Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Медико-генетические аспекты обследования супружеских пар с бесплодием, включенных в программу ЭКО и ПЭ, ИКСИ

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Глинкина, Жанна Ивановна

ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ.4 стр.

ВВЕДЕНИЕ.5 стр.

ГЛАВА I. Особенности кариотипа супружеских пар в бесплодном браке обзор литературы).13 стр.

1. Особенности кариотипа у супружеских пар с нарушением репродуктивной функции.14 стр.

2. Особенности кариотипа у супружеских пар программы ЭКО и ПЭ, ИКСИ.22 стр.

3. Особенности сперматогенеза у мужчин при различных его состояниях .27 стр.

3.1. Частота анеуплоидии в сперматозоидах у мужчин при нормозооспермии.31 стр.

3.2. Частота анеуплоидии в сперматозоидах у мужчин с олиго,-астено,- тератозооспермиией.35 стр.

3.3. Корреляция между кариотипом в лимфоцитах крови и частотой анеуплоидии в сперматозоидах у мужчин программы ЭКО и

ПЭ, ИКСИ.40 стр.

ГЛАВА II. Материал и методы исследования.45 стр.

1. Характеристика обследованных супружеских пар.45 стр.

2. Характеристика сперматогенеза у мужчин программы ЭКО и ПЭ, ИКСИ.48 стр.

3. Методы исследования.49 стр.

ГЛАВА III. Медико - генетическое обследование супружеских пар программы ЭКО и ПЭ, ИКСИ.57 стр.

1. Результаты генетического обследования супружеских пар программы ЭКОиПЭ, ИКСИ.57 стр.

2. Анализ частоты анеуплоидии гоносом в сперматозоидах у мужчин программы ЭКО и ПЭ, ИКСИ.72 стр.

3. Изучение корреляции между кариотипом, частотой анеуплоидии гоносом в сперматозоидах и состоянием сперматогенеза.83 стр.

4. Разработка подходов к формированию группы риска среди супружеских пар программы ЭКО и ПЭ, ИКСИ.88 стр.

ГЛАВА IV. Обсуждение полученных результатов.93 стр.

ВЫВОДЫ.109 стр.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Медико-генетические аспекты обследования супружеских пар с бесплодием, включенных в программу ЭКО и ПЭ, ИКСИ"

АКТУАЛЬНОСТЬ РАБОТЫ

Более двадцати лет назад было положено начало успешному лечению женского бесплодия с помощью прогрессивного метода экстракорпорального оплодотворения и переноса эмбрионов (метод ЭКО и ПЭ) женщине. Благодаря расширению методов ЭКО и ПЭ, применению интраплазматической инъекции одного сперматозоида в ооплазму яйцеклетки (ИКСИ), в настоящее время удается преодолевать ранее неизлечимые тяжелые формы мужского бесплодия.

Преодоление бесплодия с помощью методов вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) высветило важную проблему - получение здорового потомства. Возникновение патологических состояний репродуктивной системы часто обусловлены хромосомными аномалиями, генными мутациями и наличием наследственной предрасположенности к заболеванию. По данным Loan et al. (1987) и Ворсановой с соавт. (1995) каждая 8 супружеская пара с нарушением репродуктивной функции нуждается в проведении цитогенетического исследования лимфоцитов крови. Jacobs et al. (1974) и Thompson et al. (1991) обнаружили среди супружеских пар с бесплодием повышенную частоту сбалансированных транслокаций в десятки раз по сравнению с популяцией. Однако к настоящему времени не определены частота и характер аберраций кариотипа у супружеских пар с бесплодием, включенных в программу ЭКО и ПЭ, ИКСИ.

Дополнительным риском формирования аномальных гамет при суперовуляции у супружеских пар, включенных в программу ЭКО и ПЭ, ИКСИ является мощная гормональная терапия, необходимая для стимуляции. В связи с вышесказанным, пациенты программы ЭКО и ПЭ,

ИКСИ нуждаются в медико-генетическом обследовании до применения к ним ВРТ.

Особое место в структуре бесплодия отводится мужскому фактору, который по данным В.И. Кулакова и Б.В. Леонова (2000) составляет 50%. Существует ряд причин, приводящих к бесплодию у мужчин. Одной из них являются нарушения сперматогенеза, обусловленное хромосомными аберрациями кариотипа (Testart, 1996). Другими причинами, приводящими к бесплодию у мужчин, являются различные физические, химические или биологические факторы, также приводящие к нарушению сперматогенеза: олиго-, астено- или тератозооспермия (ОАТ). Очевидно, что помимо развития патозооспермии, причиной бесплодия может служить гормональный дисбаланс, нарушения эвакуации половых клеток, копуляция и др.

В настоящее время нет единого мнения о том, существует ли корреляция между нарушениями сперматогенеза и изменением набора хромосом в сперматозоидах. Pang et al. (1999) обнаружили высокую долю дисомии в сперматозоидах мужчин, включенных в программу ИКСИ по сравнению с контролем (5.4% и 0.2% соответственно). По данным других исследователей (Colombero et al., 1999) частота анеуплоидии в сперматозоидах у мужчин с нарушением сперматогенеза были 2.7% и 1.8% в контроле соответственно.

В связи с этим, важным является выяснение частоты ошибок в хромосомном наборе сперматозоидов при различных формах нарушений сперматогенеза, а также обнаружение корреляции кариотипа пациента с формой заболевания и частотой хромосомных аберраций в сперматозоидах. Кроме того, остается неясным, существует ли корреляция между наличием нормального и/или аберрантного кариотипа в лимфоцитах крови и изменением хромосомного набора в половых клетках мужчин с нормозооспермией и ОАТ (Шаронин, 1998). К настоящему времени в литературе высказаны противоречивые мнения и имеются немногочисленные данные по этим вопросам (Blanco, 2000; Colls, 1997; Estop, 2000; Morel, 2001), поэтому продолжение исследований в этом направлении необходимо.

Изучение корреляции между нарушениями хромосом в соматических и половых клетках расширяют представления о механизмах генетического контроля этого процесса. Изучение характера хромосомных аномалий в половых клетках необходимо для понимания механизмов их происхождения и наследования. Это стало более актуальным с момента использования репродуктивных технологий, поскольку к последним прибегают супружеские пары в возрасте за 35 лет, когда возрастает риск рождения ребенка с хромосомными аберрациями (Прокофьева- Бельговская, 1986).

Происходящие в мейозе процессы давно волнуют исследователей в области биологии и медицины. Исследования половых клеток до середины 70-х годов проводили с использованием светового микроскопа. В 80-90 годах была усовершенствована техника приготовления тотальных препаратов мейотических хромосом из яичек (материал биопсий). С 1978 г совершенствуется и используется техника экстракорпорального оплодотворения ооцитов золотистого хомячка сперматозоидами человека. (Дыбан, 1970; Holm et al., 1983; Rudak et al.; 1978; Solari, 1980). В настоящее время одним из наиболее информативных доступных методов для исследования хромосом в сперматозоидах является молекулярно-цитогенетический FISH метод (Флуоресцентная in situ гибридизация) который позволяет идентифицировать определенные хромосомы или их локусы (Курило, 1989).

Исследования поведения гоносом в процессе мейоза не только расширят возможности диагностики форм мужского бесплодия, но и помогут в расшифровке патогенетических механизмов их развития, что в свою очередь, будет способствовать разработке лечебных и профилактических мероприятий в практическом здравоохранении (Курило, 1989).

Для исследования сперматозоидов многие авторы рекомендуют использовать зонды к специфическим участкам хромосом X и Y, для анализа дисомии гоносом в зрелых гаметах, даже в тех случаях, когда в кариотипе лимфоцитов периферической крови имеются хромосомные перестройки аутосом (Blanco, 2000; Colls, 1997; Estop, 2000; Morel, 2001,). Существует мнение о том, что аберрации хромосом в кариотипе периферической крови влияют на общие процессы мейоза, вызывая их нарушения. В половых клетках образуются хромосомные изменения, связанные не только с выявленными в лимфоцитах периферической крови аберрациями хромосом, но и мутации de novo. Это явление получило название - «интерхромосомный эффект» (Blanco et al, 2000).

Таким образом, перед введением пациентов в программу ЭКО и ПЭ, ИКСИ требуется проведение медико- генетического консультирования с включением цитогенетического и молекулярно-цитогенетического обследования не только лимфоцитов периферической крови, но и половых клеток. Важно информировать супружеские пары о характере генетических изменений (если таковые имеются), о риске наследования хромосомных и генных нарушений потомством, о возможностях прегтплантационной генетической диагностики, т.к. решение о лечении путем вспомогательных репродуктивных технологий, включая ИКСИ, принимает супружеская пара.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ: Определить частоту и характер хромосомных аберраций у супружеских пар в лимфоцитах периферической крови, а также в сперматозоидах у мужчин с нормозооспермией и у мужчин с ОАТ, включенных в программу ЭКО и ПЭ, ИКСИ в связи с бесплодием. Выявить корреляцию между кариотипом в лимфоцитах периферической крови и частотой нерасхождения гоносом в сперматозоидах у мужчин программы ЭКО И ПЭ, ИКСИ.

Для выполнения данной цели были сформулированы следующие задачи:

1) оценить семейный анамнез и провести цитогенетическое обследование супружеских пар программы ЭКО и ПЭ, ИКСИ по лимфоцитам периферической крови;

2) выявить корреляцию по частоте хромосомных изменений в лимфоцитах периферической крови и частотой нерасхождения хромосом X и Y в сперматозоидах у мужчин с нормозооспермией и у мужчин с ОАТ;

3) разработать показания к применению молекулярно-цитогенетического метода у мужчин программы ЭКО и ПЭ, ИКСИ для выявления хромосомных аберраций в сперматозоидах;

4) разработать показания к формированию группы риска по рождению детей с хромосомной патологией среди пациентов программы ЭКО и ПЭ, ИКСИ.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Впервые определены особенности кариотипа супружеских пар, страдающих бесплодием и включенных в программу ЭКО и ПЭ, ИКСИ, выявлены удельный вес и тип хромосомных аберраций в лимфоцитах периферической крови.

Впервые определена частота нерасхождения X и Y хромосом в сперматозоидах у мужчин, включенных в программу ЭКО и ПЭ, ИКСИ. Выявлено соотношение клонов с нормальным и аберрантным хромосомным набором (по дисомии гоносом) в сперматозоидах у мужчин с нормозооспермией и/или с ОАТ.

Разработаны показания к применению молекулярно-цитогенетического метода (FISH) при нарушениях репродуктивной функции у мужчин, включенных в программу ЭКО и ПЭ, ИКСИ.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ Полученные данные позволяют расширить и углубить рамки медико-генетического консультирования, а также указывают на необходимость проведения цитогенетического обследования обоим супругам, нуждающимся в лечении бесплодия методами ВРТ. Разработаны рекомендации для проведения молекулярно - цитогенетического исследования сперматозоидов у мужчин с различными показателями спермограммы, а также лимфоцитов периферической крови у пациентов программы ЭКО и ПЭ, ИКСИ при подозрении на хромосомный мозаицизм. Разработаны рекомендации для проведения молекулярноцитогенетического исследования лимфоцитов крови и сперматозоидов у пациентов программы ЭКО и ПЭ, ИКСИ.

