Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

ТОКОФЕРОЛСИНТЕЗИРУЮШИЕ МИКРООРГАНИЗМЫ ПИЩЕВАРИТЕЛЬНОГО ТРАКТА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННОЙ ПТИЦЫ

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "ТОКОФЕРОЛСИНТЕЗИРУЮШИЕ МИКРООРГАНИЗМЫ ПИЩЕВАРИТЕЛЬНОГО ТРАКТА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННОЙ ПТИЦЫ"

Л-&9876

ВСЕСОЮЗНЫЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЖИВОТНОВОДСТВА (ВИЖ)

На правах рукописи УДК 636.5:612.32:577*161*3

Хуаяева Елена Николаевна

ТОКОФЕРОЛСИНТЕЗИРУЮШИЕ МИКРООРГАНИЗМ ПИЩЕВАРИТЕЛЬНОГО ТРАКТА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННОЙ ПТИЦЫ

03,00.13 — Физиология человека и животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени ханвддата биологических наук

п. Дубровицы Московской области 1991

Рабата выполнена > лаборатории микробиологии Всесоюзного ордена Трудового Лрйсного' Знаиенп научно-исс гедоватезьского института животноводства. '

Научный руководитель - доктор биологических наук, профессор -- - ' И.Г. шшк.

Сбишагьные опподантн: доктор биологических наук

5.В. ТАРАКАНОВ,

. кандидат биологически наук A.A. ЧШН.

Зедутее учреадвнае - ВсесэщгеЛ научно-исс,ie довате льсшР. институт незеразнза болезнзЗ животных.

Зазита диссертации состоится ^Vtlp&lQ. Х991 г. на заседания Спегааладироваккого Совета ¿.02C.I5.C2 при Ьсесссзнсм ордена Трудового красного Знамени' научно-исстедозательекем -кн- ' стктутв тиьотновсдства.

Адрес института: I42CI2, Дубровки, Подольского района, Московской .области

С даееертапнеЯ ыотаз ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат.рммгая г.

TeeкнЯ секретарь специализированного Совета, гаадиддт биояопгисюд иаук

и.я^ггыгш ;

■ .... ' - 3 - .' - '. ^ ' і. сзд.зд хар/;-сг£рют/ка !

Лкт;'і^косуь Позуиениа биологически ектиьных. гсг.еств

ьитодом мі кро С с о логического син те-за в настоящее Ерэыя интенсивно " игс.гідуаїся учеші:.« как ь н&тей страна, гак и за руСехом. Здесь зьяо-йїнк поэм о шості; 'получения препаратов д,і.я при-

менения в различных областях народного хоэяйс тва. Достсу.ис??? использования микроорганизмез з качестве источников Сис."гсг;:чесяи - активных верств с с стоит* в тем, ч?о сни обладают больней скороогы: размножения и способностью роста на дешевых источниках лцгания

■ ':/Г.и.Схрі;бии,: 1979,' А.В.Л вагонові 1985; Т. , 1937;

^Л^г , 1987/.

Одзия из за т.ных источников микроорганизмов - продажентез ' биолэгичееки активных веществ являемся микрофлора пкцезйриге^ьно-. го тракта сельскохозяйственных квотных И ПТИЦЫ. иэзестно, 'ГГО

к^крэорганиэма пищеварительного тракта '«явотных и птиізд синтези-

• *

руят битамины группы 3, Сиотин, витамин л и бета-каротин -. /В.З.Зракин, І97С; Лог.енько, Д.Г.Гоголадэе, 1970; Л.А.Вабин,

■ 1971;.К.Г.Пивняк, 1976,І9Є2; Е.З.Драгунсза, 1989/. В отношении

■ синтеза микроорганизмами пищеварительного тракта токссерота имеются. ограниченные с гедония. И.Г.Ливнях и А.Н.Попов /І98ЄИ установили способность ¡микроорганизмов рубца крупного рогатого скота синтеэирозать гик&^ролы. А.П.Зарубина с сотр. /1909/ определили, что витамин 2 синтезируется культурой /г^лг - пролу-

■ центом локипептидного антибиотика грамицидина.

Экспериментального обоснования существования бактерий* образующих токо^эроя в пищеварительном тракте моногастрячннх хивоткшс и ;лтицч, не имэотся.

Цвіль'и •задячк исследований. Целью иссве

Л - ШХ.

и«г>. сдал

еанр (бьалсс устднозтіДСЗ.

шя. -Сл'/.Т

__

яение способности бактерий отоварительного тракта пгиц синтезировать токоферол. .

