Трофические отношения в системе хозяин - паразит - симбионтная микрофлора

Извекова, Галина Игоревна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Трофические отношения в системе хозяин - паразит - симбионтная микрофлора
ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Трофические отношения в системе хозяин - паразит - симбионтная микрофлора"

На правах рукописи

003067263

Извекова Галина Игоревна

ТРОФИЧЕСКИЕ ОТНОШЕНИЯ В СИСТЕМЕ ХОЗЯИН -ПАРАЗИТ - СИМБИОНТНАЯ МИКРОФЛОРА (НА ПРИМЕРЕ ПРЕСНОВОДНЫХ КОСТИСТЫХ РЫБ ИЦЕСТОД)

03.00.19 - паразитология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Санкт-Петербург - 2006

003067263

Работа выполнена в Институте биологии внутренних вод им. И.Д. Папанина РАН

Официальные оппоненты:

Доктор биологических наук

К.В. Галактионов

Доктор биологических наук

А.И. Гранович

Доктор биологических наук, профессор

К.В. Квитко

Ведущая организация: Институт систематики и экологии животных СО РАН

Защита состоится 20 марта 2007 года в 14 часов на заседании диссертационного совета Д 002.223.01 при Зоологическом институте РАН по адресу: 199034 г. Санкт-Петербург, Университетская наб., 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Зоологического института РАН

Автореферат разослан

2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук

Н.А. Петрова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Одна из фундаментальных проблем паразитологии - проблема взаимоотношений паразита и его хозяина. Питание - основа симбиоза и паразитизма, а знание механизмов, с помощью которых паразиты абсорбируют и частично утилизируют нутриенты, имеет фундаментальное значение для понимания сущности паразитизма и отношений паразит - хозяин (Crompton, Hall, 1981). Цестоды - высокоспециализированные организмы, в биологии и морфологии которых проявляются многие важные черты адаптаций к паразитическому образу жизни (Куперман, 1988; Haiton, 1997; Dalton et al., 2004). В силу ярко выраженного морфологического сходства пищеварительно-транспортных поверхностей цестод и кишечника их хозяев, а также благодаря значительно большей, по сравнению с другими гельминтами, биомассе и площади поверхности, принимающей участие в процессах пищеварения, цестоды оказывают существенное влияние на пищеварительную систему хозяина.

На примере ряда позвоночных животных установлена важная роль симби-онтного пищеварения в процессах экзогенного питания (Уголев, 1985; Шивокене, 1989; Уголев, Кузьмина, 1993). К настоящему времени доказано, что существование высших организмов невозможно без постоянного взаимодействия с микроорганизмами, причем многие физиологические процессы у человека, животных и растений неразрывно связаны с соответствующими процессами у населяющих их бактерий (Уголев, 1985; Tannock, 1999; Пименов и др., 2004). Животное-хозяин и его кишечная микрофлора функционируют как комплексная экологическая система, в которой кишечная микрофлора оказывает значительное влияние на организм хозяина, а компоненты микрофлоры - друг на друга (Rolfe, 1984). Микроорганизмы, заселяющие кишечник, обладают набором специфических ферментов, позволяющих гидролизовать субстраты, недоступные ферментам макроорганизма. В результате жизнедеятельности симбионтной микрофлоры образуются пищевые вещества, не нуждающиеся в дальнейшем гидролизе, - аминокислоты, глюкоза, жирные кислоты и другие (Уголев, 1985; Уголев, Кузьмина, 1993). Микрофлора кишечника синтезирует многие витамины, необходимые для жизнедеятельности не только хозяина, но и паразита (Шишо-ва-Касаточкина, Леутская, 1979). Согласно современным представлениям, макроорганизм следует рассматривать как единую систему более высокого иерархического уровня, чем отдельный индивидуум, выполняющий по отношению к микроорганизмам функцию доминанта и регулятора всей системы в целом (Уголев, 1985; Кузьмина, 2005). Бактерии - не только неотъемлемый, но и жизненно необходимый компонент пищеварительного тракта различных животных, в том числе рыб (Шивокене, 1989; Cahill, 1990; Кузьмина, 1996; Clements, 1997; Кузьмина, Скворцова, 2002; Кузьмина, 2005). Существует обширная литература, посвященная количественному и качественному составу энтеральной микрофлоры рыб (Шивокене, Трепшене, 1985; Лубянскене и др., 1989; Шивокене, 1989; Cahill, 1990; Syvokiené, 1991; Баздеркина, 1992; Ring0 et al., 1995; Clements, 1997; Grisez et al., 1997; Ringa, Gatesoupe, 1998; Syvokiené et al., 1999; Austin, 2002). Нормальная микрофлора пищеварительного тракта играет важную роль в жиз-

недеятельности макроорганизма, в частности в формировании иммунитета хозяина, синтезе ряда ферментов и витаминов, утилизации пищевых субстратов с выделением незаменимых аминокислот (Шивокене, Лубянскене, 1980; Шивоке-не, 1989; ег а1., 1991). Особое значение имеет резидентная микрофлора, т.е. микрофлора стенки кишечника, которая формирует природный экологический барьер, представляющий собой один из факторов устойчивости организма (Шп§0 е1 а1., 1995), и оказывает ингибирующее воздействие на патогенные микроорганизмы (1Мез1егс1аЫ е1 а1., 1991). Существенный аспект изучения кишечной микрофлоры - оценка ее роли в питании макроорганизма, которое осуществляется за счет выделения бактериями внеклеточных ферментов, способных участвовать в гидролизе биополимеров. Познание взаимоотношений между рыбами и бактериями, населяющими кишечник, - важный вклад в сравнительную физиологию пищеварения животных. Хозяин, паразит и симбионтная микрофлора представляют собой микробиоценоз со сложившимися за время совместной эволюции тесными взаимоотношениями, исследование которых важно для понимания происходящих в нем процессов (Чахава, Горская, 1982). Работ, касающихся взаимоотношений между микрофлорой кишечника и населяющими его гельминтами, крайне мало. Изучение микрофлоры, ассоциированной с пгацеварительно-транспортными поверхностями цестод, обитающих в кишечнике рыб, ограничивается серией исследований, проведенных в рамках совместного гранта РФФИ с коллегами из лаборатории экологической паразитологии ИБВВ РАН (к.б.н. Ж.В. Корневой и к.б.н. Л.Г. Поддубной).

В то же время, для анализа основных закономерностей трофических взаимоотношений между хозяином и паразитом и выяснения роли в них симбионтного пищеварения необходимы сведения о наличии бактерий в пищеварительном тракте рыб и степени их ассоциации с пищеварительно-транспортными поверхностями, а также о способности этих бактерий выделять различные гидролитические ферменты. Кроме того, требуются данные об активности ферментов, функционирующих на структурах щеточной каймы энтероцитов и тегументе цестод, о соотношении активности одноименных ферментов как в зоне мембранного пищеварения у рыб и гельминтов, так и в полости кишечника хозяина, и, наконец, об активности одноименных ферментов бактерий.

Исследования трофических взаимоотношений между хозяином и паразитом, с учетом существования симбионтной микрофлоры, позволяют пересмотреть некоторые базовые принципы отношений паразита и хозяина и выявить неизвестные ранее механизмы пищевых адаптации цестод.

Цель и задачи исследования. Цель работы - изучение трофических отношений, складывающихся между хозяином, паразитом и симбионтной микрофлорой в кишечнике пресноводных рыб.

В связи с этим были поставлены следующие задачи: 1. Разработать методические подходы к исследованию микрофлоры, с различной степенью прочности ассоциированной со слизистой оболочкой кишечника рыб и тегументом цестод.

2. Установить существование симбионтной микрофлоры, колонизирующей пищеварительно-транспортные поверхности кишечника рыб и цестод, и иссле- « довать способность микрофлоры продуцировать ферменты, гидролизующие основные пищевые субстраты - белки и углеводы.

3.Оценить активность протеаз и амилаз, продуцируемых бактериями, с различной степенью прочности связанными с исследованными поверхностями, а также выяснить общие закономерности функционирования этих ферментов.

4. Сравнить уровни активности исследованных ферментов бактерий с характеристиками ферментов, десорбируемых с пищеварительно-транспортных поверхностей рыб и цестод.

5.Определить локализацию процессов симбионтного пищеварения на пи-щеварительно-транспортных структурах рыб и цестод.

6. Выявить основные пищевые адаптации цестод - паразитов рыб.

Положения, выносимые на защиту.

1. Бактерии, ассоциированные с пищеварительно-транспортными поверхностями кишечника рыб и цестод, вносят существенный вклад в процессы пищеварения хозяина и паразита.

2. Питание у цестод осуществляется в соответствии с трехзвенной схемой пищеварения, включающей мембранное и симбионтное пищеварение, а также всасывание, или транспорт мономеров.

3. Трофические отношения в системе «хозяин - паразит - симбионтная микрофлора» представлены преимущественно взаимовыгодными связями, устанавливающимися за время совместного существования.

Научная новизна. Впервые в идентичных методических условиях исследована симбионтная микрофлора, ассоциированная с пищеварительно-транспортными поверхностями паразита и хозяина, что позволило оценить прочность фиксации бактерий на этих поверхностях. Впервые изучена способность симбионтной микрофлоры, локализованной на пищеварительно-транспортных поверхностях паразита и хозяина, гидролизовать белковые и углеводные компоненты пищи. Впервые существование симбионтной микрофлоры установлено не только для паразитов кишечника, но и для гельминта, паразитирующего в полости тела рыб. Впервые предпринята попытка выявить возможность участия и роль симбионтной микрофлоры в процессах гидролиза основных питательных веществ (белков и углеводов) у цестод и сравнить их с аналогичными процессами, протекающими в кишечнике хозяина. Впервые исследована способность симбионтной микрофлоры, ассоциированной с пищеварительно-транспортными поверхностями рыб и паразитирующих в них цестод, гидролизовать углеводы различной степени сложности (поли- и дисахариды); сопоставлена амилолитическая активность ферментов, адсорбированных на слизистой кишечника и тегументе цестод, с активностью аналогичных ферментов бактерий. На примере низших цестод и их хозяев - рыб впервые установлены основные закономерности трофических взаимоотношений и функционирования системы

«паразит-хозяин» с учетом роли симбионтной микрофлоры, что существенно дополняет представления об отношениях между паразитом и хозяином. Впервые исследованы заключительные стадии углеводного обмена у цестод Triaenopho-rus nodulosus и Eubothrium rugosum, что позволило выявить адаптивные изменения значений рН в окружении червей.

Теоретическая и практическая значимость. Работа выполнена в рамках плановых тем лаборатории экологической паразитологии ИБВВ РАН и грантов РФФИ (96-04-49080; 00-04-48289; 03-04-48271).

Результаты исследований существенно дополняют и расширяют представления об отношениях между хозяином и паразитом на примере рыб и низших цестод; способствуют систематизации сведений по пищевым адаптациям цестод, а также доказывают важную роль симбионтной микрофлоры в питании не только хозяина, но и паразита.

Сведения, приведенные в работе, могут быть использованы в вузах при чтении лекций в курсах паразитологии, экологии и физиологии пищеварения рыб.

Систематизированные представления по симбионтной микрофлоре кишечника рыб могут найти применение при разработке кормов и использовании про-биотиков в прудовых хозяйствах.

Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на следующих научных мероприятиях: VI Всероссийский симпозиум по популяцион-ной биологии паразитов (Борок, 1996); «Экологический мониторинг паразитов» (С-Петербург, 1997); «Роль российской гельминтологической школы в развитии паразитологии» (Москва, 1997); «Взаимоотношения паразита и хозяина» (Москва, 1998); 50th Anniversary of Foundation and 18th Congress of Polish Parasitological Society Wiadomosci parazytologiczne, (Варшава, 1998); Совещание, посвященное 90-летию со дня рождения академика Б.Е. Быховского (С-Петербург, 1998); «История развития и современные проблемы гельминтологии в России» (Москва, 1999); «Механизмы функционирования висцеральных систем» (С-Петербург, 2001; 2003; 2005); «Паразитологические исследования в Сибири и на Дальнем Востоке» (Новосибирск, 2002; 2005); «Биологические ресурсы Белого моря и внутренних водоемов Европейского Севера» (Сыктывкар, 2003; Вологда, 2005); «Паразиты рыб: современные аспекты изучения» (Борок, 2003); «Трофические связи в водных сообществах и экосистемах» (Борок, 2003); «Основные достижения и перспективы развития паразитологии» (Москва, 2004); Сибирская зоологическая конференция (Новосибирск, 2004); «Современные проблемы физиологии и биохимии водных организмов» (Петрозаводск, 2004); XIII международное совещание по эволюционной физиологии (С-Петербург, 2006).

Публикации. Материалы диссертации отражены более чем в 50 работах, в том числе в 32 статьях, опубликованных в рецензируемых журналах и сборниках.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 342 стр. машинописного текста, состоит из введения, 5 глав, заключения, выводов и списка цитируемой литературы, который включает 371 источник, из них 214 на английском языке. Работа проиллюстрирована 22 таблицами и 51 рисунком.

Пользуясь случаем, с теплом и признательностью вспоминаю своего учителя д.б.н., проф. Б.И. Купермана, открывшего для меня дорогу в паразитологию, а также выражаю глубокую благодарность д.б.н., проф. В.В. Кузьминой за постоянное внимание к работе и конструктивное обсуждение врзникавших проблем.

Содержание работы Глава 1. Материал и методы исследований

Объектами исследований служили массовые виды рыб, обитающие в Рыбинском водохранилище, и паразитирующие в их кишечнике и полости тела черви класса Сев1ос1а (табл. 1).

Таблица 1. Объекты исследования

Хозяин Паразит Место обитания паразита, стадия его развития

Щука Esox lucius L. Налим Lota lota (L.) Лещ Abramis brama (L.) Лещ Abramis-brama (L.) Triaenophorus nodulosus (Pallas, 1781) Eubothrium rugosum (Batch, 1786) Caryophyllaeus laticeps (Pallas, 1781) Ligula intestinalis (L.) кишечник, взрослые черви кишечник, взрослые черви кишечник, взрослые черви полость тела, плероцеркоид

Для изучения микрофлоры, ассоциированной с пищеварительно-транспортными поверхностями рыб и цестод, использовали фрагменты кишечника рыб и целых червей.

Общую протеолитическую активность (ОПА) (общая активность трипсина, КФ 3.4.21.4, химотрипсина, КФ 3.4.21.1 и дипептидаз, КФ 3.4.13.1-3.4.13.11) определяли методом Ансона (Anson, 1938). Общую амилолитическую активность (ОАА) (суммарная активность а-амилазы, КФ 3.2.1.1, глюкоамилазы, КФ 3.2.1.3 и ферментов группы мальтаз, КФ 3.2.1.20), а также активность сахаразы, КФ 3.2.1.48 - модифицированным методом Нельсона (Исследование..., 1969). Активность а-амилазы, КФ 3.2.1.1 - модифицированным методом Смита и Роя (Исследование..., 1969). Содержание молочной кислоты определяли по Баркер и Саммерсону (Barker, Summerson, 1941) в некоторой модификации (Hollanders, 1968). При исследовании активности ферментов и выделения молочной кислоты

оптическую плотность измеряли на спектрофотометре СФ-46 при соответствующей длине волны.

Для исследования микрофлоры, с различной степенью прочности связанной со слизистой кишечника рыб и тегументом паразитирующих в них цестод, нами модифицирован метод последовательной десорбции ферментов с отрезков кишки (Кузьмина, 1976). Смывы с отрезков кишечников и целых червей получали, последовательно перенося образцы в колбы со стерильным раствором Рингера для холоднокровных животных. Первую фракцию Д1 получали после 30-секундного встряхивания, остальные Д2-Д7 - через каждые последующие 15 минут. Для микробиологических исследований использовали нечетные фракции. Из них, в зависимости от поставленной задачи, производили посевы (по 0.1 мл) на различные твердые и жидкие питательные среды. Бактерии из фракции Д1 не связаны с поверхностями хозяина и гельминта и, скорее, принадлежат микрофлоре полости кишечника рыб. Прочность ассоциации бактерий с пище-варительно-транспортной поверхностью увеличивается в ряду Д1-Д7. Химус при этом не исследуется. Применение метода последовательной десорбции для изучения микрофлоры имеет ряд преимуществ, поскольку позволяет до некоторой степени отделить микрофлору кишечного содержимого от микрофлоры, связанной с пищеварительно-транспортными поверхностями, а также получить примерную картину распределения микроорганизмов по отношению к поверхности, с которой они ассоциированы. В случае L. intestinalis исследовали фракции Д1, Д2иДЗ.

В полученных фракциях классическими методами определяли общее количество бактерий и их биомассу (Романенко, Кузнецов, 1974). Определение общей численности и биомассы смытых бактерий, а также подсчет колоний на твердых средах выполнены совместно с в.н.с. лаборатории экспериментальной экологии к.б.н. H.A. Лаптевой.

Для обнаружения групп бактерий, обладающих протеолитической активностью, производили посевы в чашки Петри на рыбопептонный, молочный и казеиновый агар. Для выявления групп бактерий, обладающих амилолитической активностью, аналогичные посевы производили на среду Имшенецкого (Родина, 1965).

Из полученных смывов для определения активности ферментов бактерий проводили посевы на жидкие питательные среды и культивировали их в течение 3 суток при температуре 25°С.

Для определения активности ферментов бактерий выращивали на следующих средах (состав сред приведен в расчете на 1 л раствора Рингера). Для оценки ОПА: 1) 10 г гидролизата казеина; 2) обезжиренное молоко, разведенное в 2 раза раствором Рингера; 3) 35 г рыбопептонного бульона (РПБ); 4) 3.5 г РПБ. Для оценки ОАА: 1) среда Имшенецкого; 2) 3.5 г РПБ и 10 г растворимого крахмала; 3) 10 г картофеля и 2 г растворимого крахмала. В некоторых опытах была использована среда из гомогената слизистой оболочки кишечника или гельминтов.

Оптическую плотность среды культивирования измеряли до посева бактерий (б|), затем через 3 суток после посева бактерий (е2). После этого к 1 мл среды культивирования добавляли 1 мл раствора субстрата (1%-ный раствор казеина, pH 8.0 или гемоглобина, pH 3.0 и 5.0, для определения ОПА; 1.8%-ный раствор растворимого крахмала для определения ОАА и 0.1%-ный раствор крахмала для определения активности а-амилазы) и инкубировали в течение 1 часа. В результате этого оптическая плотность среды инкубации изменялась (е3). По изменениям оптической плотности за время культивирования и время инкубации судили о процессах, происходящих в средах. Если (ег- е0 или (ез- е2) > 0 - измеряется активность ферментов, а если эти величины < 0, то происходит поглощение либо аминокислот, либо глюкозы из среды (в зависимости от состава используемой среды).

Каждая задача отработана на 5-18 рыбах одной размерно-возрастной группы. Черви из каждой рыбы составляли отдельную пробу. В случае Т. nodulosus и Е. rugosum в одну пробу входило 5-10 червей, в случае С. laticeps 15-30, L. intestinalis - 1 червь. Объем выборки определялся размерами червей. Опыты проведены в 3-5 биохимических повторностях. Результаты обработаны статистически с использованием программного пакета Excel.

Глава 2. Симбионтная микрофлора кишечника рыб (обзор литературы)

В главе представлены общие сведения, касающиеся микрофлоры кишечника позвоночных животных, а также информация о численности, составе и функциональном значении микрофлоры кишечника рыб. Приведены данные немногочисленных параллельных исследований кишечной микрофлоры и обитающих в кишечнике гельминтов. В настоящее время достаточно глубоко изучают сим-бионтную микрофлору кишечника у различных видов рыб. Развиваются как традиционные направления, связанные с определением количественного и качественного состава микрофлоры, так и исследования возможных функций микроорганизмов, населяющих кишечник рыб. Работы, посвященные параллельному изучению микрофлоры, связанной с пищеварительно-транспортными поверхностями хозяина и паразита, а также исследованию активности пищеварительных ферментов бактерий и их роли в процессах пищеварения у рыб и гельминтов в литературе отсутствуют.

Глава 3. Численность, биомасса и активность ферментов бактерий, ассоциированных с пищеварительно-транспортными поверхностями рыб и цестод, паразитирующих в их кишечнике и полости тела

Численность и биомасса бактерий

В результате проведенных исследований установлено существование сим-бионтной микрофлоры, с различной степенью прочности связанной с пищеварительно-транспортными поверхностями рыб и паразитирующих в них цестод. Данные по численности бактерий, полученные в наших экспериментах, сопоста-

вимы с данными о количестве бактерий в кишечнике рыб, известными из литературы. Общее количество бактерий, изолированных из кишечников 9 видов рыб, составило 105-108 кл./г (Шивокене, 1989; Cahill, 1990; Sugita et al., 1991, 1996; Баздеркина, 1992; Austin, 2002). В наших исследованиях количество бактерий колебалось в пределах 106-108 кл./г (табл. 2).

Таблица 2. Общая численность (над чертой, млн. кл./г) и биомасса (под чертой, мг/г) бактерий, смытых с пищеварительно-транспортных поверхностей кишечника рыб и тегумента цестод

Объект Фракция

исследования т ДЗ Д5 Д7

Щука 407.00±135.25 1.68±0.55 283.80±112.34 2.60±1.12 113.60±23.16 1.82±0.80 73.60±19.22 1,08±0.40

Т. nodulosus 1177.60±433.44 3.40±1.26 264.20±94.46 0.48±0.17 131.80±38.57 0.14±0.04 25.34±12.50 0.03±0.01

Налим 33.25±11.49 0.005±0.002 32.45±10.10 0.005±0.002 26.13±9.39 0.011±0.004 -

Е. rugosum 19.13±7.76 0.004±0.002 45.75±19.16 0.010±0.005 49.95±16.83 0.012±0.004 -

Лещ 28.97±9.48 14.64±2.60 60.88±20.93

0.016±0.005 0.002±0.001 0.019±0.008

С. ¡aticeps 118.94±39.68 0.008±0.004 44.56±18.05 0.004±0.002 13.85±1.41 0.010±0.005 -

Д1 ДО ДЗ

L. intestinalis 58.38±5.58 0.009±0.001 41.88±6.54 0.006±0.001 22.66±2.71 0.004±0 -

Примечание. Прочерк - отсутствие данных.

Обнаружена способность смытых бактерий к росту на твердых питательных средах. Как правило, количество колоний бактерий на твердых средах уменьшается по мере приближения к поверхности кишечника или червя. Как и при определении общей численности, наибольшее количество колоний на различных ага-ризованных средах отмечается для щуки и Т. nodulosus. Различия в количестве бактерий, смываемых с исследованных пищеварительно-транспортных поверхностей, могут быть связаны с особенностями питания рыб. Например, щука-типичный хищник, питающийся с перерывами на протяжении всего года; налим - хищник - факультативный бентофаг, наиболее интенсивно питающийся зимой; лещ - бентофаг с летним максимумом пищевой активности (Поддубный, 1971; Кузьмина, 1986). Небольшое количество колоний бактерий на твердых питательных средах, по сравнению с общей численностью смываемых бактерий, вероятно, связано с тем, что с исследованных поверхностей удаляются не только живые клетки бактерий, но и некоторое количество мертвых клеток, а также бактерии, не обладающие исследуемой ферментативной активностью или не способные расти на предложенных средах.

Если наличие бактерий, связанных с поверхностью кишечника и кишечными паразитами, вполне закономерно, то исследование бактерий, ассоциированных с поверхностью плероцеркоида L. intestinalis, обитающего в полости тела, леща, требует объяснений. Плероцеркоиды L. intestinalis - доминантная фаза в жизненном цикле этого червя как по продолжительности, так и по глубине воздействия на хозяина. Черви локализуются в полости тела рыб, где располагаются между внутренними органами (Дубинина, 1966). Известно, что индигенные бактерии, населяющие желудочно-кишечный тракт позвоночных, посредством процесса транслокации в небольшом количестве непрерывно проникают через му-козный барьер в брыжеечные лимфатические узлы и некоторые другие места локализации (Berg, 1996). Основные механизмы, вызывающие транслокацию, -чрезмерный рост численности кишечных бактерий, ослабление иммунитета хозяина, а также увеличение проницаемости или повреждения кишечного мукоз-ного барьера (Berg, 1995). Процеркоиды L. intestinalis, попадая в кишечник рыб вместе с веслоногими рачками (Copepoda), освобождаются от первого промежуточного хозяина и через стенки передней части кишечника проникают в полость тела второго промежуточного хозяина - рыбы (Дубинина, 1966). Таким образом, в полость тела леща бактерии могут попадать посредством транслокации. Возможно также, что паразит, проникающий из кишечника в полость тела, заносит туда кишечную микрофлору, ассоциированную с его поверхностью. Заражение леща L. intestinalis связано с нарушением иммунных функций хозяина (Sweeting, 1977; Williams, Hoole, 1990; Arme, 1997), что, по-видимому, способствует транслокации бактерий из кишечника в полость тела.

Активность ферментов микрофлоры, ассоциированной с пищеварительно-

транспортными поверхностями рыб и цестод

Важный аспект изучения кишечной микрофлоры - оценка ее роли в питании макроорганизма, связанной с выделением внеклеточных ферментов, способных

участвовать в гидролизе биополимеров, в частности белков и углеводов. Для выращивания бактерий, смытых с пищеварительно-транспортных поверхностей, использовали стандартные жидкие среды, состав которых изменялся в процессе стерилизации. Если до посева бактерий в среде содержится достаточное количество мономеров (аминокислот или глюкозы), то бактерии могут сначала поглощать эти вещества, а уже потом начинают синтезировать ферменты для гидролиза полимеров. При исследовании способности бактерий продуцировать протео-литические ферменты установлено, что за время культивирования на средах, бедных аминокислотами, содержание последних повышается, что свидетельствует о расщеплении белков среды ферментами, продуцируемыми бактериями. В средах, богатых легкодоступными мономерами, в процессе культивирования отмечается поглощение аминокислот из среды (рис. 1). В среде культивирования максимальные значения ОПА отмечены для пары щука - Т. пос!и1озш, а для пары лещ - С. ¡аИсерв зафиксировано поглощение аминокислот из среды. В первую очередь такие различия связаны с составом использованных в этих экспериментах сред. Известно, что, варьируя состав питательной среды, можно добиться изменения количественного соотношения отдельных гидролитических ферментов в общем литическом комплексе, синтезируемом культурой микроорганизмов (Олескин, 1993).

Исследована общая амилолитическая активность (ОАА) ферментов бактерий, а также активность а-амилазы и сахаразы. Переваривание углеводов начинается под действием а-амилазы, гидролизующей ,4-глюкозидные связи в молекулах крахмала и гликогена. Олигосахариды подвергаются дальнейшему расщеплению с помощью дисахаридаз - мальтазы, изомальтазы, сахаразы, лак-тазы, трегалазы - до мономеров, которые могут всасываться (Диксон, Уэбб, 1982). При исследовании ОАА ферментов бактерий установлены те же закономерности, что и для бактерий, способных продуцировать протеолитические ферменты. А именно, при выращивании бактерий на средах с высоким содержанием глюкозы, микроорганизмы поглощают ее из среды культивирования, а при низком содержании глюкозы в среде - выделяют амилолитические ферменты (рис. 2).

Использование для культивирования бактерий сред различного состава позволило выявить неоднородность микрофлоры, ассоциированной с поверхностью кишечника и тегументом цестод, и установить, что на богатых аминокислотами и глюкозой питательных средах бактерии поглощают эти мономеры, а на обедненных средах вырабатывают ферменты для гидролиза высокомолекулярных субстратов.

На рисунках 1-6 представлены наиболее типичные данные по активности ферментов микрофлоры, ассоциированной с исследованными пищеварительно-транспортными поверхностями. Уровни активности ферментов и поглощения мономеров колеблются в зависимости от состава среды культивирования, объекта исследования и фракции, в которую смыты бактерии. Получение воспроизводимых данных затруднено из-за обилия и разнообразия бактериальной флоры,

мкмоль/ г час. 1

0,8 0,6 0,4 0,2 0

-ОД -0,4

|Ь

В пептон И казеин □ молоко

1Й

-Щ*

У1 Ы"

Д1 дз

налим

Д5 Д1 ДЗ Д5 Е. ^ояит

Рис. 1. ОПА (положительные значения) и поглощение аминокислот (отрицательные значения) бактериями, смытыми с пищеварительно-транспортных поверхностей кишечника налима и Е. /*М£сюа/и, после 3 суток культивирования на средах, содержащих пептон, казеин и молоко.

мкмоль/г ч 30 20

10 О -10 -20 -30 -40 -50

Д1

щука

дз

Т. пос!и1о$и$

лг

Д5

И 1А а 2А И ЗА

Д7 Д1 ДЗ Д5 Д7

Рис. 2. ОАА (положительные значения) и поглощение глюкозы (отрицательные значения) в среде после 3 суток культивирования бактерий, смытых с пищеварительно-транспортных поверхностей кишечника щуки и Т. пойиШю. 1А, 2А, ЗА - питательные среды с различным содержанием углеводов.

обусловленных богатым пищевыми ресурсами местообитанием (кишечник) во время проведения исследований (в период наиболее интенсивного питания рыб).

Подобные трудности при исследовании бактерий, обитающих в кишечниках разных особей одного и того же вида рыб, отмечают и другие авторы (Эраг^аагс! е1 а1., 2000). В первую очередь это определяется тем, что исследованные сообщества бактерий разнообразны по видовому составу и поэтому размножаются не синхронно. Даже из одной пробы при посеве на различные среды попадает разное количество активных и неактивных клеток бактерий. Различия в структурной организации пищеварительно-транспортных поверхностей рыб и цестод способствуют колонизации этих поверхностей как одинаковыми, так и разными микроорганизмами.

Следующий шаг в исследовании роли симбионтных бактерий в пищеварительных процессах у паразита и хозяина - определение активности ферментов, проявляемой симбионтной микрофлорой при часовой инкубации аликвоты фер-ментативно-активного препарата (культуральной жидкости) и субстрата (казеина или гемоглобина для исследования ОПА и крахмала для исследования ОАА). Активность протеаз бактерий за 1 ч инкубации представлена на примере щуки и Т. поёШояш на рис. 3, а амилолитических ферментов - на примере леща и С. \aticeps на рис. 4.

Следует отметить, что активность ферментов бактерий после часовой инкубации на 2-3 порядка превышает активность этих же ферментов после трех суток культивирования. Это объясняется тем, что за длительный период в культуральной среде происходит постепенная убыль пищевых субстратов за счет ферментативной деятельности бактерий, причем с уменьшением количества субстрата активность фермента падает. По истечении срока культивирования вычислена активность ферментов за этот период (от высокой начальной до более низкой конечной).

Переваривание универсальных пищевых полисахаридов у различных животных начинается под действием о-амилазы. В то время как ОАА определяют по приросту конечных продуктов реакции (глюкозы), активность а-амилазы обычно оценивают по убыли субстрата (крахмала) в результате его ферментативного гидролиза. При исследовании активности а-амилазы бактерий, смытых с различных пищеварительно-транспортных поверхностей, обнаружена ее активность как в среде культивирования, так и в среде инкубации для всех исследованных пар хозяин-паразит (рис. 5). Активность фермента проявляется в широком диапазоне значений рН среды. Уровень активности зависит от объекта, с которого бактерии смыты, и состава среды культивирования. В ряде случаев активность с*-амилазы бактерий, смытых с тегумента цестод, достоверно выше (Р<0.05), чем аналогичная активность бактерий, полученных со слизистой кишечника хозяина. Это может быть обусловлено присутствием специфической микрофлоры, избирательно связанной с той или иной поверхностью, а также адсорбционными свойствами исследованных поверхностей, способных удерживать различное количество микроорганизмов и влиять на вклад населяющих кишечник й тегумент бактерий в пищеварительные процессы макроорганизмов.

мкмоль/г час 200

160

120

рН 8

щука рН 5

I Ё

И 1П

Й2П

рНЗ

Д1 ДЗ Д5 Д7 Д1 ДЗ Д5 Д7 Д1 ДЗ Д5 Д7

мкмоль/г час 500

400

300 200 100 О

рН 8

Т. nodulosus рН5

рНЗ

Ш Ш

Д1 ДЗ Д5 Д7 Д1 ДЗ Д5 Д7 Д1 ДЗ Д5 Д7

Рис. 3. ОПА ферментов бактерий, смытых с пищеварительно-транспортных поверхностей кишечника щуки и Т. nodulosus, за 1 ч инкубации при различных значениях рН среды. 1П и 2П - среды с различным содержанием белка.

Заключительные этапы гидролиза углеводов осуществляются с помощью дисахараз. Активность сахаразы - типичного фермента щеточной каймы - на 97-100% связана со слизистой кишечника рыб (Кузьмина, 1986). Поэтому представляется важным исследование способности бактерий, ассоциированных с

пищеварительно-транспортными поверхностями кишечника рыб и тегументом цестод, продуцировать сахаразу, что может увеличить концентрацию глюкозы в непосредственной близости от этих поверхностей. На рисунке 6 представлена активность сахаразы, продуцируемой бактериями, смытыми со слизистой кишечника леща и тегумента С. ¡аИсеря.

Рис. 4. ОАА ферментов бактерий, смытых с пищеварительно-транспортных поверхностей кишечника леща (1) и С. ¡аИсеря (2), за 1 ч инкубации.

В результате проведенных исследований установлено, что с пищеварительно-транспортными поверхностями кишечника рыб и тегументом цестод ассоциированы бактерии, способные выделять ферменты, гидролизующие основные пищевые субстраты - белки и углеводы. Микроорганизмы вносят существенный вклад в деградацию белков и углеводов ферментами кишечника. При этом высвобождаются мономеры, которые как хозяин, так и паразит могут транспортировать во внутреннюю среду организма. Нормальная микрофлора определяет течение и исход взаимодействия паразита с хозяином. Этот процесс имеет не одностороннюю направленность: по некоторым клиническим наблюдениям, присутствие гельминтов у высших позвоночных животных и человека меняет состав нормальной микрофлоры кишечника (Чахава и др., 1982).

Существование микрофлоры, ассоциированной с пищеварительно-транспортными поверхностями хозяина и паразита и способной гидролизовать белки и углеводы, дает основание предполагать возможность использования паразитом бактериальных гидролаз, позволяющих ему успешно конкурировать с хозяином за источники питания. Об этом же свидетельствует присутствие ферментов бактерий не только в легко, но и в трудно десорбируемых фракциях, где роль ферментов, принимающих участие в мембранном пищеварении, снижается,

а также одинаковая или даже более высокая ферментативная активность микрофлоры, ассоциированной с тегументом.

Д1 да Д1 Д2 Д1 Д2 Д1 Д2

щука Т поЛЛти щука Т. поШ)Ш

Рис. 5. Активность ск-амилазы бактерий, смытых с пшцеварительно-транспортных поверхностей кишечника щуки и Т. пойЫозиь, за время культивирования (а) и после часовой инкубации (б). 1,2, 3 - среды с различным

содержанием крахмала.

Рис. 6. Активность сахаразы бактерий, смытых с пищеварительно-транспортных поверхностей кишечника леща (1) и С. \aticeps (2).

Для оценки соотношения активности амилолитических и протеолитических ферментов в кишечнике рыб используют коэффициент К/П (отношение активности карбогидраз к активности протеаз). Коэффициент К/П отражает тип питания рыб: у хищников он меньше единицы, а у планкто- и бентофагов, как правило, больше единицы (Кузьмина, 1992). Нами предпринята попытка рассчитать аналогичный коэффициент для ферментов бактерий, смытых с исследованных поверхностей. Это соотношение вычислено для среды с рыбопептонным бульоном без крахмала (при определении ОПА) и с крахмалом (при определении ОАА) (табл. 3).

Таблица 3. Коэффициент К/П для ферментов бактерий, смытых с различных пищеварительно-транспортных поверхностей

Объект исследования Фракции

Д1 ДЗ Д5

Щука 0.43 0.31 0.60

Т. nodulosus 0.90 0.49 0.11

Налим 0.37 6.52 —

Е. rugosum 1.39 25.16 • 4.95

Лещ 1.66 1.43 1.56

С. laticeps 1.81 1.72 2.92

Для ферментов бактерий, смытых с пищеварительно-транспортных поверхностей, в парах щука - Т. nodulosus и лещ - С. laticeps получены классические соотношения: меньше единицы для хищника (щуки) и его паразита и больше единицы для бентофага (леща) и его паразита. В случае налима и К rugosum соотношение К/П интерпретировать труднее. Возможно, это связано со смешанным типом питания налима (хищник - факультативный бентофаг), временем проведения исследования (зима) и с отделом кишечника, взятым для анализа. У налима брали отдел кишечника, расположенный сразу за пилорическими придатками, а у щуки и леща - средний отдел кишечника. Выбор отдела кишечника связан с локализацией паразитов. Установленные соотношения К/П могут служить косвенным доказательством автохтонности исследованной микрофлоры, адаптированной к типу питания хозяина. Присутствие бактерий, выделяющих как амилолитические, так и протеолитические ферменты, снижает энергетические затраты макроорганизмов на синтез собственных ферментов и повышает доступность тех компонентов пищи, которые не составляют основу питания рыб. Вклад ферментов бактерий в процессы пищеварения может изменяться под влиянием различных компонентов пищи. Существуют адаптации ферментных систем микрофлоры пищеварительного тракта к биохимическому составу пищи рыб (Лубянскене и др., 1989; Шивокене, 1989).

Для оценки и сравнения ферментативной активности бактерий, ассоциированных с различными пищеварительно-транспортными поверхностями, суммировали их активность из фракций Д1, ДЗ и Д5 (для L. intestinalis - Д1, Д2 и ДЗ)

со сред РПБ/10 (для ОПА) и РПБ/10 с крахмалом (для ОАА), проявляемую в среде инкубации (табл. 4).

Данные таблицы 4 также свидетельствуют о том, что в паре щука-Т. nodulosus отношение К/П меньше 1, а для остальных исследованных объектов - больше 1. Наиболее высокая суммарная активность карбогидраз и протеаз бактерий отмечена в паре лещ - С. laticeps, а самая низкая у L. intestinalis.

Значительное видовое разнообразие в сообществе бактерий ограничивает возможность оценки специфического вклада каждого вида в симбионтное взаимодействие. Микроорганизмы либо конкурируют с паразитом и хозяином за пищевые субстраты, либо выступают как поставщики гидролитических ферментов, которые могут быть использованы в процессах пищеварения макроорганизмами. Оба рассматриваемых процесса протекают в широком диапазоне значений pH, что свидетельствует о значительном адаптационном потенциале микроорганизмов. На основании полученных данных о функционировании бактерий, с различной степенью прочности связанных с исследуемыми пищеварительно-транспортными поверхностями, можно предположить, что больший вклад в процессы пищеварения как паразита, так и хозяина, вносят микроорганизмы, более тесно связанные с изученными поверхностями, поскольку бактерии, присутствующие в содержимом кишечника, быстрее удаляются с помощью перистальтики из пищеварительного тракта.

Таблица 4. »Суммарная активность ферментов бактерий, смытых со слизистой кишечников рыб и тегумента цестод

Объект ис- Ферментативная активность (ОАА над чертой, ОПА под чертой),

следования мкмоль/г час

рНЗ рН5 рН8

Щука - - 35.69±7.37*

112.75±15.04 106.22±12.34 166.72± 17.05

Т. nodulosus - — 166.09±50.47*

264.70±58.82 177.30±35.56 286.48±34.07

Налим 14.90±12.68 42.90±17.65 16.80±9.82

3.78±1.98 5.28±2.66 11.59±5.04

Е. rugosum 30.20±7.30 23.5СШШ 32.60±8.02

2.83±0.78 4.29±1.0б 8.95±2.29

Лещ - - 343.91±68.81*

- - 265.51±58.75*

С. laticeps - - 513.60±122.61*

— — 456.93±79.17*

L. intestinalis - - 8.1Ш.99*

0.29±0.04 0.41±0.06 0.26±0.05

Примечание. * pH среды инкубации 7.4

Установлено, что ферменты бактерий способны гидролизовать углеводы различной сложности - от полисахарида крахмала до дисахарида сахарозы. Активность исследованных гидролаз варьирует в зависимости от условий эксперимента: состава среды; прочности ассоциации бактерий с пшцеварительно-транспортными поверхностями; объекта, с которого бактерии были смыты. Для всех бактерий, смытых с различных поверхностей, также установлено, что на богатых доступными мономерами средах микроорганизмы поглощают аминокислоты или глюкозу, а на более бедных- продуцируют протеолитические и амилолитические ферменты. Эти факты, а также определение ферментативной активности бактерий после 3 суток культивирования и после часовой инкубации дает основание предполагать изменение роли населяющих пищеварительно-транспортные поверхности микроорганизмов в питании макроорганизмов в зависимости от состава пищи и поступления питательных веществ в кишечник. Время пребывания пищи в кишечнике определяется такими факторами, как температура, частота питания, размер пищевых объектов, биохимический состав пищи, метод кормления, а также длина и вес рыбы (Fange, Grove, 1979; Сорва-чев, 1982; Clements, 1997). Принимая во внимание эти сведения, можно допустить, что значения ферментативной активности после часовой инкубации соответствуют периоду поступления пищи в кишечник и интенсивному питанию, а значения этой активности после трех суток культивирования соответствуют периоду снижения интенсивности питания.

Данные о сходной ферментативной активности, проявляемой бактериями, смытыми с разных поверхностей, позволяют предположить, что кишечник рыбы и тегумент ее паразита заселены одинаковыми группами бактерий. Это предположение подтверждается также сведениями о формировании первичной микрофлоры в кишечнике рыб. Формирование ее осуществляется после первого питания в несколько стадий, в результате чего через неделю-месяц устанавливается «взрослая» микрофлора (Hansen, Olafsen, 1999). До начала внешнего питания состав и численность кишечных бактерий зависят от микрофлоры окружающей воды, в то время как с началом поглощения пищи главную роль играет питание (Syvokiene et al., 2003). Цестоды - паразиты рыб, имеющие сложный цикл развития со сменой промежуточных хозяев. Так, циклы развития Т. nodulosus и Е. rugosum протекают со сменой двух промежуточных хозяев (Куперман, 1973, 1988), цикл развития С. laticeps- с одним промежуточным хозяином (Протасова и др., 1990). Паразит появляется в кишечнике, когда тот уже населен симбионт-ной микрофлорой, с которой он и вступает во взаимодействие. Возможно также, что с некоторым количеством бактерий паразит ассоциируется «на пути» к окончательному хозяину.

Бактерии, ассоциированные с поверхностью плероцеркоида L. intestinalis, так же как и бактерии, колонизирующие поверхность паразитов кишечника, выделяют ферменты, гидролизующие белки и углеводы. Продолжительность жизни плероцеркоидов L. intestinalis в организме промежуточного хозяина гораздо дольше, чем у многих паразитов, обитающих в кишечнике. Кроме того, их влияние на хозяина намного сильнее по сравнению с паразитами кишечника, по-

скольку, находясь в полости тела, плероцеркоиды оказывают значительное механическое воздействие на хозяина, сильно сдавливая внутренние органы и нарушая их нормальное функционирование (Дубинина, 1966). Присутствие на поверхности плероцеркоидов даже небольшого количества бактерий, способных выделять ферменты, гидролизующие белки и углеводы, по всей видимости, благоприятно для паразита, так как образующиеся при гидролизе мономеры могут использоваться паразитом для собственных нужд.

Уровни активности гидролаз бактерий, ассоциированных с пищеварительно-транспортными поверхностями кишечников рыб и цестод, сопоставимы с уровнями активности тех же ферментов, адсорбированных из полости кишечника и с различной степенью прочности связанных с исследованными поверхностями. Это свидетельствует о значительном вкладе ферментов симбионтной микрофлоры в процессы пищеварения хозяина и паразита. Расчет активности ферментов бактерий, ассоциированных с пищеварительно-транспортными поверхностями, проводили на 1 г влажной навески ткани. «Активная» в плане пищеварения составляющая у рыб (эпителий слизистой оболочки) по массе относится к «неактивной» (мышечно-серозной оболочке) примерно как 1:4, в то время как у цестод размеры этих составляющих (длина микротрихий и толщина червя) соотносятся приблизительно как 1:103. Поэтому, если рассчитывать активность ферментов бактерий на навеску «активной» ткани, вклад ферментов симбионтной микрофлоры в пищеварительные процессы у цестод представляется значительно большим, чем у рыб.

Сравнение уровней активности, с одной стороны, адсорбированных и собственных, связанных с мембраной ферментов, а с другой стороны - ферментов микрофлоры, представляет определенные трудности. Это объясняется тем, что характеристики кишечных ферментов определяют сразу пЬсле вскрытия кишечников, а активность бактериальных ферментов - после их культивирования на питательных средах в течение 3 суток. Иначе говоря, условия регистрации ферментативной активности бактерий в большей степени удалены от реальных условий их функционирования в живом организме, чем при оценке активности адсорбированных и собственно кишечных ферментов. Тем не менее, можно предположить, что активность бактериальных ферментов вносит в процессы переваривания тем больший вклад, чем теснее бактерии связаны с пищеварительно-транспортными поверхностями. В первую очередь это относится к тегу-менту цестод, поскольку по мере увеличения времени десорбции резко снижается активность ферментов в последних фракциях. Следует отметить, что активность десорбируемых ферментов в полученных фракциях убывает по мере приближения к пищеварительно-транспортным поверхностям, в то время как активность ферментов бактерий сохраняется на одном и том же уровне. Опираясь на полученные значения ферментативной активности бактерий в различных условиях, которые сопоставимы с аналогичными характеристиками ферментов макроорганизмов, а в ряде случаев превосходят их, можно предполагать существенный вклад ферментов микрофлоры в пищеварительные процессы трофических партнеров.

В системе «хозяин - паразит - симбионтная микрофлора» устанавливается динамическое равновесие сложных, разнонаправленных процессов: на уровне хозяина - переваривание пищевых субстратов с помощью полостного, мембранного, внутриклеточного пищеварения и индуцированного аутолиза и их всасывание; на уровне паразита - мембранное пищеварение и транспорт; на уровне симбионтной микрофлоры - поглощение доступных мономеров или выделение гидролитических ферментов (различных амилаз и протеаз), что по отношению к макроорганизму может рассматриваться как симбионтное пищеварение. Необходимо также учитывать взаимное влияние всех этих процессов и их зависимость от состава поступающей пищи, изменяющего потоки метаболитов в сложившемся симбиоценозе.

Глава 4. Локализация процессов симбионтного пищеварения на пище-варительно-транспортных структурах рыб и цестод

Существуют классические схемы пищеварения с описанием структур и локализации различных звеньев этого процесса у позвоночных животных, и в частности рыб (Уголев, Кузьмина, 1993; Кузьмина, 1996). В тоже время симбионтное пищеварение и ферменты бактерий в этих схемах либо не представлены, либо авторы ограничиваются предположениями об их локализации (Кузьмина, 1995). Аналогичные схемы для цестод в литературе отсутствуют. В связи с этим представляется целесообразным попытаться определить локализацию симби-онтных бактерий (и соответственно, симбионтного пищеварения) на пищевари-тельно-транспортных поверхностях кишечника рыб и паразитирующих в них цестод и составить схему этих процессов.

Структурная организация энтероцитов рыб и тегумента цестод

Раздел посвящен описанию структурной организации энтероцитов рыб и тегумента цестод на основе большого количества работ, как частного, так и обобщающего характера (Threadgold, 1967; Smyth, 1969; Morris, 1971; Hockley, 1972; Kapoor et al., 1975; Lumsden, 1975; Huebner, Chee, 1978; Fange, Grove, 1979; Ky-перман, 1980; Thompson et al., 1980; Ezeasor, Stokoe, 1981; Веригина, Жолдасова, 1982; Куперман, Кузьмина, 1984; Threadgold, Robinson, 1984; Куперман и др., 1985; Гальперин, Лазарев, 1986; Куперман, 1988; Уголев, Кузьмина, 1993; Ки-perman, Kuz'mina, 1994; Кузьмина, 1995; Haiton, 1997; Кузьмина, 2005).

Процессы симбионтного пищеварения у рыб и цестод

Микрофлора - не только неотъемлемый, но и жизненно необходимый компонент пищеварительного тракта различных животных, в том числе рыб (Cahill, 1990; Кузьмина, 1996,2005; Clements, 1997; Кузьмина, Скворцова, 2002).

Однако лишь в некоторых работах по изучению кишечной микрофлоры рыб исследованы функции бактерий в кишечнике (Sugita et al., 1997 a, b; Кузьмина, Скворцова, 2002). Более полная картина представлена в работах, посвященных бактериям, колонизирующим слизистую различных отделов кишечника. Для

рыб, как и других позвоночных, подчеркивается важность и необходимость изучения автохтонной микрофлоры, колонизирующей пищеварительно-транспортную поверхность и ингибирующей действие патогенных бактерий (Ring0 et al., 1995).

Микроорганизмы преодолевают воздействие потока химуса за счет прочного прикрепления к эпителиальным клеткам. Ассоциированные с мукозой бактерии обнаружены на поверхности кишечника у многих видов животных (Lee, 1980). Существует два основных способа ассоциации микроорганизмов с поверхностью кишечника - плотное прикрепление к поверхности и обитание в поверхностном окружении, обычно в слизистой. Во взаимодействии между бактериями и клетками кишечного эпителия участвуют • различные физико-химические силы, позволяющие микроорганизмам удерживаться на стенках тонкого кишечника при прохождении пищи (Beveridge, 1980). Прочное прикрепление к поверхности обеспечивается за счет выработки бактериями полимерных мостиков или плотного полисахаридного слоя. Некоторые микроорганизмы колонизируют кишечное пространство без прикрепления к клеткам эпителия и способны выживать в слое слизи (Lee, 1980; Savage, 1980).

Считается, что рыбы обладают специфической кишечной микрофлорой, состоящей из аэробов, факультативных и облигатных анаэробов. Состав бактерий изменяется с возрастом, а также в зависимости от спектра питания рыб и условий окружающей среды (Шивокене, 1989; Hansen, Olafsen, 1999; Ringo et al., 2003). На колонизацию микробиотой пищеварительного тракта влияют кислотность, желчные кислоты, перистальтика, пищеварительные ферменты, иммунный ответ хозяина, присутствие индигенных бактерий и продуцируемые ими антибактериальные компоненты. Однако взаимоотношения хозяин-микрофлора построены не только на конкуренции за субстраты, но и на совместной продукции пищеварительных ферментов.

По нашим наблюдениям, при использовании метода десорбции ферментов для исследования микрофлоры, ассоциированной с пищеварительно-транспортными поверхностями, слой слизи смывается в основном во фракцию Д1, некоторое ее количество попадает во фракцию Д2, в последующие же фракции слизь фактически не попадает, т.е. смытые бактерии во фракциях ДЗ-Д7 ассоциированы непосредственно с микроворсинками кишечника и микровилля-ми тегумента. С использованием этого метода получены доказательства ассоциации бактерий с пищеварительно-транспортными поверхностями кишечника рыб и тегументом цестод, описанные в главе 3. Бактерии обнаруживаются во всех исследованных фракциях, вплоть до фракции Д7, полученной после 90-минутного встряхивания. Установлено, что эти бактерии выделяют в окружающую среду амилолитические и протеолитические ферменты.

Электронно-микроскопические исследования бактерий, ассоциированных с

пищеварительно-транспортными поверхностями рыб и цестод

Наличие симбионтной микрофлоры, с различной степенью прочности ассоциированной с пищеварительно-транспортными поверхностями, находит убеди-

тельное подтверждение в исследованиях с применением электронного микроскопа, как сканирующего, так и трансмиссионного (Williams et al., 1970; Austin, Al-Zahrani, 1988; Ring0 et al., 2001; Ring0 et al., 2003; Fidopiastis et al., 2006).

Установлено, что поверхность цестоды T. nodulosus и слизистая кишечника ее хозяина - щуки покрыты многочисленными и разнообразными бактериями (Корнева, 2004; Корнева, Плотников, в печати). У изученных организмов бактерии колонизируют преимущественно апикальные части специализированных поверхностных структур (микроворсинки кишечника и микротрихии тегумента цестоды), составляя «поверхностную» популяцию. Значительно меньше бактерий, составляющих «глубинную» популяцию, обнаружено в более глубоких слоях: между микротрихиями и микроворсинками, а также в их основании, на поверхности эпителия. Морфологические и ультраструктурные характеристики этих популяций микроорганизмов существенно различаются. Наряду с уже известными представителями кишечной микрофлоры у рыб выявлены наноформы (размеры которых колеблются от 200 до 500 нм) и представители спирохет. С покровами цестоды T. nodulosus и поверхностью кишечника ее хозяина щуки ассоциирована разнообразная симбионтная микрофлора: обнаружено 15 морфо-типов прокариотических клеток, из них - 8 на поверхности паразита и 7 - на поверхности слизистой кишечника. К особенностям изученных микроорганизмов относятся сходство бактерий в «поверхностных» слоях микрофлоры паразита и хозяина и специфичность «глубинных» слоев, по-видимому, представленных облигатными симбионтами соответствующих организмов (Корнева, Плотников, в печати). По всей видимости, «глубинная» популяция, обнаруженная при электронно-микроскопическом исследовании, может либо попадать в трудно десорбируемую фракцию (при использовании метода десорбции), либо вообще не смываться с пищеварительно-транспортных поверхностей. Бактерии из «поверхностной» популяции смываются легче и, по-видимому, входят в состав фракции ДЗ. Доказательства ассоциации микрофлоры с тегументом цестод получены также для Е. rugosum (Поддубная, 2005), С. latioeps (Poddubnaya, Iz-vekova, 2005), Khawia armeniaca из кишечника храмули (Poddubnaya, Izvekova, 2005) и нескольких видов рода Proteocephalidea, паразитирующих в различных видах рыб (Корнева, 2005). Не обнаружено структурных изменений ни в тегу-менте цестод, ни в микробиальных клетках. Отсутствие очевидных повреждений тегумента цестод клетками микроорганизмов, а также наличие специальных прикрепительных структур, позволяет предположить, что обнаруженные бактерии - скорее симбионты, чем случайные находки.

Структурные основы симбионтного пищеварения у рыб и цестод

Представленные сведения позволяют дополнить классические схемы пищеварения (Уголев, 1985; Гальперин, Лазарев, 1986) применительно к рыбам, а также перенести эти схемы на цестод, паразитирующих в кишечниках рыб, и попытаться найти в этих схемах место для симбионтных бактерий (рис. 7). Схемы построены совместно с Ж.В. Корневой. Бактерии способны прикрепляться к специализированным микроструктурам (микроворсинкам энтероцитов рыб и

микротрихиям на покровах паразитов) и располагаться между ними. В кишечнике рыб, у которых толщина гликокаликса незначительна (как, например, у щуки), бактерии колонизируют поверхность бокаловидных слизистых клеток и прикрепляются на границе энтероцитов, где микроворсинки располагаются несколько реже. Слой гликокаликса, толщина которого сравнима с длиной микроворсинок (как, например, у налима), по-видимому, может служить препятствием для колонизации щеточной каймы микроорганизмами (Уголев, 1985). Апикальные концы микроворсинок и микротрихий, наряду с многочисленными морфо-типами обычных бактерий, колонизированы наноформами бактерий, формирующих своеобразную биопленку на поверхности рассматриваемых пищевари-тельно-транспортных структур. В то же время надо иметь в виду, что качественный и количественный состав кишечной микрофлоры рыб изменяется под воздействием различных эндогенных (структура пищеварительного тракта, pH кишечного содержимого, анаэробные условия, ферменты кишечника, осмотическое давление, иммунный ответ хозяина) и экзогенных (окружающая среда и пищевые вещества) факторов. Стрессовые влияния, такие как низкое качество воды, изменения температуры, дефицит пищи, повреждения, инфекции или высокая плотность популяции рыб, могут нарушать баланс уже установившейся микрофлоры (äyvokienö et al., 2003). Все это делает участие ферментов симбион-той микрофлоры существенным, хотя и нестабильным, элементом в процессах пищеварения у рыб и паразитирующих в них цестод. Кроме того, численность популяции бактррий в кишечнике рыб значительно ниже, а состав микрофлоры менее разнообразен, чем у теплокровных животных, включая человека. Преобладающие группы бактерий, выделенные из желудочно-кишечного тракта теплокровных, относятся к облигатным анаэробам (Berg, 1996), в то время как у рыб пищеварительный тракт населен преимущественно аэробами и факультативными анаэробами (Cahill, 1990).

В схеме уровней энзиматического барьера пищеварительного тракта рыб, предложенной В.В. Кузьминой (1995), ферменты, продуцируемые микрофлорой, помещены в полость желудочно-кишечного тракта, в пристеночный слой слизи и (под вопросом) в слой гликокаликса. Полученные нами данные убедительно подтверждают эту точку зрения для рыб, указывая на возможность присутствия бактерий (в особенности, наноформ) и выделения ими ферментов, способных гидролизовать пищевые субстраты, в том числе и в непосредственной близости к энтероцитам, т.е. в гликокаликсе. Предложенная схема участия бактерий в жизнедеятельности цестод согласуется с представлениями о том, что в процессе эволюции паразит приспосабливает как организм хозяина, так и другие элементы симбиоценоза для своих жизненных нужд. В результате формируются комплементарные симбиотические, в том числе паразитоценотические, системы (Астафьев, Петров, 1992).

Рис. 7. Схема локализации симбионтных бактерий на структурах пищеваритель-но-траиспортной поверхности рыб (I) и цестод (II). Э - энтероцит, БК - бокаловидная клетка, МВ - микроворсинки, С - слизистые наложения, Б - бактерия, Т - наружная цитоплазма тегумента, М - микротркхии, НФ - наноформы.

Глава 5. Пищевые адаптации низших цестод - паразитов рыб

В основу главы положены критически рассмотренные собственные данные и сведения, известные из литературы.

Для установления тесных (специфичных) взаимоотношений при попадании в организм хозяина паразит должен метаболически, физиологически и биохимически адаптироваться к жизни в этих условиях (Сергеева, Беэр, 2000). Адаптации к паразитическому образу жизни включают разнообразные виды специализации, связанные с изменением формы тела, физиологии и поведения, однако основные адаптации связаны с потреблением пищевых ресурсов (Haiton, 1997).

Общие представления о питании цестод

Цестоды - высокоспециализированные организмы, в биологии и морфологии которых проявляются многие важные черты адаптации к паразитическому образу жизни. Как эндопаразиты, плоские черви обитают в среде, богатой легко доступными низкомолекулярными субстратами. В этой ситуации целесообразно использовать поверхность своего тела как пищеварительную систему, а не развивать внутренние пищеварительные механизмы или кишечник (Уголев, 1985; Куперман, 1988; Dalton ét al., 2004). Поскольку цестоды - кишечные паразиты, в первую очередь на их рост влияет состав пищи хозяина. Показано, что скорость роста цестод зависит от содержания углеводов в пище хозяина, но фактически не зависит от количества и качества белка (Smyth, 1969; Mead, Roberts, 1972; Roberts, 1983).

Отсутствие пищеварительной системы у цестод предопределяет полифункциональность их тегумента, который выполняет не только обычные функции покровных образований, но и обеспечивает питание организма. При этом наряду с редукцией ряда пищеварительных функций имеет место ¡чрезвычайное усиление сохранившихся (развитие мощного аппарата микротрихий, аналогичного щеточной кайме энтероцитов кишечника, и распределение его по всей поверхности тела) (Smyth, 1969; Куперман, 1988).

По мере развития представлений о питании цестод, стало ясным, что для этих животных характерны не только всасывание пищевых веществ (Pappas, Read, 1975) и пиноцитоз, но и мембранное пищеварение (Taylor, Thomas, 1968; Аркинд, Раева, 1971; Кузьмина, Куперман, 1983; Izvekova et al., 1997; Dalton et al., 2004). Кроме того, полученные к настоящему времени сведения дают основания предполагать и участие симбионтной микрофлоры, ассоциированной с поверхностью червей, в гидролизе пищевых субстратов.

Транспорт мономеров через тегумент цестод

Всасывание (транспорт) мономеров - важный и завершающий этап в усвоении нутриентов после их гидролитического расщепления. Механизмы всасывания питательных веществ у гельминтов сходны с аналогичными процессами, протекающими у различных животных, и рассматриваются в связи с общей проблемой проницаемости клеточных мембран. Характеристики транспортных про-

цессов анализируют с использованием классических уравнений Михаэлиса-Ментен (Pappas, Read, 1975). В настоящее время установлено, что цестоды обладают специфическими системами для опосредованного поглощения органических растворов из окружающей среды (Pappas, Read, 1975; Cyr et al., 1983; Gruner, Mettrick, 1984; Arme, 1988; Cornford, 1990; Uglem, Pappas, 1991).

При изучении транспорта углеводов у цестод основное внимание уделяется транспорту глюкозы как основного моносахарида, служащего источником энергии для цестод, и единственного моносахарида, используемого ими для синтеза гликогена (Pappas, Read, 1975; Ward, 1982; Сопрунов, 1984).

Показано, что транспортные процессы у низших цестод и их хозяев - рыб имеют много общих черт (Извекова, 1988, 1989; Кузьмина, Извекова, 1988; Iz-vekova et al., 1997). В то же время наблюдаются и видовые особенности, связанные с различной скоростью этих процессов у исследованных животных. Нами исследованы особенности транспорта глюкозы у цестод, обитающих в кишечнике рыб (T. nodulosus, Е. rugosum, С. laticeps). Установлен ряд общих закономерностей транспортных процессов у изученных цестод и их хозяев - рыб, а также особенности, обусловленные различной структурно-функциональной организацией этих животных. Тот факт, что глюкоза аккумулируется червями против концентрационного градиента, так же как кинетика насыщения этого процесса, указывает на существование активного компонента транспорта глюкозы у исследованных цестод. Системы транспорта у молодых червей имеют более высокое сродство к транспортируемому веществу, чем аналогичные системы взрослых гельминтов (Извекова, 1989), что показано и для высших цестод (Cyr et al., 1983; Barrett, 1987; Cornford, 1990; Pappas et al., 1999). Установлена зависимость транспорта глюкозы от присутствия ионов Na+. Интенсивность ингибирования транспорта варьирует в зависимости от условий опыта, включающих источник глюкозы (крахмал, мальтоза или свободная глюкоза) и температуру (Извекова, 1988, 1989). Наличие высокоэффективных транспортных систем с значительным Na+- чувствительным компонентом у цестод, по-видимому, можно рассматривать как специализацию, связанную с необходимостью конкурировать с хозяином за пищевые субстраты. У рыб отмечен невысокий На+-зависимый, активный компонент транспорта глюкозы (Рощина, 1981; Голованова, 1988).

Изученные цестоды и их хозяева - рыбы способны абсорбировать глюкозу, полученную при гидролизе мальтозы и крахмала, что указывает на сопряженный характер гидролиза и транспорта углеводов и сходство процессов пищеварения у паразитов и их хозяев. Скорость поглощения глюкозы у цестод выше, чем у рыб. В тканях цестод С. laticeps глюкоза аккумулируется значительно интенсивней, чем в слизистой кишечника леща, причем при низких концентрациях субстрата преимущества транспорта глюкозы у гельминтов выражены сильнее (Кузьмина, Извекова, 1988). Возможно, в этом проявляется адаптация к существованию в условиях недостаточного питания хозяина. У паразитов, также как у гомойотермных животных, преобладает механизм активного транспорта, а у рыб - механизмы простой и облегченной диффузии (Кузьмина и др., 1987; Кузьмина, Извекова, 1988).

Внутриклеточное пищеварение или пиноцитозу цестод

В некоторых случаях имеет место всасывание нативного белка через тегу-мент. Механизм его проникновения через тегумент цестод аналогичен пиноцитозу. Пиноцитированные белки активно усваиваются клеткой и обнаруживаются впоследствии в основных ее структурах (Шишова-Касаточкина, Леутская, 1979). Пиноцитоз обнаружен у плероцеркоидов L. intestinalis, а также у плероцеркои-дов и половозрелых Schistocephalus solidus (Treadgold, Hopkins, 1981). Возможности внутриклеточного пищеварения ограничены проницаемостью мембраны и сравнительно небольшой скоростью процесса пиноцитоза, который, по-видимому, не играет существенной роли в обеспечении пищевых потребностей организмов (Уголев, 1985).

Особенности мембранного пищеварения у цестод

Мембранное пищеварение играет важную роль в реализации промежуточных и заключительных этапов гидролиза нутриентов (Уголев, 1985; Уголев, Кузьмина, 1993).

В тегументе многих паразитических червей обнаружены различные ферменты, что указывает на высокую метаболическую активность поверхности гельминтов. Распределение различных гидролитических ферментов в тегументе цестод весьма сходно с таковым в кишечнике позвоночных, что дает основание предположить существенную роль этих ферментов в переваривании и абсорбции пищевых субстратов. Способность тегумента к абсорбции, так же как и роль некоторых ферментов в гидролизе пищевых субстратов на его поверхности, бесспорна (Roy, 1982; Dalton et al., 2004).

В настоящее время появились серьезные обзорные работы, в которых признается, что цестоды не только продуцируют собственные гидролазы, но также-захватывают и адсорбируют ферменты хозяина (Haiton, 1997; Dalton et al., 2004). Процессы мембранного пищеварения обнаружены и на тегументе цестод, обитающих в кишечнике рыб (Куровская, 1978,1991; Кузьмина, Куперман, 1983).

Нами исследована роль полостных и мембранно-связанных ферментов в мембранном гидролизе белков и углеводов у цестод (С. laticeps, Е. rugosum, Т. nodulosus) и их хозяев - рыб (лещ, налим и щука) (Извекова, 1990, 1991, 2001; Izvekova et al., 1997). Установлено, что скорость гидролиза большинства субстратов в кишечнике рыб заметно выше по сравнению с тегументом цестод. Это проявляется в большем количестве ферментативно-активных фракций, десорби-рованных с пищеварительно-транспортных поверхностей рыб, и более высокой активности этих фракций по сравнению с аналогичными фракциями, полученными с тегумента червей. В осуществлении мембранного пищеварения у цестод и в кишечнике их хозяев - рыб значительную роль играют полостные ферменты, слабо связанные с пищеварительно-транспортными поверхностями. Это справедливо как для гидролиза белков, так и углеводов. Изучение десорбционных характеристик гидролитических ферментов, функционирующих на пищеварительно-транспортных поверхностях рыб и паразитирующих в них цестод, позволило установить существенное влияние ферментов хозяина на характеристики

ферментных систем паразита, выражающееся в общих закономерностях динамики этого процесса у рыб и гельминтов. Результаты исследования дают основание заключить, что паразитические черви используют для осуществления процессов мембранного пищеварения адсорбированные из полости кишечника ферменты, что позволяет им успешно конкурировать с хозяином за продукты гидролиза.

Мембранное пищеварение на поверхности цестод, обитающих в кишечнике рыб, в основном осуществляется с использованием гидролитических ферментов хозяина, что можно рассматривать как важную адаптацию к условиям обитания. Хотя в кишечнике рыб пищеварительные процессы протекают более эффективно, использование ферментов хозяина достаточно выгодно для удовлетворения цестодами своих метаболических потребностей.

Важная особенность адаптации гельминтов к условиям существования -двойственное отношение к протеиназам хозяина. Кишечные паразиты активно воздействуют на иммунную систему хозяина и должны быть устойчивыми к действию пищеварительных ферментов. У гельминтов есть несколько механизмов защиты от протеиназ хозяина (секреция ингибиторов, муцина, протеиназо-устойчивая кутикула, структура белковых молекул покровных тканей, специфичность действия ферментов и др.) (Шишова-Касаточкина, Павлов, 1969; Со-прунов, 1987; Pappas, 1987; Pappas, Uglem, 1990). С другой стороны, цестоды используют протеиназы хозяина для гидролиза белковых компонентов пищи. Двойственность адаптации гельминтов к условиям существования проявляется во взаимоотношениях с ферментами хозяина на микроуровне: с одной стороны, осуществляется ингибирование протеиназ на поверхности тегумента, а с другой - использование их для гидролиза белковых компонентов пищи.

Роль симбионтного пищеварения у цестод

Наименее изученным аспектом трофических взаимоотношений остается возможность участия симбионтной микрофлоры в процессах пищеварения хозяина и, особенно, паразита. В предыдущих главах на основе данных литературы и собственных исследований описаны некоторые свойства микрофлоры кишечника рыб и пищеварительно-транспортных поверхностей рыб и цестод. Бактерии дополнительно к имеющимся органам пищеварения служат поставщиками ферментов при разрушении питательных веществ. В свою очередь, бактерии зависят от пищевых веществ, поступающих в пищеварительный тракт, и складывающегося физико-химического режима среды.

Важный аспект изучения кишечной микрофлоры - оценка ее роли в пищеварении, которая осуществляется за счет выделения внеклеточных ферментов, способных принимать участие в гидролизе биополимеров. Выделение ферментов можно считать наиболее эффективным способом использования макромолекул отдельными бактериальными клетками. Однако выживанию популяции бактерий в целом также способствует гибель некоторой ее части, обеспечивающая жизнь оставшихся клеток. В результате лизиса части клеток освобождаются активные ферменты, обеспечивающие жизнь оставшимся микроорганизмам (Роджерс, 1963). Для макроорганизмов происхождение бактериальных ферментов

(выделение внеклеточных ферментов или лизис клеток) не важно, важен результат - присутствие этих ферментов в непосредственной близости от пищевари-тельно-транспортных поверхностей.

Нами получен ряд количественных характеристик активности ферментов микрофлоры, ассоциированной с пищеварительно-транспортными поверхностями рыб и цестод. Эти характеристики подробно описаны в предыдущих главах. Указанные ферменты гидролизуют белки и углеводы различной степени сложности. Образовавшиеся в результате ферментативной деятельности бактерий мономеры могут транспортировать в клетки тела как хозяин, так и паразит. Наличие подобных бактерий позволяет предположить возможность их участия в процессах пищеварения хозяина и паразита, поскольку пищеварительные ферменты микроорганизмов могут вносить значительный вклад в утилизацию белков и углеводов. Выделяемые бактериями в окружающую среду ферменты находятся в непосредственной близости от пищеварительно-транспортных поверхностей, и продукты гидролиза биополимеров (белков и углеводов), осуществляемого микроорганизмами, могут транспортироваться макроорганизмами. Ассоциация с тегументом цестод может быть выгодна также и бактериям, поскольку возможно использование микроорганизмами не полностью окисленных конечных продуктов углеводного обмена цестод - органических кислот.

Заключительные этапы и конечные продукты углеводного обмена у цестод

В ходе роста и развития черви выделяют различные продукты жизнедеятельности в организм хозяина. Пути углеводного обмена гельминтов значительно разнообразнее, чем у позвоночных животных - хозяев этих паразитов (Со-прунов, 1984). Однако ряд конечных продуктов, продуцируемых гельминтами, ограничен. Характерные конечные продукты углеводного катаболизма - органические кислоты (лактат, сукцинат, ацетат), продукция которых не прекращается даже в аэробных условиях (Barrett, 1984; Bennet et al., 1990; Nabih, Ansary, 1992; Precious, Barrett, 1993). i

Нами исследовано изменение pH среды и выделение в эту среду молочной кислоты при содержании цестод Т. nodulosus, Е rugosum и L. intestinalis в среде с глюкозой и без нее. Содержание молочной кислоты в среде при инкубации -важная характеристика углеводного обмена паразитов. Исследование заключительных этапов углеводного обмена у цестод показало, что при инкубации in vitro взрослых Т. nodulosus, Е. rugosum и плероцеркоидов L. intestinalis pH среды изменяется в кислую сторону. При 24-часовой инкубации изменения pH зависят от присутствия глюкозы (в среде с глюкозой pH изменяется сильнее). Показано, что Е. rugosum выделяет в среду значительно больше молочной кислоты, чем Т. nodulosus и L. intestinalis (табл. 5), в то время как содержание ее в организме первого ниже, чем у двух последних. С течением времени скорость изменения pH среды и выделения молочной кислоты у исследованных цестод снижается.

Важно отметить, что количество выделенной Т. nodulosus молочной кислоты сопоставимо с ее количеством, обнаруженном в кишечнике щуки. Присутствие L. intestinalis заметно не изменяет содержания лактата в полости тела леща. Из-

менения рН среды в результате жизнедеятельности гельминтов лежат как в пределах физиологических значений рН кишечника хозяев - рыб, так и в пределах оптимальных значений действия основных гидролитических ферментов. Известно, что у рыб в кишечнике поддерживается среда со значениями рН 6.5-7.8 (Со-рвачев, 1982). При этом показано, что оптимум рН амилолитических ферментов, осуществляющих гидролиз углеводов, у большинства видов рыб соответствует значениям рН энтеральной среды (Кузьмина, 1986), а активность кислых про-теиназ снижается от передних отделов кишечника к задним при одновременном увеличении активности щелочных протеиназ (Уголев, Кузьмина, 1993). В то же время пищеварительные ферменты могут гидролизовать субстраты в достаточно широком диапазоне рН. Следовательно, изменения рН среды, вызванные присутствием паразита, не должны сказываться на активности ферментов, осуществляющих гидролиз углеводов и белков.

Таблица 5. Содержание молочной кислоты (мкг/мл г) и скорость ее секреции (мкг/мл г-ч) в инкубационную среду цестодами

Время инкубации, ч Среда без глюкозы Среда с глюкозой

содержание скорость содержание скорость

Т. nodulosus

2 2040±360 1010±190 2680*320 1340±160

24 1490±170 60±10 1630±290 70±10

Е. rugosum

2 14375±2216 7543±1090 9756±1789 4878±894

24 12042±1924 502±80 9130±1843 380±77

L. intestinalis

2 282±38 141±19 283±68 141±34

24 273±26 11±1 366±20 15±1

Поскольку молочная кислота - не полностью окисленный продукт, вполне вероятно ее использование in vivo в качестве источника углерода бактериальной микрофлорой кишечника. В то же время понижение уровня рН в микроокружении цестод дает им преимущества в транспорте мономеров (Halton, 1997; Dalton et al., 2004). Как и большинство других эндопаразитов, имеющих доступ к неограниченным пищевым ресурсам, цестоды обладают сокращенными метаболическими путями, осуществляя неполное окисление пищевых субстратов и сводя свои энергетические затраты к минимуму. В результате они продуцируют и выделяют большое количество частично окисленных короткоцепочечных органических кислот (молочную, пропионовую, уксусную), что может понижать рН кишечника хозяина больше, чем на пол-единицы. Это приводит к угнетению транспортных функций кишечника хозяина, в то время как переносчики глюкозы у червя лучше функционируют при более низких значениях рН (Halton, 1997; Dalton et al., 2004). Таким образом паразиты достигают высокой эффективности

и конкурентоспособности транспортных систем, не оказывая существенного отрицательного влияния на функционирование пищеварительных ферментов хозяина.

Пищевые адаптации низших цестод - паразитов рыб

Различные биохимические процессы, происходящие у цестод на границе раздела паразит - хозяин, объединяют абсорбцию, переваривание, «защиту» и «передачу информации». Несомненно, каждый из этих процессов играет заметную роль в поддержании паразитического образа жизни цестод, но особенно важна интеграция процессов, которая определяет способность цестод эффективно конкурировать с хозяином за пищевые, пластические и энергетические ресурсы (Pappas, 1983).

Сопоставление полученных нами данных и обширного литературного материала позволяет расширить представления о питании цестод и перейти от ранних представлений о существовании у них только систем активного транспорта мономеров, т.е. от однозвенной схемы пищеварения (Pappas, Read, 1975), к двух-звенной и далее - к трехзвенной. Двухзвенная схема объединяет мембранное пищеварение (осуществляемое с помощью собственных и адсорбированных из кишечника хозяина ферментов) и всасывание. Трехзвенная схема, наряду с этими двумя процессами, включает в себя также симбионтное пищеварение, осуществляемое с помощью ферментов бактерий, с различной степенью прочности ассоциированных на поверхности паразита. Для некоторых видов цестод показана также возможность осуществления пиноцитоза, который в отдельных случаях можно рассматривать как дополнительное, четвертое звено, по всей вероятности, не вносящее существенного вклада в процессы пищеварения цестод и обеспечение их пищевых потребностей. Современная схема пищеварения у рыб - окончательных хозяев цестод, обитающих в их кишечнике, включает шесть звеньев (Кузьмина, 1996). Для сравнения, схемы пищеварения у цестод и их хозяев - рыб представлены в таблице 6.

Таблица 6. Схемы пищеварения у цестод и рыб

Цестоды Рыбы (по: В.В. Кузьмина, 1996)

- полостное пищеварение

мембранное пищеварение (ферменты, адсорбированные из полости кишечника хозяина и собственные мембран-но-связанные ферменты) мембранное пищеварение (ферменты, локализованные на внешней поверхности клеточной мембраны энтероцитов)

внутриклеточное пищеварение (пино-цитоз) внутриклеточное пищеварение (фагоцитоз, пиноцитоз)

симбионтное пищеварение (ферменты микрофлоры) симбионтное пищеварение (ферменты микрофлоры)

- индуцированный аутолиз (ферментные системы объектов питания)

всасывание (транспорт нутриентов) всасывание (транспорт нутриентов)

Опираясь на представленные выше данные, к важным пищевым адаптациям низших цестод, обитающих в кишечнике рыб, можно отнести: более эффективные, чем у хозяев., системы транспорта мономеров; использование ферментов хозяина для осуществления мембранного пищеварения; способность к сопряжению процессов гидролиза и транспорта нутриентов на поверхности тегумента; двойственное отношение к протеиназам хозяев - сочетание защиты от воздействия протеиназ хозяев и использование этих ферментов в мембранном гидролизе белков; возможность использования ферментов симбионтной микрофлоры, ассоциированной с тегументом цестод; небольшое понижение pH окружающей среды, способствующее более эффективному функционированию транспортных систем паразита, но не влияющее на активность основных пищеварительных гидролаз в кишечнике хозяина.

Заключение

Исследованные трофические взаимоотношения соответствуют системному подходу к анализу природных объектов и процессов. Этот подход подразумевает, что усиление взаимосвязей элементов в системе (в данном случае хозяин, паразит и симбионтная микрофлора) ведет к появлению новых степеней свободы, характерных для системы в целом (Ройтман, Беэр, 2004). Полученные результаты свидетельствуют о тесных трофических отношениях, устанавливающихся в процессе совместного существования между хозяином и населяющими его кишечник цестодами и микрофлорой. Установлено наличие микрофлоры, ассоциированной не только с тегументом взрослых червей, обитающих в кишечнике рыб, но и с поверхностью плероцеркоида L. intestinalis из полости тела леща. Существование симбионтной микрофлоры, с различной степенью прочности связанной с пищеварительно-транспортными поверхностями рыб и паразитирующих в них цестод и способной выделять ферменты, гидролизующие основные пищевые субстраты (белки и углеводы), снижает энергетические затраты макроорганизмов на синтез собственных гидролаз. Установлены основные закономерности функционирования микробиоты на пищеварительно-транспортных поверхностях и ее существенная роль в процессах пищеварения хозяина и паразита.

В настоящее время трудно корректно оценить вклад того или иного звена в систему пищеварения у рыб (Кузьмина, 1999, 2005) и, тем более, у цестод. Это связано с тем, что в содержимом кишечника, помимо ферментов хозяина, присутствуют ферменты, синтезируемые энтеральной микробиотой и паразитами. В отдельных работах предпринимались попытки выделить вклад ферментов симбионтной микрофлоры в общий пул кишечных ферментов (Кузьмина, Скворцо-ва, 2002; Скворцова, 2002; Skea et al., 2005), однако нельзя считать, что этот вопрос окончательно решен. Поиск методов адекватной оценки вклада ферментов энтеральной микробиоты исключительно важен не только для углубления представлений о роли симбионтного пищеварения в процессах ассимиляции пищи и реализации трансформационной функции пищеварительных гидролаз, но и для

выяснения роли микробиоты в процессах саморегуляции, лежащих в основе сложных форм адаптивной регуляции пищеварительной функции и процессов экзотрофии в целом (Кузьмина, 2005).

Полученные данные позволяют пересмотреть схему пищеварения у цестод и дополнить ее звеном, включающим симбионтное пищеварение, которое осуществляется с помощью ферментов бактерий.

На рисунке 8 представлена схема трофических отношений между хозяином, паразитом и симбионтной микрофлорой, в которой отражены только пищевые отношения между элементами системы. За рамками схемы остаются различные взаимные влияния партнеров (иммунитет, продукция биологически активных веществ, в частности витаминов, и т.п.). Интенсивность влияния отдельных компонентов системы в схеме также не отражена, поскольку на данный момент ее определение не представляется возможным. Наиболее интенсивное взаимодействие трофических партнеров, по-видимому, происходит в непосредственной близости к границе раздела паразит - хозяин.

ХОЗЯИН

негид ревизованные нутриенты

пищеварительные ферменты

гидролиэо-ванные

ПАРАЗИТ

гидролизованные нутриенты

не полностью окисленные продукты углеводного обмена

негидроли- эованные нутриенты гидролизо» ванные нутриенты гидролиза» ванные нутриенты

! 1

СИМБИОНТНАЯ МИКРОФЛОРА

Рис. 8. Трофические отношения в системе «хозяин - паразит - симбионтная

микрофлора»

Влияние различных экзогенных и эндогенных факторов на качественный и количественный состав микрофлоры кишечника рыб делает участие ферментов симбионтой микрофлоры в процессах пищеварения у рыб и паразитирующих в них цестод нестабильным, но существенным элементом.

Полученные данные согласуются с концепцией функциональных блоков, предложенной A.M. Уголевым (1985), согласно которой функции низших и

высших организмов реализуются близкими или идентичными блоками. Это относится не только к функционированию пищеварительных ферментов у изученных трофических партнеров, но и к характеристикам транспортных систем хозяина и паразита. Трофические взаимодействия в системе «хозяин - паразит -симбионтная микрофлора» согласуются с теорией адекватного питания (Уголев, 1985, 1991). К числу основных постулатов этой теории относятся следующие положения. В метаболическом и, особенно, трофическом отношении ассимилирующий организм является надорганизменной системой. Существует эндоэкоси-стема организма - хозяина, образуемая микрофлорой кишечника, с которой хозяин поддерживает сложные симбионтные отношения. Организмы, как составная часть биосферы, объединены трофическими связями на основе единых механизмов экзотрофии, базирующихся на единстве структуры пищевых субстратов и сходстве механизмов их деструктурирования (Уголев, 1985).

Перспективы дальнейших исследований в области взаимоотношений между хозяином, паразитом и симбионтной микрофлорой, по нашему мнению, связаны с разработкой подходов к определению вклада ферментов различного происхождения в процессы пищеварения трофических партнеров, а также к установлению механизмов, обеспечивающих устойчивость их сосуществования в биоценозе кишечника.

Выводы

1. С пищеварительно-транспортными поверхностями кишечника рыб и паразитирующих в них цестод ассоциированы бактерии, способные продуцировать ферменты, гидролизующие белки и углеводы. Присутствие бактерий с аналогичными свойствами отмечено и для плероцеркоида, паразитирующего в полости тела рыб. Использование гидролизованных бактериями нутриентов снижает энергетические затраты макроорганизмов на гидролиз высокомолекулярных субстратов.

2. Наряду со сходством функциональных свойств бактерий, колонизирующих пищеварительно-транспортные поверхности хозяина и паразита, выявлена специфичность, связанная как с особенностями структуры слизистой кишечника и тегумента цестод, способных удерживать различное количество микроорганизмов, так и с существованием микрофлоры, избирательно колонизирующей ту или иную поверхность. Наибольший вклад в гидролиз белков и углеводов как у хозяина, так и у паразита, очевидно, вносят микроорганизмы, более тесно связанные с их пищеварительно-транспортными поверхностями и труднее удаляемые из кишечника в ходе перистальтики.

3. При изменении содержания легкодоступных мономеров в среде, обнаруженные бактерии выделяют гидролитические ферменты или поглощают пищевые субстраты. Зависимость активности бактериальных ферментов от состава среды культивирования дает основание предполагать влияние интенсивности питания рыб на величину вклада ферментов микрофлоры в процессы пищеварения хозяина и паразита. Доля симбионтного пищеварения в гидролизе полиме-

ров повышается при активном питании рыб, а при выключенном или ослабленном экзогенном питании бактерии конкурируют с хозяином и паразитом за доступные мономеры.

4. Бактерии продуцируют ферменты, деградирующие не только сложные углеводы, но и дисахариды. Учитывая низкую активность собственных дисаха-ридаз хозяина и паразита, присутствие бактерий, обладающих сахаразной и мапьтазной активностью, особенно важно для макроорганизмов, поскольку глюкозу, образующуюся в результате гидролитической деятельности бактериальных ферментов, могут использовать все члены складывающегося сообщества.

5. Общая протеолитическая, общая амилолитическая активность ферментов и активность а-амилазы бактерий проявляется в широком диапазоне значений рН. Уровни активности ферментов бактерий в условиях опыта сопоставимы с аналогичными характеристиками ферментов, десорбируемых с исследованных поверхностей и принимающих участие в процессах мембранного пищеварения у хозяина и паразита, что может свидетельствовать о значительном вкладе симби-онтной микрофлоры в пищеварение макроорганизмов.

6. На основе сопоставления собственных данных и обширного литературного материала для цестод предложена трехзвенная схема пищеварения, объединяющая всасывание (активный транспорт мономеров), мембранное пищеварение (осуществляемое с помощью собственных и адсорбированных из кишечника хозяина ферментов) и симбионтное пищеварение (осуществляемое с помощью ферментов бактерий, с различной степенью прочности ассоциированных на поверхности паразита).

7. Пищевые адаптации низших цестод, обитающих в кишечнике рыб, включают: а) более эффективные, чем у хозяев, системы транспорта мономеров, и в частности, глюкозы; б) использование ферментов хозяина для осуществления мембранного пищеварения; в) способность к сопряжению процессов гидролиза и транспорта нутриентов на поверхности тегумента; г) сочетание защиты от воздействия протеиназ хозяев с одновременным использованием этих ферментов для мембранного гидролиза белков; д) возможность использования ферментов симбионтной микрофлоры, ассоциированной с тегументом цестод; е) незначительное понижение рН окружающей среды, способствующее более эффективному функционированию транспортных систем паразита, но не влияющее на активность основных пищеварительных гидролаз в кишечнике хозяина.

8. Трофические отношения в системе «хозяин - паразит - симбионтная микрофлора» включают разнонаправленные потоки гидролизованных и негид-ролизованных нутриентов, а также пищеварительных ферментов, продуцируемых трофическими партнерами и используемых как самими продуцентами, так и другими членами сложившегося сообщества.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Извекова Г.И. Характеристика транспорта глюкозы у цестоды Eubothrium rugosum II Паразитология. 1988. Т. 22. № 3. С. 210-215.

2. Извекова Г.И. Особенности транспорта углеводов у цестоды Eubothrium rugosum II Паразитология. 1988. Т. 22. № 4. С. 337-341.

3. Извекова Г.И. Транспорт некоторых углеводов у цестоды Triaenophorus nodulosus II Паразитология. 1989. Т. 23. № 3. С. 222-228.

4. Извекова Г.И. Динамика десорбции карбогидраз с поверхности кишечника рыб и паразитирующих в них цестод // Паразитология. 1990. Т. 24. № 6. С. 485-492.

5. Извекова Г.И. Некоторые характеристики гидролиза белков на пищева-рительно-транспортных поверхностях цестоды Eubothrium rugosum и кишечника ее хозяина - налима // Паразитология. 1991. Т. 25. № 3. С. 244-249.

6. Извекова Г.И. Содержание белка, углеводов и транспорт глюкозы в разных частях стробилы у цестоды Eubothrium rugosum II Паразитология. 1997. Т. 31. №2. С. 90-96.

7. Извекова Г.И. Некоторые аспекты паразито-хозяинных отношений в системе Ligula intestinalis - лещ // Экологический мониторинг паразитов. С-Пе-тербург, 1997. С. 147.

8. Извекова Г.И. Закономерности процессов ассимиляции пищи у цестод и их хозяев - рыб // Роль российской гельминтологической школы в развитии паразитологии. М., 1997. С. 24.

9. Извекова Г.И. Характерные особенности паразито-хозяинных отношений в системе Ligula intestinalis - лещ // Проблемы цестодологии. Сборник научных трудов. С-Петербург: ЗИН РАН, 1998. С. 50-59.

10. Извекова Г.И. Физиологическая специфика взаимоотношений между Triaenophorus nodulosus (Cestoda) и его хозяевами - рыбами // Взаимоотношения паразита и хозяина. М.: 1998. С. 29.

11. Извекова Г.И. Некоторые аспекты паразито-хозяинных отношений в системе Ligula intestinalis (L.) (Cestoda, Pseudophyllidea) - лещ II Известия АН. Сер. биол. 1999. № 4. С. 432-438.

12. Извекова Г.И. Ligula intestinalis (Cestoda): своеобразие углеводного обмена // История развития и современные проблемы гельминтологии в России. М., 1999. С. 19.

13. Извекова Г.И. Физиологическая специфика взаимоотношений между Triaenophorus nodulosus (Cestoda) и его хозяевами - рыбами // Паразитология. 2001. Т. 35. № 1.С. 60-68.

14. Извекова Г.И. Ligula intestinalis (Cestoda, Pseudophyllidea): некоторые аспекты углеводного обмена плероцеркоидов // Биол. внутр. вод. 2001. № 2. С. 101-106.

15. Извекова Г.И. Особенности заключительных этапов углеводного обмена у цестод Ligula intestinalis и Triaenophorus nodulosus // Проблемы цестодологии. Товарищество научных изданий КМК. М., 2002. Вып. 2. С. 97-111.

16. Извекова Г.И. Некоторые аспекты паразито-хозяинных отношений на примере заключительных этапов углеводного обмена у цестод Ligula intestinalis и Triaenophorus nodulosus // Паразитологические исследования в Сибири и на Дальнем Востоке. 2002. С. 71-74.

17. Извекова Г.И. Активность протеаз микрофлоры пищеварительно-транспортных поверхностей кишечника щуки и паразитирующего в нем Triaenophorus nodulosus (Pallas, 1781) (Cestoda, Pseudophyllidea) // Биол. внутр. вод. 2003. №2. С. 96-101.

18. Извекова Г.И. Протеолитическая активность микрофлоры, ассоциированной с пищеварительно-транспортными поверхностями кишечника налима и паразитирующего в нем Eubothrium rugosum (Cestoda, Pseudophyllidea) // Журн. эвол. биохим. физиол. 2003. Т. 39. № 5. С. 424-429.

19. Извекова Г.И. Характеристика заключительных этапов углеводного обмена у цестоды Eubothrium rugosum (Cestoda, Pseudophyllidea) // Паразитология. 2003. Т. 37. № 6. С. 496-502.

20. Извекова Г.И. Протеолитическая активность микрофлоры, ассоциированной с пищеварительно-транспортными поверхностями кишечника налима и паразитирующего в нем Eubothrium rugosum (Cestoda, Pseudophyllidea) // Биологические ресурсы Белого моря и внутренних водоемов Европейского Севера. Сыктывкар, 2003. С. 37 (130 англ.).

21. Извекова Г.И. Гидролитическая активность ферментов микрофлоры, ассоциированной .с пищеварительно-транспортными поверхностями кишечников рыб и паразитирующих в них цестод // Паразиты рыб: современные аспекты изучения. Борок, 2003. С. 24.

22. Извекова Г.И. Некоторые особенности заключительных этапов углеводного обмена у цестоды Eubothrium rugosum И Паразиты рыб: современные аспекты изучения. Борок, 2003. С. 25.

23. Извекова Г.И. Трофические отношения в системе хозяин - паразит -симбионтная микрофлора // Трофические связи в водных сообществах и экосистемах. Борок, 2003. С. 45-46.

24. Извекова Г.И. Функционирование пищеварительной системы рыб при заражении гельминтами: роль симбионтной микрофлоры // Механизмы функционирования висцеральных систем. С-Петербург, 2003. С. 125.

25. Извекова Г.И. Пищевые взаимоотношения рыб и паразитирующих в них цестод: роль ферментов симбионтной микрофлоры // Сибирская зоологическая конференция. Новосибирск, 2004. С. 377.

26. Извекова Г.И. Роль симбионтной микрофлоры в пищеварительных процессах рыб и паразитирующих в них цестод // Современные проблемы физиологии и биохимии водных организмов. Петрозаводск, 2004. С. 56.

27. Извекова Г.И. Гидролитическая активность ферментов микрофлоры, ассоциированной с пищеварительно-транспортными поверхностями кишечника щуки и паразитирующего в нем Triaenophorus nodulosus (Cestoda, Pseudophyllidea)//Журн. эвол. биохим. физиол. 2005. Т. 41. № 2. С. 146-153.

28. Извекова Г.И. Активность карбогидраз симбионтной микрофлоры и их роль в процессах пищевариения у рыб и паразитирующих в них цестод (на примере щуки и Triaenophorus nodulosus) Н Журн. эвол. биохим. и физиол. 2005. Т. 41. №4. С. 325-331.

29. Извекова Г.И. Пищевые адаптации у низших цестод - паразитов рыб // Паразитологические исследования в Сибири и на Дальнем Востоке. Новосибирск, 2005. С. 78-80.

30. Извекова Г.И. Роль ферментов симбионтной микрофлоры в гидролизе углеводных компонентов пищи в системе паразит - хозяин (на примере налима и цестоды Eubothrium rugosum) // Биологические ресурсы Белого моря и внутренних водоемов Европейского севера. Вологда, 2005. С. 164-166.

31. Извекова Г.И. Симбионтное пищеварение как физиологическая коадап-тация в условиях кишечного биоценоза (рыбы - цестоды - микрофлора) // XIII Международное совещание по эволюционной физиологии. С-Петербург, 2006. С. 90.

32. Извекова Г.И. Гидролитическая активность ферментов микрофлоры и ее роль в процессах пищеварения у леща и паразитирующего в его кишечнике Caryophyllaeus laticeps (Cestoda, Caryophyllidea) // Известия РАН. Сер. биол. 2006. №3. С. 358-364.

33. Извекова Г.И., Комова A.B. Роль а-амилазы микрофлоры в процессах пищеварения у низших цестод и их хозяев - рыб // Основные достижения и перспективы развития паразитологии. М., 2004. С. 121-122.

34. Извекова Г.И., Комова А.Е. Роль а-амилазы симбионтной микрофлоры в процессах пищеварения у низших цестод и их хозяев - рыб // Известия РАН. Сер. биол. 2005. № 2. С. 208-213.

35. Извекова Г.И., Корнева Ж.В. Симбионтное пищеварение у рыб при заражении цестодами // Механизмы функционирования висцеральных систем. С-Петербург, 2005. С. 103-104.

36. Извекова Г.И., Кузьмина В.В. Сравнительная характеристика некоторых особенностей транспорта углеводов у цестод и в кишечнике их хозяев рыб // Биол. внутр. вод, инф. бюл. Л.: Наука, 1988. № 79. С. 38-41.

37. Извекова Г.И., Кузьмина В.В. Гидролиз и транспорт Сахаров у цестоды Caryophyllaeus laticeps и в кишечнике ее хозяина - леща // Паразитология. 1991. Т. 25. № 6. С. 536-543.

38. Извекова Г.И., Лаптева H.A. Закономерности пищеварительно-транспортных процессов у цестод и в кишечнике их хозяев-рыб // Механизмы функционирования висцеральных систем. С-Петербург, 2001. С. 145.

39. Извекова Г.И., Лаптева H.A. Микрофлора пшцеварительно-транспортных поверхностей кишечника щуки и паразитирующего в нем Triaenophorus nodulosus (Cestoda, Pseudophyllidea) // Биол. внутр. вод. 2002. № 4. С. 75-79.

40. Извекова Г.И., Лаптева H.A. Микрофлора, ассоциированная с пищева-рительно-транспортными поверхностями рыб и паразитирующих в них цестод // Экология. 2004. № 3. С. 205-209.

41. Извекова Г.И., Лаптева H.A. Симбионтная микрофлора, ассоциированная с поверхностью плероцеркоида Ligula intestinalis (L.) (Cestoda, Pseudophyllidea) // Гидробиол. журнал. 2004. Т. 40. № 2. С. 78-86.

42. Кузьмина В.В., Извекова Г.И. Механизмы транспорта углеводов в кишечнике пресноводных костистых рыб // Биол. внутр. вод. инф. бюллетень. 1988. № 79. С. 42-44.

43. Кузьмина В.В., Извекова Г.И. Влияние температуры на кинетические характеристики сахаразы слизистой кишечника рыб // Биол. внутр. вод. инф. бюллетень. 1992. № 92. С. 58-63.

44. Кузьмина В.В., Извекова Г.И., Куперман Б.И. Особенности физиологии питания цестод и их хозяев - рыб // Успехи соврем, биол. 2000. Т. 120. № 4. С. 384-394.

45. Куперман Б.И., Извекова Г.И., Кузьмина В.В. Морфологические и физиологические аспекты взаимоотношений цестод и их хозяев - рыб // Проблемы систематики и филогении плоских червей. С-Петербург, 1998. С. 52-54.

46. Куперман Б.И., Жохов А.Е., Извекова Г.И., Таликина М.Г. Динамика зараженности лигулидами лещей Волжских водохранилищ и паразито-хозяинные отношения при лигулезе // Биол. внутр. вод. 1997. № 2. С. 41-49.

47. Izvekova G.I. Some aspects of parasite-host relationship between Ligula intestinalis (Cestoda) and bream (Abramis brama) II 50th Anniversary of Foundation and 18th Congress of Polish Parasitological Society. Wiadomosci parazytologiczne, 1998. V. 44. P. 338.

48. Izvekova G.I. Peculiarities of the final stages of carbohydrate metabolism in Ligula intestinalis plerocercoids (Cestoda, Pseudophyllidea) // Helminthologia. 2000. V. 37. № 1. P. 9-13.

49. Izvekova G.I. Triaenophorus nodulosus (Cestoda, Pseudophyllidea): final stages of carbohydrate metabolism // Helminthologia. 2001. V. 38. № 1. P. 23-27.

50. Izvekova G.I., Kuperman B.I., Kuz'mina V.V. Digestion and digestive-transport surfaces in cestodes and their fish hosts // Comp. Biochem. Physiol. 1997. V. 118A. № 4. P. 1165-1171.

51. Kuz'mina V.V., Golovanova I.L., Izvekova G.I. Influence of temperature and season on some characteristics of intestinal mucosa carbohydrases in six freshwater fishes // Comp. Bioch. Physiol. 1996. V. 113. № 2. P. 255-260.

52. Poddubnaya L.G., Izvekova G.I. Detection of bacteria associated with the tegument of caryophyllidean cestodes // Helminthologia. 2005. V. 42. № 1. P. 9-14.

Лицензия ПД 00661 от 30.06.2002 г. Печ. л. 2. Заказ 2208. Тираж 100. Отпечатано в типографии Ярославского государственного технического университета г. Ярославль, ул. Советская, 14 а, тел. 30-56-63.

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Извекова, Галина Игоревна

Общая характеристика работы

Глава 1. Материал и методы исследований

1.1. Характеристика объектов исследования

1.2. Методы определения активности 16 пищеварительных ферментов

1.2.1. Исследование протеаз

1.2.2. Исследование карбогидраз

1.3. Методы определения конечных продуктов 19 углеводного обмена цестод (содержание молочной кислоты)

1.4. Методы исследования кишечной микрофлоры

1.4.1. Традиционные методы

1.4.2. Метод десорбции

1.4.3. Питательные среды

1.5. Схема проведения опытов

1.6. Статистическая обработка данных

Глава 2. Симбионтная микрофлора кишечника рыб (обзор литературы)

2.1. Общие сведения по микрофлоре кишечника 31 позвоночных животных

2.2. Микрофлора кишечника рыб

2.2.1. Численность бактерий кишечного тракта

2.2.2. Состав бактерий кишечного тракта рыб

2.2.3. Функциональное значение микрофлоры 70 кишечника для рыб

2.3. Кишечная микрофлора и обитающие в 83 кишечнике гельминты

Глава 3. Численность, биомасса и активность ферментов 88 микрофлоры, ассоциированной с пищеварительно-транспортиыми поверхностями рыб и цестод, паразитирующих в их кишечнике и полости тела

3.1. Численность и биомасса бактерий, смытых со 88 слизистой оболочки кишечника хозяина и тегумента его паразита

3.1.1. Щука - Triaenophorus nodulosus

3.1.2. Налим - Eubothrium rugosum

3.1.3. Лещ - Caryophyllaeus laticeps

3.1.4. Лещ - Ligula intestinalis

3.1.5. Общие закономерности распределения 99 бактерий на пищеварительно-транспортных поверхностях рыб и цестод

3.2. Активность протеаз микрофлоры, 107 ассоциированной с пищеварительно-транспортными поверхностями рыб и цестод

3.2.1. Щука - Triaenophorus nodulosus

3.2.2. Налим - Eubothrium rugosum

3.2.3. Лещ - Caryophyllaeus laticeps

3.2.4. Лещ - Ligula intestinalis

3.2.5. Общие закономерности функционирования 133 протеаз симбионтной микрофлоры

3.3. Активность карбогидраз микрофлоры и 141 карбогидраз, десорбированных с пищеварительнотранспортных поверхностей рыб и цестод

3.3.1. Общая амилолитическая активность

3.3.1.1. Щука - Triaenophorus nodulosus

3.3.1.2. Налим - Eubothrium rugosum

3.3 Л .3. Лещ - Caryophyllaeus laticeps

3.3 Л .4. Лещ - Ligula intestinalis

3.3.2. Активность а-милазы

3.3.2.1. Щука - Triaenophorus nodulosus

3.3.2.2. Налим - Eubothrium rugosum

3.3.2.3. Лещ - Caryophyllaeus laticeps

3.3.3. Активность дисахаридаз

3.3.3.1. Щука - Triaenophorus nodulosus

3.3.3.2. Налим - Eubothrium rugosum

3.3.3.3. Лещ - Caryophyllaeus laticeps

3.3.4. Активность карбогидраз, десорбированных 175 со слизистой кишечника рыб и тегумента цестод

3.3.4.1. Щука - Triaenophorus nodulosus

3.3.4.2. Налим - Eubothrium rugosum

3.3.4.3. Лещ - Caryophyllaeus laticeps

3.3.5. Общие закономерности функционирования 181 карбогидраз симбионтной микрофлоры

Введение Диссертация по биологии, на тему "Трофические отношения в системе хозяин - паразит - симбионтная микрофлора"

Актуальность проблемы. Одна из фундаментальных проблем паразитологии - проблема взаимоотношений паразита и его хозяина. Питание - основа симбиоза и паразитизма, а знание механизмов, с помощью которых паразиты абсорбируют и частично утилизируют нутриенты, имеет фундаментальное значение для понимания паразитизма и отношений паразит - хозяин (Crompton, Hall, 1981). Цестоды - высокоспециализированные организмы, в биологии и морфологии которых проявляются многие важные черты адаптаций к паразитическому образу жизни (Куперман, 1988; Halton, 1997; Dalton et al., 2004). В силу ярко выраженного морфологического сходства пищеварительно-транспортных поверхностей цестод и кишечника их хозяев, а также благодаря значительно большей, по сравнению с другими гельминтами, биомассе и площади поверхности, принимающей участие в процессах пищеварения, цестоды оказывают существенное влияние на пищеварительную систему.

На примере ряда позвоночных животных установлена важная роль симбионтного пищеварения в процессах экзогенного питания (Уголев, 1985; Шивокене, 1989; Уголев, Кузьмина, 1993). К настоящему времени доказано, что существование высших организмов невозможно без постоянного взаимодействия с микроорганизмами, причем многие физиологические процессы у человека, животных и растений неразрывно связаны с соответствующими процессами у населяющих их бактерий (Уголев, 1985; Tannock, 1999; Пименов и др., 2004). Животное-хозяин и его кишечная микрофлора функционируют вместе как комплексная экологическая система, в которой кишечная микрофлора оказывает значительное влияние на организм хозяина, а компоненты микрофлоры - друг на друга (Rolfe, 1984). Микроорганизмы, заселяющие кишечник, обладают набором специфических ферментов, позволяющих гидролизовать субстраты, недоступные ферментам макроорганизма. В результате жизнедеятельности симбионтной микрофлоры образуются пищевые вещества, не нуждающиеся в дальнейшем гидролизе -аминокислоты, глюкоза, жирные кислоты и другие (Уголев, 1985; Уголев, Кузьмина, 1993). Микрофлора кишечника синтезирует многие витамины, необходимые для жизнедеятельности не только хозяина, но и паразита (Шишова-Касаточкина, Леутская, 1979). Согласно современным представлениям, макроорганизм следует рассматривать как единую систему более высокого иерархического уровня, чем отдельный индивидуум, выполняющий по отношению к микроорганизмам функцию доминанта и регулятора всей системы в целом (Уголев, 1985; Кузьмина, 2005). Бактерии-не только неотъемлемый, но и жизненно необходимый компонент пищеварительного тракта различных животных, в том числе рыб (Шивокене, 1989; Cahill, 1990; Кузьмина, 1996; Clements, 1997; Кузьмина, Скворцова, 2002 б; Кузьмина, 2005). Существует обширная литература, посвященная количественному и качественному составу энтеральной микрофлоры рыб (Шивокене, Трепшене, 1985; Лубянскене и др., 1989; Шивокене, 1989; Cahill, 1990; Syvokiene, 1991; Баздеркина, 1992; Ring0 et al., 1995; Clements, 1997; Grisez et al., 1997; Ring0, Gatesoupe, 1998; Syvokiene et al., 1999; Austin, 2002). Нормальная микрофлора пищеварительного тракта играет важную роль в жизнедеятельности макроорганизма, в частности в формировании иммунитета хозяина, синтезе ряда ферментов и витаминов, утилизации пищевых субстратов с выделением незаменимых аминокислот (Шивокене, Лубянскене, 1980; Шивокене, 1989; Sugita et al., 1991). Особое значение имеет резидентная микрофлора, т.е. микрофлора стенки кишечника, которая формирует природный экологический барьер, представляющий собой один из факторов устойчивости организма (Ring0 et al., 1995), и оказывает ингибирующее воздействие на патогенные микроорганизмы (Westerdahl et al., 1991). Существенный аспект изучения кишечной микрофлоры - оценка ее роли в питании макроорганизма, которое осуществляется за счет выделения бактериями внеклеточных ферментов, способных принимать участие в гидролизе биополимеров. Познание взаимоотношений между рыбами и бактериями, населяющими кишечник, - важный вклад в сравнительную физиологию пищеварения животных. Хозяин, паразит и симбионтная микрофлора представляют собой микробиоценоз со сложившимися за время совместной эволюции тесными взаимоотношениями, исследование которых важно для понимания происходящих в нем процессов (Чахава, Горская, 1982). Работ, касающихся взаимоотношений между микрофлорой кишечника и гельминтами, обитающими в нем, крайне мало. Изучение микрофлоры, ассоциированной с пищеварительно-транспортными поверхностями цестод, обитающих в кишечнике рыб, ограничивается серией исследований, проведенных в рамках совместного гранта РФФИ с коллегами из лаборатории экологической паразитологии (кбн Ж.В. Корневой и кбн Л.Г. Поддубной).

Исследования трофических взаимоотношений между хозяином и паразитом, с учетом существования симбионтной микрофлоры, позволяют пересмотреть некоторые базовые принципы отношений паразита и хозяина и выявить не известные ранее механизмы пищевых адаптаций цестод.

Цель и задачи исследования. Цель работы - изучение трофических отношений, складывающихся в кишечнике пресноводных рыб между хозяином, паразитом и симбионтной микрофлорой. В связи с этим были поставлены следующие задачи:

1. Разработать методические подходы к исследованию микрофлоры, с различной степенью прочности ассоциированной со слизистой оболочкой кишечника рыб и тегументом цестод.

2. Установить существование симбионтной микрофлоры, колонизирующей пищеварительно-транспортные поверхности кишечника рыб и цестод, и исследовать способность микрофлоры продуцировать ферменты, гидролизующие основные пищевые субстраты - белки и углеводы.

3. Оценить активность протеаз и амилаз, продуцируемых бактериями, с различной степенью прочности связанными с исследованными поверхностями, а также выяснить общие закономерности функционирования этих ферментов.

5. Определить локализацию процессов симбионтного пищеварения на пищеварительно-транспортных структурах рыб и цестод.

6. Выявить основные пищевые адаптации цестод - паразитов рыб.

Положения, выносимые на защиту. 1. Бактерии, ассоциированные с пищеварительно-транспортными поверхностями кишечника рыб и цестод, вносят существенный вклад в процессы пищеварения хозяина и паразита. 2. Питание у цестод осуществляется в соответствии с трехзвенной схемой пищеварения, включающей мембранное и симбионтное пищеварение, а также всасывание, или транспорт мономеров. 3. Трофические отношения в системе «хозяин - паразит - симбионтная микрофлора» представлены преимущественно взаимовыгодными связями, устанавливающимися за время совместного существования.

Научная новизна. Впервые в идентичных методических условиях исследована симбионтная микрофлора, ассоциированная с пищеварительно-транспортными поверхностями паразита и хозяина, что позволило установить различную степень прочности фиксации микрофлоры с исследуемыми поверхностями. Впервые исследована способность симбионтной микрофлоры, локализованной на пищеварительно-транспортных поверхностях паразита и хозяина, гидролизовать белковые и углеводные компоненты пищи. Впервые существование симбионтной микрофлоры установлено не только для паразитов кишечника, но и для гельминта, паразитирующего в полости тела рыб. Впервые предпринята попытка выявить возможность участия и роль симбионтной микрофлоры в процессах гидролиза основных питательных веществ (белков и углеводов) у цестод и сравнить их с аналогичными процессами, протекающими в кишечнике хозяина. Впервые исследована способность симбионтной микрофлоры, ассоциированной с пищеварительно-транспортными поверхностями рыб и паразитирующих в них цестод, гидролизовать углеводы различной степени сложности (поли-, и дисахариды); сопоставлена амилолитическая активность ферментов, адсорбированных на слизистой кишечника и тегументе цестод, с активностью аналогичных ферментов бактерий. На примере низших цестод и их хозяев - рыб впервые установлены основные закономерности трофических взаимоотношений и функционирования системы "паразит-хозяин" с учетом роли симбионтной микрофлоры, что существенно дополняет представления об этих отношениях между паразитом и хозяином. Впервые исследованы заключительные стадии углеводного обмена у цестод Triaenophorus nodulosus и Eubothrium rugosum, что позволило выявить адаптивные изменения значений рН в окружении червей.

Результаты исследований существенно дополняют и расширяют представления об отношениях между хозяином и паразитом на примере рыб и низших цестод; способствуют систематизации сведений по пищевым адаптациям цестод; а также доказывают важную роль симбионтной микрофлоры в питании не только хозяина, но и паразита.

Систематизированные представления по симбионтной микрофлоре кишечника рыб могут найти применение при разработке кормов и использовании пробиотиков в прудовых хозяйствах.

Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на следующих научных мероприятиях: VI Всероссийский симпозиум по популяционной биологии паразитов (Борок, 1996); «Экологический мониторинг паразитов» (С-Петербург, 1997); «Роль российской гельминтологической школы в развитии паразитологии» (Москва, 1997); «Взаимоотношения паразита и хозяина» (Москва, 1998); 50th Anniversary of Foundation and 18th Congress of Polish Parasitological Society Wiadomosci parazytologiczne, (Варшава, 1998); Совещание, посвященное 90-летию со дня рождения академика Б.Е. Быховского (С-Петербург, 1998); «История развития и современные проблемы гельминтологии в России» (Москва, 1999); «Механизмы функционирования висцеральных систем» (С-Петербург, 2001; 2003; 2005); «Паразитологические исследования в Сибири и на Дальнем Востоке» (Новосибирск, 2002; 2005); «Биологические ресурсы Белого моря и внутренних водоемов Европейского Севера» (Сыктывкар, 2003; Вологда, 2005); «Паразиты рыб: современные аспекты изучения»

Борок, 2003); «Трофические связи в водных сообществах и экосистемах» (Борок, 2003); «Основные достижения и перспективы развития паразитологии» (Москва, 2004); Сибирская зоологическая конференция (Новосибирск, 2004); «Современные проблемы физиологии и биохимии водных организмов» (Петрозаводск, 2004); XIII международное совещание по эволюционной физиологии (С-Петербург, 2006).

Заключение Диссертация по теме "Паразитология", Извекова, Галина Игоревна

Выводы

2. Наряду со сходством функциональных свойств бактерий, колонизирующих пищеварительно-транспортные поверхности хозяина и паразита, отмечается и специфичность, связанная как с особенностями структуры слизистой кишечника и тегумента цестод, способных удерживать различное количество микроорганизмов, так и с существованием микрофлоры, избирательно колонизирующей ту или иную поверхность. Наибольший вклад в гидролиз белков и углеводов, как у хозяина, так и у паразита, очевидно, вносят микроорганизмы, более тесно связанные с их пищеварительно-транспортными поверхностями и труднее удаляемые из кишечника в ходе перистальтики.

Бактерии продуцируют ферменты, деградирующие не только сложные углеводы, но и дисахариды. Учитывая низкую активность собственных дисахаридаз хозяина и паразита, присутствие бактерий, обладающих сахаразной и мальтазной активностью, особенно важно для макроорганизмов, поскольку глюкозу, образующуюся в результате гидролитической деятельности бактериальных ферментов, могут использовать все члены складывающегося сообщества. Общая протеолитическая, общая амилолитическая активность ферментов и активность а-амилазы бактерий проявляется в широком диапазоне значений рН. Уровни активности ферментов бактерий в условиях опыта сопоставимы с аналогичными характеристиками ферментов, десорбируемых с исследованных поверхностей и принимающих участие в процессах мембранного пищеварения у хозяина и паразита, что может свидетельствовать о значительном вкладе симбионтной микрофлоры в пищеварение макроорганизмов. На основе сопоставления собственных данных и обширного литературного материала для цестод предложена трехзвенная схема пищеварения, объединяющая всасывание (активный транспорт мономеров), мембранное пищеварение (осуществляемое с помощью собственных и адсорбированных из кишечника хозяина ферментов) и симбионтное пищеварение (осуществляемое с помощью ферментов бактерий, с различной степенью прочности ассоциированных на поверхности паразита).

Пищевые адаптации низших цестод, обитающих в кишечнике рыб, включают: а) более эффективные, чем у хозяев, системы транспорта мономеров, и в частности, глюкозы; б) использование ферментов хозяина для осуществления мембранного пищеварения; в) способность к сопряжению процессов гидролиза и транспорта нутриентов на поверхности тегумента; г) сочетание защиты от воздействия протеиназ хозяев с одновременным использованием этих ферментов для мембранного гидролиза белков; д) возможность использования ферментов симбионтной микрофлоры, ассоциированной с тегументом цестод; е) незначительное понижение рН окружающей среды, способствующее более эффективному функционированию транспортных систем паразита, не влияющее на активность основных пищеварительных гидролаз в кишечнике хозяина.

8. Трофические отношения в системе «хозяин - паразит - симбионтная микрофлора» включают разнонаправленные потоки гидролизованных и негидролизованных нутриентов, а также пищеварительных ферментов, продуцируемых трофическими партнерами и используемых как самими продуцентами, так и другими членами сложившегося сообщества.

5.7. Заключение

Цестоды - высоко адаптированные кишечные паразиты, лишенные кишечника, их тегумент развился в эффективный пищеварительно-транспортный слой, конкурирующий с мукозой позвоночных и дающий цестодам ряд кинетических преимуществ в избирательном поглощении нутриентов в пространстве паразит - хозяин (Halton, 1997). Различные биохимические процессы, происходящие у цестод на границе раздела паразит -хозяин, объединяют абсорбцию, переваривание, «защиту» и «передачу информации». Несомненно, каждый из этих процессов играет заметную роль в поддержании паразитического образа жизни цестод, но особенно важна интеграция процессов, которая определяет способность цестод эффективно конкурировать с хозяином за пищевые, пластические и энергетические ресурсы (Pappas, 1983). Прогресс у паразитов направлен не столько на повышение интеграции собственного организма, сколько на повышение интеграции со средой хозяина, как на биоценологическом, так и на организменном уровнях. Состояние устойчивого равновесия в гетерогенной системе паразит - хозяин достигается в достаточно узкой зоне взаимной толерантности партнеров (Краснощеков, 2000). Система паразит - хозяин двойственна по своей сути. С одной стороны, между ними существуют антагонистические отношения, с другой стороны - эволюция данной системы ведет к ее стабилизации и длительному существованию. Эволюция паразитов идет по пути постоянного совершенствования адаптивных механизмов, необходимых для их существования за счет хозяев. В результате наступает стабилизация системы паразит - хозяин, что выгодно в первую очередь паразиту (Оксов, 1991). Например, негативное воздействие на рост атлантического лосося {Salmo salar), инвазированного Eubothrium sp., отмечено только до двухмесячного возраста, у более взрослых рыб заражение паразитом на этот показатель не влияет (Saksvik et al., 2001).

Сопоставление полученных нами данных и обширного литературного материала позволяет расширить представления о питании у цестод и перейти от ранних представлений о существовании у них только систем активного транспорта мономеров, т.е. от однозвенной схемы пищеварения (Pappas, Read, 1975), к двухзвенной и далее - к трехзвенной. Двухзвенная схема (Кузьмина и др., 2000) объединяет мембранное пищеварение (осуществляемое с помощью собственных и адсорбированных из кишечника хозяина ферментов) и всасывание. Трехзвенная схема, наряду с этими двумя процессами, включает в себя также симбионтное пищеварение, осуществляемое с помощью ферментов бактерий, с различной степенью прочности ассоциированных на поверхности паразита. Как отмечено выше, для некоторых видов цестод показана также возможность осуществления пиноцитоза, который в отдельных случаях можно рассматривать как дополнительное, четвертое звено. Однако, по всей вероятности, пиноцитоз не вносит заметного вклада в процессы пищеварения цестод и обеспечение их пищевых потребностей. Современная схема пищеварения у рыб - окончательных хозяев цестод, обитающих в их кишечнике, включает шесть звеньев (Кузьмина, 1996). Для сравнения, схемы пищеварения у цестод и их хозяев - рыб представлены в таблице 5.2.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Извекова, Галина Игоревна, Борок

1. Аркинд М.В., Раева И.И. Мембранное пристеночное пищеварение у цестод // Журн. эвол. биох. и физиол. 1971. Т.7. № 4. С. 375-379.

2. Астафьев Б.А., Петров О.Е. Эволюционно-генетическая теория паразитизма//Усп. совр. биол. 1992. Т. 112. Вып. 2. С. 163-175.

3. Баздеркина С. А. Эколого-физиологическая характеристика микрофлоры пищеварительной системы карповых рыб при выращивании на теплых водах. Автореф. дис. на соиск. степ, к.б.н., Борок, 1992. 17 с.

4. Безбородов A.M., Астапович Н.И. Секреция ферментов у микроорганизмов. М.: Наука, 1984. 70 с.

5. Беэр С.А. Роль фактора патогенности паразитов в эволюции органического мира // Усп. общ. паразитол. Труды Института паразитологии . М.: Наука. 2004. Т. XLIV. С. 65-80.

6. Бухарин О.В., Литвин В.Ю. Патогенные бактерии в природных экосистемах. Екатеринбург: УрО РАН, 1997. 277 с.

7. Вайнштейн М.Б., Кудряшова Е.Б. О наннобактериях // Микробиология. 2000. Т. 69. №2. С. 163-174.

8. Веригина И.А., Жолдасова И.М. Эколого-морфологические особенности пищеварительной системы костистых рыб. Ташкент: Фан. 1982.151 с.

9. Выхрестюк Н.П., Буренина Э.А. Углеводный обмен и его регуляция у трематод. Владивосток.: Дальнаука. 2001. 203 с.

10. Гальперин Ю.М., Лазарев П.И. Пищеварение и гомеостаз. М.: Наука. 1986.304 с.

11. Георгиевский А.Б. Эволюция адаптаций (историко-методологическое исследование) Л., 1989. с.

12. Голованова И.Л. Интенсивность всасывания различных Сахаров в кишечнике двухлетних карпов // Биол. внутр. вод.: информ. бюл. 1985. № 66. С. 50-54.

13. Голованова И.JI. Механизмы всасывания глюкозы и галактозы в кишечнике леща и карпа // Биол. внутр. вод: информ. бюл. 1988. № 79. С. 67-71.

14. Голованова И.Л. Некоторые характеристики транспорта углеводов в кишечнике рыб-бентофагов на примере леща и карпа. Автореф. дис. на соиск. степ, к.б.н., Ленинград, 1991. 23 с.

15. Грачева И.М, Гернет М.В. Пути синтеза и регуляция образования глюкоамилазы, выделение и очистка ее // Итоги науки и техники. Серия Микробиология. Биосинтез ферментов микроорганизмами. 1978. Т.9. С. 89-133.

16. Давыдов О.Н, Куровская Л.Я. Паразито-хозяинные отношения при цестодозах рыб. Киев: Наукова Думка, 1991. 169 с.

17. Дегтева Г.К, Лавровский С.Н, Беляева Е.В. Микробные гидролазы -ферментные препараты. Нижний Новгород: Из-во Нижненовгородского госуниветситета. 2001. 224 с.

18. Диксон М., Уэбб Э. Ферменты. М.: Мир, 1982. 1118 с.

19. Добровольский А.А., Евланов И.А, Шульман С.С. Паразитарные системы: анализ структуры и стратегии, определяющий их устойчивость // Экологическая паразитология. Петрозаводск: КНЦ РАН. 1994. С. 5-45.

20. Дубинина М.Н. Ремнецы фауны СССР. М, Л: Наука, 1966. 261 с

21. Дубовская А.Я. Сравнительное исследование потребления белков различной биологической ценности цестодами Bothriocephalus scorpii И Труды Всесоюзного института гельминтологии. 1971. Т. 17. С. 41-45.

22. Дубовская А.Я. Исследование протеолитической активности у некоторых видов цестод // Паразитология. 1973. Т. 7. Вып. 2 С. 154159.

23. Еренская А.С. Изучение протеолитической активности лентеца широкого // Актуальные вопросы гигиены питания. Труды ЛОГМИ. 1974. Т. 107. С. 67-71.

24. Извекова Г.И. Характеристика транспорта глюкозы у цестоды Eubothrium rugosum И Паразитология. 1988 а. Т. 22. № 3. С. 210-215.

25. Извекова Г.И. Особенности транспорта углеводов у цестоды Eubothrium rugosum II Паразитология. 1988 б. Т. 22. № 4. С. 337-341.

26. Извекова Г.И. Транспорт некоторых углеводов у цестоды Triaenophorus nodulosus II Паразитология. 1989. Т. 23. № 3. С. 222-228.

27. Извекова Г.И. Динамика десорбции карбогидраз с поверхности кишечника рыб и паразитирующих в них цестод // Паразитология. 1990. Т. 24. №6. С. 485-492.

28. Извекова Г.И. Некоторые характеристики гидролиза белков на пищеварительно-транспортных поверхностях цестоды Eubothrium rugosum и кишечника ее хозяина налима // Паразитология. 1991. Т. 25. В. 3. С. 244-249.

29. Извекова Г.И. Содержание белка, углеводов и транспорт глюкозы в разных частях стробилы у цестоды Eubothrium rugosum II Паразитология. 1997. Т. 31. № 2. С. 90-96.

30. Извекова Г.И. Некоторые аспекты паразито-хозяинных отношений в системе Ligula intestinalis лещ // Экологический мониторинг паразитов. С-Петербург. 1997. С. 147.

31. Извекова Г.И. Закономерности процессов ассимиляции пищи у цестод и их хозяев рыб // Роль российской гельминтологической школы в развитии паразитологии. Москва. 1997. С. 24.

32. Извекова Г.И. Характерные особенности паразито-хозяинных отношений в системе Ligula intestinalis лещ // Проблемы цестодологии. Сборник научных трудов . Сп-б: ЗИН РАН. 1998. С. 5059.

33. Извекова Г.И. Физиологическая специфика взаимоотношений между Triaenophorus nodulosus (Cestoda) и его хозяевами рыбами // Взаимоотношения паразита и хозяина. Москва. 1998. С. 29.

34. Извекова Г.И. Некоторые аспекты паразито-хозяинных отношений в системе Ligula intestinalis (L.) (Cestoda, Pseudophyllidea) лещ // Известия АН. Серия биологическая. 1999. № 4. С.432-438.

35. Извекова Г.И. Ligula intestinalis (Cestoda): своеобразие углеводного обмена // История развития и современные проблемы гельминтологии в России. Москва. 1999. С. 19.

36. Извекова Г.И. Физиологическая специфика взаимоотношений между Triaenophorus nodulosus (Cestoda) и его хозяевами рыбами // Паразитология. 2001 а. Т.35. Вып.1. С.60-68.

37. Извекова Г.И. Ligula intestinalis (Cestoda, Pseudophyllidea): некоторые аспекты углеводного обмена плероцеркоидов // Биол. внутр. вод. 2001 б. №2. С. 101-106.

38. Извекова Г.И. Особенности заключительных этапов углеводного обмена у цестод Ligula intestinalis и Triaenophorus nodulosus II Проблемы цестодологии. Товарищество научных изданий КМК, Москва. 2002 а. В. 2. С. 97-111.

39. Извекова Г.И. Активность протеаз микрофлоры пищеварительно-транспортных поверхностей кишечника щуки и паразитирующего в нем Triaenophorus nodulosus (Pallas, 1781) (Cestoda, Pseudophyllidea) // Биол. внутр. вод. 2003 а. № 2. С.96-101.

40. Извекова Г.И. Характеристика заключительных этапов углеводного обмена у цестоды Eubothrium rugosum (Cestoda, Pseudophyllidea) // Паразитология. 2003 в. Т. 37. № 6. С. 496-502.

41. Извекова Г.И. Гидролитическая активность ферментов микрофлоры, ассоциированной с пищеварительно-транспортными поверхностями кишечников рыб и паразитирующих в них цестод // Паразиты рыб: современные аспекты изучения. Борок. 2003. С. 24.

42. Извекова Г.И. Некоторые особенности заключительных этапов углеводного обмена у цестоды Eubothrium rugosum II Паразиты рыб: современные аспекты изучения. Борок. 2003. С. 25.

43. Извекова Г.И. Трофические отношения в системе хозяин паразит -симбионтная микрофлора // Трофические связи в водных сообществах и экосистемах. Борок. 2003. С. 45-46.

44. Извекова Г.И. Функционирование пищеварительной системы рыб при заражении гельминтами: роль симбионтной микрофлоры // Механизмы функционирования висцеральных систем. С-Петербург. 2003. С. 125.

45. Извекова Г.И. Пищевые взаимоотношения рыб и паразитирующих в них цестод: роль ферментов симбионтной микрофлоры // Сибирская зоологическая конференция. Новосибирск. 2004. С. 377.

46. Извекова Г.И. Роль симбионтной микрофлоры в пищеварительных процессах рыб и паразитирующих в них цестод // Современные проблемы физиологии и биохимии водных организмов. Петрозаводск. 2004. С. 56.

47. Извекова Г.И. Активность карбогидраз симбионтной микрофлоры и их роль в процессах пищеварения у рыб и паразитирующих в них цестод (на примере щуки и Triaenophorus nodulosus) И Журнал эвол. биох. физиол. 2005 б. Т.41. № 4. С. 325-331.

48. Извекова Г.И. Пищевые адаптации у низших цестод паразитов рыб // Паразитологические исследования в Сибири и на Дальнем Востоке. Новосибирск. 2005. С. 78-80.

49. Извекова Г.И. Симбионтное пищеварение как физиологическая коадаптация в условиях кишечного биоценоза (рыбы цестоды -микрофлора) // XIII Международное совещание по эволюционной физиологии. С-Петербург. 2006. С. 90.

50. Извекова Г.И. Гидролитическая активность ферментов микрофлоры и ее роль в процессах пищеварения у леща и паразитирующего в его кишечнике Caryophyllaeus laticeps (Cestoda, Caryophyllidea) // Известия РАН. Серия биологическая. 2006. № 3. С. 358-364.

51. Извекова Г.И, Комова А.В. Роль а-амилазы микрофлоры в процессах пищеварения у низших цестод и их хозяев рыб // Основные достижения и перспективы развития паразитологии. Москва. 2004. С. 121-122.

52. Извекова Г.И., Комова А.В. Роль а-амилазы симбионтной микрофлоры в процессах пищеварения у низших цестод и их хозяев рыб // Известия РАН. Серия биологическая. 2005. № 2. С. 208-213.

53. Извекова Г.И., Корнева Ж.В. Симбионтное пищеварение у рыб при заражении цестодами // Механизмы функционирования висцеральных систем. С-Петербург. 2005. С. 103-104.

54. Извекова Г.И., Кузьмина В.В. Сравнительная характеристика некоторых особенностей транспорта углеводов у цестод и в кишечнике их хозяев рыб // Биол. внутр. вод: инф. бюл. Л.: Наука. 1988. № 79. С. .38-41.

55. Извекова Г.И., Кузьмина В.В. Гидролиз и транспорт Сахаров у цестоды Caryophyllaeus laticeps и в кишечнике ее хозяина леща // Паразитология. 1991. Т. 25. № 6. С. 536-543.

56. Извекова Г.И., Лаптева Н.А. Закономерности пищеварительно-транспортных процессов у цестод и в кишечнике их хозяев-рыб // Механизмы функционирования висцеральных систем. С-Петербург. 2001. С. 145.

57. Извекова Г.И., Лаптева Н.А. Микрофлора пищеварительно-транспортных поверхностей кишечника щуки и паразитирующего в нем Triaenophorus nodulosus (Cestoda, Pseudophyllidea) // Биол. внутр. вод. 2002. № 4. С. 75-79.

58. Извекова Г.И., Лаптева Н.А. Микрофлора, ассоциированная с пищеварительно-транспортными поверхностями рыб и паразитирующих в них цестод // Экология. 2004 а. № 3. С. 205-209.

59. Извекова Г.И., Лаптева Н.А. Симбионтная микрофлора, ассоциированная с поверхностью плероцеркоида Ligula intestinalis (L.) (Cestoda, Pseudophyllidea) // Гидробиол. журн. 2004 б. Т. 40. № 2. С. 7886.

60. Исследование пищеварительного аппарата у человека (обзор современных методов). Л.: Наука. 1969. 260 с.

61. Коновалов Ю.Д. Свойства, локализация, роль и возможные пути регуляции активности протеиназ и аминотрансфераз в раннем онтогенезе рыб // Усп. совр. биол. 1986. Т. 101. В. 3. С. 359-373.

62. Копылов А.И., Крылова И.Н. Структура бактериопланктона Рыбинского водохранилища // Современное состояние экосистемы Рыбинского водохранилища. СПб.: Гидрометеоиздат. 1993. С. 141-173.

63. Корнева Ж.В. Ультраструктурная организация бактерий, ассоциированных с тегументом цестоды Triaenophorus nodulosus и кишечником ее хозяина щуки // Сибирская зоологическая конференция. Тезисы докладов. Новосибирск. 2004. С. 384.

64. Корнева Ж.В. Симбионтная микрофлора, колонизирующая тегумент протеоцефалидных цестод // Паразитологические исследования в Сибири и на Дальнем Востоке. Материалы II межрегиональной научной конференции. Новосибирск. 2005. С. 92-94.

65. Корнева Ж.В., Плотников А.О. Симбионтная микрофлора, колонизирующая тегумент Triaenophorus nodulosus (Cestoda) и кишечник его хозяина щуки // Паразитология. В печати.

66. Корнева Ж.В., Плотников А.О. Симбионтная микрофлора, колонизирующая тегумент протеоцефалидных цестод и кишечник их хозяев рыб// Паразитология. В печати.

67. Краснощеков Г.П. Паразитарные системы: II. Воспроизводство популяций паразита и их биоценологические взаимодействия. Тольятти. 1996. 67 с.

68. Краснощеков Г.П. Паразитизм: критерии и экологический статус // Успехи совр. биол. 2000. Т. 120. № 3. С. 253-264.

69. Крылов Ю.М., Долгих Е.А., Долгих В.В. Активность лактатдегидрогеназы и изменение спектра ее изоферментов в печени леща Abramis brama при паразитировании плероцеркоидов цестоды Digramma interrupta // Паразитология. 1993. Т.27. Вып. 4. С. 332-335.

70. Кудрявцев В.М. Численность бактерий в зарослях и обрастаниях высших водных растений // Гидробиол. журн. 1978. Т. 14. № 6. С. 1420.

71. Кузнецов С.И., Дубинина Г.А. Методы изучения водных микроорганизмов. М.: Наука, 1989. 283 с.

72. Кузьмина В.В. Применение метода последовательной десорбции а-амилазы с отрезков кишки при изучении мембранного пищеварения у рыб // Вопр. ихтиол. 1976. Т. 16. В. 5. С. 944-946.

73. Кузьмина В.В. Мембранное пищеварение у круглоротых и рыб // Вопр. ихтиол. 1978. Т. 18. Вып. 4(111). С. 684-696.

74. Кузьмина В.В. Общие закономерности мембранного пищеварения у рыб и его адаптивные перестройки / Автореф. дис. . докт. биол. наук. JL: ИЭФиБ, 1986. 39 с.

75. Кузьмина В.В. Активность пищеварительных ферментов слизистой кишечника у различающихся по экологии костистых рыб Черного моря //Вопр. ихтиологии. 1992. Т. 32. Вып. 2. С. 141-148.

76. Кузьмина В.В. Защитная функция пищеварительного тракта рыб // Вопр. ихтиол. 1995. Т. 35. № 1. С.86-93.

77. Кузьмина В.В. Трофология рыб (физиолого-биохимические аспекты) // Биол. внутр. вод. 1996. № 1. С. 14-23.

78. Кузьмина В.В. Трофическая, защитная и трансформационная функции пищеварительной системы рыб // Вопр. ихтиол. 1999. Т.39. № 1. С.69-77.

79. Кузьмина В.В. Физиологические адаптации (на примере экзотрофии у рыб)//Журн. эвол. биохим. физиол. 2001. Т. 37. № 3 С. 215-224.

80. Кузьмина В.В. Физиолого-биохимические основы экзотрофии рыб. М.: Наука. 2005. 300 с.

81. Кузьмина В.В., Голованова И.Л. Влияние рН на амилолитическую активность слизистой кишечника у некоторых видов пресноводных костистых рыб // Вопросы ихтиологии. 1980. Т. 20. В. 3. С. 566-571.

82. Кузьмина В.В, Голованова И.Л., Извекова Г.И. Влияние различных факторов на процесс всасывания глюкозы в кишечнике рыб // Биол. внутр. вод: инф. бюл. 1987. № 76. С. 41-44.

83. Кузьмина В.В, Извекова Г.И. Механизмы транспорта углеводов в кишечнике пресноводных костистых рыб // Биол. внутр. вод: инф. бюл. 1988. № 79. С. 42-44.

84. Кузьмина В.В, Извекова Г.И. Влияние температуры на кинетические характеристики сахаразы слизистой кишечника рыб // Биол. внутр. вод: инф. бюл. 1992. № 92. С. 58-63.

85. Кузьмина В.В, Извекова Г.И, Куперман Б.И. Особенности физиологии питания цестод и их хозяев рыб // Усп. совр. биол. 2000. Т. 120. № 4. С. 384-394.

86. Кузьмина В.В, Куперман Б.И. Сравнительная характеристика мембранного пищеварения у цестод и их хозяев рыб // Паразитология. 1983. Т. XVII. № 6. С.436-442.

87. Кузьмина В.В, Скворцова Е.Г. Активность протеиназ энтеральной микробиоты рыб: ревизия методических подходов // Биол. внутр. вод. 2002 а. № 3. С. 76-83.

88. Кузьмина В.В, Скворцова Е.Г. Бактерии желудочно-кишечного тракта и их роль в процессах пищеварения у рыб // Успехи совр. биол. 2002 б. Т. 122. №6. С. 569-579.

89. Кузьмина В.В, Скворцова Е.Г, Первушина К.А. Активность протеиназ энтеральной микробиоты рыб: влияние температуры и рН // Биол. внутр. вод. 2002. № 4. С. 69-74.

90. Куперман Б.И. Ленточные черви рода Triaenophorus паразиты рыб. Л.: Наука. 1973. 207 с.

91. Куперман Б.И. Биология и цикл развития Eubothrium rugosum (Cestoda: Pseudophyllidea) // Проблемы гидропаразитологии. Киев, 1978. С. 105112.

92. Куперман Б.И. Ультраструктура покровов цестод и ее значение для систематики // Паразитол. сборник Зоологического института АН СССР. Л., 1980. Т. 29. С. 84-95.

93. Куперман Б.И. Функциональная морфология низших цестод. 1988. Л.: Наука. 168 с.

94. Куперман Б.И., Извекова Г.И. Таликина М.Г., Папченкова Г.А. Популяционные и морфофизиологические аспекты паразито-хозяинных отношений при лигулезе // VI Всероссийский симпозиум по популяционной биологии паразитов. Борок. 1996. С. 51-52.

95. Куперман Б.И., Извекова Г.И. Кузьмина В.В. Морфологические и физиологические аспекты взаимоотношений цестод и их хозяев рыб // Совещание, посвященное 90-летию со дня рождения академика Б.Е. Быховского. С-Петербург. 1998. С. 52-54.

96. Куперман Б.И., Кузьмина В.В. Ультраструктура кишечного эпителия щуки Esox lucius L. (Esocidae) // Вопр. ихтиол. 1984. Т. 24. Вып. 3. С. 431-437.

97. Куперман Б.И., Кузьмина В.В., Веригина И.А. Ультраструктура кишечного эпителия налима Lota lota (L.) (Gadidae) // Вопр. ихтиол. 1985. Т. 25. Вып. 2. С. 275-282.

98. Куровская Л.Я. Изучение трофических связей лентецов и рыб и влияния на них ряда антгельминтиков: Автореф. дис. канд.биол.наук. Киев, 1978. 20 с.

99. Куровская Л.Я. Сопряженность процессов пищеварения в системе Bothriocephalus acheilognathi карп // Паразитология. 1991. Т. 25. Вып. 5. С. 441-449.

100. Кушак Р.И. Пищеварительно-транспортная система энтероцитов. Рига. 1983. 304 с.

101. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высшая школа. 1980. 294 с.

102. Лубянскене В, Вирбицкас Ю., Янкявичюс К. и др. Облигатный симбиоз микрофлоры пищеварительного тракта и организма. Вильнюс: Мокслас, 1989. 192 с.

103. Лубянскене В, Шивокене Я, Тряпшене О, Лясаускене Л, Грибаускене В. Микрофлора пищеварительного тракта рыб // Acta hydrobiologica Lituanica. 1980. V. l.P. 87-94.

104. Лубянскене В, Ястюгинене Р. Микроорганизмы пищеварительного тракта плотвы озера Друкшяй и их активность // Ekologija (Vilnius). 1995. №3. С. 17-22.

105. Метельский С.Т, Уголев A.M. Сравнение двух путей транспорта натрия через стенку тонкой кишки крысы in vitro // ДАН СССР. 1983. Т. 269. №3. С. 767-768.

106. Мосолов В.В. Протеолитические ферменты. М.: Наука. 1971. 413 с.

107. Никольский Н.Н. Всасывание Сахаров // Физиология всасывания. Л. «Наука». 1977. С. 249-277.

108. Оксов И.В. Тканевой уровень организации системы паразит хозяин // Паразитология. 1991. Т. 25. № 1. С. 3-12.

109. Олескин А.В. Надорганизменный уровень взаимодействия в микробных популяциях //Микробиология. 1993. Т. 62. № 3. С. 389-403.

110. Осадчая А.И, Кудрявцев В.А, Сафронов Л.А, Смирнов В.В. Влияние источников питания на синтез экзополисахаридов и аминокислот штаммами Bacillus subtilis II Мжробюл. журн. 1999. 61. № 5. С. 56-63.

111. Пименов Е.В., Дармов И.В, Бывалов А.А, Рудой Б.А, Чеботарев Е.В, Рощевский М.П. Актуальные проблемы физиологии микроорганизмов //Журн. эволюц. биохим. физиол. 2004. Т.40. № 2. С. 180-186.

112. Поддубный А.Г. Экологическая топография популяций рыб в водохранилищах. Л, 1971. 312 с.

113. Подцубная Л.Г. Электронно-микроскопическое исследование микрофлоры, ассоциированной с тегументом цестоды Eubothriumrugosum, паразита кишечника налима // Паразитология. 2005. Т.39. № 4. С.293-298.

114. Прист Ф. Внеклеточные ферменты микроорганизмов. М.: Мир. 1987. 117 с.

115. Пронина С.М., Пронин Н.М. Взаимоотношения в системах гельминты рыбы М.: Наука. 1988. 176 с.

116. Протасова Е.Н., Куперман Б.И., Ройтман В.А., Поддубная Л.Г. Кариофиллиды фауны СССР М.: Наука, 1990. 238 с.

117. Ройтман В.А., Беэр С.А. Паразитарные системы: понятия, концепции, структуры, свойства, функции в экосистемах // Успехи общей паразитологии. Труды Института паразитологии. М.: Наука. 2004. Т. XLIV. С. 273-317.

118. Роджерс Г.Дж. Метаболизм бактерий. Иностранная литература. 1963. 496 с.

119. Родина А.Г. Методы водной микробиологии. М.-Л.: Наука, 1965. 363 с.

120. Романенко В.И., Кузнецов С.И. Экология микроорганизмов пресных водоемов. Л.: Наука, 1974. 194 с.

121. Рощина Г.М. Особенности всасывания углеводов у некоторых видов костистых рыб // Журн. эволюц. биох. физиол. 1981. Т. 17. № 1. С. 9394.

122. Сергеева Е.Г., Беэр С.А. Факторы паразито-хозяинной специфичности // Актуальные проблемы общей паразитологии. Труды Института паразитологии РАН. М.: Наука. 2000. Т. XLII. С. 192-204.

123. Скворцова Е.Г. Роль протеиназ объектов питания и энтеральной микробиоты в процессах пищеварения у рыб разных экологических групп. Автореф. дис. канд. биол. наук. Борок. 2002. 21 с.

124. Смит Л.С. Введение в физиологию рыб. М.: Агропромиздат. 1986. 166 с.

125. Сопрунов Ф.Ф. Успехи в изучении углеводного обмена гельминтов // Труды ГЕЛАН СССР. 1984. Т. 32. С. 121-154.

126. Сопрунов Ф.Ф. Молекулярные основы паразитизма. М.: Наука. 1987. 224 с.

127. Сорвачев К.Ф. Основы биохимии питания рыб. М.: Легкая и пищевая промышленность, 1982. 247.С.

128. Стасюнайте П., Шивокене Я., Скродените В. Влияние вида корма на взаимосвязь микробиологических и ростовых показателей кумжи {Salmo trutta trutta L.) // Ekologija (Vilnius). 1996. № 1. C. 13-17.

129. Уголев A.M. Видовые и индивидуальные адаптации пищеварительных желез // Изв. АН СССР. Сер. биологическая. 1960. № 5. С. 768-774.

130. Уголев A.M. Физиология и патология пристеночного (контактного) пищеварения. Л.: Наука. 1967. 230 с.

131. Уголев A.M. Мембранное пищеварение. Полисубстратные процессы, организация и регуляция. Л.: Наука. 1972. 356 с.

132. Уголев A.M. Эволюция пищеварения и принципы эволюции функций. 1985. Л.: Наука. 544 с.

133. Уголев A.M. Теория адекватного питания и трофология. С-П.: Наука, 1991.272 с.

134. Уголев A.M., Иезуитова Н.Н. Мембранное пищеварение. Структурная и функциональная организация // Успехи физиол. наук. 1985. Т. 16. № 4. С. 3-34.

135. Уголев A.M., Кузьмина В.В. Пищеварительные процессы и адаптации у рыб. С-П.: Гидрометеоиздат, 1993. 238 с.

136. Уголев A.M., Кузьмина В.В., Рощина Г.М., Смирнова Л.Ф., Голованова И.Л., Груздков А.А. Характеристика мембранного гидролиза и транспорта у рыб // Известия АН СССР (серия биол.). 1989. № 3. С. 341-349.

137. Чахава О.В. Гнотобиология. М.: Медицина, 1972. 200 с.

138. Чахава О.В., Горская Е.М. Гнотобиологический принцип исследования взаимоотношений паразита с хозяином // Паразиты и паразитозы человека и животных. Киев: Наукова Думка, 1982. С.57-63.

139. Чахава О.В, Горская Е.М, Рубан С.З. Микробиологические и иммунологические основы гнотобиологии. М.: Медицина, 1982. 160 с.

140. Шивокене Я.С. Роль микроорганизмов пищеварительного тракта в питании прудовых рыб. 23. Изменчивость физиологических групп микроорганизмов в зависимости от характера питания рыб // Труды Академии наук Литовской ССР. 1980. Т. 2(90). С. 77-83.

141. Шивокене Я. С. Активность амилолитических и протеолитических ферментов микрофлоры химуса, слизистой пищеварительного тракта и пищи двухлеток карпа при кормлении комбикормом // Труды Академии наук Литовской ССР Серия В. 1984. Т. 1 (85). С. 47-54.

142. Шивокене Я. Симбионтное пищеварение у гидробионтов и насекомых. Вильнюс: Мокслас, 1989. 223 с.

143. Шивокене Я, Мицкенене Л. Изменчивость бактериоценозов пищеварительного тракта рыб в зависимости от питания // Трофические связи в водных сообществах и экосистемах. Материалы Международной конференции. Борок. 2003. С. 137.

144. Шивокене Я, Мицкенене Л, Восилене 3. Влияние сырой нефти на бактериоценоз кишечника радужной форели // Актуальные проблемы экологической физиологии, биохимии и генетики животных. Материалы международной научной конф. Саранск. 2005. С. 273-276.

145. Шивокене Я., Мицкенене Л., Лазаускене Л., Сабалюнене И., Репечка Р., Вайтонис Г. Микроорганизмы, ассоциированные с кишечником гидробионтов // Ekologija (Vilnius). 1992. № 3. С. 3-15.

146. Шивокене Я., Мицкенене Л., Милерене Э., Репечка Р., Вайтонис Г. Микрофлора пищеварительного тракта гидробионтов Каунасского водохранилища // Ekologija (Vilnius). 1996. № 1. С. 29-34.

147. Шивокене Я.С., Трепшене О.П. Численность и биомасса бактерий пищеварительного тракта прудовых рыб в зависимости от особенностей их питания // Вопросы ихтиол. 1985. 25. 5. С. 821-827.

148. Шишова-Касаточкина О.А., Дубовская А.Я. Некоторые стороны белкового обмена у цестод-паразитов позвоночных различных классов // Цестоды и трематоды. Морфология, систематика и экология. Тр. ГЕЛАН. 1977. Т. 27. С. 211-221.

149. Шишова-Касаточкина О.А., Леутская З.К. Биохимические аспекты взаимоотношений гельминта и хозяина. М.: Наука, 1979. 279 с.

150. Шишова-Касаточкина О.А., Павлов А.В. К вопросу о причинах резистентности гельминтов по отношению к протеолитическим ферментам кишечника хозяина // Труды ГЕЛАН СССР. 1969. Т. 20. С. 195-204.

151. Al-Harbi А.Н., Uddin M.N. Seasonal variation in the intestinal bacterial flora of hybrid tilapia (Oreochromis niloticus * Oreochromis aureus) cultured in earthen ponds in Saudi Arabia // Aquaculture. 2004. V. 229. P. 37-44.

152. Anson M. The estimation of pepsin, tripsin, papain and eathepsin with hemoglobin // J. Gener. Phys. 1938. V.22. № 1. P. 79-83.

153. Arme C. Ontogenetic changes in helminth membrane function // Parasitology 1988. 96 (Suppl.). S83-S104.

154. Arme C., Bridges J. F., Hoole D. Infections in the vertebrate host // Biology of the Eucestoda. Academic Press, 1983. V. 2. P. 449-538.

155. Arme С. Ligulosis in two cyprinid host: Rutilus rutilus and Gobio gobio II Helminthologia. 1997. V. 34. № 4. p. 191-196.

156. Arme C., Owen, R.W. Observations on a tissue response within the body cavity of fish infected with the plerocercoid of Ligula intestinalis (L.) (Cestoda) // J. Fish Biol. 1970. 2. 35-37.

157. Arme C., Read C.P. A surface enzyme in Hymenolepis diminuta (Cestoda) // J. Parasitol. 1970. V. 56. P. 514-516.

158. Austin B. The bacterial microflora of fish // The Scientific Word Journal. 2002. 2. P. 558-572.

159. Austin В., Al-Zahrani A. M. J. The effect of antimicrobial compounds on the gastrointestinal microflora of rainbow trout, Salmo gairdueri Rchardson //J. Fish Biol. 1988. V. 33. P. 1-14.

160. Bailey H.H., Fairbairn D. Lipid metabolism in helminth parasites. V. Absorption of fatty acids and monoglycerides from micellary solution by Hymenolepis diminuta (Cestoda) // Сотр. Biochem. Physiol. 1968. V. 26. P. 819-836.

161. Bairagi A., Ghosh K.S., Sen S.K., Ray A.K. Enzyme producing bacterial flora isolated from fish digestive tracts // Aquaculture International. 2002. V. 10. P. 109-121.

162. Barker S.B., Summerson W.H. The colorimetric determination of lactic acid in biological material // J. Biol. Chem. 1941. V. 138. № 2. P. 535-554.

163. Barrett J. The anaerobic end-products of helminthes // Parasitol. 1984. V. 88. № 1. P. 179-198.

164. Barrett J. Developmental aspects of metabolism in parasites // International J. for Parasitol. 1987. V. 17. P. 105-110.

165. Barrett J., Precious W.Y. Application of metabolic control analysis to the pathways of carbohydrate breakdown in Hymenolepis diminuta // Intern. J. for Parasitol. 1995. V. 25. № 4. P. 431-436.

166. Behm С.A, Bryant С. Studies of regulatory metabolism in Moniezia expansa: general consideration // Intern. J. for Parasitol. 1975. V. 5. P. 209217.

167. Behm C.A, Bryant C, Jones A.J. Studies glucose metabolism in Himenolepis diminuta using 13C nuclear magnetic resonance // Int. J. Parasitol. 1987. V. 17. №7. P. 1333-1341.

168. Bennet E.M., Behm C.A, Bryant C. The role of the host in the regulation of end-product formation in two strains of the rat tapeworm, Hymenolepis diminuta II Int. J. Parasitol. 1990. V.20. №> 7. P. 841-848.

169. Bennet E.M, Heath P.A, Bryant C. The effects of changes in the definitive host environment on the metabolism of Hymenolepis diminuta during growth and maturation // Int. J. Parasitol 1993. V.23. № 1. P. 57-68.

170. Berg R.D. Bacterial translocation from the gastrointestinal tract // Trends Microbiol. 1995. № 3(4). P. 149-154.

171. Berg R.D. The indigenous gastrointestinal microflora // Trends in Mirobiol. 1996. Vol. 4. № 11. P. 430-435.

172. Beveridge T.J. Bacterial structure and its implication in the mechanisms of infection: a short review // Can. J. Microbiol. 1980. V. 26. № 6. P. 643-653.

173. Blum S, Alvarez S, Haller D, Perez P, Schiffrin E.J. Intestinal microflora and the interaction with immunocompetent cells // Antonie van Leeuwenhoek. 1999. V. 76. P. 199-205.

174. Bolla R.J, Robesrts H.S. Developmental physiology of cestodes X. The effect of crowding on carbohydrate levels and on RNA, DNA and protein synthesis in Hymenolepis diminuta И Сотр. Biochem. Physiol. 1971.V. 40. № ЗА P. 777-787.

175. Brand T. von Biochemistry of parasites. Academic Press.: New York, London. 1966.

176. Bry L, Falk P.G, Midtvedt T, Gordon J.I. A model of host-microbial interactions in an open mammalian ecosystem // Science. 1996. V. 273. P. 1380-1383.

177. Bundy D.A., Golden M.H.N. The impact of host nutrition on gastrointestinal helminth populations // Parasitology. 1987. V. 95. № 3. P. 623-635.

178. Cahill M.M. Bacterial flora of fishes: a review // Microb. Ecol. 1990. V. 19. № 1. P. 21-41.

179. Campbell A.C., Buswell J.A. The intestinal microflora of farmed Dover sole (Solea solea) at different stages of fish development // J. of Applied Bacteriology. 1983. V. 55. P. 215-223.

180. Cornford E.M. Glucose utilization rates are linked to the internal free glucose gradient in the rat tapeworm // Exp. Parasitol. 1990. V. 70. № 1. P. 25-34.

181. Cyr D., Gruner S., Mettrick D.F. Hymenolepis diminuta: uptake of 5-hydroxytpyptamine (serotonin), glucose, and changes in worm glycogen levels // Can. J. Zool. 1983. V. 61. № 7. P. 1469-1474.

182. Clements K.D. Fermentation and gastrointestinal microorganisms in fishes // Gastrointestinal microbiology. London and New York: New York, 1997. V. l.P. 156-198.

183. Crompton D.W.T., Hall A. Parasitic infection and host nutrition // Parasitology. 1981. V. 82. № 4. P. 77-82.

184. Dahulat E., Kausch H. Chitinase activity in the digestive tract of the cod Gadus morhua (L.) // J. Fish Biol. 1984. V. 24. № 2. P. 125-133.

185. Dalton J.P., Skelly P., Halton D.W. Role of the tegument and gut in nutrient uptake by parasitic platyhelminths // Can. J. of Zoology. 2004. V. 82. № 2. P. 221-232.

186. Dike S.C., Read C.P. Tegymentary phosphohydrolases of Hymenolepis diminuta // The Journal of Parasitology. 1971. V. 57. P. 81-87.

187. Ezeasor D.N., Stokoe W.M. Light and electron microscopic studies on the absorptive cells of the intestine caeca and rectum of the adult rainbow trout, Salmo gairdneri Buch // J. Fish Biol. 1981. V. 18. № 5. P. 527-544.

188. Fange R., Grove D. Digestion // Fish physiology. New York; San Francisco; London. 1979. V. 8. P. 162-260.

189. Fidopiastis P.M. Microbial activity in the gut of an herbivorous marine fish // Masters Abstracts International. 1996. V. 34. № 3. P. 1102.

190. Fisher F.M., Jr, Read C.P. Transport of sugars in the tapeworm Calliobothrium verticillatum II Biol. Bull. Mar. Biol. Lab.: Woods Hole. 1971. 140. P. 46-62.

191. Gamble H.R., Pappas P.W. Solubilization of membrane-bound ribonuclease (RNase) and alkaline phosphatase from the isolated brush border of Hymenolepis diminuta II The Journal of Parasitology. 1980. V. 66. P. 434438.

192. Gamble H.R., Pappas P.W. Type 1 phosphodiesterase in the isolated brush border membrane of Hymenolepis diminuta II The Journal of Parasitology. 1981. V. 67. P. 617-622.

193. Gordon H.A., Pesti L. The gnotobiotic animal as a tool in the study of host microbial relationships // Bact. Rev. 1971. V. 35. № 4. P. 390-429.

194. Grisez L., Reyniers J., Verdonck L., Swings J., Ollevier F. Dominant intestinal microflora of sea bream and sea bass larvae, from two hatcheries, during larval development// Aquaculture. 1997. 155. P. 387-399.

195. Gruner S., Mettrick D.F. The effect of 5-hydroxytryptamine on glucose absorption by Hymenolepis diminuta and by the mucosa of the rat small intestine // Can. J. Zool. 1984. V. 62. № 5. P. 798-803.

196. Gunalp A, Sellioglu В., Uras G. The effects of intestinal parasites on enteric bacterial flora//Mikrobiol. Bui. 1979. 13(1). P.73-79.

197. Halton D.W. Nutritional adaptations to parasitism within the platyhelminthes // Int. J. for Parasitol. 1997. V. 27. № 6. P. 693-704.

198. Hansen G.H., Olafsen J.A. Bacterial interactions in early life stages of marine cold water fish // Microbiol. Ecology. 1999. V. 38. P. 1-26.

199. Harris В. G. Protein metabolism // Biology of the Eucestoda. Academic Press. 1983. V. 2. P. 335-341.

200. Henderson D. The effect of worm age, weight and number in the infection on the absorption of glucose by Hymenolepis diminuta II Parasitology. 1977. V. 75. № 3. P. 277-284.

201. Hockley D.J. Schistosoma mansoni: the development of the cercarial tegument // Parasitol. 1972. V. 64. № 2. P. 242-252.

202. Holben W.E, Williams P, Saarinen M, Sarkilahti L.K, Apajalahti J.H.A. Phylogenetic analysis of intestinal microflora indicates a novel mycoplasma phylotype in farmed and wild salmon // Microbial ecology. 2002. V. 44. №2. P. 175-185.

203. Hollanders F.D. The production of lactic acid by the perfused rat diaphragm // Сотр. Bioch. Physiol. 1968. V. 26. P. 907-916.

204. Hooper L.V, Bry L, Falk P.G, Gordon J.I. Host-microbial symbiosis in the mammalian intestine: Exploring an internal ecosystem // BioEssays. 1998. V. 20. №4. P. 336-343.

205. Horsley R.W. A review of the bacterial flora of teleosts and elasmobranches, including methods for its analysis // J. Fish Biology. 1977. V. 10. P. 529553.

206. Insler G.D., Roberts L.S. Developmental physiology of cestodes. XV. A system for testing possible crowding factors in vitro // J. Exp. Zool. 1980. V. 211. P. 45-54.

207. Izvekova G.I. Peculiarities of the final stages of carbohydrate metabolism in Ligula intestinalis plerocercoids (Cestoda, Pseudophyllidea) // Helminthologia. 2000. V. 37. № 1. P. 9-13.

208. Izvekova G.I. Triaenophorus nodulosus (Cestoda, Pseudophyllidea): final stages of carbohydrate metabolism // Helminthologia. 2001. V. 38. № 1. P. 23-27.

209. Izvekova G.I., Kuperman B.I., Kuz'mina V.V. Digestion and digestive-transport surfaces in cestodes and their fish hosts// Сотр. Biochem. Physiol. 1997. V. 118A. № 4. P. 1165-1171.

210. Jankauskiene R. Defence mechanisms in fish: Lactobacillus genus bacteria of intestinal wall in feeding and hibernating carps // Ekologija (Vilnius). 2000 a. № l.P. 3-6.

211. Jankauskiene R. The dependence of the species composition of lactoflora in the intestinal tract of carps upon their age // Acta Zoologica Lituanica. 2000 b. V. 10. №3. P. 78-83.

212. Jankauskiene R. Defence mechanisms in fish: frequency of the genus Lactobacillus bacteria in the intestinal tract microflora of carps // Biologija. 2002. №2. P. 13-17.

213. Kapoor B.G., Smit H., Verigina I.A. The alimentary canal and digestion in teleosts // Advances Mar. Biol. 1975. V. 13. P. 109-239.

214. Karasov W.H., Buddington R.K., Diamond J.M. Adaptation of intestinal sugar and amino acid transport in vertebrate evolution. // Transport processes, iono- and osmoregulation. Springer-Verlag Berlin Heidelberg. 1985. P.227.

215. Knowles W.J., Oaks J.A. Isolation and partial biochemical characterization of the brush border plasma membrane from the cestode Hymenolepis diminuta II The Journal of Parasitology. 1979. V. 65. P. 715-731.

216. Koushik G., Kumar S.S., Kumar R.A. Characterization of bacilli isolated from the gut of rohu, Labeo rohita, fingerlings and its significance in digestion // J. Appl. Aquculture. 2002. 12. № 3. P. 33-42.

217. Korting W, Barrett J. Carbohydrate catabolism in the plerocercoids of Schistocephalus solidus (Cestoda: Pseudophyllidea) // Int. J. Parasitol. 1977. V. 7. P. 411-417.

218. Krogdahl A., Hemre G.-I., Mommsen T.P. Carbohydrates in fish nutrition: digestion and adsorption in postlarval stages // Aquaculture Nutrition. 2005. V. 11. P. 103-122.

219. Kuperman B.I., Kuz'mina V.V. The ultrastructure of the intestinal epithelium in fishes with different types of feeding // Journal of Fish Biology. 1994. V. 44. P. 181-193.

220. Kuz'mina V.V., Gelman A.G. Membrane-linked digestion // Reviews in Fisheries Science. 1997. V. 5. № 2. P. 99-129.

221. Kuzmina V.V., Golovanova I.L., Izvekova G.I. Influence of temperature and season on some characteristics of intestinal mucosa carbohydrases in six freshwater fishes // Сотр. Biochem. Physiol. 1996. V. 113B. № 2. P. 255260.

222. Kwa B.H. Studies on the sperganum of Spirometra erinacei // International Journal ofParasitilogy. 1972. V. 1. P. 29-33.

223. Laurie J. S. Carbohydrate absorption in cestodes from elasmobranch fishes // Сотр. Biochem. Physiol. 1961. V. 4. P. 63-71.

224. Lee A. Normal flora of animal intestinal surfaces // In: Bitton G., Marshall K.C. (eds) Adsorption of Microorganisms to surfaces. Wiley, New York. 1980. P. 145-173.

225. Lee C.G.I., Ip Y.K. Effect of host fasting and subsequent refeeding on the glycogen metabolizing enzymes in Hymenolepis diminuta (Cestoda) // Biol. Bull. 1986. V. 171. № 2. P. 417-425.

226. Lee D. L., Rothman A.H., Senturia J. Esterases in Hymenolepis and in Hydatigera II Expl. Parasit. 1963. V. 14. P. 285-295.

227. Lindsay G.J.H., Gooday G.W. Chitinilytic enzymes and the bacterial microflora in the digestive tract of cod, Gadus morhua II J. Fish Biol. 1985. V. 26. № 3. P. 255-265.

228. Lumsden R.D. Surface ultrastructure and cytochemistry of parasitic helminths // Exp. Parasitol. 1975. V. 37. № 2. P. 267-339.

229. Lumsden R. D, Gonzalez G., Mills R. R, Viles J. M. Cytological studies on the absorptive surfaces of cestodes. III. Hydrolysis of phosphate esters // J. of Parasitol. 1968. V. 54. P. 524-535.

230. MacCormack W.P., Fraile E.R. Bacterial flora of newly caught Antarctic fish Notothenia neglecta II Polar Biology. 1990. V. 10. № 6. P. 413-417.

231. MacDonald N. L, Stark J.R, Austin B. Bacterial microflora in the gastrointestinal tract of Dover sole (Solea solea L.), with emphasis on the possible role of bacteria in the nutrition of the host // FEMS Microbiol. Lett. 1986. 35. P. 107-111.

232. MacMillan J.R, Santucci T. Seasonal trends in intestinal bacterial flora of farm-raised channel catfish // J. of Aquatic Animal Health. 1990. V. 2. № 3. P. 217-222.

233. Matskasi I. The effect of Bothriocephalus acheilognati infection on the protease and ce-amylase activity in the gut of carp fry // Symposia Biologia Hungarica. 1984. V. 23. P. 119-125.

234. Matskasi I, Juhasz S. Ligula intestinalis (L, 1758): Investigation on plerocercoids and adults for protease and protease inhibitor activities // Parasitol. Hung. 1977. V. 10. P. 51-59.

235. McCracken R.O, Lumsden P.D. Structure and function of parasite surface membranes. I. Mechanism of phlorisin inhibition of hexose transport by the cestode Hymenolepis diminuta II Сотр. Biochem. And Physiol. 1975. V. 50. № l.P. 153-157.

236. McFall-Ngai M.J. Unseen Forces: The influence of bacteria on animal development // Developmental Biology. 2002. V. 242. P.l-14.

237. McManus D.P. Intermediary metabolism in parasitic helminthes // Intern. J. for Parasitol. 1987. V. 17. № 1. P. 79-96.

238. McManus D. P., Sterry P. R. Ligula intestinalis'. intermediary carbohydrate metabolism in plerocercoids and adults // Z. Parasitenk. 1982. Bd. 67. S. 7385.

239. Mead R. W. Histochemical study on the distribution of amylase activity within the intestine of the rat and the effect of cestode (Hymenolepis diminuta) infection // Trans. Am. Microsc. Soc. 1976. V. 95. P. 183-188.

240. Mead R. W. Roberts L. S. Intestinal digestion and absorption of starch in the intact rat: effects of cestode (Hymenolepis diminuta) infection // Сотр. Biochem. Physiol. 1972. V. 41A. P. 749-760.

241. Mettrick D.F. Hymenolepis diminuta: the microbiota, nutritional and physico-chemical gradients in the small intestine of uninfected and parasitized rats // Can. J. Physiol. Pharmacol. 1971. V. 49. P. 972-984.

242. Mettrick D.F. The intestine as an environment for Hymenolepis diminuta И Biology of the Tapeworm Hymenolepis diminuta. Academic Press, London and New York. 1980, P. 281-356.

243. Mettrick D.F., Munro H.N. Studies on the protein metabolism of cestodes // Parasitology. 1965. V. 55. P. 453-466.

244. Mettrick D. F., Podesta R. B. Ecological and physiological aspects of helminth-host interactions in the mammalian gastrointestinal canal // Advances in Parasitology. London and New York: Academic Press, 1974. V. 12. P. 183-279.

245. Mettrick D. F., Rahman M.S., Podesta R. B. Effect of 5-hydroxytryptamine (5-HT-serotonin) on in vitro glucose uptake and glucogen reserves in Hymenolepis diminuta II Mol. and Biochem. Parasitol. 1981. V. 4. № 3-4. P. 217-223.

246. Mickeniene L., Syvokiene J. Changes of the diversity of the bacteriocenosis in the digestive tract of fish under the impact of heavy metals // Ekologija (Vilnius). 2001. №4. P. 11-15.

247. Moczori T. Glycogen distribution and accumulation of radioactive compounds in tissue of mature specimens of Hymenolepis diminuta (Cestoda) after incubation in glucose 14Ci.6 // Acta parasit. Pol. 1975 a. V. 23. P. 135-145.

248. Moczon T. Histochemical studies on the enzymes of Hymenolepis diminuta (Rud., 1819) (Cestoda). V. Some enzymes of the synthesis and phosphorolytic degradation of glycogen in mature cestodes // Acta parasit. Pol. 1975 b. V. 23. P. 569-592.

249. Moczon T. Histochemical studies on the enzymes of Hymenolepis diminuta (Rud., 1819) (Cestoda). XI. Some hydrolases of oligosaccharides in mature tapeworms // Acta parasit. Pol. 1980. V. 27. P. 477-486.

250. Moczon T. Histochemical studies on the enzymes of Hymenolepis diminuta (Rud., 1819) (Cestoda). XII. Activities of some glucosidases of the mature parasite in different nutritional conditions // Acta parasit. Pol. 1981. V. 28. P. 97-102.

251. Moran D., Turner S.J., Clements K.D. Ontogenetic development of the gastrointestinal microbiota in marine herbivorous fish Kyphosus sydneyanus II Microbial Ecology. 2005. V. 49. № 4. P. 590-597.

252. Morris G.P. The structure of the tegument and associated structures of the cercaria of Schistosoma mansoni II Ztschr. Parasitenk. 1971. Bd. 36. № 2. P. 115-121.

253. Mountfort D.O., Campbell J., Clements K.D. Hindgut fermentation in three species of marine herbivorous fish // Appl. Environ. Microbiol. 2002. P. 1374-1380.

254. Nabih I., Ansary A. El., Metabolic end-products in parasitic helminthes and their intermediate hosts // Сотр. Biochem. Physiol. 1992. V. 101B. № 4. P. 499-508.

255. Oaks J, Knowles W, Cain G. A simple method of obtaining an enriched fraction of tegumental brush border from Hymenolepis diminuta // J. Parasitol. 1977. V. 63. P. 476-485.

256. Olsen R.E., Sundell K., Hansen T, Hemre G-I, Myklebust R, Mayhew T.M, Ring0 E. Acute stress alters the intestinal lining of Atlantic salmon, Salmo salarL.: An electron microscopical study // Fish Physiology and Biochemistry. 2002. V. 26. P. 211-221.

257. Pampori N.A, Singh G, Srivastava V.M.L. Cotugnia diginipora: carbohydrate metabolism and effect of anthelmintics on immature worms // J. ofHelminthology. 1984. V. 58. P. 39-47.

258. Pappas P. W. Tryptic and protease activities in the normal and Hymenolepis i/z>nz>7wta-infected rat small intestine // J. Parasit. 1978 V. 64. P. 562-564.

259. Pappas P.W. Enzyme interactions at the host-parasite interface // Cellular Interactions in Symbiosis and Parasitism. The Ohio State University Press, Columbus. 1980. P. 145-172.

260. Pappas P.W. Hymenolepis diminuta: partial characterization of membrane-bound nucleotidase activities (ATPase and 5'-nucleotidase) in the isolated brush border membrane // Experimental Parasitology. 1981. V. 51. P. 209219.

261. Pappas P.W. Hymenolepis diminuta: partial characterization of the membrane-bound and solubilized alkaline phosphohydrolase activities of the isolated brush border plasma membrane // Experimental Parasitology 1982. V. 54 P. 80-86.

262. Pappas P.W. Host-parasite interface // Biology of Eucestoda. Academic Press. 1983. V. 2 P. 297-334.

263. Pappas P.W. Proteinase inhibitors in helminth parasites (antienzymes: fact or fiction?) // Parasite host environment. First international autumn school. Varnus, Bulgaria. 1987. P. 41-53.

264. Pappas P.W. Activation and inhibition of the brush-border membrane-bound alkaline phosphatase activity of Hymenolepis diminuta (Cestoda) by divalent cations//Parasitology. 1991 a. V. 102. № i. p. 141-145.

265. Pappas P.W. Hymenolepis diminuta: further characterization of the membrane-bound acid phosphatase activity associated with the brush border membrane of tapeworm's tegument // Exp. Parasitol. 1991 b. V. 72. № 4. P. 362-367.

266. Pappas P.W., Barley A.J., Wardrop S.M. Hymenolepis diminuta: glucose and glycogen gradients in the adult tapeworm // Exp. Parasitol., 1999. V. 91. №4. P. 315-326.

267. Pappas P. W., Freeman B. A. Sodium dependent glucose transport in the mouse bile duct tapeworm, Hymenolepis microstoma II J. Parasitol. 1975. 61. P. 434-439.

268. Pappas P.W., Leiby D.A. Alkaline phosphatase and phosphodiesterase activities of the brush border membrane of four strains of the tapeworm Hymenolepis diminuta И J. Parasitol. 1986. V. 72. № 5. P. 809-811.

269. Pappas P.W., Narcisi E.M. A comparison of membrane-bound enzymes of the isolated brush border plasma membranes of the cestodes Hymenolepis diminuta and Hymenolepis microstoma II Parasitology. 1982. V. 84. P. 391396.

270. Pappas P.W., Narcisi E.M., Rentko V. Alteration in brush border membrane proteins and membrane-bound enzymes of the tapeworm Hymenolepis diminuta during development in the definitive host // Mol. And Bioch. Parasitol. 1983. V. 8. P. 317-323.

271. Pappas P.W., Read C.P. Trypsin inactivation by intact Hymenolepis diminuta H The Journal of Parasitology. 1972 a. V. 58. P. 864-871.

272. Pappas P.W., Read C.P. Inactivation of a- and P-chymotrypsin by intact Hymenolepis diminuta (Cestoda) // Biol. Bull. 1972 b. V. 143. № 3. P. 605616.

273. Pappas P.W., Read C.P. Membrane transport in helminth parasites: a review //Exp. Parasitol. 1975. V. 37. № 3. P. 469-530.

274. Pappas P. W., Uglem G. L. Hymenolepis diminuta (Cestoda) liberates an inhibitor of proteolytic enzymes during in vitro incubation // Parasitology. 1990. V. 101. №3. P. 455-464.

275. Phifer K. Permeation and membrane transport in animal parasites: the absorption of glucose by Hymenolepis diminuta II The J. of Parasitology. 1960. V. 46. P. 51-62.

276. Podesta, R.B., Evans, W.S., Stallard H.E. Hymenolepis diminuta and Hymenolepis microstoma: effect of ouabain on active nonelectrolyte uptake across the "epithelial" syncytium // Experimental Parasitology. 1977. V. 43. P. 25-38.

277. Podesta R.B., Mettrick D.F. The interrelationships between the in situ fluxes of water, electrolytes and glucose by Hymenolepis diminuta II Int. Jour, for Parasitol. 1976. V. 6. P. 163-172.

278. Poddubnaya L.G., Izvekova G.I. Detection of bacteria associated with the tegument of caryophyllidean cestodes // Helminthologia. 2005. V. 42. № 1. P. 9-14.

279. Polzer M., Overstreet R.M., Taraschewski H. Proteinase activity in the plerocercoid of Proteocephalus ambloplitis (Cestoda) // Parasitology. 1994. V. 109. Iss. P. 209-213.

280. Precious W.Y., Barrett J. Quantification of the control of carbohydrate catabolism in the tapeworm Hymenolepis diminuta II Biochem. Cell Biol. 1993. V. 71. P. 315-323.

281. Read C.P. Carbohydrate metabolism of Hymenolepis diminuta II Experimental Parasitology. 1956. V. 5. № 4. P. 325-344.

282. Read C.P, Simmons J. E. Biochemistry and physiology of tapeworms // Physiol. Revs. 1963. V. 43. P. 263-305.

283. Read C.P. Contact digestion in tapeworms // The Journal of Parasitology. 1973. V. 59. P. 672-677.

284. Read С. P, Rothman A. H. The role of carbohydrates in the biology of cestodes. I. The effect of dietary carbohydrate quality on the size of Hymenolepis diminuta I I Expl. Parasit. 1957. № 6. P. 1-7.

285. Read С. P, Rothman A. H, Simmons J. E, Jr. Studies on membrane transport, with special reference to parasite-host integration // Ann N.Y. Acad. Sci. 1963. V. 113. P. 154-205.

286. Rimmer D.W. Changes in diet and the development of microbial digestion in juvenile buffalo bream, Kyphosus cornelii II Marine Biology. 1986. V. 92. № 3. P. 443-448.

287. Rimmer D.W, Wiebe W.J. Fermentative microbial digestion in herbivorous fishes // J. Fish Biol. 1987. V. 31. № 2. P. 229-236.

288. Ringo E, Bendiksen H.R, Wesmajervi M.S., Olsen R.E, Jansen P.A, Mikkelsen H. Lactic acid bacteria associated with the digestive tract of Atlantic salmon (Salmo salar L.) // Journal of Applied Microbiol. 2000. V. 89. P. 317-322.

289. Ringo E, Gatesoupe F.-J. Lactic acid bacteria in fish: a review // Aquaculture. 1998. V. 160. P. 177-203.

290. Ringo E, Lodemel J.B, Myklebust R, Kaino T, Mayhew T.M, Olsen R.E. Epithelium-associated bacteria in the gastrointestinal tract of Arctic charr (Salvelinus alpinus L.). An electron microscopical study // J. of Appl. Microbiol. 2001. V. 90. P. 294-300.

291. Ringo E., Olsen R.E. The effect of diet on aerobic bacterial flora associated with intestine of Arctic charr (Salvelinus alpinus L.) // J. Appl. Microbiol. 1999. V. 86(1). P. 22-28.

292. Ring0 E., Olsen R.E., Mayhew T.M., Myklebust R. Electron microscopy of the intestinal microflora of fish // Aquaculture. 2003. V. 227. P. 395-415.

293. Ringo E., Strem E., Tabachek J.-A. Intestinal microflora of salmonids: a review// Aquaculture Research. 1995. V. 26. P. 773-789.

294. Roberts L. S. Carbohydrate metabolism // Biology of the Eucestoda. Academic Press. 1983. V. 2. P. 343-390.

295. Roberts L.S., Insler G.D. Developmental physiology of cestodes. 17. Some biological properties of putative crowding factor in Hymenolepis diminuta II J. Parasitol. 1982. V. 68. № 2. P. 263-269.

296. Rolfe R.D. Interactions among microorganisms of the indigenous intestinal flora and their influence on the host // Rev. Infect. Dis. 1984. V. 6. Suppl. 1. P. 73-79.

297. Rosen R., San M. L., Denton M. E., Wolf J. M., Uglem G. L. The rapid development of the glucose-transport system in the excysted metacestode of Hymenolepis diminuta II Parasitol. 1994. V. 108. P. 217-222.

298. Rothman, A.H. Ultrastructural studies of enzyme activity in the cestode cuticle//Experimental Parasitology. 1966. V. 19. P. 332-338.

299. Roy Т. K. Hydrolytic enzymes and membrane digestion in parasitic platyhelminths // J. of Scientific and Industrial Research. 1982 V. 41. P. 439-454.

300. Ruff M. D., Read C. P. Inhibition of pancreatic lipase by Hymenolepis diminuta II J. Parasit. 1973. V. 59. P. 105-111.

301. Saha A.K., Ray A.K. Cellulase activity in rohy fingerlings // Aquaculture International. 1998. V. 6. № 4. P. 281-291.

302. Saksvik M., Nilsen F., Nylund A., Berland B. Effect of marine Eubothrium sp. (Cestoda: Pseudophyllidea) on the growth of Atlantic salmon, Salmo salar L // J. Fish Diseases. 2001. V. 24. № 2. P.l 11 -119.

303. Savage D.C. Colonization by and survival of pathogenic bacteria on intestinal mucocal surfaces // In: Bitton G., Marshall K.C. (eds) Adsorption of Microorganisms to surfaces. Wiley, New York. 1980. p. 175-206.

304. Savage D.C., Dubos R., Schaedler R.W. The gastrointestinal epithelium and its autochthonous bacterial flora // J. Exp. Med. 1968. 127. P. 67-76.

305. Schramlova J., Blazek K. Cysticercus bovis: pinocytosis in the cysticercus tegument // Folia parasitol. 1988. V. 35. № 3. P. 223-226.

306. Schroeder L.L., Pappas P.W. Trypsin adsorption by Hymenolepis diminuta (Cestoda) // The Journal of Parasitology. 1980. V. 66. № 1. P. 49-52.

307. Schroeder L.L., Pappas P.W., Means G.E. Trypsin inactivation by intact Hymenolepis diminuta (Cestoda ): some characteristics of the inactivated enzyme // The Journal of Parasitology. 1981. V. 67. № 3. P. 378-385.

308. Seeto G.S., Veivers P.C., Clements K.D., Slaytor M. Carbohydrate utilization by microbial symbionts in the marine herbivorous fishes Odax cyanomelas and Crinodus lophodon II J. Сотр. Physiol. 1996. V. 165 B. № 7. P. 571-579.

309. Sisova-Kasatockina O.A., Dubovskaya A.Ja. Proteinase activity in certain cestode species parasitizing vertebrates of different classes // Acta parasitol. Pol. 1975. V. 23(35). P. 389-393.

310. Smyth J.D. The Physiology of Cestodes. W.H. Freeman and Company. San Francisco. 1969. 279 p.

311. Smyth. J.D. Changes in the digestive-absorptive surface of cestodes during larval adult differentiation // Symp. Soc. Parasitology. 1972. V. 10. P. 41-70.

312. Spanggaard В., Huber I., Nielsen J., Nielsen L., Applel K., Gram L. The microflora of rainbow trout intestine: a comparison of traditional and molecular identification // Aquaculture. 2000. V. 182. P. 1-15.

313. Starling J.A. Tegumental carbohydrate transport in intestinal helminthes: Correlation between mechanisms of membrane transport and the biochemical environment of absorptive surfaces // Trans. Amer. Microsc. Soc. 1975. V. 94. № 4. P. 508-523.

314. Sugita H., Iwata J., Miyajima C., Kubo Т., Noguchi Т., Hashimoto K., Deguchi Y. Changes in microflora of a puffer fish Fugu niphobles, with different water temperatures // Marine Biology. 1989. V. 101. № 3. P. 299304.

315. Sugita H., Kawasaki J., Kumazawa J., Deguchi Y. Production of amylase by the intestinal bacteria of Japanese coastal animals // Letters in Applied Microbiol. 1996 a. 23. 174-178.

316. Sugita H., Kawasaki J., Deguchi Y. Production of amylase by the intestinal microflora in cultured freshwater fish // Lett. Appl. Microbiol. 1997 a. V. 24. №2. P. 105-108.

317. Sugita H., Miyajima G., Deguchi Y. The vitamin Bi2-producing ability of the intestinal microflora of freshwater fish // Aquaculture. 1991. V. 92. P. 267-276.

318. Sugita H., Shibuya K., Shimooka H., Deguchi Y. Antibacterial abilities of intestinal bacteria in freshwater cultured fish // Aquaculture. 1996 b. V. 145. P. 195-203.

319. Sugita H., Shibuya K., Hanada H., Deguchi Y. Antibacterial abilitiea of intestinal microflora of river fish // Fisheries Science. 1997 b. V. 63(3). P. 378-383.

320. Sugita H., Tsunohara M., Ohkoshi Т., Deguchi Y. The establishment of an intestinal microflora in developing godfish (Carassius auratus) of culture ponds // Microbiol. Ecol. 1988. V. 15. P. 333-344.

321. Sweeting R.A. Studies on Ligula intestinalis. Some aspects of the pathology in the second intermediate host // J. Fish Biol. 1977. V. 10. P. 43-50.

322. Syvokiene J. Interrelation berween the macroorganism and its digestive tract microorganisms // Ekologija (Vilnius). 1991. № 4. P. 37-44.

323. Syvokiene J, Mickeniene L. Microorganisms in the digestive tract of fish as indicators of feeding condition and pollution // J. of Marine Science. 1999. V. 56S. P. 147-149.V

324. Syvokiene J, Mickeniene L. Effects of heavy metals on the bacteriocenoses of the digestive tract of fish // Chemia i inzynieria ekologiczna. 2002. V. 9. №9. P. 1033-1038.V

325. Syvokiene J, Mickeniene L. Microorganisms in the digestive tracts of Baltic fish // Baltic Marine Science Conference, R^nne, Denmark, 22-26 October 1996. In: ICES Cooperative Research Report 2003. № 257. P. 3-7.

326. Syvokiene J, Mickeniene L, Bubinas A, Repecka, Voveriene G. Characteristics of microflora of the digestive tract of commercial fish depending on fish feeding // Ekologija (Vilnius). 1999. № 4. P.46-54.V

327. Syvokiene J, Mickeniene L, Kazlauskiene N, Stasitinaite P. Assessment of interrelation between macro- and microorganisms in salmon fish on the example of sea trout // Ekologija. 1997. N 4. P. 40-48.

328. Syvokiene J, Mickeniene L, Petrauskiene L, Stasitinaite P. Effect of heavy metals on microflora in the digestive tract of the rainbow trout (Salmo gairdneri Rich.) // Ekologija (Vilnius). 1995. № 1. P. 75-79.

329. Syvokiene J, Stasitinaite P, Mickeniene L. The impact of municipal wastewater and heavy metal mixture on larvae of rainbow trout (iOncorhynchus mykiss) // Acta Zoologica Lituanica. 2003. V. 13. № 3. P. 372-378.

330. Tannock G.W. Mini Review: Molecular Genetics: a New Tool for Investigating the Microbial Ecology of the Gastrointestinal Tract // Microbiol. Ecol. 1988. V. 15. P. 239-256.

331. Tannock G.W. Studies of the intestinal microflora: a prerequisite for the development of probiotics // Int. Dairy Journal. 1998. V. 8. P. 527-533.

332. Tannock G.W. Analysis of the intestinal microflora: a renaissance // Antonie van Leeuwenhoek. 1999. V. 76. P. 265-278.

333. Tannock G.W. Analysis of the intestinal microflora using molecular methods // European J. of Clinical Nutrition. 2002. V. 56 Suppl. 4. P. 44-49.

334. Taylor E.W., Thomas J.N. Membrane (contact) digestion in the three species of tapeworm Hymenolepis diminuta, Hymenolepis microstoma and Moniezia expansa/I Parasitol. 1968. V. 58. P. 535-546.

335. Taylor M., Hoole, D. Ligula intestinalis (L.) (Cestoda: Pseudophyllidea): plerocercoid induced changes in the spleen and pronephrous of roach, Rutilus rutilus (L.) and gudgeon, Gobio gobio (L.) // J. Fish Biol. 1989. V. 34. P. 583-596.

336. Thomas J.N., Turner S.G. A reinterpretation of the evidence for contact digestion in the tapeworm Hymenolepis diminuta II J. Physiol. (Gr. Brit.). 1980. V.301.P. 79-80.

337. Thompson R.S.A., Hayton A.R., Jue Sue L.P. A ultrastructural study of the microtriches of adult Proteocephalus tidswelli (Cestoda: Proteocephalidea) at the ultrastructural level // Ztschr. Parasitenk. 1980. Bd. 64. № 1. S. 95111.

338. Threadgold L.T. An electron microscopic study of the tegument and associated structures of Dipylidium caninum II Q.J. Microsc. Sci. 1962. 103. P. 135-140.

339. Threadgold L.T. Fasciola hepatica: Ultrastructure and histochemistry of the glycocalyx of the tegument // Exp. Parasitol 1967. V. 39. № 1. P. 119-134.

340. Threadgold L.T., Hopkins C.A. Schistocephalus solidus and Ligula intestinalis: pinocytosis by the tegument // Expl. Parasit.1981. V. 51. P. 444456.

341. Threadgold L.T., Robinson A. Amplification of the cestode surface: a stereological analysis // Parasitol. 1984. V. 89. № 3. P. 523-535.

342. Trust T.J, Sparrow R.A.H. The bacterial flora in the alimentary tract of freshwater salmonid fishes //Can. J. Microbiol. 1974. V. 20. P. 1219-1228.

343. Turcekova L', Hanzelova V. The membrane transport of I4C glucose and 14C leucine in cestodes of the genus Proteocephalus II Helminthologia. 1998. V. 35. №3. P. 167-168.

344. Uglem G.L, Love R.D. Hymenolepis diminuta: properties of phlorizin inhibition of glucose transport // Experimental Parasitology. 1977. V. 43. P. 94-99.

345. Uglem G.L, Pappas P.W. Mechanism of 3-0-methylglucose uptake by Hymenolepis diminuta II Int. J. Parasitol. 1991. V. 21. № 5. P. 517-520.

346. Voveriene G, Mickeniene L, Syvokiene J. Hydrocarbon-degrading bacteria in the digestive tract of fish, their abundance, species composition, and activity // Acta Zoologica Lituanica. 2002. V. 12. № 3. P. 333-339.

347. Ward F.V. Aspects of helminth metabolism // Parasitology. 1982. V. 84. № l.P. 177-194.

348. Watts S.D.M, Fairbairn D. Anaerobic excretion of fermentation acids by Hymenolepis diminuta during development in the definitive host // J. Parasitol. 1974. V. 60. P.621-625.

349. Webb R.A, Mettrick D.F. The role of glucose in the lipid metabolism of the rat tapeworm Hymenolepis diminuta I I Int. Jour, for Parasitol. 1975. № 5. P. 107-112.

350. White A. C., Molinari J. L., Pillai A. V., Rege A. A. Detection and preliminary characterization of Taenia solium metacestode proteases // J. Parasitol. 1992. V. 78. № 2. P. 281-287.

351. Williams M.A., Hoole D. Ligula intestinalis (Cestoda: Pseudophyllidae): studies on the antibody response of the intermediate host, Rutilus rutilus L. // Bull. Soc. fr. Parasitol. 1990. V. 8. Suppl. № 2. P. 1165-1170.

352. Williams H.H., McVicar A.H., Ralph R. The alimentari canal of fish as an environment for helminth parasites // Symp. Br. Soc. Parasit. 1970. V. 8. P. 43-77.

353. Zavras E.T., Roberts L.S. Developmental physiology of cestodes characterization of putative crowding factors in Hymenolepis diminuta II J. Parasitol. 1984. V. 70. № 6. P. 937-944.

Информация о работе

Извекова, Галина Игоревна
доктора биологических наук
Борок, 2006
ВАК 03.00.19

Диссертация

Трофические отношения в системе хозяин - паразит - симбионтная микрофлора - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы