Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

УРОВЕНЬ СУПЕРОВУЛЯWИИ. КАЧЕСТВО ЭМБРИОНОВ И ИХ ПРИЖИВЛЯЕМОСТЬ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ГОРМОНАЛЬНОГО ПРОФИЛЯ В КРОВИ КОРОВ-ДОНОРОВ И ТЕЛОК-РЕЦИПИЕНТОВ

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "УРОВЕНЬ СУПЕРОВУЛЯWИИ. КАЧЕСТВО ЭМБРИОНОВ И ИХ ПРИЖИВЛЯЕМОСТЬ В ЗАВИСИМОСТИ ОТ ГОРМОНАЛЬНОГО ПРОФИЛЯ В КРОВИ КОРОВ-ДОНОРОВ И ТЕЛОК-РЕЦИПИЕНТОВ"

А-%9903

ВСЕСОЮЗНЫЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРаСНОГО ЗНАМЕНИ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЖИВОТНОВОДСТВА (ВИЖ)

На правах рукописи

■ \

- УДК 612.64S.C2

Шириев Вакиль Мнргалиеаич

УРОВЕНЬ СУПЕРОВУЛЯДИИ,-КАЧЕСТВО ЭМБРИОНОВ И ИХ ПРИЖИВЛЯЕМОСТЬ В ЗАВИСИМОСТИ ОГ ГОРМОНАЛЬНОГО ПРОФИЛЯ В КРОВИ КОРОВ-ДОНОРОВ И ТЕЛОК-РЕЛИН ИЕНТОВ

C3.00.2S — Фкзяоаогш чвповвкв н животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

п. Дубровины Московской области 1991

- z -

Дисевртьдиокмм работа выполнена я центре трансплантации эмбрионов сельскохозяйственных животных ВНИИ животноводства.

Научные руководители • академик БАСХНИЛ Л.К. ЭЖСТ

Официальные оппоненты : доктор биологических наук,

профессор В.Д. КлинекиЯ кандидат биологических наук C.B. Советкин

Ведущее учреждение : Всероссийский научно-исследователь-

по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора кл/л при Всесоюзном каучно-исследовательском институте животноводе*?.; Адрес института : I420I2, Московская область. Подольский

раЯок, яое* Дубровкцы. С диссертацией можно ознакомиться s библиотеке ВИНСа. Автореферат разослан "Л2* (? У л 1991 г.

Ученый секретарь специалм»кованного Совета,

і —iiijii с;\ чс: кау* И.И. ПЩП4Н

профессор Н,И. СЕРГЕЕВ

ский институт племенного дела

Защита диссертации состоится " Ч " ÛА_1991 р.

в час, на заседании специализированного Совета 5.020.16,02

- э - .

І. ОВД« ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1 Актуальность теш; Главным условием успешного выполие-иия селекционных програм» методом эмбриотрвнсплантацхя являътся качественная гормональная стимуляция яичников доноров, которья предоопределдет получение достаточного числа жнтактныг вибрионов.

Этот элемент технология с точки зрения науки и практики наиболее проблематичен. Непредсказуемость и нестабильность результатов индуцированной суперогуляция до сих пор остается в центре этой проблемы и требуют научного решения,

1.2 Цель и задачи исследований: Цель роботы заключалась в изыскании надежных критериев отбора в подготовки:коров-доноров я телок-реципиентов, усовершенствовании ыетедое направленной синхронизации половых циклов, сравнительном-изучении эффективности различных гонадотропних в лютеолитических■ горюнов при вызываний суперовуляции, а так же выявлении факторов, опредехящих сффектнаностъ эибркотрансплактацки.

Исходя из этого на разрешение ставились следуццие задачи;

- усовершенствовать методы синхронизации охоты у доноров и реципиентов с.использованием разных препаратов гонадотропного и лптеолптического действия;

- изучить в сравнительном аспекте эффективность вызывания суперовуляции с использованием зарубежных коммерческих и отечественных гормональных препаратов;

- выяснить влияние биостимуляторов и профилактической санации матки на качество получаемых зародышей;

- определить наличке возможной связи гормонального фона в кров» норов и телокс уровнем суперовулятш и прижнвлямостье. эмбрионов;

- усовераенстеовать технолопгю трансцервякалъного извлечения и пересадки эмбрионов;

- на основе полученных данных выявить степень влияния гормонального статуса, способов синхронизация и разных препаратов * ФСГ. на результаты суперовудяцнн и прихивлявмостъ эмбрионов, определить значение этих показателей для выбора доноров я реципиентов; оценитъ методы премедмкации реципиентов и эффективность использования приборов разных конструкций при нехирургичэском извлечении я пересадке оыбрионов.

1*3 Научная новмзь. _________

І^ИТРАЛйі-научная библиотека

Моск. солкснохоэ. анадсімии

И и».

іального профиля

' • - 4

& крови коров и телок перед синхронизацией, вызыванием супврову-ляция я пересадкой эмбрионов с реакцией яичников на гонадотрогшя и приигэл*еиостм>. изучены факторы, определящие эффективность, трансплантации» ' ■ . -

1.4 Практическая значимость работы: Результаты исследований позволили разработать систему целенаправленного отбора «"подготовки коров-доноров для получения оптимального числа зарэдьгоей, усовершенствовать методичеокхе приемы применения препаратов фол-яихуяэстиыулнрущего действия в сочетании с гонадолиберпюм и хютвшнэкрувфш герконом.

1.5 Апробация подученных денных! Основные ночсксикя дкссер-тащш доложеіщ и получили псаежмтаяьну» оценку:

- ні XX Вв«оозкоА нлучно-практкческой їоі^кк'щк ЛРеэврэы 7ВЄЯИІІЄНШІ производства О» - X* Продукции", ВННЗ&г Г. Оренбург, (28 - 29 карте 1990 г,).'

•• на 43 на>^ло-«етсідичеокоЛ конї>вре*кциа рдшрг-кгсз к молодых ученых "Проблеми интекснфикваии животноводства", ВИД» Дубровкцц <30 - 31 мал 1990 гЛ.

