Цитологический и биохимический анализ реакции ядерной оболочки гепатоцитов на облучение

Мирхамидова, Парида

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Цитологический и биохимический анализ реакции ядерной оболочки гепатоцитов на облучение
ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Цитологический и биохимический анализ реакции ядерной оболочки гепатоцитов на облучение"

АКАДЕМИЯ НАУК РЕСПУБЛИКИ УЗБЕКИСТАН ИНСТИТУТ БИОХИМИИ

• < о я

2 е пРавах рукописи

УДК 576.315.2 + 577.334.616 : 591.436

МИРХАМИДОВА ПАРИДА

ЦИТОЛОГИЧЕСКИЙ И БИОХИМИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ РЕАКЦИИ ЯДЕРНОЙ ОБОЛОЧКИ ГЕПАТОЦИТОВ НА ОБЛУЧЕНИЕ

03.00.25 — Клеточная биология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Ташкент — 1994

Работа выполнена в лаборатории структурной организации биологических мембран Института биохимии АН РУз и в лаборатории биохимии Института биологии развития РАН им. Н. К. Кольцова.

Научные консультанты: академик РАМН —

И. Б. Збарский,

заслуженный деятель науки РУз, лауреат Гос. премии РУз им. Беруни, академик АН РУз— Д. X. Хамидов, доктор биологических наук, профессор А. К. Мирахмедов.

Официальные оппоненты: доктор биологических наук"

Л. А. Муртазаева, доктор биологических наук, профессор К. Н. Нишанбаев, доктор биологических наук Г. Хожиахмедов.

Ведущая организация: Институт цитологии РАН.

Зашита диссертации состоится «» 10Д4 г.

в « Уч 1ЙУ» ч. на заседании специализированного совета Д 015.16.21 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук при Институте биохимии Академии Наук Республики Узбекистан по адресу: 700143, Ташкент, ул. X. Абдуллаева, 56.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института биохимии АН РУз.

Автореферат разослан « » 1М4 г.

Ученый секретарь специализированного совета доктор биологических наук

С. А. БУРХАНОВ

ОШЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ'

Актуальность проблемы. Клеточное ядро является центре», ^егулирущйм рост и развитие клеток 51 всего организма и играет важную роль в процессах эмбрионального рззгития. Одна из функций. ядра заключается в направления и осуществления кардинальных процессов жизнедеятельности - рост, размножение и ди^ерен-пировка клеток п ядра в значительной степени определяют Функциональные особенности органов и тканей. Соответственно, гшруиеггяя в ядерном аппарате имеют мосто при бесконтрольном опухолевом росте, наследственных болезнях, тропических нарушениях ткзнэй. Поэтому детальное изучение структуры л функций клеточного ядра, его.организаций я взаимодействия его ультраструг.тур представляют первостепенное зночонпо в биологических исследованиях (ЗбарскпЯ;, 1973, 1388; Збарс«лЛ, Кузьмина, 1991).

Ядерный аппарат отдепок" от цитоплазмы ядерной оболочкой, которая выполняет многообразные функции .в ядорг.<о-дптопдг?зг.«згр-ческрх огнопкжячх (Збарскпй, 1969, 1972, 1980; Ггяпкв , 1974). Ядерный матрвхс управляет кардпнзчышлп биологическими процессами роста, развития а клеточной дпМ-оршщировкп (ЗбзрскяЯ, Кузьмине, 1951).

Поэтому но подлежит сомнении, что "цегнй ряд патологических взменеялй, связанннй с нарушениями роста, развития и регуляция метаболизма, отражается на морфологии ядра я его ФункцпЯ (Збарский, 1991). К таким вадем патологии относятся лучегаю поражения.

В современной концепции биологического действия ионизирующих излучений основная роль отродится порз'эечостя уипкалкпгс структур меток и, в первую очередь, ее генетического пшгаратг •(Кузин, 1973; Рсканцэв и др., 1960). Воздействие пояпзйрзрптх йзлучег.гй ип ядррнул оболочку мэ^ет нарушать $звшод?Пстгпо ядра е. пптоплзчт:с??, из.мепвть ропогторяне йугтсизп ядерно"? оболочки, нарушить г.р'кгп.з-мость ез меггбрзк (Кузин, 1973).

Раливсвстше пограадшшя ядорпоЯ оболочке могут иметь серьезные яоедедет?"«» для хчзнедеягагьпоогя клэтка п организма, Исходя чз этого, зесявдоваия9 радиационных повреждений ядррно?': оболочки я.чяяетоя одней из важных задач радиобиолог?:".

Наиболее радиочувствительным в онтогенезе является эмбриональный период. Облучение зародыша иле плода мяэкбпитзицих дака в относительно малых дозах (от 0,01 до 0,2 Гр) гызывает отклонение от нормы, развитие дефектов й уродств (Еодамша и др., 1960). Представления о причинах изменений чувствительности к действию ионизирующей радиация, наблюдаемых в ходе эмбрионального в постнатального развития животных организмов часто противоречивы.

Проблема радиочувствительности организма в своих основных чертах является.клоточной проблемой. Наиболее часто радиочувствительность метки связывают со. степенью пораяения ее генетического аппарата.

В связи с этим представляют значительный интерес научные исследования влияния ионизирующих излучений на структуру и функций ядерной оболочки печени в период беременности и эмбрионального развития. •'..'■.'

Б настоящее время широкое использование атомной энергии в промышленности, технике'и научно-исслсдоватольскйх учрежден наих, а также применение различных источников ионизирующей радиации в медицине требует обеспечения безопасности как людей, работающих с источником излучений; так и всего населения. . ■

Большинство известных радиопротекторов весьма токсичны и вызывают глубокие изменения структуры «функции мембран (Коломийцева я др.Д985). "

Поэтому острая потребность в более эффективных и менее. токсичных радиопротекторах, необходимость их целенаправленного поиска и'синтеза, выяснение механизмов рьдиозащитного действия, в частности, выявление вклада структурных перестроек мембранных систем клетки в реализацию радиозгЯцмтного эфгё'кга стимулировали работы по исследованию разнообразных синтетических и природных соединений. .

В связи с этим, проводили поисковые работы с биологически активным веществом - молозивныы фактором (Мф), обладающим, радиопротерюряыми свойствами, выделенным из молозива коровы в лаборатории клеточной биологии Института биохимии. А.Н РУз (Арипдаанов й др., 1993).

Целенаправленный поиск новых эффективных: средств защиты

организма от лучевого пораяения в значительно!'! мара должен базироваться на результатах изучения механизма действия ионизирующих излучений на организм яивотннх.и быть напеленннм на выявление тех его звеньев, где может бить осуществлена радиационная замдата.

Цель и задачи исследования. Выяснение всех вшзо порочпелшь ннх вопросов является чрезвычайно актуальным для более глубокого понимания механизма действия радиации на структуру п функция ядерной оболочкй клеток регенерирующей и интактной почони, а такав в период беременности и эмбрионального развития., В, связи с этим, в настоящей работе били поставлены следушгие задачи:

1. Изучить действие рентгеновского облучения на структуру

и функции ядерной оболочки клеток ре генерируйте и и иптактно;: печени крнс посла облучения in vivo и in vitro,

2. Исследовать влияние ^-облучения на структуру и функции ядорно/i' оболочки печени беременных крис и их эмбрионов, облученных на различных сроках öipcufjHKooTii и эмбрионального развития.

3. Исследовать влияние 'М>, обладающего радиопротекторцими свойствами на структуру и функции лдорной оболочки печени облученных животных.

Научная новизна результатов исследования, теоретическое. практическое значение рабоп-;. В результате проведенных электронно-микроскопических исследований показано, что мембраны ядерной оболочки являкЯся радиочувствительными структурами при облучений животного и при облучении изолированных.ядерных оболочек in vitro. Показано, что при облучении изолированных ядер , in vitro мембраны ядерной оболочки радиореэпстелтны.

Впервые показано, что поровке комплексы при облучении in vivo более устойчивы к действию радиации, чей мембранные структуры ядерлоИ'оболочки. Уменьшение числа поровых комплексов на периферии ядра при тотальном облучении крнс в дозе 8 Гр, сопровождается нарушением транспорта ¡леченого белна из ядра в цитоплазму.

Кяеточгшэ ядра гопатоцктов беременных крйс" й эмбрионов являются радиочувствительной структурой при воздействии облучения в дозе 2 Гр во все сроки беременности и эмбрионального развития, чувствительность организма беременных животных к воздействию облучения зависит от срока беременности и развития эмбриона в m'omsht облучения.

Показано, что повреждение ядерной оболочки гепатоцитов берэ-менных крче и ;:х гпбрпочов поело облучения животного сопровогаиот-ся яокотир.пиел продуктов перокисного окисления липидов л угнотени-

ом актишюсти. аомбриносвяиашшх фирыннтоа (ццгохром-с-окоидаза, НАД. Н~цп гохром-с-родуктааа).

Показано, что скорость мишчотш -ий'пюищщ и билкн поио-ш; оказалась нииболио высоко;; «о фракции ядерного катрикса, что оьвдитольствуот о шсокоИ скорости кругооборота ого белков па веса сроках бороисшюсти. НосОоЗразошшю' белков ядарного матрикса относительно глубоко нодаыштсн при тотальном ^-обдуч.нпш.

Ьиорвио показано, что М, ьпдолошшЦ из молозива коропи, обладает радиозащитннй эффектом при введший; и дозе Гмг на грамм массы тола за 30 мин до облучения с последующим введоциом препарата после облучшшя доз ой Ь Гр в точенй'- чотирох дно И повшлаи? итишаемость крис,

Нво донна жпьи'шш ¡.И' до к поели оолучепия нормализует изменения структуры ядер, 'иорикшюо окислшшо лшшдов и активность формантов (гщтохром-с-окскдаза,' ^-^-МЧ-аза, ШКаза), ассоциированию с ядорлой оболочкой клеток почшш крлс, визьашшо облучений л. •

Показано, что антиокиолитилышо уерыентние системы дотежеи-кации клеток .печени (супароксидидоиу^аза, улутатионредуктаза 1> митохондриях н ышфосотх) чу#оттталши к лучиьоиу гьпде шр; 1Л1> проявляет протииодуччъой ь сшзв с этнн у крнс, полу-

чавших ¡¡¡¡< до и после, обдучшнш глутатиоиродуктааиая л еупирокерд-диалутазнап активность- в млтохоьдрня.с и шкрошлах нчрутона н ш-н ьшо й ото пони, чои у. ойдучонкич киьоч ши.. ¡С Зи-и суткам после облучения активность этих, тиршнтон "колиолотся ь продолах нормы.

Морфологически« и биохимические исследования укаг-ашают, что Мб сшшаот у Оорвшшшх-жадютиих тераготолиш" э(/|«кт ионияирующо-го излучения, пройьляот заадитиоо действие, при его ш.*;.;- . до и посла ойяучомш на 13-о и 17-а • сутки берошшюйти. и оглбрщушыю-го развития.

На основании полученных дашшх пролдо-ксна схима ицилпненкл !.и> ь качество радиопротектора.

Результат! исследоиати; позволяет 1'лубне проникнуть в понимание рашшх механизмов действия ионизирующей радиации, дополняют современные щедставлшиш об одной из шашх прошлом радиобиологии - действия радиации на ялгкшшх и изолированные структур» клеток.

Проблема радиочуветлитилыюсти дирамошшх организмов и их вибрионов откосится и числу центральных в рашобнолошп. Тоорети-

тоски по аспект непоародстпмшо спчзап с разработкой нокоторшс рап.ио^пчогг.'чрскюс вопросов, тпкпх как" чувствительность яяпр клеток ппплчи л период (Гпромонности я эмбрионального раэгптгя й различным шшанш по?яп1стш»чм.

Получошшп ДППННО ГПУНЫ ЛЛЯ ПОНРГПИИЛ путоП ('-ормкроплияя рПДЛЛ!тонного пэрлжоиия КЛ11ТОК Я í.-пгут пл"тн npi!."OHO!Iim при рояо-пли ?алпп модггТгкапия рпдиочувстпп?о.льпости, п тапяя при разработке проблем их коррекции. Прлкппрскоп тпоипо работы нопссродст-всино связано с рг^о!П'~ч актуальных рндпч: засипи от тяднпшгслно-го поражения и ог-о профилактики. Исечадоплняе порокиенсгп ояисла-

(!!!Я ЛП1ГЯЛОВ я 1Г6ТНПХ Г>КСПЙ]Ч'!'.|ЧГГа."7..Ш;х ЖИВОТНЫХ г.'ОТОТ fílITb иппо-льзевано К8К nponnponiülil ТПОГ при ПОПСЯО И ПСПНГ1ШМХ IIOP'CC сродстп ПОЩПТ1! ОТ ДОйСТР!ТЯ КОПППг'П'.'ГГ'ПГО иплучпиич.

