуноглобулина противосябиреязвенного лошадиного жидкого (коммерческого) в среду. Поэтому использование ~<ой питательной среды для выявления токсинообразования у сибиреязвенного микроба в лабораторных условиях весьма проблематично.

С этой целью мы предложили питательный агар для образования токсина у сибиреязвенного микроба на основе агара Хотгангера, к которому добавляли 1 % соды и 10 % инакгивированной лошадиной сыворотки. Готовили полоски фильтровальной бумажки (1,5 на 8 см), которые стерилизовали и пропитывали неразведённым иммуноглобулином противосибиреязвенным лошадиным жидким. Смоченную . бумажку накладывали на поверхность уже застывшего агара, после чего изучаемые культуры в вегетативной форме (1-суточные агаровые) засевали по обеим сторонам бумажки в виде бляшек на расстоянии 1 см от бумажки и 2-2,5 см друг от друга. Инкубацию проводили в течение 48 ч при 37 °С в анаэростате при содержании 10-25 % COz

Для обнаружения токсинообразования чашки просматривали при естественном освещении на чёрном фоне, пользуясь листом чёрной бумаги. При наличии у культуры способности образовывать токсин та месте встречи антигена и антител формируется белый преципитат, располагающийся в виде 1-3 линий. Не продуцирующие токсин колонии лишены таких линий.

Предложенный способ был проверен на 16 штаммах сибиреязвенного ммфоба, выделенных в Ставропольском крае, и штамме 644/268. Для сравнения использовали среду СОПЭК (таблица 2).

Разработанный способ повышает точность идентификации, более экономичен, не связан с использованием лабораторных животных и дорогостоящих аминокислот, а также прост для использования в лабораторных условиях.

Сибирская язва энзоотична и эндемична практически на всей территории Ставропольского края.

История сибирской язвы на Северном Кавказе имеет глубокую давность, так как этот район нашей страны исстари является животноводческим. Даже при недостаточно точном учёте за 20 дореволюционных лет (18951914 гг.) на Северном Кавказе было зарегистрировано 4916 неблагополучных по сибирской язве пунктов, в которых заболело 53266 голов скота, из них пало 48098. За этот же период на Северном Кавказе зарегистрировано 11814 случаев сибирской язвы среди людей, причём смертность в отдельные годы достигало 23 % от числа заболевших. Наиболее неблагополучными по сибирской язве за этот период были 1S98,1901,1908,1909,1910 годы. В эти годы имели место засухи-и неурожаи, что, вероятно, сказывалось на росте сибиреязвенных эпгоосетйй (Скляров BJL, 1963).

Таблица 2

Выявление капсулообразования и токсинообразования у различных штаммов В.агйкгаах

№ штаммов Предлагаемым способом Па среде СОПЭК

токсин капсула токсин капсула

8/1 + + + +

9/2 + + + +

10/3 + + + +

78/649 + + + +

80/1112 + + + +

81/1 + + + +

952/64Д + + + +

1056/1 + + + +

1173 + + +

1174 + + + +

1190 + + - +

1191 + + + +

1192 + + + +

1193 + + + +

1194 + + + +

1195 + + + • +

644/268 л - + -

За 18 довоенных лет (1924-1940) в среднем на зону северного Кавказа приходилось ежегодно не менее 32 % обще федеративной заболеваемости, за 17 послевоенных лет (1946-1962гг.) - в среднем более 37 % обще федеративной заболеваемости, а в отдельные годы этот процент достигал 53.

Впервые в Ставропольском крае проведен ретроспективный анализ эпизоотологической и эпидемиологической обстановки за более, чем 100-летний период, и выделено четыре периода заболеваемости людей и - животных, связанных с особенностями вакцинации сельскохозяйственных животных: период нерегулярной вакцинации животных (1896 -1950 гг.), однократной вакцинации (1951-1970 гг.), двукратной (1971-1990 гт.) и однократной вакцинации новой сибиреязвенной вакциной 55 ( 1991- 2001 гг).

Было установлено, что заболеваемость сибирской язвой людей и животных регистрируется во всех 26 районах Ставропольского края. Людей заболело 345 человек, животных - 1778 гол. Больные люди не зарегистрированы в Арзгирском и Георгиевском районе," по 1 случаю в Благодарненском, Кировском районах и по 2 случая - в Нефтекумском и Степновском районах. Эти районы отличает и низкая заболеваемость сельскохозяйственных животных. Наиболее пораженными сибирской язвой

районами являются Изобильненский, Петровский, Левокумский, Труновский, Апанасснковский и Шпаковский районы. Нами установлена совпадение динамики заболеваемости людей и животных по ремени их появления. Высокая численность больных животных, в основном, проявляется за счет крупных вспышек КРС, овец и свиней и, как правило, при этом заболевает 23 человека. Крупных вспышек среди людей зарегистрировано незначительное количество, и все они наблюдались более 30 лет тому назад (рисунок 1).

Первый период, выбранный нами для анализа, характеризуется высокой заболеваемостью как животных, так и людей - 751 гол животных и 119 заболевших людей. В течение 1951-1970 гг. заболеваемость людей и животных продолжает быть высокой, но, начиная с 1971г., она начинает снижаться и доходит до спорадических случаев. Так, за период 1981-1990 гг. заболело всего 9 человек и 141 животное. Обращает внимание, что 17 районов в этот период освободились от заболеваний людей и животных. Несомненно, на снижение заболеваемости людей и животных в третьем и четвертом десятилетии существенное влияние оказала двукратная вакцинация всех сельскохозяйственных животных.

С 1991 г. экономическая ситуация в Ставропольском крае резко изменилась. Разрушились коллективные животноводческие хозяйства, взамен появились фермерские или частновладельческие и реализация мясных продуктов стала трудно контролироваться. Все это привело к тому, что в крае были зарегистрированы крупные групповые заболевания сибирской язвой среди КРС, повлекшие за собой заболевания среди людей. Так, в 1996 г. вспыхнула крупная эпизоотия среди коров в Красногвардейском районе, повлекшая за собой заболевания людей, овец и одной свиньи, в этом же году значительная вспышка среди овец возникла в Петровском районе. Аналогичные вспышки, даже в большем объеме, в этом периоде появились в соседних республиках - Карачаево-Черкессии (1992 г) и Кабардино-Балкарии (1993 г. и 1998 г.).

Ставропольский край долгие годы занимал ведущее положение по разведению овец тонкорунной породы. Это существенным образом отразилось на видовом составе заболевших животных - овец болело больше (61,4 %), чем КРС (33,8 %). В то же время, в других республиках и краях Юга России превалирует заболеваемость сибирской язвой КРС (Петрюк В.А., 1999; Урусбамбегов З.Х., 2000). И ещё одна эпизоогологическая особенность выявлена для Ставропольского края - это заболеваемость свиней (4,8 %), при этом свиньи болеют только в отдельных районах, таких как Геогриевском, Курском, Предгорном, Советском и Шпаковском. Помимо овец, в Шпаковском районе в 1973 г. и в 1977 г. регистрировались крупные эпизоотии среди норок (619 гол)..

Годы

Таким образом, в многолетней динамике заболеваемости людей и животных сибирской язвой в Ставропольском крае можно выделил. 4 периода: допрививочный или с нерегулярными прививками, отличающийся высокой заболеваемостью людей и животных сибирской язвой; прививочный с однократной вакцинацией, характеризующийся высокой заболеваемостью сельскохозяйственных животных, но с намечающимся спадом заболеваемости среди людей; прививочный с двукратной вакцинацией сельскохозяйственных животных, отличающийся снижением заболеваемости сибирской язвой животных и людей до спорадических случаев; прививочный с однократной вакцинацией новой сибиреязвенной вакцины 55, отличающийся возникновением групповых заболеваний животных только в отдельных почвенных сибиреязвенных' очагах, сопровождающихся единичными случаями заболевших людей.

Нами на основании эпизоотоло-эпидемиологического анализа в Ставропольском крае за более чем 100 летний период (1896-2001 гг.) составлен кадастр, в котором представлены карты-схемы районов края с указанием неблагополучных по сибирской язве пунктов. На территории Ставропольского края учтены 1029 стационарно неблагополучных пункта. Наибольшее их количество размещено в Изобильненском районе - 70, 68 пунктов в Красногвардейском, 58 - в Платовском, 57 - в Апанасенковском, 54 - в Труновском, 53 - в Шпаковском, 50 - в Туркменском, 48 - в Буденовском районах, в остальных районах от 40 до 11 пунктов. Чтобы проследить за временем их появления, мы исходили из периодов, которые брали за основу при анализе заболеваемости людей и животных. Период довакцинальный или неполной вакцинации - 1896-1950 гг., период массовых заболеваний сибирской язвой людей и животных в Ставропольском крае, отличается от остальных периодов появлением наибольшего количества неблагополучных пунктов, 55,7 % (573 пункта). В последующие 50 лет зарегистрировано 456 пунктов, 44,3 %. При этом наибольшее их количество формировалось в первые' два десятилетия, в период однократной вакцинации (339), в дальнейшем за 30 лет учтено 117 пунктов. В последние 10 лет зарегистрированы 17 новых неблагополучных пунктов.

Полученные данные позволили провести эпидемиологическое районирование сибирской язвы в крае. Практически, по расположению стационарно неблагополучных по сибирской язве пунктов Ставропольский край можно разделить на две зоны: зону устойчивого проявления заболеваний людей и животных сибирской язвой и зону спорадических проявлений инфекции (рисунок 2).

В первую зону включены большинство районов Ставропольского края - Платовский, Красногвардейский, Новоалександровский, Труновский, Изобильненский, Кочубеевский, Шпаковский, Грачевский, Петровский, Благодарнекский, Александровский, Андроповский, Минераловодский, Предгорный, Кировский, Советский.

