Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Трансгенез и экспрессия генов у сельскохозяйственной птицы
ВАК РФ 06.02.07, Разведение, селекция и генетика сельскохозяйственных животных
Автореферат диссертации по теме "Трансгенез и экспрессия генов у сельскохозяйственной птицы"
005013288
Коршунова Людмила Георгиевна
ТРАНСГЕНЕЗ И ЭКСПРЕССИЯ ГЕНОВ У СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННОЙ ПТИЦЫ
06.02.07 - разведение, селекция и генетика сельскохозяйственных животных
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук
2 І МАР ш
Москва 2012
005013288
Диссертационная работа выполнена в Государственном научном учреждении Всероссийском научно-исследовательском и технологическом институте птицеводства Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИТИП Россельхозакадемии)
Научный консультант: доктор сельскохозяйственных наук,
профессор, академик Россельхозакадемии Фисинин Владимир Иванович
Официальные оппоненты: доктор сельскохозяйственных наук,
профессор, член-корреспондент Россельхозакадемии Кочиш Иван Иванович
доктор биологических наук, профессор Забудский Юрий Иванович
доктор биологических наук Станишевская Ольга Игоревна
Ведущая организация: ФГБОУ ВПО «Российский государственный аграрный университет - МСХА им. К. А. Тимирязева»
Защита состоится 12 апреля 2012 г. в 10 ч. на заседании диссертационного совета Д.220.042.03 при ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» по адресу: 109472, г. Москва, ул. Академика Скрябина, д. 23.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина».
Автореферат разослан 12 марта 2012 г.
Ученый секретарь диссертационного совета доктор сельскохозяйственных наук, профессор
1. Общая характеристика работы
Актуальность темы
Современная селекция в птицеводстве базируется на отборе лучшего поголовья из высокопродуктивных семей и семейств и требует длительного времени. Одним из нетрадиционных подходов к генетическому улучшению птицы может стать трансгенез - внедрение в их геном инородных генов. Несмотря на методические трудности, работы по созданию трансгенной птицы как актуального направления в отрасли активно ведутся во многих странах, поскольку перспективны с точки зрения экономической выгоды, возможностью достижения эффекта селекции в короткие сроки. Трансгенез расширяет возможности получения животных с измененными признаками, многие из которых могут быть использованы в селекции, при этом отпадает необходимость длительных обратных скрещиваний для удаления из популяции «ненужных» генов, неизбежно передаваемых при обычной гибридизации. Очевидно, что методами трансгенеза могут быть введены в популяцию совершенно новые фенотипиче-ские признаки, кодируемые генами других видов и родов животных.
Дальнейшее развитие селекции и генетики сельскохозяйственной птицы предполагает разработку новых методов и приемов оценки генома, основанных на знаниях механизмов организации и функционирования живых организмов, в частности, механизмов яйцеобразования у кур. Процесс яйцеобразования связан со значительным усилением биосинтетических процессов в печени, где происходит синтез большинства желточных белков. Белки желтка в основном происходят из вителлогенина и липопротеидов очень низкой плотности (ЛОНП), синтез которых начинается в печени кур по достижении ими репродуктивного возраста. С наступлением яйценоскости печень курицы приобретает новую вителлогенную функцию без утраты предшествующих. Такая дифференцировка уже специализированной ткани находится под контролем эстрогенов. Синтез вителлогенина и ЛОНП может быть вызван у цыплят введением им эстрадиола. Этот феномен позволяет изучать гормониндуцированную экспрессию «молчащих» генов, то есть последовательность процессов, приводящих к синтезу определенного белкового продукта, не синтезируемого ранее, а также определенные этапы этих процессов. Реализация генетической ин-
3
формации во многом зависит от рибосом, содержание которых определяет интенсивность белкового синтеза.
Активизация биосинтеза в печени связана с дополнительными энергозатратами, что предполагает значительное увеличение энергетической нагрузки на митохондрион печени, обеспечивающий производство необходимого количества макроэргических соединений для анаболических процессов. Наличие в митохондриях собственного генетического материала обуславливает свои особенности во взаимодействии ядерного и митохондриального геномов в процессе развития и специализации органов и тканей.
Новые знания о сопряженности экспрессии вителлогенинового гена с биогенезом рибосом, митохондриальной энергетикой клеток печени и их использование будут способствовать максимальной реализации продуктивного потенциала у кур.
Цель и задачи исследований
Основной целью настоящей работы было изучение воздействия интегрированной генной конструкции, с геном гормона роста быка на биологические и продуктивные признаки генетически модифицированных перепелов, а также изучение гормональной экспрессии генов в печени цыплят.
В связи с указанным были поставлены следующие задачи:
- получить трансгенных перепелов с встроенным геном гормона роста быка;
- провести оценку экспрессии трансгена, биологических и продуктивных показателей трансгенных перепелов в ряду поколений: динамика роста и иммунный статус перепелов, гормональный статус крови, масса перепелиных яиц, их биохимический состав и морфологические показатели, яйценоскость;
- изучить экспрессию генов на модели гормониндуцированного вителлогенеза у цыплят: синтез вителлогенина и липопротеидов очень низкой плотности, биохимические показатели крови и печени, биогенез рибосом после однократного и повторного введения цыплятам 17-Р-эстрадиола и в зависимости от его дозы;
- определить влияние гормональной экспрессии генов, вызванной 17-|3-эстрадиолом, на биогенез и биоэнергетические параметры митохондрий печени цыплят.
Научная новизна работы
Впервые проведена оценка экспрессии трансгена, генетический и фенотипический анализ трансгснных по гену гормона роста быка перепелов, полученных методом микроинъекции экзогенной ДНК в зародышевые диски яйцеклеток, и их потомков в ряду поколений.
Впервые на примере трансгенных перепелов по гену гормона роста быка показана возможность существенного улучшения продуктивности птицы методами трансгенеза.
Впервые изучена сопряженность эстрогениндуцированной экспрессии вителлогешшового гена, выраженной в усилении синтетических процессов в печени и увеличении содержания вителлогенина, ЛОНП и триглицеридов в плазме крови с синтезом РНК и биогенезом рибосом в печени цыплят.
Выявлено, что синтез вителлогенина и липопротеидов очень низкой плотности в печени эстрогенизированных цыплят имеют разные динамики, то есть относительно независимую регуляцию экспрессии соответствующих генов.
Обосновано, что необходимым условием для становления вител-логенной функции печени является синтез мРНК в первые часы после введения 17-Р-эстрадиола цыплятам. Биогенез рибосом определяет количественные характеристики ответа печени на гормон. Увеличение числа рибосом в печени после повторного введения эстра-диола цыплятам больше, чем после однократного.
Получены новые данные о том, что различия функционального состояния митохондрий печени кур-несушек и цыплят нивелируются в ходе эстрогениндуцированного вителлогенеза: в митохондриях печени цыплят происходят изменения параметров сопряжения и активного транспорта ионов кальция, которые приближаются к таковым в митохондриях печени кур-несушек.
Практическая ценность работы
Перепела опытной группы, потомки трансгенных по гену гормона роста быка, в ряду поколений сохранили превосходство по живой массе на 5-15% и массе яиц на 10-20% по сравнению с обычными, что свидетельствует о возможном практическом использовании трансгенеза в селекционной работе, направленной на повышение продуктивных показателей птицы в короткие сроки. Производствен-
ная проверка подтвердила результаты исследований. Разница по массе яиц перепелок трансгенного происхождения и эстонской породы составила 18,7%.
Материалы исследований легли в основу разработанного способа отбора перепелок по массе яиц (Патент РФ № 2402209). Результаты еженедельных взвешиваний яиц перепелок, отличающихся по средним показателям, с 7- до 50- недельного возраста позволили определить целесообразный возраст проведения оценки перепелок по этому признаку (11-12 недель). Именно в этом возрасте масса яйца соответствует средним показателям за весь период яйценоскости.
Выявленные у цыплят различия в динамике индукции синтеза вителлогенина и ЛОНП в ответ на введение 17-(3-эстрадиола являются обоснованием возможности раздельной селекции кур по этим признакам.
Линейная зависимость содержания фосфопротеидного фосфора и общего кальция в крови эстрогенизированных цыплят позволяет использовать каждый из них для ранней оценки яичной продуктивности кур. Использование в качестве показателя общего кальция из соображений методического характера является предпочтительным.
На основании изученных параметров окислительного фосфорили-рования и цитохромоксидазной активности митохондрий печени получено экспериментальное подтверждение оптимальным нормам кормления, режимам выращивания и содержания птицы (Фисинин В.И., Коршунова Л.Г., 1988; Байковская И.П., Коршунова Л.Г., 1989), Методическое руководство для зоотехнических лабораторий (1998).
Основные положения, выносимые на защиту
В результате выполненных исследований и производственной проверки разработаны и выносятся на защиту следующие основные положения:
1. Экспрессии трансгена у перепелов, полученных методом микроинъекции генной конструкции с геном гормона роста быка в зародышевые диски яйцеклеток, и их потомков в ряду поколений.
2. Рост, продуктивность, гормональный статус крови, иммунный статус трансгенных по гену гормона роста быка перепелов и их потомков в ряду поколений.
3. Синтез вителлогенина и липопротеидов очень низкой плотно-
сти, показатели крови и печени, биогенез рибосом после однократного и повторного введения цыплятам 17-Р-эстрадиола и в зависимости от его дозы.
4. Интеграция гормональной индукции вителлогенной функции печени цыплят с биогенезом, активностью окислительного фосфо-рилирования и функциональной специализацией митохондрий.
Апробация работы
Основные материалы диссертации были представлены на Ученых советах ВНИТИП в ежегодных отчетах 1980-2010 г.г.; на 11 Всесоюзном симпозиуме по биохимии митохондрий, Пущино (1981); на Всесоюзном симпозиуме по биохимии с.-х. животных, Витебск (1982); на научно-методической комиссии по селекции и генетике птицеводства Отделения животноводства ВАСХНИЛ (1983); на Всесоюзном биохимическом съезде, Киев (1986); на Всесоюзном симпозиуме «Биохимия сельскохозяйственных животных и продовольственная программа», Ташкент (1986); на 2 Всесоюзном симпозиуме «Научные основы витаминного питания с.-х. животных», Юрмала (1987); на Всесоюзной научно-технической конференции «Эффективное использование кормов в птицеводстве», Новосибирск (1990); на Всесоюзной научной конференции «Использование физических и биологических факторов в ветеринарии и животноводстве», Витебск (1991); на Украинской конференции с международным участием «Актуальные проблемы современного птицеводства», Харьков (1991); на международном симпозиуме «Молекулярная генетика и биотехнология в оценке и изменении геномов с.-х. животных», С.-Петербург, Пушкин (1994); на ежегодных отчетах в отделении зоотехнии и животноводства РАСХН (1995-2005 г.г.); на научных конференциях «Актуальные проблемы биотехнологии в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии», Москва (1996, 2000 гг.); на II Международной выставке «Инновации-99. Технологии живых систем» Всероссийский выставочный центр, Москва (1999), где был присужден Диплом II степени за разработку «Получение трансгенной птицы»; на конференции «Ориентированные фундаментальные исследования и их реализация в АПК России». С.Петербург (2008), на XVI конференции Российского отделения Всемирной научной ассоциации по птицеводству «Достижения в современном птицеводстве: Исследования и инновации», Сергиев Посад
7
(2009); а также за рубежом на 10 Европейской конференции по птицеводству, Иерусалим, Израиль (1998); на 6 Конференции Балтийских стран по птицеводству, Вильнюс, Литва (1998), на 8 конференции стран Балтии по птицеводству, Турку, Финляндия (2000); на 21 Международном конгрессе по птицеводству, Монреаль, Канада (2000).
Публикация результатов исследований
Основные результаты исследований опубликованы в трудах ВНИТИП, материалах Россельхозакадемии, республиканских и международных научных конференций, научных и научно-производственных журналах, информационной экспресс-информации. Всего по теме диссертационной работы опубликовано 56 статей, в том числе 14 в изданиях, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ, методическое руководство для зоотехнических лабораторий «Оценка качества кормов, органов, тканей, яиц и мяса птицы», 1998, получен патент РФ(2009 г.) на изобретение.
Научные исследования выполнены в соответствии с планом (1980-2010 гг.) Всесоюзного научно-исследовательского и технологического института птицеводства ныне ГНУ ВНИТИП Россельхозакадемии по темам: «Разработать методы прогнозирования яйценоскости кур с помощью введения в раннем возрасте экзогенных гормонов», № гос. per. 81090364; «Разработка переносов генов в геном птиц» № гос. per. 01980008817, «Разработать новые и усовершенствовать существующие методы получения трансгенной птицы с заданными признаками», № гос. реп 01200120268; «Разработать методы получения генетически модифицированной птицы с ценными хозяйственными признаками», № гос. per. 01200602327.
Объем и структура работы
Диссертационная работа состоит из следующих разделов: введение; обзор литературы; материал и методика исследований; результаты исследований и их обсуждение; выводы; список литературы; приложения. Материал изложен на 305 страницах машинописного текста, иллюстрирован 44 таблицами и 26 рисунками. Список литературы включает 644 библиографических источника, в том числе 205 отечественных и 439 иностранных авторов. Приложение включает дополнительные таблицы и рисунки, иллюстрирующие результаты
исследований; Патент РФ на изобретение №2402209 «Способ отбора перепелок по массе яиц», 2009; Акт производственной проверки, 2009; Удостоверение на рационализаторское предложение, 1981; Методическое руководство, 1998.
Личный вклад соискателя
Автору принадлежит постановка темы диссертации, ее разработка и решение. Экспериментальная часть работы и обработка полученных результатов выполнена непосредственно при личном авторском участии диссертанта, а также совместно с соисполнителями, что нашло отражение в списке публикаций по теме исследований.
2. Материал и методы исследований
Исследования выполнены по трем разделам (рис. 1): 1 - получение и фенотип трансгенных перепелов по гену гормона роста быка; 2 - эстрогсниндуцированный вителлогенез и биогенез рибосом печени цыплят; 3 - роль митохондрий в вителлогенезе печени.
Исследования раздела 1 по получению и изучению биологических и продуктивных качеств перепелов, трансгенных по гену гормона роста быка, проведены в 1994-2010 годах на перепелах эстонской породы в условиях вивария ГУП «Загорское ЭПХ ВНИТИП Россельхозакадемии» (Московская обл.) Птицу содержали в индивидуальных клетках при свободном доступе к воде и корму. Технологические параметры содержания и питательность комбикормов соответствовали принятым нормам.
Трансгенную птицу получали методом микроинъекции экзогенной ДНК в зародышевые диски яйцеклеток. Инъецированная генная конструкция рМТЬвН(2хаи) была предоставлена Институтом молекулярной биологии РАН (г. Москва).
Для идентификации трансгенных перепелов использовали блот-гибридизационный анализ ДНК и метод полимеразной цепной реакции (ПЦР). Продукты ПЦР анализировали методом электрофореза.
Анализ экспрессии трансгенов был выполнен на уровне белка: исследование плазмы крови на бычий соматотропин иммунофер-ментным методом.
В исследованиях было две группы перепелов - опытная и контрольная. В опытную группу входили потомки (33 поколения) трансгенных особей, контрольную - эстонские перепела 33 генераций.
Направления исследований
Трансгенез Гормональная экспрессия генов
Получение перепелов, трансгенных по гену гормона роста быка Фенотип трансгенных перепелов Эстрогениндуцированный вителлогенез и биогенез рибосом печени цыплят Роль митохондрий в вителлогенезе печени
Метод получения трансгенной птицы. Идентификация трансгенных перепелов методом полиме-разной цепной реакции и блот-гибридизационным анализом ДНК. Оценка-экспрессии трансгена им-муноферментным методом по содержанию бычьего соматотропина в крови трансгенных перепелов. Биологические и продуктивные качества трансгенных перепелов: масса суточного молодняка, динамика роста, гормональный статус крови, иммунный статус, яичная продуктивность; морфологические показатели и биохимический состав перепелиных яиц. Влияние однократного и повторного введения 17-р-эстра-диола на массу, состав, содержание рибосом и функциональную активность печени цыплят. Влияние дозы 17-Р-эстрадиола на вителлогенез и биогенез рибосом. Действие а-аманитина, акти-номицина Д, 5-бромдезокси-уридина и тиоацетамида на вителлогенез и биогенез рибосом. Окислительное фосфо-рилирование, транспорт кальция, метаболическая активность и биогенез митохондрий печени кур и цыплят после введения 17-Р-эстрадиола. Действие клофибрата на вителлогенез и биоэнергетику митохондрий.
Выводы и практические предложения
Рисунок 1. Общая схема исследований
Поголовье в поколениях колебалось от 45 до 110. Отвод потомства в опытной и контрольной группах проводили естественным спариванием определенных особей. Каждая особь из опытной группы имела шифр в компьютерной базе данных, позволяющий проследить се родословную, начиная от первичных трансгенных особей.
Учитываемые показатели: живая масса в суточном возрасте и еженедельно, в течение 20 недель, индивидуальная яйценоскость и масса яиц в течение 10 мес. продуктивного периода, биохимические показатели яиц (Фисинин В.И., Тишенков А.Н., 1998), содержание жирных кислот в липидах желтка (Архипов A.B., Топорова JI.B, 1976), морфологические показатели яиц (Дядичкина Л.Ф., Позднякова Н.С., 2001). В плазме крови определяли содержание инсулина, тетрайодтиронина (тироксин или Т4), трийодтиронина (ТЗ) радиоиммунологическим анализом (Радченков В.П., Аверин B.C., Бутров Е.В., 1985). Иммунный статус перепелов оценивали по нарастанию титров антител в крови и желтках яиц в ответ на введение антигена. Антитела определяли в реакции задержки гемагглютинации (РЗГА) (Методические указания, 1997).
Исследования раздела 2 по изучению эстрогениндуцированного вителлогенеза и биогенеза рибосом печени проводили на цыплятах породы белый леггорн в возрасте 75-90 дней и на взрослой птице в возрасте 240-280 дней. Выполнено три исследования на поголовье 333 цыплят, 15 кур и 15 петухов.
В первом исследовании изучали экспрессию вителлогенинового гена по показателям крови и динамике ответа печени цыплят на однократное введение 17-Р-эстрадиола и при разных дозах гормона. Использовали дозы: 10, 30, 50 и 70 мг/кг. Подробная динамика была исследована для дозы 30 мг/кг. Цыплят декапитировали через 4, 12, 18, часов, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ,8, 9 суток после введения гормона.
Во втором исследовании изучали показатели крови и динамику ответа печени цыплят на однократное и повторное введение эстра-диола. Были сформированы две опытные группы цыплят. Цыплятам одной группы ввели 17-Р-эстрадиол в дозе 20 мг/кг. Через 16 суток эстрадиол в той лее дозе ввели цыплятам обеих групп и декапитировали их через 3, 6, 9, 12 часов и 1, 2, 3,4, 5, 6, 7, 8,9, 10 суток.
В третьем исследовании изучали влияние а-аманитина, актино-мицина Д, бромдезоксиуридина и тиоацетамида на эстрогениндуци-рованный вителлогенез у цыплят. Цыплятам вводили 17-Р-эстрадиол
11
в дозе 30 мг/кг; а-аманитин, актиномицин Д, бромдезоксиуриндин и тиоацетамид в дозах 20 мкг/кг, 50 м кг/к г, 20 мг/кг и 50 мг/кг соответственно. Цыплят декапитировали на 2, 4 и 6 сутки после введения эстрадиола. За 2 часа до убоя цыплятам внутрибрюшинно вводили 3Н-уридин в количестве 70 МБк.
17-Р-Эстрадиол (Сигма, США) растворяли в пропиленгликоле в разных концентрациях и вводили внутримышечно из расчета 1 мл/кг живой массы. Актиномицин Д и а-аманитин (Серва, ФРГ), а также 5-бромдезксиуридин и тиоацетамид (BDH, Англия) использовали в виде раствора в 0,85% хлористом натрии и вводили внутрибрюшинно по 1 мл/кг живой массы.
Учитываемые показатели в 1, 2, 3 исследованиях:
- в плазме крови цыплят определяли содержание общего белка (Chromy V.Ficher J., 177), триглицеридов (Tixier М., Clande J., 1974), неорганического и фосфопротеидного фосфора (Грибанов Г.А., Сергеев С.А., Алексеенко A.C., 1976), общего кальция (Sarkar B.C.R., Chauhan U.P.S., 1967). Фракционный состав белков плазмы крови определяли электрофоретически. Количественную обработку элек-трофореграмм проводили денситометрированием;
- печень оценивали по массе, содержанию общего белка, РНК, ДНК (Труболюбова М. Г., 1977), радиоактивности РНК. РНК-азную активность определяли по скорости расщепления очищенного препарата дрожжевой РНК. Рибосомы выделяли преципитацией 0,2 М MgCI2, количество рибосом определяли по поглощению их растворов в додецилсульфате натрия при 260 нм (Palmitel R., 1974).
По разделу 3: «Роль митохондрий в вителлогенезе печени» выполнено 2 исследования на птице породы белый леггорн: цыплятах в возрасте 75-90 дней, курах и петухах в возрасте 240-280 дней. Использованное поголовье составило 330 цыплят, 30 кур и 15 петухов.
В первом исследовании изучали окислительное фосфорилирова-ние, активный транспорт ионов кальция, метаболическую активность и биогенез митохондрий печени кур и цыплят. Для этого из цыплят были сформированы одна контрольная две опытных группы. Индукцию вителлогенной функции печени у цыплят опытных групп вызывали однократным подкожным введением раствора 17-ß-эстрадиола на пропиленгликоле в дозе 30 мг/кг живой массы. Второй опытной группе одновременно с 17-р-эстрадиолом внутрибрюшинно 12
вводили спиртовой раствор актиномицина Д в дозе 100 мкг/кг живой массы. Контрольной группе цыплят вводили пропиленгликоль. Убой цыплят контрольной и опытных групп осуществляли декапитацией (по 5 гол.) через 4, 12, 24, 36,48, 72 и 96 ч после инъекций.
Во втором исследовании изучали действие клофибрата (п-этилхлорофсноксиизобутират) на вителлогенез и биоэнергетику митохондрий с целью определения связи между основными биоэнергетическими функциями митохондрий и активностью индуцированного 17-Р-эстрадиолом липогенеза в печени цыплят. Были сформированы две группы цыплят: контрольная и опытная Цыплят опытной группы в течение семи суток принудительно кормили клофибратом в форме желатиновых капсул, по одной капсуле в сутки. Одна капсула содержала 250 мг препарата. Затем цыплятам вводили 17-ß-эстрадиол в дозе 30 мг/кг живой массы. Убой цыплят осуществляли декапитацией (по 5 гол.): через семь суток кормления клофибратом, через 1 и 2 суток после прекращения скармливания клофибрата, через 1 и 2 суток после инъекции 17"Р-эстрадиола.
Учитываемые показатели 1 и 2 исследований:
- в плазме крови цыплят определяли содержание общего белка (Chromy V.Ficher J., 1977), триглицеридов (Tixier М., Clande J., 1974), неорганического и фосфопротеидного фосфора (Грибанов Г.А., Сергеев С.А., Алексеенко A.C., 1976), общего кальция (Sarkar B.C.R., Chauhan U.P.S., 1967).
- из печени методом дифференциального центрифугирования выделяли митохондриальную фракцию, в которой определяли содержание ДНК, РНК, белка (Труболюбова М. Г., 1977), свободных аминокислот. Скорость дыхания в митохондриях определяли полярографическим методом (Кондрашова М.Н., Евдодиенко Ю.В., Куд-зина JT.ÍO., 1973). Цитохромоксидазную активность оценивали по максимальной скорости дыхания митохондрий в присутствии насыщающих концентраций аскорбата натрия с тетраметилпарафенилен-диамидом и цитохромом С. Активность транспорта ионов кальция в митохондриях определяли по потреблению кислорода в присутствии сукцината после добавления СаСЬ (50-100 мкМ/мг белка митохондрий) (Кудзина Л.Ю., 1970).
Результаты обработаны статистическими методами (Гмур-ман В.В., 1972) с использованием программы Microsoft Excel. На
диаграммах и таблицах указаны ошибки выборочного среднего. Достоверность различий показателей опытной и контрольной групп в таблицах отмечены следующим образом: *-р<0,05; **-р<0,01; ***-р<0,001.
3. Результаты исследований
3.1. Получение и фенотип трансгенных перепелов по гену гормона роста быка
Перепела, трансгенные по гену гормона роста быка, были получены хирургическим методом микроинъекции экзогенной ДНК перепелиных яйцеклеток, как овулировавших, так и находившихся на поздних стадиях созревания (крупные фолликулы). Для инъекции использовали генную конструкцию pMTbGH(2xatt), содержащую природный ген гормона роста быка (bGH gene), находящийся под контролем металлотионинового промотора (МТ prom) (рис. 2). Последний активируется ионами цинка и других тяжелых металлов, содержащихся в организме птицы. Активный промотор заставляет экс-прессироваться ген бычьего гормона роста. У трансгенных по этой конструкции перепелов происходит синтез указанного гормона.
SacI PstI PslI EcoRI PstI EcoRI
PstI
103
1619
—>
460 210
1150 1150
____1___
MT prom.
Hindlll
bGH gene
pUC19
__[78б1_| 103 3'-poly(A)
1619 ait
•jJ----------
217 !
Ndcl
Рисунок 2. Физическая карта плазмиды pMTbGH(2xatt) (указаны сайты рестрикции эндонуклеазами), использованной в качестве генной конструкции при получении генетически модифицированных перепелов
Было прооперировано 93 перепелки, у которых инъецировано 280 яйцеклеток, как овулировавших, так и находившихся в крупных фолликулах. От них получено 122 перепеленка.
Методами блот-гибридизационного анализа и ПЦР было исследовано 180 проб ДНК, выделенных из эмбрионов, органов и тканей экспериментальных перепелов. Нуклеотидные последовательности гена гормона роста быка были обнаружены в ДНК 10 эмбрионов и
14 особей перепелов. Распределение трансгена в тканях опытных перепелов проиллюстрировано на рис. 3.
Трансгенные перепела были исследованы на содержание в крови бычьего соматотропина. В некоторых образцах крови он был обнаружен в количестве 1,0-3,0 нг/мл. Таким образом, экспрессия трансгена в крови полученных трансгенных перепелов составила от 1,0 до 3,0 нг/мл бычьего соматотропина, тогда как в крови перепелов контрольной группы искомый белок отсутствовал. Трансгенность перепелов проявилась в ряду поколений.
і 2 3 4 5 6 7 8 п.н.
Рисунок 3. Блот-гибридизационный анализ ДНК из различных тканей перепелов: 1 - птица 116, грудная мышца; 2 - птица 116, печень; 3 - птица 116, ножная мышца; 4 - птица 22, миокард; 5 - птица 22, грудная мышца; 6 - птица 107, грудная мышца; 7 - птица 107, миокард; 8 - кровь контрольного перепела плюс плазмида в количестве 1-2 копии на гаплоидный геном
В процессе выращивания экспериментально полученных перепелов и отвода от них потомства было замечено, что некоторые самки сносили крупные яйца (14,0-21,0 г), а из яиц с обычной массой вылуплялись перепелята с живой массой на 15-25% выше обычной. Вскрытие показало, что яйца не были двухжелтковыми и были покрыты нормально пигментированной прочной скорлупой. Была установлена связь признака «крупнояичности» с трансгенностью особей, а также наследование этого признака (рис. 4).
Это послужило основанием для размножения экспериментальных особей и изучения фенотипа полученной птицы. Трансгенные особи были использованы с целью получения потомства для формирования и дальнейшего исследования опытной группы перепелов. В настоящее время получено и изучено 33 поколения экспериментальных перепелов.
Рисунок 4. Пример фенотипического проявления трансгенности в потомстве перепелов
У трансгенных перепелов живая масса на 5-15% была выше, чем в контроле. У их потомков сохранялось превосходство по живой массе (рис. 5), причем у самок различия оказались более существенны. В суточном и 1-недельном возрасте опытные птицы были крупнее контрольных соответственно на 21 и 13%. Средняя масса суточных перепелят в опытной группе составляла 9,1, в контрольной - 7,4 г. В 7- и 20-недельном возрасте статистически достоверные различия наблюдались только у самок - соответственно 8,0 и 6,0% (р<0,001).
Масса суточного молодняка птицы в значительной степени обусловлена массой инкубационных яиц. В наших опытах с увеличением массы яиц пропорционально увеличивалась масса трансгенных суточных перепелят (г = +0,810). При этом все перепелята были подвижными, активно реагировали на звук, имели мягкий подобранный живот, чистую клоаку. Пух мягкий, ровный, блестящий, правильно пигментированный (коричневого цвета с двумя светлыми полосками
на спинке). Ноги и клюв крепкие, глаза блестящие. Взрослые особи внешне не отличались от контрольных перепелов.
Рисунок 5. Живая масса перепелов опытной и контрольной групп, в среднем по 15 поколениям
Живая масса трансгенных перепелов варьировала от поколения к поколению, однако, линия тренда для этого показателя в 20-недельном возрасте свидетельствовала об отсутствии тенденции к снижению (наклон незначительный, Я2 = 0,019) (рис. 6).
Гормональный статус трансгенных перепелов по изученным показателям не претерпел существенных изменений по сравнению с контрольными. Среднее значение уровня инсулина у самок опытной группы составило 15,8 и у самцов -16,4 против 10,7 и 16,5 мкЕд/мл соответственно у контрольной группы. Индивидуальные значения этого показателя варьировали у опытной группы от 6,7 до 30,9 и у контрольной - от 7,8 до 18,1 мкЕд/мл.
В значениях показателей содержания тиреоидных гормонов в крови перепелов опытной и контрольной групп наблюдался большой разброс. Так, минимальные концентрации тироксина составляли 12 нМ, максимальные: 10-12 нМ. Средние значения составили у опытных самок 4,2 и у самцов 6,1 нМ, тогда как у контрольных соответственно 4,7 и 5,7 нМ. Концентрация трийодтиронина у опытных самок была 0,7 и у самцов 1,6 нМ, у контрольных соответствен-
но 0,8 и 1,6 нМ. Значительные колебания концентрации трийодтиро-нина были более характерны для самок - от 0,2 до 2,1 нМ, в то время как у самцов - от 1,2 до 2,1 нМ.
г- У = -0.1933Х + 207,27 Р?2 = 0,019
18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 Поколения
Рисунок 6. Живая масса самок перепелов в возрасте 20 нед, трансгенных по гену бычьего соматотропина, в разных поколениях.
Показатель отношения концентрации инсулина к трийодтирони-ну, по которому можно судить о сдвиге метаболизма в организме, был выше у самок, чем у самцов, а также у самок опытной группы по сравнению с контрольной, что подтверждает более высокий уровень анаболизма у подопытных самок, выраженный в повышенном синтезе компонентов яйца.
Полученные данные по нарастанию титров антител в крови и желтке яиц в ответ на введение антигена свидетельствуют о повышении иммунного статуса у перепелов опытной группы, выраженным в ускоренной выработке антител к вводимому антигену. Через четыре недели титры антител у опытных перепелов были выше (р<0,001), чем в контроле (табл. 1). Достоверные различия были получены и для экстрактов желтков яиц контрольной и опытной групп, снесенных через 4 недели после вакцинации (р<0,001).
Показатель Через 2 нед Через 4 нед
титр 10g2 титр log2
Контрольная группа
Сыворотка крови 1:4-1:16 3,2±0,28 1:8-1:32 4,0±0,24
Экстракт яичного желтка - - 1:4-1:8 2,9±0,09
Напряженность иммунитета, % 80% 100%
Опытная группа
Сыворотка крови 1:8-1:32 3,8±0,23 1:32-1:128 6,0±0,23*
Экстракт яичного желтка - - 1:8-1:64 4,9±0,23*
Напряженность иммунитета, % 100% 100%
У трансгенных перепелов и их потомков масса яиц была на 1020% выше, чем в контроле (р<0,001). На пике продуктивности масса яиц у опытных перепелов в среднем по 33 поколениям составила 13,0 г. Разброс показателя по отдельным особям был от 11,3 до 15,0 г.
Яйценоскость перепелок в опытной группе в поколениях колебалась от 200 до 235 яиц, в контроле - от 193 до 227 яиц за 10 месяцев продуктивного периода. Средняя яйцемасса за этот период в опытной группе составила 2749,4 г, что на 11% больше, чем в контрольной группе (р<0,001). Средняя число яиц и их масса по поколениям представлены на диаграмме (рис. 7).