Апробация работы. Прсдстпплштип в лпссчртпшш результаты бнлп долочопн на различных роспубликлнских, рсгсотнчх и поясукН-родннх съоздчх, citwyinyrra и ксн^прошшх, в топ число:-на X Рспсопзяоп рчдпоЛяологйчпокдм с.падо (Иупипо, 19Я9); на X Веа-согоиом окшояпуг.м "Структура п ñ-jmmut клеточного ядра (Гродно, 1900); па I Вслсоюзиол симпозиум> "Мо-окулчрио-ллоточинп мохаяяэ-ш хроничрекого (ппоя:нпго и внутреннего) действии логширукппк íf3~ лучршй! нп биологические оистпми (Иущичо, Т900); на 20-ой конфп-ренюн! Федерации Европейских биохимических общоотв (Будапешт, 1990); на 3-пг ЕпропоЯскзм конгресса клоточйоЛ бпоюгци (Флоренция, 1900); на У-оЯ кснТорочкпн биохимиков Сродно!! Азии п Казахстана (Ташкент, 1991).

Публ.чкашш. По томе диссертации опублпкоално 30 работ. Дяосертацпонкно штеряалч тдачоны в моногрпТчи "Действие факторов внешней среди на клеточнэо ядро" (Мярахг.»пдов, Мпрхомядова, Сагатова, Азимова // Фан, Ташкент. - 1990. - 132 е.).

Объем и структура работ;:. Диссертация состоит из введения, обзора литературн, описания материалов и методов, результатов С0бСТЛ1Я!ШХ ЯОСЧОЯОРШ1П1, обсу-гдонпл результатов, выводов п списка датируемо? Л'?г<?ра?ур7, Работа пзлехепа на 290 отраняцах, ял-дгетриропяпг. по рисунками и 7 таблицами.

okoiifp ш.гштлтт часть и.

В работе испод*чоялли ггечонь белых крче самцов .Uster весом 100-150 г, а такее почеч*-. ярю 10-20 чпоов (период начала

6' -

интенсивного синтеза ДНК) после частичной гепатэктомии по методу Хиггиаса и Андерсона (1931). Животных подвергали облучейию на установке РУ11—20Ü в дозах 0,5, 1,5, 3, 4," Ü, 15 Гр (при режиме 250 кв. силе тока 15 ма, фильтре 0,5 ш Cu+ 1,0 юл AI и мощности 0,526 Гр/мин). При изучении действия рентгеновского облучения на структуру клеток изолированных из печени-ядра, ядерные оболочки, митохондрии, их облучали рентгеновскими лучами в тех ко условиях, но при 4°С в дозе 1,5, 4, 8, 15 и 50 Гр.

Лля проведения исследования струк-гурно-^ушшиоиальних изменений ядерной оболочки печени беремешшх крис и их эмбрионов животных подвергали тотальному облучению (на ^-установке при мощности доэи 0,0233 Гр/сак). Крис облучали в дозе I и 2 Гр на 3-й, 13-не и 17-ие сутки беременности соответственно; облучению in utero подвергались и их'эмбрионы на 3-й (имплатациошшй период), 13-не (период органогенеза) и 17-ие (плоднии период) сутки эмбрионального развития. Исследования проводили на 21-ие сутки беременности.

В работе использовали биологически активное вещество - мо-лозившш .фактор (My), вцделеннин в лаборатории клеточной биологии Института биохимии Ail РУз.'ЭДФ - это низкомолекулярнце компоненты молозива корови ранних сроков лактации, содержащий нпзкомоле— "ухярныв полипептида (м."в. около № кД), липиды, углеводы, нукляо-тиди и неорганические соединения (Арипджанов и др.,1903). I иг сухой навески препарата содерялт 200-250 мкг белка (полшшптидов), 40-45 мкг углеводов, 20-40 мкг нуклеотидов, 1-3 ккг липидов. Широкое колебание количества компонентов зависит от сроков лактации. Проводили поисковые работи с Ш>- для внявлания его радиопротекторных свойств. При введении M до и после облучения в дозе 8. Гр были проведенн исследования критерия.выживаемости крнс. Первую• .^упку крис облучали на ^-источнике 60Со в дозе 8 Гр (мощность дозы -0,0233 Гр/сак). Второй группе крыс за 30 шш до облучения и ежедневно в течение 4 дней после облучения вводили подкожно ЫФ в дозе I мг на грамм массы тела.

Клеточнце ядра изолировали по методу Biobei and Potter (1966) в модификации Кузьминой и др. (1976). Ядерные оболочки получали пооредбтвом осмотического шока изолированных ядер в гипотоническом 0,01 М'фосфатном буфере, pli - 7,2 с последующим диф-

ф-з'ренциальшм центрпй/ггфовч.чием. Изоляция мятсхондриЯ осп свана на йетйде дч$фзрзнциального цонтри^угироазнш!. Для алектропно-мвкрссяшэтеского. исследования изолированные. структуры фпксирова-лп 2,5% глютарошгм альдегидом на О,Г H фосфатном буфера, рН-7,4 с последующей дофиксаплей 1% OsO^. п обззвожепннЯ материал заливали 'в смесь эпон-аралдят. Экстрагат лптщсз из ядер проподялл, как описано в работе Мэдди Э, (1979), содортанио диенов и диенко-тонов определяли по методу Мялина и Чернавппа (1979). Цптохром-c-оксгаюзную активность определяли споктроФотдаетрппсски по скороа-ти окисления восстановленного дитионитом цятохрома с (. ïonetnni, I9S7). НАД.Н-питохром- с-родуктазнуго активность определяли по мэ-тоду Mahler (1955). НАД.iï-оксидазнул активность определяли полярографическим методом ( Loncmuir , ISS3; Сое ., 1965). ы&г+ -зависимую АТРтазную активность определяли по.методу Hays and вег-land ( 1966}. РНК-азнув активность определяли по модифицированному методу Скрпдоненко и соавт.- (1975)* Ядерно-цятсплазматпческкЯ транспорт РНК изучали в скотоме, как описано в работе Коэн и Збарский (1978). Электрофореткческие исследования белков ядер и ядерного татрикса проводили по методу lacaeli (1970). Общее содержание белка определяли по методу Lowry at al. (1951)•

_ РЕЗУЛЬТАТЫ COECTBEIIIb'î НСС.Щ08ШЙ

Глава I. Действие рентгеновского облучения на структуру й функцию ядерной оболочки регонсрйрузэдзй печеня

ДеЯствяа .облучения. на.ядерную оболочку пр.я чения Урас. В течение первого часа посла облучения ирцо через 1Я-20 часов после частично'! геиатэкго'/Ш (в начала s периода клеточного цикла), повреждения периферии ядра найлгдагтся ужо при действия облучения в дозо 0,5 л 1,5 Гр: нару.тгяал мембрана ядерной оболочки в отдельных ядрах торяот чйткпэ контуру, перпнуклеарнов пространство расширено. Отмеченное-повреждения мембран ядерной оболочки не сопровождаются язменевгоот в псразнх кошлекоах. Прсг тотальном о'блученйи крао рзнтгейовсккмй лучами в дозе 4 Гр наблюдаются более глубокие морфологические изменения в ядерной оболочка. .Повреждения выявляются .как через 30 мот , так и через 60 мин после облучения.'Наиболее характерны изменения наружной мембрана ядерно? оболочки, которая у частя ядер представляется "разлитой", .

•теряет четкиз контуры; на отдельных участках ядра она 'Лообвд но прослекгазается; нарукнак к внутренняя мембраны я^ярной ббалочки образуют, соответственно, выпячивания if впячившшя, внутренняя мембрана образует глубокие инвагинации. Перинуклеарное пространство расширено в-большей степени, чем при облучении дозами в 0,5 и 1,5 Гр. Однако, на поровио комплаксн облучение в дозе 4 Гр также не влияет; one сохраняют свою структуру, а число их на периферии ядра остается высоким. Летальная доза облучешш вызывает более глубокие морфологические изменения ядерной оболочки. При летальной дозе облучения крыс изолированные ядра деформированы, Много ядер с разрывами наружных и внутренних мембран. Большое колачаст-т во ядер на обширных участках лииенн ядерной оболочки. Встречаются полностью разрушенные ядра. Поринуклеарноэ пространство сильно расширено, выраяэгш очень глубокие выпячивания и инвагинация ядерной оболочка. После тотального облучения ннвотного в дозе 8 Гр на периферия ядра видны немногочисленные норовив комплексы. В некоторых перовых комплексах можно отметить нарушения структурной организации - митральная и периферические гранулы теряют чат-кие контуры. Дальнейшее повышение дозы облучения усиливает глубину и размеры отмоченных повреждений момбран ядерной оболочки и приводит н существенным поврзвдонияи порових комплексов. При по-внаении дозы облучения дЬ 12 Гр порозце комплексы исчезают.

Таким образом, при тотальном облучении гепатэктомярованных крыс достаточно быстро, в точение первых 30-60 мин, в мембранах ядерной оболочки развиваются очаги поражения.

Действие радиации на ядерную оболочку при облучения изолированных ядер in vitro . Облучению подвергали ядра, изолированные из регеггврирувдоЯ печени и для сравнения из иятактной печени крысы, которая считается радиоустойчявой (Creasej mid stocken,l960).

При облучения in vitro интактных ядер и ядер, изолированных из регенерирующей печени крысы, возрастающими дозами до 50 Гр видимых морфологических изменений мембранных структур ядврноЗ оболочки не обнаружено. Обе кембраны ядерной оболочки хороио прослеживается, имеют четкие контуры. Норовые комплексы сохраняют свои структурную организации. Ь норовых комплексах видны центральная и периферические гранулы и их число на периферии ядра не уменьшено как при облучении в дозе 15 Гр, так и в дозе 50 Гр. Видимые изиэнения при зтих дозах облучения связаны только с хрома-

тоном, который концентрируется'вдоль.ядерных оболочек. Такта образом, при облучении in vitro изолированных интактных ядер и ядер из регенерирующей почени крысы, мембраны ядерной оболочки являются радиоустойчивкми структурами, мор5ология которых хорошо сохраняется да~е при высоких дозах облучения (таких как 50 Гр).

Действие радиации на изолированную ядернуто.оболочку. При постановке этих опытов ядерные оболочки изолировали из ядер клеток илтактной печени. Через 30 мин после облучения в дозе 4 Гр мембранная структура изолированно;'; ядерной оболочки теряет четкие контуры, появляются однородные гранулы размером 15 нм. Многие мекбранн распадаются на отдельные гранулы. При облучении изолированных ядерных оболочек более высокими доза!,ж рентгена образование гранул на месте мембранных структур нарастает.

Таким образом, облучение изолированных ядерных оболочек in vi tro показало высокую их радиочувствительность, тогда как при облучении изолированных ядер in vitro мембраны ядерной оболочки радиорезистентш.

ДеИствиа облучения на ЧАД.Н-нитохрон-с-^зге/ктазшга п цито-хром-с-окс;1дазла^К1._а?;;тпвность ядер_пр_и yivo .

Поскольку НАД.Н-цптохром-с-реяуктаза ц шггохром-с-оксидаза, фер-м.ентн цопи транспорта электронов связаны в клетке с мембранами митохондрий, изменения их активности в-ядерной оболочке изучала сопоставлением их с соответствуете!-«! изменёйкямя ферментативной активности митохондрии. Через 30 и 60 мин после облучения крыс с регенерирующей печонью цитохром-с-окепдазнал активность угнетена как в ядрах, так п з митохондриях (рис.1 А, Б), Через 60 мин поело облучения кркс отмечается глубокое угнетение цитохрем-с-оксидазной активности з ядрах ужо при действии доз 0,5 и 1,5 Гр. При облучении крыс дозой в 0,5 Гр цитохром -с-оксидазная активность ядер снижается на 35^, при дозе 1,5 Гр - на 60£, Дальнейшее увеличение дозы облучения до летальной не сшпает уровень ш-тохром-е-оксидазной активности в ядрах (рис. Í В).

Таким образом, цитохром-е-оксидазнач активность при тотальном облучении крыс рентгеновскими лучата угнетена, как в митохен-. дрпях, так и в ядрах и зависит от дози облучения. . "

НАД.Н-цк'гоуром-о-редуктазкад активность в ядрах, изолированных как через 30 мин, так и через 60 мин после тотального облучения крыс остается практически без изменений при всех дозах от 0,5 до 15 Гр,

Рис. I. Цитохром-с -оксидазная активность ядер и митохондрий,. изолированных из регенерирующей печени крнсц через 30 мин (А) и 6Р мин (Б) поеде тотального •облучения. Цитохром-с -оксидазная активность ядер - 15,6? нмояь/аин. мг белка, митохондрий - 224 нмолъ/ышц мг болка не облученных гепатэктомироаанч йейс крце. За 100$-приняты цитохром-о -оксидазная 'активность ядер в митохондрий необлученних гепа-тэвт&.шротшпУх крае » —.—_ ядра, ■'. — г-- митохондрия

Действие облучения на ^арментаттакуа активность ядер пр% облучении in vitro. При .облучении in vitro ядер в дозах,от .1,5.. до 50 Гр, НАД ^-цит охр ом-с -редуктазнал активность колеблется в пределах.контрольных величин, " .