Результаты исследования позволяют составить индивидуальный алгоритм лечения методами ВРТ конкретной супружеской пары и разработать рекомендации по формированию группы риска пациентов, у которых в потомстве могут быть хромосомные изменения. Проведение преимплантационной с последующей пренатальной диагностик, с целью профилактики рождения детей с хромосомной патологией, позволяет повысить эффективность программы ЭКО и ПЭ, ИКСИ.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1. Высокая частота хромосомных аберраций в кариотипе пациентов программы ЭКО и ПЭ, ИКСИ по сравнению с общепопуляционными показателями, обусловливают необходимость проведения медико-генетического консультирования с проведением цитогенетического исследования по лимфоцитам периферической крови обоим супругам до начала применения вспомогательных репродуктивных технологий.

2. Между кариотипом, установленном по лимфоцитам периферической крови и частотой нерасхождения половых хромосом в сперматозоидах выявляется четкая корреляция. При наличии хромосомных аберраций в кариотипе лимфоцитов периферической крови повышается частота нерасхождения гоносом в мейозе.

3. У мужчин с нарушением сперматогенеза выявляется высокая частота анеуплоидии гоносом в сперматозоидах, что свидетельствует о существовании корреляции между особенностями сперматогенеза и хромосомным набором в сперматозоидах. В связи с этим, необходимо обязательное молекулярно-цитогенетическое исследование сперматозоидов мужчин с отклонениями в показателях спермограммы: пониженной концентрации сперматозоидов, при сниженной их подвижности и отклонении морфологии даже при нормальном кариотипе в лимфоцитах крови.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ: Работа изложена на 134 страницах машинописного текста и состоит из введения, четырех глав, выводов, практических рекомендаций. Работа иллюстрирована 14 таблицами и 8 рисунками. Библиографический указатель включает 156 литературных источника, из которых 45 работы отечественных и 111 зарубежных авторов.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Глинкина, Жанна Ивановна

ВЫВОДЫ

1. До включения в программу ЭКО и ПЭ, ИКСИ, супружеским парам необходимо пройти медико - генетическое консультирование в комплексе с исследованиями: кариотипа в лимфоцитах периферической крови; сперматозоидов молекулярно - цитогенетическим FISH методом (по показаниям); преимплантационной и/или пренатальной диагностик (при проведении программы).

2. У женщин из супружеских пар, включенных в программу ЭКО и ПЭ, доля хромосомных изменений в кариотипе лимфоцитов периферической крови была обнаружена в 9% наблюдений, что значительно выше, чем у мужчин этой же программы - 2%. Основные хромосомные изменения у женщин программы ЭКО и ПЭ представлены аберрациями в комплексе половых хромосом с преобладанием хромосомного мозаицизма - в 7 наблюдениях из 9 (78%).

3. Мужчины из супружеских пар, включенных в программу ИКСИ, имеют высокую частоту хромосомных аберраций в лимфоцитах периферической крови (11%) по сравнению с женщинами этой же программы - 1%. Хромосомные аберрации аутосом у мужчин программы ИКСИ составляют основную долю хромосомных изменений - в 7 наблюдениях из 11 (63%).

4. Существует корреляция между кариотипом мужчин в лимфоцитах крови и частотой нерасхождения хромосом X и Y в сперматозоидах. Высокая доля анеуплоидии гоносом в сперматозоидах наблюдается у мужчин с изменениями в комплексе половых хромосом. Только у пациентов с кариотипом 47,XYY соотношение частоты нерасхождений в сперматозоидах хромосом YY к хромосомам XX больше единицы. Хромосомные аберрации аутосом могут привести к нарушению расхождения половых хромосом в мейозе, что подтверждает теорию существования интерхромосомного эффекта.

5. У мужчин с нормальным кариотипом существует корреляция между особенностями сперматогенеза (олиго,- астено,- терато, ОАТ) и повышенной частотой анеуплоидии гоносом в сперматозоидах. При ОАТ наблюдается наиболее высокая частота нерасхождения хромосом X и Y в сперматозоидах -0.83%.

6. У мужчин, включенных в программу ЭКО и ПЭ с нормальным кариотипом и пограничными показателями спермограммы, а также у мужчин с изменениями в кариотипе и нормальными показателями спермограммы, наблюдается повышенная частота сперматозоидов с нерасхождением гоносом относительно мужчин группы сравнения (0.5%; 1.7% (средний) и 0.21% соответственно). Этим мужчинам следует проводить исследование частоты нерасхождения хромосом в сперматозоидах FISH методом.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Пациентам с бесплодием перед включением их в программы ЭКО и ПЭ, ИКСИ рекомендуется пройти медико - генетическое консультирование.

2. Исследование кариотипа лимфоцитов периферической крови следует проводить обоим супругам программ ЭКО и ПЭ, ИКСИ.

3. При подозрении на мозаицизм у пациентов программ ЭКО и ПЭ, ИКСИ необходимо проведение молекулярно - цитогенетического исследования лимфоцитов крови для уточнения процентного соотношения клонов с нормальным и аберрантным кариотипом.

4. Мужчинам из супружеских пар, включенных в программу ЭКО и ПЭ, с нормальным кариотипом и пограничными показателями спермограммы (по концентрации, подвижности и морфологии), а также мужчинам с изменениями в кариотипе и нормальными показателями спермограммы, необходимо проведение молекулярно - цитогенетического исследования половых клеток с целью определения индивидуального уровня сперматозоидов с анеуплоидией.

5. Мужчинам из супружеских пар, включенных в программу ИКСИ и имеющих отклонения в спермограмме, рекомендуется проведение молекулярно - цитогенетического исследования половых клеток с целью определения индивидуального уровня сперматозоидов с анеуплоидией.

6. Супружеским парам, в которых один из супругов является носителем хромосомных аберраций в кариотипе по лимфоцитам периферической крови, а также, если у мужей в сперматозоидах имеется повышенная частота анеуплоидии, и у которых беременность наступила в программе ЭКО и ПЭ, ИКСИ, следует соответственно проводить преимплантационную и/или пренатальную диагностики.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Глинкина, Жанна Ивановна, Москва

1. Айала Ф., Кайгер Дж. Современная генетика. М: Мир, 1988. - т. 3. -с. 58-70.

