Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Углеводно-белковые соединения и воспроизводительная функция животных

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Углеводно-белковые соединения и воспроизводительная функция животных"

ВСЕСОЮЗНЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЖИВОТНОВОДСТВА (ВИЖ)

На правах рукописи УСПЕНСКИЙ Александр Николаевич

УГЛЕВОДНО-БЕЛКОВЫЕ СОЕДИНЕНИЯ И ВОСПРОИЗВОДИТЕЛЬНАЯ ФУНКЦИЯ ЖИВОТНЫХ

03.00.13 — Физиология человека и животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

п. Дубровицы Московском обл., 1991 г.

Работа выполнена на кафедре акушерства и зоогигиены Нижегородского сельскохозяйственного института.

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук В. П. Кононов;

доктор биологических наук, профессор Ф. И. Осташко;

доктор биологических наук В. В. Жаркин.

Ведущее учреждение — Всероссийский паучно-псслсдова-тельский институт племенного дела.

в 10 часов, на заседании спет г. . . Д 020.16.02 во Всесоюзном научно-исследовательском институте животноводства.

Адрес института: 142012 Московская обл., Подольский р-он, п. Дубровицы.

Защита диссертации состоится <0.

Автореферат разослан

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат биологических наук И. И. Шмыгин.

• I. оми',;; :ш'А':тш!;яг-;л шли1

Актуальное1:.'!, у айн, В кошлеког лародноховянсгвешпа проблем траин одни:из гланню: стоит вопрос об обеспечении людей ютог-оводческой продукцией^ Основой роста производства продуктов яи-отногодстю является научно-технический прогресс. Интенсивное: азвитие животноводства немыслимо без достижения высокого уровня эспроизводства стада. В настоящее время наблюдается большое элпчество бесплодных коров, что приносит громадны"! экономический №рб.

Комплексность подхода к вопросу о воспроизводстве животных юддолагает наличие информации об особенностях формирования ермиев, сохранении их вне организма и в половых путях самок, ветские учение: И.И.Иванов, В.К.Милованов, И.Н.Соколовская, П.Шергин, М.П.Кузнецов, Х.Х.Хабибуллш, Е.П.Платов, Н.И.Серев, А.П.Студепцов, Д.Д.Логвинов, ф.И.Осташко, А.Л.Сысоев, С.Шипилов л др. внесли большой вклад в разработку вопросов зяолопш и практики воспроизведения животных. В свете сущест-эщих данных секреторная деятельность половых путей самцов и юк оказывает существенное влияние на процессы, связанные с ¡производительной функцией, хотя и не вполне выяснен механизм воздействия.

Углеводно-белковые соединения являются одним из компонентов ретов половых путей. Эти соединения выполняют жизненно вакные кцпи в процессах биологического развития и.узнавания, игрда:т ь антикоагуляторов, составных частей крови, вег,оств, яв.хя::-оя резервом онергип, а многие из них слул.ат такт.с и структур-матсрнаяоу,.

Однако нет сведений, каепкнпхея роли и мрхялирмп птих 1с.-"-!-юв, которую они осупест'-л'тг л шюносс он-.ц .•тг" м.....1 "

тыла!', взаимодействий си сиоршцлш при сохранении спермы вне организма и в половых путях самок после осеменения. Наличие отделы,их составляющих гллконротеинов во всех участках половых нуте л у половозрелых мтотиих предполагает непосредственное ыиынпе их па воспроизводительную функцию. Проведение исследований углеводно-белковых соединений в отдельных участках половых путец у самцов и самок во многом является проблематичным, как в теоретическом, так и в практическом плане. Поэтому возникает целесообразность решения этой проблемы и на основе ее - разработка практических пер, которые могут повысить оплодотворяеыость коров и экономический аффект осеменений .

Поль и аадачи исследований. Целью исследований била разработка методов повышения оплодотворяемости коров на основе глубокого теоретического изучения механизмов действия гликопротеинов в процессе формирования спермиев, разбавления, заморакиваиия и оттаивания спермы и контакта с секретами гшеталиев, а также совершенствование методов длительного сохранения спермы быков.

В соответствии с целью исследований были поставлены следующие задачи:

- вменить роль придатка семенника в формировании углеводно-оелкових соединении спермиев у быков;

- исследовать влияние глнкопротеинов в образовании спермы быка и на сохранение ее в глубокозашроженном состоянии;

- установить функциональное состояние гинеталиев у коров в перыд подготовки их к оплодотворению;

- исследовать гликопротеины половых путей у коров;

- установить влияние секретов половых путей самцов и самок ' на дднаийку линейных паранетров спермиев;

-- усогс-рйенствоьать метод глубокого замораживания спермы

быков;

- знпснпгъ влияние микробной контаминации на состав глчко-протешюв в сперме и оплодотворяя!,юсть коров;

- исследовать эффективность внутриматочного осеменения го ров в начале послеовуляш-онкого периода;

- изучить возможность воздействия прогестерона на корон г, . послеосегенительном периода,

Научная новизна исследовали:*!. 3 результате исследован;:' впервые выявлена закономерность распределения всссств угле»'.';:««?--белковой природа в придатке секелплка и придаточных половнх железах у быка, установлен механизм включения гликопрогеинов в состав сперла и спермиев.

Получены новые данные о роли отдельных компонентов глнкопро-геппа при разбавлении, закорсшшаюш и оттандеяяа cnept.ni бшся, 5 арап а и хряка.

Выявлены принципиально новые закономерности влияния глпг.о-1ротеинов на воспроизводительную функции коров.

На основе исследования углеводно-белковых соединении, ами-юкислотного и клеточного состава, разработана схема зональной сласспфикацин зпидвдгаиса быка.

На базе выявленных физиологических особенностей распределения компонентов гликопротеина секретов гинеталиев и продвижения :пермиев после осеменения, разработан метод внутриматочного 'секенения коров в течение трех часов после овуляции.

Основные положения диссертации:

- в формировании иарузшк образований сперши в придатке еменнпка значительная роль пр:ш!>Угзс::«т гликопрогешюм; в сайрах этдаидгашса, пузврьковндннх, ир?дстпте.чыгоп, гуиерогли рзгралышх железах итнег место счеш-рнческо.; г.:г;;?;\с,ло,1:"

комионоитои, ч-ю и оооои«чш»шл' ьклшчмше их в состав сперш;

- углеподпац часть глшсощютониов спермы быков и цервикаль-ной слизи коров идентична; оодкоио-углеводнио соединения пшета-лиеи у коров являются оперативна!,I сродством реагирования на изменения физиологического состояния организма животного в связи с его репродуктивной функцией; на консистенцию цервикальной слизи влияет зкзо- и эндоглшсозидазц;

- в процессе разбавления, глубокого замораживания и оттаивания спермы быков, баранов и хряков проявляется специфичность реагирования углеводно-белковых соединений на вти процедуры, в связи с устойчивостью спермы к замораживанию; уменьшение количества гексоз и фукозы происходит при увеличении микробного числа в сдер-1.Ю быков;

- нормализация углеводного содержимого гдикопротешюв в матке у коров происходит при участии прогестерона, поэтому введение его^нослеовуляцнонный период повышает эффективность осеменений;

- у некоторых коров (7-15,7$) овуляция происходит синхронно с "рефлексом неподвижности", для успешного оплодотворения .таких ¡¿иьопшх следует вводить сперму в краниалышй участок рога матки со стороны овулпровавиего фолликула.

11олиг.ения диссертации научно обоснованы и подтверждены ре-зу^ьтаташ исследований придатка семенника, придаточных половых и^.ез, спермы в процессе технологической обработки при заморажи-ьашш, оттаивании,спермиев, находящихся в половых путях коров, свкрс'юь пшета-'щев ъагвотннх, данных об оилодотворяешсти, а так^е анализа при сопоставлении дачных отечественной и зарубек-литература.

Практическое значение работы. Результаты гистохимического нос;.!- .лганкя эви.-иуашиоа бива, «а основе которых предлояева зо-

нальная классификация этого органа, являются базой для проведения исследований в этом направлении.

Контроль состава углелодннх компонентов глт:опротеина сперми и секретов гинеталиев коров позволяет использовать высококачественную сперму в физиологически оптимальные срокп.

Усовершенствовании;: состав синтетической среди сохраняет полезные биологические свойства спермы бшеа и кобеля при 2-4°С в течение 3-5 суток. Зто позволяет осуществлять длительную транспортировку спермы для подбора пар в собаководстве и проведение лабораторных исследований сперян..

Предложенный метод замораживания спермы в одноразовых полистироловых шшетках позволил проводить асептическое осеменение коров в условиях производства и послужил основой для дальнейшей разработки способа замораживания спермы быка с использованием пластмассовых емкостей.

Технология трехступенчатого метода оттаивания спермы, замороженной в форме необлиц-овашшх гранул, способствует освобождению ее от микробов, сорбированных на поверхности гранулы в период заморахглвания и хранения, и использовать асептическую сперму. Первые опиты накопления и использования замороганкой спермы в практике отечественного мясного скотоводства явились основой для массового использования ее в производственных условиях.

Метод внутриматочного Осеменения коров, проявляющих охоту в послеовуляшонпш! период, позволяет получить 67-71^ оплодотворений у 7-15,% таких кивотнпх. Использование птего метода приводит к погашению выхода телят в среднем но ста"у на 5-12 я повшешш продукп'лпостя гясотювс за счет с:.ч'—>н;!н по г гот»

СОПЛОДИИ.

"::юсои пятиниес.:!^ .^.сн^егерсла ::л; выдергивания

:;оров через ¿3 дяец поело осекешшы начале яастошцного перио-/л ирауцдаглируея оиориоиглш» и поникли о сгсдиюсть до 33^.