1 цитохром--с -оксидазная активность в ядрах изолированных из пвчони дрис'через IÖ-20 часов посла частичной гепатзктомда и %арез 30 мин после облучения in vitro снижается по мера ррвчиа-нкя Аоэы облучения. В изолированшве и облученных in vitro ядргос цитохром-с -оксидазная активность понижается на 40? при действии от 1,5 до- 4 Гр н существенно не изменяется при дальнейаем повышении дезн облучения до .50 Гр.

Таким образом, цитохром-с -оксидазная активность является более чувствительным показателем радиационного повреждения' мембран ядер при дблучеила ад in vitro и виявляат нарушения (.тамб-ранной структуры, которие нам на удалось наблюдать ыор$ологичво-аи.

Влияние облучения на транспорт балка из ядра л бпсклеточ-ной системе. По современным представлениям транспорт внсокомоле-куляргшх соединений из ядра в цитоплазму связан с поровш.ш комплексами.

Быио било отмечено, что. при облучении крно летальными дозами рентгена, на периферии ядра уменьшается число порових комплексов и отмечается сегрегация их от мембран ядэрно!! оболочки.

На основании получонннх д'аннпх нам казалось интереонш проследить транспорт-молекул белка в беоклеточной системе интакт-ннх ядер, обработавших Тритоном X-I0Q, т.о. лпшешшх ядерно!! оболочки, и из ядер после обучения in vivo в дозе 8 Гр.' На рис.2 представлен» вршкю транспорта бплка, меченого 311-<1)енилаланпном. Видно, что наиболее интенсивно транспорт белка идет в течение первых 5 мин ¡шкубмцш и сущосгв'ошо зависит от условий инкубации. При 0°С в течение первых 5 мин инкубации из ядра выходит 5-6!í белка; последугпач инкубация не аншет на транспорт белка из ядра в бесклеточноП системе.'

Гпо.2. Транспорт белка из ядер, изолированных из регенарпрук'дец печени крнеи (I), из ядер.пгаин-кубпрованннх с и,5:.' Тритоном 1-iuO (2) и ядер, изолированных через 60 млн после тотального облучения животного п доза 8 Гр

(3).

403020" ГП

инкубация при 0°С.

—|-1-1-г

5 10 20 30 шщ

Анализ кривых транспорта 'балка "из "ядер, 'изолированных из рогонерирутжзй печпни крнсн до'(кривая X) и после (кривая 2) обработки свидетельствует, что Тритон л-100 не влияет на скорость выхода белка из ядер. Однако, уменьшение числа поровых комплексов после облучения крнс уменьшает.скорость.выхода белков в два раза (крива? 3). По вядпмому, транспорт белка из ядра в цитоплазму связан с поровши комплексами ядерноГ; оболочки.

Глава 2. J! ей стало ^'-облуч-пш на структуру ц

«ЛОР»Ой 050л0чкн ПОЧ01Ш copomohüuv itfuc я, их OUÖpüOHOIJ

При облучении в начальные срок;: (на 3-й сутки) поели онло-дотпороти пшотного в конце баромсшностн (па 21-е сутки) отмочены морролегичоедиэ г.эмпиишы в ядрах иочони: возникают шшаги-пации ядерной оболочки, иорпнукллрноо пространство расширено, нарушая мембрана ядерно!! оболочки теряет четкие контуры, на от-дольних участках ядра она но проелошш&отоя. Недодается очош. плотная пуклйояротеинспгл есть, лдршо как прлвило крупное, фибриллярной, алоктроншш микроскопия ультратонких срезов измельченной ткани пачвня крои на 21-е сутки Сароменности облучон-Hoii y-лучп.ми на 13-а сутки баромошюстн d дозе 2 Гр тато свидетельствует об изменениях ядерно;! оболочки: наружная мембрана выглядит более рнхлой, местами она но прослеживается. На некоторых срезах после облучения крыс в этот срок боромошшети выявлены нез-начитальные инвагинации ядерной оболочки. Морфологические исследования ядер печени крыс на 21-е сутки после тотального облучения животного ¿'-лучами п дозе 2 Гр на 17-е сутки, беременности пока зывают, что ядра имеют округлую ijср-:.г/, в ядерно!"! оболочке хорошо прослеживаются наружная и внутренняя момбранп. Четко выражена тонкая внутриядерная фибриллярно-гранулярная сеть, которая связывается с ядорноГ; оболочкой.

Исследованы также ядра печени гмбрионов посла тотального облучения in utero в различные сроки эмбрионального развития. На ультратонких срезах измельченной ткани печени о.чбрлонов, вндолен-нои на 21-е сутки развития (конец эмбриогенеза) после облучения in utero У -лучами в доза 2 i'p на третьи суткц. развития (ими-лаитационнын период), наблюдаются случаи инвагинации ядерной оболочки. Наружная мембрана ядерной оболочки местами отсутствует. 1'етерохроматин рассредоточен по всему ядру; ядрыако неправильной формы, фибриллярное.

Морфологические изменения отмечены также в ядрах клеток печени эмбрионов,) облученных in utero в дозе 2 Гр в период органогенеза ЧЗ-е. сутки развития)оболочка ядра сохраняется, однако наружная мембрана ядерной оболочки но имеет четких контуроп. Достаточно выражены поровые комплексы. 13 ядрах. выражен фибриллярно-гранулярный гетерохроматин. Периферический хроматин конден-

тз

СЛроваН .

Поело Ç&ly4«!ttt4 nnÖpncnOB in. utero ^-лучами в до зо 2 Гр на 17-0 сутки Р*.?Г:1ШИ (плодкпз порпод) В йопщз Гтбр!!СПалИ!ого развктяя 121-0 сутка развития) на ультратоикго: сразех ткани пвчч-нп р иекоторнх ядрах на порп.Тсрия вшшп углубления и выступи, ядерная оболочка склошга к впвагтипплм. Наружная п внутренняя ксябргш лдпряоА сболочкя четко контурпразаии, Наблгдается уплотнение п утолщонио впутррлдорноЗ фвбрюшлрио-гррпуллрпоЯ Сети, tí 60jlt!4[wctb9 яд<зр лидии сельпо развитие или »•яогочпелопшго ядршп--!tn.

Таким образом, проведемте рлоктронпсмпкросксйячоскпо по-следапявяя иоклзивгот, что у «птрря и у рмбрвоиа няпболоо рцражеп-йне иэмояепгя г ядрах наблюдаются посла облучения л !»л!лаятаодои-исм периоде т.е. на тротйЗ день боромсппости.

Ппрпкисвое окяслоите литядоп ядер яри рл.ппашттоясч. ttorn.?o-

ния. Облучеппо т.пвоита в дозах I я 2 Гр па 3-й, 13-ио и 17-тю

суткп беременности я окбриогопоза внзыпяет образование в ядрах

клеток почепп продуктов поргкпсиого окрслоияя яипкдог» (ком-ггп-

ров.антгх диетв и дионнртопоэ) и вагиотт от доз« облучения.

Ряс,ЗД1ор<пшеисо окисление ля-ппдов 1ДК0Ш1) ядер,изолирован-то: на 21-0 сутки бергаенностя ирнс поете облучения in vivo» По оси огдипат - га 100$ пря-рЬ ппто перпкксиоо окисление лппя-

/j f-î-i дов (двепн) ядер печени носб-

% гоо-

ТОО-

г+

Л7Ч9ШИГХ беревдэнких крыс - 0,57 Д/мт/гл. По оси абсцисс - сроки облучевия (.сутки беременности) ,

- Ï Гр

- г гР

13_ 17

Сроки облучения (дни беременности)

На рпс. 3 видно, что папболывео накопление дионевкх кояъягапий в ядрах »юрт (¡ерояттх «?рао происходят при облучения кевотного па 3-я сутки берчмзяноста. Сблученио яаватиого в дояв 3 Гр внзн-гает пяпшлепгэ ллздогпх чпягюгагов на B5f' пршюьи»» ' норму » Как

и в печени взрослой особи наиболее высокое содержаний диенов наблюдали поело облучения эмбрионов in utero в првдйшлайтацйон-ний период (на 3-й сутки эмбриогенеза)í пра облучеииа в доае I Гр уровень диенов повышался на 20$ и на 45$ - пра доза облучения в 2 Гр.

3. Действие ионизирующей радиации на ферментативную активность ядер.

Действие облучения на цитохром-е -оксидазнун и НАД .Н-иито-хтом-с -редуктаэну» активность пдар клеток печени беременных крыс я эмбрионов. Данные наших исследований на 21-е сутки беременности цитохром—с -оксидазной активности ядер, изолированных из печени облученных беременных крце и их эмбрионов в доза I и 2 Гр, показывают, что актипность этого фермента зависит от дозы облучения я заметно изменяется в различные сроки беременности и эмбрионального'развития. Тан,, у беременных крыс облучение в дозе I Гр на 3-я сутки беременности снижает цитохром-с -оксидазную активность на 28$, на 13-ые сутки на 31% и на 17-ые сутки - на 38$, Увеличение дозы облучения до 2 Гр приводит к более глубокому по-V влешш активности этого форманта при облучении на всех сроках беременности. Доза в 2 Гр снижает активность фермента при облучй-нии на.3-й сутки беременности ид 44^, на 13-е сутки - на 52? и на 17-е сутки - на 64$. и ядрах, изолированных из печени эмбрионов, облучение на. 13-е сутки эмбрионального развития приводит к подавлению цитохроы-с -оксидазной активности в большей степени, чем при облучения на 3-й и 17-е сутки развитая. Активность ферлеи-та при облучении на 13-е сутки развития п дозе I Гр снижается на 30$, в дозе 2 Гр - на 47$.

Облучение беременных крыс in vivo в доза I и 2 Гр вызывает ингибированяе активности НАД.И-цитохроы-с-рдауктазы в ядрах печени как беременных крыс, так и их эмбрионов на всех сроках развития. Активность этого фермента максимально угнетается при облучения in vivo крыс на 13-е сутки беременности. В этот период у беременных крыс, исследованных на 21-е сутки беременности, активность фермента в изолированных: ядрах снижается посла облучения ^-лучами в доза<1 Гр на 48£, а в дозе 2 Гр - на &&%. Облучение вызывает глубокое ингибированио активности НАД.Н-цитохром-с -ре-дуктазы в ядрах печени эмбрионов. Увеличение дозы облучения до 2 Гр приводит к б.олее глубокому подавлению активности фермента пос-

* л» облутаияя эибрсоноз in ufcero m peor сроках развития. Лола сблупапяя тз 2 Гр угпатзот НАД .Н-цптохром- с -редуктазнув йкткр-яоеть п ядрах клеток почогш эмбрионов посто облучонет на 3-й сутки рмфтоиальпого развития па 43Î, на 13-е сутки - па Б8£ я на 17-0 сут-я - t'a 5Т£.

Такяи образом, активность ептохрем-с -оясшиз:« и НАД»Н-ки-тохрпк-с -редуктази ядер клеток печени эмбрионов пппбо.юп чувствительна к дойстлип радгаюп: пря облучеипи in utero на 13-о сутки эмбриогенеза (период органогттаза).

Лейстикс обл'/чения па ГНК-азнуп я АТФ-язяую активности ядер 2S2£H1ÍL_ÜClE£ÎJÏIIIйт• у -облучение рнзкяпот ш-гябпровтше ркбопуклоазноЯ актшшостп ядер клеток печени беремен-пнх крнс и их эмбрионon. Ипгибиропанпе РНК-азной активности увеличивается после облучения г.нпотпого на 13-й п, особенно, 17-е сут-пя беременности и эмбрионального развития. Поело облучения в дозо 2 Гр па 13 и 17 сутки беременности PÎÎK-азная активность енгоэотся соответствпнно на 56% и 67£. Y эмбрионов на 13-е сутки внутриутробного развития в дозе 2 Гр РКК-азная активность подавляется на 49< и па 63£ - при облучении на Г7-о сутки эмбриогенеза.