- на Всесомко* научно-техническом совещании "Проблемы, развит** Ліотеяиологии > животноводстве",.ВИЖ, Дуб ровкгц, (1990 г.).

1.6 Внедрение: Основні» положения к практические прздлохс-. кхя ммкавцие ив выполненных ио:лвдованиЯ внедряотсл в центре. *р*нзпя*н?ацим вибрион» о, • я. »квотных "ЕИКа.:

. 1.7 Обіе» работы, Диссертация хэлохена на 133 страницах ыа-вкнвшвног') текста,,еодервит £Й таблиц, Э рисунка и приложение. Список хиератург »хлопает 79 отечественных и .101 нностремныЯ ИСТОПИ**.

2« ктшл и югоді иоаг^озАнкЯ .

Иоследовклия проведены од 150 "коровах черно-пестроа породы в прадуетивностьвог 6000 до Х0000 кг молока за лактацию и тел-хаж мучного возрасть » период о по 1990 гг в центр« по транвпхактацхи ембрноно» ВИКа» ШХ "Дубрг:.*??«" к "В^тово", уч-хо»г'Иимй«вогм* Ы'»хомг:ой обд»сти >1 в колхозе 'Ногал сгакк" 'іухввхоЯ области,

Кораенм* живот** ооуг«?ел*лл по корили ВНЕ* (1985).

Для еикхрсмздшм охоти у животных н вызывания суперовуляцих

мсг.огьэоволи КГ-n (СШ;ГСКК, Золликся-ропю!, Гн-РГ -Диригеот--ран, эстрофан (ЧС&Р) и препараты отечественного проиэводствл.' їолліггрспин,.Гро<їпдлон и Овсгон-Тио.

ФСГ-я (CSA) при вызстаким суперовуляции применяли.в дезах 32 - 50 мг,гфэлл*котрэпкн, фодлитролян и гро$оллон-в дозах 600 . КЬ, І20СЕД к 1000ИВ, адиригсстран и могвд-тио ЗДОюсг к І500ИЕ соответственно. Кспользсвгші 4 серии їоялитроянна Îî?ï2ff7t 41288, 10489 к 31069). : ,

Проф^лакткческуо санации уаткк доноров осуществляли иод'^но-лои, недосолом тлі препаратом ГАШ е комплексе с тр«шшгином. Для витаминизации докеров и рецлпкектов использовали тетр&виг, селевит (внт&мкн Е * селен) и.прг;іарат витамина Б..

* Д*я определения взаимосвязи концентраций прогестерона и ЗІ-традиола с пэка&адслями суяероеулвцяк и пргаквляеыостью эмбрионов у ялвотних кровь брали перед синхронизацией охоты,-в день охоты,- перед вызыванием суперовуляции, в день осеменения'доноре * »«хирургической пересадкой эибрисноэ реципиентам.

Концентрации rojKCHob в сыгоро^ке креви определяли радкона)-. мулологическуо/ ¡«.тодш в лаоораторки зоотехнической эндокринологии ВИКа.

СтСор коров-донорав, их гормональную обработку, осеменение, нехирургяческое извлечение, поиск йосекку качества:Барод^ей, выбор рецкпиентоз И пересадку ОИбрКОНОВ ■ выполняли по ыетоликэ EK3£a^I9fi7). . - „

Цифровой материал обрабатывали 'бис«етр;пссккм метод см г.с H.A. Плохкнскоуу (1970), на микрокалькуляторе UK — 56.

3. результати кссгндовани?.

З.Х. Изусенис эффекгивностя сшоеронкзеции охоты при подготовка коров-доноров п телск-рецтеиекгов

Била изучена эф^кгненазп. 3-х схем сюарониэазии у короя: • с применением только ПГ. (500 мкг) и его сочетонкй с ТІОО-ЄООИЕ г ГСЗК или <ЬСГ: фоллмр;",ин - 150 ЬД либо грефеллон - ЇОО НЕ. Го-, кадогрспикы к ПГ керозаіг и тегкам в лктеальнур стадію полового ЦИКЛЧ ВЧОДК-И tl,-î»3DJ?V.CHH0 в две рьэлютгке точки (табл. I).

Установлено, что коибкшфованнцэ ыптоды еиюфонигмг.'у: способствуют более р.чзн;л!орнп«у прояі'л^кио кияотннки пригпакэо стяти по временя. Число t-пр^с^гих в охоту через 44 ч. пои«-

Таблица I

Результаты синхронизации охоты у коров-доноров (п-ї)

Показатели

. Группы

ПГ ; ПГ + ГШ : ПГ + ФСГ

Число животных .36 25 27

Пркии в охоту 31-86,1 23-92,0 ' 23-85,2

В ток числе: . '

. через 24 часа 7-19.4 1-4,0 1-3,7

через 48 час. 20-55,6 19-76,0 20-74,1

через 72 час. 4-11,1 3-12,0 . 2-7,4 Не проявили признаков

охоты 5-13,9 2-8,0 4-14,8

Число коров, пригодных

* качество доноров .18-50,0 16-64,0 17-63,0

талось до 76 - 74Ї. В группе коров обработанных одним ПГ 30,5$ животных охоту Ї^ЯВИЛИ в более ранние или поздние сроки., что на 14 - 19% бия о больше чек при комбинированной синхтхжизадку.

Цель синхронизации может считаться достга-угсї» ємік їм. , предполагаемая день начала индуцирования ечпзроэугету« хдв елии*:-кадии эмбриона в яичнике животного будет xtpcsrc гнргкы^ол каж» тое тело. После синхронизации охоты только ПГа такиг ксрог базо 50£ от общего числа обработанных, - во 2 п 3-fi 64 с 635С си-

ответственно. После индуцирования суперовуяяскн у 6Ї!® ХСрСЕ хо овуляций, зародышей, в т. ч. нормальных, д.тмнгр^'югая'ых к неоплодотворенншс яйцеклеток В Средней было £3» кож к у ко-

ров со спонтанным циклом. Не установлено различий и s срчжиэляе-мости идентичных по качеству эмбрионов»

На телках-реиипкентох использовали 4 схемы синхронизации. Кал минимальное (0tt5), так и максимальное (9o,69S) число телок проявивших признаки охоты отмечены в грутжх животных синхронизированных одно и двукратной инъекцией ПГ (табл. 2).

