Характеристика сперматогенеза при некоторых генетически обусловленных и приобретенных нарушениях репродуктивной функции у мужчин

Гришина, Екатерина Михайловна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Характеристика сперматогенеза при некоторых генетически обусловленных и приобретенных нарушениях репродуктивной функции у мужчин
ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Характеристика сперматогенеза при некоторых генетически обусловленных и приобретенных нарушениях репродуктивной функции у мужчин"

Направахрукописи

Гришина Екатерина Михайловна

ХАРАКТЕРИСТИКА СПЕРМАТОГЕНЕЗА ПРИ НЕКОТОРЫХ ГЕНЕТИЧЕСКИ ОБУСЛОВЛЕННЫХ И ПРИОБРЕТЕННЫХ НАРУШЕНИЯХ РЕПРОДУКТИВНОЙ ФУНКЦИИ У МУЖЧИН

03.00.25. - гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва - 2004

Работа выполнена в ГУ Медико-генетическом научном центре РАМН

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор Л.Ф. Курило

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук Т.Г.Бархина

доктор медицинских наук, профессор А.И.Лысенко

Ведущая организация: ГОУВПО Российский Государственный Медицинский Университет

Защита диссертации состоится , заседании

Диссертационного совета (Д.001.004.01) ГУ НИИ Морфологии человека РАМН

по адресу: 117418, Москва, ул.Цюрупы, д.З

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ НИИ Морфологии человека РАМН

Автореферат разослан ".........."....................................2004 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета кандидат медицинских наук

Л. П. Михайлова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Бесплодие поражает около 10-15% супружеских пар. По данным статистики у 50% из них невозможность реализации детородной функции обусловлена мужским бесплодием. Причины нарушения репродуктивной функции у мужчин разнообразны. По данным литературы в 30-35% случаев в основе мужской инфертильности лежит нарушение количественных и/или качественных показателей эякулята (Горюнов В.Г. и соавт., 1983; ММс й а1., 1981; ОшЬеМ, Уегеескеп, 1995).

Нарушение сперматогенеза может возникать вследствие поражения генетических факторов и/или эндокринных механизмов регуляции дифференцировки половых клеток, нарушения анатомо-гистологических структур половой системы. Немаловажное значение имеет повреждающее действие на половые клетки химических, физических, биологических факторов (Авцын А. П., Шахламов В.А., 1979; Райцина С.С., 1982; Курило Л.Ф. и соавт., 1995, 1998; Евдокимов В.В. и соавт., 1998, 1999). Примерно в 30% случаев причину мужского бесплодия выявить не удается. Предполагают, что в структуре идиопатического бесплодия немаловажную роль имеет нарушение генетической регуляции репродуктивной функции Е., 1997; Б1ешег Т. е! а1., 1999). Показано, что

до 20% случаев нарушения мужской репродуктивной системы связаны с числовыми или структурными аномалиями хромосом (Курило Л.Ф. и соавт., 1997, 1998, 2000; СИапШеу А.С.е! а1., 1986,1988,1989; Багака! А.1. е!аИ, 1986). Около 2/3 всех хромосомных нарушений составляют анеуплоидия и структурные аберрации половых хромосом - X и У (Курило Л.Ф. и соавт., 1997).

Изменение морфологических, функциональных, биохимических характеристик клетки зависит от характера повреждающего агента, чувствительности повреждаемой живой системы, а также от стадии клеточного цикла (Алов И.А и соавт., 1966). В то же время, при анализе повреждающего действия тех или иных факторов, необходимо учитывать неспецифический характер ряда проявлений клеточной реакции.

Половые клетки организма являются одними из наиболее чувствительных к действию тех или иных факторов. Уникальность половых клеток заключается в присущей только им способности к мейотическому делению, в результате, которого происходит рекомбинация генетического материала и редукция числа хромосом. Таким образом повреждающий эффект разных факторов на половые клетки отражается в том числе на прохождении ими сложных и многоэтапных мейотических событий. Установление специфичности нарушения дифференцировки половых клеток является важным моментом при изучении патогенеза заболеваний половой системы, а также неблагоприятных воздействий на ткань яичка и гаметогенез.

Нарушение сперматогенеза могут быть обусловлены заболеваниями половой системы, в том числе такими часто встречающимися, как варикоцеле и хламидиоз. В настоящее время не существует единой точки зрения, позволяющей на основе механизмов патогенеза бесплодия объединить патологические процессы, возникающие при этих заболеваниях и приводящие к мужскому бесплодию у таких пациентов.

Полиэтиологичность мужской инфертильности, а также достаточно высокий удельный вес идиопатического бесплодия, предполагают расширение методов диагностики, применяемых в клинической практике. ВОЗ в четвертом издании (WHO, 199?) руководства по лабораторному исследованию эякулята и взаимодействия сперматозоидов с цервикальной слизью указывает на "необходимость поиска новых стандартизованных и усовершенствованных методов исследования эякулята", принимая во внимание, как один из многих неблагоприятных факторов, ухудшение экологической ситуации и влияние загрязнений окружающей среды на мужскую репродуктивную функцию.

Отсутствие понимания возможных составляющих мужской стерильности может привести к ошибке в диагнозе и лечении. В связи с этим становится несомненным, что для правильного подбора лекарственной терапии, разработки профилактических мероприятий требуется детальное понимание механизмов гаметотоксического эффекта тех или иных повреждающих факторов, имея в виду,

что многие из них оказывают сочетанное повреждающее влияние на гонады и гаметы.

Исходя из вышесказанного, целью настоящего исследования явилось: изучение особенностей дифференцировки мужских половых клеток при генетически обусловленных нарушениях репродуктивной функции; действии биологических, физических факторов; нарушении кровоснабжения яичка; а также создание схемы обследования мужчин с бесплодием для комплексной оценки сперматогенеза.

Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:

1. Изучить характер цитологических и гистологических изменений в яичках при хромосомной, генной патологии сперматогенеза, заболеваниях мужской половой системы и гаметотоксическом влиянии факторов внешней среды.

2. Провести сравнение состояния сперматогенеза у мужчин с бесплодием разной этиологии и контрольной группы, используя количественный анализ состава НПК из эякулята.

3. Создать схему обследования с целью комплексной оценки сперматогенеза при нарушении генеративной функции различной этиологии у мужчин.

Научная ценность. На материале обширной группы пациентов была определена частота генетически обусловленной патологии в структуре мужского бесплодия неясной этиологии: при азооспермии - 20%, при олигозооспермии -8%; при астенозооспермии - 6%; при астенотератозооспермии - 5%; при нормозооспермии - 2%.

У пациентов с одинаковыми формами генетически обусловленной патологии выявлена гетерогенность нарушений сперматогенеза.

Впервые определена возможность завершения сперматогенеза при синдроме Клайнфельтера (кариотип 47, ХХУ) и синдроме Де ля Шапелля (46,ХХ-та1е).

Впервые проведенное исследование сперматогенеза у пациентов с полизооспермией свидетельствует о блоке дифференцировки гамет на разных стадиях профазы I мейоза и в делениях созревания.

У пациентов с хламидийной инфекцией отмечена тенденция нарушения сперматогенеза на разных стадиях дифференцировки мужских половых клеток и слущивания незрелых половых клеток в просвет извитых семенных канальцев.

Практическая значимость работы. Практическая ценность заключается в выработке рекомендаций по совершенствованию диагностического и прогностического обследования мужчин, страдающих бесплодием. Показана необходимость проведения цитогенетического анализа лимфоцитов периферической крови, количественного кариологического анализа состава незрелых половых клеток из эякулята, ультраструктурного анализа мужских половых клеток, молекулярно-генетических и молекулярно-цитогенетических методов при нарушении репродуктивной функции в схеме комплексного клинико-андрологического обследования пациентов с бесплодием. Выводы и рекомендации работы предложены для внедрения в клиническую практику и использованы специалистами, занимающимися проблемами механизмов нарушения репродуктивной функции человека, а также при медико-генетическом консультировании.

Материалы исследования используются в учебном процессе на кафедре репродуктивной медицины и хирургии Московского государственного медико-стоматологического университета, в научно-практической деятельности лаборатории цитогенетики Института общей генетики им. Н.И.Вавилова РАН.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Одинаковые формы генетически обусловленной патологии характеризуются гетерогенностью нарушений сперматогенеза;

2. У пациентов с генетически обусловленной азооспермией в осадке эякулята выявлены не только сперматоциты и сперматиды, но и сперматозоиды, что свидетельствует о вовлечении широкого спектра генов, локализованных на разных хромосомах и контролирующих различные этапы сперматогенеза.

3. У пациентов с варикоцеле, а также при хламидийной инфекции выявлена тенденция нарушения сперматогенеза на разных стадиях дифференцировки мужских половых клеток.

4. Анализ состояния сперматогенеза при полизооспермии позволяет рассматривать эти случаи как определенную форму, характеризующуюся нарушением сперматогенной функции.

Апробация работы. Материалы работы доложены на VIII Всероссийском съезде дерматовенерологов (Москва, 2001); II международном форуме "Мужское здоровье и долголетие" (Москва, 2004); научной конференции ГУ НИИ Морфологии человека (Москва, 2004). По материалам диссертации опубликовано 9 работ.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 120 страницах машинописного текста, иллюстрирована 10 таблицами, 2 схемами, 19 рисунками. Состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, практических рекомендаций, выводов, списка литературы, включающего 180 работ.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Объект исследования

Клиническое обследование пациентов с бесплодием в браке включало общеклинические, в том числе генеалогический, лабораторные и инструментальные методы исследования. Пациентам проводили спермиологический и цитогенетический анализы (анализ кариотипа по

лимфоцитам периферической крови), количественный кариологический анализ состава незрелых половых клеток (ККА НПК) по стадиям их развития из эякулята. У части пациентов с азооспермией, олигозооспермией тяжелой степени было проведено гистологическое исследование биоптатов яичек. Анализ микроделеций локуса AZF хромосомы Y проводили пациентам с азооспермией или олигозооспермией тяжелой степени после выполнения цитогенетического исследования и при отсутствии хромосомных аномалий. Всего в ходе работы обследовано 407 человек.

Гистологический анализ препаратов биоптатов яичка пациентов с

бесплодием

Фрагменты ткани яичка, полученные при оперативном вмешательстве (одно-или двусторонняя биопсия яичек), погружали в приготовленный ex tempore фиксатор Буэна (на 6-36 часов). Фиксированные фрагменты биоптата яичка отмывали от пикриновой кислоты в трех сменах 70° спирта. По завершении последовательной проводки через ряд спиртов восходящей концентрации, ксилол, смесь ксилола с парафином (1:1), материал заливали в парафин. Использовали схему длительности проводки через названные жидкости, отработанную для яичников (Курило Л.Ф., 1985).

Срезы толщиной 5-7 мкм окрашивали гематоксилином и эозином, после чего заключали в канадский бальзам.

Количественный кариологический анализ состава незрелых половых клеток из эякулята

Для проведения КА состава НПК использовали суховоздушные препараты половых клеток из эякулята, приготовленные по общепринятым методам с модификацией и окрашенные красителем Гимза (Курило Л.Ф., Любашевская И.А., 1990, 1993; Evans E.P. et al.,1964; Templado С. et al.,1996).

Анализ включает в себя дифференцирование клеток сперматогенного эпителия по стадиям развития: сперматогонии (общий пул), сперматоциты I на стадиях

прелептотены, зиготены, пахитены, диплотены, диакинеза, метафазы I мейоза, метафазы II мейоза, сперматоциты II, сперматиды (общий пул), сперматозоиды. Среди общего числа подсчитанных клеток определяли долю НПК, долю клеток на каждой из вышеуказанных стадий, за исключением сперматозоидов.

Спермиологическое исследование

Спермиологический анализ эякулята выполняли по методу, рекомендованному ВОЗ (WHO, 1999). Согласно данным параметрам определяли режим половой активности, объем, цвет, вязкость и рН эякулята, количество сперматозоидов в 1 мл спермы, степень их подвижности, соотношение живых и мертвых сперматозоидов, патологические формы, количество лейкоцитов.

