Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Тромбогенный потенциал и тромборезистентность сосудов микроциркуляторного русла

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Тромбогенный потенциал и тромборезистентность сосудов микроциркуляторного русла"

С"»

( 5 На правах рукописи

:>

• МИХАЙЛОВА Крина Анатольевна

Тромбогенный потенциал и тромборйзистентность сосудов мккроциркуляторного русла

Специальность 03.СЮ. 13 Физиология человека и животных

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

САНКТ-ПЕТЕРБУРГ 1995

Работа выполнена в Санкт-Петербургском Государственном Медицинской Университете иы. акад. И.П.Павлова

Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор Н.Н.Петрищев

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, чл-корр. РАМН, профессор В,0.Самойлов доктор биологических наук, профессор Ю.£.Москаленко доктор медицинских наук Л.П.Папаян

Ведущая организация:Институт физиологии им.И.П.Павлова РАН

Защита диссертации состоится "_"_:_1995 г. в

_часов на заседании диссертационного совета Д.002.89.01 Института эволюционной физиологии и биохимии им. И.М.Сеченова РАН (194223, Санкт-Петербург, пр. М.Тореза, д.44)'.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ИЭВиБ им. И.М.Сеченова^АН по адресу 194223, Санкт-Петербург, пр.М.Тореза Д.44.

Автореферат разослан 1995

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук

(М.Н.Маслова)

АКТУАЛЬНОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ. Последнее десятилетке в области изучения метаболизма и функциональной активности клеток сосудистой стенки отмечено резким увеличением количества исследований. В физиологических условиях образование в сосудистой атетоз большинства тромбогенных и атроибогенных веществ, а также поступление их в кровь происходит непрерывно, хотя и в небольшом количестве. Неповрежденный эндотелий предотвращает образование тромбина и адгезию тромбоцитов на лушшальной поверхности сосудов, при повреждении и нарушении целостности эндотелия выделяются тромбогенные вещества, обнажается субэндотелий, происходит связывание и активация коагуляционных факторов, адгезия и агрегация тромбоцитов, т.е. формируется гемостатический ответ. В корме продукция атромбогенных веществ в эндотелии преобладает, так «е , как и образование плазменных антикоагулянтов над про-коагулянтами, что обеспечивает несвертываемость крови и предуп-реддает развитие тромбоза. Таким образом, сосудистая стенка предотвращает чрезмерную активацию гемостатической сиотоин вследствие наличия специфических свойств поверхности. Последовательное рассмотрение этих свойств дало возможность возникнуть и укорениться понятиям "тромборезистентность сосудов" и " тромбо-генный потенциал".

Мы рассматриваем тромборезистентность сосудистой стенки как свойство, проявляющееся в способности ограничивать процесс тромбообраэоваяия зоной повреждения. Основное значение в формировании тромборезисгеятности имеют прогеогликаны, простацшшш, тромбомодулин, протеин Б, и ряд других веществ, образующихся преимущественно в эндотелии и ингибирующих гемокоагуляцию, адгезию и агрегацию тромбоцитов. Мобилизация местных антикоагуля-ционных, антиадгезивных и антиагрегационных механизмов при повреждении интактных сосудов ограничивает распространение тромбоза, но ке препятствует гемостазу.

Экспериментальными исследованиями последнего десятилетия убедительно показано, что нарушение соотношения тромбогеннссти и тромбореаистентности имеет значение не только в развитии тромбоза при различных видах сосудистой патологии, но и в патогенезе воспаления, атеросклероза, метастазирования опухолей и т.д. В наиболее полном объеме.взаимодействие всех компонентов системы гемостаза, з том числе и атромбогенных факторов сосудистой стенки, происходит при повреждении сосуда и формирования тромба. Для оценки тршбсгекноати и тромборезистенткости необ-

« •

~ 1С -

ходимы объективные критерии. Наблюдение образования и роста тромба In vivo дает возможность изучать вышеуказанные свойства и направленно влиять на них. Взаимодействие тромбоцитов о сосудистой отенкой является динамическим процессом. Наряду с- биохимическими факторами гидродинамические факторы являится необходимыми компонентами при исследовании гемостаза и тромбообразо-вания. Толчком к интенсивному изучении взаимодействий тромбо-цит-сооудистая стенка послужили клинические наблюдения инфарктов миокарда, следовавших за развитием больших тромбов, возникших на атероыатозных бляшках в коронарных артериях ( Frink R. et al., 1988 ); сходный процесс в сонных артериях привадил к инсультам. Троыбообразование на искусственных поверхностях в организме ( протезы сосудов, искусственные органы) также приводило к серьезным нарушениям в сердечно-сосудистой системе.

Во отношению исследования в микроциркуляторном русле на первый план выдвигается проблема моделирования процесса тромбо-образовавия in vivo. Наиболее адекватные методики, развивающиеся в последнее время - облучение микрососудов сфокусированным через микроскоп лазерным лучом ( Чернух A.M. и саавт., 1976; Петрищев Н.Н. и соавт.,1981; Kovacs I. et al., 1979; В. Araljot et al., 1994), зл-ктро- и ионофорез посредством микроэлектродов, введенных в сосудистую стенку ( Callahan А.В. et al., 1060; Begent et al., 1970 ), пункция ыикрососудов с помощью ыикропипетки (Oude Egbrink et al., 1991). Первая из вышеуказанных моделей в различных модификациях может обеспечить условия, приближенные к реальным по отношению к общей проблеме тромборе-зистентносги сосудистой стенки и частным вопросам динамики тромбообразования и влияния различных внешних и внутренних фак~ торов на этот процесс. Однако отсутствует систематическая разработка этой модели с учетш количественной оценки повреждающего фактора при сравнительных исследованиях микрососудов различного типа. Необходимым моментом в этой разработке является учет гидродинамических условий роста тромба на всех стадиях его формирования. Совершенствование методических подходов дает возможность широкого применения этой модели как для изучения общей проблемы ' соотношения тромбогенных и тромбореэистентных свойств сосудистой стенки, так и для решения конкретных задач, связанных о возникновением и ростом тромба. Распространенность трои-

* л • I

база в клинической практике как наиболее часто встречающихся осложнений сердечно-сосудистой сиотеш обуславливает важность подобного рода исследований.

Исходя из изложенного.актуальность избранной темы обусловлена недостаточной изученностью соотношений тромбогенных и тромборезистентных свойств сооудистой отенки, отсутствием систематической разработки адекватной модели ln vivo, позволяющей решать поставленную задачу как в общем плане, так и более узких рамках влияния конкретных физических и химических факторов на процесс тромбообразования.

Целью настоящей работы являлось СЬздание и систематическая разработка методики прижизненного моделирования тромбоза микрососудов, дающей возможность оценивать в сравнительном аспекте тромбогенные и троборезиотентные свойства сосудистой стенки микрососудов различного типа, а также выяснение некоторых эволюционных аспектов этой проблемы. Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

- выбрать оптимальные условия моделирования процесса тромбообразования, .обеспечивающие строго дозированное воздействие на сосудистую стенку в микрососудах разных классов позвоночных животных;

- охарактеризовать соотношения наиболее вероятных повреждающих факторов при лазер-индуцированном тромбозе, выделив основной из них, оценить величину-и длительность воздействия .в микрссосудах эволющганно различных сосудистых систем;

- разработать математическую модель развития тромба, учитывающую изменения гидродинамических характеристик кровотока в условиях стеноза микрососуда;

- на основе полученного экспериментального материала дать характеристику соотношения тромбогенных и тромборезистентных свойств артериол и венул, а также изменений этих соотношен: л у микрососудов разных диаметров;

- изучить влияние некоторых физических факторов ( г-облучение и гипоксия ) на соотношение вышеуказанных свойств, а также медиатора воспалительных процессов интерлейкина-1;

- исследовать процессы тромбообразования в микрососудах других позвоночных ( рептилии и амфибии) и сопоставить полученные результаты с данными по млекопитающим.

Для решения поставленных задач использовались Сеапородныэ белые крыаы, рептилии (Ophisaurus apus), амфибии (Rana temporaria).

Работа выполнялась в соответствии о планом основных научно-исследовательских работ Санкт-Петербургского государственного университета им.акад.И.П.Павлова по теме " Тромбогенные и троыбореэистентные овойства сосудов микроциркуляторного русла в норме и при патологии " ( номер госрегистрации 01.93.0011102).

Новизна исследования заключается в тем, что впервые теоретически и практически разработанная модель лазер-индуцированного тромбоза для сравнительных характеристик тршбогешшх и тромборезистентных свойств микрососудов щ шэнена для комплексного исследования микрососудов разного типа, калибра и зволюци-онно раз дичащихся сосудистых систем. Построенная математическая модель на основе концепции "времени активации" тромбоцитов описывает влияние скорости кровотока на скорость роста тромба в условиях экспериментально установленной неравномерности распределения тромбоцитов по сечению ыикрососуда. Дальнейшее развитие модели дало возможность впервые описать с единых позиций рост тромба в условиях возникающего вследствие процесса тромбообра-аования стеноза микрососуда. Соответствующий выбор феноменологических параметров модели, описывающих гидродинамические ха-рактеристикикровотока и агрегационные свойства тромбоцитов определяет заключительную стадии развития тромба: либо тромб прекращает рост и стабилизируется, либо рост тромба происходит вплоть до полной окклюзии ммсрососуда.

В экспериментальных исследованиях на микрососудах брыжейки крысы получены новые данные о соотношении тромбогенного потенциала и тромборезистентности в сосудах разного калибра. Установлено, что с увеличением диаметра ыикрососудов (20-50 мкм) в артериолах увеличивается плоадць сечения тромба и уменьшается время первичного гемостаза, что указывает на увеличение тромбогенного потенциала. В венулах также отмечен рост сечения тромба; при атом в обоих типах сосудов практически не менялась протяженность тромбов вдоль сосудистой стенки. Исследование параметров тромбообразования у артериол и венул одинакового диаметра показало, что артериолы обладают большим тромбогенным потенциалом и одновременно большей тромборезистентностью. '

- Б -

Впервые проведено комплексное иооледоваше изменений вышеуказанных свойств микрососудов при воздействии физических факторов - радиации и гипобарической гипоксии. Показано, что в процессе адапции к повторным воздействиям гипоксии проявляются изменения тромбогенного потенциала, особенно в венулярном отделе микроциркуляторного русла. Исследования процесса тромбообразо-вания в пострадиационном периоде С до 3 месяцев после т-облучения) свидетельствуют о сохраняющихся нарушениях в системе тром-боцитарно-сосудистого гемостаза в указанные сроки. Получены новые результаты по исследованию тромбогенного потенциала и тром-борезистентности микрссосудов в эволюционном аспекте ( на рептилиях и.амфибиях). Показано, что у млекопитающих тромбогенная активность сосудов выше, более существенны различия этих свойств между артериолами и венудаыи. Сопоставление этих данных о данными, полученными у млекопитающих в разных функциональных состояниях организма подтверждает положение о том, что в условиях патологии происходит Еозврат к древним формам функционирования физиологических систем. ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1.Лазерное излучение б области ближнего ультрафиолета (Х-337 нм) поглощается гемоглобином и оксигемоглобином крови, вызывая кратковременное повышение температуры внутри облучаемого объема крови в микрососудэ, инициирующее повреждение луми-нальной поверхности сосудистой стенки.

2. Скорость роста тромба в начальных стадиях немонотонно зависит от средней скорости кровотока. Представленная теоретическая кргаая хорошо совпадает с экспериментальной при учете зависимости времени активации тромбоцитов от расстояния до поврежденного. участка луминальной поверхности и неоднородности распределения тромбоцитов по сечению мтсрососуда.

3. Разработана математическая модель, которая описмь^т динамику роста вплоть до заключительной стадии. Изменением значений 4 феноменологических параметров модели, зависящих от гидродинамических характеристик кровотока и агрегационных свойств Отромбоцитоз получены все наблюдаемые в эксперименте режимы роста тромба на заключительной стадии.

4. Установлена зависимость между тромбогенныы потенциалом и в меньшей отепени тромборезкстентностью и диаметром ыикросо-

судов (20-60 ша<). Показано, что тромбогенный потенциал артери-ол вше, чем венул ооответотвущего диаметра и одновременно выше их троыборезиотентнооть.

5. При патологических процессах происходит уменьшение различии тршбогенных свойств между артериолами и венулами млеко-тггащих. Установленное уменьшение этих различий в микрооооу-дах у низших позвоночных по сравнении о млекопитающими подтверждает концепции возврата к древним формам функционирования физиологических окстем в условиях патологии. ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ РАБОТЫ. Теоретическая и экспериментальная разработка модели лазер-индуцированного тромбоза как наиболее приближенной к реальным условиям возникновения тромба в микрососудах, дает возможность на основе анализа основных параметров процесса тромбообразования оценить соотношение тромбогенных и тромборезистентных свойств ыикрососудов разного типа in vivo . Изучение изменений этих соотношений под воздействием факторов внещней и внутренней среды позволяют не только определить их роль в патологических процессах, но и обсновать возможные направления патогенетического воздействия на отдельные компоненты тромбообразования в плане коррекции вышеуказанных свойств сосудов. В настоящее время подобные модели являются наиболее распространенными методами оценки эффективности тромболитических и антиагрегантных препаратов как на интактных, так и находящихся в различных функциональных состояниях животных in vivo. Результаты математического моделирования описывают роль гидродинамических характеристик кровотока и агрегационных свойств тромбоцитов на рост тромба в условиях постепенно сушащегося сосуда и дают возможность предсказать характер заключительной. стадии тромбообразования в зависимости от количественных характеристик указанных факторов. Результаты исследований по разработке системы лазер-индуцированного тромбоза могут быть рекомендованы для педрения в учебный процесс в курсе медицинской и биологической физики в медицинских высших учебных заведениях при рассмотрении гидродинамики кровотока в условиях растущего тромба, современных типов микроскопов и вопросов, связанных с применением лазеров в медицине. Полученные данные об особенностях тромбообразования в условиях гипобарической гипоксии и пострадиационного периода, а также под влиянием интерлейкина-1

могут рассматриватьоя в курсе патологической физиологии при изучении вопросов гемоотаза и сердечно-сосудистой оиотемы при патологиях.

РЕАЛИЗАЦИЯ РАБОТЫ. По материалим диссертации опубликовано 36 печатных работ и внедрено 1 рационализаторское предложение. Результаты исследования внедрены в практику учебного процесса по куроу медицинской и биологической физики для студентов 1 курса лечебного и стоматологического факультетов, по курсу патологической физиологии для студентов 3 куроа лечебного и стоматологического факультетов и по куроу биофизики для специализации " Биомедицинская оптика" для студентов 2 и 5 курсов Технического университета точной механики, и оптики. АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Материалы диссертации обсуждались на

-II Всесоюзном симпозиуме по венозному кровообращению и лимфообращению ( Уфа, 1981 )

- I и II Всесоюзных симпозиумах по применению телевизионной микроскопии при исследовании сердечно-сосудистой системы ( Ленинград, 1981,1985 )

- III Всесоюзном съезде патофизиологов ( Тбилиси, 1982)

- Всесоюзной конференции по микроциркуляции ( Москва, 1984)

- III Всесоюзном симпозиуме "Кровообращение а условиях высокогорной и экспериментальной гипоксии" ( Фрунзе, 1986)

- Учредительном конгрессе Международного общества патофизиологии (ISP) ( Моокваг-1991)

- ежегодных симпозиумах "Биомедицинская оптика Европы" (Будапешт, 1S93; Лилль, 1994; Барселона, 1995 )

- I Азиатском конгрессе по микроциркуляции ( Осака, 1993)

- II международном конгрессе по патофязиоло1 .т ( Киото, 1994)

-XV Конгрессе международного общества по тромбозу и гемо-таз,у С Израиль, 1995 ) ОБЪЕМ К СТРУКТУРА РАБОТЫ. Диссертация изложена на 221 странице машинописи и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, собственных исследований, обсуждения результатов и выводов. Библиографический указатель содержит 228 источников. Работа иллюстрирована 31 рисунком и содержит 15 таблиц.

ССЩЕРаАНИЕ РАБОТЫ

МАТЕРИАЛЫ К МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Эксперименты выполнены на 207 беспородных половозрелых крыоах, 20 лягушках (Rana temporaria) и 6 желтопузиках (Ophisaurus Apus). Опыты о крысами проводились в "ссенне-весенний период, о рептилиями и амфибиями - в весенний период (апрель) учитывая сезонные особенности их эритропозэа.

Лазер-индуцированный тромбоз микрососудов щюизводился посредством дозированного воздействия ьа микрососуды излучением импульсного лазера на молекулярном азоте ЛГИ-21 (Х-337 нм), сфокусированным в плоскость объекта чере;, объектив микроскопа. Излучение этого лазера интенсивно поглощается железосодержащими белками крови. Вследствие этого обеспечивается тепловая травма луминальной поверхности микрососуда, что соответствует реальным условиям образования тромба при патологии сердечно-сосудистой системы.

Измерение скорости кровотока и основных параметров тром-бообразования ( пространственных и временных ) производилась с помощью записи процесса тромбообразования на видеомагнитофон и фотографирования с экрана видеоконтрольного устройства. Измерялись следующие параметры тромбообразования: время роста тромба до отрыва первого эмбола, время окончания периода эмболизации ( стабилизации тромба ), пловддь сечения тромба в направлении кровотока, протяженность тромба вдоль сосудистой стенки. Определялась также вероятность тромбоза ( доля от общего количества опытов, в которых произошел процесс тромбообразования с последующей эмболизацией) и частота разрывов микрососудов. При разрывах микрососудов определялось время первичного гемостаза. Анализ видеозаписи позволял определить среднюю скорость кровотока в пределах 0,10±0,01 мм/с до 4,0 + 0,8 мм/с, которая оценивалась по скг-хэсти перемещения оторвавшихся эмболов по прямолинейному участку микрососуда.

Определение спектральных характеристик крови в области 337 нм для количественной оценки повышения температуры внутри микрососуда при облучении сфокусированным лазерным лучом проводилось на спектрометрах Beckman-Acta и Perkin-Elmer. Снимались спектры гемолизата венозной и артериальной крови, на осно-

вании которых рассчитывался коэффициент поглощения крови в области 337 ни.

Определение агрегационной активности тромбоцитов производили фотометрическим методом по Вогп (1962) на анализаторе агрегации тромбоцитов ЕИАН АГ-02. В качестве индуктора агрегации использовали раствор динатриевой соли АДФ (фирма "1?еапа1.", Венгрия ), конечная концентрация в пробе составляла 1,2 *10~° М. Определялись следующие показатели агрегации: время максимальной скорости агрегации время максимальной интенсивности агрегации Интенсивность агрегации Т, время дезагрегации Ьз.

Расчеты по определение размеров 'зоны теплового повреждения луминадьной поверхности микрососуда , а также математическое моделирование процесса роста тромба проводилось на ЭВМ 1052 и РС АТ 386.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Процесс поглощения лазерного излучения сосудистой отенкой и кровью может вызвать разнохарактерные явления, принципиально могущие быть причиной повреждения эндотелия и . таким образом инициализировать процесс тромбообразования. К подобным явлениям относятся в первую очередь фотохимические, механические и, как показывают проведенные в работе оценки, главным образом, тепловые эффекты.

В процессе облучения микрососуда при каждом импульсе лазера происходит поглощение энергии и, как следствие, повышение температуры внутри облучаемого объема. Для оценки этой величины были взяты следующие параметры: диаметр лазерного пу-ла на объекте Ь- Ю-5 м, диаметр микрососуда 4-Ю-5 м. Значения средней скорости кровотока v менялись от 10~3 до З-Ю"3 м/с. Использовался лазер о длительностью импульса Т= ю-8 с, време..ксй промежуток между импульсами х0,02с, средней мощностью излучения, попадающей на микрососуд N - 4-Ю-5 Ет и длиной волны 337 км. Показано, что характерные времена отвода тепла из облученного объема за счет процессов диффузии и конвекционного сноса течением крови являются величинами одного порядка ( 10"3с), то есть оба процесса дают одинаковый вклад в отвод тепла от облученного участка сосуда. В то же время эти величины оказались на

порядок меньше временного интервала между двумя последователь-вши ¿шпульсами х -2*1О-2.

Поэтому можно рассматривать воздействие отдельных импульсов практически независимыми друг от друга и находить максимальное увеличение температуры при воздействии одного импульса лазерного излучения по полученной формуле:

- 4 Лср- х- &и (х) /(я Ь2« х- с1' о) где <1 - плотность крови, о - ее удельная теплоемкооть, а„ (Б)-относительный коэффициент поглощения слоя крови толщиной Б. Так как коэффициенты поглощения гемоглобина и оксиг емоглоб ина одинаковы в области \-337 ны, значит и повышение температуры при воздействии одного импульса одинаково л артериолах и вену-лах. Таким образом, применение - азотного импульсного лазера обеопечивает тождественность повреждающего фактора в микрососудах разного типа ( во равного диаметра ).

. Произведена оценка размеров пораженной области эндотелия за счет распространения тепла из облученного объема посредством численного решения уравнения теплопроводности о заданными граничными условиями. Выяснено, что протяженность тромба 1 вдоль стенки в направлении кровотока больше, чем дает оценка протяженности зоны термического повреждения. Это означает, что реально существуют ведущие к адгезии тромбоцитов изменения эндотелия вне зоны термического повреждения,механизм возникновения которых пока неясен.

Гидродинамические характеристики кровотока оказывают существенное влияние на процесс тромбообразования, как на начальных стадиях его роста, так и на завершающем этапе, когда процесс роста тромба вносит значительные изменения в картину распределения скоростей в сооуде. .Влияние средней скорости кровотока на процесс тромбообразования в агрегационной стадии роста тромба исследовали на венулах брыжейки тонкой кишки крысы (с!=40-50 мкм ). В микрососуде о помощью лазерного излучения воспроизводился процесс тромбообразования с одновременной видеозаписью. Рассчитанная по полученным данным средняя скорость роста оечения тромба сначала растет, затем достигает максимального значения в области 0,7-1,2 мм /о, затем при скоростях свыше 2 мм/с стабилизируется и в пределах измеренных скоростей не зависит от скорости кровотока ( рис.1 ). Для объяснения полу-

ченных результатов проведено подробное рассмотрение начала аг-регационной стадии роста тромба, когда отсутствуют еще резкие изменения «гидродинамических уоловий вследствие частичной закупорки сосуда выросшим тромбом. По предположению, впервые высказанному P.D.Richardson ( 1973 ), при условии линейности профиля скорости кровотока и поотоянотва роста тромба в процессе роста, все тромбоциты, аппроксимируемые шариками радиуса R2<Ri ( радиус поперечного сечения тромба в направлении, перпендикулярном кровотоку ), попадающие в зону активации и остающиеся там в течение времени tft становятся активированными и участвуют в образовании тромба. Время пребывания тромбоцита в агрегационной гоне равно 1/v «» XRi/v. Таким образом, тромбоциты проагрегируют, если XRi/v > tA, и будут унесены потоком крови, если \Rt/v < tA. При предположении зависимости времени активации от расстояния до поврежденного участка сосудистой стенки, что естественно следует из того, что концентрация индукторов агрегации, выделяющихся из проагрегировавших пластинок,, уменьшается по направлению к центру сосуда, то эту зависимость можно представить в виде tA - tA +_«уп, где tA - время активации в пристеночной области. В этом случае для частоты агрегации ( т.е. числа тромбоцитов, агрегирующихся в единицу времени ) имеем выражение

N - 2/3 ( no* T(Ri)3* F(0,rt)). где по- концентрация тромбоцитов в потоке крови, в = aRin / tA-безразмерный параметр, определяющий зависимость времени активации от расстояния до поврежденного участка сосудистой стенки. Характерной чертой графиков безразмерной величины rt*F(fl,rt) , определяющей величину частоты агрегации, а значит, и скорости роста тромба, как функции безразмерной величины Tt является прямопропоциональный рост при малых значениях Гт и спад кривой при больших Ре ( рис.2 ). Параметр в определяющим образом влияет на величину и положение максимумов кривых. Значения параметра п , как показывают расчеты, существенно влияют на крутизну ниспадающих ветвей после прохождения максимума. Полученные значения rt*F(s, Гт) позволяют,подбирая подходящие величины п и В, добиваться наилучшего согласия экспериментальной и теоретических кривых.

Построенная модель позволяет учесть также неравномерность распределения тромбоцитов в потоке крови. Характер распределе-

" - 12f

Рио.1. Зависимость скорости роста тромба Угот средней скорости кровотока Ук(венулы)

РяС. 2. З&ВпипмииГЬ фу'ш\Цп*1 иПрёДаЛпиЩбп СКириСТЪ

роста тромба в начальных стадиях развития от параметра Гс, пропорционального скорости кровотока для случаев п-1 (3=0;0,5;1)

ния, установленный в опытах на микрососудах( Tangelder G.J.et al., 198Z, 1985 ) и путем математического моделирования ( Е.С. Ecsteln et. al., 1991 ) - немонотонный, о острым максимумом в пристеночной области. Учет неоднородности распределения тромбоцитов в кровотоке не меняя качественно, приближает общий характер и детали поведения кривой к наблюдаемой в эксперименте, а именно, к более крутому росту кривой при малых значениях Гт(8+1), к более высокому значению максимума ( превышающему это значение в отсутствии учета неоднородноотей в 2-3 раза), к более медленному относительному изменению функции после прохождения .плато. Эти изменения проявляются' тем сильнее, чем больше размеры тромба.

При построении математической модели динамики роста тромба со временем в микрососуда учитывалось то, что в начале агрега-ционной стадии, растущий в пристеночной области тромб практически не влияет на гидродинамические характеристики потока крови. По мере роста тромба в сосуде меняется не только профиль скорости крови, но и в соответствии о уравнением неразрывности, скорость кровотока в стенозированном участке микрососуда ( Sato М. et al., 1986). На заключительной стадии происходит либо остановка роста тромба о последующей эмболизацией или стабилизацией, либо окклюзия сосуда растущим тромбом, которой предшествует резкое снижение скорости кровотока в сосуде. Исход заключительной стадии зависит от агрегациошшх свойств тромбоцитов.и гидрсдик-Амчеоких характеристик кровотока. Построенная нами модель динамики роста тромба опирается на два экспериментально установленных факта - немонотонной скорости роста тромба в микрососуде от средней скорости кровотока (Begent N.et .Л., 1970; Кондратьев А.С. и соавт., 1990) (рис.1)и немонотонного изменения скорости кровотока над растущим тромбом ( Sato М. _ et al, 1986 ) ( рис.3), Аппроксимация зависимости скорости роста тромба dM/dt от значения скорости кровотока ( рис.1) производится выражением

dM/dt«a*v*e~bv

где а и Ь - некоторые положительные постоянные, а М - величина, характеризующая величину тромба.Экспериментальное изучение зависимости скорости кровотока в микрососудах над растущим тромбом от размеров этого тромба показало, что при малых размерах

- u

Рис. 3 . Временные зависимости изменении скорости кровотог-а (на оси сосуда) и относительной высоты тромба в венуле диаметром 60 рм (M.Sato et al., 1986 )

Рис..4. Модельная зависимость изменения скорости кровотока на оси сосуда <р (О и характерного размера тромба М(и как функции времени (е-1; г=2,5; «х=10; а-0,9)

тромба изменение скорости соответствует уравнению неразрывности, а затем, начиная о некоторого значения скорости уменьшается до нуля ( Sato M.et al., 1986 ) (рио.З). Такой вид зависимости хорошо аппроксимируется формулой v(M)- v0*<p(M) Ф(М)- e"£M/l-r*M*e"£M Здесь еит- некоторые положительные постоянные, a vo- значение скорости кровотока на оси сосуда до начала процесса тромбообразования. Результат численного решения этих уравнений зависит от 4 феноменологических параметров, характеризующих гидродинамические характеристики кровотока и агрегационные свойства тромбоцитов. Построенные на основании численного решения дифференциальных уравнений зависимости характерного размера тромба от времени передают все особенности экспериментального закона роста размеров тромба во времени ( рис.4) и может описывать различные режимы роста тромба при надлежащем выбо'ре параметров. Несмотря на то, что экспериментальная зависимость (р«с.1) получена только для венул , тот факт, что для артериол получены в опыте графики, аналогичные рис.3 для венул дает возможность сделать вывод, что зависимость типа указанного на рис.1 характерна и для артериол. Однако сложности методического, а, может быть, и принципиального характера не дают возможности получить подобный результат in vivo.

Изучение соотношения тромбогенных и тромборезистентных свойств микрососудов разного типа и калибра определяется динамическим равновесием в процессе секреции тромбогенных и атром-богенных агентов в весьма различающихся гидродинамических усло-- виях. Исследования параметров тромбообразования в артериолах и венулах в зависимости от диаметра микрососуда (d=20-50 мкм) показали, что время роста тромба в артериолах с диаметрами от 23 до 43 мкм в среднем растет от значений 10 до 40 с (* г«=0,7 ) В венулах коэффициент корреляции их г = 0,2 и о связи их говорить не приходится. Площадь сечения тромба в артерийлах растет от 250 мкм2 до 550 мкм2 (г = 0,7 )к и аналогичная тенденция отмечается в венулах - рост сечения от 450 до 820 мкм2. При этом во всем интервале исследованных диаметров площадь сечения тромбов в артериолах была существенно меньше, чем в венулах. Протяженность тромбов, характеризующая тромборезиотентность сосудистой

стенки,в исследованных артериалах менялась в пределах 35 - 40 мкм, что в пределах ошибки измерений дает возможность считать эту величину постоянной. В венулах соответствующая величина также была практически постоянна ( варьировалась в пределах 40-45 мкм ).Время первичного гемостаза в артериолах существенно уменьшалось ( с 40 о до 10 с'), в венулах же разброс значений был значителен, что не давало возможности говорить о корреляции между временем первичного гемостаза и диаметром сосуда.

Уменьшение времени первичного гемостаза в артериолах большего диаметра указывает на увеличение тромбогенного потенциала, хотя заметную роль здесь может играть и реактивность сосудистой стенки. Таким образом, наблюдаемые изменения дают возможность говорить о увеличении тромбогенного потенциала на фоне мало меняющейся тромборезистентности у более крупных сосудов микроцир-куляторного русла, особенно, в артериолах.

Для сравнительных исследований соотношения тромбогенного потенциала и тромборезистентвых свойств артерйол и венул использовались микрососуды диаметром 35-40 мкм.

Динамика тромбообразования в артериолах и венулах брыжейки тонкой кишки крысы исследовалась с помощью модели лазер-индуци-рованного тромбоза при следующих режимах облучения: длительность экспозиции 0,05 с (энергия облучения 0,002 Дж). С увеличением экспозиции растет частота разрывов венул и уменьшается относительное число опытов без визуально наблюдаемого тромбообразования. Частота разрывов растет пропорционально энергии облучения в исследованной области энергий. В артериолах имеется такая же тенденция, однако процент разрывов артерйол выше, чем в венулах при всех использовавшихся экспозициях, а тромбы образуются реже. Так как воздействие каждого лазерного импульса на сосудистую стенку происходит независимо, термическое повреждение стенки распространяется вглубь по мере роста экспозиции, затрагивая оубэндотелиальные и более глубокие слои стенки. Тромбоциты контактируют в этом случае со слоями, характеризующимися большей адгезивноотью и тромбогенностью, с чем и связан рост вероятности опытов о визуально наблюдаемым тромбозом. Временные параметры тромбообразования и в венулах имеют немонотонную зависимость от дозы облучения. Время роста тромба до отрыва первого змбола имеет максимальное значение в области 0,01-0,02

Дж, примерно в этой же области ммеег максимум время окончательной фиксации тромба к сосудистой стенке.' При энергиях, больших 0,04 Дж, .если микрососуд не рвался, возникающий тромб практически фиксируется сразу же, почти не подвергаясь процессу эмбо-диэации. В области исследуемых знрргий облучения площадь поперечного сечения тромба растет с ростом падающей энергии в обоих типах микрососудов, однако в венулах этот параметр всегда больше, чем в артериолах соответствующего диаметра. Протяженность тромба вдоль сосудистой стенки в направлении кровотока является параметром, который определяется в первую очередь характером взаимодействия тромбоцит - стенка сосуда. В венулах протяженность тромба растет пропорционально энергии облучения, причем тромб в венулах имеет тенденцию к более быстрому увеличению размеров стенки, чем в перпендикулярном направлении. В артериолах при энергиях облучения 0,02-0,2 Дж протяженность практически не меняется, а при больших энергиях возрастает. Значит, в области небольших энергий, в которой производились основные исследеования, рост тромба происходит преимущественно в направлении, перпендикулярном сосудистой стенке.

При разрывах микрососудов измерялось также время кровотечения до образования первичной гемостатической пробки, причем в артериолах оно было меньше, чем в венулах при различных степенях повреждения сосуда.

В качестве иллюстрации использования модели мы исследовали результаты воздействия на крыс двух физических факторов внешней среды, вносящих существенные изменения в систему гемостаза -гипобарическую гипоксию и т-излучение. При барокамерной гипоксии и в процессе адаптации к условиям высокогорья у человека наблюдаются изменения в системе гемостаза гиперкоагуляция, активация фибринолиза, тромбоцитоз. Радиационное воздействие приводит к нарушению сосудисто-тромбоцитарного механизма гемостаза и, как следствие, к тромбоцитопении и геморрагиям .

При исследовании процесса тромбообразования у крыс под воздействием прерывистой гипоксии в бароустановке ( 2 сеанса "на высоте" 4500 м, 2 - "на высоте" 5000 м, 5 - "на высоте" 5500 м и 15 "на высоте" 6000 м) наблюдалось достоверное увеличение тромбоцитов в периферической крови, причем тромбоцитоз сохранялся в течение всего периода наблюдений. Исследование

АДФ- индуцированной агрегации тромбоцитов показало, что в условиях гипоксии у крыс повышается агрегационная активность тромбоцитов, а в конце периода происходит адаптация. Данные по параметрам тромбообразования при лаз ер-индуцированном тромбозе после 10 и 25 сеансов гипоксии представлены в таблице 1. Установлено, что в артериолах площадь сечения тромба достоверно увеличилась по сравнению о контрольными крысами.Площадь сечения тромба в венулах имело тенденцию к снижению ( но не достоверную), а протяженность тромба вдоль направления кровотока практически не изменилась. Время первичного гемостаза в артериолах не изменилось по сравнению с контролем, в венулах оно существенно уменьшилось. После 25 сеансов оно практически не отличалось от контроля. Временные параметры достоверных изменений за время наблюдении не претерпели. Таким образом, приведенные данные свидетельствуют о том, что в процессе адаптации к повторным воздействиям гипобарической гипоксии проявляются изменения тромбогенного потенциала, особенно в венулярном отделе микро-циркуляторного русла. При этом различие параметров тромбообразования в артериолах и венулах меньше, чем у интактных крыс.Однако по мере адаптации эти различия ( в сравнении с контрольными животными) исчезают.

В пострадиационном периоде у крыс, подвергнутых г- излучению, число тромбоцитов через 1 и 3 месяца имело тенденцию к снижению по сравнению с контрольными, однако эти изменения в указанные сроки были статистически недостоверны. Временные параметры параметры тромбообразования достоверно не изменялись в течение периода наблюдений ( 1 и 3 месяца после облучения) (табл.2). Однако площадь сечения тромба" через 1 месяц после облучения существенно уменьшилась и в артериолах, и в венулах, а через 3 месяца в последних существенно увеличилась. В артериолах этот параметр если и увеличился, то в меньшей степени, чем в венулах. При атом в венулах возросла протяженность тромба , в артериолах этот параметр достоверно не изменился. Отсюда можно сделать вывод, что увеличение площади сечения в венулах связано, о возрастанием зоны повреждения при воздействии лазерного излучения,о чем свидетельствует достоверное нарастание протяженности тромба.

Время первичного гемостаза в артериолах у контрольных крыс

Таблица 1

Параметры тромбообраэования в артериолах и венулах брыжейки крыс, /подвергшихся воздействию гипоксии

1 1 | Параметры | Группы животных 1 1

1 1 1 1 • 1 контроль ( 1 | гипоксия | I 10-й сеанс | • < гипоксия | 25-й сеано|

I Вевулы |

1 1 1 с 1 1 1 31+3 1 1 | 18+2* | 1 | 28+4 |

1 1 1 Ьф, с- | 1 1 120+8 1 1 | 95+4* | 1 | 115±7 |

1 1 | Б ,мкм2 | 1 1 1680+60 1 1 | 1413+80 | 1 1 1700+50 |

1 1 | Ь, мм | 1 1 75+5 1 1 | 77+4 | 1 1 6413 |

1 1 1 Ьгви, С | 1 > 40+5 1 1 | 25+5 | | 1 |

| Артериблы |

1 1 1 с | 1 | 20+2 1 1 I 17±2 | 17±1 |

1 1 1 с | 1 1 60+6 1 1 1 65+5 | 1 | 58+3 |

1 1 | Б, мкм2 | 1 1 730+60 1 1 I 1107±50* 1 1 | 600±55 |

1 1 | 1, мкм 1 47+6 о 1 1 | 50+3 | 1 | 60+5 |

1 1 ! Ьг^эм^ | 1 1 19+2 1 1 I 15+2 | | ' 1

- г, ' п У и,ио

Таблица 2

Параметры троибообрааования у контрольных и облученных крыс

Показатель Контроль Время после облучения, мес.

. Тромбоциты *105 /л 1 3

756±51 (Ю) 624±74 (9) 701+78 (Ю)

Бремя первичного гемостаза,о а 14,4±1,2 (7) в 46,5±5,4 16,5+3,1 (4) 55,0±7,0 17,7+1,7 (5) 76,2+10,0

о а 18,0+2,5 (Ю) В 23,9±4,7 (9) 15,1± 3,1. (5) 22,0±3,4 (5) 14,7+1,7 (10) 19,2±3,2 (5)

Ч®, о а 68,6±5,1 (Ю) в 113,0+8,0 (Ь 61,2±4,1 (5) 102,1±9,2 , (5) 76,2±11,0 (4) 122,2+7,1 (5)

Б, мкм2 а 400±47 (10) В 606±73 (Ю) 246+32 * 395+46 * (6) 315+48 534+27 (8)

1, мкм а 31,0+2,1 (Ю) в 39,5±2,0 (Ю) 34,0±1,6 (Б) 41,0±4,7 (6) 29,8+2,7 (9) , 49,2+2,7 (8)

а-артериош, в-венулы. * - р < 0,05 со сравнению с контролем р < 0,05 между 1 и 3 мес

значительно меньше, чем в венулах, что, как было отмечено ранее, указывает на их более высокий тромбогенных потенциал. Через 1 месяц после облучения время первичного гемоотаза в артериолах и венулах достоверно не изменялось , но через 3 месяца наблюдалось отчетливое увеличение этого параметра в венулах и некоторая тенденция увеличения его в артериолах.

Исследование интерлейкина -1, воздействие которого на клетки эндотелия ведет к повышению адгезивности, стимуляции синтеза тканевых факторов коагуляции, фактора активации тромбо-цитбв , при внутримышечном введении показало, что он существенно влияет на тромбогенные и тромборезистентные свойства сосудов венулярного отдела микроциркуляторного русла.

Для выяснения эволюционных аспектов проблемы соотношения тромбогенных и тромборезистентных свойств были исследованы процессы тромбообразования в микрососудах других позвоночных ( рептилии и амфибии ).

При рассмотрении соответствующих значений параметров в артериолах и венулах лягушек и желтопузиков необходимо отметить отсутствие столь резкой разницы, которая выявлена у крыс (рио. 5). Время роста тромба в артериолах у лягушек и в венулах достоверно не отличаются. То же самое можно сказать и о времени формирования стабильного тромба в артериолах и венулах, хотя здесь просматривается тенденция к различиям ( у желтопузиков на протяжении всего опыта наблюдался отрыв тромбоцитарных масс). Достоверных различий протяженности тромба между артерио-лами и венулаыи у лягушек и у желтопузиков нет. Значимая разница отмечается в площади сечения тромба вдоль направления кровотока. В артериолах лягушек этот параметр имел значения 560 ± 40 мкм2 , а в венулах - существенно большие - 720 ± 30 мкм2 . У желтопузиков достоверной разницы в этих параметрах нет. Обращает на себя внимание тот факт, что площади сечения тромбов у желтопузиков и лягушек значительно меньше, чем у крыс, что частично может быть связано с меньшим количеством тромбоцитов в крови лягушек и, особенно, желтопузиков. Время первичного гемостаза у млекопитающих короче, чем у желтопузиков и лягушек, при этом артерио-венулярные различия у лягушек выражены слабее, чем у крыс. У желтопузиков достоверность в различии времени первичного гемостаза отсутствует .Очевидно, что артерио - вену-

крысы

амфибии

рептилии

Время роста тромба, с

1воо 1600 1400 1200 1000 600 600 400 200 о

1580

1

ЯШ

730 •й-'. <

'г"--'/'

560

720

крысы

амфибии

рептилии

Площядь сечения тромба в направлении кровотока, мкм2

Протяженность тромба вдоль сосудистой стенки, мкм -»-р< О,05 по сравнению с вртериолами соответствующего вида

Рис.Б. Параметры тромбообразования в мезентериальных артерио-лах и венулах амфибии и рептилии

лярные различия ярче всего выражены у млекопитающих, менее резко у лягушек и практически отсутствуют у/желтопузиков.

Выводы

1. В механизме предложенной модели лазер-индуцированного тромбоза ( Х-337 нм ) принципиальное значение имеет вызываемое импульсным лазерным излучением кратковременное ( ~ Ю-8 о) повышение температуры внутри облучаемого объема микрососуда (примерно на 50° в наших экспериментальных условиях). Фотохимические процессы и механические эффекты на процесс инициирования тромбообразования заметного влияния не оказывает.

2. Лазерное излучение (Х-337 нм) обеспечивает в микрососудах разного типа, но одинакового диаметра тождественность повреждающего фактора. При этом протяженность тромба вдоль сосудистой стенки и в артериолах, и в венулах больше, чем зона термического нагрева стенки сосуда за счет теплопроводности.

3. Развитие концепции "времени активации" в направлении учета неоднородности распределения тромбоцитов в потоке крови, учета зависимости времени активации от расстояния до пораженного участка стенки сосуда и учета различного вида профилей скорости позволило установить закономерность изменения скорости роста тромба от средней скорости кровотока, согласующуюся с экспериментальными данными.

4.Динамика роста тромба со временем зависит в значительной степени от гидродинамических характеристик кровотока и агрега-ционных свойств тромбоцитов. Моделирование этой зависимости, опирающееся на два установленных экспериментальных факта - немонотонной зависимости скорости роста тромба от средней скорости кровотока и изменения скорости кровотока в сосуде с растущим тромбом дает хорошее совпадение с экспериментом.

5. Тромбогенный потенциал артериол ( (1=20-50 мкм) растет о ростом диаметра микрососуда, в то время как тромборезистент-ность меняется значительно меньше, что выражается в росте площади сечения тромба, уменьшении времени первичного гемостаза и малых изменений протяженности тромба.

6. В артериолах наблюдается более короткое время роста тромба и сокращенное время первичного гемостаза по сравнению с

венулами аналогичного диаметра, что указывает на больший трои-богенный потенциал первых. Меньшая частота тромбоза и меньшая протяженность тромба вдоль луминальной поверхности в артериолах определяет их большую тромборезистентность по сравнению о венулами такого же калибра.

7. В процессе адапции к повторным воздействиям гипобари-ческой гипоксии проявляются изменения тромбогенного потенциала, особенно в венулярном отделе микроциркуляторного русла. Различие параметров тршбобразования между артериолами и венулами в процессе адаптации меньше, чем у интактных крыс, однако к концу периода адаптации различия восстанавливаются.

8. В пострадиационном периоде ( 1 и 3 месяца после облучения) происходит изменения тромбогенной активности микрососудов, а в венулярном отделе они сохраняются и в конце исследуемого периода.

0. У низших позвоночных ( рептилии и. амфибии ) выявлено снижение тромбогенной активности артериол и венул и значительное уменьшение различий вышеуказанных свойств по сравнению с млекопитающими.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Петрищев H.H., Закревская А.Л., Михайлова И.А., Назаров Г.Ф. Тромборезистентность вен у нормотензивных и гипертензивных крыс // В сб.: Венозное кровообращение и лимфообразование. Тезисы докладов II Всесоюзного симпозиума. - Уфа. - 1981. - С.243-244.

2. Михайлова И.А., Назаров Г.Ф. Способ микроповреждения сосудистой стенки с помощью лазерного луча, сфокусированного через объектив // В сб. Изобретательство и рационализация в медицине. - Л. - 1982.-С.100.

3. Петрищев H.H., Назаров Г.Ф., Михайлова'., Гавришева H.A., Закревская А.Л. Применение УФ-лазерного телевизионного микроскопа // В сб. Методические аспекты использования телевизионной микроскопии при исследовании сердечно-сосудистой системы.- Л.- 1982 - С.30-32.

4. Петрищев H.H., Закревская А.Л., Михайлова И.А., Назаров Г.Ф. Тромборезистентность сосудов при артериальной

1 I

гипертензии // В кн.: Повреждение и рёгуляторные сиотеш организма. Тезисы докладов III ,съезда патофизиологов.-Ms-1982.-С. 155."

5. Петрищев H.H., Закревская А.Л., Михайлова И.А. Тромборезистентность сосудов и агрегационная активность тромбоцитов при артериальной гипертензии // В сб.: Клинические и экспериментальные аспекты регуляции агрегатного состояния крови. -Саратов. -19В4. -С. 133-134.

6. Петрищев H.H., Закревская А.Л., Михайлова И.А., ' Цестакова С. А. Тромборезистентность микрососудов и функциональная активность тромбоцитов при острой артериальной гипертензии // В сб.: Актуальные вопросы нарушения гемодинамики и регуляции микроциркуляции в клинике и эксперименте. -М.-1984.- С.226-227.

7. Михайлова И. А. Об использовании лазерного излучения для прижизненного излучения тромборезистентности сосудов // В сб.: Тромборезистентность и реактивность сосудов при артериальной гипертензии.-Л.-1984.-С.12-19.

8. Михайлова И.А. Исследование процессов тромбообразования в микросооудах брыжейки крысы с помощью УФ-лазерного телевизионного микроскопа /J В кн.: Телевизионная микроскопия в исследовании сердечно-сосудистой системы.-Л.-1985.-С.28.

9. Петрищев H.H., Михайлова И.А. Влияние скорости кровотока на динамику тромбообразования в венулах // Тезисы докладов III Всесоюзного симпозиума "Венозное кровообращение й лимфообразование". -Таллин. -1985. -С.77- 78.

10. Петрищев H.H., Михайлова И.А., Степанова М.Н., Ткаченко С.Б. Влияние барокамерной гипоксии на трсмбоцитар-но-сосудистый гемостаз // Тезисы докладов III Всесоюзного симпозиума "Кровообращение в условиях высокогорной и экспериментальной гипоксии".-Фрунзе.-1986-С.137-138.

11. Петрищев Н.Н., Михайлова И.А., Ткаченко С.Б. Возрастные особенности тромбообразования у крыс // Физиологический фурнал СССР.- 1986.-Т.XXII, N12.-С. 1643-1646.

12. Петрищев H.H., Михайлова И.А. Особенности тромбообразования в артериолах и венулах // Физиологический_ журнал CCCP.-1987.-T.XXIII, N8.-С.1100-1102.

13. Петрищев H.H., Митрейкин В.Ф., Михайлова И.А. Обмен серото-

\ /

нина в тромбоцитах и микрососудиотый геиоотаз при спонтанной артериальной гипертензии // Бил.аксп.биологии и мед.-1986, N2.- С.77-81.

14. Петрищев H.H., Михайлова И.А., Ткаченко С.Б. Использование лазерного излучения для исследования тромборезистентности сосудов // Вестник АМН СССР.-1988, N2.C.77-81.

15. Петрищев H.H., Закревская А.Л., Михайлова И.А. Влияние токоферола на тромбоцитарно-сосудиотый гемостаз // В кн.: "Механизмы нарушения .тромбоцитарно-сосудистого гемоота-аа".-Л.-1088.-С.25-31.

16. Кондратьев A.C., Михайлова И.А., Петрищев H.H. Влияние скорости кровотока на процесо тромбообразования в микрососудах // Биофизика.-1990.-Т.35, N3.-С.469-472.

17. Михайлова И. А. Определение геометрических параметров процесса тромбообразования и скорости кровотока в микрососудах брыжейки крысы // Тезисы докладов III Всесоюзного симпозиума "Телевизионная микроскопия в исследовании сердечно-сосудистой системы".-Л.-1990.-С.24-25.

1В. Михайлова И.А. Моделирование процессов тромбообразования в микрососудах // В кн.: Патологическая физиология системы гемостаза".-Л.-1990.-С.39-46.

19. Михайлова И.А. Связь параметров процесса тромбообразования и скорости кровотока в микрососудах брыжейки крыс // Физиологический журнал СССР.-1991.-Т.77, N6.-C.95-99.

20. Петрищев H.H., Горбачев А.Г., Агулянский Л.И., Хавинсон В.Х. Влияние комплекса полипептидов, выделенных из предстательной железы животных, на тромбообразование // Пат.фиэ. и эксп.терапия.-1991. N5.-C.5-6.

21. Михайлова И.А.Тромборезистентные свойства микрососудов брыжейки при адренал-генераторной гипертензии // Тезисы докладов научно-практической конференции "Актуальные вопросы эндокринологии", посвященные памяти з.д.н.РФ проф. Д.Я.Шурыгина.-СПб.-1993.-С.123-124.

22. Петрищев H.H., Митрейкин В.®., Михайлова И.А. Состояние тромбоцитарно-сосудистого гемостаза после воздействия на организм т-излучения // Тезисы научной конференции "Актуальные проблемы патофизиологии экстремальных состояний", посвященных 100-летию со дня рождения академика АМН СССР

И.Р.Петрова й 70-летию со дня рождения академика АМН СССР В.К.Кулагина.- СПб.- 1993.- С.60.

22. Petrishchev N.N., . Mikhailova I.A., Mitreikin V.F. Platelet serotonin content and microcirculation haemostasis In spontaneous arterial hypertentlon in rat // Thrcxnb. Res.-

1992.- V.65.N3.- P.443-448.

23. Petrishohev N.N.,, Mikhailova I.A. Use of ultra-violet laser in studying of thranboifenic and thromboresistant properties of microvasculature // Abstracts of International Symposium " Biomedical Optics of Europe 93"'.- Budapest.- 1993.- P. 287.

24. Petrishchev N.N., Mikhailova I.A. Influence of some hydro-dynamic factors on thrombi formation in microvessels // Доклад на 1-ом Азиатском конгрессе по микроциркуляции. -

1993.- Осака, Япония.

26. Petrishchev N.N., Mikhailova I.A. Thrombi formation parameters in mesenteric arterioles and venules in rats II Thromb.Res.- 1993.-V.72, N4.- P.347-352.

26. Петрищев H.H., Михайлова И.А., Митрейкин В.Ф. Микрососудис-• тый гемостаз в фазе пострадиационного восстановления // Радиобиология. Радиоэкология.- 1994.- вып. 1. - С. 117-120.

27. Petrishchev N.N., Mikhailova I.A. Thrombogenio potential of microvascular vtssels// Abstracts of the 2-nd International Congress of Pathophysiology.- 1994.- Kyoto, Japan.

28. Petrishchev N.N., Mikhailova I.A. Influence of some hydro-dynamic factors of thrombus formation in microvessels// Microvasc.Res.- 1995.- V.49.N1.- P.12-16.

29. Петрищев H.H..Михайлова И.А..Тромбогенныб свойства и тромбо-реэистентность сосудов у амфибий и рептилий // Физиологический журнал им. И.М.Сеченова.- 1995.-Т.81, N6.- С. 109-112.

30. Михайлова И.А. Динамика последовательных стадий тромбообра-зования в микрососудах // Физиологический журнал им. И.М.Сеченова.- 1995.- T.81.N6.- С.109-112.

31. Petrishchev N.N., Mikhailova I.A.Type-specific peculiarities of thrombi formation in microvasculature // Thromb. & Haemost.-1995.-V.73,N6.-P.1337.