Стационарно неблагополучные по снбнрскон язве пункты в районах

Ставропольского края

Ростовская область

Калмыкия

Кабардино-Балкария

Во вторую зону можно включить: северо-восточную часть Аяанасенковкого района, север Буденовского, Георгиевского, Левокумского районов, восточную часть Курского, Новоселицкого и Степновского районов, целиком Арзгирский и Нефтекумский районы. На указанные территории приходится лишь 50 стацинарно неблагополучных пунктов, что составляет 4,6 %. При этом, все эти пункты появились до 1970 г, за исключением 2-х пунктов в Арзгирском районе (1971, 1976 г.)

Известно, что активность проявления эпизоотического процесса в стационарно неблагополучных по сибирской язве пунктах связана с почвенно-климатическими условиями, влияющими на биологию возбудителя (Черкасский Б.Л., 1999). Как нами уже сообщалось, наиболее длительно сохраняется возбудитель сибирской язвы в черноземах и других богатых гумусом почвах, при щелочной или нейтральной реакции и значительной влажности (Колонии Г.В., 1969; Ипатенко Н.Г. с соавт., 1990; Родзиковский А.В., Соркин Ю.И., 1990; Киреев Ю.Г., Прометной В.И., 1994; Киреев с соавт., 1996). На активность неблагополучных по сибирской язве пунктов в определенной степени оказывает влияние количество атмосферных осадков и водная эрозия.(Киреев Ю.Г., 1994).

Нами проведен анализ зависимости активности сибиреязвенных почвенных очагов в крае от различных почвенно-климатических факторов.

Были использованы такие данные: дня характеристики почв - тип почвы, содержание гумуса, рН и эрюзивность; из климатических факторов -величина атмосферных осадков, средняя температура и водная эрозия.

Преобладающими почвами в Ставропольском крае являются чернозёмные и каштановые, лишь в северю-восточиой и восточной частях края расположены пески, солонцы и солончаки (рисунок 3).

На основании наших наблюдений и прюведённого картографирования стационарно неблагополучных по сибирской язве пунктов на территории Ставропольского края было установлено, что существует прямая связь между почвенно-климатическими условиями и стойкостью очагов данной инфекции.

Зона устойчивого проявления заболеваний людей и животных сибирской язвой, неблагополучная по сибирской язве территория, в основном, расположена на северю-западных, западных, центральных и южных территориях края. Это степная и предгорная зона с черноземами или темно-каштановыми почвами, с высоким слоем гумуса, нейтральной или слабо щелочной рН, высокой эрозировности. Эти территории входят в зону неустойчивого увлажнения. Среднегодовое количество осадков равно 500550 мм, в отдельные годы - 600-700 мм. Температурные условия на этих территориях способствуют укоркнешпо сибиреязвенного микроба. В весенне-летний период (май - сентябрь) среднемесячная температура колеблется от +16 °С до +25 °С, максимальная - от +30 °С до +36 °С. Весна относительно теплая, в первой декаде марта почва оттаивает на полную глубину. С середины апреля начинается безморозный период, который

Основные типы почв в Ставропольском

Ростовская область.

У. Тру конский •.

Калмыкия

Обозначения:

1 .светлокотновьи

2 •светлоквшпковые и солонцово.^

солонч«кшые комплексы

3-к*штшю»ые <?<

4-кашпншые салонцеавтьм 5.темкокаштаноаме ¿черноземы

7лески

Эсолонцеввти-солончмссвы* комплексы

\У

\ м " I

ЧНоног.щм—- 'V — — — -

'^^г^-Г^Ш?* Дагестан

\\\УЛ\лУа\\\\\«гГ|',' 11 'Ар !

т Г-/ЗД, 1111,

Кабардино-Балгария

--1/' ,•

Се8еп„ Ч-1 ^ Ч*™»

* ■ шпз* ссз, ЕЭ,

заканчивается в конце октября, средняя продолжительность его равна 185-190 дням. На эту зону приходится 95,4 % стационарно неблагополучных пунктов.

В зону спородических проявлений инфекции входят стационарные пункты, размещенные на севере и севере-востоке некоторых районов, граничащих с Калмыкией, Дагестаном и Чечней. Почвы каштановые или светлокаштановые, бедные влагой и органическими веществами, с высоким щелочным рН, не подвергающиеся водной эрозии, мало пригодные для вегетации возбудителя сибирской язвы. Климатические условия (жаркое лето, засуха) также этому способствуют. На таких территориях размещено лишь 4,6 % стационарных пунктов, при этом почти все они сформировались 50 лет тому назад.

Составленный нами кадастр стационарно неблагополучных по сибирской язве пунктов в Ставропольском крае может служить основой для целенаправленного проведения профилактических мероприятий формированию новых неблагополучных сибиреязвенных пунктов.

В настоящее время на фоне относительно низкой заболеваемости как людей,' так и животных увеличилась доля групповых вспышек. Так, зарегистрирована крупная вспышка в 1992 г. в Карачаево-Черкессии (Агапитов Д.С. с соавт., 1994), затем в 1993 г. и 1998 г. в КБР (Буравцева Н.П. с соавт., 1994, Урусбамбетов З.Х , 2000). В Ставропольском крае за последние 50 лет также отмечается несколько вспышек сибирской язвы. Так, в 1968 г. в совхозе "Белые Копани" Апанасенковского района была крупная вспышка коров- на животноводческой базе. Причиной послужил зеленый корм, который перевозился на тележке, загрязненной спорами возбудител.7 сибирской язвы. Одним из неблагополучных районов по сибирской язве в Ставропольском крае является Труновский район, в котором было зарегистрировано четыре вспышки сибирской язвы среди коров (1968, 1984, 1990,1995 гг.).

Неожиданным было появление больных сибирской язвой в 1995 г. в Новосеяецком районе, в с. Паденском, так как на этой территории не было зарегистрировано случаев сибирской язвы среди люден и животных. Эпидрасследование выявило, что все четверо жителей заболели сибирской язвой в результате разделки туши вынужденно забитой коровы. Ещё 16 коров пали от сибирской язвы. Один из заболевших употреблял от забитой коровы жареную селезёнку и печень, после чего на 5 - сутки болезни он скончался от токсико-инфекционного шока.

В 1996 г. в Красногвардейском районе в посёлке Медвеженском была зарегистрирована крупная вспышка сибирской язвы среди КРС. Животные заразились, употребляя воду из «Соленого озера», которое заполнилось водой после ливневых дождей. Эпидемиологическая ситуация была осложнена тем обстоятельством, что молоко от больных коров поступало на молокозаводы в г. Ставрополя и с. Красногвардейское.

Не менее сложная ситуация сложилась в 1998 г в с. Степное. Из мяса от больной коровы, больных свиней и овец готовилась колбаса, которая частично была реализована. Это было обнаружено только после того, как заболела зав.складом предприятия, на котором колбаса готовилась.. Больную удалось спасти, хотя у нее кожная форма осложнилась сепсисом. Все оборудование на предприятии было загрязнено спорами сибиреязвенного микроба.

При эпидрасследовании всех вспышек были установлены основные причины возникновения сибирской язвы - это неполный охват прививками сельскохозяйственных животных против сибирской язвы, неудовлетворительная подготовленность врачей общей медицинской сети по особо опасным инфекциям, а также грубейшие нарушения элементарных санитарно-ветеринарных правил.

Сибирская язва - зоонозная инфекция, поэтому эпидемиологический надзор за этой инфекцией осуществляется на основе разработанных комплексных программ, в которых учитываются задачи и функции всех уровней управления санитарно-эпидемиологической, ветеринарной и других служб и ведомств края (МВД, таможенный комитет, министерство торговли и др.). В настоящее время в крае действует программа, утвержденная решением совета ассоциации республик, краев и областей Северного Кавказа, "Обеспечение эпидемиологической безопасности по особо опасным и природно-очаговым заболеваниям и улучшению медико-экологической обстановки на Юге России (1999-2002 гг.)".

Постоянный и оперативный обмен информацией между медицинской, ветеринарной и другими службами является определяющим звеном в комплексности управленческих решений, принимаемых всеми заинтересованными службами.

Благодаря компл. ксному подходу к проведению противоэпидемических мер, их своевременности и оперативности в очагах сибирской язвы, эпидемические вспышки в крае были ликвидированы в короткие сроки и не было допущено распространения инфекции за пределы первичных очагов.

Выводы:

1. Установлено, что 30 штаммов В. anthracis, выделенных очагах сибирской язвы в Ставропольском крае, комплексно изученных как классическим способом, так и новыми методами, независимо от сроков хранения и объектов выделения, оказались типичными вирулентными сибиреязвенными культурами.

2. Установлено, что гены pag, суа, lef и cap С, ответственные за патогенность, выявлены в реакции ПЦР у всех без исключения штаммов, выделенных в Ставропольском крае, что соответствует их фенотипу.

3. Впервые обнаруженная устойчивость выделенных в Ставропольском крае штаммов В. anthracis к антибиотикам цефалоспоринового ряда -

цефуроксиму, цефатоксиму, цефтазидиму, цефиксиму, имеет важное практическое значение при выборе курса лечения сибирской язвы.

4. Разработан новый способ определения токсино-и-капсулообразования В. агиЬгася по формированию имму нопреци питации в агаре с помощью бумажных полосок, пропитанных иммуноглобулином противосиби-реязвенным лошадиным жидким, обеспечивающий сокращение времени лабораторного диагноза и снижение стоимости исследования.'

