Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Цитогенетический и электронно-микроскопический анализ районов локализации транспозонов в политенных хромосомах Drosophila melanogaster

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Цитогенетический и электронно-микроскопический анализ районов локализации транспозонов в политенных хромосомах Drosophila melanogaster"

*

РГ5 ОД

2 5 £ЕК 20ПЗ "

На правах рукописи

УДК 57.086:576.316.352:595.773.4

Шлома Виктор Владимирович

ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИЙ И ЭЛЕКТРОННО-МИКРОСКОПИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ РАЙОНОВ ЛОКАЛИЗАЦИИ ТРАНСПОЗОНОВ В ПОЛИТЕННЫХ ХРОМОСОМАХ тюхорнил МЕИЛМОСЛЬТЕЯ.

Генетика - 03.00.15

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Новосибирск 2000

Работа выполнена в лаборатории молекулярной цитогенетики Института цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск

Научный руководитель: доктор биологических наук

В.Ф. Семешин

Институт цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск

Официальные оппоненты: доктор биологических наук

Л.В. Высоцкая

Новосибирский государственный университет, г. Новосибирск

доктор биологических наук Н.Б. Рубцов

Институт цитологии и генетики СО РАН, г. Новосибирск

Ведущее учреждение: Институт биологии гена РАН,

г.Москва.

Защита диссертации состоится 6 _2000 г.

на утреннем заседании диссертационного совета по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук (Д - 002.11.01) в Институте цитологии и генетики СО РАН в конференц-зале Института по адресу: 630090, г. Новосибирск, проспект академика Лаврентьева, 10; т/ф: (3832) 33-12-78, e-mail: dissov@bionet.nsc.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института цитологии и генетики СО РАН

Автореферат разослан _2000 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор биологических наук " А. Д. Груздев

Ш-4

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы.

Одной из главных задач современной генетики является выяснение принципов организации хромосомы и составляющих ее структурных элементов. Особый интерес представляет интерфазная хромосома, в которой идет активная экспрессия генетического материала и интенсивность функционирования которой максимальна. Однако, именно в этот период хромосомы диплоидных клеток максимально деконденсированы, и практически недоступны для визуального анализа.

Уникальной моделью интерфазных хромосом являются политенные хромосомы двукрылых, которые обладают рядом характерных особенностей, делающих их привлекательным и незаменимым объектом цитогенетических исследований: 1) политенные хромосомы обладают гигигантскими размерами, поскольку состоят из тысяч гомологичных нитей - хроматид, 2) они обладают характерной морфологией, возникающей за счет чередования плотно упакованных участков хроматина - дисков, и менее плотно упакованных участков - междисков; высокая специфичность возникающего дискового рисунка позволяет легко идентифицировать отдельные районы хромосом.

Несмотря на интенсивность исследований, вопрос о взаимосвязи молекулярно-генетической и структурно-функциональной организации политенных хромосом остается во многом открытым. Решение этой проблемы с помощью обычных молекулярных, генетических и цитологических подходов основывается главным образом на цитологических данных, полученных при помощи световой микроскопии, которая не дает достаточного разрешения и в результате не всегда позволяет провести связь между молекулярно-генетической организацией и морфологией конкретных структур политенных хромосом (2Ыти1еу сЧ а1., 1981; Жимулев, 1994).

Новый подход к решению данного вопроса был предложен В.Ф. Семешиным и его коллегами. Суть этого подхода состоит в выявлении и морфологическом описании структур, которые формируются при встройке в хромосому фрагментов ДНК с известными молекулярно-генетическими характеристиками. Применение в этих исследованиях методов электронной микроскопии (ЭМ) позволяет добиться наибольшего разрешения и точности в выявлении, картировании и описании возникающих структур. Таким образом, внедряя в состав хромосомы различные по составу и свойствам фрагменты ДНК, можно проводить моделирование морфологических структур политенных хромосом, что, в свою очередь, дает возможность точно выявлять связь между молекулярными и структурно-функциональными характеристиками фрагментов ДНК в составе хромосомы.

Цель данной работы.

Целью данной работы является моделирование структур политенных хромосом (дисков, междисков, пуфов) с помощью транспозонов различной

n

длины и разного генетического содержания. В связи с этим были поставлены следующие конкретные задачи:

1. Получить и охарактеризовать коллекцию линий, содержащих инсерции транспозонов различного размера и генетического содержания, без отбора получаемых линий по каким-либо фенотипическим признакам.

2. Разработать упрощенный метод ЭМ гибридизации in situ, что позволило бы локализовывать последовательности ДНК в политенных хромосомах с точностью до конкретных морфологических структур и дало бы возможность, в частности, проводить точную цитологическую локализацию генов и встроек транспозонов.

3. Осуществить картирование встроек, приводящих к летальному фенотипу.

4. Используя полученную коллекцию линий, при помощи ЭМ анализа провести моделирование дисков различной толщины, возникающих при встройке транспозонов разного размера в различные районы политенных хромосом.

5. При помощи конструкций, содержащих последовательность ДНК междиска 61С7-8, исследовать, какие структуры будут возникать в районах инсерций.

6. Проанализировать морфологические проявления активности промотора гена домашнего хозяйства Prat, содержащегося в транспозоне P[ry+;Prat:bw],

7. При помощи подходящих конструкций осуществить моделирование "темных пуфов".

Научная новнзна.

В настоящей работе впервые осуществлено ЭМ картирование встроек транспозонов, вызывающих появление летального фенотипа у особей, гомозиготных по инсерции. Также при помощи встроек транспозонов различного размера проведено моделирование дисков различной толщины. Впервые экспериментально показано, что размер среднего диска в политенных хрососомах составляет -~40 т.п.н. На основе данных ЭМ анализа встройки транспозона PflacWJ проклонирована и проанализирована ДНК междиска 68АЗ-5, который, как было показано в результате анализа, содержит промоторную область гена bed. При помощи конструкции WRIpUC, содержащей фрагмент ДНК междиска 61С7-8 показано, что данного фрагмента недостаточно для формирования нового междиска в районе встройки транспозона WRIpUC.

Впервые проведен ЭМ анализ структур, формируемых на основе материала конструкции, содержащей промоторную область гена домашнего хозяйства Prat и находящейся под ее контролем последовательности гена bw. Показано, что в районе инсерции такой конструкции формируется новый рыхлый диск, по характеристикам сходный с малыми пуфами. Также в результате ЭМ анализа структур, формируемых на основе последовательно встроенных в один район повторенных копий транспозона P[ry+;Prat:bwJ,

впервые проведено моделирование так называемых "темных пуфов". На основе полученпых данных выдвинуто предположение, объясняющее характерную морфологическую структуру "темных пуфов".

Практическая ценность.

В работе показана высокая эффективность использования метода моделирования морфологических структур политенных хромосом при помощи Р-транспозонов при изучении структурно-функциональной организации политенных хромосом. В настоящий момент этот метод является единственным, позволяющим выявлять связь между первичными последовательностями ДНК и формируемыми на их основе структурами политенных хромосом.

Апробация работы

Основные результаты этой работы были представлены:

1. В стендовом сообщении на XII Всероссийском симпозиуме по структуре и функциям клеточного ядра, 22-24 октября 1996 г., Сапкт- Петербург, Россия.

2. В стендовом сообщении на VI Европейском конгрессе по энтомологии. 23-29 августа 1998 г., Ceske Budejovice, Чехия.

3. В стендовом сообщении на Всероссийском симпозиуме по структуре и функциям клеточного ядра, 19-21 октября 1999 г., Санкт- Петербург, Россия.

Вклад автора

Основные результаты получены автором самостоятельно. Работы по ЭМ картированию инсерций проводились как совместно с В.Ф.Семешиным, так и самостоятельно. Автор принимал непосредственное участие в разработке описанного в данной работе метода ЭМ in situ гибридизации. Молекулярный анализ ДНК междиска 68АЗ-5 выполнен С.А.Демаковым и И.В.Макуннным.

Объем работы

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов и обсуждения, а также выводов и списка цитируемой литературы, в который входит 201 ссылка. Работа изложена на 133 страницах машинописного текста, содержит 2 таблицы и 20 рисунков.

Публикации

По теме диссертация опубликовано или находятся в печати 6 работ.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

Линии мух. В работе использовались линии Drosophila melanogaster, содержащие инсерции разных Р-транспозонов, схематически изображенных на Рисунке 1. Линию гу5Пб56,Р[гу*А2-3] использовали как конститутивный источник транспозазы в экспериментах по получению встроек транспозона при помощи "enchancer trap" метода (O'Kane, Gehring, 1987). Для морфологического сравнения трансформированных районов хромосом с нормой использовали лабораторные линии мух дикого типа Oregon R и Batumi-L, а также ^трансформированные районы хромосом линий со

3 lacZ-hsp70 ^Adh rosy pBluescript

5'РИдщЛ:^ II " ИЗ'Р 19 т.п.н.

^ facZ hsp 70 Kan rosy

5'P вяур—г—^-лжл—1 -J— n 3'p 14,4 т.п.н.

lacZ hsp 70 white > ampR

.IZZZZ-aTP 10,7 т.п.н.

г

Prat.bw

F <- Г R

« rosy bw 4V. ......... im'T 16 т.п.н.

Д

^y/hite ^ a6

5'P BBS?! 1 .....и 3'P 16 т.п.н.

^ while Ь6

^'РГгГгТ--^1— ' ................15,3 Т.И.Н.

Ж white - a6 i?

5'PE3= I """r ..11. .. . "-""_'.. ■ Д3'P 40 т.п.н.

3 . white Д™ 61-3,8 HB pUC19 5'РЕ5ВЭг==~ .«..ill—Hi »mmrnmum-В 3'P 11,4 Т.П.Н.

Рисунок 1. Схематическое изображение использованных в работе транспозонов. а - P-IArB (Bellen et al„ 1989); 6 - PZ (Mlodzik, Hiromi, 1992); в -P[lacW] (Bier et al., 1989). r - P[ry+;Praf:bw] (Clark et al., 1990); д - P[w+;a6] (Макунин, 1999); e - P[w+;a6] (Макунин и др., 1999); ж - 5581 (Шварц, неопубликованные данные); з- WRIpUC (Демаков, Шварц, неопубликованные данные). lacZ - последовательность репортерного гена lacZ; hsp 70 -промотор гена теплового шока hsp 70; Кап, ampR - гены устойчивости к антибиотикам; Adh - последовательность гена алкогольдегидрогеназы; аб, Ь6, t9, 5581 - геномные последовательности; white, гу, - кодирующие последовательности маркерных генов окраски глаз white и rosy, pBluescript, pUC19 - плазмидные последовательности; 61-3,8 HB - последовательность междисковой ДНК из района 61С7-8. Справа указаны молекулярные размеры конструкций.

встройками. В качестве контроля при других экспериментах также использовали лабораторные линии мух дикого типа Oregon R и Batumi L.

Метод ЭМ картирования. Приготовление препаратов для ЭМ анализа проводили по .методу, описанному в статье В.Ф.Семешина с соавторами (Семешин и др., 1979). При ЭМ картировании районов политенных хромосом использовали правила, разработанные В.Ф. Семешиным с соавторами (Семешин, Жимулев, 1989; Semeshin et al., 1989).

Молекулярные методы. Все молекулярные методы, связанные с выделением и анализом нуклеиновых кислот, выполняли согласно руководству Маниатиса и др. (Maniatis et al., 1982) и Мазина и др. (Мазин и Др., 1990).

Гибридизация in situ. Приготовление препаратов политенных хромосом слюнных желез и гибридизацию с меченными 3Н, DIG-11-dUTP и biotin-16-dUTP фрагментами ДНК выполняли по стандартным методикам (Gall, Pardue, 1971; Atherton, Gall, 1972; De Frutos et al., 1990; Zhang, Spradling, 1995).

ЭМ гибридизация in situ. Для детекции сигнала на световом уровне гибридизацию in situ с меченными дигоксигенином фрагментами ДНК выполняли, как описано ранее (De Frutos et al., 1990). При проведении гибридизации для последующей детекции на ЭМ уровне мы придерживались той же схемы, с некоторыми существенными модификациями: а) исключили высушивание препаратов на всех этапах работы; б) перед денатурацией препараты дофиксировали в растворе 70% этанола с добавлением 4% формальдегида и 5% уксусной кислоты в течение 10 мин., а затем проводили через серию спиртов понижающейся концентрации (50, 30 и 10%) и накапливали в растворе 2xSSC; в) препараты прогревали в растворе 2xSSC при 65°С в течение 2 мин., денатурировали в 70% растворе формамида с добавлением 30% 2xSSC при 65°С в течение 2 мин., после чего быстро охлаждали в 2xSSC при 4°С (Макгрегор, Варли, 1986). Дальнейшая процедура гибридизации проводилась с использованием стандартной гибридизационной смеси, содержащей 50% деконизованного формамида при 37°С в течение 1618 часов; количество меченой пробы ДНК составляло приблизительно 20 нг на препарат (De Frutos et al., 1990). Для детекции сигнала использовали антитела против дигоксигенина, связанные с частицами золота (»0,8 нм) с последующим его усилением серебром в течение 30 мин. (реактивы компании Boehringer Mannheim).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

Получение коллекции трансформантнык линий. Нами из различных экспериментов и источников было получено более 50 линий, содержащих инсерции транспозонов (Рис. 1) в различные районы X, 2L, 2R, 3L и 3R хромосом. Для полученных линий были определены группы сцепления хромосом с инсерциями. Из 51 проанализированной нами линии в четырех

инсерции транспозона произошли в Х-хромосому, в пятнадцати - во вторую хромосому, в тридцати - в третью хромосому, и две линии несли инсерции во второй и третьей хромосомах (Таблица 1).

Проверка жизнеспособности линий в гомозиготе по инсерции показала, что из 51 линии пять нежизнеспособны в гомозиготе по инсерции. Только три линии имеют фенотипические отклонения. Таким образом, на основании полученных данных можно сделать вывод, что в большинстве случаев встройки трааспозонов не приводят к возникновению видимых мутаций.

Таблица 1. Результаты определения групп сцепления хромосом со встройками и картирования встроек при помощи in situ гибридизации.

Вектор Районы инсерции

PZ 38D1-2, 97С, 99В, 96С, 99В, 61А

P[lacW] 76С, 85Е1-2,68А, 93В, 47А, 2В, 59EF, 87АВ, 68С, 72D, 79F, 75F-76A, 90EF, 75В1-2; 76CD

P[w+;а6] 59F

P[w* ;Ьб] 59А; 96А, 36D, 77В1-2,61CD, 82С, 42D, 94В1-2, 66А, 61С, 28А

5581 35, 86Е,

WRIpUC 7D5-6,12А, 16СЗ-4, 47А11-16, 47F, 62Е

Рfry+; Prat :bw] 65Л

При помощи гибридизации in situ были определены районы инсерции транспозонов. Как видно из Таблицы 1, встройки транспозонов распределены по хромосомам неравномерно. Большая часть встроек произошла в третью хромосому, меньшее количество встроек - во вторую и в Х-хромосому. Значительное количество встроек попадает в районы, в которых на определенной стадии развития личинки либо на протяжении всего развития личинки образуются пуфы, что затрудняет дальнейшее картирование инсерции.

Также нами было проведено определение паттерна экспрессии lacZ в линиях со встройками транспозонов PZ и P[lacW] у личинок третьего возраста, поскольку дальнейший анализ хромосом также проводился у личинок этого возраста. Из 21 проанализированной линии 9 имели паттерн специфической окраски на X-gal, отличный от контрольной линии Oregon R. Во всех этих 9 линиях окраска в разной степени выявляется в слюнных железах. В остальных органах и тканях экспрессия lacZ распределена по-разному в зависимости от линии. Представляется интересным, что три имеющие фенотипические отклонения линии из данного набора, (летали и стерильность) имеют ярко выраженный паттерн экспрессии lacZ, отличный от контрольной линии Oregon R.

Таким образом, нами была собрана и охарактеризована коллекция линий D. melanogaster, содержащих встройки различных по величине и генетическому составу транспозонов в различные районы хромосом. Подавляющее большинство линий со встройками жизнеспособны в гомозиготе по инсерциям и не имеют заметных фенотипических отклонений. На основе этой коллекции в дальнейшем и проводилось моделирование структур политенных хромосом.

Электронно-микроскопическая гибридизация in situ. Для повышения разрешающей способности картирования последовательностей ДНК нами был разработан новый вариант метода ЭМ гибридизации in situ с использованием проб ДНК, меченных дигоксигенином. В качестве модели для выявления специфичности и разрешающей способности метода мы использовали трансформированную линию 148, поскольку ранее было показано, что инсерции искусственных транспозонов типа Р-1ЛгВ могут формировать новые диски в районе их инсерции (Рис. 2) (Семешин и др., 1994).

По данным гибридизации in situ на уровне световой микроскопии ДНК lacZ пробы в линии 148 выявляется в районе ЗА X хромосомы. Дальнейший ЭМ анализ подтверждает наличие инсерции — в трансформированном районе между дисками ЗА4 и ЗА6 появляется новый диск, материал которого, очевидно, соответствует материалу инсерции Р-1АгВ и морфологически сходен с дисками, формируемыми такими же вставками в других трансформированных районах (Семешин и др., 1994).

Р-транспозон

Встройка в междиск

4

I

ДЙ

«JL

Встройка в диск

f.Л

Рисунок 2. Схема формирования нового диска в районе инсерции из материала транспозона.

Поскольку встройка транспозона Р4АгВ в линии 148 расположена недалеко от района 3C2-3, в котором расположен ген w (Sorsa et al., 1973), в дальнейшем для проведения ЭМ гибридизации in situ мы использовали ДНК плазмиды Carnegie-20, содержащей фрагмент ДНК гена гу (7,2 т.п.о.) и последовательность ДНК гена w (около 700 п.о.) (Rubin, Spradling, 1983). В результате гибридизации in situ ожидалось появление сигнала в двух близко расположенных участках X хромосомы - ЗА4-6 и 3C2-3. Данные ЭМ гибридизации in situ хорошо подтверждают ожидаемые результаты. На серийных срезах политенной хромосомы отчетливо видно, что метка локализуется как в районе ЗА4-6, где находится вставка Р-1АгВ, так и несколько правее начального участка подсекции ЗС, где в дистальной части диска 3C2-3 расположен ген w (Sorsa et al., 1973).

Таким образом, в данной работе был успешно разработан и применен новый, облегченный метод гибридизации in situ на полигенных хромосомах на ЭМ уровне. Разработанный метод существенно проще для технического исполнения, позволяет достичь более высокого разрешения при картировании и дает четкие воспроизводимые результаты.

Электронно-микроскопический анализ районов инсерций транспозонов PZ, P-lacW и 5581. Линии для ЭМ анализа из полученной нами коллекции линий отбирались в первую очередь по следующим признакам: 1) по отсутствию в районе встройки крупных пуфов по крайней мере на какой-либо стадии развития личинки 3-го возраста, поскольку в противном случае даже при использовании ЭМ новообразованный диск в пуфирующем районе выявить практически невозможно; 2) по паттерну окраски на X-gal органов личинок 3-го возраста, отличному от линии Oregon R; 3) по жизнеспособности линий в гомозиготе по инсерции.

Исходя из вышеприведенных критериев и из полученных нами характеристик для ЭМ анализа нами были выбраны следующие линии: 740, 791,259, 184,486, 121,524,380, 836, 118.3.

ЭМ анализ встроек в линиях 740, 791, 184, 259, 118.3 выявил в районах инсерций транспозонов новые диски, формируемые материалом транспозонов.

Особый интерес представляет трансформированная линия 184. По данным гибридизации in situ на уровне светового микроскопа она несет инсерцию транспозона в район 68А 3L хромосомы. В этом районе между дисками 68АЗ и 68А4-5 появляется новый тонкий диск, материал которого, очевидно, соответствует материалу инсерции транспозона P-iacW. ДНК, прилежащая к инсерции, была клонирована методом "спасения Р-мишеней" (Wilson et al., 1989), сиквенирована и проанализирована. Согласно полученным данным, на расстоянии 45 п.н. от 3' конца Р-элемента находится последовательность ДНК, соответствующая гену домашнего хозяйства Ixd (Демаков С.А., Макунин И.В., неопубликованные данные). Ранее ген Ixd был цитологически картирован в интервале 68АЗ-5 (Bentley et al., 1981; Bogaart and Bernini, 1981; Browder et al.,

1982). Таким образом, можно утверждать, что промоторная область гена Ixd расположена в междиске 68A3 - A4-5.

Ранее в ряде работ по исследованию Р-элементных мутаций было выяснено, что Р-элементы преимущественно встраиваются в непосредственной близости от сайтов начала транскрипции, то есть в 5' нетранслируемые районы генов (Tsubota et al., 1985; Kelley et al„ 1987; Engels, 1989), а также в интронные зоны генов (Соловьева, 1992; Engels, 1989; Horowitz, Berg, 1995), Также были высказаны предположения, что в междисковых районах могут быть расположены промоторные области генов (Paul, 1972; Sorsa, 1975, 1976, 1984). Как следует из полученных нами данных, промоторная область гена Ixd находится в междиске 68АЗ-5. Ранее уже были получены данные о том, что в междисковых районах могут располагаться промоторные области генов. Так, в двух из трех исследованных междисковых районов с высокой вероятностью располагаются 5' концы трех генетических локусов (Демаков, 1994, Шварц, 2000). Таким образом, на основании того, что встройки транспозонов с высокой частотой происходят в районы междисков, и в то же время, в промоторные области генов, можно предполагать, что другие полученные встройки в междисковые районы также попадают в регуляторные зоны генов.

Линия 118.3 содержит встройку конструкции 5581 в район 86Е 3R хромосомы. Поскольку размер конструкции составляет более 30 т.п.н., то в районе инсерции мы ожидали увидеть новый крупный диск. Действительно, в линии 118.3 в трансформированном районе за диском 86Е7-8 возникает новый толстый и плотный диск, материал которого, очевидно, соответствует материалу инсерции транспозона 5581.

ЭМ анализ районов инсерций транспозонов в линиях 486, 121 и 524, проведенный нами, не выявил новых дисков, соответствующих материалу инсерции, возможно, из-за того, что инсерции транспозонов в этих линиях произошли в диски.

В случаях, когда в районах инсерций мы обнаруживали новые структуры, формируемые из материала транспозонов, эти структуры были представлены дисками различной толщины. Толщина выявленных дисков зависела от размера транспозонов. Так, материал конструкции PflacWJ, имеющей размер 10,7 т.п.н. в районах инсерции формирует тонкие диски, а транспозон Р-1АгВ размером 19 т.п.н. - более толстые диски. Ранее Беерман, основываясь на данных о количестве ДНК в гаплоидном наборе Drosophila melanogaster (Rudkin, 1972) и количестве выявляемых цитологическими методами дисков оценивал примерный молекулярный размер среднего диска в 30 т.п.н. (Beermann, 1972). Формирующийся в районе 86Е на основе материала конструкции 5581 диск имеет толщину, сравнимую с толщиной расположенных рядом дисков 86Е1-2 и 86Е7-8, имеющих среднюю толщину. Поскольку размер конструкции 5581 составляет примерно 40 т.п.н., можно утверждать, что оценка, данная Беерманом, является верной. Таким образом,

нами впервые при помощи транспозона большого размера было проведено моделирование диска средней толщины и подтверждена оценка количества ДНК в таких дисках, данная Беерманом (Beermann, 1972).

ЭМ анализ линий, нежизнеспособных в гомозиготе по иисерции. Все предыдущие попытки прокартировать при помощи ЭМ встройки транспозонов, приводящие к летальному фенотипу, оканчивались неудачами. В данной работе были предприняты еще две попытки осуществить подобное картирование с целью выяснить, в какие же структуры политенных хромосом происходят встройки, вызывающие подобный эффект. Для анализа нами были выбраны две линии - 1(2)02306 со встройкой транспозона PZ и 118.2 со встройкой транспозона 5581. В линии 1(2)02306 гомозиготные по инсерции особи доживают до стадии куколки и, таким образом, было возможно проводить ЭМ анализ на политенных хромосомах личинок, гомозиготных по встройке. Выбор линии 118.2 объясняется тем, что, как было показано на примере линии 118.3 со встройкой того же транспозона, возникающий в районе инсерции новый диск имеет большие размеры, и, таким образом, существовала вероятность выявления подобного нового диска в гетерозиготном состоянии.

Линия 1(2)02306. Ген DHR38, в промоторную область которого произошла инсерция транспозона PZ, был при помощи гибридизации in situ картирован в 38 районе 2L хромосомы (Sutherland et al., 1995). С помощью гибридизации in situ мы уточнили локализацию встройки, которая по нашим данным произошла в диск 38D1-2. Проведенный нами ЭМ анализ трансформированного района в линии 1(2)02306 при сравнении с нетрансформированным районом контрольной линии Oregon R не выявил в подсекции 38D нового диска, образованного материалом транспозона. По-видимому, встройка транспозона PZ произошла в диск 38D1-2, и материал инсерции слился с материалом диска.

Линия 118.2. По данным гибридизации in situ, встройка транспозона 5581 в линии 118.2 произошла в тот же район, что и в линии 118.3 - в район 86Е. Поскольку гомозиготы по инсерции линии 118.2 не жизнеспособны, анализ проводился на гетерозиготах 118.2/Oregon R. В районе встройки на одном из гомологов выявляется новый диск, сходный с диском, образующимся из материала инсерции в линии 118.3. Таким образом, благодаря большому размеру конструкции, нам впервые удалось прокартировать в гетерозиготе инсерцию, вызывающую летальный фенотип в гомозиготе.

Электронно-микроскопнческий анализ районов инсерций транспозона WRIpUC. В нашем распоряжении было 6 линий, несущих инсерции транспозона WRIpUC. Сайты инсерций транспозонов были прокартированы при помощи гибридизации in situ (см. Таблица 1).' Для ЭМ анализа нами были выбраны линии, несущие инсерции в районах 7D5-6, 16СЗ-4, 47F и 62Е соответственно. ЭМ анализ линии со встройками в район 12А и 47А11-16 не проводился, поскольку эти районы постоянно пуфируют.

У трех из четырех прокартированных нами линий с инсерциями транспозона IVRIpUC в районах встройки - 16СЗ-4, 47F и 62Е - выявлен новый диск, соответствующий материалу конструкции. В районе 7D5-6 с инсерцией транснозона WRIpUC возникновение нового диска нами зафиксировано не было, однако, толщина диска 7D7 по сравнению с толщиной этого диска в контроле заметно увеличилась. По-видимому, инсерция транспозона WRIpUC произошла в диск 7D7 или в его край, и за счет материала транспозона произошло увеличение толщины данного диска. Расщепление диска 7D7 или увеличение длины прилегающих к нему междисков выявлено не было.

В районах инсерций транспозона WRIpUC, содержащего фрагмент ДНК междиска 61С7-8, мы ожидали увидеть формирование нового междиска, который могла бы образовать междисковая ДНК в составе транспозона. Однако, в исследованных нами линиях со встройками данной конструкции мы видели либо образование нового диска, либо увеличение толщины исходно находившегося в районе диска за счет материала встроившегося в него транспозона. Отсутствие в районах инсерций транспозона WRIpUC новых междисков, формируемых на основе ДНК междиска 61С7-8 может быть обусловлено несколькими причинами. 1) Поскольку конструкция содержала только фрагмент ДНК междиска, расположенный справа от сайта инсерции Р-элемента (Демаков, 1994), а не полноразмерный междиск, можно предполагать, что данного фрагмента междиска недостаточно для формирования характерной междисковой структуры, либо последовательности, отвечающие за формирование междиска, находятся в другой, не входящий во встроенной в транспозон части междиска 61С7-8. 2) Можно также предполагать, что последовательности, отвечающие за формирование структуры междиска находятся не в самом междиске, и, таким образом, междиск не является автономной структурой.

Электронно-микроскопический анализ района инсерции транспозона Pfry, Prat:bwl. Нами был проведен ЭМ анатиз района инсерции транспозона P[ry+;Prat:bwJ (Clark et al., 1998), содержащего в своем составе последовательность гена bw, находящегося под контролем промотора гена домашнего хозяйства Prat (фосфорибозиламидотрансфераза) (Рис. 1г). Было показано, что инсерция этого транспозона произошла в район 65А; были получены также линии, содержащие до 19 повторенных копий данного транспозона, последовательно встроенных в этот же район (Clark et al., 1998).

В норме в средней части района 65А виден слегка разрыхленный диск 65А10-11, справа и слева от которого расположено по паре едва заметных тончайших диска. На различных пуфовых стадиях морфология диска 65А10-11 не претерпевает каких-либо существенных изменений. На стадии 0 час предкуколки диск 65А10-11 включает 3Н-уридин (Zhimulev, Belyaeva, 1975), что позволяет отнести этот район к разряду малых пуфов. В линиях с единичной копией транспозона P[ry+;Prat:bw] формируется новый, слегка разрыхленный диск, морфологически сходный с диском 65А10-11. С

увеличением числа копий транспозона Pfry+;Prat:bwJ один из этих дисков становится шире, что дает основание полагать, что интеграция транспозонов происходит не в диск 65А10-11, расщепляя его (Clark et al., 1998), а в район междиска, расположенного дистальнее диска 65А10-11. В линиях, несущих 13 и 16 копий инсерта, материал транспозонов начинает сливаться с естественным диском 65А10-11, образуя единую широкую и разрыхленную структуру. Диаметр этой структуры по сравнению с диаметром хромосомы увеличен, а образовавшийся пуф выглядит плотным и гетерогенным. Поскольку, как было показано, конструкция P[ry+;Prat:bw] в составе хромосомы постоянно экспрессируется на низком уровне (Clark et al., 1998), можно сделать вывод, что характеристики формирующейся в районе 65А структуры совпадают с характеристиками малых пуфов.

Малые и темные пуфы являются малоизученными структурами политенных хромосом. До сих пор остается невыясненным, какие факторы влияют на их специфическую морфологию. Проведенный нами анализ инсерций повторенных копий транспозона P[ry+;Prat:b\v] показал, что в зависимости от числа копий транспозона в районе возникает либо новый разрыхленный диск, либо малый пуф, либо, при большом числе копий транспозона, возникает структура, морфологически идентичная темным пуфам.

Полученные данные свидетельствуют о том, что, по-видимому, главным фактором, влияющим на морфологию малых пуфов, является низкий уровень транскрипции и, как следствие, неполная декомпакгизация дисков, формирующих такие пуфы. Следует отметить, что диск, образованный единичной копией транспозона P[)y^;Prat:bw], морфологически сходен с соседним природным диском 65А10-11, который проявляет свойства малого пуфа. Показано, что экспрессия единичной копии P[ry+;Prat:bw] у взрослых мух составляет не более половины от экспрессии гена Prat, а количество глазного пигмента в результате экспрессии гена bw возрастает пропорционально числу встроенных копий (Clark et al., 1998). Известно также, что в диске 65А10-11 расположен ген LanA, который кодирует одну из цепей высокомолекулярного белка ламинина и слабо экспрессируется в третьем личиночном возрасте. Ген LanA имеет в своем составе 15 экзонов, составляющих зрелую м-РНК размером 14 т.п.н. (Montell, Goodman, 1988; MacKrell et al., 1992). Таким образом, две слабо зкспрессирующихся последовательности, Prat:bw и LanA, обладая различной молекулярной организацией, формируют морфологически сходные структуры. Вероятно, неполная декомпактизация дисков может приводить к формированию слабо выраженных малых пуфов и в других районах политенных хромосом.

Увеличение числа инсерций P[ry+;Prat:bw] в районе 65А приводит к формированию темного слоистого вздутия, достигающего максимума в линиях с 16 и более копиями транспозона (Clark et al., 1998). Можно предполагать, что неактивные конденсированные последовательности ДНК гена гу в составе

транспозонов перемежаются с активными деконденсированными последовательностями РгШ:Ь\м. Таким образом, в результате даже незначительной транскрипции гена компактные последовательности

гу перемещаются и формируют ассоциации, нарушая дисковую организацию комплекса, при этом пространство между ассоциациями заполняется материалом РНП транскрибируемых генов, что в совокупности и создает картину темного пуфа (Рис. 3). Несколько иная картина наблюдается при интеграции в район 93А 311 хромосомы четырех тандемно повторенных и не транскрибируемых копий гена гу (БетеБЬт Л а1., 1989). В этом случае также происходит формирование рыхлой слоистой структуры, в составе которой, однако, можно выделить 4 диска.

■ И О-- 9-

-а—»—о ••© •

—П О -- в--- О • О D-

□ ДНК дисков

Неактивная ДНК транспозонов

Транскипционно

активная ДНК транспозонов

Рисунок 3. Схема формирования темного пуфа из материала транспозонов P[ry+;Prat:bw].

Структуры, возникающие при встраивании транспозонов P[ry+;Prat:bwJ, очевидно сходны с другими эухроматиновыми районами политенных хромосом, в которых формируются малые пуфы. В противоположность другой аналогичной системе, PflacWJ, в которой степень инактивации гена white возрастает с увеличением числа копий, также встроенных в один и тот же район хромосомы (Dorer, Henikoff, 1994), трансгены Prat:bw не проявляют эффекта положения мозаичного типа (Clark et al., 1998). Тем не менее, в обоих

случаях с помощью иммунофлуоресцентного метода в трансформированных районах выявлен специфический гегерохроматиновый белок НР1 (Fanti et al., 1998). При этом интенсивность флуоресценции в районе встройки P[ry+;Prat:bw] существенно ниже по сравнению с районами инсерции PflacWJ. Возможно, белок HPI, связываясь с хромосомными сайтами, приводит к дифференциальной компактизации района и оказывает влияние лишь на часть транспозона P[ry+;Prat:bw], соответствующую, например, гену гу, тогда как активная его часть, Prat:bw, остается декомпактизованной. В этой же работе (Fanti et al., 1998) был выявлен низкий уровень свечения антител на белок НР1 в районе диска 65А10-11, который мы относим к разряду малых пуфов. Возможно, что белок НР1, связываясь с хромосомными сайтами, снижает экспрессию гена, снижая также декомпактизацию диска. Нельзя исключить, что оба эти фактора влияют на морфологию малых пуфов и в других районах полит енных хромосом.

Морфология дисков, возникающих на основе материала инсерций.

Таким образом, в большинстве случаев в районах инсерции транспозонов возникали новые диски, размер которых зависел от размеров транспозона. Возможно, что подобное конденсированное состояние новообразованных структур объясняется тем, что в политенных хромосомах ДНК транспозонов находится в неактивном состоянии, и только при наличии в конструкции определенных активирующих сайтов происходит изменение морфологии новообразованных дисков.

Хорошим доказательством такого предположения являются структуры, формирующиеся в районе транспозона P[ry+;Prat:bw]. В районе инсерции одной копии данной конструкции на ее основе образуется рыхлый диск, по структуре сходный с соседним рыхлым диском 65А10-11, проявляющим свойства малого пуфа. Ранее было показано, что единичная копия транспозона Pfry+;Prat:bwJ экспрессируется в ходе онтогенеза. Интенсивность ее экспрессии примерно в два раза меньше, чем интенсивность экспрессии гена Prat (Clark etal., 1998).

Как было показано ранее, в районах встроек транспозона Р-lArB возникают новые плотные диски. Исходя из данных по экспрессии содержащегося в этом транспозоне репортерного гена IacZ, ДНК транспозона экспрессируется в ходе онтогенеза (Семешин и др., 1994).

По-видимому, разница в морфологии дисков, формируемых на основе транспозонов Р-lArB и P[ry+;Prat:bw] обусловлена различным уровнем экспрессии генов, содержащихся в этих конструкциях. Так, в транспозоне Р-1АгВ репортерный ген IacZ находится под контролем слабого промотора Р-элемента, и уровень экспрессии этого гена в основном зависит от действия энхансеров, под действие которых промотор Р-элемента может попадать при встройке в геном. Содержащийся же в конструкции P[ry+;Prat:bw] промотор гена домашнего хозяйства Prat обеспечивает постоянную экспрессию

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Шлома, Виктор Владимирович

ВВЕДЕНИЕ.

Актуальность проблемы.

Цель данной работы.

Научная новизна.

Практическая ценность.

Апробация работы.

Вклад автора.

Объем работы.

Публикации.Ю

Благодарности.

Список использованных сокращений.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Структура политенных хромосом.

Открытие политенных хромосом.

Хромомерный рисунок политенных хромосом, построение цитологических карт и правила картирования.

МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ СТРУКТУРА И ИНФОРМАЦИОННОЕ

СОДЕРЖАНИЕ ПОЛИТЕННЫХ ХРОМОМОМ.

ДИСКИ.

Размеры дисков.

Организация дисков.

Район 24А-25Р 2Ь хромосомы.

Район 9Е-10В.

Характеристика пуфов.

Транскрипционная активность пуфов.

Морфология пуфов.

МЕЖДИСКИ.

Структура междисковых районов.

Генетическое содержание междисков.

Транскрипционная активность междисков.

МОДЕЛИРОВАНИЕ СТРУКТУР ПОЛИТЕННЫХ ХРОМОСОМ.

Метод Р-опосредованной трансформации.

ЭМ анализ трансформированных фрагментов ДНК в составе политенных хромосом.

Диски, возникающие при трансформации.

Пуфы, возникающие при активации транспозированных фрагментов

Образование междисков из материала трансформированных конструкций.

Изучение междисков при помощи трансформированных в геном конструкций.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Цитогенетический и электронно-микроскопический анализ районов локализации транспозонов в политенных хромосомах Drosophila melanogaster"

Актуальность проблемы

Одной из главных задач современной генетики является выяснение принципов организации хромосомы и составляющих ее структурных элементов. Особый интерес представляет интерфазная хромосома, в которой идет активная экспрессия генетического материала и интенсивность функционирования которой максимальна. Однако, именно в этот период хромосомы диплоидных клеток максимально деконденсированы и практически недоступны для визуального анализа.

Уникальной моделью интерфазных хромосом являются политенные хромосомы двукрылых, которые обладают рядом характерных особенностей, делающими их привлекательным и незаменимым объектом цитогенетических исследований: 1) политенные хромосомы обладают гигигантскими размерами, поскольку состоят из тысяч гомологичных нитей -хроматид, 2) они обладают характерной морфологией, возникающей за счет чередования плотно упакованных участков хроматина (дисков) и менее плотно упакованных участков - междисков; высокая специфичность возникающего дискового рисунка позволяет легко идентифицировать отдельные районы хромосом.

Несмотря на интенсивность исследований, вопрос о, взаимосвязи молекулярно-генетической и структурно-функциональной организации политенных хромосом остается во многом открытым. Решение этой проблемы с помощью обычных молекулярных, генетических и цитологических подходов основывается главным образом на цитологических данных, полученных при помощи световой микроскопии, которая не дает достаточного разрешения и в результате не всегда позволяет провести связь между молекулярно-генетической организацией и морфологией конкретных структур политенных хромосом (2Ыпш1еу е1 а1., 1981; Жимулев, 1994).

Новый подход к решению данного вопроса был предложен В.Ф. Семешиным и его коллегами. Суть этого подхода состоит в выявлении и морфологическом описании структур, которые формируются при встройке в хромосому фрагментов ДНК с известными молекулярно-генетическими характеристиками. Применение в этих исследованиях методов электронной микроскопии позволяет добиться наибольшего разрешения и точности в выявлении, картировании и описании возникающих структур. Таким образом, внедряя в состав хромосомы различные по составу и свойствам фрагменты ДНК, можно проводить моделирование морфологических структур политенных хромосом, что, в свою очередь, дает возможность точно выявлять связь между молекулярными и структурно-функциональными характеристиками фрагментов ДНК в составе хромосомы.

Цель данной работы

Целью данной работы является моделирование структур политенных хромосом (дисков, междисков, пуфов) с помощью транспозонов различной длины и разного генетического содержания. В связи с этим были поставлены следующие конкретные задачи:

1. Получить и охарактеризовать коллекцию линий, содержащих инсерции транспозонов различного размера и генетического содержания, без отбора получаемых линий по каким-либо фенотипическим признакам.

2. Разработать упрощенную методику ЭМ гибридизации in situ, что позволило бы локализовывать последовательности ДНК в политенных хромосомах с точностью до конкретных морфологических структур и дало бы возможность, в частности, проводить точную цитологическую локализацию генов и встроек транспозонов.

3. Осуществить картирование встроек, приводящих к летальному фенотипу.

4. Используя полученную коллекцию линий, при помощи ЭМ анализа провести моделирование дисков различной толщины, возникающих при встройке транспозонов разного размера в различные районы политенных хромосом.

5. При помощи конструкций, содержащих последовательность ДНК междиска 61С7-С8, исследовать, какие структуры будут возникать в районах инсерций.

6. Проанализировать морфологические проявления активности промотора гена домашнего хозяйства Prat, содержащегося в транспозоне P[ry+;Prat: bw].

7. При помощи подходящих конструкций осуществить моделирование "темных пуфов".

Научная новизна

В настоящей работе впервые осуществлено ЭМ картирование встроек транспозонов, вызывающих появление летального фенотипа у особей, гомозиготных по инсерции. Также при помощи встроек транспозонов различного размера проведено моделирование дисков различной толщины.

Впервые экспериментально показано, что размер среднего диска в политенных хрососомах составляет ~ 40 т.п.н.

На основе данных ЭМ анализа встройки транспозона PflacWJ проклонирована и проанализирована ДНК междиска 68АЗ-5, который, как было показано в результате анализа, содержит промоторную область гена Ixd.

При помощи конструкции WRIpUC, содержащей фрагмент ДНК междиска 61С7-С8 показано, что данного фрагмента недостаточно для формирования нового междиска в районе встройки транспозона WRIpUC.

Впервые проведен ЭМ анализ структур, формируемых на основе материала конструкции, содержащей промоторную область гена домашнего хозяйства Prat и находящейся под ее контролем последовательности гена bw.

Показано, что в районе инсерции такой конструкции формируется новый рыхлый диск, по характеристикам сходный с малыми пуфами. Также в результате ЭМ анализа структур, формируемых на основе последовательно встроенных в один район повторенных копий транспозона Р[гу+;РгМ:Ьм>] впервые проведено моделирование так называемых "темных пуфов". На основе полученных данных выдвинуто предположение, объясняющее характерную морфологическую структуру "темных пуфов".

Практическая ценность

В работе показана высокая эффективность метода моделирования морфологических структур политенных хромосом при помощи Р-транспозонов для изучения структурно-функциональной организации политенных хромосом. В настоящий момент этот метод является единственным, позволяющим выявлять связь между первичными последовательностями ДНК и формируемыми на их основе структурами политенных хромосом.

Апробация работы

Основные результаты этой работы были представлены:

1. В стендовом сообщении на XII Всероссийском симпозиуме по структуре и функциям клеточного ядра, 22-24 октября 1996 г., Санкт- Петербург, Россия.

2. В стендовом сообщении на \ТШ Европейском конгрессе по энтомологии. 23-29 августа 1998 г., СеБке Висфоуюе, Чехия.

3. .В стендовом сообщении на Всероссийском симпозиуме по структуре и функциям клеточного ядра, 19-21 октября 1999 г., Санкт- Петербург, Россия.

Вклад автора

Основные результаты получены автором самостоятельно. Работы по ЭМ картированию инсерций проводились как совместно с В.Ф.Семешиным, так и самостоятельно. Автор принимал непосредственное участие в разработке описанного в данной работе метода ЭМ in situ гибридизации. Молекулярный анализ ДНК междиска 68A3-5 выполнен С.А.Демаковым и И.В.Макуниным.

Объем работы

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов и обсуждения, а также выводов и списка цитируемой литературы, в который входит 201 ссылка. Работа изложена на 133 страницах машинописного текста, содержит 2 таблицы и 20 рисунков.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Шлома, Виктор Владимирович

выводы

1. Получена и охарактеризована коллекция из 51 линии со встройками 8-ми различных по размеру и генетическому содержанию транспозонов.

2. Разработан упрощенный по сравнению с существующими метод ЭМ гибридизации in situ на политенных хромосомах. Результаты, получаемые при помощи разработанного метода дают высокое разрешение и хорошо воспроизводятся.

3. Впервые проведено ЭМ картирование встроек транспозонов, вызывающих летальный фенотип у особей, гомозиготных по инсерции. Показано, что подобное картирование осуществимо только в случаях, когда гомозиготные по инсерции особи доживают до стадии личинки 3-го возраста, либо когда размер встройки очень велик (около 40 т.п.н.), что позволяет выявить новые диски на хромосомах гетерозиготных особей.

4. Проведено моделирование дисков различной толщины, возникающих в политенных хромосомах при встройках транспозонов разного размера. Экспериментально показано, что размер среднего диска составляет «40 т.п.н.

5. На примере междиска 68АЗ-5 показано, что междиск может содержать промоторную область гена домашнего хозяйства.

6. Показано, что содержащегося в конструкции WRIpUC фрагмента ДНК междиска 61С7-С8 недостаточно для формирования нового междиска в районе инсерции транспозона.

7. Показано, что экспрессия входящих в состав конструкции P[ry+;Prat:bw] репортерных генов, вызванная промотором гена домашнего хозяйства Prat, приводит к формированию в районе инсерции транспозона нового рыхлого диска, по характеристикам сходного с малыми пуфами.

8. При помощи повторенных копий транспозона P[ry+;Prat:bwJ, последовательно встроенных в район междиска, проведено

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Шлома, Виктор Владимирович, Новосибирск

1. Ананьев Е.В., Барский В.Е. Ультраструктура политенных хромосом Drosophila melanogaster II Докл. АН СССР. 1983. Т. 273. № 4. С. 985-987.

2. Ананьев Е.В., Барский В.Е. Электронно-микроскопическая карта политенных хромосом слюнных желез дрозофилы (D. melanogaster). М.: Наука, 1985.

3. Баричева Э.М., Семешин В.Ф. Электронномикроскопическое картирование некоторых пуфов 34 хромосомы Drosophila melanogaster. Цитология. 1985. Т. 27, № 1. С. 50-53.

4. Беляева Е.С., Жимулев И.Ф. О вариабильности размеров пуфов у Drosophila melanogaster!У Генетика. 1974. Т. 10. № 5. С. 74-80.

5. Беляева Е.С., Жимулев И.Ф., Семешин В.Ф. Цитогенетический анализ района 2В1-2 2В9-10 Х-хромосомы Drosophila melanogaster. I. Цитологическая локализация перестроек и закономерности пуфинга// Генетика. 1980 Т. 16. № 1. С. 103-114.

6. Беляева Е.С Цитогенетическое исследование организации и функционирования транскипционно-активных районов хромосом : Дис. . д-ра биол. наук. Новосибирск. 1982.

7. Белянина С.И. Хромосомный полиморфизм Chironomus plumosus из различных частей ареала. II. Кариотипическая структура трех географически разобщенных популяций// Цитология. 1977. Т. 19. №. 5. С. 565-570.

8. Власова И.Е., Умбетова Г.Х., Циммерман В.Г., Алонсо К., Беляева Е.С., Жимулев И.Ф. Иммунофлуоресцентная локализация гибридов ДНК-РНК в политенных хромосомах Drosophila melanogaster!I Докл. АН СССР. 1984. Т. 274. № 1.С. 189-192.

9. Жимулев И.Ф., Беляева Е.С., Айзензон М.Г. Цитогенетический анализ района 2В1-2 2В9-10 Х-хромосомы Drosophila melanogaster. III. Изменения пуфинга в хромосомах слюнных желез у гомозигот по мутации 1(1)рр-Н10//Генетика. 1980 Т. 16. № 9. С. 1613-1631.

10. Жимулев И.Ф. Хромомерная организация политенных хромосом: Дис. . д-ра биол. наук. Новосибирск. 1982.

11. Жимулев И.Ф. Политенные хромосомы: морфология и структура. Новосибирск: Наука. 1992.

12. Жимулев И.Ф. Хромомерная организация политенных хромосом. Новосибирск: Наука. 1994.•5

13. Жимулев И.Ф., Беляева Е.С. Включение Н-уридина в хромосомы слюнных желез Drosophila melanogaster!I Генетика. 1974. Т. 10. №. 9. С. 71-79.

14. Жимулев И.Ф., Беляева Е.С. Варьирование картины дисков в политенных хромосомах Drosophila melanogaster!! Генетика. 1977. Т. 13. № 8. С. 13981407.

15. Жимулев И.Ф., Колесников Н.М. Методы отбора синхронно развивающихся личинок Drosophila melanogaster II Оогенез. 1975. Т.6. №.6. С. 635-639.

16. Жимулев И.Ф., Лычев В.А. Синтез РНК в левом плече третьей хромосомы Drosophila melanogaster в последние 5 часов личиночного развития // Онтогенез. 1972. Т. 3. № 2. С. 289-298.

17. Кикнадзе И.И. Политенные хромосомы как модель интерфазной хромосомы// Цитология. 1971. Т. 13. № 6. С. 716-733.

18. Кикнадзе И.И. Функциональная организация хромосом // Успехи современной генетики. М. Наука. 1971. Т.З. С. 175-205

19. Кикнадзе И.И. Функциональная организация хромосом // Л. Наука. Ленингр. отд-ние. 1972.

20. Макгрегор Г., Варли Дж., Методы работы с хромосомами животных // М. Мир. 1986. 272 с.

21. Макунин И.В., Шестопал С.А., Беляева Е.С., Эшбернер М., Жимулев И.Ф. Сопоставление молекулярной и генетической карт района 2В6-2В7-8 X-хромосомы Drosophila melanogaster. Генетика. Т. 35. № 8. С. 1071-1077. 1999.

22. Перов H.A., Ченцов .С. Электронно-микроскопическое изучение политенных хромосом слюнных желез личинок Chironomus plumosus II Докл. АН СССР. 1971. Т. 196. № 6. С. 1452-1456.

23. Похолкова Г.В., Соловьева И.В. Характеристика инсерционных мутаций, полученных в системе Р-М гибридного дисгенеза в районе 9F12-10A7 X-хромосомы Drosophila melanogaster II Генетика. 1989. Т. 25. № 10. С. 1776-1785.

24. Протопопов М.О., Беляева Е.С., Кокоза Е.Б., Шарапова Е.М., Баричева Э.М., Демакова О.В., Графодатская В.Е., Жимулев И.Ф. Цитогенетический анализ районов 2В1-2 2В9-10 Х-хромосомы

25. Drosophila melanogaster .VIL Клонирование локусов esc, dor и swi II Генетика. 1988.T. 24. № 9. С. 1614-1623.

26. Семешин В.Ф., Жимулев И.Ф., Беляева Е.С. Цитогенетическое изучение района 9Е-10А Х-хромосомы Drosophila melanogaster 1. Морфология района и картирование делеций, затрагивающих диск 10Al-2// Генетика. -1979. Т. 15. № ю. С. 1784-1792.

27. Семешин В.Ф., Баричева Э.М., Жимулев И.Ф. Морфология и генетическая организация района 67В ЗЕ-хромосомы Drosophila melanogaster!I Генетика. 1984. Т. 20. № 5. С. 794-799.

28. Семешин В.Ф., Баричева Э.М., Беляева Е.С., Жимулев И.Ф. развитие пуфов политенных хромосом Drosophila melanogaster II Тезисы докладов VII Всесоюзного симпозиума "Структура и функции клеточного ядра". Пущино. 1984. С. 59-60.

29. Семешин В.Ф., Жимулев И.Ф. О правилах электронно-микроскопического картирования политенных хромосом на давленых препаратах слюнных желез дрозофилы//Цитология. 1989. Т.31. № 6. С. 728-731.

30. Семешин В.Ф., Демаков С.А., Алонсо М.П., Жимулев И.Ф. Формирование междисков из материала ДНК Р-элемента в политенных хромосомах дрозофилы//Генетика. 1990. Т. 26. № 3. С. 448-456.

31. Семешин В.Ф., Чернухин В.А., Шабельников И.В., Омельянчук JI.B., Беляева Е.С., Жимулев И.Ф. Цитогенетический анализ инсерций в составе междисков политенных хромосом дрозофилы// Генетика. 1994. Т.30. № 7. С. 927-933.

32. Соловьева И.В. Молекулярное картирование инсерционных мутаций локуса esc // Генетика. 1992. Т.28. № 2. С.63-71.

33. Умбетова Г.Х. Иммунофлуоресцентная локализация транскрипционно активных районов в политенных хромосомах Drosophila melanogaster. дисс. канд. биол. наук. Новосибирск: Институт цитологии и генетики СО РАН, 1991. 172 с.

34. Шварц Ю.Б. Молекулярно-генетический анализ междисковых районов политенных хромосом Drosophila melanogaster : Дис. . канд. биол. наук. Новосибирск. 2000.

35. Щербаков Е.С. К вопросу о гетерозиготности по пуфам и структуре отдельных дисков гигантских хромосом мошек (Simuliidae, Diptera) // Генетика. 1968. Т. 4. № 5. С. 60-69.

36. Alanen М. An integrated description of polytene chromosome structure // Hereditas. 1981. V. 95. P. 295-321.

37. Alonso C., Berendes H.D. The location of 5S (ribosomal) RNA genes in Drosophila hydeill Chromosoma. 1975. V. 51. P. 347-356.

38. Artavanis-Tsakonas S., Muskavitch M.A.T., Yedvobnick B. Molecuar cloning of Notch, a locus affecting neurogenesis in Drosophila melanogaster II Proc. Nat. Acad. Sei. USA. 1983. V. 80. P. 1977 1981.

39. Ashburner M. Function and structure of polytene chromosomes during insect development // L.; N. Y. 1970. V. 7. P. 1-95.

40. Ashburner, M. Patterns of puffing activity in the salivary gland chromosomes of Drosophila. VI. Induction by ecdysone in salivary glands of Drosophila melanogaster cultured in vitro // Chromosoma. 1972. V. 38. P. 255-281.

41. Ashburner, M., and Bonner J. The induction of gene activity in Drosophila by heat shock // Cell. 1979. V. 17. P. 241-254.

42. Beermann, W. Chromomerenkonstanz und spezifische Modifikationen der Chromosomenstruktur in der Entwicklung und Organdifferenzierung von Chironomus tentans II Chromosoma. 1952(a). V. 5. P. 139-198.

43. Beermann, W. Chromosomenstruktur und Zelldifferenzierung in der Speicheldruse von Trichocladius vitripennis. Z. Naturforsch. 1952(b) V. 7b. P. 237-242.

44. Beermann, Beermann, W. Riesenchromosomen. In "Protoplasmatologia" 6/D Springer, Wien. 1962.

45. Beermann, W. Structure and function of interphase chromosomes. // In "Genetics today. 2. XI intern, congress genet." (S.J. Gerts, ed.) Oxford, London, Edinburgh, New York, Paris, Frankfurt. Pergamon Press. 1965. P. 375-384.

46. Beermann, W. Differentiation at the level of the chromosomes. // "Cell Differentiation and Morphogenesis". 1966. P. 24-54. Amsterdam, North Holland.

47. Beermann, W. Gene action at the level of the chromosome. // "Heritage from Mendel" (R.A. Brink, E.D. Styles, eds.). Madison, London. University of Wisconsin Press. 1967. P. 179-201.

48. Beermann, W. Chromomeres and genes. // Results and problems in cell differentiation (W. Beermann, ed.). 1972. V. 4. P. 1-33. Springer, Berlin, Heidelberg, New York.

49. Bellen H.J., O'Kane C.J., Wilson C., Grossnikiaus U., Pearson R.K., Gering W.J. P-element-mediated enhancer detection: a versatile method to study development in Drosophila II Genes & Development 1989. V.3. P.1288-1300.

50. Belyaeva, E.S., and Zhimulev, I.F. RNA synthesis in the Drosophila melanogaster puffs // Cell Differ. 1976. V. 4. P. 415-427.

51. Bentley, M.M., Williamson, J.H., Oliver, M.J. The effects of molybate, tungstate and Ixd on aldehyde oxidase and xanthine dehydrogenase in Drosophila melanogaster// Canad. J. Genet. Cytol. 1981. V. 23(4). P. 597-609.

52. Berendes H.D. Salivary gland function and chromosomal puffing patterns in Drosophila hydei /'/ Chromosoma. 1965. V. 17. P. 35-77.

53. Berendes, H.D. Factors involved in the expression of gene activity in polytene chromosomes .// Chromosoma. 1968a. V. 24. P. 418-437.

54. Berendes, H.D. The effect of ecdysone analogues on the puffing pattern of Drosophila hydei // Dros. Inform. Serv. 1968b . V. 43. P. 145.

55. Berendes, H.D. Induction and control of puffing. // Ann. Embryol. Morphogen. Suppl. 1969. V. l.P. 153-164.

56. Berendes, H.D. Polytene chromosome structure at the submicroscopic level. I. A map of region X, 1-4E of Drosophila melanogaster II Chromosoma. 1970. V. 29 P.118-130.

57. Berendes, H.D., Alonso C., Helmsing H.J., Leenders H.J., Derksen J. Structure and function in the genome of Drosophila hydei II Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 1974. V. 38. P.645-654.

58. Bier E., Vaessin H., Shepherd S. et al. Searing for pattern and mutation in the Drosophila genome with P-lacZ vector // Genes & Development 1989. V.3. P.1273-1287.

59. Binder M. In situ hybridization at the electron microscope level // In situ hybridization: a practical approach. Oxford: IRL Press, 1992. P. 105-120.

60. Bogaart, A.M., Bernini, L.F. The molybdoenzyme system of Drosophila melanogaster//Biochem. Genet. 1981. V. 19(9/10). P. 929-946.

61. Bonner, J.J., Parks, C., Parker-Thornburg, J., Mortin, M.A., and Pelham, H.R.B. The use of promoter fusions in Drosophila genetics: isolation of mutations affecting the heat shock response // Cell. 1984. V. 37. P. 979-991.

62. Boyd L., O'Toole E., Thummel C.S. Pattern of E74A RNA and protein expression at the onset of metamorphosis in Drosophila II Development. 1988. V. 112. P. 981-995.

63. Breuer, M.E., and Pavan, C. Gens na diferenciacao // Cienc. e Cult. 1952. V. 4. P. 115.

64. Breuer, M.E., and Pavan, C. Behaviour of polytene chromosomes of Rhynchosciara angelae at different stages of larval development // Chromosoma. 1955. V. 7. P. 371-386

65. Bridges, C.B. Salivary chromosome maps with a key to the banding of the chromosomes of Drosophila melanogaster II J. Hered. 1935. V. 26. P. 60-64.

66. Bridges, C.B. A revised map of the salivary gland X-chromosome of Drosophila melanogaster 11 J. Hered. 1938. V. 29. P. 11-13.

67. Britten, R.J., and Davidson, E.H. Organization, transcription and regulation in the animal genome // Quart. Rev. Biol. 1973. V. 48. P. 565-613.

68. Browder, L.W., Wilkes, J., Tucker, L. Aldehyde oxidase cross-reacting material in the Aldoxn, ein, mal, and lxd mutants of Drosophila melanogaster // Biochem. Genet. 1982. V. 20(1/2). P. 111—124.

69. Burnet, B., and Hartmann-Goldstein, I. Environmental influences on puffing in the salivary gland chromosomes of Drosophila melanogaster II Genet. Res. Camb. 1971. V. 17. P. 113-124.

70. Casperson T.O. Die Eiweiss Verteilung in den Strukturen des Zellkernes // Chromosoma. 1940. Bd. 1. S. 562-604.

71. Clark D.V., Sabl J.F., Henikoff S. Repetitive arrays containing a housekeeping gene have altered polytene chromosome morphology in Drosophila II Chromosoma. 1990. V. 107. P. 96-104.

72. Cooley L., Kelley R., Spradling A. Insertional mutagenesis of the Drosophila genome with single P elements // Science. 1988. V.239. N4844. p.l 121-1128.

73. Cuenca J.B., Galindo M.I., Saura A.O., Sorsa V., de Frutos R Ultrastructure of regions containing homologous loci in polytene chromosomes of Drosophila melanogaster and Drosophila subobscura I I Chromosoma. 1998. V. 107(2). P. 113-26

74. Frutos de R., Kimura K., Peterson K. In situ hybridization of Drosophila polytene chromosomes with digoxigenin-dUTP labeled probes // Methods in molecular and cellular biology. 1990. V. 2. P. 32-36.

75. Dorer D.R., Henikoff S. Expansions of transgene repeas cause heterochromatin formation and gene silencing in Drosophila II Cell. 1994.V. 77. P. 993-1002.

76. Engels W.R., Preston C.R., Thompson P., Eggleston W.E. In situ hybridization to Drosophila salivary gland with biotinylated DNA probes and alkaline phosphate //Focus. 1986. V. 8. P. 6-8.

77. Engels W.R. Extrachromosomal control of mutability in Drosophila melanogaster II Proc. Nat. Acad. Sei. 1979a. V.76. P.4011-4015.

78. Engels W.R. Hzbrid dzsgenesis in Drosophila melanogaster. Rules of inheritance of female sterility // Genet. Res Camb. 1979b. V.33 P.219-236.

79. Engels W.R. The P family of transposable elements in Drosophila II Ann. Rev. Genet. 1983. V.17. P.315-344.

80. Engels W.R. P-elements in Drosophila melanogaster, P.437-484 in Mobile DNA elements, edited by D.E.Berg and M.M.Howe. Washington, DC. American Society for Microbiology. 1989.

81. Ephrussi B., Beadle G.B. Technique of transplantation for Drosophila // Amer. Naturalist. 1936. V. 70. P. 218-225.

82. Fanti L:, Dorer D.R., Berloco M., Henikoff S., Pimpinelli S. Heterochromatin protein 1 binds transgene arrays // Cromosoma. 1998. V. 107. P. 286-292.

83. Fitch, D.H.A., Strausbaugh, L.D., and Barrett, V. On the origins of tandemly repeated genes: does histone gene copy number in Drosophila reflect chromosomal location// Chromosoma. 1990. V. 99 P. 118-124.

84. Fridell Y.W.C., Searles L.L. Vermilion as a small selectable marker gene for Drosophila transformation // Nucl. Acids Res. 1991. V. 19. P.50-82.

85. Gall J.G. The genes for ribosomal RNA during oogenesis// Genetics. 1969. V. 61. P. 121-132.

86. Gall J.G., Pardue M.L. Formation and detection of RNA-DNA hybrid molecules in cytological preparations // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1969. V. 63. P. 378-383.

87. Gall J.G., Pardue M.L. Nucleic acid hybridization in cytological preparations/ Methods Enzymol. 1971. V. 2ID. P. 470-480.

88. Goldberg, D.A., Posakony, J.W., and Maniatis, T. Correct developmental expression of a cloned alcohol dehydrogenase gene tranduced into the Drosophila germ line // Cell. 1983. V. 34. P. 59-73.

89. Golubovsky M.D., Ivanov Yu.N., Green M.M. Genetic instability in Drosophyla melanogaster: putative multiple insertion mutants at the singed bristle locus //Proc. Nat. Acad. Sci. 1977. V. 74. P.2973-2975.

90. Green M. Genetic instability in Drosophila melanogaster: de novo induction of putative insertion mutations // Proc. Nat. Acad. Sci. 1977. V.74. P.3490-3493.

91. Hartenstein V., Yuh Nung Jan. Studying Drosophila embriogenesis with P-lacZ enhancer trap lines // Roux Arch. dev. Biol. 1992. V. 201. P. 194-220.

92. Hazerling T., Kaufman T.C. Revertants of dominant mutations associated with the Antennapedia gene complex of Drosophila melanogaster II Molecular aSpects of early development / Eds. G. Malacinsky, W. Klein.- N.Y.: Plenum Press. 1983. P. 189-218.

93. Hazelrigg, T., Levis, R., and Rubin, G.M. Transformation of white locus DNA in Drosophila: dosage compensation, zeste interaction and position effects // Cell. 1984. V. 36. P. 469-481.

94. Hill R.J., Stollar B.D. Dependence of Z-DNA antibody binding to polytene chromosomes on acid fixation and DNA torsional strain// Nature. 1983. V.305. P. 338-340.

95. Hill, R.J., and Watt, F. "Native" salivary chromosomes of Drosophila melanogaster II Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 1978. V. 42. P. 859865.

96. Hoffman E.P., Corces V.G. Sequences involved in temperature and ecdysteron-induced transcription are located in separate regions of Drosophila melanogaster heat shock gene//Mol. Cell. Biol. 1986. V.6. P. 663-673.

97. Horowitz H., Berg C.A. Aberrant splicing and transcription termination caused by P element insertion into the intron of a Drosophila gene // Genetics. 1995. V.139. P.327-335.

98. Hutchison N.J., Langer-Safer P.R., Ward D.C., Hamkalo B.A. In situ hybridization at the electron microscopic level: hybrid detection by autoradiography and colloidal gold // J. Cell Biol. 1982. V. 95. P. 609-618.

99. Jamrich M., Greenleaf A.L., Bautz E.K.F. Localization of RNA-polymerase in Drosophila melanogaster polytene chromosomes // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1977. V. 74. P. 2079-2083.

100. Kalisch W.-E., Schwitalla G., Whitmore T. Electron microscopic bandinterband pattern of the X chromosome in Drosophila hydeill Chromosoma. 1986. V.93.P. 387-392.

101. Kelley M.R., Kidd S., Berd R.L., Young M.W. Restriction of P element insertions at the Notct locus of Drosophila melanogaster II Molecular & Cell Biology. 1987. V.7. P.1545-1548.

102. Kerkis, A.Yu., Zhimulev, I.F., and Belyaeva, E.S. EM autoradiographic study of 3H-uridine incorporated into Drosophila melanogaster salivary gland chromosomes//Dros. Inform. Serv. 1977. V .52. P. 14-17.

103. Kiknadze I.I., Perov N.A., Chentsov Y.S. Electron microscopic studies on the polytene chromosomes of Chironomus thummi salivary glands. I. Ultrastructural mapping // Chromosoma. 1976. V .55. P. 91-103

104. Kozlova, T., Pokholkova, G.V., Tzertzinis, G., Sutherland, J.D., Zhimulev, I.F., Kafatos, F.C. Drosophila hormone receptor 38 functions in metamorphosis. A role in adult cuticle formation // Genetics. 1998. V. 149. P. 1465-1475

105. Kress H., Meyerowitz E.M., Davidson N. High resolution mapping of in situ hybridized biotinylated DNA to surface-spread Drosophila polytene chromosomes // Cromosoma. 1985. V. 93. p. 113-122.

106. Laird, C.D. Structural paradox of polytene chomosomes // Cell. 1980. V. 22. 869-874.

107. Langer-Safer P.R., Levine M., Ward D.C. Immunological method for mapping genes on Drosophila polytene chromosomes // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1982. V. 79. P. 4381-4385.

108. Laski F.A., Rio D.C., Rubin G.M. Tissue Specificity of Drosophila P element transposition is regulated at the level of mRNA Splicing // Cell. 1986. V. 44. P. 7-19.

109. Lefevre, G., Jr. Salivary chromosome bands and the frequency of crossing over in Drosophila melanogaster II Genetics. 1971. V. 67. P. 497-513.

110. Lefevre, G., Jr., and Green, M.M. Genetic duplication in the white-split interval of the X chromosome in Drosophila melanogaster II Chromosoma. 1972. V. 36. P. 391-412.

111. Lifschytz, E. Fine-structure analysis of the chromosome recombinational patterns at the base of the X-chromosome of Drosophila melanogaster II Mutat. Res. 1971. V. 13. P. 35-47.

112. Lindsley, D.L., and Grell, E.H. Genetic variations of Drosophila melanogaster I I Carnegie Inst. Wash. Publ. 1968. P. 627.

113. Lindsley D.L., Zimm G.G. The genom of Drosophila melanogaster II Academic Press. San Diego, New York, Boston, London, Sydney, Tokyo, Toronto. 1993.

114. Lis J.T., Simon S.A., Sutton C.A. New heat shock puff and p-galactozidase activity resulting from transformation of Drosophila with an hsp-70 lacZ hybrid gene // Cell. 1983. V.35. P.403-410.

115. Meyerowitz, E.M., and Hogness, D.S. Molecular organization of a Drosophila puff site that responds to ecdysone // Cell. 1982. V. 28. P. 165-176.

116. Mlodzik M., Hiromi Y. Enhancer trap method in Drosophila: its application to neurobiology // Method in neuroscience. 1992. V.9. P.397-414.

117. Mott, M.R., Burnett, E.J., and Hill, R.J. Ultrastructure of polytene chromosomes of Drosophila isolated by microdissection // J. Cell Sci. 1980. V. 45. P. 15-30.

118. Mott, M.R., and Hill, R.J. The ultrastructural morphology of native salivary gland chromosomes of Drosophila melanogaster. the band-interband question // Chromosoma. 1986. V. 94. P. 403-411.

119. Noll R., Sturtevant M.A., Gollapudi R.R., Bier E. New functions of Drosophila rhomboid gene during embrionic and adult development and revealed by a novel method, enhancer piracy // Development. 1994. V. 120. P. 2329-2338.

120. O'Connor, D., and Lis, J.T. Two closely linked transcription units within the 63B heat shock puff locus of Drosophila melanogaster II Nucl. Acids Res. 1981. V. 9. P. 5075-5092.

121. O'Hare K., Rubin G.M. Structures of P transposable elements and their sites of insertion and excision in the Drosophila melanogaster genome // Cell. 1983. V.34. P.25-36.

122. O'Kane C.J., Gehring W.G. Detection in situ of genomic regulatory elements in Drosophila II Genetics. 1987. V.84. P.9123-9127.

123. Pardue M.L. In situ hybridization to DNA of chromosomes and nuclei // Drosophila: a practical approach. Oxford: IRL Press, 1986. P. 111-137.

124. Pardue, M.L., Gerbi, S.A., Eckhart, R.A., and Gall, J.G. Cytological localization of DNA complementation to ribosomal RNA in polytene chromosomes of Diptera II Chromosoma. 1970. V. 29. P. 268-290.

125. Paul, J. General theory of chromosomes structure and gene activation in eukaryotes //Nature. 1972. V. 238. P. 444-446.

126. Pelling, C. A replicate and synthetic chromosomal unit the modern concept of the chromomere//Proc. Roy. Soc. B. 1966. V. 164. P. 279-289.

127. Pelling, C. Transcription in giant chromosomal puffs // In "Results and problems in cell differentiation" (W. Beermann, ed.), 4, P. 87-99. Berlin, Heidelberg, New York, Springer. 1972

128. Perez-Alonso M., Cuenca J.B., De Frutos R Electron microscope analysis of the E polytene chromosome of Drosophila subobscura: region 70B to 72D // Biol. Cell. 1988. V. 63. P. 269-75.

129. Perrimon N. Creating mosaics in Drosophila II Int. J. Dev. Biol. 1998. V. 42. P. 243-247.

130. Plilei M.D., Farmer J.L., Jeffrey D.E. In situ hybridization of biotinylated DNA probes to polytene salivary chromosomes of Drosophila species // Dros. Inf. Ser. 1986. V. 63. P. 147-149.

131. Procunier, W.S. The interdependence of B chromosomes, nucleolar organizer expression, and larval development in the blackfly species Cnephia dacotensis and Cnephila ornitophilia (Diptera: Simuliidae) II Can. J. Zool.1982. V. 60. P. 2879-2896.

132. Raikow, R.B. Puffing in salivary gland chromosomes of picture-winged Hawaiian Drosophila II Chromosoma. 1973. V. 41. P. 221-230.

133. Ramos, R.G.P., Grimwade, B.G., Wharton, K.A., Scottgale, T.N., and Artavanis-Tsakonas, S. Physical and functional definition of the Drosophila Notch locus by P element transformation // Genetics. 1989. V. 123. P. 337-348.

134. Richards G., Cassab A., Bourouis M., Jarry B., Dissous C. The normal developmental regulation of a cloned Sgs3 "glue" gene chromosomally integrated in Drosophila melanogaster by P element transformation// EMBO J.1983. V.2. P. 2137-2142.

135. Rubin G.M., Kidwell M.G., Bingham The molecular basis of P-M hybrid dysgenesis: the nature of induced mutation // Cell. 1982a. V.29. P.987-994.

136. Rubin G.M., Kidwell M.G., Bingham The molecular basis of P-M hybrid dysgenesis: the role of P element, a P-strain-specific transformation family // Cell. 1982b. V.29. P.995-1004.

137. Rubin G.M., Spradling A.C. Genetic transformation of Drosophila with transposable element vector // Science. 1982. V.218. P.348-353.

138. Rubin G.M., Spradling A.C. Vector P element-mediated gene transfer in Drosophila II Nucleic Acids Res. 1983. V.l 1. P.6341-6351.

139. Rudkin, G.T. The relative mutabilities of DNA in regions of the X chromosome of Drosophila melanogaster II Genetics. 1965. V. 52. P. 665-681.

140. Rudkin, G.T. Replication in polytene chromosomes // In "Results and problems in cell differentiation" (W. Beermann, ed.). Berlin, Heidelberg, New York Springer. 1972. V. 4. P. 59-85.

141. Rykowski, M.C., Parmelee, S.J., Agard, D.A., and Sedat, J.W. Precise determination of the molecular limits of a polytene chromosome band: regulatory sequences for the Notch gene are in the interband // Cell. 1988. V. 54. P. 461-472.

142. Sass, H. Features of in vitro puffing and RNA synthesis in polytene chromosomes of Chironomus II Chromosoma. 1980. V. 78. P. 33-78.

143. Scouras Z.G., Kastritsis C.D. Balbiani rings and puffs of the polytene chromosomes of Drosophila auraria 11 Chromosoma. 1984. V. 89. P. 96-106.

144. Searles, L.L., and Voelker, R.A. Molecular characterization of the Drosophila vermilion locus and its supperssible alleles // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1986. V. 83. P. 404-408.

145. Segraves, W.A., and Hogness, D.S. Molecular and genetic analysis of the 75B ecdysone-inducible puff of Drosophila melanogaster II Genetics. 1984. V. 107. № 3. pt. 2. P. 96-97.

146. Semeshin, V.F., Zhimulev, I.F., and Belyaeva, E.S. Electron microscope autoradiographic study on transcriptional activity of Drosophila melanogaster polytene chromosomes//Chromosoma. 1979. V. 73 P. 163-177.

147. Semeshin, V.F., Baricheva, E.M., Belyaeva, E.S., and Zhimulev, I.F. Electron microscopical analysis of Drosophila polytene chromosomes. I. Mapping of the 87A and 87C heat shock puffs in development// Chromosoma. 1982. V. 87. P. 229-237.

148. Semeshin V.F., Baricheva E.M., Belyaeva E.S., Zhimulev I.F. Electron microscopical analysis of Drosophila polytene chromosomes. II. Development of complex puffs // Chromosoma. 1985a. V. 91. P. 210-233.

149. Semeshin V.F., Baricheva E.M., Belyaeva E.S., Zhimulev I.F. Electron microscopical analysis of Drosophila polytene chromosomes. III. Mapping of puffs developing from one band // Chromosoma. 19856. V. 91. P. 234-250.

150. Semeshin V.F., Perez Alonso M., Demakov S.A. EM analysis of Drosophila melanogaster polytene chromosome regions with inserted P element // Abseracts of the 10th EDRC, Barcelona, Spain. 1987. P. 234.

151. Semeshin V.F., Kritikou D., Zacharopoulou A., and Zhimulev I.F. Electron microscope investigation of Mediterranean fruit fly Ceratitis capitata II Genome. 1995. V. 38. P. 652-660.

152. Semeshin V.F., Szidonya J. EM mapping of rearrangements in the 24-25 sections of D. melanogaster 2L chromosome // Dros. Inform. Serv. 1985. V. 61. P. 148-154.

153. Simmons M.J., Lim J.K. Site specificity of mutations arising in dysgenic gibrids of Drosophila melanogaster II Proc. Nat. Acad. Sci. 1980. V.77. P.6042-6046.

154. Sirotkin, K. Developmentally regulated transcription at the 67B heat shock cluster // In "Heat shock from bacteria to man" (M.L. Schlesinger, M. Ashburner, A. and Tissieres, eds.). Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor. 1982. P. 69-75.

155. Skaer, R.J. Interband transcription in Drosophila II J. Cell Sci. 1977. V. 26. P. 251-266.

156. Skaer, R.J. Transcription in the interbands of Drosophila II Phil. Trans. R. Soc. Lond. 1978. B283. P. 411-413.

157. Sokoloff, S. Replication of polytene chromosomes in the dipteran Phryne. II Disser. Grad. Doktors Naturwiss. Univers. Tubingen. 1977.

158. Sorsa, V., Green, M.M., and Beermann, W. Cytogenetic fine structure and chromosomal localization of the white gene in Drosophila melanogaster II Nature New Biol. 1973. V. 245. P. 34-37.

159. Sorsa, M. Ultrastructure of puffs in the proximal part of chromosome 3R in Drosophila melanogaster II Ann. Acad. Sci. Fenn. 1969. Ser. A, IV Biol. V. 150. P. 1-21.

160. Sorsa, V. A hypothesis for the origin and evolution of chromomere DNA // Hereditas. 1975. V. 81. P. 77-84.

161. Sorsa, V. A cytological view of the functional organization of chromomeres //Hereditas. 1976. V. 82. P. 63-68.

162. Sorsa, V. Electron microscopic mapping and ultrastructure of Drosophila polytene chromosomes // In "Insect Ultratructure" (R.C. King, H. Akai, eds.). 1984. 2, P. 75-107. Plenum Press, New York.

163. Sorsa, V. Polytene chromosomes in genetic research // Eoois Horwood Ltd, Chichester, West Sussex. 1988a.

164. Sorsa, V. "Chromosome Maps of Drosophila." II FL. CRC Press, Boca Raton. 1988b. V. 1, P. 2.

165. Sorsa M., Sorsa V. Electron microscopic observation on interband fibrils in Drosophila salivary chromosomes // Chromosoma. 1976. V. 22. P. 32-41.

166. Sorsa M., Sorsa V. Electron microscopic studies on band regions in Drosophila salivary chromosomes // Ann. Acad. Sei. Fenn. Ser. A. IV. Biol. 1968. V. 127. P. 1-9.

167. Spradling A.C., Rubin G.M. Transposition of cloned P elements into Drosophila germ line chromosomes// Science. 1982. V.218. P.341-347.

168. Spradling, A.C., and Rubin, G.M. Drosophila genome organization: conserved and dymamic aspects I I Ann. Rev. Genet. 1981. V. 15. P. 219-264.

169. Steffensen, D.M., and Wimber, D.E. Localization of tRNA genes in the salivary chromosomes of Drosophila by RNA: DNA hybridization I I Genetics. 1971. V. 69. P. 163-187.

170. Steller, H., Pirrotta, V. A transposable P vector that confers selectable G418 resistance to Drosophila larvae // EMBO J. 1985 V. 4. P. 167—171.

171. Szidonya, J., and Reuter, G. Cytogenetic analysis of the echinoid (ed), dumpy (dp) and clot (cl) region in Drosophila melanogaster // Genet. Res. Camb. 1988. V. 51. P. 197-208.

172. Thomas, C.A., Jr. The genetic organization of chromosomes I I Annual review of genetics. 1971. V. 5. P. 237-256.

173. Tsubota S., Ashburner M., Scheid P. P element induced control mutations at the r gene of Drosophila // Molecular & Cell Biology. 1985. V.5. P.2567-2674.

174. Vazquez-Nin, G., and Bernhard, W. Comparative ultrastructural study of perichromatin- and Balbiani Ring granules // J. Ultrastruct. Res. 1971. V. 36. P. 842-860.

175. Vlassova I.E., Umbetova G.H., Zimmermann V.H., Alonso C., Belyaeva E.S., Zhimulev I.F. Immunofluorescent localization of DNA:RNA hybrids in

176. Drosophila melanogaster polytene chromosomes // Chromosoma. 1985. V. 91. P. 251-258.

177. Vlassova, I.E., Zhimulev, I.F., Belyaeva, E.S., and Semeshin, V.F. The effect of DRB and a-amanitin on the RNA synthesis in Drosophila melanogaster polytene chromosomes//Dros. Inform. Serv. 1987. V. 66. P. 151-154.

178. White, M.J.D. Animal cytology and evolution, Second edition. Cambridge University Press. 1954.

179. Wilkinson D.G. The theory and practice of in situ hybridization // In situ hybridization: a practical approach. Oxford: IRL Press, 1992. P. 1-13.

180. Wilson C., Pearson R.K., Bellen H.J., O'Kane C.J., Gehring W.J. P-element-mediate enhancer detection: an efficient method for isolating and characterizing developmentally regulated genes in Drosophila // Genes & Development. 1989. N3. P.1301-1313.

181. Wimber, D.E., and Steffensen, D.M. Localization of 5S RNA genes on Drosophila chromosomes by RNA-DNA hybridization // Science. 1970. V. 170. P. 639-641.

182. Wu M., Davidson N. Transmission electron microscopic method for gene mapping on polytene chromosomes by in situ hybridization // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1981. V. 78. P. 7059-7063.

183. Zhimulev, I.F., Belyaeva, E.S., Semeshin, V.F. Informational content of polytene chromosome bands and puffs// CRC Critical Reviews in Biochemistry. 1981. V. 11. P. 303-340.

184. Zhimulev, I.F., Semeshin, V.F., Kulichkov, V.A., and Belyaeva, E.S. Intercalary heterochromatin in Drosophila. I. Localization and general