Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Ультраструктурная организация CRYPTOSPORIDIUM BAILEYI и взаимоотношения в системе паразит-хозяин при криптоспоридиозе кур

ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Ультраструктурная организация CRYPTOSPORIDIUM BAILEYI и взаимоотношения в системе паразит-хозяин при криптоспоридиозе кур"

На правах рукописи

ЯМПОЛЬСКИЙ Михаил Марковйч

1ЫРАСТРУКТУРНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ CRYPTOSPORIDIUM 3AILEYI И ВЗАИМООТНОШЕНИЯ В СИСТЕМЕ ПАРАЗИТ-ХОЗЯИН ПРИ КРИПТОСПОРИДИОЗЕ КУР.

03.00.19 - паразитология, гельминтология,

АВ1*ОРЁФЕ^АТ

диссертации на соискёние ученой степени кандидёта

1997

Работа выполнена в Проблемной научно-исследовате] лаборатории протозоологии Санкг-Петербу

государственной академии ветеринарной медицины.

Научный руководитель: Заслуженный деятель науки

академик ПАНИ, доктор биологи« наук, профессор ТАШибалова.

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных

профессор А.И.Ятусевич, доктор ветеринарных наук, проф Э.Х.Даугалиева,

Ведущая организация: Всероссийский научно-

исследовательский ветеринарный институт птицеводства.

Защита состоится 24 декабря 1997 года в 11 часов на засе, диссертационного совета Д 120.20.02 Санкг-Петербу! государственной академии ветеринарной медицины (1£ Санкт-Петербург, ул. Черниговская, 5).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ( Петербургской государственной академии ветерин медицины.

Автореферат разослан «&3 » ноября 1997

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат биологических наук, доцент О. В.Узюмов;

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

1.1. Актуальность проблемы. Возбудители криптоспоридиоза - кокцидии рода Cryptosporidium Tyzzer 1910, в последние десятилетия привлекают к себе особое внимание потому, что являясь возбудителями оппортунистических инфекций вызывают тяжелое Заболевание у всех видов животных, включая птиц при дисбалансе иммунитета у хозяина, отягощают общее течение болезни (Tzipori, 1983; Current 1984; Fayer, Ungar 1986; Бейер 1989).

В Последние годы во всех странах мира отмечена тенденция роста криптоспоридиозной инвазии у цыплят-бройлеров, хотя До недавнего времени ветеринарное значение криптЪспоридиОза в птицеводстве фактически игнорировалось (Ytakura et. äl. 1985; Blagburn et. al. 1987, Pavlasek et.al. 1987,1988; Goodwin, 1988,1989; Goödwin and Brown,1989; Latimer et, al, 1992; Täylor et, al, 1994).

В России изучение криптоспоридиоза птиц в Ленинградском и других регионов впервые было начато в Проблемной научно-исследовательской лаборатории, Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины (Шйбалова, 1987), в Московском и других регионах проблему криптоспоридиоза птиц изучали (Никитин, Павласек, 1989). В процессе исследования установлен и выделен возбудитель криптоспоридиоза птиц. По имеющимся данным международной ветеринарной статистики криптоспоридиоз птиц наПосит большой экономический ущерб во многих странах мира. Интенсивность инвазии в некоторых птицеводческих хозяйствах д0стигает 90 - 100 % (Gudvin, 1989). В некоторых штатах Америки еженедельно гибнет до 20-30 тысяч бройлеров. Экономический ущерб состоит из значительных потерь продуктивности (Muirherd, 1986, 1988). Однако, несмотря на некоторые успехи, достигнутые в изучении криптоспоридиоза и его йозбудители он продолжает оставаться далеко не решенной проблемой. До настоящего времени пока не представляется возможности профилактики

Проблемы успешной борьбы с болезнями протозоозами зоонозами, в том числе криптоспоридиозом не может быть реше без всестороннего изучения патогенеза болезни, ультраструкгурной морфофункциональной организацией возбудителя, особенности паразито-хозяинных отношений, познания имуннологических биохимических процессов в инвазированном организм Актуальность проблемы криптоспоридиоза птиц, его слаб изученность, отсутствие данных по ультраструктурной морфофункциональной организации возбудителя криптоспоридио птиц - Cryptosporidium Baileyi, а также отсутствие сведений i взаимоотношениям паразит-хозяин - определили задачи наип исследований.