5. Установлены закономерности в динамике заболеваемости сибирской язвой людей и животных в Ставропольском крае, зависящие от эффективности проводимых профилактических мероприятий и в первую очередь вакцинации сельскохозяйственных животных. Наибольшее количество больных людей и животных зарегистрированы до 1970 гг. - в период неполной или однократной вакцинации животных, в то время, как в последующие годы (период двукратной вакцинации) заболеваемость снизилась до спорадических случаев.

6. Неравномерность распределения заболеваемости людей и животных отразилось, в свою очередь, на динамике формирования стационарно неблагополучных по сибирской язве пунктов (1029). Наибольшее их число (55,7 %) сформировалось в довакцинальный период или неполной вакцинации - 1896-1950 тт. В последующие 50 лет зарегистрированы 44,3 % пунктов. Некоторый подъем числа новых неблагополучных пунктов в последнем десятилетии связан, по-видимому, с неполной вакцинацией животных, обусловленной перестройкой в сельском хозяйстве.

7. Установлена зависимость активности сибиреязвенных очагов от характера почвеишыишматических факторов в различных регионов края. Наиболее активные очаги (95,4 % - зона устойчивого проявления заболеваемости людей и животных) расположены на черноземных и каштановых почвах, в поймах рек, с умеренной влажностью и жарким климатом. Зона спорадических проявлений инфекции (4,6 %) - на территориях светлокаштановых почв с солонцевато-солончаковыми комплексами и песками, жарким летом и суховеями, где заболевания людей и животных сибирской язвой отсутствуют.

8. Данные эпизоотолого-эпидемиологического анализа заболеваемости людей и животных сибирской язвой впервые позволили разработать атлас-кадастр стационарно неблагополучных по сибирской язве пунктов в Ставропольском крае, который может способствовать прогнозированию эпидемической ситуации в крае.

Список работ, опубликованных по теме диссертации: 1 .Лысогора Е.В. Эпидемиологическая ситуация по сибирской язве в Ставропольском крае // Здоровье и болезнь как состояния человека. -Ставрополь, 2000. - С. 484-485.

2. Лысогора Е.В. Почвенные очаги сибирской язвы в Ставропольском крае//Тамже. - Ставрополь, 2000. - С.528-529.

3.'1>уравцева Н.П., Донской С.В., Габадзе С.К., Лукаш М.М., Коготкова О.И.,Саркисова Н.В., Лысогора Е.В. Вспышка сибирской язвы в Ставропольском крае Н Сб. материалов между нар. науч. конф. " Проблемы биологической и экологической безопасности", 22-25 мая 2000 г., г.Оболенск. - Оболенск, 2000. - С. 20-21.

4. Буравцева Н.П., Цыганкова О.И., Ерёменко Е.И., Лысогора Е.В., Саркисова Н.В. Характеристика штаммов B.anthracis, выделенных в очагах сибирской язвы в Ставропольском крае // Деп. в ВИНИТИ 12.07 2001 г. № 1646-В 2001.-27 с.

5. Буравцева Н.П., Саркисова Н.В., Ерёменко Е.И., Цыганкова О.И., Коготкова О.И., Лысогора Е.В. Чувствительность сибиреязвенного микроба к антибиотикам, в том числе к цефапоспоринам // Актуальные аспекты природноочаговых болезней: Мат. межрегион, науч.-практ. конф. 16-17 окт. 2001 г., посвященной 80-летаю Омскою НИИПИ. - Омск, 2001. - С. 208-209.

6. Буравцева Н.П., Лысогора Е;В. Вспышки сибирской язвы. в Ставропольском крае // Здоровье. — Ставрополь, 2001. - С. 430-432.

7. BuravtsevaN.P., Proskurina V.A., Eremenko E.I. Lysogora E.V. Effective antibiotics for trament and profylax of Bacillus anthracis II Научный журнал: Эрдэм Шинжилгээний Бутээл. - 1999. - № 7. - Р. 193-194 (Монголия).

8. Buravtseva N.P., Proskurina V.A., Eremenko E.I., Yaroschuk V.A., Lysogora E.V. Elimination of Bacillus anthracis fiorri Milk During Pasteurisation Followed by Fermentation with Lactobacill // Abstracts of 4-th International Conference on Anthrax, Iune 10-13, 2001, Annapolis, Maryland, USA.-B. 24.

Зак. № CS Подл, к печ. 04. 0/. <5 ¿Тир. /00 ш.

Рэтапрнлт ВНИИОК. Ставрополь, пер.ЗоотехническвЯ, 15

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Лысогора, Елизавета Вильевна

Вявдоянс

ГЛАВА I. Обзор лвтервтуры

1.1. Микробиология и лабораторная диагностика Bacillus anthracis

1.2. Эпизоотология сибирской язвы

1.3. Эпидемиология сибирской язвы

1.4. Сибирская язва на Северном Кавказе

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА Н.Мятернялы ■ методы

2.1. Штаммы микроорганизмов

2.2. Экспериментальные животные

2.3. Химические реактивы, питательные среды

2.4. Методы, используемые для характеристики сибиреязвенных штаммов

2.4.1. Методы выделения и культивирования сибиреязвенного 44 микроба на дифференциально-диагностической питательной среде

2.4.2. Тест с сибиреязвенным бактериофагом

2.4.3. Капсулообразование in vitro

2.4.4. Тест "жемчужное ожерелье"

2.4.5. Гемолиз эритроцитов барана

2.4.6. Тест на лецитиназу

2.4.7. Определение протеолитической и гемолитической активности

2.4.8. Определение питательных потребностей

2.4.9. Определение токсинообразования и капсулообразования на среде СОПЭК

2.4.10. Определение чувствительности сибиреязвенного микроба к антибиотикам

2.4.11.ПЦР

2.5. Методы статистической обработки

ГЛАВА III. Эиизоотологические и эпидемиологические особенности сибирской язвы и Ставропольском крае

3.1. Краткая клнмато-географическая характеристика и экономика Северного Кавказа и Ставропольского края

3.2. Заболеваемость животных сибирской язвой в Ставропольском крае 57 3.3 Заболеваемость людей сибирской язвой в Ставропольском крае

ГЛАВА IV. Характеристика штаммов В. апйкгаск, выделенных в очагах сибирской язвы в Ставропольском крае

4.1. Выделение штаммов сибиреязвенного микроба в очагах сибирской язвы в Ставропольском крае

4.2. Характеристика основных биологических свойств сибиреязвенных штаммов

4.3.Чувствительность сибиреязвенных штаммов, выделенных в

Ставропольском крае, к различным антибиотикам

4.4. Изучение факторов патогенности штаммов сибиреязвенного микроба, выделенных в Ставропольском крае, с помощью ПЦР

4.4.Разработка нового метода определения токсинои - капсулообразования у сибиреязвенного микроба

ГЛАВА V. Характеристика стационарно неблагополучных по сибирской язве пунктов и отдельных вспышек сибирской язвы на территории Ставропольского края

5.1. Стационарно неблагополучные по сибирской язве пункты

5.2. Вспышки сибирской язвы в Ставропольском крае и проводимые в них профилактические мероприятия

Введение Диссертация по биологии, на тему "Биологические свойства штаммов Bacillus anthracis, выделенных в очагах сибирской язвы Ставропольского края"

Актуальность проблемы. Сибирская язва - особо опасное инфекционное заболевание. Актуальность изучения свойств возбудителя, усовершенствования методов его выделения и идентификации вызвана возникновением в последнее время опасности, связанной с актами биологического терроризма в США. Возбудитель сибирской язвы еще со времен II мировой войны считался наиболее вероятным потенциальным агентом биологического оружия (Беляков В.Д., Жук Е.Р., 1988; Смирнов Е.И. с соавт., 1988; Crenn Y., 1992; Meselson М. et al., 1994).

Широкое распространение сибирской язвы отмечается во многих странах Европы, Азии и других регионах земного шара. Наибольшее число заболевших людей зарегистрировано в Китае: 2799 случаев сибирской язвы за период 1990-1994 гг., из них 380 смертельных (Xudong L. et al., 1995). Проблема сибирской язвы постоянно существует в Индии (Stephen G. et at., 1994; Lalitha M.K. et al., 1995), Турции (Doganay М, 1995), Судане (Musa М.Т. et al., 1993), Непале (Joshi D.D. et al., 1995), Танзании (Jiwa S.F.H., 1995), Замбии (Bbalo G., 1995). После долгого перерыва сибирская язва появилась в Австралии (Turner A.J. et al., 1998).

Основной эпизоотологической и эпидемиологической особенностью сибирской язвы в настоящий период является неравномерность территориального распределения заболеваний сибирской язвой, преобладающие на Юге России, в Казахстане и республиках Средней Азии -Узбекистане, Таджикистане, Туркменистане, Киргизии ( Камышева В.Ф. с соавт., 1993; Черкасский Б.Л. с соавт., 1993; Федякин Ю.П., Хотько Н.И., 1994; Галсанова Г.Д. с соавт., 1995; Пекова JI. с соавт., 1995; Турсункулов

Ж.Ш. с соавт., 1997; Монисов A.A. с соавт., 1997; Абакаримов С.Т. с соавт., 1997; Маткаримов Б.Д., 1997; Буравцева Н.П. с соавт. 2000).

К неблагоприятным по сибирской язве территориям относится и Северный Кавказ, хотя в 60-80 гг. удалось резко снизить заболеваемость людей и животных в результате широко проводимых профилактических мероприятий. Однако изменения социально-экономических отношений в сельском хозяйстве после 1991 г. как внутри региона Северного Кавказа, так и в сопредельных государствах Закавказья, предопределяют существенные изменения в эпизоотической и эпидемической ситуации по сибирской язве (Буравцева Н.П. с соавт., 1994; Ярощук В.А. с соавт., 1996; Монисов A.A. с соавт., 1997; Петров С.П. с соавт., 1997). Зарегистрированы крупные групповые вспышки людей в 1992 г. в Карачаево-Черкессии (Агапитов Д.С. с соавт., 1994; Петрюк В.А. с соавт., 1997), в 1993 г. и 1998 г. в Кабардино-Балкарской республике (Урусбамбетов З.Х. с соавт., 2000), в 1998 г. в Калмыкии.