Цитогенетический анализ лимфоцитов периферической крови пациентов

Цитогенетическую диагностику проводили на клетках препаратов метафазных хромосом лимфоцитов периферической крови, культивированных in vitro. Отбор метафазных пластинок хромосом для анализа осуществляли согласно общепринятым критериям (Захаров А.Ф. и соавт., 1982; Кулешов Н.П., 1991). Препараты хромосом окрашивали G-методом. В каждом случае анализировалиови не менее 11 метафазных пластинок. При обнаружении количественных или структурных аберраций хромосом число анализируемых клеток увеличивали до 29 и далее по общепринятой схеме (Кулешов Н.П., 1991).

Результаты цитогенетического исследования приведены согласно Международной системе номенклатуры цитогенетики человека (ISCN, 1995)

Микроделеционный анализ локусов AZF хромосомы Y

ДНК для проведения ПЦР выделяли по стандартной методике с определенным набором праймеров, который включал в себя 3 пары Y- специфичных STSs.

1. для субрегиона AZFa (интервал 5С- 5D): DYS275;

2. для субрегиона AZFb (интервал 5P-6D): DYS224;

3. для субрегиона Л2Ре (интервал 6Б-6Б): ВУ8249

ДНК - исследование проведено при участии сотрудника лаборатории генетики нарушений репродукции ГУ МГНЦ РАМН к.м.н. В.Б. Черных, которому автор выражает благодарность.

Электронно-микроскопичесое исследование сперматозоидов эякулята

Эякулят фиксировали 2,5%-ным раствором глютарового альдегида на 0,1М фосфатном буфере в соотношении 1:20. После центрифугирования к осадку добавляли 2 мл фиксатора, ресуспендировали, инкубировали при 4°С в течение 60 мин.

Материал центрифугировали, к осадку добавляли 2 мл буфера, инкубировали при 4°С 15 мин. Затем после центрифугирования к осадку добавляли 2 мл четырехокиси осмия, фиксировали 1-1,5 часа при 4°С. Затем материал дегидратировали в спиртах возрастающей крепости.

Контрастировали 12-14 часов в растворе уранилацетата в 70%-ном этаноле. Затем проводили дегидратацию материала в спиртах возрастающей крепости (70°, 96°, 100°), абсолютном ацетоне. Предварительную пропитку материала проводили в трех смесях абсолютного ацетона или окиси пропилена с эпоксидной смолой. Полимеризация в течение 24-х часов при 37°С и 24 часа при 56°С. из залитого в эпоксидную смолу эякулята на ультратоме готовили ультратонкие срезы, которые контрастировали цитратом свинца.

Автор выражает благодарность д.б.н Е.Е.Брагиной за помощь в проведении данного раздела работы.

Статистическая обработка данных

Достоверность полученных результатов определяли при помощи компьютерной программы "8ТЛТ18Т1СЛ 6.0". Для анализа данных использовали методику вычисления средних показателей, их ошибок репрезентативности, расчета среднего квадратичного отклонения, определения достоверности средних показателей, применяя методы сравнения средних и относительных величин непараметрической

корелляции. Результаты считали достоверными, если различие по Т-критерию Стьюдента было незначимым, т.е. уровень значимости не превышал 0,01 (р<0,01) (Урбах, 1975).

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ

ОБСУЖДЕНИЕ

Формирование потока и групп пациентов по основному клиническому диагнозу, результатам спермиологического и цитогенетического

обследования

В лаборатории генетики нарушений репродукции ГУ МГНЦ РАМН с 1986 по 2003 год было проведено 1305 исследований спермы мужчин, обследующихся по поводу бесплодия в браке. Из них приблизительно в 49% случаев выявлена азооспермия и олигозооспермия.

Согласно классификации показателей эякулята (WHO, 1999) случаи астенозооспермии составляют около 30% от общего числа обследованных (рис.1). Приблизительно 9% от числа мужчин с бесплодием составляют пациенты с тератозооспермией. Около 8% мужчин с бесплодием (114 случаев) имели нормальные показатели спермограммы. В небольшом проценте случаев (около 5%) выявлена полизооспермия (концентрация сперматозоидов выше 150 млн/мл).

29V,

¡29%

20%

■терато

□ астенозооспермия

□ олигозооспермия ■ азооспермия

□ нормозооспермия □ полизооспермия

Рис.1 Структура различных форм патозооспермии у мужчин с бесплодием в браке

Из числа обследованных была сделана выборка пациентов, прошедших комплексное обследование: спермиологическое исследование, количественный кариологический анализ (КА) незрелых половых клеток из осадка эякулята, цитогенетическое исследование лимфоцитов периферической крови (всего 203 человека, 237 образцов эякулята). У всех обследуемых кариотип лимфоцитов периферической крови соответствовал нормальному мужскому - 46, ХУ. Выборку разделили на несколько групп:

1. доноры спермы для искусственной инсеминации (23 человека) - 1-я группа (условно-контрольная);

2. лица с олигозооспермией (54 человека, 71 образец эякулята) — 2-я группа;

3. азооспермией (36 человек, 49 образцов эякулята) - 3-я группа;

4. астенозооспермией (22 человека, 25 образцов эякулята) - 4-я группа;

5. тератозооспермией (24 человека, 24 образца эякулята) - 5-я группа;

6. 45 образцов эякулята от 44 пациентов с полизооспермией - 6-я группа.

Анализ сперматогенеза и количественный анализ состава по стадиям развития незрелых половых клеток у пациентов с нормальным мужским кариотипом (46,Х¥) и нарушением генеративной функции неясного генеза

Для пациентов с азооспермией характерно отсутствие половых клеток в эякуляте. Средние показатели объема эякулята и концентрации лейкоцитов соответствовали нормальным значениям.

При КА НПК у всех пациентов данной группы было установлено наличие незрелых половых клеток в эякуляте (табл.1). Отмечена тенденция снижения доли сперматоцитов на стадии пахитены профазы I мейоза. Наблюдаемая ситуация может быть следствием нарушения формирования СК и синапсиса гомологичных хромосом в зиготене.

Нарушение структуры синаптонемного комплекса, весьма чувствительного к действию повреждающих факторов, может приводить к блоку гаметогенеза (Джгаркава Н.А., 1991; Коломиец О.Л., 1992,1998,2000; Коломиец О.Л. и соавт., 2001). В нашем исследовании при анализе состава НПК из эякулята у 9-ти пациентов был отмечен частичный блок сперматогенеза на стадиях прелептотены-

зиготены профазы I мейоза, доля НПК этих стадий составляла при этом от 1 до 21% (в контрольной группе - 0,66+/-0,16%).

У одного пациента 34 лет, при КА НПК был определен блок сперматогенеза на стадиях лептотены-зиготены профазы I мейоза (доля сперматоцитов на этих стадиях мейоза была увеличена почти в 20 раз в обоих образцах эякулята в сравнении с таковой в условно-контрольной группе). Обнаружен также частичный блок сперматогенеза на стадиях диплотены и в делениях созревания. Количество сперматид снижено. При ультраструктурном исследовании клеток сперматогенного эпителия из эякулята, распластанных на водном мениске были выявлены "пустые" ядра сперматоцитов I, без тяжей боковых элементов (БЭ) синаптонемного комплекса и без СК в целом. В ядрах отмечены лишь единичные, тонко окрашенные азотнокислым серебром (специфическая реакция на СК), короткие нитевидные структуры (фрагменты БЭ СК).

Отсутствие формирования СК позволяет сделать предположение о нарушении синтеза белков, необходимых для его формирования в лептотене-зиготене профазы I мейоза, либо об аномалии самого процесса формирования СК, что приводит к блоку сперматогенеза на уровне сперматоцитов I и азооспермии, о чем и свидетельствовали данные КА НПК из эякулята. Однако обнаружение единичных, даже аномальных сперматозоидов, в рассматриваемом случае говорит о том, что в единичных сперматоцитах происходит образование СК и сперматогенез прогрессивно заканчивается.

У пациентов с олигозооспермией (возраст от 21 до 42 лет) показатели объема эякулята, концентрации лейкоцитов, доля живых сперматозоидов находятся в пределах нормы (WHO, 1999). Однако в группе мужчин с олигозооспермией тяжелой степени доля живых сперматозоидов от всего числа зрелых половых клеток несколько ниже, чем у мужчин с концентрацией сперматозоидов выше 5 млн/мл (в среднем 73% и 96% соответственно).

При оценке НПК из эякулята в группе пациентов с олигозооспермией выявлено повышение доли НПК по отношению к зрелым гаметам (табл.1). Отмечена тенденция снижения числа НПК на стадиях до пахитены-пахитены

профазы I мейоза, что может свидетельствовать о нарушении прохождения клетками более ранних стадий.

У пациентов с астенозооспермией (возраст от 21 до 60 лет) кроме подвижности все параметры рутинного семиологического анализа соответствовали нормальным значениям (объем эякулята - 2,3 мл; рН-8,0; количество сперматозоидов в 1 мл - 41,5 млн.; доля живых сперматозоидов - 91%; доля морфологически нормальных зрелых половых клеток - 38%). Подвижность сперматозоидов была снижена. Сперматозоиды с быстрым и медленным поступательным движением составили 13% от общего количества живых зрелых половых клеток.

Как указывают данные литературы и подтверждено нашим исследованием снижение подвижности сперматозоидов при остальных нормальных показателях эякулята, а также сочетание астенозооспермии с тератозооспермией является одной из наиболее частых причин, снижающих мужскую фертильность и могут быть следствием нарушения формирования ультраструктур сперматозоидов в спермиогенезе (Сип Р. е! а1.,2003).

Клинический случай: Пациент 44 лет, обследован по поводу бесплодия в браке. При обычном спермиологическом исследовании выявлено около 1% сперматозоидов с поступательным движением. При электронно-микроскопическом исследовании клеток эякулята в аксонеме части исследованных сперматозоидов было выявлено отсутствие динеиновых ручек. Отсутствие динеиновых ручек может быть свидетельством синдрома Картагенера.

Этот синдром характеризуется генетически обусловленным нарушением синтеза белка динеина и, вследствие этого нарушением функции ресничек и/или жгутиков сперматозоидов. Предполагается аутосомно-рецессивный тип наследования заболевания.

В целом в группе пациентов с астенозооспермией, по сравнению с контрольной группой, доля НПК в среднем увеличивается до 7,5%, что может свидетельствовать о блоке сперматогенеза на разных стадиях развития половых клеток и слущивании последних в просвет извитых семенных канальцев (табл.1). Количество сперматид и сперматоцитов приблизительно на том же уровне, что и в

контроле. Этот факт указывает на способность большинства сперматогониев пройти все стадии сперматогенеза вплоть до спермиогенеза.

При тератозооспермии количество сперматозоидов при обычном семиологическом анализе соответствовало нормальному (в среднем 49,5 млн/мл), однако доля морфологически нормальных зрелых половых клеток была снижена (согласно критериям ВОЗ) и составила 18% от общего количества живых сперматозоидов.

Табл.1 Данные количественного аиализа по стадиям развития незрелых половых клеток из эякулята у пациентов с нарушением генеративной функции неясного

генеза

ГРУППА пациентов согласно данным спермнологнческого анализа Индекс НПК (%) Доля сперматоцитов на разных стадиях меноза Спермато-циты II/ сперматиды Неразо-шед-шнеся сперматиды Ненден-тифи-цируе- мые клетки

профаза мета-фазы 1,11

До ла-хите-ны Па-хи-тена Дип-ло-тена

У слови о-контрольн ая группа п=23 среднее значение 2-4 0,66+/-0,16 0,45+ /-0,1 1,11+/-0,26 0,04+/-0,02 91,99+/-0,89 22,98+/-2,65 5,85+/-0,85

медиана 3,4 0,5 0 0,3 0 90,9 22 6,5

азооспермия п=49 медиана 0 0' о 0 99.0 19,0 1.0

олнгозоо-спермия п-71 медиана 21,5' 0 0 0' 0 91.25 13,25 5.45

терато-300- спермия п=24 медиана 10' 3,0' 0 0 0' 88 22 6.5

астенозоо-спермия п=25 медиана 7,5' 1.7 0 0 0' 92.3 18.5 5.0

полнзоо-спермия п=45 медиана ' 7,4' V 0 0» 0* 87.5 16.0• 7,5

* Показатели, достоверно отличающиеся от соответствующих показателей доноров (р < 0,01)

Количество живых сперматозоидов с подвижностью категории "а+в" достигала лишь 25%, что свидетельствует о снижении двигательной активности гамет. Необходимо отметить, что в данной группе доля сперматозоидов с поступательным движением (категория "а+в") варьирует от 0 до 65%. Это может быть обусловлено наличием или отсутствием патологии жгутиков сперматозоидов.