Рис,4 . t»¡j2+ -стимулпоуемая ATТ>-азнля активность ядгзр.изоляро-ванннх из клеток поченя эмбрион os 21 дня разпптш н облученных iu ut ого п разные сроки эмбрионального развития. По оегт ордггнаг - за 10Ой принята -стимулируемая АТФ-азная активность ядер печена необлучешПхХ пмбряоноз - 3,2 мк моль Pi/мг белка/мин. По оси абсцисс - сроки облучения (сутки развития змбряо-нгл).

¡§j- Г Гр 2 Гр

(дня эмбриогенеза) Нпжй яссяодэюига помтсотогт, что чувствительность -отя-».длируомоЗ АТФ-азпоЯ активности к дейстшто радиации а ядрах плотов печени берокенвнх пгчо п пх эмбрионов оказалась различной в пзрисшсст.т от срока бороь'шюстп п стадии эмбрионального развития в .n-repoí' они тдгоргчлпсь облучение, '¿аиетное еншшко

100'

50-

à*,

гЬ

Í3 „ 17 Сроки облучения

стг/лкруиюи Aliäsiioit активности в ядрах печени крыс >t вх эмбрионов отмечается поело однократного ^'-оодучвшю дозами I и 2 Гр ua 13-ые сутки беременности к эмбрионального развития (период органогенеза) . При дозе облучения I Гр активность АТ^азы в ядрах печени бера«синах' крыс снизаетеп на 34ч', 2 Гр - на 61%. С ядрах • клеток печени эморийна после однократного -облучения in utero, ^ на I3-UJ сутки эмбрионального развитая в дозе I Гр активность Мк"-стимулируемой А'Пазп снижается на 42,', а в 2 Гр - на 4^'ú (рис. 4).

до i!ctk;»' ' 'обл 'i ч'йиаи на транспорт Til а т..я)шр.1.^тлирпвашщх из печени беоэденапх крыс и их.эмбрионов, Иолучошшо наш допнио свидетельствуют, .что ¿'-тобдучшшо (дозы 1 и 2 Гр) приводит к подавленна транспорта PHK из изолированных ядер клеток печени как беременных крыс, так и их эмбрионов. Голое глубокое подавление транспорта I'iilC из ядер клеток печени происходит поело тотального облучения беременных крыс и их эмбрионов в дозе 2 Гр на 13-ые и 17-ие сутки беременности- и эмбрионального развития. Выход Ж из ядер клеток.печени" беременных необлучошшх крыс в течение 15 ми»-кутной инкубации в босклеточной системе составляет '->,4Ü.-Í; посла облучения в дозе "2 Гр на 13-ы'е сутки беременности его выход составляет 5,85't, т.о. выход Ш подавлен в 1,5 раза. После оОлучоцЬг крыс в дозе 2 Гр на 17-ие сутки беременности транспорт PIK цнги-бируется в 2 раза. Выход-KIK из ядер глоток печени необлученных эмбрионов в течение IG минутной инкубации в бесклоточной системе составляет I3,í$; после облучения in .utero ь дозе 2 Гр на 13-ые сутки развития он составляет т.о. облучение приводит к его подавлению также в 1,5 раза. При облучении in uterona 17-ые сутки эмбрионального развитая этот процесс подавлен в 2 раза. Результаты настоящих исследований свидетельствует о серьезных изменениях транспорта К К через поровио комплексы ядерной оболочки после воздействия ионизирующей радиации.

Действие облучения на синтез белков ядер и ядерного матрикса печени беременных „крыс и их эмбрионов. Полученные нами данные свидетельствуют, что радиоактивная глотка предшественника (°°s -метиокдна) включается несколько активное (в [,2-I,í3 раза) в ядерные белки но отнесению к общим балкам гомогенат-а. По наиболее активно она включается в белки ядерного матрпкеа. Скорость включения -матионипа в белки ядерного матмшеа на 3,1-4,U раза выше, чем включение их в белки ядра в целом. Кроме того, скорость ß&uw-

' чопия рздпоактишой метки яродавествонняка в болпи ядерного мат-рикса излетает от поряода кмплонтяцап омбриоиа (3 сутки беременности) к периоду органогенеза (13 сутки беременности) п особенно активно - к плодному периоду (17-е сутки бэремэнностп). Новообразование белков ядерного патрпкеа относительно глубоко подавляется ^-облучением. .Воздействие ^«облучолкя на 17-е сутки беременности и до?о 2 Гр внепваот резкое подавление s -метионина в белки ядчрного штрикса клеток печени бвромэшшх крио (па 221), При гнутгиутробном воздействии на эмбрион. ^-облучоккем in utero на З-п, 13-9 и 17-<з сутки эпбрпонгмыюго развития также отпечено ст'пвине яключгня* Оо8 -ттяогаша в балки ядер и ядерного катрик-са, что в значительно'! степени зависит от дозы облучения п сроков развития эмбриона, при котором он бкл поцторгпут облучению. Удельная радиоактивность белков ядерного чятрзкеа печени эчбрионов, подвергнутых облуюнпв, в дозе 2 Гр на 3-й сутки эмбрионального развития при исследовании на ¿1-е сутки снижается на 21;!, при облучении на 13-е сутки развития - на 22% и на 17-о сутки - на 21%. "

Глава Ш. Действие Мб на структуру а функцию ядер

моток печени крыс, получавших ^-облучение

Влияние !.!на ватагаемость кпю пта лучевом погашении. Проводили П0ИСК0Е1Ш работы с ;.!!' для выявления его радпопротектор-ннх свойств. Исследования проводили на беспородных крысах самцах весом 120-140 г. Первую группу кргс облучали в дозе-8 Гр. Второй группе крнс за 30 млн до облучения и затем ежедневно в-течение 4 дне" после облучения вводили подкожно i-1 J? в дозе I мг на граш массн тела. Крисы, облучонние вншеуказанчоЯ дозой баз применения Mi погибали на 3-3 сутки после облучения (рис. 5). Процент смертности в этой группа животных был очень'высоким - на шестые сутки погибло 01:0.10 50.1 крко,- а- та 9 сутки-погибали все яявотнке. Введение животики Ш и "пзн 1-мг на граш массы тала по ваше описанной схеге оказываю загцинх; эччект (рис. 5). Тибчль зяпотных наблюдали значительно яоз:-::я, через 10—II суток после облучения. Выживаемость глеотннх составила в этой группе 62%, ,

Расягечслзнт мерного трятке;* № по зубклаточиш структурам печенк kihc. В это:й серчк опытов использот-аяи "§, начоннй по % Чбтодсгд ;,;:"'''"сава к др. (IS7G). Г.ф метался сс'труяникад Института бпосргатш»еоко2 :аглы РА';. Печеный етзодвли подкояно крысам

100 *

90 -

ьо -

70 -

60 -

50 '

40 - ■ /

30 " /

20 Г • /

10 - X

г*

,—г—г—I-,-1--1—т—--г-1---1---1--1--1—-Т--1-' I-1--

3 4 5 6 7 8 3 10 II 1213 1415 1617 18 19 90

Ьремя после облучения (в сутках)

Рис.5. Радиолротекторноо доаствио Ш' на выживаемость крис.

Но оси ординат - число погибших крцс в процентах от чабда нивых на началышй указании;; срок. По оси абцисс-время после облучения в сутках,Гибель крыс без Ль> после тотального у-облучения (— -5 и после его введения (---)

в т чзе I ыкКи на грамм ыассц тела. При подколшом введении крысам меченого по оказалось, что он быстрее всасывается, распрост-

рашясь по органам и тканям. Максимальное накопление радиоактивной метки в печени наблюдается через 30-40 мин после введения этого радиопротектора. Через 40'мин после подкожного введения ^Н-МФ радиоактивность обнаруживается практически во всох фракциях клетки, однако распределяется она неравномерно (табл.1). Наибольшое накопление меченого 1>№ отмечается в ядерной матриксо, однако с чем это связано пока не ясно. Таблица I

Субклеточное распределение Ч1-МФ в печени крис

Субклеточные структуры | Имп/ глин / мг белка

Ядра " 2670+125

Ядерный матрице 10154+498

Митохондрии 944+101

Микросомы ; 2221+213

Лдтозоль 1906+201

Структура ядер клеток печени кшс в отдаленная срок я после облучения в присутствии MS. Учитывая, что Ш? ассоциирует наиболее активно с ядерным болковнм иатрпксом, в котором различает ла мину, остаточное ядрышко и внутриядерные ^ибриллярно-грапулярные компоненты, нагл казалось интересным выяснить как влияет этот радиопротектор на состояние ядерных ультраструктур после облучения. Исследования проводили через I час, 1,5, 10, 15 п 20 суток и I, 2 и 3 месяца посла облучения in vivo. Крысы, облученные в дозе 8 Гр без применения Mí псгг.баля на 3-9 сутки после облучения. Злектронномикроскопячпскпе исследования показывают, что облучение крыс у-лучами вызывает супествоннко повреждения в структуре ядер. В изолированных ядрех печени крысы облученных дсзоЯ 8 Гр отмечается наибольшие изменения на периферии ядра, а тленно, возникают выраженные инвагинации, гидно разрыхление гаругшой мембра-ш! ядерно!! оболочки, поринуклеарное пространство сильно расширено. Выявлено такке уплотнение хроматина; очень плотная нуклеопро-теиновпп сеть. Аналогичные морфологические изменения в ядрах наблюдали и на ультратонких срезах клеток печени. .В ядрышках появляются округлые электронно менее плотные (светлые)' структуры, не наблюдаемые в нормальшгх ядрах» Оти изменения нарастают в лучевой патология.

Через I час поело тотального обдученлч у крас, получавших Ш за 30 мин до облучения, ядра сохраняют своя форму. Наружная мямбрзиз ядорноП оболочки не н/.гэет четких контуров. На некоторых снимках печени ишют место случая инвагинаций ядврноЗ оболочки, но рто единичные ядра. IO-о сутки после тотального облучения у крыс, получавших Ш за 30 кпи яо и затем ежедневно в течение 4 дней поело облучения ядра тлеют округлую форму, наружная мембрана ядерной оболочки хорошо прослеживается. На некоторое срезах ядргакя остаются "рыхлыми", пстрачаптся скруглыо светлые структуры. В это''! группе гшг«отшгх в более отдаленные сроки после облучения нас'лпдзлось полное лоссталгалонив морфологической структуры ядер; к 90 суткам ядернно структуры полностью восстанавливаются.

Таким образе:,*, результаты свидетельствуют, что Ю обладает рядяозагигшга а тактом при введения, в дозе I мг па грамк «чеса телэ до к поело облучения.

7Тят)у:::опое оняолеиие яшетсо ядер клеток печени к око яооле облучения п ввод'.чшэ Уте В первые чаем после радиационного возд^чет^™ проясхощп суцостввнпнй едтшг i.'O-fi я ядрах' клеток по-

чени крысы (ряс. б), И ядрах клеток печени содержание "ВОД Iдиенов) увеличивается чораз I и 84 часа после тотального, облучения крыс в 2,8 и 2,6 раз соответственно Чрйс. 6). На 5 сутки после облучения концентрация диенов резко увеличивалась, превышая норму в 3,1 раза. Такую яе дина1.шку в накоплении дианкетонов после -облучения наблюдали в изолированных ядрах клеток печени крыс.

3251

300

275

250 -

Т50

125

100

50 Ч

/ /

гн!

.0,042 I' ; 5 10 15 20 30 60 90

. . ' Время после облучения

(в сутках)

^ис.б. Перекисное :окислешт липидов Чдиены) ядер, изолированных из печени крыс.

□ -.¡За 100$ принято лерекисноо окисление липвдов •'• ядер клеток почоии крыс в контроле {диены -зимой 0,764+0,097 Д/дя'/ш, весной и осенью .. : 1,068+0)ИШЛя-Дш).

; ШЛ после тотального ^-облучения в дозе 8 Гр.

ЧОЛ после воздействия ионизирующего излучения в дозе 8 Гр и введения 1® до и после облучения.

Введение МФ при лучевой паталогии, вызванной облучением, резко снижает накопление ПОЛ. Как видно из рис. 6 через I час и первые, пятые сутки после облучения концентрации диенов возрастала незначительно в ядрах клеток печена крыс, получавших Ш до и после облучения по сравнению с облученными животными, Максимальное повы-ваняа ПОЛ отмечали через 5 суток после облучения. В ядрах содержание .диенов • повышалось на 30$ относительно норш. В .отдаленные

сроки после облучения концентрация ПОЛ отличалась от контрольных величия незначительно, Пронодешше исследования показывает, что в ядрах клеток потони крае, палучашчпх Ш до.и после облучения к 20-м суткам происходит нормализация яерскисного окисления лйплдов.