Вопрос об экологии возбудителя сибирской язвы в почве не может считаться решенным, так как по этому поводу существуют разные точки зрения. H.H. Гинсбург (1975), A.C. Коротич и Л И. Погребняк (1976), В.А. Ярощук, Н.П. Буравцева (1990) считают, что размножение сибиреязвенного микроба в почве сопровождается необратимой утратой его патогенных свойств. Такая концепция подтверждается фактами выделения из старых скотомогильников культур Bacillus anthracis, не способных образовывать капсулу, а так же культур, образующих мукоидные колонии на воздухе (Колонии Г.В., 1969,1971; Гулый A.C., 1982; Буравцева Н.П. с соавт., 1983). Однако в последнее время появились данные о том, что некоторые из таких атипичных штаммов способны в определенных условиях эксперимента восстанавливать и даже повышать свою вирулентность с соответстующим измененением генотипа (Еременко с соавт., 1992, 1998, 1999).

Ряд исследователей полагает, что стойкость почвенных очагов связана не только с биологической устойчивостью спор сибиреязвенного микроба, но и главным образом с накоплением возбудителя в почве за счет вегетации (Чуйская Г.Я.,1971; Иванова Д.П. с соавт.,1980; Соркин Ю.И. с соавт.,1980; Завирюха А.И.,1990; Ипатенко Н.Г. с соавт.,1990).

Фактические данные позволяют некоторым авторам считать, что состояние инфицированности почвы возбудителем сибирской язвы есть явление динамическое, подверженное изменчивости во времени в количественном и качественном отношениях под влиянием меняющихся условий внешней среды. Неблагоприятно сложившиеся условия внешней среды могут вести к уменьшению вирулентности В. anthracis, либо к полной гибели возбудителя. Вместе с тем, благоприятные гидрометеорологические и биоценотические условия могут способствовать накоплению возбудителя в почве на основе многократных вегетаций и обусловить стойкое стационарное неблагополучие сибиреязвенного очага (Владимиров A.A., 1936; Ломаковская В.М., 1956; Прометной В.И., Богданова ТФ., 1984; Соркин Ю.И., Родзиковский A.B., 1984; Киреев Ю.Г., 1994 ).

Однако в настоящий период как отечественными, так и зарубежными исследовав :лями недостаточно уделяется внимания вопросам экологии возбудителя сибирской язвы. Основная тенденция в изучении эпидемиологии сибирской язвы сводится к описанию вспышек сибирской язвы, причин их возникновения и проводимых противоэпидемических мероприятий.

Характеристике биологических свойств возбудителя сибирской язвы в отечественной и зарубежной литературе посвящено достаточное количество научных работ и рекомендаций. Наряду с типичными штаммами в природных условиях довольно часто встречаются атипичные, для характеристики которых не достаточно использование только традиционных лабораторных способов исследования. Особый интерес представляют штаммы с ослабленной вирулентностью, эпидемическая и эпизоотическая значимость которых не вполне очевидна (Калиновский А.И. с соавт., 1986; Неляпин Н.М. с соавт., 1986; Черкасский Б.Л. с соавт., 1978; Ипатенко Н.Г. с соавт., 1991; Цыганкова О.И.с соавт., 1995; Turnbull P.C.B, et al., 1992).

Отечественными и зарубежными исследователями предложено целый ряд методик и приемов, позволяющих не только обнаружить атипичные штаммы в объектах исследования, но и изучить характер их изменчивости (Цыганкова О.И., 1993; Еременко Е.И., 1997 и др.)

Дм определения таксономической принадлежности некоторых атипичных штаммов предложено учитывать также рестрикционный профиль плазмид и результаты ПЦР с праймерами к последовательностям генов факторов вирулентности ( Еременко Е.И. с соавт.,1999; Ramisse V et al., 1996; Patra G. et al., 1998; Staritzyn N.A. et al.,1999).

Первые попытки различить штаммы бацилл внутри вида, в том числе и сибиреязвенные, основывались на самых отличительных фенотипических признаках. Е.И. Ерёменко (1997) предложил использовать в качестве критериев для внутривидовой таксономии ряд показателей, в том числе протеолитическую активности in vitro, плазмидный состав, питательные потребности, однородность популяций и вирулентность для лабораторных животных. Изучение внутривидовой таксономии сибиреязвенного микроба при достаточно точном разделении всех штаммов на группы с определением фено- и - плазмидотипов дает возможность проследить закономерные взаимопереходы между ними и определить эпидемическую значимость того или иного штамма В. anthracis.

Цель работы. Сравнительная характеристика штаммов В. anthracis из сибиреязвеных почвенных очагов и создание кадастра стационарно неблагополучных по сибирской язве пунктов в Ставропольском крае

Для достижения этой цели были поставлены задачи:

- определить наличие генов основных факторов патогенности у штаммов В. anthracis;

- определить у штаммов В. anthracis чувствительность к антибиотикам, в том числе к цефалоспоринам;

- усовершенствовать метод определения капсуло- и- токсинообразования у сибиреязвенного микроба in vitro;

- на основании эпизоотолого-эпидемиологического анализа сибирской язвы в Ставропольском крае выявить стационарно неблагополучные по сибирской язве пункты с последующей оценкой их эпидемической опасности;

- определить зависимость активности почвенных сибиреязвенных оча< оь на территории Ставропольского края от характера почвенно-климатических условий и выявить факторы, провоцирующие эпизоотии сибирской язвы ;

- создать атлас-кадастр стационарно неблагополучных по сибирской язве пунктов Ставропольского края.

Научная новизна. Впервые комплексно изучены сибиреязвенные штаммы, выделенные в крае из различных объектов в очагах сибирской язвы за 45-летний период. При характеристике штаммов использованы современные методы исследования такие, как определение гемолитических свойств по отношению к отмытым эритроцитам барана, протеолитических свойств по отношению к гемоглобину, альбумину, казеину и желатине, питательных потребностей на синтетической среде "9AT" и выявление генов токсино-и-капсулообразования в ПЦР. Определена чувствительность штаммов к 37 антибиотикам, впервые установлена устойчивость к некоторым цефалоспоринам (цефуроксиму, цефотаксиму, цефтазидиму, цефиксиму), что необходимо учитывать при лечении и профилактике сибирской язвы.

Разработан более простой и надежный метод определения токсино- и-капсулообразования на чашках с помощью реакции иммунопреципитации с использованием индикаторных бумажек, пропитанных иммуноглобулином противосибиреязвенным лошадиным жидким

Впервые в Ставропольском крае проведен ретроспективный анализ эпизоотологической и эпидемиологической обстановки за более, чем 100-летний период и выделено четыре периода заболеваемости людей и животных, связанных с особенностями вакцинации: период нерегулярной вакцинации животных (1896-1950гг.), однократной вакцинации сельскохозяйственных животных (1951-1970 гг.), двукратной (1971-1990 гг. и однократной вакцинации новой сибиреязвенной вакциной 55 (1991- 2001 гг).

Установлено снижение заболеваемости людей и животных до спорадических случаев к концу 90 годов, в последнем же десятилетии прослеживается тенденция к увеличению заболеваемости животных в отдельных неблагополучных пунктах. Заболеваемость людей носит бытовой характер, полностью исключен промышленно-индустриальный тип заболеваемости в крае.

Впервые изучены особенности экологии возбудителя сибирской язвы в почвенных очагах на территории Ставропольского края. Проведен анализ зависимости активности стационарно неблагополучных по сибирской язве пунктов от почвенно-климатических условий и хозяйственного освоения этих территорий. В результате проведенного районирования территория Ставропольского края разделена на зону устойчивого проявления заболеваний людей и животных и зону спорадических проявлений инфекции. Определены неблагополучные пункты с высокой степенью вероятности появления новых сибиреязвенных очагов. Установленные экологические особенности возбудителя сибирской язвы позволят проводить дифференцированные профилактические мероприятия на изучаемых территориях.

Впервые создан атлас-кадастр стационарно неблагополучных по сибирской язве пунктов в Ставропольском крае.

Практическая значимость. Установленные эпизоотологические и эпидемиологические особенности сибирской язвы позволяют проводить дифференцированные противоэпидемические мероприятия в районах Ставропольского края. Материалы по эпизоотолого-эпидемиологическому районированию нашло отражение в целевой комплексной программе "Обеспечение эпидемиологической безопасности по особо опасным и природно-очаговым инфекциям и улучшение медико-экологической обстановки на Юге России (1999-2002 гг.)", одобренной решением Совета ассоциации республик, краев и областей Северного Кавказа.

1. Методические рекомендации "Определение токсинообразования и капсулообразования у сибиреязвенного микроба "(Утверждены Ученым Советом СтавНИПЧИ, протокол № 5 от 31 мая 2001 г.)

2. "Кадастр стационарно неблагополучных по сибирской язве пунктов в Ставропольском крае" (Утвержден Ученым Советом СтавНИПЧИ, протокол № 8 от 21 сентября 2001 г.)

Основные положения, выносимые на защиту:

2.0пределение чувствительности ставропольских штаммов к антибиотикам свидетельствует о высокой их чувствительности к большинству антибиотиков. Однако обнаруженная устойчивость к некоторым цефалоспоринам, широко используемым в настоящее время в лечебной практике, дает основание для рекомендаций об обязательной проверке чувствительности к антибиотикам при разработке схем лечения больных сибирской язвой.

