Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

УГЛЕВОДНО-БЕЛКОВЫЕ СОЕДИНЕНИЯ И ВОСПРОИЗВОДИТЕЛЬНАЯ ФУНКЦИЯ ЖИВОТНЫХ

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "УГЛЕВОДНО-БЕЛКОВЫЕ СОЕДИНЕНИЯ И ВОСПРОИЗВОДИТЕЛЬНАЯ ФУНКЦИЯ ЖИВОТНЫХ"

ВСЕСОЮЗНЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЖИВОТНОВОДСТВА (ВИЖ)

На правах рукописи УСПЕНСКИЙ Александр Николаевич

УГЛЕВОДНО-БЕЛКОВЫЕ СОЕДИНЕНИЯ И ВОСПРОИЗВОДИТЕЛЬНАЯ ФУНКЦИЯ животных

03.00.13 — Физиология человека и животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

..Г.Н'

н. Дубровицы Московской обл., 1991 г.

Работа выполнена на кафедре акушерства н зоогигиени Нижегородского сельскохозяйственного института.

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук В. П, Коконов;

доктор биологических наук, профессор Ф. И. Осташко;

доктор биологических наук В. В. Жаркин.

Ведущее учреждение — Всероссийский научно-исследова- .

тельскнй институт племенного л0^ - '

. - - *

Зашита диссертации состоятся 991 г.,

в 10 часов, на зассгани;! специализированного совета Д 020.16.02 но Всесоюзном-научно-исследовательском институте животноводства;

Адрес института: 142012 Московская обл., Подольский р-он, п. Дубровицьг.

Автореферат разослав «¿¡¡Ь?..» >1 г.

Ученым секретарь атгхклнзированиип» совета,: А кандидат биологически* каук И. И, Шмыгиа^^

I. ОШАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАШШ

Актуальность темы, в комплексе народнохозяйственных проблем страны одним из главных стоит вопрос ой обеспечении людей животноводческой продукцией. Основой роста производства продуктов животноводства является научно-технический прогресс. Интенсивное развитие животноводства немыслимо без.достижения высокого уровня воспроизводства стада, в настоящее время ваблвдается большое количество бесплодны* коров, что приносят громадный экономический ущерб.

Комплексность подхода к вопросу.о воспроизводстве животных ' предполагает наличие информации об особенностях формирования спермиев, сохранении их вне организма и в половых путях самок. Советские учение! И.И.Иванов, В.К.Мялованов, .И.II.Соколовская, Н.П.Шергнн, М.П .Кузнецов* Х.Х.Хабибуллин, Е.М.Шитов, Н.11.Сер-геев, А.П.СТуденцрв, Д.Д.Логвинов, Ф.И.Осташко, А.А.Сысоев, В.С.Шилилов и др. внесли большой вклад в разработку вопросов физиологии и практики воспроизведения животных. В свете существующих данных секреторная деятельность половых путей самцов.и самок оказывает существенное влияние на процессы, связанные с воспроизводительной Функцией, хотя и не вполне выяснен механизм ах воздействия. . '

Углеводно-белковые соединения являются одним из компонентов секретов половых лутея. Эти соедшеипя выполняют ¡глэненно ваклые функции в процессах биологического развития и узнавания, игравт роль антикоагуляторов, со став! их частеЛ г.рсвп, веществ, являвшихся резервом энергия/а многие из них слу-лт также п структур-1шг,1 материалом, '

Однако нет сведений, кзслкится роли и механизма этих гга.тл-лексов, которую она осутесгпляят в^югу^^^^^отпку.я. .1-

Цэят?, Сизгиеи Кг«, с/;. Хекяяз с^ьк», - а^д. гл. Е, Д. V, ггчрггасж

взашодействш со слерипял и при сохранении сперш вне организма и в соловых путях самок после Осеменения. Наличие от. .иельаих составляющих глин снрот е!шо в во всех участках половых путей у половозрелых животных. предполагает непосредственное влияние их на воспроизводительную функцию. Проведение исследований углеводно-белковых соединений в отдельных участках половых путей у самцов в самок во многой является проблематичным, как в теоретическом, так ив практической плане. Поэтому возникает целесообразность решения этой проблемы и на основе ее - разработка прьхтнческих нер, которые могут повысить оплодотворяемость коров и экономический эффект осеменений .

Цель и задачи идоледовани^.- Целью исследований была раэра- > ботка методов, повышения оплодотворяемостикоров на основе глубо-. кого ■ теоретического изучения1механизмов действия гликопротеияов . в процессе формирования спермнрв, разбавления, замораживания и оттаивания спермы и контакта с секретами пшегаяиев» а такке совершенствование методов длительного сохранения спермы быков.. ■ •

В соответствии с целью исследований были поставлены следующие задачи;- - • .. ■

- винсьить роль придатка семенника в форшроьании углеводно-^ белковых ооедииепип спермиеву быков; . -'■ '

- исследовать ьлияние гликолротеияов в образовании спермы быка и на сохранение ее в глубокозаморояекном состоянии;1

. - установить .^ушсцаокальное состояние .гшеталиев у коров в . период подготовки их к оплодотворению; ' - исследовать глнкопротеины половых Путей у коров;

- установить влияние секретов половых путей самцов и самок , на азшакику .тшюСшлс параметров спермиев;

- усовершенствовать метод глубокого зашрааивания спермы ■

быков; - ." ■

- выяснить влияние микробной контампнаипн на состав глико-протеинов в сперме я оплодотворяемость коров;'

. - исследовать эффективность внутриматочного осеменения коров в начале послеовуляиионкого периода;

- изучить возмошюсть воздействия прогестерона на коров в . послеосеменительном периоде.'

Паучная новизна 'исследование;, о результате исследован и;; впервые выявлена закономерность распределения веществ гглеводло-белковой природы в придатке семенника п придаточных полопюс железах у. быка, установлен механизм включения глпкопротепнов в состав спермн и спермиев.

Получзвы новые данные о роли отдельных; компонентов г л икон роте яя а при разбавлении,.замораживании и оттаияаккя спермы бшеа, барана и хряка. '

Выявлены принципиально новИе закономерности влияния глякопротепнов на воспроизводительную функцию коров. '

На основе исследования угяеводно-бзлкових соединения, аминокислотного и клеточного состава, разработана схема зональноЛ классификации зптщидишеа быка.

На базе выявленных физиологических особенностей распределения компонентов гликопротеина секретов гинеталиев а продвижения спермиев после осеменения, разработав метод виутршаточного осеменения коров в течение трех часов после овуляция.

Основные полосе пул диссертации:

- в фазирования наруглих образований cnepi.ua! в придатке семенника значительная роль пркнедае^ит глико прот е ииам; в секретах опидидинаса,.пузырьковидных, предстательной," куперопих к уретральных ¡нелезах имеет место спеш'фнческое рзсп^рлело;;::? -л1"."

компонентов, что л обеспечивает включение их е состав спермы;

- углеводная часть гликопротеипов ene pai быков и цервик&яъ-ijoíl слизи коров идентична; бе лково-углеводные соединения гинета-лиев у коров являются оперативным средством реагирования - на изменения физиологического состояния организма животного е связи с его репродуктивной функцией; ва консистенцию цервшеальной слизи вдняит skso- и э ндоглика з идаз и;

- в процессе разбавления, глубокого замораживания и оттаивания спермы быков, баранов в хряков проявляется специфичность реагирования углеводно-белковых соединений на эти процедуры, -в связи с устойчивостью спермы к аамораливаипю; уменьшение количества гексоз и фукоза происходит при увеличении микробного числа в спер-«е быков;

- нормализация углеводного содержимого гликосротешюв в матке у коров происходит при участии прогестерона, поэтому введение его'вослеовуляшюнный период повышает эффективность осеменений;

- у некоторых коров (7-15,7%) овуляция происходит синхронно с "рефлексом неподвижности", для успешного оплодотворения-таких ккьотних следует еводцть сперму в краниальный участок рога матки со стороны овулировавшего фолликула.

" Положения диссертации научно обоснованы и подтверждены ре- ; зультьтами исследований придатка семенника, придаточных половых reлез, слерш в процессе технологической обработки при замораживал mi, оттейвалаи,спермиев, находящихся в половых путях коров,. секретов гпнеталаев животных, дайних об оплодотворяемости, а так^е анализа при сопоставлении данных отечественной и зарубежной литературы.

Пгу.ктгчеккое значение работы, результаты гистохимического ccüj*£>:oFa¡tM эпилкдиыиса быка, на основе которых вредл01вна so- ■

нальная классификация этого органа,. являются базой для проведения исследований в этом направлении.

Контроль состава углеводных компонентов гллкопротенна сперт! ■ и секретов гсшеталиев коров позволяет использовать высококачественную сперму в физиологически оптимальные орокн.

Усовершенствованный состав синтетической среды сохраняет полезные биологические свойства спермы быка и кобеля при г-40С в .течение 3-5 суток. Это позволяет осуществлять длительную транспортировку, сверла для подбора, пар в собаководстве и проведение лабораторных исследований спервы. ,;

Предложенный метод замораживания спермы в'одноразовых поли- . стироловых пипетках позволил проводить асептическое осеменение ' воров в условиях производства и послужил основой для дальнейшей разработки спооойа замораживания спермы быка-с использованием пластмассовых емкостей. ,

Технологи« трехступенчатого метода оттаивания спермы, замороженной в форме необлин-ованшх гранул, способствует освобождению ее от микробов, - сорбированных на поверхности гранулы в период даыоракивания■и хранения,4и использовать асептическую сперму. Первые опыты накопления и использования замороженной спермы в практике отечественного мясного скотоводства явились основой для массового использования ее в производственных условиях. ■

Нетод внутркматочного о се 1.« пения коров, проявляшях охоту в послеовулшионный период,' позволяет получить 67-71# оплодотворений^ 7-Г5,7,в таких животных. Использование этого метода - приводит в повышению выхода телят в среднем.по стану на 5-12*' и повышении продуктивности кнвотных за счет ешманхя портала .

оесллодыя.

Слоев б пятидневных ииььдцин прогестерона алл виде ртев алия хоров через дней после осеменения г начале састйшшого иерио-да профидактирует эмйриопатию и. повышает стельность до 33%..