В задачу исследований рходило: ~ - выделение иэ 'составаминрофдорыпищеварительного тракта атяц тскофералсянтезирущих бактерий;

- идентификашя гожоферо лсиктеэирующкх бактерий;

- изученио активности бактерий, синтезирующих токоферол при различных условиях культивирования;

- идентифякашя токоферолов, образуемых бактериями пгацева-рительиогэ тракта птиц;

- определенна возиоаности приживления токоферолсинтезирунгадас бактерий в лкщвварятеяъноы тракта' птицы.

Заучаая новизна. Шервда были получены данные о способности бактерий же.туд очко-кишечного тракта птиц синтезировать токоферол. Установлена взаимосвязь.меж^ синтезом бактериями токоферола и каротина. Выталзна способность бактерий к синтезу токоферола в анаэробных условиях культивирования.

Научное• и ттг-актическое значение работы. Полученные данные о синтезе токоферола бактериями пищеварительного тракта птис рас-.крывеэт ранее несзвестнув роль микрофгоры :квдудочно-килечного "тракта з обеспечении организма витамином 2,

' Выделенные токо^еролсинтезирукеие бактерии лицеварительного тракта атипы : в перспективе могут быть ислояьэовада дея полу-"чвяаяаробяотячвсктапрепаратов.

•"у Апробадяя работы. Цате риалы диссертации доношены: * т -: - на научт« кон$ерендаях молодых ученых к аспирантов Ш£а '/196?.'1990/;"";. • '

наУченомСоветв ВКХаа отчете лаборатории микробиологии

/1990/; . . • •

- ка научно" кок* ренгак-отдела кормления сельскохозяйственна:: -квотных /І99С/. ; 1 —

Объс.-л работ». Диссертация из л оте на на 127 страницах мазмно-аисного ге кета, содержит.18 таблиц, 18 рисунков, 3 графика. Список исаодьзован-ізЯ литературы Бкцгчаег 203 наміре я ■звання, в том ' чиск 82 на инэстранних языках. '

2. .siATSFKAX :; «ЩТОДУ иоолщоаАН>д '

Ь'аг-ериалом'дья лучения служили: михроергаяизмы, выделенные га содержимого лии.« верительного тракта птип» "

Микроорганизмы иг состава нереальной микрої>лорн выделяли." в лггга:* лэриод с 20 мгя по 20 уюня 1938 г. от шалят2-3-х ыесячного возраста. Рацион олытнчх цыилчт состоял из / % /: кукуруза -20; псе ница - 20; ячмень - 17; срот соевый - 7,5; дронта уормо-

выэ - 3; мука рыбная - 6; ракушки - 1,5; молоке сухое обезттрен-

і ■ -

ное - 5; преняткс - І..З зимний период с I по 20 февраля.1989 г. микроорганизмы изолировали из помета ютлет 2-ІЄ-тк .днєеного возраста. Цылчят кормили ввояк вареники рубленными яйцами и шпоном. . В лзт:*иа. период ваделекие производилось из содержимого зоба, т-лудка, тонкого и толстого отделов кишэчника при убое хвалят.

Всего в опытах из; содержимого пжцеварііте сьного тракта птий было выделено 100 итаммов бактерий. Выделение бактерий проводили катодами аэробного культивирования, согласно "^етодрческим рекомендациям по изучению.микрофлора пищеварительного тракта.сельскохозяйственных животных" /1979/. Первоначальным признаком отбора культур, выросших на ША в чашках, слузшло шгментообраговагош колоний от светло ГЙЛТОГО до желтого и оранжевого пветов.

йідовув принадлежность у выделенных токоферолсинтезирующих бахтериЯопредэпяли, используя определите яь *£) у ^/І98о/, ■ работнГ.Шдегель/1907/, Н.С.Егорова /1983/, А. С. ЯабіїнскоЯ/ 1972/,, . Л.Б.Борясова /I90V, М. О.Биргера /1973/.

Дій опредэления у выделенных бактерий способности сингеэиро- -яать токофзроаы их культивировали на жидких и плотных средах» не сода ржащихвит амин Е сяедутацвго- состава: глюкоза - 20 г, глица-рии - 40 ыл,Уа^1Р04 - 4,0 г, ВНаР04 - 3,0 г, tigS04 х THgO'- .'-.Г ;I»C>»:- jiH^-- штрат- 2,5г, «С - дастеин.-- 0,7 г,, дроже вой ■ , автояизат- 2,0 их, вода до Г я /среда ¡9 I/; дроявг.звой гкдрзлизат 250ня^ куяуруэныЯ экстракт - 14 мл» тиамин'- 0,15» р-р - I мв, • ¡Я2Р04 - 0,5 г, Ug 504 - 0,5 г, £» So4 - 0,05 г,?е£04 - 0,05 г, И«£Э4 - 0,05 г, fflgCOO/a - I г, воды до'Г л /среда Г 2/; .лПА.