Большинство телок в охоту прешли через 48 ч. после обработки ' (52, 67, 70,4 к 78«) соответственно, Однако значения отого искателя в 3 и 4-й группах достоверно были вюе чей в 1-й. Соответственно увеличилось и число животных пригодных для целей трансплантации. Tax, в груше ПГ + ГСЖК их было' 59,ЇЙ, в группе ПГ ♦ ФСГ - 62,5^ против 37,7% в 1-й (р ¿_ 0.01) и 45,75С от числа обработа-

7 , Таблица 2

Результаты синхронизации охоты у телсш-рещшкентов

Показатели

Группы -

ПГ ■_:ПГ+ИЯК : ПГ+5СГ

йднсиратно,двукратно:(250 ИЕ):' (75 ВД)

Обработано телок ; 61 46 44 " > • 32

Проявили признаки '.' ""

охоты (п—лУ , . .49-80,3 : 44-95,6 39-88,6 "29^90,6

В т. ч. через 24 часа 14-23,0 10-21,7 1-2,3 2*6,25 •

. 48 чао. • ' 32-52,4х" 31-67,4 31-70,4*' 25-78,1*

72-"- 3-4,9 3-6,5 7-15,9 2-6,25

Ка прищли в охоту 12-19,7 ' 2-4,4 .5-11,4 3-9,4 Чзсж» телок. пригодных ' ' "

,»дя пересадки - эмбрионов 23-37,7** 21-45,7 26-59,20^62,5х*

"=) Р/_0,05; хх) Р£_0,01

иных во 2-й. Из 119 телок, проявивших охоту через 48 ч..пригодными для пересадки.оказалось 60,5$ реципиентов,, При проявлении:охота. через 24 или 72 ч. число потенциальных реципиентов было на 19-14'? меньше. ■ ■ ч

Из приведенных данных можно заклотить, что применение ПГ а сочетании с ГСКК и ФСГ в определенной степени стабилиэирует процессы происходящие в яичниках обрабатываемых'животных, и.как' след» ствие обусловливает равный промежуток времени наступления полноценной охоты у максимального их числа и увеличивает количество коров и-телок, пригодных для-целей трансплантация..-

3.2* Сравнительное испытание зарубежных и отечественных препаратов ФСГ при'вызывании пояковушщии у коров-доноров

Возросшие, в последние годы, потребности в гонадотропних, препаратах и сложности в приобретении коммерческих ®СГ стимули-т роэали организацию промышленного изготовление их в нашей стране. Производственное испытания разных препаратов ФСГ-п показало, что овудирущая реакция яичников у коров-доноров по группам различается незначительно (табл. 3). Однако по выходу качественных эмбрионов на донора более эффективным был ШСГ'производства США.

Снижение этого показателя при применении отечественных препаратов произошло из-за низкого выхода полноценных зародышей у

. лік

Уровень суперовуляции и качество мбряомов при применении разных препаратов фСГ *

Таблица 3

Показатели:

ФСГ производства

США.

: ссср ,

| фодлгт репин | грофоллсн.

Обработано коров Реагировало суперовуляцией (п-%) Число овуляций на донора.

Подучено зародышей на донора В Т. 9.

нормальных

дегенерированнъвс

неоплодотворен-(вое яйцеклеток

20

20-100,0

11,6+1,1 '

7,9+1,2: 5,6+0,0

■6,1±1,2*; 4,0+0,8

1,<£о,2 , 0,8+0,5

0,6+0,1 0,8+0,3

26 71

24-92,3 60-84,5 9,9+0,8

ба%0;Э

20

17-85,0

10,9+1,3

7,0+1,2

2,7+0,6* 1.4+0.76

2,9+0,3*

хоров обработанных грофоллонои (2,7+1,2 в ре^чг^га на I декора). При этом отмечено достоверное -повышение и«татащет»орож»1?

яйцеклеток (Р^.0.05). ' " I' ,

При применении фоллитропкна качестсек^со: »«^брноноэ получено по 4,2 на донора, что на 1,9'ыенысе в группе ФСГ (США) > несколько больше чем у коров обработанная фехтахотрезвкои. Следует отметить о высокой индивидуальной кгтнщекосук овуякгорно! решщх* при применении фоллитропгна. ,

В опытах были использованы 4серн«г фоядютропкна {табл. 4).

Таблица 4"

Результаты суперовудяции в зависимости от серии фоллитрооина

Показатели

Серия 'КГ

21287

41288

10489

31089

Обработано коров Реагировало суп еров у-« ляцкеи, (п-%) Число овуляций на донора

Число зародызейка донора

* т. ч. кормальчыг.

20 18-90.0 12,8+1,8 7,8+1,7 5,2+1,5

■іі-73,3

16 20

14-67,5 17-85,0

8,3+1,0 11,4+1,3- 11,8+1,4

4,8+0,8 . 7,1+0,8 7,0+1,1 2,7+0,8 4,1+0,7 4,2+0,9

Данные таблицы.4 показывают различную выраженность биологи-

ческого действия отдельны* серий препарата. Только 7336 коров-реагировали на 4СГ серии 41288» в то время как при-обработке препаратами других серий показатель быз на 12 - 17% выше.

Наиболее высокое число овуляций« эародыяей к нормальных эмбрионов: 12,8; 7,8 ■ к 5,2 на донора было получено при использовании фолдкгропина серки 21287. Во 2-й группе значения показателей снижались соответственно до 8,3; 4,8 и 2,7. Причем отмеченная наибольшая изменчивость в числе овуляций и нормальных вибрионов была в 1-й группе. При использовании фоллитропина серий 10489 н 31089 получены более стабильные результаты. В целом можно зак-яткть, -«о отечественный ФСГ (фоллктропин) по своему биологическому действии не уступає" зарубежник аналогам подобного типа.

3.3 Влияние рагных факторов иа уровень суперовуляции-и качество эмбрионов - ■ ■

5 эагисршости от возраста и физиологического состояния число животных реагировавшее на гонад отропии было различное.' У новотельных коров получена реакция яичников суперовуляцкей у 13 иа 14 или 93%, у выбракованных коров - 84%. (табл.5). По этому пока-

Таблица 5

Уровень суперовуляции и качество эмбрионов у доноров разновозрастных групп

Показатель

Коровы

ноьотель-: 3-4 : вкбрако-ние глахтаций *: ванные

Обработано животных Реагировало суперову-ляциеи (п-%) Число овуляций на донора .

Получено зародышей на донора

в т. ч. нормальних

14 13-92,9 10,1+2,5 6,6+1,3

16 19

16-100,0 16-84,2 11,8+1,5 10,8+3,2

0,3+1,1

4,4+1,3 " 6,5+1,2

7,6+2,4 3,8+1,2

16

16-100,0

II ,7+1,1

8,1+1,2 6,4+1,1

тел» вццеляются группы телок и коров 3-4 дактаций; р

По числу овуляций и зародышей на донора положительного по ■ извлечен«» достоверной разница" по группам не выявлено.

Среднее число кнтоятішх эмбрионов было самый высоким в I и 3 группах <6,4 и 6,5), соответственно, во 2-й,группе этот показатель снижался до 4,4 и 8 4-Й до 3,8, что почти в 1,5 раза меньше,, чем в 3-й группе. Де генерированных эмбрионов и неоалодотворенных яйцеклеток у старых коров-доноров -быяо более чем в 2 раза беяьтз ;

- 10 - ;

чем у «квотных молодого возраста. -

Для наиболее объективной оценки эффективности использования доноров- разного возраста полученные.эмбрионы:были пересажены-тел-кам-реципиентам (табл..6). .

- Таблица 6

Пркживляемость эмбрионов, полученных от-Доноров разного возраста (п-56)

: Показатели 4 Группа

: • I : 2 :. з , ., ; 4

Пересажена эмбрионов 76 40 70 42

в т.ч. :све*еподуче:ига)г 16 ■ 19.- . ,35 = 21. * '. эоморояенно-■:

■ . оттаянных- 60 21 33' 21 Подучено гстельностей:

всего 22-28,9 17-42,5 36-51,4 21-50,0

в т.ч. от пересадки -

свежеполученнцх 7-43,8 11-57,9 21-60,0 12-57,1

• эамороженно-отта-кнах 15-55,0 ' 6-23,6: 15-42,9* 9-42,9 Число стельностеЯ .

на I.вымывание 1,6 1,4 • 2,6" " 1,6

Процент'стельности после пересадки 228 эмбрионов составил 422, причем приживляемое«, эмбрионов полученных от:полносоэрчст-кых доноров была достоверно вы^е.При^ивляемость свежеполученных от телок-доноров эмбрионов-бага 43,то есть почти равной показателю заморгяенно-оттаянных эародызеЯ■полученных от доноров 3 НА групп. В целом уровень стельности от перссадки закорожешо оттаянных эмбрионов! достоверно ниже чеа свежеполученных.. Максим- ' ~альное-его снижение (на 293») отмечено в группе каров-яерпотелок, -минимальнее (на. 1455) у старнх доноров..

Наибольшее число стельностей ( 2,6 ) не. донора было у коров . ' по 3-4 лактации; наииеньвее (1,4») у первотелок. В группах телок и;коров,старке 6 лет этот показатель был одинаковым (по 1,6).

По результатам исследований «окно сделать визод, что яичники доноров практически любого возраста реагируот. на экзогенные гона-догропкны, однако более приемлемые результаты в целом моззт получить у коров а возрасте 4 - б лет по 3 и 4 лактацяи..

На 64:Еысокопродуктиошйс коровах-донорах была изучена.зависи кость мезду продолжительностью индуцированной охоты,. стадиям« развития извлеченных эарод»х5еЯ'и процентом нормлпышх эмбрионов. Вменено, что1продолжительность схоты до 12 и-болое 24 ч. но коррелирует с показателем среднего.числа'эарог^иоЯ на донора, но со-

• .- • ------И - . . ■

провожается уменьшением числа кнтактних эмбрионе в (табл 7). '* • ..'■■.. . Таблица ?

■ Сооткоэенм общего числе, зародышей и интактнкх змбркогіоз 1 при различной продолжительности охоты

і;родол-: - : - -.....

¡глтельнї Стадия охоты :'* развития

(час.)î- эмбрионов

'число " ; ч"ис л'о" э а'родк : 11 о луу єно ка до-

ДОНО- Î ІВЄЙ Г ' HOCft

ров ' ■ : все- ¡нормаль t всего іі'ь-

- : го н«х*: :зароды-:нь*х »м-

' ' ' * Сп-^) "їісеи :бтэиское

До 12 Поздние уорулы и

1 ранние бластоиноты■12 67 - 33-49,3 5,7+1,3 2,6+0,6 .

Ранниа и поздние ■. ■". і ...

у морулы и бластоцисті! 3 26, 6-23,1 8,7+1,7 2,0+0,2

До 24 Поздние морули и ■-■ ... " ■ _ _ -.

ранние бластоциста',' ' 23 128 Ш-86,7 5,6+0,6 ' 4,8+0,7*

■ • : Ранние1 и поздние ". ■-,•■• ■ • -

■' м^рули'и бластоциста :: 5 ■ 43 10-23,3 8,6+1,9-2,0+0,8

Более - Поздние мор^лы и ■ - . 1

24 ранние бластоциста . II- . 52 27^51,9 4,7+1,6 2,5+0-,7£

Ранние и.поздние * ■ *., ' .'

ыорюш и бластоцисти 10 72 ' 8-11,1 7,2+1,2 0,6+0.3

хі Р 0,05 .-----

. При, извлечении зародышей только'на близких стадиях развития полноценных эмбрионов было 51*9 - 49.и их число снижалось до

11 - 23S если извлекали на стадиях ранней и поэдаей морул и блас-тоцист. Оптимальные результаты были получены при 24-хаасовой охоте.- Число пригодных эмбрионов достигало 66,7£, гри среднсм чкг.ле на донора 4,8+0,7, что почти в более раз больое чем"во всех остальных случаях (р /_ 0,05).

, Вйлгкение, в схему гормональной _ обработки диригестрана - за

12 часов до ожидаемой охоты или овогона-тио - перед I.осеменением способствовало некоторому сокріг.енпії продолжительности ОКОТИ и ' увеличении числа нормальных эмбрионов (табл. в). При згом откачено сніиенио^числа дегенерированннХ; эмбрионов / и неепкодотворен:нас ' яйцеклеток,' В контроле их было более чом в.2- раза больше, чем в omitных группах. Зго свидетельствует, что с'¿точение в схеми гор-"' коналького' воздействия как гонадолиберина произэодства 405Р, так . и отечественного препарата ЛГ в определенной степени оптимизирует сроки овуляций индуцированных я росту фолликулов. В результате ■ ' этого создается благоприятные условия для оплодотворения яйцеклеток и'развития ранних эмбрионов.

В процессе работи проанализированы данные вызывания супероэу-

Таблвда 8

Влиякке диригестргкая оаогон-тио на результаты гормональной обработки

Показатель

Груши

ФСГ +

ФСГ +

диригестран: овогон—тио!

! контроль

Япело доноров . 13 13 Средняя продолжительность

охоты (час.) 20,7+2,18 24,0*2,35

Обцее число овуляций 148 156

Общее число зародышей • 63. 74 .

в т.ч. нормальных (п-50 62-74,7 60-81,0

- дегенерирсванных 9-10,8 7-0¡,3

- неоплодот воренных яйцеклеток. 12-14,5

Влияние санации катки на оплодотворккг^* эиЗрмонов

Препарата ----

13

25,8*2,3 159

■ €3

гз-г*.7

Тайвдх » з зксегсото

Показатель

й одос о л ; * один л л : ГАШ' :г.октрель

15

Обработано ¿квотных Число положительных долоров (п-ть)

- по извлечение зародышей 12-80,0

- по выходу норыальннх эмбрионов

Общее число зародышей

в т.ч. нормальных (п-$) Оя*здотворя«лость яйцеклеток, %

15

14-93,3

12-85,7 ■83

48-57,8 ■ 75,9

.....15

13-66,7 13-100,0

15

104

73-70,2

83,7

14-93,3

11-73,6 86 36-41»?

64,4

12-100,0

99 71-71,7

81,8

ллцик в разное время года. Лучше результаты получены в осенне-зимний * зиине-весекнкЯ периоды. Леток отмечено достоверное (р ¿_ 0,001) снижение числа овуляций, выхода зародышей и нормальных эмбрионов при увеличении доли иеопходотгореннше яйцеклеток.

В исследованиях по изысканно эффективных средств: оздоровления полости натка доноров установлено, что применение любого из истгтантмх препаратов в день , охоты до гормональной обработки оказывает хороший терапевтический эффект: оплодотворяемость яйцеклеток » опыте была на 11,5-19$ вше, чей в контроле (табл. 9).

При применении для этой цели йодосода и препарата ГАМП в комплексе с трицкдл^ном нереальные эмбрионы получены от всех доноров пр* числе интактнше вубрионсв 72 - 70%. Применение аодинола сопровождалось повышение* доли меоплодотворекных яйцеклеток до 24$ к

- ІЗ -

снижением числа полноценных вибрионов до 58£. В контроле втн пока» эателкбшш еще нкяс. 1 * ■

Такий образом, для профилактической санация натки доноров за 10 - 14 дней до гормональной обработки следует использовать йодо-сол и ГАШ - как наиболее эффективные, а иодинол. в учетом более выраженного раздражающего его действия на вндометрлй, лучше использовать после нехирургического извлечения эмбрионов.

3.4. Изучение зависимости показателей суперовуляции и прм-живляемостя эмбрионов от концентраций прогестерона и эстредиоха в кроьи коров-доноров к телок-реципиентсв.

Выло выявлено, что каждому уровню реакции яичников соответствует *определенный исходный гормональный фон. Отчетливо »то вира-esho 8 о-гктаении концентрации прогестерона* С повышением средней ковц«н*рьцки его от 1,97 дс 4,2 нг/мх число овулящій увеличивавшей ст 3-6 до II и более (табл. 10).

■ Таблица 10

Уровень овухяций в зависимости от концентраций прогестерона и эст радиола в кроэи коров-доноров

Число ксров п-%

. Средняя концентрация.

прогестерос нг/мл

!&

эстрадное пг/мд

31-36,9

15-17,9 22-26,2

16-19,0

II и более 7-Ю 3-6

отсутствие реакции

4,2+0,24 4,oTo,62xx 1,97^,34х*

33,5+3,34 28,5*3,93 25,С*5»7

31,0±6,2 .

**> 0,01

Установлена прямая слязь концентрация прогестерона в крови "коров с числом овуляций (£* 0.6Э)*

Аналогичной зависимости числа овуляЦий от концентрате*, эс-традиола не наблюдалось. С увеличением средних его значений лт 25,0 до 31,0 ПГ/мл реіщия яичников на гонадотропин либо совсчм ' отсутствовала, либо увеличивалась до II и болге овуляций. И нап-. ротив, с повышением числа овуляций концентрация прогестерона достоверно превышала показатель коров не реагировавших суперовуляцией. Высокая достоверность различий в концентрации гормона от- . мечена при 7 и более овуляциях в сравнении с уровнем овуляций от 3 до 6. ,

" - 14 >

НвОбХОДКЫЭ ОТМЄТ И-і'Ь о наличии прямой СВЯЗИ мєдду содергаїжеіл эстрадиола в крови:в день осеменения доноров,и числом индуцированных к рос?у фолликулов (г«0,74, р/ 0,01)> Прогестерон в день ох оты отрицательно влияя на оплодотволдёмость -0,43);

■ . ..-..'..■. . , . Таблица' II

Взаимосвязь меяду концентрацией прогестерона -- - . и показателями суперовуляции " '

Концентрация прогестерона,, нг/мл. .

П0К&двіТ8ЛЬ * I - - __ ___-_____— ■ - '

. : до 0,9 : 0,9-1.8 *І,Є-3,6 { 3,6-5,0Іболее 5,0

Обработано короз 16 ; 12 , ; 24 : 14 " 16

ЕК^ій®4* 8-20,0 ' 8-66,7' 22-91,7 14-100 16-88,9 Число овуляций кг

донора 5;5+9,98 5,7+0,81 9,8+0,94 И,3+1,0 13,5+1,8

Получено зароды- • " . ■ . -

вей на донора 2,8+0,8 2,3+1,4 6,2+1,1 .8,3+1,4 11,4+2,0

в т*ч. нормальных 1,4+0,4 " 1,с£о,3 3,3+0,68 . 5,6*1,3.;. 7,2+1,6 .

Ї от общего числі? * 50,0 55,6 - . 53,7'. 67,2 ... 63,2

■■ .- Таблица 12 Приживляємость эмбрионов и содержание в*хрови эстрадиола в зависимости от уровней концентраций прогестерона- ■

Уровни ко-: Средіїяя-концентрация їр.^^.-^.-іПереса-їСтельньзс нцентрацки:-: соотношение. жено ;реципден-

прогесте- їпрагестеро-:зстрздиола;прогестерон;змбто-:tob. _ ... рона,нг/мл:на, нг/ил і пгумл ■ ; гстрадиол ¡нов --¡- п-%

До 1,6 1,14+0,13 32,0*4,2 28,0 16 Г&-31,3Х

1,8-3,6 2,5+0,14', 30,0+3,1 I : 12,0.-16 И-68,8Х Более 3,6 4,8+0,5 28,<£з,7 I : 5,9 ' II ,6-54,5

Xl Р 0,05 .

Только 50 и 67^ корок с концентрацият/и прогестерона.перэд • обработкой соответственно-до 0,9 и от-0,9 до Л¿8 нг/мл реагирова-. ли суперозуляцией с числом овуляций 5,5-5,7; зароддаей 2,8-2,3 и нормальних Э!:брионоа1,4-1,0 на донора'<табл. II); По' мара-пови-де:гоя исходных концентрацкй гормона от 1,8 до 3,6 и 5,0 нг/кл (число коров с реакцией жмников на гонад от ропш увеличивается до иаксияаяьного значения, при достоверном { д/_0,01 ) пезьяіекин уровня овуляций и выхода эародьагй, Превізіение концентрации более 5,0 нг/ил сопровождалось неяоторим сниженкем числа коров с реакцией суперовуляции,.хотя показатели числа овуляций, эаредшгей и ксрсалътгх эмбрионов били высокими. - - ' -

' -15"-

Количество полноценных зародызей от общего.числа полученных по группам разл>палось незначительно.. По-вкдкмому, их число не завися?'от концентрации прогестерона.» крови на день гормональной, обработки.' _

В исследованиях установлено,,что успешный-пересадкам эмбрионов еоотвгтстаует достоверно сысокая кондентрацкя прогестерона, в-* крови реципиентов перед пересадкой С2,5 против-1,5*нг/мл>.. Оптимальные результаты прккивляемости эмбрионов получены при:концентрации прогестерона от 1,8 до 3,6 нг/мл (табл. 12). Увеличение или уменьокние его концентрации сопровождалось снижениемпроцента при-живляемости на 10,5 и 37,соответственно.-При-ниэкоы уровне гормона снижение показателя произошло на достоверную величину. .Коэффициент корреляции между содержанием прогестерона в день-, пересадки и уровнем стельности реципиентов составил - 0,42;,-<, -

Зависимости прижив ля емости эмбрионов оте одержання эст радиола в крови реципиентов не,выявлено.

Ножно предположить,, что для получения-приемлемых результатов■ трансплантации концентрации прогестерона и эстрадиола должны находиться в определенном соотношении.,По нашим данным,. уснешь»'пересадкам соответствует іос'соотнсиение'і : 11,3, а беэуспетным I : 21,5.. Однако сопоставление результатов пересадок с тремя вы--деленными уревнями концентраций прогестерона показало,,что:прижиг-ляемость эмбрионов возможна и при более высоких и низких соотношениях... ..

Из приведенных данных следует, что в программе эмбриотракс-плантации гормональный профиль является достаточно точным тестом прогнозирования реакции яігонітков на голадотрогин и результатов пересадки эмбрионов. Однако, эффективное использование-гормональна исследований при отборе доноров:«, реципиентов до настоящего времени сдерживается отсутствием.точгнья холичьствекных методов экспресс -енализа,- *. . •

3 исследованиях была изучена;возможность', более,раннего прог*-ноза результатов по гормональному фону в:крови животных в-процессе подготовки;их для целей трансплантации. .„■'. , "V

Средняя "концентрация прогестерона перёд синхронизацией в крови коров к телок была 1,8 и 1,9 нг/мл, а эстрадиола 29,0 и 27,5 Пг/мд, соответственно (табл; 13). Двумя днями позже¿ко дето индуцированной^ охоты концентрация эстрадиола'в крови »ивотнтгх псвысилось на ТІ—10 Пг/мл. при десяти - двадцатикратном снижении уровня

-16 -

. „ Таблица ІЗ,

Концентрация половых гормонов в крови коров и телок

Возрастные грушш

Концентрация

досинхрони-: эацииохоты;

в день охопгы

на 7-10-Я день цикла

Коровы

прогестерон яг/нл

Пг/шг

ОЛ1

Телки

прогестерон нг/мл.' эстрадиол Пг/мл'

0,18+0,04 40,0 +2,,36

0,С%0,№

• 2,5^,0,3 27,0-3,3

Т

29» ££3,7

Г,8*0,21 29,0*2,34

1,9*0,26 27,Ь±3,6

прогестерона. Ко времени пересадки зародышей кяи вьзыгадая супєр-овуляции пронэошо обратное повышение концентрации прогестерона и снижение эстрадиоладо уровней отмеченные до синхронизации охоты. Дальнейший'анализ показал, что у коров, не ре&гяровавегюс на ПП и в поеледущем - охаэавщихся клинически непригодными - в качестве допоров, концентрации.прогестерона и эетрадиола= перед скнхронвзе.- -цией*составляли соответственно 0,25 нг/мл и 36,0 пг/кл, т. е. аналогичны таковым в-дин охоты (рис. I). Ко врвшгкя предполагаемой охоты отмечено некоторое повисение уровня ОГеСїерОгіа при 1 снижении эетрадиола, что характера для ранних сгадлй поел«

охоты. Однако на 8-10 день-индуцированного цикла найледа атоя обратное снижение уровней гормонов, что, вероятно, свидетельствует об отклонениям в воспроизводительной Функция.

В остальных группах в период от синхрснязяц^ч охоты до гормональной' обработки кривая концентраций прогестерона зі эетрадиола типичная, но по мере-повышения і»аяции полиовуляции исходные концентрации прогестерона до синхронизации и на 8-Ю день достоверно превышают соответстэутацке показатели групп короя, не пригодных для суперовуляции и не реагаровавщих на гоналотаюяин'{р / ' 0.05 —0,001)-В содержании эетрадиола в кровикоров 2-5 групп в эти дни не установлено существенной разницы и концентрации его били в пределах 27,0-29,5 Пг/мл. А в день охоты, во 2-й группе пик эетрадиола сглаженный и превшенке,от исходного составило лищь 3 Пг/мл; в то время как в 3-5 группах он был.более отчетливым. Значения хоэтен-трацим прогестерона'в этот день у коров 2-й группы снижается до минимума, но не меньае; чем в 3-5 группах (0,2 кг/мл против 0,1-0,12). Самый низкий уровень прогестерона и наибольший пик эетрадиола е день охоты отмечены в 5-й группе: 0,1 против 0,12 яг/ил и 42,5

5Н •

3'8 2'.

Взаимосвязь уровня суперовупяции с содержанием прогестерона и эстрадиола в крови коров в дни синхронизации, охоты и на 8-10-ый день цикла

Прогестерон, нг/мл

, . Эстрадно«, пг/ыл

не

>бр4йотани

4

3 -

\

2 ------

нет ре «шли

Реакция

3-6 жт

7-10 жт более . 11 жт

А ' ( Л

Л - *........Г \ '

5» О

12 3 1

1.23 I 2 3

I

ч ■

Ц:1Я\ме Проб крови 1 - ДО синхропиуацни.' 3 - в ден» окоти, .

--- эстредиол — прогестерон

- 18 - .

нг/ид. Среди коров с отсутствием реакции суперовуляции у 5 - до синхронизации-и у 3-х перед обработкой концентрация прогестерона была н-чже 0,9, а у остальных в пределах от 0,9 до 1,8 нг/мл.

При уровне суперовуляции от 3 до 6 желтых тел распределение исходных:концентраций отмечено в более широких пределах, причем у бояьшмсгва коров от 0,9 до 3,6 нг/мл. В 4 и 5-Й группах не бы-

Рис. 2

Результаты гподготовки реципиентов и приживляемое?ь зародышей » зависимости от концентрации прогестерона е крови до синхронизации, в день охоты и на 7-й ден^- цк^га

Прогестерон, нг/мл

а ■ i**« ti

ЕЯ211 KS33 ÍZZ22 ІЩШ

синхронизация

охота

пересадка Цикл технологии I - потенциальные реципиенты, 2 - непригодные,

3 - стельные-реципиенты, 4 - нестелыше реципиенты jo:ни -одной коровы с уровнем гормона ниже 0,9 нг/мл и лишь 4 хо-ровап- до синхронизации и'2 - перед обработкой имели концентра-"дага в:пределах от 0,9 до 1,8, а остальные от 1,8 до 3,6 нг/мл и более» - . '

Аналогичная« как у доноров, взаимосвязь рйсу.чьтатсв синхронизации* И:аппликации вибрионов с уровнем прогестерона наблюдается у телок—реципиентов* У потенциальных реципиентов содержание гормона в день синхронизации было достоверно больсе, чем у телок

' - 19 -

оказавшихся непригодными для трансплантации (рис. 2>. У последних, напротив, достоверно высокая концентрация была отмечена во время индуцированной охоты, а перед пересадкойLэмбрионов разница в уровне гормона была снова в пользу потенциальных реципиентов* В свое очередь, у стельных:телок перед синхронизацией охоты и пересадкой эмбрионов, уровень , прогестерона был больше чем у нестелькых, а во время охоты некоторое превышение гормона Сило в пользу нестельных телок.

Корреляционный анализ показал наличие достоверной^прямой связи между концентрациями'Лрогестерона в^хрови коров к телок перед синхронизацией охоты и на 7-Ю день цикла ("I,« 0,72). Средняя отрицательная, связь установлена между его уровнями перед синхронизацией и на день индуцированной охоты (7.» -0.31, р ¿_ 0,05) и' между концентрациями на день охоты и на день использования животных в целях трансплантации tX» -0,37, р^_0,05). "

Это свидетельствует'о том, что определение гормонального фона, при подготовке доноров и реципиентов можно использовать для более объективной оценки функционального состояния их яичников и ' раннего прогноза результатов в программе трансплантации эмбрионов.

В исследованиях было выяснено, что эффективность извлечения эмбрионов с использованием катетеров открытой и закрытой конструкций практически равная и составляет 58-59$ от числа овуляций. Установлена средняя линейная взаимосвязь между объемом извлеченной из катки промывкой,жидкости и процентом извлечения зародышей;'

Сравнительными испытаниями катетеров фирм "Кассу" (Франция) и "Нойштадт Айш" (ФРГ) при нехирургической пересадке эмбрионов не выявлено преимущества какой либо конструкции. Комбинированное применение 5мл 2^-ного раствора новокаина сакрально и маточного релаксанта в половинной дозе от общепринятой оказывает выраженное расслабляющее действие на мускулатуру шейки и рогов матки, что обеспечивает легкое проведение катетера через трансцервикальный канал, <-

вывода.

I. Применение простаглацдина в сочетании с ГСКК или ФСГ на 10-12-й день астрального цикла обеспечивает проявление полноценной охотыу большинства коров-доноров перед вызыванием суперовуляции и у телок-реципиентов перед пересадкой эмбрионов, не оказывая отрицательного влияния на результаты гормонального вызывания су-

■ -20-. пероэудяции- и пркхивляеность энбраснов.

2. .Отечественный препарат £СГ (фэллктропин) ло своемубиоло-гичеаа;гу действию fe уступает зарубежным аналогам подобного типа. Удчнихи самся крупного'рогатого: скота любого возраста.'реагирует на экзогенные гонадотропины, однако,.. предпочтительнее использовать коров в качестве доноров эмбрионов после;3-Й ИЛИ'4-Й лактации.

3. Включение в-схему гормонального вызывания суперивудяции-у коров гонадолибержіа за,12.час., до осеменения или-препарата ЛГ под .1 осеменение сокраз&ет сроки овулягвди индуцированных- к росту фолликулов, , псвшает ■ оплодотвссяеыость яйле клеток и увеличивав число нормалькых эмбрионов. до .81,1*. ■ -

4..Результаты индуцированной суперовуляции у-коров зависят от* сеэ«ta гола. Лучсне результаты супзрсвуляции; оллодотворяемости яйцеклеток и выхода.нориальгегс эмбрионов получены в -оечнне-зкмнкй изише-веггкний периоды года. Проіїїлагтігсесхая селения рогов матки вігіраковакках -\*сог.ояродугуивных корив до скнхрениэьахи или в день охоты до-гормональной-обработки йодосолом или препаратом ГАЬХ _обеспечивает увеличение .числа норх&льки* смбрисноз к? дек ста.

5. Установлена положительная кор^зля^ия■ (Х«0,721 между концентрацией прогестерона на день синхронизации охоты и концентраций прогестерона.перед герменбльно*. обработкой (10-3 день цикла).

Уровень суперовуляции зависит от концентрации прогестерона- в крови коров-доноров на.день.гормональной обработки. Аналогичная зависимость определена у телох-рецяпмгнтев.

Оптимальной концентрацией прогестерона в крови коров-доноров * тедэк-уецуииектов лерэд емнхрони.'шгкей охота и гормональной обработкой следует считать от 1,9 до 3,6 нг/*л.

6, £лл нехпуургичеекзго извлечения-, эмбрионов у корсв ИТСЛЭР «СїЛО С равное долей успеха, применять 34KpMTJD к 0*rKp.-iTvt¡ скстекы. При извлечении,амбриснсв-в условиях iwpi предлэчтеккз следует отдавать закрытой системе. Установлена зависимость числа извлеченных эародагей от чистоты удаления проыцвнгй 'среды из рогов катки.-Леобходииьы условием при пересадге эмбрионов яьляетея снятие напряжения с тайки к рогов матки. С этой вдльо лучзе использоьать 2Í-S раствор новокаина в дозе 5 мл сакрально ь сочств.чии с матгч-ным - релаксантом в:доэе 10 мд внутриївоечно, . .

^шичзамз пгьелсеш

¿ля сингрінйздшха охоты у коров-укоров * тедоч-репипкентоь

" - 21 -

рекомендуется использовать простагландин в сочетании с ГСКЯ в-до~ ае 509-800 и £50 ИЕ кли'ОСГ - 100-150 и 50-75 ВД соответственно*. Для повкгения результатов трансплантации следует проводить про$к-лакгиче-¿уо санации рогсв матки перед синхронизацией кяя в день эстру« ,о гормональной обработки, применять Гн-РГ а дозе 200 мкг -за 12 часов до осеменения кди препарат ЛГ в дозе І500ИЕпервд I осеменением* - •

В дополнение к общепринятых критериям отбора коров-доноров и телок-реципиентов рекомендуется определять концентрацию прогесте-; * рона в крови животных перед синхронизацией. Отбирать коров и телок следует преимущественно е концентрацией прогестерона в крови от 1,8 до 3,6 нг/мл*

По теме диссертации опубликованы работы! -

1. Ширяев В.М. Эффективность вызывания оупвровуляции в зависимости от вида гонадотропного препарата //Резервы увеличения производства сельскохозяйственной продукции. - Оренбург* - 1990, - С. 12*

2, Хильхевич С.Н*, Шириев В»М* Применение синхронизации в программе экбриотрансплантации с келью отбора доноров в повышения производительности труда //Резервы увеличения производства сельскохозяйственной продукции. - Оренбург* - 1990* «0*65-66.

3.Хилькевич С.Н., Ширяев В.М., Евстигнеева Н.М, Влияние ФСГ-п, гонадолиберина м лгтеинизирупдего гормона на*качество вибрионов //Зоотехния - 1990* - С.72-73* ;

4, Сергеев H.H., Хклькввкч С.Н., Шириев В.М. Влияние некоторых факторов на претшляемость эмбрионов //Молочное и мясное скотоводство - 1991. -#!.'- С.28-29*

Подписано к печати 26.03.1991 г.- Заказ 659.'.

Тпраж ЮО зка,- Овьем 0,9 уч.-йэд. л*

_____