Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Цитохром-P450-зависимые монооксигеназы при иммобилизационном и гипокинетическом стрессе

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Цитохром-P450-зависимые монооксигеназы при иммобилизационном и гипокинетическом стрессе"



На правах рукописи

<г^

Сысаков Дмитрий Андреевич

Цитохром-Р450-зависимые монооксигеназы при иммобилизационном и гипокинетическом стрессе

03.00.04-биохимия

■1 5 ОКТ 2&53

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Челябинск - 2009

003479906

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Челябинская Государственная медицинская академия Росздрава»

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ:

доктор биологических наук, профессор Цейликман Вадим Эдуардович ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

Доктор медицинских наук, профессор Никоноров Александр Александрович Доктор медицинских наук, профессор Камилов Феликс Хусаинович

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Российский Государственный Медицинский Университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита состоится /О, I ( 2009 "г. в _часов на заседании

диссертационного совета Д 208.117.02 при ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия Росздрава» (454092 г. Челябинск, ул. Воровского, 64).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО « Челябинская государственная медицинская академия Росздрава» (454092 г. Челябинск, ул. Воровского, 64)

Автореферат разослан "_ I - / О 2009г.

Ученый секретарь совета, д.м.н., профессор

Н.В.Тишевская.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность исследования. Система цитохрома Р450 печени характеризуется высокой чувствительностью к действию разнообразных стрессорных раздражителей в том, числе и к тем, которые не являются непосредственными индукторами микросомального окисления, а значит не вызывают формирование «структурного следа адаптации» в виде гипертрофии микросомальных структур (Никоноров A.A., 2003; Твердохлиб С.И., 1989; Меерсон Ф.З., 1986). Во многом это связано с уникальной ролью системы цитохрома Р450 в метаболизме липофильных эндобиотиков (Арчаков А.И., 1975; Ляхович В.В., 1978; Сибиряк C.B., 2006). Известно, что цитохром Р450-зависимые монооксигеназы печени принимают активное участие в биосинтезе холестерина, желчных кислот, эйкозаноидов, стероидных гормонов и.т.д. (Сибиряк C.B.,2006). Поэтому имеются основания предполагать, что различные изоформы цитохрома Р450 играют уникальную роль в регуляции эндокринно-метаболического статуса при стрессе. На сегодняшний день данные, касающиеся состояния цитохром Р450-зависимых монооксигеназ при стрессорных воздействиях сложны и противоречивы. Имеются сведения об усилении активности этих ферментов при воздействии такого стрессорного фактора, как низкие температуры (Перепечаева M.J1., Гришанова А.Ю. 2006). Вместе с тем, имеются данные о том, что при ишемическом шоке защитным эффектом обладают индукторы цитохрома Р450 (Биленко М.В., 1989 Грек O.P., 1997). Напротив, ингибиторы цитохрома Р450 снижали устойчивость экспериментальных животных к ишемическому шоку. Данный феномен объясняется присутствием среди липофильных метаболитов-эндобиотиков цитохрома Р450 вазоактивных факторов, обладающих протекторным действием в ишемических условиях.

В то же время имеются данные об угнетении при стрессорных воздействиях активности различных изоформ цитохрома Р450. Супрессия цитохром Р450-зависимых монооксигеназ объясняется стрессорной активацией липопероксидации (ПОЛ) мембран микросом и митохондрий (Деев Л.И., 1983). В связи с этим уместно обратить внимание на способность липопероксидации вовлекаться в трансдукцию гормональных сигналов (Дубинина Е.Е., 2001). Известно, что усиление ПОЛ является составной частью цитокин-зависимой внутриклеточной сигнализации. В свою очередь известно, что провоспалительные цитокины обладают депримирующим действием в отношении цитохром Р450-зависимых монооксигеназ (Morgan Е., 1997; Сибиряк C.B., 2006). Однако только в отдельных исследованиях проводится сопоставление между содержанием циркулирующих цитокинов и уровнем цитохром Р450-зависимых монооксигеназ при стрессе (Сибиряк C.B., 2004). Остаётся малоизученной модифицирующее влияние стресса и иммуностимуляции на чувствительность цитохром Р450-зависимых монооксигеназ к действию индукторов и иммуностимулирующих факторов. Цель исследования: Изучить активность цитохром Р450-зависимых монооксигеназ при стрессорных воздействиях, характеризующихся повышенным содержанием циркулирующих цитокинов

Задачи исследования:

1. Провести сопоставление между содержанием циркулирующих 1Ь-1, 1Ь-6 и уровнем активности изоформ цитохрома Р450 СУР1А1 и СУР2В1/2 в динамике гипокинетического стресса

2. Провести сопоставление между содержанием циркулирующих 1Ь-1, 1Ь-6 и уровнем активности изоформ цитохрома Р450 СУР1А1 и СУР2В1/2 при редко чередующихся одночасовых иммобилизациях

3. Провести сопоставление между содержанием циркулирующих 1Ь-1, 1Ь-6 и уровнем активности изоформ цитохрома Р450 СУР1А1 и СУР2В1/2 при ежедневных одночасовых иммобилизациях

4. Изучить влияние ежедневных и редко чередующихся одночасовых иммобилизаций на чувствительность цитохром Р450-зависимых монооксигеназ к рекомбинантному 1Ь-1(3 и к глюкокортикоидному препарату

5. Изучить влияние ежедневных и редко чередующихся одночасовых иммобилизаций, на выраженность 2,3,7,8 - тетрахлор-р-бенздиоксин-зависимой индукции изоформы СУР1А1

Научная новизна: Установлено, что при гипокинетическом стрессе продолжительностью 7-10 суток и при редко чередующихся иммобилизациях, несмотря на прирост содержания циркулирующих цитокинов, не развивается цитокин-зависимая супрессия изоформ цитохрома Р450 СУР1А1 и СУР2В1/2. Обнаружено развитие десенситизации цитохром Р450-зависимых монооксигеназ к депримирующему действию провоспалительных цитокинов. Напротив, при ежедневных иммобилизациях отмечена сенситизация изоформ цитохрома Р450 СУР1А1 и СУР2В1/2 к депримирующему действию провоспалительных цитокинов. Установлена способность редко чередующихся иммобилизаций купировать антиген-зависимую супрессию активности цитохром Р450-зависимых монооксигеназ. Для редкочередующихся одночасовых иммобилизаций отмечена способность усиливать чувствительность изоформы СУР1А1 к действию супериндуктора 2,3,7,8 - тетрахлор-р-бенздиоксину (ТХДД), а для ежедневных иммобилизации чувствительность этой изоформы к ТХДД-зависимой индукции снижается. Обнаружено снижение активности изоформ цитохрома Р450 при редко чередующихся и ежедневных одночасовых иммобилизациях в ответ на дополнительное введение глюкокортикоидного препарата. Теоретическая и практическая значимость

Полученные результаты исследований подтверждают

сформулированную ранее гипотезу (Цейликман В.Э. и соавт., 2008) о цитокиновой регуляции активности цитохром Р450-зависимых монооксигеназ при стрессе. Экспериментальные данные, касающиеся постстрессорной индукции и постстрессорной супрессии изоформ цитохрома Р-450 также необходимо учитывать при назначении разнообразных медикаментов, метаболизирующихся путём микросомального окисления в печени с целью минимизации их побочных эффектов.