2. Албертс Б., Брей Д., Льюис Дж. и др. Молекулярная биология клетки. -М: Мир, 1994. т. 3.-с. 38-39.

3. Балахонов А.В. Преодоление бесплодия. СПб. - СпбГУ. - 2000. - с. 256-257.

4. Барцева О.Б., Пулина Г.А., Балашова Е.В. Цитогенетическое обследование супружеских пар в программе ЭКО // Проблрепродукции. 1998. № 4. - с. 37-38.

5. Бочков Н.П. Клиническая генетика. М: Медицина, 1997.-216 с.

6. Бутомо И.В., Хитрикова J1.E. Полуколичественный анализ полиморфизма хромосом 1,9,16 и Y у детей с болезнью Дауна// Полиморфизм хромосом у человека. М: Медицина, 1981.-е. 205211.

7. Быков B.J1. Оплодотворение, ранний эмбриогенез и воздействие на плодовитость человека. СПб. - СпбГУ. - 1994. - с. 37-39.

8. Ворсанова С.Г., Юров Ю.Б., Демидова И.А. Хромосомные аномалии у детей с недифференцированными формами умственной отсталости по данным молекулярно-цитогенетических исследований // Цитол и генет. 1993. - т. 27., № 3.-е. 72-78.

9. Ворсанова С.Г., Юров Ю.Б., Соловьев И.В. Современные достижения молекулярной цитогенетики в диагностике хромосомной патологии у детей // Росс вестник перинатол и педиатрии. 1998. - т. 43., №1. - с. 31-36.

10. Ворсанова С.Г., Демидова И.А. Способ оптимизации условий получения дифференциального окрашивания хромосом с помощью С- метода для диагностики хромосомных аномалий// Рац предл № 744.- 1989.-2 с.

11. Демидова И.А., Ворсанова С.Г. Цитологический и молекулярный полиморфизм гетерохроматиновых районов хромосом человека. // Мед генетика (Экспресс-информация), М., 1990. - т. 12., №1. - с. 9.

12. Джгаркава Н.А. Изучение хромосомных аномалий в митозе и мейозе у мужчин с бесплодием, связанным с нарушением сперматогенеза. Автореф дис канд мед наук М., 1991.- 24 с.

13. Дыбан А. П. Метод приготовления препаратов мейотических и митотических хромосом из семенников млекопитающих // Цитол -1970. т. 12., № 5. - с. 687-689.

14. Захаров А.Ф., Бенюш В.А., Кулешов Н.П. и др. Хромосомы человека: Атлас. М: Медицина, 1982. - с. 255-263.

15. Здановский В.М., Гоголевский П.А., Хилькевич JI.B. Первые положительные результаты лечения мужского бесплодия методом интраплазматической инъекции сперматозоида в яйцеклетку // Пробл репродукции. 1996.- т. 2., №2. - с. 53-56.

16. Каретникова Н.А. Клинико цитогенетические и дерматоглифические параллели у супружеских пар с привычными выкидышами и детьми с врожденными пороками развития // Полиморфизм хромосом у человека - М: Медицина, 1981. - с. 176185.

17. Козлова С.И., Демикова Н.С., Семанова Е. Наследственные синдромы и медико-генетическое консультирование. М: Практика, 1996. -410 с.

18. Кулаков В.И., Леонов Б.В. Экстракорпоральное оплодотворение и его новые направления в лечении женского и мужского бесплодия. М: МИА, 2000. - 5 с.

19. Кулешов Н.П. Современные проблемы в клинической цитогенетике: сб научтр.-М., 1991. №91.- 163 с.

20. Курило Л.Ф. Возможности цитогенетического исследования мейоза при мужском бесплодии // Цитол и генет. 1989. - т. 23., № 2. - с. 6370.

21. Курило Л.Ф., Любашевская И.А., Дубинская В.П. и др. Количественный кариологический анализ состава незрелых половых клеток из эякулята // Урол и нефрол. 1993. - т. 5. - с. 45-47.

22. Курило Л.Ф., Дубинская В.П., Остроумова Т.В. и др. Анализ патологии сперматогенеза различной этиологии по эякуляту // Пробл репродукции. 1995. - т. 3. - с. 33-38.

23. Курило Л.Ф. Генетически обусловленные нарушения мужской репродуктивной системы // Сексопатол и андрол. Киев, 1996. - т. 3. - с. 28-46.

24. Курило Л.Ф., Шилейко Л.В., Мхитарова Е.В. и др. Структура наследственной патологии половой системы при обследовании пациентов с нарушением репродукции // Медико-генетич консультир в проф наследственных забол: Тез. конф. 1997.-XI. - с. 154-155.

25. Курило Л.Ф. Доля генетической патологии у пациентов с нарушением развития половой системы // Сексопатол и андрол -Киев, 1998.-т. 4.-е. 18-27.

26. Курило Л.Ф., Шаронин В.О., Савельева А.П. и др. Нерасхождение хромосом половых клеток как причина патозооспермии и бесплодия // Андрол и генит хирург 2002. - № 3. - с. 20-21.

27. Лазюк Г.И. Тератология человека. М: Медицина, 1991. - 480с.

28. Маринчева Г.С., Гаврилов В.И. Умственная отсталость при наследственных болезнях. М: Медицина, 1988. - 255 с.

29. Никитин А. И. Факторы среды и репродуктивная система человека // Морфол. т. 114., № 6. - с. 7-16.

30. Осипова Г.Р. Исследование гена SRY при некоторых нарушениях детерминации пола (XY «чистой форме дисгенезии гонад, синдроме Шерешевского- тернера, XX инверсии пола): Дисс канд. мед. наук. -М., 1997. 125 с.

31. Прокофьева-Бельговская А.А. Основы цитогенетики человека. М: Медицина, 1969. - с. 338-344.

32. Прокофьева-Бельговская А.А. Гетерохроматиновые районы хромосом. М: Наука, 1986. - 430 с.