Активность 'Fop,'тактов ядер плеток печени крнс после облучения гс Ярддднгся Ш>. После однократного ^-облучейяя крас п доза

0 Гр в изолированиях ядрах •клети; печени яайхгдял«' с>т.тошто. активности фор.тентов пятохром- о -окепдлзц, РНК-азн и.' utf** -сталируемой АТ?~азя ядерно-": оболочки. Через I час поете тотального облучения ярые в дозе 8 Гр цптохрзм-'с -оксляазнпя активность яигяб.п-руется па 41?. Ингпбпровапго нарастает- в динамике развития -лучевой паталзгпп. Активность этого ^ер'лента пороз I сутки после облучения подавлена на 46!?, через 5 суток на 58?.. у животинх,'получавших МЗ за 30 мин до и в течение 4-х дней носче облучения -дозой 8 Гр цитохроч-с -оксглязная активность подавлена значительно и'ояьгав, чом у облученных и не полупавших пшотнцх: через I час после облучения она полая лена ляиь па 25?, через I сутки на 30£, через 5 суток - на 29£. В более поздние-срока (15-20-и .сут-Ия1 наблгдается восстановление цитохром-'с -скскдазпой- активности

и к 60-90-м суткам активность зтого if-ернента колеблется в пределах нормы. ' *

Из рис. 7 ни,вдо,.что активность РПК-азн ядер практически не изменяется в течение первого часа после облучения.- Однако через сутки активность РНК-азы падает примерно в два-раза (на 48,7,1), а через 5 суток ее активность снижается на 56,2%. у крнс, получавших ИЗ до и после облучения дозой 8 Гр РЕЖ-аэнач активность подавляется значительно меныпэ, чем у облученных ^квотных, Через' сутки после облучения активность подавлена на 21%, через 5;суток - па 325?. На 15-20-е сутки РНК-аз гая активность ингибирсвана' на 24,8$ я 22% соответственно. На 30 сутки наблюдается яосстанонланяз активности РНК-азы. ■ -.

После тотального облучения животных в дозе 8 Гр ужо через

1 час наблюдается гнгябироваштв м§2+-АТФ-азной активности в ядрах клеток печени, активность Фермента снижается на 45$, Через

24 часа после тотального облучения наблюдали более глубокое ингц-бяровянпе активности этого сГ-ермента; она'подавлена на 6S %. На 5-а сутяя после облучения.активность сяяглотсч ла 44,G^. У крнс, получаврих Ш до я поме тотального облучения дозой-8 Гр, в ядрах также отпечено янгибированив АТФ-азлоЯ активности. Через I час я

50 '

0,042 I

-г

20"

зо"

60 эй Время после облучения (в сутках)

Рис.7. РНК-азная активность ядер, изолированных из клеток печени крыс. РНК-азная активность ядер меток печени не облученных крыс - 3,6 А2р0/час. м? болка - принята за 100#.

- — активность после тотального облучения б дозе 8 Гр

-;— активность после воздействия ионизирующего

излучения в дозе 8 Гр и введения I© до и послз тотального облучения

24 часа после облучения активность этого фермента снижена на 35 •0% соответственно. На 5 и 10 сутки после облучения активность-ингибирована на 27 и 25£ соответственно. К 20-и суткам наступает процесс восстановления. К 60-80 суткам -АТФ-азная активность восстанавливается до нормальных величин.

Таким образом, радиационная инактивация РНК-азы,' АТФ-азы ядерной оболочки может привести к нарушению транспорта РНК из ядРа' 35

Включение 3 -мотионина в белки ядерного матрккса печени

при тотальном облучении крыс и введении Ш>. Наши результаты показывают, что чбрез I час после тотального облучения крыс в доза 6 Гр уровень удельной радиоактивности белков ядерного матрикса увеличен на 45$ по сравнению с контролем. Взе более выраженное увеличение на 80% удельной радиоактивности белков ядерного матрикса наблюдали чгфез сутки после облучения животных. В ядерном матриксе,-изолирбванном из клеток печени облученных крыс в условиях защиты организма радиопротектором отмечается также некоторое увеличение включения. -метионина в течение первых суток после

облучения (увеличение через I чес па и на 31$ через -сутки). На 10—о сутки уровень удельной радиоактивности в ядерном матриксо на I4/J ниже по сравнению' с контролем. На 30, 60 сутки в этой группе- животных происходит нормализация синтеза бзлков ядерного мат-рикса печени. Уровень включения -метионина в ядерном•матриксе колеблется в пределах нормы.

Глутатионродуктазная и супароксидтшсмутазная активность митохондрий. и микросом клеток печени таю после облуче'ния и введения МФ. Результаты опытов показывают, что в митохондриях и микросоках печени животных после тотального облучения в дозе S.Гр отмечается снижение активности глутатконродукгаэц (ГР). Через I час' после облучения активность ГР подавлена в митохондриях на.47,7$, в микросомах на 44;?. Ингибированиа активности фермента наблюдали также через I, 5 суток поело облучения. Полученные результаты, ука*-зивают на высокую радиочувствительность фермента к действию ионизирующей радиации, пршшлаюадго участие в обеспечении защитней антитоксической функции. В группе животных, получавших МФ до .и после облучения, активность ГР в митохондриях и микросомах ингибиру-ется в меньшей степени, чем у животных, облученных, без протектора. Нокотороэ подавленна активности (Гзрмонта наблюдали через I час, 1-е и 5-а сутки после облучения. На 30-е сутки, после облучения начинается процесс восстановления; так, активность ГР в митохондриях подавлена лшь на 19%, в мккросомах - на -16%.

Ионизирующая радиация вызывает изменения активности суперок-сиддисмутаян (СОД) в-митохондриях и микрооомах, печени крысы. Через I чао после тотального облучония резко возрастает активность фермента. Активность фермента в митохондриях на 75,3$, в микросомах на 124':? выше по сравнению с нормой. Такая высокая активность фермента в митохондриях и микросомах наблюдается при лучевой патологии. Результаты показывают, что в группе животных, получавших Ш до и после облучения, активность СОД в митохондриях и микросомах менее измонена, чем у облученных животных. Через I час после облучения активность форманта в митохондриях выше на 27%, в мин-росомах-на 44,45?. Такой уровень активность фермента наблюдаемся через I, 5, 20 сутки после облучония. В отдаленные сроки (30 сутки) посла облучения активность СОД в митохондриях и микросомах колеблется в пределах контроля.

Структура ядер клеток печени беременных крыс и их эмбрионов после облучения и введения МФ. Исследовали структуру ядер

клеток печени крыс на 21 сутки беременности поело тотального облучения Е дозе 2 Гр на 3-й, 13-е и 17-е сутки беременности и эмбриогенеза. Исследование проводили в присутствии МФ: животным за 30 мин до.облученияt а затем ежедневно в течение 4 дней после облучения вводили МФ в дозе I кг на грагял массы тела, ^-облучение бызнеэот морфологические изменения в структуре ядер клеток по чени беременных крыс. Выражены существенные повреждения животшк, облученных на. 3-й .сутки беременности. Изолированные ядра сильно деформированы, наблюдаются•инвагинации и. выпячивания j ядерная оболочка не прослеживается. У беременных крыс, облученных' на 3-й сутки боременности в дозе 2 Гр к получавших И35 да и после облучения, также наблюдали некоторые повреждения ультраструктуры ядер. Видна слабо выраженная инвагинация ядра. Наружная мембрана ядерной оболочки местами не прослеживается. Отмечено, что у беременных крыс, получавших МФ до я после облучения, на 13-е сутки (период органогенеза) и на 17-е сутки циодннй период) клеточный ядра менее повреждены, чем у облучонппх беременных животных. Ядерная оболочка прослеживается по всей периферии ядра. Лерпиук™ леарное пространство увеличено, такг*е набдщао.тег плотный слой периферического хроглатйна.

После облучения змбриояоз в дозе -2 'Гр' in utero в различные сроки развития' 1ЕмалаитяционпыЯ; органогенеза я плодный периоды) на 21~о сутки развития выявлено повреждение структуры ядер гепатоцитов. Глубокие морфологические повреждения структуры ядер клеток печени отмечаются при облучении эмбрионов in utero на 3-й сутки развития.

У беременных крыс, получавших МФ за 30 мин до облучения и затем ежедневно, в течение 4 дней после облучения и их эмбрионов облученных ia utero на 3-л сутки эмбрионального развития наблюда ются также некоторые повреждения структуры ядер гепатоцитов эмбрионов, инвагинаций ядра, очень плотный периферический хроматин. Наружная мембрана местами не.прослеживается.

Нами результаты указывают, что. у беременных крыс, получавших МФ до и после облучения я их эмбрионов облученных in utero на 13-ые и 17-ые сутки'эмбрионального развития, па 21-ые сутки эмбриогенеза ядра гепатоцитов эмбрионов повреждены в мень-пей степени чем ядра у' облученных эмбрионов. Наблюдаете? такяе склонность н инвагинация ядер. Четко прослеживаются.мембраны яд9ряо*1 оболочки, Ядркпко имеет правильную форму. Щ проягляет' банее элективное-

защитное действие при его впадений и после облучаная на 13-е а 17-е оуткя беременности и эмбрионального развития,

Пррекионоо окисление лппидоп ядер клеток печени беременных кто и ¡гс эмбрионов после облучения и введения М5. Облучение в дозе 2 Гр яа 3-й, ГЗ-ые а 17-ые сутки беременности и эмбриогенеза на 21-е сутки- приводит к накоплению продуктов переокнсления ляпидов в клеточных ядрах печени (рис. 8). Введение МФ при луче-, вой паталогяи снижает накопление ЛОЛ. Образованна диенов.и диен-' кетонов в клеточных ядрах почепи беременных крас и их эмбрионов, получавшее МБ до я посла облучения,' было ниже чем у облучению; животных. В это!-! группе шюотпых облученных на 3-й сутки беременности в ядрах концентрация дианкотонов повышалась на 25$ и их эмбрионов на 27,"' относительно нормы (рис...8).

150'

100-

А '

г!-

150

100

rfl

i i

rfl

ьь

a l—i

3 13 17 Сроки облучения

(сутки беременности)

3 13 I? ./ Срока облучения

(дни эмбриогенеза)

Рис.8. Перекисное окислониа'лапндоа (диенкетоны) в ядрах клеток печени берш.мншг.х крыс (А) и их эмбрионов (Б).

ПОЛ беременных крыс после облучения in vivo (АД и эмбрионов после облучения ы utero(E) в дозе Гр; ЕЭ[~ ПОЛ после воздействия ионизирующего из-

лучения а дозе 2 Гр и введения М5 до и после облучения. Парояпснои окисление ляпвдов (диенкетоны) ядер печени необлученных беременных крыс - 0,74+ 0,052 Д/мг/мл, необлученных эмбрионов - 0,71+0,049 Д/мг/ш1. По оси ординат эти величины пршмтн за 100%. По оси абсцисс - сроки облучения (сутки беременности и развития эмбрионов)

■ Аналогичную картину наблюдали при образовании дивнов в клеточных ядрах печена беременных крыс и их эмбрионов. Наши розультаты свидетельствуют, что iffi снижает накопление продуктов переписного окисления липвдов в ядрах клеток печени беременных крыс я их эмбрионов.

Цитохром- с -окопдазная и НАД.Н-цнтохрон- с-родуктазиая активность ядер клеток беременных крно и их эмбрионов после облучения и введения МФ. После однократного ¡/-облучения беременных крыс in vivo и их эмбрионов in utero в дозе 2 Гр в ядрах отмечено подавление цитохром-с -оксидазной к НАД.Н-цитохром-с -редуятазной активности после облучения на всех сроках беременности я эмбрионального развития.

Облучение в дозе 2 Гр сниуяет цитохром-с -окепдазиую активность в ядрах печени ирис на 21-е сутки беременности после облучения, на 3-й сутки беременности - на 32,5$, на 13-е сутки - на 31% и на I7-S сутки на 50$. Наиболее глубокое подавление активности цитохром-с -оксядазы наблюдали поело облучения эмбрионов

■ in: utero на 13-ые сутки эмбрионального развития (перьзд органогенеза) : активность ингибирована на 50$. У беременных яивотных, получавших Ш за 30 мин до и после, облучения, в ядрах гепатоця-тов наблюдается подавление активности цитохром-с-оксидазы, однако ингибирование активности ^ермец^а выражено в меньшей степени, чем-у .облученных животных, не получавших Ш. При облучении на 3-й-и 13-ые сутки беременности в дозе 2 Гр цитохром-с -оксидазная активность подавляется на 16,5$ и соответственно, Активность этого фермента снижается в этой группе животных при облучении на 17-ые сутки беременности в дозе 2 Гр - на 27,5$. В этой группе животных при облучении на 3-й п 17-ые сутки развития эмбриона.в дозе 2 Гр цитохром-с-оксядазная активность подавляется •на 13,8$ к V,7% соответственно. Облучение на 13-ые сутки эмбрионального развития -вызывает более глубокое ингибирование. цитохром-с-оксидазной активности: активность Фермента снижается на 33,6?.

Результаты показывают, что облучение вшивает ппгибирование • активности ШД.И-щггохром-с -редуктазы как в ядрах печени беро-;ленщ:х крцс,..т8к к их эмбрионов. Однако глубокое подавление активности этого Меркганта. наблюдали в ядрах клеток печени крпа и их эмбрионов, облучении на 13-ш сутки беременности и эмбриогенеза. Р ядрах, йзолировгнннх из печонп борешагах крис, актив-

ность Фермента подавлена на 51$, а в эмбрионах - на 41,7$,

У беременных аивотннх, подучшшвс Iffi аа 30 мин до я после облучения, в ядрах гопатоцитов наблюдается подавленно активности ЕАД.Н-цитохром-с-редуктазы, однако ингибирование активности фермента выр&танб в меньшей степени, пом у облученных животных, но получавших МФ. В отой группе ялвотных облучение на 13-ыо сутки беременности .в доза 2 Гр снижает активность НАД.Н-цитохром-с -редуктазы на 34;? и их эмбрионов на 20$,

Обсуждение результатов

Учитывая ванную роль клеточного ядра, можно полагать, что радиационные повреждения мембран ядерно!? оболочки имеют важное значение в общей цепи радиационных повреждении клетки я всего организма.

Важным аспектом нашего исследования радиочувствительности ядерной оболочки было сравнение степени повреждений при тотальном облучении животного и при облучения изолированных структур.

Проведенные исследования показали, что изолированные и облученные in vitro.' мембраны ядерной оболочки интакткоА печени крысы являются радиочувствительной структурой. . Но если изолированные и облученные in vitro мембранц ядерной оболочки радиочувствительны, то при облучении изолированных ядер морфологических изменений в мембранах ядерной оболочки не было обнаружено. Видимых морфологических изменений мембранных структур ядерной оболочки не было определено даке при повышении дозы облучения до 50 1'р,как в ядрах пнтактнои печени, так я при облучения ядер, изолированных из регенерирующей печени крысы. Эти наблюдения хорошо согласуются о данными устойчивости изолированных ядер и Других клеточных структур при облучении их in vitro (Токин,1974). Но если при облучении ядер in vitro,морфологические изменения отсутствуют, то биохимические исследования свидетельствуют о имеющихся повреждениях в мембранных структурах ядерной оболочки. Мы наблюдали радиационные изменения в мембранах ядерной оболочки по угнетению цитохром-o -оксидазной активности. Таршис (1969) показал подавление аэробного фосфорллирования при облучении изолированных ядер тимуса крыс. Облучение изолированных ядер тимоцитов сопровождается угнетением дыхания, которое полностью подавляется че-

pes 2 часа после облучения суспензии ядер тпчоцатов в дозе 10 Гр (Кузин, Таргаис, 1970). Угнетение дыхания авторы связывают с потерей мембранами ядерной оболочки цитохроглоп cub. Эти изменения авторы объясняют непосредственным действием радиации на ядерные оболочки.

Таким образом, при облучении изолированных ядер мембраны ядерной оболочки также радиочувствительны, но повреждения в них гшр.т.:ены г меньшей степени, чем при облучении изолированных ядерных оболочек. Отсутствие морфологических изменений в мембранах ядерной оболочки при облучении ядер in vitro возможно вызвано какимп-то факторами, обуславливающими устойчивость ядерной оболочки к поврезд-топому действию радиации. Химпческач природа этих факторов не известка. Могло высказать предположение, что устойчивость ядерной оболочки к повреждащону действию радиация связана с нуклеоплазмей.

Наши результаты указывают, что тотальное облучение крыс (в начале 5 -периода клеточного никла) приводит к изменениям в мембранной структуре ядерно:! оболочки угсе при действии доз 0,5 и 1,5 Гр. Изменения в ядерной оболочке прослеживаются и электронно-микроскоппчеснида и биохимическими методами. Через 30 и 60 мин после облучения, я отдельных ядрах прослеживается расширение пе-р.'-Луклоарного пространства и уменьпёниа четкости контуров наружной мембраны ядерно'! оболочки. Изменения нарастают по мерз увеличения доза обаученяя. Пострадиационные поареаданяч ядерной оболочки проявляются и г угнетении цитохром- с -оксида:»пой активности. Снижение ое активности, полученное нами'Иа ядрах регенерирующей печени крысы, согласуется.с данными Кузина и Тарияса (Кузин и Тар?жс, 1970; Тэрияс я др., 1968)которые показали, что через 4 чг.с.ч поело облучения крыс in vívd в дозе 10 Гр наблюдается уменьшение п ядрах тпмонптоэ содержания цитохромов с и ь и угнетение дыхания,

Однако, при этом надо учитывать, что на ядра при облучении in vivo оказывает влияние радиационные изменэшп в клетке !•; не!!-рогуморалыше реакция всего организма.

В настоящей работе показано уменьшение числа норовых комплексов на пери-Терн? ядра после тотального рентгеновского облучз-ккя. Порой.'?, тииексн оказались более уст з'лчгрш"/* к деЗсталя иояя?"руг"юго пзлучонч!!, "ом момбраннн". структур'. Пссгс сблуче-

nun крыс дозой б 0,5, 1,5 я 4 Гр ira пэраДОвв ядра хорошо сохраняются норовые комплексы. В шмбраках ядерной ободочка при STJDC усасвглх наступают морфологические п бисхш-гачоскве изменения. Поело тотального облучения кявочного п дозе 8 Гр щ iiep;r¡.n~ proi ядра пабйкяалп уменьшение числа порош« комплексов и corpa-гацкю их ст мембранной оболочки. Уменьшение числа поровых комплексов на поверхности ядор резко нарастает при дозе 12 Гр. Такое печвзновенио перовпх комплексов поело высоких доз облучения оаэ более четко тФндашя па сколах, полученных методом замораживания-травления, позволяющим изучать большиа поверхности мембран \Кузьмина и др., 1979). Уменьшение плотности ядерных пор после рентгеновского облучения может указывать на торможение процесса их биогенеза. Механизм исчезновения и изменения плотности поровых комплексов после рентгеновского облучения пека не ясен. Однако несомненно, что уменьшение числа поровых комплексов связано с нарушением транспортних функций ядерной оболочки, что показано нами на примере транспорта белка из ядер регенерирующей и облученной in vivo ';печени крыс. Проведенная работа показала, что выход меченого белка из ядер, обработанных детергентом, не отличается 'от контрольных ядер с неповрежденными мембранами ядерной оболочки, тогда как выход белка из ядер, облучению: in vivo в дозе 8 Гр уменьшается'в два раза. Очевидно транспорт макромолекул белка из ядра в цитоплазму связан с порошили комплексами и не зависит от мембранных структур ядерной оболочки.

Электронномикроскоппческими и биохимическими методами установлена высокая радиочувствительность ядер клеток печени внутриутробно развивающегося эмбриона к ионизирующей радиации. Наши данные согласуются с литературными данными, показывающими высокую чувствительность внутриутробно развивающегося эмбриона к ионизирующей радиации, особенно на ранних стадиях его развития (Бодяжи-па и др., IS62).

Наши морфологические результаты показывают, что ядерная оболочка печени является радиочувствительной структурой; на 21-е сутки исследования при тотальном облучении в дозе 2 Гр на 3-й, 13-не и Г7-ые сутки беременности ы эмбриогенеза наблюдаются ое изменения. Наибольшие повреждения ядерной оболочки отмечены после тотального облучения беременна крыс в дозе 2 Гр на 3-й сутки беременности и их .эмфиояоп при облучении in utero .Повреждение

ядараой оболочки при действии радиации tía берег:ешпхх крыс и га эмбрионов, проявляется в изменении активности ыембрэносяязанпых йормоптов как, например, цитохром-С-окскдазы и НАД .Н-цитохром-о-рэдуктазы; РЩ-азы я Ме1"4"-зависимой АТФ-ази. Активность этих ферментов в ядрах клеток печени оказалась весьма чувствительной к облучению во вредя беременности и эмбрионального развития. Пн~ гпбиропание активности'фермента зависит от срока беременности л эмбрионального развития в момент облучошы. Показано, что цнто-х'ром-с-оксидазная и ШД.П-цптохром-с-редуктазная, Mg2+-зависимая АТФ-азная активности в ядрах клеток печени эмбрионов чувствительны к действию радиации после облучения в период органогенеза. Полученные результаты.согласуются с литературными данными, свидетельствующими о том, что период органогенеза характеризуется наиболее высокой чувствительностью к ионизирующей радиация и другим неблагоприятным факторам (Бодялшна и др., 1968).

аффекты радиации обусловлены изменениям лшшдного состава мембранных структур (Бурлакопа и др., is75; Koteies g.i. , 1979; КудряшOB, 1985), что может служить одной из причин радиационного нарушения мембранных функций. Нами было показано, что облучение беременных крыс la vivo п их эмбрионов in utero ускоряет накопление порекисного окисления липидов. Максимальные концентрации липидных перекисей (конъгогированныХ диенов-и диенкетонов) обнаруживаются в ядрах клеток печени после ^-облучения крыс на 3-й сутки беременности и :эмбрасшального развития (период имплантации). Накопление продуктов перекисного.окисления липидов свидетельствует о повревдении ядерных мембран» Эти данные хорошо коррелируют с морфологическими изменениями мембран ядерной оболочки, которые оказались наиболее чувствительными к ионизирующей радиации на 3-чт сутки, беременности и эмбрионального развития ( период имплантации) .

В литературе имеются данные, указывающие на езязь if!g2+-ua-Еисямом АТФ-азы и РЕК-азы ядериоП оболочки с ядерно-нитоплазмяти-чоскям транспортом РЖ. Учитывая важную роль ферментер лдорной оболочки s ядерно-вдтогншзиатическЕх отпадениях, могло полагать, что иостраптацлшшыо измяшшя активности отпх формоатор. могут привести к нарушении транспорта I'IIK из ядра н цитоплазму. Погаза-ио, что пря 15 минутной кнкуванпи л беда'еточпоП енот?:'? utocoa Ш' из изолированных ядер печени бербмэшшх крыо и го; эмбрионов

посла тотального облучения в дозах I и 2 i'p на 13-не сутки после оплодотворения подавлен в 1,5 раза, а облучение на 17-ые сутки беременности и эмбриогенеза подавляет ее выход в 2 раза.

■ По-видимому, подавление транспорта РНК из ядра в цитоплазму, связано с изменением активности РШ-азы я Mg2+ -АТФ-азц. Однако, транспорт РНК из ядра в цитоплазму зависит но только от активности этих ферментов ядерной оболочки. Известно, что в этом процессе участвует ядерннй матрикс, который играет важную роль в жизнедеятельности клетки, принимая участие в репликации ДНК, транскрипции и ядерно-цитоплазматичяском транспорте РНК (Збарский, Кузьмина, 1991; Berezney, Coffey , I97G; Franke, Sheer , 1974). Учитывая его значение, место предположить, что ^-облучение, оказывая влияние на белки ядерного матрикса, вызывает изменения в биосинтезе и транспорта РНК.

Большая скорость включения радиоактивного предшественника в белки ядерного матрикса свидетельствует о высокой скорости кругооборота его балков на всех сроках беременности я эмбрионального развития,; что согласуется с литературшми даннши (Кузьмина и др., I960; Збарский, Кузьмина, 1991). Новообразование бол-ков ядерного матрикся печени беременных крыс и их эмбрионов подавляется при у-облучении животного. На 21-е сутки беременности и эмбриогенеза выявлено зависимое от дозн облучения и срока беременности и эмбрионального развития в момент облучения, подавление интенсивности включения Нэ-метионина в тотальные белки ядер и ядерного матрикса нлетон печени.

Таким образом, наблюдаемые морфологические и биохимические изменения в ядрах клеток печени беременных крыс и эмбрионов свидетельствуют о высокой радиочувствительности беременных крыс при облучении на 3-й (имплантациошшй), 13-е (органогенез) и 17-е-(плодный) сутки развития.

Большинство известных радиопротекторов весьма токсичны и вызывают глубокие изменения структуры и функции мембран (Коломийце-ва и др., 1985). Введение крысам Щ в дозе I-нг на граыгл массы . тела за 30 мин до облучения и ежедневно в течение 4-х дней после облучения оказывало защитный эгИект (рис. 5). При введении МФ гибель нивотнцх наступает лишь через ТО—II суток после облучения; около 62% животных выживают. Данные указывают, что МФ обладает радиозащитшм эффектом.

Памй бю:о показано, что у крас, получат»: КЗ? до п нос.чо облучения в дозе 8 Гр в боло о поздние срок;? после облучения наблюдалось восстановление морфологии ядер, Через 00 суток поело облучения на ультратонких срезах ткани почекп большинство ядер имеют округлую форму с четко вираяошшии ядерными структурами. Уорфологическае исследования показывает, что к SO-м суткам у крыс, получавших М5 до и после облучения, структуры ядра полностью восстанавливаются.

Полученные результаты евддетельотруга о том, что М5 обла--дает заяцшчшн свойствами и ускоряет процессы репарации. Поводимому, основную роль в повншенпя вталплемостя облученных животных, защищенных Щ, играют бкахпмлчеекке изменения, возникающие г глотке в ответ на введение и наблюдаемые в ранние сроки поело облучания. Восстановительный проносе у глгвотных, получавших М'5 активизируется через несколько суток после поражения.

Одним из возможных бйохпмячеекпх механизмов зашиты М5 является способность сникать наруаашю окисления дипидов. Известно, что различные радиозатитние препарата уменьшают концентрацию свободных радикалов, образующихся при облучении я органоидах клетки (Бурлакова и др., I9G5, 1975). Паши результаты показывают, что введение пря лучевой паталогпи, вызванной облучением, резко снижает накопление перекисного окисления липпдов. Показано, что в ядрах клеток печени крыс, получавших Ш до и после'облучения, к 90-м суткам происходит нормализация перекисного окисления ли-пидов. В этих сроках после облучения определена таюко нормализация активности ферментов ассоциированных с ядерной оболочкой (цл-тохром- с -оксидаза, Mg2+ -зависимая АТФ-аза, FIK-аза).

Известно, что развитие анода зависит от состояния организма матеря. Лучевые повреждения плода в значительной степени вызываются нарушениями в организме ыотерк, развивающимися прп лучевой болезни (Бодяжкяа я Др., 1962). Из литературных данных известно, что у беременных крыс, облученных после введения меркамина и про-псмйнз, восстановление веса начиналось раньше, чем у животных, облученных без защиты (Knpranemto, 1962). Однако высокие дозк отлх вепэств (150 мг/кг) оказались токсичными для беремонт-jx крыо п их плод св.

Нами бчло показано, что профилактическое введения МФ в дозе Т мг на грамм массы тела за 30 мим до и ежедневно в течение

4-х днрй (..5лучеиш1 в доза £ Гр полноотю не нрадотнрав$аот г-.гаа-.'зо лучавой болезни у борамвнных язпотных я их эмбрионов, Ислптное дейесвиэ выразияось в значительном уменьшении кои-1;-.'Нтрац!п: продуктов порокиснога окисления лшшдов, улучшения структуры я яоестаиоплешш пктепиостн пеглбраяосплзшшнх ферментов (цнтохром-с -оиоидиза, НАД .Н-цптохром- о -редуктаза) в ядра;: клеток качени беременных крыс и их о:.:бряонсп.

На основании экспериментальных дашшх предлагается гипотеза радиопротокторного действия М5, выделенного из модозшзного молока короли (схема Г).

Схема I, Предположительный радиотротекторныК эффект Ш>, выделенного из молозива коровы

—-->активация (восстановление)

— -^ингцбирсвание (разрушение)

Нами было показано, что интервал времени для получения эффективной защиты - небольшой - ЗСМО мин; он достаточен для про-шкновяния меченого по %-М!1, который больие всого накапливается в ядерном г.лтриксе, клеточных ядрах, шкросомальных фракциях. Эти данные согласуются с литературными данными о том, что радио-

протекторы проникают is клетки я в значительной степени накапливаются п ядрах, осуществляя внутриклеточную защиту (Титов, 1971; Павлова й др., 1975).

Проведенные исследования показывают, что у- облученных живот-шсс происходит активация процесса ЦОД, прячем интенсивность его взаимосвязана о состоянием амтиоксидантной ,системы защити (00Д и ГР). Известно, что ионизирующая радиация может явиться причиной прооксидантногочсрогояния клетки, вызывая образование О7, гилрокоильного 'радикала в.результате недостаточности антпоксиданг-поМ защиты, что,в конечном итоге, приводит к повреждению ДНК (Rôti, Roti and сerutti >:I9?4) ¿ Показано, что у животных, получавших МФ до и поапё Облучения активность супороксиддисмутази, глутатионредуктазы. в ; митохондриях и мякросомах меньше повреждена, чем у облучениях Животных. Через 30 суток после облучения активность суперокоиддисмутазы, глутатионредуктазы восстанавливается до нормальных величин. Восстановление активности суперокоиддисмутазы, глутатионредуктазы приводит к нормализации концентрации продуктов переписного окисления липидов в гомогенате печени и ядрах. Понижение перекисного окисления липидов в биологических мембранах, в конечном счете приводит к снижению интенсивности протекания лучевых процессов в облученном организме.

•Результаты -исследования показывают, что Mí, выделенный из молозквного молока коровы обладает радиозаадатяым эффектом при введении в дозе I мг на грамм массы тела за 30 мин до облучения с последующим введением препарата после облучения в течение четырех- дней. И этих условиях повышается процент выживаемости крыо, значительно быстрее восстанавливаются структур« и функции ядра.

выводы.

1. Изолированные мембраны ядерной оболочки клеток гепато-цятоа, облученяне in vitro , радиочувствительна (потеря четких контуров, появление и нарастание образования однородных гранул, размером 15 ям я осмиофильпоП субстанции).

2. При облучения in vitro ядер, мембраны ядерной оболочки радиоустойчивн и сохраняют сво® морфологическую целостность даже при дозч облучения 50 Гр. -Повреждение ядерной оболочки удается выявить только по угнетению цитохром-с -опоядазпоЗ активности.

3. Облучение in vivo мембран ядерной оболочки гопатоцитов

сопровождается потерей. ■чэтнсЯ коктурности а разрывами наруняоЗ мембраны, расяирвниеа перипуклеарпого пространства, появлением ззциячпБазшЙ я 'штагпйвдпй наружной а внутренней мембран а угнв-?евзем щзтохром-с-окоядазноЗ актдвнеотя. Изменения проявляются в отдельных ядрах уне при дозе 0,b Грд нарастают пра повышения доза облучения и свидетельЬтвувт ó радиочувствительности мембран nsopHoii оболочки.

4¿ Перовые комплексы при ейяучепая in vivo более устойчивы к лейСтвда радиации, чбм мембранные структуры ядерной оболочки, т.к. их повреждения проявляются только при летальных дезах облучения (8 Гр).

5. Уменьшение числа поровых комплексов на поверхности ядер при летальной облучении крыс сопровождается нарушениям транспорта меченного белка из ядра п цитоплазму,

6. Клеточные ядра гепатоцитов беременных- крыс я эмбрионов являются радиочувствительными структура/ли. После облучения во все сроки эмбрионального развития и беременности в ядрах выражо-нн морфологические Изменения: нарушена целостность мембрашшх

_ структур ядерной'оболочки, выракена конденсация 'хроматина. Глубина повреждения ядерных структур зависит от сроков беременности и развития эмбрионй в момент облучения.

7."Повреждение ядерной оболочки гепатоцятав беременных крыс и их эмбрионов проявляется также угнетением ентазностя ферментов, функции которых неразрывно связаны с этой структурой: цитохреш-' c-оксядазы, НАД .Н-цитохром- с -редуктазы. Мй +-зависимой АТФ-ази a 1'НК-а8ы, Наиболее глубокое ингябироааниз первых 3-х ферментов отмечено при внутриутробном облучения в период органогенеза (на 13-е сутки развития).

9. Поэрождепие ядерной оболочки.после тотального облучения беременных нрнс сопряжено с наруиениам транспарта макромолекул РШ£ через поровне комплексы ядерной оболочки. Подавление выхода .РНК Чаиболее пыравдно посла облучения на 13-е (период органогенеза) и 17-е ./-плоДныЙ период) сутки после оплодотьзрения.

9. Скорость включения радиоактивного предшественника в белки оказалась более высокой во фракции ядерного матрвкса, что свидетельствует о большей скорости кругооборота ого белков па всех сроках беременности. Новообразование белков ядерного матринса болькэ подавлено пра тотальном облучении.

.10. Молозипный фактор, выделенный из молозива коровы обладает радиозшдатпкм эффоктои при введения его хшюпш подкожно.в дозо Î № на грамм масса тела за 30 мин до и после облучения дозой 8 Гр в течение 4-х ДкоЗ.

11. Введение иолозшшого фактора до я после облучошш в до-зо..8.Гр снижает уровень накопления диенов и дианкетонов в ядрах клеток печени и способствует более ранпой нормализации перекяс-пого окисления лявдаов. Радиозацитноэ действие молозивного фактора проявляется в нормализации активности Лермонтов^ ассоциировавши о ядеряоЗ оболочкой: цитохром-с -оксидазой,Mg +-АТФ-азой и PHS-азой.

12. Применение молозивного фактора в профилактических целях (его введение животным до и после облучения в дозе 2 Гр в течение 4-х дней) приводит к меньшему изменению структуры ядер, частичному угнетению активности мембраносвязанных ферментов, снижению накопления продуктов перекяоного окисления липидов в ядрах клеток печени беременных крыо п юс эмбрионов.

Спшок работ, опубликованных по теме диссертации ... . "

I. Действие радиации на структуру и функция ядерной оболочки /Мирхамидова II., Кузьмина U.H., 'Мирахмедоз А,К., Бульдяева Т 3», Троицкая 1.П., 3 барский И .Б., Хамидов ДД. // В тез. П-ой Радиобиологической конференция социалистических стран. - Варна, НРБ, 1978. - С. 197.

• 2. Действие рентгеновского облучения на ядерную ободочку попеки красы /Мирхашдова П., Кузьмина G.H., Троицкая Д.П., Бульдя-ева.Т.В», .ЗбарскиЯ Н.Б., Мпрахмедов А;К. // Цитология. - 1979. - T. St. - К 7, - 0. 768-774.

. 3. Плотность ядерных пор в клетках печени.крысы.при регенерация .'я.рентгеновском облучении животных /Кузьмина G.H., Троицкая Л Д., Мярхамвдова.П., Бульдяева Т.В., Збарский И.Б., Григорьев В,Б,// Цитология. -.1979. - T.2I. - № 8. - С. B75-88I.

4. Действие ионизирующей,радиации на момбраны.ядеряоЯ оболочки / Шрхамидова П., Мирахмедоз А.К., Кузьмина С.Н., Троицка? Л.11., Бульдяева Т.В., ЗбарониВ И.Б., Хаг.шдов. Д.Х. // Радиочувствительность и процессы восстановления у животных н растений: Tes. Все-ооюз. кон?. - Ташкент, 1979. - С. 14-15.

5. Влияния облучайся па транспорт балка в ядрах пэчепи крыс / Кузьмина G.H., Мирхапидсяа Л,, Бульдяева Т.В., ЗбарониЙ И.Б. // Радиочупствктйльиость а процессы посстановлашвт у гпшот-шх* я растовяЯ: Тез. Бсоссиз. конф. - Ташкент, 1973. - G.17-16, , . G. Влшпшэ лонязирующоЯ радиации на ядерную оболочку лелсня окбряонов кролиха./Шрахмедов А.К., Мирхамвдсза П., Джураова М.М., Хамидов ДД. // Тезисы УП.Всесоюзного симпозиума по структуре л.функциям клеточного ядра. - Харьков. - I98Q. - G, 104..

7. Влияние ионизирующей радиации на лшнд-$эрмонтяую оисте-му.клеток печени.эмбрионов.кролика Дкураеяа U.M., Млрхаиадова II., Мярахмадов А.К. // Тез. докл. Ш-ей конференции бяохяшкоа. республик СредмЙ Азии и Казахстана. - Душанбе. - 1981. - Т.П. -0. 96..

8. Влияние рентгеновского облучения на морфологическую структуру, митохондрий гепатэктомяровашшх крыс /Мирахмедса А.К., Мярта-кидова П., Хамидов Д.Х. // В кн.: Цитологические механизмы гиогс-генезов. Изд. "Фан", Ташкент, 1983. - G. II5-IIS. . .

9. Дейсталё/рентгеновского облучения на,ферментную антайт. ность митохондрий печени крыс /Мирхамядшза П., Мирахмадов AJÍ.., Хамидов Д.Х. // В кн.: Цитологические механизмы гистогенезов. Иад. "Фан", Ташкент,:1983. - С, II7-II8.

. 10. Реакция, мембран ядериоП оболочки и.митохондрий ялегок печени на различные факторы /Уграхмздаз А.К., Уирхамидсза П.,. Саратова Г.А., Шаралиев A., Хамил gb Д.Х. // В кн.: Ультраструктура и патология печени. Знание, Рига. - 1984. - С, 107-114.