:уэлчэшп»{ к«)учиих '»кмадотаиМ. Г;ссперкмаатальине данные и результат производственной проверки попользована при разработке ааучно-методичаских и нормативно-технических документов:

- зреыошше указания по низкотемпературному захораниванию

2 кщдам азоте егшрш быков, ее длительному хранению и использовании, /твер:/дс>}ш Глагны.1 управлением киъотноьодства 1.1СХ СССР 1266 г.;

- инструкция по организации и технологии работы станций по полуостведному осеменению сельскохозкШзтвешшх кивотных ИСХ ОХл 1366, Г-'-ЗЗ гг.;

- рекомендации. ю улучиениа воспроизводства стада, искус- ственного осеменения н внепрошш в производство научных достиже-

лиС в области физиологии рйышоггишщ сельскохозяйствзшшх еивот-:Шл, утверздени решением исполкома Горьковского областного Совета • ппродиих депутатов ыая 1975) г.;

- рекомендации по разработке и вдедренсю мероприятий по профилактике и лечения ьезар&зшх заболеваний и бесплодия ки-ьотних ь молочных хозяйствах, утверждены 1ГГС Горьковского филиала центры "РоссельхозНОПТУ" Ю карта 1981 г.;

- рекомендации о приемах повпиешщ одлодотворяемости коров лра :!скуссть-СЕ1!011 осеменении, угсарэдиш 'У™*'"-"

" " Лп гоб»1.чш н нуолп;;йц;'.я. Цагерииш диссертации долог.ены и одобрены на ежегодных научно-методических и отчетных конферен-ц::,;-; Есесоозиого НШ1 ^а-хотповодстга (3X64-1269 гг.), Горьковско-»'й скохоаяйствошюго института (1Ь70—1989 гг.).

- на Я шздушродшои конгрессе го розмношпго я искусственному осеменения яивотних - Тренго, 1967; Всесоюзных мевузовских научно-!,ютодических конференциях но екуиерсгву, гинекологии, искусственному осеменению и болезням тлочной яелеэн сельскохозяйственных животних - Ереван, 1970; Ленинград - I27G; зонатьной научной конференции по системно-экологическому подходу к современным проблемам сельского хозяйства и науки - Горький, 1980? ежегодных районных, мзграйошшх п областных семинарах, совещаниях и научно-практических конференциях в Горьковской области (19811989 гг.).

Предложенный вариант синтетических сред используется в практике проведения дабораторно-прэктлческих занятий 1П1Р и 7IÍP на зооинкенерпом и ветеринарном факультетах ГСХИ. Трехступенчатое оттаивание спермы использует в хозяйствах Горшзвской области.

Интргнаточное осем-эненкэ корон в нерп» часы послеовулянион-ного периода апробировано на 21 пункте по искусственному осеменению коров Горьковской области.

Основные положения диссертации опубликована в журналах "Еи-вотноводстго", "¡,'олочное и 1лясно» скотоводство", "Доклада ВАСХШЦГ, "Вестник сельскохозяйственно;! науки", трудах Горъковского СХИ и межвузовских сборниках научных работ. Всего по результатам исследований опубликовано 40 работ, в том числе по теме диссертации -31 работа.

Объем диссертационной ваботц- Рукопись изложена на 304 зтраницах машинописного текста, содержит 63 таблицы, 7 формул, ишзстрнрована I схемой, t'¿ рисунками. Список литературы гк-тлча-;т 455 наименований, в том числе 173 янострзште;. В нршютенлн i 3 страниц.

;.;. ШШШ1 II ¡.¡й 10,1:11 ШЦЩРВШЩ

Исследования ироьедшш в Юо4- 1С-1<Г; гиды в отделе Биологии воспроизведения Всесоюзного ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательского института кивотноводства, ЦСИО, Волгоградской станции искусственного осеменения, совхозах и,1.62 Армии, "Советская Россия" Еолгоградской области, "Горьковский", "Заку-банскнй", "Шиводскнё" Ставропольского края, "Зимовшшовский" Ростовской области, на кафедре шсуыерстьа и зоогигиены Горьковского сельскохозяйственного института, лаборатории морфологии Горьковского медицинского института, Горьковского мясокомбината $ I, Горьковском племоб¿единении, учхозе "Новинки", совхозе "Сормовский пролетарий" и других хозяйствах в зоне деятельности' Горьковского нлемобъеднненш. Общая схема основных исследований представлена.

Б 24 опытах били использованы 83 быка черно-пестрой, швиц-кой, симментальской, красной датской и красно-горбатовской пород, 9 баранов ропни-марл, вятской, ярославской и горьковской пород, 14 хряков крупной белой породы и 10004 коровы черно-пестрой, симментальской, мвицкоц, красной датской и красной горбачевской пород.

Х.ля опытов использовав клинически здоровых, нормально раз-ыи'ш. н.инотных. Группы кивотних формировали то принципу аналогов, с учетом возраста, физиологического состояния и продуктивности. Кормление «цветных осущг стьлялось в соответствии с нормами ВШа.

Ьзятпе спермы и обработки ее осуцествляли в соответствии с Vреоованнам инструкции по организации и технологии работы станций и предприятий но искусственному осеменению сельскохозяйсхвец-

¡г>цж еивот1шх.

Искусственное осеменение коров проводили в соотьотствии о

Схема и объем основных исследований

Г Воздействие углеводно-белковых "соединений на репродуктивной функцал крупного ) \_ рогатого скота__у

• Об'ьекты исследований: бшш, коровы, твлза _ ^

Придаток семенника и I придаточные половые железы

33

Сперма

i-.CC, аминокислоты, гликопротеины (80 препаратов от 10 быков) липе:1ные параметры спермиев (2Ь34 препаратов от 19 быков, 5 баранов, 7 хряков)

1.

Гшеталва

Гликопротеаны, глвку-роновая кислота, серо-мукоид, гиалурояццаза, фосйолилидн (520 проб от 24 быков, 4 Сарадоз 7 хрякоз)

Глнаэпротеина, глюкуронидаза, гадактозвдаза, яейраыинидаза, гиалуооапдаза, . лидеиные параметра а продвизениа спермиев (2900 препаратов от 50 коров)

\ Разработка" методов Сохранение спергдГ^"

Осеменение коров"")

I Модернизация 1 синтетической | среды и осеме-| пение С50 коров

Санация 12У проб замороженной спермы и осеменение 3421 коров

I

Заыоратавание с применением полистироловых пипеток и осеменение 1662 коров

А

йр-оейрла состояния шолланула и оСемене нее 2568 коров

1

Воздействиз в п о еле осе ма нательном периоде на 1453 коров

^Предложения для исподьзовакшГТ"производстве )

- Ю -

гребованиями действующей инструкции.

При гистохимических исследованиях придатка семенника у быка аминокислоты - тирозин, триптофан и гистидин выявляли по ыетоду Даниелн-Нпрса (Э.Пирс, 1962). Нейтральные ыукополисахарпды о предварительным контролем на специфичность окрашивания альдегидных групп по Кэйзон (А.П.Авцин, 1971)проводили по Шабадашу (Э.Пирс, 1962). Кислые ыукополисахариды выявляли по ыетоду Хейла, а такие методом окрашивания на альциановый синий по Таури и при низких значениях рН (А.П.Авцин, 1964).

При биохимическом исследовании зпидидиыиса, секретов придаточных половых желез, спермы быка, секретов гинеталиев определяли: гликопротеины сыворотки крови (0. Ц. Костюков скля, А.В.Жуков, X96J), содержание гексоз в гликопротеине (Х.Вейыер, Е.Шшин, 1952), гексозамин (Х.Зюдхов, ЦЛетрович, 1954), фукозу (З.Дише, Л.Шеттл, 1940), сиаловую кислоту (П.Бем в модификации Л.Свеннерхольыа, 1957), глькуроновую кислоту (В.С.Асатиани, 1965), серомукоид (Х.Вейыер, Ж.Мошин, 1952), бета-галактозидазу (В.С.Асатиани,1969), бета-глюкуронидазу (С.фишмен, в модификации Ц.Плейс, 1961), пшлуронидазу (И.И.Соколовская, 1957).

Оптимальное соотношение исследуемых компонентов при разработке рецептов синтетических сред для хранения спермы при 2-4°С, иииус 196°С находили методом встречных арифметических рядов (В.К.Милованов, 1962) с последующим уточнением биологическим уетодои по живучести спермиев.

Линейные измерения зозинофобных спермиев проводили в половых путях быков, сперме и гинегалиях коров через 2, 4, 6, 8 ч после исьменьлия. После внутриматочного осеменения коров в постовуля-ционнои периоде дозами от 0,1 до 3,5 мл спермы подсчет спермиев в раздшчьих участках яйцепровода производили в эктомированннх

терез 10-16 ч органах.

Контроль состояния гликопротеииов цервпкальной слизи коров доводили в соответствии с методом кафедры акушерства ТСХА (1987), им определения мукополисахарпдов, который бил нами модифигтро-ш (А.П.Успенский, 1973;,

Биометрическую обработку полученных данных проводили с ие-■ользоваштем ЗБИ "№-6000' .

Дшг расчеют экономического дефекта, получаемого от разрабо-анных способск, шгал&зовали метод А.СЛДитюкова и З.И.Эскелевой 1983).

3 . РЕЗУЛЬТАТЫ!; КСКЩОБЖШИ

3.1. ЗТлеводно-белковпе соединения эпидидпмиса л придаточных половых колез

3.1.1. Шрфология придатка семенника у бнкп

Изучение содержания и характера распределения тирозина, зиптофана п игстидапа в- эпителиальных клетеаж эшздидимпса бгаса, зюттра ЕанаяЕвгэ» велгпчши и формы; их просвета, танпотлого сосала сделало' воготжЕШ предложить зональную классификацию отого тала.

Головку придатка составляют выносящие канальцы, зона I, ПА, 1, Ш и часть зопц 1У. Тело органа заншают канальцы зонн 1У. ост придатка семенника состоит из зон У, У1 и УП-

Стенка вшосящих канальцев выстлана однослойным многорядным линдрическим мерцательным эпителием. Главными клеточными элентами его являются "основные" (клетки, в которых четко выявля-ся базальпнй полос, контактирующий с мембраной и аРикалышй, ходящий в просвет канальца), реснитчатые и базалыше. Просвет пальцев дистального отдела и высота эпителия, так ке кок л

секреция, меньше, чем в проксимальном отделе, цитоплазма содержи! умеренное и большое количество аминокислот. Среди реснитчатый цдеток встречаются бокаловидные и цилиндрические.

Зона I содержит клетки, большие по высоте, чем у дистально-го отдела выносящих канальцев "основные" клетки имеют цилиндрическую форму. Количество аминокислот среднее шш высокое. От апикальных концов "основных" клеток отходят средней величины стереоцшши. На базальной мембране лежат базальные клетки с округлыми ядрами.

Зона Ц. Просвет канальцев шире, чем в зоне I. Высота эпителия здесь более, чем в 2 раза. Зона ПА по сравнению с зоной ПБ характеризуется неровным просветом канальцев. Цитоплазма светлых "основных" клеток содеркит умеренное количество, темные основные клетки содержат большое количество тирозина, триптофана и гистидина.

Зона Ш. Эпителий канальцев здесь ниже предыдущей зоны. Ядра располагаются ниае средней оси клеток, но не прилегают к базальной мембране. Редко встречающиеся базальные клетки имеют ядра округлой или неправильной формы.

Зона ГУ. Канальцы имеют ровный просвет и выстланы однослойным высоким цилиндрическим многорддным эпителием, состоящим из "основных" и 2 типов базалышх клеток: одни имеют круглые ядра, тогда как ядра другого типа вытянуты вдоль базальной мембраны.

Зона У. Эпителий здесь ниге, чем в предыдущей зоне. Оодер-жатся "основные", "ореольше" и базальные клетки. От апикальных ' концов "основных" клеток отходят короткие стереоцшши. "Ореоль-ные" клетки имеют округлую форму и располагаются в базальной зона впителил. При окраске на аминокислоты содержимое клеток на препаратах выглядит оптически пустым. Вокруг ядер заметен тонкий

ободок цитоплазмы с умеренным содержанием белковых веществ. Назальные клетки не отличаются от базалышх клеток зоны 17.

Зона У1. На поперечном срезе канальцы тлеют более мощный мышечный слой, чем канальцы У зоны, и неровный просвет за счет разной высоты основных клеток. Характерной особенностью является неравномерное распределение аминокислот в цитоплазме "основных" клеток. Наибольшая активность имеет место в надъядерной зоне, умеренная - в апикальной зоне. Высокие "основные" клетки имеют повышенную активность аминокислот по сравнению с низкими. В области коротких стереоцшшй наблюдается темная полоса очень высокой активности аминокислот, окаймляющая просвет канальца. Ба-зальные клетки встречаются часто, их ядра крупнее ядер "ореоль-них" 1слеток, неправильной формы, бедны хроматином.

" Зона Ш. Канальцы окруяены мощным слоем мышечной ткани. Просвет канальцев неровный из-за разной внсоти "основных" клеток. Ядра "основных" клеток неправильной и четырехугольной формы, занимают центральную зону клеток. Базалыше метки расположены непрерывным слоем, их ядра неправильной бормы, светлые, с.умеренным содержанием хроматина. Цитоплазма базальных клеток бедна аминокислотами.

3.1.2. Муксподисахарпдц эшщкдиг.гаса

Выносящие канальцы проксимального отдела показывают значительное содержание ШК-лозитигаого материала. Базальные'мембраны канальцев представлены тончайанми гомогенными пластинками ярко-красного цвета. В подэпителкальной соединительной ткани контрастно выделяются извитые тонкие волокна, окраыенные в интенсивно красный цвет. Ядра всех видов клеток не дазст ШИК-положительного окрашивания. Характерной особенности: клеток этого

отдела является секреция по апокриновому типу. Гранулы секрета обладают высокой чувствительностью к перйодату. Цитоплазма реснитчатых и базалыщх клеток ШШ-негативна.

Эпителий вшюсяцих канальцев дистального отдела характеризуется более умеренным количеством нейтральных ыукополисахаридов, однако апикальные концы "основных" клеток показывают сильную периодатную активность. В надъядерных участках цитоплазмы "основных" клеток видны мелкие гранулы ШК-позитивного продукта. Цитоплазма эпителиальных клеток в очень малой степени связывает альциановый синий при рН 2,4. Секреторные гранулы не содержат кислых ыукополисахаридов, хотя ядра клеток, базальная мембрана и соединительная ткань содеркит АС-иатериал.

Стенка канальцев I зоны и цитоплазма эпителиальных клеток красятся в бледно-розовый цвет и содержат следы нейтральных ыукополисахаридов. Нежканальцевая Соединительная ткань содержит большое количество нейтральных и кислых ыукополисахаридов.

В эпителии канальцев зоны П отмечается увеличение нейтральных мухополисахарвдов. Спермин, расположенные в просвете канальцев, характеризуются высокой перйодат-реактивностыо. цитоплазма всех видов эпителиальных клеток канальцев отличается малым количеством кислых мукополисахаридов. Вместе с тем содержание кислых мукополисахарцдов в апикальных участках и стереоцшшях "основных" клеток, а так;/.е в спермиях остается на высоком уровне.

В стенке канальцев зоны Ш происходит дальнейшее накопление нейтральных мукополисахаридов. Голокриновые клетки ранних стадий развития содержат большое количество ШИК-позитивного материала. Спермин ярко скраыены в розовый цвет. Количество кислых мукопо- ■ дкеахкридоь в гоне и снижалось. Исключение составляли только уз-ккД ободок цитоплазмы "основных" клеток и стереоцклии. Количество

•- № -

кислых мукополисахаридоз в сперкиях резко снижается. Голокрипо-вне клетки их также не содержат. В соединительной ткани больше нейтральных, чем кислых мукополисахарпдов.

В эпителии канальцев 1У зоны наблюдается снижение содержания нейтральных мукополисахарпдов. В цитоплазме клеток содержание их высокое. В спермпях много нейтральны): п мало кислых мукополисахаридов.

В соединительной ткани, окрукшощей канальш, отмечается дольне Шее накопление нейтральных и кислых мукополисахаридов.

Начиная с зоны У в стенке канальцев вновь происходит накопление нейтральных мукополисахаридов, а количество кислых соединений снижается до следов (алыпюиовий синий рН 2.4 и Хейл-реакция) или до полного исчезновения (алъциановнй синий рН 0,5) в зоне ТО. Аналогичные данные получены и для спермков, в которых по мерэ продвижения к хвосту придатка семенника происходят увеличение нейтральных и исчезновение кислых мукополисахаридов. В соединительной ткани придатка семенника* наряду с накоплением нейтральных, усиливается окраска на кислые мукополисахаридн.

3.1.3. Глшсопротеш репродуктивных органов быка

Влияние округаиодих тканей на формирование гликопротеина спермиев придатка семенника прослеживается.при исследовании венозной крови и гомогенатов из семенника и опидидимиса. Количество углеводных компонентов этих соединений в крови и гемогеиатах довольно близки: гексозаыин - 97-100 мг>, фукоза - 7-8 мг$, сиа-ловая кислота - 61-С4 мг£, серомукопд - 12-14 Вместе с тем гексоз в крови било больше на 47 мг;», чем в гомогенате из семенников, и на 54-55 нг^ больше, чем в гомогекато из придатка р»пси-ника (Р ч: 0,01).

В спсрмиях из головки тела и хвоста гсг'-- ч

б 6-16 раз меиьше, чем в венозной крови и в 4-12 раз меньше, чем в гомогенате из семенника и в Ц раз меньше по сравнению с гомо-генатоы из того же органа. Такие ке закономерности при некотором различии в цифровых выражениях били характерны и по отношению к гексозамину, фукозе,' опаловой кислоте и серомукоиду. Мы связываем это с механизмом формирования гликопротеина спермия.

3.1.4. Изменение площади головок спермиев в эпццидимисе

По мере прохондеиия спермия по придатку семенника наблюдается изменение его.линейных параметров, например, площади головок (таблица I).

Таблица I

Площадь головки спермия у быков, баранов и хряков, езятцх из семенников и различных участков придатка семенника (п = 1200)

Спермии Площадь головки спермия (мкм2) взятых из;_

_' эпидидимиса

семенника

головки_тела хвоста

Быка Б7,36+0,25 37,32+0,44 37,43+0,48 38,72+0,31

Барана 39,1210,34 38,96+0,33 40,56+0,63 40,72+0,59 Хряка 38,40+0,3 38,80^0,25 39,64+0,41 39,44±0,4

Представленные данные позволяют утвервдать, что площадь головок спермиев у быков и баранов по мере продвижения их по придатку семенника увеличивается (Р < 0,05), У хряка эта величина шела тенденцию к увеличению.

Воздействие на впидидиыальных спермиев секретов придаточных иолових ле^ез шзивало изменение линейных параметров. При обра-¿хлке слеригев быка секретами предстательной, куверовых и урет-ралыци. хелез плоьздн головок увеличивались (Р < 0,05; Р< 0,02;

Р < 0,02, соответственно). Обработка спермпеп оекретами пузнрькп -видных желез приводила к менее внракенному увеличению площади головок спермиев.