Положения, выносимые на защиту:

1. В условиях 7 суточной и 10 суточной гипокинезии и при редкочередующихся одночасовых иммобилизациях, несмотря на прирост содержания циркулирующих цитокинов не развивается супрессия активности изоформ цитохрома Р450

2. Стрессорные изменения чувствительности к цитокинам определяют направленность изменений активности изоформ CYP1A1 и CYP2B1/2.

3. Чувствительность изоформы CYP1 Al к индукции 2,3,7,8 - тетрахлор-р-бенздиоксину и к рекомбинантному IL-ip находятся в реципрокных отношениях.

Апробация работы

Основные положения работы изложены и представлены на 12th International Congress of Immunology (Montreal, Canada, 2004), 5th international congress of pathophysiology, (Beijing, China, 2006), 16th European Congress of immunology (Paris, 2006), International society for adaptive medicine 8th World congress (Moscow, Russia, 2006). Публикации

По теме диссертации опубликовано 14 печатных работ, из них 5 - в рецензируемых журналах по перечню ВАК Минобразования РФ. Структура и объём диссертации

Диссертация изложена на 122 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, главы собственных исследований, обсуждения результатов, выводов. Библиографический указатель включает 236 источников: 93 - на русском языке и 143 -иностранных. Работа содержит 24 таблицы, 6 рисунков.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В работе проводилось экспериментальное моделирование режимов иммобилизационного стресса с различным характером господствующей адаптационной стратегии, фармакологической активации гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы, экспериментальное моделирование гипокинезии. Исследование выполнено на 623 лабораторных крысах массой 180 - 300 г. обоего пола.

Эксперименты проведены в соответствии с этическими нормами, и рекомендациями по гуманизации работы с лабораторными животными (Кополадзе Р.А.,1998), отражёнными в "Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных целей" (Страсбург, 1985).

Хронический стресс воспроизводился одночасовыми иммобилизациями, которые осуществлялись путём фиксации животного за конечности на спине с применением для этих целей прямоугольных планшет из фанеры (Волчегорский И.А. и соавт., 2000). Были использованы два режима повторных стрессорных воздействий. Первый режим воспроизводился путём ежедневных одночасовых иммобилизаций в течение 3 суток. Согласно

полученным ранее данным В.Э. Цейликмана, при таком способе моделирования хронического стресса доминирует толерантная стратегия адаптации (Цейликман В.Э., 1998). Для второго режима повторных стрессорных воздействий характерно доминирование резистентной стратегии адаптации и наличие поведенческих расстройств тревожно-депрессивного характера (Волчегорский И.А., 2002). Его воспроизводили одночасовыми иммобилизациями, с интервалом 72 часа между отдельными стрессорными эпизодами. Всего животные четырежды подвергались одночасовому иммобилизационному стрессу.

Гипокинетический стресс моделировали путём помещения крыс в специальные клетки - пеналы, ограничивающие подвижность животных при свободном доступе к пище и воде. Применялись 1-,3-,7-,10-,30-суточные модели гипокинетического стресса.

Моделирование стрессорной активации ГГАС осуществляли путём введения пролонгированного глюкокортикоидного препарата триамцинолона ацетонида (кеналог ,Veb Berlin Chemie, Германия); (Волчегорский И.А.,1993; Волчегорский И. А и соавт., 2000).

Для воспроизведения цитокин-зависимой активации ГГАС применялся рекомбинантный человеческий IL-lß (Беталейкин, Betaleukinum, hrIL-1 ß) (ГНЦ РФ ГосНИИ особо чистых препаратов, Санкт-Петербург).

ТХДЦ (Cambridge Labs) разводили в суспензии кукурузного масла, и в дозе 2,5 мг/кг, вводили через зонд. Биохимические методы

Для оценки монооксигеназных активностей в печени использовалась субмитохондриальная фракция -12000§-гомогенаты (812-фракция), которые адекватно заменяют очищенные микросомы (Pelkonen О. е.а.,1974). Все процедуры получения 812-фракции проводили на холоде (4°С). Содержание белка в 812-фракции оценивали, используя метод Брэдфорда и стандартный набор для определения белка Protein Assay Kit (BioRad). Микросомы получали методом низкоскоростного центрифугирования в присутствии ионов Са2+ (Kamath S., Rubin Е.,1972).

В супернатанте 812-фракции флюорометрическим методом (Pocl R., Foutus J., 1978) определяли 7этоксирезоруфин -О-деэтилазную активность (ЭРОД- активность; CYP1A1 - зависимое моноксигенирование).

Для постановки реакции дебензилирования 7- дибензилоксирезоруфина (БРОД-активность; СУР2В1/2-зависимое монооксигенирование)

осуществляли те же этапы, как и для определения ЭРОД - активности. Единственной особенностью дебензилазной реакции являлось двухкратное увеличение содержание субстрата в реакционной среде.

Для определения СУР2С-зависимого монооксигенирования осуществляли определение дибензилфлюоресцеиндибензилазной (ДБФД) активности.

Для определения СУРЗА-зависимого монооксигенирования осуществляли деметилирование эритромицина (Wrighton S et all., 1985).

Оценку р-нитрофенол-гидроксилазной реакции (ПНФГ; СУР2Е-зависимое монооксигенирование) проводили по методу Р-в. Рогкей с соавторами (2001). Определение анилин-р-гидроксилазной реакции проводили в реакционной смеси содержащей микросомы, метаболизируемый субстрат и НАДФ*Н.

Содержание продуктов 'перекисного окисления липидов (ПОЛ) оценивали спектрофотометрически в липидном экстракте исследуемых тканей по методике Волчегорского И.А. и др. (1989).