В опытной и контрольной группе увеличение массы яйца до 14,0 г было обусловлено пропорциональным увеличением массы его составных частей - скорлупы, белка, желтка. При этом доля желтка составила 29-33%, белка - 58-61%, скорлупы - 9-10%. Начиная с массы яиц выше 14 г в опытной группе, соотношение составных частей изменилось. Доля желтка возросла до 39,6%, белка - снизилась до 52,3% и скорлупы - до 8,1%. Индекс формы яиц массой от 8,0 до 14,0 г в контрольной и опытной группах варьировал в пределах 75,483,6%. При дальнейшем увеличении массы яиц в опытной группе происходило снижение индекса формы до 67,5%, то есть форма становилась более вытянутой.
Рисунок 7. Число (1,2) и масса (3,4) яиц в среднем по 19—33 поколениям, 1,3- трансгенная, 2,4 - интактная птица
Большая часть сухих веществ желтка перепелиных яиц приходится на долю липидов. В желтке яиц опытной группы их содержалось от 26,1 до 29,3%, контрольной - 27,8-29,2%.
Содержание протеинов составило от 15,1 до 17,0% для всех проанализированных желтков, независимо от их массы и принадлежности к группе. Не установлено в обеих группах закономерных различий и по содержанию воды в желтках яиц разной массы.
Белок перепелиных яиц содержал 85,0-87,9% воды. На долю протеинов приходилось от 8,9 до 10,9%. Закономерные различия между группами также отсутствовали.
Содержание каротиноидов в желтке яиц опытной группы было от 9,2 до 16,6 мкг/г, в контрольной - от 12,2 до 20,7 мкг/г. Отмечена тенденция повышения содержания каротиноидов с увеличением массы яйца. Содержание витамина А в желтке яиц опытной группы менялось от 12,8 до 16,8 мкг/г, в контрольной - от 14,2 до 19,7 мкг/г. Содержание витамина Е в желтке яиц опытной группы варьировало в пределах 56,7-80,5 мкг/г, в контрольной - от 75,4 до 90,5 мкг/г. Витамина В2 в желтке яиц опытной группы содержалось 3,68-4,10 мкг/г, контрольной - 3,82^,42 мкг/г и не зависело от массы яиц. Витамин В2 в белке яиц опытной группы находилось в пределах 1,681,91 мкг/г, контрольной - 1,95-2,16 мкг/г. Аминокислотный состав
яичного белка трансгенных перепелок не отличался от такового у контрольных особей.
В желтках яиц у контрольных перепелок на долю насыщенных жирных кислот приходилось 41,35, мононенасыщенных - 41,06, полиненасыщенных - 17,59%. Сумма насыщенных и полиненасыщенных жирных кислот в липидах желтка у птиц в опытной группе была несколько больше и составляла соответственно 42,08 и 19,41%, сумма мононенасыщенных жирных кислот была меньше, чем в контрольной - 38,51%. Выявленные различия обусловлены в основном увеличением содержания стеариновой и линолевой кислот на 1,8% и уменьшением количества олеиновой кислоты на 2,3% в яйцах у перепелок из опытной группы. При этом массовая доля олеиновой кислоты изменялась от 31,40 до 37,00%, линолевой - от 19,90 до 17,30%. В опытной группе содержание стеариновой кислоты в яйцах у несушек 3- и 6-месячного возраста было соответственно 17,03 и 16,76%, линолевой кислоты - 18,08 и 19,33%. Доля олеиновой кислоты в яйцах несушек из опытной группы оказалась 38,55 и 33,59% соответственно. Следовательно, при изменении массы яйца и в опытной, и контрольной группах перепелок наблюдались колебания в содержании отдельных жирных кислот в липидах желтка. Главным образом это относилось к жирным кислотам с 18 атомами углерода: стеариновой,олеиновой, линолевой и линоленовой.
Таким образом, в наших исследованиях экспериментально показано, что у полученных трансгенных по гену гормона роста быка перепелов произошло усиление биосинтетических процессов в организме без изменений в биологических закономерностях, определяющих процессы роста и развития птицы, формирования яйца. Полученные данные свидетельствуют о возможном практическом использовании методов трансгенеза в селекционной работе на повышение продуктивных показателей птицы.
3.2. Эстрогениндуцированный вителлогенез и биогенез рибосом печени цыплят
Одним из факторов регуляции активности генов являются стероидные гормоны. Известно, что стероидные гормоны избирательно накапливаются в определенных тканях организма. Действие стероидных гормонов на метаболизм клеток заключается в экспрессии определенных генов и общем усилении биосинтетичсских процессов.
Введение 17-Р-эстрадиола цыплятам увеличивало содержание белкового и неорганического фосфора, триглицеридов, общего белка и кальция крови. На вторые сутки после эстрогенизации концентрация белка достоверно отличалась от контрольного значения (р<0,05) и составила 53,9 мг/мл, а в контроле - 44,5мг/мл. Максимальную концентрацию белка зафиксировали на пятые-шестые сутки, когда она на 74-68% превышала контрольный уровень. Электрофорез белков плазмы показал, что введение 17-Р-эстрадиола привело к появлению двух крупных белков, характерных для крови кур-несушек (рис. 8). Определение молекулярной массы (м.м.) и окрашивание на фосфор выявило только одну фракцию с м.м. 205 килодальтон (кД), представленную мономером вителлогенина. Это означает, что весь фосфопротеидный фосфор плазмы крови эстрогенизированных цыплят связан с вителлогенином. Другой индуцируемый эстрадиолом крупный белок с м.м. 405 кД представляет собой апопротеин липо-протеида очень низкой плотности I (ЛОНП I). Кроме вителлогенина и ЛОНП I под влиянием 17-Р-эстрадиола заметно увеличилась фракция с м.м. 11,5 кД - ЛОНП II.
¡111
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
; « —
■
Щ ;«¥' Щ Щ Щ Ш • - ф т : -в*
, : v» -г * ^ 1
- «"SI
Рисунок 8. Электрофореграмма белков плазмы крови цыплят в разное время после введения им 17-Р-эстрадиола: 1, 2, 3, 4 - стандарты м.м., 5, 6 - контроль, 7,8-1 сутки, 9,10-2 суток, 11,12-5 суток, 13,14-6 суток, 15, 16-9 суток, 17, 18 - 10 суток, 19,20- белки плазмы крови курицы-несушки
Количественная обработка электрофореграмм показала, что содержание белка в плазме крови цыплят после эстрогенизации увеличилось на 70%, из которых в среднем по 20% приходилось на долю ЛОНП I и вителлогенина, 10% - ЛОНП II. То есть увеличение содержания белка на 3/4 обусловлено появлением в крови главных протеинов - предшественников яичного желтка. Оставшаяся доля (1/4) - результат возрастания концентрации белков - обычных компонентов плазмы крови цыплят.
Содержание фосфопротеидов в контроле было на грани чувствительности использованного метода в течение всего периода исследования. В крови опытных цыплят при всех исследованных дозах гормона в регистрируемых количествах фосфопротеиды появлялись через 3-4 ч; на 2-е сутки их количество было значительным, а на 5-6-е -максимальным и составило 158-296 мкг/мл при дозе гормона 30 мг/кг. Затем содержание их быстро снижалось. Повторное введение цыплятам 17-Р-эстрадиола через 16 суток после первого, когда действие предыдущей дозы гормона уже закончилось, вызывало более сильную стимуляцию синтеза вителлогенина. Скорость его накопления в крови была значительно больше. Уже через 9 ч различия становились достоверными (р<0,01). Содержание фосфопротеидов на максимуме ответа в обоих случаях на пятые сутки в 1,72 раза превышало этот показатель при первичном ответе.
Таким образом, индукция экзогенным 17-р-эстрадиолом вител-логенеза в печени цыплят полностью обратима.
Воздействие разных доз 17-р-эстрадиола на содержание фосфопротеидов в плазме показало, что максимальная скорость их накопления зафиксирована при дозах 30 и 50 мг/кг.
Введение эстрадиола в дозе 10 мг/кг вызывало низкую скорость накопления фосфопротеидов, максимум их содержания отмечен на четвертые сутки, а на шестые количество их было равным показателю аналогично содержанию на девятые сутки при дозе 30 мг/кг. На шестые сутки снизилась масса печени до уровня контроля, увеличилось содержание ДНК (р<0,05).
Доза эстрадиола 70 мг/кг вызвала большую индукцию синтеза фосфопротеидов, по сравнению с 10 мг/кг, и накопление их в крови продолжало непрерывно расти вплоть до шестых суток. Но больше всего фосфопротеидов наблюдалось на шестые сутки при дозе эстрадиола 30 мг/кг.
Масса печени цыплят, как и содержание общего белка в плазме крови, интенсивнее увеличивалась при дозах гормона 50 и 70 мг/кг, причем масса печени для этих доз на шестые сутки больше, чем на четвертые, а для 10 и 30 мг/кг - меньше.
Таким образом, скорость становления вителлогенной функции в печени цыплят возрастает с увеличением дозы вводимого эстрадио-ла, но до определенных пределов.
Динамика содержания общего кальция, неорганического фосфора, триглицеридов, общего белка в крови цыплят после их эстроге-низации была аналогична динамике содержания фосфопротеидов.
Для выяснения степени связи между исследуемыми показателями были рассчитаны коэффициенты корреляции. Биохимические показатели хорошо коррелировали между собой. Наименее тесная корреляционная связь отмечена между общим белком и другими показателями (0,76-0,80). Следует отметить высокий коэффициент корреляции между белковосвязанным фосфором и общим кальцием (0,99), что говорит о функциональной связи между ними. Для этих показателей было построено методом наименьших квадратов линейное уравнение регрессии:
Са = 2,0155*Р+76,4500; г = 0,9894,
где: Са, Р - концентрация, соответственно, кальция и белкового фосфора, мкг/мл.
Коэффициент 76,45 практически совпадал с концентрацией общего кальция в плазме крови контрольных цыплят (73,9). Следовательно, прибавка общего кальция в плазме крови цыплят после введения им эстрадиола обусловлена долей его, связанной с фосфопро-теидами, следовательно, с вителлогенином. Если сделать перерасчет с учетом атомных масс кальция и фосфора, то на один атом белкового фосфора приходится 1,56 атомов кальция за вычетом исходного уровня кальция в плазме крови, то есть когда содержание белкового фосфора практически равно нулю. Отсюда следует, что 2 атома фосфора вителлогенина, то есть две фосфатные группы, связывают в среднем три атома кальция.
Линейную зависимость между содержанием фосфопротсидного фосфора и общего кальция в крови цыплят после введения эстра-
диола можно использовать при прогнозировании яичной продуктивности кур. Нет необходимости использовать в качестве показателей фосфопротеидный фосфор и общий кальций одновременно, достаточно одного из них. Определение общего кальция методически проще. Определив его, с помощью несложных вычислений легко получить концентрацию белковосвязанного фосфора в плазме крови цыплят после введения 17-Р-эстрадиола.
Введение эстрадиола цыплятам приводило к заметному увеличению массы печени на 2-е сут после однократного и повторного введения 17-Р-эстрадиола (р<0,001) - по группам соответственно, 36,1 и 38,2 г против 28,1 и 28,5 г в контроле, достигая максимума на 4-е сутки (37,6 и 41,1 г) и возвращаясь к контрольному уровню (28,7 и 29,2 г) на 8-е сутки.
В изменении содержания ДНК в тканях печени отмечалась некоторая периодичность (табл. 2). Так, на 1-е и 3-й сутки после однократного введения гормона происходило понижение количества ДНК, перемежаемое повышением этого показателя, что может быть обусловлено частичной синхронизацией клеток печени по митотиче-скому циклу. Наименьшее содержание ДНК после однократного и повторного введения гормона наблюдали на 3-4-е сутки, когда отмечались максимумы по массе печени и содержанию рибосом. Следовательно, развитие белоксинтезирующего аппарата клеток печени достигало максимума на 3—4-с сутки, что вызывало некоторую гипертрофию гспатоцитов и снижение содержания ДНК. В последующем содержание ДНК постепенно повышалось и на 9-е сутки достоверно отличалось от регистрируемого на 3-4-с сутки (р<0,05). Количество рибосом при этом уменьшалось (р<0,01) и на 9-е сутки возвращалось к контрольному значению (рис. 9). Увеличение содержания ДНК и уменьшение содержания рибосом вызваны распадом гипертрофированного под влиянием 17-Р-эстрадиола белоксинтезирующего аппарата клеток печени. Это подтверждается изменением рибонуклеазной активности в тканях печени. На пятые сутки после введения гормона она на 40% превышала контрольные значения (р<0,001-0,05), а на 24-е сутки в период нарастания содержания рибосом в печени становилась ниже контроля на 29-16%.
Содержание РНК в тканях печени цыплят возрастало как после однократного, так и после повторного введения 17-р-эстрадиола при наибольшем значении на 5-е сутки. Наблюдаемое уменьшение содер
25
2. Масса печени цыплят, содержание в ней РНК, ДІІК и рнбонуклеазнан активность после однократного (О) н повторного (П) введения 17-р-эстраднола
Время после введения Масса печени, г/кг РНК, мг/г ДНК, мг/г Рибонуклеаза А260/минт печени
О П О П О П О
Контроль 28,1±2,7 28,5±2,2 б,81±0,37 7,08±0,37 2,11±0,24 2, №0,10 1,33±0,06
3 ч 24,6±0,7 31,6±2,0 б,77±0,40 7,04±0,16 2,40±0,18 2,64±0,08 1,79±0,10
бч 29,5±2,4 35,4=Ь1,4 7,48±0,29 6,82±0,40 2,41±0,09 2,54±0,15 -
9 ч 29,9±2,6 33,1±0,8 7,85±0,23 7,78±0,37 2,32±0,04 2,45±0,12 -
12 ч 31,5±2Д 33,4±1,2 7,48±0,06 б,57±0,16 2,45±0,13 2,16і0,09 1,24±0,07
1 сут 32,8±1,б 33,8±1,1 6,77±0,23 б,83±0,16 1,94±0,04 1,98±0,13 1,32±0,10
2 сут 36,1±1,3 38,2±2,1 8,51±0,13 8,39±0,29 2,19±0,02 1,79±0,11 0,95±0,07
3 сут 39,0±1,5 38,5±1,5 8,68±0,18 8,44±0,20 1,93±0,07 2,07±0,07 1,24±0,14
4 сут 37,6±1,1 41,1±1,1 8,41±0,21 8,50±0,05 2,04±0,07 1,76±0,07 1,12±0,01
5 сут 32,5±1,2 33,5±1,5 9,21±0,28 9,21 ±0,24 2,34±0,14 2,17±0,06 1,88±0,11
6 сут 37,0±1,4 32,7±4,2 8,87±0,24 8,84±0,47 2,17±0,10 2,3б±0,11 2,05±0,08
7 сут 38,2±1,4 36,5±1,б 8,41±0,43 8,55±0,23 2,13±0,15 2,12±0,04 1,73±0,08
8 сут 28,7±1,8 29,2±1,9 7,85±0,25 9,15±0,33 2,37±0,08 2,80±0,19 1,73±0,05
9 сут 30,5±1,9 34,9±5,3 8,45±0,47 8,60±0,16 3,20±0,09 2,57±0,17 1,72±0,08
жания РНК и рибосом в печени через четыре часа после однократного введения гормона сопровождалось увеличением рибонуклеазной активности на 35% (р<0,05).
Изменение количества ДНК зависело от схемы применения эстрогена. Так, на 2-е и 4-е сутки содержание ДНК было достоверно ниже при повторном введении эстрадиола, что свидетельствует о более высокой степени гипертрофии гепатоцитов. На 9-е сутки после однократного введения эстрадиола этот показатель возрастал и превышал контрольное значение (р<0,01). При повторном введении эстрадиола на последних стадиях ответа повышение ДНК наблюдали на 8-9-е сутки (табл. 2).
Количество общего белка в печени после однократной и повторной эстрогенизации не различалось. В динамике содержания рибосом в печени после однократного и повторного введения цыплятам 17-Р-эстрадиола имелись некоторые различия: снижение в первые часы после введения гормона, характерное для однократной эстрогенизации (р<0,05), после повторной - не наблюдали. На 12-й ч после повторного введения эстрогена, а также на 3-е и б-е сутки содержание рибосом было достоверно выше, чем после однократного. В остальные сроки статистически достоверных различий не обнаружили. Наличие разбросов, обусловленных индивидуальной чувствительностью цыплят к 17-Р-эстрадиолу, затрудняло непосредственное сравнение изменений показателя. Поэтому для оценки динамики содержания рибосом методом наименьших квадратов были построены уравнения регрессии А = а + Ы + с\2 + сИЗ, где А - содержание рибосом в тканях печени, А26о/г; I - время после введения гормона, сутки (рис. 9). При сравнении полученных кривых видно, что содержание рибосом в печени цыплят после повторной эстрогенизации в целом выше (р<0,05). Следовательно, после повторной эстрогенизации интенсивность синтеза белка в печени выше, чем после однократной, что и требует большего числа рибосом.
Таким образом, биогенез рибосом в печени у цыплят представляет собой один из главных факторов, количественно определяющих ответ на введение 17-Р-эстрадиола. Изменения в печени после однократного и повторного введения 17-Р-эстрадиола носили обратимый характер.
С целью выяснения роли отдельных классов РНК в становлении вителлогенной функции печени нами использовались: а-аманитин -
высокоспецифичный ингибитор РНК полимеразы И, ответственной за синтез мРНК; актиномицин Д - антибиотик в малых дозах преимущественно ингибирующий синтез РНК; тиоацетамид (ТАА) -стимулирующий синтез некоторых классов РНК (табл. 3).
сутки
Рисунок 9. Содержание рибосом в печени у цыплят при однократном (1) и повторном (2) введении 17-р-эстрадиола
Действие а-аманитина зависело от времени его введения. Будучи введенным одновременно с эстрадиолом, а -аманитин полностью подавлял ответ на эстрогенизацию, увеличения содержания фосфо-протеидов и триглицеридов не происходило, содержание общего белка в плазме крови снижалось на 37% по сравнению с уровнем контроля. Если а-аманитин вводили через 1 сутки после эстрадиола, то на вторые сутки после введения гормона наблюдалось значительное (на 83%) подавление синтеза вителлогенина и в гораздо меньшей степени (на 18%) синтеза триглицеридов, что связано с различной динамикой их биосинтеза и чувствительностью к изменениям в метаболизме РНК. а-Аманитин, блокируя синтез мРНК, препятствует синтезу вителлогенина из-за отсутствия матриц для синтеза. При этом ферменты для синтеза триглицеридов не теряют способности работать в присутствии а-аманитина, поэтому синтез триглицеридов уменьшается в меньшей степени.
3. Влияние ингибиторов на показатели крови и печени цыплят через двое суток после введения 17-р-эстрадиола
Введенное вещество Время введения ингибиторов Плазма крови Печень
Фосфор белковый мкг/мл% Триглице-риды, мг/мл% Рибосомы, А260/Г РНК-азная активность, А26о/мин'г
Контроль 0,9±0,2 5,6±1,7 142±5 17,8±2,4
Эстрадиол 55,4±5,8 57,9±3,2 174±8 12,9±0,6*
Эстрадиол +а-аманитин Одновременно 1,1±0,1 7,6±0,2 145±4 -
Эстрадиол +а-аманитин Через 24 час. 10,1±1,0 48,5±0,2 143 ±2 -
Эстрадиол +актиномицин Д Одновременно 38,9±3,7 40,2±2,8 156±6 -
Эстрадиол +актиномицин Д Через 24 час. 16,3±0,5 26,8±6,2 159±8 -
Эстрадиол +тиоацетамид Через 24 час 17,8±1,1 38,0±3,5 153±4 16,7±2,7
Контроль +тиоацетамид Через 24 час 1,4±0,1 10,8±0,5 127±4 28,9±1,4*
а-Аманитин, введенный как одновременно с гормоном так и через 24 часа после него, подавлял вызываемое эстрадиолом увеличение рибосом в гепатоцитах.
Актиномицин Д, введенный одновременно с гормоном, не полностью подавлял ответ печени на эстрогенизацию, но примерно на 30% снижал содержание как вителлогенина, так и триглицеридов в крови цыплят. Равномерное снижение синтеза вителлогенина и триглицеридов, мы связываем с дефицитом рибосом, увеличению содержания которых препятствовал актиномицин Д.
Введение ТАА одновременно с 17-Р-эстрадиолом подавляло вызываемое 17-Р-эстрадиолом увеличение содержания РНК и рибосом в печени, при этом содержание фосфопротеидов в плазме крови составило 25%, триглицеридов 35% от значений, наблюдаемых через одни сутки после введении цыплятам только 17-Р-эстрадиола.
Введение ТАА цыплятам контрольной группы на 62% увеличивало рибонуклеазную активность и на 29% включение 3Н-уридина в РНК печени. У цыплят опытной группы ТАА препятствовал снижению ри-бонуклеазной активности, вызванному введением 17-Р-эстрадиола. Полученные данные показывают, что ингибирующее действие тиоацета-мида на эстрогениндуцированный вителлогенез происходит за счет увеличения рибонуклеазной активности в печени цыплят.
3.3. Роль митохондрий в вителлогенезе печени
Становление вителлогенной функции печени при половом созревании кур и при введении эстрогенов цыплятам сопряжено с началом синтеза компонентов яичного желтка. С каждым желтком при снесении яйца из организма курицы выделяется около шести граммов липидов и трех граммов протеина, что обуславливает увеличение энерготрат и предполагает интеграцию вителлогенеза с биогенезом и функциональной активностью митохондрий.
В наших опытах эстрогенизация цыплят повлияла на функциональную активность митохондрий печени (табл. 4).
4. Влияние 17-р-эстрадиола на цитохромоксидазную активность митохондрий и на содержание мтДНК и мтРНК в печени
Показатель Время после введения 17-р-эстрадиола, час
контроль 4-12 24-48 72-96
Цитохромоксидазная активность, нмоль Ог'/мин-мг белка 253±15 201±14 165±9** 437±29***
мтДНК, мкг/мгбелка митохондрий 0,69±0,03 0,81±0,03 0,62±0,03 1,47±0,07**
мтРНК, мкг/мг белка митохондрий 5,2±0,4 6,4±0,3 9,5±0,5** 14,3±1,0***
Коэффициент РНК/ДНК в митохондриях 7,5 7,9 15,3 9,7
Содержание ДНК в митохондриях (мтДНК) печени через 4-12 ч после введения 17-Р-эстрадиола возросло на 17%. Еще более высокие значения зафиксировали через 72-96 ч: увеличение было 2,1-кратным (р<0,001). Содержание РНК в митохондриях (мтРНК) в опытной группе оказалось больше, чем в контрольной. Наибольший 30
рост показателя (в 1,8-2,8 раза) происходил в период с 24 до 96 ч после введения эстрадиола. Величина отношения мтРНК/мтДНК возросла, достигая через 24-48 ч максимального значения, после чего несколько снизилась, оставаясь, тем не менее, выше, чем в контроле. Цитохромоксидазная активность через 4-48 ч была несколько ниже, через 72-96 ч - в 1,7 раза выше контрольного значения. Введение цыплятам актиномицина Д одновременно с 17-Р-эстрадиолом предотвращало как падение, так и повышение активности цитохромок-сидазы. Это предполагает ее зависимость от синтеза de novo рибо-сомных РНК в ядрах гепатоцитов.
Измерение скоростей дыхания митохондрий показало, что в течение 24 ч после введения 17-Р-эстрадиол не оказывал какого-либо заметного влияния на окисление сукцината в присутствии АДФ, в ее отсутствие и не изменял скорость переноса электронов в разобщенной дыхательной цепи (табл. 5).
5. Влияние 17-р-эстрадиола на транспорт кальция и скорость потребления кислорода митохондриями печени цыплят (нмоль02/мин мг белка) при окислении сукцината
Показатель Время после введения 17-Р-эстрадиола, час
контроль 4-24 36-48 72-96
Коэффициент Са/О 4,0±0,1 4,5±0,2 5,3±0,2** 7,7±0,2***
В присутствии АДФ (V3) 28,5±1,0 30,0±1,5 19,5±1,0** 25,5±1,0
В отсутствие АДФ (V4o) 8,5±1,0 7,3±0,7 5,5±0,2* 15,0±1,5***
В присутствии ДНФ (Уд,,ф) 25,0±1,0 23,0±2,5 16,0±1,2** 28,5±1,0
Через 36^18 ч после введения 17-Р-эстрадиола в митохондриях наблюдалось заметное снижение скорости контролируемого (У4о) и активного дыхания (У3), а также в разобщенном состоянии дыхательной цепи (Уднф). Аналогичные результаты были получены при окислении других субстратов. Скорость потребления кислорода митохондриями печени эстрогенизированных цыплят при окислении глутамата+малата уменьшилась на 37-39%, а-кетоглутарата - на 5052%. После 72-96 ч у цыплят происходило увеличение скоростей дыхания как в присутствии акцепторов фосфата (У3), так и после использования всего добавленного АДФ (У4о).
Характер окислительного фосфорилирования и активного транспорта в митохондриях печени у кур-несушек и эстрогенизированных цыплят был аналогичен (табл. 6). У кур-несушек АДФ практически необратимо стимулировал дыхание, отмечалось низкое значение коэффициента АДФ/О. Снижение показателей энергетического сопряжения дыхания и фосфорилирования наблюдали при использовании среды инкубации, содержащей ионы магния, повышение - в их отсутствие. При этом величина отношения АДФ/О возросла с 0,50 до 1,50; а скорость дыхания после использования всего добавленного АДФ уменьшилась до 9,0 и практически равнялась таковой у цыплят и взрослых петухов. У кур добавление аденозинмонофосфата не влияло на скорость дыхания в отсутствие ¡У^2+, но стимулировало его в присутствии этого иона. Исключение ионов магния из среды инкубации практически не влияло на дыхание митохондрий печени у цыплят и взрослых петухов.
6. Окислительное фосфорилирование и коэффициент Са/О митохондрий печени цыплят и взрослой птицы
Показатель Цыплята (контроль) эстрогенизированные цыплята (72 ч) куры-несушки петухи
Скорость потребления кислорода в присутствии АДФ, нмольОг/мшгмг белка
+М§ 28,5±2,0 30,0±1,5 25,0±1,0 30,0±2,0
-м8 28,0±2,0 29,0±1,5 26,0±2,0 28,0±2,0
Скорость потребления кислорода после исчерпания добавленного АДФ, нмоль02/минмг белка
+Мё 8,5±1,5 15,0±1,5*** 22,3±1,7 7,5±1,5
7,0±1,0 7,0±0,5 9,0±1,2 7,0±1,5
Коэффициент АДФ/О
+Мё 1,85±0,10 1,20±0,01* 0,50±0,20 1,85±0,10
-м8 1,85±0,09 1,90±0,02 1,50±0,10 1,85±0,10
Коэффициент Са/О
4,0±0,1 6,6±0,2** 11,0±3,0 4,0±0,1
Для митохондрий печени цыплят опытной группы также было характерно низкое сопряжение дыхания и фосфорилирования в при-52
сутствии ионов магния и повышение степени сопряженности в их отсутствие. Полученные результаты позволили заключить, что в митохондриях эстрогснизированных цыплят также как у кур происходит включение аденилаткиназной реакции, которая активируется ионами магния и служит связующим звеном между окислительным фосфорилированием и процессами биосинтеза. При этом низкие показатели сопряжения дыхания и фосфорилирования у кур-несушек и эстрогенизированных цыплят обусловлены отвлечением промежуточных макроэргических соединений на специфические биосинтезы.
Одной из эндергонических реакций митохондрий, конкурирующей за промежуточные богатые энергией соединения с синтезом АТФ, является транспорт ионов кальция. В нашем опыте коэффициент Са/О для митохондрий печени у кур-несушек был в 2,8 раза выше, чем у цыплят и петухов. Это предполагает, что поглощение ионов кальция митохондриями у кур-несушек происходит с меньшей затратой кислорода, чем у цыплят и петухов. Под влиянием 17-р-эстрадиола (через 72-96 ч) у цыплят коэффициент Са/О возрастал в 1,9 раз приближаясь к таковому у кур-несушек (табл. 6).
Под влиянием 17-Р-эстрадиола в митохондриях печени цыплят происходило снижение пула свободных аминокислот. Если в контрольной группе сумма свободных аминокислот составила 0,345 мкмоль/мг белка, то через 36 ч она составила 0,269, а через 72 ч 32,6% от контрольной величины (р<0,001). Концентрация аргинина и лизина в контроле была 5,6 и 6,0 нМ/мг белка, соответственно, затем она увеличивалась и через 36^8 ч была в 2-2,5 раза больше, чем в контроле (р<0,001).
Полученные результаты позволили заключить, что при активации вителлогенной функции после введения 17-Р-эстрадиола, в печени цыплят наблюдалось два пика стимуляции биогенеза митохондрий. Первый по времени совпадал с синтезом ядерной ДНК (до 24 ч после введения эстрадиола), когда характеристики процесса окислительного фосфорилирования не отличались от таковых в контроле. Более интенсивный второй пик регистрировался через 72-96 ч после инъекции, и в этот период активность окислительного фосфорилирования в митохондриях печени эстрогенизированных цыплят была аналогична таковой у кур-несушек.
Действие клофибрата на митохондрии печени цыплят проявилось в двукратном увеличении скорости дыхания в третьем и четвер-
33
том состояниях по Чансу, в случае использования сукцината в качестве субстрата. Если субстратами служили глутамат+малат, то скорость дыхания митохондрий, лишь немного превышала контроль. Под влиянием клофибрата на 67% возрастала цитохромоксидазная активность митохондрий. Клофибрат снижал вызванное 17-р-эстрадиолом увеличение концентрации триглицеридов и не влиял на базовый уровень триглицеридов в плазме крови цыплят (табл.7).
7. Влияние клофибрата и 17-Р-эстрадиола на цитохромоксидазнуго активность, скорость потребления кислорода (нмоль Ог/мин х мг белка) митохондриями печени и содержание триглицеридов в крови цыплят
Группа Уз (сукцинат) Уз (глютамат + малат) Цитохро-моксидаза Триглицериды плазмы крови, мг/мл%
Контроль 32,4±1,2 22,8±1,5 19Ш0 3,3±0,7
7 сут. кормления клофибратом 57,0±2,1*** 27,8±2,0 319±31** 3,5±0,7
1 сут. после клофибрата 59,1±2,5*** 26,4±1,7 287±25** 3,4±0,7
2 сут. после клофибрата 62,5±3,0*** 25,8±1,9 304±27** 3,3±0,1,0
7 сут. Клофибрат + эстрадиол (1 сут.) 38,0±2,0 29,9±1,8 244±20 8,6±1,6
7сут. клофибрат + эстрадиол (2 сут.) 40,6±2,5 24,8±1,9 266±23 26,4±1,3***
Эстрадиол (1 сут.) 30,0±1,9 20,2±1,7 143±15 12,2±2,0***
Эстрадиол (2 сут.) 19,5±1,0** 11,5±0,8*** 115±10** 36,7±7,9***
Таким образом, снижение триглицеридемии под влиянием клофибрата происходит на фоне стимуляции дыхательной и цитохро-моксидазной активностей митохондрий, что определяет важную роль митохондрий в регуляции липогенеза. Функциональные изменения в печени цыплят, вызванные введением эстрадиола, и становление ее вителлогенной функции интегрированы с биогенезом, активностью окислительного фосфорилирования и функциональной специализацией митохондрий.
Выводы
На основании проведенных исследований по оценке трансгенных перепелов и изучению гормональной экспрессии генов у кур можно сделать следующие выводы:
1. Методом микроинъекции генной конструкции с геном гормона роста быка в зародышевые диски яйцеклеток перепелок эстонской породы была получена трансгенная птица.
2. «Пересадка» гена гормона роста быка перепелам эстонской породы повысила их живую массу на 5-15% и массу яиц на 10-20%. Высокие показатели наследовались в ряду поколений (р<0,001).
3. Яйценоскость перепелок в опытной группе колебалась по поколениям от 200 до 235 яиц за 50 недель их жизни, в контроле - от 193 до 227. Средняя яйцемасса за этот период в опытной группе составила 2749,4 г, что на 11% больше, чем в контрольной группе (р<0,001).
4. У потомков трансгенных перепелов установлено повышение иммунного статуса, выраженного в ускоренной выработке антител к вводимому антигену. Через четыре недели разность титров была высоко достоверна (р<0,001). В сыворотке крови опытной группы 1о§2 составил 6,0±0,23, в контрольной - 4,0±0,24; в желтке яиц опытной группы - 4,9±0,23, в контрольной - 2,9±0,09.
5. Введение 17-(3-эстрадиола цыплятам в возрасте 2,5-3 месяцев вызывало экспрессию генов, приводящую к становлению вителло-генной функции печени, при этом происходило увеличение ее массы в 1,3-2,2 раза и содержания рибосом в ней на 25-47%. Количество бсл'ка в' плазме крови увеличивалось на 70 %, из которых в среднем по 20 % приходилось на долю вителлогенина и ЛОНП I, 10 % -ЛОНП II, являющихся предшественниками яичного желтка; оставшиеся - составляли обычные белки плазмы крови цыплят. Изменения по всем изученным показателям носили обратимый характер и были статистически достоверны (р<0,001-0,05).
6. Индукция 17-Р-эстрадиолом синтеза ЛОНП I и вителлогенина имела разную динамику. ЛОНП I появлялся в крови на 12 часов раньше, а исчезал позже вителлогенина, который появлялся через 24 часа, а исчезал через 9 суток; на 5 сутки - их содержание было одинаковым. Синтез ЛОНП II эффективнее, чем синтез вителлогенина;
при перерасчете их содержания в крови на молекулярную массу ЛОНП II было в 9 раз больше, чем молекул вителлогенина.
7. Скорость становления вителлогенной функции в печени цыплят зависела от дозы и кратности введения эстрадиола. Синтез фос-фопротеидов увеличивался с повышением дозы 17-Р-эстрадиола с 10 до 30 мг/кг живой массы. Дозы 50 и 70 мг/кг действовали угнетающе.
8. Максимум ответа на введение 17-Р-эстрадиола приходился на пятые сутки. Количество фосфопротеидов в плазме крови цыплят при повторном введении 17-Р-эстрадиола на максимуме ответа в 1,72 раза превышало этот показатель при первичном ответе.
9. Введение 17-Р-эстрадиола цыплятам приводило к изменению рибонуклеазной активности в печени; через 3-4 часа она кратковременно повышалась на 35%, на 2-4-е сутки была ниже контроля (7184%), на 5-9-е сутки после введения гормона она на 29-54% превышала значение в контрольной группе (р<0,001-0,05).
10. Действие а-аманитина на гормональный вителлогенез у цыплят зависело от времени его введения. Введение а -аманитина одновременно с 17-р-эстрадиолом полностью подавляло увеличение содержания фосфопротеидов и триглицеридов и на 37% - содержание общего белка в плазме крови по сравнению с контролем. Если а-аманитин вводился на одни сутки позже 17-р- эстрадиола, то на вторые сутки после введения гормона происходило подавление синтеза вителлогенина на 83%, синтеза триглицеридов - на 18% (р<0,001).
11. Введение тиоацетамида цыплятам на 62% увеличивало рибо-нуклеазную активность. Введение тиоацетамида одновременно с 17-Р-эстрадиолом подавляло вызываемое 17-р-эстрадиолом увеличение содержания РНК и рибосом в печени, при этом содержание фосфопротеидов в плазме крови составило 25%, триглицеридов 35% от значений, наблюдаемых через одни сутки после введении цыплятам только 17-Р-эстрадиола (р<0,01-0,05).
12. При активации вителлогенной функции после введения 17-р-эстрадиола в печени цыплят наблюдались два пика стимуляции биогенеза митохондрий. Первый по времени совпадал с синтезом ядерной ДНК (12-24 ч после введения эстрадиола), в это время показатели окислительного фосфорилирования не отличались от таковых в
контроле. Более интенсивный второй пик регистрировался через 7296 ч после инъекции. Это сопровождалось увеличением содержания мтРНК в 2,8 раза и увеличением цитохромоксидазной активности в 1,7 раза по сравнению с контролем (р<0,001-0,01). Введение цыплятам 17-Р-эстрадиола одновременно с актиномицином Д препятствовало повышению активности цитохромоксидазы, что предполагает ее зависимость от синтеза de novo рибосомных РНК в ядрах гепато-цитов.
13. Введение 17-Р-эстрадиола цыплятам привело к снижению скорости дыхания митохондрий через 36^48 ч.: скорость окисления сукцината падала на 32-35%, глутамата+малата - на 37-39%, а-кетоглутарата - на 50-52%. Под влиянием 17-Р-эстрадиола через 7296 ч. в митохондриях цыплят возрастал коэффициент Са/О в 1,9 раз, приближаясь к таковому у кур-несушек (р<0,001-0,01).
14. Митохондрии печени эстрогенизированных цыплят и кур-несушек имеют более низкое сопряжение дыхания с фосфорилиро-ванием, чем в контроле. Величина отношения АДФ/О в митохондриях у цыплят контрольной группы составила 1,85; у опытных цыплят - 1,20 (р<0,05); у кур-несушек - 0,50 (р<0,001).
15. Митохондрии печени цыплят, которым в течение семи суток давали per os клофибрат, повысили на 67% цитохромоксидазную активность и на 20-76% скорость дыхания; последующее введение 17-Р-эстрадиола снизило этот эффект, не снимая полностью. Клофибрат снизил вызванное 17-Р-эстрадиолом увеличение количества тригли-церидов в плазме крови на 28-30%, не влияя на их содержание в контроле (р<0,001-0,01).
Сведения о практическом использовании результатов исследований
1. Данные исследования апробированы в производственных условиях ФГУП Загорское ЭПХ ВНИТИП Россельхозакадемии (Акт производственной проверки от 20 марта 2009 г.). В производственной проверке подтвердились результаты исследований о высокой массе яиц трансгенных перепелов: масса яиц группы перепелок нового варианта была на 18,7% выше массы яиц перепелов базового варианта в возрасте 11-12 недель.
2. Результаты по цитохромоксидазной и фосфорилирующей активности митохондрий печени были использованы при уточнении норм витаминов в рационах кур (Фисинин В.И., Коршунова Л.Г., 1988; Байковская И.П., Коршунова Л.Г., 1989), а также в Методическом руководстве для зоотехнических лабораторий «Оценка качества кормов, органов, тканей, яиц и мяса птицы», под общей редакцией академика РАСХН В.И. Фисинина и доктора биологических наук, профессора А.Н. Тншенкова, 1998 год, 11бс.
Рекомендации по использованию научных выводов
1. Результаты о высокой массе яиц трансгенных по гену бычьего соматотропина перепелов, подтвержденные данными производственной проверки, свидетельствуют о возможном практическом использовании методов трансгенеза в селекционной работе и, в том числе, как эффективный прием на повышение массы яиц.
2. Предложен способ отбора перепелок по массе яиц, позволяющий дать объективную характеристику поголовья по этому показателю и провести целенаправленный отбор перепелок-дочерей с повышенной массой яиц для комплектования промышленных и племенных стад без длительной оценки птицы. На данный способ оценки получен Патент РФ на изобретение №2402209 «Способ отбора перепелок по массе яиц» (2009).
3. Разные динамики индукции синтеза вителлогенина и липопро-теидов очень низкой плотности в печени цыплят, свидетельствующие об относительно независимой экспрессии соответствующих генов, являются обоснованием возможности раздельной селекции кур по этим признакам.
4. Установлена линейная зависимость содержания фосфопроте-идного фосфора и общего кальция в крови эстрогенизированных цыплят, что позволяет использование каждого из них для прогнозирования яичной продуктивности кур. Из соображений методического характера показатель общего кальция является предпочтительным.
Список РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
Публикации в рецензируемых журналах ВАК РФ:
1. Коршунова Л.Г., Карапетян Р.В. Трансгеника и се перспективы в птицеводстве // Птицеводство. - 2000. - № 4. - С. 23-25.
2. Коршунова Л.Г., Карапетян Р.В. Генетически модифицированные растения в кормах для птицы // Птицеводство. - 2007. - № 12.-С. 14-15.
3. Коршунова Л.Г., Карапетян Р.В. Гормональный и иммунный статус трансгенных перепелов // Ветеринария. - 2009. - № 5. - С. 15-16.
4. Коршунова Л.Г. Качество яиц перепелов эстонской породы // Птица и птицепродукты. - 2009. - № 3. - С. 50-51.
5. Коршунова Л.Г. Качество яиц трансгенных перепелов // Птицеводство. - 2009. - № 4. - С. 35-36.
6. Коршунова Л.Г. О роли митохондрий в становлении вителло-генной функции печени у кур // Сельскохозяйственная биология. -2009,-№4.-С. 46-50.
7. Коршунова Л.Г. Способ генетического улучшения продуктивных признаков птицы // Вестник РАСХН. - 2009. - № 3. - С. 7273.
8. Коршунова Л.Г. Биологические и продуктивные качества перепелов, трансгенных по гену бычьего соматотропина // Сельскохозяйственная биология. -2011. -№ 2. - С. 46-50.
9. Коршунова Л.Г., Карапетян Р.В. Биохимический подход к прогнозированию яичной продуктивности кур // Доклады Россель-хозакадемии. - 2011. - № 6. - С. 43^4.
10. Коршунова Л.Г., Карапетян Р.В. Влияние дозы 17-бета-эстрадиола на вигеллогенез печени цыплят // Вестник РАСХН. -20 П.-№6.-С. 64-66.
11. Коршунова Л.Г., Карапетян Р.В. Синтез вителлогенина в печени эстрогенизированных цыплят // Вестник РАСХН. - 2011. - № 4. - С. 67-69.
12. Коршунова JI.Г. Фенотипическая характеристика серых перепелов эстонской породы // Птица и птицепродукты. - 2011. - № 3. - С. 43-47.
13. Фисинин В.И., Околелова Т.М., Коршунова Л.Г. Гормональный статус мясных кур при различном уровне лимитирующих витаминов в рационе //Доклады ВАСХНИЛ. - 1990. -№ 8. - С. 51-54.
14. Цитохромоксидазная и фосфорилирующая активность печени ремонтных курочек в зависимости от их возраста и дозы витаминов в рационе / В.И. Фисинин, Т.М. Околелова, Л.Г. Коршунова, Р.В. Карапетян // Сельскохозяйственная биология. - 1988. - № 3. -С. 43-45.
Патентные материалы
15. Способ отбора перепелок по массе яиц: пат. 2402209 RU / В.И. Фисинин, Л.Г. Коршунова, Р.В. Карапетян и др № 2009118061/13; заявл. 12.05.2009; опубл. 27.10.2010, Бюл. № 30.
Публикации в материалах конференций и других научных и научно-практических изданиях:
16. Биоэнергетика митохондрий печени ремонтных молодок в зависимости от уровня жиро- и водорастворимых витаминов в рационе / В.И. Фисинин, Т.М. Околелова, Л.Г. Коршунова и др. // Научные основы витаминного питания с.-х. животных: тезисы докладов 2-го Всесоюзного симпозиума. - Юрмала, 1987. - С. 217-218.
17. Влияние дозы эстрадиола на динамику синтеза вителлогени-на в печени цыплят / Л.Г. Коршунова, Р.В. Карапетян, И.В. Журавлев, В.И. Фисинин // Всесоюзный биохимический съезд. Тезисы. - Киев, 1986.-Т. 3,-С. 263-264.
18. Газоэнергетический обмен и пищеварение у бройлеров при ограниченном кормлении / А.Н. Тишенков, Л.Г. Коршунова, H.A. Зубарева и др. // Интенсификация птицеводства. Сборник научных трудов ВНИТИП. - Загорск: ВНИТИП, 1987.-С. 139-151.
19. Гормональный статус ремонтных молодок при различном уровне лимитирующих витаминов в рационе / В.И. Фисинин, Т.М. Околелова, Р.В. Карапетян, Л.Г. Коршунова // Научные основы витаминного питания с.-х. животных. Тез. докладов 2-го Всесоюзного симпозиума. - Юрмала, 1987. - С. 215-216.
20. Жирнокислотный состав липидов желтка яиц трансгенных перепелов / Л.Г. Коршунова, М.М. Демченко, А.Н. Шсвяков, Р.В Ка-рапетян // Сборник научных трудов ВНИТИП. - Сергиев Посад: ВНИТИП, 2008. - Т. 83. - С. 84-93.
21. Инъекции гена бета-галактозидазы в яйцеклетки кур / Р.В. Карапстян, Л.Г. Коршунова, Л.Е. Андреева и др. // Актуальные проблемы биотехнологии в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии: тезисы докладов. - Москва, 1996. - С. 35-35.
22. Использование полярографического метода для определения трихотецина / Е.Б. Кругляк, С.Г. Билуши, П.М. Зайцев, Л.Г. Коршунова//Антибиотики. - 1977.-Т. 22.-№ 12.-С. 1088-1093.
23. Карапетян Р.В., Коршунова Л.Г. Содержание рибосом в печени цыплят и индукция синтеза вителлогенина 17-бета-эстрадиолом // Передовой науч.-произв. опыт в птицеводстве: Экспресс-информ. / ВНИИТЭИСХ, Всесоюз. н.-и. и технол. ин-т птицеводства. - 1980. -№5.-С. 15-20.
24. Карапетян Р.В., Коршунова Л.Г., Журавлев И.В. Эстроген-стимулированный вителлогенез в печени неполовозрелых цыплят // Тез. докл. Всесоюзного симпозиума по биохимии с.-х. животных. -Витебск, 1982.-С. 72-73.
25. Карапетян Р.В., Коршунова Л.Г., Журавлев И.В. Биогенез рибосом и синтез вителлогенина в печени цыплят после однократного и повторного введения эстрадиола // Новое в селекции, кормлении и профилактике заболеваний с.-х. птицы. Сб. науч. трудов ВНИТИП. -Загорск: ВНИТИП, 1983. - Т. 56. - С. 40-47.
26. Карапетян Р.В., Коршунова Л.Г., Журавлев И.В. Эстрогенин-дуцированный вителлогенез, метаболизм РНК в печени цыплят и действие альфа-аманитина, актиномицина Д и тиоацетамида // Фи-зиолого-биохимические основы повышения продуктивности с.-х. птицы. Сб. науч. трудов. - Боровск: ВНИИФБиП, 1985. - Т. XXXI. -С. 126-133.
27. Карапетян Р.В., Коршунова Л.Г., Фисинин В.И. Использование сперматозоидов в качестве вектора переноса чужеродной ДНК в яйцеклетки сельскохозяйственной птицы // Ориентированные фундаментальные исследования и их реализация в АПК России: материалы конференции. - С.-Петербург, 2008. - С. 55-56.
28. Карапетян Р.В., Коршунова Л.Г. Яичная продуктивность потомков перепелов, трансгснных по гену бычьего соматотропина // Достижения в современном птицеводстве. Исследования и инновации: материалы XVI конференции Российского отделения Всемирной научной ассоциации по птицеводству. - Сергиев Посад, 2009. -С. 34-35.
29. Коршунова Л.Г. Влияние 17-в эстрадиола на энергетическую функцию митохондрий печени цыплят // Передовой науч.-произв. опыт в птицеводстве: Экспресс-информ. / ВНИИТЭИСХ, Всесоюз. н.-и. и технол. ин-т птицеводства. - 1978. -№ 7. - С. 28-30.
30. Коршунова Л.Г. Роль магния в регуляции фосфорилирования митохондрий печени кур // Передовой науч.-произв. опыт в птицеводстве: Экспресс-информ. / ВНИИТЭИСХ, Всесоюз. н.-и. и технол. ин-т птицеводства. - 1978. - № 9. - С. 34-36.
31. Коршунова Л.Г. Влияние 17-в эстрадиола на содержание свободных аминокислот в митохондриях печени цыплят // Тезисы докладов 22 конференции молодых ученых и аспирантов по птицеводству. - Загорск, 1979.-С. 17-19.
32. Коршунова Л.Г., Журавлев И.В. Действие клофибрата на ли-погенез у цыплят // Передовой науч.-произв. опыт в птицеводстве: Экспресс-информ. / ВНИИТЭИСХ, Всесоюз. н.-и. и технол. ин-т птицеводства. - 1980. — № 2. - С. 34-37.
33. Коршунова Л.Г. Роль митохондрий печени кур в синтезе основных компонентов яичного желтка: Автореф. дисс. ... канд. биол. наук. - Боровск, 1980. - 19 с.
34. Коршунова Л.Г., Журавлев И.В. Окислительное фосфорили-рование митохондрий печени цыплят и кур // Митохондрии. Механизмы сопряжения и регуляции. Тез. докл. 11 Всесоюзного симпозиума. - Пущино, 1981. - С. 65-66.
35. Коршунова Л.Г., Тишенков А.Н., Зубарева H.A. Биоэнергетика митохондрий печени кур в зависимости от факторов кормления // Биохимия сельскохозяйственных животных и продовольственная программа. Тез. докл. Всесоюзного симпозиума. - Ташкент, 1986. -С. 83.
36. Коршунова Л.Г., Тишенков А.Н., Зубарева H.A. Гормональный статус крови и обмен веществ у бройлеров при различной дли-
тельности светового периода // Передовой науч.-произв. опыт в птицеводстве: Экспресс-информ. / ВНИИТЭИСХ, Всесоюз. н.-и. и тех-нол. ин-т птицеводства. - 1988. -№ 5. - С. 33-39.
37. Коршунова Л.Г., Балаев А., Зубарева H.A. Выращивание бройлеров в условиях пониженного воздухообмена // Передовой науч.-произв. опыт в птицеводстве: Экспресс-информ. / ВНИИТЭИСХ, Всесоюз. н.-и. и технол. ин-т птицеводства. - 1991. -№ 3. - С. 10-14.
38. Коршунова Л.Г., Зубарева H.A., Карапетян Р.В. Энергетический обмен и гормональный статус крови мясных цыплят в зависимости от факторов кормления // Использование физических и биологических факторов в ветеринарии и животноводстве. Тез. докл. Всесоюзной науч. конференции. - Витебск, 1991.
39. Коршунова Л.Г., Зубарева H.A., Карапетян Р.В. Энергетический обмен и гормональный статус крови у бройлеров в зависимости от плотности посадки // Проблемы современного птицеводства. -Харьков, 1991.-С. 102-103.
40. Коршунова Л.Г., Карапетян Р.В. Использование полимераз-ной цепной реакции для идентификации интегрированного в геном перепела гена гормона роста быка // Молекулярная генетика и биотехнология в оценке и изменении геномов с.-х. животных: материалы международн. симпозиума. - С.-Петербург, Пушкин, 1994. - С. 18-19.
41. Коршунова Л.Г., Карапетян Р.В., Фисинин В.И. Трансформация генома птиц микроинъекцией ДНК в яйцеклетки на разных стадиях созревания // 6-ая Конференция Балтийских стран по птицеводству. - Вильнюс, Литва, 1998. - С. 52-55.
42. Коршунова Л.Г., Карапетян Р.В. Исследование экспрессии гена в-галактозидазы в трансгснных эмбрионах кур // Сборник научных трудов ВНИТИП. - Сергиев Посад: ВНИТИП, 2000. - Т. 75. - С. 101-104.
43. Коршунова Л.Г., Карапетян Р.В. Трансгенная птица // Науч,-произв. опыт в птицеводстве: Экспресс-информ. / Всерос. н.-и. и технол. ин-т птицеводства. - 2000. - № 1. - С. 46-48.
44. Нормирование жирорастворимых витаминов для мясных кур-несушек / И.П. Байковская, Т.Л. Пименова, Л.Г. Коршунова и др.
// Вопросы повышения эффективности кормления сельскохозяйственной птицы. Сборник научных трудов ВНИТИП. - Загорск: ВНИТИП, 1989.-С. 57-62.
45. Обмен веществ и пищеварение у бройлеров в зависимости от световых режимов / А.Н. Тишенков, JI.F. Коршунова, H.A. Зубарева, В.Н. Доброхотов // Вопросы повышения эффективности кормления сельскохозяйственной птицы. Сборник научных трудов ВНИТИП. -Загорск: ВНИТИП, 1989. - С. 123-129.
46. Обмен веществ и пищеварение у бройлеров на низкопротеиновых рационах с добавлением синтетических аминокислот / А.Н. Тишенков, Л.Г. Коршунова, H.A. Зубарева, В.Н. Доброхотов // Эффективное использование кормов в птицеводстве. Тезисы докладов Всесоюзной научно-технической конференции. - Новосибирск, 1990.-С. 16.
47. Оценка качества кормов, органов, тканей, яиц и мяса птицы. Методическое руководство для зоотехнических лабораторий / В.И. Фи-синин, А.Н. Тишенков, И.А. Егоров, и др. / под редакцией А.Н. Тишен-кова и В.И. Фисинина - Сергиев Посад: ВНИТИП, 1998. - 116 с.
48. Особенности фенотипа популяции потомков перепелов, трансгенных по гену бычьего соматотропина / Р.В. Карапетян, Л.Г. Коршунова, K.P. Коршунов и др. // Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии: Тез. докладов II Межд. науч. конф. -Москва, 2000.-С. 140-141.
49. Получение кур, трансгенных по гену в-интерферона / Л.Г. Коршунова, В.А. Серикова, О.Ф. Зиадинова, Р.В. Карапетян // Сборник научных трудов ВНИТИП. - Сергиев Посад: ВНИТИП, 2000. -Т. 75.-С. 96-100.
50. Состояние обмена веществ и пищеварение у бройлеров в зависимости от содержания растворимых форм протеина в рационе / А.Н. Тишенков, Л.Г. Коршунова, H.A. Зубарева, В.Н. Доброхотов // Селекция и воспроизводство сельскохозяйственной птицы. Сборник научных трудов ВНИТИП. - Загорск: ВНИТИП, 1990. - С. 157-167.
51. Сравнительная оценка яичной продуктивности потомков трансгенных и серых перепелов эстонской породы / Л.Г. Коршунова, Р.В. Карапетян, K.P. Коршунов и др. // Сборник научных трудов ВНИТИП. - Сергиев Посад: ВНИТИП, 2001. - Т. 76. - С. 78-85.
52. Трансгенные технологии улучшения продуктивных качеств сельскохозяйственной птицы / Л.Г. Коршунова, Р.В. Карапетян, З.А. Петрина, О.Ф. Зиадинова // Сборник научных трудов ВНИТИП. -Сергиев Посад: ВНИТИП, 2010. - Т. 85. - С. 18-24.
53. Фисинин В.И., Карапетян Р.В., Коршунова Л.Г. Использование спермиев в качестве вектора переноса чужеродной ДНК в яйцеклетки кур // Достижения в современном птицеводстве. Исследования и инновации: материалы XVI конференции Российского отделения Всемирной научной ассоциации по птицеводству. - Сергиев Посад, 2009.-С. 67-68.
54. Karapetyan R.V., Korshunova L.G., Fisinin V.I. Production of transgenic chicken by DNA microinjection in ovum // The poultry industry towards the 21st century: 10th European Poultry Conference. - Jerusalem, Israel, 1998. - V. 1. - P. 227-229.
55. Phenotypic features of transgenic quail carrying the bovine growth hormone gene / R.V. Karapetyan, L.G. Korshunova, K.R. Kor-shunov, V.I. Fisinin // XXI World's poultry congress. - XXI World's poultry congress, 2000.-P. 45.
56. Fisinin V.I., Karapetyan R.V., Korshunova L.G. Obtaining of transgenic chickcn by DNA microinjection in ovum // Eight Baltic Poultry Conference. - Turku, Finland, 2000. - P. 80.
Формат 60x90 '/|6. Печать офсетная. Объем 2,75 п. л. Тираж 100 экз. Заказ 1926. Отпечатано с готовых диапозитивов в филиале ГУП МО «Мытищинская типография» «Загорская типография» 141300, Московская обл., г. Сергиев Посад, пр. Красной Армии, д. 212Б Тел. (496) 547-60-60, (496) 540-25-70, факс 540-25-70
Содержание диссертации, доктора биологических наук, Коршунова, Людмила Георгиевна
Введение.
1. Обзор литературы.
1.1. Современное состояние и перспективы использования трансгенеза в птицеводстве.
1.2. Экспрессия вителлогенинового гена и биосинтез вителлогенина в печени кур.
1.3. Роль митохондрий в становлении вителлогенной функции печени у кур.
2. Материал и методы исследований.
2.1. Методы получения и исследования трансгенных перепелов.
2.2. Методы исследования эстрогениндуцированного вителлогенеза и биогенеза рибосом печени цыплят.
2.3. Методы исследования роли митохондрий печени в становлении ее вителлогенной функции.
3. Результаты исследований.
3.1. Получение и изучение трансгенных перепелов с геном гормона роста быка.
3.2. Изучение эстрогениндуцированного вителлогенеза и биогенеза рибосом печени цыплят.
3.3. Изучение роли митохондрий в вителлогенезе печени.
4. Обсуждение результатов.
4.1. Получение трансгенных перепелов, экспрессия и наследование гена гормона роста быка.
4.2. Экспрессия вителлогенинового гена и биогенез рибосом печени цыплят.
4.3. Роль митохондрий в вителлогенезе печени кур.
5. Выводы.
6. Сведения о практическом использовании результатов исследований.
7. Рекомендации по использованию научных выводов.
Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Трансгенез и экспрессия генов у сельскохозяйственной птицы"
Актуальность темы. Современная селекция в птицеводстве базируется на отборе лучшего поголовья из высокопродуктивных семей и семейств и требует длительного времени. Одним из нетрадиционных подходов к генетическому улучшению птицы может стать трансгенез - внедрение в их геном инородных генов. Несмотря на методические трудности, работы по созданию трансгенной птицы как актуального направления в отрасли активно ведутся во многих странах, поскольку перспективны с точки зрения экономической выгоды, возможностью достижения эффекта селекции в короткие сроки. Трансгенез расширяет возможности получения животных с измененными признаками, многие из которых могут быть использованы в селекции, при этом отпадает необходимость длительных обратных скрещиваний для удаления из популяции «ненужных» генов, неизбежно передаваемых при обычной гибридизации. Очевидно, что методами трансгенеза могут быть введены в популяцию совершенно новые фенотипические признаки, кодируемые генами других видов и родов животных.
Дальнейшее развитие селекции и генетики сельскохозяйственной птицы предполагает разработку новых методов и приемов оценки генома, основанных на знаниях механизмов организации и функционирования живых организмов, в частности, механизмов яйцеобразования у кур. Процесс яйцеобразования связан со значительным усилением биосинтетических процессов в печени, где происходит синтез большинства желточных белков. Белки желтка в основном происходят из вителлогенина и липопротеидов очень низкой плотности (ЛОНП), синтез которых начинается в печени кур по достижении ими репродуктивного возраста. С наступлением яйценоскости печень курицы приобретает новую вителлогенную функцию без утраты предшествующих. Такая дифференцировка уже специализированной ткани находится под контролем эстрогенов. Синтез вителлогенина и ЛОНП может быть вызван у цыплят введением им эстрадиола. Этот феномен позволяет изучать гормониндуцированную экспрессию «молчащих» генов, то есть последовательность процессов, приводящих к синтезу определенного белкового продукта, не синтезируемого ранее, а также определенные этапы этих процессов. Реализация генетической информации во многом зависит от рибосом, содержание которых определяет интенсивность белкового синтеза.
Активизация биосинтеза в печени связана с дополнительными энергозатратами, что предполагает значительное увеличение энергетической нагрузки на митохондрион печени, обеспечивающий производство необходимого количества макроэргических соединений для анаболических процессов. Наличие в митохондриях собственного генетического материала обуславливает свои особенности во взаимодействии ядерного и митохондриального геномов в процессе развития и специализации органов и тканей.
Новые знания о сопряженности экспрессии вителлогенинового гена с биогенезом рибосом, митохондриальной энергетикой клеток печени и их использование будут способствовать максимальной реализации продуктивного потенциала у кур.
Цель и задачи исследований. Основной целью настоящей работы было изучение воздействия интегрированной генной конструкции, с геном гормона роста быка на биологические и продуктивные признаки генетически модифицированных перепелов, а также изучение гормональной экспрессии генов в печени цыплят.
В связи с указанным были поставлены следующие задачи:
- получить трансгенных перепелов с встроенным геном гормона роста быка;
- провести оценку экспрессии трансгена, биологических и продуктивных показателей трансгенных перепелов в ряду поколений: динамика роста и иммунный статус перепелов, гормональный статус крови, масса перепелиных яиц, их биохимический состав и морфологические показатели, яйценоскость;
- изучить экспрессию генов на модели гормониндуцированного вител-логенеза у цыплят: синтез вителлогенина и липопротеидов очень низкой плотности, биохимические показатели крови и печени, биогенез рибосом после однократного и повторного введения цыплятам 17-Р-эстрадиола и в зависимости от его дозы;
- определить влияние гормональной экспрессии генов, вызванной 17-0-эстрадиолом, на биогенез и биоэнергетические параметры митохондрий печени цыплят.
Научная новизна работы. Впервые проведена оценка экспрессии трансгена, генетический и фенотипический анализ трансгенных по гену гормона роста быка перепелов, полученных методом микроинъекции экзогенной ДНК в зародышевые диски яйцеклеток, и их потомков в ряду поколений.
Впервые на примере трансгенных перепелов по гену гормона роста быка показана возможность существенного улучшения продуктивности птицы методами трансгенеза.
Впервые изучена сопряженность эстрогениндуцированной экспрессии вителлогенинового гена, выраженной в усилении синтетических процессов в печени и увеличении содержания вителлогенина, ЛОНП и триглицеридов в плазме крови с синтезом РНК и биогенезом рибосом в печени цыплят.
Выявлено, что синтез вителлогенина и липопротеидов очень низкой плотности в печени эстрогенизированных цыплят имеют разные динамики, то есть относительно независимую регуляцию экспрессии соответствующих генов.
Обосновано, что необходимым условием для становления вителлоген-ной функции печени является синтез мРНК в первые часы после введения 17-р-эстрадиола цыплятам. Биогенез рибосом определяет количественные характеристики ответа печени на гормон. Увеличение числа рибосом в печени после повторного введения эстрадиола цыплятам больше, чем после однократного.
Получены новые данные о том, что различия функционального состояния митохондрий печени кур-несушек и цыплят нивелируются в ходе эстро-гениндуцированного вителлогенеза: в митохондриях печени цыплят происходят изменения параметров сопряжения и активного транспорта ионов кальция, которые приближаются к таковым в митохондриях печени кур-несушек.
Практическая ценность работы. Перепела опытной группы, потомки трансгенных по гену гормона роста быка, в ряду поколений сохранили превосходство по живой массе на 5-15% и массе яиц на 10-20% по сравнению с обычными, что свидетельствует о возможном практическом использовании трансгенеза в селекционной работе, направленной на повышение продуктивных показателей птицы в короткие сроки. Производственная проверка подтвердила результаты исследований. Разница по массе яиц перепелок трансгенного происхождения и эстонской породы составила 18,7%.
Материалы исследований легли в основу разработанного способа отбора перепелок по массе яиц (Патент РФ № 2402209). Результаты еженедельных взвешиваний яиц перепелок, отличающихся по средним показателям, с 7- до 50- недельного возраста позволили определить целесообразный возраст проведения оценки перепелок по этому признаку (11-12 недель). Именно в этом возрасте масса яйца соответствует средним показателям за весь период яйценоскости.
Выявленные у цыплят различия в динамике индукции синтеза вителло-генина и ЛОНП в ответ на введение 17-(3-эстрадиола являются обоснованием возможности раздельной селекции кур по этим признакам.
Линейная зависимость содержания фосфопротеидного фосфора и общего кальция в крови эстрогенизированных цыплят позволяет использовать каждый из них для ранней оценки яичной продуктивности кур. Использование в качестве показателя общего кальция из соображений методического характера является предпочтительным.
На основании изученных параметров окислительного фосфорилирова-ния и цитохромоксидазной активности митохондрий печени получено экспериментальное подтверждение оптимальным нормам кормления, режимам выращивания и содержания птицы (Фисинин В.И., Коршунова Л.Г., 1988;
Байковская И.П., Коршунова Л.Г., 1989), Методическое руководство для зоотехнических лабораторий (1998).
Основные положения, выносимые на защиту. В результате выполненных исследований и производственной проверки разработаны и выносятся на защиту следующие основные положения:
1. Экспрессии трансгена у перепелов, полученных методом микроинъекции генной конструкции с геном гормона роста быка в зародышевые диски яйцеклеток, и их потомков в ряду поколений.
2. Рост, продуктивность, гормональный статус крови, иммунный статус трансгенных по гену гормона роста быка перепелов и их потомков в ряду поколений.
3. Синтез вителлогенина и липопротеидов очень низкой плотности, показатели крови и печени, биогенез рибосом после однократного и повторного введения цыплятам 17-Р-эстрадиола и в зависимости от его дозы.
4. Интеграция гормональной индукции вителлогенной функции печени цыплят с биогенезом, активностью окислительного фосфорилирования и функциональной специализацией митохондрий.
Апробация работы. Основные материалы диссертации были представлены на Ученых советах ВНИТИП в ежегодных отчетах 1980-2010 г.г.; на 11 Всесоюзном симпозиуме по биохимии митохондрий, Пущино (1981); на Всесоюзном симпозиуме по биохимии с.-х. животных, Витебск (1982); на научно-методической комиссии по селекции и генетике птицеводства Отделения животноводства ВАСХНИЛ (1983); на Всесоюзном биохимическом съезде, Киев (1986); на Всесоюзном симпозиуме «Биохимия сельскохозяйственных животных и продовольственная программа», Ташкент (1986); на 2 Всесоюзном симпозиуме «Научные основы витаминного питания с.-х. животных», Юрмала (1987); на Всесоюзной научно-технической конференции «Эффективное использование кормов в птицеводстве», Новосибирск (1990); на Всесоюзной научной конференции «Использование физических и биологических факторов в ветеринарии и животноводстве», Витебск (1991); на Украинской конференции с международным участием «Актуальные проблемы современного птицеводства», Харьков (1991); на международном симпозиуме «Молекулярная генетика и биотехнология в оценке и изменении геномов с.-х. животных», С.-Петербург, Пушкин (1994); на ежегодных отчетах в отделении зоотехнии и животноводства РАСХН (1995-2005 г.г.); на научных конференциях «Актуальные проблемы биотехнологии в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии», Москва (1996, 2000 гг.); на II Международной выставке «Инновации-99. Технологии живых систем» Всероссийский выставочный центр, Москва (1999), где был присужден Диплом II степени за разработку «Получение трансгенной птицы»; на конференции «Ориентированные фундаментальные исследования и их реализация в АПК России». С.Петербург (2008), на XVI конференции Российского отделения Всемирной научной ассоциации по птицеводству «Достижения в современном птицеводстве: Исследования и инновации», Сергиев Посад (2009); а также за рубежом на 10 Европейской конференции по птицеводству, Иерусалим, Израиль (1998); на 6 Конференции Балтийских стран по птицеводству, Вильнюс, Литва (1998), на 8 конференции стран Балтии по птицеводству, Турку, Финляндия (2000); на 21 Международном конгрессе по птицеводству, Монреаль, Канада (2000).
Публикация результатов исследований. Основные результаты исследований опубликованы в трудах ВНИТИП, материалах Россельхозакаде-мии, республиканских и международных научных конференций, научных и научно-производственных журналах, информационной экспресс-информации. Всего по теме диссертационной работы опубликовано 56 статей, в том числе 14 в изданиях, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ, методическое руководство для зоотехнических лабораторий «Оценка качества кормов, органов, тканей, яиц и мяса птицы», 1998, получен патент РФ(2009 г.) на изобретение.
Научные исследования выполнены в соответствии с планом (1980— 2010 гг.) Всесоюзного научно-исследовательского и технологического института птицеводства ныне ГНУ ВНИТИП Россельхозакадемии по темам: «Разработать методы прогнозирования яйценоскости кур с помощью введения в раннем возрасте экзогенных гормонов», № гос. per. 81090364; «Разработка переносов генов в геном птиц» № гос. per. 01980008817, «Разработать новые и усовершенствовать существующие методы получения трансгенной птицы с заданными признаками», № гос. per. 01200120268; «Разработать методы получения генетически модифицированной птицы с ценными хозяйственными признаками», № гос. per. 01200602327.
Объем и структура работы. Диссертационная работа состоит из следующих разделов: введение; обзор литературы; материал и методика исследований; результаты исследований и их обсуждение; выводы; список литературы; приложения. Материал изложен на 305 страницах машинописного текста, иллюстрирован 44 таблицами и 26 рисунками. Список литературы включает 644 библиографических источника, в том числе 205 отечественных и 439 иностранных авторов. Приложение включает дополнительные таблицы и рисунки, иллюстрирующие результаты исследований; Патент РФ на изобретение №2402209 «Способ отбора перепелок по массе яиц», 2009; Акт производственной проверки, 2009; Удостоверение на рационализаторское предложение, 1981; Методическое руководство, 1998.
Заключение Диссертация по теме "Разведение, селекция и генетика сельскохозяйственных животных", Коршунова, Людмила Георгиевна
5. Выводы
На основании проведенных исследований по оценке трансгенных перепелов и изучению гормональной экспрессии генов у кур можно сделать следующие выводы:
1. Методом микроинъекции генной конструкции с геном гормона роста быка в зародышевые диски яйцеклеток перепелок эстонской породы была получена трансгенная птица.
2. «Пересадка» гена гормона роста быка перепелам эстонской породы повысила их живую массу на 5-15% и массу яиц на 10-20%. Высокие показатели наследовались в ряду поколений (р<0,001).
3. Яйценоскость перепелок в опытной группе колебалась по поколениям от 200 до 235 яиц за 50 недель их жизни, в контроле - от 193 до 227. Средняя яйцемасса за этот период в опытной группе составила 2749,4 г, что на 11% больше, чем в контрольной группе (р<0,001).
4. У потомков трансгенных перепелов установлено повышение иммунного статуса, выраженного в ускоренной выработке антител к вводимому антигену. Через четыре недели разность титров была высоко достоверна (р<0,001). В сыворотке крови опытной группы 1о§2 составил 6,0±0,23, в контрольной -4,0±0,24; в желтке яиц опытной группы - 4,9±0,23, в контрольной - 2,9±0,09.
5. Введение 17-Р-эстрадиола цыплятам в возрасте 2,5-3 месяцев вызывало экспрессию генов, приводящую к становлению вителлогенной функции печени, при этом происходило увеличение ее массы в 1,3-2,2 раза и содержания рибосом в ней на 25—47%. Количество белка в плазме крови увеличивалось на 70 %, из которых в среднем по 20 % приходилось на долю вителлогенина и ЛОНПI, 10 % - ЛОНПII, являющихся предшественниками яичного желтка; оставшиеся - составляли обычные белки плазмы крови цыплят. Изменения по всем изученным показателям носили обратимый характер и были статистически достоверны (р<0,001-0,05).
6. Индукция 17-(3-эстрадиолом синтеза ЛОНП I и вителлогенина имела разную динамику. ЛОНП I появлялся в крови на 12 часов раньше, а исчезал позже вителлогенина, который появлялся через 24 часа, а исчезал через 9 суток; на 5 сутки - их содержание было одинаковым. Синтез ЛОНП II эффективнее, чем синтез вителлогенина; при перерасчете их содержания в крови на молекулярную массу ЛОНП II было в 9 раз больше, чем молекул вителлогенина.
7. Скорость становления вителлогенной функции в печени цыплят зависела от дозы и кратности введения эстрадиола. Синтез фосфопротеидов увеличивался с повышением дозы 17-|3-эстрадиола с 10 до 30 мг/кг живой массы. Дозы 50 и 70 мг/кг действовали угнетающе.
8. Максимум ответа на введение 17-|3-эстрадиола приходился на пятые сутки. Количество фосфопротеидов в плазме крови цыплят при повторном введении 17-р-эстрадиола на максимуме ответа в 1,72 раза превышало этот показатель при первичном ответе.
9. Введение 17-р-эстрадиола цыплятам приводило к изменению рибо-нуклеазной активности в печени; через 3-4 часа она кратковременно повышалась на 35%, на 2-4-е сутки была ниже контроля (71-84%), на 5-9-е сутки после введения гормона она на 29-54% превышала значение в контрольной группе (р<0,001-0,05).
10. Действие а-аманитина на гормональный вителлогенез у цыплят зависело от времени его введения. Введение а -аманитина одновременно с 17-0-эстрадиолом полностью подавляло увеличение содержания фосфопротеидов и триглицеридов и на 37% - содержание общего белка в плазме крови по сравнению с контролем. Если а-аманитин вводился на одни сутки позже 17-Р- эстрадиола, то на вторые сутки после введения гормона происходило подавление синтеза вителлогенина на 83%, синтеза триглицеридов - на 18% (р<0,001).
11. Введение тиоацетамида цыплятам на 62% увеличивало рибонукле-азную активность. Введение тиоацетамида одновременно с 17-р-эстрадиолом подавляло вызываемое 17-Р-эстрадиолом увеличение содержания РНК и рибосом в печени, при этом содержание фосфопротеидов в плазме крови составило 25%, триглицеридов 35% от значений, наблюдаемых через одни сутки после введении цыплятам только 17-Р-эстрадиола (р<0,01-0,05).
12. При активации вителлогенной функции после введения 17-Р-эстрадиола в печени цыплят наблюдались два пика стимуляции биогенеза митохондрий. Первый по времени совпадал с синтезом ядерной ДНК (12-24 ч после введения эстрадиола), в это время показатели окислительного фосфорилирования не отличались от таковых в контроле. Более интенсивный второй пик регистрировался через 72-96 ч после инъекции. Это сопровождалось увеличением содержания мтРНК в 2,8 раза и увеличением цитохромоксидазной активности в 1,7 раза по сравнению с контролем (р<0,001-0,01). Введение цыплятам 17-Р-эстрадиола одновременно с актиномицином Д препятствовало повышению активности цитохромоксидазы, что предполагает ее зависимость от синтеза de novo рибосомных РНК в ядрах гепатоцитов.
13. Введение 17-Р-эстрадиола цыплятам привело к снижению скорости дыхания митохондрий через 36-48 ч.: скорость окисления сукцината падала на 32-35%), глутамата+малата - на 37-39%, а-кетоглутарата - на 50-52%). Под влиянием 17-Р-эстрадиола через 72-96 ч. в митохондриях цыплят возрастал коэффициент Са/О в 1,9 раз, приближаясь к таковому у кур-несушек (р<0,001-0,01).
14. Митохондрии печени эстрогенизированных цыплят и кур-несушек имеют более низкое сопряжение дыхания с фосфорилированием, чем в контроле. Величина отношения АДФ/О в митохондриях у цыплят контрольной группы составила 1,85; у опытных цыплят - 1,20 (р<0,05); у кур-несушек - 0,50 (р<0,001).
15. Митохондрии печени цыплят, которым в течение семи суток давали per os клофибрат, повысили на 67% цитохромоксидазную активность и на 2076%) скорость дыхания; последующее введение 17-р-эстрадиола снизило этот эффект, не снимая полностью. Клофибрат снизил вызванное 17-р-эстрадиолом увеличение количества триглицеридов в плазме крови на 28-30%, не влияя на их содержание в контроле (р<0,001-0,01).
6. Сведения о практическом использовании результатов исследований
1. Данные исследования апробированы в производственных условиях ФГУП Загорское ЭПХ ВНИТИП Россельхозакадемии (Акт производственной проверки от 20 марта 2009 г.). В производственной проверке подтвердились результаты исследований о высокой массе яиц трансгенных перепелов: масса яиц группы перепелок нового варианта была на 18,7% выше массы яиц перепелов базового варианта в возрасте 11-12 недель.
2. Результаты по цитохромоксидазной и фосфорилирующей активности митохондрий печени были использованы при уточнении норм витаминов в рационах кур (Фисинин В.И., Коршунова Л.Г., 1988; Байковская И.П., Коршунова Л.Г., 1989), а также в Методическом руководстве для зоотехнических лабораторий «Оценка качества кормов, органов, тканей, яиц и мяса птицы», под общей редакцией академика РАСХН В.И. Фисинина и доктора биологических наук, профессора А.Н. Тишенкова, 1998 год, 116 с.
7. Рекомендации по использованию научных выводов
1. Результаты о высокой массе яиц трансгенных по гену бычьего сома-тотропина перепелов, подтвержденные данными производственной проверки, свидетельствуют о возможном практическом использовании методов трансгенеза в селекционной работе и, в том числе, как эффективный прием на повышение массы яиц.
2. Предложен способ отбора перепелок по массе яиц, позволяющий дать объективную характеристику поголовья по этому показателю и провести целенаправленный отбор перепелок-дочерей с повышенной массой яиц для комплектования промышленных и племенных стад без длительной оценки птицы. На данный способ оценки получен Патент РФ на изобретение №2402209 «Способ отбора перепелок по массе яиц» (2009).
3. Разные динамики индукции синтеза вителлогенина и липопротеидов очень низкой плотности в печени цыплят, свидетельствующие об относительно независимой экспрессии соответствующих генов, являются обоснованием возможности раздельной селекции кур по этим признакам.
4. Установлена линейная зависимость содержания фосфопротеидного фосфора и общего кальция в крови эстрогенизированных цыплят, что позволяет использование каждого из них для прогнозирования яичной продуктивности кур. Из соображений методического характера показатель общего кальция является предпочтительным.
Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, доктора биологических наук, Коршунова, Людмила Георгиевна, Москва
1. Абдурашидова Г.Г., Цветкова Е.А., Будовский Э.И. Непосредственные РНК-белковые взаимодействия в рибосомных комплексах // Всесоюзный биохимический съезд: тезисы. Киев, 1986. - Т. 1. - С. 5.
2. Адрианов Н.В., Щуппе Н.Г. Биогенез и биохимическая гетерогенность митохондрий // Биохимия митохондрий. Москва: Наука, 1976. - С. 120.
3. Адрианов Н.В., Спиричев В.Б., Щуппе Н.Г. Биохимическая гетерогенность митохондрий слизистой оболочки тонкого кишечника крыс // Вопросы медицинской химии. 1977. - Т. 23. - № 3. - С. 398-^03.
4. Айзенштадт Т.Б. Некоторые особенности ультраструктуры ооцитов в связи с синтезом желтка // Журнал общей биологии. 1965. - Т. 26. - № 2. -С. 230-236.
5. Арбузов В.А. Метаболизм информационных РНК мембраносвязан-ных и свободных полирибосом в клетках печени крыс при ингибировании белкового синтеза циклогексимидом // Биохимия. 1977. - Т. 42. - № 2. - С. 338-349.
6. Арбузов В.А. Стабилизация мРНК полирибосом в клетках печени крыс при ингибировании белкового синтеза циклогексимидом // Биохимия. -1978. Т. 43. - № 5. - С. 838-850.
7. Архипов A.B. Изучение липидов и липидного обмена у птиц с применением тонкослойной и газожидкостной хроматографии: Методические рекомендации. Москва: ВАСХНИЛ, 1973. - 36 с.
8. Архипов A.B., Топорова Л.В. Липидный и жирнокислотный состав яиц в зависимости от возраста кур и характера рационов // Повышение качества пищевых яиц. Москва: Колос, 1976. - С. 114-122.
9. Архипов А.В. Липидное питание, продуктивность птицы и качество продуктов птицеводства. Москва: Агробизнесцентр, 2007. - 436 с.
10. Бакеева Л.Е., Солодовникова И.М., Сапрунова В.Б. Митохондрия внутри митохондрии (условия возникновения, динамика образования) // III Съезд биофизиков России: тезисы. Воронеж, 2004. - С. 396-397.
11. Белякова Л.С., Кочетова З.И. Оценка мясных качеств перепелят эстонской породы // Науч.-произв. опыт в птицеводстве: Экспресс-информ. / Всерос. н.-и. и технол. ин-т птицеводства. 2004. - № 1. - С. 14-16.
12. Боголюбский С.И. Селекция сельскохозяйственной птицы. Москва: Агропромиздат, 1991. -285 с.
13. Бойков Н.Я., Сидоренко Л.И., Тодоров И.Н. Биогенез хроматина в клетках высших животных. Активация синтеза ядерных белков и ДНК гепатоцитов после импульсного торможения трансляции циклогексимидом // Биохимия. 1979. - Т. 44. - № 6. - С. 963-974.
14. Болотников И.А. Иммунопрофилактика инфекционных болезней птиц. Москва: Россельхозиздат, 1982. - 184 с.
15. Болотников И.А., Конопатов Ю.В. Практическая иммунология сельскохозяйственной птицы. С.-Петербург: Наука, 1993. - 205 с.
16. Братанов К. Изменение наследственности у кур с помощью переливания крови // Природа. 1964. - № 13. - С. 10-15.
17. Брем Г., Кройслих X., Штранцингер Г. Экспериментальная генетика в животноводстве. Москва: РАСХН, 1996. - 328 с.
18. Быстров А. Биофизические показатели перепелиных яиц // Всероссийская конференция молодых ученых и аспирантов по птицеводству. Сергиев Посад, 1999.-С. 14-15.
19. Великий H.H., Пархомец П.К., Могилевич С.Е. Транспорт восстановительных эквивалентов из митохондрий в цитоплазму при интенсификации липогенеза // Биохимия митохондрий. Москва: Наука, 1976. - С. 104.
20. Гальперн И.Л. Методы выведения и совершенствования специализированных линий кур и их кроссов // Методические рекомендации по выведению специализированных яйценоских и бройлерных линий кур и их кроссов. Ленинград, 1973. - С. 5-34.
21. Гальперн И.Л., Сергеев В.А., Иванова Н.Б. Генетические основы селекции и разработка методов выведения линий и создания гибридов сельскохозяйственной птицы // Сборник научных трудов ВНИТИП. Загорск: ВНИТИП, 1977. - Т. 44. - С. 3-12.
22. Гальперн И.Л. Концепция развития исследований в области селекции, разведения и воспроизводства сельскохозяйственной птицы // Теория и практика селекции яичных и мясных кур. Сборник научных трудов ВНИИГРЖ. Санкт-Петербург - Пушкин, 2002. - С. 6-15.
23. Гиршович A.C., Бочкарева Е.С., Васильев В.Д., Курцхалия Т.В. Локализация факторов элонгации на рибосоме E.coli // Всесоюзный биохимический съезд: тезисы. Киев, 1986. - Т. 1. - С. 4.
24. Гмурман В.В. Теория вероятностей и математическая статистика. -Москва: Высшая школа, 1972. 368 с.
25. Головачев А.Ф., Надальяк Е.А. Дыхание и гликолиз печени куриных эмбрионов и цыплят в процессе роста // Журнал эволюционной биохимии и физиологии. 1975. - Т. И. - № 4. - С. 353-359.
26. Голубев А.К., Балукова В. Исследование изменений в окраске оперения кур при соматической гибридизации // Наследственность и изменчивость сельскохозяйственной птицы. Москва: Колос, 1966. - С. 7-21.
27. Гольдман И.Л., Башкеев Е.Д., Гоголевский П.А. и др. Прогрессивная биотехнология получения трансгенных овец // Доклады РАСХН. 1992. -№9/10.-С. 25-30.
28. Гольдман И.Л., Эрнст Л.К., Брем Г. и др. Получение трансгенных овец продуцентов молока, содержащего физиологически активные белки, в условиях племенной фермы // Сельскохозяйственная биология. - 1994. - № 6. -С. 46-53.
29. Гольдман И.Л., Бабаянц A.A., Кузнецов В.П. и др. Противовирусная активность в крови хряка, трансгенного по гену фибробластного интерферона человека // Доклады РАСХН. 1995. - № 6. - С. 28-31.
30. Гончаренко М.С., Никитин В.Н. Возрастная характеристика функционирования митохондрий поджелудочной железы белых крыс // Митохондрия. Москва: Наука, 1977. - С. 37-40.
31. Гордон Р.Ф., Джордан Т.У., Айткен И.Д. и др. Болезни птиц: монография. Москва: Агропромиздат, 1985. - 349 с.
32. Гоулдинг К. Методы практической биохимии. Москва: Мир, 1978. -272 с.
33. Грезина Н.М., Зиновьева H.A., Эрнст Л.К. Молочная железа кроликов как объект биоинженерии. Московская обл., Подольский район, п. Дуб-ровицы: ВИЖ, 2004. - 60 с.
34. Грибанов Г.А., Сергеев С.А., Алексеенко A.C. Микротонкослойная хроматография фосфолипидов сыворотки крови и их количественное определение с помощью малахитового зеленого // Лабораторное дело. 1976. - № 12.-С. 724-727.
35. Громов А., Гусева Н., Воронцова Т., Андреева Г. Наследование окраски оперения у цесарок при гемогибридизации // Птицеводство. 1974. -№2.-С. 25-26.
36. Громов A.M., Феоктистов П.И. Изменение наследственности у кур переливанием крови. Москва: МСХ РСФСР, 1957. - 51 с.
37. Дядичкина Л.Ф., Позднякова Н.С. Руководство по биологическому контролю при инкубации яиц сельскохозяйственной птицы. Методические рекомендации. Сергиев Посад: ВНИТИП, 2001. - 80 с.
38. Евдодиенко Ю.В., Гайнутдинов М.К., Кудзина Л.Ю. Транспорт кальция в митохондриях // Биофизика живой клетки. Пущино, 1974. - Т. 5. -С. 84-95.
39. Евстратова A.M. Аутосексность в селекции птицы // Достижения науки и передовой опыт в сельском хозяйстве. Животноводство и ветеринария. Москва: ВНИИТЭИСХ, 1976. - Т. 1. - С. 12-17.
40. Евстратова A.M. Пути увеличения вывода суточного молодняка птицы. Москва: ВНИИТЭИСХ, 1986. - 51 с.
41. Егорова A.B. Методы и приемы племенной работы по повышению эффективности использования мясных кур: Автореф. дис. . докт. с.-х. наук. Сергиев Посад, 1999. - 28 с.
42. Ениколопов Г.Н., Бенюмов А.О., Барминцев В.А. и др. Опережающий рост трансгенных рыб, содержащих ген соматотропина человека // Доклады АН СССР. 1988. - Т. 301. - № 3. - С. 724-727.
43. Жаданов А.Б. Получение векторов для экспрессии чужеродных генов в трансгенных животных: Автореф. дис. . канд. биол. наук. Москва, 1991.-23 с.
44. Журавлев И.В., Фисинин В.И., Толкачев П.С., Данилина В.А. Действие гормонов на содержание свободных аминокислот в печени цыплят // Сельскохозяйственная биология. 1980. - Т. 15. -№ 6. - С. 949-950.
45. Забудский Ю.И., Григорьева Н.В. Адаптационные возможности организма цыплят в зависимости от продолжительности пребывания в инкубаторе // Сельскохозяйственная биология. 2000. - № 4. - С. 87-92.
46. Звонова JI.H., Карпенко JI.C. Программа работ с аутосексной материнской родительской формой мясных кур // Интенсификация птицеводства. Загорск: ВНИТИП, 1987. - С. 130-138.
47. Зиновьева H.A., Эрнст Л.К., Брем Г. Трансгенные животные и возможности их использования: молекулярно-генетические аспекты трансгенеза в животноводстве. Московская обл., Подольский район, п. Дубровицы: ВИЖ, 2000.- 128 с.
48. Зиновьева H.A., Эрнст Л.К. Проблемы биотехнологии и селекции сельскохозяйственных животных. Московская обл., Подольский район, п. Дубровицы: ВГНИИ животноводства, 2006. - 343 с.
49. Злочевская К.В. Методы создания линий и кроссов кур с низкой живой массой: Автореф. дис. докт. с.-х. наук. Л.-Пушкин, 1980, - 38 с.
50. Злочевская К.В. Новое в селекции яичных и мясных кур // Новое в птицеводстве. Москва: Колос, 1987. - С. 39-59.
51. Ишбулатова P.M., Отрыганьев Г.К. Взаимосвязь веса яиц с живым весом молодняка у японского перепела // Материалы 13 конференции аспирантов и молодых ученых. Загорск, 1971. - Т. 4. - С. 58-62.
52. Ишбулатова P.M., Отрыганьев Г.К. Некоторые морфологические и физико-химические показатели инкубационных яиц в связи с возрастом перепелок // Материалы 13 конференции аспирантов и молодых ученых. Загорск, 1971. - Т. 4. - С. 62-66.
53. Карапетян Р.В. Микроинъекции ДНК в яйцеклетки кур // Доклады РАСХН. 1995. -№ 4. -С. 27-29.
54. Карапетян Р.В. Получение трансгенных кур методом микроинъекции ДНК в яйцеклетки // Генноинженерные сельскохозяйственные животные. Сборник научных трудов. Выпуск 1. / под общ. ред.: И.Я. Шихов, С.Г. Кадулин. Москва: Миннауки, РАСХН, 1995. - С. 214-223.
55. Карапетян Р.В., Коршунова Л.Г., Андреева Л.Е. и др. Инъекции гена бета-галактозидазы в яйцеклетки кур // Актуальные проблемы биотехнологии в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии: тезисы докладов. -Москва, 1996.-С. 35-35.
56. Карапетян Р.В. Получение трансгенных кур микроинъекцией ДНК в яйцеклетки // Доклады РАСХН. 1996. - № 2. - С. 19-20.
57. Карапетян Р.В. Фенотипические проявления трансгенности перепелов, развившихся из яйцеклеток, инъецированных чужеродной ДНК // Сельскохозяйственная биология. 1997. -№ 4. - С. 89-96.
58. Карапетян Р.В. Разработка метода микроинъекций ДНК в яйцеклетки кур // Сборник научных трудов ВНИТИП. Сергиев Посад: ВНИТИП, 2000.-Т. 75.-С. 84-95.
59. Карпенко JI.C. Признак пола у цыплят // Птицеводство. 1987. - № 10.-С. 24-26.
60. Карпенко JI.C. Методика отбора суточных цыплят носителей гена медленной оперяемости К // Экономические и технологические аспекты промышленного птицеводства. Сборник научных трудов ВНИТИП. - Загорск: ВНИТИП, 1991.-С. 145-152.
61. Кириллов C.B., Семенков Ю.П., Катунин В.И., Макаров Е.М. Взаимодействие транспортной РНК с рибосомами и синтез белка // Всесоюзный биохимический съезд: тезисы. Киев, 1986. - Т. 1. - С. 6.
62. Коваленко Е.А. Полярографическое определение кислорода в организме. Москва: Медицина, 1975. -231 с.
63. Кондрашова М.Н., Евдодиенко Ю.В., Кудзина Л.Ю. Влияние обычных экспериментальных факторов на состояние митохондрий // Руководство по изучению биологического окисления полярографическим методом. Москва: Наука, 1973. - С. 93-106.
64. Коршунова Л.Г., Карапетян Р.В., Фисинин В.И. Трансформация генома птиц микроинъекцией ДНК в яйцеклетки на разных стадиях созревания // 6-ая Конференция Балтийских стран по птицеводству. Вильнюс, Литва, 1998.-С. 52-55.
65. Коршунова Л.Г., Карапетян Р.В. Исследование экспрессии гена в-галактозидазы в трансгенных эмбрионах кур // Сборник научных трудов ВНИТИП. Сергиев Посад: ВНИТИП, 2000. - Т. 75. - С. 101-104.
66. Коршунова Л.Г., Серикова В.А., Зиадинова О.Ф., Карапетян Р.В. Получение кур, трансгенных по гену в-интерферона // Сборник научных трудов ВНИТИП. Сергиев Посад: ВНИТИП, 2000. - Т. 75. - С. 96-100.
67. Коршунова Л.Г., Карапетян Р.В., Коршунов К.Р. и др. Сравнительная оценка яичной продуктивности потомков трансгенных и серых перепелов эстонской породы // Сборник научных трудов ВНИТИП. Сергиев Посад: ВНИТИП, 2001. - Т. 76. - С. 78-85.
68. Косенко О.В. Ортотропная трансплантация донорского яичника в качестве альтернативного метода искусственного воспроизводства птицы // Докл. РАСХН. 2007. - № 3. - С. 44^16.
69. Косенко О.В. Получение кур-реципиентов, фертильных за счет функций трансплантанта донорского яичника: Автореф. дис. . канд. биол. наук. Москва, 2009. - 22 с.
70. Кочетова З.И., Белякова Л.С., Макрушина Е. Особенности поведения и продуктивные качества перепелов эстонской и английской белой пород при разной плотности посадки. // Сборник научных трудов ВНИТИП. Сергиев Посад: ВНИТИП, 2005. - Т. 80. - С. 161-176.
71. Кочетова З.И., Белякова Л.С., Филоненко В.И., Чинцова А.И. Разведение и содержание перепелов. Сергиев Посад: ВНИТИП, 2006. - 83 с.
72. Кочиш И.И., Петраш М.Г., Смирнов С.Б. Птицеводство. Москва: Колос, 2003.-407 с.
73. Кудзина Л.Ю. Регуляция дыхания митохондрий эндэргоническими реакциями: Автореф. дис. канд. биол. наук. Пущино, 1970. - 22 с.
74. Кузнецов A.B., Кузнецова И.В. Связывание экзогенной ДНК pRK31acZ сперматозоидами кролика, ее перенос в ооциты и экспрессия в до-имплантационных эмбрионах // Онтогенез. 1995. - Т. 26. - № 4. - С. 300309.
75. Кузнецова И.В., Щит И.Ю., Кузнецов A.B. Эффективность переноса сперматозоидами рекомбинантных ДНК в яйцеклетки кроликов // Сельскохозяйственная биология. 1998. -№ 6. - С. 40-44.
76. Кушнер Х.Ф. Наследование у кур изменений в окраске оперения, возникающих под влиянием переливания чужеродной крови // Журнал общей биологии. 1958. - Т. 19. - № 5. - С. 357-368.
77. Ленинджер А. Митохондрия. Молекулярные основы структуры и функции. Москва: Мир, 1966. - 315 с.
78. Ленинджер А.Л. Биохимия. Москва: Мир, 1980. - Т. 3. - 487 с.
79. Лим В.И., Каява A.B., Спирин A.C. Стереохимический анализ транспептидации, транслокации и сворачивания растущего пептида на рибосоме // Всесоюзный биохимический съезд: тезисы. Киев, 1986. - Т. 1. - С. 7.
80. Малер Г.Р., Фан С.Г., Бастон Р.Н. Интеграция и регуляция сборки митохондрий у дрожжей. // Молекулярная генетика митохондрий. Ленинград: Наука, 1977. - С. 118-132.
81. Малюгин Э.Ф., Князева Т.А., Заринская С.А. и др. Динамика изменения активности кислородовосстанавливающих ферментов в ткани печени при ишемии // Экспериментальная и клиническая хирургия печени. Москва: Мир, 1973.-С. 67-76.
82. Марзанов Н.С., Девришов Д.А., Марзанова С.Н. и др. Генетическое маркирование, сохранение биоразнообразия и проблемы разведения животных // Сельскохозяйственная биология. 2011. - № 2. - С. 3-14.
83. Марибона Р., Корнева С.Б., Копылов A.M. Выделение рибосом с интактной рРНК из дрожжей // Биохимия. 1979. - Т. 44. - № 9. - С. 17011705.
84. Матарадзе Г.Д., Гонтарь Е.В., Кондратьев Я.Ю., Розен В.Б. Сравнительный анализ изучения взаимодействия различных форм эстрогенных рецепторов с клеточным ядром // Биохимия. 1982. - Т. 47. - № 5. - С. 869878.
85. Мецлер Д. Биохимия. Москва: Мир, 1980. - Т. 3. - 487 с.
86. Митюшин В.М. К вопросу о биогенезе митохондрий в клетках млекопитающих // Биохимия митохондрий. Москва: Наука, 1976. - С. 125.
87. Монахов Н.К. О биохимических функциях митохондрий различного типа // Биохимия. 1964. - Т. 5. - № 29. - С. 955-963.
88. Монахов Н.К. О функциональной гетерогенности митохондрий нормальной и опухолевой клетки // Молекулярная биология. 1967. - № 1. — С.114-122.
89. Нейфах A.A., Тимофеева М.Я. Проблемы регуляции в молекулярной биологии развития. Москва: Наука, 1978. - 312 с.
90. Овчинников Л.П. Регуляция элонгации у эукариот // Всесоюзный биохимический съезд: тезисы. Киев, 1986. - Т. 1. - С. 9-10.
91. Озернюк Н.Д. Изменение количества митохондрий в процессе оогенеза вьюна // Докл.АН СССР. 1972. - № 4. - с. 974-977.
92. Озернюк Н.Д., Пальмбах Л.П. Связь между митохондриями и эн-доплазмотическим ретикулумом в ооцитах вьюна // Онтогенез. 1974. - Т. 5. - № 4. - С. 404^107.
93. Озернюк Н.Д., Пальмбах Л.П. Рост и воспроизведение митохондрий в ооцитах вьюна // Онтогенез. 1975. - Т. 6. - № 5. - С. 442-449.
94. Озернюк Н.Д., Котомин A.B. Перенос в митохондрии белков, синтезированных в цитоплазме и стимуляция митохондриального белкового синтеза фракцией микросом // Биохимия. 1978. - Т. 43. - № 1. - С. 67-71.
95. Отрыганьев Г.К. Справочник по инкубации яиц. Москва: Колос, 1983.-176 с.
96. Оуэн Р.Л. Иммунная система птиц // Птицеводство. 1996. - № 2. -С. 39^41.
97. Пенионжкевич Э.Э., Шахнова Л.В. Эффективность прямых и обратных скрещиваний в птицеводстве // Метериалы конференции по наследственности и изменчивости растений, животных и микроорганизмов. Москва, 1959.-С. 515-520.
98. Пенионжкевич Э.Э. Метода и план работы по выведению мясных линий кур // Птицеводство. 1963. - № 12. - С. 11-14.
99. Пенионжкевич Э.Э., Злочевская К.В., Шахнова Л.В. Разведение и племенное дело в птицеводстве. Москва: Колос, 1982. - 302 с.
100. Пигарева М.Д., Афанасьев Г.Д. Перепеловодство. Москва: Рос-агропромиздат, 1989. - 103 с.
101. Покровский A.A., Мальцев Г.Ю., Гаппаров М.М. Особенности переноса электронов в митохондриях слизистой желудка // Митохондрия. -Москва: Наука, 1977.-С. 143-147.
102. Прокофьев М.И., Захарченко В.И., Сураева Н.М., Лагутина И.С. Методы получения биоинженерных сельскохозяйственных животных // Сельскохозяйственная биология. 1994. - № 4. - С. 12-25.
103. Прокофьев М.И., Городецкий С.И., Мезина М.Н. и др. Создание трансгенных кроликов, продуцирующих с молоком человеческий гранулоци-тарный колониестимулирующий фактор // Сельскохозяйственная биология. — 2003. -№ 6. -С. 49-54.
104. Радченков В.П., Аверин B.C., Бутров Е.В. и др. Определение гормонов в крови крупного рогатого скота, свиней и их гормональный статус: Методические указания. Боровск: ВНИИФБиП, 1985. - 76 с.
105. Ройтер Я.С. Методы повышения племенных и продуктивных качеств цесарок: Автореф. дис. докт. с.-х. наук. Сергиев Посад, 1992. - 30 с.
106. Ройтер Я.С. Племенная работа с гусями и утками // Птицеводство. 2007. - № 6. - С. 2-4.
107. Ройтер Я.С., Гусева Н.К., Коноплева А.П. Иммуногенетические методы создания межвидовых гибридов птицы // Ориентированные фундаментальные исследования и их реализация в АПК России: материалы конференции. Сергиев Посад, 2009. - С. 136-139.
108. Рыцарева А.Н. Технологические приемы инкубации перепелиных яиц: Автореф. дис. канд. с.-х. наук. Загорск, 1989. - 21 с.
109. Самоделкина С.Д. Функциональная оценка репродуктивной системы кур в раннем возрасте: Автореф. дис. . канд. биол. наук. Краснодар, 1979. -19 с.
110. Самойлов A.B. Разработка и совершенствование методов транс-фекции экзогенной ДНК в эмбриональные клетки кур: Автореф. дис. . канд. биол. наук. Москва, 2010. - 19 с.
111. Сапрунова В.Б., Бакеева JI.E. Морфофункциональные изменения митохондрий при митоптозе // Рецепция и внутриклеточная сигнализация: материалы международной конференции. -Пущино, 2007. С. 197-200.
112. Сапрунова В.Б., Солодовникова И.М., Бакеева Л.Е. Выявление ци-тохром-с-оксидазной активности в митохондриях кардиомицитов изолированной ткани миокарда при длительном действии гипоксии // Цитология. — 2008. Т. 50. - № 3. - С. 268-274.
113. Сапрунова В.Б. Ультраструктура митохондрий в условиях окислительного стресса: Автореф. дис. докт. биол. наук. Москва, 2008. - 46 с.
114. Сердюк И.Н., Спирин A.C. Крупноблочные изменения рибосомы при транслокации // Всесоюзный биохимический съезд: тезисы. Киев, 1986. -Т. 1.-С.4-5.
115. Серебровский A.C. Генетика домашней птицы // Труды Аников-ской генетической станции наркомзема РСФСР. Москва, 1926. - С. 3-74.
116. Симонян A.A., Абрамян К.С., Геворкян Г.А. и др. Ультраструктурные изменения митохондрий сердца и печени кур в онтогенезе // Биол. журнал Армении. 1977. - Т. 30. - № 5. - С. 18-22.
117. Симонян A.A., Геворкян Г.А., Степанян P.A. Сравнительная характеристика дыхания и окислительного фосфорилирования в митохондриях сердечной мышцы кур в онтогенезе // Украинский биохимический журнал. -1978. Т. 50. - № 3. - С. 281-284.
118. Сингер М., Берг П. Гены и геномы. Москва: Мир, 1998. - Т. 1.373 с.
119. Сингер М., Берг П. Гены и геномы. Москва: Мир, 1998. - Т. 2.394 с.
120. Скулачев В.П. Соотношение окисления и фосфорилирования в дыхательной цепи. Москва: АН СССР, 1962. - 156 с.
121. Скулачев В.П., Джунет X., Брайнес A.C. Окисление и фосфорили-рование в митохондриях эмбриональной мышцы // Биохимия. 1964. - Т. 29. - № 4. - С. 653-667.
122. Скулачев В.П. Аккумуляция энергии в клетке. Москва: Наука, 1969.-440 с.
123. Скулачев В.П. Энергетика биологических мембран. Москва: Наука, 1989.-564 с.
124. Сметнев С.И. Повышение яйценоскости кур мясо-яичных пород для получения бройлеров // Доклады ТСХА. 1963. - С. 24-28.
125. Смирнов А.Н., Смирнова О.В., Розен В.Б. Выявление и предварительная характеристика особого эстрогенсвязывающего белка в печени самцов крыс // Биохимия. 1977. - Т. 42. - № 3. - С. 560-571.
126. Смирнов А.Н. Проблема гетерогенности рецепторов стероидных гормонов // Проблемы эндокринологии. 1978. - Т. 24. - № 6. - С. 98-107.
127. Смирнов Б.В. Биологические особенности гусей и использование их при интенсификации гусеводства: Автореф. дис. . докт. с.-х. наук. -Краснодар, 1978. 29 с.
128. Смирнова О.В., Смирнов А.Н., Фишер У.М., Розен В.Б. Изучение некоторых структурных форм цитоплазматических рецепторов к эстрадиолу матки, почек и печени крыс // Доклады АН СССР. 1976. - Т. 226. - № 2. -С. 474-477.
129. Солодовникова И.М., Сапрунова В.Б., Бакеева JI.E., JI.C. Я. Динамика изменений ультраструктуры митохондрий кардиомицитов изолированного миокарда крысы при длительной инкубации в условиях аноксии // Цитология. 2006. - Т. 48. -№ 10. - С. 848-855.
130. Сопиков П.М. Методы направленной гемомолекулярной гибридизации животных // Соматическая гибридизация клеток и потомство животных. Научные труды Ленинградского ветеринарного института. Ленинград, 1978.-Т. 54.-С. 91-98.
131. Спирин A.C. Молекулярная биология: Структура рибосомы и биосинтез белка. Москва: Высшая школа, 1986. - 303 с.
132. Станишевская О.И. Режим инкубации должен учитывать качество яйца // Животноводство России. 2008. - № 6. - С. 17-18.
133. Стрелков Л.А., Кафиани К.А. Молекулярная биология генов, программирующих рибосомные РНК животных // Успехи биологической химии. 1978. -№ 19.-С. 32-60.
134. Сураева Н.М., Кесян А.З., Прокофьев М.И., Эрнст Л.К. Выделение химозина из молока трансгенных овец // Актуальные проблемы биотехнологии в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии: тезисы докладов. -Москва, 1996.-С. 77-77.
135. Сураева Н.М., Барышников А.Ю., Самойлов A.B. Трансфекция in vitro гонадных клеток кур бактериальным геном в-галактозидазы // Российский биотерапевтический журнал. 2007. - Т. 6. - № 1. - С. 7.
136. Сураева Н.М., Барышников А.Ю., Фисинин В.И. и др. Изучение эффективности различных способов трансфекции репортерного гена в эмбриональные клетки кур // Известия РАН. 2008. - № 1. - С. 18-23.
137. Сураева Н.М., Самойлов A.B. Получение фармацевтических белков с помощью трансгенной птицы // Вестник РОНЦ им.Блохина H.H. РАМН. 2009. - Т. 20. - № 4. - С. 19-25.
138. Сураева Н.М., Мартиросян В.В., Кесян А.З. и др. Получение трансгенных кур с геном гранулоцитарного колониестимулирующего фактора человека // Российский биотерапевтический журнал. 2010. - Т. 9. - № 2. - С. 60.
139. Сураева Н.М., Мартиросян В.В., Кесян А.З. и др. Трансфекция экзогенной ДНК эмбриональных клеток птицы // Российский биотерапевтический журнал. 2010. - Т. 9. - № 2. - С. 59.
140. Токин И.Б. Электронно-микроскопическое исследование половых и соматических клеток аскариды. Ленинград: ЛГУ, 1961. - 164 с.
141. Толкачев П.С., Журавлев И.В., Фисинин В.И. Спектр хроматино-вых белков клеток печени при индукции эстрогеном вителлогенной функции // Приемы профилактики болезней с.-х. птицы. Сб. науч. трудов ВНИТИП. -Загорск: ВНИТИП, 1982. Т. 54. - С. 3-9.
142. Толкачев П.С., Журавлев И.В., Косенко О.В. Межпородные трансплантации яичников, тимуса и кожи у кур // Промышленное производство яиц и мяса птицы. Сборник научных трудов ВНИТИП. Сергиев Посад: ВНИТИП, 1993.-С. 132-140.
143. Тоныпин A.A., Сапрунова В.Б., Солодовникова И.М. и др. Функциональная активность и ультраструктура митохондрий, выделенных из апоптозной ткани сердца // Биохимия. 2003. - Т. 68. - № 8. - С. 1070-1078.
144. Трудолюбова М.Г. Количественное определение РНК и ДНК в субклеточных фракциях клеток животных // Современные методы в биохимии. -Москва: Медицина, 1977. С. 313-316.
145. Тучемский Л.И. Технология выращивания высокопродуктивных цыплят-бройлеров. Сергиев Посад, 1999. - 203 с.
146. Уотсон Д.Д. Молекулярная биология гена. Москва: Мир, 1978.720 с.
147. Фатеев В. Создание гибридной птицы // Птицеводство. 2002. - № 8.-С. 9-10.
148. Фисинин В.И. Методы совершенствования продуктивных качеств яичных кур и организационно-технологические принципы племенной работы: Автореф. дис. докт. с.-х. наук. Ленинград-Пушкин, 1979. - 36 с.
149. Фисинин В.И., Бирюков А.Г., Авдонин Б.Ф. Продуктивные качества кур, дыхание и окислительное фосфорилирование в митохондриях печени под влиянием янтарной и малоновой кислот // Сельскохозяйственная биология. 1986. - № 12. - С. 3-7.
150. Фисинин В.И., Эрнст Л.К., Карапетян Р.В. и др. Способ получения трансгенной птицы: пат. 1550652 1Ш. № 4475436; заявл. 17.08.88; опубл.2307.93, Бюл. № 10.
151. Фисинин В.И., Эрнст Л.К., Карапетян Р.В. и др. Способ трансформации генома птицы: пат. 2022014 1Ш. № 4452202; заявл. 12.05.88; опубл.3010.94, Бюл. №20.
152. Фисинин В.И., Околелова Т.М., Коршунова Л.Г., Карапетян Р.В. Цитохромоксидазная и фосфорилирующая активность печени ремонтных курочек в зависимости от их возраста и дозы витаминов в рационе // Сельскохозяйственная биология. 1988. - № 3. - С. 43-45.
153. Фисинин В.И., Журавлев И.В., Айдинян Т.Г. Эмбриональное развитие птицы. Москва: ВО Агропромиздат, 1990. - 240 с.
154. Фисинин В.И., Эрнст JI.K., Карапетян Р.В. и др. Способ повышения яичной продуктивности птицы: пат. 2061366 RU. № 93019970/15; заявл. 19.04.93; опубл. 10.06.96, Бюл. № 16.
155. Фисинин В.И., Тишенков А.Н., Егоров И.А., и др. Оценка качества кормов, органов, тканей, яиц и мяса птицы. Методическое руководство для зоотехнических лабораторий. Сергиев Посад: ВНИТИП, 1998. - 116 с.
156. Фисинин В.И. Племенное дело генетика и селекция // Птицеводство России - стратегия инновационного развития. / под общ. ред.: В.И. Фисинин. - Москва: ГНУ ВНИТИП РАСХН, 2009. - С. 67-87.
157. Фисинин В.И. Птицеводство России стратегия инновационного развития. - Москва: ГНУ ВНИТИП РАСХН, 2009. - 148 с.
158. Фисинин В.И., Коршунова Л.Г., Карапетян Р.В. и др. Способ отбора перепелок по массе яиц: пат. 2402209 RU. № 2009118061/13; заявл. 12.05.2009; опубл. 27.10.2010, Бюл. № 30.
159. Хатт Ф.Б. Генетика животных. Москва: Колос, 1969. - 445 с.
160. Хмельницкая Т. Работаем с кроссом "Ломанн браун" // Птицеводство. 1993. - № 3. - С. 27-31.
161. Ченцов Ю.С. Общая цитология. Москва: Изд-во МГУ, 1995.384 с.
162. Черновская Т.В., Любимова Е.В., Лерман М.И. Метаболизм мРНК в клетках регенерирующей печени: ускорение процессинга и распада мРНК // Молекулярная биология. 1976. - Т. 10. - № 6. - С. 1361-1368.
163. Шатский И.Н. Топография РНК в рибосомах // Всесоюзный биохимический съезд: тезисы. Киев, 1986. - Т. 1. - С. 3-4.
164. Шахнова Л. Основные направления в селекции мясных кур // Птицеводство. 1991. -№ 4. - С. 24-26.
165. Шихов И.Я. Интерференционная РНК как защита клетки от транс-генеза // Сельскохозяйственная биология. 2009. - № 4. - С. 3-12.
166. Эрнст Л.К., Фисинин В.И., Журавлев И.В. и др. Способ трансплантации куриной яйцеклетки: пат. 1565025 SU. № 4396482; заявл. 23.03.88; опубл. 15.01.90, Бюл. № 18.
167. Эрнст Л.К., Тнхоненко Т.И., Сураева Н.М., Мирошниченко О.И. Получение трансгенного потомства от кроликов с геном асРНК против Е1А области аденовируса А<1 Ь5 // Доклады ВАСХНИЛ. 1989. - № 6. - С. 4(М2.
168. Эрнст Л.К., Гольдман И.Л., Семенова В.А. и др. Фенотипический эффект трансгенности по гену гормона роста крупного рогатого скота у кролика // Доклады ВАСХНИЛ. 1990. - № 6. - С. 32-36.
169. Эрнст Л.К., Прокофьев М.И. Биотехнология сельскохозяйственных животных. Москва: Колос, 1995. - 192 с.
170. Эрнст Л.К., Прокофьев М.И., Дьяконов Л.П. и др. Микроинъекции чужеродных генов, ответственных за устойчивость организма к инфекционным заболеваниям // Вестник РАСХН. 1995. - № 1. - С. 56-58.
171. Эрнст Л.К. Проблемы селекции и биотехнологии сельскохозяйственных животных. Москва: РАСХН, 1995. - 359 с.
172. Эрнст Л.К., Зиновьева Н.А., Брем Г. Современное состояние и перспективы использования трансгенных технологий в животноводстве. -Москва: РАСХН, 2002. 341 с.
173. Эрнст Л.К. Генетические основы селекции сельскохозяйственных животных. Москва: РАСХН, 2004. - 737 с.
174. Эрнст Л.К., Зиновьева H.A. Биологические проблемы животноводства в XXI веке. Москва: РАСХН, 2008. - 508 с.
175. Эрнст Л.К., Волкова H.A., Зиновьева H.A. Некоторые аспекты использования трансгенных технологий в животноводстве // Сельскохозяйственная биология. 2009. - № 2. - С. 4-9.
176. Эрнст Л.К. Методы биотехнологии в селекции животных: хозяйственные и биологические характеристики трансгенных свиней // Сельскохозяйственная биология. 2010. - № 4. - С. 3-6.
177. Юсупов М.М., Спирин A.C. Исследование поверхности рибосом и рибосомных субчастиц Escherichia coli методом тритиевой бомбардировки // Всесоюзный биохимический съезд: тезисы. Киев, 1986. - Т. 1. - С. 5-6.
178. Aaij С., Borst Р. Mitochondrial RNA from rat liver // Biochim Biophys Acta. 1970. -V. 217. -N 2. -P. 560-562.
179. Ab G., Roskam W.G., Dijkstra J., et al. Estradiol-induced synthesis of vitellogenin. III. The isolation and characterization of vitellogenin messenger RNA from avian liver // Biochim Biophys Acta. 1976. - V. 454. - N 1. - P. 67-78.
180. Acs P., Kipp M., Norkute A., et al. 17beta-estradiol and progesterone prevent cuprizone provoked demyelination of corpus callosum in male mice // Glia. 2009. - V. 57. - N 8. - P. 807-814.
181. Amalric F., Nicoloso M., Zalta J. A comparative study of "soluble" RNA polymerase activity of Zajdela hepatoma ascites cells and calf thymus // FEBS Lett. 1972. - V. 22. - N 1. - P. 67-72.
182. Amieux P.S., McKnight G.S. Cyclic nucleotides converge on brown adipose tissue differentiation // Sei Signal. 2010. - V. 3. - N 104. - P. 112-118.
183. Andacht T., Hu W., Ivarie R. Rapid and improved method for windowing eggs accessing the stage X chicken embryo // Mol Reprod Dev. 2004. - V. 69.-Nl.-P. 31-34.
184. Anderson E., Condon W., Sharp D. A study of oogenesis and early embryogenesis in the rabbit, Oryctolagus cuniculus, with special reference to the structural changes of mitochondria // J Morphol. 1970. - V. 130. - N 1. - P. 6791.
185. Andre J. Contribution to the knowledge of the chondriome. Study of its ultrastructural changes during spermatogenesis. // J Ultrastruct Res. 1962. -V. Suppl 3. - P. 1-185.
186. Araujo G.W., Beyer C., Arnold S. Oestrogen influences on mitochondrial gene expression and respiratoiy chain activity in cortical and mesencephalic astrocytes // J Neuroendocrinol. 2008. - V. 20. - N 7. - P. 930-941.
187. Archibald A.L., McClenaghan M., Hornsey V., et al. High-level expression of biologically active human alpha 1-antitrypsin in the milk of transgenic mice // Proc Natl Acad Sei USA.- 1990. V. 87. - N 13. - P. 5178-5182.
188. Arning L., Haghikia A., Taherzadeh-Fard E., et al. Mitochondrial hap-logroup H correlates with ATP levels and age at onset in Huntington disease // J Mol Med (Berl). 2010. - V. 88. - N 4. - P. 431-436.
189. Arnold S., Beyer C. Neuroprotection by estrogen in the brain: the mitochondrial compartment as presumed therapeutic target // J Neurochem. 2009. -V. 110. -N l.-P. 1-11.
190. Aschenbrenner B., Druyan R., Albin R., Rabinowitz M. Haem a, cytochrome c and total protein turnover in mitochondria from rat heart and liver // Bio-chemJ.- 1970.-V. 119.-N2.-P. 157-160.
191. Attardi B., Attardi G. A membrane-associated RNA of cytoplasmic origin in HeLa cells // Proc Natl Acad Sei USA.- 1967. V. 58. - N 3. - P. 10511058.
192. Balthazart J., Foidart A., Sante P., Hendrick J.C. Effects of alpha-methyl-para-tyrosine on monoamine levels in the Japanese quail: sex differences and testosterone effects // Brain Res Bull. 1992. - V. 28. - N 2. - P. 275-288.
193. Balthazart J., Foidart A., Wilson E.M., Ball G.F. Immunocytochemical localization of androgen receptors in the male songbird and quail brain // J Comp Neurol. 1992. - V. 317. - N 4. - P. 407-420.
194. Bartelink A.K., de Kort C.A., Kroon A.M. Mitochondrial formation in the developing flight muscles of the Colorado beetle // Dev Biol. 1975. - V. 42. -N2.-P. 262-273.
195. Bartels H., Gourlet V., Perramon A., et al. Biological parameters in Japanese quail genetically selected for resistance or sensitivity to an acute hypoxic survival // Aviat Space Environ Med. 1985. - V. 56. - N 10. - P. 976-984.
196. Bergink E.W., Kloosterboer H.J., Gruber M., Ab G. Estrogen-induced phosphoprotein synthesis in roosters. Kinetics of induction // Biochim Biophys Acta. 1973. -V. 294. -N 1. -P. 497-506.
197. Best M.M., Duncan C.H. Hypolipemia and Hepatomegaly from Ethyl Chlorophenoxyisobutyrate (Cpib) in the Rat // J Lab Clin Med. 1964. - V. 64. -P. 634-642.
198. Beuving G., Gruber M. Induction of phosvitin synthesis in roosters by estradiol injection // Biochim Biophys Acta. 1971. - V. 232. - N 3. - P. 529536.
199. Bieri-Bonniot F., Joss U., Dierks-Ventling C. Stimulation of RNA polymerase i activity by 17beta-estradiol-receptor complex on chick liver nucleolar chromatin//FEBS Lett. 1977. -V. 81. -N 1. - P. 91-96.
200. Blokhuis G.G., Veldstra H. Heterogeneity of mitochondria in rat brain //FEBS Lett.-1970.-V. 11.-N3.-P. 197-199.
201. Borthwick N.M., Smellie R.M. The effects of oestradiol-17beta on the ribonucleic acid polymerases of immature rabbit uterus // Biochem J. 1975. - V. 147.-N l.-P. 91-101.
202. Bos E.S., Vonk R.J., Gruber M., Ab G. Lipovitellin synthesizing polysomes: Specific and quantitative isolation // FEBS Lett. 1972. - V. 24. - N 2. -P. 197-200.
203. Bosselman R.A., Hsu R.Y., Briskin M.J., et al. Transmission of exogenous genes into the chicken // J Reprod Fertil Suppl. 1990. - V. 41. - P. 183195.
204. Boveris A., Valdez L.B., Zaobornyj T., Bustamante J. Mitochondrial metabolic states regulate nitric oxide and hydrogen peroxide diffusion to the cyto-sol // Biochim Biophys Acta. 2006. - V. 1757. - N 5-6. - P. 535-542.
205. Brackett B.G., Baranska W., Sawicki W., Koprowski H. Uptake of heterologous genome by mammalian spermatozoa and its transfer to ova through fertilization // Proc Natl Acad Sci U S A. 1971. - V. 68. - N 2. - P. 353-357.
206. Brandon M.C., Wallace D.C., Baldi P. Data structures and compression algorithms for genomic sequence data // Bioinformatics. 2009. - V. 25. - N 14. -P.1731-1738.
207. Brazolot C.L., Petitte J.N., Etches R.J., Verrinder Gibbins A.M. Efficient transfection of chicken cells by lipofection, and introduction of transfected blastodermal cells into the embryo // Mol Reprod Dev. 1991. - V. 30. - N 4. - P. 304-312.
208. Breindl M., Doehmer J., Willecke K., et al. Germ line integration of Moloney leukemia virus: identification of the chromosomal integration site // Proc Natl Acad Sci USA.- 1979. -V. 76. -N 4. P. 1938-1942.
209. Brinster R.L., Allen J.M., Behringer R.R., et al. Introns increase transcriptional efficiency in transgenic mice // Proc Natl Acad Sci USA.- 1988. V. 85.-N3.-P. 836-840.
210. Brinster R.L., Sandgren E.P., Behringer R.R., Palmiter R.D. No simple solution for making transgenic mice // Cell. 1989. - V. 59. - N 2. - P. 239-241.
211. Brosemer R.W., Vogell W., Buecher T. Morphological and Enzymatic Patterns in the Development of the Indirect Flight Muscle of the Locust Migratoria. // Biochem Z. 1963. - V. 338. - P. 854-910.
212. Brown D.D., Gurdon J.B. Absence of Ribosomal Rna Synthesis in the Anucleolate Mutant of Xenopus Laevis // Proc Natl Acad Sci USA.- 1964. V. 51.-P. 139-146.
213. Brown D.D., Dawid I.B. Specific gene amplification in oocytes. Oocyte nuclei contain extrachromosomal replicas of the genes for ribosomal RNA // Science. 1968. - V. 160. - N 825. - P. 272-280.
214. Bulos B., Shukla S., Sacktor B. Bioenergetic properties of mitochondria from flight muscle of aging blowflies // Arch Biochem Biophys. 1972. - V. 149. -N2.-P. 461-469.
215. Bygrave F.L. The ionic environment and metabolic control // Nature. -1967. V. 214. - N 5089. - P. 667-671.
216. Byrne E., Marzuki S., Dennett X. Current perspectives in the study of human mitochondriopathies // Med J Aust. 1988. - V. 149. - N 1. - P. 30-33.
217. Caboche M., Bachellerie J.P. RNA methylation and control of eu-karyotic RNA biosynthesis. Effects of cycloleucine, a specific inhibitor of methylation, on ribosomal RNA maturation // Eur J Biochem. 1977. - V. 74. - N 1. -P. 19-29.
218. Carafoli E. In vivo effect of uncoupling agents on the incorporation of calcium and strontium into mitochondria and other subcellular fractions of rat liver // J Gen Physiol. 1967. - V. 50. - N 7. - P. 1849-1864.
219. Carafoli E., Sacktor B. The effects of ruthenium red on reactions of blowfly flight muscle mitochondria with calcium // Biochem Biophys Res Commun. 1972. - V. 49. - N 6. - P. 1498-1503.
220. Carafoli E., Gazzotti P. The reaction of Ca ++ with the inner and outer membrane of mitochondria // Experientia. 1973. - V. 29. - N 4. - P. 408^09.
221. Carafoli E. The calcium cycle of mitochondria // FEBS Lett. 1979. -V. 104.-N l.-P. 1-5.
222. Carafoli E. The fateful encounter of mitochondria with calcium: how did it happen? // Biochim Biophys Acta. 2010. - V. 1797. - N 6-7. - P. 595-606.
223. Cardoso A.R., Queliconi B.B., Kowaltowski A.J. Mitochondrial ion transport pathways: role in metabolic diseases // Biochim Biophys Acta. 2010. — V. 1797.-N6-7.-P. 832-838.
224. Carinci P., Caruso A., Evangelisti R., et al. Studies on the mechanism of in vitro estradiol-17 beta induced synthesis of phosvitin in chick embryo liver cells // Cell Differ. 1976. -V. 4. -N 6. - P. 441^148.
225. Cassidy M.M., Golder A.M., Tiolboll C.S. Stadies on the localisation of magnezium and calcium ions in mucosal tissue from canine small intestine // Fed. Proc. 1965. - V. 24. - P. 588-597.
226. Castro F.O., Limonta J., Rodriguez A., et al. Transgenic rabbits for the production of biologically-active recombinant proteins in the milk // Genet Anal. -1999.-V. 15.-N3-5.-P. 179-187.
227. Chakrabartty P.K., Schneider W.C. Increased activity of rat liver messenger RNA and of albumin messenger RNA modulated by thioacetamide // Cancer Res. 1978. - V. 38. - N 7. - P. 2043-2047.
228. Chan A.W., Homan E.J., Ballou L.U., et al. Transgenic cattle produced by reverse-transcribed gene transfer in oocytes // Proc Natl Acad Sei U S A. -1998.-V. 95.-N24.-P. 14028-14033.
229. Chan L., Jackson R.L., O'Malley B.W., Means A.R. Synthesis of very low density lipoproteins in the cockerel. Effects of estrogen // J Clin Invest. -1976. V. 58. - N 2. - P. 368-379.
230. Chang K., Qian J., Jiang M., et al. Effective generation of transgenic pigs and mice by linker based sperm-mediated gene transfer // BMC Biotechnol. -2002. -V. 2.-P. 5.
231. Chapman M.J., Goldstein S., Laudat M.H. Characterization and comparative aspects of the serum very low and low density lipoproteins and their apoproteins in the chicken (Gallus domesticus) // Biochemistry. 1977. - V. 16. - N 13.-P. 3006-3015.
232. Chedid A., Nair V. Ontogenesis of cytoplasmic organelles in rat hepa-tocytes and the effects of prenatal phenobarbital on endoplasmic reticulum development // Dev Biol. 1974. - V. 39. - N 1. - P. 49-62.
233. Chen D., Osborne D.J. Ribosomal genes and DNA replication in germinating wheat embryos // Nature. 1970. - V. 225. - N 5230. - P. 336-340.
234. Choi W.S., Kruse S.E., Palmiter R.D., Xia Z. Mitochondrial complex I inhibition is not required for dopaminergic neuron death induced by rotenone, MPP+, or paraquat // Proc Natl Acad Sci USA.- 2008. V. 105. - N 39. - P. 15136-15141.
235. Christianson T.W., Clayton D.A. A tridecamer DNA sequence supports human mitochondrial RNA 3'-end formation in vitro // Mol Cell Biol. 1988. - V. 8.-N10.-P. 4502-4509.
236. Christmann J.L., Grayson M.J., Huang R.C. Comparative study of hen yolk phosvitin and plasma vitellogenin // Biochemistry. 1977. - V. 16. - N 14. -P. 3250-3256.
237. Chromy V., Fischer J. Photometric determination of total protein in li-pemic sera // Clin Chem. 1977. - V. 23. - N 4. - P. 754-756.
238. Clark A.J., Ali S., Archibald A.L., et al. The molecular manipulation of milk composition//Genome. 1989.-V. 31.-N2.-P. 950-955.
239. Clark R.C. The isolation and compsotion of two phosphoproteins from hen's egg // Biochem J. 1970. - V. 118. -N 3. - P. 537-542.
240. Contreras L., Satrustegui J. Calcium signaling in brain mitochondria: interplay of malate aspartate NADH shuttle and calcium uniporter/mitochondrial dehydrogenase pathways // J Biol Chem. 2009. - V. 284. - N 11. - P. 70917099.
241. Cosmos E. Intracellular Distribution of Calcium in Developing Breast Muscle of Normal and Dystrophic Chickens // J Cell Biol. 1964. - V. 23. - P. 241-252.
242. Costantini F., Lacy E. Introduction of a rabbit beta-globin gene into the mouse germ line // Nature. 1981. - V. 294. - N 5836. - P. 92-94.
243. Cox R.F., Haines M.E., Carey N.H. Modification of the template capacity of chick-oviduct chromatin for form-B RNA polymerase by estradiol // Eur J Biochem. 1973. - V. 32. - N 3. - P. 513-524.
244. Crawford R.J., Krieg P., Harvey R.P., et al. Histone genes are clustered with a 15-kilobase repeat in the chicken genome // Nature. 1979. - V. 279. - N 5709.-P. 132-136.
245. Crimi M., O'Hearn S.F., Wallace D.C., Comi G.P. Molecular research technologies in mitochondrial diseases: the microarray approach // IUBMB Life. -2005. V. 57. - N 12. - P. 811-818.
246. Crittenden L.B. Retroviral elements in the genome of the chicken: implications for poultry genetics and breeding // Crit. Rev. Poultry Biol. 1991. - V. 3.-P. 73-109.
247. Crittenden L.B., Salter D.W. A transgene, alv6, that expresses the envelope of subgroup A avian leukosis virus reduces the rate of congenital transmission of a field strain of avian leukosis virus // Poult Sei. 1992. - V. 71.-N5.-P. 799-806.
248. Czarnecka A.M., Kukwa W., Krawczyk T., et al. Mitochondrial DNA mutations in cancer-from bench to bedside // Front Biosci. 2010. - V. 15. - P. 437-460.
249. Dabeva M.D., Petrov P.T., Stoykova A.S., Hadjiolov A.A. Contamination of detergent-purified rat liver nuclei by cytoplasmic ribosomes // Exp Cell Res.-1977.-V. 108.-N2.-P. 467-471.
250. Dabeva M.D., Dudov K.P., Hadjiolov A.A., Stoykova A.S. Quantitative analysis of rat liver nucleolar and nucleoplasmic ribosomal ribonucleic acids // Biochem J. 1978. - V. 171. - N 2. - P. 367-374.
251. Damiano M., Galvan L., Deglon N., Brouillet E. Mitochondria in Huntington's disease // Biochim Biophys Acta. 2010. - V. 1802. - N 1. - P. 52-61.
252. Deeley R.G., Mullinix D.P., Wetekam W., et al. Vitellogenin synthesis in the avian liver. Vitellogenin is the precursor of the egg yolk phosphoproteins // J Biol Chem. 1975. - V. 250. - N 23. - P. 9060-9066.
253. Deeley R.G., Udell D.S., Burns A.T., et al. Kinetics of avian vitellogenin messenger RNA induction. Comparison between primary and secondary response to estrogen // J Biol Chem. 1977. - V. 252. - N 22. - P. 7913-7915.
254. Deeley R.G., Gordon J.I., Burns A.T., et al. Primary activation of the vitellogenin gene in the rooster // J Biol Chem. 1977. - V. 252. - N 22. - P. 8310-8319.
255. Denton R.M., Rändle P.J., Martin B.R. Stimulation by calcium ions of pyruvate dehydrogenase phosphate phosphatase // Biochem J. 1972. - V. 128. -Nl.-P. 161-163.
256. Dierks-Ventling C. Vitellogenin synthesis in isolated hepatocytes // FEBS Lett. 1978. - V. 92. - N 1. - P. 109-113.
257. Dijkstra J., Touw J., Halsema I., et al. Estradiol-induced synthesis of vitellogenin. IV. The isolation of non-degraded polysomes from avian liver using an endogenous ribonuclease inhibitor // Biochim Biophys Acta. 1978. - V. 521. -Nl.-P. 363-373.
258. Dimino M.J., Lloyd D.M., Elfont E.A., et al. Studies on oxidative phosphorylation and steroidogenesis by ovarian mitochondria after gonadotropic stimulation //Endocrinology. 1976. -V. 99. -N 5. - P. 1377-1385.
259. Dimino M.J. Effect of hypophysectomy on the functions of ovarian mitochondria of mature rats // Proc Soc Exp Biol Med. 1977. - V. 156. - N 2. - P. 330-333.
260. Duchler M., Pengg M., Schuller S., et al. Somatic gene transfer into the lactating ovine mammary gland // J Gene Med. 2002. - V. 4. - N 3. - P. 282291.
261. Dudov K.P., Dabeva M.D., Hadjiolov A.A., Todorov B.N. Processing and migration of ribosomal ribonculeic acids in the nucleolus and nucleoplasm of rat liver nuclei // Biochem J. 1978. - V. 171. - N 2. - P. 375-383.
262. Dyck M.K., Lacroix D., Pothier F., Sirard M.A. Making recombinant proteins in animals—different systems, different applications // Trends Biotechnol. 2003. - V. 21. - N 9. - P. 394-3999.
263. Eeg-Olofsson O., al-Zuhair A.G., Teebi A.S., al-Essa M.M. Abnormal mitochondria in the Rett syndrome // Brain Dev. 1988. - V. 10. - N 4. - P. 260262.
264. Ellendorff F., Gulyas N., Muhlbauer E., Klein S. Potential use of molecular sex recognition in layer birds // XX World's Poultry Congress. India, 1996.-V. 4.-P. 3-4.
265. Etches R.J. Transgenic chickens // The poultry industry towards the 21st centry: 10th European Poultry Conference. Jerusalem, Israel, 1998. - V. 1. — P. 3-6.
266. Fan W., Waymire K.G., Narula N., et al. A mouse model of mitochondrial disease reveals germline selection against severe mtDNA mutations // Science. 2008. - V. 319. - N 5865. - P. 958-962.
267. Felber B.K., Ryffel G.U., Weber R. Estradiol-induced accumulation of vitellogenin mRNA and secretion of vitellogenin in liver cultures of Xenopus // Mol Cell Endocrinol. 1978. -V. 12. -N2. -P. 151-166.
268. Fire A. Nucleic acid structure and intracellular immunity: some recent ideas from the world of RNAi // Q Rev Biophys. 2005. - V. 38. - N 4. - P. 303309.
269. Fisher RJ. Characterization of rat liver mitochondria depleted of inner membrane components by chloramphenicol treatment of regenerating rat liver // Arch Biochem Biophys.-1976.-V. 172.-N 2.-P. 611-617.
270. Fisinin V.I., Karapetyan R.V., Korshunova L.G. Obtaining of transgenic chicken by DNA microinjection in ovum // Eight Baltic Poultry Conference.- Turku, Finland, 2000. P. 80.
271. Fletcher M.J., Sanadi D.R. Turnover of rat-liver mitochondria // Bio-chimBiophys Acta. 1961.-V. 51.-P. 356-360.
272. Fong W.F., Fuchs M.S. The differential effect of RNA synthesis inhibitors on ecdysterone induced ovarian development in mosquitoes // J Insect Physiol.- 1976. V. 22.-Nil.-P. 1493-1499.
273. Fontanesi F., Soto I.C., Horn D., Barrientos A. Assembly of mitochondrial cytochrome c-oxidase, a complicated and highly regulated cellular process // Am J Physiol Cell Physiol. 2006. - V. 291. - N 6. - P. 1129-1147.
274. Fontanesi F., Soto I.C., Barrientos A. Cytochrome c oxidase biogenesis: new levels of regulation // IUBMB Life. 2008. - V. 60. - N 9. - P. 557-568.
275. Francolini M., Lavitrano M., Lamia C.L., et al. Evidence for nuclear internalization of exogenous DNA into mammalian sperm cells // Mol Reprod Dev. -1993. V. 34. - N 2. - P. 133-139.
276. Freeman B.M., Bumstead N. Transgenic Poultry: theory and practice // World's Poultry Science Journal. 1987. - V. 43. -N 3. - P. 180-189.
277. Gagne M.B., Pothier F., Sirard M.A. Electroporation of bovine spermatozoa to carry foreign DNA in oocytes // Mol Reprod Dev. 1991. - V. 29. - N 1.-P. 6-15.
278. Gall J.G., Pardue M.L. Formation and detection of RNA-DNA hybrid molecules in cytological preparations // Proc Natl Acad Sci USA.- 1969. V. 63.-N2.-P. 378-383.
279. Galvin M.J., McRee D.I., Hall C.A., et al. Humoral and cell-mediated immune function in adult Japanese Quail following exposure to 2.45-GHz microwave radiation during embryogeny // Bioelectromagnetics. 1981. - V. 2. - N 3. -P. 269-278.
280. Gandolfi F. Sperm-mediated transgenesis // Theriogenology. 2000. -V. 53.-N1.-P. 127-137.
281. Gear A.R., Bednarek J.M. Direct counting and sizing of mitochondria in solution // J Cell Biol. 1972. - V. 54. - N 2. - P. 325-345.
282. Gear A.R., Albert A.D., Bednarek J.M. The effect of the hypocholes-terolemic drug clofibrate on liver mitochondrial biogenesis. A role for neutral mitochondrial proteases // J Biol Chem. 1974. - V. 249. - N 20. - P. 6495-6504.
283. Gellerich F.N., Gizatullina Z., Trumbeckaite S., et al. The regulation of OXPHOS by extramitochondrial calcium // Biochim Biophys Acta. 2010. - V. 1797.-N6-7.-P. 1018-1027.
284. Georgiev G.P., Ryskov A.P., Coutelle C., et al. On the structure of transcriptional unit in mammalian cells // Biochim Biophys Acta. 1972. - V. 259. -N2.-P. 259-283.
285. Goldblatt P. J., Archer J., Eastwood C. The effect of high and low doses of cycloheximide on nucleolar ribonucleic acid synthesis // Lab Invest. 1975. -V. 33.-N2.-P. 117-124.
286. Gordon J.I., Deeley R.G., Burns A.T., et al. In vitro translation of avian vitellogenin messenger RNA // J Biol Chem. 1977. - V. 252. - N 22. - P. 83208327.
287. Gordon J.W., Scangos G.A., Plotkin D.J., et al. Genetic transformation of mouse embryos by microinjection of purified DNA // Proc Natl Acad Sci USA. 1980. -V. 77. -N 12. - P. 7380-7384.
288. Gordon J.W., Ruddle F.H. Integration and stable germ line transmission of genes injected into mouse pronuclei // Science. 1981. - V. 214. - N 4526. - P. 1244-1246.
289. Gorenstein C., Warner J.R. Coordinate regulation of the synthesis of eukaryotic ribosomal proteins // Proc Natl Acad Sci USA.- 1976. V. 73. - N 5. -P. 1547-1551.
290. Greengard O., Sentenac A., Mendelsohn N. Phosvitin, the Iron Carrier of Egg Yolk // Biochim Biophys Acta. 1964. - V. 90. - P. 406-407.
291. Greengard O., Gordon M., Smith M.A., Acs G. Studies on the Mechanism of Diethylstilbestrol-Induced Formation of Phosphoprotein in Male Chickens // J Biol Chem. 1964. - V. 239. - P. 2079-2082.
292. Greengard O., Sentenac A., Acs G. Induced Formation of Phosphoprotein in Tissues of Cockerels in Vivo and in Vitro // J Biol Chem. 1965. - V. 240. -P. 1687-1691.
293. Griswold R.L., Pace N. The intracellular distribution of metal ions in rat liver // Exp Cell Res. 1956. - V. 11. - N 2. - P. 362-367.
294. Grove D., Nair K.G., Zak R. Biochemical correlates of cardiac hypertrophy. 3. Changes in DNA content; the relative contributions of polyploidy and mitotic activity // Circ Res. 1969. - V. 25. - N 4. - P. 463-471.
295. Grover A., Sundharadas G., Talwar G.P. Estrogen action in rooster liver. Modification of a tRNASer-inactivating activity // Eur J Biochem. 1979. -V. 100.-N2.-P. 477-481.
296. Gruber M., Bos E.S., Ab G. Hormonal control of vitellogenin synthesis in avian liver // Mol Cell Endocrinol. 1976. - V. 5. - N 1-2. - P. 41-50.
297. Gschwendt M., Kittstein W. Specific binding of estradiol to the liver chromatin of estrogenized roosters // Biochim Biophys Acta. 1974. - V. 361. - N l.-P. 84-96.
298. Gustafsson R., Tata J.R., Lindberg O., Ernster L. The relationship between the structure and activity of rat skeletal muscle mitochondria after thyroidectomy and thyroid hormone treatment // J Cell Biol. 1965. - V. 26. - N 2. - P. 555-578.
299. Guy A.L., Taylor J.H. Actinomycin D inhibits initiation of DNA replication in mammalian cells // Proc Natl Acad Sci USA.- 1978. V. 75. - N 12. -P. 6088-6092.
300. Hadjiolov A.A., Cox R.A., Huvos P. The presence of a high-molecular-weight (guanine-plus-cytosine)-rich segment at the 3' end of rabbit 28S ribosomal ribonucleic acid // Biochem J. 1975. - V. 147. - N 3. - P. 625-628.
301. Hadjiolov A. A., Nikolaev N. Maturation of ribosomal ribonucleic acids and the biogenesis of ribosomes // Prog Biophys Mol Biol. 1976. - V. 31. - N 2. -P. 95-144.
302. Haller O., Acklin M., Staeheli P. Genetic resistance to influenza virus in wild mice // Curr Top Microbiol Immunol. 1986. - V. 127. - P. 331-337.
303. Halperin M.L., Robinson B.H., Fritz I.B. Effects of palmitoyl CoA on citrate and malate transport by rat liver mitochondria // Proc Natl Acad Sci USA. 1972. - V. 69. - N 4. - P. 1003-1007.
304. Hammer R.E., Pursel V.G., Rexroad C.E., Jr., et al. Production of transgenic rabbits, sheep and pigs by microinjection // Nature. 1985. - V. 315. -N6021.-P. 680-683.
305. Hansford R.G., Chappell J.B. The effect of Ca2+ on the oxidation of glycerol phosphate by blowfly flight-muscle mitochondria // Biochem Biophys Res Commun. 1967. - V. 27. - N 6. - P. 686-692.
306. Harvey A.J., Ivarie R. Validating the hen as a bioreactor for the production of exogenous proteins in egg white // Poult Sci. 2003. - V. 82. - N 6. - P. 927-930.
307. Havenstain G.B., Crittenden L.B., Petitte J.N., et al. Application of biotechnology in the poultry industry // Animal Biotechnology. 1992. - V. 3. - N 1. -P. 15-36.
308. Henderson A.S., Eicher E.M., Yu M.T., Atwood K.C. Variation in ri-bosomal RNA gene number in mouse chromosomes // Cytogenet Cell Genet. -1976. V. 17. - N 6. - P. 307-316.
309. Henderson L.M., Bruere A.N. Association of nucleolus organizer chromosomes in domestic sheep (Ovis aries) shown by silver staining // Cytogenet Cell Genet. 1977. - V. 19. - N 6. - P. 326-334.
310. Hibbs R.G. Electron microscopy of developing cardiac muscle in chick embryos // Am J Anat. 1956. - V. 99. - N 1. - P. 17-51.
311. Higashi K., Hanasaki N., Nakanishi A., et al. Difference in susceptibility to sonication of chromatins containing transcriptionally active and inactive ri-bosomal genes // Biochim Biophys Acta. 1978. - V. 520. - N 3. - P. 612-622.
312. Ho S.Y., Gilbert M.T. Ancient mitogenomics // Mitochondrion. 2010. -V. 10.-N1.-P. 1-11.
313. Hoefer M., Kleinzeller A. Calcium Transport in Slices of Rabbit Kidney Cortex: The Loss of Calcium from Ca-Enriched Slices // Physiol Bohemoslov. 1963. - V. 12.-P. 425-434.
314. Hoefer M., Kleinzeller A. Calcium Transport in Slices of Rabbit Kidney Cortex: The Steady-State Compartmentation of Ca and Rate Constants of 45ca Efflux // Physiol Bohemoslov. 1963. - V. 12. - P. 417-424.
315. Hoefer M., Kleinzeller A. Calcium Transport in Slices of Rabbit Kidney Cortex: The Uptake and Distribution of Calcium // Physiol Bohemoslov. -1963.-V. 12.-P. 405-416.
316. Hofgartner F.J., Krone W., Jain K. Correlated inhibition of ribosomal RNA synthesis and silver staining by actinomycin D // Hum Genet. 1979. - V. 47.-N3.-P. 329-333.
317. Hohman W., Schraer H. The intracellular distribution of calcium in the mucosa of the avian shell gland // J Cell Biol. 1966. - V. 30. - N 2. - P. 317331.
318. Holt I.J., Harding A.E., Morgan-Hughes J.A. Mitochondrial DNA polymorphism in mitochondrial myopathy // Hum Genet. 1988. - V. 79. - N 1. -P. 53-57.
319. Howell W.M. Visualization of ribosomal gene activity: silver stains proteins associated with rRNA transcribed from oocyte chromosomes // Chromo-soma. 1977. -V. 62. -N4. - P. 361-367.
320. Howland J.L., Challberg M.D. Altered respiration and proton permeability in liver mitochondria from genetically dystrophic mice // Biochem Biophys Res Commun. 1973. -V. 50. -N2. - P. 574-580.
321. Huszar D., Balling R., Kothary R., et al. Insertion of a bacterial gene into the mouse germ line using an infectious retrovirus vector // Proc Natl Acad Sci US A.- 1985.-V. 82.-N24.-P. 8587-8591.
322. Iapalucci-Espinoza S., Franze-Fernandez M.T. Effect of protein synthesis inhibitors and low concentrations of actinomycin D on ribosomal RNA synthesis // FEBS Lett. 1979. - V. 107. - N 2. - P. 281-284.
323. Ivarie R. Avian transgenesis: progress towards the promise // Trends Biotechnol. -2003. V. 21. -N 1. - P. 14-19.
324. Ivarie R. Competitive bioreactor hens on the horizon // Trends Biotechnol. 2006. - V. 24. - N 3. - P. 99-101.
325. Jacob S.T., Sajdel E.M., Munro H.N. Specific action of alpha-amanitin on mammalian RNA polymerase protein // Nature. 1970. - V. 225. - N 5227. -P. 60-62.
326. Jacobson B.E., Blanchaer M.C., Wrogemann K. Defective respiration and oxidative phosphorylation in muscle mitochondria of hamsters in the late stages of hereditary muscular dystrophy // Can J Biochem. 1970. - V. 48. - N 9. -P. 1037-1042.
327. Jaenisch R., Mintz B. Simian virus 40 DNA sequences in DNA of healthy adult mice derived from preimplantation blastocysts injected with viral DNA // Proc Natl Acad Sci USA.- 1974. -V. 71. -N 4. P. 1250-1254.
328. Jaenisch R. Germ line integration and Mendelian transmission of the exogenous Moloney leukemia vims // Proc Natl Acad Sci USA.- 1976. V. 73. -N4.-P. 1260-1264.
329. Jailkhani B.L., Talwar G.P. The role of estrogens in differentiation and growth of target tissues // Adv Sex Horm Res. 1975. - V. 1. - P. 359-395.
330. Janan J., Rudas P., Bartha T., Ludrovszky F. Serum concentrations of thyroid hormones during egg laying in two types of Japanese quail (Coturnix co-turnix japonica) // Arch Vet Pol. 1994. - V. 34. - N 3^1. - P. 249-260.
331. Jeurissen S.H., Janse E.M. The use of chicken-specific antibodies in veterinary research involving three other avian species // Vet Q. 1998. - V. 20. -N4.-P. 140-143.
332. Johnson L.K., Johnson R.W., Strehler B.L. Cardiac hypertrophy, aging and changes in cardiac ribosomal RNA gene dosage in man // J Mol Cell Cardiol.1975.-V. 7.-N2.-P. 125-133.
333. Johnson R., Strehler B.L. Loss of genes coding for ribosomal RNA in ageing brain cells //Nature. 1972. -V. 240. -N 5381. -P. 412-414.
334. Jones D.H., Rosano T.G. Studies of mitochondrial development prior to lactogenesis in the mouse mammary gland // Arch Biochem Biophys. 1972. - V. 153.-Nl.-P. 130-138.
335. Joss U., Bassand C., Dierks-Ventling C. Rapid appearance of estrogen receptor in chick liver nuclei: partial inhibition by cycloheximide // FEBS Lett.1976. V. 66. - N 2. - P. 293-298.
336. Jost J.P., Keller R., Dierks-Ventling C. Deoxyribonucleic acid and ribonucleic acid synthesis during phosvitin induction by 17beta-estradiol in immature chicks // J Biol Chem. 1973. - V. 248. - N 15. - P. 5262-5266.
337. Jost J.P., Pehling G., Baca O.G. Rate of synthesis of beta L-lipovitellin in the liver of immature chicks treated with 17beta estradiol // Biochem Biophys Res Commun. 1975. - V. 62. - N 4. - P. 957-965.
338. Jost J.P., Pehling G. Immunochemical isolation and characterization of vitellogenin mRNA from liver of estradiol-treated chicks // Eur J Biochem. 1976. -V. 66.-N2.-P. 339-346.
339. Jost J.P., Pehling G. Organization of vitellogenin polysomes, size of the mRNA and polyadenylate fragment // Eur J Biochem. 1976. - V. 62. - N 2. - P. 299-306.
340. Jost J.P., Pehling G., Ohno T., Cozens P. Identification of a large precursor of vitellogenin mRNA in the liver of estradiol-treated chicks // Nucleic Acids Res. 1978. -V. 5. -N 12. - P. 4781-4793.
341. Kadenbach B. Synthesis of mitochondrial proteins. The synthesis of cytochrome c in vitro // Biochim Biophys Acta. 1967. - V. 138. - N 3. - P. 651— 654.
342. Kadenbach B. Incorporation of 32P-phosphate into phosphatides of rat liver mitochondria in vivo and in vitro // FEBS Lett. 1968. - V. 2. - N 2. - P. 118-120.
343. Kai C., Yoshikawa Y., Yamanouchi K., et al. Ontogeny of the third component of complement of Japanese quails // Immunology. 1985. - V. 54. - N 3.-P. 463-470.
344. Kamenski P., Smirnova E., Kolesnikova O., et al. tRNA mitochondrial import in yeast: Mapping of the import determinants in the carrier protein, the precursor of mitochondrial lysyl-tRNA synthetase // Mitochondrion. 2010. - V. 10. -N3.-P. 284-293.
345. Kanerva P.A., Maenpaa P.H. Codon-specific serine transfer ribonucleic acid degradation in avian liver during vitellogenin induction // Acta Chem Scand B. 1981. -V. 35. -N 5. -P. 379-385.
346. Karapetyan R.V., Korshunova L.G., Fisinin V.I. Production of transgenic chicken by DNA microinjection in ovum // The poultry industry towards the 21st century: 10th European Poultry Conference. Jerusalem, Israel, 1998. - V. 1. -P. 227-229.
347. Kasupski G.J., Mukherjee B.B. Effects of controlled exposure of L cells to bromodeoxyuridine (BUdR). I. Evidence for ordered gene replication during S phase // Exp Cell Res. 1977. - V. 106. - N 2. - P. 327-338.
348. Kay J.E., Cooper H.L. Differential inhibition of 28S and 18S ribosomal RNA synthesis by actinomycin // Biochem Biophys Res Commun. 1969. - V. 35.-N4.-P. 526-530.
349. Kay J.E., Leventhal B.G., Cooper H.L. Effects of inhibition of ribosomal RNA synthesis on the stimulation of lymphocytes by phytohaemagglutinin // Exp Cell Res. 1969. -V. 54. -N l.-P. 94-100.
350. Kedes L.H. Histone messengers and histone genes // Cell. 1976. - V. 8. -N 3. - P. 321-331.
351. Kedinger C., Gniazdowski M., Mandel J.L.J., et al. Alpha-amanitin: a specific inhibitor of one of two DNA-pendent RNA polymerase activities from calf thymus // Biochem Biophys Res Commun. 1970. -V. 38. -N 1. - P. 165-171.
352. Khoo H.W. Sperm-mediated gene transfer studies on zebrafish in Singapore // Mol Reprod Dev. 2000. - V. 56. - N 2 Suppl. - P. 278-280.
353. Kistler A., Weber R. Enzyme patterns in mitochondria of eggs, liver, and skeletal muscle during larval development of Xenopus // Dev Biol. 1974. -V. 37.-N2.-P. 236-247.
354. Koo B.C., Kwon M.S., Choi B.R., et al. Production of germline transgenic chickens expressing enhanced green fluorescent protein using a MoMLV-based retrovirus vector // FASEB J. 2006. - V. 20. - N 13. - P. 2251-2260.
355. Kruse S.E., Watt W.C., Marcinek D.J., et al. Mice with mitochondrial complex I deficiency develop a fatal encephalomyopathy // Cell Metab. 2008. -V. 7,-N4.-P. 312-320.
356. Kumar A., Subramanian A.R. Ribosome assembly in HeLa cells: labeling pattern of ribosomal proteins by two-dimensional resolution // J Mol Biol. -1975. V. 94. - N 3. - P. 409^23.
357. Kurup C.K., Aithal H.N., Ramasarma T. Increase of hepatic mitochondria on administration of ethyl alpha-p-chlorophenoxyisobutyrate to the rat // Biochem J. 1970. - V. 116. - N 5. - P. 773-779.
358. Kuylenstierna B., Nicholls D.G., Hovmoller S., Ernster L. Effect of trypsin on mitochondrial and microsomal enzymes // Eur J Biochem. 1970. - V. 12.-N3.-P. 419-426.
359. Kwon M.S., Koo B.C., Choi B.R., et al. Generation of transgenic chickens that produce bioactive human granulocyte-colony stimulating factor // Mo 1 Reprod Dev. 2008. - V. 75. - N 7. - P. 1120-1126.
360. Lampert A., Feigelson P. A short lived polypeptide component of one of two discrete functional pools of hepatic nuclear alpha-amanitin resistant RNA polymerases // Biochem Biophys Res Commun. 1974. - V. 58. - N 4. - P. 10301038.
361. LaNoue K.F., Tischler M.E. Electrogenic characteristics of the mitochondrial glutamate-aspartate antiporter // J Biol Chem. 1974. - V. 249. - N 23. -P. 7522-7528.
362. LaNoue K.F., Bryla J., Bassett D.J. Energy-driven aspartate efflux from heart and liver mitochondria // J Biol Chem. 1974. - V. 249. - N 23. - P. 75147521.
363. Lastick S.M., McConkey E.H. Exchange and stability of HeLa ribo-somal proteins in vivo // J Biol Chem. 1976. - V. 251. - N 10. - P. 2867-2875.
364. Lavitrano M., Camaioni A., Fazio V.M., et al. Sperm cells as vectors for introducing foreign DNA into eggs: genetic transformation of mice // Cell. -1989. V. 57. - N 5. - P. 717-723.
365. Lavitrano M., French D., Zani M., et al. The interaction between exogenous DNA and sperm cells // Mol Reprod Dev. 1992. - V. 31. - N 3. - P. 161-169.
366. Lavitrano M., Forni M., Varzi V., et al. Sperm-mediated gene transfer: production of pigs transgenic for a human regulator of complement activation // Transplant Proc. 1997. - V. 29. - N 8. - P. 3508-3509.
367. Lavitrano M., Bacci M.L., Forni M., et al. Efficient production by sperm-mediated gene transfer of human decay accelerating factor (hDAF) transgenie pigs for xenotransplantation // Proc Natl Acad Sci USA.- 2002. V. 99. -N22.-P. 14230-14305.
368. Lavitrano M., Forni M., Bacci M.L., et al. Sperm mediated gene transfer in pig: Selection of donor boars and optimization of DNA uptake // Mol Reprod Dev.-2003.-V. 64.-N3.-P. 284-291.
369. Lazarow P.B., De Duve C. A fatty acyl-CoA oxidizing system in rat liver peroxisomes; enhancement by clofibrate, a hypolipidemic drug // Proc Natl Acad Sci USA.- 1976. -V. 73. -N 6. P. 2043-2046.
370. Lazier C. (3H)-estradiol binding by chick liver nuclear extracts: mechanism of increase in binding following estradiol injection // Steroids. 1975. -V. 26.-N3.-P. 281-298.
371. Lazier C.B. Ontogeny of the vitellogenic response to oestradiol and of the soluble nuclear oestrogen receptor in embryonic-chick liver // Biochem J. -1978.-V. 174. -Nl. -P. 143-152.
372. Lee J., Schriner S.E., Wallace D.C. Adenine nucleotide translocator 1 deficiency increases resistance of mouse brain and neurons to excitotoxic insults // Biochim Biophys Acta. 2009. - V. 1787. - N 5. - P. 364-370.
373. Lehninger A.L. A soluble, heat-labile, high-affinity Ca2 plus-binding factor extracted from rat liver mitochondria // Biochem Biophys Res Commun. -1971.-V. 42.-N2.-P. 312-318.
374. Leighton P.A., van de Lavoir M.C., Diamond J.H., et al. Genetic modification of primordial germ cells by gene trapping, gene targeting, and phiC31 integrase // Mol Reprod Dev. 2008. - V. 75. - N 7. - P. 1163-1175.
375. Leonard T.B., Jacob S.T. Alterations in DNA-dependent RNA polymerase I and II from rat liver by thioacetamide: preferential increase in the level of chromatin-associated nucleolar RNA polymerase IB // Biochemistry. 1977. - V. 16.-N20.-P. 4538-4544.
376. Lillico S.G., McGrew M.J., Sherman A., Sang H.M. Transgenic chickens as bioreactors for protein-based drugs // Drug Discov Today. 2005. - V. 10.-N3.-P. 191-196.
377. Lillico S.G., Sherman A., McGrew M.J., et al. Oviduct-specific expression of two therapeutic proteins in transgenic hens // Proc Natl Acad Sci U S A. -2007.-V. 104.-N6.-P. 1771-1776.
378. Lindberg U., Persson T. Isolation of mRNA from KB-cells by affinity chromatography on polyuridylic acid covalently linked to Sepharose // Eur J Biochem. 1972. -V. 31. -N 2. - P. 246-254.
379. Lindell T.J., Weinberg F., Morris P.W., et al. Specific inhibition of nuclear RNA polymerase II by alpha-amanitin // Science. 1970. - V. 170. - N 956. P. 447—449.
380. Lindell T.J. Inhibition of eukaryotic DNA-dependent RNA polymerase release from isolated nuclei and nucleoli by phenylmethylsulfonylfluoride // Arch Biochem Biophys. 1975. -V. 171. -N 1. - P. 268-275.
381. Lindell T.J. Evidence for an extranucleolar mechanism of actinomycin D action // Nature. 1976. - V. 263. - N 5575. - P. 347-350.
382. Loeb L.A., Wallace D.C., Martin G.M. The mitochondrial theory of aging and its relationship to reactive oxygen species damage and somatic mtDNA mutations // Proc Natl Acad Sci USA.- 2005. V. 102. - N 52. - P. 1876918770.
383. Loening U.E. Molecular weights of ribosomal RNA in relation to evolution // J Mol Biol. 1968. - V. 38. - N 3. - P. 355-365.
384. Lotscher H.R., Winterhalter K.H., Carafoli E., Richter C. The energy-state of mitochondria during the transport of Ca2+ // Eur J Biochem. 1980. - V. 110. -N 1. - P. 211-216.
385. Love J., Gribbin C., Mather C., Sang H. Transgenic birds by DNA microinjection // Biotechnology (N Y). 1994. - V. 12. - N 1. - P. 60-63.
386. Luck D.J. Formation of mitochondria in Neurospora crassa. A quantitative radioautographic study // J Cell Biol. 1963. - V. 16. - P. 483-499.
387. Lyamzaev K.G., Pletjushkina O.Y., Saprunova V.B., et al. Selective elimination of mitochondria from living cells induced by inhibitors of bioenergetic functions // Biochem Soc Trans. 2004. - V. 32. - N Pt 6. - P. 1070-1071.
388. Lykkesfeldt A.E., Andersen H.A. Preferential inhibition of rDNA transcription by 5-bromodeoxyuridine // J Cell Sci. 1977. - V. 25. - P. 95-102.
389. Ma Y., Bai R.K., Trieu R., Wong L.J. Mitochondrial dysfunction in human breast cancer cells and their transmitochondrial cybrids // Biochim Biophys Acta. 2010. - V. 1797. - N 1. - P. 29-37.
390. Mackerer C.R., Haettinger J.R. Further studies concerning the effects of clofibrate on respiration and oxidative phosphorylation of rat liver mitochondria // Biochem Pharmacol. 1974. - V. 23. - N 23. - P. 3331-3345.
391. Mackerer C.R. Effect of sub-acute administration of clofibrate on the oxidation of fatty acids by liver mitochondria // Biochem Pharmacol. 1977. - V. 26.-N23.-P. 2225-2230.
392. Mackler B., Grace R., Duncan H.M. Studies of mitochondrial development during embiyogenesis in the rat // Arch Biochem Biophys. 1971. - V. 144.-N2.-P. 603-610.
393. Maden B.E., Salim M. The methylated nucleotide sequences in HELA cell ribosomal RNA and its precursors // J Mol Biol. 1974. - V. 88. - N 1. - P. 133-152.
394. Maenpaa P.H., Bernfield M.R. A specific hepatic transfer RNA for phosphoserine // Proc Natl Acad Sci USA.- 1970. V. 67. - N 2. - P. 688-695.
395. Maenpaa P.H. Seryl transfer RNA alterations during estrogen-induced phosvitin synthesis. Quantitative assay of the hormone-responding species by ribosomal binding // Biochem Biophys Res Commun. 1972. - V. 47. - N 4. - P. 971-974.
396. Maenpaa P.H. Vitellogenin synthesis in rooster liver: changes in liver polyribosomes in relation to the activation of nucleolar RNA polymerase and vitellogenin synthesis // Biochem Biophys Res Commun. 1976. - V. 72. - N 1. - P. 347-354.
397. Mager W.H., Retel J., Planta R.J., et al. Transcriptional units for ribosomal proteins in yeast // Eur J Biochem. 1977. - V. 78. - N 2. - P. 575-583.
398. Maione B., Pittoggi C., Achene L., et al. Activation of endogenous nucleases in mature sperm cells upon interaction with exogenous DNA // DNA Cell Biol. 1997. - V. 16. - N 9. - P. 1087-1097.
399. Maione B., Lavitrano M., Spadafora C., Kiessling A.A. Spermmediated gene transfer in mice // Mol Reprod Dev. 1998. - V. 50. - N 4. - P. 406-409.
400. Mansour A.M., Nass S. RNA synthesis in rat liver after Cortisol treatment: a possible mitochondrial-nuclear relationship // Acta Endocrinol (Copenh). -1974. V. 77. - N 2. - P. 298-309.
401. Margulis L. Recombination of non-chromosomal genes in Chlamydo-monas: assortment of mitochondria and chloroplasts? // J Theor Biol. 1970. - V. 26.-N2.-P. 337-342.
402. Margulis L. Symbiosis and evolution // Sci Am. 1971. - V. 225. - N 2.-P. 48-57.
403. Margulis L. Symbiotic theory of the origin of eukaryotic organelles; criteria for proof// Symp Soc Exp Biol. 1975. - N 29. - P. 21-38.
404. Margulis L. Words as battle cries—symbiogenesis and the new field of endocytobiology // Bioscience. 1990. - V. 40. - N 9. - P. 673-677.
405. Markaki M., Drabek D., Livadaras I., et al. Stable expression of human growth hormone over 50 generations in transgenic insect larvae // Transgenic Res. -2007.-V. 16.-N l.-P. 99-107.
406. Marmol P., Pardo B., Wiederkehr A., et al. Requirement for aralar and its Ca2+-binding sites in Ca2+ signal transduction in mitochondria from INS-1 clonal beta-cells // J Biol Chem. 2009. - V. 284. - N 1. - P. 515-524.
407. Mason T.L., Schatz G. Cytochrome c oxidase from bakers' yeast. II. Site of translation of the protein components // J Biol Chem. 1973. - V. 248. - N 4.-P. 1355-1360.
408. Mather C. Transgenic chicken by DNA microinjection // Poultry International. 1994. -V. 33. -N 6. - P. 16-18.
409. Mather C., Love J., Gribbin C., Sang H.M. Transgenic chicken by microinjected DNA // International Hatchery Practice. 1994. - V. 8. - N 5. - P. 29-29.
410. Max S.R. Disuse atrophy of skeletal muscle: loss of functional activity of mitochondria // Biochem Biophys Res Commun. 1972. - V. 46. - N 3. - P. 1394-1398.
411. Meade H., Gates L., Lacy E., Lonberg N. Bovine alpha Sl-casein gene sequences direct high level expression of active human urokinase in mouse milk // Biotechnology (N Y). 1990. - V. 8. - N 5. - P. 443-446.
412. Meli J., Bygrave F.L. The role of mitochondria in modifying calcium-sensitive cytoplasmic metabolic activities. Modification of pyruvate kinase activity //Biochem J. 1972. -V. 128. -N2. - P. 415-420.
413. Mello C.C., Conte D.J. Revealing the world of RNA interference // Nature. 2004. - V. 431. - N 7006. - P. 338-342.
414. Michel F., Pons M., Descomps B., Crastes de Paulet A. Affinity labelling of the estrogen binding site of glutamate dehydrogenase with iodoacetyldi-ethylstilbestrol. Selective alkylation of cysteine-89 // Eur J Biochem. 1978. - V. 84.-N1.-P. 267-274.
415. Michel F., Pons M., Julliard J., et al. Enzymic hydrolysis of 3-acetyl-estrogens or analogues by glutamate dehydrogenase with specific acylation of the estrogen binding site // Eur J Biochem. 1978. - V. 84. - N 1. - P. 275-283.
416. Miller L., Knowland J. The number and activity of ribosomal RNA genes in Xenopus laevis embryos carrying partial deletions in both nucleolar organizers // Biochem Genet. 1972. - V. 6. - N 1. - P. 65-73.
417. Miller O.L., Jr., Hamkalo B.A. Visualization of RNA synthesis on chromosomes // Int Rev Cytol. 1972. - V. 33. - P. 1-25.
418. Milner J. The functional development of mammalian mitochondria // Biol Rev Camb Philos Soc. 1976. -V. 51.-N2.-P. 181-209.
419. Mintz B. Malignancy vs. normal differentiation of stem cells as analyzed in genetically mosaic animals // Adv Pathobiol. 1977. - N 6. - P. 153-157.
420. Mintz B. Teratocarcinoma cells as vehicles for mutant and foreign genes // Brookhaven Symp Biol. 1977. - N 29. - P. 82-95.
421. Mishmar D., Ruiz-Pesini E., Mondragon-Palomino M., et al. Adaptive selection of mitochondrial complex I subunits during primate radiation // Gene. -2006.-V. 378.-P. 11-18.
422. Mita S., Monnat R.J.J., Loeb L.A. Direct selection of mutations in the human mitochondrial tRNAThr gene: reversion of an 'uncloneable' phenotype // Mutat Res.-1988.-V. 199.-Nl.-P. 183-190.
423. Mita S., Monnat R.J., Jr., Loeb L.A. Resistance of HeLa cell mitochondrial DNA to mutagenesis by chemical carcinogens // Cancer Res. 1988. - V. 48. -N 16.-P. 4578-4583.
424. All. Mokhova E.N., Khailova L.S. Involvement of mitochondrial inner membrane anion carriers in the uncoupling effect of fatty acids // Biochemistry (Mosc). 2005. - V. 70. - N 2. - P. 159-163.
425. Morgan G.W. Hemagglutinin responses in Japanese quail treated with exogenous adrenocorticotrophin // Poult Sci. 1981. - V. 60. - N 5. - P. 10711074.
426. Morley C.G., Boyer J.L. Stimulation of hepatocellular proliferation by a serum factor from thioacetamide-treated rats // Biochim Biophys Acta. 1977. -V. 477.-N2.-P. 165-176.
427. Mullinix K.P., Wetekam W., Deeley R.G., et al. Induction of vitellogenin synthesis by estrogen in avian liver: relationship between level of vitellogenin mRNA and vitellogenin synthesis // Proc Natl Acad Sci USA.- 1976. -V. 73.-N5.-P. 1442-1446.
428. Naito M. Genetic improvement of chickens by direct gene transfer // XX World's Poultry Congress. India, 1996. - V. 1. - P. 341-353.
429. Naito M., Kuwana T. Production of chimeric chickens // Methods Mol Biol. 2004. - V. 254. - P. 245-254.
430. Nakada T., Koja Z., Tokashiki S. Influence of ovulation and gonadal hormones on shell formation in the domestic fowl // Japanese Poultry Science. -1976.-V. 13.-N5.-P. 169-175.
431. Nakanishi A., Iritani A. Gene transfer in the chicken by spermmediated methods // Mol Reprod Dev. 1993. - V. 36. - N 2. - P. 258-261.
432. Nancarrow C.D., Shanahan C.M., Dixon R.J., et al. Growth hormone expression and effects in transgenic sheep // Biotechnology in growth regulation. / Editors: R.B. Heap, C.G. Prosser, G.E. Lamming. London: Butterworths, 1989. -P. 265.
433. Nass M.M., Nass S. Intramitochondrial Fibers with DNA Characteristics. I. Fixation and Electron Staining Reactions // J Cell Biol. 1963. - V. 19. - P. 593-611.
434. Nass M.M. The circularity of mitochondrial DNA // Proc Natl Acad Sci USA.- 1966. V. 56. - N 4. - P. 1215-1222.
435. Nass M.M. Mitochondrial DNA. I. Intramitochondrial distribution and structural relations of single- and double-length circular DNA // J Mol Biol. -1969. V. 42. - N 3. - P. 521-528.
436. Nass M.M. Mitochondrial DNA. II. Structure and physicochemical properties of isolated DNA // J Mol Biol. 1969. - V. 42. - N 3. - P. 529-545.
437. Nass M.M. Mitochondrial DNA: Advances, Problems, and Goals // Science. 1969. - V. 165. - N 3888. - P. 25-35.
438. Nass S., Nass M.M. Intramitochondrial Fibers with DNA Characteristics. Ii. Enzymatic and Other Hydrolytic Treatments // J Cell Biol. 1963. - V. 19. -P. 613-629.
439. Neubert D. Comparative studies on the nucleic acid synthesis in cell nuclei and mitochondria and their control by drugs. // Naunyn Schmiedebergs Arch Exp Pathol Pharmakol. 1966. - V. 253. - N 1. - P. 152-176.
440. Notarianni E., Laurie S., Moor R.M., Evans M.J. Maintenance and differentiation in culture of pluripotential embryonic cell lines from pig blastocysts // J Reprod Fertil Suppl. 1990. -V. 41. - P. 51-56.
441. Novak S., Smith T.A., Paradis F., et al. Biomarkers of in vivo fertility in sperm and seminal plasma of fertile stallions // Theriogenology. 2010. - V. 74. -N6.-P. 956-967.
442. Novi A.M., Baserga R. Correlation between synthesis of ribosomal RNA and stimulation of DNA synthesis in mouse salivary glands // Lab Invest. -1972. V. 26. - N 5. - P. 540-547.
443. Numa S. Regulation of fatty-acid synthesis in higher animals // Ergeb Physiol. 1974. - V. 69. - N 0. - P. 54-96.
444. Numa S., Yamashita S. Regulation of lipogenesis in animal tissues // Curr Top Cell Regul. 1974. - V. 8. - N 0. - P. 197-246.
445. Ogata E., Kondo K., Kimura S., Yoshitoshi Y. Dependency on Ca++ of ATP-stimulated uncoupled oxidation of succinate in rat lier mitochondria // Biochem Biophys Res Commun. 1972. - V. 46. - N 2. - P. 640-645.
446. Ohlendorf D.H., Barbarash G.R., Trout A., et al. Lipid and polypeptide components of the crystalline yolk system from Xenopus laevis // J Biol Chem. -1977. -V. 252. -N22. P. 7992-8001.
447. Ojala D., Attardi G. Expression of the mitochondrial genome in HeLa cells. XIX. Occurrence in mitochondria of polyadenylic acid sequences, "free" and covalently linked to mitochondrial DNA-coded RNA // J Mol Biol. 1974. - V. 82.-N2.-P. 151-174.
448. Okada G., Sawai Y., Teraoka H., Tsukada K. Differential effects of di-methylsulfoxide on S-adenosylmethionine synthetase from rat liver and hepatoma // FEBS Lett. 1979. - V. 106. - N 1. - P. 25-28.
449. Oliveira M.T., Da Rosa A.C., Azeredo-Espin A.M., Lessinger A.C. Improving access to the control region and tRNA gene clusters of dipteran mitochondrial DNA // J Med Entomol. 2006. - V. 43. - N 3. - P. 636-639.
450. Oliveira M.T., Azeredo-Espin A.M., Lessinger A.C. The mitochondrial DNA control region of Muscidae flies: evolution and structural conservation in a dipteran context // J Mol Evol. 2007. - V. 64. - N 5. - P. 519-527.
451. Oliveira M.T., Kaguni L.S. Comparative purification strategies for Drosophila and human mitochondrial DNA replication proteins: DNA polymerase gamma and mitochondrial single-stranded DNA-binding protein // Methods Mol Biol. 2009. - V. 554. - P. 37-58.
452. Oliveira M.T., Garesse R., Kaguni L.S. Animal models of mitochondrial DNA transactions in disease and ageing // Exp Gerontol. 2010. - V. 45. - N 7-8.-P. 489-502.
453. Paget G.E. Experimental Studies of the Toxicity of Atromid with Particular Reference to Fine Structural Changes in the Livers of Rodents // J Athero-scler Res. 1963. -V. 3. - P. 729-736.
454. Palmiter R.D. Magnesium precipitation of ribonucleoprotein complexes. Expedient techniques for the isolation of undergraded polysomes and messenger ribonucleic acid // Biochemistry. 1974. - V. 13. - N 17. - P. 3606-3615.
455. Palmiter R.D., Brinster R.L., Hammer R.E., et al. Dramatic growth of mice that develop from eggs microinjected with metallothionein-growth hormone fusion genes // Nature. 1982. - V. 300. -N 5893. - P. 611-615.
456. Palmiter R.D., Sandgren E.P., Avarbock M.R., et al. Heterologous in-trons can enhance expression of transgenes in mice // Proc Natl Acad Sci U S A. -1991. V. 88. - N 2. - P. 478^182.
457. Panyim S., Ohno T., Jost J.P. In vitro RNA synthesis and expression of vitellogenin gene in isolated chicken liver nuclei // Nucleic Acids Res. 1978. - V. 5.-N4.-P. 1353-1370.
458. Papa S. Role of cooperative H(+)/e(-) linkage (redox bohr effect) at heme a/Cu(A) and heme a(3)/Cu(B) in the proton pump of cytochrome c oxidase // Biochemistry (Mosc). 2005. - V. 70. - N 2. - P. 178-186.
459. Parrish S., Fleenor J., Xu S., et al. Functional anatomy of a dsRNA trigger: differential requirement for the two trigger strands in RNA interference // Mol Cell. 2000. - V. 6. - N 5. - P. 1077-1087.
460. Pawlowski P.J. Effect of 5-bromodeoxyuridine on the appearance of cytoplasmic poly-A containing RNA // J Cell Physiol. 1976. - V. 89. - N 1. - P. 19-27.
461. Pearce J., Balnave D. The effects of estradiol administration of the hepatic activities of some enzymes of carbohydrate, amino acid and lipid metabolism in the immature pullet // Horm Metab Res. 1976. - V. 8. - N 3. - P. 181-183.
462. Perry M.M. A complete culture system for the chick embryo // Nature.- 1988. V. 331. -N 6151. -P. 70-72.
463. Perry R.P., Errera M. The role of the nucleolus in ribonucleic acid-and protein synthesis. I. Incorporation of cytidine into normal and nucleolar inactivated HeLa cells // Biochim Biophys Acta. 1961. - V. 49. - P. 47-57.
464. Perry R.P., Kelley D.E. Inhibition of RNA synthesis by actinomycin D: characteristic dose-response of different RNA species // J Cell Physiol. 1970. -V. 76.-N2.-P. 127-139.
465. Peschon J.J., Behringer R.R., Brinster R.L., Palmiter R.D. Spermatid-specific expression of protamine 1 in transgenic mice // Proc Natl Acad Sci USA.- 1987. -V. 84. -N 15. -P. 5316-5319.
466. Petitte J.N., Clark M.E., Liu G., et al. Production of somatic and germline chimeras in the chicken by transfer of early blastodermal cells // Development.- 1990. V. 108.-N l.-P. 185-189.
467. Petropoulos C.J., Payne W., Salter D.W., Hughes S.H. Appropriate in vivo expression of a muscle-specific promoter by using avian retroviral vectors for gene transfer // J Virol. 1992. - V. 66. - N 6. - P. 3391-3397.
468. Pette D., Klingenberg M., Buecher T. Comparable and specific proportions in the mitochondrial enzyme activity pattern // Biochem Biophys Res Commun. 1962. - V. 7. - P. 425-429.
469. Pletjushkina O.Y., Lyamzaev K.G., Popova E.N., et al. Effect of oxidative stress on dynamics of mitochondrial reticulum // Biochim Biophys Acta. -2006.-V. 1757.-N 5-6.-P. 518-524.
470. Pollak J.K., Woog M. Changes in the proportions of two mitochondrial populations during the development of embryonic chick liver // Biochem J. 1971. -V. 123.-N3.-P. 347-353.
471. Pollak J.K. The maturation of the inner membrane of foetal rat liver mitochondria // Biochem J. 1975. - V. 150. - N 3. - P. 477^188.
472. Porcellati G., Biasion M.G., Arienti G. The incorporation of phos-phorylethanolamine into the phospholipids of brain microsomes in vitro // Lipids. -1970. V. 5. - N 9. - P. 725-733.
473. Price P.M. The effect of 5-bromodeoxyuridine on messenger RNA production in cultured cells // Biochim Biophys Acta. 1976. - V. 447. - N 3. - P. 304-311.
474. Pursel V.G., Campbell R.G., Miller K.F., et al. Growth potential of transgenic pigs expressing a bovine growth hormone gene // Anim. Sci. 1988. -V. 66.-P. 267.
475. Pursel V.G., Pinkert C.A., Miller K.F., et al. Genetic engineering of livestock// Science. 1989. -V. 244. -N 4910. - P. 1281-1288.
476. Pursel V.G., Miller K.F., Bolt D.J., et al. Insertion of growth hormone genes into pig embryos // Biotechnology in growth regulation. / Editors: R.B. Heap, C.G. Prosser, G.E. Lamming. London: Butterworths, 1989. - P. 181-188.
477. Pursel V.G., Bolt D.J., Miller K.F., et al. Expression and performance in transgenic pigs // J Reprod Fertil Suppl. 1990. - V. 40. - P. 235-245.
478. Raw I., Rockwell P. A protein-bound form of thioacetamide in liver nucleoli // Biochem Biophys Res Commun. 1979. - V. 90. - N 3. - P. 721-725.
479. Raynaud-Jammet C., Catelli M.G., Baulieu E.E. Inhibition by alpha-amanitin of the oestradiol-induced increase in alpha-amanitin insensitive RNA polymerase in immature rat uterus // FEBS Lett. 1972. - V. 22. - N 1. - P. 93-96.
480. Retel J., Planta RJ. Nuclear satellite DNAs of yeast // Biochim Biophys Acta. 1972. -V. 281. -N 3. - P. 299-309.
481. Rexroad C.E., Jr., Hammer R.E., Behringer R.R., et al. Insertion, expression and physiology of growth-regulating genes in ruminants // J Reprod Fertil Suppl. 1990.-V. 41.-P. 119-124.
482. Rieth A., Pothier F., Sirard M.A. Electroporation of bovine spermatozoa to carry DNA containing highly repetitive sequences into oocytes and detection of homologous recombination events // Mol Reprod Dev. 2000. - V. 57. - N 4.-P. 338-345.
483. Ritossa F., Malva C., Boncinelli E., et al. The first steps of magnification of DNA complementary to ribosomal RNA in Drosophila malanogaster // Proc Natl Acad Sci U S A. 1971. - V. 68. - N 7. - P. 1580-1584.
484. Ritossa F.M., Atwood K.C., Lindsley D.L., Spiegelman S. On the chromosomal distribution of DNA complementary to ribosomal and soluble RNA // Natl Cancer Inst Monogr. 1966. - V. 23. - P. 449^172.
485. Ro-Choi T.S., Raj N.B., Pike L.M., Busch H. Effects of alpha-amanitin, cycloheximide, and thioacetamide on low molecular weight nuclear RNA // Biochemistry. 1976. -V. 15. -N 17. - P. 3823-3828.
486. Robertson E., Bradley A., Kuehn M., Evans M. Germ-line transmission of genes introduced into cultured pluripotential cells by retroviral vector // Nature.- 1986. -V. 323. -N 6087. P. 445-448.
487. Roeder R.G., Rutter W.J. Multiple forms of DNA-dependent RNA polymerase in eukaryotic organisms // Nature. 1969. - V. 224. - N 5216. - P. 234237.
488. Roeder R.G., Rutter W.J. Specific nucleolar and nucleoplasmic RNA polymerases // Proc Natl Acad Sci USA.- 1970. V. 65. - N 3. - P. 675-682.
489. Roskam W.G., Gruber M., Ab G. Estradiol-induced synthesis of vitellogenin. II. Immunochemical characterization of vitellogenin polysomes // Bio-chim Biophys Acta. 1976. - V. 435. - N 1. - P. 91-94.
490. Rotig A. Genetic bases of mitochondrial respiratory chain disorders // Diabetes Metab. 2010. - V. 36. - N 2. - P. 97-107.
491. Rotskaya U.N., Rogozin I.B., Vasyunina E.A., et al. High frequency of somatic mutations in rat liver mitochondrial DNA // Mutat Res. 2010. - V. 685.- N 1-2. P. 97-102.
492. Rottmann O.J., Stratowa C., Hornstein M., Hughes J. Tissue specific expression of hepatitis B surface antigen in mice following liposome—mediated gene transfer into blastocysts // Zentralbl Veterinarmed A. 1985. - V. 32. - N 9. -P. 676-682.
493. Rowlett K., Simkiss K. Explanted embryo culture: in vivo and in ovo techniques for domestic fowl // Br Poult Sci. 1987. - V. 28. - P. 91-101.
494. Royer C., Jalabert A., Da Rocha M., et al. Biosynthesis and cocoon-export of a recombinant globular protein in transgenic silkworms // Transgenic Res. 2005. - V. 14. - N 4. - P. 463-472.
495. Rubenstein J.L., Nicolas J.F., Jacob F. Introduction of genes into pre-implantation mouse embryos by use of a defective recombinant retrovirus // Proc Natl Acad Sci USA.- 1986. V. 83. - N 2. - P. 366-368.
496. Rubin G.M., Sulston J.E. Physical linkage of the 5 S cistrons to the 18 S and 28 S ribosomal RNA cistrons in Saccharomyces cerevisiae // J Mol Biol. -1973. V. 79. - N 3. - P. 521-530.
497. Ruiz-Pesini E., Wallace D.C. Evidence for adaptive selection acting on the tRNA and rRNA genes of human mitochondrial DNA // Hum Mutat. 2006. -V. 27.-N 11.-P. 1072-1081.
498. Ryffel G.U., Wahli W., Weber R. Quantitation of vitellogenin messenger RNA in the liver of male Xenopus toads during primary and secondary stimulation by estrogen // Cell. 1977. - V. 11. - N 1. - P. 213-221.
499. Ryffel G.U. Synthesis of vitellogenin, an attractive model for investigating hormone-induced gene activation // Mol Cell Endocrinol. 1978. - V. 12. -N3.-P. 237-246.
500. Salter D.W., Smith E.J., Hughes S.H., et al. Gene insertion into the chicken germ line by retroviruses // Poult Sci. 1986. - V. 65. - N 8. - P. 14451458.
501. Salter D.W., Crittenden L.B. Chickens transgenic for a defective recombinant avian leukosis proviral insert express subgroup A envelope glycoprotein //Poult Sci Suppl. 1987. -V. 66. -N 1. - P. 170.
502. Salter D.W., Smith E.J., Hughes S.H., et al. Transgenic chickens: insertion of retroviral genes into the chicken germ line // Virology. 1987. - V. 157. -Nl.-P. 236-240.
503. Salter D.W., Crittenden L.B. Gene insertion into the avian germ line // Brit. soc. Anim. Product. 1988. -N 12. - P. 32-57.
504. Salter D.W., Crittenden L.B. Artifical insertion of a dominant gene for resistance to avian leukosis virus into the germ line of the chicken // Theor. and Appl. Genetics. 1989. -V. 77. - P. 457-461.
505. Sang H. Prospects for transgenesis in the chick // Mech Dev. 2004. -V. 121.-N9.-P. 1179-1186.
506. Sarkar B.C., Chauhan U.P. A new method for determining micro quantities of calcium in biological materials // Anal Biochem. 1967. - V. 20. - N 1. -P. 155-166.
507. Satav J.G., Rajwade M.S., Katyare S.S., et al. The significance of pro-mitochondrial structures in rat liver for mitochondrial biogenesis // Biochem J. -1973. V. 134. - N 3. - P. 687-695.
508. Sawa D., Page N., Vick L., Simkiss K. Detection of foreign DNA in transgenic chicken embryos using the polymerase chain reaction // Res Vet Sci. -1991. V. 50. - N 2. - P. 131-133.
509. Sawai Y., Kitahara N., Thung W.L., et al. Nuclear location of ribonu-clease H and increased level of magnesium-dependent ribonuclease H in rat liver on thioacetamide treatment // J Biochem. 1981. - V. 90. - N 1. - P. 11-16.
510. Schatz G. The biogenesis of mitochondria // Biochem J. 1970. - V. 116.-N4.-P. 8P.
511. Schiller C.M., Taylor W.M., Halperin M.L. Control of fatty acid synthesis in white adipose tissue by insulin: coordination between the mitochondrial citrate transporter and pyruvate dehydrogenase // Can J Biochem. 1974. - V. 52. -N10.-P. 814-821.
512. Schuster S.M., Olson M.S. Studies of the energy-dependent uptake of divalent metal ions by beef heart mitochondria // J Biol Chem. 1974. - V. 249. -N22.-P. 7151-7158.
513. Seifart K.H., Benecke B.J., Juhasz P.P. Multiple RNA polymerase species from rat liver tissue: possible existence of a cytoplasmic enzyme // Arch Biochem Biophys. 1972.-V. 151.-N2.-P. 519-532.
514. Sesterhenn T.M., Slaven B.E., Keely S.P., et al. Sequence and structure of the linear mitochondrial genome of Pneumocystis carinii // Mol Genet Genomics. 2010. - V. 283. - N 1. - P. 63-72.
515. Shapiro D.J., Baker H.J. Purification and characterization of Xenopus laevis vitellogenin messenger RNA // J Biol Chem. 1977. - V. 252. - N 15. - P. 5244-5250.
516. Sharonov G.V., Feofanov A.V., Bocharova O.V., et al. Comparative analysis of proapoptotic activity of cytochrome c mutants in living cells // Apop-tosis. 2005. - V. 10. - N 4. - P. 797-808.
517. Shemesh M., Gurevich M., Harel-Markowitz E., et al. Gene integration into bovine sperm genome and its expression in transgenic offspring // Mol Reprod Dev. 2000. - V. 56. - N S2. - P. 306-308.
518. Shen J., Platek M., Mahasneh A., et al. Mitochondrial copy number and risk of breast cancer: a pilot study // Mitochondrion. 2010. - V. 10. - N 1. - P. 62-68.
519. Simons J.P., McClenaghan M., Clark A.J. Alteration of the quality of milk by expression of sheep beta- lactoglobulin in transgenic mice // Nature. -1987. V. 328. - N 6130. - P. 530-532.
520. Sjostrand F.S. A method to improve contrast in high resolution electron microscopy of ultrathin tissue sections // Exp Cell Res. 1956. - V. 10. - N 3. - P. 657-664.
521. Skulachev V.P., Bakeeva L.E., Chernyak B.V., et al. Thread-grain transition of mitochondrial reticulum as a step of mitoptosis and apoptosis // Mol Cell Biochem. -2004. -V. 256-257. -N 1-2. P. 341-358.
522. Skulachev V.P., Longo V.D. Aging as a mitochondria-mediated atavistic program: can aging be switched off? // Ann N Y Acad Sci. 2005. - V. 1057. -P. 145-164.
523. Skulachev V.P. Bioenergetic aspects of apoptosis, necrosis and mitoptosis // Apoptosis. 2006. - V. 11. - N 4. - P. 473-485.
524. Smith R.G., Schwartz R.J. Isolation and purification of a hen nuclear oestrogen receptor and its effect on transcription of chick chromatin // Biochem J. 1979. - V. 184.-N 2.-P. 331-343.
525. Smoly J.M., Kuylenstierna B., Ernster L. Topological and functional organization of the mitochondrion // Proc Natl Acad Sci USA.- 1970. V. 66. -Nl.-P. 125-131.
526. Snow L.D., Eriksson H., Hardin J.W., et al. Nuclear estrogen receptor in the avian liver: correlation with biologic response // J Steroid Biochem. 1978. -V.9.-N ll.-P. 1017-1026.
527. Soeiro R., Vaughan M.H., Darnell J.E. The effect of puromycin on intranuclear steps in ribosome biosynthesis // J Cell Biol. 1968. - V. 36. - N 1. - P. 91-101.
528. Soriano P., Cone R.D., Mulligan R.C., Jaenisch R. Tissue-specific and ectopic expression of genes introduced into transgenic mice by retroviruses // Science. 1986. -V. 234. -N 4782. - P. 1409-1413.
529. Soto I.C., Fontanesi F., Valledor M., et al. Synthesis of cytochrome c oxidase subunit 1 is translationally downregulated in the absence of functional FIFO-ATP synthase // Biochim Biophys Acta. 2009. - V. 1793. - N 11. - P. 1776-1786.
530. Sottocasa G., Sandri G., Panfili E., et al. Isolation of a soluble Ca 2+ binding glycoprotein from ox liver mitochondria // Biochem Biophys Res Commun. 1972. - V. 47. - N 4. - P. 808-813.
531. Spadafora C. Sperm-mediated 'reverse' gene transfer: a role of reverse transcriptase in the generation of new genetic information // Hum Reprod. 2008. -V. 23.-N4.-P. 735-740.
532. Staeheli P., Pravtcheva D., Lundin L.G., et al. Interferon-regulated influenza virus resistance gene Mx is localized on mouse chromosome 16 // J Virol. 1986. - V. 58. - N 3. - P. 967-969.
533. Staeheli P., Haller O., Boll W., et al. Mx protein: constitutive expression in 3T3 cells transformed with cloned Mx cDNA confers selective resistance to influenza virus //Cell. 1986.- V. 44.-N l.-P. 147-158.
534. Staeheli P., Danielson P., Haller O., Sutcliffe J.G. Transcriptional activation of the mouse Mx gene by type I interferon // Mol Cell Biol. 1986. - V. 6. -N12.-P. 4770-4774.
535. Steele W.J., Okamura N., Busch H. Effects of Thioacetamide on the Composition and Biosynthesis of Nucleolar and Nuclear Ribonucleic Acid in Rat Liver // J Biol Chem. 1965. - V. 240. - P. 1742-1749.
536. Stephens R.J., Bils R.F. Ultrastructural changes in the developing chick liver. I. General cytology // J Ultrastruct Res. 1967. - V. 18. - N 3. - P. 456^174.
537. Stewart C.L., Vanek M., Wagner E.F. Expression of foreign genes from retroviral vectors in mouse teratocarcinoma chimaeras // EMBO J. 1985. - V. 4. -N13B.-P. 3701-3709.
538. Stolf A.M., DAbronzo F.H., Wang L., et al. Selection of albumin mRNA by thioacetamide // Biochem Biophys Res Commun. 1976. - V. 72. - N4.-P. 1576-1584.
539. Stoyanova B.B., Hadjiolov A.A. Alterations in the processing of rat-liver ribosomal RNA caused by cycloheximide inhibition of protein synthesis // Eur J Biochem. 1979. - V. 96. - N 2. - P. 349-356.
540. Strehler B.L., Chang M.P., Johnson L.K. Loss of hybridizable ribosomal DNA from human post-mitotic tissues during aging: I. Age-dependent loss in human myocardium // Mech Ageing Dev. 1979. - V. 11. - N 5-6. - P. 371378.
541. Strom C.M., Dorfman A. Distribution of 5-bromodeoxyuridine and thymidine in the DNA of developing chick cartilage // Proc Natl Acad Sci US A.-1976. V. 73. - N 4. - P. 1019-1023.
542. Suissa S., Wang Z., Poole J., et al. Ancient mtDNA genetic variants modulate mtDNA transcription and replication // PLoS Genet. 2009. - V. 5. - N5.-P. 101-110.
543. Swick R.W., Eiermann R.A., Rexroth A.K., et al. The distribution of mitochondrial enzymes in rat liver after various treatments, in liver from other species, and in rat heart. ANL-7409 // ANL Rep. 1967. - P. 57-60.
544. Swick R.W., Stange J.L., Nance S.L., Thomson J.F. The heterogeneous distribution of mitochondrial enzymes in normal rat liver // Biochemistry. 1967. -V. 6.-N3.-P. 737-744.
545. Szczesny R.J., Borowski L.S., Brzezniak L.K., et al. Human mitochondrial RNA turnover caught in flagranti: involvement of hSuv3p helicase in RNA surveillance // Nucleic Acids Res. 2010. - V. 38. - N 1. - P. 279-298.
546. Tabak H.F., Borst P. Erroneous transcription of mitochondrial DNA by RNA polymerase from Escherichia coli // Biochim Biophys Acta. 1970. - V. 217.-N2.-P. 356-364.
547. Taborsky G. Interaction between phosvitin and iron and its effect on a rearrangement of phosvitin structure // Biochemistry. 1963. - V. 2. - P. 266-271.
548. Tashmukhamedov B.A., Gagelgans A.I., Mamatkulov K., Makhmu-dova E.M. Inhibition of Ca(2+) transport in mitochondria by selective blockade of membrane mucopolysaccharides by hexamine cobaltichloride // FEBS Lett. -1972. V. 28. - N 2. - P. 239-242.
549. Tixier M., Claude J. A simple and rapid technic for triglyceride determination. // Ann Biol Clin (Paris). 1974. - V. 32. - N 1. - P. 53-57.
550. Tower D.B. Ouabain and the distribution of calcium and magnesium in cerebral tissues in vitro // Exp Brain Res. 1968. - V. 6. - N 4. - P. 273-283.
551. Tuppen H.A., Blakely E.L., Turnbull D.M., Taylor R.W. Mitochondrial DNA mutations and human disease // Biochim Biophys Acta. 2010. - V. 1797. -N2.-P. 113-128.
552. Tzagoloff A., Meagher P. Assesmbly of the mitochondrial membrane system. VI. Mitochondrial synthesis of subunit proteins of the rutamycin-sensitive adenosine triphosphatase // J Biol Chem. 1972. - V. 247. - N 2. - P. 594-603.
553. Valdez L.B., Zaobornyj T., Boveris A. Mitochondrial metabolic states and membrane potential modulate mtNOS activity // Biochim Biophys Acta. -2006.-V. 1757.-N3.-P. 166-172.
554. Vaughan M.H., Jr., Soeiro R., Warner J.R., Darnell J.E., Jr. The effects of methionine deprivation on ribosome synthesis in HeLa cells // Proc Natl Acad Sci USA.- 1967. V. 58.-N4.-P. 1527-1534.
555. Villalobos J.G., Jr., Steele W.J., Busch H. Effects of Thioacetamide on Labeling of Ribonucleic Acid of Isolated Nucleoli in Vitro // Biochim Biophys Acta. 1964. -V. 91. - P. 233-238.
556. Wachsmuth E.D., Jost J.P. Localization of vitellogenin and serum albumin in hepatic parenchymal cells of normal and estradiol-treated immature chickens // Biochim Biophys Acta. 1976. - V. 437. - N 2. - P. 454-461.
557. Wagner E.F., Stewart T.A., Mintz B. The human beta-globin gene and a functional viral thymidine kinase gene in developing mice // Proc Natl Acad Sci U S A. 1981. - V. 78. - N 8. - P. 5016-5020.
558. Wagner E.F., Covarrubias L., Stewart T.A., Mintz B. Prenatal lethalities in mice homozygous for human growth hormone gene sequences integrated in the germ line // Cell. 1983. - V. 35. - N 3 Pt 2. - P. 647-655.
559. Wagner T.E., Hoppe P.C., Jollick J.D., et al. Microinjection of a rabbit beta-globin gene into zygotes and its subsequent expression in adult mice and their offspring // Proc Natl Acad Sci U S A. 1981. - V. 78. - N 10. - P. 6376-6380.
560. Wahli W., Dawid I.B., Wyler T., et al. Comparative analysis of the structural organization of two closely related vitellogenin genes in X. laevis // Cell. 1980. - V. 20. - N 1. - P. 107-117.
561. Wallace D.C. Animal models for mitochondrial disease // Methods Mol Biol. 2002. - V. 197. - P. 3-54.
562. Wallace D.C. Mitochondria and cancer: Warburg addressed // Cold Spring Harb Symp Quant Biol. 2005. - V. 70. - P. 363-374.
563. Wallace D.C. The mitochondrial genome in human adaptive radiation and disease: on the road to therapeutics and performance enhancement // Gene. -2005.-V. 354.-P. 169-180.
564. Wallace D.C. A mitochondrial paradigm of metabolic and degenerative diseases, aging, and cancer: a dawn for evolutionary medicine // Annu Rev Genet. 2005. - V. 39. - P. 359^407.
565. Wallace D.C. Why do we still have a maternally inherited mitochondrial DNA? Insights from evolutionary medicine // Annu Rev Biochem. 2007. -V. 76.-P. 781-821.
566. Wallace D.C., Fan W. The pathophysiology of mitochondrial disease as modeled in the mouse // Genes Dev. 2009. - V. 23. - N 15. - P. 1714-1736.
567. Wallace D.C., Fan W. Energetics, epigenetics, mitochondrial genetics // Mitochondrion.-2010.-V. 10. -N 1. -P. 12-31.
568. Wang S.Y., Williams D.L. Identificiation, purification, and characterization of two distinct avian vitellogenins // Biochemistry. 1980. - V. 19. - N 8. -P. 1557-1563.
569. Wang S.Y., Williams D.L. Biosynthesis of the vitellogenins. Identification and characterization of nonphosphorylated precursors to avian vitellogenin I and vitellogenin II // J Biol Chem. 1982. - V. 257. - N 7. - P. 3837-3846.
570. Webster N.L., Forni M., Bacci M.L., et al. Multi-transgenic pigs expressing three fluorescent proteins produced with high efficiency by sperm mediated gene transfer // Mol Reprod Dev. 2005. - V. 72. - N 1. - P. 68-76.
571. Weckler C., Gschwendt M. The effect of estradiol on the activity of the nucleolar and nucleoplasmic RNA polymerases from chicken liver // FEBS Lett. -1976. V. 65. - N 2. - P. 220-224.
572. Weinberg R.A., Loening U., Willems M., Penman S. Acrylamide gel electrophoresis of HeLa cell nucleolar RNA // Proc Natl Acad Sci USA.- 1967. -V. 58.-N3.-P. 1088-1095.
573. Weinmann R., Roeder R.G. Role of DNA-dependent RNA polymerase 3 in the transcription of the tRNA and 5S RNA genes // Proc Natl Acad Sci USA. 1974. -V. 71. -N 5. -P. 1790-1794.
574. Weiss J.W., Pitot H.C. Inhibition of ribosomal RNA maturation in No-vikoff hepatoma cells by toyocamycin, tubercidin, and 6-thioguanosine // Cancer Res. 1974. -V. 34. -N3. - P. 581-587.
575. Wellauer P.K., Dawid I.B. Secondary structure maps of RNA: processing of HeLa ribosomal RNA // Proc Natl Acad Sci USA.- 1973. V. 70. - N 10. -P. 2827-2831.
576. Wicker T., Robertson J.S., Schulze S.R., et al. The repetitive landscape of the chicken genome //Genome Res.-2005.-V. 15.-N l.-P. 126-136.
577. Wieringa B., Mulder J., van der Ende A., et al. Purification of vitellogenin mRNA and serum albumin mRNA from avian liver by preparative gel electrophoresis // Eur J Biochem. 1978. - V. 89. - N 1. - P. 67-79.
578. Wiley H.S., Wallace R.A. Three different molecular weight forms of the vitellogenin peptide from Xenopus laevis // Biochem Biophys Res Commun. -1978.-V. 85.-N l.-P. 153-159.
579. Wiley H.S., Wallace R.A. The structure of vitellogenin. Multiple vitellogenins in Xenopus laevis give rise to multiple forms of the yolk proteins // J Biol Chem.-1981.-V. 256.-N 16.-P. 8626-8634.
580. Willems M., Penman M., Penman S. The regulation of RNA synthesis and processing in the nucleolus during inhibition of protein synthesis // J Cell Biol. 1969. -V. 41.-N1.-P. 177-187.
581. Williams D.L., Wang S.Y., Klett H. Decrease in functional albumin mRNA during estrogen-induced vitellogenin biosynthesis in avian liver // Proc Natl Acad Sci USA.- 1978. -V. 75. -N 12. P. 5974-5978.
582. Williams D.L. Apoproteins of avian very low density lipoprotein: demonstration of a single high molecular weight apoprotein // Biochemistry. 1979. -V. 18.-N6.-P. 1056-1063.
583. Wilmut I., Archibald A.L., Harris S., et al. Modification of milk composition // J Reprod Fertil Suppl. 1990. - V. 41. - P. 135-146.
584. Yazawa R., Hirono I., Aoki T. Transgenic zebrafish expressing chicken lysozyme show resistance against bacterial diseases // Transgenic Res. 2006. - V. 15.-N3.-P. 385-391.
585. Yehuda-Shnaidman E., Kalderon B., Azazmeh N., Bar-Tana J. Gating of the mitochondrial permeability transition pore by thyroid hormone // FASEB J. -2010. -V. 24. -N 1. P. 93-104.
586. Zhu L., van de Lavoir M.C., Albanese J., et al. Production of human monoclonal antibody in eggs of chimeric chickens // Nat Biotechnol. 2005. - V. 23.-N9.-P. 1159-1169.
587. Zoraqi G., Spadafora C. Integration of foreign DNA sequences into mouse sperm genome // DNA Cell Biol. 1997. - V. 16. - N 3. - P. 291-300.иложения
588. Живая масса перепелов опытной и контрольной групп (19-30 поколения)1. Опыт с? $
589. Возраст 1 сут. 1 нед. 7 нед. 20 нед. 1 сут. 1 нед. 7 нед. 20 нед.1. Поколение 19
590. М 8,47 26,58 150,06 166,82 8,40 27,54 189,66 203,00ш 0,07 0,94 2,39 2,37 0,08 0,94 3,46 3,30п 37 37 36 33 32 32 29 251. Поколение 20
591. М 9,00 26,88 147,96 156,90 9,13 32,58 186,56 197,88ш 0,09 1,19 1,84 1,79 0,10 1,37 2,61 3,25п 51 51 49 42 49 49 45 331. Поколение 21
592. М 8,83 24,18 149,47 162,45 8,79 24,95 180,87 209,39ш 0,08 0,72 1,57 1,60 0,09 0,84 3,18 3,63п 58 58 57 47 52 52 52 331. Поколение 22
593. М 9,04 28,88 145,54 163,91 9,00 27,61 183,78 203,65
594. ГП 0,08 1,22 1,33 2,67 0,08 1,38 2,51 4,65п 37 37 37 23 37 37 37 261. Поколение 23
595. М 9,17 26,31 147,14 163,18 9,27 26,19 186,92 197,91ш 0,09 1,00 1,47 2,60 0,07 0,82 2,29 2,78п 35 35 35 22 61 61 60 431. Поколение 24
596. М 9,10 29,58 146,20 155,95 8,99 29,89 186,75 212,22ш 0,07 1,16 1,71 3,69 0,10 1,54 3,02 3,97п 25 25 25 21 20 20 20 181. Поколение 25
597. М 9,01 25,46 148,44 159,13 8,89 26,68 191,33 208,86ш 0,11 1,16 2,20 2,47 0,09 1,19 2,89 3,65п 32 32 32 23 30 30 30 221. Опыт с? 9
598. Возраст 1 сут. 1 нед. 7 нед. 20 нед. 1 сут. 1 нед. 7 нед. 20 нед.1. Поколение 26
599. М 9,13 23,74 143,91 153,18 9,10 25,22 187,73 215,00т 0,11 0,52 2,31 1,21 0,13 0,71 3,84 3,42п 33 33 32 22 26 26 26 221. Поколение 27
600. М 8,99 23,95 146,86 153,59 8,93 26,11 187,22 209,83т 0,11 0,51 1,44 1,61 0,12 0,68 2,92 2,60п 44 44 43 32 37 37 36 301. Поколение 28
601. М 9,29 24,15 144,50 148,86 9,22 24,05 188,78 205,00ш 0,08 0,76 2,09 2,87 0,07 0,50 2,59 3,27п 31 31 30 22 43 43 41 351. Поколение 29
602. М 9,02 23,78 144,52 151,54 9,18 24,22 187,08 205,00ш 0,08 0,58 1,89 1,70 0,07 0,58 2,83 2,69п 31 31 31 26 36 36 36 321. Поколение 30
603. М 9,11 23,10 145,15 155,78 9,26 23,82 182,71 198,64т 0,10 0,49 1,24 1,57 0,11 0,48 4,48 2,76п 34 34 34 32 24 24 24 22
604. В среднем по всем поколениям
605. М 8,99 25,45 146,90 158,00 9,02 26,60 186,40 204,88т 0,03 0,28 0,53 0,67 0,03 0,31 0,87 1,00п 449 449 441 345 447 447 436 3411. Конт роль в 9
606. Возраст 1 сут. 1 нед. 7 нед. 20 нед. 1 сут. 1 нед. 7 нед. 20 нед.1. Поколение 19
607. М 7,08 24,18 136,67 153,27 7,23 24,67 163,59 194,02ш 0,13 0,80 3,16 2,74 0,06 0,58 3,18 2,45п 27 27 27 26 46 46 46 411. Поколение 20
608. М 7,54 22,91 135,37 151,11 7,80 26,25 169,12 193,53ш 0,08 0,58 2,43 1,91 0,08 0,67 5,31 4,08п 27 27 27 27 17 17 17 171. Поколение 21
609. М в,19 23,89 144,33 162,00 7,57 26,99 178,57 194,82ш 0,08 0,95 3,96 3,68 0,08 0,50 2,25 2,97п 15 15 15 15 28 28 28 281. Поколение 22
610. М 7,70 26,30 136,15 154,42 7,26 29,51 170,45 185,91ш 0,11 0,55 1,50 2,29 0,19 0,64 4,93 3,74п 26 26 26 26 11 И 11 111. Поколение 23
611. М 7,24 18,42 142,50 153,75 7,41 20,82 176,39 196,52ш 0,08 0,54 1,40 1,79 0,06 0,44 2,93 2,74п 34 34 34 28 36 36 36 331. Поколение 24
612. М 7,79 22,88 141,54 151,82 7,64 25,44 173,72 194,85ш 0,10 0,77 1,48 1,53 0,10 0,72 3,10 2,47п 52 52 52 44 43 43 43 331. Поколение 25
613. М 7,34 23,08 148,38 158,89 7,51 23,80 174,10 196,00ш 0,07 0,69 1,67 2,41 0,08 0,47 2,42 3,32п 34 34 34 18 39 39 39 251. Конт ЮЛЬ с? ?
614. Возраст 1 сут. 1 нед. 7 нед. 20 нед. 1 сут. 1 нед. 7 нед. 20 нед.1. Поколение 26
615. М 7,30 22,12 141,35 158,00 7,42 21,66 167,18 189,73ш 0,07 0,45 1,38 1,65 0,07 0,32 2,28 2,50п 48 48 48 45 39 39 39 371. Поколение 27
616. М 7,52 21,81 141,58 151,47 7,47 20,39 175,69 195,38ш 0,08 0,43 1,53 2,05 0,08 0,57 3,88 3,19п 19 19 19 17 29 29 29 261. Поколение 28
617. М 7,48 25,58 147,50 163,82 7,32 24,35 184,35 198,70ш 0,10 0,70 2,47 1,94 0,07 0,45 2,45 3,91п 18 18 18 17 31 31 31 271. Поколение 29
618. М 7,03 19,10 143,85 158,40 7,14 18,41 174,56 197,22ш 0,06 0,86 1,78 2,56 0,06 0,59 2,20 3,21п 26 26 26 25 34 34 34 271. Поколение 30
619. М 7,64 21,69 155,50 153,95 7,39 21,25 171,82 179,55ш 0,08 0,87 1,59 2,49 0,09 1,05 3,54 2,75п 26 26 26 25 22 22 22 22
620. В среднем по всем поколениям
621. М 7,41 22,47 142,65 155,38 7,42 23,25 173,15 193,58ш 0,02 0,22 0,57 0,86 0,03 0,08 0,87 0,88п 352 352 352 313 375 375 375 327
622. Средняя масса яиц перепелок опытной и контрольной групп разных поколений по месяцам продуктивности, г
623. Поколение Месяц продуктивности1 2 3 4 5 6 7 8 9 101. Опытная группа
624. М 11,77 12,01 12,20 11,96 11,61 11,70 12,17 12,06 12,08 12,34ш 0,47 0,29 0,25 0,31 0,34 0,32 0,41 0,42 0,46 0,53п 5 5 5 5 5 4 4 4 3 2
625. М 12,65 12,54 12,50 12,36 12,42 12,42 12,56 12,54 12,46 12,35ш 0,14 0,14 0,10 0,12 0,15 0,21 0,21 0,25 0,28 0,23п 21 21 21 19 17 15 15 14 12 9
626. М 11,86 12,32 12,36 12,59 12,50 12,54 12,62 12,33 12,26 12,20ш 0,16 0,11 0,12 0,10 0,09 0,13 0,14 0,14 0,16 0,18п 31 31 31 27 27 26 25 20 18 14
627. М 10,93 11,73 12,26 12,31 12,37 12,38 12,32 12,38 12,32 12,33ш 0,20 0,19 0,16 0,16 0,16 0,17 0,17 0,18 0,19 0,20п 27 27 27 26 26 26 25 23 22 20
628. М 10,60 11,53 12,01 12,24 12,30 12,35 12,27 12,32 12,17 12,02ш 0,11 0,13 0,15 0,14 0,17 0,18 0,19 0,19 0,19 0,20п 46 46 46 42 37 33 29 27 26 25
629. М 10,69 11,88 12,15 12,38 12,48 12,48 12,50 12,32 12,09 12,15ш 0,15 0,17 0,19 0,20 0,19 0,18 0,20 0,21 0,21 0,18п 20 20 20 19 19 18 16 14 14 15
630. М 10,96 11,81 12,29 12,58 12,77 12,64 12,58 12,48 12,51 12,35ш 0,13 0,20 0,23 0,20 0,20 0,20 0,18 0,19 0,21 0,22п 23 23 23 22 22 20 20 19 17 15
631. М 11,09 12,14 12,63 12,71 12,81 13,00 13,00 12,75 12,63 12,46ш 0,21 0,20 0,20 0,22 0,23 0,17 0,20 0,18 0,28 0,23п 24 24 24 24 22 20 20 17 14 14
632. М 10,91 11,96 12,39 12,53 12,48 12,54 12,51 12,31 12,68 12,51ш 0,20 0,16 0,18 0,18 0,18 0,18 0,17 0,18 0,24 0,24п 29 29 29 29 28 28 25 26 20 16
633. М 11,43 12,21 12,65 12,88 12,92 12,85 12,67 12,65 12,85 12,71ш 0,14 0,13 0,13 0,13 0,14 0,14 0,16 0,16 0,20 0,22п 35 35 35 32 30 25 22 20 17 17
634. Поколение Месяц продуктивности1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
635. М 11,74 12,39 12,78 12,75 12,89 13,56 12,90 12,88 12,81 12,91ш 0,13 0,10 0,11 0,11 0,13 0,60 0,17 0,17 0,19 0,13п 34 34 34 33 30 26 23 21 19 17
636. М 11,37 12,35 12,81 12,82 12,92 12,99 12,97 12,69 12,63 12,49ш 0,14 0,16 0,17 0,20 0,18 0,21 0,21 0,22 0,22 0,25п 22 22 22 22 22 21 21 19 18 16
637. В среднем М 11,3 12,1 12,4 12,5 12,6 12,7 12,6 12,5 12,5 12,4ш 0,16 0,15 0,16 0,16 0,17 0,22 0,18 0,19 0,21 0,21п 317 317 317 300 285 262 245 224 200 1801. Контрольная группа
638. М 10,45 10,77 10,88 10,80 10,95 10,91 10,92 10,72 10,68 10,74ш 0,15 0,28 0,26 0,29 0,21 0,32 0,34 0,23 0,25 0,27п 7 7 7 6 5 5 5 4 4 4
639. М 10,43 11,26 11,66 11,55 11,58 11,44 11,40 11,35 11,48 11,32ш 0,21 0,12 0,16 0,18 0,18 0,16 0,19 0,24 0,25 0,26п 10 10 10 10 10 10 9 9 9 9
640. М 10,30 10,71 11,32 11,38 11,23 11,33 11,64 11,29 11,26 11,25ш 0,19 0,15 0,19 0,19 0,18 0,22 0,45 0,18 0,07 0,12п 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4
641. М 9,90 10,82 11,30 10,90 11,02 10,90 11,14 11,04 10,67 11,01ш 0,14 0,13 0,16 0,18 0,19 0,18 0,24 0,17 0,16 0,18п 13 13 13 13 13 13 13 13 12 12
642. М 9,57 10,81 10,88 11,19 11,48 11,35 10,99 10,95 10,96 10,97ш 0,16 0,13 0,13 0,14 0,15 0,15 0,16 0,18 0,16 0,16п 14 14 14 14 14 14 14 14 13 12
643. М 10,79 11,23 11,22 11,09 11,17 11,24 11,31 11,12 10,80 10,72ш 0,20 0,12 0,12 0,15 0,14 0,15 0,15 0,16 0,21 0,21п 14 14 14 14 14 14 14 14 13 13
644. В среднем М 10,20 10,97 11,20 11,14 11,27 11,20 11,20 11,08 10,95 10,98ш 0,17 0,14 0,16 0,18 0,17 0,17 0,21 0,18 0,19 0,20п 62 62 62 61 60 60 59 58 55 54
645. Среднее количество яиц перепелок опытной и контрольной групп разных поколений по месяцам продуктивности, шт.
646. Поколение Месяц продуктивности1 2 3 4 5 6 7 8 9 101. Опытная группа
647. М 23,40 22,00 24,20 25,60 18,60 24,00 21,75 21,00 20,33 17,50ш 2,11 3,44 1,93 2,04 3,20 2,12 3,68 6,01 5,70 2,50п 5 5 5 5 5 4 4 4 3 2
648. М 24,86 23,76 20,52 23,16 19,76 21,47 20,13 15,50 15,17 17,56ш 0,97 0,97 1Д4 1Д7 1,46 2,09 1,97 1,65 2,49 2,65п 21 21 21 19 17 15 15 14 12 9
649. М 23,94 24,65 25,19 25,93 23,00 22,15 20,12 21,15 19,78 18,29ш 1,03 0,84 0,73 0,87 1,07 1,23 1,50 1,69 2,10 2,15п 31 31 31 27 27 26 25 20 18 14
650. М 17,67 25,93 25,15 23,81 24,85 24,88 20,96 23,78 20,50 20,35ш 1,32 0,70 0,95 1,18 0,90 1,19 1,77 1,28 2,03 1,93п 27 27 27 26 26 26 25 23 22 20
651. М 17,37 24,85 24,57 23,19 24,76 24,58 24,28 23,15 21,73 20,96ш 0,99 0,61 0,95 0,93 0,72 0,86 0,94 1,02 1,42 1,48п 46 46 46 42 37 33 29 27 26 25
652. М 18,55 26,30 24,55 25,37 25,21 23,67 17,94 19,64 19,93 19,60ш 2,02 0,60 1,08 0,69 0,78 1,37 1,63 1,42 1,67 1,92п 20 20 20 19 19 18 16 14 14 15
653. М 14,13 22,74 21,96 23,45 21,00 20,75 20,40 20,11 16,41 18,53ш 1,71 1,52 1,56 1,62 1,76 1,79 1,49 2,01 2,31 1,91п 23 23 23 22 22 20 20 19 17 15
654. М 14,17 24,92 24,08 21,00 23,18 23,60 22,30 17,24 20,21 19,14ш 1,71 0,61 0,88 1,55 1,28 0,96 1,31 2,13 1,82 2,06п 24 24 24 24 22 20 20 17 14 14
655. М 14,52 24,97 26,07 25,28 22,29 22,54 21,32 19,85 20,80 21,44ш 1,67 0,75 0,43 0,79 1,09 1,27 1,39 1,53 1,61 1,23п 29 29 29 29 28 28 25 26 20 16
656. М 18,29 24,43 24,43 23,41 23,03 23,72 23,23 20,95 24,18 21,71ш 1,45 0,94 0,76 0,99 1,08 1,02 1,13 1,43 1,09 1,49п 35 35 35 32 30 25 22 20 17 17
657. Поколение Месяц продуктивности1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
658. М 18,65 25,76 25,38 23,15 23,30 22,31 20,96 20,57 21,37 17,53ш 1,47 0,54 0,72 1,03 1,09 1,07 1,30 1,72 1,49 1,57п 34 34 34 33 30 26 23 21 19 17
659. М 17,73 26,14 25,41 25,41 24,41 24,24 24,43 25,16 23,17 18,81ш 1,21 0,59 0,80 0,82 1,25 1,28 1,19 0,55 1,22 2,13п 22 22 22 22 22 21 21 19 18 16
660. В среднем М 18,2 24,9 24,4 23,9 23,2 23,2 21,6 20,9 20,5 19,6ш 1,39 0,81 0,9 1,06 1,14 1,25 1,43 1,55 1,78 1,81п 317 317 317 300 285 262 245 224 200 1801. Контрольная группа
661. М 19,57 18,79 20,36 17,58 24,20 24,30 23,20 25,63 21,38 19,38.ш 4,19 2,08 2,65 3,54 2,18 3,13 2,46 2,38 3,18 4,04п 7 7 7 6 5 5 5 4 4 4
662. М 10,60 21,60 22,15 22,65 23,05 21,00 19,56 21,50 19,94 20,33ш 0,89 1,79 2,53 2,03 2,06 1,92 2,38 2,12 1,36 1,86п 10 10 10 10 10 10 9 9 9 9
663. М 21,63 27,25 25,13 25,63 20,63 20,75 16,50 14,63 15,13 12,00ш 0,52 0,60 1,14 2,54 4,42 4,40 3,23 3,23 2,70 2,68п 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4
664. М 7,92 23,88 26,88 24,19 23,88 20,23 21,38 19,19 16,96 17,10ш 1,00 1,48 1,06 1,40 1,71 1,54 1,74 1,81 1,61 1,58п 13 13 13 13 13 13 13 13 12 12
665. М 4,68 23,00 22,86 21,39 22,36 22,29 20,46 19,71 17,65 18,13ш 0,74 1,70 1,23 1,76 1,64 1,88 1,77 1,98 2,26 2,38п 14 14 14 14 14 14 14 14 13 12
666. М 20,54 25,79 25,21 25,86 24,71 23,43 23,96 17,07 19,92 20,04ш 1,11 1,45 1,24 1,10 0,76 1,31 1,28 1,24 1,26 1,59п 14 14 14 14 14 14 14 14 13 13
667. В среднем М 13,54 25,00 25,64 24,75 25,06 23,53 22,87 20,72 19,95 19,83ш 1,28 1,59 1,56 1,80 1,75 1,95 1,90 1,90 1,83 2,07п 62 62 62 61 60 60 59 58 55 54
668. Средняя яйцемасса опытной и контрольной групп перепелок разных поколений по месяцам продуктивности, г
669. Поколение Месяц продуктивности1 2 3 4 5 6 7 8 9 101. Опытная группа
670. М 277,94 264,30 296,24 305,98 214,12 278,78 264,63 253,83 245,87 217,20ш 32,81 42,31 26,91 25,36 36,17 17,95 44,73 73,02 69,35 40,10п 5 5 5 5 5 4 4 4 3 2
671. М 313,44 297,51 256,24 286,45 244,11 266,97 251,93 195,44 186,96 215,74т 11,65 12,12 14,16 14,55 17,47 26,05 24,97 22,14 29,32 31,73п 21 21 21 19 17 15 15 14 12 9
672. М 286,60 303,18 312,83 326,96 288,16 278,45 253,98 263,06 244,32 222,44т 14,02 10,26 10,60 11,76 13,87 16,12 19,29 21,94 26,65 25,96п 31 31 31 27 27 26 25 20 18 14
673. М 197,30 304,19 306,66 293,30 305,77 307,22 257,81 292,12 250,28 250,41ш 17,57 9,44 11,13 15,27 10,35 14,69 21,99 15,10 24,46 24,26п 27 27 27 26 26 26 25 23 22 20
674. М 186,23 287,04 293,32 283,23 303,15 301,14 296,50 283,15 263,57 253,20т 11,32 7,92 11,48 11,32 8,55 9,71 11,38 11,72 17,57 18,37п 46 46 46 42 37 33 29 27 26 25
675. М 197,96 312,52 298,52 313,94 314,17 294,82 221,31 240,19 242,26 238,75т 21,76 8,57 13,74 9,76 10,53 17,14 18,50 16,25 21,18 23,61п 20 20 20 19 19 18 16 14 14 15
676. М 157,11 268,97 273,56 295,17 266,70 262,29 256,66 249,48 206,19 230,05т 19,46 19,00 21,11 20,79 22,23 23,48 19,10 24,82 30,11 24,51п 23 23 23 22 22 20 20 19 17 15
677. М 160,45 302,05 303,82 266,96 297,48 305,99 289,74 219,97 258,32 239,21т 20,41 8,30 11,74 20,26 17,70 12,55 17,54 27,10 24,26 26,47п 24 24 24 24 22 20 20 17 14 14
678. М 164,28 298,91 323,19 317,14 278,70 285,27 268,48 245,84 262,83 267,41т 20,34 9,99 7,41 11,01 14,38 17,56 17,92 19,78 20,69 15,24п 29 29 29 29 28 28 25 26 20 16
679. М 211,41 297,26 308,43 301,24 296,30 303,97 294,99 265,17 310,26 274,42т 17,22 11,39 9,84 13,00 13,21 12,94 14,58 18,02 15,03 17,91п 35 35 35 32 30 25 22 20 17 17
680. М 221,85 319,79 323,85 295,28 300,61 293,35 272,40 265,94 275,38 227,62т 18,27 7,66 9,16 13,54 14,61 12,68 18,01 22,57 19,96 20,96п 34 34 34 33 30 26 23 21 19 17
681. Поколение Месяц продуктивности1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
682. М 202,07 322,64 324,43 324,92 314,10 313,21 314,59 318,09 290,93 232,90т 13,92 8,21 9,73 10,84 15,91 16,48 14,73 5,95 14,07 26,09п 22 22 22 22 22 21 21 19 18 16
683. В среднем М 209,2 300,0 303,5 299,7 291,8 292,9 272,5 261,4 256,3 243,0т 16,82 10,54 11,72 13,81 14,4 15,66 18,11 19,31 22,42 22,71п 317 317 317 300 285 262 245 224 200 1801. Контрольная группа
684. М 202,07 200,94 219,61 188,88 263,68 261,48 250,90 274,74 226,59 208,06т 41,75 20,72 26,61 37,83 21,29 30,03 23,69 26,68 30,34 42,66п 7 7 7 6 5 5 5 4 4 4
685. М 111,52 243,20 257,31 259,93 265,83 238,72 220,51 242,56 228,41 230,02т 10,45 20,25 29,03 22,06 23,01 20,44 25,77 23,09 15,57 21,38п 10 10 10 10 10 10 9 9 9 9
686. М 222,69 291,99 284,06 291,51 231,95 236,24 195,50 165,75 170,76 134,75ш 7,11 8,58 11,52 28,74 49,26 50,37 44,77 37,13 31,16 29,64п 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4
687. М 78,26 259,25 304,18 264,43 265,09 221,04 237,78 212,44 181,80 188,27т 9,96 17,31 13,34 16,49 21,14 17,86 19,58 20,90 18,25 18,02п 13 13 13 13 13 13 13 13 12 12
688. М 45,76 249,06 254,89 274,98 256,26 299,67 224,70 221,63 191,77 197,48т 7,52 19,09 15,25 44,82 18,79 55,10 19,43 19,19 24,33 25,64п 14,00 14,00 14,00 14,00 14,00 14,00 14,00 14,00 13,00 12,00
689. М 222,10 335,54 282,06 285,70 275,56 262,56 269,74 188,55 213,70 213,06т 13,48 51,36 13,54 11,65 7,95 14,50 13,65 12,76 12,03 15,91п 14 14 14 14 14 14 14 14 13 13
690. В среднем М 141,17 285,54 288,25 283,96 282,07 274,72 255,17 230,54 217,60 216,81т 13,69 25,70 17,73 25,70 19,71 29,38 21,14 20,38 19,60 22,45п 62 62 62 61 60 60 59 58 55 54
691. Итого за 10 месяцев продуктивности
692. Опытная группа 2749,4 г 111% р < 0,001
693. Контрольная группа 2481,6 г 100%титрование антигенаэритроциты1. V ч г > а > г *1. С • л * . & Л4 ■ Д> '^^жлМ *•ч V ■> у Слф^/Я ^ Э / f1. Г . Гпроверкараббчегог разведения антигена2 1 0,5 0,25г ч Г4 2 1 и/д.^ 1Г ^
-
Коршунова, Людмила Георгиевна
-
доктора биологических наук
-
Москва, 2012
-
ВАК 06.02.07
- ЭФФЕКТИВНОСТЬ ГЕНЕТИЧЕСКОЙ ТРАНСФОРМАЦИИ СОМАТИЧЕСКИХ И ЭМБРИОНАЛЬНЫХ КЛЕТОК ЖИВОТНЫХ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ РАЗЛИЧНЫХ ТИПОВ КЛЕТОК-«УПАКОВЩИЦ»
- Изучение рецепторно-опосредуемого трансгенеза в клетки эмбрионов млекопитающихся доимплатационных стадий развития и анализ ДНК трансгенных животных
- Эффективность генетической трансформации соматических и эмбриональных клеток животных с использованием различных типов клеток-"упаковщиц"
- Получение и характеристика трансгенных мышей с генами гемопоэтических факторов человека (Г-КСФ и ГМ-КСФ) под контролем 5`-регуляторной области гена α-S1-казеина козы
- Эффективность использования ретровирусных векторов для генетической трансформации клеток яйцевода кур in vivo