3. Территориальное распределение неблагополучных по сибирской язве пунктов в Ставропольском крае зависит от характера почвенно -климатических факторов и хозяйственного освоения этих территорий.

4. Данные эпизоотолого-эпидемиологического анализа сибирской язвы позволяют научно обосновать прогнозирование эпидемической ситуации по сибирской язве на основе разработанного кадастра стационарно неблагополучных по сибирской язве пунктов в Ставропольском крае.

Апробация работы. Основное содержание диссертации отражено в 8 опубликованных работах и в заключительном отчете. Материалы диссертации доложены и обсуждены на научно-практических конференциях Ставропольского научно-исследовательского противочумного института и Ставропольской государственной медицинской академии в 1998-2001 гг.

Структура н объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 4 глав собственных исследований, заключения, выводов, списка используемых источников (154 отечественных и 75 иностранных авторов) и приложения А. Работа изложена на 237 страницах компьютерного текста, включает 37 таблиц и 32 рисунка.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Лысогора, Елизавета Вильевна

выводы

2. Установлено, что гены pag, суа, lef и cap С, ответственные за пато-генность, выявлены в реакции ПЦР у всех без исключения штаммов, выделенных в Ставропольском крае, что соответствует их фенотипу.

3. Впервые обнаруженная устойчивость выделенных в Ставропольском крае штаммов В. anthracis к антибиотикам цефалоспоринового ряда - цефу-роксиму, цефатоксиму, цефтазидиму, цефиксиму, имеет важное практическое значение при выборе курса лечения сибирской язвы.

4. Разработан новый способ определения токсино-и-капсулообразования В. anthracis по формированию иммунопреципитации в агаре с помощью бумажных полосок, пропитанных иммуноглобулином противосибиреязвенным лошадиным жидким, обеспечивающий сокращение времени лабораторного диагноза и снижение стоимости исследования.

6. Неравномерность распределения заболеваемости людей и животных отразилось, в свою очередь, на динамике формирования стационарно неблагополучных по сибирской язве пунктов (1029). Наибольшее их число (55,7 %) сформировалось в в акцинальный период или неполной вакцинации -1896-1950 гг. В последующие 50 лет зарегистрированы 44,3 % пунктов. Некоторый подъем числа новых неблагополучных пунктов в последнем десятилетии связан, по-видимому, с неполной вакцинацией животных, обусловленной перестройкой в сельском хозяйстве.

7. Установлена зависимость активности сибиреязвенных очагов от характера почвенно-климатических факторов в различных регионов края. Наиболее активные очаги (95,4 % - зона устойчивого проявления заболеваемости людей и животных) расположены на черноземных и каштановых почвах, в поймах рек, с умеренной влажностью и жарким климатом. Зона спорадических проявлений инфекции (4,6 %) - на территориях светлокаштановых почв с солонцевато-солончаковыми комплексами и песками, жарким летом и суховеями, где заболевания людей и животных сибирской язвой отсутствуют.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Лысогора, Елизавета Вильевна, Ростов-на-Дону

1. Абакаримов С.Т., Баатырбеков Э.Ш., Шевченко В.П. О состоянии заболеваемости и мерах профилактики в Кыргызской Республике // Матер. Межрегион, рабочего совещ. ВОЗ/ФАО по сибирской язве.- Алматы, 1997.- С. 26-27.

2. Абалакин В.А., Черкасский Б.Л. Наследственная устойчивость к сибирской язве и чувствительность к сибиреязвенному токсину у мышей // ЖМЭИ.- 1986.- № 5.- С. 45-49.

3. Африкян Э.К. Энтомопатогенные бактерии и их значение. Ереван, Изд-во АН Арм.ССР, 1973.-418

4. Бароян О.В. Динамика инфекционных болезней в СССР за истекшие 50 лет (1917-1967) // Бароян О.В. Итоги полувековой борьбы с инфекциями в СССР и некоторые актуальные вопросы современной эпидемиологии.- М., 1968.-С. 135-142.

5. Безуглова О.С. Гумус почв Ростовской области // Автореф. дис. канд. Биол наух. Ростов н/Д, 1976. - 21 с.

6. Беляков В.Д., Жук Е.Р. Военная эпидемиология // Военная гигиена и эпидемиология: Учеб. пособие. 2 изд., перераб. и дополн. - М., 1988. -Разд. 2. - С. 173-316.

7. Блялов Б.А., Утегенов К.У., Спатаев М.Б. Паспортизация очагов сибирской язвы первооснова эпидемиологического надзора // Здравоохранение Казахстана. - 1991- № 5.- С. 9-11.

8. Богданов И.К., Пугачева О.Н. Состояние заболеваемости людей сибирской язвой в Ставропольском крае в 1970-1990 г. // Современные аспекты профилактики зоонозных инфекций: Тез. докл. науч. конф.-Ставрополь, 1991.-С.- 105-106.

9. Бугаркова Т.В., Шмеркивич Д.А., Наумшина М.С. Биохимия, патофизиология и микробиология особо опасных инфекций. Саратов, 1983.-С. 78-82.

10. Буравцева Н.П., Кулешова Л.И. Сравнительное изучение чувствительности B.anthracis к различным антибиотикам // Антибиотики, 1972 Вып.11.- С. 1019-1023.

11. Буравцева Н.П., Ярощук В.А., Ерёменко Е.И., Банных В.А., Гниловская Ю.Г. Сибирская язва на Северном Кавказе // Мат. Межгосуд. науч. конф.

12. Актуальные вопросы профилактики чумы и других инфекционных заболеваний", посвящ. 100-летию открытия возбудителя чумы. -Ставрополь, 1994. С. 168-169.

13. Буравцева Н.П., Ерёменко Е.И., Цыганкова О.И. Роль атипичных штаммов сибиреязвенного микроба в эпизоотологии и эпидемиологии сибирской язвы // Матер. Межрегион, рабочего совещ. ВОЗ/ФАО по сибирской язве. -Алматы, 1997. С. 38-39.

14. Бургасов П.Н., Марчук J1.M., Черкасский Б.Л. и др. Сибирская язва // Под ред.Р.А.Салтыкова. М.: Медицина, 1970. - 127 с.

15. Бургасов П.Н., Рожков Г.И. Сибиреязвенная инфекция // М.: Медицина, 1984. 208 с.

16. Ветчинин В.В., Сухопяткин A.A., Бат О.С., Патапова В.Г. Особенности распространения сибирской язвы в ландшафтно-географических условиях Ивано-Франковской области // ЖМЭИ.- 1978.-№4.-С. 144.

17. Владимиров A.A. К биологии сибиреязвенного микроба в почве // Архив биол. наук.- 1936.- Т. 43.- Вып. 213.- С. 331-336.

18. Вяжевич В.К. К эпидемиологии сибирской язвы у людей в Новосибирской области за последние 10 лет (1949-1958) // ЖМЭИ.- i960.- № 12,- С. 100101.

19. Галсанова Г.Д., Цыдыпов В.Ц., Угрюмов Г.А., Филипов И.В., Будаев Ю.Ж., Содбоев Ц.Ц. Случай вспышки сибирской язвы в Бурятии // Ветеринария,- 1995.-№9.-С. 10-11.

20. Ганнушкин М.С. Сибирская язва // Курс эпизоотологии. М., 1952. - С. 121-138.

21. ГинсбургН.Н. Живые вакцины//М.: Медицина, 1969,-С. 126-134.

22. Гинсбург H.H. Сибирская язва// М.: Медицина, 1975.- 159с.

23. Гинсбург Н.Н., Федотова Ю.М. Сравнительное изучение вакцинного и вирулентного штаммов в культуре тканей эмбриона человека // ЖМЭИ. -1963.-№11.-С. 3-7.

24. Гребёнкина М.Б., Афанасьев Е.Н., Проскурина В.А., Ефременко В.И. Изучение терапевтической эффективности липосомальных форм антибиотиков при сибирской язве //Деп. В ВИНИТИ №2338 В- 97, 10.07.97.-9 с.

25. Громашевский Л.В., Вайндрах Г.Н. Частная эпидемиология. М., 1947. -С. 625-637.

26. Джупина С.И. Современные особенности профилактики сибирской язвы // Диагностика болезней животных.- Новосибирск, 1984. С. 3-9.

27. Джупина С.И. Прогнозирование эпизоотической ситуации: (на модели эпизоотического процесса сибирской язвы). Новосибирск: СО РАСХН, 1996.-191 с.49. Ёлкин Н.П. Очерки теории эпидемиологии // М., 1960. 256 с.

28. Ерёменко Е.И. Потребности сибиреязвенного микроба в факторах роста и новые питательные среды для его культивирования : Авт. дис. . канд. мед. наук. Саратов, 1986. - 25 с.

29. Ерёменко Е.И. Биологические и популяционные аспекты патогенности Bacillus anthracis II Дис. докт. мед. наук. Ставрополь, 1997. - 275 с.

30. Ерёменко Е.И., Цыганкова О.И., Буравцева Н.П. Новые методы исследования штаммов В. anthracis // Материалы науч.-практ. конф., посвященной 100-летию образования противочумной службы России. -Саратов, 1997. Т. 1. - С. 43.

31. Залепухин B.C. Влияние метеорологических факторов и физико-химических свойств почвы на эпизоотологический процесс // Перспективы развития научных исследований в области общей эпизоотологии. -Ульяновск, 1972.-С. 25-27.

32. Запорожченко А.Я. Эпидемиология и клиника кишечной формы сибирской язвы // ЖМЭИ. 1961. - № 7. - С. 41-45.

