Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Роль Y хромосомы и митохондриального генома в нарушении сперматогенеза

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Роль Y хромосомы и митохондриального генома в нарушении сперматогенеза"

На правах рукописи

ООЗиьии^о

ИСЛАМОВА АЙСЫЛУ АЙРАТОВН4

РОЛЬ У ХРОМОСОМЫ И МИТОХОНДРИАЛЬНОГО ГЕНОМА В НАРУШЕНИИ СПЕРМАТОГЕНЕЗА

03.00.15 - генетика

АВТОРЕФЕРАТ па соискание ученой степени кандидата биологических наук

УФА-2007

2 1 МАЯ 2007

003060039

Работа выполнена в Институте биохимии и генетики Уфимского научного центра Российской академии наук

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор Хуснутдинова Эльза Камилевна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Курило Любовь Федоровна

доктор медицинских наук, профессор Викторова Татьяна Викторовна

Ведущая организация Институт общей генетики им Н И Вавилова Российской академии наук, г Москва

заседании Регионального диссертационного совета КМ 002 133 01 при Инстигуте биохимии и генетики Уфимского научного центра РАН по адресу 450054, г Уфа, просп Октября, 71

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке Уфимского научного центра РАН

Автореферат разослан апреля 2007 г

Защита диссертации состоится "З/ " исАЛ 2007 г вЛ£^°часов на

Ученый секретарь Регионального диссертационного совета, к б н

Бикбулатова С М

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы. Бесплодием страдает около 15% супружеских пар, при этом, в 45-50% случаев оно связано с «мужским фактором» Приблизительно у 5% мужчин репродуктивного возраста имеются различные отклонения количественных или качественных показателей спермы Около 1/3 случаев мужского бесплодия относят к так называемому идиопатическому бесплодию, большинство случаев которого может быть обусловлено генетическими факторами, такими как различные нарушения хромосом или мутации в ответственных за сперматогенез генах [Tiepolo L et al, 1976, Krausz С , et al 2001]

Тотальное ухудшение качества спермы отразилось в изменении эталонных норм показателей сперматогенеза Если в 1921 году нормальной считалась концентрация 100 млн сперматозоидов/мл, пограничной 60 млн /мл, то через 30 лет эта цифра достигла 40 млн /мл, а, согласно Руководству ВОЗ, в 1992 году нижней границей нормальной концентрации сперматозоидов стали считать 20 млн /мл [World Health Organization, 1992] Поэтому особое значение приобретает выявление факторов мужского бесплодия, диагностика и лечение, особенно, у молодых людей Причиной генетически обусловленного мужского бесплодия, связанного с нарушением сперматогенеза, в 10-15% случаев являются структурные нарушения Y-хромосомы [Chandley АС et al, 1994, Vogt Н et al, 1996] Роль Y хромосомы в репродуктивной медицине неоспорима, так как на ней расположен основной детерминирующий пол человека ген SRY (sex-determimng region Y) и множество генов, экспрессирующихся при сперматогенезе Помимо хромосомных аномалий наиболее частой генетической причиной нарушения репродуктивной функции у мужчин являются делеции AZF (Azoospermia Factor - фактор азооспермии) региона длинного плеча мужской половой хромосомы [Vogt et al, 1996] AZF -микроделеции являются причиной нарушения сперматогенеза в 10-15% случаев при азооспермии и в 5-10% при олигозооспермии тяжелой степени

В последние десятилетия стали придавать большое значение роли мутаций митохондриапьного генома в развитии заболеваний человека, в том числе и в нарушении сперматогенеза

Хотя есть и значительные достижения в области исследования генетических причин нарушения сперматогенеза, остается много невыясненных вопросов, касающихся гено-фенотипических корреляций, а также неясно, существуют ли популяционные различия в частоте и распространенности мутаций У хромосомы и митохондриапьной ДНК у мужчин с бесплодием различной этнической и географической принадлежности

В последние годы, в связи с развитием и внедрением в медицину современных молекулярно-генетических и цитогенетических методов, удалось установить генетическую природу ряда форм мужского бесплодия Продолжение исследований генетических причин нарушения сперматогенеза позволят расширить возможности в понимании этиопатогенеза данного заболевания, а также будут способствовать проведению более глубокого генетического обследования Выявление причин бесплодия необходимо для определения прогноза и выбора наиболее эффективного метода лечения

Целью исследования являлось изучение А7.Р региона У хромосомы, анализ гаплогрупп митокондриальной ДНК и У хромосомы у больных с нарушением сперматогенеза

В соответствии с целью исследования были поставлены следующие задачи:

1 Определить спектр и частоты микроделеций А2Р региона У хромосомы у больных с нарушением сперматогенеза и в контрольной группе фертильных мужчин

2. Провести анализ гено-фенотипических корреляций у больных с разной степенью тяжести нарушения сперматогенеза

3 Исследовать и Ь2/Ь3 частичные делеции АгРс субрегиона у больных с нарушением сперматогенеза и в группе контроля

4 Провести анализ распределения частот гаплогрупп У хромосомы у больных с нарушением сперматогенеза и в контрольной группе

5 Провести анализ распределения частот гаплогрупп мтДНК у больных с нарушением сперматогенеза и в контрольной группе

Научная новизна. Впервые проведен анализ спектра и частот микроделеций А'/.Р региона У хромосомы у больных с нарушением

4

сперматогенеза татарской, русской и башкирской этнической принадлежности Впервые выявлена ассоциация частичной делеции

субрегиона с кластером N У хромосомы у мужчин русской, татарской и башкирской этнической принадлежности Впервые выявлено, что гаплогруппа ШЬЗ У хромосомы является маркером пониженного риска нарушения сперматогенеза у мужчин башкирской этнической принадлежности Впервые выявлена ассоциация гаплогруппы С мтДНК с нарушением сперматогенеза у башкир Впервые обнаружено, что гаплогруппа Т мтДНК у лиц башкирской этнической принадлежности и гаплогруппа V мтДНК у мужчин татарской этнической группы являются факторами пониженного риска нарушения сперматогенеза

Научно-практическая значимость. Полученные данные позволяют расширить представление о молекулярно-генетических механизмах развития нарушения сперматогенеза Исследование микроделеций региона У хромосомы может быть использовано в практике урологов и андрологов для выявления генетически обусловленного бесплодия Анализ гаплогрупп У хромосомы и мтДНК может применяться для определения лиц с повышенным или пониженным риском развития нарушения сперматогенеза и проведения досимптоматической профилактики заболевания. Результаты исследования могут быть использованы при чтении курсов медицинской генетики на биологических факультетах университетов, в медицинских ВУЗах и на курсах повышения квалификации медицинских работников

Положения, выносимые на защиту:

1 Частота и спектр микроделеций региона У хромосомы у больных с нарушением сперматогенеза

2 Частота и спектр микроделеций КТР региона У хромосомы у больных с олигозооспермией тяжелой степени, с азооспермией и у больных с другими формами патозооспермии

3 Ассоциация §г/|»г делеции АТЯс субрегиона с N гаплогруппой У хромосомы у мужчин татарской, русской и башкирской этнической принадлежности

4 Пониженный риск нарушения сперматогенеза у башкир - носителей гаплогруппы ГПЬЗУ хромосомы

5 Ассоциация гаплогруппы С митохондриальной ДНК с нарушением сперматогенеза у башкир

6 Пониженный риск нарушения сперматогенеза у лиц башкирской этнической принадлежности с гаплогруппой Т мтДНК и у мужчин татарской этнической группы с гаплогруппа V мтДНК

Апробация работы. Результаты исследования были представлены на 10-й Пущинской Школе - Конференции молодых ученых, посвященной 50-летию Пущинского научного центра РАН «Биология - наука XXI века» (Пущино, 2006), Девятой Всероссийской медико-биологической конференции молодых исследователей «Человек и его здоровье» (Санкт-Петербург, 2006), на Ежегодных конференциях Европейского общества генетиков человека (Амстердам, 2006, Ницца, 2007), на 31-ом Конгрессе Федерального Европейского общества биохимиков «БЕВЗ» (Стамбул, 2006), Школе молодых ученых им Вавилова «Актуальные проблемы современной генетики» (Москва, 2006), XVI международной конференции РАРЧ "Вспомогательные репродуктивные технологии сегодня и завтра 20 лет ЭКО в России" (Ростов-на-Дону, 2006), Международном конгрессе андрологов (Сочи, Дагомыс, 2007)

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 10 работ. Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов исследования и обсуждения, заключения, выводов и списка литературы Работа изложена на страницах машинописного текста, содержит 32 таблицы и 47 рисунков Список литературы включает 20} источников

Материал исследования. В качестве материала для молекулярно-генетического анализа были использованы образцы ДНК, полученные от 140 неродственных больных с нарушением сперматогенеза из разных регионов России (Республики Башкортостан, Чеченской республики, Северной Осетии - Алании) и Казахстана Подавляющую часть созданного банка ДНК (62%) составляет ДНК пациентов, обратившихся в Центр планирования семьи и репродукции с медико-генетическим консультированием при Республиканском перинатальном центре (г Уфа), с диагнозом первичное бесплодие Критерием отбора больных явились показатели

6

спермиологического анализа, учитывающие количество, морфологию и подвижность сперматозоидов Спермиологический анализ эякулята был выполнен по стандартной методике, рекомендованной ВОЗ (WHO, 1992, 1999) Контрольная группа состояла из 304 здоровых (фертильных) мужчин, имеющих потомство В ее состав вошли 102 человека татарской этнической принадлежности, 101 - русской этнической группы, 101 - башкирской этнической принадлежности

Методы исследования. Выделение ДНК проводили методом последовательной фенольно-хлороформной экстракции из цельной венозной крови (Mathew, 1984) Для обнаружения микроделеций применяли мультиплексную полимеразную цепную реакцию (ПЦР) согласно руководству, предложенному Simoni и соавт [Simoni et al, 1999] В работе были использованы 9 пар праймеров, позволявших исследовать следующие 7 Y-специфичных маркеров для AZF-локуса (по Simoni соавт (1999), оптимизированные Черных и соавт (2002) для субрегиона AZFa sY 86, sY 84, sY 615, субрегиона AZFb sY 127, sY 134; для субрегиона AZFc sY 254 (DAZ), sY 255 (DAZ) Кроме того, в качестве "внутреннего" контроля на присутствие в геномной ДНК фрагментов короткого плеча Y —хромосомы использовали два маркера SRY и ZFY - что позволяло выявить наличие даных локусов и определить сответствие фенотипического пола генотипическому В качестве "внешнего положительного" контроля использовали ДНК фертилыюго мужчины Исследование gr/gr делеций длинного плеча Y хромосомы проводилось с помощью мультиплексной полимеразной цепной реакции с использованием трех пар праймеров, две из которых были Y-специфичными маркерами sY 1191 и sY 1291 [Repping S et al, 2002], третья Fbn 63 - служила внутренним контролем Анализ диаллельных маркеров нерекомбинирующей области Y-хромосомы проводился по следующим 18 локусам М9, М89, YAP (Ml), М35, М130, 12f2, М172, М170, М231, Tat(M46), P43, M20, M175,92R7, M207, M306, SRY 1532, M269 методом ПЦР-ПДРФ анализа с помощью праймеров, предложенных рядом исследователей (Hammer М F and Horai S 1995, Whitfield L S et al, 1995, Underhill PA et al, 1997, Bergen AW et al, 1999, Shen P et al, 2000, Cruciam F et al, 2002, "The Y chromosome consortium" (YCC), 2002] Анализ мутаций в кодирующем регионе мтДНК, ассоциированных с гаплогруппами проводился

методом ПЦР-ПДРФ анализа с использованием следующих сайтов, специфичных для большинства европейских и азиатских популяций +663 НаеШ, -13259 HincII, -5176 AluI, +4732 Rsal, -7025 AluI, -4529 Haell, +4216 Nlalll, -13704 BstNI, +12308 Hmfl, -4577 Nlalll, +7933 Mbol, -9052 Haell

Статистическая обработка полученных результатов. Математическую обработку результатов исследования проводили с помощью пакета программ статистического анализа Statistica ver 6 0 (StatSoft, Inc, 2003) и Microsoft Excel 2003 Вычисление показателей отношения шансов (Odds Ratio) проводили с использованием интерактивной таблицы сопряженности 2x2 с вычислением статистик связи, а также их доверительных интервалов (с поправкой Иэйтса на непрерывность), разработанной В П Леоновым (http //www biometrica tomsk ru/) В случае, когда ожидаемое число наблюдений в одной из ячеек было меньше пяти, использовали точный двухсторонний критерий Фишера (Гланц,1999) РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ Анализ микроделеций AZF региона Y хромосомы Одной из наиболее частых генетических причин тяжелой степени олигозооспермии и азооспермии являются микроделеции Y хромосомы Такие микроделеции, ассоциированные с бесплодием, происходят в специфическом регионе длинного плеча Y хромосомы, который был назван регионом «фактора азооспермии» (AZF) и было выделено три неперекрывающихся субрегиона, получившие названия AZFa, AZFb и AZFc

У всех пациентов с нарушением сперматогенеза был проведен анализ AZF локуса длинного плеча Y хромосомы У 15 из 140 больных были обнаружены различные типы микроделеций, т.е частота их оказалась равна 10,7% Результаты, полученные в нашем исследовании, сходны с данными по частоте микроделеций в среднем в азиатских популяциях - 11,7% [Kim S W et al, 1999, Fujisawa et al, 2001; Carvalho et al, 2004] Подавляющее большинство делеций (93%) было выявлено в татарской, русской, башкирской и казахской этнических группах, составляющих 81% от общей выборки больных (рис 1) В группе больных с нарушением сперматогенеза татарской этнической принадлежности частота делеций AZF локуса составила 8,7%, что соответствует средней частоте микроделеций в

европейских популяциях [Qureshi et aL 1996; Peterlin В. et al,, 1997; Dohle et a!., 2002]. У лиц, принадлежащих к русской этнической группе, это значение оказалось равно 6,7% и сходно с таковыми у больных с бесплодием из Нидерландов, Испании, Словении, но ниже, чем у больных из Москвы, что, видимо, связано с этнической неоднородностью выборки (рис.2) [Черных В.Б. и др., 2003; Kremer J.А. et al., 5997; Peteräin В. et at., 1997; 2002; Oliva R. et al., 1998; Martinez et aL, 2000; Dohle et aL, 2002].