Клинические случаи: У пациента, 32 лет с кариотипом 46,XY, обследующегося по поводу первичного бесплодия в течение 10 лет, все сперматозоиды были неподвижны, а доля морфологически нормальных клеток составила всего 3% от общего количества зрелых гамет. При оценке патологических форм - около половины (45%) составляли сперматозоиды с атипией жгутика. Содержание НПК в сперме данного пациента было повышено и составило 9,4% от общего числа подсчитанных клеток. До 6 % незрелых половых клеток представлено сперматоцитами на стадии до пахитены профазы I мейоза, что говорит о частичном блоке сперматогенеза на этой стадии. Вследствие блока сперматогенеза незначительно снижена доля сперматид. При электронно-микроскопическом исследовании сперматозоидов эякулята выявлено нарушение строения аксонемы с тотальным отсутствием центральной пары микротрубочек аксонемы и нарушением спиральной укладки митохондрий и реберных фибрилл, что соответствует DFS-синдрому (dysplasia of the fibrous sheath) и является показанием для проведения ЭКО супружеской паре.

Случай отсутствия морфологически нормальных зрелых половых клеток был зарегистрирован у мужчины 38-ми лет, который в течение 9-ти лет обследовался по поводу бесплодия в браке. Цитогенетическое исследование лимфоцитов периферической крови свидетельствовало о нормальном мужском кариотипе - 46, XY. Количество сперматозоидов в 1 мл эякулята соответствовало нормальным значениям. Морфологически нормальных сперматозоидов практически не было выявлено (95% из них составили клетки с округлыми головками). КА НПК из эякулята свидетельствовал о частичном блоке сперматогенеза на стадии пахитены и диплотены профазы I мейоза. Электронно-микроскопическое исследование сперматозоидов этого пациента подтвердило

диагноз глобулозооспермии, т.е. отсутствие акросомы у зрелых половых клеток, и вследствие этого, невозможность оплодотворения яйцеклетки в естественных условиях, что явилось причиной бесплодия.

С помощью КА НПК у пациентов с тератозооспермией неясной этиологии выявлен частичный блок сперматогенеза на стадиях прелептотены-зиготены профазы I мейоза (табл.1). Повышение индекса НПК (доли НПК по отношению к зрелым сперматозоидам), отмеченное в данной группе, может свидетельствовать не только о нарушении сперматоцитов I и слущивании НПК в просвет семенных канальцев, но также о нарушении спермиогенеза.

Одним из малоизученных состояний является ситуация, при которой концентрация сперматозоидов в эякуляте значительно выше нижней границы нормы. В классификации ВОЗ (1999) понятие полизооспермии отсутствует, несмотря на то, что в литературе есть данные о нарушении мужской репродуктивной функции при полизооспермии. В пятую группу были включены пациенты, у которых количество сперматозоидов в 1 мл эякулята было от 150 млн/мл и выше. Объем эякулята в среднем составил 3,2+/-1,2 мл Доля морфологически нормальных гамет была достоверно ниже, чем у пациентов контрольной группы (р< 0,01). У 43 обследуемых данной группы в сперме отмечено "склеивание" (агглютинация) подвижных сперматозоидов между собой от легкой до тяжелой степени. У всех пациентов повышен показатель количества лейкоцитов в эякуляте: в среднем - 6,8+/-4,6 млн/мл (медиана - 5,3). Количество лейкоцитов достоверно превышало аналогичный показатель у пациентов других исследуемых групп (при азооспермии, олигозооспермии, астенозооспермии, астенотератозооспермии) (рис.2).

Впервые нами было проведено исследование состава НПК на разных стадиях развития из эякулята у мужчин с полизооспермией. Всего было выполнено 35 анализов. Доля НПК в эякуляте мужчин с полизооспермией увеличивается почти в 2 раза по сравнению с контрольной группой (табл.1). Отмечена тенденция блока сперматогенеза на стадиях до пахитены профазы I мейоза, что приводит к снижению количества сперматоцитов на стадии диплотены профазы I и на стадиях

метафазы I и II. Достоверно снижена доля половых клеток, не разошедшихся в делениях созревания.

Можно предположить два возможных механизма полизооспермии. При данном состоянии может быть нарушен контроль за интенсивностью делений пресперматогониев (повышение их пролиферативной активности). С другой стороны, полизооспермия может быть следствием нарушения функции физиологических регуляторов апоптоза в пресперматогенезе.

У 1

у 1 >ь

-----^

■ азооспермия □ олигозоослермия ■ эстенооослермия

□ тератозооспермия Ололизоослермия

Рис.2 Содержание лейкоцитов при различной концентрации сперматозоидов в зякуляте (норма концентрации лейкоцитов в эякуляте 1 млн/мл; №НО,1999) (р <0,01)

Характеристика сперматогенеза при разном этиопатогенезе его нарушения (облучение, варикоцеле, хламидиоз) и количественный анализ состава по стадиям развития незрелых половых клеток из эякулята

Одной из целей исследования явилось определение особенностей нарушения сперматогенеза с различным этиопатогенезом у нескольких групп пациентов с аномалиями по спермограмме с помощью количественного анализа состава НПК из эякулята. В зависимоти от доминирующего этиологического фактора были сформированы 4 группы.

• условно-контрольная - 1-я группа (23 человека с нормальной фертильностью и нормальным мужским кариотипом).

• вторая группа - пациенты, подвергшиеся облучению (участники ликвидации последствий аварии (ЛПА) на Чернобыльской атомной электростанции (ЧАЭС), производственные аварии) (32 человека, 32 образца эякулята).

• третья группа - 30 человек (30 образцов эякулята) с хламидийной инфекцией

• четвертая группа - 72 пациента (72 образца эякулята) с левосторонним варикоцеле.

У пациентов 2-4 групп возрастает доля сперматозоидов с нарушением подвижности (малоподвижных и неподвижных) (табл.2). Достоверно снижено количество морфологически нормальных сперматозоидов в эякуляте по сравнению с контрольной группой. У мужчин с варикоцеле количество морфологически нормальных сперматозоидов снижено как по сравнению с аналогичным показателем в контрольной группе, так и с нормативными значениями ВОЗ.

Количество зрелых половых клеток у пациентов с варикоцеле и участников ЛПА ЧАЭС находилось в пределах нормы. У пациентов с хламидийной инфекцией концентрация сперматозоидов в эякуляте была достоверно ниже, а содержание лейкоцитов достоверно выше, чем в контрольной группе, что отражает в данном случае наличие воспалительного процесса урогенитального тракта.

При количественном кариологическом анализе НПК из эякулята пациентов 24 групп мы выявили нарушение сперматогенеза, о чем свидетельствует частичный блок дифференцировки сперматоцитов на стадиях прелептотены-зиготены профазы I мейоза и повышение количества НПК в эякуляте, вследствие слущивания незрелых гамет в просвет извитых семенных канальцев (р<0,05) (табл.3). Вследствие задержки НПК на ранних стадиях профазы у пациентов 3-й и 4-й групп снижается доля гамет, находящихся на стадии дипдотены (р<0,1), которая характеризуется поэтапным разрушением СК и исчезновением когезии между хромосомами. Кроме того, задержка НПК на стадиях прелептотены-зиготены может быть обусловлена нарушением синапсиса гомологичных хромосом, а это в свою очередь приводит к "неполноценному" кроссинговеру и

селекции таких клеток. У пациентов с варикоцеле отмечена тенденция увеличения числа дегенерирующих половых клеток (р<0,1).

У участников ЛПА ЧАЭС отмечена тенденция к увеличению числа сперматоцитов на предпахитенных стадиях профазы I мейоза и снижением доли клеток в метафазе I и II (р<0,1). Такие результаты могут быть следствием нарушения синтетических процессов в G1 и S периодах клеточного цикла.

Используя в нашей работе критерии оценки состояния сперматогенеза по соотношению НПК разных стадий развития из эякулята, прослежено, что разные повреждающие факторы приводят к блоку сперматогенеза на разных стадиях мейоза. Согласно нашим наблюдениям и данным литературы можно предположить, что стадии синтеза ДНК и формирования СК, коньюгации гомологичных хромосом являются одними из наиболее чувствительных к действию повреждающих факторов различной природы.

Табл.2 Данные по количеству, подвижности и морфологии сперматозоидов из эякулята

обследованных мужчин

* * 1 2 >> — 4 — 5 ? «О О Объем эякулт а, мл Количество СИерМаТО-ЗОИДОВ, млн/мл Доля живых сперматозоидов от их общего количества, % Доля сперматозоидов с подвижностью категории "а+в" (%) Доля морфологически нормальных сперматозоидов, % Количество лейкоцитов (млн) в 1 мл эякулята

Нормативы ВОЗ, 2001 2,0 и более 20 и более 50 и более 50 и более 30 и более 1 и менее

контрольная группа 2.5 41 89 44 62 2

ЛПА ЧАЭС, п-32 2,5 51.5 76" 20* 41,5е 1,3

Хлам иди ог, п-30 3,65 27,2* 92 27" 37' 3"

Вдрико-целе, п«72 3.1 44.65 90 20" 25" 3,3

Табл.3 Данные количественного анализа по стадиям развития незрелых половых клеток из эякулята разных групп пациентов

Обследуемые группы Доля сперматоцитов на разных стадиях мейоза,% Сперма-тоциты И/ сперма-тнды,% Неразо-шед-шиеся сперма-тиды,% Неидеи« тифи-цируемые клетки,%

профаза Метафа-зы 1,11

До пахи-тены Пахи* тена Дипло-тена

Контрол. группа медиана о; 0 (У 0 90,9 22,0 8,0

Варнко- целе п=72 Медиан а 2,6• 0 0•• в 91 16,0 5,4**

Хлями- диоз п-30 Медиан а 1.0• 0 0*• 0 Ч 23 10

ЛПА ЧАЭС п=32 Медиан а 1.3" 0 1,0 0•• »9,9 13,7 5,9

* показатели достоверно отличающиеся от соответствующих показателей контрольной группы (р<0,01) *» р<0,1

Анализ сперматогенеза и количественный анализ по стадиям развития незрелых половых клеток у пациентов с генетически обусловленным нарушением генеративной функции

Известно, что генные и хромосомные мутации являются причиной более трети нарушений мочеполовой системы (Baгakat et 1986).

Выборка пациентов с генетически обусловленной причиной бесплодия в браке была разделена на четыре группы:

a. пациенты - носители структурных аномалий хромосом (18 чел.);

b. пациенты с числовыми хромосомными нарушениями (32 чел.);

а пациенты с микроструктурными изменениями половых хромосом (синдром

Де ля Шапелля) (6 чел.); d. пациенты с наличием микроделеции локуса AZF хромосомы Y (14 чел.)

Характеристика сперматогенеза у пациентов со структурными аберрациями

хромосом

В нашей работе из 18 пациентов-носителей структурных ХА (1-я группа) транслокации выявлены в 12 случаях (около 70%). Большая часть из них (7 случаев - около 60%) представлена робертсоновскими транслокациями: в 6-ти случаях в транслокацию вовлечены хромосомы 13 и 14; в одном случае - хромосомы 14 и 15.

Влияние структурных аберраций хромосом на гаметогенез варьирует в широких пределах: от полного отсутствия гамет в эякуляте до нормального течения процесса развития мужских половых клеток. Разной степенью нарушения сперматогенеза могут сопровождаться одинаковые структурные перестройки. Нами показано, что робертсоновские транслокации хромосом 13 и 14 встречаются у бесплодных мужчин и при азооспермии и при олигозооспермии. Исследование осадка эякулята и гистологическое исследование биопсийного материала яичек у пациентов с транслокациями и азооспермией показало возможность дифференцировки половых клеток до сперматоцитов и сперматид.

