Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Цитогенетическое и дерматологическое исследование при бесплодии к мужчин, связанном с нарушением сперматогенеза по типу азооспермии

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Цитогенетическое и дерматологическое исследование при бесплодии к мужчин, связанном с нарушением сперматогенеза по типу азооспермии"

рз 11 9.2

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК НЕД1! КО-ГЕНЕГИЧЕСКИЛ НАУЧНЫ Л ЦЕНТР

г!а ..;аъах руког.у.с.' УДК 576.3+572.52V12+616.6S-C.LC.t-

ЕКГ1Ю5А ЛАРИСА СЕРГЕЕВНА

ШТОГЕНЕТИЧЕСКОЕ И ДЕРМАТО ПИФИЧЕСКОЕ ИССЯЕД03;Т.1:Е ПРИ БЕСПЛОДИЯ У НУЕ.ЧИН, СВЯЗАННОМ С Н\В'СЕНИЬ"1

СПЕРМАТСГЕНЕЗА ПО ТИПУ АЗООСПЕРЖИ (ОЗ.00.15-Генетика)

Автореферат диссертации на соискание учепоЯ степени кандидата биологических гаук

э с к зз а - 1592

Работа выполнена в НИИ репродукции человека им; 1орданиа И.Ф Министерства Здравоохранения и социального обеспечения Республики Грузия.

Научный руководитель- доктор медицинских наук Д.И.Кристесашвили

Официальные оппоненты- доктор медицинских наук,профессор

Н. П.Кулешов - доктор медицинских наук В.А.Бахарев

Ведущая организация- Центральный Институт усовершенствования врачей.

Защита диссертации состоится (^КХ^Ц 1992г.

в часол> на заседании Специализированного Совета Д.С 01.16.Оч при медико-генетическом научном центре РАМН

Адрес: I15470,Москва,ул.Москворечье,I.

С дпссертацгей можно ознакомиться в библиотеке медико-генетического научного центра РАМН.

Автореферат разослан " 9 " ^ ^_1992г.

Ученья секретарь

Спещшлизи;ованного совета,

доктор биологических наук, профессор.

Л. Ф. Курило

о и ь ¿- .1 I . . ..

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. В Международной программе ВОЗ " Здо овье для всех к 2000 году"МН0 5рес/а6 ргодгатте ,№Ч91Ч,И86) особое внимание уделяется репродукции человека.Все большее значении приобретает проблема мужского бесплодия,поскольку в 40-5Щ случаев причины бесплодия в браке связаны с нарушением репродуктивное функции мулчинССоптРкдие а1 ,1988).

Высокий процент стерильности мужчин в бездетных семьях объясняется тем,что на всех этапах жизни мужчины на половые клетки действует множество этиологических факторов,как экзогенных,'¡ак и наследственно обусловленных,приводя к нарушению сперматогенеза. Поскольку более чем у 50$ мужчин с бесплодием причина нарушения сперматогенеза определяется частично,либо вовсе не устанавливастся(Хад-сон и др., 1986),отсутствие понимания возможных составляющих может привести к ошибке в диагнозе и лечении.

Г0-15$ мужчин с бесплодием имеют те или иные аномалии хромо-сом(Курило,Кулешов, 1988),однако хромосомным факторам нарушения мужской фертильности уделяется крайне мало внимания в современных руководствах по проблемам бесплодия у человека,не отмечается необходимость проведения цитогенетических исследований и консультаций специалистов генетиков и цитогенетиков.

В отечественной литературе нет работ,которые давали бы мужской стерильности цитогенетическую оценку в зависимости от степени нарушения сперматогенеза.Поэтому цитогенетическия анализ бесплодных мужчин с азосспермией позволяет выяснить роль хромосомной патологии в развитии тяжелого нарушения сперматогенеза,гиявить долю аномалий аутосом и гоносом,структурных и числовых абеггаций в этой татологии.а также частоту встречаемости синдрома Клаиг^ельтера в 4етко отобранной группе мужчин с бесплодием и азооспермией.

Практически не освещен в литературе вопрос о значении С-поли-(орфизма хромосом при нарушении сперматогенеза,о возмокной роли ¡кстремальных С-вариантов гетерохроматина в нарушении фертильности ' мужчин.Исследования в направлении оценки типов и частот вариан--ов С-гетерохроматина могут иметь как теоретическое значение для армирования единого взгляда на функциональную значимость и адаптационную ценность структурного гетерохроматана^так и практические, юскольку установлении этиологии каждого конкретного случая завоевания важно для разработки правильной тактики ведений больного.

Цитогенетическни факторы не отражают полностью все генетичег-

кис аспекты нарушения сперматогенеза,приводящие к бесплодию у мужчин. Помощь в определении генетической природы заболевания может оказать применение в практике клиник,занимающихся проблемами нарушения репродуктивной функции,методов дерматоглифики и хлинико-ге-неалогического анализа.Такой подход расширяет представление о мере генетической детерминированности нарушения сперматогенеза,что имеет не только диагностическое,но и прогностическое значение и способствует решению ванных задач по оказанию профилактической и лечебной помоци мужчинам с бесплодием,прогноза и реабилитации пациентов.

Цель нашего исследованиягдать цитогенетическую и дерматогли-фическую оцелку мужской стерильности,связанной с нарушением сперматогенеза по типу азооспермии.

Для достижения поставленной цели в процессе ])аботы решались следующие задачи:

1. Установление частоты и типов хромосомных аномалий при азооспермии.

2. Исследование вариабельности структурного гетерохроматина хромосом i, S, 16 и У при азооспермии с кариотипом об, ХУ и при синдроме Клайнфельтера в равнении с контрольной группой фертильных мужчин путем определения типов и частот вариантов С-гетерохрома-тина,частоты гетероморфизма гомологов методом полуколичественной оценки С-сигиентов.

3. Определение отклонения в параметрах дерматоглифики при синдроме Клайшфельтера и при азооспермии с нормальной хромосомной конституцией по сравнению с контрольной группой.

4. Анализ дерматоглифических показателей при носительстве экстремальных С-вариантов гетерохроматина хромосом 1,9,16 и У.

Научная новизна исследования заключается в том,что на основании обследования большой группы мужчин с нарушением сперматогенеза по типу азооспермии определены частота и спектр хромосомных аномалия щи данной патологии .установлена доля пациентов с синдромом Клайнфельтера в указанной группе индивидов.