Реализация научних последораиий. Экспериментальные данные ж результат производственной проверка исиользовгаи ори разработке, вау ч ио-што дичешеях н но рлатввно-т ехш че ских документов:

- временные указания по низкотемпературному эаыоражиьашш

в жидком азоте спермы Йиг.ов, ее длительному хранению ц использованию, утверждены Главным управлением, животноводства МСЗС СССР . 4 шя 1966 г.{

- инструкция по организации и технологии работы станцаЗ по искусственному осеменении сельскохозяйственных животных ПСХ СССР, 1966, 1969 гг.;

. - рекомендации.по улуяшешт воспроизводства стада, искусственного осеменения и внедрению в производство научных достижений в области физиологии-размножения се льскохозяйственнш: животных, утверждены решениеи исполкома Горьковсхого областного Совета народных депутатов 14 мая 1979 г,;' . • 1

- рекомендации ио разработке в внедрению мероприятий ш ;. профилактике и лечени» незараэшсс заболеваний и бесплодия кн-ротних в молочных хозяйствах, утверждены ТОО Горьковсяого филиала центра "РоссельхогШПТУ" Ю марта 1981 г.;

- рекомендация о приемах повшешш ошюдотьордеыости коров . при искусственном о сем о не шш, утворздены У^е^»-*' //До . * ■ и публикация. Материалы Диссертации доложены и Одобрен» № еггегоишх научно-иетодических и отчетных вон^-ерев-цэдх Всесоюзного Ш31 животноводства (1964-1969 гг.), Горьковско--ГО сельскохозяйственного института (1970-1989 гг.).

- на У1 мевдународиом конгрессе по размножению « искусственному осеменении кавотиих - Трснто, 1367; Всесоюзных межвузовских научно-методических конференциях по акушерству, гинекологии, . искусственному осеменению и болазнлм молочной железы сельскохозяйственных животных - Ереван, 1970; Ленинград - 1976; зональной научной конференция по' си стешю-э ко логическому подходу к современным проблемам сельского хозяйства и науки - Горький, 1980; ежегодных районных, межрайонных и областных семинарах, совещаниях и научно-практических конференциях в Горько веко а области (1981- . 19ВЭ гг.).

^ Предложенный вариант синтетических сред используется в практике проведения лаОорагорно-практвческих занятий Ш1Р п УИР на зооиняенериом и ветеринарном факультетах ГСХН. Трехступенчатое оттаивание спер!.« используют в хозяйствах ГорьковскОй- области.

Интраматочкое осеменение коров в первые часы послеовуляцион-ного периода апробировано на 21 пункте по искусственному осеменению коров Горшовской области.

' • Основные положения диссертации опубликованы в журналах "Еи-вотноводство", "Молочное:а мясное скотоводство",' "Доклады ВАСЯМ" "Вестник сельскохозяйственной.науки", трудах Горьковекого СШ и межвузовских сборниках науч;шх работ.' Всего по, результатам исследований опубликовано 40 работ, в тоа числе по теме, диссертации-21 работа.,

Объем диссерташюнноД работы. Рукопись изложена на Л&1/ страницах машиноппсного'текста, содержит. 63 таблицы; 7"формул,' иллюстрирована'I схемой,'.72 рисунками, список литературы изучает1 455-наименования, в том числе 173 иностранных*'.В приложении /3 страниц.'

- о -

2. ШТЕР11М II ШОда теСЛЕДОШ^И;]

Исследования проведено в 1964-1506 года в отделе Биологии воспроизведения Всесоюзного ордена Трудового Красного Знамена научно-исследовательского института животноводства, ЦСШ, волгоградской станции искусственного осеменения» совхозах км.62 Армии, "Советская Россия" Волгоградской области, "ГорьковскиД", "Заку-банский", "Шнводский" Ставропольского края, "Зимовниковский" Ростовской области, на ка$«дре акушерства и зоогигиены Горьков-ского сельскохозяйственного института, лаборатории морфологии Горшовского медицинского института, Горьковского мясокомбината № I, Горьковеком нлеыо йье дине и Ш5, учхозе "Новинки4, совхозе "Сормовский пролетарий" и других хозяйствах в зоне деятельности' Горьковского ллемойъединения. Общая схема основных исследований представлена, .' ': -

В 24 опытах были использованы 63 быка черно-пестрой, шведкой, сшмантальской, красной датской и красно-горйат овско й пород, 9 баранов рошш-марш, вятской, ярославекоа и горьковской пород, 14 хряков крупной белой породы и 10004 коровы черно-пестрой, сиишптаиьской, швицкой, красной датской и красной горбатовской' пород. . ,

опытов использовали клинически здоровых,, нормально раэ-ьитых ¡мшотиых. Группы «квотных формировали по лршщипу аналогоВ| с учетом возраста, физиологического состояния и продуктивности. Кормление животных осуир стьлялось в; соответствии с нордами ВИЖа.

Взятие спермы и обработки ее осуществляли в соответствии с ' т^-ейоьаниеы инструкции по организации и технологии работы стан- . пкй и предприятий по искусственному осеменении сельскохозяйственных ЕЛБОТНЫХ. ■ ■

'.'скусстЕенЕОе осеменение коров проводили в соответствии о

дана г объем основных исаадованай

СВоэдействие углеводно-белковых соединений на репродукткшув фуквд® круансгоЛ ■ _рогатого скота____ )

■ Объекты Есслэдоваыла: быка, корим, тшси

Придаток семенника и придаточные половые железы Сиерга Гэзетадпа.

1 ' I

ШС, аушюкислотн, глккопротешш (80 препаратов от Ю вдков) лицс4!ные параметры сдермзев (2&Э4 препаратов от 19 бшкзв, 5 баранов, 7 хряков) Глгкопротеины, роновая кислота, серб' мукоад, лшутаавдаза, фосйоляпады (520 проб от 64 быков, 4 баранов, 7 хряков) Гззжопротеиды., . глщуронздаза, гаазктоэиазза, . ввйрамшшдаза, гаалурснвдаэа, . - * линейные параметры и продвижение спер-шев (2300 препаратов от 50 коров)

| ¿охранение спермы

т

Разработка методов

I

(о I

Модернизации синтетической-среда и осеие-650 коров Санация проо замороженной спермы й осеменение 3421 коров Заыоразэгоание с применением полистироловых пипеток и осеменение 1662 коро? провераа состояния ^олсотяа а осеменение 2566 коров

Воздействии г послеосеиенитедь-шм периоде на: ■ 1453 -коров .

(Предложения для использов&иац в производстве )

- 10 -

требованиями действующей инструкции.

При гистохимических исследованиях придатка семенника у быка аминокислоты - тирозин, триптофан я гистидин выявляли по методу Даниели-Пярса (Э.Пиро, 1962). Нейтральные мукополисахариды о предварительным контролен на специфичность окрашивания альдегид-' них групп по Кэйзон (А.П.Авцкн, 1971)проводили по Шабадашу (Э,Пирс,ХЭ62). Кислые мукополисахариды выявляли'по методу Хейла, а такие методом окрашивания на альциановый синий по Таури в при низких значенияхрН (А.П.Авцин, 1964).

При биохимическом исследования эпидидимиса, секретов придаточных половых желез, спермы быка, секретов гиветалиев определяли! гдикопротешш сыворотки крови (О.Ы.Костшовская, А.В.Жуков, 1961), содержание гексоэ в гликопротеине (Х.Веймер, К.Ыэоин, 1953)» гексозамин (Х.Зшхов, Ц.Петрович, 2954), фукозу (З.Дюпе, Д.Шеттл, 1916), сиаловув кислоту (П.Беы в модификации Л. Свеннерхольыа» 1957), глижуроновую кислоту (В.С.Асатиани, 1965), серомуковд: (Х.Веймер, Ж.Ыошин, 1952), бета-гадактоэидазу (В.С.Асатиани,1969), Оега-глюкуровдцаэу (С.фишмен, в модификации Ц.Плейс, 1961), гиалуронидазу (И.И.Соколовская, 1967).

Оптимальное соотношение исследуемых компонентов при разработке рецептов синтетических сред для хранения спермы при 2-4°С, минус 196°С находили методом встречных арифметических рядов (В.К.Милованов, 1962) с последующи уточнением биологическим методом по живучести сперыиев.

. Линейные измерения «оаиыофобных спермиев проводили в половых путях быков, сперме и гипеталиях коров через 2, 4, 6, 8 ч после ооемененхя. После внутриматочного осеменения коров в постовуля-цвоииом периоде дозами от 0,1 до 3,5 мл сперм подсчет спермиев ■ в различии* участках яйпепровода производили в эктомвровашшх

через 10-16 ч органах.

Контроль, состояния гликопротеияов цервшсальвой слизи коров проводили в соответствии с методом кафедры акушерства УСХА (1997), для определения мукополпсахаридов, который был нами модифгогиро-. ван (А.Н.УспенскиД, 1973).

Биометрическую обработку, полученных данных проводили с ис-. пользованием Я "№-6000''.

Дл» расгота» экономического эффекта, получаемого от разработанных способзв, вакглкзо'вали метод А.С.(Дятвжова и З.И.Эскелевой (1966К

Э. шхдяшгы шгшшашя

5(1, Углеводно-белковые соединения эп идидимиса и придаточных соловых ж лез

3.1.1. Морфология придатка семенника у быка

Рзученгэ содержания и характера распределения тнроэкпа, триптофана в гиствдяда в- эшггелнадьанх клетках эшшош'лпез быка, дшаивтгра кашлдщст, величины с форка юс просвета, ¡слиточного сос— ■ ташш сделало яшиемнцдя' предложить зональную классификацию этого . органе.

. Головку првдатка составляют выносящие канальцы, зова X, 11А, ЦБ, И и част®- аоям 1?, Тело органа занимают канальцы зоны ГУ-Хвост придатка семенника состоит из зон У, У1 и УЛ.

Стенка выносящих канальцев выстлана однослойным многоряднад цилиндрическим мерцательным эпителием. Главными'клеточными элементами его являются "основные" (клетки, в которых четко выявляется базальннй долюс, контактирующий с мембраной п апикальный, выходящий в просвет канальца), реснитчатые и базальные. Просвет канальцев дистальвого отдела в высота эпителия, так г.е как и

секреция, меньше, чем в проксимальной отделе, цитоплазма содер- ■ хит.умеренное и большое количество аминскислот. Среди рвснитчаты! рлвток встречаются бокаловидные и цилиндрические.

Зова I содержит клетки, большие по высоте, чей у диет альт-го отдела выносящих канальцев "основные" клетки имею цилиндрическую форлу. количество аминокислот среднее ш высокое. От апикальных кондов "основных" клеток отходят средней величины стереоцилии. На базальной мембране лежат базалыше клетки в округлыми ядрами.

Зона В* Просвет канальцев шире, чем в зоне I. Высот аэпи-телвя здесь более,чем в 2 раза. Зова ПА по сравнению с зоной ПБ характеризуется неровным просветом канальцев. Цитоплазма светлых "основных* клеток содержит умеренное количество, темные основные клетка содержат большое количество тирозина, триптофана ж гиствдина, '

Зона Ш, Эпителий канальцрв здесь ниже предыдущей зоны. Ядра располагаются ниже средней оси клеток, но не прилегают к ' ' базальной мембране. Редко встречающиеся базальице клетки имеют' ядре округлой или неправильной формы.

Зона 17. Канальцы имеют ровный просвет и выстланы однослойным высоким цилиндрическим ыногорядвым эпителием, состоящим из .' "основных" и 2 типов базалышх клеток: одни имеш круглые ядра, -/ тогда ках ядра другого типа вытянуты вдоль базальвой мембраны.

Зона 7. Эпителий здесь ниже, чем в.предыдущей зоне. Содер-• хатсл "основные", "ореольные" и базальвые клетки. От апикальных' . концов "основиых" клеток отходят короткие:стереоцилии. "Ореодь- ■ вые* клетхи имеют округлую форму и располагаются в базальной ',' ,зояа вшетедкя. Ери, окраске на аминокислоты содержимое клеток на '.'препаратах выглядит опткчесяж пустым, вокруг ядер заыетеа тонкяв

ободок цитоплазма о умеренным содержанием белковых веществ. Назальные клетки не отличаются от базальных клеток зоны 17,

Зона 71. На поперечном срезе канальцы шест более мощный мышечный слой, чем канальцы У эонн, и неровный просвет за счет развой высоты основных клеток. Характерной особенность» является неравномерное распределение аминокислот в цитоплазме "основных" клеток. Наибольшая активность имеет место в надъядерной зоне,, умеренная - в апикальной зоне. Высокие "основные" клетки имеет повышенную активность аминокислот по сравнению с низкими, в области коротких стереоцвлнй наблюдается темная полоса очень высокой активности аминокислот,, окаймпящая просвет канальца. Ба-эалышв клетки встречаются часто, их якра крупнее ядер "ореоль-инх" клеток, неправильной формы, бедны .хроматином.

:' зона ТО. Канальцы окружены мощным слоем мышечной ткани. Просвет канальцев неровный из-за развой высоты "основных" клеток. ядра "основных" клеток неправильной в четырехугольной формы, занимают центральную зону клеток. Еаэальвые клетки расположены непрерывным слоем, их ядра неправильной форды, светлые, с.умеренным содержанием хроматина.Цитоплазма базальвых клеток бедна

аминокислотами.■

3.1.2. 1фкополисахаркды эпидидлмиса

Выносящие канальцы проксимального отдела показывают значительное -содержание ППК-позйтишого материала. Базальные 'мембраны канальцев представлены тончадаими гомогенными пластинками ярко-красного цвета. В подэЛителкальной соединительной ткани контрастно выделяются извитые тонкие волокна; окрашенные в интенсивно красный цвет. Ядра всех видов клеток не дают ШИК-поло-кательного окрашивания. Характерной особенностью клеток этого

отдела является секреция по апокриновому типу. Гранулы секрета ой-1 лапают высокой чувствительностью к перйодату, цитоплазма реснитчатых и базальних хлеток ОК-негативна, . * •

Эпителий выносящих канальцев днстальнсго отдела характеризуется более умеренным количеством нейтральних кукополясахарддов, однако апикальные концы "основных1* клеток показывают сильную перйодатнув активность, в недъядерних участках цитоплазмы "основных" клеток вдшш мелкие гранулы 1ЙК-позитившго продукта. Цитоплазма эпителиальных клеток в очень малой степени связывает альциановый синий ири рЛ 2,4. Секреторные гранула не содержат кислых нукополисахаридов, хотя ядра клеток, базальная мембрана

и соединительная ткань содержит АС-материал, ;

*

Стенка канальцев I зоны и цитоплазма эпителиальных клеток красятся-в бледно-розовый свет и содержат следы нейтральных муко-полисахарадов. [.Ьзжкапальцевая с'оединительшя ткань содержит ^большое количество нейтральных и кислых мукополисахаридов.

В эпителии канальцев зоны П отмечается увеличение нейтральных мукополисахаридов, спермии, расположенные в просвете канальцев, характеризуются высокой перйодат-реактивностью. Цитоплазма всех видов эпителиальных клеток канальцев отличается малым количеством кислых мукополисахаридов. Вместе с тем содержание кислых . Мукополисахаридов в апикальных участках и стереоцилиях "основных* клеток, а также в сперших остается на высоком уровне.

В стенде канальцев зоны 111 происходит дальнейшее накопление

г

нейтральных мукополисахаридов. Голокриновые клетки ранних стадий развития содержат большое количество ¡НК-позкт явного материала. Ше^шл ярко скрашены в розовый цвет. Количество кислых мукопо- . ■ ' яис&харидов в зоне и снижалось. Исключение составляли только узки! ободок цитоплазмы-"основных'* клеток и стереоцялии. Количество'

кисших мукополисахаридов в спермиях резко снижается. Голокриновые клетки их также не содержат. В соединительной ткани больше нейтральных, чем кислых мукополисахаридов. ■ ,

В эпителии канальцев 1Узоны наблвдается снижение содержания нейтральных мукополксахаридов. В цитоплазме клеток содержание их высокое, в сперм гуд много нейтральных н мало кислых мукополисаха-ридов.

В соединительной ткани, окружающей канальцы, отмечается дальнейшее накопление нейтральных п кислых мукополпсахаридов.

Начиная с зоны У в стенке канальцев вновь происходит накопление нейтральных мукополисохаридои, а количество кислых соединений снижается до следов (альциановый стшй:рН 2,4 и Хейл-решсция) или до.полного исчезновения (альциановый сшшй рН 0,5) в зоне УП. Аналогичные данные получены и для спертков, в которых по мере продвижения « хвосту придатка семенника происходят увеличение нейтральных и исчезновение киолых мукополисахаридов* В соединительной ткани придатка семенника» наряду с накоплением нейтральных, усиливается окраска на кислые мукополиоахаряди.

3»1.3. Гликоаротеин репродуктивных органов быка

Влияние окружгуодах тканей на формирование гликопротеина спермиев придатка семенника прослехивается.пря исследовании венозной кровл и гомогенатов пз сеьашкка и эпидщшапса, Отчество углеводных компонентов этих соединений г крови и гемогенатах ■ довольно близки: гексозамин - 97-100 £укоза - 7-0 мг#, сиа-ловая кислота - 61-64 мг$, серомуковд - 12-14 Вместе с тем гексоз в крови было больше на 47 чем в готгенате из.семей-ников, и на 54-55 юг^ больше, чем в гошгенате из пркдатка семенника (Р 0,01).

. В епермиях на головки теля я хвоста ппцглик.хез гекссп

- 1С -

в 6-16 раз меньше, чем в венозной крови и'в 4-12 раз меньше,Чем 9 гомогенате из семенника и в и раз меньше по сравнению с го ноге натои из того же органа. Такие же закономерности при некотором различии в цифровых выражениях были характерны н по отношении в гексозашшу, фукозе,' сиаловой кислоте и серомукодду. Ыы связываем 9X0 с механизмом формирования гликопротеина спермин.

3,1.4. Изменение площади головок сперыиев в эпидидимисе

По мере прохождения спермия по придатку, семенника ваблвдшет-ся изменение его. линеСвых параметров, наярвшр, шювдди головок (таблица I).

Таблица I

Площадь головки спермин у быков, баранов а хряков, взятых аз семенников и различных участков придатка семенника (п - 1200) ..

Спермин Площадь головки спермия (мкм2) взятых из!

семенника '^ппциддмиеа

головки тела хвоста ' 1

Быка 37,36±0,25 37,32±0,44 37,43^0,48 38,72±0,31

Барана 39,12±0,34 з8,эе±о,зз 40,5640,63 40,72+0,59

Хряна аз,40±0,з 38,8010,25 39,64^0,41 39,44±0,4 . :

Представленные данные позволяют утверждать, что площадь . головок спедоиев у быков и баранов по мере продвижения их по придатку семенника увеличивается (Р < 0,05), У хряка эта величина имела тенденции к увеличению. ' , ЦовдеАствие на апидидамалышх спермиев'секретов приддточных половых жь-ез вызывало изменение линейных пареметров; При обра-.' ботхе спершев быка секретами предстательной, куперовых и урет- I. р едина желез плоьзд» головок угеХгчгвались (Р < 0,05; Р < 0,02;

Р < 0,02» соответственно). Обработка епермиев оекрэтамя лузырьно-видны* желез приводила к менее выраженному увеличению площади головок епермиев, ■

В процессе обработки епермиев хряка в барана секретами ку-перовнх к уретральных желеэ,в первом случае наблюдали увеличение шюшадч головок (Р< 0,02), .во втором - тенденцию к увеличению. При бездействии на эпвдшшмальных епермиев этих животнях секретами пузырьковидных и предстательной яелезн площади головок епермиев уменьшалась,.

Увеличение линейных параметров епермиев быка при проявите-ник И* от головки к хвосту придатка сеиетшка ш связываем с вовнижнеем количества гексоз s сиаловых кислот в соотаве гллко-вротвша епермиев.

■ В секретах придаточных половых желез также был найден глл-копротеин. Наибольшая часть гексоз содержалась в секрете пузырьковидны* келеа (125 мг%) и наименьшая - в секрете предстательной железы (15 мг#). Гевсоэамин находили.только в секретах пузырько-

tf ypt-TpaJftSKf

видных,. луковиччнхгёелез (10-140 Сиаловая кислота бала

полнее представлена в секрете пузырьковидных желез Ç30 кг$), меньше ее было в секретах предстательной (70 луковичных

(23 мг$) л уретральных (9 мг;») ¡келез. следовательно, секреты придаточных половых желез являются основнып источником пополнения глииопротеина плазмы спермы',

Динамика углеводно-белковых комплексов в репродуктивных органах самцов проявляется о различной интенсивностью. Пабл»ушется более высокая активность бета-галактозпдаэы в эпвдшшмпсе барянз, чем у бака (в 1,07 раза) и хряка (в ц,8 раз). В то re время, активность бета-глюкуроиидазы в зпиддглмисе была Bitie у быка, чем у барана (в 2 раза) и хряка (в 18 раз).

- 18 -

Количественные соотношения этих ферментов позволяют предположить, что в сперлу быков она попадают из апвдидимиса и пузырьковидных желез, у баранов - из придатка семенника. У хряков в сперме била обнаружена только галактозидаза.

Гиалуронвдаэа у всех видов половозрелых животных проявляла свою максимальную активность в семенников придатке семенника (65-55/0).

3.2. УГлеводнo-öeлковые и другие соединения спермы

3.2.1. Глюкуроновая кислота.'

Сперма быков,баранов и хряков содержит глшуроыовую кислоту, , которая входит в состав спермиев и плазмы спермы. В плазме спермы находится основная масса глшуроновой кислоты. В пересчете ' на I цлрд спермиев больше всего (Л) ее приходится, на спермин хряка (1,1), затем спермин быка (0,32) и спермин барана (0,13).

Глюкуроновая кислота входит в состав желтка куриного яйца, поэтому при добавлении к сперме разбавителей, содержащих желток,, количество ее изменяется. ,

Вместе с тем в процессе подготовки сперш к замораживанию, глубокого заморашвания и оттаивания происходит специфическое распределение глюкуроновой кислоты в сперме. В плазме спермы быка количество глшуроновой кислоты уменьшается от шыента раз-бааления до замораживания и оттаивания (Р < 0,01), в то время как у барана и хряка этот показатель остается практически неиз-цешым. Очевидно, в сперш глюкуроновая кислота выполняет на- . ч*тную функцию, связывая вредные и токсические продукты с образе*» здквем нетоксичных глшуронатов,

Зйиэражявание спермы' оказывало влияние и на активность гийг- -которая уменьшалась в прогесее разбавления (58»9-?5;1),

- I9 -.

"эквиллСрации" (57-67?), глубокого замораживания и оттаивания спермы (52-623). Этот показатель значительно варьировал в зявисв-мооти от крио защитных способностей спермы ( С is = 10,15; 2G; I3t 31,68?).

3.2.3- влияние глубокого замораживания слермн на .. гликопротеин и серогликовд спермиев

Глккопротеин входит не только в состав акросомы •¿тег, ё^УГЛ/^л^/л^Л*. 1965), но и является составной часть» средней части и жгутика спермия быка и барана. При распределении ■0,56 мг/wt гексозы в спермиях быка и 0,25 мг/мл гексозы в саер-миях барана в теле и жгутике содержалось О,I и О,К мг/мл гексозы соответственно.

После разбавления ЛТК средой и в процессе замораживания спермы углеводно-белковые соединения распределялись в спермиях оледующим образом (таблица 2). ' Таблица 2

Гексозы, опаловая кислота и серомуковд спермиев при замораживании спермы быка и барана (я = 150)

Оперт-. Ецк ^Р3" — гексозы сиаловая серому- гексозы опаловая серому-(мг/мл) кислота коид (мг/мл) кислота ком ______Ш Смг7мл) •_f Д) (мг/мл)

После разбав- ■ ' 0,074+0.007 0.31+0,003 О,11+0,06

ления • • 0,19±0,ООЙ ' 0,00±0,СКЙ - . 0.086*0.00^ -

Перед замора- 0,098+0,001 0,48*0,003 0,05+0,000

живанием 0,24±0,004 ■ 0,21±0,004 • 0,Ц±0,003

После оттай- . 0,094+0,001 0,31+0,004 0,2±0,00г

вания 0,24$0,004 • 0,1*0,002 . 0,11*0,000

В процессе "зквшшбрации" происходило накопление гексоз в сперыялх быка (Р< 0,05), сиаловой кислоты (-Р^: 0,01) и серому-шидов почти в 3 раза, в спермиях барйш в «тот период происходило незначительное повышение количества гексоз и заметное повышение количества сиаловой кислоты (Р< 0,01), в то время как количество сероыукоида уменьшалось вдвое.

В процессе глубокого замораживания и оттаивания сперлы быка количество гексод, силовой кислоты и серомукопдоа возвращалось в исходному уровни, в то время как в спермам барана количество серомукоида почти удваивалось. При инкубации спермы в сперииях барана возрастало количество гексоз и сиаловой кислоты.

Показанная специфичность, по-видимсыу, является следствием ; особенностей распределения гликанов на поверхности спермнев и связи его с другими компонентами.

3.2>3. Изменение фэсфолшидов, сократительных элементов и оптических свойств спершев в процессе замора- . : живания

Количество дипоидного фосфора в сперииях барана било больше (Е.Ы.Платов, А.В.Усленский, 1967) со сравнению со спармиями быка и 1.3 раза после разбавления, в 1,4 раза после "аквилибрации" и в 1,8 раз после оттаивания спермы. В исследованиях В.С.Голубя (1972) была подтверждена закономерность потери фосфолипвда спер-ывлмв быков х баранов после глубокого замораживания спермы.

Особенность спермы этих видов животных заключается в том, что после замораживания в лактоэо-аелточно-глицеривовой среде активность спермиев барана уменьшается до 2 баллов о потерей йводог в ческой полнаценностя, у.быка активность сохраняется на -уровне 4 баллов без потери оплодотворяиае Я спосоСности5°Йсоле- . яоелнсо сокгдтетедышх элементов ей ер мне в барана потеря верво-

начального веса при высушиваний ло 72~"5% сокращало количество "препаратов" с вибрирующим жгутиком (24-405). Однако единичные 1 спермин сохраняли поступательную подвижность даже при потере 57$ первоначальной массы ."Было установлено, что при сохранения 39Í остаточной влажности контрактильные элементы спермиев не повреждались.(А.Н.Успенский^ Е.М.Платов, 1967). Это дает основание утверждать,. что в процессе технология глубокого замораживания спермы больше повреждаются периферийные образования спермиев.

Электронномикроскопическое исследование'спермиев с использованием различных синтетических сред и режимов замораживания показало, что в процессе разбавления, "эквилнбрацип", глубокого -замораживания и оттаивания1сперды число неподверженных изменениям спермиев снижалось от 55,1! (неразбавленная сперма) - ЗВ£ (после -разбавления средой с глицерином) - 19? (перед замораживанием) до IES (после оттаивания). Это соответствовало активности: 8, 7, 6, 3 баллов. ~ 4■' 1

В процессе подготовки, замораживания я оттаивания спермы наибольшим изменениям подвергался акросомйый колпачок (55-80;.) -Шейка повревдалась у 27-63* спермиев. Разбухание митохопдриаль-вой части тела было больше вырая®но после периода "эквилибрации" (15$). Головка сохранялась в неизменном состоянии у 70-94,^ половых клеток. Изменение жгутика отмечали у IO-I5Í спермиев.

3.2.4. Микробная контампнацая'я глнкопротеин

Средние данные,о содержаний глгасопротегыювых компонентов в сперме быков в зависимости от .микробного.числа приведены в таблице 3.

Мате риалы таблицы 3 позволяют судить о тенденции ума ныне пил количества гексоз на 0,5 мг£, гексозпмииа (на 4,6 кг'-,), £укот»н (на 1,9 miíÍ) и с пало ро ti кислоты (на 1,2 ,у~-о при пеона-ш-

Таблица 3

Гликопротеин спермы быков в эависшости-от шкробной ' . ' контаминации (п = 80)

число гексозы гексозанш фукоза сиаловая: кислота

0 19,"0±1.3 34,6±2,7 . 8,210,9 ; 9,7±0,91

103 18,5±1,6 28±2,5 6,310,6 8,5*0,92 ■

362 18.0Ц.7 24±2,7 4,5^0,4 6,710,7

2000 ' 20+2,9 3,510,45 Б^О.б!

тельном поьшизнии микробного числа в сперме. Дальнейшее повышение ■' инкройного числа увеличивает тенденцию понижения гексоз в глико-■ протеине снерми (до'1,2 иг*) и генсозаыкна (до 10 ш*«). В даль— Нвйшеи количество гексозаиина продолжает уменьшаться (Р < 0,01),. Уровень фукози а опаловой кислоты снижается, при повышении микробного числа в 1,8; 2,3 н 1,4; 1,9 раз, соответственно, Ыы свя-' вывеем механизм этих изменений с екяивноетью микробных гликозцдаз,

3.3, Секреты гииетолиев коров *

5.3.1. Углеводно-белковый состав секретов половых путей

В период течки происходит иаькнение рН (от 7,3 до 7,9); адкжгропршодности (от £¿-14 до 6-7 шло), удельного веса (1,004-.

В состав глшшпротеинов цервикальной слизи входит 26 , ■ гексоэ, 25 г^ гексованина, 4,5 Г^ $укозы и 12 Г* сиаловой кис-'"лаги, 'ср1Вивтельное исследование отог» содеркимого в процессе ■ ' ■■■

врремаюности показало аналогичную картину, за исключением сиало-■ ЯоВкк слоты, котероЗ было на-6 мг^ больше в слизистой пробке ■; ¿еге»й1«и>ети. Сходные лгишие бши порчены'г Других ис" ледова- ■

вяях (В.Будцеше. 1%Э). Расчетный молекулярный sec гликопротеи-ка составляет 1,4-10^- Соотношение манпозн и галактозы в глико-вротевне было 5:4- ■ ,

Аминокислотный' состав .гликопротеина цервииальной слизи включает в себя следующие аминокислоты (г£):алшшн - 9,9; аспа-рагиновая кислота 6,0; глютамшгавая кислота - 7,7; глицин - 7,1; изолейцин - 1,5; лейцин —-3,9; фенилаланян - 2,6; про лип - 14,7; серии - 13,1; треонин - 22,4; валин ~ 5,9; арганан - з,5; лизин - ■

' Присоединение углеводов к полшептидшш цепям осуществляется чаще всего через серия, треонин й оспарагшовую'кислоту (Е.Будден-ке, 1969), " ; • . . .