башкиры

русские

татары

т

_L

....... • ■

■

7х

0%

«0%

100%

20% 40% 60%

■ С 1И1*срчЯГЛеЦНЯНИ □ вс! М"К|И11Г.1СЛН1Г

Рис.1. Частота микроделеций А2Р региона V хромосомы в четырех этнических группах больных с нарушением сперматогенеза.

Гораздо более высокими были частоты в башкирской и казахской группах - 17,4% и 25%, соответственно, т.е. близкими к частотам микроделеций у больных с нарушением сперматогенеза из Японии, Израиля, Кореи [Nagafuchi el aL, 1993; Kobayashi К. et al., 1994; Nakohori t aL, 1996; Shirakawa et aL, ¡997; Kim S.W. et aL, 1999; Fujisawa et aL, 2001; Carvalho et aL, 2004].

Полученные нами данные являются закономерными как по антропологическим характеристикам этих популяций, так и подтверждаются ранее проведенными нами исследованиям ядерного и мнтохондриальиого геномов, где было обнаружено, что популяции татар и русских более европеоидны по сравнению с популяциями башкир и казахов [Хуснутдинова Э.К. и др., 1999а; 19996].

Рис. 2. Частоты микроделеций региона У хромосомы у мужчин с

бесплодием в различных странах мира

При сравнении частот микроделеций региона У хромосомы в

разных этнических группах достоверных различий обнаружено не было, т.к. уровень значимости во всех случаях не достигал порогового значения (Р>0,05), Но, наши результаты показали, что частота микроделеций в два с половиной раза выше у больных башкирской этнической принадлежности по сравнению с группой больных русской этнической принадлежности и в два раза выше - по сравнению с соответствующей группой татарской этнической принадлежности. Частота микроделеций \7.¥ локуса у больных казахской этнической принадлежности выше более чем в три раза по сравнению с таковой у больных татарской и русской этнических групп, и близко к таковому у больных башкирской этнической принадлежности, что, возможно, связано с общим этногенезом этих народов [Кузеев и др., 1975].

Таким образом, полученные нами результаты о частоте микроделеций AZF региона У хромосомы у больных с нарушением сперматогенеза различной этнической принадлежности не исключают вероятности существования популяционных различий, связанных с географическими, либо с этногенети чески ми особенностями больных с бесплодием.

В общей выборке больных были выявлены несколько типов микроделеций локуса Агр длинного плеча У хромосомы. Наиболее

распространенным типом оказалась деления АЕРс субрегиона, ее частота составила 66,7% среди числа обнаруженных делений или 7,14% среди всех больных с нарушением сперматогенеза Следующей по распространенности в нашей работе явилась частичная деления всех субрегинов АХ? локуса -АгРа+Ь+с (13,2%), или 1,42% для общей выборки Остальные типы делений АгРа+с, А7РЫ-с, АХ¥Ъ имели одинаковую частоту - 6,7%, для выборки больных в целом - 0,71% (табл 1)

Таблица 1

Спектр микроделеций А7Р региона длинного плеча У хромосомы у больных с нарушениями сперматогенеза

Характер нарушения Количество (%)

Общее количество делеций АХР локуса 15 100

Микроделеции АХРа+Ь+с - субрегионов 2 13,2

Микроделеции АЙРа+с - субрегионов 1 6,7

Микроделеции АХ¥Ь+с - субрегионов 1 6,7

Микроделеции АХРЬ - субрегиона 1 6,7

Микроделеции А/.Рс - субрегиона 10 66,7

Спектр делеций, полученный в результате нашего исследования, в целом сходен с мировой картиной распространения делеций отдельных субрегионов, а также делеций, захватывающих два или три субрегиона У хромосомы

При разделении общей выборки больных по степени тяжести нарушения сперматогенеза нами было выделено три группы В первой группе пациентов с азооспермией (I группа) делеции были найдены у девятерых из 80 человек, частота их составила 11,6% (рис 3), что согласуется с литературными данными и близко к таковым у больных с азооспермией из Москвы [Черных В Б и др, 2003] Наиболее частой среди них оказалась микроделеция А2Рс субрегиона (9,1%), микроделеции субрегионов АгИа+с и АХ^Ь встретились с одинаковой частотой (1,3%) Частота делеции А2Ра+с у разных авторов описывается как очень низкая, такой тип делеции встречается даже реже микроделеций Агра субрегиона [КгаиБг С ^ а1, 2003] В нашей работе, напротив, не было обнаружено ни одного случая делеции только

AZFa региона, lio второй группе больных с олигозооспермией тяжелой степени делении были обнаружены у шестерых из 49 пациентов, здесь частота также оказалась равна 12%, что несколько выше среднемирового уровня и близко к частоте микроделеций у больных с олигозооспермией тяжелой степени из Японии и Италии [Nagafuchi et al.,1993; Kobayashi et al., 1994; NaJíahori el al., 1996; Stuppia L. et ai., 1996; Grimaldi P, et al., 1998; Foresta C. et al., 1999; Krausz C. et al., 2003]. В этой группе наиболее распространенными оказались микроделеции AZFc субрегиона (6,3%). Чуть реже обнаружились делении AZFa+b+c субрегионов (4,2%). По литературным данным, при частичных микроделециях всех трех субрегионов AZF локуса, в 100 % случаев у пациентов наблюдалась азооспермия [Vogt Р., 1996; Krausz С, 2000., 2000: Foresta С. et al., 2001]. В нашем исследовании такие микроделеции были обнаружены у пациентов с олигозооспермией тяжелой степени. Это можно объяснить либо неточностью спермиологического анализа, либо существованием гонадного мозаицизма.

Также в группе с олигозооспермией была выявлена микроделеция AZFb+c субрегионов, ее частота составила 2,1%.

азооспермия олигоэоосперыия

■ АЛ=а+с □ А2=с □ АгрЬ а АгРЬ+с г А2Ра+ь+е

Рис, 3. Спектр микроделеций AZF региона У хромосомы у мужчин с бесплодием в зависимости от степени нарушения сперматогенеза.

В третьей группе больных, куда вошли больные с числом сперматозоидов, превышающим 5 млн./мл. эякулята, но имеющие патологию морфолога чес кик или количественных признаков, микроделеций обнаружено не было. По литературным данным, у больных с другими формами патозооспермии микроделеция выявляются с частотой от 0 до 2%,

что подтверждается нашими исследованиями [Foresta et al, 2001, Krausz С et al, 2000, 2003] В группе контроля фертильных мужчин, состоящей из 300 человек, микроделеции не были выявлены

Подводя итог, можно сказать, что частота микроделеций в исследованной нами выборке больных с нарушением сперматогенеза незначительно отличается от распространенности данной мутации в среднем <в популяциях мира, где это значение составляет 7,5% Распространенность делений в башкирской (17,4%) и казахской (25%) этнических группах значительно выше частот микроделеций в татарской (8,7%) и русской (6,7%) этнических группах, но статистической значимости эти различия не достигают Частоты делеций в группах с азооспермией и олигозооспермией тяжелой степени сходны со среднемировыми частотами

Анализ частичных делеций AZFc субрегиона длинного плеча Y хромосомы у больных с нарушением сперматогенеза и в контрольной

группе

AZFc субрегион Y хромосомы является крайне нестабильным участком В связи с его особенностью для него характерны несколько видов частичных делеций Наиболее распространенными являются gr/gr, Ь2/Ь3 и Ы/ЬЗ делеции Gr/gr делеция, по данным некоторых авторов, ассоциирована с мужским бесплодием [Giachini et al, 2005] При этом виде делеции теряются несколько копий многокопийных генов, экспрессирующихся исключительно в тестикулярной ткани Отсюда следует предположение о потенциально возможном угнетении репродуктивной функции у мужчин в результате уменьшения дозы генов AZFc субрегиона

Нами был проведен анализ частот частичных делеций AZFc субрегиона длинного плеча Y хромосомы Пациентов с обнаруженными микроделециями AZF локуса мы исключили из данного анализа В результате чего, общая выборка больных с нарушениями сперматогенеза для анализа частичных делеций составила 125 человек В группе контроля было исследовано 304 человека башкирской, татарской и русской этнической принадлежности

Среди проанализированных 429 человек мы обнаружили два типа частичных делеций AZFc субрегиона - это gr/gr и Ь2/Ь3 делеции Частота gr/gr в общей изученной группе составила 0,17 (74/429), а частота Ь2/Ь3 делеции - 0,007 (3/429) Оба типа частичных делеций были обнаружены и

среди больных с нарушением сперматогенеза, и среди фертильных мужчин. При сравнении частот gr/gr делеции в группе больных она составила 0,19, в группе контроля - 0,17 (р > 0,05). Частота Ь2/Ь3 делеции в группе больных была равна 0,02, и контрольной группе - 0,003 (р > 0,05). Таким образом, различия между общей выборкой больных с бесплодием и контрольной группой оказались статистически не достоверными.

Попарное сравнение групп больных с нарушением сперматогенеза башкирской, русской и татарской этнической принадлежности с соответствующими группами контроля не выявило статистически значимых различий в распространении частот делений (рис.4).

татары башкиры русски*

Я больны» □ юитропь

Рис. 4. Частота gc/gr делений AZFc субрегиона Y хромосомы у больных с нарушением сперматогенеза и в контрольной группе фертильных мужчин в трех этнических группах.

Частота делеции в группе больных с азооспермией составила 20%, у больных с олигозооспермией тяжелой степени - 16% (рис.5), В группе больных с нарушением сперматогенеза и количеством половых kjacvok > 5 млн./мл, не было обнаружено ни gr/gr, ни Ь2/Ь3 делений. В контрольной группе фертильных мужчин частота gr/gr делеции составила 17%. При сравнительном анализе частот делеций в группах больных, дифференцированных по степени тяжести нарушения сперматогенеза, с группой контроля, статистически достоверных различий обнаружено не было (р > 0,05).

О дг/дг делеции о без делений

Рис.5. Распределение частот gг/gг делений кЪУс субрегиона У хромосомы у больных с разными тинами нарушения сперматогенеза

Таким образом, не выявлены ассоциации делений с тяжелыми формами нарушения сперматогенеза. Возможно, частичные делеции А2Рс субрегиона длинного плеча У хромосомы приводят к более легким формам нарушения сперматогенеза, не сопровождающимися инфертильностью. Так как понятие «фертильность» не является синонимом нормозооспермии, можно предположить, что у фертильных мужчин из группы контроля с цг^г делениями количество половых клеток было ниже нормы, но достаточно для оплодотворения.

Анализ гаплогрунн V хромосомы у больных с нарушением сперматогенеза

Хотя микроделеции У хромосомы являются наиболее частыми генетическими причинами олигозооспермии и азооспермии, у значительного количества пациентов с идиолатическим бесплодием У хромосома имеет полноценные размеры. Существует предположение, что такие индивиды могут быть носителями перестроек нуклеотидной последовательности, не обнаруженных микроделеций или вариантов последовательности нерекомбинирующей области У хромосомы, ассоциированных с нарушением сперматогенеза. В последнее время появились исследования, где были выявлены ассоциации между гаплогруппами У хромосомы и нарушением сперматогенеза различной степени тяжести [Ргеуйеге С. е! а1., 1999; Кигок!

15

Y et al, 1999, Krausz С et al, 2001, Paracchini S et al, 2002] Как известно, распределение гаплогрупп Y хромосомы специфично для каждой популяции мира, вследствие чего не уместно ожидать, что фенотип, в нашем случае нарушение сперматогенеза, ассоциированный с определенной гаплогруппой

Y хромосомы в одной популяции, будет ассоциироваться с той же гаплогруппой в другой популяции мира И, наоборот, отсутствие ассоциаций в одной популяции не является доказательством отсутствия такового в какой-либо другой популяции [McElreavey К et al, 2006]

Нами был проведен анализ гаплогрупп Y хромосомы у мужчин с бесплодием и в контрольной группе Гаплогруппы были определены у 133 человек с нарушением сперматогенеза и 303 фертильных мужчин Определение гаплогрупп проводилось путем анализа медленно мутирующих бинарных маркеров MSY региона У двоих пациентов с бесплодием гаплогруппы не были определены, т к в результате обширных микроделеций были делегированы бинарные маркеры, используемые для идентификации гаплогрупп.