Впервые исследован С-полимор£изм хромосом 1,9,16 и У при азоо спермин в сравнении с адекватной контрольной группой фертилышх мужчин.Установлено,что при азооспермии увеличена частота встречаемости малых блоков С-гетерохронатпна в сумме для всех исследованных хромосом.Более того, при синдроме Клайшрельтсра достоверно увеличена частота каждой исследованной хромосомы с малики С-сегмента-

ми и частота лиц с наличием в кариотипе только малых экстремальных вариантов.

Определен комплекс параметров дерматоглифики,частота которых при тяжелом нарушении сперматогенеза достоверно увеличена при сравнении с контрольной группой мужчин с нормальной репродуктивной функцией.

Впервые проведено комплексное исследование мул чин с азооспер-мхе*,включивЕее в себя не только цитогенетический, но и дсрматогли-фический,и генеалогический методы генетического анализа.

Практическая ценность работы:

Выявленные при азооспермии высокая частота хромосомных аномалия, повышенная чаоота отклонений дерматогли;ических параметров и отягощенности родословных указывают на необходимость широкого применения методов генетического исследования(цитогенетаческого,дер-матоглифического,генеалогического) с целью диагностики различных форм нарушения спе| патогенеза по типу азооспермии. Свов; еменное чн-явление пациентов,у которых можно предположить участие генетического компонента в развитии патологии,избавит врача и больных от лишних диагностических и лечебных процедур и позволит вов' емя поставить вопрос об изменении тактики ведения пациента.

Комплекс отклонении параметров дерматоглифики,выявленный у мужчин с азооспермией,в том числе и у пациентов с синдромом Клапн-фельтера позволяет использовать этот доступный метод при консультировании супружеских пар в целях отбора индивидов дл;. кориолоп:-ческого анализа.Вместе с тем,такой подход может способствовать раннему выделении групп риска еще до начала полового созревания.

Данные по О-полиморфизму,позволяющие выделить группы пациентов-носителей редких вариантов,могут иметь важное диагностическое и прогностическое значение при медико-генетическом консультировании пар с бесплодием,обусловленным мужской стерильнос'ьн.

Выводы и рекомендации настоящего исследования могут быть предложены для практического применения в клиниках,занимагвдхся проблемами нарушения репродуктивной функции у мужчин.

Положения,вьдвигаемые на защиту:

1.Определены частота и спектр хромосомных аномалий при нарушении сперматогенеза по типу азооспермии.

2.У мужчин с азооспермией и кариотипом 46,ХУ увеличена суммарная частота хромосом 1,9,16 и У с малыми С-сегментеми.

3.У пациенте]! с синдромом Клай14ельтера увеличена частота кждой исследоваыюи хромосомы с малыми блоками С-гетерохроматина,

ч

а также частота лиц с наличием в кариотипе хромосом только с малыми экстремальными вариантами .

Ч.У бесплодных мужчин с нарушением сперматогенеза по типу азооспермии выявлен комплекс дерматоглифических параметров,частота которых достоверно отличается от их частоты в контрольной группе мужчин с нормальной репродуктивной функцией.

Апробация работы.

Материалы исследования были представлены и обсуждены на У съезде Грузинского общества генетиков и селекционеров(Тбилиси,1987); на УШ научном семинаре "Хромосомные основы нарушений развития че-ловска"(Тбилипи,198в); на юбилейной конференции .посвященной ЗО-ле-тию основания ШИ репродукции человека им.Зкорданиа И.Ф. (Тбилиси, 1988); на объединенном заседании Научного Совета по акушерству и гинекологии АМН СССР и Научного Совета по мед.генетике АМН СССР "Современные исследования по медицинской генетике в акушерстве и гинекологии"(Носква,1909);на межотделенческой конференции НИИ репродукции человека(Тбилиси,1992);на научном семинаре во Всесоюзном научном медико-генетическом центре РАМН(Москва, 199?.).

Структура и объем диссертации:

Диссертационная работа изложена на страницах машинописного текста,включает введение,обзор литературы,материалы и методы, результаты собственных исследований и их обсуждение,заключение,выводы,рекомендации, V* рисунков,ЗАтаблиц,список литературы включает 36 отечественных и -/¿У зарубежных источников.

МАТЕРИАЛ и методы ИССЛЕДОВАНИЯ

В настоящей работе проведено исследование у 305 мужчин с азооспермией,диагноз которым устанавливался на основании анализа эякулята в отделении клинической андрологии НИИ репродукции человека имДорданиа И.О.Контрольную группу составили 118 человек с нормальной репродуктивной функцией,имеющие здоровых детей.

Мате; иилои исследования служили препараты хромосом, полученные методом культивирования лимфоцитов периферической крови,отпечатки пальцев и ладоней рук,карты генеалогического обследования, составленные путем опроса мужчин,и протоколы,куда- заносилась стандартная информация,позволяющая установить наличие или отсутствие факторов,ко'1 огые могли стать возможной причиной нарушения сперматогенеза.

Культивирование лимфоцитов периферической крови,фиксацию и

приготовление п^егга;атов проводили полумикрометодом по стандартной методикеСНииде^Огс! ,1965) с небольшими модификацияги. Хромосомы окрашивали по & - и С-методам(беа(>г1дЬ1 ,1971, Зцтпег с!а£ ,1571} Хромосомный анализ осуществляли с учетом диагностики мозапцизма (Кулешов, Алехин, 197 4). Анализ хромосом, окрашенных 6-мет од ом, запись формул хромосомных перестроек проводили согласно Па^жскоГ; номен-клатуре(РссЫ$ СО^егег'С.е ,1978).

С-варианты хромосом оценивали непосредственно под микроскопом по 5-балльноИ системе с использованием полуколичествегшого метода, согласно "Предложениям по стандартизации методов у:ета полиморфизма хромосом человека".разработанным медико-генетическим научным центром.

Анализ признаков дерматоглифики осуществляли по стандартной методике,описанной (?итгтп&,М|^6х1961).Конные узоры изучали по отпечаткам пальцев и ладоней рук.Клинико-генеалогкческпл анализ проводили по общепринятой методике с охватом четырех поколений, при этом особое внимание уделяли наличию у родственников пробандов признаков отягощенности.связанных с нарушением уертильности: бесплодные браки,предшествующее бесплодие,смерть детей до I года от невыясненных причин, отягощенный акушерский анамнез.

Анализ достоверности различий между исследуемыми и контрольной группой проводили методом вариационной статистики с использованием критерия Стьюдента ).