У одного пациента с робертсоновской транслокацией (кариотип 45,ХУ,(!ег(13;14)) при семиологическом анализе выявлена азооспермия. При КА НПК отмечено снижение доли сперматоцитов П/сперматид и повышение доли неидентифицируемых незрелых половых клеток. При гистологическом исследовании ткани левого яичка этого пациента отмечено наличие соединительной ткани в большей части исследованных срезов. В другой части исследованных срезов в семенных канальцах имеются единичные сперматогонии и сперматоциты на стадии пахитены, недифференцированные клетки Сертоли. При исследовании биоптата правого яичка отмечено незначительное снижение числа клеток Лейдига по сравнению с нормой. Перитубулярная мембрана семенных канальцев представлена без особенностей. Несколько увеличено число семенных канальцев с десквамацией клеток сперматогенного эпителия. В некоторых канальцах наблюдался частичный блок сперматогенеза на стадии пахитены профазы I мейоза.

У другого пациента с такой же ХА (45,ХУ,ёег(13;14)) при семиологическом анализе выявлена олигоастенотератозооспермия. При КА НПК обнаружен частичный блок сперматогенеза на стадии пахитены профазы I мейоза. Отмечено

повышение количества неразошедшихся сперматид, что свидетельствует о нарушении цитотомии. При анализе гистологических препаратов яичка выявлено снижение числа клеток Лейдига, утолщение, многослойность и фестончатые очертания базальной мембраны семенных канальцев. В извитых семенных канальцах были выявлены все стадии развития клеток сперматогенного эпителия, но вследствие блока сперматогенеза на стадии пахитены лишь часть сперматоцитов I переходит в деления созревания, а далее в сперматиды и сперматозоиды. Оба описанных выше случая свидетельствуют о том, что наличие структурно измененных хромосом в половых клетках препятствует нормальному течению мейоза, вследствие нарушения коньюгации и кроссинговера между гомологичными хромосомами и активизации процессов селекции генетически неполноценных гамет.

Известно, что в регуляции разных этапов сперматогенеза важную роль играют гены хромосомы Y, а именно локус AZF. В нашей работе при цитогенетическом исследовании были выявлены 4 случая делеций длинного плеча хромосомы ^ В одном случае это сопровождалось азооспермией, в другом - олигозооспермией, в 2-х случаях — нормальным количеством сперматозоидов, но снижением подвижности и нарушением морфологии зрелых гамет. Вариабельность расположения точек разрыва при транслокации с вовлечением длинного плеча хромосомы Y и возможное вовлечение генов локуса AZF объясняет в данном случае разнообразие нарушений сперматогенеза. Если нарушается функциональная структура гена AZF, то угнетение сперматогенеза носит более выраженный характер.

Характеристика сперматогенеза при числовых нарушениях хромосом

Как установлено в нашей работе, около 20% случаев азооспермии обусловлены нарушением генетических факторов. Большая часть этих случаев (около 70%) представлена хромосомными аномалиями и прежде всего числовыми нарушениями гоносом (в частности синдромом Клайнфельтера). Наличие дополнительной Х-хромосомы приводит к нарушению дифференцировки половых

клеток. При семиологическом анализе выявлено достоверное снижение объема эякулята у пациентов данной группы, что подтверждает нарушение функции придаточных половых желез. В нашем исследовании у пациентов с этим синдромом только в 4-х случаях из 30 была выявлена олигозооспермия тяжелой степени. У одного из этих пациентов при окраске сперматозоидов эозином живых зрелых половых клеток в эякуляте не было обнаружено.

У двух пациентов обнаружены живые сперматозоиды, из них большая часть представлена патологически измененными клетками: у одного - с преобладанием гамет с цитоплазматической каплей на шейке, что может свидетельствовать о гормональной недостаточности; у другого - сперматозоиды с атипией жгутика.

При исследовании НПК обнаружено снижение числа сперматоцитов II и сперматид по сравнению с контрольной группой и пациентами с азооспермией при нормальном мужском кариотипе. Также выявлена тенденция снижения количества сперматоцитов на стадиях профазы I мейоза. Возможно у лиц с дополнительной хромосомой Х в мейоз вступает меньшее число сперматогониев, чем у мужчин с нормальным кариотипом (установленным по лимфоцитам периферической крови).

Однако выявленное нами наличие зрелых половых клеток в осадке в 10 из 26 случаев азооспермии свидетельствует о возможности завершения сперматогенеза при данной патологии. С одной стороны это можно объяснить наличием гонадного хромосомного мозаицизма, с другой стороны нельзя отрицать возможность вступления и прохождения мейоза половыми клетками с дополнительной хромосомой Х и формирования зрелых сперматозоидов.

Наличие в кариотипе дополнительной хромосомы У не всегда приводит к нарушению дифференцировки половых клеток. В нашем исследовании у пациента с кариотипом 47, ХУУ было выявлено снижение подвижности сперматозоидов при их нормальном количестве. Данные исследования НПК из осадка эякулята свидетельствуют о нормальном течении сперматогенеза.

У мужчин с наличием анеуплоидии по гоносомам повышен уровень зрелых половых клеток с гипергаплоидией и дисомией по половым хромосомам (24, ХУ или 24,УУ), вследствие чего такие пациенты нуждаются в медико-генетическом

консультировании по причине повышенного риска рождения детей с трисомией по половым хромосомам.

Табл.4 Суммирование данных обследования по спермограмме и данных медико-генетического обследования пациентов с бесплодием

Данные сперм иол ()-гического обследования Структурные аномалии хромосом Числовые аномалии хромосом Микрострук* туриые перестройки Микро-делецни локуса АХГ хромосомыУ Доля генетически обусловленной патологии среди лиц с аналогичными слермиологи- ческими изменениями

Азооспермия 46_ХУ,«1;13) 46,ХУ,1пу(5Хр14;ЧП) 45ДУ,йег(13;14) (ч 10^10) 4б,Х,<)е!(У)(чП.2) 47.ХХУ; п=24 47ДХУ/46Л У; п=2 4б,ХХ-та1е, п=5 с!е] А2Рс, п=5; <5е1 АгРЬ+с, п-3; de!A2Fa, п=1 20%

Олнгоастеио-тератозоо-слермия 45,ХУ,<]ег(13;14) <Я1 Од 10), 11=4 45,Х.-У,<1ег<22МУ;22) 45,ХУ,с1ег(|4;15) (Ч10;Ч10) 46,Х,<1е1(УХ<111.2) 46,ХУД4;19) 47ДХУ; п=3 47,ХХУ/46,Х У;п=1 46<ХХ-та1е, п=1 del п=3; <1е1А2РЬ+с, п=1 • 8%

Астеиозоо-спермня 46,ХУ,1(1;22) 46,ХУ,1(П;12) 45ДУ,с)ег(13;14) (Ч10;ч10) 46,Х,йе1(У)(д11.2) 47.XYY.n-l 6%

Астенотера-тозооспермия 46Д,ае1(УХч11.2) 47уХУ,+таг/4 6,ХУ, п=1 - - 5%

Нормозоо-спермня 46,Х У.ЦУ; 14)(Ч 12;р 12) - • - 2%

Всего: 18 человек 32 человека б человек 13 человек

Микроструктурные перестройки хромосом и генные мутации

Среди пациентов с идиопатическим бесплодием, проходящих обследование в нашей лаборатории, были выявлены случаи микроделеций локуса AZF хромосомы Y (4-я группа). Среди 92 пациентов с азооспермией и олигозооспермией тяжелой степени и нормальным кариотипом было выявлено 14 пациентов с delAZF (около 15%). Микроделеций локуса AZF являются наиболее частой из известных причин нарушений сперматогенеза, обусловленных генными мутациями.

Табл.5 Данные количественного анализа по стадиям развития незрелых половых клеток из эякулята пациентов с генетически обусловленной

патологией

Данные КА НПК группа Доля сперматоцитов на разных стадиях мейоза,% Сперма-тоцнты (I/ сперма-тиды,% Неразо-шед-шнеся сперма-тиды,% Ненден-тифи-циру-емые клетки, %

профаза Мета-фазы >.11

До пахи-тены Пахи-тена Дипло-тена

Условно-контрольная группа медиана 05 0 0.3 0 90,9 22 6.5

Синдром (Слайнфельтера п-36 0 0 0 0 79 0* 0

Структурные аберрации хромосом п=20 0,5 0,3 1,0 0 844* 20,6 7.8

46ДХ-ша1е п=8 0 0 0 0 60,Г 10,75* 12

Делеции локуса AZF хромосомы Y, п=16 0 0 0 0 934* 19 2,35*

показатели, достоверно отличающиеся от аналогичных показателей контрольной группы (р<0,01)

У девяти из обследуемых мужчин были обнаружены микроделеции субрегиона AZFc (64%), у четырех - микроделеции субрегиона AZFb+c (около 28%), у одного пациента - микроделеция субрегиона AZFa (8%), что согласуется с данными литературы (Foresta et al., 2001). Методы семиологического анализа, КА НПК и гистологическое исследование биоптата яичка позволили охарактеризовать сперматогенез у этих пациентов. Рутинный спермиологический анализ был проведен у 13 из 14 пациентов с delAZF. Согласно его результатам, у 9-ти человек (692%) (пять из них имеют delAZFc, трое - delAZFb+c, один - delAZFa) была выявлена азооспермия (т.е. полное отсутствие зрелых половых клеток в эякуляте), в четырех случаях (30,8%) (трое мужчин с delAZFc и один с delAZFb+c) установлена олигозооспермия тяжелой степени.

КА НПК эякулята был проведен у 12-ти пациентов (16 образцов эякулята). Использование данного метода позволило выявить у них в осадке эякулята от единичных до тысячи сперматозоидов и от десятков до тысяч НПК. Результаты гистологического исследования биоптатов яичек и анализа НПК из осадка эякулята свидетельствуют о гетерогенности нарушений сперматогенеза при данной патологии даже при делеции одного и того же субрегиона: от синдрома только клеток Сертоли до наличия очагов сперматогенеза в семенных канальцах и возможности дифференцировки половых клеток до сперматозоидов.

Гистологическое исследование биоптата яичка, выполненное у трех мужчин-носителей микроделеций в локусе Л2Р хромосомы У, в двух случаях (ёе1Л2Рс и ёе1Л2РЪ+с) показало наличие синдрома клеток Сертоли 2-го типа (наличие единичных половых клеток в сперматогенном эпителии), а в одном - синдром "только клеток Сертоли". Однако в последнем случае при КА НПК из осадка эякулята обнаружены единичные сперматозоиды и незрелые половые клетки, что свидетельствует о частичном сохранении сперматогенеза в некоторых участках семенных канальцев этого пациента.

При сравнении показателей КА НПК у пациентов с азооспермией, обусловленной генными мутациями с пациентами с азооспермией неясного генеза не выявлено достоверной разницы (табл.6), что свидетельствует о нормальном прохождении мейоза половыми клетками при микроделециях Л2Р и возможном вовлечении генов этого локуса в контроль более ранних стадий сперматогенеза.

Отсутствие генов локуса Л2Р хромосомы У наблюдается также при XX-инверсии пола (синдроме де ля Шапелля, 46, ХХ-та1е). Нами было проведено клинико-андрологическое обследование 6-ти пациентов с синдромом де ля Шапелля, т.е. с женским кариотипом 46, ХХ и мужским фенотипом (3-я группа). у 5-ти пациентов и олигозооспермии тяжелой степени с наличием только мертвых сперматозоидов у 1-го мужчины. Результаты спермиологического исследования свидетельствуют об азооспермии. У четырех пациентов обследуемой группы в образцах эякулята при КА НПК выявлены зрелые половые клетки.

Табл.6 Данные КА НПК у пациентов с азооспермией и нормальным кариотипом и пациентов с генетически обусловленной азооспермией

« я х я 2. = 3 5. 5 & о О Данные ККАНПК, %

Сперматоциты Сперматоциты 11+ сперматиды Неидеитн-фицкруемые НПК

Предпа-хитена пахитена диплотена метафаза 1,11 всего Неразошед-шихся в делениях созревания

Азооспермия п=53 0 0 0 0 99 19 1

С-м Клийнфельтера п=36 0 0" 0 0 79,5' 0' 0

С-м Де ля Шапелля п=8 0 0 0 0 60,1' 10,75 12'

Структурные ХА п=4 1,5" 0' 0 0 43,5* 20,5 13,25'

Мнкроделеции А2Я п=8 0 0 0 0 97,5 10,8 1

показатели, достоверно отличающиеся от аналогичных показателей в группе пациентов с азооспермией и нормальным кариотипом, р<0,01

Частичная сохранность сперматогенеза у мужчин с кариотипом 46,ХХ может быть обусловлена функциональной активностью генов, ответственных за те или иные стадии сперматогенеза, локализованных на Х-хромосоме и/или аутосомах.

При синдроме де ля Шапелля по сравнению с азооспермией при нормальном кариотипе, контрольной группой и пациентами с микроделециями AZF снижена доля сперматоцитов II и сперматид, что может быть следствием блока сперматогенеза на более ранних стадиях и интенсивной дегенерацией половых клеток (табл.6).

Таким образом, одинаковые формы генетической патологии характеризуются гетерогенностью нарушений сперматогенеза. В то же время даже при наличии азооспермии, вызванной повреждением разных генетических факторов, сперматогенез завершается образованием зрелых гамет.

На основании результатов проведенного исследования и данных литературы мы предлагаем схему комплексной оценки сперматогенеза у пациентов с нарушением репродуктивной функции (рис.3).

Рис.3 Схема комплексного исследования сперматогенеза при нарушении мужской репродуктивной функции

выводы

1. Нарушение сперматогенеза у пациентов с одинаковой генетически обусловленной патологией имеет гетерогенный характер. Различные генетически обусловленные формы патологии могут приводить к одинаковым клиническим проявлениям патозооспермии:

• установлена гетерогенность нарушения сперматогенеза при одинаковой хромосомной патологии. Например, у мужчин с бесплодием при робертсоновской транслокации хромосом 13 и 14 (кариотип 45, ХУ, дег(13;14)) у 1-го пациента диагностирована азооспермия, у 5-ти - олигозооспермия, у 1-го — астенозооспермия при нормальном количестве зрелых половых клеток;

• из 30 обследованных пациентов с синдромом Клайнфельтера у 4-х человек обнаружена олигозооспермия;

• у пациентов с делециями локуса Л2Р хромосомы У выявлена гетерогенность нарушений сперматогенеза независимо от типа микроделеции.

2. У мужчин с генетически обусловленной азооспермией наряду с незрелыми половыми клетками обнаружены зрелые сперматозоиды, что свидетельствует о возможности завершения сперматогенеза при генетически обусловленной патологии репродуктивной функции.

3. Установлено, что в структуре генетически обусловленной патологии в контингенте лиц с азооспермией из хромосомных мутаций преобладают числовые аномалии половых хромосом; с олигозооспермией - структурные аномалии хромосом.

4. Одним из патогенетических звеньев нарушения сперматогенеза при генетически обусловленной патологии репродуктивной системы, заболеваниях урогенитального тракта у мужчин, экзогенных влияниях на процесс развития мужских половых клеток является частичный блок сперматогенеза на стадиях до пахитены профазы I мейоза, что свидетельствует о наличии критического этапа в мейотическом делении половых клеток.

5. Результаты исследования сперматогенеза у пациентов с полизооспермией свидетельствуют о снижении доли зрелых половых клеток с прогрессивным движением, повышении количества лейкоцитов и наличии агглютинации сперматозоидов в эякуляте. Отмечен частичный блок сперматогенеза на стадиях допахитены-пахитены профазы I мейоза, снижение числа сперматоцитов на стадиях диплотены, метафазы 1, 11, снижение количества неразошедшихся сперматоцитов II.

6. При планировании схемы последовательного комплексного исследования сперматогенеза при мужском бесплодии целесообразно проведение количественного кариологического анализа состава НПК из эякулята, а также электронно-микроскопического исследования сперматозоидов. Применение цитогенетического анализа лимфоцитов

периферической крови, молекулярно-цитогенетических и молекулярно-генетических методов исследования в диагностике мужского бесплодия позволяет выявить генетически обусловленные причины нарушения репродуктивной функции.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Курило Л.Ф., Шилейко Л.В., Сорокина Т.М., Гришина Е.М. Структура наследственных нарушений репродуктивной системыУ/ Вестн РАМН, 2000,5;32-36.

2. Васильев М.М., Курило Л.Ф., Абудуев Н.К.; Гомберг М.А., Шилейко Л.В., Гришина Е.М., Сорокина Т.М. Обследование и лечение пациентов с нарушениями репродуктивной функции при инфекциях передаваемых половым путем. Пособие для врачей, М, 2000, 18с.

3. Mazo Е. В., Tirsi К.А., L.F. Kurilo, L.V. Shi le iko, E.M. Grishina. The quantitative karyological analysis (QKA) of immature germe cells (IGC) of semen of fertile and infertile men with varicocele (V)7/ Eur. Urol., 2000; 38; 529.

4. Кубанова А.А.,Абудуев Н.К., Курило Л.Ф., Шилейко Л.В., Гришина Е.М Влияние урогенитального хламидиоза и уреа-микоплазмоза на состояние сперматогенеза мужчин // Вест-к дерматол-и и венерол-и, 2000, 6, 8-11.

5. Черных В.Б., Курило Л.Ф., Гоголевская И.К., Гришина Е.М. и соавт. Комплексное клинико-генетическое обследование пациентов с азооспермией или олигозооспермией неясной этиологии.// Пробл репр, 2001; 7;3; с.58-63.

6. Абудуев Н.К., Шилейко Л.В., Курило Л.Ф., Гришина Е.М. и соавт. Оценка сперматогенеза у мужчин с заболеваниями мочеполовых органов хламидийной и микоплазменной этиологии.// Тезисы научн. работ VIII всерос съезда дерматовенерологов, М., 2001, 12-13.

7. Гришина Е.М., Курило Л.Ф., и соавт. Механизмы нарушений сперматогенеза и бесплодие.// Андрол. и генит. хирургия, 2002, 3, 39-40..

8. Гришина Е.М., Курило Л.Ф., Сорокина Т.М. и соавт. Морфо-функциональные характеристики сперматогенеза при синдроме Клайнфельтера // Тезисы докл. Дальневост. Научно-практич. конф. "Проблемы медицинской генетики в Приморском крае: достижения и перспективы", Владивосток, 27-28/IX-2001 ; Тихоокеанский мед. Журнал, 2002,1 ;8; 73-76.

9. Гришина Е.М., Курило Л.Ф., Сорокина Т.М. и соавт. Полизооспермия как возможная причина нарушения мужской репродуктивной функции (Материалы форума). 2-я междунар. Выставка "Мужское здоровье и долголетие", М., 17-19/02-2004, 41-42.

Служба множительной техники ГУ РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН Подписано в печать 26. 08 .04 Заказ ЛЩОб Тираж 100 за

»1 6659

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Гришина, Екатерина Михайловна

Список сокращений

Введение

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Закономерности сперматогенеза у человека

1.1.1 Гоноциты, просперматогонии, сперматогонии

1.1.2 Профаза I мейоза в сперматогенезе у человека

1.1.3 Деления созревания в сперматогенезе

1.1.4 Спермиогенез

1.1.5 Полизооспермия

1.2 Нарушение сперматогенеза при воздействии эндогенных и экзогенных повреждающих факторов

1.2.1 Воздействие на генеративную систему физических факторов

1.2.2 Варикоцеле и его влияние на репродуктивную функцию мужчины

1.2.3 Нарушение сперматогенной функции яичек при инфекционно-воспалительных заболеваниях урогенитального тракта у мужчин

1.2.4 Генетически обусловленные нарушения сперматогенеза

1.2.4.1 Аномалии половых хромосом

1.2.4.2 Аномалии аутосом при нарушении репродуктивной функции

1.2.4.3 Генные мутации

ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

II. 1 Объект исследования

II.2 Анализ гистологических препаратов биоптатов яичек

II.3 Количественный кариологический анализ состава незрелых половых клеток из эякулята

II.4 Спермиологический анализ

11.5 Цитогенетический анализ лимфоцитов периферической крови

II.6 Микроделеционный анализ локусов AZF хромосомы Y

II.7 Электронно-микроскопическое исследование сперматозоидов эякулята

II.8 Статистическая обработка данных

ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

III.1 Формирование потока и групп пациентов по основному клиническому диагнозу, показателям семиологического анализа и результатам цитогенетического обследования

III.2 Количественный анализ состава незрелых половых клеток по стадиям их развития из эякулята у пациентов с нормальным кариотипом, сперматогенезом и фертильностью

III.3 Анализ сперматогенеза у пациентов с нарушением генеративной функции неясной этиологии

III.3.1 Группа пациентов с азооспермией

IH.3.2 Группа пациентов с олигозооспермией

III.3.3 Группа пациентов с астенозооспермией

III.3.4 Группа пациентов с тератозооспермией

III.3.5 Группа пациентов с полизооспермией

III.4 Анализ сперматогенеза при разном этиопатогенезе (облучение, варикоцеле, хламидиоз) его нарушения и количественный анализ состава НИК по стадиям их развития

III.5 Анализ сперматогенеза у пациентов с генетически обусловленным нарушением генеративной функции

Ш.5.1 Характеристика сперматогенеза у пациентов со структурными аберрациями хромосом

III.5.2 Характеристика сперматогенеза при числовых нарушениях хромосом

III.5.3 Характеристика сперматогенеза при микроструктурных перестройках хромосом и генных мутациях

ГЛАВА IV. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Характеристика сперматогенеза при некоторых генетически обусловленных и приобретенных нарушениях репродуктивной функции у мужчин"

Общая характеристика работы. Настоящая работа посвящена исследованию сперматогенеза у мужчин с бесплодием при генетически обусловленной патологии репродуктивной функции, действии биологических, физических факторов, нарушении кровоснабжения яичка. Работа включает раздел, посвященный выработке рекомендаций по обследованию пациентов с бесплодием и комплексной оценки сперматогенеза.

Актуальность темы. Бесплодие поражает около 10-15% супружеских пар. Учитывая результаты исследований последних лет, которые свидетельствуют об ухудшении качества спермы, можно сказать, что в этиологии бесплодия в настоящее время все большее значение приобретает мужской фактор. Несмотря на это диагностика заболеваний мужской половой сферы несовершенна, вследствие многопричинности нарушений и отсутствия общепринятой классификации, которая бы учитывала не только этиологию, но и патогенез заболеваний. Из всех форм мужского бесплодия значительное место занимают неизлечимые случаи инфертильности, к которым относится также и генетически обусловленная патология (Nieschlag Е,1997).

Одной из распространенных причин мужского бесплодия является нарушение сперматогенеза, которое в свою очередь является следствием влияния различных факторов: генетически обусловленная патология половой системы, заболевания яичек и придаточных половых желез, неблагоприятные внешние воздействия, включая профессиональные вредности, производственные аварии, неблагоприятную экологическую ситуацию и т.д.(Мкпс et al., 1981; Ombelet, Vereecken, 1995).

Гаметогенез занимает центральное место в функционировании мужской репродуктивной системы и представляет собой гормонально-зависимый и генетически детерминированный процесс. Постоянно протекающие в сперматогенном эпителии процессы дифференцировки половых клеток, делают процесс сперматогенеза уязвимым на молекулярном, клеточном уровнях при действии повреждающих факторов различной природы. Изменение под их влиянием морфологических и/или функциональных характеристик половых клеток может стать причиной бесплодия у мужчины. Учитывая также уникальную роль половых клеток в онтогенезе, как фактора, несущего генетическую информацию и дающего начало генетически новому организму, становится очевидным возрастание опасности отдаленных последствий в результате действия повреждающих факторов в отношении здоровья, в том числе репродуктивного, последующих поколений.