Уровень кортикостерона в сыворотке оценивали флюорометрическим микрометодом (Балашов Ю.Г., 1990).

Содержание нитритов/нитратов в сыворотке крови определяли после предварительного осаждения белков сульфатом цинка в реакции диазотирования сульфаниловой кислоты с последующим соединением соли диазония с а-нафтиламином и образованием азо-красителя красного цвета.

Животных иммунизировали тимусзависимым антигеном - эритроцитами барана (ЭБ). Перед использованием ЭБ трижды отмывали в физиологическом растворе. Учитывая, что доза 1><108 ЭБ является оптимальной как для подкожного, так и внутрибрюшинного введения антигена, для индукции системного и локального иммунного ответа использовали данную дозу ЭБ. В качестве разрешающей дозы для подкожной иммунизации использовали 5х107 клеток. В случае индукции гуморальной и клеточной составляющей иммунного ответа сначала проводили внутрибрюшинную иммунизацию, а через 4 дня осуществляли повторную иммунизацию, а в случае индукции клеточно-опосредованного иммунного ответа антиген вводили двукратно, с интервалом в 4 дня под апоневроз стопы животных.

Гистологические препараты печени готовили по стандартным методикам (кусочки фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина с последующей проводкой через спирты, заключали в парафин, изготавливали серийные срезы 5-7 мкм, которые после депарафинирования окрашивали гематоксилином и эозином). Морфометрическое определение абсолютного количества клеток (гепатоцитов, моноцитов/макрофагов, лимфоцитов) проводили на 1 мм2 среза. Объёмное содержание некоторых исследуемых объектов выполнено с применением планиметрического метода точечного счета (Автандилов Г.Г., 1980).

Содержание циркулирующих цитокинов определяли

иммунноферментным методом с использованием наборов BIOSOR.CE (Бельгия).

Статистическая обработка результатов

Данные обрабатывались общепринятыми методами вариационной статистики (Лакин Г.Ф., 1990) и выражались в виде среднеарифметической (М) и её стандартной ошибки (т). Оценка достоверности различий осуществлялась с помощью непараметрических критериев (и- критерия Вилкоксона-Манна-Уитни; \¥\У-критерия Вальда-Вольфовица, X одностороннего критерия Колмогорова-Смирнова), параметрического критерия Ньюмена-Келса - Тч'К. (однофакторный дисперсионный анализ

ANOVA). (Гублер E.B, Генкин A.A., 1969; Гублер E.B. 1978).

Применялись только односторонние критерии, различия между группами считались статистически достоверными при Р < 0,05. Статистические взаимосвязи изучали при помощи непараметрического корреляционного анализа по Опирмену (rs) и Кенделлу (rk). Для обработки результатов исследований использовали пакет прикладных программ «Statistica 6.0 for Windows».

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ОБСУЖДЕНИЕ

1. Изменение цитокинового статуса и активности цитохром Р450-

зависимых монооксигеназ в динамике 30 суточной гипокинезии

Данные, представленные на рисунке 1, свидетельствуют, что уже на ранних этапах гипокинетического стресса наблюдается развитие гиперцитокинемии. Уже через сутки после начала гипокинетического стресса наблюдалось увеличение содержания TNF на 17%. В этот период ещё не обнаруживались статистически значимые изменения содержания IL-1, IL-6 и TNF. После завершения ГК-3 содержание TNF оставалось повышенным. При этом выраженность гиперцитокинемии усилилось за счёт увеличения содержания IL-1 на 10% и IL-6 на 15%.

Рисунок 1

Изменения содержания IL-1, IL-6, TNF при 1,-3,-7,-10,-30-суточных

режимах гипокинетического стресса

Контроль ( ГК 1 (п=7) ГК 3 (п= 10) ГК 7 (п=10) ГК 10 (п= 10) ГК 30 (п=8) П=8) Сутки

- -♦- - IL-1 — е_ IL-6 ' —•-TNF

Примечание: На рисунке представлены данные отражающие активность IL-1; IL-6; TNF

(пг/мл). ГК - гипокинетический стресс.

Данные представлены в % от показателей группы контроль.

На протяжении 7 и 10 суток гипокинетического воздействия оставалось повышенным содержание всех исследованных цитокинов. Вместе с тем, у животных группы ГК-30 содержание IL-I, IL-6 и TNF снизилось до контрольного уровня. Таким образом, характерная для гипокинетического стресса гиперцитокинемия имеет транзиторный характер и проявляется только на начальных этапах гипокинетического стресса.

На начальных этапах гипокинетического стресса развитию гиперцитокинемии соответствовало снижение активности цитохром Р450-зависимых монооксигеназ. (рисунок 2) В частности, при ГК-1 наблюдалось снижение CYP1 Al-зависимого деалкилирования 7-этоксирезоруфина (ЭРОД-активность) на 55 %. При этом не обнаружено статистически значимых изменений СУР2В1/2-зависимого дебензилирования ' 7-

дибензилоксирезоруфина (БРОД-активность).

Через трое суток гипокинезии нормализовалась ЭРОД-активность на фоне статистически значимого снижения БРОД-активности на 45 %.

Важно подчеркнуть, что в данном случае отмечено снижение БРОД-активности в пересчёте на орган, а не мг/белка, как в случае односуточной гипокинезии. На 7 сутки гипокинетического стресса наблюдалась индукция CYP3A - зависимого деметилирования эритромицина (ЭРНД-активность) (с 18,78±2,557 нмоль/мин/мг белка в контроле (п=5) до 30,06±2,763 нмоль/мин/мг белка при гипокинетическом стрессе (n=6), P=0,034U). Известно, что именно эта изоформа цитохрома Р450 индуцируется глюкокортикоидами.

Рисунок 2.

Изменения CYP1 Al-зависимой ЭРОД-аютшности, CYP2B1/2 -зависимой БРОД-активности при 1,-3,-7,-10,-30-суточных режимах гипокинетического стресса

Контроль (п=8) ГК1 (п=7) ГК 3 (п=10) ГК7(п=10) ГК10(п=10) ГК30(п=8) —*—ЭРОД - активность --■--БРОД-активность Сутки

Примечание: На рисунке представлены данные отражающие ЭРОД и БРОД активности, выраженные в пкмоль/мин/мг белка; ГК - гипокинетический стресс.

Данные представлены в % от показателей группы контроль.

Отсутствию гиперцитокинемии в период 30 суточной гипокинезии соответствовала нормализация СУР1А1 - зависимого и СУР2В1/2-зависимого монооксигенирования. Однако при этом наблюдалось снижение СУР2С-зависимого дебензилирования дибензилфлуоресцина.