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИСОЩОВАИ-Ь И ИХ ОЕСУГДЕНИГ

I. Аномалии хромосом при азооспермии.

Кариологический анализ,проведенный у 305 мужчин с азооспермией,показал высокус частоту хромосомных аномалий(ХА):у 65 пациентов выявлен аномальный кариотипО-1,32).&5,4Й всех ХА связаны с половыми хромосомами и лишь три структурные перестройки С обнаружены в аутосомах.Среди гоносомных аберраций преобладали числовые нарушения,их доля от всего количества обнаруженных аберраций составляет 67,75?.

Все найденные ХА суммированы в таблице 1,где они сгруппированы по аномалиям в аутосомах и в системе половых хромосом, по аномалиям числовым и структурным.

Синдром Клайнфельтера выявлен у 54 пациентов(17,7Й) .причем болыпинство(47 человек) имели чистую форму синдрома с к:риотипом 47,ХХУ(15,40.113 семи человек с мозаичным вариантом синдрома шестеро имели кариотип 46,ХУ/47,ХХУ и лишь у одного пациента выявлен

Таблица I

Частота и типы хромосомных аномалии у мужчин с азооспермией

Число обслед. ИНДИВИДОВ Число хромосомных аномалий Частота и типы нарушений в системе половых хромосом Частота и типы нарушений в аутосомах (структурные)

Числовые Структурные Реверсия иола Всего

305 65 (21,355) 57 (18,750 Из них: 47 ,ХХУ- 47(15,0 46.ХУ/47, ХХУ- 6(2,05?) 46, ХХ/47, ХХУ- 1(0,%) 47.ХУУ- 1(0,3£) 46.ХУ/47.ХУУ- 1(0,ЗЮ ХУ- 1(0,3?) 4 (1,30 46,Х£)е£(У)-4 I (0,330 46, ХХ-1 62 (20, ЗЙ 3 (1,00 45,ХУ,К21;22)(^П;<)Д1) 46,ХУ,К5;13)(912;рН) 45,ХУ,1(14;17)(^И;^25)

кариотип .4б,ХХ/47,ХХУ.

Обнаружено еще три случая анеуплоидии по полотзым хромосомам: 47,ХУУ,46,ХУ/47,ХУУ и Ч5,Х/Ц6,ХУ.

У одного пациента(0,3$) с мужским фенотипом и нормальной психосоциальной установкой определен женский кариотип 46,XX.У пробан-да отмечались отклонения в признаках дерматоглифики,характерные для больных с синдромом Клайнфельтера.Путемб - и С-методов окраски хромосом причину маскулинизации выявить не удалось, но можно предположить транслокацию микроскопически не определяемого фрагмента У-хромосоьы с тестис-детерминирующими генами на одну из X-хромосом или аутосом,что и обусловило развитие тестикулярпой ткани. Нельзя исключить и возможность существования скрытого мозаи-цизма с наличием клонов 46,ХУ или 47,ХХУ в других тканях.

У четырех пациентов(1,3$) обнаружена очень короткая У-хромо-сома,по размеру меньше хромосом группы G . С-окрашивание не выявило наличие структурного гетерохроматина на У-хромосоне,поэтому мы предполагаем делецию длинного плеча У-хромосомы,которая захватила не только гетерохроматиновый сегмент,но и часть эухроматина, прилегающую к гетерохроматиновому блоку. Предполагается,что именно на границе эухроматина и гетерохроматина находится фактор плодовитости, контролирующий сперматогенез® h£et ,1985).По всей видимости, нарушение сперматогенеза у этих мужчин вызвано именно де-лецией длинного плеча У-хромосомы.Таким образом,структурные перестройки У-хромосомы составили 6,2$ от общего количества ХА.

Среди пациентов с азооспермией в системе аутосом выявлены три транслокации.что составило I% от всех исследованных мужчин, т.е. доля аутосомных аномалий составляет 4,6% от общего числа Хл. Признать прямую овязь аутосомных аберраций с нарушением сперматогенеза нельзя.Мы можем только с определенной долей вероятности предположить,что аутосомные перестройки явились основной причиной остановки сперматогенеза,поскольку ответ на этот вопрос может дать только анализ хромосом в мейозе.

2. С-вариапты гетерохроматина хромосом 1,9,16 и У.

Анализ С-полиморфизма проведен у 100 мужчин с азооспермией и кариотипом 46,лУ и у 50 пациентов с синдромом Клайнйельтера. Контролем служили 50 мужчин с нормальной репродуктивной функциег и нормальным кариотипом.При анализе С-вариантов хромооом 1,9,16 .1 У учитывались локализация гетерохроматинового сегмента,его относительный размер,готе1 оморфизм гомологов.Размер С-сегмента определи-

ли как отношение его длины к длине несущего плеча для хромосом I и У и к длине короткого плеча дда хромосом 9 и 16.Инверсии регистрировали, если не менее 1/3 длины С-блока находилось на коротком плече хромосомы.

К р. едким (экстремальным) вариантам относили малые С-сегменты, оцененные баллом I и крупные С-блоки с оценкой 4 и 5 баллов.

В таблице 2 представлена частота встречаемости С-вариантов хромосом Т ,1,16 и У.Частоту вариантов рассчитывали по отношению к числу хромосом данной пары у всех индивидов в каждой исследованной группе.

Во всех иселедоианных группах преобладали хромосомы I со сред ним разы».;.о:.; С-гетерохроматина.Если у пациентов с азооспермией и нормальны!! кариотипом в хромосоме I выявлены все 5 типов С-блоков, то в груши; кукчин с синдромом Клайнфельтера и в контрольно* группе не было ни одной хромосомы I с С-блоком,оцененным максимальным баллом. Част о"; а хромосом I с крупным С-блоком во всех исследованных группах весьма мала и практически не различается.Значительно чаще по сравнению с контрольной группой у пациентов встретилась хромосома I с мал! м экстремальным вариантом,причем при синдроме Клайнфельтера разница статистически достоверна(р<0,013).

В контрольной группе лиц с нормальной реп[ одуктивной функцией 9СС хромосом 9 имели средний размер С-блока,и при синдроме КлаИнфельтера-лишь 68й(р<0,001).С такой же высокой степенью достоверности пр.л этой хромосомной болезни чаще встречались хромосомы 9 с малым экстремальным вариантом^ 32» по сравнению с Я в контроле). Сравнение группы индивидов с азооспермией у. кариотипом 46,ХУ с контр олем дало недостоверную разницу в частота, встречаемости малого С-сегмента.