У больных с нарушением сперматогенеза, как и в контрольной группе фертильных мужчин было выявлено 13 гаплогрупп и 3 кластера Y хромосомы С наиболее высокой частотой и в группе контроля, и больных с нарушением сперматогенеза была обнаружена гаплогруппа Ria

У лиц татарской этнической принадлежности наиболее часто встречались гаплогруппы Ria (25%), Rlb3 (15%), I (12%), тогда как у индивидов башкирской этнической группы значительно преобладала гаплогруппа Rlb3 (43%) и Ria (24%) В контрольной группе фертильных мужчин русской этнической принадлежности с наиболее высокой частотой обнаружена гаплогруппа Ria (42%), второй по частоте была гаплогруппа N3 (21%)

Статистически значимые различия выявлены при сравнении групп контроля башкирской и русской этнической принадлежности для пяти гаплогрупп (Ria, Rib, Rlb3, I, N3) Группы контроля татарской и русской этнической принадлежности достоверно различались по распределению частот гаплогрупп Ria и Rlb3 Индивиды из групп контроля башкирской и татарской этнической принадлежности достоверно отличались друг от друга только по частоте гаплогруппы Rlb3 У хромосомы (рис 6)

Рис.6. Распределение частот гаплогрупп У хромосомы в группах контроля, дифференциированных по этническому признаку

В результате исследования обнаружено, что гаплогруипа Я1ЬЗ является маркером пониженного риска нарушения сперматогенеза у индивидов башкирской этнической принадлежности (рис.7).

□тарыЯруссшв

45%

О контроль в больные

ТйТЛрЫ

башкиры русские

Рис. 7. Распределение частоты Я1ЬЗ гаплогруппы У хромосомы среди групп больных с нарушением сперматогенеза и контроля.

Анализ частот гаплогрупп У хромосомы у больных с нарушением сперматогенез!« и в контрольной группе, несущих частичные делении ЧХГс субрегиона длинного плеча У хромосомы

Проведен анализ гаплогрупп У хромосомы у носителей вг/зг делений А2¥с субрегиона У хромосомы как у больных с нарушением сперматогенеза, так и в контрольной труппе. С подавляющей частотой в обеих исследуемых группах обнаружен кластер N. при сравнении которого со всеми остальными гаплогруппами в сумме в группе больных (х =24,38; сИМ; р=0,0005,) и в группе контроля (х2=43,62; (ИМ; р=0,0005,) различия явились статистически достоверными (рис. 8).

Нта Р'

езь с к* и*

n2 n3

ОТ5 10% 30% 4У+ 60% 70%

■ борный и *.01ГТР0ГЬ

Рис. 8. Распределение частот гапло групп У хромосомы у носителей делеций в группе больных с нарушением сперматогенеза и в контроле

Возможно, полученный нами результат относительно gr/gг делении, можно объяснить существованием компенсаторной мутации, ассоциированной с кластером N. при которой сокращается, но не нейтрализуется полностью вредное воздействие gr/gг делеции.

Анализ частот гаплогрупп У хромосомы у больных с нарушением сперматогенеза, несущих микродслеции AZF региона

Проведен анализ гаплогрупп У хромосомы у пациентов с микроделециями AZF локуса. Гаплогруппы были определены в двенадцати случаях из пятнадцати, т.к. у трех пациентов с обширными делециями AZF региона были делегированы маркерные локусы, используемые при анализе гаплогрупп (рис.9).

N3: 20%

ГЯ1111 Mö опред: 20%

F*; 7%

r1a; 33%

К*;

С; 13%

Рис. 9. Распределение частот гаплогрупп У хромосомы у больных с микроделециями AZF локуса

С наиболее высокой частотой (33%) среди больных с обнаруженными микроделециями AZF региона длинного плеча У хромосомы вне зависимости от этнической принадлежности была определена гаплогруина Y хромосомы Ria.

В результате нашего исследования ассоциаций гаплогрупп У хромосомы с микроделециями AZF региона не выявлено.

Анализ частот гаплогрупп мтДНК у больных с нарушением сперматогенеза и в контрольной группе,

Вопрос о влиянии митохондриального генома на мужскую фертильность начал изучаться недавно. При исследовании ассоциаций гаплогрупп мтДНК с некоторыми формами нарушения сперматогенеза выявлен повышенный риск развития астенозооспермии или олигозооспермии у носителей гаплпгрушты Т [Rnis-Pesini etaL, 2000].

В своей работе мы провели анализ гаплогрупп мтДНК у больных с разной степенью нарушения сперматогенеза и у фертильных мужчин. Гаплогруппы мтДНК были определены у 373 человек, среди которых было 2 54 мужчин с бесплодием я 259 человек с нормальным статусом фертильности.

У больных с нарушением сперматогенеза, как и в группе контроля было выявлено 10 гаплогрупп и 1 кластер митохондриальной ДНК, С наиболее высокой частотой и в группе контроля, и больных с нарушением сперматогенеза была обнаружена гапл о группа Н и кластер UK. С высокой частотой среди больных с нарушением сперматогенеза была выявлена гаплогруппа С мтДНК у пациентов башкирской этнической принадлежности

(28%). При сравнении полученного значения с частотой в башкирской группе контроля мы получили статистически достоверные различия (X2 =5,82; (ИИ; р=0,02: ОК-6,15, 95%С1 1,3-29,59) (рис. 10).

татары

СЖ=б,15 башкиры

40* Ж* 30* 25* 20* 15* 10* 5*

- • %

1

1 ж

□ больные ■ контроль

И ЦК А С О Р

^ Т V

Рис. 10. Распределение частот гаплогрупп мтДНК у больных с нарушением сперматогенеза и в контроле.

V больных татарской и русской этнической принадлежности частота данной гаплогруппы не превышала пяти процентов и незначительно отличалась от распространения гаплогруппы С в соответствующей группе контроля.

Высокого значения достигла частота гаплогруппы V мтДНК в группе контроля татарской этнической принадлежности (12%). В общей популяции татар данная гаплогруппа была обнаружена с частотой 3,9%, полученные нами данные превысили это значение более чем в три раза [ВегтЬЬеуа М., 2002]. 11ри сравнительном анализе частоты гаплогруппы V в группе контроля татарской этнической принадлежности и популяционных данных различия

достигли статистически значимых значений (/2=5,2; 1; р-0,02; (Ж=0,31, 95%С1 0,11-0,87) (рис. 11),

башюфы /

русски«

Щ ПОПУЛЯЦИЯ (□ КОИтроЛЬ

Рис. 11. Распределение частот гаплогрупп мтДНК у ферт ильных мужчин башкирской, татарской, русской этнических групп и а соответствующих популяциях.

На основании полученных результатов можно сделать вывод, что гаплогруппа V у индивидов татарской этнической принадлежности является фактором пониженного риска нарушения сперматогенеза. У лиц русской этнической принадлежности частота данной гашюгруппы составила всего 3%, что согласуется с литературными данными (2%) [Морозова, 2007; Ма1уагсЬик е1 а1., 2001; 2004]. В башкирской этнической группе контроля данная гаплогруппа не была обнаружена.

Гаплогруппа Т в группе контроля башкирской этнической принадлежности, по сравнению с популяцией, обнаружена в три раза чаще (X2 =9,92; с11=1; р-0,003, <Ж=0,37, 95%С1 0,16 - 0,89) (рис.11). Вследствие чего, можно сделать вывод, что гаплогруппа Т является фактором пониженного риска нарушения сперматогенеза у индивидов башкирской этнической принадлежности. Частоты гаплогруппы Т в группах контроля татарской и русской этнической принадлежности от популяиионных данных отличались незначительно.

Таким образом, в результате сравнительного анализа частот гаплогрупп мтДНК у больных с нарушением сперматогенеза и фертильных мужчин башкирской, русской и татарской этнических групп показано, что у индивидов башкирской этнической принадлежности с гаплогруппой С увеличен риск развития нарушения сперматогенеза по сравнению с контрольной группой фертильных мужчин Гаплогруппа Т мтДНК у лиц башкирской этнической принадлежности и гаплогруппа V мтДНК у мужчин татарской этнической группы являются факторами пониженного риска нарушения сперматогенеза Предположение о существовании ассоциации нарушения сперматогенеза с гаплогруппой Т, выдвинутое Ниш-Ревни и соавт , в нашем исследовании не подтверждается

ВЫВОДЫ.

1 Частота микроделеций АЪ¥ региона У хромосомы у больных с нарушением сперматогенеза составила 10,7% У больных татарской и русской этнической принадлежности их частоты (8,7% и 6,7%) сходны с таковыми в европейских популяциях, у башкир и казахов (17,4% и 25%) -близки к азиатским популяциям

2 У больных с олигозооспермией тяжелой степени частота микроделеций АХ¥ региона У хромосомы составила 12,2%, у больных с азооспермией -11,2% Микроделеции не обнаружены у больных с другими формами патозооспермии

3 Частота микроделеций АХТс субрегиона составила 66,7%, АгГа+Ь+с -13,2%, АгРЬ, АгРа+с, АгРЬ+с - по 6,7% среди всех обнаруженных микроделеций 1

4 У мужчин татарской, русской и башкирской этнической принадлежности обнаружена ассоциация делеции А7.¥с субрегиона с N кластером У хромосомы и не обнаружена ассоциация с нарушением сперматогенеза

5 Генетическим маркером пониженного риска нарушения сперматогенеза у башкир является ШЬЗ гаплогруппа У хромосомы

6 Гаплогруппа С мтДНК ассоциирована с нарушением сперматогенеза у башкир Гаплогруппа Т мтДНК у лиц башкирской этнической принадлежности и гаплогруппа V мтДНК у мужчин татарской этнической группы являются факторами пониженного риска нарушения сперматогенеза

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1 Islamova А А , Khusainova R I, Akhmetov R F , Shimkov О S , Mushmova A R, Khusnutdinova E К Analysis of AZF microdeletions in infertility males //Abstracts of European Human Genetics Conference. Amsterdam 2006 European Journal of Human Genetics -V14-P313

2 Islamova A A , Khusainova RI, Khusnutdinova E К AZF region microdeletions of Y chromosome are one the most frequent causes of spermatogenesis abnormality //Abstracts of European Human Genetics Conference Nice 2007 European Journal of Human Genetics -V 15 -P 345

3 А А Исламова, Р.И. Хусаинова, P Ф. Ахметов, О С Шимков, Э К Хуснутдинова Скрининг микроделеций AZF локуса Y хромосомы у мужчин с нарушением сперматогенеза //Сб научн работ «Естествознание и гуманизм» - Томск ,2005 - Т 2, №4 - с 51-52

4 Исламова А А, Хусаинова P И, Ахметов Р Ф, Шимков О С, Муслимова A P , Хуснутдинова Э К Анализ микроделеций AZF локуса Y хромосомы у мужчин с нарушением сперматогенеза // Сборник научных трудов Международной научно-практической конференции "Биологические науки в XXI веке Проблемы и тенденции развития ", часть 1, ISBN 5-86607253-Х - Бирск, 2005 -с 4-7

5 Исламова А. А, Хусаинова P И, Ахметов Р Ф, Шимков О С , Муслимова A P , Хуснутдинова Э К Анализ микроделеций AZF локуса Y хромосомы у мужчин с бесплодием //Тезисы докладов 10 Путинской школы-конференции молодых ученых «Биология - наука XXI века» -Пущино, 2006 - с 141

6 Исламова А А, Кутуев И А Анализ ассоциации нарушения сперматогенеза с гаплогруппами Y хромосомы //Тезисы докладов научно-практической конференции «Человек и его здоровье» - Санкт-Петербург, 2006-с 131-132

7 Исламова А.А , Хусаинова Р И , Кутуев И А , Хуснутдинова Э К Исследование гаплогрупп Y хромосомы у пациентов с нарушением сперматогенеза //Тезисы докладов на Школе молодых ученых им Вавилова «Актуальные проблемы современной генетики» - Москва, 2006 - с 79

8 Исламова А А, Хусаинова P И, Ахметов Р Ф , Шимков О С ,Муслимова А Р , Хуснутдинова Э К Анализ AZF локуса Y хромосомы у мужчин с азооспермией и олигозооспермией тяжелой степени // Тезисы

XVI международной конференции РАРЧ "Вспомогательные репродуктивные технологии сегодня и завтра 20 лет ЭКО в России". - Ростов-на-Дону, 2006 -с 51-52

9 Исламова А А , Хусаинова Р И , Ахметов Р Ф , Шимков О С., Муслимова А Р, Хуенутдинова Э К Анализ маркеров У хромосомы у мужчин с нарушением сперматогенеза // Материалы Международного конгресса андрологов - Сочи, Дагомыс, 2007 - с 65

10 Исламова А А , Хусаинова Р И , Хуенутдинова Э К Роль У хромосомы и митохондриального генома в нарушении сперматогенеза // Молекулярная медицина -2007 -№3-с 29-38.

Благодарности. Автор выражает глубокую благодарность заведующей Центра планирования семьи и репродукции с медико-генетическим консультированием при Республиканском перинатальном центре Муслимовой А Р, врачам - андрологам Ахметову РФ и Шимкову О С, врачу-лаборанту Хабировой 3 X , а также д м н , проф , руководителю лаборатории медицинской генетики РГКП «РНИЦ охраны здоровья матери и ребенка», г. Алматы, Казахстан Святовой Г С за помощь, оказанную при проведении исследований

Отпечатано с готовых диапозитивов в ООО «Принт+», заказ № 117, тираж 110 шт, печать л 2,0, 450054, пр Октября, 71

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Исламова, Айсылу Айратовна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Структура Y хромосомы человека и ее функции.И

1.2. Микроделеции Y хромосомы.

1.3. Частичные делеции AZFc субрегиона.

1.4. Разнообразие гаплогрупп Y хромосомы среди популяций мира

1.5. Исследование гаплогрупп Y хромосомы и мужское бесплодие.

1.6. Структура и функция митохондриального генома.

1.7. Распределение гаплогрупп мт ДНК среди популяций мира.

1.8. Митохондриальный геном и бесплодие у мужчин.

Глава II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

II. 1. Материалы исследования.

11.2. Методы исследования.