Следует отметить, что при длительной гипокинезии ограничение цитохром Р-450-зависимого монооксигенирования имеет цитокин-

независимый характер. Вероятно, в данном случае супрессия активности изоформы СУР2С связана с активацией свободно-радикального окисления в печени.

2. Изменение активности цитохромР450-зависимых монооксигеназ при стрессорных воздействиях сопровождающихся сниженной чувствительностью к рекомбннантному 1Ь-1р

Данные таблицы 1 иллюстрируют особенности цитокинового статуса беспородных животных через 24 часа после завершения редко чередующихся одночасовых иммобилизаций (РЧИМ).

Установлено, что после завершения РЧИМ у беспородных крыс не претерпел статистически значимых изменений уровень 1Ь-1. Однако у этих же животных было зарегистрировано уменьшение уровня циркулирующего ГЬ-4, при одновременном приросте содержания сывороточного 1Ь-6 при РЧИМ. Несмотря на увеличение уровня провоспалительного цитокина, через 24 часа после завершения РЧИМ отсутствовали статистически значимые изменения в активности изоформ СУР 1А1 и СУР2В1/2. Однако наблюдалось увеличение активности п-оксифениленгидроксилазы, отражающей уровень СУР2Е-зависимого моноксигенирования (с 1,83±0,53 нмоль/мин/грамм ткани в контроле (п=12) до 2,137±0527 нмоль/мин /грамм ткани при РЧИМ (п=10)).

Таблица 1

Изменение уровня циркулирующих цитокинов при редкочередующихся

одночасовых иммобилизациях

Группа 11Л (пг/мл) И4 (пг/мл) 1Ь6 (пг/мл) ТОТ (пг/ил)

1.Контроль (п=12) 23,5±0,94 1,66±0,144 19,666±0,497 27,33±0,8

2.РЧИМ (п=10) 24,±1,137 1,1±0,233 21,5±0,909 27,9±0,874

Примечания РЧИМ - редко чередующиеся одночасовые иммобилизации

В более отдалённые сроки (96 и 120 часов после завершения РЧИМ) наблюдалось угнетение активности цитохромР-450-зависимых монооксигеназ. Так спустя 96 часов после завершения серии повторных иммобилизаций отмечено снижение СУРЗА-зависимой ЭРНД активности (с 0,282±0,043 нмоль/мин/грамм ткани (п=3) до 0,204±0,0019 нмоль/мин /грамм ткани (п=4) Р=0,039 \У\\0, а через 120 часов - СУР2В'/2.-зависимой БРОД-активности (с 416,96±17,59 пкмоль/мин/грамм ткани до 293,15±30,913 пкмоль/мин/грамм ткани Р=0,044\\'\\г).

Как уже ранее отмечалось, несмотря на наличие гиперцитокинемии, у стрессированных животных, отмечалась индукция некоторых изоформ цитохрома Р450. В частности, у беспородных животных обнаружено усиление п-оксифениленгидроксилазной активности (с 1,83±0,53 нмоль/мин/грамм белка (п=12) в контроле до 2,137±0527 нмоль/мин/грамм белка при РЧИМ(п=10))

Интересно отметить наличие отрицательной корреляционной связи между содержанием 1Ь-6 и активностью п оксифениленгидроксилазы у контрольных животных, (г РеагБоп= -0,59;р<0,05). Между тем у стрессированных животных не было отмечено подобной зависимости

В дальнейших исследованиях мы изучали влияние предварительных стрессорных воздействий на выраженность цитокин-зависимого депримирования монооксигеназной активности печени. В таблице 2 представлены данные, характеризующие уровень активности изоформ

Таблица 2

Изменения активности изоформ СУР1А1 и СУР2В1/2 у крыс при редкочередующихся одночасовых иммобилизациях после инъекции

__ ПЫР __

Группы ЭРОД-активность пкмоль/ мин/мг белка ЭРОД-активность пкмоль/ мин/грамм ткани БРОД-активность пкмоль/ мин/мгбелка БРОД-актпвносль пкмоль/ мин/грамм ткани

1. Контроль п—6 2,48±0,41 69,52±9,4 2,26±0,58 58,26±5,54

2. г1Ь-1В п=6 0,759±0,14 Р,.2=0,004и 22,65±4,0 Ри=0,004и 1,29±0,06 Зб,5±1,4 Р,.2=0,00би

3. РЧИМ + г1Ь-1В п=6 0,995±0,136 27,52±1,31 1,29±0,19 37,8±4,2 P2.з=0,04WW

Примечание: и - критерий Манна - Уитни; различия считали статистически значимыми прир < 0,05.

Р1.2 - статистическая значимость различий между 1 и 2 группой, Рг,з - статистическая значимость различий между 2 и 3 группой

СУР1А1 и СУР2В1/2 у стрессированных (группа г1Ь-1[3) и нестрессированных крыс (группа г1Ь-1Р).

Через 24 часа после инъекции г1Ь-1р у нестрессированных животных обнаружено трёхкратное снижение ЭРОД-активности, при одновременном уменьшении на 50 % БРОД-активности. У животных группы РЧИМ+ г1Ь-113 уровень БРОД-активности всего лишь на 3% был выше чем в группе г1Ь-113. Тем не менее, данное различие было статистически значимо. По ЭРОД активности наблюдалась статистически недостоверная тенденция к ограничению выраженности 1Ь-1-зависимой супрессии изоформы СУР1А1. 3. Влияние предварительных стрессорных воздействий на вызванную иммунизацией эритроцитами барана супрессию цитохромР450 зависимых монооксигеназ печени Ранее было показано, что этот режим повторных стрессорных воздействий характеризовался не только снижением чувствительности к действию рекомбинантного 1Ь-1р, но и иммуносупрессивным действием

(Григорьев И.И.,2007). Иммунизация сама по себе вызывает депримирование цитохром Р450-зависимых монооксигеназ. Поэтому в дальнейших исследованиях мы посчитали целесообразным изучить влияние РЧИМ на иммуно-зависимую супрессию цитохром Р450-зависимых монооксигеназ.

Через 96 часов после иммунизации эритроцитами барана у нестрессированных животных наблюдалось снижение уровня СУР1А1-зависимого монооксигенирования (с 2,02±0,17 пмоль/мин гр.белка в контроле (п=6) до 1,71±0,15 пмоль/мин гр.белка у иммунизированных животных (п=9)) при статистически недостоверной тенденции снижения активности изоформы СУР2В1/2. (с 24,35±1,87 пмоль/мин гр.белка в контроле (п=6) до 20,2±2,24 пмоль/мин гр. белка у иммунизированных животных (п=10)).

Предварительные стрессорные воздействия полностью отменили иммуно-зависимую супрессию цитохром Р450-зависимых монооксигеназ. По сравнению с подвергнутыми иммунизации нестрессированными животными у стрессированных крыс через 96 часов после введения эритроцитов барана на 20% повышена БРОД-активность (с 20,2±2,24 пмоль/мин/ грамм, белка в группе иммунизированных нестрессированных животных (п=9) до 24,35±1,87 пмоль/мин/ грамм, белка в группе иммунизированных стрессированных животных (п=10)) и на 17% ЭРОД-активность (с 1,71±0,15 пмоль/мин/ грамм, белка в группе иммунизированных нестрессированных животных (п=9) до 1,90±0,21 пмоль/мин/ грамм, белка в группе иммунизированных стрессированных животных (п=10) р=0,03711).

Обращает на себя внимание наличие отрицательной корреляции между уровнем ЭРОД-активности и выраженностью реакции ГЗТ (Иб= -0,526; Р=0,048).

Таким образом, в условиях РЧИМ наблюдалась отмена иммуно-зависимого депримирования цитохромР450-зависимых монооксигеназ. Вполне возможно, что данный вариант повторных стрессорных воздействий сопровождается повышением чувствительности к действию индукторов цитохром Р450-зависимых монооксигеназ. В дальнейших исследованиях мы изучали влияние РЧИМ на чувствительность к индуктору изоформы СУР 1А1-2,3,7,8 - терахлор-р-бенздиоксина (ТХДД).

4. Влияние предварительных редко чередующихся повторных иммобилизаций на чувствительность печени к действию тетрахлор — р -

бенздиоксина

В таблице 3 представлены данные, характеризующие интенсивность СУР 1А 1-зависимой ЭРОД-активности, СУР2В1/2 -зависимой БРОД-активности у стрессированных и нестрессированных животных через 96 часов после введения селективного индуктора изоформы СУР1А1 - 2,3,7,8, -тетрахлор -р - бенздиоксина (ТХДД). У нестрессированных животных (группа ТХДД) отмечено возрастание в 5 раз ЭРОД-активности в гомогенатах печени. В меньшей мере ТХДД усиливает БРОД-активность, что отражает неизбирательную селективность реакции дебензилирования дибензоилэтоксирезоруфина. В данном эксперименте наблюдалось

пятикратное увеличение ЭРОД и трёхкратное увеличение БРОД-активности через 96 часов после введения ТХДД. Предварительные стрессорные воздействия усиливали ТХДД - индукцию изоформы СУР1А1. Так, в группе РЧИМ+ТХДД уровень ЭРОД активности достоверно превышал таковой в группе ТХДД. Кроме того, введение ТХДД через 24 часа после завершения повторных иммобилизаций привело к снижению уровня СУР2В1/2-зависимого монооксигенирования. Подобные изменения могут быть связаны с фоновым уровнем активности исследуемых монооксигеназ.

Таблица 3

Интенсивность СУР1А1-зависимой ЭРОД-активности, СУР2В1/2-зависимой БРОД-активности у животных при редкочередующихся одночасовых иммобилизациях через 96 часов после введения тетрахлор —

р-бенздиоксина

Группа ЭРОД активность пкмоль/мин/грамм ткани БРОД активность пкмоль/мин/грамм ткани ЭРНД активность нмоль/мин/грамм ткани

1.Контроль (п=7) 1,145±0,28 0,728+0,1 0,036+0,17

2.ТХДЦ (п=8) 6,36±0,22 Р1.2=0,00Ш 2,81+0,31 Ри=0,00Ш 0,036+0,005

З.РЧИМ+ТХДД (п-в) 7,56+0,28 Ри=0,00Ш Р2.з=0,003 и 1,86+0,13 Р1,з=0,0011) Р2,з=0,02 и 0,06+0,02

Примечание II - критерий Манна - Уитни; различия считали статистически значимыми при р < 0,05.

Р1,2- статистическая значимость различий между группами 1 и 2; Р1.з - статистическая значимость различий между группами 1 и 3; Рг,з - статистическая значимость различий между группами 2 и 3

Важно отметить, что в группе РЧИМ+ТХДД по сравнению с группой ТХДЦ наблюдалось повышение уровня СУРЗА-зависимого монооксигенирования (с 6,36±0,22 пкмоль/мин/грамм ткани в группе ТХДД (п=8) до 7,56±0,28 пкмоль/мин/грамм ткани в группе РЧИМ+ТХДД (п=8)

р=о,оози).

Известно, что глюкокортикоиды могут выступать в роли индукторов этой изоформы. Между тем, РЧИМ сопровождался увеличением содержания циркулирующего кортикостерона (с 21,61±4,3 нмоль/л в контроле (п=8) до 25,61+5,31 нмоль/л в опытной (п=8) группе Р=0,015 Не исключено, что

характерное для группы РЧИМ+ТХДД увеличение ЭРНД - активности имеет глюкокортикоид-зависимый характер.

5. Влияние предварительных редко чередующихся повторных иммобилизаций на чувствительность печени к действию триамцинолона

ацетонида

Введение глюкокортикоидного препарата как стрессированным так и не стрессированным животным существенно отразилось на активности изоформы СУР 1А1.(таблица 4). Так, введение триамцинолон ацетонида нестрессированным беспородным животным (ТА) привело к снижению ЭРОД - активности на 9,25%. Предварительные стрессорные воздействия усугубляли глюкокортикоид - зависимое угнетение ЭРОД-активности. При этом в группе РЧИМ+ТА, по сравнению с группой ТА, отмечено снижение ЭРОД активности на 15%.

Таблица 4.

Модифицирующее влияние триамцинолона ацетонида на уровень ЭРОД

активности у беспородных крыс

Группа Контроль ТА РЧИМ+ ТА

(ч=8) (п=6) (п-в)

ЭРОД-активность 787,37± 81.88 725,06±60,15 617,4±50,72

пкмоль/мин/орган Р=0,026\У\\Г

Примечание: Р - статистическая значимость различий между группами ТА и РЧИМ+ТА ХУУУ - критерий Вальда-Вольфовица; различия считали статистически значимыми при р < 0,05.

6. Влияние ежедневных одночасовых иммобилизаций (ЕИМ) на базальный уровень активности и чувствительность к рекомбинантному 1Ь-1Р у цитохром Р450-зависимых монооксигеназ

Как видно из рисунка № 3 у стрессированных крыс наблюдались тенденции к увеличению содержания кортикостерона, и циркулирующего 1Ь-6 не достигшая при этом статистически значимых величин. Уровень 1Ь-1 не отличался от контрольных значений.

Известно, что именно СУР2В1/2 играет важную роль в метаболической трансформации барбитуратов (Щербаков В.М, Тихонов А.В.1995). Таким образом, нарушение фармакометаболизирующей активности печени являлось дезадаптивным последствием постстрессорной супрессии цитохром Р450 зависимых монооксигеназ.

При этом, через 24 часа после завершения последней иммобилизации наблюдалось угнетение активности изоформ СУР1А1 и СУР2В1/2 (таблица 5) С угнетением цитохром Р-450 зависимых монооксигназ хорошо согласуется значительное увеличение времени гексеналового сна (с 16,8±4,16мин в группе контроль (п=5), до 48,00±7,74 мин в группе ЕИМ (п=5)) у стрессированных животных.

Рисунок 3

Изменения уровня кортикостерона; 1Ь-1; 1Ь-6 у крыс при ежедневных одночасовых иммобилизациях

150 100 - ь -

* :: ; -1-

1 1 - 1

Кортикостерон 11_ 1 Ц_ 6

□ Контроль (п=8) □ ТР (п=8)

Примечание: На рисунке представлены данные отражающие активность ГЬ-1; ГЬ-6;

ТЩ(пг/мл), содержание кортикостерона (нмоль/л)

ЕИМ - группа ежедневные одночасовые иммобилизации.

Данные представлены в % от показателей группы контроль.

* - статистическая значимость различий от показателей группы контроль

Таблица 5

Изменения уровня СУР1 А1-зависимой ЭРОД-активности, С\'Р2В1/2-зависимой БРОД-активности у крыс при ежедневных одночасовых _ _ _ иммобилизациях___

Группы ЭРОД БРОД

активность активность

(пкмоль/ (пкмоль/

мин/мг белка) мин/мг белка)

1 .Контроль (п=10) 2,48±0.156 ЗЛ7±0,199

2.ЕИМ 0,972±0,088 1.895±0,16

(п=12) Р=0,0073и Р=0,0319и

Примечание: и - критерий Манна - Уитни; различия считали статистически значимыми при р < 0,05.

Р - статистическая значимость различий между первой и второй группой

В более поздние сроки (96 и 120 часов после завершения повторных стрессорных воздействий) уровни ЭРОД-активности и БРОД-активности восстанавливались до контрольных значений. Вместе с тем. через 96 часов

после завершения ежедневных иммобилизаций наблюдалось снижение СУРЗА - зависимого деметилирования эритромицина (с 0,217±0,01 нмоль/мин/грамм ткани в группе контроль (п=5) до 0,16±0,04 нмоль/мин/грамм ткани в группе ЕИМ; Р=0,044 \¥\У).

Через 120 часов после завершения последнего стрессорного эпизода активность этой изоформы изменилась в противоположном направлении, что проявлялось в повышении интенсивности СУРЗА-зависимой ЭРНД активности (с 0,432±0,035 нмоль/мин/мг белка в группе контроль (п=6) до 1,18±0,33 нмоль/мин/мг белка в группе ЕИМ; Р=0,044 WW)

Через 24 часа после инъекции беталейкина у нестрессированных животных обнаружено снижение СУР1А1- и СУР2В1/2-зависимого монооксигенирования. Это проявлялось в трёхкратном снижении ЭРОД-активности при одновременном уменьшении в 1,5 раза БРОД-активности.

Предварительные стрессорные воздействия усугубили 1Ь-1-зависимую супрессию изоформ СУР1А1 и СУР2В1/2. Так в группе ЕИМ+г1Ь-1|3 по сравнению с группой г1Ь-1р уровень ЭРОД активности снизился в 2,5 раза при одновременном уменьшении на 16% БРОД-активности (таблица 6).

Таким образом, при доминировании толерантной адаптационной стратегии, адаптации усиливалось цитокин-зависимое угнетение активности цитохрома Р-450.

Таблица 6

Влияние дополнительного введения рекомбинантного 1Ь-1р на СУР1А1-зависимую ЭРОД-активность, СУР2В1/2-зависимую БРОД-активность

у крыс при ежедневных одночасовых иммобилизациях

Группы ЭРОД-активность пкмоль/ мин/мг белка БРОД-активность пкмоль/ мин/мг белка

1.Контроль п=6 2,48±0,41 2,26±0,58

2.rIL-lß п=6 0,759±0,14 Р 1.2=0,004 U 1,29±0,06 Pi.2=0,006 и

З.ЕИМ + rIL-lß п=6 0,326±0,03 Р2.3=0,01 U 1,082±0,06 Рг.з-0,024 U

Примечание: U - критерий Манна - Уитни; различия считали статистически значимыми прир < 0,05.

Pi.2 статистическая значимость различий между I и 2 группой, Р2.3 - статистическая значимость различий между 2 и 3 группой

Известно, что для ряда цитохром Р450 зависимых монооксигеназ существуют реципрокные отношения между чувствительностью к цитокин-зависимой супрессии и к действию селективных и неселективных индукторов. Поэтому мы посчитали целесообразным изучить влияние ЕИМ на чувствительность к индуктору изоформы СУР1А1-ТХДД (таблица 7).

Через 96 часов после введения селективного индуктора изоформы CYP1 AI - 2,3,7,8, тетрахлор -р- бенздиоксина (ТХДД) у нестрессированных животных (группа ТХДД) отмечено возрастание в 5 раз ЭРОД-активности в

гомогенатах печени. В меньшей мере ТХДД усиливает БРОД-активность, что отражает неизбирательную селективность реакции дебензилирования дибензоилэтоксирезоруфина.

Таблица 7

Влияние ежедневных одночасовых иммобилизаций на чувствительность

СУР1 А1-зависимой ЭРОД-активности, СУР2В1/2 -зависимой БРОД-

активности к супериндукгору цнтохрома Р450 2,3,7,8,_ тетрахлордибензо-р-диокснну_

Группа ЭРОД активность БРОД активность

пкм оль/мин/грамм. пкмоль/мнн/грамм. ткани

ткани

1.Контроль (п=7) 0,75±0,157 1,29±0,4

2.ТХДД 4,07±2,15 3,58±1,59

(п=8) Р1.2 =0,000711 Р1.2 =0,00411

З.ЕИМ+ТХДД 3,39±0,55 2,77±0,48

(п=7) Р2,з<0,05Х Р2.з =0,0038\У\У

Примечание: II - критерий Манна - Уитни; У/У/ - критерий Вальда - Вольфовица; X -критерий Колмогорова - Смирнова; различия считали статистически значимыми при р < 0,05.

Р 1,2■- статистическая значимость различий между группами 1 и 2; Рг.з - статистическая значимость различий между группами 2 и 3

Вместе с тем уровень СУРЗА-зависимого монооксигенирования не претерпел существенных изменений после инъекции ТХДД (с 0,25±0,09 нмоль/мин/мг. белка в группе контроль (п=7) до 0,22±0,097 нмоль/мин/мг. белка в группе ТХДД (п=8)). Предварительное стрессирование ежедневными одночасовыми иммобилизациями (группа ЕИМ+ТХДД) привело к ограничению ТХДД - зависимой монооксигеназной активности СУР1А1 в печени. При этом в группе ЕИМ+ТХДД по сравнению с группой ТХДД на 21% снижен уровень ЭРОД-активности и на 24% БРОД-активности.

Для данного режима повторных стрессорных воздействий на активность цитохром Р450-зависимых монооксигеназ может оказать модифицирующее влияние обусловленное ежедневными одночасовыми иммобилизациями изменение чувствительности печени к глюкокортикоидам. 7. Влияние ежедневных одночасовых иммобилизаций на глюкортикоид-зависимые изменения активности цитохром Р450-зависимых монооксигеназ

Как видно из таблицы № 8, введение глюкокортикоидного препарата нестрессированным животным существенно отразилось на активности цитохром Р-450-зависимых монооксигеназ.

Прежде всего, у животных группы ТА наблюдалась индукция изоформы СУРЗА, осуществляющей в печени биотрансформацию глюкокортикоидных гормонов. Так в группе ТА зарегистрирован четырёхкратный прирост ЭРНД активности по сравнению с контролем. Другой особенностью предварительных стрессорных воздействий являлось увеличение

выраженности триамцинолон-зависимого депримирования СУР1А1-зависимого монооксигенирования.

Таблица 8

Влияние дополнительного введения триамцинолона ацетонида на активность цитохром Р450-зависимых монооксигеназ в печени крыс

Группы ЭРОД-активность пкмоль/ мин/иг белка БРОД-активность пкмоль/ мин/мг белка ЭРНД-активность нмоль/ мин/мг белка

1.Контроль п=6 0,012±0,001 0,172±0,015 0,432±0,035

2.ТА N=5 0,0076±0,001 Р1.2 =0,037 и 0,193±0,005 Р|.2=0,00би 1,77±0,35 Р12 =0,026 WW

З.ЕИМ п=6 0,0098±0,001 0,171±0,02 1,18±0,33 р, 3=0,044 ШШ

4.ЕИМ + ТА п=5 0,0031±0,001 Р2,4=0,03 ЫК 0,161±0,015 1,88±0,523

Примечание: и - критерий Манна - Уитни; - критерий Вальда - Вольфовица; ЫК -критерий Ньюмана- Кэлби; различия считали статистически значимыми при р < 0,05. Р1.2 - статистическая значимость различий между группами 1 и 2; Ри - статистическая значимость различий между группами 1 и 3 Рг,4 - статистическая значимость различий между группами 2 и 4

Это проявлялось в снижении в группе ЕИМ+ТА в 2 раза уровня ЭРОД активности по сравнению с группой ТА.

выводы

1. В динамике гипокинетического стресса отмечены фазные изменения активности цитохром Р450-зависимых монооксигеназ. Первая фаза, зарегистрированная в первые трое суток гипокинезии, характеризуется снижением выраженности CYP1A1 - и СУР2В1/2-зависимого монооксигенирования. Вторая фаза, наступающая на 7 сутки гипокинетического стресса - характеризуется индукцией СУРЗА-зависимого монооксигенирования. В этот период отмечается увеличение содержания циркулирующих IL-1, IL-6, TNF. Для третей фазы наступающей после 30-суточной гипокинезии характерно угнетение СУР2С-зависимого монооксигенирования.

2. Редкочередующиеся иммобилизации предопределяют супрессию изоформ цитохрома Р450 CYP1A1 и CYP2B1/2 у стрессированных (группа rIL-lß) и нестрессированных крыс (группа rIL-lß). вызванную иммунизацией эритроцитами барана.

3. Для редкочередующихся иммобилизаций характерно снижение чувствительности изоформ цитохрома Р450 CYP1A1 и CYP2B1/2 к угнетающему действию аллогенных антигенов и провоспалительных цитокинов. Для ежедневных иммобилизаций характерно повышение чувствительности цитохром Р450-зависимых монооксигеназ к действию провоспалительных цитокинов

4. Для редкочередующихся иммобилизаций отмечено увеличение чувствительности изоформы CYP1A1 к действию супериндуктора 2,3,7,8 -тетрахлор -р - бенздиоксина, а для ежедневных иммобилизации чувствительность этой изоформы к 2,3,7,8 - тетрахлор -р- бенздиоксин -зависимой индукции снижается.

5. Для исследованных режимов повторных иммобилизаций характерно снижение активности цитохром Р450-зависимых монооксигеназ в ответ на дополнительное введение глюкокортикоидного препарата

Список наиболее часто используемых сокращений

РЧИМ - редкочередующиеся одночасовые иммобилизации

ЕИМ - ежедневные одночасовые иммобилизации

ЭРОД - активность - 7этоксирезоруфин -О - деэтилазная активность

БРОД-активность - реакция дебензилирования 7- дибензилоксирезоруфина

CYP3A активность - реакция

деметилирования эритромицина

ПОЛ - перекисное окисление липидов

ГГАС - гипоталамо-гипофизарно-адреналовая система

ДБФ - дибензилфлюоресцеиндебензилазная активность

ТА - триамцинолона ацетонид

ТКФ - точный критерий Фишера

ФИО - фактор некроза опухолей

ИЛ - интерлейкин

TNF - туморнекротический фактор

U - критерий Манна-Уитни

WW - критерий Вальда-Вольфовица

X - критерий Колмогорова- Смирнова

ЭБ - эритроциты барана

ТХДД - тетрахлор -р - бенздиоксин

ГК - гипокинезия

IL-1 - интерлейкин 1

IL-6 - интерлейкин 6

CYP - цитохром Р450

Список опубликованных научных работ

1. Цейликман, О.Б. Угнетение активности цитохром Р-450 зависимых монооксигеназ печени при стрессорных воздействиях, связанных с ограничением подвижности крыс. / О.Б. Цейликман, С.В. Сибиряк, Н.В. Бубнов, Д.А. Сысаков // Российская Академия наук: материалы II Междунар. конф. по физиологии мышц и мышечной деятельности, МГУ им. М.В. Ломоносова. -2003. - С. 166-167.

2. Сибиряк, С.В. О механизмах развития инволюции тимуса при различных режимах повторных стрессорных воздействий. / С.В.Сибиряк, И.А. Волчегорский, В.Э. Цейликман, Н.В. Бубнов, А.И. Синицкий, Д А. Сысаков, Д.А. Козочкин // Весгн. Уральской мед. академической науки. - 2004. - №2. - С. 62-66.

3. Цейликман, О.Б. О пермиссивном действии глюкокортикоидов в отношении цитокиновой регуляции монооксигеназной активности изоформ цитохрома Р-450 в печени при повторных стрессорных воздействиях./О.Б. Цейликман, В.Э. Цейликман, С.В. Сибиряк, И.А. Волчегорский, Н.В. Бубнов, Д.А. Сысаков, А.И. Синицкий // Медицинская иммунология: материалы 7 Всерос. науч. форума с междун. участием им. акад. В.И.Иофе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге». -2003. - Т.5, № 3-4. - С. 181-188.

4. Цейликман, О.Б. О механизмах развитая повышенной чувствительности тимуса к гипоплазирующему действию глюкокортикоидов в условиях гипокинетического и иммобилизационного стресса/О.Б. Цейликман, В.Э Цейликман, С.В Сибиряк, Н.В. Бубнов, А.И Синицкий, Д.А. Сысаков, Т.А. Филимонова, Д.А. Козочкин // Объединённый иммунологический форум: тез. докл. - Екатеринбург ,2004. - С 10.

5. Цейликман, О.Б. Соотношение между цитокиновой активностью крови и уровнем ' монооксигеназной активности в печени при стрессорных воздействиях, сопровождающихся повышенной устойчивостью к гипоксии / О.Б. Цейликман, В.Э. Цейликман, С.В. Сибиряк, Д.А. Сысаков, Д.А. Шикирянская // Цитокины и воспаление. -2004,- Т.З, №3,- С. 26-29.

6. Tseilikman, V.E. Stress-Induced Hyper sensitization of Thymus to Glucocorticoid Drug / V.E. Tseilikman, T.A. Filimonova, S.V. Sibiryak, D.A. Kozochkin, A.I. Sinitskii, N.V. Bubnov, D.A. Sisakov // 12th International Congress of Immunology. - Montreal, 2004. - M.4.67. - P. 18-23.

7. Сибиряк, С.В. Активация апоптоза как механизм развития инволюции тимуса при повторных иммобилизациях / С.В.Сибиряк, В.Э. Цейликман, Н.В.Бубнов, А.И.Синицкий, Д.А. Сысаков // Бюлл. Эксперим. биологии и медицины. - 2005. - Т. 139. - С. 38-39.

8. Бубнов Н.В. Влияние повторных часовых иммобилизаций на лейкоцитарную формулу крови у нормо- и гипертензивных крыс / Н.В. Бубнов, А.И Синицкий, Д.А. Сысаков, М.И Нестеров, Д.А. Козочкин, В.С Абашкин // Научно - практическая конференция «Молодые исследователи биологии и медицины» тез.докл. - Челябинск, 2005. - С. 53.

9. Tseilikman, V.E. Previous stress episode enhances effect of recombinant IL -1 on hepatic cytochrome P450 - dependent monooxygenases / V.E.Tseilikman, O.B. Tseilikman, S.V.Sibiryak, A.I. Sinitzkii, D.A. Sisakov, E.A. Lavin//Chinese Pathophysiology 5Л international congress of pathophysiology June 28-July 1,- Beijing. Vol. 22( 13 ). - 2006. -P. 151.

10. Tseilikman, V.E. Immune and monooxigenase systems interactions under the stress conditions / V.E. Tseilikman, O.B. Tseilikman, A.I. Sinitzkii, D.A. Sisakov, E.A. Lavin // 16th European Congress of immunology. - Paris. - 2006. - P. 443.

11. Tseilikman, V.E. Hypersensitization to glycocortikoids and desensetion to pro-inlammatory cytokines as the signs of resistant strategy of adaptation protective effect on the liver under the stress condition / V.E.Tseilikman, O.B. Tseilikman, D.A. Sisakov, E.A.Lavin, D.A.Kozochkin ,A.L Markel // International society for adaptive medicine VIII World congress. - Moscow, 2006. -P 140-141.

12. Tseilikman, V.E. The transition from resistentant to tolerance strategy of adaptation and IL-sensitivity shifts / Tseilikman V.E., Markel A.L., Kozochkin D.A., Sysakov D.A. // Stress: Basic mechanisms and clinical implications. - Montreal, 2007. - P. 45.

13. Цейликман, О.Б. Влияние повторных стрессорных воздействий на иммунную реактивность и монооксигеназную активность печени у нормотензивных и гипертензивных крыс / О.Б. Цейликман., В.Э Цейликман., С.В Сибиряк., Д.А. Сысаков., A.C. Симбирцев., А.И Синицкий., А.Л. Маркель., Д.А. Козочкин. // Рос.физиол. журн. им. Сеченова. - 2008. - Т.94, №5. - С. 574-580.

14. Цейликман, О.Б. Провоспалительные гепатотропные эффекты хронического стресса и повышение чувствительности к цитокин - зависимой супрессии некоторых изоформ цитохрома Р 450 / О.Б. Цейликман., В.Э Цейликман., С.В Сибиряк., Д.А. Сысаков., A.C. Симбирцев // Цитокины и воспаление. - 2008. - Т. 7, №1. - С. 51-60.

Сысаков Дмитрий Андреевич

Цитохром-Р450-зависнмые монооксигеназы при иммобилизационном и гипокинетическом стрессе

03.00.04-биохимия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Челябинск-2009

Подписано в печать Бумага офсетная. Отпечатано на ризографе. Формат 60x84. 1/16. Усл. печ. листов 1,5 Уч.- изд. л. 1,7 Тираж 100 экз. Заказ №

454092, г. Челябинск, ул. Воровского, 64, ГОУ ВПО « Челябинская государственная медицинская академия Росздрава»