В хромосоме 16 лишь однажды обнаружен крупный блок С-гетеро-хроматиначпр: азооспермии с нормальным кариотипом).В других исследованных группах зарегистрированы только С-блоки среднего и малого размера.Надо отметить,что самую высокую частоту встречаемости хромосом с малым сегментом С-гетерохроматина наблюдали именно в хромосоме 16.Ото отмечалась во всех исследованных группах,а при синдроме Клайнфельтера 4&ь хромосом 16 имели малый С-блок(р<0,01).

У-хромосома при азооспермии с нормальным кариотипом представляла полный спектр размеров гетерохроматинового сегмента,а л группе пациентов с синдромом Клайнфельтера и в контроле не.встречались У-хр-омосомы с максимально оцененным блоком С-гетсрохрсжатииа. '<»,%

Таблица 2

Частота С-сегментов хромосом 1,9,16 и У у мужчин с азооспермиейС в % )

Исследованные группы Число хромо сом Размеры С-сегмента l баллах

I 2 J 4 5

►—1 ш Мужчины с азооспермией и кариотипом 46,ХУ 2О0 17,0 .65,5* 14,5 с., 5 0,5

о о о £ Пациенты с синдромом Клайнфельтера ICJ0 20,0х 72,0 6,1. 2, Ú -

Р. X Контроль 100 10,0 76,0 И,Г 3, и -

о\ га Мужчины с азооспермией и кариотипом 46, ХУ 2С0 13,5 62,0 21.,5 4, 0 _

я о о « X Пациенты с синдромом Клайнфельтера 100 32,0***60,0 8, С*х*- -

р< Контроль 100 9,0 59,0 31,0 1, 0 -

•Л >—< га Мужчины с азооспермией и кариотипом 46,АУ 2 СО 26,5 64,0 9,0 - 0,5

о о о S Пациенты с синдромом Клайнфельтера 100 46,0**52,0 2,0***- -

(Л Контроль ICO 25,0 60,0 15,0 - -

>> га я о о о Мужчины с азооспермией и кариотипом 46, ХУ ICO 12,0 54,0 22,С* I] ,0 1.0

Пациенты с синдромом Клайнфельтера 50 20,0* 44,0 24,0**12 ,0 -

X о Рч Контроль 50 6,0 44,0 44,0 6 ,0 №

§1 (=£0 Мужчины с азооспермией и кариотипом 46,ХУ 700 18,0* 62,4 15,7** 3 0,5

0) о S » 3 X >. Пациенты с синдромом Клайнфельтера 350 30,9***58,8 8,0*** 2 .3 -

Ж га «> о Контроль 350 13,4 62,0 22, £ 2 ,0 -

* -статистически достоверное отличие от конт ,оля,р< 0,05 " - -"- -"- ,р< 0,01

У-хромосом при нормальной репродукции имели средний размер С-сег-мента.Значительно реке наблюдались подобные блоки при азооспермии с кириотипом 46,ХУ(р< 0,05) ,еще более значима разница частот при сравнении с контролем группы пациентов с хромосомной патологией (р<0,Ы). 20$ У-х]омосом в группе мужчин с синдромом Клайнфельтера имели малый блок С-гетерохроматинаСпо сравнению с 6% в контроле, р< 0,05).При аз.ооспермии с нормальной хромосомной конституцией такие отмечалось увеличение частоты встречаемости У-хромосом с малым С-сегментом,однако разница была недостоверной.

Таким образом,налицо явная тенденция к увеличзнию частоты хромосом с уменьшенным количеством С-гетерохроматияа при нарушении сперматогенеза по типу азооспермии.При нормальной хромосомной конституции можно говорить лишь о тенденции,Которая отмечается в кавдой исследованной хромосоме,однако в сумме для семи хромосом разница в частоте малых С-блоков по сравнению с контролем уже статистически зпачима(р< 0,05).

При синдроме Клайнфельтера достоверно увеличена частота малых С-вариантов гетерохроматина во всех исследованных хромосомах, в сумме для семи хромосом разница по сравнению с контрольной группой мужчин с нормальной репродуктивной функцией статистически высоко значима(р<0,001).

Вариабельность структурного гетерохроматина отражает и характер комбинаций С-блоков в числе и типах вариантов,сочетаемых в одном кариотипе,поэтому нами проведен анализ распределения экстремальных вариантов по индивидам.Результаты этого анализа приведены в таблице 3.

6СЙ мужчин из контрольной группы являлись носителями экстремальных вариантов.У мужчин с бесплодием и азооспермией частота встречаемости таких лиц значительно выше:77Й при нормальном кариотипе и 80£ при хромосомной патологииСр<0,05).

Все мужчины-носители экстремальных С-вариантов разделены на индивидов с одиночным экстремальным вариантом и с сочетанныыи вариантами. При синдроме Клайнфельтера частота индивидов с одним экстремальным вариантом меньше,чем в контроле(р< О,(Л).Значительно увеличено в исследованных группах число ивдивидов.в кариотипе которых 2 и более экстремальных варианта.

Эта же таблица дает представление о характере сочетаемости в кариотипе малых и крупных С-вариантов при нарушении сперматогенеза. Как у лиц с нормальным кариотипом.так и щи анеуплоидии от-

.щьшшса о лариотипе экстремальных С-вариантов гетерохроматинаСГХ)

—...... ■ ■ ----- ------- " - ■ — ——— Исследованная группа 4унчины с аэооспер-чиея и кариотипом 46, ХУ Пациенты с синдромом Клайнфельтера Контроль

Всего обследовано индивидов 100 50 50

абс. кол-во % абс, кол- во % абс.кол-во %

Крупный одиночный блок О-ГХ Малый одиночный блок С-ГХ 12 12 21 21 6 12 5 10 12 24

Всего лиц с одиночным экстремальным вариантом С-ГХ 33 33 6 12х* 17 34

Наличие в кариотипе только крупных экстремальных блоков С-ГХ Сочетание в кариотипе малых и крупных блоков" С-ГХ Наличие в кариотипе только малых экстремальных блоков С-ГХ 3 3 9 9 32 32 I 2 5 10 28 56*** 2 Ч II 22

Всего лиц с сочетанными экстремаль ными вариантами С-ГХ 44 44* 34 68*** 13 26

Итого индивидов с экстремальными вариантами С-ГХ 77 77* 40 80* 30 60

* -досчове^ные отличия от контроля,р<0,05 «»-достоверные отличия от контроля,р<0,001 УХ * — — I I/ ^ и} их

мечалась тенденция к увеличению частоты индивидов,в кариотипе которых малых блок С-гетерохроматина сочетался с крупным или все исследованные хромосомы имели только малые С-сегменты,

Достоверно чаще пациенты с синдромом Клайнфельтера обладали хромосомами с малыми С-блоками гетерохроматина.