33. Иванова Д.П., Соркин Ю.И., Хлебович И.А. Экспериментальные полевые наблюдения за размножением микроба сибирской язвы в черноземной почве юга Средней Сибири // Там же.- С. 75-76.

34. Инструкция и методические указания по лабораторной, клинической диагностике, профилактике и лечению сибирской язвы.- М., 1980.-63 с.

35. Инструкция по определению чувствительности возбудителей опасных инфекционных заболеваний к антибиотикам и химиопрепаратам. м, 1990. -35 с.

36. Ипатенко Н.Г., Залепухин B.C. Сибирская язва крупного рогатого скота // Инфекционные болезни крупного рогатого скота. М.: Колос, 1974. - С. 217-232.

37. Ипатенко Н.Г., Седов В.А., Зелеп\\ин B.C., Гущин В.Н. Сибирская язва сельскохозяйственных животных // М.: Агропромиздат, 1987.- 256с.

38. Ипатенко Н.Г., Седов В.А., Гущин В.Н., Маничев A.A., Ревазов A.A., Гутиев A.B., Шморгун Б.И., Абдурашитов Т.А. Почва основной резервуар возбудителя сибирской язвы // Биопрепараты, методы их стандартизации и контроля.- М., 1990.- С. 164-169.

39. Ипатенко Н.Г., Гущин В.Н., Щенев А.И., Ревазов A.A., Гутиев A.B., Саленко J1.C. Абдурашитов Т.А., Шморгун Б.И. Почва основной резервуар возбудителя сибирской язвы // Ветеринария. - 1991. - № 12. - С. 23-26.

40. Калиновский А.И., Найманов П.И., Соркин Ю.И., Юзвик Л.П. Характеристика штаммов В. anthracis, выделенных в Азиатской части СССР // Природно-очаговые инфекции в Забайкалье: Тез. докл. к предстоящей науч. конф. Чита, 1983. - С. 43-45.

41. Кебеджиев Т., Томов А. Сибирская язва как медицинская проблема в текстильной и кожевенной промышленности Болгарии // ЖМЭИ.- 1969.-№9.-С. 144-148.

42. Киреев Ю.Г., Прометной В.И. Совершенствование эпидемиологического надзора за сибирской язвой // Материалы научно-практ. конф., посвященной 100-летию образования противочумной службы России ( 1618 сентября 1997г.).-Саратов, 1997,- T.1.-C.62.

43. КолесовС.Г. Сибирская язва// М.: Колос, 1976.-С. 116-123.

44. Колонии Г.В. Нозогеография сибирской язвы в СССР в связи с её ландшафтной эпизоотологией // ЖМЭИ. 1969. - № 2. - С. 91-97.

45. Колонии Г.В. Роль диких животных в циркуляции возбудителя сибирской язвы // Зоологический журнал. 1969. - Т. 48. - Вып. 12. - С. 1852-1859.

46. Колонии Г.В. Эволюция сибирской язвы: Сообщение 2. История распространения болезни и формирование нозоареала // ЖМЭИ.- 1971.- № 1.-С. 118-122.

47. Коротич A.C., Погребняк П.И. Сибирская язва // Киев: Урожай, 1976. 159 с.

48. Красильников В.Р., Лебединская И.М., Скороходов Ю.М., Куролап С.А., Артемов Б.Т., Воронова Л.И. Прогнозирование активности сибиреязвенных очагов в Воронежской области // ЖМЭИ.-1990.-12.-С. 3840.

49. Кульмагамбетова Н.И. Исследование нозоареала сибирской язвы животных в зависимости от почвенно-географических зон и подзон // Там же. -С.21-24.

50. Куролап С.А., Скороходов Ю.Ю., Артемов Б.Т., Лебединская И.С., Ефанова Л.И., Красильников В.Р. К вопросу об участии мышевидных грызунов в эпизоотическом процессе при сибирской язве // Там же.-С. 3940.

51. Лабораторная диагностика сибирской язвы у животных и людей, обнаружение возбудителя в сырье животного происхождения и объектах внешней среды (методические указания) // Москва ВО "Агропромиздат", 1989.-30 с.

52. Лащенко Е.В. Прогнозо-аналитические исследования заболеваемости животных и людей сибирской язвой на территории Чечено-Ингушской республики // Тез.докл. научной конференции " Современные аспекты проф-ки зоонозных инфекций". Ставрополь, 1991.-С.119.

53. Лелеп П.П. К вопросу о значении слепней в распространении сибирской язвы // Научные труды Омского НИВИ. Омск, 1936.- № 2. - С. 70-89.

54. Ломаковская В.М. О размножении микроба сибирской язвы в почвах разных типов // Тр. Львовского зоовет. ин-та.- 1956.- Вып. 8 С. 5-8.

55. Маткаримов Б.Д. Заболеваемость людей сибирской язвой в Узбекистане // Материалы Межрегион, рабочего совещания ВОЗ/ФАО по сибирской язве. Алматы, 1997.-С. 35-36.

56. Микшис Н.И. Разработка экспериментальных подходов к генетическому анализу хромосомы возбудителя сибирской язвы // Авт. дисс. канд. мед. наук. -Саратов, 1996. 24 с.

57. Монисов A.A., Федоров Ю.М., Жилина Н.Я., Хадарцев О.С. Эпидемиологическая обстановка по сибирской язве в Российской Федерации // Там же.- С. 27-29.

58. Навашин С.М., Фомина И.П. Рациональная антибиотикотерапия (справочник)// М., 1982.- 495с.

59. Наджафаров А.Ф. Роль полевых грызунов в распространении сибирской язвы в природе// Актуальные вопросы профилактики сибирской язвы в СССР.-М., 1971.-С. 77-78.

60. Никифоров В.Н. Сибирская язва // Руководство по инфекционным болезням М., 1986. - С. 414-426.

61. Пекова Л., Димитрова М., Цанева В., Лолова М. Клинические и эпидемиологические исследования, проведенные во время эпидемиологической вспышки сибирской язвы // Инфектология 1995.32, № 1.-С. 36-37.

62. Петрюк В.А. Совершенствование противоэпидемических и профилактических мероприятий при сибирской язве в Карачаево-Черкесской республике // Авт. дис. . канд. мед. наук.- Саратов, 1999.-23 с.

63. Петрюк В.А., Проскурина В.А., Ефременко В.И., Фунтикова Т.Н., Агапитов Д.С., Суворова А.Е. О вспышке сибирской язвы в Карачаево-Черкесской республике // Ставроп. н.и. противочум. ин-т. Ставрополь, 1997. -9 с. - Деп. в В НИТИ 16.06.97.-№ 1977-1997.

64. Погребенко А.Г., Аубакиров С.А., Левченко К.В., Оспанов К.С., Бекзатов К.Н. К нозогеографии сибирской язвы в Кахахстане // Экологические проблемы Казахстана. Алма-Ата, 1990.-С. 80-82.

65. Прометной В.И., Богданова Т.Ф. О некоторых природных факторах, влияющих на состояние активности почвенных очагов сибирской язвы // Современные аспекты профилактики особо опасных инфекций: Тез докл Всесоюзной конф.- Иркутск, 1984.- Ч. 3.- С. 21-22.

66. Проскурина В.А., Буравцева Н.П. Сравнительная оценка некоторых методов определения чувствительности сибиреязвенного микроба к антибиотикам. Антибиотики и мед.биотех. - 1985. - Т. 30, № 11. - С. 845-847.

67. Проскурина В.А., Буравцева Н.П., Ярощук В.А., Неляпин Н.М., Ерёменко Е.И. Определение чувствительности сибиреязвенного микроба к антибиотикам для дифференциации от близкородственных сапрофитов // Антибиотики и химиотерапия. -1992. -Т.З, № 2. -С.23-25.

68. Пунский Е.Е., Цибу леве кий Ф.С. Восприимчивость больших песчанок ( Rhombomys Opimus Licht) к сибиреязвенной инфекции // ЖМЭИ. 1958. -№ 11.-С. 105-112.

69. Рево М.В., Жукова М.Д. Возбудитель сибирской язвы // Вет.микробиология.- М.,1958.- С. 246-251.

70. Розеньер Л.А. Сибирская язва у человека // Кишенев, 1948.- 150 с.

71. Скляров В.Я. Сибирская язва на Кавказе // Дис. . канд. мед. наук. -Ставрополь, 1963. 182 с.

72. Сколубович Г.В., Рубан Г.Е. Вспышка сибиркой язвы в Амурской области в 1954 г. ( из опыта диагностики и борьбы с сибирской язвой) // ЖМЭИ.-1995.-№4,-С. 102-105.

73. Скороходов Ю.М., Куролап С.А. Экологический мониторинг как основа для моделирования эпизоотического процесса и прогнозирования вспышек сибирской язвы // Экологические проблемы охраны живой природы: Тез. Всесоюз. конф.-ч.З.-М., 1990.-С. 170-171.

74. Смирнов Е.И., Лебединский В.А., Гарин Н.С. Войны и эпидемии // М., 1988.-240 с.

75. Соркин Ю.И., Найманов П.И., Иванова Д.П., Маевский М.П. К методике экспериментальных наблюдений за размножением патогенных микробов (Ä anthracis, Y. pestis) в почве // Проблемы природной очаговости чумы.-Иркутск, 1980.- Ч. 2. С. 95.

76. Соркин Ю.И., Родзиковский A.B. Экология сибиреязвенного микроба в естественных биоценозах почв различных природных зон СССР // Современные аспекты профилактики зоонозных инфекций: Тез. докл. Всесоюз. конф. Иркутск, 1984. - Ч. III. - С. 5-7.

