Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Цитогенетическое и дерматологическое исследование при бесплодии у мужчин, связанном с нарушением сперматогенеза по типу азоосперии

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Цитогенетическое и дерматологическое исследование при бесплодии у мужчин, связанном с нарушением сперматогенеза по типу азоосперии"

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ МУК МЕДИКО-ГЕНЕТИЧЕСКИЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР

ш .¡¿авах рукопке-УДК 576.3+572.524.12+616.б^-ССб.

ЕИМЛЛ ЛАРИСА СЕРГЕЕВНА.

ШТОГШШЧЕСКОЕ И ДЕН1АТОШВДЕСКОЕ ИСОЩОВ/'Е'Е ПРИ БЕСПЛОДИИ У МУ1ЧИН, СВЯЗАННОМ С а'ЛЩН

СПЕРМАТОГЕНЕЗА ПО ТИПУ АЗООСПЕРМИЙ . (03.00.15-Ге нетика)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

", о с к в а - 1952

Работа выполнена в НИИ репродукции человека им; Ь орд а ни а И.Ф Министерства Здравоохранения и социального обеспечения Республики Грузия.

Научный руководитель- доктор медицинских наук Д. И. Кри ст е са шви ли

Официальные оппоненты- доктор медицинских наук,профессор

Н. П.Кулешов - доктор медицинских наук В, А. Бахарев

Ведущая организация- Центральный Институт усовершенствования врачей.

Защита диссертации состоится J-IJ_1992г.

в /О часол! на заседании Специализированного Совета Д.(.01.16.Ci. 1,ри медико-генетическом научном центре РАМН

Ад ре с : 115 47 8, H осхва, у л. Л о скв ope чъ е, I.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке медико-генетического научного Центра РАМН.

Автореферат разослан " "_1992г.

Ученый секретарь Спецяализи;ованного совета,

доктор биологических наук,профессор Л. Ф. Курило

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. В Международной программе ВОЗ " Здо овье для всех к 2000 году"МНО 5р€С/о£ ргодгатте ,№4914,1986) особое внимание уделяется репродукции человека.Все большее значение приобретает проблема мужского бесплодия,поскольку в 40-5случаев причины бесплодия в браке связаны с нарушением репродуктивной функции мужчинССот^сиге ег1 а£ ,1988).

Высокий процент стерильности мужчин в бездетных семьях объясняется тем,что на всех этапах жизни мужчины на половые клетки действует множество этиологических факторов,как экзогенных,так и наследственно обусловленных,приводя к нарушению сперматогенеза. Поскольку более чем у 5<Ж мужчин с бесплодием причина нарушения сперматогенеза определяется частично,либо вовсе не устанавливается(Хад-сон и др., 1986).отсутствие понимания возможных составляв®« может привести к ошибке в диагнозе и лечении.

10-15$ мужчин с бесплодием имеют те или иные аномалии хромо-сом(Курило,Ку ленов, 1988), однако хромосомным факторам нарушения мужской фертильности уделяется крайне мало внимания в современных руководствах по проблемам бесплодия у человека,не отмечается необходимость проведения цитогенетических исследования и консультаций специалистов генетиков и цитогенетиков.

В отечественной литературе нет работ,которые давали бы мужской стерильности цитогенетическув оценку в зависимости от степени нарушения сперматогенеза. Поэтому цитогенетический анализ бесплодных мужчин с азосспермией позволяет выяснить роль хромсомнои патологии в развитии тяжелого нарушения сперматогенеза,вкявить долю аномалий аутосом и го носом, структурных и числовых абе^аций в этой патологии,а также частоту встречаемости синдрома Клайи.'ельтера в четко отобранной группе мужчин с бесплодием и азооспермией.

Практически не освещен в литературе вопрос о значении С-поли-морфизма хромосом при нарушении сперматогенеза,о возмскной роли экстремальных С-вариантов гетерохроматина в нарушении фертильности у мужчин.Исследования в направлении оценки типов и час"'от вариантов С-гетерохроматина могут иметь как теоретическое значение для формирования единого взгляда на функционально значимость и адаптационную ценность структурного гетерохроиатина-;так и тактические, поскольку установление этиологии каждого конкретного случая заболевания важно для разработки правильной тактики ведения больного.

Цитогенетическио факторы не отражает полностью все генетиче.-.-

кии аспекты нарушения сперматогенеза, приводящие к бесплодии у мужчин.Помочь в определении генетической природы заболевания может оказать применение в практике клиник,занимающихся проблемами нарушения репродуктивной функции,методов дерматоглифики и клинико-ге-неалогического анализа.Такой подход расшряет представление о мере генетической детерминированности нарушения сперматогенеза, что имеет не только диагностическое,но и прогностическое значение и способствует решению важных задач по оказанию профилактической и лечебной пскоьв: мужчинам с бесплодием, прогноза и реабилитации пациентов.

Цель на:.его исследования:дать цитогенетическую и дерматогли-фическую оцежу мукскои стерильности,связанной с нарушением сперматогенеза по типу азооспермии.

Для достижения поставленной цели в процессе работы решались следующие задачи:

1. Установление частоты и типов хромосомных аномалий при азооспермии.

2. Исследование вариабельности структурного гетерохроматина хромосом 1,5-,.16 и У при азооспермии с кариотипом '»6,ХУ и при синдроме Клайифельтера в равнении с контрольной группой фертильных мужчин путем определения типов и частот вариантов С-гетерохрома-тина,частоты гетероморфизма гомологов методом полуколичественной оценки С-сегментов.

3. Определение отклонений в параметрах дерматоглиуккк при синдроме КлаИш'оельтера и при азооспермии с нормальной хромосомной конституцией по сравнению с контрольной группой.

4. Анализ дерматоглифических показателей при носительстве экстремальных С-вариантов гетерохроматина хромосом 1,9,16 и У.

Научная новизна исследования заключается в том, что на основании обследования большой группы мужчин с нарушением сперматогенеза по типу азооспермии определены частота и спектр хромосомных аномалий при данной патологии,установлена доля пациентов с синдромом Клайнфельтера в указанной группе индивидов.

Впервые исследован С-полимонизм хромосом 1,9,16 и У при азооспермии в сравнении с адекватной контрольной группой фертильных мужчин. Установлен о, что при азооспермии увеличена частота встречаемости малых блоков Огетерохроматмна в сумме для всех исследованных хромосом.Более того, при синдроме Клайнфельтсра достоверно увеличена частота каждой исследованной хромосомы с малыми С-сегмента-

ми и частота лиц с наличием в кариотипе только малых экстремальных вариантов.

Определен комплекс параметров дерматоглифики, частота которых при тяжелом нарушении сперматогенеза достоверно увеличена при сравнении с контрольной группой мужчин с нормальной репродуктивной функцией.

Впервые проведено комплексное исследование ну]".чин с азооспер-чкеЯ,включившее в себя не только цитогенетическиЯ, но и дсрматогли-фический.и генеалогический методы генетического анализа.

Практическая ценность работы:

Выявленные при азооспермии высокая частота хромосомных аномалия, повыше иная частота отклонений дерматогли'Гических параметров и отягощенности родословных указывают на необходимость широкого применения методов генетического иоследования(цигогенети«еского,дер-матоглифического,генеалогического) с целью диагностики различных форм нарушения спе] патогенеза по типу азооспермии. Свовременное выявление пациентов.у которых можно предположить участие генетического компонента в развитии патологии.избавит врача и больных от лишних диагностических и лечебных процедур и позволит вов) емя поставить вопрос об изменении тактики ведения пациента.

Комплекс отклонений параметров дерматоглифики,выявленный у мужчин с азооспермией,в том числе и у пациентов с синдромом Клаин-фельтера позволяет использовать этот доступный метод при консультировании супружеских пар в целях отбора и ¡а ив вдов дх, кариологк-ческого анализа..вместе с тем,такой подход может способствовать раннему выделения групп риска еще до начала полового созревания.

Данные по С-полиморфизму,позволяющие выделить группы пациентов-носителей редких вариантов,могут иметь важное диагностическое и прогностическое значение при медико-генетическом консультировании пар с бесплодием,обусловленным мужской стерильностью.

Выводы и рекомендации настоящего исследования могут быть предложены для практического применения в клиниках .занимающихся проблемами нарушения репродуктивной функции у мужчин.

Положения,выдвигаемые на защиту:

I.Определена частота и спектр хромосомных аномалий при нарушении сперматогенеза по типу азооспермии.

2.У мужчин с азооспермией и кариотипом 46, ХУ увеличена суммарная частота хромосом 1,9,16 и У с малыми О-сегментеми.

3.У пациентов с синдромом Клайнфельтера увеличена частота швдои исследоваыюй хромосомы с малыми блоками С-гетеоохроматика,

ч

а также частота лиц с наличием в кариотипе хромосом только с малыми экстремальными вариантами .

4.У бесплодных мужчин с нарушением сперматогенеза по типу азооспермии выявлен комплекс дерматоглифических параметров,частота которых достоверно отличается от их частоты в контрольной группе мужчин с нормальной репродуктивной функцией.

Апробация работы.

Материалы исследования были представлены и обсуждены на У съезде Грузинского общества генетиков и селекционеров(Тбилиси,1987); на УЯ1 научной семинаре "Хромосомные основы нарушений развития че-ловека"(Тбилиси,1980);на юбилейной конференции,посвященной 30-летию основания НИИ репродукции человека им.Жорданиа И.Ф.(Тбилиси, 1988);на объединенном заседании Научного Совета по акушерству и гинекологии АМН СССР и Научного Совета по мед.генетике АМН СССР "Современные исследования по медицинской генетике в акушерстве и гинекологии"('1осква, 1989);да межотделенческой конференции НИИ репродукции человека(Тбилиси,1992);на научном семинаре во Всесоюзном научном медико-генетическом центре РАМН(Москва,199И).

Структура и объем диссертации;

Диссертационная работа изложена на страницах машинописного текста,включает введение,обзор литературы,материалы и методы, результаты собственных исследований и их обсуждение,заключение,выводы,рекомендации, рисунков, таблиц,список литературы включает отечественных и зарубежных источников.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

В настоящей работе проведено исследование у 305 мужчин с азооспермией,диагноз которым устанавливался на основании анализа эякулята в отделении клинической андрологии НИИ репродукции человека им.Жорданиа И.Ф. Контр ольпую группу составили 118 человек с нормальной репродуктивной функцией,имеющие здоровых детей.

Материалом исследования служили препараты хромосом,полученные методом культивирования лимфоцитов периферической крови,отпечатки пальцев и ладоней рук.карты генеалогического обследования, составленные путем опроса мужчин,и протоколы,куда заносилась стандартная информация,позволяющая установить иаличие или отсутствие факторов,которые могли стать возможной причиной нарушения сперматогенеза.

Культивирование лимфоцитов периферической крови.фиксацию и

приготовление п^епа^-атов проводили полумикроиетодом по стандартной методике(Ниидегjot<i ,1965) с небольшими модификациями. Хромосомы окрашивали по & - и С-методам(£>еа6г'(.дЫ ,1971, Sumnez etat ,1971) Хромосомный анализ осуществляли с учетом диагностики мозаицмзма (Кулешов, Алехин, 1974). Анализ хромосом, окрашенных 6-мет од он, запись формул хромосомных перестроек проводили согласно Парижской иомен-клатуре(РсщЧ co'rjeience ,1978).

С-варианты хромосом оценивали непосредственно под микроскопом по 5-балльной системе с использованием полуколичественного метода, согласно "Предложениям по стандартизации методов учета полиморфизма хромосом человека",разработанным медико-генетическим научным центром.

Анализ признаков дерматоглифики осуществляли по стандартной методике,описанной Cummin&(Mid6xIS6I). Кожные узоры изучали по отпечаткам пальцев и. ладоней рук.Клиннко-генеалогическил анализ проводили по общепринятой методике с охватом четырех поколения, при этом особое внимание уделяли наличию у родственников пробандов признаков отягоценности,связанных с нарушением фертильности: бесплодные браки,предшествующее бесплодие,смерть детей до 1 года от невыясненных причин,отягощенный акушерский анамнез.

Анализ достоверности, различий между исследуемыми и контрольной группой проводили методом вариационной статистики с использованием критерия Стьюдента (t ).

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИСОЩОВА1Ш И ИХ ОЕСЛДШИГ

I. Аномалии хромосом при азооспермии.

Кариологический анализ,проведенный у 305 мужчин с азооспермией, показал высокук частоту хромосомных аномалий(ХА):у 65 пациентов выявлен аномальный кариотип(21,ЗЙ).95,4Й всех ХА связаны с половыми хромосомами и лишь три структурные перестройки(4„6Й) обнаружены в аутосомах.Среди гоносомных аберраций преобладали числовые нарушения,их доля от всего количества обнаруженных аберраций составляет 67,7$.

Все найденные ХА суммированы в таблице 1,где они сгруппированы по аномалиям в аутосомах и в системе половых хромосом, по аномалиям числовым и структурным.

Синдром Клайнфельтера выявлен у 54 пациентов(17,7Й).причем болыпинство(47 человек) имели чистую форму синдрома с кг.риотипом 47,ХХУ(15,4!0.Из семи человек с мозаичным вариантом синдрома шестеро имели кариотип 4б,ХУ/47,ХХУ и лишь у одного пациента выявлен

Таблица I

Частота и типы хромосомных аномалия у мужчин с азооспермией

Число обслед. индивидов Число хромосомных аномалий Частота и типы нарушения в системе половых хромосом Частота и типы нарушений в аутосомах (структурные)

Числовые Структурные Реверсия пола Всего

305 65 (21,3© 57 (18,7© Из них: 47, ХХУ- 47(15,4© 46.ХУ/47,ХХУ- 6(2, СЙ) 46, ХХ/47, ХХУ- 1(0,3© 47, ХУУ- 1(0,3© 46, ХУ/47, ХУУ- 1(0,3© ■|3,>./46,ХУ- 1(0,3© 4 (1,3© 46, Хс1е£ (У)-4 I (0,3© 46.ХХ-1 62 (20,3© 3 (!,«) 45,ХУ,1(21;22)(^11;^И) 46,ХУ,К5;13)(^12;рИ) 45, ХУ, 1(14; 17)(<^И;^25)

кариотип %,ХХ/47,ХХУ.

Обнаружено еще три случая анеуплоидии по половым хромосомам: ¥7,ХУУ,46,ХУ/47,ХУУ и 45,Х/%,ХУ.

У одного пациента(0,3%) с мужским фенотипом и нормальной психосоциальной установкой определен женский кариотип 46,XX.У пробан-да отмечались отклонения в признаках дерматоглифики,характерные для больных с синдромом Клайнфельтера.Путем б - и С-методов окраски хромосом причину маскулинизации выявить не удалось, по можно предположить транслокацию микроскопически не определяемого фрагмента У-хромосомы с тестис-детермииирующими генами па одну из X-хромосом или аутосом,что и обусловило развитие тестикулярной ткани.Нельзя исключить и возможность существования скрытого мозаи-цизма с наличием клонов 46,ХУ или 47,ХХУ в других тканях.

У четырех пациентов(1,3$) обнаружена очень короткая У-хромо-сома.по размеру меньше хромосом группы б . С-окрашивание не выявило наличие структурного гетерохроматина на У-хромосоме,поэтому мы предполагаем делецию длинного плеча У-хромосомы,которая захватила не только гетерохроматиновый сегмент,но и часть эухроматина, прилегающую к гетерохроматиновому блоку. Предполагается,что именно на границе эухроматина и гетерохроматина находится фактор плодовитости, контролирующий сперматогенезСВи^е"!: ,1985).По всей видимости, нарушение сперматогенеза у этих мужчин вызвано именно де-лехшей длинного плеча У-хромосомы.Таким образом, структурные перестройки У-хромосомы составили 6,2% от общего количества ХА.

Среди пациентов с азооспермией в системе аутосом выявлены три транслокации.что составило 1% от всех исследованных мужчин, т.е. доля аутосомных аномалий составляет 4,6% от общего числа ХА. Признать прямую связь аутосомных аберраций с нарушением сперматогенеза нельзя.Мы можем только с определенной долей вероятности предположить,что аутосомные перестройки явились основной причиной остановки сперматогенеза,поскольку ответ на этот вопрос может дать только анализ хромосом в мейозе.

2. С-варианты гетерохроматина хромосом 1.9,16 и 7,

Анализ С-полиморфизма проведен у 100 мужчин с азооспермией и кариотипом 46,ХУ и у 50 пациентов с синдромом Клайнйельтера. Контролем служили 50 мужчин с нормальной репродуктивной функцией и нормальным кариотипом.При анализе С-вариантов хромосом 1,9,16 л У учитывались локализация гетерохроматинового сегмента,его относительный размер,гетероморфизм гомологов.Размер С-сегмента определи-

ли как отношение его длины к длине несущего плеча для хромосом I и У и к длине короткого плеча для хромосом 9 и 16.Инверсии регистрировали,если не менее 1/3 длины С-блока находилось на коротком плече хромосомы.

К редхкм(экстремальшм) вариантам относили малые С-сегменты, оцененные баллом I и крупные С-блоки с оценкой 4 и 5 баллов.

В таблице 2 представлена частота встречаемости С-вариантов хромосом '/-,16 и У.Частоту вариантов рассчитывали по отношению к числу хромосом данной пары у всех индивидов в каждой исследованной группе.

Во всех исследованных группах преобладали хромосомы I со сред ним разMt:¡ ом С-гетерохроматина.Если у пациентов с азооспермией и нормальным кг.риотипом в хромосоме I выявлены все 5 типов С-блоков, то в группе !><укчин с синдромом Клайнфельтера и в контрольно* группе не было ни одной хромосомы I с С-блоком, оцененным максимальным баллом.Часто; а хромосом I с крупным С-блоком во всех исследованных группах весьма мала и практически не различается.Значительно чаще по сравнению с контрольной группой у пациентов встретилась хромосома I с малки экстремальным вариантом,причем при синдроме Клайнфельтера тазпица статистически достоверна(р<0,(Ь).

В контрольной группе лиц с нормальной репродуктивной функцией 90й хромосом 9 имели cj едиий размер С-блока,и ;;ри синдроме Клайнфельтера-лишь 6Щ!(р< 0,001).С такой же высокой степенью достоверности прл этой хромосомной болезни чаще встречались хромосомы 9 с малым экстремальным вариантом^ 32^ по сравнению с % в контроле). Сравнение группы индивидов с азооспермией и кариотипом 46,ХУ с контролем дало недостоверную разницу в частоте встречаемости малого С-сегмента.

В хромосоме 16 лишь однажды обнаружен крупный блок С-гетеро-хрома тина (.при азооспермии с нормальным кариотипом).В других исследованных группах зарегистрированы только С-блоки среднего и малого размера.Надо отметить, что самую высокую частоту встречаемости хромосом с малым сегментом С-гетерохроматина наблюдали именно в хромосоме 16.Уто отмечалось во всех исследованных группах,а при синдроме Клайнфельтера 46% хромосом 16 имели малый С-блок(р< 0,01),

■У-хромосома при азооспермии с нормальным кариотипом представляла полный спектр размеров гетерохроматинового сегмента,а в группе пациентов с синдромом Клайнфельтера и в контроле не встречались У-хромосомы с максимально оцененным блоком С-гетсрохрокатина. ЫЙ

Таблица 2

Частота С-сегментов хромосом 1,9,16 и У у мужчин с азооспермиейС в % )

Исследованные группы Число хромо сом Размеры С-сегмента в баллах

I 2 ) 4 5

ни ео Мужчины с азооспермией .и кариотипом 46, ХУ 200 17,0 .65,5х 14,5 2,5 0,5

о CJ О X Пациенты с синдромом КлаЯнфельтера 100 20,0* 72,0 6,ь 2,0 -

Р) х Контроль 100 10,0 76,0 .а/; з.о -

стч я Мужчины с азооспермией и кариотипом 46,ХУ 2С0 13,5 62,0 20,5 4,0 _

о о о ж Пациенты с синдромом Клайнфелътера 100 32,0***60,0 8,0***- -

а« X Контроль 100 9,0 59,0 31,0 1,0 -

43 ы <0 Мужчины с азооспермией и кариотипом 46,АУ 200 26,5 64,0 9,0 - 0,5

о о о я Пациенты с синдромом Клай1?фельтера 100 46,0**52,0 2,0***- -

р. X Контроль 100 25,0 60,0 15,0 - -

>> Мужчины с азооспермией и кариотипом 46,ХУ ICO 12,0 54,0 22, С* 11,0 1.0

S о о о Пациенты с синдромом КлаИн$ельтера 50 20,0* 44,0 24,0**12,0 -

3 о Рк X Контроль 50 6,0 44,0 44,0 6,0 №

«о Мужчины с- азооспермией и кариотипом 46,ХУ 700 10,0* 62,4 15,7** 3,4 0,5

<и о Я ft Я X ■ >. Пациенты с синдромом КлаЯнфельтера 350 30,9***58,8 8,0*** 2,3 -

О К Е ra t> о Контроль 350 13, 4 62,0 22,6 2,0 -

* -статистически достоверное отличие от контроля,р<0,05 ** - -"- -"- -"- ,р<0,01 *** _ _»_ ,р<о, ;Ю1

У-хромосом при нормальной репродукции имели средний размер С-сег~ мента.Значительно реже наблюдались подобные блоки при азооспермии с кариотилом 46,ХУ(р< 0,05),еще более значима разница частот при сравнении с контролем группы пациентов с хромосомной патологией (р<0,С1). 2С$ У-хромосом в группе мужчин с синдромом Клайнфель-тера имели малый блок С-гетерохроматинаСпо сравнению с 6% в контроле, р< 0,05). При аз.ооспермии с нормальной хромосомной конституцией также отмечалось увеличение частоты встречаемости У-хромосом с малым С-сегментом,однако разница была недостоверной.

Таким образом,налицо явная тенденция к увеличении частоты хромосом с уменьшенным количеством С-гетерохроматила при нарушении сперматогенеза по типу азооспермии.При нормальной хромосомной конституции можно говорить лишь о тенденции,Которая отмечается в каждой исследованной хромосоме,однако в сумме для семи хромосом разница в частоте малых С-блоков по сравнению с контролен уже статистически значима(р< 0,05).

При синдроме Клайнфельтера достоверно увеличена частота малых С-вариантов гетерохроматина во всех исследованных хромосомах, в сумме для семи хромосом разница по сравнению с контрольной группой мужчин с нормальной репродуктивной функцией статистически высоко значима(р<0,001).

Вариабельность структурного гетерохроматина отражает и характер комбинация С-блоков в числе и типах вариантов,сочетаемых в одном кариотипе,поэтому нами проведен анализ распределения экстремальных вариантов по индивидам.Результаты этого анализа приведены в таблице 3.

60Й мужчин из контрольной группы являлись носителями экстремальных вариантов.У мужчин с бесплодием и азооспермией частота встречаемости таких лиц значительно выше:77$ при нормальном кариотипе и 8С$ при хромосомной патологии(р< 0,05),

Все мужчины-носители экстремальных С-вариантов разделены на индивидов с одиночным экстремальным вариантом и с сочетанными вариантами. При синдроме Клайнфельтера частота индивидов с одним экстремальным вариантом меньше,чем в контроле(р< 0,01).Значительно увеличено в исследованных группах число индивидов,в кариотипе которых 2 и более экстремальных варианта.

Эта же таблица дает представление о характере сочетаемости в кариотипе малых и крупных С-вариантов при нарушении сперматогенеза.Как у лиц с нормальным кариотипом.так и при анеупловдии от-

мища ±51Лречаеыиитк ИВДИБЗДОВ С раЗНЫИ

сочетанием в кариотипе экстремальных С-вариантов гетерохроматина(ГХ)

Исследованная группа Чу ж чины с азооспермией и кариотипом 46, ХУ Пациенты с синдромом Клайнфельтера Контроль

Всего обследовано индивидов 100 50 50

абс.кол-1 во % абс.хол-во. % абс.кол-во %

Крупный одиночный блок О-ГХ Малый одиночный блок С-ГХ 12 12 21 21 6 12 5 10 12 24

Всего лиц с одиночным экстремальным вариантом С-ГХ 33 33 б 12** 17 34

Наличие в кариотипе только крупных экстремальных блоков С-ГХ Сочетание в кариотипе малых и крупных блоков С-ГХ ' Наличие в кариотипе только малых экстремальных блоков С-ГХ 3 3 9 9 32 32 I 2 5 10 28 56*** 2 4 11 22

Всего лиц с сочетаиными экстремаль ными вариантами С-ГХ 44 44» 34 68«* 13 26

Итого индивидов с экстремальными вариантами С-ГХ 77 77х 40 80* 30 60

* -достоверные отличия от ^контроля, р<0,05 «»-достоверные отличия от контроля,р< 0, СОТ

мечалась тенденция к увеличении частоты индивидов,в кариотипе которых малых блок С-гетерохроматина сочетался с крупным или все исследованные хромосомы имели только палые С-сегменты.

Достоверно чаще пациенты с синдромом Клайнфельтера обладали хромосомами с малыми С-блоками гетерохроматина.

Зо всех исследованных группах мужчин получена низкая частота лиц с сочетанием в кариотипе только крупных С-сегментов.

В связи с тем,что при азооспермии с кариотипом 46,ХУ для всех исследованных хромосом существует тенденция к увеличению частоты хромосом с малыми С-блоками(а в сумме для семи хромосом разница с контролем достоверна)(таблица 2),а также к увеличению числа мужчин с комбинациями малых блоков,можно предположить,что пониженное содержание С--ге?ерохроматина оказывает неблагоприятное действие на нормальную репродуктивную функцию и,в частности,на сперматогенез.

На отрицательную роль малых сегментов гетерохроматина в репродукции указывается в работах (тсэтсс4 0.1 (1983),Кристесашвили (1984) и Круминя(1989). Существует гипотеза о возможной генетической активности структурного гетерохроматина на ранних стадиях эмбриогенеза <2сЬилзX.гас^ег , 1976).Подугольникова и Елюмина(1962) , наблюдали уменьшенные размеры С-сегментов у детей с змбриопатиями неясной этиологии и сделали вывод о неблагоприятном влиянии общего снижения количества структурного гетерохроматина на эмбриогенез, жизнеспособность и физическое развитие в постнатальном периоде. Возможно,уменьиение суммарного количества гетерохроматина,нарушая сбалансированность хромосомного набора,может привести к искаженно -генетической программы развития,что вызывает неблагоприятные последствия,в том числе нарушение репродуктивной функции путем воздействия на сперматогенез.Эмбрионы с малыми С-блоками больше подвержены вредному влиянию факторов внешней среды,и предрасположенность к тому или иному пороку будет реалкзовываться более часто(Кристе-сашвили, 1984).Нельзя исключить и влияние изменения количества гетерохроматина иа экспрессию структурных генов.

Что касается содержания гетерохроматина в длинном плече У-хромосомы,то поскольку нами получено равное соотношение лиц,в кариотипе которых эта половая хромосома обладала малым и крупным 0-блоком.мы предполагаем,что вариабельность длины У-хромосомы,обусловленная вариабельностью С~сегмента,не связана непосредственно с нарушением сперматогенеза,кроме случаев делеции гетерохроматиьа,

захватившей эухроматиь. Кроме того,на наш взгляд, надо иметь в виду сбалансированность генома по количеству гетерохром-.тина, поскольку С-блоки У-хромосомы вносят свою лепту в суммарное количество гете-рохроматина в хромосомном наборе.

При синдроме Клайлфельтера для всех исследованных хромосом получено достоверное увеличение частоты малых С-сегментов и статистически значимое увеличение частоты лип с сочетанием в кариотипе только малых вариантов С-гетерохроматина,Вероятно,избыточное количество гетерохроматина имеет летальный эффект при г>той хромосомной патолопш.

Если существует определенный оптимальный уровень структурного гетерохроматина,и уменьшение или,напротив,увеличение его количества может привести к различным отклонениям в развитии,то при синдроме Клайнфельтера,когда присутствует в кариотипе лишняя Х-хромо-сома,которая вносит свой вклад в суммарное количество гетерохроматина, большое число хромосом с экстремально малыми С-блоками обеспечивают жизнеспособность эмбрионов с хромосомной патологией.Эмбрионы,в кариотипе которых уровень гетерохроматина превышает некий определенный порог,элиминируются,т.е. дисбаланс по гетерохромати-ну при данной хромосомной патологии может быть одной из возможных причин дифференциальной смертности эмбрионов и разной жизнеспособности индивидов в пост катальном периоде.

Анализ локализации Осегмента хромосом 1,9,16 показал,что ни в одной группе обследованных лиц не были обнаружена индивиды с полной инверсией С-гетерохроматина.Частичные инверсии встречались только в хромосомах I и 9,среди пациентов с синдромом Клайнфельтера вообще не было хромосом с инверсией.Предполагается,что изменение локализации гетерохроматина может способствовать нерасхождению хромосомСКристесашвили ,1984),Пр1чина возникновения синдрома Клаян-фельтера-нерасхождение хромосом,однако наше исследование не выявило среди пациентов с этой хромосомной патологией носителей не только полных(Верлинская и др.,1982),но и частичных инверсий.

Не найдено различий в частоте встречаемости частичных инверсий хромосом I и 9 в норме и при тяжелом нарушении сперматогенеза с кариотипом ч6,ХУ.

При анализе частоты гетероморфизма гомологов хромосом 1,9,16 не выявлено статистически значимых различии при сопоставлении исследованных групп пациентов с азооспермией и контрольной группы фертильных мужчин для ¡¡сех изученных хромосом.Для всех исследован-

ных групп и для всех изученных хромосом характерно преобладание гетероморфизма гомологов средней степени,

3. Результаты дернатоглифического анализа мужчин с азоослеруией и кариотипом 46,ХУ

У мужчин с азооспермией и кариотипоу 46,ХУ было обследовано 396 ладоней рук.Все изученные дерматоглифические параметры сравнивались с таковыми в группе мужчин с нормальным кариотипом и нор* мальной репродуктивной функцией,где было обследовано 236 ладоней.

При нарушении спе¡патогенеза и нормальном кариотипе показаны достоверные различия в частоте встречаемости почти всех пальцевых узоровСза исключением радиальных петель) в сравнении с контролем (таблица 4).При*ем,обвдн тенденция к уменьшению кии увеличению частоты того илу иного узора прослеживается практически на всех пальцах.

Таблица 4 Частота встречаемости различных типов рисунка на пальцах кисти у мужчин с азооспермией и кариотипом 46,ХУ

Тип узора Мужчины с азооспермиеи -л кариотипом 46, ХУ Контроль

Число пальцев % Число пальцев %

Арки Петли радиальные . Петли ульнапные Завитки Всего исследовано пальцев 84 4,3*** 77 3,9 T03I . 52,1*** 788 39,8*** ::980 18 1,5 34 2,9 544 46,1 564 49,5 1180

статистически достоверные отличия от контроля,р<0,001.

У 15,9Й мунчкн с азооспермией наблюдал:: однообразные узоры на всех десяти пальцах,каждый десятый обладал только петляпичв контроле- 3,4&,i)< С, 05) (таблица 5).

Общий гребневыг. счет(ОГС) у мужчин с нормальной репродуктивной функцией раген ?'46,43£3,31,в группе мужчин с азооспермгей и нормальным хромосомьым набором ОГС не отл^^ается от контроля (147,14 i 3,57).Больше всего пациентов имглк гребневый счет в ин-

Таблица 5

Признаки дерматоглифики у мужчин с азооспермией

Мужчины- с азооспермией и кариотипом 46, ХУ - Пациенты с синдромом Клайнфельтера Контроль

аос. кол-зо % аос. кол-во % аос. кол-во %

¡личие только пе-:ль на 10 пальцах 20 10,3* 2 3,8 4

)ГС ниже 100 37 18,7** 12 23,1$ 10 8,5

)тсутствие пальцевого трирадиуса 36 9Д 17 16,3** 12 5.2

40° 161 41,7х 40 39,6 74 33,0

1 > 60° 10 2.6* 3 2,9 16 7,2

1ополнительный осе-зой трирадиус 46 11,6 3 2,9*** 30 12,9

?зоры в области кенара 59 14,9** 5 4,8 18 7,8

^зоры в области типотенара 126 31,8** 36 34,6* 52 22,4

Редкое окончание 1инии А 55 13,9*** 4 3,9 14 6,1

Зарианты четырех-тальцевых складок 34 8,6*** 3 2,9 4 1.7

Всего изучено лиц 198 Всего изучено ладоней 396 52 104 116 232

-статистически достоверные отличия от контроля,р< 0,05

-"- ,Р<0,01

-'•- ,р<0,001

тервале от 101 до '60(41,452).значительно узеличено по сравнению с контролем число лиц с ОГС ниже 100(18,75? и 8,5$ соответственно, ICÜ.OI).

а-6 гребневый счет в группе мужчин с азооспермией в среднем равнялся 82,3S - 0,85 ,что несколько выше этого показателя в контрольной группе( 00,7R ± )>а расстояние между трирадиусами а и t меньше,чём в ко:гг;оле,что привело к уменьшении ширины гребешков,т. е. при азооспермии у мужчин с кариотлпом 46,ХУ на единицу длины приходится большее число гребешков.

Среднее значение углааМв исследованной группе пациентов равнялось 84,8i°¿ 0,68° ,что достоверно ниже,чем среднее значение параметра в контрольной группе ( 88,70° - 2,03°). 41,7^ мужчин с азооспермией к л ели j гол <гМ 40° и mme(Tj контроле-33#,р<0,05)-.

Частота ладоней с отсутствием или с дополнительным трирадиу-сом практически не отлкчается от контроля.

Получено достоверное увеличение частоты встречаемости ладоней,имеющих узоры в области тенара и гипотенара,а также ладоней с редким окончанием главной линии А в полях 1,2,5 в группе мужчин с азооспермией(таблица 5).0,ладоней мужчин с нарушением сперматогенеза имели варианты четырехпадьцевых складок( в контроле всего !,'(%, р< 0,001).

Таким обозом,в г;уппе мужчин с азооспермией и нормальным ка-риотипом по очень большому числу изученных параметров получены достоверные отличия от контрольной группы мужчин.Такие признаки считались измененными. К ним были отнесены следующие: наличие только петель на всех пальцах,ОГС ниже-100,присутствие арок более,чем на одном пальце, у гол &Ы. 4 40°'.узоры на тенаре и гипотенаре,редкое окончание пинии А и наличие вариантов четырехпальцевой борозди.

Чтобы исключить возможность того,что небольшая часть мужчин с азооспермией накопила большое количество измененных признаков, а это, в свою о-)ередь,дало обиую картину высокой частоты встречаемости этих признаков,у каждого изученного индивида подсчитано количество измененных признаков.Всего 8,1$ пациентов не обладали измененными пара Петрами дерматоглифики,а в контрольной группе мужчин с нормальной фертильностью- 30,5Й(р<0,001). 43,% мужчин с азооспермией имели три и более измененных признака,тогда как л контроле- 15,% индивидов(р<0,001).

Как известно, большинство дерматоглнгл'.ческих признаков фор-

мируется исключительно под влиянием генетических факторов,поэтому выделение нами ряда признаков,достоверно отличных у мужчин с нормальной репродуктивной функцией и с азооспермией позволило кап сделать предположение о том,что серьезное нарушение сперматогенеза у части пациентов с нормальным комплексом хромосом генетически детерми нировано.

Несмотря на то, что кариологическое исследование мужчин этой группы показало наличие нормального хромосомного комплекса,накопление измененных признаков дерматоглифики может указывать на возможное скрытое нарушение /ли на дефекты на .уровне гена.

4. Результаты де; ,:атоглкфического анализ;-: пациентов с скнд;оиои Клайн/ельтера.

В группе пациентов с синдромом Клайнбельтера,диагноз которым ставился на основании ;езультатов криологического анализа,было исследовано 520 пальцев и 104 ладони.

Изучение дерматоглифических данных у больных с синдромом ллайп-йельтера подтверждает результаты других более рвннк.х исследований, которые говорят о том, что при нарушении комплекса половых хромосом в признаках дерматоглифики наблюдаются определенные отклонения.

Из четырех типов узоров разница в частоте встречаемости по сравнению с контролем достоверна только для арок.Общая частота этого узора оценивалась как 6,1$(в кон?роле-1,5$,р<0,001).

О ГС при синдроме ллайнфельтере в среднем равен 130,73 i 7, Сб. Это уменьшение по сравнению с контролем отмечалось как на отдельных руках,так и в сумме на двух,причем разница с контролем достоверна (р< 0,05). 23,1% мужчин с синдромом Клайнфельтера имели ОГС ниже ICO,тогда как в контрольной группе всего В,5$ индивидов обладали ОГС в этом интервале(р< 0,05) (таблица 5).

Для того, чтобы уэкать.чем определяется уменьшение ОГС у паци-ентоз с хромосомной nai о.л огией,мы обработали результаты подсчета среднего гребневого счыа петель и завитков на отдельных пальцах руки и всех пальцев вместе.Диализ показал,что п;и синдроме Клайнфельтера средний гребне вы Я счет рядиалышх.уль парных петель и завитков ниже,чем у фертпльпых мужчин.Таким образом,уменьшение ОГС, наблюдаемое в группе пациентов,можно интерпретировать не только как результат увеличения частоты арок,но и как следствие редукции гребневого счета пе*ель и завитков.

Достоверно меньше,чем в контроле,величина среднего гребневого счета между пальцевыми грир.адиусами а и I муячин с анеуплоидией

он равен 76,86 - 1,64 Св контроле- 80,76 £ 1,14,р<0,05).Анализ подсчета средней ширины гребешков говорит об увеличении их ширины при синдроме КлаРукрельтера.Значительно чаде,чек в контроле,вст; чались ладони с отсутствием пальцевого тря радиуса с (16,% и 5,2$ соответственно,р< 0,01).

Отмечалась тенденция к проксимальному смещению осевого три-радиуса t ,т.е.,другими словами,к уменьшению максимального угла aid .однако разница но сравнение с контролем достоверна лишь для правой руки.Б срзднем значение угла aid. при синдроме Клайнфельтерг равно 43°(в контзоле-44,4°).Достоверно реке,чем в контроле,встречались ладони с дополнительным осевым трирадиусом(2, % по сравнению с 12,9$ в контрольной группе фергильннх мужчин,р<0,001),

Каждая третья ладонь пациента с синдромом Клайнфельтера обладала узором в области гипотенара(34,б$).Разница по сравнению с кон ролем(22,4уОстат|".стически доотоверна(р<0,05)0габлица 5).

Не отмечалось в группе пациентов увеличения частоты ладоней с редким окончанием главной ладонной линии А и с вариантами четы-Iехпальцевой складки.

Таким образом, при нарушении комплекса половых хромосом наблюдались следующие отклонения в признаках дерматоглифики:увеличе-ние частоты встречаемости арок,уменьшение ОГС, среднего гребневого счета между пальцевыми трирадиусами а и 1з ,проксимальное смещение осевого трирадиуеа,увеличение частоты ладоней с узорами на гипоте-наре и с отсутствием пальцевого трирадиуса.

Из всех исследованных признаков, кожного рисунка пальцев и ладоней нельзя определить строго специфические для синдрома Клайнфельтера,тем не менее на вышеупомянутые параметры надо обращать особое внимание гри анализе отпечатков пальцев и ладоней. Присутствие любого из эту.х признаков,тем более их совокупность,может слу-¡тат'., основанием для направления на цитогенеткческое исследование. Подобный подход особенно важен в клинике бесплодия,ццс у больных h большинстве случаев наблюдается стертая клиническая картина синдрома.

5. Анализ дерматоглифическях параметров у носителей малых экстремальных С-вариантов хромосом 1,9,16 и У.

Проводилось исследование дермагоглифических параметров у 26 индивидов,кариотип которых при окрашивании пэ С-методу содеркал только хромосомы 1,9,г6 и У со средним размером С-сегиента.Результаты сравнивались с таковыми у лиц,в кариотиле которых наблюдались

•2 малых С-блока(39 человек) и у мужчин с тремя и более малыми •вариантами(15 человек).Остальные исследованные хромосомы в пос-дних двух группах ииели С-гетерохроматин среднего размер.

Существенно повышался ОГС в грУП11е мугчян.в кашотипе кото-х три и бвлее хромосом с малым С-блоком(I66,13 ¡о сравнению с 9,96 в группе индивидов,не имеющих вообще экстремальных вариан-в в кари от и пе). 6 СЙ этих мужчин имели ОГС выше 16С(в двух других |уппах-30,ад.

По мере накопления в кариотипе хромосом с малыми С-варианта-увеличивалась частота ладоней без пальцепогг три адиуса и с до-лнительными пальцевыми трирадиусами.уменьгсялась частота .ладоней з осевого трирадиуса("Ь) или с дополнительным трираднусом кже резко возрастало число ладоней с узорами на тенаре: иракт,!-ски каждая третья ладонь обладала рисунком в этой области.Часта узоров на гипотенаре,напротив,уменьшалась по мере накопления |омосом с малыми С-вариантами.

Таким образом,увеличение гребневого счета, наличие доиолттелъ-х пальцевых трирадиусов или их редукция,узоры на тенаре-все это жет говорить о возможном уменьшении в кариотипе суммарного коли-ства структурного гетерохроматина,т,е. о сочетании в кариотипе юмосом с малыми экстремальными С-варианта:.:и.

Результаты сопоставления данных дерматоглифики с наличием в риотипе экстремальных С-вариантов хромосом 1,9,16 и У говорят в пользу того,что структурный гетерохроматин является фат ором,пеняющим градиент распределения кожных узороз или нарушающим сте-нь их экспрессивности,оказывая влияние на формирование кожного супка на пальцах и ¿.адонях рук.

Эти данные еще раз подтверждают существующее мнение о том, о изменение оптимального суммарного количества гетерохронатшш безразлично для организма,особенно в процессе эмбрногенеэаСГ.'од-,ольникова,Блюмкна,1962) и может влиять не только на форнкрова-е кожных узоров,но н на морфогенез в целом.Конечно,опираясь на зультаты нашего исследования,мы может гоьо; ить только о пеблаго— пятном эффекте уменьшенного количества гетерохгомг^ина.

Кллнико-генеалогическое исследование мужчин с азооспермией казало высокую степень отягоцениости родословных по признакам, торые связаны с паруленим фертильностиСбссплодпый брак,предшест-ющее бесплодие,смерть детей до 1 года,отягощенный акукерский анак-э у замужних родственниц или жен родственников).Анализ семейных

частот встречаемости вышеуказанных признаков по трем степеням ро; ства выявил их существенное семейное накопление в обеих исследовг них группахСкак при нормальном кари отипе, так и при анеуплоидии).

Проведение генетпко-корреляционного и геиетико-сегрегашшннс го анализа не входило в задачи настоящего исследования,поэтому изучение родословных мужчин с азооспермией позволяет нам только с большой осторожностью сделать предположение о том,что в ряде случаев,даме при отсутствии видимых аномалий кариотипа,немаловажную роль в этпонатогевеэе нарушения сперматогенеза играют наследствен ш:е факторы,

'Гаки> образе.-),для выявления различных генетически обусловлен i:í'X vO'.m нарушзтл сперматогенеза необходимо комплексное примене-к;.е ¡азличных методов генетического и с след звания, таких как цитоге-не.ji!веский,дерматоглифпческий и генеалогический.На основании резу. титоб нашего исследования мы предполагаем,что в этиологии нарушения сперматогенеза велика доля генетических факторов,что подтверждается выявленной высокой частотой хромосомных аномалий,достоверны!! увеличением суммарной частоты малых вариантов С-гетерохромати-х• омосом 1,9,16 и У,повышенной частотой отклонений в параметра* дерматоглифики к отягоценных родословных мужчин с азооспермией,

В В О Д Ы

1. Ср.еди нукчин с азооспермией хромосомные аномалии встречают' ея с писокой частотоя(21,3$).В згиолопш нарушения сперматогенеза

г.о типу азооспермии существенная роль, принадлежит анеуплоидии по головым хромосомам(18,7л!).доля гоносомных аберраций в общем числе

, омосомных аномалий составляет 95 .доля же структурных перестроек ау: осой значительно тда-'-^.бЙ.Сбцая частот;-, синдрома Клайнфель-i.,a с;ед7 мужчин с азооспермией составляет 17,72. 87$ всех гациен-0!« о чнеупловдие» по Х-хромосоме имеет чисгус форму сундроке.

2. При азооспермии с нормальным кариот^п^м установлено досто-vt:,Hoe увеличение суммарной частоты хромосом '-,9,16 и У с малыми \v< .иантами С-гетерохроматика.При синдроме Кла нфельтера увеличена •'а--гота каждой исследованной хромосомы с малыми С-сегмеитами,а так-.<о частота лиц с наличием кариотипе только 'алых экстремал] ных

va - пантов.

3. У мукчин с азооспермией к кариотипом '-»6, ХУ выявлен кемп-■екс значимых отклонений дерматоглифических параметров от гручпы •Je; ^ильных мужчин: проксимальное смецеиие ос (.что три радиуса, у.юры та тенаре и гипотенаре,редкое окончание главной ладонной ли го; и Л, чаличие вариантов четыг-гх пельцезой склад te:.

4. При синдроме Клайнфельтера выявлено уменьшение С ГС,при

м уменьшение связано как с увеличением числа пальцев с и ка::и, и с редукцией гребневого счета петель и завитков.Установлено же достоверное уменьшение гребневого счста.увелич'-.^е часы ладоней с узорами на гипотенаре и с отсутствием нал! ■ "вого радиуса с.Наличие таких, отклонений в параметрах дерматоглифики ет служить показанием к цитогенетическому обследованию нациен-

5. Выявлены определенные корреляции между дангкми дерчатогли-а и наличием в кариотипе экстремальных С-ватиантов: по мере паления в кариотипе хромосом 1,9,16 и У с малыми ('-вариантами яичивается ОГС,частота ладоней без пальцевого т];;:;адиуса или с алии тельными пальцевыми трирадиу сами, возрастает число ладоней зорами на тенаре.

6. Выявленная высокая частота хромосомных аномалий,увеличе-суммарной частоты малых экстремальных С-вариантов хро;:осом 1,

3 и У,повышенная частота отклонений в параметрах дерматоглифи-I отягощенных родословных указывает на значительный вклад ге-1ческих факторов в этиологию нарушения сперматогенеза по типу юпермии.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Пр1 мужском бесплодии с на;,ушв!ием спо; матогенсза по типу юпермии рекомендуется:

I1. Комплексное применение разлкчных методов генетического it с— ;ования,включающих в себя цитогенетнческий.дерматоглифическнл ¡неалогический.

2. Всем без исключения лицам с нарушением сперматогенеза по

азооспермии обязательно проведение кариологического анализа

выявления хромосомных аномалий.

3. В случае невозможности проведения кацтлогаческого лпали-;сем бесплодным мужч.шак с азооспермией проводить отбор паци-iB для исследования хромосом по результатам анализ Х-хромат:;-ли де^матоглифического анализа с целью выявления му},:ч1,н с сицд-и Илайнфельте^а.

4. Обнаружение анеуплоидии по X-xiомосоме.делении гетерохро-нового сегмента длинного плеча У-хромосомы,XX-Kaiиотппа дает ой прогноз относительно восстановления репродуктивной (■упкцпк 1ента. (бедует j екомездовать инсеминацию жены спермой донора.

СПИСОК ?Ai£Г ПО ТШЕ ДИССЕРГАПИ

1. lliipiüoaa Л. С, ,Читакадзе К.В., Копа лизни Н. Ш, Хромосомные а "алии в генезе 5еспаодия//Мат.1 респ. дауч. "энф. молодых ученых п гг. облеме"Бесплодный брек".-Тбилиси, 1985.-С. 147

2. Ниршова Л.С. .Нигаианидзе Ш. Кариотип 46,XX у мужчины.Ош с.зШ1е случая.//Тез.докл.респ.конф.молодых ученых и специалистов1 "Молодые учепие-ускоренип процесса".-Тбилиси. -19Б6.-С. 125

3. Окуджава H.A.,'1опалианп Н.Ш., Ширшова Л. С., Дкгаркава H.A. Значение цитогенетических исследований при медико-генетическом консультировании бесплодных индивидов//Мат.Зсесоюз.симпоз!'Лктуал ■¡ые вопросы профилактики на с лсд ст.болезней".Вильнюс.-1986. -С. 93.

4. Гиршова Л. С. Соотношение различных типов аномалий хромое у мужчин с азооспершей//Мат.У съезда Груз.оба-ва генетиков к се . i скцко 11 еров.Т б или си.-1986. С.217-218.

Г>. и'ршова Л.С.,Чиракадзе К.В. Азооспермия и аномалии полов х; омосои//Тсз.докл.юбил.конф.НИИ репродукции человека"Современны вопросы репр оду ктологип1'. Тбилиси.-1988.-С. 50-51.

6. Чиркова JI.C., ¡Сристесагвили Д.И. Ано-алии и варианты хром сом у бесплодных мужчин с азоос.1ермией//Сб. "Хромосомы человека в норме и патологии.II. :Наука,1969.-C.II7-I24.

7. ШирЕОва Ж.С.,Хтлстесашшлй Д.И.,Григалашвшш Н.В. Штоге-::(. "тческий анализ бесплодных мужчин с азооспермией//Матер. П Bcect ¡¡ого съезда мел. генетиков.-Алма-Ата.-1990, -С. 499,