Зо всех исследованных группах мужчин получена низкая частота лиц с сочетанием в кариотипе только крупных С-сегкентов.

В связи с тем,что при азооспермии с кариотипом 46,ХУ для всех исследованных хромосом существует тенденция к увеличению частоты хромосом с малыми С-блоками(а в сумме для семи хромосом разница с контролем достоверна)(таблица 2),а также к увеличению числа мужчин с комбинациями малых блоков,можно предположить, что пониженное содержание С-гетерохроматина оказывает неблагоприятное действие на нормальную репродуктивную функцию и,в частности,на сперматогенез.

На отрицательную роль малых сегментов гетерохроматина в репродукции указывается в работах Вотс) е!. (1983),1\ристесашшли (1984) и Круминя(1989). Существует гипотеза о возможной генетической активности структурного гетерохроматина на ранних стадиях эмбриогенеза ЙсЬшг'гас^е'г ,197б).Подугольникова и Блюмина(1982). наблюдали уменьшенные размеры С-сегментов у детей с змбриопатиями неясной этиологии и сделали вывод о неблагоприятном влиянии общего снижения количества структурного гетерохроматина на эмбриогенез, жизнеспособность и физическое развитие в постнатальном периоде. Возможно,уменьшение суммарного количества гетерохроматина,нарушая сбалансированность хромосомного набора,может привести к искажении генетической программы развития,что вызывает неблагоприятные последствия,в том числе нарушение репродуктивной функции путем воздействия на сперматогенез.Эмбрионы с малыми С-блоками больше подвержены вредному влиянию факторов внешней среды,и предрасположенность к тому или иному пороку будет реалкзовываться более часто(Кристе-сашвили, 1984).Нельзя исключить и влияние изменения количества гетерохроматина на экспрессию структурных генов.

Что касается содержания гетерохроматина в длинном плече У-хромосомы,то поскольку нами получено равное соотношение лиц,в кариотипе которых эта половая хромосома обладала малым и крупным С-блоком.ыы предполагаем,что вариабельность длины У-хромосомы,обусловленная вариабельностью С-сегмента,не связана непосредственно с нарушением сперматогенеза,кроме случаев делеции гетерохроматина,

захватившей эухроматиь.Хроме того, на наш взгляд .надо иметь в виду сбалансированность генома по количеству гетерохром-.тина, поскольку С-блоки У-хромосомы вносят свои лепту в суммарное количество гетерохроматина в хромосомном наборе.

При синдроме Клагпфеяьтера для всех исследованных хромосом получено достоверное увеличение частоты малых С-сегаептов и статистически значимое увеличение частоты лиц с сочетанием в кариотипе только малых вариантов С-гетерохроматина.Вероятно,избыточное количество гетерохроматина имеет летальный эффект при этой хромосомной патологии.

Если существует определенный оптимальный уровень структурного гетерохроматина,и уменьшение или,напротив,увеличение его количества может привести к различным отклонениям в развитии,то при синдроме КлаИнфельтера,когда присутствует в кариотипе лишняя Х-хромо-сома,которая вносит свой вклад в суммарное количество гетерохроматина,большое число хромосом с экстремально малыми С-блоками обеспечивают жизнеспособность эмбрионов с хромосомной патологией.Эмбрионы, в кариотипе которых уровень гетерохроматина превышает некий определенный порог,элиминируются,т.е. дисбаланс по гетерохромати-ну при данной хромосомной патологии может быть одной из возможных причин дифференциальной смертности эмбрионов л разной жизнеспособности индивидов в пост;;атальном периоде.

Анализ локализации С-сегмента хромосом 1,9,16 показал, что ни в одной группе обследованных лиц не были обнаружены индивиды с полной инверсией С-гетерохроматина.Частичные инверсии встречались только в хромосомах I и 9,среди пациентов с синдромом Клайнфельтера вообще не было хромосом с инверсией.Предполагается,что изменение локализации гетерохроматина может способствовать нера схождеиию хромосомСКристесашвили, 198*0,Пр1чина возникновения синдрома Клаян-фельтера-нерасхождение хромосом,однако наше исследование не выявило среди пациентов с эюя хромосомной патологией носителей не только полных (Берлинская и др. ,1982), но и частичных инверсий.

Не найдено различий в частоте встречаемости частичных инверсий хромосом I и 9 в нсрме л при тяжелом нарушении сперматогенеза с кариотипом чб,ХУ.

При анализе частоты гетероморфизма гомологов хромосом 1,9,16 не выявлено статистически значимых различии при сопоставлении исследованных групп пациеьтсь с азооспермией и контрольной группы фертильных мужчин для всех изученных хромосом.Для всех исследован-

них групп и для всех изученных хромосом характерно преобладание гетероморфизма гомологов средней степени.

3. Результаты дерматоглифического анализа мужчин с азооспермией и каркотипом 46.ХУ

У мужчин с азооспермией и кариотипом 46,ХУ было обследовано 396 ладоней рук.Все изученные дерматоглифичсские параметры сравнивались с таковыми в группе мужчин с нормальным кариотипом и нормальной репродуктивной функцией,где было обследовано 236 ладоней.

При нарушении спе;матогенеза и нормальном кариотипе показаны достоверные различия в частоте встречаемости почти всех пальцевых узоровСза исключением радиальных петель) в сравнении с контролем '.таблица 4).При'ем,общая тенденция к уменьшении или увеличении частоты того или иного узора прослеживается практически на всех пальцах.

Таблица 4

Частота встречаемости различиях типов рисунка на пальцах кисти у мужчин с азооспермией и кариотипом 46,ХУ

Тип узора Мужчины с азооспермией 'Л кариотипом 46, ХУ Контроль

Число пальцев % Число пальцев %

Арки Петли радиальные Петли улычгные Завитки Всего исследовано пальцев 84 4,3*** 77 3,9 1031 . 52,1*** 788 39,8*** 7.900 18 1,5 34 2,9 544 46,1 584 49,5 П80

статистически достоверные отличия от контроля,р<0,001.

У 15,9?5 мужчин с азооспермией наблюдал;: однообразные ,\'Зорк на всех десяти лалъг.ах,каждый десятый обладал только петляриов контроле- 3,4£,р<0,05)¿таблица 5).

Общий гребневы:; счст(ОГС) у мужчин с нормальной репродуктивной функцией разен 146,43-3,31,в группе музгчин с азооспермией и нормальным хромосомным набором ОГС не отливается от контроля (147,14 - 3,57).Больше всего пациентов имглг гребневый счет в ин-

Таблица 5

Признаки дерматоглифики у мужчин с азооспермией

Мужчины с азооспермией и ка~иотипом 46; ху Пациенты с синдромом КлаИнфельтерс Контроль

аос. кол-ио % аос. кол-во % аос. кол-во %

шчие только пе-1ь на 10 пальцах 20 10,3* 2 3,8 4 3.4

X! нгаже ЮО 37 18,7" 12 23,1* 10 8,5

'сутстпие пальце-¡го трл радиуса 36 9,1 17 16,3" 12 5,2

40° 161 41,7х 40 39,6 74 33, с

1 > 60° 10 2.6* 3 2,9 16 7,2

шолнительный осе-)й трирадиус 46 11,6 3 2,9"* 30 12,9

юры в области ¡пара 59 14,9** 5 4,8 18 7,8

юры в области ¡потенара 126 31,8" 36 34,6* 52 22,4

дкое окончание [нии а 55 13,9"* 4 3,9 14 6,1

|рианты четырех-1льцевых складок 34 8,6"* 3 2,9 4 1.7

!сего изучено лиц 198 1сего изучено [адоней 396 52 104 116 232

-статистически достоверные отличия от контроля,р< 0,05 -"- -"- -"- ,Г<0,С01

теръале от IOI до 604*1,4$) .значительно увеличено по сравнению с контролем число л'^ц с ОТС ниже 1С0(18,7£ и 8,5$ соответственно, ! <G,OI).

а-6 гребневый счет в группе мужчин с азооспермией в среднем равнялся 82,39 £ 0, G5 ,что несколько выше этого показателя в конт р.олыюи группеС 80,VB ± Ifl4 )fa расстояние между трирадиусами а и i меньше,чём в кп:гг;оле,чтс привело к уменьшению ширины гребешков,т.е. при азооспермии у муичин с кариот::пом 46,ХУ на единицу длины приходится болььье число гребешков.

Среднее значение углаоМв исследованной группе пациентов равнялось 64,81°£ 0,80° ,что достоверно нгае,чем среднее значение параметра в контрольной группе С 88,70° £ 2,03°). 41,7% муичин с азооспермией к .«ели jгол cttfi 40° и нижеС1? контроле-ЗЭ$,р<0,05)-.

Частота ладоней с отсутствием или с дополнительным трирадиу-сом практически не отличается от контроля.

Получено достоверное увеличение частоты встречаемости ладоней,имеющих узоры в области тенара и шпотенара.а также ладоней с редким окончанием главной линии А в полях 1,2,5 в группе мужчин с азооспермиейСтаблица 5).8,6Й ладоней мужчин с нарушением сперматогенеза имели варианты четырехпальцевых складок( в контроле всего 1,Уй, р< 0,001).

Таким обозом,в г;уппе мужчин с азооспермией и нормальным ка-риотнпом по очень большому числу изученных параметров получены достоверные отличия от контрольной группы мужчин.Такие признаки считались измененными. К ним были.отнесены следующие:наличие только петель на всех пальцах,ОГС ниже -100,присутствие арок более,чем на одном пальце,угол ClttL 4 40° ',узоры не тенаре и гапотенаре,редкое окончание нити А и наличие вариантов четырехпальцевой борозда.

Чтобы исключить возмоиность того, 41 о небольшая часть мужчин с азооспермией накопила большое количество измененных признаков, а это,в свою очередь,дало общую картину высокой частоты встречаемости этих признаков,у каждого изученного индивида подсчитано количество измененных признаков.Всего 8,1«' пациентов не обладали измененными параметрами дерматоглифики,а в контрольной групае мужчин с нормальной ф'^ттильностью- 30,5й(р<о,00L). 43,9$ мужчин с азооспермией имели три и более измененных признака,тогда как в контроле- 1Ь,Ж индтидо-кр<0,001).

Как известно, большинство дерматоги.ш/.'ческих признаков фор-

мируется исключительно под влиянием генетических факторов, поотс-му выделение нами ряда признаков, достоверно отличных у мужчин с нормальной репродуктивной функцией и с азооспермией позволило ifcti сделать предположение о том,что серьезное нарушение сперматогенеза у части пациентов с нормальным комплексом хромосом генетически детерминировано.

Несмотря на то, что кариологаческое исследование мужчин этой группы показало наличие нормального хромосомного комплекса,накопление измененных признаков дерматоглифики может указывать на возможное скрытое нарушение лли на дефекты на .уровне гена.

4. Результаты де, .¡атоглифичеекпго анидна;: пациентов с синд;ояом Клали/ельтера.

В группе пациенто.з с синдромом Клайнфельтера,диагноз кототьм ставился на основании ;езультатоя криологического анализа,было исследовано 520 пальцев и 104 ладони.

Изучение дерматоглифических данных у больных с синдромом длаип-фельтера подтверждает результаты других белее ранних исследований, которые говорят о том, что при нарушении комплекса половых хромосом в признаках дерматоглифики наблюдаются определенные отклонения.

Из четырех типов узоров разница в частоте встречаемости по сравнению с контролем достоверна только для арок.Обцая частота этого узора оценивалась как 6,1#(в кинтроле-1,5Й,р<0,001).

О ГС при синдроме длайнфельтера в среднем равен 130,73 - 7,Сб. Это уменьшение по сравнению с контрюлем отмечалось как на отдельных руках,так и в сумме на двух,причем разница с контролем достоверна Ср< 0,05). 23,1% мужчин с синдромом Клайнфельтера имели OK; ииже ICO,тогда как в контрольной группе всего (3,553 индивидов облагали ОГС в этом интервс;ле(р< 0,05) (таблица 5).

Для того,чтобы узьать.чем определяется уменьшение ОГС у нрци-2HT0B с хромосомной па? плотней, мы обработали результаты подсчета среднего гребневого C4tia петель и завитков на отдельных пальцах руки и всех пальцев вместе.Анализ показал, что при синдроме Клайнфельтера средний гребневыа счет ]адиалышх,ульпарных петель и за-зитков ниже,чем у фер'п.льных мужчин.Таким образом,уменьшение ОГС, шблюдаемое в группе пациентов,можно интерптсти; огать не только как результат увеличения частоты арок,но и как следствие редукции греб-icaoro счета петель и завитков.

достоверно меньше, чем в контроле,величина среднего гребневого ¡чета между пальцевыми гржрадиусами а и & ¿у гужчин с анеуплоидией

on i-авен 76,86 i 1,64 (в контроле- 80,78 - 1,14,p<0,05).Анализ подсчета средней ширины гребешков говорит об увеличении их ширни при синдроме Кла^фельтера.Значительно чаде,чем в контроле,вс чались ладони с отсутствием пальцевого тр'л радиуса с (16,35» и 5,2е, соответственно,р< 0,01).

Отмечалась тенденция к проксимальному смещению осевого три-¡адиуса t ,т.е.-,другими словами,к уменьшение максимального угла aid. , однако разница по сравнению с контролем достоверна лишь для п;авоЯ руки.В среднем значение угла aid. при синдроме Клайнфельте] равно 43°(в контроле-44,4°).Достоверно резче,чем в контроле,встречались ладони с дополнительным осевым трирадиусом(2,Ж по сравнению с 12,% в контрольной группе ферт иль них мужчин,р <0,001).

Каждая третья ладонь пациента с синдромом Клайнфельтера обла дала узором в области гипотенара(34,65&).Разница по сравнению с кс ролем(22,42)стат«стически достоверна(р<0,05)(таблица 5).

Не отмечалось в группе пациентов увеличения частоты ладоней с редким окончанием главной ладонной линии Лис вариантами четы-Iехпальцевол складки.

Таким образом, при нарушении комплекса половых хромосом наблюдались следующие отклонения в признаках дерматоглификигувеличе-ij.ie частоты встречаемости арок,уменьшение ОГС,среднего гребневого счета мекду пальцевыми трирадиусами а и 8,проксимальное смещение осевого трирадиуса,увеличение частоты ладоней с узорами на гипоте-г.;ipe и с отсутствием пальцевого трирадиуса.

Из всех исследованных признаков, кожного рисунка пальцев и ладоней нельзя определить строго специфические для синдрома Клайнфельтера,тем не менее на вышеупомянутые параметры надо обращать особое внимание гри анализе отпечатков пальцев и ладоней. Присутствие любого из этих признаков,тем более их совокупность,может слу-/;чт'.. основанием для направления на цитогеиетнческое исследование, ¡"юдобный подход особенно важен в клинике бесплодия,где у больных .ь большинстве случаев наблюдается стертая тоническая картина сиця

М1МП.

5. Анализ дерматоглифических параметров ,у носителей малых экстремальных С-вариантов хтомосом 1.9,16 и У.

Проводилось исследование дерматоглифических параметров у 26 индивидов,кариотип которых при окрашивании пэ С-методу содержал только хромосомы 1,9, г6 и У со средним размс ом С-сегнента.Результаты сравнивались с таковыми у лиц,в кариоги.:е которых паблг".ялксь

•2 малых С-блока(39 человек) и у мужчин с тремя и более мальши •вариантами(15 человек).Остальные исследсгалные хромосомы в пос-дних двух группах имели С-гетерохроматин среднего размо/а.

Существенно повышался ОГС в гр.уппе мужчин,в каротипе кото-:х три и Лиее хромосом с малым С-блоком(Т66,13 го сравнению с 9,96 в группе индивидов,не имеющих вообще экстре мальных иариан-1В в кариотипе).6С$ этих мужчин имели ОГС выше 16С(в двух друшх >уппах-30,5$).

По мере накопления в кариотипе хромосом с малыми С-варианта-увеличивалась частота ладоней без пальцекогг тти'одиуса и с до-лнительными пальцевыми трирадиу сами,уменьшалась частота ладоней з осевого трирадиуса(£) или с дополнительным трирадиусом ,а кже резко возрастало число ладоней с узотами на тенате:пуакт.:-ски каждая третья ладонь обладала рисунком в это/ области.Часта узоров на гипотенаре, на против, уменьшалась по пере накопление юмосом с малыми С-вариантами.

Таким образом,увеличение гребневого счета,наличие донолнитель-х пальцевых трирадиусов или их редукция,узоры на тенаре-все зто жет говорить о возможном уменьшении в кариотипе суммарного коли-ства структурного гетерохроматина,т.е. о сочетании в кариотипе юмосом с малыми экстремальными С-вариантами.

Результаты сопоставления данных дерматоглифики с наличием в риотипе экстремальных С-вариантов хромосом 1,9,16 и У говорят в пользу того,что структурный гетерохроматкн является фак'1 ором,пз-няющим градиент распределения кожных узоров или нарушшцйи сте-нь их экспрессивности,оказывая влияние на формирование кожного супка на пальцах и „.адоиях рук.

Эти данные еще раз подтверждают существующее мнение о том, о изменение оптимального суммарного количества гетерохроматина безразлично для организма,особенно в процессе эморпогенезаСПод-•ольникоза.Блюкина, 19о2) и может влиять не только на фо] г'прсва-е кожных узоров, но и на морфогенез в цело:;. Конечно, ошцаясь на зультаты нашего не следования, мы монет пи. о; нть только о »еблаго-^-иятнем эффекте уменьшенного количества гстсрох^ом," нма.

Клпнико-генеалогпческое исследование мужчин с азооспермией •казало высокую степень отягоценнсстп род ослов |!ых по признакам, .торые связаны с нарушении фертильностиСбссплодныя брак,предшест-ющее бесплодие,смер-ть детей до 1 года,отягощенный акушерский анам-з у замужних родственниц или жен родственников).Анализ семейных

частот встречаемости вышеуказанных признаков по трем степеням ро, ства выявил их существенное семейное накопление в обеих исследов; них группах(как г.ри йог,сальном кариотипе,так и при анеуплоидии).

Проведение генетпко-корреляционного и генетико-сегрегационш го анализа не входило в задачи настоящего исследования,поэтому изучение родословных мукчнн с азооспермией позволяет нам только с большой остороннсстью сделать предположение о том,что в ряде случае!,,даме при отсутсчвпи видимых аномалий кариотипа, немаловажную ..иль в этпопатэгенезе нарушения сперматогенеза играют наследствен ш:е факт о, ь:.