77. Степанов A.C. О молекулярной природе токсина Bacillus anthracis II Молек. генет. микробиол. вирусология.-1991 .-N1-С.3-10.

78. Степанов A.C. Разработка основ генетического анализа возбудителя сибирской язвы // Авт. дис. . докт. мед. наук. Саратов, 1992.-45 с.

79. Тамм О.М., Токалова К.А. Эпидемиология и профилактика сибирской язвы в Эстонской ССР // Актуальные вопросы профилактики сибирской язвы в СССР: Матер. III пленар. засед. междувед. комис. по борьбе с сибирской язвой,- М., 1971,- С. 47-48.

80. Тимошин В.Б. Конструирование видоспецифического ДНК-зонда для индикации возбудителя сибирской язвы: Автореф. дис. кан. мед.наук.-Саратов, 1994.- 22 с.

81. Ткаченко В.В. Сравнительное изучение гемолитических свойств некоторых микробов // Известия Иркутского ПЧИ. 1963. -Т. 25. - С. 135.

82. Тоскарь Е.Ш., Хотько Н.И. Эпидемиологическая характеристика сибирской язвы в условиях антропогенного воздействия. Саратов, 1995.-8с.- Деп. 25.04.95, № 1173 - В 95.

83. Турсункулов Ш.Ж., Санзыбаев А.Р., Горелов Ю.М. Сибирская язва сельскохозяйственных животных в Республике Казахстан //Матер. Межрегион, рабочего совещещания ВОЗ/ФАО по сибирской язве.-Алматы, 1997.- С. 22-24.

84. Урусбамбетов З.Х., Буравцева Н.П., Вайсман И.В., Тлупов P.A., Казаков A.M. Эпидемиология и эпизоотология сибирской язвы а Кабардино-Балкарской республике Н Деп. в ВИНИТИ 19.07.00. -№ 2010-В00

85. Федякин Ю.П., Хотько Н.И. Клинико-эпидемиологические особенности сибирской язвы в Среднем Поволжье // Сб. науч. труд. Новороссийск, 1994,-Вып. 1. -С. 234-235.

86. Цыганкова О.И. Гемолитическая и протеолитическая активность сибиреязвенного микроба // Авт. дис. . канд. мед. наук. Саратов, 1993. -26 с.

87. Цыганкова О.И., Буравцева Н.П. Определение гемолитической активности у сибиреязвенного микроба (методические рекомендации). Ставрополь, 1989. - 6 с.

88. Цыганкова О.И., Ефременко В.И., Буравцева Н.П. Изучение протеолитических свойств возбудителя сибирской язвы // Современные аспекты профилактики зоонозных инфекций: Тез. докл. науч. конф., окт. 1991 г. Ставрополь, 1991. - С. 126-128.

89. Черкасский Б.Л. Сибирская язва // Руководство по эпидемиологии инфекционных болезней. М.: Медицина, 1993. - Т.2. - С. 416-432.

90. Черкасский Б.Л. Сибирская язва // Инфекционные и паразитарные болезни человека( справочник эпидемиолога).- М., 1994 С. 450-456.

91. Черкасский Б.Л. Проблема профилактики сибирской язвы в современных условиях //Международный симпозиум: Особо опасные инфекционные заболевания: эпидемиология, экспресс-диагностика и профилактика. -Киров, 1997. С .91 -93.

92. Черкасский Б.Л. Закономерности территориального распространения и проявления активности стационарно неблагополучных по сибирской язве пунктов // Эпидемиология и инфекционные болезни. 1999. - X? 2. - С. 4852.

93. Черкасский Б.JI., Кноп А.Г., Федоров Ю.М., Седов В.А., Ведерников В.А. Пыталев П.И. Эпидемиология, эпизоотология и профилактика сибирской язвы в бывшем СССР // ЖМЭИ. -1993. № 5. - С. 7-12.

94. Чуйская Г.Я. Почва как среда сохранения сибирской язвы // Актуальные вопросы профилактики сибирской язвы в СССР. М., 1971.- С. 72-73.

95. Шенгелия Л.Р. Экономический аспект борьбы с сибирской язвой //Актуальные вопросы проф-ки сибирской язвы: Тез. докл. 13 пленарн. заседания межвед. науч.- методич. комис. по борьбе с сибирской язвой 2324 окт. 1990г. г. Ташкент. М., 1990г.-С. 40-41.

96. Шляхов Э.Н. Эпидемиология, диагностика и профилактика сибирской язвы // Кишенев, 1960. 127 с.

97. Шляхов Э.Н., Груз Е.В., Присакарь В.И. Сибирская язва: (Очерки эпидемиологии, лабораторной диагностики и профилактики)// Кишенев: Изд-во "Штинца", 1975. 162 с.

98. Элькина A.B. К эпидемиологии легочной формы сибирской язвы // ЖМЭИ.- 1971.-№9,-С. 112-116.

99. Юзвик Л.Н., Агапов В.А. Особенности эпидемиологических проявлений при сибирской язве в Забайкалье И Мат. науч.-практ. конф., посвященной 100-летию образования противочумной службы России (16-18 сент. 1997 г.).-Саратов, 1997. Т. 1. - С. 165.

100. Ярощук В.А. Роль молока при алиментарном способе заражения сибирской язвой и разработка методов его обеззараживания // Авт. дис. . канд. мед. наук.- Саратов, 1988.- 26 с.

101. Abdenour D., Larouze В., Dalichaouche М., Aouati М. Familial occurrence of anthrax in Eastern Algeria // J. infect. Dis.- 1987.- V. 155.- № 5. P. 10831084.

102. Andersen G.L., Simchock J.M., Wilson K.H. Identification of a region of genetic variability among Bacillus anthracis strains and related species // J. Bacterioi. 1996. - V. 178. - P. 377-384.

103. Bbalo G. Anthrax in Western Province Zavbia // Proceed, of the International Workshop on Anthrax, Winchester, England, Sept. 19-21, 1995. P. 11-12.

104. Beall F.C., Dalldorf F.G. The pathogenesis of the lethal effect of anthrax toxin in the rat // J. infect. Dis. 1966. - № 3. - P. 377- 389.

105. Berdjis C.C., Gleiser C., Hartman H.A. Pathogenes of respiratory anthrax in Makaka mulatta // Brit. J. exp. Path.- 1962. V. 43. - P. 515-524.

106. Bohm R. Bacterienbedingte Risiken beim Trank und Brauchwasser und Vorschlage ftir Standards // Deutsch. Tierarztl. Wochenscr. 1986. - V. 93. - № 7.-S. 289-291.

107. Boutin J. P., Debonne J. M., Rey J. L. Apparition de charbon humain en foret cvoirienne // Vtd. Tropic ale.- 1985,- V. 45.- №1.- P. 79-81.

108. Bowen J. Y., Tumbull P.C.B. The Fate of Bacillus anthracis in Unpasteurized and Pasteurized Milk // Let. Appl. Microbiol. -1992. Vol. № 5,- P. 224.

109. Bradaris N., Pundarolic V. Cutaneous anthrax due to penicillin-resistant Bacillus anthracis tranmitted by an insect bite // Lancet.- 1992.- V. 340.- № 8814.- P.306.

110. Clark R. Speculations on the incidence of anthrax in bovines // J. S. Air. vet med. ASSOC.- 1938.- V. 9- P. 5-12.

111. Crenn Y. Билогическая война // Leff. Infec. Microbiol. Clin. 1992. V.7, № 2. - P.36-37.

112. Dai Z., Koehler T.M. Regulation of anthrax toxin activator gene (atxA) expression in Bacillus anthracis: Temperature not C02 / bicarbonate affects AtxA synthesis. Infect. Immun. - 1997. - V.65, № 7. - P. 2576-2582.

113. Davies G., Harry R. W. S. Anthrax infection in bone meal from various countries of origin //J. Hyg. Camb. 1972.- 70, V.3.- P. 455-457.

114. De Vos V., Bryden H.B. Anthrax in the Kruger National Park: temporal and spacial patterns of disease occurrence // Proceed, of the Internacional Workshop on Anthrax, Winchester, England, Sept. 19-21. 1995. - P. 26-30.

115. Doganay M. Human anthrax in Turkey // Ibid . P. 8.

116. Dragon D.C., Rennie R.P., Gates C.C. Bison and anthrax in northern Canada // Ibid.- P. 22-23.

117. Dutz W., Daidi F., Kohont E. Anthrax stomach damage with large ascites // Gut.-1970.- Vol.11 .-№ 4 P. 352-354.

118. Ebedes H. Control of anthrax outbreaks in wildlife // Vet. Rec. 1972 -Vol. 90. -P. 198.

119. Fernendez M. T., Grogono J. L. Bone-meal ànd anthrax // Comm. Med.-1972.- Vol. 128.- № 24.- P. 522-523.

120. Friedlander A.M. Macrophages are Sensitive to Anthrax Lethal Toxin Through an Acid-Dependent Process // J. Biol. Chem. 1986. - Vol. 261. - P. 7123-7126.

121. Gainer R. S., Saunders J. R. Aspekts of the epidemiology of anthrax in Wood Buffalo National Park and environs // Can. Veter. J.- 1989 Vol. 30 - № 12.-P. 953-956.

122. Handy W.E., Ryden H.N. The capsule substance of Bacillus anthracis II Biochem. J. 1946. - Vol. 4. - P. 297-309.

123. Hugh- Jones M. 19% Global anthrax report // 3rd Intemacional Conference on Anthrax University of Plymouth 7-10 th Sept., 1998.- P. 1.

124. Jackson P.I., Hill K.K., Laker M.T., Ticknor L O., Keim P. Genetic comparison B. anthracis and its close relatives using AFLP and PCK analysis // Ibid. P. 20.

125. Jiwa S.F.H. Experience with anthrax control in areas of Tansania // Proceedings of the International Workshop on Anthrax, Sept. 19-21, 1995, England, Winchester. P. 10-11.

126. Joshi D.D., Pradhan A. And Ghimire N.P. Evidence of anthrax in humans and animals in Nehal // Ibid. P. 12-13.

127. Kauker E. 40 jahre Milzbranduntersuchung im Regierungsbezirk Wiesbaden // Tierarztl. Umsch. 1955. - Bd. 10. - S. 47-49.

128. Keppie J., Harris-Smith P. W., Smith H. The chemical basis of the virulence of B. anthracis. 11. Its aggresions and their mode of action Brit. J. Exp. Path. -1963.-V. 44.-P. 446.

129. Keppie J., Smith H., Harris- Smith P.W. The chemical basis of the virulence of Bac. anthracis. III. The role the terminal bacteremia indeath of guines-pigs from anthrax // Prit. J. Exp. Path.- 1955.- V. 36.- P. 315-322.

130. Lalitha M.K., Dilip M., Kurien T., KumarA., Ganesh A., Jacoband M., John J. Anthrax a continuing problem in southern India // Proceedings of the International Workshop on Anthrax, England, sept. 19-21. - Winchester, 1995. -P. 14-15.

131. Leppla S. H. Anthrax toxin edema factor: a bacterial adenilate cyclic AMP concentracions in eukariotie cells // Proc. Nat. Acad. Sci. USA 1983.- V. 79.-P. 3162-3166.

132. Leppla S. H. The Anthrax Toxin Complex // In: Sourcebook of bacterial protein toxin. 1991. - P. 277-302.

133. Lightfoot N.F., Scott R.J.D. and Turnbull P.C.B. Antimicrobial Susceptibility of Bacillus anthracis // International workshop on Anthrax 11-13 th april 1989 Winchester, England. P. 95-98.

134. Lincoln R. E., Fish D. C. Anthrax toxin // In: Microbiological toxius .- V 3.-New York-London, 1970,- P. 361-414.

135. Makino S., Uchida I., Terakado N., Sasakawa C., Yoshikawa M. Molecular Characterization and Protein Analysis of the cap Region Which Is Essential for

136. Makino S., Uchida I., Terakado N., Sasakawa C., Yoshikawa M. Molecular characterization and protein analysis of the cap region, wich is essential for encapsulation in Bacillus anthracis II J.of Bacteriolgy.-1989.-Vol. 171.-P.722-730.

137. MannoM., Vassaire J.,Vartel J.L., Morhain A. Apropos de trois foyers de charbon bacteridien // Bull. Soc. Veter. Prat. Fr.- 1986.- V. 70.- № 5.- P-281-291.

138. Mikesell P., Ivins B.E., Ristroph J.D., Dreier T.M. Evidence for Plasmid -mediated Toxin Production in Bacillus anthracis II Infect. Immun. 1983. - Vol. 39.-P. 371-376.

139. Mikesell P., Ivins B.E., Ristroph J.D., Dreier T.M. Evidence for Plasmid -mediated Toxin Production in Bacillus anthracis II Infect. Immun. 1983. - Vol. 39.-P. 371-376.

140. Миха.ловиЬ Б. Хемолизин В.anthracis и присутство хемолитичного фактора у культурами В.anthracis // Acta veterin.- 1958. Vol. 8, No. 4. -P. 15-19.

141. Mnxa^OBuh Б. Heke особине хемолизина // Acta veterin.- 1959. Vol. 9, No. 3. - P.47-52.

142. Musa M. T., Shomein A. M., Add El Raxid Y. M„ Meki N. T., El Hassan S. M. Anthrax in human and camels in the disease in the country // Rev. elev. et med. vet. pays trop. -1993.- 46.- № 3,- P. 438-439.

143. Patra G., Vaissaire J., Mock M., Ramisse V. PCR based characterisation of Bacillus anthracis as mean for ecological studies // Abstract Book 3rd International Conference on Anthrax, University of Plymouth, England, 7-10th September.-1998.- P. 10.

144. Pinkerton H. An jutbrtak of anthrax in minks with infection of a ranch owne // J. Amer. Assoc. 1939. - V. - 112. - P. - 1148-1149.

145. Poos, Ulrich Die seuchenepidemiologische Bedeutung der äusseren Haut und ihre Behandlung im Tierseuchen- und Tierkorperbeseitigungsgesets unter besonderer Berücksichtigung des Milzbrandes: Inang. Diss . . Havnover, 1989.- 180 n.

146. Rao Krischna M. S., Mohiyudeen S. Tabinus flies as transmitters of anthracis -a field experiens // Indian Vet. J.- 1958.- 35.- P. 348-353.

147. Reddy A., Battisti L., Thorne C.B. Identification of self-transmissible plasmids in four Bacillus truringiensis subspecies //J.Bacteriol.-1987.-Vol.l69.- P.5263-5270.

148. Ross J.M. The pathogenesis of anthrax following the administration of spores by the respiratory route // J. Path. Bact. i957. - V. 73. - № 2. - P. 485-494.

149. Schiersmann G., Catan E.F., DiRocco M. Antibiograma del Bacteridium anthracis // Revisia de investigaciones agropecuarias. Serie 4- Patología Animal.- 1964.-vol. 1.- № 11.-P. 139-148.

150. Smith H„ Keppie 1. and Stanley l.L. // Br.J. Exp. Pathol. 1955. - Vol. - P. 460472.

151. Steel J. H., Helvig R. J. // Pub. Health. Rep.- 1953.- P. 616-688.

152. Stephen G., Mathai Dilip, Balraj Vinohar, Lalitha M.K., John T. Jacob An outbreak of anthrax meningoencephalitis // Trans. Roy. Soc. Trop. Med. and Hyg. 1994. - 88. - № 2. - P. 206-207.

153. Steme M. Variation in Bacillus anthracis II Onderstepoort J. Vet. Sci. 1937. -Animal Ind, 8.-P. 271.

154. Stuart F., Williams J. M. Antrhax diagnosis-a selt assessment guiz // State veter. J. 1987.- V. 41.-№ 118.- P. 38-41,56-57.

155. Tenover F.C. Diagnostic deoxyribonucleicacid probes for infectious diseases // Clinical Microbiology Reviews -1988.-N9.-P.49-67.

156. Thome C. B. Capsule formation and glutamin polypeptide synthesis by Bacillus anthracis and Bacillus subtilis II Symp. Soc. Gen. Microbiol. 1956. - Vol. - 6. - P. 68.

157. Thorne C.B. Biochimical properties of virulent and avirulent strains of Bacillus anthracis // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1960. - Vol. 88. - № 6. - P. 1024-1033.

158. Turnbull P.C.B., Hutson R.A., Mandy J.Ward, Jones M.N., Quinn C.P., Finnie N.J., Duggleby C.J., Kramer J.M., Melling J. Bacillus anthracis but not always anthrax // Journal of Applied Bacteriology.- 1992.-Vol.72.-P.21-28.

159. Turnbull P.C.B. Definitive identification of Bacillus anthracis // 3 rd International Conference on Anthrax, University of Plymouth 7-10 th Sept. 1998. P. 12.

160. Turner A. J., Galvin J.W., Miller G.T. and Rubira R.I. Anthrax explodes in an Australian summer // Ibid. P. 3.

161. Uchida I., Sekizaki T., Hashimoto K., Terakado N. Association of the Encapsulation of Bacillus anthracis with a 60 Megadalton Plasmid // J. Gen. Microbiol. 1985. - Vol. 131. - № 2. - P. 363-367.

162. Uchida I., Hashimoto K., Terakado N. Virulence and Immunogenicity in Experimental Animals of Bacillus anthracis Strains Hatboring or Lacking 110

163. V. De Vos, Helena B. Bryden Anthrax in the Kruger National Park : temporal and spatial patterns of disease occurrence // Proceedings of the International Workshop on Anthrax, Winchester, England, Sept. 19-21 1995. P. 26-30.

164. Wilson J.B., Russel K.E. Isolation of Bacillus anthracis from soil Stored 60 years // J. Bacterid. 1961. - Vol. 87. - № 1 - P. 237-238.

165. Yelton D.B. and Thome C.B. Transduction in Bacillus cereus by each of two bacteriophages // J.Bact.-1970.-Vol.l02.N.2.-P.573-579.

166. Xudong L., Fenggin M. and Aifang L. Anthrax surveillance and control China // Proceedings of the International Workshop on Anthrax, England, Winchester, Sept. 19-21, 1995.-P. 16-18.

167. Кадастр стационарно неблагополучных по сибирской язве пунктов в1. Ставропольском крае

168. В Ставропольском крае проведено территориальное распределение заболеваемости людей и животных сибирской язвой за период 1896-2001 гг. На территории учтены 1029 стационарно неблагополучных пунктов.

169. Представленный кадастр стационарно неблагополучных по сибирской язве пунктов может служить основой для целенаправленного проведения профилактических противосибиреязвенных мероприятий в Ставропольском крае.

170. АОЗТ " Чограйское" 1947 121948 3 1949 1 13 с. Каменная Балка 1948 4 с. Новоромановское 1915 3 1921 2 1925 3 5 с. Петропавловское 1915 1 1945 1 6 с. Садовое 1976 7 с. Серафимовское 1921 5 8 аул Эдельбай 1971 1

Информация о работе

Лысогора, Елизавета Вильевна
кандидата медицинских наук
Ростов-на-Дону, 2002
ВАК 03.00.07

Диссертация

Биологические свойства штаммов Bacillus anthracis, выделенных в очагах сибирской язвы Ставропольского края - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы