Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Ureaplasma urealytioum: диагностика и патогенность

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Ureaplasma urealytioum: диагностика и патогенность"

^ v российская академия щвдотлих наук ' кд^чно-исслздоватеяьския ордена трудового красного знамш

эпщкшологм и микробиологии ¡«1 почетного

v " академика н.ф. ГАМАЛЕИ !

йа правах рукописи

ГАМОБА Наталия Александровна

ШШРЬАЕЫА ШЗШГГЮТ! ДИАГНОСТИКА И ПАТОГЕННОСТЬ

03.00.07 - микробиология

Автореферат

диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

Ыоекэа - 196$

Работа выполнена в Научно-исследовательском ордена Трудового Красного Знамзки институте эпидемиологии и микробиологии имени почётного академика Н.8».Гамалеи РАЖ.

Нсучий руководитель :

Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

академик РАМН, доктор медицинских наук, профессор

С,В. Прозоровский

доктор медицинских наук A.C. Анкирская,

доктор ыэдицкнехта ка^, профессор

S.A., Бедьмша,

Государственный научно-исследовательски; иксаитут стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А. Тарас евича.

Защита диссертации состоится

jJ^ßf^^ I9S3

часов на заседании специализированного совета

ËÛ0I.07.0I е Научно-исследовательском институте эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф.Гамалеи РАМН по адресу: 123093, г. Мосвза, ул. Гамалеи, IS.

С диссертацией можно ознакомиться s библиотеке Ш1Ш км. H.S.Гамалеи РАЖ,

M

Автореферат разослан

IS93 г.

Учёный секретарь специализированного совета доктор медицинских наук

Е.И. КШТЕЖША

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы.

Человек является естественным хозяином по крайней мере II видев микоплазм (Тимаков В.Д., Каган Т.Я., £9?3; И.З. Раковская; О.В.Вульфович, 1990; Hazin s. ,Tully,19S3). Некоторые из них веде -лшгея or практически здоровых лвдей и считаются непатогентдл .Таковы, например, M. orale, И.salivnriuriîacluru . Другие виды ».'И ко плазм: П. pneuswnlae, lî.ier<nentan3,U.i:ico£nitus з полном соответствии с постулатам! Коха патогенны длй человека. Войрос о патогенности урогенигальшх хс.ко плазм (И. hoalnia -и U.urenlyticim). окончательна не ресён. й хотя пиеются, казалось Си, весьма убедительные данные о причастности этих юткошгазм к р2эа:ш:э патологических процессов, широкое распространите отю: в вдов среди прак -тически здоровых л та, несовершенство методов. лабораторной диагностики кякопяазмегашх ш:фс;аз,'!й, отсутствие стаадарт«22х диагностичес-гдж препаратов и слогность доф$ерещкецкк клинических ироязкенкй микоилазиеюшк инфекций от аналогична патологических процессов другой этиологии затрудняет реаеяие вопроса об их патогекносгл. Больпшютвом исследователей ÎJ. hoailnls (H.h.) п U.urcalyticwa (V.a) рассматриваются как условко-патогенныз возбудители.

По датнм ведуггих, ьикрое:;:ологоэ и зга;де!лкояоГов нашей страны,

" г

я последнее десятилетке наблюдается определения тегщенция к уве--личениэ роли услозно-па'гогеж^с микроорганизмов в инфепдаок'кой патологии человека (В.М.Еокдареюю, Î9SP). Этому способствует значительное увеличение в человеческой популяции числа' иммунодз -рицктних лиц, иярокое внедрение в медицинскую практику ан-гибиоти-<00, наругааюцнх экологически!? Еза-шмсетмаенкл орггшизма человека его иккрофлори, неэффективность проводимых лечебных лрофилак-:ичесхих мероприятий. Анализ зарубежной литератур« сз15дстельству-'.т о том., что зта тенденция характерна для микоплазмозоз к уреа -

- г -

плазмозов С S.okaaoto, Т989).

Б на^тоэдее враня урогенктеяьше микоплаз^озц интенсивно изучаются б расшх «гранах vs.pa, в нааей стране их изучение го суч^сгзу только начинается. Официальные статистичесзшу данные о распространении урогениталыкк шкоплазмозов отсутствуй-.!!, дисиак-серкоз наблвдение за бодыагда hs проводятся, необходимые диагностические препараты не выпускается. Принимая- во витание сложную демографическую ситуацию, проблема урогениталънкх шкоплазшзов в кашей страна приобретает особенно большое значений.

Цель работы: разработка истодов диагностики урсапдазиоза и кзуче-• ние патогенкости u.urcalytioun.

Задачи исследования.

1. Подобрат» оптимальные питательные среда для выделения, длительного куямчшировадня V.urealy-ticun и получения биомассы уреаплазы.

2. Разрабогагь ыесодаку получения мембранной франция и.urea-ly tí cura и гипе^к^ыуший сыворотки к ней. .

3. РаграСотагь комплекс изтсдоэ для выявления u.urealyticuK к антител к ней у больных различных нозологических групп.

4. Создать síKiiepínieHxaawHy® модель уреашхазыенкой инфекции на обезьянах и кроликах. ■

Научная новизна работе." Разработан коммгекс методов для диат-тос-тг.ки урештаалмешгай инфекции человека, который вклвчает: £} t.a;c -ро 0 коло г и че с ки U - ввдеяеиие уреаплаам' кз клинического материала на резляадые среды, в тс и числе на оригинальные, разработанные авторам; 2) серологические: реакции агрегат-гсмагглютинации и яг.ссквной ге.чаггдвтииэдйи и 3} реакуиг икЗ-'уьофлуоресценхуш с ис -

- 3 -

пользованием гипериммуннсй сыворотки к мембранным компонентам клетки уреьпяазм.

- Получены доказательства причастности 1'.игеа1уисш: к развитию неспешфтаесхих ¿оепалетельних заболеваний.гениталий у женщин, хронического пиолокефрмта, кекс ко го бесплодия и незынаии-а&нчя беременности.

- Впервые показана причастность 'и.игеа1у*1с«и к развитию явенильных артритов.

- Созданы экспериментальные модели уреаллаяменшй инфекции.

- Впервые показана способность И.иге-а1у11сгш кчдутдировать артрит при экспериментальном инфицировании ::ролккоз.

- Впервые показана возможность генерализации инфекционного процесса и длительной (в течение 1,5 лет) аерсистенция уреашгазм в организме экспериментально инфицированных шэяиксз.

- При экспериментальном оаракекии обезьян И. игср.1уЫс1т показана генерализация инфекционного процесса: развитие поспал!. -тельного процесса в мочеполовой тракте и лЗгкйх, длительная пер -

систенцкя возбудителя Сдо б месяцев) в органах иммуногенеза, уро-

Ч -

гекцтйльном тракте, некотсрЫл эвдокринньк железах, гипофизе, поджелудочной железе, а семенниках и семенных пузьфьках.

Наушю-прястнчасяая ценность работы. Ког.шлеке разработанных методов диагностики уреаялаэменной; инфекции кии быть использован для серозшдешояопгоесгого обследования разных конрингеигав урологических, гинекологических больных, беременных жёшш с небла -сопслуэдим анамнезом., жекшгкн, страда шик Зестаодчэм. выявление /рь -млязме-нрой .чвгекцш? позволит члмндаястзл; аьчска состб'-гзтвую-зде коррективы щ осеку тераяну. таких йояьакх.

Здежфруировепик? на .«квотных модели микоплазмо^са человека. :юэЕсл>а деучигь яатогсье"» этих кнфеноий т разраос. ..?? -ле-^оды

их профилактики и терапий.

Экспериментальные результата, представленные в диссертации, получены как лично диссертантом, так и в соавторстве с сотрудниками ШИШ им- Н.Ф.Гамалеи РАМН, Университета им. Гумбольдта (ГДР), НИИЭШТ г. Сухуми, Ереванского .медицинского института.

Матерката диссертации использсваш при составлении "Методических рекомендаций по получении гилеримкунчой сыворотка к цитоллазмати-часгш. мембранам 17геар1азоа га-ззЛу^З-сиш (утверждены на заседании Учёного Совета НЙЮМ чм. Н.Э.Гам-злеи"АМН СССР по внедрений научных достижений в практику, 1965).

АараЗадкя работы. Материалы диссертации доложены и обсуздены на:

- Международном симпозиума по патологии обеоьж (Сухуми, 198?); 2-ой Всесоюзной кокференцкк "Актуарные вопросы клинической микро-биологип (Барнаул- 1588); Объединенном заседании проблемных комиссий Научного Совета по микробиологии АМН СССР "Медицинская микробиология" и "Теоретическая прикладная иммунология" совместно с секцией микробиологии ВНСМЗП им. И.К. Мечникова (Москва, 1939);

- научко-црак^ической конференции в лаборатории михоплазм и X. -ферм бактерий НИИЭМ км. Н.ФЛ'аыадеи АЛИ СССР, С1939).

Публикации. Осноакке положенач диссертации опубликованы б 8 научных работах.

Структур к есть ем диссертации. Диссертация состоят из введзшд, обзора литературы, четырех глаз, включающих результаты эк о л ери -ментального исследов&шя, обсуждения результатов, выводов, бкб -лшграфик. Работа изложена на страницах машинописного тек-

ста, включая 18 таблиц, 13 рисунков и 165 цитированных не -точниког.

)

Материалы и методы

В работе был использован птамм и.игеа1у1:1сит УШ серотипа} полеченный от доктора В.Кёл'ер (Университет км. Гумбольдта, ГДР).

Среды. Для культивирования и.игеа1уисип и выделения ее из клинического материала использовали 10 различных питательных сред, 5 из которых приготовлены на основе импортных коммерческих сред по прописям зарубежных авторов ( № 2 - эедкая среда ка основе рш> -бульона, № 2а - полутвердая среда на основе ГРЬС-агара, № 3 - жидкая среда на основе тротсиказэсоевого бульона,

За - полутвердая среда на основе трилтиказссоевого агара, № 5 - полутвердая среда, приготовленная на основе коммерческой диф -ференцирозочноЯ агароаой среды А-7), 3 - на основе отечзстветшх сред (1? I - жидкая среда на основе триптичесного гидродизата мышцы говяжьего сердца, 1-5 1а - полутвердая среда на оснозе тркпти -чесхого гидролязата говяжьего сердца), в некоторых случаях с далей модификацией (№ 4 - яидкая среда на основе среды Игла). 2 пита -гельные среди разработали нал! совместно с НЛО "Питательные срезы" (г. Махачкала) ( № о - жидкая среда на оснозе. триптичесного ридролизата кильки, Р 6а - полутвердая среда на этой же основе ).

Бее среды были обогащены компонента.1®, необкодкшми для сизкедеятелькости и.игеа1,у;Ысип.

Посев клинического материала первоначально производили на ране аортную среду, предназначенную ¡сак для транспортировки об-азцов <Св течение 1-24 часов), гак г. для подавления посторонней лоры, препят-ствущей выделений уреатлазм. Основой транспортной редц с дуля л РРЬО -бульон или трлптическиЯ гидролизах дагацы го-етьего сердца. 4

Антигены. Зззесь и.иггаЗ.уЫсип, соотзетствущую 20 мчрд. шеей микробных меток (по оптическому бактериальному стандарту

- 6 -

мутности^озвучивали на'"ультразвуковом дезинтеграторе MSE-150 в течение 6 минут при 20 кгд. Для удаления рибосом и ДНК с поверхности цитэплазматических мембран в клеточную суспензию вносили РпКагу и ДНКазу до I мкг/мл. Суспензию дезинтегрированных клеток , центрифугировали при 40000 е влечение 30 минут. В оседке получали фраидт ¡¿екбрак. Мембраны очицали е ступенчатом градиенте плотности сахарозы и 5 раз промывали деионизированной водой к 0,01 И (фосфатным буфером.

Моноспецифгчесхую сыворотку к U.ure&lyticuia получали путем

U*

пятикратной шлуяизацим кроликов в течение трех месяцев препаратами цктсплааматических мембран U. urealyticum У11! серотипа.

Реакция кнгибиции метаболизма (РИМ). Постановку реакции про -водили по методу D.Ïaylor-Robinsoa (19S3).

Реакция агрегат-гемагглютинации (PATA). Постановку осущест -вляли по модификации, предложенной Л.Г.,Гориной и А.М.Оловнико -яым (1975).

Реакция пассивной гемагглютикации (РПРА) - согласно модификации, разработанной Н.В.Чумаченко и С.А.Гончаровой (1973).

Реакция непрямой ю.муноФлуореспекпии (РИФ). Реакции проводи -ли по методу Weiler, Coons (1954).

Животные. В опытах были использованы самцы обезьян ( lïacaoa nulatía ) массой 4-6 кг в возрасте 3-5 лет и кролики породы шиншилла обоего пола, массой 2,5-4 кг.

Статистическуя обработку полуденных результатов осуществляли по П.П.Атааркну и А.А.Воробьеву (1962) с оценкой статистической значимости по критерии Стъидента.

Результаты исследований и их обсуждение I. Подбор сред ДЛЯ U.urealyticum.

Уреаллазмк являются труднохультивируекши микроорганизмами, поэтому зарубежные авторы предлагают целый ряд много компонентных питательных сред для юс выделения из клинического материала и последующего культивирования (Sh.RazirvJ .Tully,1923;Л.Штипкович, 1987). Больная часть этих сред не доступна для клинических лабораторий кашей страны ввиду их дороговизны.

Проводили сравнение 10 разлитых в ариант а вда пит ат ел ьньк сред: I) коммерческих или приготовленных на основе коммерческих (¡№ 2, 2а, 3, За, 5); 2) приготовленных на основе известных отечественных сред {Ш' I, 1а, 4); 3) разработанных нами совместно с КГЮ "Шгаагельные среды" (г. Махачкала) (№ 6, 6а).

На всех исследуемых средах лабораторный штамм УШ серотипа и.п. культивировали успешно.

В дальнейшей изучали пригодность этих сред для ввдгления уреаолазм из клинического материала.

297 проб ночи и 55 мазков из злагзлща, цервикального канала и уретры, полученных от женщин с воспалительными заболеваниями гениталий или нарушениям репродуктивной функции (до или после лечения) высевали на различные питательные среды. Посев образцов про -водили по одинаковой методике на 2-IO различных средах одновременно,

л

При посеве 28 проб мочи на 5 жидких (}Г# I, 2, 3, 4, 6) и 5 полутвердых средах (Eí la, 2а, За, 5, 6а) статистически достоверных различий между числом штаммов уреаплазм, выделенных на раз -личных средах, не отмечено (р > 0,05) (таблица I).

Частота выделения на1 различных питательных средах игеар1аеяа огеа1у(;1сип из Проб мочиле воспали -тельными заболеваниями гениального тракта

Число проб Число положительных проб на средах

¡¿очи-------

№ I № 2 № 3 К> 4 № б № 1а 1? 2а № За № 5 ■

28 15 15 14 14 15 14 13 12 14 14 '

Аналогичные результаты бьик получены при посеЕе других образцов клинического материала.

. Вместе е тем, при посеве на полутвердые среды Ш/ 1а, 2а, За, о, 6а) 20 штаммов уреаплазм, выделенных на жидких средах, нельзя не отметить несколько худшее качество среды № За (р <; 0 < 05).

В результате проведенного исследования установлено, что все отечественные среды (.'!# I, 1а, 4, б, 6а) могут быть использованы для микробиологического выделения уреаплазм из клинических - образцов наряду с импортными коммерческими средами (№№ 2, 2а, 3, За, 5). Необходимо подчеркнуть, что среды I® &, 6а, предложенные нами для культивирования и выделения и.и. из клинического материала, не уступали по культуральным свойствам импортным коммерческим, а также отечественным средам.

Жидкие среды оказались т&кне пригодными для культивирования в пассажах, о ней свидетельствует рост 18 выделенных штаммов уреаплазм на средах №№ I, 2, 3, 4, б на протяжении четырех пассохей.

Титры бульонных культур 10 штаммов уреаплазм, прошедших 4 пассажа на средах !№ I, 2, 3, 4, оказались приблизительно одинаковыми на средах I© I, 2, 4, б (р> 0,05) и несколько выше,

чем на среде № 3 (р<0,Сй).

Едедневшз наблюдения позволили сделать швод с суцеетзова -нки корреляции меяду длительностью роста кгакмои и. а, при юс первичном выделение из клинического материала и количеств йинш содержание:.! уреагшазм в исследуемом образце, что позволяет ориенти -рссбуко определить количество уреаштзм, содержащихся в нем.

2. Разработка методов выявления уреаялазменшй иифгкции

По данным литературы и по нашим наблюдениям, микробиологический метод ке всегда позволяет выявить наличие урепллазм у лиц, инфицированных шли (Г.Ф.Корсмыслэва, Я.Месарсм, Д.Шгшжович, 1987). Для выявления уреаплазм у больных нами был разработан комплекс методов, включающий микробиологическое исследование биологических проб, исследование в Б© мазков из отделяемого влагалища, церв и -кального канала, уретры, а также обнаружение в пробах сывороткз кроЕИ антигена и „и, (в PATA) и антител н чей (з ИГРА).

Результаты реакций ишунофлуоресцеяции и агрегат-гекагглюти-нации в значительной мерэ заенеят от качества используемой при этом иммунной сызо]откк. Нчш была предложена методика получения гипериммунной сыворотки к мембранной фракции и.и* Такая с«ворот-иг. характеризуется более высоким титром специфических антител и отсутствием антител к белковым компонентам среды, ответственном на неспец?4'киеские реакции. Гиперннмунная сьворотка, приготовленная но этой схеме, сохраняла активность до разведения 1:16 384 в ,?АГА к с 1н-:игрном этих не мембран в разьедении 1:32 768 в РОГА.

С использованием комплекса »етодое на наличие ypecrymw было обследовано хенцки детородного возраста (.20-40 лет'^страдающие хрльическимк ъосиалтммьж ¿аболеэ'/гкями г с ¡иг алий и

- ТО -

(или) нарушениями репродуктивной функции. Наличке у них б&кте -риальной, хлаиадийчой, цитомегаловирусной и герпетической инфекций было исключено путём предварительного обследования в других диагностических центрах. Обследовали также 30 беременных кенщин, страдающих пиелонефритом.

Все обследованные составите 5 групп:

1. Страдающие неспецифичеслиич восп&чительныяи заболеваниями гениталий - 50 женщин.

2. СтрадЮощиё бесплодием - 62 иенщины.

3. Страдающие привычным нез шагав ани ем беременности - 66 человек. N

4. Беременные женщины с. хроническими воспалительными заболеваниями гениталий в анамнезе - 30 человек, . ...

5. Беременные женщиныс страдающие хроническим пиелонефритом .- 30 человек. .

Лабораторному последованкю .подвергали пробы сыворотки юровк и мочи обследуемых лиц, а также соскэбы из уретры, со стенок влагалища я цэрЕШсальпОго канала. Этот материал исследовали различ -„нкми методами: пробы мочи у. со скоби -микробиологическим методом, мазки из материала еосшбов исследовали в Ж. Кроме того,-в пробах сыворотки крови с помощью РАГА и РПГА определяли наличие ан --тигеноа и.и. я ~й.'п< и антител к ним.

Контрольную группу I составили 32 практически здоровых жен -щины £5-4^: лет, контрольную груилу II - 30 беременных женщин (20 --40 лет) без клинических признаков зсслалительннх заболеваний ге-ниталыюго и мочезгеодящего трактов. В анамнезе беременных же* -щин, вошедших ь контрольную группу, на имелось кёртворолсдеиий и самопроизвольных аборто«. Кроме того, пробы сгаоротхи крови 134 1'доровис гт разного возраста, били лсследозаны в РАГА к РИГА ка

- II -

наличие з них антигенов^и.и., Ы.ь. • к антител к ним.

Результаты проведенного обследования представлены в табди -це 2. ''

192 пациент:»! (80,7$), входящих в 1-5 группы, оказались инфицированными и.и. Процент шфщчровакшети уреаплаомами лиц этих групп колеблется от 74 до что совпадает с дегашии ря-

да оарубстдлх авторов (С.Э.игаЪег-, 157Э;ЗЛйсоЬз...с!; а!., 19?0). V небеременных аегерш 1-Згругш уреаплазцу• выявляла и 8-9,2 раза чаще, ч?м у практически здорог*« кеглргн (контрольная группа I), а у беременных лсегщин с нарушения.:,-;! ревродуктнзкой функции и с гфсначесюая восладигельнея! гайолззапшш урогекстаикого тракта - в 1,5-3,7 раза чаще то сразисгош с жщглп даютгичзой рруппы,-10 без 5«кт-:сск«х призниюо зг.о'ояс-;с:гл*1 (ггот-рэльнзл группа Ш.

Полученные дакда« саядехельсгзрг о пользу отпояоглческой роли и.п. 'а возндаюзежи шгмнгззшегх а&0ззг?г.зд3. Пгобходжю от-мотитъ 55ксоп;й процент агеъзтънъ гоюп^г.-г^па-уросйтзг^ошого 4эдрщиговгл;м лиц, пходящах в группа 1^5 ( и.и. + il.li.) по • сравнена) с. лш?*ги юьгрользж;: групл \т~бг.ща 2).

■ У Солык* всех *рупп и.и. а еЗ гдакгсгн ъзце

обнару5жв&ли в урогеюггчльнон грдазге, пез1. в хропл (таблица 3).

Анализ сразн:гзсльной дпагност.'пгсао;^ цеяносил шгольдов&ндос виги истодов показал, "но ¿-74,5% сяучггэ и.и. бша обнаружена кккробйояпгкчеекш методом,- а 62,- в ЕЭ, я 26,03 - в РЛГА.Од-коЕремемчое прет^кепий кшфобхогогичсского в Е-'Ф юзнсило

процент'вчявлепйя урезплаон до 96,73 (р 0,05). В нехотормх случаях урсаклсгчу удегаяэеь выявить -только яаки''-либо одни:.! ?.:етодоч: всего в И!'3 (£3,1й), несколько реяв метода:'- ашробио "тичес-::ого выделения (8,5$), очень редко - только л РЛГА (3.3%).

Таким образом, приведенные данные свидетельствуют о намболь-

Таблица 2

Суммарные данные по обнаружению Ureaplasma urealyticum и Mycoplasma íiondnln у лиц различных групп

ft группы

Д и а г н о

Число обследованных лиц

Моноинфекция Смесан-ная инфекция

В с е г о

U.urea- Н.holy tiсия nlnis

число лиц

Ш

ЧИСЛО

т

U.urea- U.uvea- fcwho» lyticuTH- lyticuin minie 11.hominis ЧИСЛО ЧИСЛО ЧИСЛО

т

лнц Ы

ЛИЦ №

т 2 3 4 . 5 6 7 8

Обследованы вне бепешкности

I. Неспецкфические воспалительны?, паболе-2£1шп гениталий 50 т б. last 32% 37 4<$

2, Бесплодие. 62 и - 22,5% 7 11,3$' 35 56,5% 79S 42 , 67,8%

3. Привычное невшаппгоание беременности л 47 4 ^ 8,5^- 0 Oí эз 80, <3% 42 ' „ 89,4?» 33 80,

Контрольная группа I . 32 . 3 „ 515,6% 3 9,4f= 5 IS.65S

Обследованы во время беременности

3. Привычное невынашивание беременности 19 4 21, BS 0 0% и 57, 15 II 57,9% ■

4. Хронические воспалительные забояева -ния в акедаезе , 30 10 , 33,3£ 2 6,9* 16 ч^З) 3% 26 86,6% % Wfo

5. Хронический пиелонефрит * ■ 30 не исследовали 23 Tío не кс-следо-

Контрольная группа 11 . 30 10 зз,за , . 5 .16,72 5 16,7% 15 fif™ 33,4Й

го

I

- ~I3 -

Сравнительная оценка различите методов обнаружения UreapJ.esna urealytieum

одним методом двумя методе:,:и

микро- ¡ликро- микро- в Е№

биоло- в КЗ 5 PATA биоло- бчоло- и а

ги1зски гкчес- гкчес- PATA

КЛ и ки и в

б Ría PATA

33 114 126 56 • Ш. 133 140

Ш 74,5?¿ 82,36,95,7% . 66,9% 91,5:%

ie'Á диагностической эффективности комплекса ?.п;кро биоло гипес ко го «етода и РИй (96,755). В PATA !-т»«. обнаруживается значительно зеже (в 25,6$ случаев), но этот истод ноазоляет получить пред -:таз'дение о степени генерализации протекшего в организме процесса, что весьма вагло гдл выбора cxcj.ii терапия больного.

•Анализ суммарных по об1:-шу::ож.1 tí.и. о различных

Укологическлх субстратах показкзает, ч"о частота микробиологи -веского ввделензщ этого гзтерооргакиззда та различного матери ада отличается незначительно, (из v.o'ti - 50,32, г.з влагалища - 56,д%, из церзикального канала - 'В,7%, из уретру - 57.855; ру0,05).Методом И® антигзн ü.u. • приблизительно с рспиой частотой аыяв -ляли в мазках кз влагал;ща {Ъ2,Ь%), церзияальдого каната (53, <$), уретры (42,953) (рт-0,05). Вместо <5 тел, а нег.оторкх случаях антигены и.ц. выявляли тояыа з одюн абр&эце кяшкческого. «ато- -риала, что подтверждает целесообразность гаезедзв&Епз различных биологических проб, полученных от одного .тща.

Итак, учитывая огранигеккяе возгояжгги ипосэтосягс лабораторий нашей страны, проведенные нанк исследования позволяет ре номеровать з практических целях для диагностики уреаплаамозов микробиологический метод и PSÍ2?. Серологический анализ кроза га -

ксло лкц, г которых ■ыявлена J.urealy-;Icura

- 14-

них больных также информативен, но, по-видимому, Еозножен толь к в лабораториях, 13-.!ьщих соответствует^ специалистов. При^забор «латьриача для выделения на питательных срэдзх и исследования в К® целесообразно от одного получать несколько клинических ооразиов.

Б соответствии с нашими рехоыецдацйяни после выявления .уре: плазкоза г.енцйнаи, сградазсе{иы поспалитель¡¡жл в&болеванмкми урс гвчитально."о тракта, бссгшодису к пркшчгаг; .нзгыийшиваккгм о'ере мзгаости был проведен курс .ангкйюуиюгсрапин. Пршланлли докси -циклим, к которому урезпаазик вусоко .чуис-гвитслььи. После курса лечения 100 человек бичи сбсяедсшаяи повторно, в бОр случаев нос ле едчкзтзгнкого курса уреагкаш':' били зя,ашнкраз£нп? состашгао боЛЬНЫХ улучшилось. Особенно ватно агистить, что у части пациенток, оград&арх беспяодяеы п гдздоввш иёагвзякзанвеи берешш -ноети (28 человек) после цро&едоэтя одкоМ ггурса ьптибиотикоте-рапии и элиминации возбудителя лзбдадахп ьаетуяшша нормальной беременности к рода в срок без ослолкекий (5 человек).

В .литературе Еьюкааыэаотся предеэлозшиг, что наличие урса-шюзиекной якфвада яьляатся фа;сл>ром. а о»люс««и развигля послеродовых ослошеяиК ( Уаьо е. сб гй,1992;

х-едгаз л., 1992). Для проверен этого предала; йжя ка:-гл были обедедоашз ррупгы гощап, родтааих сшаетоягелд?» и перекеешх операцию кесарева сеченгш. Показано значительное преобладание уреаглазм в группах с ослокчекыдгл точешек послеродового и яоело-олерацко'нного периодов пэ сравкези» с д>а;амг. гшжпюше: груш, не ивевзих осложнений в д&кькй перазд (таблица <2).

Результата кссяедрсашш йй.ретельствуст о внеодой вйрояг- , кости возникновения послеродовьзс и юздеоп&родкшшх осложнений

ч

Боспгл'атвяьнсго характера у л:гц, хя^вдфодпжне И.»

Б работа?; ряда авторов пркзодтск убедительные док-ззатоль-

Результата выявления антигена u.urealy-ticmi ! и антител к ней у женщин с различным течением послеродового и послеоперационного периодов

Обследуемый Число :Выявление антигенов H.urea-

контингент оо'сле- lyticura и антител к ним

дуемьк (число лиц , %)

лиц

РАГА рига ?№

: ГРУША

после само - 65 4L - ' 5 34

яизвольких родов 62, If, 7 ¡6% 5х у Ъ%

а) с осложненным те-

чением послеродо-

вого периода

.6) с нормальным тече- ■ 25 ? 3 и

кием послеродового периода m ' 12% 44^

: группа

£кчины после онера -

кзного родораатзеше —

:ия ■

'а) с осложненным те- ' 35 21 3 0 26

чением послеопе -. рационного перио- 60% s, m 74,355

да

3) с нормальным те - „ 30 s 3 14

чением послеоперационного периода 2ÜJT m: tó.'/g

тез b03v.oshoctk передачи урент;аэненной инфекции от матери ало-.у внутриутробно. В результате внутриутробного инфицирования нло--;а Ч.и. моаэт развиться литолсгичгсккй процесс, приводящий к избиениям в легких, а таизе н других органах V. системах органов ■кода ( Р .Д.Quina. st al.. 1933; üaii H. ¿t al. , 1963; ?.J. Зап--:Ъя:: ei al,, 13?&).

При исследовании в PÍE» маэкок-отаечатков органов 45 новсрск-,ек.1л:; умерших- б течение одного месяца по ело рсяденш; и рмгвшга .нагчоз врожденная пневмония; в легких к печени достаточно боль ~

шой грушь' детей были обнаружены как антигены и.и., так и ан гены а. в сочетании с Е.Ь. (таблица 5).

Таблица 5 •

Результаты исследовании в РШ мазков-отпечатков органов новороаденнюс, умерших в возрасте до I месяца и млевших диагноз врогценка<: пноякония

Исследуемый Всего ис- Выявлены

материал следовано ------———--:-----—-г-

^ и.игеа1у- И.лопы.- и.ихеа1у"Ьз.|

"Исгш Шз +■ К. Чо;п1п:

_____________________________а_______

Лёгкие 23 5 (21,756) 2 (8,7$) 3 (13,00

22 4 (18,23£) не исследовали

Печень 22 5 (22,7$) 3 (13,63) 2 (9,1%)

22 I (4,5$) не исследовали

По-видимому, б результате внутриутробного или интранаталь ноге заражения различные ткани .и органы, в том числе суставы и> ьорожденньге, могут быть инфицированы о.и.

Результаты исследований сотрудников лаборатории микоплаз!» НИКЭМ им. Н.й.Гамалеи свидетельствует о том, что мико плазмы ( i:.arthriüdi<j ,lí.íе.ггаепсаиа) в 30$ случаев обнаруживаются в ct ь-оьчаньной жидкости и крови больных ревматоидным артритом (РА) Ш.В.Жевераёева и др.. Í933; Ю.Б.Вульфович, 1991). Имеются от -дельные сообщения о вед ел емки уреаплазм от больных РА, при sí о?.' часто уреаплазш язляшск ержегвенньм обнаруженным инфгкцион-ним агентом ( ciarle н., 1976).

Данные, полученные нами пра обследовании ЮОдетей, госпи -■гализирозакнкх о институте педиатрии с диагнозом РА или с по -доэр-гняил не. ГА, я 74 пгвдемдов tecíoro центра .с диаг-

hojdi.i реактивный артрит или с годазр&ькеи на ¡'А, также в ряде случаев дамг основания пр^г.голагачъ дос&зл&з&шянуд природу арт-

- 17 -

гол. В пользу этого обстоятельства свидетельствует: I) прямое целение культуры и.и', из синовиальной жидкости ребёнка; 2)от- ' гит ель ко частое обнаружение антигена э сшороткг крови

гей (&£) и взрослых йольных РА (37,ЗЙ). Следует отметить, что следняя цифра в 1,2-1,5 раза превышает частоту выявления'актина такой артритогенной микоплазш, как М.а., роль которой в звитки РА весьма очевидна ( -лаХгД л., 1975); 3) более частое 3,5 раза) выделение и.и. из мочи больных с диагнозом РА, а от лиц контрольной группы (р<0,01). я

Для выяснения роли уреаплазм з возникновении РА и других болеваний, а таете для изучения патогенеза уреаплазменных ин-кпий предстазляется необходимым разработать экспериментальное цели уреаплазменной инфекции на лабораторных яивоткых.

При этом наибольшую ценность представляют результаты, Полунине при экспериментальном инф/цировакии обезьян. Обезьяны бк-успелно использован^ зарубежными и отечественными исследова-ляз.ш для моделирования сальпингита и уретрита (З.В. КоПэг ; а1.. 1979; А.Н.Марантиди и др., 1937). Б-наших эксперимен -х при воспроизведении уреаплазменной инфекции у Масаса ицХа-^а алось наблюдать генерализацию инфекционного процесса: уреа -азму ввделяг.л~ через 3 недачи после юс внутрибрюшинног-о зара-кия из мочи, кочевого пузыря, почек, семенников, семенных иу-рьков, селезенки, лимфатических узлов, тимуса, печени, желчи, цжелудочной железы, надпочечкикоз, легких. Через б и 12 не -ль после заражения живои-ш: уреаплазму выделяли в основном из ганов иммуногенеза (ткмуса, селезенки, лимфатических узлов), чени, почек, надпочечников. Необходимо отметить, что из крови еаплазму выделяли ухе через 24 часа после .заражения в титре

О 1

' -10' ЦОЕ/мя и в дальнейшем обнаруживали з течение всего сро-

ка наблюдения, что безусловно свидетельствует о репродукции уреа плазм в организме кивотных.

При исследовании в' РИФ мазков-отпечатков органов обезьян ан шгены уреаплазм выявляли на протяжении всего срока наблюдения (б месяцев) и несколько чаще, чем при микробиологическом исследо вании,

В тканях лёгкого, мочевого пузыря, предстательной железы через 3, 6, 12 недель после заражения каблвдали изменения, свиде -тельствуюцис о развитии воспалительного процесса.

Накопление уреаплазм и их антигенов в органах иммуногенеза, по-видимому, характерно для различных микоплазмогов. Выявленная в данном опыте тропность уреаплазм к почечной ткани, а также к . слизистой оболочке урогенитального тракта подогшткк животных наблюдалась ранее при других способах заражения обезьян («Г.Ъ.СаИ, et а1., 1Э77 ; А.Н. Марантиди и др., 1987). Особый интерес представляет выявленная наш локализация уреаплазм и их антиге -нов в некоторых эндокринных железах: гипофизе, под-келудочной и щитовидкой налезав, а таете в семенниках и семею-ых пузырьках.

При зтсм не отмечено отклонений в функциях этих.органов,хотя количество шзотных и ограниченный срок наблюдений недостаточны для о кончат ельньвс вьезодов. Дальнейшие наблюдения должны пояснить, язляется ли персистенция уреаплазм б эндокринных железах одной из особенностей экологии этих микроорганизмов, и какое кдч-ническое значение может- иметь этот факт. .

В результате экспериментального моделирования уреаплазмен -ной инфекции на кроликах нагл удалось показать, что в ответ на ьнутр/.бр:оч;и;шсе введение и.и. у жг.вотнах развивается генера -лизоьанный инфекционный процесс, сопровождавшийся длктелпной пер-систекцкей микроорганизмов в различных тканях.

- 19 -

Через 7 дней после инфицирования у животных развивался полиартрит, носивший т!ранзиторный характер. Этот процесс по своей кмму/юмореологической характеристике и клиническое течению не был похож ка ревматоидный артрит человека.

У инфицированных кроликов наблюдали структурную перестройку костной ткани крупных и мелких суставов,сопровождавшуюся процессом резорбции, протекающей по типу периостеоцитаркого остео -лизиса. Возможно, развитие этого патологического процесса связано с наруыением эндокринной регуляции, а именно с временной г* -терпродукцией гормона паращитовидных желез, как зто я било показано ранее для некоторых "артритогенных" мкхеплазм (.А.З.Зильфян «др., 1981}.

Таким образом, моделирование уреатлазмемной инфекции на кромках позволило нам получить информации о локализации и.и. в инфицированном организме,.длительности персистенции возбудителя к сарактеристину некоторых, патологических изменений, возникающих три этом в организме животных.

Анализ дачных, полученных при длительном наблюдении за инфи-дерованныш кроликами и обезьянами, свидетельствует о некотором сходстве этих моделей. В обоих случаях а.и. УШ серотипа диссе -генировала в инфицированном организме, длительно персистировапа 1 заселяла органы иммуногенеза, урогегагальный тракт и некоторые ¡ндокринные железы..Вероятно, в дальнейшем следует использовать юлее чувствительные биохимические к иммунологические метода ис-яедования с целью выявления тонки патологических изменений, юзможно, возникающих в организме в ответ на уреаплазметную икфек-

вывода

. I. Результаты испытания 8 различных вариантов питательных сред показали, что отечественные модифицированные среды, аналогично импортным коымерчесюм, пригодны как для выделения Ureaplasma urealy-ticun. кз клинического материала, так и для её дальнейиого культивирования. Наряду с этим, совместно с ШО "Пи" тательные среди" сконструированы 2 сухие питательные среды на основе трилптеского гидролизата кильки, которые дешевле вале -указанных сред* и такие пригодны как для выделения,так и для культивирования уреагшазм. -

2. Разработана методика получения высокоспецифичнсй гипер -иммунной сыворотки к мелбракным компонентам Ureaplasma urealy-ticmn.

3. Комплексное исследование клинического материала, включающее микробиологический метод, непряыую реакцию ишукосмуоресцён -Пии, реакция агрегат-гемагглхзтиноции и реакцию пассивной гемаг -глюткнации, позволяет значительно повысить вероятность выявления уоеаплазменкой инфекции у людей.

4. Для выявления уреагогазменной инфекции показана необходимость исслод,2Еакь.я у каждого больного различных клинических ма -териалов (мочи, отделяемого влагалищ, цервикааького канала, уретры).

5. Комплексное исследование, клинического материала, полученного от лиц с различными нозологическими формами заболеваний,позволило получить данные, свидетельствуйте з пользу причастности Ureaplasma ercaiyticuia : а) к воспалительным заболевание урогенитадъного тракта, послеродовым и послеоперационным ослож -нениям у ленщкн, перинатальной патологии алода; б) к нарушениям

- 21 -

^продуктивной функции у «енции; а) к ав шильным и реактивным зтритам.

6. Путём заражения обезьян ( тасиса Ми1а1^а; ЧгеарТавта гсаау-Ысип воспроизведён инфекционный процесс. Основным про-зленнем инфекции является развитие воспалительного процесса в згавс и урог-екигальноы тракте. Впервые показана длительная перист екция уреаплазы в организме животных и генерализация инфок -ии (срок наблюдения - 6 месяцев).

7. Впервые установлена воздагкость воспроизведения артрита реаплазмениой природы путём внутрибрюшшного заражения кроликов ¿•еагаазм игеа1у4Лсил ; показана генерализация инфекционного роцесса и длительная (до 1,5 лет) персистенция уреаплазм в тка-ях инфицированного организма.

'ШК1ИЧЕСКИЕ ПРЩаШШ К РЕКОМЕЩйЦЩ!

1. Две питательные среды на основе трииическсго гчдрояияа-а кильки для наделения уреашазм из клинического материала и их ультиЕирования (авторское свидетельство № 1495381).

2. "Методичкекис рекомендации по получению гипериммунной сы~ ■орстки к цитсягазматическим мембранам ^Л-еврХавша,. игеаЗ.у^оил" утверждены на заседании Учёного Совета Б1ИЭМ ик. Н.З.Гамалеи

Ж СССР по внедрению"научных достижений з практику, 1386 г.).

3. Совокупность полученных нами данных о' причастности уреа-•лазм к развитию воспалительных процессов в урогенитальном трак-

послеродовом, послеоперационным осложнениям у яенщич, внутри-тройному инфицирован?!» плода я нарушениям репродуктивной функции ! кендин свидетельствует о необходимости установления диспансер -юго наблюдения за лицами, составляющими эти группы, комплексно.-." "■о исследования клинического материала, полученного от ни:: а

целью выявления уреаллазмеяной инфекции, и решения вопроса об элиминации возбудителя. '

список работ, опубжошных по тжеГдисскргацки J. Экспериментальная инфекция кроликов, вызванная 'J.urealytioura В сб. "Микоплазш и кикоплазшзы". -1935. - C.60-S6 (в соаът с В.Келлер, Ю.В.Вульфович, С.А.Гончаровой).

2. Экспериментальная икфеилия обезьян, вызйанная U.urealyticum/. Сб. "Материалы Всесоюзной конференции". - Международный сим-поэиук по патологии обезьян (тезисы доклада). Сухуми, 1987.-С.72 (з соавт. с Ю.В.Вульфович, А.Н. Марантиди).

3. Микоплазш! и ревматоидный артрит у детей//Вестн.Акад.мед.наук - I9S9. - № 6. - С.62-64. (в соавт. с Ю.В.Вульфович, Л.Г.Гер? ной, А.Ф.МиТченко, В.В.Неустроевой, И.В.Раковской).

4. Роль урсадлазменшй 'инфекции в этиологии воспалительных забо леваний гениталий у работниц сельскохозяйственного произведет ва// Материалы 2'Всесоюзной конференции "Актуальные вопросы клинической микробиологии" (тезисы доклада). - т.2, Барнаул, 1938. - С-63 (б соавт. с Фейзуллой М.Ф., Ю.В.Вульфович, P.M. Муратозой, С.А.Гончаревой, К.И. Яковлевой).

5. йнфицировадие. обезьян ff. urealytieuas yji сератлпа //ЙМЗИ,-1990.- № б. - С.13-18.(в соавт. с А.Н.Маг- -иди, Ю.В.Вульфович, Р.И.Крылоаой).

6. йерсистенция уреаплазм и их артрите генное действие при вкс -периментальном инфицхроганж кроликов//!ММ. - 1991. - №

С.20-22 (в соавт. с ..б.Вуяьфович, А.В.Зильфяком).

7. Выявлений микоплазменной инфекции у и послеродовом пе-ркоде//аестн.Акад.аед.наук СССР. - 1991. - Г? 6. - С.21-22.

чЬ ссант. с М.В.Власенкэ, Ю.З.ВульфоЕ^ч, С.В.Гончаровой).

- 23 -

. Микоплазмоз и уреаплазмоз при хронических соспалительных процессах гениталий, невинаяквании беремешости и бесплодии// Бестн. Акад.мед.наук СССР. - 1991. - № 6. - С.23-26. (в соазт. с О.И. Тропиной, й.В.Вульфович, И.В.РаковскоИ).