11.2.1. Выделение геномной ДНК.

11.2.2. Анализ AZF региона длинного плеча Y хромосомы.

11.2.3. Исследование gr/gi-делеций длинного плеча Y хромосомы

11.2.4. Анализ полиморфизма диаллельных локусов Y- хромосомы

11.2.5. Анализ мутаций в кодирующем регионе мтДНК, ассоциированных с гаплогрупами.

11.3. Статистическая обработка результатов.

Глава III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ

III. 1. Анализ микроделеции AZF региона Y хромосомы.

111.2. Исследование частичных делеций AZFc субрегиона длинного плеча Y хромосомы у больных с нарушением сперматогенеза и в контрольной группе.

111.3. Анализ гаплогрупп Y хромосомы у больных с нарушением сперматогенеза.

III.3.1. Анализ частот гаплогрупп Y хромосомы в группе больных с нарушением сперматогенеза и в контрольной группе.

111.3.2. Анализ частот гаплогрупп Y хромосомы у больных с нарушением сперматогенеза и в контрольной группе, несущих частичные делеции AZFc субрегиона длинного плеча Y хромосомы.

111.3.3. Анализ частот гаплогрупп Y хромосомы у больных с нарушением сперматогенеза, несущих микроделеции AZF региона . . 120 III.4. Анализ частот гаплогрупп мтДНК у больных с нарушением сперматогенеза и в контрольной группе.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Роль Y хромосомы и митохондриального генома в нарушении сперматогенеза"

Актуальность проблемы.

Бесплодием страдает около 15% супружеских пар, при этом, в 45-50% случаев оно связано с «мужским фактором». Приблизительно у 5% мужчин репродуктивного возраста имеются различные отклонения количественных или качественных показателей спермы. Около 1/3 случаев мужского бесплодия относят к так называемому идиопатическому бесплодию, большинство случаев которого может быть обусловлено генетическими факторами, такими как различные нарушения хромосом или мутации в ответственных за сперматогенез генах [Tiepolo L.et al., 1976; Krausz С., et al. 2001].

Тотальное ухудшение качества спермы отразилось в изменении эталонных норм показателей сперматогенеза. Если в 1921 году нормальной считалась концентрация 100 млн. сперматозоидов/мл, пограничной 60 млн./мл, то через 30 лет эта цифра достигла 40 млн./мл, а, согласно Руководству ВОЗ, в 1992 году нижней границей нормальной концентрации сперматозоидов стали считать 20 млн./мл [World Health Organization, 1992]. Поэтому особое значение приобретает выявление факторов мужского бесплодия, диагностика и лечение, особенно, у молодых людей. Причиной генетически обусловленного мужского бесплодия, связанного с нарушением сперматогенеза, в 10-15% случаев являются структурные нарушения Y-хромосомы [Chandley А.С. et al., 1994; Vogt Н. et al., 1996]. Роль Y хромосомы в репродуктивной медицине неоспорима, так как на ней расположен основной детерминирующий пол человека ген SRY (sex-determining region Y) и множество генов, экспрессирующихся при сперматогенезе. Помимо хромосомных аномалий наиболее частой генетической причиной нарушения репродуктивной функции у мужчин являются делеции AZF локуса длинного плеча мужской половой хромосомы [Vogt et al., 1996]. AZF - микроделеции являются причиной нарушения сперматогенеза в 10-15% случаев при азооспермии и в 5-10% при олигозооспермии тяжелой степени.

В последние десятилетия стали придавать большое значение роли мутаций митохондриального генома в развитии заболеваний человека, в том числе и в нарушении сперматогенеза.

Хотя есть и значительные достижения в области исследования генетических причин нарушения сперматогенеза, остается много невыясненных вопросов, касающихся гено-фенотипических корреляций, а также неясно, существуют ли популяционные различия в частоте и распространенности мутаций Y хромосомы и мтДНК у мужчин с бесплодием различной этнической и географической принадлежности.

В последние годы в связи с развитием и внедрением в медицину современных молекулярно-генетических и цитогенетических методов удалось установить генетическую природу ряда форм мужского бесплодия. Продолжающиеся исследования генетических причин нарушения сперматогенеза расширяют возможности в понимании этиопатогенеза данного заболевания, а также способствует проведению более глубокого генетического обследования. Выявление причин бесплодия необходимо для определения прогноза и выбора наиболее эффективного метода лечения.

Цель и задачи исследования.

Целью исследования являлось изучение AZF региона Y хромосомы, анализ гаплогрупп митохондриальной ДНК и Y хромосомы у больных с нарушением сперматогенеза.

В соответствии с целью исследования были поставлены следующие задачи:

1. Определить спектр и частоты микроделеций AZF региона Y хромосомы у больных с нарушением сперматогенеза и в контрольной группе фертильных мужчин.

2. Провести анализ гено-фенотипических корреляций у больных с разной степенью тяжести нарушения сперматогенеза.

3. Исследовать частичные делеции AZFc субрегиона gr/gr и Ь2/Ь3 у больных с нарушением сперматогенеза и в группе контроля.

4. Провести анализ распределения частот гаплогрупп Y хромосомы у больных с нарушением сперматогенеза и в контрольной группе.

5. Провести анализ распределения частот гаплогрупп мтДНК у больных с нарушением сперматогенеза и в контрольной группе.

Научная новизна

Впервые проведен анализ спектра и частот микроделеций AZF региона

Y хромосомы у больных с нарушением сперматогенеза татарской, русской и башкирской этнической принадлежности. Впервые выявлена ассоциация частичной gr/gr делеции AZFc субрегиона с гаплогруппой N Y хромосомы у мужчин Волго-Уральского региона. Впервые выявлено, что гаплогруппа Rlb3

Y хромосомы является маркером пониженного риска нарушения сперматогенеза у мужчин башкирской этнической принадлежности. Впервые выявлена ассоциация гаплогруппы С мтДНК с нарушением сперматогенеза у башкир. Впервые обнаружено, что гаплогруппа Т мтДНК у лиц башкирской этнической принадлежности и гаплогруппа V мтДНК у мужчин татарской этнической группы являются факторами пониженного риска нарушения сперматогенеза.

Научно-практическая значимость

Полученные данные позволяют расширить представление о молекулярно-генетических механизмах развития нарушения сперматогенеза. Исследование микроделеций AZF региона Y хромосомы может быть использовано в практике урологов и андрологов для выявления генетически обусловленного бесплодия. Анализ гаплогрупп Y хромосомы и мтДНК может применятьтся для опеделения лиц с повышенным или пониженным риском развития нрушения сперматогенеза и проведения досимптоматической профилактики заболевания. Результаты исследования могут быть использованы при чтении курсов медицинской генетики на биологических факультетах университетов, в медицинских ВУЗах и на курсах повышения квалификации медицинских работников.

Положения, выносимые на защиту:

1. Частота и спектр микроделеций AZF региона Y хромосомы у больных с нарушением сперматогенеза.

2. Частота и спектр микроделеций AZF региона Y хромосомы у больных с олигозооспермией тяжелой степени, с азооспермией и у больных с другими формами патозооспермии.

3. Ассоциация gr/gr делеции AZFc субрегиона с N гаплогруппой Y хромосомы у мужчин татарской, русской и башкирской этнической принадлежности

4. Пониженный риск нарушения сперматогенеза у башкир - носителей гаплогруппы Rlb3Y хромосомы.

5. Ассоциация гаплогруппы С митохондриальной ДНК с нарушением сперматогенеза у башкир.

6. Пониженный риск нарушения сперматогенеза у лиц башкирской этнической принадлежности с гаплогруппой Т мтДНК и у мужчин татарской этнической группы с гаплогруппа V мтДНК.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Исламова, Айсылу Айратовна

выводы.

1. Частота микроделеций AZF региона Y хромосомы у больных с нарушением сперматогенеза составила 10,7%. У больных татарской и русской этнической принадлежности частота (8,7% и 6,7%) сходна с таковыми в европейских популяциях, у башкир и казахов (17,4% и 25%) - близки к азиатским популяциям.

2. У больных с олигозооспермией тяжелой степени частота микроделеций AZF региона Y хромосомы составила 12,2%, у больных с азооспермией - 11,2% и не обнаружена у больных с другими формами патозооспермии.

3. Частота микроделеций AZFc субрегиона составила 67% среди всех обнаруженных микроделеций.

4. У мужчин татарской, русской и башкирской этнической принадлежности обнаружена ассоциация gr/gr делеции AZFc субрегиона с N гаплогруппой Y хромосомы и не обнаружена ассоциация с нарушением сперматогенеза.

5. Генетическим маркером пониженного риска нарушения сперматогенеза у башкир является Rlb3 гаплогруппа Y хромосомы.

6. Гаплогруппа С мтДНК ассоциирована с нарушением сперматогенеза у башкир. Гаплогруппа Т мтДНК у лиц башкирской этнической принадлежности и гаплогруппа V мтДНК у мужчин татарской этнической группы являются факторами антириска нарушения сперматогенеза.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Вклад генетических факторов в нарушение репродуктивной функции, как у мужчин, так и у женщин в настоящее время оценивается очень высоко. Выявление генетических причин бесплодия является необходимым условием для определения прогноза и тактики лечения заболевания.

В рамках настоящего исследования проведен анализ молекулярно-генетических причин развития нарушения сперматогенеза. Анализ микроделеций AZF региона Y хромосомы показал, что частота микроделеций в исследованной нами выборке больных с нарушением сперматогенеза составила 10,7% и соответствует средним значениям таковых в азиатских популяциях (11,7%). Подавляющее большинство делеций (93%) было обнаружено у больных татарской, русской, башкирской и казахской этнических групп, составляющих 81% от общей выборки больных. В группе больных с нарушением сперматогенеза татарской этнической принадлежности частота делеций AZF локуса составила 8,7%, что соответствует средней частоте микроделеций в европейских популяциях. У лиц, принадлежащих к русской этнической группе, это значение оказалось равно 6,7% и сходно с таковыми у больных с бесплодием из Нидерландов, Испании, Словении, но ниже, чем у больных из Москвы, что, видимо, связано с этнической неоднородностью этой выборки. Более высокими были частоты в башкирской и казахской группах - 17,4% и 25%, соответственно, т.е. близкими к частотам микроделеций у больных с нарушением сперматогенеза из Японии, Израиля, Кореи. Полученные нами данные являются закономерными как по антропологическим характеристикам этих популяций, так и подтверждаются ранее проведенными нами исследованиям ядерного и митохондриального геномов, где было обнаружено, что популяции татар и русских более европеоидны по сравнению с популяциями башкир и казахов.

В общей выборке больных с нарушением сперматогенеза были выявлены несколько типов микроделеций локуса AZF длинного плеча Y хромосомы. Наиболее распространенной оказалась микроделеция AZFc субрегиона, ее частота составила почти 67% среди числа обнаруженных делеций или 7,14% среди всех больных с нарушением сперматогенеза. Следующей по распространенности в нашей работе оказалась частичная делеция всех субрегинов AZF локуса - AZFa+b+c (13%), или 1,42% для общей выборки. Остальные типы делеций AZFa+c, AZFb+c, AZFb имели одинаковую частоту ~ 7%, для выборки больных в целом - 0,71%).

При разделении общей выборки больных по степени тяжести нарушения сперматогенеза нами было выделено три группы. В первую группу были отнесены пациенты с азооспермией, во вторую - с олигозооспермией тяжелой степени, в третью - мужчины с другими формами нарушения сперматогенеза. Частота делеции AZF региона Y хромосомы у больных с азооспермией составила 11,2%. Наиболее частой среди них оказалась микроделеция AZFc субрегиона (9,1%>), микроделеции субрегионов AZFa+c и AZFb выявлены с одинаковой частотой (1,3%). Во второй группе больных с олигозооспермией тяжелой степени частота микроделеций составила 12,2%, что несколько выше среднемирового уровня и близко к частоте микроделеций у больных с олигозооспермией тяжелой степени из Японии и Италии. В этой группе наиболее распространенными оказались микроделеции AZFc субрегиона (6,3%). Чуть реже выявлены делеции AZFa+b+c субрегионов (4,2%).

В третьей группе больных, куда вошли больные с числом сперматозоидов, превышающим 5 млн./мл. эякулята, но имеющие патологию морфологических или количественных признаков, микроделеции обнаружены не были. По литературным данным, у больных с другими формами патозооспермии микроделеции выявляются с частотой от 0 до 2%, что подтверждается нашими исследованиями. В группе контроля фертильных мужчин, состоящей из 300 человек, микроделеции не были обнаружены.

С точки зрения практического значения идентификация микроделеций AZF локуса Y хромосомы важна в плане диагностики, прогнозирования и профилактики мужского бесплодия, хотя специфичного лечения при данной проблеме на сегодняшний день нет. У мужчин с азооспермией с полными микроделециями AZFa или AZFb субрегионов прогноз относительно улучшения показателей спермограммы отрицательный. То же можно сказать про случаи с микроделециями, включающими два или три субрегиона. Для пациентов с олигозооспермией тяжелой степени, несущих делецию AZFc субрегиона, есть большой риск быстрого регрессирования сперматогенеза, приводящего к уменьшению имеющегося количества сперматозоидов. В таких случаях рекомендуется криоконсервация половых клеток, пригодных для дальнейшего проведения ИКСИ (ICSI, Introcytoplasmic Sperm Injection) -одного из методов экстракорпорального оплодотворения путем введения единичного сперматозоида в цитоплазму яйцеклетки.

Среди проанализированных 429 человек выявлено два типа частичных делеций AZFc субрегиона Y хромосомы - это gr/gr и Ь2/Ь3делеции. Частота gr/gr в общей изученной группе составила 0,17, а частота Ь2/Ь3делеции - 0,007 (3/429). Оба типа частичных делеций были обнаружены и среди больных с нарушением сперматогенеза (gr/gr - 0,19), и среди фертильных мужчин (gr/gr -0,17%). Частота Ь2/Ь3делеции в группе больных была равна 0,02, в контрольной группе - 0,003. Таким образом, различия между общей выборкой больных с бесплодием и контрольной группой оказались статистически не достоверными.

Попарное сравнение групп больных с нарушением сперматогенеза башкирской, русской и татарской этнической принадлежности с соответствующими группами контроля также не выявило достоверных различий в распространении частот gr/gr делеций.

При сравнении частот делеций в контрольных группах башкир, татар и русских было обнаружено достоверное различие в распространении gr/gr 2 делеции между башкирами и русскими (% =8,4709, р=0,0045,).

Частота gr/gr делеций в группе больных с азооспермией составила 20%, у больных с олигозооспермией тяжелой степени - 16%. В группе больных с нарушением сперматогенеза и количеством половых клеток > 5 млн./мл. gr/gr и Ь2/Ь3 делеции не были обнаружены. В контрольной группе фертильных мужчин частота gr/gr делеций составила 17%.

Таким образом обнаружены этнические различия по частоте gr/gr делеций AZFc субрегиона Y хромосомы между фертильными мужчинами башкирской и русской этнической принадлежности, при попарном сравнении остальных групп контроля статистически достоверных различий не выявили. Не обнаружено ассоциации gr/gr делеций с тяжелыми формами нарушения сперматогенеза. Возможно, частичные делеции AZFc субрегиона длинного плеча Y хромосомы являются причиной более легких форм нарушения сперматогенеза, не приводя к бесплодию.

Нами был проведен анализ гаплогрупп Y хромосомы у мужчин с бесплодием и в контрольной группе.

У больных с нарушением сперматогенеза было выявлено 13 гаплогрупп Y хромосомы. С наиболее высокой частотой в этой группе (32%) была обнаружена гаплогруппа Rla. С частотой 9% в группе больных была выявлена гаплогруппа С. Данная гаплогруппа охватывает от 25% до 75% мужских линий Центральной и Восточной Азии, и в том числе имеет высокую частоту в популяции казахов. Такая высокая частота этой азиатской гаплогруппы Y хромосомы в нашей исследуемой группе обусловлена наличием пациентов казахской этнической принадлежности. Гаплогруппы I и Rlb3 в группе больных с нарушением сперматогенеза были выявлены с частотой 8% и 7%,соответственно. Частота остальных гаплогрупп (Rib, ЕЗЬ, J*, J2, L, N*, N2, О), выявленных в группе больных, составила 5% и менее.

В контрольной группе фертильных мужчин наиболее частой гаплогруппой Y хромосомы, как и в группе больных с нарушением сперматогенеза оказалась гаплогруппа Rla, ее частота составила 30%. С частотой 21% была обнаружена среди фертильных мужчин гаплогруппа Rlb3. Гаплогруппы I и N3 также показали высокую частоту 11% и 13%, соответственно. Остальные гаплогруппы среди фертильных мужчин были выявлены в пяти и менее процентах случаев.

При сравнительном анализе частот гаплогрупп Y хромосомы в общей выборке больных с нарушением сперматогенеза и в группе контроля достоверные различия были обнаружены для гаплогрупп Rlb3, С и J*. Гаплогруппа Rlb3 оказалась генетическим маркером пониженного риска нарушения сперматогенеза (%2= 12,19, р=0,001, (Ж=0,28, 95%С1 0,12-0,60), а гаплогруппы С и J* были выявлены как потенциальные маркеры риска развития мужского бесплодия (%2 = 11,51 , р=0,002, OR=5,91, 95%С1 1,88-19,68 и р=0,04, х2 = 4,06, OR=4,72, 95%С1 1,03-24,21, соответственно). Полученные результаты мы можем объяснить значительной неоднородностью по этническому признаку общей выборки больных. Достоверные отличия, полученные при анализе распространения частоты гаплогруппы Rlb3 в общей выборке больных с нарушением сперматогенеза и в группе контроля, были достигнуты за счет лиц башкирской этнической группы.

Также значительные различия были выявлены в распределении частот гаплогрупп С и ЕЗЬ у пациентов с бесплодием (7% и 11%) и фертильных индивидов (0% и 3%) русской этнической принадлежности, но статистически

9 9 достоверных значений они не достигли (р=0,06, % =3,55 и р=0,2, % =1,64, соответственно).

У лиц татарской этнической принадлежности сравнительный анализ частот гаплогрупп Y хромосомы достоверных различий не выявил.

Таким образом, в результате исследования нами обнаружено, что гаплогруппа Rlb3 Y хромосомы является маркером пониженного риска нарушения сперматогенеза у индивидов башкирской этнической принадлежности.

Проведен анализ гаплогрупп Y хромосомы у носителей gr/gr делеций, AZFc субрегиона Y хромосомы как у больных с нарушением сперматогенеза, так и в контрольной группе. Преобладающей гаплогруппой как в группе больных, так и контрольной группе оказалась гаплогруппа N3 (57% и 70%, сотвественно). Частота этой гаплогруппы Y хромосомы в выборке больных и контрольной группе не несущих gr/gr делеции составила 2,5% и 0,8%), соотвественно. Различия достигают статистически достоверных значений (% =**** , р = 0, 0005 и %2 = **** , р = 0, 0005). Гаплогруппа N2 оказалась второй по частоте у больных с нарушением сперматогенеза, несущих gr/gr делеции по сравнению с другими гаплогруппами Y хромосомы. В целом, среди носителей gr/gr делеций кластер N встречался с частототой 90% у больных и 83% в контрольной группе, тогда как у больных и у фертильных мужчин без gr/gr делеций частота кластера N составила 3,5% и 2,3%, соотвественно. Различия л достигают статистически достоверных значений (% =102,44; р=0,0005 и л =128,73; р=0,0005), что позволяет говорить нам об ассоциации гаплогруппы N3 и кластера N в целом с gr/gr делецией AZFc субрегиона Y хромосомы. Остальные гаплогруппы Y хромосомы встречались с низкой частотой не превышающей 5%.

Возможно, полученный нами результат относительно gr/gr делеции, можно объяснить существованием компенсаторной мутации, ассоциированной с кластером N, при которой сокращается, но не нейтрализуется полностью вредное воздействие gr/gr делеции.

Проведен анализ гаплогрупп Y хромосомы у пациентов с микроделециями AZF локуса. Гаплогруппы были определены в двенадцати случаях из пятнадцати, т.к. у трех пациентов с обширными делециями AZF региона были делетированы маркерные локусы, используемые при анализе гаплогрупп.

С наиболее высокой частотой (33%) среди больных с обнаруженными микроделециями AZF региона длинного плеча Y хромосомы вне зависимости от этнической принадлежности была определена гаплогруппа Y хромосомы Rla.

В результате нашего исследования ассоциаций гаплогрупп Y хромосомы с микроделециями AZF региона не выявлено.

Проведен анализ гаплогрупп мтДНК у больных с разной степенью нарушения сперматогенеза и у фертильных мужчин.

С наиболее высокой частотой в обеих исследуемых группах выявлена гаплогруппа Н мтДНК. Частота ее составила 30% среди больных с нарушением сперматогенеза и 29% в группе фертильного контроля.

Частота галогруппы D мтДНК в общей выборке больных с нарушением сперматогенеза без дифференциации по этническому признаку составила 0,9%, в контрольной группе - 4%. Различия не достигли статистически достоверного значения (р>0,05).

С достаточно высокой частотой в общих выборках больных и контроля была выявлена гаплогруппа Т мтДНК. У мужчин с бесплодием частота ее составила 10%, в контрольной группе -16%. Гаплогруппа J мтДНК среди пациентов с нарушением репродуктивной функции была обнаружена чаще (9%), чем у фертильных мужчин (7%). Различия статистически достоверного

О о уровня не достигли (х =1,64, р=0,2 для гаплогруппы мтДНК Т, % =0,0005, р=1,005 для гаплогруппы мтДНК J).

С наиболее высокой частотой в группе контроля татарской и русской этнической принадлежности была выявлена гаплогруппа Н, 26% и 40%, соответственно. В группе контроля башкирской этнической принадлежности частота данной гаплогруппы была ниже, чем у татар и русских и составила 21%. По литературным данным, частота гаплогруппы Н мтДНК в популяции татар составляет 31%, в популяции русских достигает 47%, в популяции башкир выявляется с частотой 14%. Полученные нами результаты по частотам этой гаплогруппы в группах фертильных мужчин татарской и русской этнической принадлежности оказались несколько ниже средних популяционных данных, в контрольной группе башкир гаплогруппа Н мтДНК была выявлена с большей частотой по сравнению с общей популяцией, но различия не достигли статистически достоверного уровня (% =3,25, р=0,07,).

Третьей по частоте во всех этнических группах контроля стала гаплогруппа Т мтДНК. Наболее высокой частота данной гаплогруппы была у индивидов башкирской этнической группы (18%), у лиц татарской и русской этнической принадлежности - по 16% и 15%, соответственно.

Гаплогруппа D мтДНК с наибольшей частотой выявлена у фертильных мужчин башкирской этнической группы (7%), тогда как в других этнических группах контроля частота этой гаплогруппы составила лишь 3% и 2%.

Гаплогруппа Т в группе контроля башкирской этнической принадлежности, по сравнению с популяцией обнаружена в три раза чаще {% =9,92, р=0,003, OR=0,37, 95%С1 0,16 - 0,89). Вследствие чего, можно сделать вывод, что гаплогруппа Т является фактором пониженного риска нарушения сперматогенеза у индивидов башкирской этнической принадлежности. Частоты гаплогруппы Т в группах контроля татарской и русской этнической принадлежности от популяционных данных отличались незначительно.

Высокого значения достигла частота гаплогруппы V мтДНК в группе контроля татарской этнической принадлежности (12%). В общей популяции татар данная гаплогруппа была обнаружена с частотой 3,9%, полученные нами данные превысили это значение более чем в три раза. При сравнительном анализе частоты гаплогруппы V в группе контроля татарской этнической принадлежности и популяционных данных различия достигли статистически достоверных значений (х2 =5,20, р=0,02, OR=0,31, 95%С1 0,11-0,87). На основании полученных результатов можно сделать вывод, что гаплогруппа V у индивидов татарской этнической принадлежности является фактором пониженного риска нарушения мперматогенеза. У лиц русской этнической принадлежности частота данной гаплогруппы составила всего 3%, что согласуется с литературными данными (2%) [Морозова, 2007; Malyarchuk et al., 2001; 2004]. В башкирской этнической группе контроля данная гаплогруппа не была обнаружена.

С наиболее высокой частотой среди больных с нарушением сперматогенеза была обнаружена гаплогруппа С мтДНК у пациентов башкирской этнической принадлежности (28%). При сравнении полученного значения с частотой в башкирской группе контроля мы получили статистически достоверные различия (х =5,82, р=0,02, OR=6,15 95%С1 1,329,59). У больных татарской и русской этнической принадлежности частота данной гаплогруппы не превышала пяти процентов и незначительно отличалась от распространения гаплогруппы С в соответствующей группе контроля.

Гаплогруппа J мтДНК у мужчин с бесплодием татарской и русской этнической принадлежности встречалась с почти одинаковой частотой (5% и 4%, соответственно). У пациентов с нарушением сперматогенеза башкирской этнической группы частота гаплогруппы J (28%) была значительно выше по сравнению с группой контроля (8%), но различия не достигли статистически л достоверного уровня (% =3,78, р=0,05).

Ни у одного мужчины с бесплодием татарской, русской и башкирской этнической принадлежности не была обнаружена гаплогруппа D, тогда как в группе контроля частота ее варьировала от 2% у русских до 7% у башкир. Частота гаплогруппы Т у больных трех этнических групп была несколько ниже, чем в соответствующих группах контроля, различия оказались статистически не достоверными (р>0,05).

Гаплогруппа V мтДНК среди больных с нарушением сперматогенеза была обнаружена только в татарской этнической группе, ее частота была в четыре раза ниже по сравнению с группой контроля (3% и 12%), но различия были статистически не достоверными (р>0,05).

Частоты остальных гаплогрупп мтДНК были выявлены у больных с нарушением сперматогенеза ниже пяти процентов и незначительно отличались от соответствующих значений в группах контроля (табл. 31, 32).

Таким образом, в результате сравнительного анализа частот гаплогрупп мтДНК у больных с нарушением сперматогенеза и фертильных мужчин башкирской, русской и татарской этнических групп показано, что у индивидов башкирской этнической принадлежности с гаплогруппой С увеличен риск развития нарушения сперматогенеза. Гаплогруппа Т мтДНК у лиц башкирской этнической принадлежности и гаплогруппа V мтДНК у мужчин татарской этнической группы являются факторами пониженного риска нарушения сперматогенеза. Предположение о существовании ассоциации нарушения сперматогенеза с гаплогруппой Т, выдвинутое Ruis-Pesini и соавт, в нашем исследовании не подтверждается.

Полученные результаты молекулярно-генетических исследований нарушения сперматогенеза могут послужить теоретической и методической основой для разработки и оптимизации молекулярно-генетической диагностики бесплодия у мужчин.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Исламова, Айсылу Айратовна, Уфа

1. Березина Г.М, Святова Г.С, Абдуллаева A.M. и др. Полиморфизм митохондриальной ДНК в казахской популяции // Мед. генетика. 2005. -Т. 4, № 3. - с. 108-113.

2. Бермишева М, Тамбетс К, Виллемс Р, Хуснутдинова Э. Разнообразие гаплогрупп митохондриальной ДНК у народов Волго-Уральского региона России. // Молекуляр. биология 2002 - Т.36 №6 - с. 990 - 1100.

3. Бермишева М.А, Кутуев И108-113.А, Коршунова Т.Ю. и др. Филогеографический анализ мтДНК ногайцев: высокий уровень смешения материнских линий из Восточной и Западной Евразии // Молекуляр. биология. 2004. - Т. 38, № 4. - с. 617-624.

4. Гланц С. Медико-биологическая статистика (пер. с англ.). М.: Практика. 1999.

5. Гоголевская И. К, Гоголевский П.А. Y-хромосома и мужское бесплодие. // Пробл. репрод.-1999.-№ 5.- с. 26-34.

6. М.В. Корякин, А.С. Акопян. Анализ причин мужского бесплодия // Проблемы репродукции 2000 - № 5 - с. 17-25.

7. Кузеев Р.Г. Народы Поволжья и Приуралья. М.: Наука.- 1985. - 308 с.

8. Морозова И. Ю. Дис. на соиск. уч. ст. канд. биол. наук. Полиморфизм митохондриальной ДНК у русских европейской части России. Москва. -2007.

9. Степанов В.А. Этногеномика населения Северной Евразии. Томск: Печатная Мануфактура. 2002. - 244 с.

10. Ю.Степанов В.А. Этногеномика и наследственные основы широко распространенных болезней //Вестник РАМН. 2003. - № 12. - С.85.88.

11. Степанов В.А, Харьков В.Н, Пузырев В.П. Эволюция и филогеография линий Y хромосомы человека. // Вестник ВОГиС. 2006. - Том 10, № 1 -с. 57-73.

12. Сукерник Р.И, Дербенева О.А, Стариковская Е.Б, Володько Н.В, Михайловская И.Е, Бычков И.Ю, Лотт М.Ю, Браун М.Д, Уоллес Д.К. Митохондриальный геном и митохондриальные болезни человека. // Генетика,- 2002.- том 38, №2.- с. 161-170.

13. Хуснутдинова Э.К, Хидиятова ИМ, Викторова Т.В. и др. Анализ полиморфизма ДНК, выявляемого методом геномной дактилоскопии на основе фага М13, в популяциях Волго-Уральского региона // Генетика. -19996. Т. 35,№4. - с. 509-515.

14. Хуснутдинова Э.К, Кутуев И.А, Хусаинова Р.И, Бермишева М, Ахметова B.JI, Виллемс Р. Этногеномика тюркских и финноязычных народов Волго-Уральского региона, Средней Азии и Северного Кавказа.// Мед. генетика 2004 - Т.З №6 - с.259-268.

15. Хуснутдинова Э.К, Кутуев И.А, Хусаинова Р.И, Юнусбаев Б.Б,. Юсупов Р.М, Виллемс Р. Этногеномика и филогенетические взаимоотношения народов Евразии.// Вестник ВОГиС 2006. - Том 10, № 1 -с. 24-40.

16. Черных В.Б, Курило Л.Ф, Поляков А.В. Y-хромосома, AZF -микроделеции и идиопатическое бесплодие у мужчин.// Проблемы репродукции. 2001. - №5. - с. 47-58.

17. Черных В.Б, Курило Л.Ф, Шилейко Л.В, Ширшова Л.С. и др. Анализ микроделеций в локусе AZF у мужчин с бесплодием: совместный опыт исследований. // Медицинская генетика. 2003. - Т. 2. № 8. - с. 367-379.

18. Agulnic A.I. et al. A novel X gene with a widely transcribed Y-linked homologue escapes X-inactivation in mouse and human. // Hum Mol Genet. -1994.-Vol.3.-P. 879-884.

19. Aitken J.R, Marchall J. A. The future of sex. // Nature. 2002. - P. 415-463.

20. Ambasudhan R, Singh K, et al. Idiopathic cases of male infertility from a region in India show low incidence of Y-chromosome microdeletion. //J Biosci 2003 - Vol.28 - P.605-612.

21. Barac L., Pericic M., Klaric I.M., Janicijevic В., Parik J., Rootsi S., Rudan P.

22. Y chromosome STRs in Croatians. // Forensic Sci Int. 2003. - V.138. - №1-3.-P. 127-33.

23. Bergen AW, Wang CY, Tsai J, Jefferson K, Dey C, Smith KD, Park SC, Tsai SJ, Goldman D An Asian-Native American paternal lineage identified by RPS4Y resequencing and by microsatellite haplotyping. //Ann Hum Genet. -1999,-Vol. 63. P.63-80

24. Bertranpetit J. Genome, diversity, and origins: the human Ychromosome as a storyteller. // Proc Natl Acad Sci USA. 2000. - Vol. 97. - P. 6927-29.

25. Blagosklonova O., Fellmann F., Clavequin M.C., Roux C., Bresson J.L. AZFa deletions in Sertoli cell-only syndrome: a retrospective study. //Mol. Hum. Reprod. 2000. - Vol.6 - P. 795-799.

26. Blanco В., Shlumukova M., Sargent C., Jobling M.A., Affara N., Hurles M.E. Divergent outcomes of intrachromosomal recombination on the human

27. Y chromosome: male infertility and recurrent polymorphism. //J Med Genet. -2000.-Vol. 37.-P.752-758.

28. Brandell R.A., Mielnik, A., Liotta, D. et al. AZFb deletions predict the absence of spermatozoa with testicular sperm extraction: preliminary report of a prognostic genetic test.// Hum Reprod. 1998. - Vol. 13 - P. 2812-2815.

29. Calafell F, Underhill P, Tolun A, Angelicheva D, Kalaydjieva L From Asia to Europe: mitochondrial DNA sequence variability in Bulgarians and Turks. //Ann. Hum. Genet. 1996 - Vol.60. - P.35-49.

30. Calogero A.E., DePalma A., Grazioso C., Barone N., Romeo R., Rapazzo G., D'Agata R. Aneuploidy rate in spermatozoa of selected men with abnormal semen parameters. //Hum. Reprod. 2001. - Vol.16. - P. 1172-1179

31. Cann RL, Stoneking M, Wilson AC. Mitochondrial DNA and human evolution. // Nature. 1987. - V. 325. - № 6099. - P.31-6.

32. Carvalho C.M., Fujisava M., Shirakawa Т., Gotoh A., Kamidono S., Freitas Paulo D., et al Lack of association between Y chromosome haplogroups and male infertility in Japanese men. // Am. J. Hum Genet. 2003. - Vol. 116A. -P. 152-8.

33. Carvalho C.M.B., Rocha J.L., Santos F.R., Kleiman S.E., Paz G., Yavetz H. Pena S.D. Y-chromosome haplotypes in azoospermic Israeli men. //Hum. Biol. 2004. - Vol.76 - P. 469-478.

34. Carvalho C., Zuccherato L., Bastos-Rodrigues L., Santos F. Pena S. No association found between gr/gr deletions and infertility in Brazilian males. // Mol. Hum. Reprod. 2006a. - Vol.12, No.4. - P. 269-273.

35. Carvalho C., Zuccherato L., Shirakawa M., Ribeiro-dos-Santos A., Santos S., Pena S., Santos R. Study of AZFc partial deletion gr/gr in fertile and infertile Japanese males. // J. Hum. Genet. 2006b. - V. 51. - P. 794-799.

36. Chandley A.C., Cooke H.J. Human male fertility-Y linked genes and spermatogenesis. // Hum. Mol. Genet. 1994. -Vol. 3. -P. 1449-1452.

37. Chang С., Chen Y.-T, Yeh S.-D, Xu Q, Wang R.-S., Guillou Ft, Lardy H., Yeh S. Infertility with defective spermatogenesis and hypotestosteronemia in male mice lacking the androgen receptor in Sertoli cells. // PNAS 2004. -Vol. 101,№ 18-P. 6876-6881.

38. Cram D.S, Song B, McLachlan R.I., Trounson A.O. CAG trinucleotide repeats in the androgen receptor gene of infertile men exhibit stable inheritance in female offspring conceived after ICSI. //Mol Hum Reprod. -2000. Vol.6. - P. 861-866.

39. Denaro M, Blanc H, Johnson M.J. et al. Ethnic variation in Hpal endonuclease cleavage patterns of human mitochondrial DNA // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1981. Vol. 78., № 9. p. 5768-5772.

40. Derenko, M. V, et. al. Diversity of Mitochondrial DNA Lineages in South Siberia. //Ann. Hum. Genetics 2003. - V. 67. - P. 391-411.

41. Dohle G.R, Halley D.JJ, Van Hemel J.O, Pieters M, Weber R, Govaerts L. Genetic risk factors in infertile men with severe oligozoospermia and azoospermia //Hum. Reprod. 2002. - Vol. 17.- № 1 P. 13-16.

42. Ferlin A, Moro E, Garolla A, Foresta C. Human male infertility and Y chromosome deletions: role of the AZF-candidate genes DAZ, RBM and DFFRY. //Hum Reprod. 1999. - Vol.14. - P. 1710-1716.

43. Fernandes S, Paracchini S, Meyer L, Floridia G, Tyler-Smith C, Vogt H. A larg AZFc deletion removes DAZ3/DAZ4 and nearby genes from men in Y haplogroups N. // Am. J. Hum. Genet. 2004. - Vol. 74. - P. 180-187.

44. Foresta СЛ., Ferlin A., Garolla A. Y -chromosome deletions in idiopathic severe testiculopathies. //J. Clin. Endocrinol. Metab. 1997.- Vol. 82. -P.1075-1080.

45. Foresta C. et al. High-frequency of well-defined Y-chromosome deletions in idiopathic Sertolli cell-only syndrome. //Hum. Reprod. 1998. - Vol.13, № 2, - P. 302-308.

46. Foresta С, Moro E, Garolla A, Onisto M, Ferlin A Y chromosome microdeletions in cryptorchidism and idiopathic infertility. //J Clin Endocrinol Metab. 1999 - Vol.84. - P.3660-3665.

47. Foresta C. et al. Deletion and expression analysis of AZFa genes on the human Y chromosome revealed a major role for DBY in male infertility .//Hum Mol Genet 2000. - Vol. 9. - P. 1161-1169.

48. Foresta C, Moro E., Ferlin A. Y chromosome microdeletions and alterations of spermatogenesis // Endocrine Reviews 2001 - Vol. 22, № 2. - P. 226239.

49. Frederick L, Reijo-Pera R. Male sperm motility dictated by mother s mt DNA. //Am. J. Hum. Genet. 2000. - Vol. 67. - P. 543-548.

50. Fujisawa M, Shirakawa T, Kanzaki M., Okada H, Arakawa S., Kamidono S. Y-chromosome microdeletion and phenotype in cytogenetically normal men with idiopathic azoospermia. //Fertil Steril. 2001. - Vol. 76 - P. 491 -495.

51. Giachini C, Guarducci E, Longepied G, Degl'Innocenti S, Becherini L, Forti G, Mitchell M.J, Krausz C. The gr/gr deletion(s): a new genetic test in male infertility? //J Med Genet 2005 - Vol. 42, № 6. - P.497 - 502.

52. Girardi S.K. et al. Submicroscopic deletions in the Y chromosome of infertile men. //HumReprod. -1997- Vol. 12.-P. 1635-1641.

53. Greenberg, BD, Newbold, JE, Sugino, A Intraspecific nucleotide sequence variability surrounding the origin of replication in human mitochondrial DNA. // Gene. 1983. - Vol. 21. - P. 33-49.

54. Grimaldi P., Scarponi C, Rossi P. et al. Analysis of Yq microdeletons in infertile males by PCR and DNA hybridization techniques. // Mol Hum Reprod.- 1998-Vol. 4-P. 1116-1121.

55. Habermann B. et al. DAZ (deleted in azoospermia) genes encode proteins located in human late spermatids and in sperm tails. // Hum Reprod. 1998. -Vol. 13.-P. 363-369.

56. Hammer M.F. and Horai S. Y chromosomal DNA variation and the peopling of Japan. //Am. J. Hum. Genet. 1995. - Vol. 56. - P. 951-962.

57. Hammer M.F, Karafet T, Rasanayagam A, Wood E.T, Altheide Т.К., Jenkins T, Griffiths R.C, Templeton A.R, Zegura S.L. Out of Africa and back again: nested cladistic analysis of human Y chromosome variation// Mol. Biol. Evol.- 1998.-Vol. 15.-P. 427-441.

58. Hargreave T.B, Chandley A.C, Ross A. et al. Y-chromosome microdeletions and male subfertility. // Androl. 1996- Vol. 28.- P. 19—21.

59. Но М., Chelly J., Carter N., Danek A., Crocker P., Monaco A.P. Isolation of the gene for McLeod syndrome that encodes a novel membrane transport protein. // Cell. 1994. - Vol. 77. - P. 869-870.

60. Hucklenbroich K, Gromoll J, Heinrich M, Hohoff C, Nieschlag E, Simoni M Partial deletions in the AZFc region of the Y chromosome occur in men with impaired as well as normal spermatogenesis. // Hum Reprod. 2005. - Vol. 20.-P.191-197.

61. Hurles M.E., Jobling M.A. A singular chromosome. //Nature Genetics.- 2003. -Vol. 34.-P. 246-247.

62. James T.C., Elgin S.C. Identification of a nonhistone chromosomal protein associated with heterochromatin in Drosophila melanogaster and its gene. // Mol. Cell. Biol. 1986. - Vol.11. - P. 3862-3872.

63. Japanese males. // J Hum Genet. 2006. - Vol. 51. - P. 794-799.

64. Jobling M.A., Tyler-Smith C. New uses for new haplotipes: the human Y chromosome, diseas and selection. // Trends Genet. 2000. -Vol. 16. - P. 356-62.

65. Jobling M.A., Tyler-Smith C. The human Y chromosome: an evolutionary marker comes of age. //Nat. Rev. Genet. 2003. - Vol. 4. - P. 598-612.

66. Kamp C., Huellen K., Fernandes S., et al. High deletion frequency of the complete AZFa sequence in men with Sertoli cell only syndrome. //Mol Hum Reprod. 2001 - Vol. 7. - P.987 -994.

67. Karafet T, Xu L, Du R, Wang W, Feng S, Wells RS, Redd AJ, Zegura SL, Hammer MF. Paternal population history of East Asia: sources, patterns, and microevolutionary processes. // Am J Hum Genet. 2001. - Vol. 69, № 3. -P.615-28.

68. Karafet T.M., Osipova L.P., Gubina M.A. et al. High levels of Y-chromosome differentiation among native Siberian populations and the genetic signature of a boreal hunter-gatherer way of life // Hum. Biol. 2002. - V. 74. - P. 761789.

69. Kim S.W., Kim K.D., Paick J.S. Microdeletions within the azoospermia factor subregions of the Y chromosome in patients with idiopathic azoospermia. // Fertil Steril. 1999 - Vol.72. - P.349-353.

70. Kivisild Т., Rootsi S., Metspalu M. et al. The genetic heritage of the earliest settlers persists both in Indian tribal and caste populations // Am. J. Hum. Genet. 2003. - V. 72. - P. 313-332.

71. Kleiman S.E., Yogev L., Gamzu R. Genetic evaluation of infertile men. // Hum. Reprod.- 1999.- Vol. 14.- P.33-38.

72. Kobayashi K., Mizumo K., Hida A. et al. PCR analysis of the Y chromosome long arm in azoospermic patients: evidence for a second locus required for spermatogenesis. // Hum Mol Genet. -1994 Vol. 3, № 11. - P. 1965—1967.

73. Koh E., Choi J., Namiki M. Y chromosome and new concept of azoospermia factor.//Reprod. Med Biol.-2005.-Vol. 4. -P. 123-127.

74. Kolman C., Sambuughin N., Bermingham E. Mitochondrial DNA analysis of Mongolian populations and implications for the origin of New World founders. //Genetics 1996 - Vol.142. - P.1321-1334.

75. Krausz C., McElreavey K., Weissenbach G., Forti G., Bishop C. Identification and mapping of a novel Y chromosome isoform of elF-lA. //

76. Miniposter book, 10th European Workshop on Molecular and Cellular Endocrinology of the testis. Capri. - 1998.

77. Krausz C, Bussani-Mastellone C. Granchi S, McElreavey K, Scarselli G, Forti G. Screening for microdeletions of Y chromosome genes in patients undergoing intracytoplasmic sperm injection. //Hum Reprod. 1999 -Vol. 14. - P.l 717—1721.

78. Krausz C., Quintana-Murci L, Rajpert-De Meyts, Jorgensen N, Jobling M.A, Rosser Z.H., et al. Identification of a Y chromosome haplogroup associated with reduced sperm counts. // Hum. Mol. Genet. 2001.- Vol. 10. -P. 1873-7.

79. Krausz C, Forti G, McElreavey K. The Y chromosome and male fertility and infertility. // Int. J. of Androl. 2003. -Vol. 26. - P. 70-75.

80. Krausz C, Quintana-Murci L, Forti G. Y chromosome polymophisms in medicine. // Ann. Med. 2004. - Vol. 36. - P. 573-83.

81. Kremer JA, Tuerlings JH, Meuleman EJ, Schoute F, Mariman E, Smeets DF, Hoefsloot LH, Braat DD, Merkus HM Microdeletions of the Y chromosome and intracytoplasmic sperm injection: from gene to clinic. // Hum Reprod. -1997-Vol.12.- P.687-691.

82. Kuroki Y, Iwamoto T, Lee J, Yoshiike M, Nosawa S, Nishida T, et al. Spermatogenic ability is different among males in different Y chromosome lineage. // J. Hum. Genet. 1999. - Vol. 44. - P. 289-92.

83. Lahn B.T., Page D.C. Functional coherence of the human Y chromosome. // Science. 1997. - Vol. 278. - P. 675-680.

84. Larsson, N.G. and Clayton, D.A. Molecular genetic aspects of human mitochondrial disorders. //Ann. Rev. Genet. 1995. - Vol. 29. -P.151-178.

85. Lau Y.F. Gonadoblastoma, testicular and prostate cancers, and the TSPY gene. 11 Am. J. Hum Genet. 1999. - Vol. 64. - P. 921-27.

86. Lell J.T, Brown M.D, Schurr T.G. et al. Y chromosome polymorphism in Native American and Siberian populations: identification of Native American Y chromosome haplotypes // Hum. Genet. 1997. - V. 100. -P. 536-543.

87. Lell J.T., Sukernik R.I, Starikovskaya Y.B, Su B, Jin L, Schurr T.G, Underhill P.A, Wallace D.C. The dual origin and Siberian affinities of Native American Y chromosomes// Am. J. Hum. Genet. 2002. - Vol. 70. - P. 192206.

88. Lightowlers R.N, Chinnery P.F, Turnbull D.M, Howell N. Mammalian mitochondrial genetics: heredity, heteroplasmy and disease. //Trends Genet.- 1997. Vol.13. - P.450 - 455.

89. Linder P, Lasko P.F, Leroy P, Nielsen P.J, Nish K, Schnier J, Slonimski P. P. Birth of DEAD box. // Nature. 1989. - Vol. 337. - P. 121122.

90. Liow S.L, Ghadessy F.J, Ng S.C, Yong E.L. Y chromosome microdeletions, in azoospermic or near-azoospermic subjects, are located in the AZFc (DAZ) subregion. //Mol Hum Reprod. 1998 - Vol. 4. - P.763-768

91. Lorenz J.G, Jackson, W. E, Beck, J. C. & Hanner, R. The problems and promises of DNA barcodes for species diagnosis of primate biomaterials. Proceedings of the Royal Society London B: Biological Scienes 2005 -Vol.360-P. 1869—1877.

92. Lutz S, Weisser HJ, Heizmann J, Pollak S. Location and frequency of polymorphic positions in the mtDNA control region of individuals from Germany. //Int J Legal Med. 1998. - Vol. 111.- P.67-77

93. Lynch M, Cram DS, Reilly A, O'Bryan MK, Baker HW, de Kretser DM, McLachlan RI (2005) The Y chromosome gr/gr subdeletion is associated with male infertility. // Mol Hum Reprod. 2005. - Vol. 11. - P.507-512.

94. Ma K, Sharkey A, Kirsch S. et al. Towards the molecular localisation of the AZF locus: mapping of microdeletions in azoospermic men within 14 subintervals of interval 6 of the human Y-chromosome. // Hum. Mol. Genet. -1992- Vol.1. -P.29-33.

95. Machev N, Saut N, Longepied G, Terriou P. et al. Sequence family variant loss from the AZFc interval of the human Y chromosome, but not gene copy loss, is strongly associated with male infertility. // J. Med. Genet.2004. Vol. 41.-P. 814-825.

96. Macaulay V, Hill C, Achilli A. et al Single, rapid coastal settlement of Asia revealed by analysis of complete mitochondrial genomes // Science.2005. V. 308. ,№ 5. - P. 1034-1036.

97. Malyarchuk B.A, Rogozin I.B, Berikov V.B, Derenko M.V. Analysis of phylogenetically reconstructed mutational spectra in human mitochondrial DNA control region. // Hum Genet. 2002. - Vol. 111 - P.46-53

98. Malyarchuk B. A, Rogozin I. B. On the Etruscan mitochondrial DNA contribution to modern humans. // Am. J. Hum. Genet. 2004. - Vol. 75. - P. 920-923.

99. Marchall J.A. Human Y chromosome, Sex determination, and spermatogenesis-a feminist view. // Biol. Reprod. 2000. - Vol. 63. - P.667-76.

100. Margulis L. Origin of Eukaryotic Cells //Yale Univerity Press. New Haven. -1970

101. Martinez M.C., Bernabe M.J., Gomez E., et al. Screening for AZF deletion in a large series of severely impaired spermatogenesis patients. J Androl. 2000 - Vol. 21. - P.651 -655

102. Mathew C.C. The isolation of high molecular weight eucariotic DNA// Methods in molecular biology / Ed. Walker J.M. N.Y.; Haman press, 1984.-P.31-34.

103. McElreavey K., Krausz C. Sex Chromosome Genetics ' 99. Male infertility and the Y chromosome. // Am. J. Hum. Genet. 1999. - Vol. 64. -P.928-933.

104. McElreavey K., Ravel C., Chantot-Bastaraud S., Siffroi J.-P. Y chromosome variants and male reproductive function. // Int. J. of Androl. -2006.-Vol. 29.-P. 298-303.

105. Metspalu M., Kivisild Т., Metspalu E. et al. Most of the extant mtDNA boundaries in south and southwest Asia were likely shaped during the initial settlement of Eurasia by anatomically modern humans // BMC Genet. 2004. -V.31. -P. 26.

106. Montiel-Sosa F., Ruis-Pesini E., Enriques J.A. et al. Differences of sperm motility in mitochondrial DNA haplogroup U sublineages. // Gene. -2006.-Vol. 368.-P. 21-28.

107. Nakohori Y, Kuroki Y., Komaki R. et al. The Y chromosome region essential for spermatogenesis. // Horm. Res. 1996. - Vol. 46. - P. 20-23.

108. Nagafuchi S, Namiki M, et al. A minute deletion of the Y chromosome in men with azoospermia. //J Urol. 1993 - Vol. 150. - P. 1155-1157.

109. Oliva R, Margarit E, Ballesca J. et al. Prevalence of Y chromosome microdeletion in oligospermic and azoospermic candidates for intracytoplasmic sperm injection. // Fertil Steril. -1998- Vol. 70. P. 506-510.

110. Orekhov V, Poltoraus A, Zhivotovsky L.A., Spitsyn V., Ivanov P, Yankovsky N. Mitochondrial DNA sequence diversity in Russians. //FEBS Letters 1999 - Vol.445. - P. 197-201.

111. Osterlund C, Segersteen E, Arver S, Pousette A. Low number of Y-chromosome deletions in infertile azoospermic men at a Swedish andrology centre. //Int. J. Androl. 2000 - Vol. 23 - P. 225-229.

112. Paracchini S, Stuppia L, Gatta V., Palka G, Moro E, Foresta C, et al. Y-chromosomal DNA haplotypes in infertile European males carrying Y-microdeletions. // J. Endocrinol. Invest. 2000. - Vol. 23. - P. 671-6.

113. Paracchini S, Stuppia L, Gatta V, De Santo M, Palka G, Tyler-Smih C. Relationship between Y-chromosomal DNA haplotype and sperm count in Italy. // J. Endocrinol. Invest. 2002. - Vol. 25. - P. 993-5.

114. Patsalis P.C, Sismani C, Quintana-Murci L, Taleb-Bekkouche F., Krausz C, McElreavey K. Effects of transmission of Y chromosome AZFc deletions. //The Lancet 2002.- Vol. 360. - P. 1222-1224.

115. Pereira L., Goncalves J., Golos A. et al. Human mt DNA haplogroups and reduced male fertility: real association or hidden population substructuring. // Int. J. Androl. 2005. - Vol. 28. - P. 241-247.

116. Peterlin, В., Kunej, Т., Zorn, B. et al. Sterility associated with Y chromosome abnormalities. In Barratt, C., De Jonghe, C., Mortimer, D. and Parinaud, J. // Genetics of Human Male Fertility. 1997. - EDK Press, Sevres. - P. 66-75.

117. Peterlin В., Kunej Т., Sinkovec J., Gligorievska N., Zorn B. Screening for Y chromosome microdeletions in 226 Slovenian subfertile men. // Hum Reprod. 2002- Vol.17 - P. 17-24.

118. Pieri P., Pereira D., Glina S., Hallak J., Mcelreavey K., Moreira-Filho C. A cost-effective screening test for detecting AZF microdeletions on the human Y chromosome. // Genetic Testing 2002. - Vol. 6. - P. 185-194.

119. Previdere C., Stuppia L., Gatta V., Fattorini P., Palka G., Tyler-Smih C. Y-chromosomal DNA haplotype differences in control and infertile Italian subpopulations. //Eur. J. Hum. Genet. 1999. - Vol. 7. - P. 733-6.

120. Pryor J.L., Ken-First M., Muallem A. Microdeletions in the Y -chromosome of infertile men. //New Engl. J. Med. 1997. - Vol. 336.- P. 534539.

121. Quintana-Murci L., Krausz.C., Heyer E., Gromoll J., Seifer I.et al. The relationship between Y chromosome DNA haplotypes and Y chromosome deletions leading to male infertility. // Hum. Genet. 2001. - Vol. 108. -P. 55-58.

122. Qureshi S.J., Ross A.R., Ma K. et al. Polymerase chain reaction screening for Y chromosome microdeletions: a first step towards the diagnosis of genetically-determined spermatogenic failure in men. // Mol. Hum. Reprod. 1996-Vol. 2.-P. 775-779.

123. Rao F, Weiss B, Fukami M, Rump A, Niesler B, Mertz A, et al. Pseudoautosomal deletions encompassing a novel homeobox gene cause growth failure in idiopathic short stature and Turner syndrome. // Nat. genet. -1997.-Vol. 16.-P. 54-63.

124. Reijo R, Lee T.Y, Salo P. et al. Diverse spermatogenic defects in humans caused by Y-chromosome deletions encompassing a novel RNA-binding protein gene. //Natur. Genet. 1995. - Vol. 10,- P.383-393.

125. Reijo, R, Alagappan, R.K, Patrizio, P. et al. Severe oligozoospermia resulting from deletions of azoospermia factor gene on Y chromosome.//Lancet. 1996- Vol. 347. - P. 1290-1293

126. Repping S, Skaletsky H., Lange J, Silber S., Van Der Veen F, Oates R.D., et al. Recombination between palindromes P5 and PI of the human Ychromosome causes massive deletions and spermatogenic failure. // Am. J. Hum. Genet. -2002.-Vol. 71.-P.906-22.

127. Repping S, van Daalen S.K, Korver C.M, Brown L.G. et al. A family of human Y chromosomes has dispersed throughout northern Eurasia despite a 1.8-Mb deletion in the azoospermia factor с region. // Genomics. 2004. -Vol. 83.-P. 1046-1052.

128. Richards M, Corte-Real H, Forster P, Macaulay V,Wilkinson-Herbots H, Demaine A, Papiha S, Hedges R, Bandelt H-J, Sykes B. Paleolithic and neolithic lineages in the European mitochondrial gene pool. //Am J Hum Genet 1996. - Vol.59. - P. 185-203.

129. Richards MB, Macaulay VA, Bandelt HJ, Sykes ВС. Phylogeography of mitochondrial DNA in western Europe. // Ann Hum Genet. 1998. - V.62. -P. 241-60.

130. Rozen, S. et al. Abundant gene conversion between arms of palindromes in human and ape Y chromosomes. //Nature. 2003. - Vol. 423. -P. 873-876.

131. Rosser Z.H, Zerjal T, Hurles M.E, Adojaan M, Alavantic D, Amorim A, et al. Y-chromosomal diversity in Europe is clinical and influenced primarily by geography, rather than by language. // Am. J. Hum. Genet. 2000. - Vol. 67. - P. 1526-43.

132. Rovio Т., Marchington D, Donat S, Schuppe H. et al. Mutations at the mitochondrial DNA polymerase locus associated with male infertility. // Natur. Genet. 2001. - Vol. 29. - P. 261-262.

133. Ruis-Pesini E, Diez C, Lapena A.-C, Perez-Martos A., Montoya J. Correlation of sperm motility with mitochondrial enzymatic activities. // Clin. Chem. 1998 - Vol. 44 - P. 1616-1620.

134. Ruis-Pesini E, Lapena A.-C, Diez-Sanchez C, Perez-Martos A, Montoya J, Alvarez E, Diaz M, et al. Human mtDNA haplogroups associated with a high or reduced spermatozoa motility. // Am. J. Hum. Genet. 2000. - Vol. 67. - P. 682-696.

135. Sajantila A, Salem A.H, Savolainen P, Bauer K, Gierig C, Pabo S. Paternal and maternal DNA lineages reveal a bottleneck in the founding of the Finnish population. // Proc Natl Acad Sci USA 1996 - Vol. 93. - P. 1203512039

136. Sargin C.F. Sargin CF, Berker-Karauzum S, Manguoglu E, Erdogru T, Karaveli S, Gulkesen KH, Baykara M, Luleci G AZF microdeletions on the Y chromosome of infertile men from Turkey. //Ann Genet 2003 - Vol. 47. -P. 61-68.

137. Saxena R. et al. The DAZ gene cluster on the human Y chromosome arose from an autosomal gene that was transposed, repeatedly amplified and pruned. // Nat Gen. 1996. - Vol. 14. - P. 292-299.

138. Schimid S.R, binder P. D-E-A-D protein family of putative RNA helicases. // Molec Microbiol. 1992. - Vol. 6. -P.283-292.

139. Seifer I, Amat S., Delgado-Viscogliosi P. et al. Screening for microdeletions on the long arm of chromosome Y in 53 infertile men. //Int. J. Androl. 1999 - Vol. 22. - P. 148-154.

140. Semino O, Passarino G, Brega A, Fellous M. Santachiara-Benerecetti A.S. A view of the neolithic demic diffusion in Europe through two Y chromosome-specific markers. Am. J. Hum. Genet. 1996. - Vol. 59. -P. 964-968.

141. Semino 0, Santachiara-Benerecetti A.S, Falaschi F, Cavalli-Sforza L.L, Underhill P.A. Ethiopians and Khoisan share the deepest clades of the human Y-chromosome phylogeny// Am. J. Hum. Genet. 2002. - Vol. 70. -P. 265-268.

142. Shirakava T, Fujisawa M, Kanzaki M, Okada H, Arakawa S, Kamidono S. Y chromosome (Yqll) microdeletions in idiopathic azoospermia. // Int. J. Urol. 1997 - Vol. 4. - P. 198-201.

143. Silber S.J, Alagappan R, Brown L.G. et al. Y chromosome deletions in azoospermic and severely oligozoospermic men undergoing intracytoplasmic sperm injection after testicular sperm extraction. //Hum. Reprod. 1998 - Vol.13. - P. 3332-3337.

144. Simoni M, Gromoll J, Dworniczak J. et al. Screening for deletions of the Y chromosome involving the DAZ (Deleted in Azoospermia) gene in azoospermia and severe oligizoospermia. // Fertil. Steril. 1997 - Vol. 67. - P. 542-547.

145. Simoni M. Molecular diagnosis of Y chromosome microdeletions in Europe: state-of-the-art and quality control. // Hum. Reprod. 2001 - Vol. 16. - P. 402-409.

146. Simoni M., Bakker E., Krausz C. EAA/EMQN best practice guidelines for molecular diagnosis of Y-chromosomal microdeletions. State of the art 2004. // Int. J. Androl. 2004. - Vol. 27. - P. 240-249.

147. Sinclair A.H., Berta P., Palmer M.S., Hawkins J.R., Griffiths B.L., Smith M.J., Foster J.W. et al. A gene from the human sex-determinig region encodes a protein with homology to conserved DNA-binding motif // Nature. -1990.-Vol. 346.-P. 240-244.

148. Skaletsky H., Kuroda-Kawaguchi Т., Minx P.J., Cordum H.S., Hillier L., Brown L.G., et al. The male specifice region of the human Ychromosome in a mosaic of discrete sequence classes. // Nature. - 2003. -Vol. 423.-P. 825-37.

149. Spiropoulos J., Turnbull D.M., Chinneiy P.F. Can mitochondrial DNA mutations cause sperm dysfunction. // Mol. Hum. Reprod. 2002. Vol. 8. - P. 719-721.

150. Stephen F., Shaban M.D. Male Infertility Overview. Assessment, Diagnosis, and Treatment, //www.ivf.com/shaban.html.- 2005.

151. Stuppia L., Mastroprimiano G., Calabreze G. et al. Microdeletions in interval 6 of the Y-chromosome detected by STS-PCR in 6 of 33 patients with idiopathic oligo- or azoospermia. //Cytogenet. Cell. Genet. 1996. - Vol.72. -P. 155-158.

152. Stuppia L., Gatta V., Calabrese G. A quarter of men with idiopathic oligo-azoospermia display chromosomal abnormalities and microdeletions ofdifferent types in interval 6 of Yqll. //Hum. Genet. 1998 - Vol.102. - P. 566-570.

153. Tessari A, Salata E, Ferlin A, Bartoloni L, Slongo M.L, Foresta C. Characterization of HSFY, a novel AZFb gene on the Y chromosome with a possible role in human spermatogenesis. // Mol Hum Reprod. 2004. - Vol. 10.-P. 253-258.

154. Thangaraj K, Singh L, Reddy A.G, Rao V.R, Underhill P.A, Pierson M, Frame I.G, Hagelberg E. Genetic affinities of the Andaman Islanders, a vanishing human population. // Curr. Biol. 2003. - Vol. 13. - P. 86-93.

155. Tiepolo L, Zuffardi O. Localization of factors controlling spermatogenesis in the nonfluorescent portion of the human Y chromosome long arm. //Hum. Genet. 1976. - Vol. 34. - P. 119-24.

156. Tolk H. V, Pericic, M, Barac, L, Martinovic Klaric, I, Janijevic, B. & Rudan, I, et al. MtDNA haplogroups in the populations of Croatian Adriatic Islands. // Coll Anthropol 2000 - Vol. 2 - P. 267- 279.

157. Torroni A., Miller J.A., Moore L.G. et al. Mitochondrial DNA analysis in Tibet. Implication for the origin of the Tibetian population and its adaptation to high altitude // Amer. J. Phys. Anthropol. 1994. - Vol. 55., № 4. - P. 760-776.

158. Torroni A, Huoponen K, Francalacci P, Petrozzi M, Morelli L, Scozzari R, Obinu D, Savontaus ML, Wallace DC (1996) Classification of European mtDNAs from an analysis of three European populations. //Genetics. -1996. -Vol. 144. P.1835-1850

159. Torroni A., Bandelt H-J., D'Urbano L. et al. MtDNA analysis reveals a major Late Paleolithic population expansion from Southwestern to Northeastern Europe // Am. J. Hum. Genet. 1998. - V. 62., № 5. - P. 11371152.

160. Underhill P., Passarino G., Lin A., Shen P., Mirazo M., Lahr N. et al. The phylogeography of Y chromosome binary haplotypes and the origins ofmodern human populations. // Ann. Hum. Genet. 2001. - Vol. 65. - P. 4362.

161. Underhill P. Inferring human history: clues from Ychromosome haplotypes // Cold Spring Harbour Symposia on Quantitative Biology. -2003.-P.487—493.

162. Van der Ven K, Montag M, Peschka B. et al. Combined cytogenetic and Y chromosome microdeletion screening in males undergoing intracytoplasmic sperm injection. //Mol. Hum. Reprod. 1997 - Vol.3. - P. 699-704.

163. Van Golde R.J.T, Wetzels A.M.M, de Graaf R. et al. Decreased fertilization rate and embryo quality after ICSI in oligozoospermic men with microdeletions in the azoospermia factor с region of the Y chromosome.//Hum. Reprod. 2001 - Vol.16. - P. 289-292.

164. Vogt P, Chandley A.C, Hargreave T.B. et al. Microdeletions in interval 6 of the Y chromosome of males with idiopathic sterility point to disruption of AZF, a human spermatogenesis gene. //Hum. Genet. 1992 -Vol.89-P. 491-496.

165. Vogt H., Edelmann A, Kirsch S et al. Human Y chromosome azoospermia factor (AZF) mapped to different subregions in Yqll. // Hum. Mol. Genet. 1996. - Vol. 5. - P.933-943.

166. Vogt P. Human Y chromosome deletions in Yql 1 and male fertility. // The Fate of the Male germ Cell. Advances in experimental medicine and biology. Plenum Press, New Yore, USA. P. 17-30.

167. Vogt P. Human chromosome deletions in Yqll, AZF candidate genes and male infertility: history and update.// Mol. Hum. Reprod. 1998 - Vol. 4. -P. 739-744.

168. Vogt H. Peter. AZF deletions and Y chromosomal haplogroups: history and update based on sequence.// Hum. Reprod. Update. 2005. - Vol.11. - P. 319-336.

169. Wallace DC, Brown MD, Lott MT. Mitochondrial DNA variation in human evolution and disease. // Gene.- 1999.- V. 238. № 1 - P. 211-30.

170. Wallace D.C, Mitochondrial genome, overview. // Encyclop. Biol. Chem. 2004. - Vol. 2. - P. 709-715.

171. Wallace D.C, The mitochondrial genome in human adaptive radiation and disease: on the road to therapeutics and performance enhancement. // Gene. 2005. - Vol. 354. - P.169-180.

172. Warchol Warchol ME, Lambert PR, Goldstein В J, Forge A, Corwin JT. Regenerative proliferation in inner ear sensory epithelia from adult guinea pigs and humans. //Science 2000 - Vol. 259 - P. 1619-1622.

173. Whitfield L.S. Whitfield L.S, Sulston J.E, Goodfellow P.N. Sequence variation of the human Y chromosome //Nature. 1995. - V. 378. - P. 379— 380.

174. World Health Organization. Laboratory manual for the examination of human semen and sperm-cervical mucus interaction. // Cambridge: Cambridge Univ.Press. -1992.

175. Wu В., Lu N.X, Xia Y.K, Gu A.H, Lu C.C. A frequent Y chromosome Ь2/Ь3 subdeletion shows strong association with male infertility in Han-Chinese population //Hum. Reprod. 2007. - Vol. 15 - P. 193-198

176. Y chromosome Consortium. A nomenclature system for the tree of human Y- chromosomal binary haplogroups. // Genome Res. 2002. - Vol. 12.-P. 339-48.

177. Yen P. The Fragility of fertility. // Nat. Genet. 2001. - Vol. 29. - P. 243-244.

178. Zegura S.L, Karafet T.M, Zhivotovsky L.A, Hammer M.F. High resolution SNPs and microsatellite haplotypes point to a single, recent entry of Native American Y chromosomes into the Americas // Mol. Biol. Evol. -2004.-V. 21.- P. 164-175.

179. Zerjal T, Xue Y, Bertorelle G. et al. The genetic legacy of the Mongols // Am. J. Hum. Genet. 2003. - V. 72. - P. 717-721.

180. Zinn A.R, Ross J.L. Turner syndrome and haploinsufficiency. // Cur. Opin. Genet. Dev. 1998. - Vol. 8. - P. 322-27.