■ *-?.'- ■Тэкофврпдскнгезируицу» активность .бактерий определяли Фпуо-ряштр»*вскіш »тодом мода^игарованнын в лаборатории микробиология Ш2а-/А.Н.ГЬадов, 1983/, .Коеттостэекнов'содврчсание гояо^ерояоэ иэшряюгна слактроф»іуориі»тре^КРР--4■ч " при воине воз-. .

буждзння 290-295 ни к-флЕюрэссеншш 320-325 км. ~/,:. Ядекпфвкалип токоферодоа, образуемых бактериями пище в ари-тедікого тракта ппш» проводили методом тонкослойной хроматогра-^яя « слеетро^д1»рогра$ии /П.в,Сурай, 1^04, 1937; H.-t.Crpose, * ■ 5. It. Вэ вере» 1972; P.A., 1966; Р, & fcujfan ,.1907;

я.%. I90G/.' '.;vV-Л-

,-'■,-^ Изучение,' антогснистических -свойств культур проводили на'жид-ш ■ плотных питательных средах, исзопьзуя мэтод агаровых блокоь я этркхов /Г.5.Гауэв, 1961:- "Иїтодичєскиз указания по определении, остаточных хожчестэ антибиотиков в продуктах нивотновадства4;

Уэсква, 1983/J '■''.-..■[■. : ' : 1 . • '•' . . ..Хл:-;'.1-

Itaротинсият5 з ирутацуэ -хтквнсстъ изучаемых микроорганизмев определяли по отраСотгн.чоЯ в лабсраториимикробиологииметодике ' /"Метсдическка ре к ожидании п з изучений микройлорипикеваритепь-ного тракта сельскохозяйственных животных", Дубрсвипн, 1975/.

Пелученные результаты исследования статистически обработана лс Н. А. Пл oxki ic kcwy*V 1900/.

3. Р.23УЛЬТАТЦ !5СС71£С2ДКЖ '.

.3.1. .Зндзлениз токэферог.синтеэирумпих Сактеркй из состава мккр}*лЬры лиэдверительного 'тракта л тип.. ■ .- ■■..'' .■

. В-'летний период Сил о выдег.ено 70 кта(ллов>з:раэшчньк етде-.юэ дарительного -ранта лтне. В эииниР.'лериод из'тодегега ст-дзда кяаечника въдакено, 30 различных штаммов культур, fe ICC кс-следуемкх культур микроорганизмов - 2С образовывали трхоферзл.'-Сактерии, си э токо!«рол, обнаружены во всех\ стде пах * ^е-

яудочно-км.лечясго тракта птга /тейл.1/.

- ' ■ ■ ' Таблица I

Наделение тсхо^ролобраэутсих ку.итур из различные отделов **елудочно-ктечного тракта птиц

! Отделы ъелудэчно-ккшечкогс тракта птетт

Показатели '

I зоб W ' Всего

I ■ [ТОНКИЙ ,гоясгыЯ ]

количество выделенных, ' '

микроергашзмоз II 13 15 oí 70.

-лог.ичестэо токо^-ерояоС- ,

раэук;их дакроорганиэ- - „

моз • 5 4 3 4 ■ .16

Процент тoro-í« рол обра-

ЗУ^Х КЯИрСи-р1^НКЗК08 _ ' * ■ __. ■ ■ „ „ _.

к «ис,^' вь-дельин-вд. ■ 45,5 30,8 16,1 - 13,0 22,8

tía 70 зтаміов,-видаленнях в летний период, 22,образ о вывали тоюфероіг. Наибольший процент токофероясинтезирущих бактерий обнаружен в зобе - 31,3$* желудке - 2SJ5 к толстом отделе ютозчни-sa ~ £5,б£. Из 30-гв тгаммов, выделенных в зимний период, 13,3%

обладай тохоферохсянгезнруксцеЗ способность!).

<? ■

3.2. Определение таксономической принадлежности токофероисннтезирутадкх вахтерий г

£ихя нзуодны 10 шташсв бактерий, образующих более 0,1 мкг rí-тохо$ерола на ICO мл питательной среды с палью определения их родоз ого и видового состава. Исследоэа-;;сь морфологические, культура л ькь» я ^язколого-биохяиическке свойства. Идентіф;Коіяід культур показала, что все изучаемые отамьты хеиооргаяэтрскЬы, - е ссн^а-нсм грампояаккгелъние, каталлзло-тоеттдльмаа бактерии. Зетре"актся tarse гранс.-?лэтельные зодвигшыд бактерии.

Язученнаэ лтаммы токоверолобраэуицих бактерия были стнасекч s 3-*г таксоксинческим группам: грампэлсеттелъные кокки, ке ^Сра-чусслэ эндоспор; грачяалстытельчке яаггечки, нэ обраэуюте яндо-езэр; греыо т ригете тгьнуз я ал очки» т образуете эндоспор.

Груша рраило^;читеяьнызс кокков, на образующих эндоспоры. Выделенные зтмшы .ТР 43,33,44,42 и 56 были отнесена к pojy /2''ttoeocctfS и ? 23 К роду tococc<jj, .-' с; из poza flh'etDCcccfsS ejapa'ísciüie, встречаются поодиночке - кокки и в ларах - диплококки, а тавдда-з резуаьтате характерного деления-бою«? чем в одно Я ялосхостя образуют пакету. Неподвижны, грамлояоккгельн«е. Шолокик , разных сттеюсоэ желтого тата. Схраска из-«ет несколько меняться

зависимости.от среда и температура. Чіте для максимальная лиг- -««нтаикя.(«об-ыдии свет. Пигмента в среду не аадг^ястся. Ito тении типичнее, лелрезрачдав я полупрозрачные, гладкие, пвлъньга.

Большинство культур углеводы ферментируют слабо. Используют ор-.' ганические кисяоты и растут на синтетических средах, культуры являются факультативными анаэробами, способны расти и синтезировать токоферолы при 37°С. По морфологическим и фиэиолого-Сиохи-: мическим свойствам культура Р 26 наиболее близка в.. виду jtfeieeoce&f . Колонии на твердых средах белые* матовые*

бускнковздные. Серментируе1.? многие углеводы с образованием яислс-ты. Слабо растет на безазотистой среде Эшби и использует органические кислоты. Хуяътура Г 26 обладает очень интенсивной каталаэ» ной активностью.Растет на среде с 5 и 10Й J^eCI.

Труппа грамполежитеаьных палочек, не образу щих эндоспоры. -Выделенные штаыыы Г? 61 и . . 37 быте отнесены к роду

ytJrSe/iLc и Í 100 к р о,пу <?T¿)i>o/a с. Ót Для кузьтур Г.61 и £ 37 характерными являются грамполокительныё тподвияные папочки, 3 старых культурах морфология клеток не меняется. Колонии i.enro-эелекые, округлые! плоские с; ровнш краем, баестящ>е, гладкие. Культуры ферментируют углевода с образованием кислоты, растут при концентрации Уа& - 4%. Активно используют органические кислоты, но в то «е время плохо'растут на безазотис-; той среде Эхби и синтетических средах. Культура

•tigense. штамм Г ICO грамположительна, подвижна при - температуре 20-£5°С, а при 37°С она снижается, характеризуется образованием . V' форм в некоторой изогнутостью кэкковидкых палочек,. В мазках молодой культуры из 16-18 часовых колония короткие кскховидкда, палочки имею? тенденция образовывать цепочки из 3; 5 и более.клеток. Полонии серо-ораньевые или бледно-оранжевые, округлые, плоские, блестящие, пастообразные. Культура слабо использует органические кислоты и растет на беэазотистсй среде "

Грузла граыотрисата льныкпалочек, не образуших эндоспоры. ' Z этой груша была' отнесена неинденти^игаро ванная культура лтамм 80. Колонии:серо-іезтие, полупрозрачные, неправильной .£ормы с ,

- ревнім жраам, гладкие,- лслус лизис? ые- Характерными являістся очен шляиэ короткие палочки, с возрастом морфология клетох немэняэг си. лультура -обладает■амиполитической и протеолитиveсксй■актив-

. иэстьо. Яслользузт органические кислоты,; а:такзд^ растет на бвз-азстистоЯ среде-Э^а'ксиятзтических средах.. Проявляет умеренный рост на среде с у/аСІ.

] Еактэряиз з аэис иуости отвидозсго с ост а за ло ратному прояв "здгт своп тсхофесолсинтеэирузс^ активность. НаибэльлС синтез .. ■. тскоферсзана I - г Сиоыассы наЗдздался у хультуру рода - ' Pufrioitú-f'''tí —г уґлгпг/і ттамы Г- 51 /23,9 икг/, у рода ~ /fceiceteanr f*üitÁ*t ягами ? 44. Тор э лсинте эирутаая активчост у зтамиа ? 44 поаьтлась на' 1С0:мл питательной среда.за счет уси ■ тения накоа.тения биомассы. А у рода ловьпжнкыЯ

- сднтзз тскоферогов:обусловливается назначительнам накоплением

биомассы '/ta.ÜK.2/1 . ■

. '• . , ." ■' - - Таб-типа 2 .

: йдавой состав v синтез токо^вроза у изучаемых штаммов -

t Синтез токоферола, мят ЕЬд, номер вташоа ■ ,---------------- — -

■»■ ■" ■ ■ | 100 мх Í р биомассы.

39 " ~ S 29 ~ 1,99 .

■ /п. ео&фЛУчз 43 ; . 3,42 1,86

/П. 42 '.■'■■■■ 8,79 3,62

ил****."* 44 39,50 10,60

• УП. 56 6,58 г 4,14 .

26 3*52 2,79:

6I ; 23,10 . 26,90 , :■

I, * j37 4,96 3,33

100 ' ' 17,60. 0,81

Двщдвнтяфицировава; • 80 4,86 3,22

. 3.3.".Иэученйе активности токоферолсинтеэирукцих. бактерий ' ■ при ра- яичных условиях культивирования; 7 с ;

Синтез;битаминов явпяется лабнльнъм процессом, сильно эа-

зййяцим от состава питательных сред, условий культивирования.' ■

Исследования по определению токоферолсинтезируизей активности'; ;;

"Мучаемых бактерий'провсдаки в опытах. ¿л ^¿¿и> на гидких и'

потных питательных средах. Б результате.культивирования уста-^7

ювлено,.что изучаемые бактерии более активно накапливает бак-".,

Сериальную"биокассу .на плотно?., среде /«ПА/, чем на гидкой'пита-

1гельной.среде ?'!.' 3 то ад врекя наблюдалось достоверное увеж- :

'чекие синтеза токоферола на среде'Г-Х у культур-Я-' 42, 25 и 55 -

/табл.3/. -■. 7/ •'•• 7 7 —' " - ■"-■' -1 \ *■; "'7'■

;;; . .-'7,'', .'7 ■''■ '. - ''■' Табтапа 3 .

,'■■ . . ■ Накопление биокассы'«'токоферола на жидкой /среда Р I/ ~ и плотной /ИЛА/ питательных средах ''■ \ О;'■--7

' ".ссг.едуемые ■ У{го?_ия 7 ^¡Токоферол,/мкг/г- биоиас-

; культуры 'среда 15 I ~ "ша" " ~Гсрэдг~г"*1 !

5 _ ! 1 ■ » ■- ■ ■

7 Г 44 2,63 • 2,95- :' 3,79 3,97т

'■ -. ? 42 . ,:,; 0,81 ■ . , : 2,045* : . . 0,99. : 3,62х

■■■ Г 37 ■ 0,94 .- 2^04* ; - 0^27 , 1,С8 ',

Т 39 ■.-м.'.'.-л С,93 - 2,39„ 0^25 1,99,. -

Г 25 " С 80 •. 2 С5ХХ ■ 0 23т 3 37х

Г>61 С,86 .-'.-. • 1,51„ - • 26,90*** 4,33_

. . ■- Т 56'1—■'/ . -. 0,59 .. • 2,50х " 0,12 ' 3,33х ,■'

х - Р<С,С5; хх - Р«С,01; ххх - Р-¿0,001 '

■ ■ Изучение .способности синтеза :токоферода-минроорганазмаки, в анаэробных условиях культивирования.имеет важное значение■ Б определении функциональной рб л и бактерий в.проиессах питания.;,. Примято считать, что еСлигьтнвди представителями микрофлоры

- хг-

ляэеваритэгьного тракта яалявтся строгие и факультативные анаэробы. Изучаемые хультуру проявляли способность к росту и проду-сзрованя» тэко^еролгв в анаэробных условиях цультиэироэанкя /таб.т.4/. .■"■■-;..'

- •:.-''': . \ . • , " ' т ■* '., Таблица 4

Бактериальная биомасса н токоферояогвнез ■ бактерий а аэробных к анаэробных условиях /срзда "2/

'■■■ ...-..,■.■-.-.■■ у . _ ■ .

Ксоледуеыые| худьтуры" ^ Аэробиоз биокасса, (токоферол, г/100 мл , мет/г I » ' I Г Анаэробиоз биомасса, I тскореро л, г/100 мл ( мкг/г

9 100 . ■ Э 44 . 3 42 ■ Р 26. ? 61 ■ . ■ 5 00 2,65 I 97 , 2,53 1170 : 2^10 ■г 2183 0,89 1,61 1,43 2,32 1 85 2,47 1,44 I 14 , 1)49 0,68 1,25 ■ 1^40 2,22 1,49 хет ■1:8 1|02

Все культур« * аэробных условиях накапливали значительно бздмЕ бактериально Я биомассы /Р^0,С5; Р-:С,01/, но синтезиро-валж орежтшгаеш одинаковое количество токоферолов при аэробном в еааэробяоэв. Токоферологэнэз в.анаэробных условиях повысил-с*.» 2 рааа /Р^0,01/ у.жудьту^ы зтамы Г4 100, хотя накопление бжсмаесы скнэклссь/ Яэвшвиий синтеза токоферола а условиях анаэробиоза наблздддось у штамма ЗР 61 /Р-й0,05Л •Нееведовали синтез тою>5брола в зависимости от накопления ба*териажьноЯ биомассы при различных сроках хуяьтнвирсвания. Иякрооргализмыбокееактивнэ на кап лазают биомассу а течении ; 5-7 суток княубирозання я аоаъпяит синтез токоферола до 3,28-13,3 кжг на Гг сыроИ биомассы/табл*Е/.

Таблиаа 5*

Накопление бактериальной биомассы и синтез токоферола в зависимости о? сроков культивирования /на 100 мл ■ ггариэованноЯ среды/

йсследуемые культуры

* 55 Г 51

Сроки культизирсвакия, суток

"3 Т 5~~~"'Т"

биокас- !токо- І Сио- !тско- ! биэ- ! тско-са, г .^.ерол, , масса, .ферол, , масса, , ферзз, миг/г { г {миг/г { г | ккг/г

С, 53 С, 51 С,45

С,42 0,04 С, 65

1,75 1,32 1,23

4,СЗ 3,89 4,6С

2, ТО ІЗ,ЗС 1,93 6,03 1,76 5.2Є

" ькде.ігьтк г с коуе росин? е? ируюгю; микроорганизмов была кэучзнч спсообнпсть предуцирования ими каротинов. Взаимосвязь синтезам тскэ.1<ерг-а и каротина косгедевалась в условиях ¿л між на чидкоЯ и плотно" питательной средах. В результате проведанных исследований выясняг.осъ, что тек о'¡еро п с г.ктє - ируюгие бактерии, как правило, образовывали. каретин. Было. сСкеру-:'£н0, * что. з иолом для всех исследуемых этапов бактерий "пизеваритель-. ного тракта г.тип мс^ду синтезом токоіерола и. каротина су-

ле ст ву е тп с її о'^іі-е я ьн&я корреляция /г =..0,724, Рі 0.05/ /табл.о/.

Таблиц?. 6

Образовение каротина токаре рстсинтезирукіциїйі бактерияки

" Ийсяедаеиав Синтез' «-кефга«». _ _

культуры 1 «кг/г р мкг/1СО млі мкг/г _ ,мкгД00мл

1СС 2179 7,46 С * с * ' 2,17

26 I 52, 4 59 /К ¡ЛРЧ с-} ^ 1,60

61 3,37 ' . Є, 85.. С 32 2 16

Ї* 42 - 4 С9 ■ 17,80 3,С5 13^30

' 44' 3,04 . 11,20. 5,ґС • 15,4?

г 55 , 2 32 : 7,54' - 4,50 - - С, 03 і1 рч Л. » .

39 1,24 с- ■ V , ■ 1,85

Г 43 І Є6 - 5,30 ' Г> "о г:22

С^ссоСяссть синтеза антибиотических веществ.токофзролсиятг зяяшэши бактериями изучает на примере культура SЩц>о£&.а£е • *tw* ^яелге гтамы " IC0. Бу.тэ устгноэяено, что культура 1С обладает- аятсгзннсгя^ескоЯ акт;гз:-г;сть» с зфоким спектром действия; Синтетитеская среда была- более благоприятна для синтез? антибиотических земств.. Снижение температура хуяыкЕираеанм дэ■25° С расширяло спектр анткСиотическсй акткздасти культуры ? ICO /тай*.7/». '

• Табтапа- 7

Образование антибиотических зе~еств тояэувропсячтаэиру;:'! хулътурсЯ ¿гамм 2 ICC '

~ .'"■ 1 ГЫ-a-e-bîaie С=рли *' Тамп&ратура ку.тъси-- . сред- вкзсзаяил на спнтзгк-

■ fter-njribw------,------г4--- - " т "

■ ! • —ггл: !сиятети- ! 37O-, t 25 -

;________ _ _ J_ _ Jчвская_ _ _Т_ _ « _ ^____ _

Soaie&rs zu&zf&s - - - +

atrtt&s — ц^1 • ■ +.

/Же'а loeeG&dtT . + - - ■ + ■ + ■ J-

: Яряаечание! *** - угнетает рост тест-кудьтуры

- не угнетает реет тест-культуры

: 3.4. Идзктьфпсахйгя токоферолов, образуемых бактериями ; шще варите ль но г о тракта птии

Ж'зяхя наиболее активных штамиоз 43,39,44;6I,IC0 Саги, изучены лродуотруемые : ими ¡токоферолы. 1!д0нт;ф1!сз!Л1ю выдеякему . бактериями токоферолов проводили методом тонкослойной хромате график по значение поглощение в УФ-свете, а так*е по им

вой рвакам аывра-Энгвяя е дипирмдилои. Для разделения изомеров токофврох& в жачествв подвкшой,фазы использовали: бенэол-дацогаксандиэтшгоаый эфир /50:40:10/ и-хлороформ. Экстрагироэ* 'ж, тсяофврзд кз багтериалькзЛ биоиассудвуыя способами без

омыления микробной биомассы и с омылением'перед проведением. экстракции токо'уролов. ' ' . . ' , 7 ; -

' После раэде пения токоферолов на пластинах ."Силуфол" в хро-. матограрическов камере получали зоны, соответствующие по значе-кии ££ т-око^еро-у, Наиболее кгивное выделение ки кроСно rö ¡pi- токс^ерола'и его мзомерол достигается лра шипении баж-териалыюй. биомассы и использовании в качестве лодвитаоЯ-фазы-хлэ^о^срма. При этом сиятеэируемызбактериямитокофероякразде-яявтся на отчетливые зоны <4, и ^-токоферолов, имещие

соответственно - 0,43-0,55;0,30-0,33 и 0,17-0, 22 .В систе-■ ме бензол-цикдогексан-диэтиловый эфир разделяйся в основном тск^^рол, имеший 0,54-0,68, что соответствовало

• еС ~ тсксферотгу. После опрьюкивакияпластины свежеприготовленным раствором Эммери-Энгеля, зоны нахождения токоферолов окрахи-: вались в розов о-красный, цвет, идентичный окраске свидетеля : ; токоферола. Хроматогра^мческое исследование показало,

; что изучаемые бактерии способны синтезировать^*^-и S'-toko-Г. ферояы. Спектра возбуждения и эмиссии микробного ■ токоферола '■;'. были получены на спвкгрофлуориг/етре №Р -4 "Хитачи". Длины волн ■ .возбуждения и &МИССИИ Л - токоферола, синтеэируеного бактерия-^ ки, соответствовали токоферолу, используемого в качестве

"; стандарта и составив 295-293 И 325-328 нм. : '

: . " ' • 3.5. Изучение возмо^лости прнт-ивления токофоро^синтези- i-„■■'"- "'-"■ .рущей культуры шташ " 100 в пищеварительном тракте

•'•;• ' ' v , ЦЫПЛЯТ ■ ■ -*■■■■

Для изучения возможности приживления бактерий а шпцевари-■ тельном тракте цыплят была выбрана токоферолсилтезирувщая куль! . тура штамм Ï 100 из рода ^aJ^aYs'ii-u.<Vt , которая продуцирова- •

із анткбистичесюїе вет,аства л обладала вураяенткми куль тура л ъны-ісл оря;нахами: колония круггаз, оран?.« з ого цвета, прозрачную, б.^стгспиэ, о ровными краями, сазообетвухщнми обнаружения es в .тИЕасаритэгъпал тракте.

Схема опыта

. ! i lío .та-1 Одз^ !Яродолтжтэпьность опыта,

Гдпга : 7елэвия опыта. !^®cr"!pac?, Í------------

і „.дни ■ .лредзарі- I слитный

- - таяьньй , период

_________f__і___период __ _______

і r^r-zz-,- .?. іс зо s: ■ ге

чал .

луа~Ьгаание 10 ЗО 5 23

культуры Г ICC з д:зе 4 млсд.

1. í-э кт. ? о к/то и.

Ск-ьсм г.панил культура їггаїіч ICO лроэсд;:ли. в смеси с кокиен-космами. Посяе одноразового скару-тивания культуры ттекы " ICC ;на напучивалась в л «кіз sapHía льнем тракте сын ляг ч^эвэ -1,3 чассэ а на 1,2,3,6,Т сутки /рис.І/. У пнллдт контрольно;» гзтпла худьтура U-wt. 3taMM $ ICO не обнаруживав

"ізаестно, что кермэвые массы через пигзварите л ьгШй тракт у оа^ят лро^ддд? через 3-4 часа, а скармливаемый им индикатор аа^нсотьс перестает обнаруживаться а калэ через 6-8 часов. Токо-^р-^тсячтезирунсая культура, скармливаемая шпяятам, обнарумва--a¡tb на 7 сутки, что является доказательством ее приживления в мдудз«іо-хипмчном тракте дапяят.

3 ззреляхтиве культура атаим * 100 из рода ^tätte&e&v&srt зиде тонная мя келудачно-иизе«него тракте шдзят, как продуцент

гокзйерояамэ'ггг быть игаэяьэована дпя создания на ее основе 1 прогнатического препарата. Проведенные исследования позволяют сделать вывод о существовании в составе.нормальной микрофлоры пищеварительного трахта птиц бактерий, образуюцих токоферол. Ооіученние даяние дополняют наш знания о роли микрофлоры пнаварите яьвого тракта в процессах питання.

ШВ0Д9 ... . *"."

I; йхервае из зоба, жалудка, тонкого я толстого отделов кшэечнлка птиц выделены токоферолсиктезирувдие микроорганизмы. ,

2. Токоферолсинтеэирукцие бактерии пищеварительного тракта отец отнесены к.четырем родовым грушам микроорганизмов:

3. Максимальное количество токоферола образуется на 5-7 сутки культивирования.'Токоферолсинтезируюцие бактерии в условиях

¿п іїІзо образовывали до 39,5 мкг 4. - токоферола на 100 мл питательной среды.

4. Бактерии, выделенные из здлудэ'-то-казечного тракта птиц, способны образовывать токоферол в анаэробных условиях культивирования, - _____

5. Уетодзм тонкослойной хроматографии установлено, что то-коферолсинтезирук5іе микроорганизмы лтаеверительного тракта птиц способны образовывать сі. , $ + и & — токоферолы.

6. Установлена положительная корреляция мечуу синтезом'бактериями вС- токоферола и каротина у большинства токоферолсин-теэирукэсс микроорганизмов.'.

7. Токоферолсиктезирушая культура <?$>Л>&геІа'ілгі^гі ■ятамм " ІС0 образует антибиотические весзсгва, угнетакя^а» рост'

8. Культура «^етг^штаии Г 100 способна

приживляться в желудочно-кишечном тракте цыплят и ыохег в перспективе быть использована для получения на ее основе пробно- ' тическсго препарата. ...

I. Выделенные из лиге варите яь кого трактаптицы токоферол-синтез иругсие микроорганизмы tasare, щтамы.Т 100,

fUipteaoecvf ñtaa/js атамм Г 44, укъгеай'

Г 61 включить в коллекцию микроорганизмов лаборатории микробиологии КЗа с целью дальнейшего изучения и использования для допущения на ira основе пробиотических препаратов.

2. Отбор новых штаммов микроорганизмов для разработки на -их основе проСиотиков проводить по комплексу полезных Сиосинге-тических свойств: образование токоферола, каротина и антибиотических вецеств, а также способности к росту в анаэробных-условиях и приживление в пищеварительном тракте сельскохозяйственных, животных.

Материалы диссертации опубликованы » следующих работах:.

1. Худяева E.H. Микроорганизмы пищеварительного тракта пгішь! - продуценты токоферолов // Передовой научно-производственный опыт в птицеводстве, рекомендуемый для внедрения / . Экспресс информация. - Загорск, 1989. - С. 47-49. .

2. Худяева E.H. Выделение токоферолсинтезирующих бактерій из пиоеверительного тракта птиц // Тезисы докладов 14 областной научно-практической конференции молодых ученых и специалистов сельского хозяйства. / Вклад молодых .ученых в интенсификации

: сельского хозяйства. - Куйбышев, 199О. — С. 74-75.

- 3, Пивняк И.Г., Хуциева Е.Н. Синтез токоферолов микроорганизмам и пищеварительного тракта сельскохозяйственной птицы // Тезисы докладов Всесоюзной конференции / Микробиологические основы интенсификации растени-евоцстаа в хормопронэаоцства, — Алма-Ата, 1990. — С.59*

Подписано к печати 15.02.1991 г. Заказ 64С.

Тираж 100 экз. Объем 0,8 уч.-изц. л

ПМП ВИЖа