Секреты эндометрия, как правило, прозрачны, более разжижены. Во время охоты они водянисты, с сероватым оттенком, удается отсасывать 1-Ю мл секрета. К 10 дню послеовуляционного периода секрет становится тягучим, мутным; желтоватым (1-3 мл). Через 17 дней в вязкой слизи обнаруживали <5олшое количество ядерных эпителиальных клеток. . .

'Секрет яйцепроводов в период охогн прозрачен (0,2-0,5 мл). Тглеводяна состав гликопротеина секретов эндометрия и аидосаль-пингса в период охотн приведен в таблипе 4,

. _ . . Таблица 4 "

углеводный состав гликопротеинов секретов эндометрия . и лПиепровода (г£)

Секрет ' Гексоэы Гексозпмвя фукоэа СиалоЕая кислота

Эндометрия Яйцепровода 15 8 26 26,5 2,5 1,5 6 4

. Отличие цервикальнов слизи ох глшсопротеияavcoсто ira в уменьшенном количестве гексоз (в 1,7 раза), фукозы (в 1,8 раз) и сиа-ловоа кислоты (в 2 раза). В секретах матки и яйцепровода количество гексозашша остается неизменным,

Uu связываем неизменность гексозамина с тем, что он является более прочный эвеном, связыващим другие углеводы о белком.

■ Количество гексоз, фуиозы и сиаловой кислоты в яйцепроводе уменьшается по сравнению с секретом эндометрия в 1,5-1,9 раз. Наличие достаточного количества фукозы и сиалово й кислоты в ооста-- ве гликопротеина обусловливает наряду с другими факторами защитные свойства секрета. При исследовании ферментов в секретах гннеталиев во время течки при флюктуирующем фолликуле они не обнаруживаются в содержимом влагалища, В шеечном секрете определяется незначительная активность (6,5 ед.) бета-ыейраминидазы. в секрете эндометрия бета-галактоэвдаза начинает проявлять активность (23 мкгф), а бета-неДраминидаза свою активность усиливает » (52,9 ед.). В содержимом я йцз про водов активность бета-галактози-дазы.(45 мкгф) и Сета-нейраминидазы (92,6 ед.) продолжает увеличиваться.

Следовательно, в основе механизма изменения количественных показателей гликанов гликопротеина в секретах гинеталиев во время течхи является ферментативный процесс. •

Активность бета-гдшуронидазы во время течки зависит от состояния фолликула (таблица 5). ■ *.

Активность 4ермента возрастает во всех участках репродук-' тхвыых путей, в зависимости от развития фолликула до слабофлш-гувруицего состоянии! (в 1,5 раза во влагалищном содержимом,' » 11«9 раз в иеечнои секрете, в 3,7 раза в секрете тела и рогов к t 2 раза в сод.ершаюм ягиепровода). Приближение конца течки,

Таблкда 5

Активность бета-глюкуронидазы секретов гинеталиев коров в зависимости от состоя! ия 4юллмкула (22 коровы) '

Состояние фолликула Активность бете-глюкуронвдазы секретов (МКГФФ)

влагалища шейки матки рогов и тела яГ!пепро~ ■ матки водов '

Упругий 60 ■ 72 30 60

Слабофлвктуируиций 88 854 112 120 .

Сильнофлюктуирувщнй 32 86- 17 30

соответствующее сильнофлюктуирующему фолликулу, вновь снижает активность бета-глюкуронидазы в содержимом гинеталиев коров (в 2,7-ю раз).

Аналогичным закономерностям подвержена и активность гиалуро-надазы цервикальной слизи в период течки. Добавление спермы увеличивает ее активность.

По мере роста фолликула в фолликулярной жидкости активность нейраминидазы увеличивалась от 13 до 110 ед. В содержимом яйле-провода этот пока^те^ь снижался от 90 ед. сразу после овуляции до 5 через В часов после овуляции.

Механизм изменений исследованных ферментов зависел от гормонального влияния, Количество ФСГ в крови коровы через 6 ч от

• - .

начала охоты было 11,5 мт; ЛГ - 28,I мкг/100 мл, через 12 ч -10,5 мг и 25 мкг/100 мл, через 24 ч - 8,3 мг и 12,1 икг/100 мл и через 36 ч- - 6,5 мг и 48 мкг/ДЮ мл, соответственно.

Окружающая среда оказывает не посре дет те ико е воздействие на организм животного. Данные распределения компонентов гликопро-теина в секрете шейки матки пршедены в таблице 6,

'Таблица 6

Глккопротеин иервикальной слизи 'у' коров в зависимости .' от времени годя

Гексози Гексозамин Фукоза Свяловая

кислота

__• . , '___

Январь ' ■ 26*2,0 25*2,1 4,5*0.2 12+0.51

ЗРевраль 22.2*2,0 24,6*2,1 4,8*0,21 12.5*0,5

2Ь.5±2,1 25*2,12 3,8*0,15 11*0,52

Апрель 25*2,I 24,2*2,1 3,0*0,12. 8,5*0,15

На И 24,5*2,13 25*1'Л 2 . 2,8*0.11 8*0.17

Итяь 25*2;I 25,5*2:И 2.6*0,75 6,5*0.18

Ишь ,26*2,0 3,5*0,14 9*0,49

Август 25,5*2.14 25;4+2.0 4.0*0.12 11,5*0,52

Сентябрь '26±2*,1 ' 25;г±2;1г 4,5*0,2 12*0,51

Октябрь 26±2;х 25*2112 . 12.1*0,50

Ноябрь- 2в+г;о 25|5±2';14 12*0,51*

Декабрь ?С,2±2,0 -25*2; г "4,5*0,2 ■ "12.2*0.51

В мае-июне, то есть яо'Врэмя смены стойлового периода на пастбищный, количество "фукозы снижалось по сравнения с январем-февралем на 1,7-2,2 г* (Р^ 0,01), сяаловой кислоты - на 4-6 гЛ (?< 0,001).

Лот период'оовпадал о массов.ыми перэгулями коров. Спите>шз полноценности углеводно-белкового комплекса цервикалытй слиз;; в этот период при добавлении еяермн быка подтверждено тестом с уксусной кислотоя.

Количествсиное сопоставление углеводных компонентов гляко-протеина маточных сегр^тоя после инъекций прогестерона,. вначале вастбгашюго периода представлено в, таблдце 7.

Таблица 7 -

Гликопротеин маточных вццзлений в зависимости от инъекций прогестерона

группы животных ■— - ------------..1,1 .——- —

гексоэы гексозамин Фукоза сиадовая

, ■ „ _-, , . , кислота

Вводили прогестерон

(5 иньекций по 50мг) 2.5*2,0 25*2,1 4,5*0,2. 12*0,61. Без прогестерона 1, 25,5*2,14 2,6*0,75 6,5*0,18

В начале пастбищного периода у коров иаблвдает са повышение количества фукозц (Р 0,001) и сиаловоц кислоты (Р < 0,001) в составе гликопротеина маточных выделений, если ш инъецировали прогестерон. ■ т .

По-видимому, восстановление нормальной структуры глинонро-.теина в присутствия экзогенного прогестерона происходит па фоне дефицита лютеинизирующего гормона у коров.

З.Э.2. Взаимодействие снермиев с секстами гинеталиев

коров

с

Выявлена зависимость скорости проникновения снермиев ь нер- ' вокальную слизь от фазы течки. Вначале.ее спермин быстрее проникают через границу раздела.

■ Вместе* с тем,.продвижение спермиев после однократного осеменения ограничивалось цервикалышм каналом, телом и рогами матки череэ^бО мин после искусственного шш естественного осеменения. сяермии достигали яйцеароводо'в только после двух- ш трехкратного естественного осеменения независимо от .времени течки. Двух-, трехкратное искусственное осеменение не пригодит к адекватно» реакции. Ш объясняем это повышенным травматизмом эндоцервик-

са, при искусственном осеменении, сопровождаемым точечной и

полостатой гиперемией, особенно в начале течкя и болезненнамн

отупениями,, которые нейтрализует "окситоциновнй" рефлекс.

Данные об изменении площади эозин сдобных головок спермиев .

после о се нения коров представлены в таблице 8»

:, Таблица 8

Площадь головки спермиев быка, взятых из различных участков половых путей после осеменения коров

Место взятия Площадь головки терния (кв.мкм) через (ч ) .спермиев .......после осеменении •

' _О 4 6_8.....

Спермя 39,5*0,38 39,3*0,39 39,2*0,20 39,5*0,39

Влагалище - 43,08*0,33 - 44,66*0,26

Катка: " -в

шейка , - . 39,96+0,16 - 40,76^0,39

тело. * . . 39,04*0,24 39,2040,17

рога - ..39,44*0,16 - 38,84*0,26

Яйцепроподы - 33,44*0,21 £8,52*0,59 41,12*0,55

Размеры голорок спермвев увеличивались при(инкубации во влагалище коровы уже через 4 ч (Р< 0,05), как и в шейке матки (Р < о;05). Изменении линейных параметров головок спермиов, извлечет! нх из тела матки, не наблюдали. Половив клетки, взятые из

о

рогов матки через 8 ч после парацервикальнбго- осеменения, имелг. меньшую площадь по сравнению с исходным материалом (Р< 0,05). При ппутриматочном осемеиении коров эта величина уменьшилась ум через 4 и 6 ч (Р< 0,05). /

Уменьшенная шють головок сохранялась в яйценроводах в течение 6 ч ; через 8 ч этот показатель увеличивался (Р< 0,Сб), что, верэлтно, снязано с проиессамк'разрушеппя спермиев. Увеличе-

uze размеров спермиев при длительном нахождении их (11-26 ч) в соловых путях крольчих подтверждают другие исследователи (B.C. Осадчук, Р.В.ОйваДЕс. А-В.Вронская, 1977).

Уменьшение площади головок зозинофобных спермиев мы связываем с ферментативными процессами, споообствуацими подготовке спермиев к оплодотворении. .

3.4. Повышение репродуктивной функции животных

* З.4.Х. Выбор времени и осеменение коров

fim обследовании 120 коров в фазе течка, сопряженной с охотой, только у £5 (54$) из них диагностировали ригидность матки; церви-

кальвая слазь при этом была "пузырчатой". В период проявления

ij-

"рефлекса неподвижности"/животных обнаруживали различное состояние фолликула (таблица 9).

Таблица 9

Состояние фолликулов у коров в охоте при ректальной о

пальпации KMi/Wft

Состояние фолликула ■■ -... ДййР.ШЙ..

___чсюдо ■ %

Твердый ; 59- 17,7*5,1

Упругий,.' 62 20*6,OB

Ыиэктуирувдиа ■ I4S 46,7*4,12

Овулировавший 49 15,7±бД9

Отметим, что из 49 коров, у которых несмотря на яркопроявляю-ишеся признаки охоты произошла овуляция, у 46,7$ яичников прощупывалось небольшое углубление; у 24,5^ эта ямка казалась заполненной На одну треть у 1В,- наравне с краями яичника и у 6;( -не пальпировали.выраженной кратерности..Анализ 395 овуляций до* каэйл, количество огулироваших в период охоты фолликулов

*

варьирует в пределах 12-17$ в различных хозяйствах, Шесте о тем, у коров, у которых.охоту выявляли быки, количество овуляреванших фолликулов было меньше - 7-10#.

Колнество овуляций варьировало в зависимости от состояния фолликула. Однако'ни в одном варианте черев 24 ч после пальпации не происходило 100^-ной овуляции,

Спермии, введенные в краниальный участок рога матки в дозе от 0,1 до 1,0 мл практически не'влияли на слизистые образования катки. Увеличение дозы до 2-3,5 мл вызывало явления локального эндометрита. Количество эозинофобных форм спермиев в цервикаль- ■ ном канале через 10-14 ч после осеменения достигало 10^, в теле матки этот показатель варьировал от 4 до ЗС#, рогах - 20-48,?, яйцепроводе - 27-53Й,

Доставка спермиев в яйцепровоя через 1-3 ч. после осеменения в краниальный участок рога матки выглядела следующим образом (таблица 10). ,

' Таблица 10

Проникновение спермиев в яйцепровод через 1-3 Ч после внутриматочного осеменения коров

Место введения сперм»

Число коров

&оза (мл)

Спеи-шев в участке я^цепровода

каудаль- яраяи- Еоего

ном средием яльнпм всча-ч

алЬНОМ

В краниальный участок рога матки

Ю 10 3

2** 0,2

71

В цервикалмша канал

э 614 139'

10 0,5 . 99

7 10 ' 0,6 0,7 ш

9 . 0,8 215

8 0,9 155

10 1.0 . 97

10 1,5 108

ю 2,0 . 207

. 9 2,5 198

10 3,0 152

10 3,5 09

10 I 47

18 195 112 44

100

15а

105

2X0

203

150 1Ю

202 173 Ш 25

70 201

Щ 310

130 550

151 402

170 313

99 310

50 400

130 450

85 490

205 505

150 408

200 510

85 4Ш

195 520

100 312

13 85

- 31 -

Средидо результаты, приведенные в таблице 10, позволяш говорить о воэаошоств смшеная осеменптельной дозы при введении спермы в краниальный участок рога матки, например, до 0,3 мл, при увеличении числа спермиев, достигающих яйцепровода, до сравнении с цервякальным осеменением..^

Осеменение коровы в краниальный участок рога матки можно

проводить без введения конца осеменительноа пипетки в этот участок.

>

Регуляция места введения может .осуществляться интенсивностью ш-стилляшщ спермы при краниоцервикальном расположении конца-о семените дьного инструмента.

Искусственное осеменение 233 коров.в послеовуляыионнн й период показало преимущество внутриыаточного введения спермы (таблица Ц),

Таблица И

Стельность после осеменения коров в постовуляпионном периоде

Цесто введения Число Стельных

спермы осеменений число %

Рог матки:

краниально 75 55 7115,2

каудаяьно 78 52 67*6,5

Цервикальный канал ВО 20 £5±4,8

Внутриматочное осеменение при умеренной инсталляции спермы и одновременном распрямлении рога со сторонй овулировавшего фолли-

кула было предпочтительнее по сравнению с цервжальным осеменением (Р < 0,01).

Анализ.деятельности 21 осеменаторов ГорьковскоЙ области, использующих комбинированный способ осеменений 15054 коров (до овуляции - ректо-шрвикальвое, после овуляции - впутриматочиое осеменение), показал эффективность его. Выход телят при этом

' - 32 - '

увеличился до 1Щ£, что било вше на 1<а% по сравнению с ректо-цермшальным осеменением. Индекс оплодотворений снизился в 1,75 ряз и бил равен 1,8. ' .

3.4.2. Снижение1 микроброгр числа яри омаиваняа необдицованных гранул спермц

Одним из недостатков способа сохранения сперма в форме необ-лицованних гранул, является незапущенность их от микробного загрязнения даже при иополъэо ваши асептических методов взятия и разбавления. Экспериментально доказана,_что основная маоса микроорганизмов располагается по периферии гранулы.

Наиболее приемлемым вариантом оттаивания необишцоваянкх гранул является трехступенчатый способ. При этом гранулу, извлеченную из жидкого азота, погружают в 3 емкооти (по I ид й.К-вдго раствора лимоннокислого натрия, подогретого да 4Q°Q) последовательно на 2 с, lone третьей еш(ооти производится дотаивание спермы. Микробное чио-Щ» ври-в ? рад баз заметного уменьшения количества портупателтд подвижных спермвев в дозе. В ряде случаев удается получать беэмикробну® сперму.

Выбор оптимального способа искусственного осеменения коров позволяет профллактировать введение микробов в Половые пути о осеменительным инструментом. Использование одноразовых_инструментов в э-jom отношении эффективнее в 6,5 раз; а использование к япм одноразовой упаковки позволяет проводить асептическое осеменение животных.

3.4.3. воздействие на коров в послеосеменителышй период

Выдергиванием коров в стойлах в Начато пастбищного периода в совхозе "Оэрмовский пролетарий" Горы'.овской области в 1973 голу или.инъекциями прогестерона после осеменения удалось добиться повышения количества стельных, животных (таблица 12).

Таблица 12

Влияние иа стельность спокойной обстановки или инъекций прогестерона коровам в послеосеменвтелышй период'

Группы жи- Воздействие Выдержаны в сцокоа- Инъекция 50 ыг вот щи после осеме- вой обстановке - прогестерона -

(дней) ЧИСЛО когов стельных т ЧИСЛО коро^ стельных

Опытные 0 70 65*5,4 12 75*12,6

7 85 74*4,7 16 62*12.1

19 80 67*5,2 . 18 66*11. а^

29 75 86*4,0 . 17 88*7,9

контроль- 0-35 67 ' 79*4,9 - ■

Без выдержи- 95. 55*5,1 93

ная вания и 55*5,16

инъекций

Во всех группах животных, кроме выдерживания коров сразу ш •через 19 дней после осеменения, была получена разница в пользу послеосемевдтельного выдерживания животных в спокойной обстановке, через 7, 29 дней (по 5 дней; Р< 0,001, Р < 0,05) и в течение 05 дней посла осеменения (Р< 0,01),

Инъекции прогестерона повшаж процент стельных коров, когда их используют через 29 дней после осеменения животных. Эхо время соответствует периоду алаценташш. Эффективность использования прогестерона, в послеосеменительном периоде подтверждена и в других исследованиях (В.Г.Гугле, С.А.Сргш, Г.И.Судаков и др., 1366),

3.4.4. Разработка метода замораживания сперлы быков в полистироловых пипетках

Нами было установлено, что сперму быков, замороженную в пипетках из полистирола, можно сохранять при температурах минус 79°С и минус 196°С. При активности 3,5-5 баллов коэффица-

ент живучести ( ) бил равен 9-10. Наивысший показатель ( -5<«.-13), был получен в образцах, где сперлу расфасовывали в пи-петхи и охлаждали до минус 196°с над жидким азотом.' с целью расфасовки спермы в полистироловые п*шетки*3кя использован вакуумный способ, разработанный нами оошостно с И.Х.Хабибуялиякм в 1965 году. ° •

В качестве материала дад упаковки пипеток использовали полиэтилен высокого давления марки ПЭ500,. не стабилизированный, гранулированный, о индексом расплава 7-Ю г (Ю мин). При изготовлении комбинированного материала использовали дублирующий агрегат. Расплав полиэтилена при.й70-500оС накладпвзли «а крв$т-бутгу.. Адгезионная прочность соединения бумага-полиэтилен составляла 600800 г/см..Автоклавированпый материал позволял сохранять пипетки со спермой от момента "эквилибрацпи* спериц до осеменения коровы в стерильпом состоянии.

Результаты опытов по осеменения Коров, в зоне деятельности Волгоградскол станции искусственного осеменения сельскохозяйственных животных, представлены в таблице 13.

, ■ Таблица 13

Стельность в зависимости от способа сохранения спермы и.осеменения коров

Способ хранения спермы Метод осеменения Число . осеменений Стельных {%)

Во флаконах при 0°С Визо-цервикальный 97 65,9*4,7

; ректо-цервикалькый . 91 ' 71,4*4,7

В ампулах При -79°С Визо-цервпкальный 1X5 60,8*4.4

Ректо-цервикальный 76 69,7*5.0

В по листи роловнх0 пипетках при -79 С Рект о-церв икал ыш й 85 .72,9*4,7

Предпочтительнее выгдшшт ректо-цервшсалышй способ осеменения коров независимо от способа хранения елерш при некотором преимуществе сохранения спермы в полистироловых пипетках.

Оплодотворяющая способность спермы, сохраненной в одном из первых отечествешых сосудов Дьюара (СД-65) испытанных нами при температуре -196°С, показана в таблице 14.

■ ■ ■ Таблица 14

Стельность в зависимости .от способа' хранения спермы и осеменения коров

Способ хранения спермы ■ метод' осеменения Число осеменения Стальных.

Во флаконах при 0°С Визо-цервикалышй 669 52±2,1

В ампулах при -196°С Ввэо-це рвикаль ни Д 46В 4912,5

В полистироловнх пипетках при -1366с Рект о-це рвикальный * * 141 б4±4,I

Полученная разница,(Р<; 0,01) подтвердила целесообразность замораживания спермы в пластмассовых пипетках и использование их для осеменения коров*

В послздуздих работах (В.Ф.ТурОин, 1567; А.П.Песковатсков, 1968) аффект использования этого те то да был'подтвержден. Дальне й-шее замораживание спермы продолжилось именно в этом направлении (ИДЛабибуллин, Л.Г.Каримова, В.Е.Киселев', 1977 а др.).

3.4*5. Использование замороженной спермы быков в международном обмене и мясном скотоводстве

С целью выполнения заявок на сперму.быков-производителей, находящихся в разных регионах нашей страны, в 1964 году била разработана специальная технология заготовки в зависимости от удаленности* места заготовки от ЦС110. Были использованы способы '

■ -36 -

одномоментного и двухступенчатого разбавления спе|9лы. Время, предшествущеа второму-разбавлению глипериниэирующей средой, использовали для доставки спермы из хозяйства, а пермбд "эквялибра-ции" - для транспортировки ее на ЦСШ, где производили замораживание о последующей отправкой в страну-заявитель. Первые данные о рождении от экспортированной сперма 14 аелят были получены из Болгарии,

Вдесте с тем, при осеменении.294 коров в Волгоградской области импортированной из стран-членов СЭВ спермой было получено -от 53,5 до 7Э,6у£ оплодотворений.

Разработка системы централизованной заготовки спермы мясных быков (совместно с Д.Н.Гороховым и ф.И.Злочевеким, 1957) позволила оперативно заготовить 94 тысячи доз гранулированной сперты от 19 быков. Специализированные группы в течение 65 дней произвели осеменение 6558 коров л телок в откормочных совхозах Ставропольского края. Стельными оказались 72,з£, индекс оплодотворения - 3,3. ' .

3.4.6. Разработка синтетических сред, применяемых для замораживания спермы быка ■

В синтетических средах, в которых использованы солевой и неэлектролитвые компоненты, не был учтеп оптимальный подбор этих' веществ. Влияние этого фактора на сперму было очевидным (таблица 15). ■ . - , . •

В сравнительном аспекте (таблица 15) только гликокол, за пределами оптимального соотношения с цитратом натрия, не сникал резко живучести спермы. ;

Среды о оптимальным набором компонентов млели следующий 00став: 0,74 г гликокола с 3,36 г цитрата натрия; 3,45 г сахарозы с 3,36 г цитрата натрия; 0,9 г глюкозы о 3,78 г цитрата

Таблица 15.

Относительный показатель живучести (5 •£) при различной

соотношении компонентов

Объемный

Щ^кис- 100 90 ео 70 60 50 40 30 20

лого натрия

Объемный

процент

несолевого

компонента

<0,4Ул1)

О Ю 20 30 40 50 ео 70 80 90 100

Глюкоза 1,0 0,9 0,8 0,8 0,7 0,7 0,7 0,1 0,1 0,04

Сахароза 1,0 1,1 1,2 1,1 0,9 0,1 0,1 0,1 0,03 0,03 0,01

Лактоза 1,0 1,1 1,0 0,9 0,6 0,8 0,3 0,2 0,1 0,05 0,001

Гликокол 1,0 1,3 1,6 1,2 1,2 1,1 1,05 1,0 1,0 0,9 0,4

натрия; 1,72 г лактозы с 3,78 г цитрата натрия. Общими для этих ооотношений были; вода дистиллированная - 100 мл, желток куриного яйца - 20 ил, глицерин - 10 ыл.

Использование синтетических сред с глюкозой и гликоколом позволило снизить количество подвижных спермнев в о семените л ьной дозе до ХО млн без снижения-шиюдотворяадей способности спермы (62-67$) по сравнению о дозами, содержавшими 50 мдн спермиев (63-68Я).

В дальнейшем эта корректировка была подтверждена и отражена в инструкции, .'.'"'■■'."

3.6.7. Сохранение спермы быка ц кобеля при 2-4°С

Применяемая глюкоэо-цитратная среда включает изотоничные растворы лимоннокислого натрия (50#) и глюкозы (50*) без учета оптимального сочетания их.

В 1969-70 гг. при использовании метода встречных.рядов.был разработан оптимальный вариант соотношения глюкозы (10,2) с ли-

монвокислым натрием (90#). При этом повышались количество эози-нофобных форм спермиев (на 13,3Í), коэффициент устойчивости спермиев * температурному шоку (на 0,15) я уменьшалось количество патологических форм спермиев. Эта среда вмела следующий состав: веда дистиллированная - 100 мл, глюкоза - 0,6 г, цитрат натрия -2,52 г, желток - 20 мл, пенициллин - 50 тыс.ед,, стрептомицин -50 тыс.ед., стрептоцид - 0,12 г.

В совхозе "Сормовский пролетарий" Горьковекоя области провели осеменение 430 коров сперт®, разйявдинтШ это! ередоя. Сшкг- " дотворяемость коров пюип» нгапмгагашжшов eiDffjw,. сохраняемой гор- " вые два дня» была практически адекватной контролю (65^3,9 ir 60±4,1; 63^3,41 и 52*4,2). Использование спермы, разбавленной опытной средой, после трехсуточного хранения повышало процент стельности и 45i4,2, при Р< 0,05).

Дллтелъшэе сохранение спермой, разбавленной этой средой, физиологически евойете позволило использовать- ее в практике проведения лабораягоjra®-®рпетгатекяжс заияти2 с® студентами зсоюскикф-^юго в ватершпэгизто

Исследование шсцюк хяфх Ф$ивлшг3! сдаркя еобвлот npw разбавле—' нии их глижоз0'-питра»го»-иеаяочиев сред/уЦ. шжазало, что абсолютннй показатель пережлваемаетв «сержа имел наибольшие значения (15) при смешивании 90 объемных процентов 0,081.1 лимоннокислого натрия о 10 объемными процентами 0,331Д глюкозы. Среда имела следующий .состав: дистиллированная вода - 100 мл, глюкоза - 6 г, лимоннокислый натрий - 2,6( г, желток - 20 мл, пенициллин - 75 тыс.ед., стрептомицин - 75 тыс.ед. Активность в пределах 5-6 баллов сохранялась в течение 5 суток. Потеря подвижности наступала через 12-15 суток (при 2-4°С). Осеменение 12 сук с интервалом между осеменениями 48 ч позволило получить 100Й щенений с выходом в

- 39 -

каждом помете по 3-5 здоровых ценит.

Собаковода заинтересованы.в вязке сук с ценными кобелями, которые часто находятся в другом регионе, что создает естественные неудобства. Способ разбавления спермы кобеля разработанной нами средой позволяет доставлять ее в об&гчиш лицевом термосе с тающим льдпм ш «а«ге bus <с асурьераи» решает дудий ряд неудобств я создает все «заестаме щрейчуцвеягва» юдарив ¡присзтои лекусетьен-даыу сюетшшвш шеред «гагееявешиави

■А. В И В С Д U

1. Во шревая д^юдвиие*щд по ваиаду-врщщгаа ^хюёшшв. в лвер-мтв аакаП|ТД5ваю1дя мейцралшшв at востеаащю лсгтезггаг «ымш£! egno-полиоахард.од. В образования зпткх веществ утотвуачг имгсшдазт эпителиальных клеток «сюевак шшшдег придатка* ш соединительная ткань япидидимиса. Голокриновые клетки содержат большое количество нейтральных мукополисахарвдов. Площадь головок спермиев у быков и баранов по мере продвижения их по эпидидимису увеличивается.

2. Впервые предложена зональная классификация эпидпдиписа быка, основанная на величине диаметра канальцев, высоте и форме их просвета, клеточном составе эпителия и содержании и распределении в нем аминокислот.:

3. В семенниках и зпидидимисе у быков содержися серомукоид я гликопротеин, в состав которого входят гексозы, гекоозаыин, Фукоза, сиаловая кислота. Гликопротеин распределяется по всей длине спермия. Секреты придаточных половых желез являытся основным источником пополнения гликопротеина плазмы спермы.

4. В сперму быков бета-галактозидаза и бета-глюкурокидаза поступают из зпщщдимиса и пузырьковидных железку баранов - из прнкатка семенника. В^сперме хряков была обнаружена только бета-

галактозидаза. В семенниках и их придатках у половозрелых кнвоткы^ проявляется высокая активность гсалуронидазм. <

5. После разбавления спермы лактозо-яелточно-глицерюювоЯ средой в процессе подготовка к замораживанию в слермиях быка происходит накопление гексоз, сиаловой кислоты и серомукоидов,

в то вреда как в сперм/дх барана повышается только количество сиаловой кислоты при одновременном уменьшении количества серомукойда. После замораживания и оттаивания в сперыиях быка количество этих соединений возвращается к исходному уровшз, а в спермкях барам количество их увеличивается. Уровень лкпокдного фосфора в слермиях быка и барана уменьшается <до ц я БОЙ соответственно).

с*

6. Количество гексоз глшо протеина зависит от степени микробной контаминации спермы. Особенно заметным было снижение уровня фукозы и опаловой кислоты при повышении микробного числа в сперле.

7. Секрета матки я яИдепроводов у коров содержат гликопро-теин, включающий четыре углеводных компонента и тринадцать аминокислот. Наиболее полно углеводные компоненты представлены в цер-викальном секрете. В количественном составе гликопротеинов секретов шейки, рогов матки и яЯнепроводов неизменным остается только гексозамин. • ■■■■'*

■ 8. Основой механизма изменений количественных показателей гликанов гликопроТеина секретов гинеталкев коров во время течки является активность ферментов, в честности, бета-галактозвдазк, бета-нейрэминидазы, бета-глюкуронидазы и гиалуронидазы.

9; Состав глзжопротеина цервикальной слизи у коров претерпевает заметные изменения в, начале иастбишого периода (май-июнь).^ это время в цервнкальном секрете уменьшается количество Фукозы и сиаловой кислоты, что совпадает с кассовыми перегудами

коров. Изменение количества олнгосахарвдов в глюсо протеине связано о присутствием прогестерона в организме shbothux.

Ю. Установлено уменьшение линейных. параметров головок спер* миев быка после извлечения их из рогов матки через 4-0 ч после осеменения коровы. Такая se закономерность имела место и в яйце-проводах, если спермиев извлекали через 6 ч после осеменения,

XI. Во.время охоты у коров в яичниках диагностируются твер-

- ■

дие, упругие и флижтуирувдле фолликулы различных размеров. В в то ate время у животных (7-15,W) пальпируются постовуляциошше изменения на месте овулировавиих фолликулов.

12. Введение спериы в краниальный участок рога матки позволяет снизать осеменительную дозу, при увеличении числа спермиев, достигающих яйцепровода по сравнению с цервикальным осеменением. Внутриматочное осеменение коров через 1-а ч после овуляции позволяет повысить стельность по Сравнению с цервикальным осеменением на 42-46^. Экономический.эффект при продуктивности 2900 кг молока на одну корову составляет 68 руб. Общая экономическая эффективность при производственно!! испытании составила 2844 тысяч рублей.

13. Впервые предложена технология замораживания спермы с использованием стерильных полистироловых штеток герметизирован-вых в одноразовые упаковки. Это позволило использовать их в качестве тары для хранения спермы и как осеменительныйннструмснт для асептического осеменения коров. Применение данной технологии позволило повысить эффективность осеменений коров.

. 14. Предложен метод оптимизации солевого и неалекхролитнош компонентов в синтетической среде с использованием компенси|юва-' лия гипотонизирующего действия глицерина на спермиев быка. Раз- . работапы рецепты синтетических сред для разбавления сперыы быка '

с использованием лимоннокислого натрия, глпкокола, глюкозы, сахарозы а лактозы, ,

15. РазраСотан способ сохранения cnept.ni кобеля при' 2-4°С. Сперма при атом сохраняет оплодотворятацую способность в течение 5 суток, что позволяет.транспортировать ее в любой регион страны и эффективно осуществлять желаемый подбор пар.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЩ!Л0£ЗЗЩМ

. I. При мор$юлогнческсм к гистохимическом исследования придатка семенника у быка рекомендовать использование зональной классификации этого органа, основанной на величине просвета й форме канальцев, клеточном состава эпителия, а такуе .содержания и распределения в нем аминокислот. *

2. С целью длительного сохранения физиологических спэйств спермы быка при 2-4°с. рекомендовать использование для разбавления свехевэятоД спермы .синтетической среды следуюце го состава: вода /шетвллированнея - 100 мл, глпгоза - 0,6 г, цитрат натрия.-2,52 г, желток - 20 мл, яенщглдин - 75 тыс.ед., стрептомицин -75 тне.ед.» стрептоцид - 0.12 г. Сперма, разбавленная этой средой, сохраняет высокую оплодотворяющую способность в течение трех су- . тол, * .

5. При использовании неэлектролитно-солевых сред для разбавления сперш быка перед заморатнвшием рекомендовать следующие составы: воды - 100 мл, желтка 20 мл, глщерииа Ю мл, 3,36 г, цитрата натрия с 0,74 г глккокола (или-3,'45 г сахарозы)} 3,78 г цитрата натргл с 1,72 г лактозы (или 0,9 г глюкозы). Использование этих сред позволяет продолжительное время сохранить- физиологические свойства спермы.

Технология рэо^асовки, зачо гаж№ а щщ-спермы в полиоткроло-

вых палетках включена в "1!нструкцию по оргшшзации и технологии' работи станций по искусственному осеменения сельскохозяйственных животных (1368 г.) н "Инструкцию со искусственному осеменению коров и телок" (1569 г.).

. 4. Рекомендовать оттадвание необлицованных гранул спермы, трехступенчатым методом. Гранулу, извлеченную из жидкого азота, помещает последовательно на 2 с, 1с в емкости с цитратом натрия (40°с); в третьей емкости (флаконе, пробирке, ампуле) производится дотаивание спермы. Такой способ оттаивания позволяет уменьшить ■ количество сорбированных на поверхности гранул микробов в 7 раз. . ' *■-■■.

5. В начале пастбищного периода у коров рекомендовать пятикратное инъецирование 50 мг прогестерона в течение 5 днеЗ через 29 дней после осеменения, либо выдергивать их в стойловых условиях в течение Б дней через 7 пли 29 дней после осеменения. Это позволяет повысить количество стельных коров п увеличит экономическую эффективность осеменений. • ■ '*

6. с целью.оплодотворения коров в охоте, на яичнике которых пальпируется послеовуляшюиная яыка, рекомендовать осешвение ' животных в краниальный участок рога матки со стороны солировавшего фолликула. Осеменение ыокно проводить » при краьио-церви-кальноы положении конца осеыенительной пипетки, сочетая это с умеренной инсталляцией,спериы при распрямлении рога катки. Процент стельности при этом достигает 67-71 по сравнению с 25% при; цервккальном осеменении,

7. Для разбавления первых двух фракций сперла кобелей рекомендовать среду следующего состава; дистиллированная вода -

100 ми, глюкоза - 0,6 г, цитрат натрия - 2,61 г, желток - 20 мл, . сенацшшш и стрептомицин - по 75.тыс.ед. сперыа, разбавленная

atott средой, сохраняет ошшдотворягацую способность при 2-4 С в течение' 5 суток.

6. Основное содержание исследований опубликовано в следующих работах:

1. Успенский А.Н. Замораживание семени бака в полистироловых пипетках // Животноводство. - 1965.- J& 3. - С.74-75.

2. Успенский А.Н, Среда с гликоколом для разбавления семени быка перед заморагдЕШшем // Молочное и мясное скотоводство, -1965, - № 6. - С.59, ■ ■

3. Успенский А.Н, Режимы замораживания при различной расфасовке семени быка // Говорят молодые ученые: сб.научн.тр. - Т.2.-М.: Мосяовский рабочий..- 1966. - С-Х07-Ш.

4. Платов E.H., Успенский А.Н. сохранение функции сократительных алементов живчиков барана при высушивании семени // Доклада В АСХНРЛ. - 1967. i. С.35-37. , ■' ^ ' . ' . ' ■

5. Изучение эффективности различных методов замораживания ■ семени быков / Хабибуллин Х.Х.,- Успенский А.Н., Турбин Б.Ф., Песковатский А.П. // Животноводство. - 1968.,- JS 6. - с-76-77.

*' 6. Платов Е.М.,-Усиенский А.Н. Действие замораживания спермы на содержание фоофолипидов в сперматозоидах быка и барана // Доклады советских ученых ж П международному конгрессу по раэмнож, й иск.осем,с.-х.«рвотных, - М»: Колос, - 1968, - С.47-48.

7. Успенский А.Н. сиаловая кислота в слерме сельскохозяйственных жилотннх // Доклады советских ученых к П мегду народному конгрессу со размнох. и и cit. о сем. с.-х. жпвотннх. - П.: Колос. -1968, - С. 142-144. , '. : - : '

8. Успенский А.Н. Уровень нейраминовой кислоты при сохрсне-urji ccwmt —лво'гинх.// Гястник сельскохозяйственной науки. -i'fJ'.. - Г 10. - С.99-101. ■ ■ -

9. Ельчанинов В.( Баранов В'» Успенский А. Замороженная ■ сперма для осеменения мясных хоров // Полочное и мясное скотоводство. - 1969, - » 4. - С.25-26.

№. Успенский А.Н. Еиохшические показатели семени при замораживании // Овцеводство, - 1969. - № 9, - С-34-36.

П. Горохов Д.Н., Злочевский Ф.И,, успенский A.B. Организация искусственного осеменения семенем быков мясных пород // Животноводство. - 1969. - & №. - 0.73-80, -

12. Успенский А.Н. Исследование глюкуроновой кислоты и муко-протевдов семени барана в связи с глубоким замораживанием // Труди института / Горькозский сельскохозяйственный институт. - 1973. - . Т.51. - С.130-134.

13. Успенский А.Н,,' Тоыенков А.Г. Влияние условий рйслеосеме ни тельного периода на оплодотворяемость коров // Акушерство, гинекология, искусственное осеменение и болезни молочной железы; Сборник научных работ / Ленинградский ветеринарный институт. -Л., ЛВИ. - 1976. - С.324-025.

14. Успенский А.Н.,. Морозов Н.Л. Влиявие окружающей среды на воспроизводительную функцию коров //'Системно-экологический подход к современным проблемам сельского хозяйства и науки; Тезисы докладов на зональной научн.конференции, - Горький. - i960. -С.49-50. •

15. Разработка и внедрение мероприятий по профилактике и лечению незаразных заболеваний и бесплодия животных в молочных хозяйствах / ярушн ¿.Д., Зайцев-A.B., Лнгеев В.А., Успенский А.И. и др. // (рекомендации) ЫСХ РОФСР. Горьковский центр ВОЛГУ.-

' Горький, - 1981. - 67 с.

16. Успенский А.Н., ШлодюкА.В. Динамика уг лево до-бе лкових

' комплексов и качество спермы сельскохозяйственных животных // Ш-

тодн профилактика я лечения болезней сельскохозяйственных вшвот-них в условиях Нечерноземной зоны РСФСР. - Сб.па^чн.раб. /. Горь-ковский СШ. - Горький; ГСШ.' - ГЭВ2. - 0.17-23. "

17. Успенский Л.Н., Молодок A.B. Морфология впидидпмиса

бшся // Незаразные болезни сельскохозяйственных животных : рб.науч рвб. / Горькое ск и Я ССИ. - Горький: TCXII. - 1984. - C.II-I2.

18, Успенский А.Н. Глгаго протеиды и репродуктивная функция коров // Незаразные болезни сельскохозяйственных'вшвотлих; С<5. научн.раб. / Горьковскпй СХИ. - Горший: ГСХН. - 1984. - С.43-47.

J9, Успенский А.Н. О возможности искусственного осеменения коров .в условиях скотного' двора // Незаразные болезни сельскохозяйственных шаотных: Сб.научн.раб. / Горшовскиа СХИ. - Горький: ГСХИ. - I9C5. - С .7-10. :

20. Успенсйий А.Н. Ускоренное воспроизводство крупного рогатого скота как требование .времени // Зоотехнические" основы интенсификации киеотноводетва; Сб.научн.раб. / Горысовский CXII. -Горький: ГСХИ. - 1988, - С.24-35.

21. Успенский А.Н., Закаленкова З.П,,-Зверев В.В. Рекомендации о приемах повышения оплодотворяемвети коров при искусственном осеменении. Отделение ВАСХШ1Л по Нечерноземной зона РСФСР. ГСХИ. НПО "Ллшегородское". - Горький, 1989. - 16 с. .