1.2. Цель и задачи исследований. Изучит ультраструктурную организацию стадий жизненного цик. возбудителя криптоспоридиоза птиц Cryptosporidium Baileyi выяснить особенности взаимоотношения в системе паразит-хозяр при криптоспоридиозе кур.

В задачи исследования входило:

• изучить процессы развития возбудителя криптоспоридиоза к] Cryptosporidium Baileyi, тканевую специфичность эндогеннь стадий жизненного цикла паразитического простейшег зависимости от способа иннокуляции заражающей стаду возбудителя;

• изучить ультраструктурную организацию стадии жизненного цию Cryptosporidium Baileyi у экспериментально зараженных цыплят;

• выяснить особенности взаимоотношений в системе парази' хозяин при криптоспоридиозе цыплят на электронш микроскопическом уровне;

• провести исследования по изучению биохимических показателей лизоцима, белков и белковых фракций в сыворотке крови пр криптоспоридиозе цыплят.

1.3. Научная новизна.

Впервые изучены процессы развития возбудителя криптоспоридиоза кур Cryptosporidium Baileyi, показана тканевая специфичность эндогенных стадий жизненного цикла паразитического простейшего в зависимости от способа иннокуляции заражающей стадии возбудителя.

нптоспоридиоза цыплят, нет надежных лечебных средств. Широко пользуемый метод борьбы - химиотерапия и химиопрофилактика принесли ожидаемых результатов.

Методами сканирующей и трансмиссивной электронной микроскопии получены оригинальные данные по ультраструктурной организации возбудителя криптоспоридиоза кур Cryptosporidium Baileyi и даны схемы строения стадий эндогенного развития паразитического простейшего. Проведен морфофункциональный анализ системы паразит-хозяин, который позволил установить, что при криптоспоридиозе цыплят существование системы паразит-хозяин обусловлено в значительной степени биологическими механизмами возбудителя и реализацией его патогенных свойств

1.4. Теоретическая и практическая значимость, лученные данные важны для расшифровки патогенеза острой и жической формы криптоспоридиоза цыплят и кур для разработки •атегии средств управления инвазионным при криптоспоридиозе I. Материалы диссертации будут использованы при разработке »аслевой комплексной программы - «Разработать и внедрить /шлекс мероприятий по профилактике криптоспордиоза птиц и оциативных болезней в птицехозяйствах, с учетом экологических юенностей и охраны окружающей среды». Материалы диссертации гут быть использованы при подготовке кадров и научных :циалистов по проблеме «Протозоозы - опасные болезни для вотных и человека».

1.5. Апробация работы. Материалы диссертации доложены и ;уждены на:

ежегодных отчетах и заседаниях в Проблемной научно-исследовательской лаборатории протозоологии Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины;

51-й научной конференции молодых ученых и студентов (Санкт-Петербург, 1997 год.);

межгосударственной межвузовской научно-практической ференции «Новые фармакологические средства в ветеринарии» нкт-Петербург, 1997 год.);

XI -м Международном конгрессе Всемирной ветеринарнс ассоциации птицеводства (Будапешт, Венгрия, 1997 год.);

• И-м съезде параЗитологического общества при Российскс академии наук РФ (Санкт-Петербург, 1997 год.).

• На заседании проблемной научно-исследовательской лаборатор! протозоологии с участием ведущих ученых протозоолого морфологов, иммунологов и биохимиков.

1.6. Публикация результатов исследований. Материал диссертации опубликованы в 9 научных статьях, из них 2 иностранных источниках.

1.7. Объем и структура диссертации. Диссертация состоит ] общей характеристики работы, обзора литературы, собственнь исследований, обсуждения полученных результатов, выводо практических предложений, библиографического указате.1 использованной литературы. Диссертация изложена на 101 странш машинописного текста, иллюстрирована 14 рисунками, 4 таблицам Список использованной литературы включает 110 источников, из hp 85 иностранных авторов.

1.8. Основные положения, выносимые на защиту:

1.8.1. Характер процесса развития возбудителя криптоспоридиоза к) - Cryptosporidium Baileyi, тканевая специфичность эндогенных стади жизненного цикла паразитического простейшего в зависимости с способа иннокуляции заражающей стадии возбудителя.

1.8.2. Данные по ультраструктурной организации возбудите; криптоспоридиоза кур Cryptosporidium Baileyi и схемы строеш стадий эндогенного развития паразитического простейшей полученные методом сканирующей и трансмиссивной электронно микроскопии.

1.8.3. Морфофункциональные особенности и показател физиологических и защитных функций организма в системе паразит хозяин при криптоспоридиозе цыплят в условиях эксперимента.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материалы и методы исследований.

Работа выполнялась в 1994 - 1997 г. г. в Проблемной

научно-исследовательской лаборатории протозоологии Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины, а гакже в птицеводческих хозяйствах Северо-Западного региона.

С целью изучения особенностей процесса развития стадии кизненного цикла Cryptosporidium Baileyi на модели жспериментально инвазированных одно-, двухсуточных цыплят и :го связь со способом иннокуляции возбудителя перорально или штротрахеально. Обследовали неблагополучные по гриптоспоридиозу птицехозяйства Ленинградского и Новгородского •егионов для получения исходного экспериментального материала. )кспериментальный материал ооцисты криптоспориди получали от !авших или от больных с выраженным симптомокомплексом олезни криптоспоридиоза. Всего было вскрыто и исследовано 455 ыплят в возрасте от 10 до 65 суток. Для постановки диагноза на риптоспоридиоз проводили комплексные методы исследования, ключая микроскопию. Для выделения и накопления ооцист риптоспориди, которые были необходимы для экспериментов, спользовали флотационные методы применяемые в

аразитологии. В качестве флотационных растворов отдавали оеимущество тем, которые позволяли получать наибольшее эличество биомассы - ооцист возбудителя. Исходный материал, аксимально богатый ооцистами, предпочитали получать из прямой 1шки. Из флотационных растворов нами использованы; смесь 1сыщенных растворов гипосульфита и поваренной соли, которые ранее готовили, а затем смешивали. Плотность этого раствора ютветствовала 1.3 мг./см3, а также использовали раствор сахарозы ютность 1.25 мг./см3. Преимущество этого раствора перед другими ютациолнными растворами в том, что он является наиболее 1дящим по отношении к ооцистам. Ооцисты не подвергалась зрушению в течение суток и более, находясь в растворе сахарозы, весь ооцист практически не содержала сопутствующей жрофлоры и дебриса. Методом

нтрифугирования, полученный изолят ооцист отмывали в 10-ithom объеме воды от флотационного раствора (3 тыс. об./ мин. в 1ение 10 минут). Полученную биомассу ооцист криптоспориди фаняли в 2.5 % К2, Сг2, От при t°= 4° С.

Ооцисты оставались жизнеспособными в течение 12-15 месяцев наших экспериментах использовали ооцисты, которые каждые месяца пассажировалиеь на однодневных цыплятах.

Для экспериментов по изучению особенности проце развития стадий жизненного цикла Cryptosporidium Baileyi и его св со способом эннокуляции возбудителя и изучения ультраструктур] организации использованы 45 одно-, двухсуточных цыплят поре кросс «Бройлер 6», которым иннокулировали 1х105 ооц криптоспориди перорально или интротрахеально. Убив; экспериментальных цыплят начиная через 12 часов после заражен а затем каждые 24 часа, включая до25 дней после заражения.