Такн'/ образ с..;, для выявления различных генетически обусловлен ..¡•х 'о;!' царушзиы сперматогенеза необходимо комплексное примене-::; е различных методов генетического исследования,таких как цитоге-:>(.лг>;сскки,дерматогли$ичсский и генеалогический.На основании резу. татов нашего исследования мы предполагаем,что в этиологии нарушения сперматогенеза велика доля генетических факторов, что подтверждается выявленной высокой частотой хромосомных аномалий,достоверным увеличением суммарной частоты малых вариантов О-гетерохромати-.:(• х омосой 1,9,16 и У,повышенной частотой отклонений в параметра* дсркчтопг.фиж к отягощенных родословных иуя«--и с азооспермией.

з ;; в о д у

I. Среди ну-:чип с азооспермией хромосомные аномалии встречают' с? с высокой частотой(21,3#).В этиологии нарушения сперматогенеза типу азооспермии существенная роль принадлежит анеуплоидии по головым хромосомамС18,7^).Доля гоносо:шых аберраций в общем числе %. '»мосомных аномалий составляет 95 ¡4$, доля ке структурных перестро-'у ау. осот.: значительно иим<-4,бЙ.Сбсая частот;, синдрома Клайчфель-|.,а с: едг мужчин с азооспермией составляет Г',752. 875? всех г.ациен-0!« о «нсулопдие* по Х-хромосоме икеет чистук форму ичццома.

При азооспермии с нормальным кариот^п^м установлено досто-ное увеличение суммарной частоты хромосом '.,9,16 и У с малыми и, пантами С-гетерохроматина.При синдроме пфельтера увеличена •'П'-гота каждой исследованной хромосомы с малы1"-! С-сегмептами,а так-

частоте лиц с наличном - кариотипе только 'злых экстремалшых ■■о" и актов.

3. У мукчин с азооспермией кариоткпом "6,ХУ выявлен кемп-екс значимых отклонений дерматоглифических п." гя метров от грушы •, е; "ильных мужчп,': проксимальное смещение осг/гго трирадиуса,у.!оры ■.'а гена}е п гипотснаре, редкое окончание главной ладонной линпч А, наличие вариантот 4ети;..ехпсльцевой склад ч-:.

4. При синдроме Елайнфельтера выявлено уменьшение í-ГС,при

■i уменьшение связано как с увеличением числа пальцев с j та:.".!, и с редукцией гребневого счета петель и завитков.Уста;;от:лено íe достоверное уменьшение а-6 гребневого счета,увели»'-..тс час-i ладоней с узора::и на гипотенаре и с отсутствием пал>. -чого радиуса с. Наличие тьких отклонений в па ¡л метрах дсрмат о :т служить показанием к цитогенетическоиу обследовании пациен-

5. Выявлены определенные корреляции между дангыми де;::атогли-[ и наличием в кариотипе экстремальных С-вариантов:по мере па-1ения в кариотипе хромосом 1,9,16 и У с малики (^-вариантами мчивается ОГС,частота ладоней без пальцевого трирадиуса или с ишителышми пальцевыми трцадиусами,возрастает число ладоней орами на тенаре.

6. Выявленная высокая частота хромосомных аномалий,увеличе-суммарной частоты калых экстремальных С-вариантов х^огосом 1,

и У, повышенная частота отклонений в параметрах детматоглифи-отягощенных родословных указывает на значительный вклад ге-ческих факторов в этиологию нарушения сперматогенеза по типу спермин.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

При мужском бесплодии с нарушением спо патогенеза по типу спермии рекомендуется:

I'. Комплексное применение" разл^нкх методов генетического всевания,включающих в себя цитогенетаческпн,дерматоглифи чеекк,! неалогический.

2. Всем без исключения лицам с нарушением сперматогенеза по азооспермии обязательно проведение наркологического анализа

выявления хромосомах аномалий.

3. В случае невозможности проведения к&] ¡«алогического аналп-сем бесплодным му»ч.:нак с азооспермией проводить отбор паци-

з для исследования х.омосом по результатам авалии- л-хг о: ат::-ш де]матолтафического анализа с целью выявления Myi.4i.ii с епцд-.1 Клайпфельте^а.

4. Обна]угение аиеуллоидип по Х-х]омосомь.делецпи reTe¡ox[o-!0В0Г0 сегмента длинного плеча У-х j омосокы, лХ-ка ¿ и от ц па дает УЛ прогноз относительно восстановления репродуктивной ру i¡kl;::j: ента. Следует ; еко;и .¡довать инсеминацию жены cnei мой донора.

глясок ?AjjT по теме диссерга:::и

1. lUfi-iLoüa Л.С.,Чптакадзе К.В,,Копализни Н.Ш. Хромосомные а •.¡алии в генезе Зеспяодия//Мат.1 респ.науч.-'энф.молодых ученых п н] облеме"Бесш:одный б »г к". -Тбилиси ,1985.-С.'47

2. Гигшоьа I.С. ,1ц'.гаианидзе Ш. Кариотил 46,XX у мужчины.Ош с.лпте случая.//Тез.докл.респ.конф.молодых ученых и специалистов' " Молодые учение-ускорению прогресса".-Тбдлиси.-1986.-С. 129

3. Окуджава H.A., ^опалиани Н.Ш., Ширшова JI.C. ,Дкгаркава H.A. Значение цитогенетических исследований при медико-генетическом консультировании бесплодных индивидов//Кат.Зсесоюз.симпоз1'Актуал ■.ые вопросы профилактики наследст.болезней".Вильнюс.-1986.-С.93.

4. Ширшова Л.С. Соотношение различных типов аномалий хромое у мужчин с азоосиериией//Мат.У съезда Груз.общ-ва генетиков и се лекционеров.Тбилиси.-I986. С.217-218.

Г'. Ьприова JI, С. ,Чиракадзе К.В. Азооспермия и аномалии полов х; очосок//'Гсз.докл.вбил.конф. НИИ репроду кцг/ человека"СоБременны вопросы репродуктол огни". Тбилиси.-1988.-С.50-51.

С, Ширшова Л,С., Кг истесагзилн Д.И. Аномалии и варианты xpom сом у бесплодных муз.;чип с азооспермией//Сб."Хромосомы человека в норме и патологии.М. :Наука,1989,-С.117-124.

7. Ширсова Ji.С., Ктистесашвалг Д.И., Григалашвили Н.В. йггоге-ттс чческиЯ анализ бесплодных мужчин с азооспермией//!4атер.П Bcect ¡¡ого съезда мед. гене:иков.-Алма-Ата.-I990.~C.499,