В процессе обработки спермиев хряка и барана секретами ку-перовнх и уретральных желез в первом случае наблюдали увеличение площади головок (Р< 0,02), по втором - тенденцию к увеличению. При воздействии на зпидидямальннх спермиев этих мгвотннх секретами пузырьковидных и предстательной железы площади головок спермиев уменьшались.

Увеличение линейных параметров спермиев бнка при продвижении их от головки к хвосту придатка сепенника мы связываем с повышением количества гексоз и сиаловых кислот в составе глико-протеша спермиев.

В секретах придаточных половых желез такпэ был найден глл-копротеин. Наибольшая часть гексоз содержалась в секрете пузырьковидных келез (125 мг%) и.нашеньиая - в секрете предстательной железы (15 мг;?). Гексозамин находшш только в секретах пузырьковидных, луковичныхГИкелез (10-140 мг%). Сиаловая кислота была полнее представлена в секрете пузырьковидных желез (20 пт%), меньше ее было в секретах предстательной (70 ьт%), луковичных (23 мг#) и уретральных (9 кг^) пелез. Следовательно, секреты придаточных половых келез являются основные источником пополнения гликопротеина плазмы спер;.™.

Динамика углвводш-белк.овмх комплексов в репродуктивных органах самцов проявляется о различной интенсивностью. Наблюдается более высокая активность бпта-тлактозядаэм в эпидг.дпмнее бпрп'-п, чем у быка (в 1,07 раза) п хряг.а (г 11,0 раз). Ъ то го нремч, активность бвта-глкг.урокклази в эпитшл миоо С<х:п 1и* с у бнтл, чем у барана (в 2 раза) и хряка (л 1В саз).

- 18 -

Количественные соотношения этих ферментов позволяют предио-лоашгь, что в сперму оыков они попадают из эпидидиыиса и пузырь-ковищшх ыелез, у баранов - из придатка семенника. У хряков в сперме била обнаружена только галактозидаза.

Гиалуронидаза у всех видов половозрелых ьшботных проявляла свою максимальную активность в семеннике и придатке семенника (85-95^).

3.2. Углеводно-белковые и другие соединения спермы

3.2.1. Глюкуроновая кислота

Сперма быков,баранов и хряков содерлшт глшуроновую кислоту, которая входит в состав спермиев и плазмы спермы. Б плазме спер-;ш находится основная масса гл:окуроцовой кислоты. В пересчете па I млрд спермиев больше ьсего (Л) ее приходится на спермин хряка 11,1), затем спермин сына (0,32) и спермин оарана (0,13).

Гликуроновая кислота входит в состав желтка куриного яйца, поэтому при дсоаьлении к сперме разбавителей, содержащие желток, количество ее изменяется.

В.;ес1о с тем ь процессе подготовки cne.pi.ia к зоморахиванию, глубокого •■•.амора'.скьания и оттаивышя происходи! специфическое распределение глпку]ю новой кислоты в сперме.. В плазме спермы .1цкг» иолпчьотьо глшуроиошй кис-юты уменьшается от цоыеита раз-Фшления до зашра^иьания и оттаивания (Р < 0,01), в то время гак у барана а хрша атот показатель остается практически неиз-и-енвнм. Очевидно, ь спермс глыкуроковая кислота выполняет за-с;т;уи ункшнм, связывал вредные к токсические продукты с образо-нетоксичных глажуронатов.

1сор£«Ж1шние сиерьш икаэыкало влияние и на активность гиа-■ •;.?.•!«, г.о?ои'.;| умс-'!!ШП'Н»с!- Г: прогессе разбавления (58,9-75?),

"эквилибрацик" (57-67;&), гх/бокого замораживания п оттаивание спермн (52-G2,»). Этот показатель значительно варьировал в записи-мости от криозащатннх способностей сперм ( 6V = 10,15; 26,13; 31,68$).

3.2.2. Влияние глубокого замораживания спермн на гликопротеип' и серогликоид спермиев

Гликопротеин в ходит по только в состав апросоми (£'. • -ir ее, & $ /а^а, 1965), но и является составной чаот»-п

средней части в жгутика спермин быка и барана. При распределении 0,56 иг/мл гексози в спермиях быка и 0,25 мг/мл гексози в сиер-тлшх барана в теле к кгутике содержалось 0,1 и 0,15 мг/ил гексози соответственно.

После разбавления ЛТК средой и в процессе замораживания спермн углеводно-белковые соединения распределялись в спермиях следуютта образом (таблица 2).

Таблица Я

Гексози, скаловая кислота и серомукоид спермиев при

заморзкгазанип спермн бш:а и барана (п = 150)

Сперма -Ш£-ЙШШ---

гексози опаловая серому- гексози опаловая серогду-(мг/мл) кислота коид (мг/мл) кислота ком _(Д) (мг/мл) ■ (Д) (мг/мл)

После разбав- 0,074+0,007 0,31+0,003 0.11+0,00

ления - -0,19+0,005 " 0,08+0,003 ~ 0,086±0,002 -

Перед зпмора- 0,098+0,001 0,48+0,003 0,05+0,003

киванием 0,24+0,004 ~ 0,21^0,004 0,Ц±0,003

После оттай- 0,094+0,001 0,31+0,004 0,2±0,001

вания 0,24+0,004 ~ 0,1*0,002 ~ 0,11*0,003

- но -

11 процессе "эквшшбргщии* происходило шиихившв гексоз в спермиях быка (Р < 0,05), опаловой кислоты (Pd 0,01) и серому-коидов почти в 3 раза. В спермиях оаращв этот период происходило незначительное повышение количества гексоз н заметное повышение количества сиадовоц кислоты (Р d 0,01), в то время как количество серомукомда уменьшалось вдвое.

В процессе глубокого замораживания н оттаивания спермы быка количество гексоз, оиалоьоц кислоты в серомукоидов возвращалось к исходному урсчш«, ь то время как в снерцшсх 'барана количество с~ромукоида почти удваивалось. При инкубации сперш в спермиях Сарана возрастало количество гексоз и с валовой кислоты.

Показанная специфичность, по-видимому, является следствием особенностей распределипил глшсанов на поверхности спермизв и >;ьпзи ei'O с друпи.ги компонентами.

3.2.3. Изменение фосфолипидов, сократительных элементов :: оптических свойств спермиев в процессе замора-мшания

¡¡аличество липоидного фосфора в спермиях барана было болыла (¿.ы.Платоз, А.П.Успенский, I9S7) по сравнения со спермпкли быка а 1,3 раза после разбавления, в 1,4 раза поел;; "окшишбрации" и а 1,Б раз после оттаивания спермы. В з:сследоь:.ииях В.С.Голубя (1972) била подтверждена закономерность потери фосфолипвда спер-;-/л.чг.л пиков н баранов после глубокого замораживания спер:,ш.

Особенность спермы этих видов шьотных заклинается в том, vi'Q ¡¡осле заиорагивания в лактозо-!.;елточно-глицериноЕой среде í¿;v»WiOctk сперги:зв барана ушибается до 2 баллоь с потерей бг.ологьчйсг.оЕ полноценносуе, у бака активность сохраняется на vporjiñ 4 Садлов tíoa потери еялодотьорлг^ей слособности><"нссло-r.or-í.iu'u car.pr.Tii'R'.'ibiiiix L„u;i.eh¿0}< er.ef:.;i:¿E Сарана потеря перво-

начального веса при высушивании до 72-75,4 сокращало количество "препаратов" с вибрирующим жгутиком (24-40?). Однако единичные спермин сохраняли поступательную подвижность дате при потере 57$ первоначальной массы. Было установлено, что при сохранении 39$ остаточной влажности контр-эктильнне элементы спермиев не повреждались.(Л.Н.Успенский, Е.М.Платов, 1967). Это дает основание утверждать, что в процессе технологии глубокого пяморашагания cnept.ni больше повреждаются периферийные образования спермиев.

Электронномикроскопическое исследование спермиев с использованием различных синтетических сред и ренинов замора;швания показало, что в процессе разбавления, "эквилибрации", глубокого замораживания и оттаивания оперли число неподверяенных изменениям спермиев снижалось от 55$ (неразбавленная сперма) - 38$ (после разбавления средой с глицерином) - 19% (перед замораживанием) до 11$ (после оттаивания). Это соответствовало активности: 0, 7, 6, 3 баллов.

В процессе подготовки, замораживания и оттаивания спермы, наибольшим изменениям подвергался акросоиннй колпачок (55-80$). Шейка поврездалась у 27-63$ спермиев. Разбухание митохондриаль-ной части тела было больше отражено после периода "эквплибрании" (15$). Головка сохранялась в неизменном состоянии у 70-94$ половых клеток. Изменение яггутипа отмечали у 10-15$ спермиев.

3.2-4. Пикробная контаминация-и гликонротеин

Средние данные о содержании глккопротеииовнх компонентов в сперме быков в зависимости от микробного числа приведены в таблице 3.

Материалы таблицы 3 попволяпт судить о теппзпшш умештл'-п'кл количества гоксоз на 0,5 мг$, гексоэлмлна (нп ■','> г.г'), (на 1,9 мг$) и сгпловоП кислоты (на 1,2 :т$), уе лги иг-'-:--!:'--

Микробное число

гексозы

гексозамин

фукоза сиаловая _кислота

103 &6Й 2000

0

19,"'0+1,3 34,6+2,7

18,511,6 28^2,5

Ю,0±1,7 24±2,7

17,811,2 20+2,9

8,2+0,9 9,7+0,91

6,3±0,6 В,510,92

4.510,4 6,710,7

3,51-0.45 510,61

тельном повышении микробного числа в сперме. Дальнейшее повышение микробного числа увеличивает тенденцию понижения гексоз в глико-протеине снермы (до 1,2 мг,») и гексозамина (до 10 иг%). В дальнейшем количество гексозамина продолжает уменьшаться (Р < 0,01). Уровень фукозы и сиаловой кислоты снижается, при повышении микробного числа в 1,8; 2,3 и 1,4; 1,9 раз, соответственно. Мы связываем механизм этих изменений с активностью микробных гликозидаз,

3.3. Секрет гинеталнев коров

3.3.1. Углеводно-белковый состав секретов половых путей

В период течки происходит изменение рН (от 7,3 до 7,9); алекцкя1роводности (от 13-14 до 6-7 ммо), удельного веса (1,0041,006) ^(.'/'¿'ч'Л ¿иСьи/пц.

Ь состав гликопротеинов цервикальной слизи входит 26 т% гекеоэ, 25 гексозамина, 4,5 г^ Фукозы и 12 сналовой кис-логн, Сравнительное исследование этого содержимого в процессе Оергмодости показало апилогвчну» картину, за исключением сиало-юй кислоты, которой било на 6 М1> больше в слизистой пробке ¿вГ-ымш.истк. С.содпне панике б»ии получены ъ других иг- одова-

нпях (Е.Буддецке, T9G9). Расчетный молекулярный вес гликонротеп-на составляет 1,4-10' - Соотношение маннозн и галактозы в глико-протепне было 5:4. .

Аминокислотный состав гликопротеина первикальной слизи включает в себя следующие аминокислоты (г*): аланин - 9,9; аспа-рагиновая кислота 6,0; глтотамюговая кислота - 7,7; глицин - 7,1; изолейнин - 1,5; лейнпн - 3,9; феннлпланин - 2,6; пролин - It,7: серии - 13,1; треонин - 22.4; валип - 5,9; аргинин - 3,5; лизин - 2,3 с

Присоединение углеводов к гюлипептпдинм пеням осуществляется чаще всего через серии, треонин и аснарагшювуп кислоту (К.Гуддрц-кп, 1969),

Секреты эндометрия, как правило, прозрачны, более разжижены. Во время охоты они водянисты, о сероватым оттенком, удается отсасывать 1-10 мл секрета. 1С 10 дню псслеовуляпионного периода секрет становится тягучим, мутным, желтовпп.'м (Т~3 мл). Через 17 дней в вязкой слизи оопарукитали больиое количество ялорвпг • эпителиальных меток.

Секрет яШепроводоп в период охоты прозрачен (0,2-0,5 мл). Углеводный состав гликопротеина секретов эндометрия п зндосадт— ппнгса в период охоты приведен в таблице 4

Таблица i

Углеводный состав гликспротеинов секретов эндометрия и лпиепровода (г%)

Секрет Гексозы Гексозамин фукозп. кп'с^

Эндометрия 15 26 2,5 О

Яйнепровона 8 20,5 1,5 1

S H Q u) ■ U * / M

Отличие цервикальной слизи от гликопротеинау'состопт в уменьшенном количестве гексоз (в 1,7 раза), фукозн (в 1,8 раз) и сиаловой кислоты (в 2 раза). В секретах матки и яйцепровода количество гексозамина остается неизменным.

.Мы связываем неизменность гексозамина с тем, что он является более прочным звеном, связывающим другие углеводы с белком.

Количество гексоз, фукозн и сиаловой кислоты в яйцепроводе уменьшается по сравнению с секретом эндометрия в 1,5-1,9 раз. Наличие достаточного количества фукозы и сиаловой кислоты в составе гликопротеина обусловливает наряду с другими факторами защитные свойства секрета. При исследовании ферментов в секретах гинеталиев во время течки при флюктуирующем фолликуле они не обнаруживаются в содержимом влагалища, в шеечном секрете определяется незначительная активность (6,5 ед.) бета-нейраминидазы. В секрете эндометрия бета-галактозидаза начинает проявлять активность (23 мкгф), а бета-нейрамикидаза свою активность усиливает (52,9 ед.). В с одержимом ящепроводов активность бета-галактози-дазы (45 мкгф) и бета-нейраминидазы (92,6 ед.) продол;кает увеличивать СЯ.

Следовательно, в основе механизма изменения количественных показателей гликанов гликопротеина в секретах гинеталиев во время течки является ферментативный процесс.

Активность бет а- г л>„к у ро нид а з ы во время течки зависит от состояния фолликула (таблица 5).

Активность фермента возрастает во всех участках репродук-

I

тптых путей, в зависимости от развития фолликула до слабофлюк-туиру^его состояния (в 1,5 раза во влагалищном содерии.юм, в 11,9 ра? в леечном секрете, в 3,7 раза в секрете тела и рогов г v 2 р;.:<2 в со..ерш.юм niueni овода). Приближение конпа течки,

Активность бета-глюкуронидазы секретов гинеталиев коров в зависимости от состояния фюл.шкула (22 коровы)

Состояние фолликула Активность бета-глюкуронидазн секретов (мкгФФ)

влагалища шейки матки рогов и тела пищепрома тки водов

Упругий 60 72 30 60

Слабофлюктуирующий 88 654 112 120

Сильнофлюктуируищий 32 86 17 30

соответствущее силънофлюктуирущему фолликулу, вновь сникает активность бета-гликуронидазн в содержимом гинеталиев коров (в 2,7-ю раз).

Аналогичным закономерностям подвержена и активность гиалуро-нидазы цервикальной слизи в период течки. Добавление спермы увеличивает ее активность.

По мере роста фолликула в фолликулярной жидкости активность нейраминидазы увеличивалась от 13 до НО ед. В содержимом яйце-провода этот показатель снижался от 90 ед. сразу после овуляции до 5 через 8 часов после овуляции.

Механизм изменений исследованных ферментов зависел от гормонального влияния. Количество ФСГ в крови коровы через 6 ч от начала охоты было Ц,5 мг, ЛГ - 28,1 мкг/100 мл, через 12 ч -10,5 мг и 25 мхг/ЮО мл, через 24 ч - 8,3 мг и 12,1 мкг/100 »л и через 36 ч - 6,5 № и 40 мкг/100 мл, соответственно.

Окружающая среда оказывает непосредственное воздействие на организм животного. Данные распределения компонентов гликопро-теина в секрете шейки матки пршеденл в таблице 6.

- -йо -

Гликонротеин цервикальиой слизи-у'коров в зовиоимоеп: от времени года

1'ексо'Ш Гексозамил фукоза Спа.гавал ______кислот с_.

____________1_______

Январь 26+2,0 2512,1 4,5±0,2 12+0,51

Яонгаль 22,212,0 24,б±г,1 4,010,21 12,510,5

(Д-'Ф'Г 26,5+2,1 2512,12 3,010,15 11+0,52

Апрель 25±2,I 24,2±г.1 3.0.10,12 8,5±0,1Ь

Май 24,5+2,13 25+1;Г2 2,810,11

Июнь 2Г.±2,1 25,512; И 2,610,75 6,5*0,1С

Ишь 20x2,0 1 3,510,14 91-0,49

Август 25.5*2; 14 25; 412,0 4,010,12 1.1,51-0.5;..

Сентябрь 2С+2;1 25,'£12,12 4,510,2 12±0,5Г

Октябрь 26+2¡1 '251г;12 47*0 ,'19 12,110,50

Ноябрь 26+2,0 25,512'. К -4,Е±0."19 12+0,5};

Декабрь ?С,2±2,0 -25±2", I ,4,5±0,2 12,2±-0,5т

В мае-июне, то есть во время смеин стойлового периода нр пастбищный, количество фукозн снижалось но сравнению с: январем-февралем на 1,7-2,2 г,-,! (Р <1 0,01), опаловой кислотн - на 4-6 т/ (Р <. 0,001).

Этот период' совпадал с массовыми перегулами ко рот Сиитеикс-полноценности углеводно-белкового комплекса иорвиг.алыюЦ слиз, в отог период при добавлении сперм» бика иодгвер.тдено тесток с уксусной кислотой.

Количественное сопоставление: углевидних компонентов гдлко--нротеипп мпточннх оогрптоп поело шгюкиии прогестерона, вначзлп няотЛкыного периода представлено я таблице 7,

Гликопротеин мьточлнх наделений в зависимости от инъекций прогестерона

Групп» животных----"-----

гексозы гексозашш фукоза сиаловая _______кислота___

Вводили прогестерон

(5 иньекций по 50мг) 2 6;t2,0 25i2» Г 4,ñ±0,2 I2±0,ÓI Без прогестерона 25i2,I 25,5¿2,I4 2,6¿0,75 6,5¿0,I8

В начале пастбищного периода у коров наблюдается повышение количества фукозы (Р с 0,001) и сиаловой кислоты (Р < 0,001) в составе гликопротеина маточных выделении, если им инъецировали прогестерон.

По-видимому, восстановлении нормальной структуры глшшпро-■тенна в присутствии экзогенного прогестерона щюисходнт на фоне дефицита лютеинизирующего гормона у коров.

3.3.2. Взаимодействие спермиев о секретами гинеталиев

ко]ю0

Выявлена зависимость скорости проникновения спермиев в цер-викальную слизь от фазы течки. Вначале ее спермин быстрее пропинают через границу раздела.

Вместе с тем, продвижение спермиев после однократного осеменения ограничивалось нервикалышм каналом, телом д рогами матки через 60 мин после искусственного шш естественного осеменения. Спермин достигали яйцепроводов только после двух- или трехкратного естественного осеменения независимо от времени течки. Двух-, трехкратное искусственное осеменение не приводит к адекватно!! реакции. Мы объясняем ото повы:!<'ШШм травматизмом зндоцервнк-

сп, при искусственном осеменении, сопровождаемым точечной к полосчатой гиперемией, особенно в начале течки и болезненными опупениями, которые нейтрализуют "окситоциновнй" рефлекс.

Данные об изменении площади эозинофобных головок спермиев после осеменения коров представлены в таблице Ь„

Таблица 8

Плонагь 1'оловкн спермиев быка, взятых из различных участков половых путей после осеменения коров

Место взятия Площадь головки спермия (кв.мкм) через (ч )

спсршеи _после осеменения

0 4 6 8

Сперма 39,5^0,38 39,3+0,39 39,2*0,20 39,5±0.39

Влагалище 4:3,08+0,33 - 44.68j0.26

Матка:

шейка 39,96+0,16 - 40,76+0,33

тело 39,84+0,24 - 39,28+0,17

рога 39, 44^0,16 - 38,84+0,25

Пйиспрогодн 38.44j0.2l 38,52±0,59 41,12±0,55

Размеры головок спермиев увеличивались при инкубации во влагалище коровы уке через 4ч (Р < 0,05), как и в шейке матки (Р 0,05). Изменений линейных параметров головок спермиев, извлеченных из тела матки, не наблюдали. Половые клетки, взятые из рогов матки через 0 ч после парацервикальнйго осеменения, имели: меньшую площадь по сравнению с исходным материалом (Р< 0,05). При внутри,точном осеменении коров эта величина уменьшилась уже через 4 и С ч (Р < 0,05).

Уменьшенная площадь головок сохранялась в я{*цепроводах в течение 6 ч ; через В ч этот показатель увеличивался (Р < 0,05), что, вероятно, связано с процессами разрушения спермиев. Увеляче-

пне размеров спермиев при длительном нахождении их (II-2G ч) в половых путях крольчих подтверждают другие исследователи (B.C. Осадчук, Р.В.Ойвадис, Л.В.Бронская, 1977).

Уменьшение площади головок зозинофобних спермиев мы связн-ваем с ферментативными процессами, способствующими подготовке спермиев к оплодотворению,

3.4. Повышение репродуктивной функции животных

3.1.1. Выбор времени к осеменение коров

fli;i обследовании 120 корон в фазе течки, сопряженной с охотой, то/лысо у 65 (54;0 из них диагностировали ригидность матки; церви-кадьаея сллзь при этом была "пузырчатой". В период проявления ■■рефлекса лштопвинпости Vк пко <т,оллккула (таблица 9).

'рефлекса лйпопвинпоспг'/ктзотни'! обнаруживали различное состоя-

Таблица 9

Состояние фолликулов у коров в охот« при ректальной и ал ьп ¡Л!» и дичи и jt п

Л ИТ*^ '¡^ 111

Ссстолн'ш Фолишуда • •—•—•----------

___. ,____чксло_2_

ТСйРДИЙ 5Е5 17,7:15, Г.

Упругий 62 20^5,00

Флюктуирующий 146 46,7+4,11}

Оьулировавыий 49 15,71-5,19

Отметим, что из 49 коров, у которых несмотря на яркопроявллю-циеся признаки'охоты произошла овуляция, у 46,7$ яичников прощупывалось небольшое углубление; у 24,5,2 эта япка казалась заяол-и«!ШоЛ на одну треть у 18,Ам - наравне с краями яичника и у €,$ -пплт.парс?аля трахейной кратерносги. Анализ 355 овуляций по-,Г,.,,,Л( .,»„ ......гчестго ог.улироьг-г:чпх в период о хоти Фолликулов

варьирует в пределах 12-17$ в различных хозяйствах. Вместе с тем. у коров, у которых охоту выявляли быки, количество овулировавших фолликулов било меньше - 7-10$„

Количество овуляций варьировало в зависимости от состоянии фолликула. Однако ни в одном варианте через 24 ч после пальпации не происходило 100$-пой овуляции.

Спермин, введенные в краниальный участок, рога матки в цоз'* от 0,1 до 1,0 мл практически не влияли на слизистые образование матки. Увеличение дозы до 2-3,5 мл вызывало явления локального эндометрита. Количество эозинофобных ф>орм спермиев в цервшсаль-иом канале через 10-14 ч после осеменения достигало 10$, в теле матки этот показатель варьировал от 4 до 30$, рогьл - 20-48$, п!тцепроводе - 27-53$.

Доставка спермиев в якценровод через 1-3 ч после осеменения в краниальный участок рога матки выглядела следующим образом (таблица 10).

Таблица 10

Проникновение спермиев в яйцепровод через 1-3 ч после внутриматочного осеменения коров

Место введения спермы Число коров Доза (мл) Спермиев каудаль-ном в участке яйцепровода среднем всего

В краниальный ю Й*1 71 60 70 201

участок 10 0,2 101 98 III 310

рога натки 8 0,3 255 195 130 550

9 139 112 151 402

10 6,5 99 44 170 313

7 0,6 III 100 99 310

10 0,7 20U 150 50 400

9 0,8 215 105 130 450

8 0,9 195 210 В5 490

10 1,0 97 203 205 505

10 1,5 108 150 150 406

10 2,0 . 207 103 20Ü 510

Q 2,5 198 202 В5 4G5

10 Б,0 152 173 195 520

10 3,5 89 12.3 100 312

В ГХ'РГ.НКПЛЫШЙ копал 10 I 47 26 13 86

- 31 -

Средние результаты, приведенные в таблице 10, позволяет говорить о возможности снижения осеменательной дозы при введении спермы в краниальный участок рога матки, например, до 0,3 мл, при увеличении числа спермиев, достигающих яйценровода, по сравнение с цервикальнш.1 осеменением.

Осеменение коровы в краниальный участок рога матки ш:шо проводить без введения конца осеменительной пинетки в этот участок. Регуляция места введения может осуществляться интенсивностью инсталляции спермы при кранюцервикалыюм расположении конца осеме-нительного инструмента.

Искусственное осеменение 233 коров в послеовулянношшй период показало преимущество внутрпматочкого вьеденпя спермы (таблица ц).

Таблица Ц

Стельность после осеменения коров в шстовуляцг.онном периоде

Место введения спермы

Число осеменений

Стельных

число

Рог матки:

краниалыю каудально

Цервикалышй канал

75 78

80

55 52

20

7110,2 67¿Я,5

25+4,8

Внутриматочное осеменение при умеренной инсталляции ашрш и одновременном распряшешш рога со стороны оьулироваидего >1;о.%.ш~ кула было предпочтительнее но сравнению с иерпикальныы осеменением (Р < 0,01) .

Анализ деятельности 21 осеменаторов Горьконской ооласти, аспользугаадх комбинированный способ осеменений 15054 koj.uk (до овуляции - ректо-цервикальное, после овуляпии - внутриматочгоч осеменение), показал эффективность его. Выход телят при ятом

увеличился до 103$, что было вше на 16% по сравнению с ректо-церпикалъннм осеменением. Индекс оплодотворений снизился в Г,7Ь раз и бил равен 1,8.

3.4.2. Снижение микробного числа при оттаивании необлицовашшх гранул енермы

Одним из недостатков оиособа сохранения спермы в форме необ-лицованных гранул, является незащищенность их от микробного загрязнения даке при использовании асептических методов взятия и разбавления. Экспериментально доказано, что основная масса микроорганизмов располагается по периферии гранулы.

Наиболее приемлемым вариантом оттаивания необлкцоваяннх гранул является трехступенчатый способ. При этом гранулу, извлеченную из жидкого азота, погружают в 3 емкости (по J ш 8,9/ь-даго раствора лимоннокислого натрия, подогретого до 4Q°G) ¡юолодова-телыю на 2с, I о и в третьей емкости производится дотаивание спермы. Микробное чиоло прй.ято^ онивдлаоь в 7 раз без заметного уменьшения количества поатун&тедьнд подбщшнх оцермиев в дозе. В ряде случаев удается по.дучат^ боэмнкробиуго сперму.

Выбор оптимального способа искусственного осеменения коров позволяет профилактировать введение микробов в половые пути с осеменительным инструментом. Использование одноразовых инструментов в этом отношении эффективнее в 6,5 раз, а использование к ним одноразовой упаковки позволяет проводить асептическое осеменение животных,

3.4.3. Воздействие на коров в послеосеменительиый период

Выдерживанием коров в стойлах в начале пастбищного периода в совхозе "Сорпот-окий пролетарий" Горьковской области в 1973 году или иньекцнлки прогестерона после'осеменения удачось добиться повышения количества стелышх, животных (таблица 12).

Влияние на стельность спокойной обстановки или инъекций прогестерона коровам в послеосеменцтельный период

Группы жи- Воздействие Выдержаны в снокой- Инъекция 50 мг вотных после осеме- пой обстановке - прогестерона -нения,через _5 дней_5 дней

^днеи; число коров стельных (£) число коров стельных {%)

Опытные 0 78 65+5,4 12 75±12,5

7 85 74+4,7 16 62±12,1

19 80 67+5,2 18 66+11,52

29 75 86+4,0 17 88+7,9

0-35 67 ' 79±4,9 - -

Контроль- Без выдержи- 95 55+5,1 93 55±5,15

ная вания и

инъекций

Во всех группах животных, кроме выдерживания коров сразу и •через 19 дней после осеменения, была получена разница в пользу послеосеменительного выдерживания животных в спокойной обстановке через 7, 29 дней (по 5 дней; Р < 0,001, Р < 0,05) и в течение 35 дней после осеменения (Р < 0,01).

Инъекции прогестерона повышают процент стельных коров, когда их используют через 29 дней после осеменения животных. Это время соответствует периоду ллацентации. Эффективность использования прогестерона, в послеосеменительном периоде подтверждена и в других исследованиях (В.Г.Гугле, с.А.Юргин, Г.И.Судаков и др., 1986).

3.4.4. Разработка метода "замораживания спер.щ быков в полистироловых пипетках

Нами было установлено, что сперму быков, Замороженную в пипетках из полистирола, можно сохранять при температурах -минус 79°С и минус 196°С. При активности 3,5-5 баллов коэЭД.ици-

ент живучести ( Зй, ) был равен 9-10. Наивысший показатель ( -5,1.-13) был получен в образцах, где сперму расфасовывали в пипетки и охлакдали до минус 196°С над яшдким азотом.- С целью расфасовки спермы в полистироловые пипегка был использован вакуумный способ, разработанный нами сошоетно с И.Х.Хнбибуллинш в 1965 году,

В качестве материала для упаковки пипеток использовали полиэтилен высокого давления марки ПЭ500, нестабшшзировашшй, гранулированный, с индексом расплава 7-10 г (10 мин). При изготовлении комбинированного материала использовали дублирующий агрегат. Расплав полиэтилена при 270-300°С накладывали на крафт-бумагу. Адгезионная прочность соединения бумага-полиэтилен составляла 600800 г/см. Автоклавированный материал позволял сохранять пипетки со спермой от момента "эквилибрацип" сперли до осеменения коровы в стерильном состоянии.

Результаты опытов по осеменения коров, в зоне деятельности Волгоградской станции искусственного осеменения сельскохозяйственных животных, представлены в таблице 13.

Таблица 13

Стельность в зависимости от способа сохранения спермы и осеменения коров

Способ хранения спермы

Во флаконах при 0°С

В ампулах при -79°С

В полистироловых0 пипетках при -79 С

Метод осеменения

Визо-цервикал ышй Ректо-цервикалы:ый

Ви з о-цервикальный Ректо-цервикальный

Ректо-цервккальнып

Число . Стелыш):

осеме- (%)

нений_

97 -65,9*4,7

91 71,4*4,7

115 60,8+4,4

76 69,7+5,0

85 . 72,9+4,7

о

Предпочтительнее выглядит ректо-цервшсалышй способ осеменения коров независимо от способа хранения спермы при некотором преимуществе сохранена спермы в полистироловых пипетках.

Оплодотворяющая способность спермы, сохраненной в одном из первых отечественных сосудов Дьюара (СД-65) испытанных нами при температуре -196°С, показана в таблице 14.

Таблица 14

Стельность в зависимости от способа хранения спермы и осеменения коров

Способ хранения спермы

Во флаконах при 0°С

В ампулах при -136°С

В полистироловнх пипетках при -1960С

Метод осеменения

Визо-цервикальный Визо-цервикальный

Рект о-цервшсальный

Число Стельных осеме- {%) нений_:_

509 52+2,I

468 49+2,5

141 64+4,I

Полученная разница (Р< 0,01) подтвердила целесообразность за'лораяшвания спермы в пластмассовых пипетках и использование их для осеменения коров.

В последующих работах (В.Ф.Турбин, 1967; А.П.Песковатсков, 1968) эффект использования этого метода был подтвержден. Дальнейшее замораживание спермы продолжилось именно в этом направлении (И.Х.Хабибуллин, Л.Г.Каримова, В.Е.Киселев, 1977 и др.).

3.4.5. Использование замороженной спермы быков в международном обмене и мясном скотоводстве

С целью выполнения заявок на сперму быков-производителей, находящихся в разных регионах нашей страны, в 1964 году была разработана специальная технология заготовки в зависимости от удаленности-места заготовки от ЦСИО. Были использованы способы

одномоментного и двухступенчатого разбавления спермы. Время, предшествующее второму разбавлению глицериниэирующей средой, использовали для доставки спермы из хозяйства, а перибд "зквшшбра-ции" - для транспортировки ее на ЦСГО, где производили замораживание с последующей отправкой в страну-заявитель. Первые данные о ровдешш от экспортированной спермы 14 шелят бшш получены из Болгарии.

Вместе с тем, при осеменении 294 коров в Волгоградской области импортированной из стран-членов СЭВ спермой было получено от 53,5 до 73,6$ оплодотворений.

Разработка системы централизованной заготовки спермы мясных быков (совместно с Л.Н.Гороховым и Ф.И.Злочевским, 1967) позволила оперативно заготовить 94 тысячи доз гранулированной спермы от 19 быков. Специализированные группы в течение 65 дней произвели осеменение 6658 коров и телок в откормочных совхозах Ставропольского края. Стельными оказались 72,3$, индекс оплодотворения - 3,3.

3.4.6. Разработка синтетических сред, применяемых для замораживания спермы быка

В синтетических средах, в которых использованы солевой к неэлектролитные компоненты, не был учтен оптимальный подбор этю. веществ. Влияние этого фактора на сперму было очевидны;,! (таблица 15).

В сравнительном аспекте (таблица 15) только гликокол, за пределами оптимального соотношения с цитратом натрия, не сникал резко живучести спермы.

Среды с оптимальным набором компонентов имели следующий состав: 0,74 г гликокола с 3,36 г цитрата натрия; 3,45 г сахарозы с 3,36 г цитрата натрия; 0,9 г глюкозы с 3,78 г цитрата

Относительный показатель нивучести 1) при различном соотношении компонентов

Объемный

процент лимоннокислого натрия (0, ш) 100 30 80 70 60 50 40 30 20 10 0

Объемный процент несолевого компонента (0,49,4) 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100

Глюкоза 1,0 1,2 0,9 0,8 0,8 0,7 0,7 0,7 0,1 0,1 0,04

Сахароза 1,0 1,1 1,2 1,1 0,9 0,1 0,1 0,1 0,03 0,03 0,01

Лактоза 1,0 1,1 1,0 0,9 0,8 0,8 0,3 0,2 0,1 0,05 0,00]

Гликокол 1,0 1,3 1,5 1,2 1.2 1,1 1,05 1,0 1,0 0,9 0,4

натрия; 1,72 г лактозы с 3,78 г цитрата натрия. Общими для этих соотношений были: вода дистиллированная - 100 мл, желток куриного яйца - 20 мл, глицерин - 10 мл.

Использование синтетических сред с глюкозой и гликоколом позволило снизить количество подвижных спермиев в осеменительной дозе до 10 млн без с нижения оплодотворяющей способности спермы (62-67?) по сравнению с дозами, содержавшими 50 млн спермиев (63-68?).

В дальнейшем эта корректировка была подтверждена и отражена в инструкции.

3.6.7. Сохранение спермы быка и кобеля при 2-4°С

Применяемая глюкозо-цитратиая среда включает изотоничные растворы лимоннокислого натрия (50?) и глюкозы (50?) без учета оптимального сочетания их.

В 1969-70 гг. при использовании метода встречных рядов был разработан оптимальный вариант соотношения глюкозы (Ю?) с ли-

моннокислш.1 натрием (90$). При этом повышались количество эозк -нофобных форм спермиев (на 13,3/2). коэффициент устойчивости спер-миев к температурному шоку (на 0,15) и уменьшалось количество патологических форм спермиев. Эта среда имела следующий состав; вода дистиллированная - 100 мл, глюкоза - 0,6 г, цитрат натрия -2,52 г, желток - 20 мл, пенициллин - 50 тнс.ед., стрептомицин -50 тнс.ед., стрептоцид - 0,12 г,

В совхозе "Сормовский пролетарий" Горьковской области провели осеменение 430 коров спермой', разбявл&шшзй! это! средой. Ошго-дотворяемость коров иасда шкгазаванизг спермы,, сохраняемой первые два дня, была практически адекватной' контролю (65+3,9 и 60+4,1; 63+3,4 и 52+4,2). Использование спермы,.разбавленной опытной средой, после трехсуточного хранения повышало процент стельности С&2+4,0 и 45^4,2, при Р< 0,05)*

Длительное сохранение спермой, разоавленной этой средой, физиологических сш'йсяв' позволило использовать ее в практике прове ■ дения лаборат'орЕзчпраглЕ^ггосс заилит;-!, со студент акс зоожкееег-ного и взтертеазшито ^ахулкгезан,--

Исследованда каделагЕ дврт фракции сверяв кабеад при разбавлении их глюкозо-цитратж?-ггглто,5Шй средой1 показало, что абсолютный показатель перезшваемоста еперкн имел наибольшие значения (15) при смешивании 90 объемных процентов 0,08М лимоннокислого катрад с Ю объемными процентами 0,ЗЗМ глюкозы. Среда шела следующий состав: дистиллированная вода - 100 мл, глюкоза - 6 г, лимоннокислый натрий - 2,6/ г, желток - 20 мл, пенициллин - 75 тнс.ед., стрептомицин - 75 тыс.ед. Активность в пределах 5-6 баллов сохранялась в течение 5 суток. Потеря подвижности наступала через 12-15 суток (при 2-4°С). Осеменение 12 сук с интервалом между осеменениями 48 ч позволило получить 100^ щенепий с выходом в

- 39 -

каждом помете по 3-5 здоровых щенят.

Собаководы заинтересованы в вязке сук с ценными кобелями, которые часто находятся в другом регионе, что создает естественные неудобства. Способ разбавления спермы кобеля разработанной нами средой позволяет доставлять ее в обычном пищевом термосе с тающии льдш по ¿вмта шли с курьерам,, раяшет дедый ряд неудобств и создает все изЕ»£;С1Гше гщредмущесяаа, кеяюрще присущи искусственному осамеые.-н» ж-еред естаствешшм.

4.ВНВАДЫ

Е. Во в,реш лродаижешщ по ¡каналу лрщатка леи&шдка э ,сдер-ыиях накашиваются негйгралшке ¡и постепенно ис^агат кетше муко-полисахариды- В -образ,овтш этих веществ участвует Едашлаама эпителиальных клеток стене® каналы®в ¡придатка и соединительная ткань опидндимиса. Голокриновые клеткл содержат большое количество нейтральных ыукополисахаридов. Площадь головок спермиев у быков и баранов по мере продвижения их по эпидидимису увеличивается.

2. Впервые предложена зональная классификация зпидиднмиса быка, основанная на величине диаметра канальцев, высоте и форме их просвета, клеточном составе эпителия и содержании и распределении в нем аминокислот.

3. В семенниках и эпидидимисе у быков содержится серомукоцд и гликопротеин, в состав которого входят гексозы, гекоозаыин, фукоза, сиаловая кислота. Гликопротеин распределяется по всей длине спермия. Секреты придаточных половых желез являются основным источником пополнения гликопротеина плазмы спермы.

4. В сперму быков бета-галактозидаза и бета-глюкуронидаза поступают из эпидидимиса и пузырьковидных келез, у баранов - из придатка семенника. В сперме хряков била обнаружив только бета-

галактозидаза. В семенниках п их придатках у половозрелых кивотнш: проявляется высокая активность гкалуронпдазы. ■

5. После разбавления спермы лак г о зо -же лт о ч но-глицерин обо ^ средой в процессе подготовки к замораживанию в спермиях быка происходит накопление гексоз, сиаловой кислоты и серомукоидов.

в то время как в спермиях барана повышается только количество сиаловой кислоты при одновременном уменьшении количества серомукоида. После замораглазания и оттаивания в спермиях быка количество этих соединений возвращается к исходному уровни, а в спермиях барана количество их увеличивается. Уровень лилоодного фосфора в спермиях быка и барана уменьшается (до II и 30$ соответственно).

6. Количество гексоз гликопротеина зависит от степени микробной контаминации спермы. Особенно заметным было снижение уровня фукозы и сиаловой кислоты при повышении микробного числа л сперле.

7. Секреты матки и яйцепроводов у коров содержат гликопро-теин, включающий четыре углеводных компонента и тринадцать аминокислот. Наиболее полно углеводные компоненты представлены в цер-викальном секрете. В количественном составе гликопротеинов секретов шейки, рогов матки и яйцепроводов неизменным остается только гексозамин» '

8. Основой механизма изменений количественных показателей гликанов гликопротеина секретов гинеталиев коров во время течкп является активность ферментов, в частности, бета-галактозидазы, бета-нейраминидазы, бета-глюкуронидазы и гиалуронидазы.

9. Состав гликопротеина цервикалыюй слизи у коров претерпевает заметные изменения в начале пастбищного периода (май-июнь) . В это время в цервикальном секрете уменьшается количество фукозы и сиаловой кислоты, что совпадает с массовыми перегулами

.сорои. Изменение количества олигосахаридов в гликопротеине связано с присутствием прогестерона в организме животных.

10. Установлено уменьшение линейных параметров головок снер-мнев быка после извлечения их из рогов матки через 4-й ч посла осеменения коровы. Такая ;хе закономерность имела место и в яйце-проводах, если спермиев извлекали через 6 ч после осеменения.

11. Во время охоты у коров в яичниках диагностируются твердые, упругие и флюктуирующие фолликулы различных размеров. В это 'зз время у штотных (7-15,7,«) пальпируются постовуляциошше изменения на месте овулировавших ф-олликулав.

12. Введение спермы в краниальный участок рога матки позволяет снизить осеменительную дозу, при увеличении числа спермиев, достигающих яйцепровода по сравнении с цервнкальным осеменением. Внутриматочное осеменение коров через 1-3 ч после овуляции позволяет повысить стельность по сравнении с цервпкалыши осеменением

• на 42-46;^. Экономический эффект при продуктивности 2900 кг молока на одну корову составляет 68 руб. Общая экономическая зффек-■ тивность при производственном испытании составила 2844 тысяч рублей.

13. Впервые предложена технология замора;швашш спермы с использованием стерильных полистироловых пипеток герметизированных в одноразовые упаковки. Это позволило использовать их в качестве тары для хранения спермы и как осеменителыши инструмент для асептического осеменения коров. Применение данной технологии позволило повысить эффективность осеменений коров.

14. Предложен метод оптимизации солевого и незлектролитного компонентов в синтетической среде с использованием компенсирова-

' ния гипотонизирующего действия глицерина па спермиев быка. Разработаны рецепты синтетических сред для разбавления спермы быка

с использованием лимоннокислого натрия, гликокола, глюкозы, сака-розы и лактозы.

15. Разработан способ сохранения спермы кобеля при 2-4°С. Сперма при этом сохраняет оплодотворяющую способность в течении Б суток, что позволяет транспортировать ее в любой регион страны и эффективно осуществлять желаемый подбор пар.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРИШЮНЕИМ

1. При морфологическом и гистохимическом исследовании придатка семенника у бш:а рекомендовать использование зональной классификации этого органа, основанной на величине просвета п форме канальцев, клеточном составе эпителия, а также еодерг.аки" п распределении в нем аминокислот.

2. С целью длительного сохранение физиологических свойств спермы быка при 2-4°С, рекомендовать использование для разбавления свежевзятой спермы .синтетической среди следующего состава: вода дистиллированная - 100 ил, глпкоза - 0,6 г, цитрат натрия -2,52 г, желток - 20 мл, непициллип - 75 тыс.сд., стрептомицин -75 тыс.ед., стрептоцид - 0,12 г. Спер;,1а, разбавленная этой средой, сохраняет высокую оплодотворяющую способность в течение трех су- . ток.

3. При использовании неэлектролпгпо-солевцх сред для разбавления спермы бнка йЪрод замораживанием рекомендовать слсдуыацю составы: воды - 100 мл, желтка 20 мл, глицерина Ю гл, 3,36 г цитрата натрия с 0,74 г гликокола (или 3,45 г сахарозы); 3,78 г цитрата натргл с 1,72 г лактозы (или 0,9 г глюкозы). Использование этих сред позволяет продолжительное яретдя сохранить ¡¡-из и оптические сьоГ.стга спермы.

Технология рао^о сопки, замора-;пвливд спермы в полистирол;)

ошс пипетках включена в "Инструкции по организации и технологии работа станций по искусственному осеменению сельскохозяйственных животных (1£6В г.) и "Инструкцию по искусственному осеменению коров и телок" (1360 г.).

4. Рекомендовать оттаивание необллцоьанных гранул спермы трехступенчатым методом. Гранулу, извлеченную из жидкого азота, помещают последовательно на 2 с, I с в емкости с цитратом натрия (40°С); в третьей емкости (флаконе, пробирке,- ампуле) производится дотаивание спермы. Такой способ оттаивания позволяет уменьшить количество сорбированных на поверхности гранул микробов

в 7 газ.

5. В начале пастбищного периода у коров рекомендовать пятикратное инъецирование 50 мг прогестерона в течение 5 дней через

29 дной после осеменения, либо вцпергявогь- их в сюйлових условиях в течение 5 дней через -7 или 29 дней после осеменения. Это позволяет повысить количество стельных коров и увеличит экономическую эффективность осеменений.

6. С целью оплодотворения коров в охоте, на яичнике которых пальпируется послеовуляционная клш, рекомендовать осеменение животных в краниаиышй участок рога матки со стороны овулиро-вавпего фоллжулп. Осеменение можно проводить л при кранио-цервп-кальном положении конца осеменительной пипетки, сочетая это с умеренной ппстнллкцией спермы при распрямлении рога матки. Про- ■ цент стельности при огом достигает 67-71 по сравнению с 25/2 при цервикальном осеменении.

7. Для разбавления первых двух фракций спермы кобелей рекомендовать среду следующего состава: дистиллированная вода -

100 мл, глюкоза - 0,6 г, цитрат натрия - 2,61 г, желток - 20 мл, тнтгпиллин и стрептомицин - по 75 тнс.ед. сперма, разбавлегщая

этой средой, сохршикт оплодотворящую способность при 2-4°С в течение 5 суток.

8. Основное содержание исследований опубликовано в следующих работах:

1. Успенский А.Н. Замораживание семени быка в полпстироло-внх пилотках // Животноводство. - 1965. - ¡ь 3. - 0.74-75.

2. Успенский А.Н. Среда с гликоколом дня разбавления се мен г. быка перед замораживанием // Молочное и мясное скотоводство. -1965. - 6. - С.59.

3. Успенский А.Н. Режимы замораживания при различной расфасовке семени быка // Говорят молодые ученые: сб.научн.тр. - Т.2.-М.: Мосдовский рабочий. - 1956. - С.107-П1.

4. Платов Е.М., Успенский А.Н. Сохранение функции сократительных элементов живчиков барана при высушивании семени // Доклады ВАСШ1Я. - 1967. - С .35-37.

5. Изучение эффективности различных методов замораживания семени быков / Хабибуллин Х.Х., Успенский А.Н., Турбин В.Ф., Песковатский А.П. // Еивотиоводство. - 1968. - 6. - С.76-77.

6/Платов ЕЛ,Ь. Успенский А.Н. Действие замораживания спермы на содержание фосфолипидов в сперматозоидах быка и барана // Доклады советских ученыхщ У1 международному конгрессу по размнож. и иск.осем.с.-х.жрвотиых. - М.: Колос. - 1968. - С.47-48.

7. Успенский А.Н. Опаловая кислота в сперме сельскохозяй-ствеиннх животных // Доклады советских ученых к У1 международному конгрессу по размнож. и иск.осем.с.-х.животных. - 1.1.: Колос. -1968. - С. 142-144.

0. Успенский А.Н. Уровень н.еГ.рамнновой кислоты при сохранены, семемт ;:,п\тгинх // йсстиик сельскохозяйственной науки. -

г ... г то. - с.90-Ю1.