Для подтверждения развившихся стадий жизненного ци] паразита и место его локализации использовали световую электронную микроскопию. Исследовали образцы ткани из тонк подвздошной, толстой кишок, клоаки, фабрициевой сумки, а также трахеи, бронхов, носовых раковин.

Для сканирующей электронной микроскопии образ пораженных тканей после фиксации трижды промывали в 6.1 какодилатном буфере, обезвоживали в спиртах возрастаюп концентрации. Затем, после высушивания, образцы помещали столик с тонким слоем специального клея, напыляли золотом вакуумном испарителе JEE-5C. Исследования экспериментальн образцов проводили под сканирующем устройством электронно микроскопа JEM 100 СХ (Япония).

Для трансмиссивного электронного микроскопа образ: закрепляли в эпоксидной смоле, контрастировали насыщенш раствором уранилацетата. Дополнительное окрашивание срез проводили цитратом свинца.

Ультратонкие срезы готовили на ультраТоме LKB - V исследовали в электронном микроскопе JEMt -10 СХ (Япония). Для изучения физиологических и защитных функций организ» определения роли лизоцима, белков и белковых фракций П криптоспоридиозе цыплят использовали 40 30-ти суточн] интактных цыплят, взращенных в условиях, исключающих заражение из вне. Подопытным цыплятам

иннокулировали ооцисты Cryptosporidium Baileyi в дозе 5 х 105 i каждого цыпленка. До начала эксперимента от всех цыплят 6paj кровь из подкрыльцевой вены для установления исходной активное! лизоцима, белков и белковых фракций. У всех опытных цыплят кроi для исследования брали через 5 и 10 дней после заражения опытнь цыплят. Определение активности лизоцима в сыворотки кров проводили, используя нефелометрический метод З.В.Ермольевой JI.M. Якобсона (1949 г.) в модификации В.М. Шубика (1979 г. Общий белок определяли по обще принятой методике с биуретовы реактивом и фотометрированием. Белковые фракции определял методом электрофореза с мединол-вероналовым буфером.

2.2. Результаты исследования.

Изучение характера развития криптоспоридий пти Cryptosporidium Baileyi тканевой специфичности эндогенных стади жизненного цикла паразитического простейшего в зависимости о способа иннокуляции заражающей стадии возбудителя.

Считается, что как минимум два вида криптоспориди] заражают птиц; Cryptosporidium Baileyi - у цыплят и Cryptosporidium Meleagridis - индеек. По некоторым данным Cryptosporidium Bailej преимущественно ифицировали респераторный тракт и рел^ инфицировали тонкую, подвздошную, толстую кишки цыплят, тал находили только несколько паразитов.

Криптоспоридий, выделенный в Японии, • инфицировал! тонкую кишку, фабрициевую сумку и трахею. Представлень многочисленные данные о развитии паразитов только в кишечшш цыплят, зараженных Cryptosporidium Baileyi (Current, Snyder, 1988 Ogimoto et.al. 1987) не обнаружили паразитов в тонкой кишке цыплят, орально иннокулированных ооцистами той же криптоспоридией и выделенных тем же методом.

Для нас представляло большой интерес выяснить тканевую специфичность в процессе развития криптоспоридий у экспериментальных цыплят при разных способах иннокуляции возбудителя- перрально или интротрахеально.

Ооцисты криптоспоридий, полученные от спонтанно болы цыплят, размножены на суточных цыплятах в эксперименталы условиях и накопленных для последующих экспериментов 6i морфологически идентифицированы. Средняя величина ооц соответствовала: 6.5 х 5.2 мкм; в то время как Cryptospofid Meleagridis имеет размеры: 4.5 х 4.0 мкм (Slavin, 1955 Г.). Поэтому с уверенностью были убеждены, что полученный нами шта криптоспоридий гггиц соответствует Cryptosporidium Baileyi.