II. Действие облучения па изолированные мембраны клеточного ядра /Мирахмедсз А Д., .Мзрхамадова П., Хам ядов Д.Х. // Узбекский биологический журнал. - 1985. - Л 4. - с. 49-52.

.12. Действие ионизирующей радиация"на-ядерную оболочку печени беременных крыс и окбрлонов / Миргакидова П., Шамсутдинсза Г .Т., Исакова A.B., Анклава 5.А., Мирахмедов А.К..// Ï Всесоюзный радиобиологический съезд: Тез. докл. - М., Пупино, 1989. - С. 1037-ГОЗЗ. . .

13. Изменение АТ5-азпой активности и транспорта РЕК из ядер клеток печешь,беременных крыс.я эмбрионов после облучения Д!ам--сутдянова Г .Т., Мирхамздаэа.П., Ибрагвмгодяаева.М.П., .Мярахмедоэ А.К. //.Узбек, бяол. журнал. - 1990. - В I. - С. 8-1Г.

14. Effect of ionising radiation on liver nuklear enzyme activities iu maternal organisa and etabvyos / HiraUtmeçlov 4.K., •

tiirthanidova P., Sbaasytdinova G.T., Akilcva I'-A., Isakova A.B. // She 20th Meeting of the Federation, of European Biochemical Societies: Abstracts. - Hungarian, Airlines, Budapest. -1990. P. 165. .

15. She effect of irradiation on nuclear иэиЬгале in^abry-ogenesis / Kirakbiaadov A.K., Mirkhasidova P.» Shaissytdinova S.T., Akilova F.A., Isafcova A.B.,. Bekfitiov К.Ы. // The third Eu~ ' ropean Congress on cell Biology: Abstrakts. - Firenze, Italy, 1990. -, P. 262.

16. Влияние радиации на ферментативную активность.ядер печени беременных организмов.я.эмбрионов /.Мирхамидова П,,.Мирах-медов А.К., Шаисутдяиова.Г.Т.,.Еекаиов Х.М. // Структура и функция клеточного ядра: Тез..докл. I Всесоюз. сишоз. - Гродно, 1014 октября, 1990. - С.146.

17. Влияние радиации на функциональную активность ядер печени беременного организма.и эмбрионов /МирахмеДов А.К», Мпрхаыидо-ва'П., Шамсутдпнова.Г.Т., БекановХ.М. // Молекулярно-клетотннв 'механизмы хронического (внешнего и внутреннего) действия ионязя- . рукщих излучздий-на биологические систеш: Тез. I Всесоюз. сим-поз. - Пушино'; 3-5 декабря, 1990. - С. 85-86. • . .

.18. Действие факторов внешней броды н&'.Елеточное ядро /Ми-рахмедов А.К., Мирхамидова П., Саганова Г .А-., Азимова Ш.С. // Фан. Ташкент. - 1990. - 132 с. .'

19.-Влияние, биологически активного вещества на перекисное окисление липадов в тканях облученных крыс Дамядоз ДД., Мирхамидова П., Мпрахмедоэ А.К., Арипдканов А .А.,-Исакова А.В. // Молеку-лярно-клет очные механизма хронического действия ионизирующего излучения на.биологические систеш: Тез. I Всесоюз. сишоз. - Пущине. - 1990. - С. 124-125.

20. Effect of radiation on functional activity of nuclear membrane from pregnant anioals and their fetuses / Mirakhmedov A.K., Mirkhamidova P., Shaosutdinpva G.T. // 7th "Tihany" Simposium on Radiation Chemistry, Balatinzeopak Hungary. -.1990» ~

P. 96. . ..... . - '

21. Влияние радиации на перекисное окисление липидоз мемб-г . ран ядер.печени беременных крыс и их эмбрионов /Шамсутдинова Г.Т,, Шр:ашдсваП.,..№рахмедав А.К. // 1-ая конференция молодых учетных Узбекистана: Тез. докл. - Ацдитай, 1991. - С. 390-391.

22. Влияние ^-облучения на бирсинтез балков ядер и ядерного матрпкса печени беременных крыс и их эмбрионов /Мнрхамидова II., Мирахмвдов А.К., Шамсутдинова Г.Т.//У конф.биохимиков респ. Сред. Азии и Казахстана:Таз.Докл. 12-15 ноября 199Г г.-Ташкент, 1991. -С. 68.

23. Влияние радиации на структуру и функцию ядерной оболочки печени облученных беременных крыс и их эмбрионов/Йнрахмедов А.К., Мирхамидова П., Шамсутдинова Г.Т..Филатова Л.С.//Цитология.-1991. -Т.33, JJ 5.-С. 115.

24. Влияние ^-облучения на структуру и ферментативную активность ядерной оболочки печени беременных крыс и их эмбрионов/Мирах-медов А.К., Мирхампдова П., Шамсутдинова Г.Т.,Филатова JI.C., Хами-дов ДД.,Збарский И.Б.//Цитология,1992.-Т.34.-]:£.-С.З-12.

25. Влияние ^"-облучения на биосинтез белков матрпкса печени беременных крыс и их змбрионов/Мирхаиидова П., й'амсутдинова Г.Т., Мирахмвдов А.К. .Филатова JI.C. .Бульдявва Т.В. .Збарокии И.Б.//Радиобиология .-1992.-Т.32.-№3.-С.406-411.

26. Влияние,- однократного внешнего ^-облучения на разных этапах онтогенеза на тиреоидный статус крыс/Туракулов Я.Х..Ташходаас-ва Т.П..Лягинская А.1/1..Гегеле Т.В.,Мирхамидова II.//Радиобиология. -I992.-Т,32.-I 4.-С.522-527,

21'. Влияние, биологически активного вещества на структуру и функциональную активность.ядер печени облученных крыс/Хамидов Д.Х., Мирахмвдов А.К.,МирхамидоЕа П..Аршджанов A.A..Филатова JI.С.,Исакова А.В.,Ляураева М.;Л.//Радиобиология.-1992.-Т.32.-К5.-С.69S-700.

28. Влиянио молозивного полипептида на структуру и перекисное окисление липпдов ядер печени крыс в отдаленные сроки после ^-облучения. /Мирхамидова П.»Мирахмвдов А.К.,Беканов ...М.,Филатова Л.С,, Арипджанов А.А.,Хамидов Д.Х./Збарский И.Б./Радиобиология.-1993.-

Т.33.-вып.3(6).-0.861-866.

29. Структура и функция ядер клеток печени крыс в отдаленные сроки, после облучения в присутствии молозивного фактора /Хамидов Д.Х. .'-¡Лирхамижова П., Баканов Х.М..Арипджанов A.A., Филатова JI.C., Мирахмвдов A.K.//I конф. биохшл. респ. Таджикистана "Проблем! биохимии".Тез.докл. 21-23 сентября 1993 г.-Душанбе, 1993.- С. 93.

40 • .Изобретения

30, Способ получения препарата для профилактики и лечения-снкоболышх. Патонт й'ПЩР S300430,1.(0280 ri») от 10 января 1994г.

31. Способ заадтц нормальных'тканой организма от лучевых поражений. Патент № ПЩР 9300190.1.(0755 И) от 5 января 1994 г.

"Гепатоцйтлар ядро 1$обигйга кур таъсирмиинг цитологии па биокимёвий анализй".мавэусздагя диссертация ишининг «рхцочп мазмуни

Утказилган електрок-ьшкросжопик тад^муэтлар натижаси шуии куроотдаки: ажратиб олннган ядро цобигини in vitro, ^емда хайвон организм» пурлантирилгацца, ядро цобигиняиг мембраналари радиация-га таъсирчандир. Ажратиб ол'внган ядро'нп in vitro нурлантирилганда ядро |{обикппшг мембраналари радиорозлотентдир.

in vivo нурлантирилганда, ядро ^обимшшг поралар комплекс и мэмбраналар структурами нисбатан».радиация таъсирига анча чидам-лпдир. Каламувшарии О Гр мш$ор билан нурлантирилганда, ядронинг устки ^исмйда порэлар комплокси оони камайиаш, пишопланган о^сил-ларни ядродан питопяазыага транспорт цплшшт фаоляятини бузилишига олиб келдя.

^омидадо^икнинг ^амма даврларига ва эмбрионлпрнинг Topaijijviëx ж раЗнлариго 2 Гр миуюр нур таъсир аттйрклгацца, зрмиладор кала-мушларни ва эмбрионларни. гедатошт хужайраларининг ядро структура-си радиация таъсирига.сезувчэндир, таъслрчанлик -^омиладордикшшг даврига ta эмбрион тараэдиёт.яараёнига боглы;. ^омиладор кэламуш-лар ва уларианг эмбриошври гепатоцитлариинг ядро ^обирини узгари-ши, мембраналарда жойлашган феркентларни активлигшш камайишида 3fSM номобн булади. Бу фэрменгларшшг функпияси ядро ^обигини структурам билан уавий богли^.' Цитохром-о-оксидаза, НАД.Н-цнтохром-с-редуктпза ва М^+-АТФаза ферментлари активлигини знг куп пасаипши омбрионларни органогенез даврида in utero нурлантирилганда кузатил-дя,

^айвонларга оигир оу'из оутпдан ажратиб олинггш омилни тана вазнининг I гра.мига I мг «шдаордд 30 мин.'8 Гр нурлзшшщая аввал ва кейин 4 кун мобайнида теря. оотим юб.орилгянда нурланишга ijapun таъсир курсата олади.-Буидай иороитда кола^иярпинг яиовчпплпп; ор-тоди, апгар хужайра ядросшшг структура«} jjaîita .тиклиноди ва ли-пидлартшг. перэкисли оксидланипш ва ядро крбирн иймбраналаригя жоВдащгои форглаитларнянг•акхивлиги нормаллапзди. Огпз сути омишш 2 Гр мигр;ор нурллнтириидан оялян -на кейкн 4 кун давомада трмиладор калсмуплорга юборялгэидэ, зрмалядор х:?1Л£мутдвр ва уларнинг эмбрион-ларпп; ядро структурасини нам реи узгэразюга яп липидларня дарители

QKCwwm-i Ma^cy.'iowopsiia KaMaSmaisra oawú itoaasa.

Cytologic«! and biochemical analysts of hepatocyte nuclear

nieitiürftne reaction to irradiation. In the result of ulaotronis microscopic atudy curriad put nuclear ¡nwmbranea have üaaji shown to ba rsidíoaariaitivs strucfcui'ea i¡pon in vitro irradiation of aniwiai organisra and ioolotod nucloar taewuraneo. Upon irradiation of iaolatuc! nuclei in vivo tha naola-ar membranes are radiorsaiotant.

Upon irradiation in vivo pural complexes ar:? ntox's radioatablt* than tha nuclear, iwniibrano ¿structures. Upon total rat irradiation in the doso of 8 a tha doorcase of »oral complexes at the nuclear periphery ia accompanied by the disorder oí iabslfcd protein trana-porfc from riuuleua to cytoplasm,

Hopatocyte coll nuclei of pregnant rate anc! rut ftmbryon are the radiosensitive structures) upon the irradiation in the doso of 2 (i during all pex-ioda of' pregnancy and erabi'yogenasia, organism aansitivtty being dependent on terms of pregnancy arid embryo ds-veiupmont at the'moment «1 irradiation. Tho disorder in hepato-cyto call laeinbrnriftj of pregnunt rata and rat embryos msusifesta itself in the inhibition of membrane-bound en?.yma activity. 'The ao.it deap inhibition of cytochroine-c-Cixidaoe, HAD. H-cytochroma reductase and Kg^ * AX'Pase activity has bean obdorved upon irradiation in utero during orgaaogoiiesi« (On thu 13th day of de val opulent ).

Coloatrlc factor iaolat.jd from blastings po.-itienooa the radioprotective effect upon ita subemtuneems 4-day adisiniatratlon to animals iri the dcae of 1 mg par gram of weight 30 minutes before and after irrtidi>ition in the dose of ü 0. Under the conditions rat survival rate Is Increased, more rapid restoration of nuclear structure y takes place nud peroxidation of lipids and the activity oí mcKBbrwie-bouiut onsywaa Hadotrjat^ci >vith rat- liver cell nucLfe'-ir membrane 'U'e normal ií:od .

fx'ophil actic 4-ii,ay mm ini at rat ton ut'the col us trie factor i-e fore and after the ii-i-adinlion in the doje of 2 Ü leída to leaa alteration 1n nuclear structure, to the decrease of accuuulfittan of lipid peroxidation product3 in ¡¡reprnftht'" rnt liver cull iiiv.l«i and rut eubiyo. ;

Информация о работе

Мирхамидова, Парида
доктора биологических наук
Ташкент, 1994
ВАК 03.00.25

Автореферат

Похожие работы