Как было указано выше, на протяжении последних десятилетий отмечают общую тенденцию к снижению качества эякулята по количественным и функциональным критериям сперматозоидов. Несомненно, что такой результат может быть связан и с воздействием повреждающих факторов (чему способствовало бурное развитие науки и техники в XX веке, ухудшение экологической ситуации, внедрение в медицинскую практику новых лекарственных препаратов и т.д.) в антенатальном периоде или на организм взрослого мужчины (Шейко А.Д. и соавт., 2001; Быков B.JL, 2000.). Под влиянием эндогенных и/или экзогенных факторов в гаметах могут возникать аномалии цитоструктур, нарушения на уровне генов и хромосом. Это может привести к гибели половых клеток (гаметическая селекция на разных этапах их дифференцировки) или сохранению их жизнеспособности и участию в оплодотворении. В случае последнего повышается вероятность гибели эмбриона (эмбриональная селекция) или развития больного потомства (Курило Л.Ф., 1998; Шейко Л.Д. и соавт., 2001).

Полиэтиологичность мужской суб- или инфертильности, а также достаточно высокий удельный вес идиопатического бесплодия, предполагают расширение методов диагностики, применяемых в клинической практике. ВОЗ в четвертом издании (WHO, 1999) руководства по лабораторному исследованию эякулята и взаимодействия сперматозоидов с цервикальной слизью указывает на "необходимость поиска новых стандартизованных и усовершенствованных методов исследования эякулята", принимая во внимание, как один из многих неблагоприятных факторов, ухудшение экологической ситуации и влияние загрязнений окружающей среды на мужскую репродуктивную функцию.

Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:

1. Установить характер цитологических и гистологических изменений в яичках при хромосомной, генной патологии сперматогенеза, заболеваниях мужской половой системы и гаметотоксическом влиянии факторов внешней среды.

3. Создать программу обследования с целью комплексной оценки сперматогенеза при нарушении генеративной функции различной этиологии у мужчин.

Новизна и научная ценность. На материале обширной группы пациентов была определена частота генетически обусловленной патологии в структуре мужского бесплодия неясной этиологии: при азооспермии - 20%, при олигозооспермии - 8%; при астенозооспермии - 6%; при астенотератозооспермии - 5%; при нормозооспермии -2%.

Определена возможность завершения сперматогенеза при синдроме Клайнфельтера (кариотип 47,XXY) и синдроме Де ля Шапелля (46,XX-male).

У пациентов с хламидийной инфекцией, отмечена тенденция нарушения сперматогенеза на разных стадиях дифференцировки мужских половых клеток и слущивания незрелых половых клеток в просвет извитых семенных канальцев.

Положения, выдвигаемые на защиту:

Заключение Диссертация по теме "Гистология, цитология, клеточная биология", Гришина, Екатерина Михайловна

7. Результаты исследования сперматогенеза у пациентов с полизооспермией свидетельствуют о снижении доли зрелых половых клеток с прогрессивным движением, повышении количества лейкоцитов и наличии агглютинации сперматозоидов в эякуляте. Отмечен частичный блок сперматогенеза на стадиях допахитены-пахитены профазы I мейоза, снижение числа сперматоцитов на стадиях диплотены, метафазы 1,11, а также снижение количества неразошедшихся сперматоцитов II.

8. При планировании схемы последовательного комплексного обследования пациентов с мужским бесплодием и нарушением сперматогенеза целесообразно проведение количественного кариологического анализа состава незрелых половых клеток из эякулята, а также электронно-микроскопического исследования сперматозоидов. Применение цитогенетического анализа лимфоцитов периферической крови, молекулярно-цитогенетических и молекулярно-генетических методов исследования в диагностике мужского бесплодия позволяет выявить или исключить генетически обусловленные причины нарушения репродуктивной функции.

ГЛАВА V. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, проведенное исследование позволяет нам считать, что мейотически делящиеся клетки, к которым относятся половые клетки организма являются одними из наиболее чувствительных при воздействии повреждающих факторов разной природы.

Как показано в нашем исследовании генные и хромосомные мутации, числовые и структурные нарушения хромосом, половых в первую очередь, сопровождаются угнетением сперматогенеза до олигозооспермии тяжелой степени и азооспермии. При гистологическом исследовании тканей яичка в таких случаях можно выявить синдром только клеток Сертоли, однако данные КА НПК из эякулята, как правило, свидетельствуют о частичной сохранности сперматогенеза в отдельных участках извитых семенных канальцев. В то же время необходимо отметить гетерогенность нарушений сперматогенеза при одних и тех же типах генетически обусловленной патологии. При азооспермии наиболее часто встречаются случаи анеуплоидии по половым хромосомам (47,XXY и его варианты). При олигозооспермии, астено- и/или тератозооспермии чаще наблюдаются структурные нарушения аутосом, среди которых преобладают робертсоновские транслокации.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Гришина, Екатерина Михайловна, Москва

1. Абудуев Н. К., Шилейко JL В. и соавт. Оценка сперматогенеза у мужчин с заболеваниями мочеполовых органов хламидийной и микоплазменной этиологии.// Тезисы докладов- VII Всерос. съезд дерматовенерологов, ч. II, М., 2001; 12-13.

2. Абудуев Н.К., Шилейко JLB. и соавт. Структурный анализ патологических форм сперматозоидов при заболеваниях мочеполовых органов у мужчин хламидийной и микоплазменной этиологии.// Тезисы докладов- VII Всерос. съезд дерматовенерологов, ч. II, М., 2001

3. Авцын А.П., Жаворонков А.А. и соавт. Нарушения репродуктивных функций при некоторых микроэлементозах.// Вестн. АМН СССР, 1986; 1; 1-96.

4. Астраханцев А.Ф. Структура мужских половых желез в постнатальном онтогенезе.// Автореф. дис. . д.м.н.; Рязань, 1996, 48 с.

5. Белушкина Н.Н., Северин С.Е. Молекулярные основы патологии апоптоза// Архив патологии, 2001; 1; 51 -60.

6. Богданов Ю.Ф. Изменчивость и эволюция мейоза.// Цитология, 2003;39;4; 453-473.

7. Богданов Ю.Ф., Соснихина С.П. и соавт. Влияние специфических генов на ход мейоза.// Цитология, 2001 ;43;4; 323.

8. Брагина Е.Е. Закономерности нарушений сперматогенеза человека при некоторых генетических и инфекционных заболеваниях.// Автореф. дисс. .д.б. н., МГУ, 2001.

9. Брагина Е.Е., Курило Л.Ф. и соавт. Влияние герпетической инфекции на сперматогенез.// I междунар. Конф. по первичной и вторичной профилактике инфекций, передающихся преимущественно половым путем. Тезисы докл., Алма-Аты, 24-25 сент. 1998 г.

10. Быков B.JI. Сперматогенез у мужчин в конце XX века (обзор литературы).// Пробл. репрод., 2000; 6; 1; 6-13.

11. Воробцова И.Е. Влияние облучения родителей на физиологическую полноценность и риск канцерогенеза у потомства первого поколения организмов разных видов.// Автореф. дис. . д.б. н.,1988; 43с.

12. Ворсанова С.Г., Шаронин В.О. и соавт. Аномалии половых хромосом при нарушении репродуктивной функции у мужчин.// Пробл. репрод., 1998; 4: 2: 12-21.

13. Габер Е.С., Данилова J1.B. и соавт. Сперматогенез и его регуляция.// М.: Наука, 1983, 232с.

14. Гаева Т.Н. Разработка метода количественного анализа незрелых половых клеток из эякулята и выяснение степени его информативности.//автореф. дисс.к.б.н., М., 1997, 124 с.

15. Гершензон С.М. Многообразное значение мейоза для проблем общей биологии.// Киев.: Наукова Думка, 1996,136 с.

16. Гоголевская И.К., Гоголевский П.А. Y-хромосома и мужское бесплодие (обзор литературы)// Пробл. репрод., 1999;5;5; 26-34.

17. Голубовский М.Д. Век генетики: эволюция идей и понятий.// С.Петербург: Борей Арт, 2000, 262 с.

18. Гольдберг Е.Д., Боровская Т.Г. Гонадотоксические эффекты противоопухолевых препаратов.// Томск,STT, 2000; 110с.

19. Дубинин Н.П. Генетический риск ионизирующей радиации.// ДАН СССР,1990;314;6; 1491-1494.

20. Дыбан А.П. Раннее развитие млекопитающих.// JL: Наука, 1988, 228 с.

21. Евдокимов В.В., Ерасова В.И. и соавт. Влияние однократного общего облучения крыс на репродуктивную систему и содержание витаминов в органах у потомства.// Бюлл. эксперим. биол. и мед., 1998; 12; 652-655.

22. Евдокимов В.В., Коденцова В.М. и соавт. Витаминный статус и сперматогенез крыс в поздние сроки после облучения разными дозами.// Бюлл. эксперим. биол. и мед., 1999;7; 42-44.

23. Захаров А.Ф., Бенюш В.А. и соавт. Хромосомы человека. Атлас.// М., 1982,263 с.

24. Игнатьева Е.Л., Курило Л.Ф. Гаметотоксическое действие окситетрацеклина на ранний антенатальный оогенез мышей в экспериментах in vivo и in vitro.// Фармакология и токсикология, 1984, 5, 75-77.

25. Игнатьева Е.Л., Курило Л.Ф. Гистологическая оценка репродуктивной функции яичников половозрелых мышей после антенатального воздействия окситетрациклином.// Бюл. эксперим. биол. и мед., 1984;97;5; 608-610.

26. Касаткина Э.П. Актуальные проблемы гермафродитизма.// Пробл. эндокрин., 1992;38;5; 17-22.

27. Козлова С.И., Демикова Н.С. и соавт. Наследственные синдромы и медико-генетическое консультирование.// М., 1996,416 с.

28. Коломиец О.Л., Абудуев Н.К. и соавт. Повреждающее действие антибиотиков на структуру синаптонемных комплексов мейотических хромосом мыши.// Генетика, 2001; 37: 2:197-206.

29. Колтовая Н.А., Кадышевская Е.Ю. и соавт. Чекпойнт-контроль у дрожжей сахаромицетов и гены SRM.// Цитология, 2001;43;4; 353-354.

30. Кондрусев А.И., Спиричев В.Б. и соавт.//Хим.-фарм. журн., 1990;1; 412.

31. Коптева А.В., Дзенис И.Г. и соавт. Генетические нарушения гипоталамо-гипофизарной регуляции репродуктивной системы.// Проб, репрод., 2000; 3:28-35.

32. Круг лова Н.Л. Структурно-функциональное состояние ДНК-мембранных комплексов клеток эукариот при действии радиации и низкой температуры.// Цитология, 2001 ;43;4; 355-356.

33. Круглова H.JI., Карнаухов В.Н. Исследование защитного влияния бета-каротина на уровень хроматина при действии радиации в малых дозах на крыс.// Цитология, 2001;43;4; 356.

34. Кубанова А.А., Абудуев Н.К. и соавт. Состояние сперматогенеза у мужчин с урогенитальными инфекционными заболеваниями.// Вестн. Дерматол. Венерол., 2000;6; 7-11.

35. Курило Л.Ф. Возможности цитогенетического исследования мейоза при мужском бесплодии.// Цитол. и генетика, 1989;23;2;63-70.

36. Курило Л.Ф. Генетически обусловленные нарушения мужской репродуктивной системы.// Лекции для врачей «Сексопатология и андрология», вып.З, Киев, 1996,28-46.

37. Курило Л.Ф. Генетический контроль за половой дифференцировкой и некоторыми этапами репродукции человека. В кн. «Многоликость современной генетики человека»// М.: Уфа, «Гилем», 2000, 51-66.

38. Курило Л.Ф. Динамика преобразования хромосом в профазе мейоза в оогенезе человека.//Цитология, 1980;22;2; 154-160.

39. Курило Л.Ф. Морфо-функциональные характеристики оогенеза млекопитающих и человека.// автореф. дисс.д.б.н., М.: 1985, 470 с.

40. Курило Л.Ф. Подходы к тестированию гонадо- и гаметотоксичекого эффекта экзогенных факторов.// Тез. докл. междун. конф. по биоэтике, Пущино, ИБФМ РАН, 25-27/06-1998, 83-84.

41. Курило Л.Ф., Дубинская В.П. и соавт. Оценка сперматогенеза по незрелым половым клеткам эякулята.// Пробл. репрод., 1995, 3, 33-38.

42. Курило Л.Ф., Козлов Г.И. и соавт. Клинико-цитогенетическое обследование пациента с кариотипом 46,XX, азооспермией и бесплодием.//Проб. эндокрин.,1994; 40: 2: 50-52.

43. Курило Л.Ф., Любашевская И.А. возможности количественного кариологического состава половых клеток эякулята.// Тезисы 12конференции болгарских аспирантов с международным участием. М.,1990;11; 14-15.

44. Курило Л.Ф., Черных В.Б. Генетический контроль дифференцировки пола у человека.// Тез. докл. II (IV) съезда российского общества медицинских генетиков. Курск 2000,1; 64.

45. Курило Л.Ф., Шилейко Л.В. и соавт. Структура наследственных нарушений репродуктивной системы.// Вестник РАМН, 2000; 5: 32-36.

46. Курило Л.Ф., Шилейко Л.В., Сорокина Т.М., Гришина Е.М. Структура наследственных нарушений репродуктивной системы.// Вестн. РАМН, 2000,5, 32-36.

47. Курносов А.В. Изучение роли иммунологических факторов в анрушении сперматогенеза при варикоцеле: клинико-экспериментальное исследование.// автореф.дисс . к. м. н., 1979, 81с.

48. Курносова Т.Р., Райцина С.С. Деструкция и регенерация семенных канальцев после локального рентгеновского облучения семенников половозрелых крыс.// Онтогенез, 1987; 18; 2; 183-191.

49. Мазо Е.Б., Тирси К.А. и соавт. Диагностическое значение количественного кариологического анализа незрелых половых клетокэякулята у больных варикоцеле.// Андрология и генитальная хирургия, 2001; 1; 95-97.

50. Мазо Е.Б., Тирси К.А. и соавт. Состояние сперматогенеза крыс линии wistar после экспериментального варикоцеле.// Пробл. репрод., 2000; 1; 40-43.

51. Мецлер Д. Биохимия.// М.:Мир,1980;2; 69-131.

52. Нестерова Т.Б., Закиян С.М. Инактивация Х-хромосомы у млекопитающих.//Генетика, 1994;30;3, 259-279.

53. Осипова Г.Р. Исследование гена SRY при некоторых нарушениях детерминации пола (XY «чистой» форме дисгенезии гонад, синдроме

54. Шерешевского-Тернера, XX инверсии пола).//Автореф. дисс.к.м.н„ М„ 1997, 17 с.

55. Основы цитогенетики человека. Под ред. А.А. Прокофьевой-Бельговской// М., Медицина, 1969, 544с.

56. Проблемы репродуктивной биологии в трудах профессора С.И. Кулаева и его последователей.// М.: МГУ, 1998, 349 с.

57. Райцина С.С. Сперматогенез и структурные основы его регуляции.// М.: Наука, 1985, 206 с.

58. Райцина С.С., Курносов А.В. и соавт. Об аутоиммунной природе нарушения сперматогенеза при моделировании варикоцеле на крысах.// Бюлл. эксперим. биологии и медицины, 1979, 11, 44-48.

59. Рапопорт И.А. Токсикогенетика.// Итоги науки. Отд. биол., фармакол. и токсикологии, ВИНИТИ, 1966; 3-16.

60. Репродуктивная эндокринология.// Под ред. С.С.К. Йена, Р.Б. Джаффе. М., Медицина, 1998; 704 с.

61. Руководство ВОЗ по лабораторному исследованию эякулята человека и взаимодействия сперматозоидов с цервикальной слизью. Четвертое издание, научн. ред. проф. Л.Ф.Курило// М., МедПресс,2001; 143с.

62. Рыжаков Ю.Д. Репродуктивная функция мужских половых желез при хроническом нарушении венозного кровотока.// Автореф. дис. .к.м.н., 1987.

63. Сафронова Л.Д., Кудрявцев И.В. Нарушение соотношения передачи, стерильность и контроль функции сперматозоидов t-комплекса.// Генетика,2001;37;9; 1198-1206.

64. Семенова-Тян-Шанская А.Г., Паткин Е.Л. Изучение на изолированных ядрах динамики изменений хромосом женских половых клеток у ранних зародышей человека.// Архив анат., гистол. и эмбриол., 1982;LXXXII;2; 51-56.

65. Современные проблемы сперматогенеза.// М.: Наука, 1982, 259с.

66. Сухачева Т.В., Богуш Т.А. и соавт. Повреждающее действие таксола на сперматогенез мыши.// Бюлл. эксперим. биологии и медицины, 2001;132;11;554-560.

67. Хилькевич Л.В., Курило Л.Ф. Гаметотоксический эффект антенатального воздействия тиоТЭФ у мышей.// Онтогенез, 1992; 23;4; 401-406.

68. Хилькевич Л.В., Курило Л.Ф. и соавт. Эффект антенатального воздействия тиоТЭФ на сперматогенез половозрелых мышей линий 101/Н и СВА.// БЭБиМ,1992;114;9;307-308.

69. Цитология и генетика мейоза.// М., Наука, 1975,432 с.

70. Шаронин В.О. роль молекулярно-цитогенетических исследований хромосомных аномалий соматических и половых клеток при нарушении репродуктивной системы у пациентов мужского пола.//Автореф.дисс.к. б. н., М., 1998; 119 с.

71. Шейко Л.Д., Мамина В.П. и соавт. Возможность использования бета-каротина в качестве лечебно-профилактического средства в репродуктивной токсикологии.// Пробл.репрод., 2001;6;7; 37-41.

72. Шилкина JI.А. Количественный анализ морфологических изменений, развивающихся в семеннике млекопитающих при остром перегревании организма.// Автореф. дис. . канд. мед.наук. М.: Ин-т морфологии человека АМН СССР, 1978,15с.

73. Abbas N. et al.// Hum. Genet., 1990; 84;4;356-360.

74. Abdelrahim F, Mostafa A et al. testicular morphology and function in varicocele patients: preoperative and post-operative histhopathology// Br J Urol, 1993;72;643-647.

75. Aitnen R.J., Clareson J.Q. et al.// Biol. Reprod.,1989;41; 183-197.

76. Amelar, R.D., Dubin, L. et al. Successful management of infertility due to polyzoospermia.// Fertil. Steril., 1979;31; 521-524.

77. Asakawa J., Kuich R. et al. A genome scanning approach to assess the genetic effects of radiation in mice and humans// Radiat Res., 2004; 161 ;4; 380-390.

78. Azfelius B.A., Elliasson R. et al. Lack of dynein arms in immotile human spermatozoa.//J.Cell Biol.,1975;66; 225-232.

79. Barnea, E.R., Arronet, G.H. et al. Studies on polyzoospermia.// Int. J. Fert., 1980;25; 303-306.

80. Bobrow M., Madan K. et al. Staining of some specific regions of human chromosomes particulary the 2 constriction regions of N 9// Nature, New Biol.,1972;238; 122-124.

81. Cakan M., Altug U. Induction of spermatogenesis by inguinal varicocele repair in azoospermic men// Arch Androl., 2004; 50;3; 145-150.

82. Calamera, J.C., Giovenco, P. et al. Adenosine 5-triphosphate (ATP) content and acrosin activity in polyzoospermic subjects.// Andrologia, 1987; 19; 460-463.

83. Caldamone A.A., Al-Juburi A. et al. The varicocele: Elevated serotonin and infertility.//J. Urol.,1980;123; 683-685.

84. Cameron D.F., Snydle F.E. The blood-testis barrier in men with varicocele: A lanthanum tracer study.// Fertil.Steril.,1980; 34; 255-258.

85. Caspersson Т., Zech L. et al. Translocations causing non-fluorescent Y chromosomes in XO/XY mosaics./ZHereditas., 1971;68; 281-304.

86. Chandley A., Ambros P. et al. Short arm dicentric Y chromosome with associated statural defects in a sterile man// Hum. Genet., 1986; 73; 350-353.

87. Chandley A.C. Infertility and chromosomal abnormality.// Oxford Rev.Reprod. Biol.,1984;6; 1-46.

88. Chandley A.C. The chromosomal basis of human infertility.// Brit.Med.Bull., 1979;35;2; 181-186.

89. Chandley A.C., Edmond P., Christie S. et al. Cytogenetics and infertility in man. I. Karyotype and seminal analysis.// An. Hum. Genet., 1975; 39; 231252.

90. Chandley A.C., Fletcher J.M. Centromere staining of meiosis in man.// Hum. Gen., 1973;18; 247-252.

91. Charny C. W. Effect of varicocele on fertility, results of varicocelectomy.// Ferti. Steril.,1962;13;47-56.

92. Chemes, H.E., Brugo Olmedo et al. Ultrastructural pathology of the sperm flagellum: association between flagellar pathology and fertility prognosis in severely asthenozoospermic men.// Hum. Reprod.,1998;13; 2521-2526.

93. Chen A.T. L., Falek A. Cytological evidence for the association of the short arms of the X and Y chromosomes in the human male.// Nature, 1971;232; 555-556.

94. Chen CH, Lee SS, Chen DC et al. Apoptosis and kinematics of ejaculated spermatozoa in patients with varicocele// J. Androl., 2004; 25;3; 348-353.

95. Cooke J., Hargreave T. et al. Understading the genes involved in spermatogenesis: a progres report.// Fert. Steril., 1998;69;6; 989-1013.

96. De la Chapelle A. The ethyology of maleness in XX men. // Hum. Genet., 1981; 58;105-116.

97. De la Chapelle et al.// Clin. Genet., 1977; 11;91-106.

98. De Rooij D.G. Regulation of the proliferation spermatogonial stem cells.//Sci., 1988; 10; 181-194.

99. De Roux N., Young J. et al. A family with hypergonadotpopic hypogonadism and mutation in the gonadotropin releasing hormone receptor.//New Eng. J. Med.,1997;337;1597-1602.

100. Dfeker H.W., Strafton W.G. et al. A controlled triad of the use of eritromicin for men with astenospermia.// Internat. J. Androl., I984;7;5; 383-388.

101. Diemer Т., Desjardins C. Developmental and genetic disorders in spermatogenesis// Hum. Reprod. Upd., 1999;5;2;120-140.

102. Domenice S. et al. // Med. Sci. Monit., 2001;7;2;238-241.

103. El-Segini Y, Schill WB et al. Assessment of sperm functions in infertile patients with varicoceles// Andrologia, 2002; 34(5);291-295.

104. Ferguson-Smith M.A. Meiosis in the human male. // Chromosomes today, 1976; 5;33-41

105. Fraser L. R., Hosseini R. et al. TCP-11 the product of a mouse t-complex gene, plays a role in stimulation of capacitation and inhibition of the spontaneous acrosome reaction.//Mol. Reprod. Dev., 1997;48;3; 375-382.

106. Fryer A. The XY girl. In: Gynecology of the children and adolescents, 1998; Ch. 12; 190-213.

107. Genuardi M., Bardoni B. et al. Dicentric chromosome Y associated with Leydig cell agenesis and sex reversal.// Clin. Genet., 1995;47; 38-41.

108. Glezerman, M., Bernstein, D. et al. Polyzoospermia: a definite pathologic entity.// Fertil. Steril., 1982;38; 605-608.

109. Goncharov et al. Testicular endocrine function and spermatogenesis in men after short term radiation exposure in the vicinity of Chernobyl.// Vlth International Congress of Andrology, Salzburg, 25-29 May, 1997.

110. Gorpinchenko et al. Semen parameters of clean-up workers of Chernobyl accident.// Vlth International Congress of Andrology, Salzburg, 25-29 May, 1997.

111. Gromoll J., Simoni M. et al. Functional and clinical consequences of mutations in the FSH receptor.// J. Clin. Endocrinol. Metab., 1996; 125; 177182.

112. Guttenbach M., Engel V. et al. Analysis of structural and numerical chromosome abnormalities in sperm of normal men and carriers of constitutional chromosome aberrations. A review.// Hum. Genet., 1997; 100; 1; 1-21.