В настоящем исследовании 30 2-х суточных цыплят зараз1 перорально ооцистами Cryptosporidium Baileyi и 10 интротрахеаль Экспериментальные цыплята, зараженные перорально проявлю симптомокомплекс болезни через 3-4 дня после заражения и в з же период появлялись первые ооцисты в фекалиях, экспериментальных цыплят после интротрахеальной иннокушц ооцист криптоспоридий первые ооцисты в носовых ракови] появились на 7-8 сутки, этот же период совпадал с появлёш кОинических симптомов: кашель, хрипы, чихание. Экспериментальных цыплят убивали первоначально черёз 12 часо! затем каждые 24 часа и до 25 суток после заражения. Ткани убт птицы подвергали патоморфолигическому и ультраструктурнс исследованию. В результате исследования оказалось* что из цыплят после перорального заражения только у 5-ти цыш криптоспоридии были выявлены в Трахеи, с то время как у 9-ти из тй зараженных цыплят интратрахеально криптоспорид обнаружены в трахеи, бронхах, носовых раковинах. При пероральн заражении цыплят почти все участки кишечника - клоака, тонк подвздошная и толстая кишки оказались поражены паразитами перйод 48 - 108 часов после заражения и продолжали цикл развш до 25-ти суток. Однако, фабрициевая сумка оказалась исключение безполые и половые стадии развившихся паразитов бы обнаружены через 7 суток После заражения и количество полов: стадий и зрелых ооцист увеличивалось к 10-18 дню, хс интенсивность инвазии значительно снижалась в отделах кишечник

Эти наблюдения могут служить подтверждением, что фабрициевая сумка играет важную роль в поддержании инвазии.

Исчезновение развившегося паразита из эпителия бурсы на 23 сутки после заражения, а некоторые исследователи отмечают на 25 день, служит подтверждением развития приобретенного иммунитета (Current et.al., 1986 г.)

2.3. Электронно-микроскопические исследования.

Ультраструктурная организация эндогенных стадий жизненного цикла Cryptosporidium Baileyi.

Изучение и расшифровка всех стадий жизненного цикла возбудителей криптоспоридиоза - Cryptosporidium Baileyi было возможным благодаря электронному микроскопу (Vitterlihg, 1971 г.; Gurrent, 1983 г.; Ytakura, 1984 г.; Fayer, 1986 г.; Бейер Т.В., 1990 г.; Сидоренко Н.В., 1990 г.; Шибалова Т.А. и Алиев А.А. 1993 г.; Лмпольский М.М. 1997г.).

Настоящим исследованием предусматривалось решить две задачи: во-первых изучить методом электронной микроскопии стадии жизненного цикла Cryptosporidium Baileyi у экспериментальных цыплят; во-вторых выяснить взаимоотношение паразита и хозяина при криптостгоридиозе цыплят.

Исследования образцов различных отделов кишечника и фабрициевой сумки проводили методом сканирующей и трансмиссивной микроскопии. При исследовании экспериментальных образцов методом сканирующей электронной микроскопии на поверхности различных отделов кишечника обнаруживали многочисленных развившихся паразитов. Особенно это касалось фабрициевой сумки вся поверхность сумки среза оказалась заполнена паразитами. Однако, основные сведения ультраструктурной организации эндогенных стадий жизненного цикла Cryptosporidium Baileyi получены при помощи трансмиссионной электронной микроскопии. На электроннограммах экспериментального материала установили все эндогенные стадии развивающегося паразита: трофозоиты, меронты, макро-и-микрогамонты, зиготы, ооциста, включая спорулированную ооцисту. Все

развившиеся стадии находились в зоне щеточной каемки энтероцитов. Они не были внедрены в клетку хозяйна, а находились в контакте с энтероцитамй, у основания микроворсинок, образуя элекгронно-плбтную мембрану, которая служит для паразита питающейся органёллой. В процессе развития эндогенные стадии криптоспоридий находились внутри паразитофорной вакуоли, которая окружая паразитичекую клетку, представлялась в виде ореола, что, обычно позволяло легко идентифицировать паразита на электрограммах.

При электронно-микроскопическом исследовании уже через 18 часов после заражения цыплят Cryptosporidium Baileyi наблюдали трофозоиты с крупным ядром, окруженным ядерной оболочкой. В процессе дальнейшего развития ядро претерпевает несколько последовательных делений, в результате которых образуются мерозоиты, формируя меронты. Мерогония или бесполое размножение у Cryptosporidium Baileyi повторяется. Меронты I типа выявлялись со сформированными 6-8 . мерозоитами, а меронты II tuna имели 4 мерозоита. Меронты I типа повторялись, а II +ипа давали Начало полбвйму развитию паразита макро-и-микрогамонтам, которке развивались в микро-и-макрогаметы.

Макрогамета покрыта двухмембранной пеликулой, окружена паразитофорной вакуолью, Ядро макрогаметы крупное, центрально расположенное с осьмйофильным ядрышком. Зрелая макрогамета в цитоплазме с гранулами амилопектина, рибосомами, липидами.

Микрогаметоцит Cryptosporidium . Baileyi на электроннограмме представлен в процессе формирования микрогамет, отпочкованных 6т остаточного тёла паразитической клетки. Сформированные бёзжгутиковыё микрогаметы имеют вытянутою слегка овальную форму. Процесс формирования ооцист Cryptosporidium Baileyi включая и спорулированных, у экспериментально Зараженных Цыплят наблюдали на 3, 4, 5 сутки после заражения. На 11 сутки число ооцист значительно увеличивалось, Что совпадало с пйкой выделения возбудителя во внешнюю среду.

2.4. Паразито-хозяинные отношения при криптоспоридиозе

цыплят.

Полученные в настоящей работе результаты исследований, экспериментально зараженных Cryptosporidium Baileyi цыплят показали, что развивающаяся стадия эндогеннного цикла паразита имели как правило внутриклеточную, экстроцитоплазматическую локализацию. Перефирическая часть энтероцита и паразитической клетки соединены плотным мембранным слоем - мембраной, функция которой осуществлять связь паразита с клеткой хозяина.

Эти особенности взаимоотношений паразита и хозяина имеют подтверждение в предыдущих публикациях по криптоспоридиям млекопитающих и птиц (Pearson, Logan, 1983 г.; Reduker, 1985 г.; Gurrent, 1986 г.; БейерБ Сидоренко Б 1991

г.).

У экспериментально зараженных цыплят на электроннограммах отмечали на 7-11 сутки выраженные ультраструктурные изменения тканей пораженных органов. Наблюдалось полная атрофия микроворсинок, ц 11ГО плаз маэ нте р о цито в вакуолизирована, выражен отек штероцитов, набухание метохондрий. Помимо этого отмечалась «фильтрация слизистого слоя макрофагами, нейтрофилами, шмфоцитами, а также выход эритроцитов в просвет кишечника 13 пораженных сосудов.

Такое негативное воздействие паразита на хозяина при :риптоспоридиозе цыплят имело определенные последствия, ;оторые были выражены в разрушении цитоплазмы клетки энтероцита) хозяина, а также в нарушении обменных процессов ! организме, процессе всасывания. Взаимоотношение между [аразитом и хозяином проходили на фоне нарушенного (мунного статуса у экспериментально зараженных цыплят.

2.5. Биохимические показатели крови птиц при криптоспоридиозе.

Криптоспоридии вызывают тяжелое заболевание при небалансе иммунитета у хозяина, отягощает общее течение олезни. Проблема борьбы с такими болезнями не может

быть решена без всестороннего изучения заболевания, его возбудителя, взаимоотношений в системе паразит-хозяин, познания иммунологических и биохимических процессов и инвазированном организме.

В настоящем исследовании в качестве биохимических показателей крови птиц при криптоспоридиозе представлены: лизоцин, общий белок и белковая фракция.

Ввиду важной роли лизоцина, белков и белковых фракций в физиологических и защитных функциях организма, именно им было уделено особое внимание при проведении исследований при изучении криптоспоридиоза и взаимоотношений его возбудителя с организмом зараженных цыплят в эксперименте.

У опытных цыплят кровь для исследований и определения активности лизоцима, белуов и белковых фракций брали через 5 и 10 суток после заражения подопытных цыплят. На 5 сутки - в период клинических симптомов криптоспиридийной инвазии и появлением ооцист возбудителя в фекалиях. На 10 сутки иследования проводили в период наличия максимального выделении ооцист криптоспоридий с фекалиями во внешнюю среду и выраженного симптомокомплекса болезни, с продолжающейся диареей и признаками респираторного криптоспиридиоза.

Анализируя, полученные данные исследования крови у экспериментально зараженных Cryptosporidium Baileyi цыплят, с очевидностью установлена закономерность снижения активности лизоцима в динамике. Так, на 5 сутки активность лизацима снижалась на 13.26 г./% и составляла 26.6 г./% ± 1.08 г./%. На 10 сутки после заражения активность лизоцима в сыворотке крови цыплят резко снижалась и составляла всего 9.086 г./%± 0.982 г.1%.

Заметные изменения в динамике отмечены в синтезе белков и белковых фракций. На 5 сутки после заражения цыплят количество общего белка повысилось на 11.3 г./% ±0.11 г./%, содержание альбуминов повысилось незначительно на 0.77 г./% ±0.34 г./%, фракции глобулинов

а и (3 снизились, а содержание у глобулинов было выше, чем у цыплят контрольной группы и достигало 27.37 г./% ± 0.39 г./%, что подтверждает интенсивно протекающий инвазионный процесс при криптоспоридиозе цыплят. На 10 сутки после заражения цыплят в период максимального выделения ооцист с фекалиями и выраженного симптомокомплекса криптоспоридиоза у цыплят отмечено резкое снижение общего белка и белковых фракций.

Полученные данные биохимических показателей (лизоцима, общего белка и белковых фракций) в крови цыплят, зараженных криптоспоридиями рельефно и хорошо коррелируют с симптомокомплекосм болезни, наличием и выделением возбудителя криптоспоридиоза во внешнюю среду. Проведенные исследования дают нам основания полагать, что криптоспоридиоз у цыплят сопровождается глубокими изменениями в метаболизме лизоцима, белка и белковых фракций в сыворотке крови.

Учитывая, что роль лизоцима, белка и белковых фракций рассматривается в звеньях одной цепи иммунологической реактивности организма, эти данные представляют интерес в системе паразит-хозяин при криптоспоридиозе кур и они могут быть использованы в разработке принципиальных подходов к профилактике криптоспоридиоза птиц.

3. ВЫВОДЫ.

1. Получены новые данные по характеру развития возбудителя криптоспоридиоза кур Cryptosporidium Baileyi, тканевой специфичности эндогенных стадий жизненного цикла паразитического простейшего, в зависимости от способа иннокуляции заражающей стадии возбудителя.

2. Методом сканирующей и трансмессивной электрон микроскопии получены оригинальные данные по ультраструктур организации возбудителя криптоспоридиоза кур Cryptosporic Baileyi и даны схемы строения стадии эндогенного развр паразитического простейшего.

3. Все эндогенные стадии жизненного цикла Cryptosporidium Baileyi: трофозоиты, меронты, макро-и-

микрогамонты, зиготы и ооцисты, включая спорулированнук ооцисту в процессе развития находится внутри паразитоформной вакуоли, которая представлена в виде ореола что позволяет легко идентифицировать паразита н< элекгроннограмме.

4. Развивающиеся или развившиеся стадш паразитической клетки находятся в зоне щеточной каемк* энтероцитов. Имеют как правило внутриклеточнук экстрацитоплазматическую локализацию. Они не был* внедрены в клетку хозяина, а находятся в контакте < энтероцитами, образуя электронно- плотную мембрану, которая рассматривается как питающая органелла и осуществляет связг паразита с клеткой хозяина.

5. При криптоспоридиозе цыплят на электронограмма> установлены ультраструктурные изменения в пораженны? органах, которые приводят к полной атрофии микроворсинок Отмечалась инфильтрация слизистого слоя макрофагами неитрофилами, лейкоцитами.

6. Негативное воздействие паразита на хозяина пр* криптоспоридиозе цыплят имеет определенные последствия которые выражаются в разрушении цитоплазмы клети (энтероцита) хозяина, а также в нарушении обменных процессо! в организме.

7. Биохимические показатели сыворотки крови цыплят зараженных криптоспоридиями, установлены значительны« изменения в динамике активности лизоцима и синтеза белков I белковых фракций.

8. Данные биохимических показателей (лизоцима общего белка, белковых фракций) при криптоспоридиоз« рельефны и хорошо коррелируют с симптомокомплексогу болезни, наличием и выделением возбудителя во внешнюк среду.

4. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

1. Материалы диссертации будут использованы при разработка отраслевой комплексной программы - «Разработать и внедрил комплекс мероприятий по

эфилактике криптоспоридиоза птиц и ассоциативных [езней в птицеводческих хозяйствах, с учетом экологических бенностей и охраны окружающей среды». Материалы диссертации могут быть использованы при ¡готовке научных кадров по проблеме «Протозоозы сные болезни для животных и человека». Полученные данные диссертации важны для расшифровки огенеза острой и хронической формы криптоспоридиоза тлят и кур, для разработки стратегии и средств управления ювазионным процессом при криптоспоридиозе кур.

5. СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ. Лмпольский М.М. Паразито-хозяинные отношения при птоспоридиозе птиц. - Материалы 51-й научной ференции молодых ученых и студентов, Санкт-ербургская государственная академия ветеринарной ицины, Санкт-Петербург, 1997 г.

Ямпольский М.М, Ультраструктурная организация стадий ;ненного цикла возбудителя криптоспоридиоза птиц -ptosporidium Baileyi - Материалы 51-й научной конференции одых ученых и студентов, Санкт- Петербургская /дарственная академия ветеринарной медицины, Санкт-ербург, 1997 г.

Ямпольский М.М., Шибалова Т. А. Изучение изменения 1вности лизоцима в сыворотке крови цыплят, зараженных ptosporidium Baileyi - Актуальные проблемы ветеринарной ицины Санкт- Петербургская государственная академия ¡ринарной медицины, Санкт-Петербург, 1997 г. Ямпольский М.М., Шибалова Т.А., Касаткина Н.В. -ктромикроскопическое исследование криптоспиридиоза ц. Стадии эндогенного жизненного цикла Cryptosporidium eyi - Теэ. док. II съезда паразитологического общества при I РФ. Санкт-Петербург, 1997 г.

юльский М.М., Шибалова Т.А. - Биохимические показатели зи птиц при экспериментальном криптоспоридиозе - Теэ.

II съезда паразитологического общества при РАН РФ. кт-Петербург, 1997 г.

6. Шибалова Т.А., Ямпольский М.М. - Проблемы криптоспориди птиц. Актуальные проблемы ветеринарной медицины

7. Шибалова Т.А., Ямпольский М.М. - Метаболические процесс! организме цыплят зараженных Cryptosporidium Baileyi до и по< применения химиотерапевтических и имуномоделирующих средст Материалы IX Межгосударственной, Межвузовской науч! практической конференции. Санкт-Петербургская государствен! академия ветеринарной медицины, Санкт-Пётербург, 1997г.

8. Yampolski М.М., Shibalova Т.А., Ananieva N.V., Ananiev О. Parasite-host Relationship in Case of Poultry Cryptosporidiosis. - X International Congress of the World Veterinary Poultry Association - 19 Budapest, Hungary.

9. Yampolski M.M., Shibalova T.A., Ananieva N.V., Ananiev 0. Ultrastructural Organisation of Life Cycle Stages of the Cryptosporidi Baileyi. - Xlth International Congress of the World Veterinary Poul Association - 1997, Budapest, Hungary.