33. Розовский И.С., Дзенис И.Г. Клинико-морфологическая характеристика больных с гонадальным дисгенезисом, женским фенотипом и наличием Y- хромосомы в кариотипе: Сб. напуч. тр. «Медико-генетич исслед в акуш и гинекол». М., 1977. - с. 136-143.

34. Руководство по безопасному материнству. М: Триада-Х,1998.- 531 с.

35. Савельева А.П. Структура хромосомной патологии среди пациентов с мужским бесплодием и патозооспермией: автореф дис канд биол наук.- М., 2002.-31 с.

36. Смирнов В.Г. Цитогенетика. М: Высшая школа, 1991. - с. 79- 81.

37. Соловьев И.В., Ворсанова С.Г., Демидова И.А. Роль молекулярно-цитогенетической диагностики в пост- и пренатальном выявлении хромосомной патологии // Ультрозвукова перинатальна д1агностика. -1995. №6-7.-с. 65-69.

38. Тальвик Т.А. Цитогенетическое исследование умственно отсталых детей с пороками развития и вопросы медико - генетическойконсультации: автореф дис канд мед наук. Тарту, 1973. - 24 с.

39. Тарская J1.A. Клинико цитогенетический анализ аномалий полового развития (синдром Шерешевского - Тернера и смешанная дисгенезия яичек): автореф дис канд мед наук. - М., 1996. - 25 с.

40. Тер Ованесов Г. В., Назаренко Т.А., Кулаков В.И. Фертильность мужчин в XXI веке // Андрол и генитал хир. - 2000. - №1. - 19 с.

41. Цветкова Т.Г. Полиморфизм хромосом в контингенте супружеских пар с отягощенным акушерским анамнезом // дис канд мед н М., 1980.-132 с.

42. Шаронин В.О. Роль молекулярно цитогенетических исследований хромосомных аномалий соматических и половых клеток принарушении репродуктивной системы у пациентов мужского пола: автореф дис канд биол наук. М., 1998. - 24 с.

43. AbramskyL., Chappie J. 47,XXY (Klinfelter syndrome) and 47,XYY: estimated rates of and indication for postnatal diagnosis with implications for prenatal counselling // Prenat. Diagn. 1997. - vol. 17., № 4. - p. 363-368.

44. Acar H., Kilinc M., Cora T. et al. Incidence of chromosome 8, 10, X and Y aneuploidies in sperm nucleus of infertile men detected by FISH // Urol Int. 2000. - vol. 64., № 4. - p. 202-208.

45. Antoni К. Тезисы 17-го ежегодного конгресса ESHRE // Hum. Reprod. -2001. № 16.

46. Aribarg A., Ngeamvijawat J., Chanprasit Y. Investigation of sex chromosome abnormalities in teratozoospermia of infertile men using fluorescence in situ hybridization // J. med. Assoc. Thai. 2000. - vol. 83., №7.-p. 737-742.

47. Assada H., Sueoka K., Hashiba T. et al. The effects of age and abnormal sperm count on the nondisjunction of spermatozoa // J. Assist. Reprod. Genet. 2000. - vol. 17., № l.-p. 51-59.

48. Azim M., Khan A.H., Khilji Z.L. et al. Chromosomal abnormalities as a cause of recurrent abortions: a hospital experience // J. Рак. Med. assoc. -2003. vol.3., № 53. - p. 117 - 119.

49. Baumgartner A., Van Hummelen P., Lowe X. R. et al. Numerical and structural chromosomal abnormalities detected in human sperm with a combination of multicolor FISH assays // Environ Mol. Mutagen. 1999. -vol. 33., № i.p. 49.58.

50. Bernardini L., Martini E., Geraedts J.P. et al. Comparison of gonosomal aneuploidi in spermatozoa of normal fertile men and those with severe male factor detected by in situ hybridization // Mol. Hum. Reprod. 1997. -vol.3., №5.-p. 431-438.

51. Bielanska M., T an S .L., А о A. F luorescence in-situ hybridization of sex chromosomes in spermatozoa and spare preimplantation embryos of a Klinefelter 46,XY/47,XXY male. // Hum. Reprod. 2000. - vol. 15., № 2.-p. 40-444.

52. Blanco J., Egozcue J., Vidal F. Interchromosomal effects for chromosome 21 in carriers of structural chromosome reorganizations by fluorescence in situ hybridization on sperm nuclei // Hum. Genet. 2000. - vol. 106, № 5. -p. 500-505.

53. Bonduelle M., Van Assche E., Joris H. et al. Prenatal testing in ICSI pregnancies: incidence of chromosomal anomalies in 1586 karyotypes and relation to sperm parameters // Hum. Reprod. 2002. - vol. 17., № 10. -p. 2600-2614.

54. Bredbacka P. Progress on methods of gene detection in preimplantation embryos // Theriogenology. 2001. - vol. 55., № 1. - p. 23-34.

55. Bridges C. Non disjunction as proof on the chromosome theory of heredity // Genetics. - 1916. - vol. 1. - p.107-163.

56. Carotti G., Vianelli P., Pellegrini L. et al. Aggiorn // Pediatr. 1979. № 30.-p. 71-82.

57. Causio F., Fischetto R., Schonauer L. M. et al. Intracytoplasmic sperm injection in infertile patients with structural cytogenetic abnormalities // J. Reprod. Med. 1999. - vol. 44., № 10. - p. 859-864.

58. Cerr D. Chromosome studies in selected spontaneous abortions // J Conception after oral contraceptives, can. Med Assoc. 1970. № 103. - p. 343- 348.

59. Chamayou S., Alecci C., Ragolia C., et al. Successful application of preimplantation genetic diagnosis for beta-thalassaemia and sickle cell anaemia in Italy // Hum. Reprod. 2002. -vol. 17., № 5. - p. 1158-65.

60. Chevret E., Rousseaux S., Monteil M. et al. Increased incidence of hyperhaploid 24,XY spermatozoa detected by three-colour FISH in 46,XY/47,XXY male//Hum. Genet.- 1996.-vol. 97.,№2.-p. 171-175.

61. Clendenin Т., Benirschke K. Chromosome studies on spontaneous abortions. //Lab Invest. 1963. - № 12. - p. 1281-1292.

62. Colombero L. Т., Hariprashad J.J., Tsai M.C. et al. Incidence of sperm aneuploidy in relation to semen characteristics and assisted reproductive outcome // Fertil. Steril. 1999. - vol. 72., № 1. - p. 90-96.

63. Conn С., Harper J.S., Winston R.M. et al. Infertility couples with Robertsonian translocation: PGD analisis of embryos reveals chaotic cleavage divisions // Hum. Genet. 1998. - vol. 102., № 1. - p. 117-123.

64. Cookke I.D. Лечение бесплодия в центрах ВРТ. Рекомендации Королевского колледжа Акушерства и Гинекологии (Великобритания), основанные на выводах доказательной медицины. -2000. 3 с.

65. Davalos I.P., Rivas F., Ramos A. L. et al. Inv(9) (p24ql3) in three sterile brothers // Ann. Genet. 2000. - vol. 43., № 1. - p. 51-54.

66. Durak В., Ozon Y.H., Ozdemir M. et al. FISH analysis with locus -specific probes in sperm from two translocation carrier men // Clin. Genet. 1999. - vol.56., №2.-p. 129-135.

67. Escudero Т., Lee M., Stevens J. et al. Preimplantation genetic diagnosis of pericentric inversion // Prenatal. Diagn. 2001. - vol. 21., № 9. - p. 760766.

68. Estop A.M., Cieply K., Munne S. et al. Is there an interchromosomal effect in reciprocal translocation carriers? Sperm FISH studies // Hum. Genet. -2000.-vol. 105, №5.-p. 517-524.

69. Garrisi G. J., Talansky В. E., Grunfeld L. et al. Clinical evalution of three approaches to vicromanipulation assisted fertilization // Fertil. Steril. -1990. - vol. 54., -№ 4. - p. 671- 677.

70. Gordon J. Micromanipulation of embryos and Germ Cells: An Approach to Gene Therapy? // A J. of Medical Genetics. 1990. № 35. - p. 206-214.

71. Griffin D. K., Handyside A.H., Harper J.S. et al. Clinical experience with preimplantation diagnosis of sex by dual fluorescent in situ hybridization // J. Assist Reprod Genet. 1994. - vol. 11., № 3. - p. 132-143.

72. Griffin D. K., Abruzzo M.A., Millie E.A. et al. Non disunction in human sperm: evidence for an effect of increasing paternal age // Hum. Mol. Genet. - 1995. - vol. 4., № 12. - p. 2227-2232.

73. Guttenbach M., Schakowski R., Schmid M. Incidence of chromosome 3,7,10,11 and X disomy in mature human sperm nuclei as determinedby nonradioactive in situ hybridization // Hum. Genet. 1997. - vol. 93., № 3. - p. 7-12.

74. Handyside A., Delhanty J. Cleavage stage biopsy of human embryos and diagnosis of X- linked secessive disease. In preconception andpreimplantation diagnosis of human genetic disease. R.G. Edwards, ed // Cambridge University press. 1993. - p. 239-270.

75. Holbek S., Friedrich U., Lauristen G. et al. Marker chromosomes in parents of spontaneous abortuses // Human genetic. 1974. vol. 25., № 1. - p. 6164.

76. Holm P., Rasmussen S. Human meiosis. V. Substages of pachytene in human spermatogenesis // Ibid. 1983. - vol. 48., № 4. - p. 351 - 384.

77. Hungerford D.A. Leukocytes culture from small inocula of whole blood and preparation of metaphase chromosomes by treatment with hypotonic KC1 // Stain. Technol. 1965. № 40. - p. 333-338.

78. Hussey ND., Davis Т., Hall J. R. P reimplantation genetic diagnosis for beta-thalassaemia using sequencing of single cell PCR products to detect mutations and polymorphic loci // Mol. Hum. Reprod. 2002. - vol. 8., № 12.-p. 1136-1143.

79. Jacobs P.A., Melville M., Ratcliffe S. et al. Cytogenetic survey of 11,680 newborn infants // Ann. Hum. Genet. 1974. - vol. - 37., № 4. - p. 359376.

80. Jiang J., Fu M., Wang D. Cytogenetic analysis in 61 couples with spontaneous abortions // Chin. Med. J. (Engl). 2001. - vol.2., №114.p.200 201.

81. Krester D.M. Are sperm counts really fallig? // Reprod Fertil. 1998. -vol.10., № i.p< 9395t

82. Kucerova M., Polivkova Z. Clinical significance of human chromosomes variants // Cesk. Pediatr. 1977. - vol. 32, № 6. - p. 330-332.

83. Kunze J., Mau G. Letter: Al and C9 marker chromosomes in children with combined minor and major malformations // Lancet. 1975. - vol. 1., № 7901.-p. 273.

84. Liebaers I., Bonduelle M., Van Assche E. et al. Sex chromosome abnormalities after intracytoplasmic sperm injection // Lancet. 1995. -vol. 346., №8982.-p. 1095.

85. Lim A., Fong I., Yu S. L. et al. Estimates of sperm sex chromosome disomy and diploidy rates in a 47,XXY /46,XY mosaic Klinefelter patient // Hum. Genet. 1999. - vol. 104., № 5. - p. 405-409.

86. Loan D., Dumitrii J., Museteanu P. et al. Cytogenetic investigation in 300couples with recurrent fetal wastage // Rev roum med Endocrinol. 1987. -vol. 25., №3,-p. 145-148.

87. Martin R.H., Spriggs., Ко E. et al. The relationship between paternal age, sex ratios, and aneuploidy frequencies in human sperm, as assessed by multicolor FISH // Am J. Hum. Genet. 1995. - vol. 57., № 6. - p. 13951399.

88. Mclnnes В., Rademaker A., Greene C.A. et al. Abnormalities for chromosomes 13 and 21 detected in spermatozoa from infertile men // Hum. Reprod. 1998. - vol. 13., № 10. - p. 2787- 2790.

89. Meschede D., Lemcke В., Exeler J. R. et al. Chromosome abnormalities in 447 couples undergoing intracytoplasmic sperm injection- prevalence, types, sex distribution and reproductive relevance // Hum. Reprod. 1998. -vol. 13., №3.-p. 576-582.

90. Micic M., Nikolis J., Micic S., Diklic V. et al. Y chromosome anomalies • and male fertility // Hellenic Association of medical geneticists anduniversity of Thessaloniki. 1st Balkan meeting on human genetics. Greece. 1994.-91 p.

91. Morel F, Roux C, Bresson J. L. et al. Segregation of sex chromosomes in spermatozoa of 46,XY/47,XXY men by multicolour fluorescence in-situ hybridization // Mol. Hum. Reprod. 2000. - vol. 6, № 6. - p. 566-570.

92. Morel F, Fellmann F, Roux C. et al. Meiotic segregation analysis by FISH investigation of spermatozoa of a 46,Y,der( X),t(X/Y)(qter-p22::ql 1-q-ter) carrier // Cytogenet Cell Genet. 2001. -vol. 92, № l.-p. 63-68.

93. Moutou C, Gardes N, Viville S. Multiplex PCR combining deltaF508 mutation and intragenic micro satellites of the CFTR gene for pre* implantation genetic diagnosis (PGD) of cystic fibrosis // Eur. J. Hum.

94. Genet. 2002. - vol. 10.,№4- p. 231-238.

95. Munne S, Fung J, Cassel M.J. et al. Preimplantation genetic analysis of translocations: case-specific probes for interphase cell analysis // Hum. Genet. 1998. - vol. 102, № 6. - p. 663-674.

96. Munne S, Magli C, Cohen J. et al. Positive outcome after preimplantation diagnosis of aneuploidy in human embryos // Hum. Reprod. 1999. - vol. 14, №. 9.-p. 2191-2199.

97. Nicolaidis P., Petersen M. Origin and mechanisms of non-disjunction in human autosomal trisomies // Hum. Reprod. 1998. - vol. 13., №2. - p. 313-319.

98. Nielsen J., Friedrich U., Hreidarsson A. B. et al. Frequency of 9qh+ and risk of chromosome aberrations in the progeny of individuals with 9qh+. // Human genetic. 1974. -vol. 21., №3.-p. 211-216.

99. Nielsen J., Wohlert M. Chromosome abnormalities among 34 910 newborn children: results from a 13-year incidence study in Arthus, Denmark // Hum. Gen.-1991.-vol. 87., №1. -p. 81-83.

100. Nishikawa N., Murakami I., Ikuta K. et al. Sex chromosomal analysis of spermatozoa from infertili men using fluorescene in situ hubridization // J. Assist Reprod. Genet. 2000. - vol. 17., № 2. - p. 97-102.

101. Sokova O.I., Kirichenko O.H., Chebotarev A.N. et al. Enhancer -Expression of lp32 and lp22 fragile sites in lymphocytes in coetane ous maignaht melanomas // Cancer Genet and Cytogen. 1992. - vol. 58., №1. - c.24-28.

102. Solari A. synaptonemal complexes and associated structures in microspread human spermatocytes // Chhromosoma. 1980. - vol. 81., № 3. - p. 315337.

103. Okada H., Fujioka H., Tatsumi N. et al. Klinefelter's syndrome in the male infertility clinic // Hum. Reprod. 1999. - vol. 14., № 4. - p. 946-952.

104. Pickering S., Polidoropoulos N., Caller J. et al. Strategies and outcomes of the first 100 cycles of preimplantation genetic diagnosis at the Guy's and St. Thomas' Center // Fertil. Steril. 2003. - vol. 79., № 1. - p. 81-90.

105. Ray P .F, F rydman N., A ttie T. e t a 1. Birth of healthy female twins after preimplantation genetic diagnosis of cystic fibrosis combined with gender determination. // Mol. Hum. Reprod. 2002. - vol. 8., № 7. - p. 688-694.

106. Rives N, Wust S, Duchesne V. et al. Fluorescence in situ hybridization with chromosome paint probes: a novel approach to assess aneuploidy in human sperm nuclei // J. Assist Reprod. Genet. 1999. - vol. 16, № 1. - p. 46-51.

107. Rousseaux S., Hazzouri M., Pelletier R. et al. Disomy rates for chromosomes 14 and 21 studied by fluorescent in- situ hybridization in spermatozoa from three men over 60 years of age // Mol. Hum. Reprod. -1998. vol. 4., № 7. - p. 695-699.

108. Rudak E., Jacobs P., Yenagimachi R. Direct analysis of the chromosome constitution of human spermatozoa // Nature. 1978, - № 2. - p. 811- 819.

109. Scarina R., Anichini C., Vivarelli R. et al. Correlation of the clinical phenotype with a pericentric i nversion о f chromosome // Boll. Soc. Ital. Biol. Sper. 1992. - vol. 68., № 3. - p. 175-181.

110. Schreurs A., Legius E., Meuleman C. et al. Increased frequency of chromosomal abnormalities in female partners of couples undergoing in vitro fertilization or intracytoplasmic sperm injection // Fertil. Ster. 2000. - vol.74., № 7. - p. 94- 99.

111. Scriven P. N., Flinter F.A., Braude P. R. et al. Robertsonian translocation-reproductive risks and indications for preimplantation genetic diagnosis // Hum. Reprod. 2001. - vol. 16., № 11. - p. 2267-2273.

112. Seabright M.A. Rapid banding technique for human chromosomes // Lancet. 1971. - vol. 2, № 7731. - p. 971-972.

113. Shi Q., Martin R.H. Spontaneous frequencies of aneuploid and diploid sperm in 10 normal Chinese men: assessed by multicolor fluorescence insitu hybridization // Cytogenet. Cell genet. 2000. - vol. 90., № 1-2. - p. 79-83.

114. Shirley G., Tierney S., Ushaho J. The Edinburgh study of growth and development of children with sex chromosome abnormalities // Birth Defects: Original article series. 1982. - vol. 18., № 4. - p. 41-60.

115. Sperling K. Frequency and origin of chromosome abnormalities in man. In: Obe B.(ed.), mutation in map. // Springer, Berlin, Heidelberg, New- York.1 1984.-p. 128-146.

116. Stern C., Pertile M., Norris H. et al. Chromosome translocation in couples with in- vitro fertilization implantation failure // Hum. Reprod. 1999. -vol. 14., №8.-p. 2097-2101.

117. Tadir Y., Neev J., Ho P. et al. Lasers for gamete micromanipulation: basic concepts // J. Assist Reprod. Genet. 1993. - vol. 10., № 2. - p. 121-125.

118. Teo S. H., Tan M., Knight L. et al. Periricentric inversion 9- incidence and clinical significance // Ann. Acad. Med. Singapore 1995. - vol. 24., № 2. -p. 302-304.

119. Testart J., Gautier E., Brami C., et al. Intracytoplasmic sperm injection in infertile Patients with structural chromosome abnormalities // Hum. Reprod. 1996. - vol. 11., № 12.-p. 2609-2612.

120. Tharapel А. Т., Summit R. L. Minor chromosome variations and selected heteromorphisms in 200 unclassifiable mentally retarded patients and 200 normal controls // Hum. Genet. 1978. -vol. 41., № 2. - p. 121-130.

121. Thompson M. Genetics in medicine//Sauders.Philadelphia.-1991 -p. 47-52.

122. ISCN 1995. An international systeme for human cytogenetic nomenclature, F.Mitelman (ed); S. Karger // Basel. 1995. - 115 p.

123. Tkachuk D.C., Pincel D., Kuo W.L. et al. Clinical applications of fluorescence in situ hybridization // Genet. Anal. Tech. Appl. - 1991. -vol. 8., №2.-p. 67-74.

124. Tomomasa H., Adachi Y., Iwabuchi M. et al. Pericentric inversion of the Y chromosome of infertile male // Arch. Androl. 2000. - vol. 45., № 3. -p. 181-185.

125. Tuerlings J.H., Kremer J.A., Meuleman E.J. et al. The practical application of genetics in the male infertility clinic // J. An. Androl. 1997. - vol. 18., №6.-p. 576-581.

126. Uehara S., Akai Y., Takeyama Y. et al. Periricentric inversion of chromosome 9 in prenatal diagnosis and infertily Tohoku // J. Exp. Med. -1992. vol. 166., № 4. - p. 417-427.

127. Ushijimal С, Kumasako Y, Kihaile P. E. et al. Analysis of chromosomal abnormalities in human spermatozoa using multi colour fluorescence in -situ hybridization // Hum. Reprod. - 2000. - vol. 15, № 5. - p. 11071111.

128. Vagnas de los Monteros M. T, Fernandes- Novoa Garcia M. C. et al. Periricentric inversion of chromosome 9. Summury of the author's results // An. Esp. Pediatr. 1990. - vol. 33, № 5. - p. 442-449.

129. Van Asshe E, Bonduelle M, Tourna H. et al. Cytogenetics of infertil man // Hum. Reprod. 1996. - 11 suppl. № 40. - p. 1-24.

130. Van Opstal D, Los F. J, Ramlakhan S, et al. Determination of the perent of origin in nine cases of prenatally detected chromosome aberretions found after intracytoplasmic sperm injection // Hum. Reprod. 1997. vol.12, №4.-p. 682-686.

131. Van Der Ven, Peschka B, Montag M. et al. Increased frequency of congenital chromosomal aberrations in femele partners of couples undergoing intracytoplasmic sperm injection // Hum. Reprod. 1998. - vol.13, № l.-p. 48-54.

132. Verlinsky Y, Rechitsky S, Evsikov S. et al. Preconception and preimplantation diagnosis for cystic fibrosis // Prenatal. Diagnosis. 1992. -vol. 12, №2.-p. 103-110.

133. Verlinsky Y, Cieslak J, Ivakhnenko V. et al. Preimplantation diagnosis of common aneuploidies by the first and second- polar body FISH analisis // J.of Assisted Reproduction and Genetics. 1998 - vol. 15., № 5. - p. 285289.

134. Verlinsky Y., Rechitsky S., Verlinsky O. et al. Polar body-based preimplantation diagnosis for X-linked disorders // Reprod. Biomed. Online. 2002. - vol. 4., № 1. - p. 38-42.

135. Wang J.Y., Samura O., Zhen D.K. et al. Fluorescence in- situ hybridization analis of chromosomal constitution in spermatozoa from a mosaic 47,XXY/46,XY male // Mol.Hum.Reprod 2000. - vol. 6. № 7. - p. 665668.

136. Wennerholm U. В., Bergh C., Hamberger L. Obstetric outcome of pregnancies following ICSI, classified according to sperm origin and quality // Hum. Reprod. 2000. - vol. 15., № 5. - p. 1189-1194.

137. Younglai E. V., Collins J.A., Foster W.G. Canadian semen quality: an analysis of sperm density among eleven academic fertility centers // Fertil. Steril. 1998. - vol. 70., № 1.- p. 76- 80.

138. Zavos P.M., Correa J.R., Atypas S. Effects of seminal plasma from cigarette smokers on sperm viability and longevity // Fertil. Steril. 1998. -vol. 69., №1.-p. 425-429.