113. Guttenbach M., Schakowski R. et al. Incidence of chromosome 3,7,10,11,17 and X disomy in mature human sperm nuclei as determined by nonradioactive in situ hybridization.// Hum. Genet., 1994; 93; 1; 7-12.

114. Hahn E.W., Feingold S.M. et al. Recovery from Aspermia Induced by Low-Dose Radiation in Seminoma Patients.// Cancer, 1982; 50; 337-340.

115. Haines GA, Hendry JH et al. Germ cell and dose-dependent DNA damage measured by the comet assay in murine spermatozoa after testicular X-irradiation// Biol reprod, 2002;67;3;854-861.

116. Handel, M.A. and Hunt, P.A. Sex chromosome pairing and activity during mammalian meiosis.// Bioessays,1992;14; 817-822.

117. Handelin J.P., Levilliers J. et al. X-chromosome-linked Kallmann"s syndrome.//J. Clin. Endocrinol. Metab., 1993;76;827-831.

118. Hawkins J.R. Mutational analysis of SRY in XY females.// Hum. Mutation, 1993;2; 347-350.

119. Heller E.G., Clermont Y. Spermatogenesis in man: an estimate of its duration.// Science, 1963; 140; 184. New developments in moleculargenetics.// World Congress of Pediatr. Adolescent Gynecology, Helsinki,1998;WS.75.

120. Henegariu O., Hirschmann P. et al. Rapid screening of the Y chromosome in idiopathic sterile men, diagnostic for deletions in AZF, a genetic Y-factor expressed during spermatogenesis.// Andrologia,1994;26;97-106.

121. Herman Tournaye, Catherine Staessen et al. No evidence for a decreased fertilizing potential after in-vitro fertilization using spermatozoa from polyzoospermic men.//Hum. Reprod.,1997;12;10; 2183-2185.

122. Hulten M. 1972. Paris Conference (1971) standartization in human cytogenetics. Birth defects. Original article series, 8; 7. N. Y., Nat. Foundation.

123. Ibrahim A.A., Awad H.A. et al. Bilateral testicular biopsy in men with varicicele.// Fertil. Steril.,1977;28; 663-667.

124. Jameson J.L. Inherited disorders of the gonadotropin hormones.// Mol. Cell Endocrinol., 1996; 125; 143-149.

125. Joel C.A., Gibor Y. New etiologic aspects of habitual abortion and infertility with special reference to the male factor.// Fertil. Steril., 1966; 17; 374-380.

126. Kadam A.L., Fateh M. et al. Fertilization antigen (FA-1) completely blocks human sperm binding to human zona pellucida: FA-1 antigen may be a sperm receptor for zona pellucida in humans.// J.Reprod.Immun.,1995;29;l; 19-30.

127. Kamiguchi Y, Tateno H. Radiation- and chemical-induced structural chromosome aberrations in human spermatozoa// Mutat Res., 2002;504(1-2);183-191.

128. Kremer H., Kraaij R. et al. Male pseudohermaphroditism due to a homozygous missense mutations of the lutenizing hormone receptor gene.// Nature Gen., 1995;9; 160-164.

129. Kurilo L.F., Chapoval N.V. et al. Mitotic and meiotic chromosome studies in 140 infertile males with spermatogenesis disturbances.// Abstr. Int. Conf. Europ. Soc. Hum. Genet. (ESHG),26th An. Meet., Paris, 1994; 126.

130. Lachaud C., Tesarik J. et al. Apoptosis and necrosis in human ejaculated spermatozoa// Hum Reprod., 2004; 19;3; 607-610.

131. Lauman L.C., Cohen D.P. et al. Mutations in gonadotropin releasing hormone receptor gene cause hypogonadotropic hypogonadism.// Nature Genet. (Letters),1998;18;14-15.

132. Licht P., Wildt L. Luteal and extraluteal receptors for hCG and LH// Zentralb Gynaekol., 1998; 120;98-105.

133. Lieblich J.M., Rogol A.D. et al. Syndrome of anosmia with hypogonadotropic hypogonadism (Kallman syndrome)// Am. J. Med., 1982;73; 506-519.

134. Lyon M. Epigenetic inheritance in mammals. // Trends in Genet., 1993;9;4; 123-129.

135. Macomber D., Sanders B. The spermatozoa count. Its value in the diagnosis, prognosis, and treatment of sterility.// N Engl J Med, 1929;200; 981-990.

136. Мак V.and Jarvi K.A. The genetics of male infertility.// J. Urol., 1996; 156; 1245-257.

137. Maura A., Pino A. Induction of sperma abnormalities in mice by norfloxacin.//Mutat. Res.,1991;264;4; 197-200.

138. Mazo E. В., Tirsi K.A. et al. The effect of two models of experimental varicocele (ELV) on spermatogenesis.// Eur. Urol., 2000; 38; 528.

139. Mazo E. В., Tirsi K.A. et al. The quantitative karyological analysis (QKA) of immature germe cells (IGC) of semen of fertile and infertile men with varicocele (V).// Eur. Urol., 2000; 38; 529.

140. Meitinger t., Heye B. et al. Definitive localization of X-linced Kallman syndrome (hypogonadotropic hypogonadism and anosmia) to Xp22.3 closelineage to the hypervariable repeatsequence CR1-S2.32.// Am. J. Hum. Genet., 1990;47; 664-669.

141. Moreau N., Teyssier M. et al. A new case of (Y; 1 )balansed reciprocal translocation in an infertile man with Hodgkins disease.// J.Med.Genet., 1987;24;6; 379-380.

142. Narayan P. et al. Varicocele and male subfertility.// Fertil steril., 1981; 36; 1; 92-97.

143. Nieschlag E, Hertle L et al. Update on treatment of varicocele: counselling as effective as occlusion of the vena spermatica// Hum Reprod, 1998; 13(8); 2147-2150.

144. Octavio Dias-Gutierrez Ureaplasma urealyticum. Diagnosis by PCR in infertile men and its clinic relevance.// J. of Andrology American Society of Andrology, Jan./Febr. 1999; abstr. 52; 38.

145. Ogata Т., Matsuo N. et al. A ring X chromosome, 46,Y,r(X)(p22.33q28),as a cause of extreme short stature in a male.// Am.J.Med., 1990;35; 241-244.

146. Onozawa M, Endo F et al. Clinical study of varicocele: statistical analysis and results of long-term follow-up// Jnt J Urol, 2002;9;455-461.

147. Page D.C. Sex reversal: deletion mapping the male-determining function of the human у chromosome.// Cold Spring Harbor symp. Quart. Biol., 1986;51; 229-235.

148. Page D.C., mocher R. et al. The Sex-Determining region of the Human Y chromosome encodes a finger protein.// Cell,1987;51; 1091-1104.

149. Pasqualotto FF et al. Relatinship between oxidative stress, semen characteristics, and clinical diagnosis in men undergoing infertility investigation// Fertil Steril, 2000; 73; 459-464.

150. Pedersen H. and Rebbe H. Absence of arms in the axoneme of immobile human spermatozoa.// Biol. Reprod., 1975; 12; 541.

151. Petit Ch., de la Chapelle et al. An abnormal terminal X-Y interchange accounts for most but not all cases of human XX maleness.// Cell., 1987;49;595-602.

152. Pohlschmidt M., Rappold G. et al. Ring Y chromosome: molecular characterization by DNA probes.// Cytogenet. Cell Genet., 1991;56; 65-68.

153. Potts J.M., Sharma R.K. and al. Ureaplasma urealyticum infection in men is associated with abnormal seminal reactive oxygen levels and absence of leukocytospermia.//# # # # abstr. 95, 49.

154. Rawe V.Y., Galaverna G.D.et al. Incidence of tail structure distorions associated with dysplasia of the fibrous sheath in human spermatozoa// Hum. Reprod.,2001;16;5; 879-886.

155. Ricci G., Perticarari S. et al. Apoptosis in human sperm: its correlation with semen quality and the presence of leukocytes// Hum Reprod., 2002; 17; 10; 2665-2672.

156. Said TM, Paasch U. et al. Role of caspases in male infertility// Hum Reprod Update, 2004; 10;1; 39-51.

157. Sasagava I., Nacada Т., Adachi Y. et al. Y-autosome translocation associated with azoospermia// Scand. J. Urol. Nephrol., 1993; 27; 285-288.

158. Sasagawa I., Terada Т., Katayama Т., Sakamoto H. Ultrastructure of the testis in an XX-male with normal plasma testosterone.// Andrologia, 1986; 18 ; 361-367.

159. Schill, W.B. and Feifel, M. Low acrosin activity in polyzoospermia// Andrologia, 1984; 16; 589-591.

160. Schill, W.B. Determination of active, non-zymogen acrosin, proacrosin and total acrosin in different andrological patients.// Arch. Dermatol. Res., 1990;282; 335-342.

161. Schill, W.B., Topfer-Petersen, E. et al. The sperm acrosome: functional and clinical aspects.// Hum. Reprod., 1988;3; 139-145.

162. Schnieders F., Dork T. et al. Testis-specific protein, Y-encoded (TSPY) expression in testicular tissues.// Hum. Mol. Genet.,1996;5; 1801-1807.

163. Schraman P., Schopf R.E. et al. Josamycin concentration in human ejaculate and its influence on sperm motility a contribution to antibiotic therapy in andrological patients.// Andrologia, 1998;20;6; 521-525.

164. Schramm P. et al., Josamycin concentration in human ejaculate and its influence on sperm motility a contribution to antibiotic therapy in andrological patients.//Andrologia, 1988;20;6; 521-525.

165. Sikka S.C., Armstrong J.S. and al. Role of bacterial pathogens in male factor infertility.// J. of Andrology American Society of Andrology, Jan./Febr. 1999; abstr.57; 40.

166. Singer, R., Sagiv, M. et al. High sperm densities and the quality of semen.//Arch. Androl., 1979;3; 197-200.

168. Thonneau P. et al. The effect of male heat exsposure on time to pregnancy.// Vlth International Congress of Andrology, Salzburg, 25-29 May, 1997.

169. Topfer-Petersen, E., Volcker, Ch. et al. Absence of acrosome reaction in polyzoospermia.//Andrologia, 1987; 19; 225-228.

170. Tournaye et al. No evidence for a decreased fertilizing potential after in-vitro fertilization using spermatozoa from polyzoospermic men.// Hum. Reprod., 1997; 12; 10; 2183-2185.

171. Urata K, Narahara H et al. Effect of endotoxin-induced reactive oxygen species on sperm motility// Fertil Steril, 2001; 76; 163-166.

172. Vogt P. Y chromosome function in spermatogenesis.// In: Spermatogenesis-Fertilization-Contraception. Molecular, cellular andendocrine events in male reproduction. Springer Verlag, NY, 1992;4; 226257.

173. Vogt P.H., Edelmann A. et al. Human Y chromosome azoospermia factors (AZF) mapped to different subregions in Yqll.// Hum. Molec. Genetics, 1996;5;7; 933-943.

174. Yanagimachi R. Mammalian fertilization.// The physiology of reprodaction. N.Y.; L.:Raven Press, 1994,189-317.

175. Yanagimachi R. Mechanisms of fertilization in mammals. Fertilization and embryonic defelopment in vitro.// N.Y.; L.:Plenum Press, 1981, 82-184.

176. Yauk CL, Dubrova YE et al. A novel single molecule analysis of spontaneous and radietion-induced mutation at a mouse tandem repeat locus// Mutat Res., 2002;500(1-2);147-156.

177. Yurov Y.B., Saias M.J. et al. Rapid chromosomal analysis of germ line cells by FISH: an investigation of infertile male with large-head spermatozoa.// Molec. Hum. Reprod., 1996; 2;9; 665-668.

178. Zhang J.S., Yang-Feng T.l. et al. Molecular isolation and characterization of an expressed gene from the human Y chromosome.// Hum. Mol. Genet., 1992;1; 717-726.

Информация о работе

Гришина, Екатерина Михайловна
кандидата медицинских наук
Москва, 2004
ВАК 03.00.25

Диссертация

Характеристика сперматогенеза при некоторых генетически обусловленных и приобретенных нарушениях репродуктивной функции у мужчин - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы