Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Термическая и рН-инактивация тканевого тромбопластина

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Термическая и рН-инактивация тканевого тромбопластина"

Государственный комитет Российской Федерации

по высшему образованию

Казанский государственный университет им. В.И. Ульянова-Ленина

рг6 од

На правах рукописи

- 8 окт 1996

СВИНТЕНОК ГАЛИНА ЮРЬЕВНА

УДК 577.157.2:542.978.

Термическая и рН-инактивация тканевого тромбопластина

03.00.04 — биохимия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Казань 1996 г.

Работа выполнена в Казанском государственном медицинском уь верситете

Научный руководитель — академик АН РТ,

доктор медицинских наук, профессор Д.М. Зубаиров

Официальные оппоненты — доктор биологических наук,

Ведущее учреждение — Казанская государственная медицине« академия последипломного образования

нии Диссертационного Совета К 053.29.19 при Казанском государственн университете им. В.И. Ульянова-Ленина, 420008 г. Казань, ул. Ленина, li

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Казанского го< дарственного университета.

профессор Б.М. Куриненко доктор медицинских наук

старший научный сотрудник Л.Г. Попова

Защита состоится

JJ.»о/аи^ц 1996 г в/у

часов на засе;

Автореферат разослан

Ученый секретарь Диссертационного Совета, кандидат биологических наук, доц(

.Н. Аскарова

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Свертывание крови — это сложный эментативный процесс, в котором условно выделяют внешний и внут-[ний пути образования тромбина. Критерием для подобного подразделе-I служит источник липопротеидов, участвующих в свертывании крови, "внешнем" пути источником липопротеидов является не кровь, а иные, :шние по отношению к крови мембраны клеток тканей (из которых они нспортируются в кровь или кровь проникает к ним). Во "внутреннем" ■и источником липопротеидов служит сама кровь и ее форменные эле-

1ты.

Тканевой тромбопластин является инициальным фактором свертыва-1 крови по главному "внешнему" пути, в котором участвуют фактор VII :оны кальция (Зубаиров Д.М. и др., 1991; Mann K.G. 1995).

До последнего десятилетия изучение механизма свертывания крови о главным образом по пути исследования плазменных белков, уча-ующих в этом процессе. Изучение тканевого тромбопластина при этом [ти не проводилось, и лишь недавно исследователи обратили внимание него (Neverson Y., Бышевский А.Ш. и др., 1993).

Известно, что развитие синдрома диссеминированного внутрисосудис-о свертывания крови, обуславливается в подавляющем большинстве ■чаев усиленным инициированием геиокоагуляционных превращений невым тромбопластином, который проникает в кровоток в количествах, вышающих физиологические (Баркаган З.С. 1988; Зубаиров Д.М. 1965; "dway R.M. 1966). Это может происходить при многих заболеваниях личной природы— сердечно-сосудистых (Зубаиров Д.М. и др., 1981), рекционных (Макацария А.Д. и др., 19ВЗ), хирургических, акушерских, екологических (Кулаков В.И. и др., 1982), терапевтических (Грицкж I. 1987; Люсов В.А. и др., 1976), злокачественных опухолях, шоке рбино Д.Д. и др.1985; Шустер X. и др., 1981; Oehler G. е.а., 1987), ожо-(Балуда В.П. 1981), посттрансфузионных осложнениях (Горбунова H.A. Л).

Для дальнейшего развития теории гемокоагуляции и практичес гемостазиологии важно более детальное изучение физико-химичес свойств тканевого тромбопластина, как важнейшего компонента процс свертывания крови и реагента, широко используемого в лаборатор практике.

Цель исследования. Целью настоящей работы было из; ние некоторых физико-химических свойств тканевого тромбопластин условий, влияющих на сохранность его препаратов, используемых шир в медицинской и лабораторной практике.

Задачи исследования:

1. Исследовать термолабильность тканевого тромбопластина.

2. Исследовать роль перекисного окисления липидов в процессе мической инактивации тканевого тромбопластина.

3. Изучить влияние антиоксиданта на термолабильность ткане] тромбопластина.

4. Изучить рН-стабильносгь тканевого тромбопластина.

5. Изыскать пути увеличения стабильности препарата ткане: тромбопластина.

Научная новизна

• Произведен кинетический анализ процесса термической инакт ции тканевого тромбопластина.

• Установлена роль перекисного окисления липидов в процессе мической инактивации тканевого тромбопластина.

• Изучена инактивация тканевого тромбопластина под дейсп изменений рН среды.

• Обнаружено увеличение стабильности препарата тромбоплас под влиянием антиоксиданта ионола.

Научно-практическая значимость. Применение тетического антиоксиданта — ионола, в процессе выделения препа тканевого тромбопластина, позволяет получить термоустойчивый преп

высокой биологической, гемокоагуляционной активностью, которая со->аняется на протяжении длительного времени.

Положения, выносимые на защиту:

. Кинетика термической инактивации тканевого тромбопластина ха-1ктеризует ее как сложный процесс, не укладывающийся в характеристи-i реакций I или II порядка. .

• Биологическая активность препарата тканевого тромбопластина гщественно зависит от интенсивности перекисного окисления его липид-эго компонента.

. Биологическая активность тканевого тромбопластина зависит от -I среды.

Апробация работы. Результаты исследований доложены и осуждены на Втором Всероссийском съезде гематологов и трансфузиоло->в (г.Челябинск, 1986).

Публикации по теме диссертации. По материалам 1ссертации опубликовано 8 работ, из них 4 — в центральной периоди-:ской печати.

Структура диссертации. Диссертация изложена на 102 странице ма-инописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания етодов и результатов исследования, обсуждения и »ыводов. Список лите-1туры содержит 119 источников. Работа проиллюстрирована 12 рисунка-и и 28 таблицами.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

В представляемой работе физико-химические свойства тканевого юмбопластина изучали на препаратах тканевого тромбопластина, из мозга юлика, (полученных по методу Tiess H.A. 1957) и мозга человека Саунасское предприятие бакпрепаратов).

Готовили три образца препарата тканевого тромбопластина: 1 образец эепарата тканевого тромбопластина только на последнем этапе выделения Зрабатывался ионолом в ацетоне (3 мг/мл) в течение 1 часа. 2 образец

тканевого тромбопластина в процессе получения обрабатывался ацетон! содержащим 0,3 % ионола. 3 образец — контрольный. Суспензию тром пластина готовили из расчета 10 мг/мл.

В качестве субстрата использовали лиофилизированную оксалатн бычью плазму крови, содержащую 9,23 мкмоль/л фибриногена, а в честве источника факторов VII и X — лиофилизированную сыворотку ловека, которую смешивали с 0,1 М раствором оксалата натрия в othoi нии 9:1.

Тромбопластиновое время определяли по методу (Koller F. е.а., 19. с нашей модификацией.

Для суждения о перекисном окислении липидов в суспензиях тка вого тромбопластина, инкубированных в атмосфере воздуха или азот; процессе термической инактивации при 100 °С в течение 20 минут, оп деляли содержание диеновых конъюгатов (Стальная И.Д.,1977), гидропе кисей липидов (Романова JI.A. и др., 1977) и малонового диальдеп (Стальная И.Д, и др., 1977).

Суммарная фосфолипидная фракция из препарата тканевого тром пластина была получена по методу (Pitlick F.A. е.а.,1976). Содержа! кальция в препарате тканевого тромбопластина и в суммарной фосфо пидной фракции определяли на атомно-абсорбционном спектрофотоме "Flarno-4" (Carl Zeiss, Jena, Германия).

Содержание свободных аминокислот в препарате тканевого тром пластина определяли на аминокислотном анализаторе ААА-881 (Чех!-после осаждения белков 3% раствором сульфосалициловой кислоты.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Исследование процесса термической инактивации тканевого тром пластина начали с анализа скорости инактивации суспензии тромбоплас на при температурах от 0 0 до 100 0 С . При температурах от 0 0 до 40 инактивация при кратковременной инкубации в пределах 1 часа не наб.

зется. Динамика инактивации при температурах от 60 0 до 100 °С на воз-/хе представлена на рис. 1.

« 8

0 О „

1 $ 5

|р8 ,

5 г- 1

О 5 =

X Й °

133

я

ю

20

30

40

50

60

время в мин.

Рис. 1. Динамика тепловой инактивгции тканевого тромбопластина. Активность тканевого тромбопластина выражена в % остаточной тромбопластической активности. 1 — при температуре 100 °С, 2 — при температуре 60 °С.

Кинетический анализ процесса термической инактивации тканевого гамбопластина начали с определения порядка реакции. Кинетический (ализ показал, что константы скорости инактивации тромбопластина при ) °С и 100 °С на воздухе, уменьшаются с течением времени и процесс рмической инактивации не может быть описан как реакция I или II по-[дка. Таким образом, порядок реакции термической инактивации тка'нево-тромбопластина является более сложным.

Инактивация тканевого тромбопластина, имеющего сложную липо-ютеидную природу, может априорно складываться из нескольких промежуточных стадий, включающих денатурацию белковой и липидной частей, зи термической инактивации на воздухе, кроме денатурационных измене-:й, может происходить окисление кислородом воздуха.

ны

При температурах 0, 40, 60 и 100 °С нами были рассчитаны вели^ энергий активации (Аи„АКТ) процесса термической инактивации на в< духе тканевого тромбопластина по методу Паттона (1968). Эти величии колебались в пределах от 5,84 до 49 кДж/моль, что значительно ниже 1 личин 167-419 кДж/моль, приводимых Паттоном для инактивации чис белковых ферментов. Полученный результат позволяет предположить, » в процессе инактивации тканевого тромбопластина, помимо денатурат апопротеина, происходит менее энергоемкая потеря упорядоченности ,

пидного компонента.

Для препаратов тканевого тромбопластина, инактивированных ин бацией при температурах 0, 40, 60 и 100 °С в течение 20 минут на обр цах субстратной плазмы, растворенных в 3,15 г/л растворе фибриноге были определены кинетические параметры по методу Скэтчарда (таб. Как видно из таб. 1 и рис. 2, тепловая денатурация тканевого тромбопл тина при 60 и 100 °С приводит к уменьшению Утах и не сопровождав' изменением Кс1, что в первом приближении указывает на то, что при ин тивации уменьшается число каталитически активных центров на пове кости липопротеидных мембран, а сродство оставшихся центров к субст там существенно не изменяется.

Таблиц

Кинетические параметры тканевого тромбопластина в условиях терм: ческой инактивации его на воздухе при различных температурах

Показатель Температура инактивации

0° 40° 60° 100 0

V™ (сек*1) 0,032 0,028 0,018 0,014

ы <М) 4,519 Ю-9 4,378 Ю-9 4,284 Ю-9 4,008 Ю-9

Для выявления вклада окислительных реакций была изучена тер ческая инактивация тканевого тромбопластина при тех же температура атмосфере азота.

мм 180 т

1/К{

^-ч-^-г-т—(1/[а]

0,025 0,05

-0,05

0,025

0

Рис. 2. График температурной зависимости активности тканевого тром-бопластина в двойных обратных координатах (график Лайнуи-вера-Бэрка), где К{ = константа образования.

Как видно из рис. 3 и 4, в атмосфере азота термическая инактивация аневого тромбопластина происходит медленнее, чем на воздухе. Но и еле устранения атмосферного кислорода порядок реакции процесса инак-зации продолжает оставаться сложным.

Рис. 3. Динамика инактивации тканевого тромбопластина при температуре 60 °С. Активность тканевого тромбопластина выражена в % остаточной тромбопластической активности. 1 — в атмосферном воздухе, 2 — в азоте.

5

10 15 20 й 30

время в мин.

время в мин.

Рис. 4. Динамика инактивации тканевого тромбопластина при темп ратуре 100 °С. Активность тканевого тромбопластина выр жена в % остаточной тромбопластической активности. 1 — в атмосферном воздухе, 2 — в азоте.

Природа фосфолилидного компонента и его физическое состояние -два важных фактора, определяющих коагуляционную активность тканево тромбопластина (Зубаиров Д.М.,1978). Различия между фосфолипидаи могут быть обусловлены, в частности, различиями в степени их окислени Поэтому мы поставили задачу — изучить роль ПОЛ в процессе терм ческой инактивации тканевого тромбопластина, а также влияние антиокс данта ионола на этот процесс.

Результаты исследования показали, что нагревание водной суспенз! тромбопластина на воздухе до 100 °С, приводит к резкой потере биолог ческой активности (Р<0,001), которая сопровождается уменьшением с держания ДК (Р<0,01), несущественным изменением количества Г (Р>0,8) и двукратным увеличением концентрации МДА (Р<0,00£ (табл. 2).

Таблица 2

Данные по ПОЛ тканевого тромбопластина при его термической

инактивации

Воздух Азот

Показатель обработка тромбопластина

ацетоном ионолом в ацетоном ионолом в

ацетоне ацетоне

логическая активность, в %

до нагревания 27,9812,9 30,62±2,99 27,98+2,9 30,6212,99

после нагревания 7,5+0,7 10,2±1,3* 20,31+3,0 19,31+3,0

»новые конъюгаты, нмоль/г

до нагревания 4,8910,4 7,47+0,4 4,8910,4 7,47+0,4

после нагревания 3,29±0,3 5,56±0,69 3,3110,29 5,76+0,5

;роперекиси (Е480):

до нагревания 0,065+0.037 0,013±0,013 0,065+0,037 0,001310,013

после нагревания 0.036±0,024 0,05310,065 0,029+0,018 0.02210,017

(А, нмоль/г

до нагревания 6,69±0,94 4,1910,69 6,69+0,94 4,1910,69

после нагревания 12,0411,78 6,93+1,04* 4,7711,08 2,8210,64

Примечание. * — достоверность различий при Р<0,05 между препа-ами обработанными и не обработанными ионолом.

В амосфере азота термическая инактивация тканевого тромбопластина 1текает в гораздо меньшей степени, чем на воздухе (Р<0,0001), (табл. 2).

Обработка препарата тканевого тромбопластина антиоксидантом ио-юм не нарушает его биологической, гемокоагуляционной активности, бавление ионола позволило получить несколько более устойчивые к >мическому воздействию на воздухе препараты тромбопластина, которые держали примерно столько же ГП, но при нагревании на воздухе обра-от меньше МДА, чем контрольный тромбопластин, это связано с соб-1енным поглощением ионола при 233 нм.

Тромбопластин, обработанный ионолом, так же как и контрольный 1чительно меньше теряет гемокоагуляционную активность при нагревая в атмосфере азота.

Таким образом, проведенные исследования свидетельствуют о зако-мерной связи между процессом окисления тканевого тромбопластина и I биологической активностью. Процесс термической инактивации препа-га тканевого тромбопластина складывается из: 1) термической денатура-

ции апопротеина III; 2) ПОЛ — как это установлено нами; 3) окисл* аполротеина III и дезорганизация его липидного окруже (предположительно).

Как известно, свертывание крови в организме протекает при рН Учитывая сложность и относительное непостоянство состава препа] тканевого тромбопластина, мы ограничились лишь приведением характ стик необратимых процессов денатурации, охватывающих белковый и пидный компоненты тканевого тромбопластина в целом.

Суспензии тромбопластина и суммарных фосфолипидов выдержии при различных значения рН 0,5 часа при 20 °С. Затем также путем ти вания восстанавливали исходную концентрацию водородных ионов. Ак ность тромбопластина определяли по протромбиновому инд£ (С^шп Р.У., 1989), а активность суммарных фосфолипидов — по А1 (МагцоИБ 1958).

Изучение процессов денатурации тканевого тромбопластина, пу изменения рН среды представлено на рис.5. Результаты показывают, необратимая инактивация препарата происходит при рН 5 и ниже и при 11-12 и выше. Эти изменения активности носят денатурационный харак' а не являются результатом увеличения ионной силы растворителя. И^ бация суспензии тромбопластина в кислой среде не приводила к гидрол эфирных связей в фосфолипидах, т.к. количество свободного сер (0,04%), в препарате тромбопластина, не изменялось после инкубаци кислой среде.

Как видно из рис.5, тканевой тромбопластин довольно стабилен ] рН 6-10, что сочетается со значительной термостабильностью.

Общая картина рН-стабильности коагуляционной активности вод| суспензии суммарных фосфолипидов тромбопластина (рис.6) напомин таковую у цельного тромбопластина, только препарат суммарных фосфо пидов начинает терять активность уже при рН 6,0 и ниже.

^ рн

Рис. 5. График рН-зависиости активности тканевого тромбопластина.

<3

г

5

л >5

ь о

о о

X

ш

о га

_ с

4 5

5 о

_: О С 3 2

Ё ? о -р.

га "

I О О 3 I •& ^ о О о х м и Я1« О

<* ° 5

с; х 3

511 о * го о.

-е-

НРН

Рис. 6. График рН-зависимости активности суммарной фосфолипид-ной фракции тканевого тромбопластина.

Полученные экспериментально результаты наших исследований по-олили заключить, что кроме денатурации апопротеина и фосфолипидный •мпонент тромбопластина теряет часть «оей биологической активности же при небольших сдвигах рН в кислую сторону.

Тканевой тромбопластин — липопротеидный комплекс, фосфолипид-,1Й компонент которого организован преимущественно в гексагональную

Ни лиотропную мезофазу. Изменение концентрации водородных ионов < зывает влияние на образование бислойных и небислойных структур в с си фосфолипидов. Нейтральные и высокие значения рН способствуют < лойной организации, а низкие значения рН — гексагональной Нц упако] Возможно именно этим обусловлена стабильно высокая активность фос липидов и цельного тромбопластина при рН 7,4 — 10.

Результаты ЯМР-спектроскопии (Р.Ф. Байкеев 1995) показывают, получасовая инкубация тканевого тромбопластина при рН 2 полностью рушает гексагональную Нц форму упаковки фосфолипидов в липопрот ном комплексе, приводит к изменению конформации белкового компоне а гидролиза фосфолипидов в структуре тромбопластина, по нашим дань при этом не происходит. Инкубация тканевого тромбопластина при рр сопровождается кластеризацией тканевого тромбопластина на домены, щественно различающиеся по своим характеристикам. В то же время действие кислой среды не оказывает существенного влияния на фазе состояние фосфолипидов из тканевого тромбопластина. Из этого можно ключить, что главное значение в перестройке организации липидов цел го тромбопластина при увеличении концентрации водородных ионов, ] надлежит денатурации белков, которая нарушает гексагональную Нц . тропную мезофазу.

Однако и в отсутствии апопротеина III сдвиг рН в кислую стор вызывает подавление активности суммарных фосфолипидов из тромбоп тина. Причина этого может заключаться в замещении мембранного каль на протоны (Токйогтш Б. е.а.,1979). По нашим данным, содержание каль в препаратах тканевого тромбопластина колебалось от 0,02 мкмоль/м1 2,6 мкмоль/мг. Молярное соотношение Са2+/фосфолипид=4,6х10-4Са2+ а в препарате фосфолипидов — 0,37 мкмоль/мг.

Фазовое разделение, наблюдаемое при снижении рН, объясняс протонированием карбоксильных групп фосфатидилсерина в мембр; Между тем известно, что наиболее важным для проявления гемокоаг ционных свойств и смеси фосфолипидов, и тканевого тромбопластина в

>м, является участие определенной пропорции именно этой группы фос-элипидов (Nemerson У., 1988).

Ослабление гемокоагуляционного действия тканевого тромбопластина суммарных фосфолипидов при сдвиге активной реакции среды до pH 11-I, по всей вероятности, является результатом не только денатурации апо-ютеина III, но и образование мицеллярных структур из солей жирных 1слот, содержащихся в препарате тканевого тромбопластина по данным щкослойной хроматографии и лизофосфатидов. Ориентация жирных кис->т и лизофосфатидов в слоистых структурах, как известно, нестабильна, ; исключено и усиление мицеллообразования при щелочных значениях i за счет начинающегося процесса омыления.

Препараты тканевого тромбопластина широко используется в меди-[нской практике. Выпускаемые препараты тканевого тромбопластина 1еют ограниченный срок годности, что приводит к ограничению его ис->льзования. Причины снижения гемокоагуляционной активности препара-тканевого тромбопластина остаются невыясненными.

Мы поставили своей задачей— найти пути стабилизации' биологи-ской активности препарата тканевого тромбопластина. Для решения этой дачи было получено три образца препарата тканевого тромбопластина из >зга человека. Сухие препараты тромбопластина расфасовывали во фла-ны, парафинировали и ставили на хранение при +4 °С. Причем одна сть флаконов с тромбопластином хранилась в атмосфере азота, а дру-я — на воздухе.

Активность препаратов тканевого тромбопластина определяли через 6, 12, 18 и 24 месяца хранения.

Нами было установлено, что ограничение ПОЛ тканевого тромбо-астина увеличивает его термическую стабильность.

Исследования изменений гемокоагуляционной активности препаратов аневого тромбопластина через 3, 6, 12, 18 и 24 месяца хранения при зных способах замедления ПОЛ, показали, что гемокоагуляционная ак-

тивность всех образцов тромбопластина хранившихся на воздухе умень лась, но в разной степени (рис.7 и 8).

Н1 Ш2 ЩЗ

8

Ё &

о о. с

В)

140 120 100 80 60 40 20 0

К

Ж

3

мес.

6

мес.

12

мес.

на воздухе

18 мес.

24 мес.

Рис. 7. Изменение гемокоагуляционной активности различных I разцов тканевого тромбопластина в процессе хранения воздухе (в % к исходной активности).

1 — активность первого образца тромбопластина.

2 — активность второго образца тромбопластина.

3 — активность контрольного образца тромбопластина.

Ш1 ПИ2 ПЗ

х

Р

X о Я1

о а. с

120 100 80 60 40 20 0

II.

3

мес.

6

мес.

12 м ее.

в азоте

18 мес.

24 мес.

Рис. 8. Изменение гемокоагуляционной активности различных ой цов тканевого тромбопластина при хранении в атмосфере а. (в % к исходной активности).

1 — активность первого образца тромбопластина.

2 — активность второго образца тромбопластина.

3 — активность контрольного образца тромбопластина.

Сравнительный анализ дает возможность заключить, что допо. тельная обработка препарата тканевого тромбопластина синтетическим тиоксидантом ионолом способствует увеличению активности и стаб

сти препарата. Способ обработки препарата тканевого тромбопластина нолом существенного влияния не оказывал (рис.9).

□ воздух Пазот

□ воздух Пизот

□ воздух Пазот

140 120 100 ) 80 | 60 » 40 20 0

И

ЕГч

120 100 80 60 40 20 О

6 м.

18 24 м. м.

1 образец тромбопластина.

Зм. 6 м

2 обраиц тромбопластина

120

X « 100

и X 80

1 60

о. 40

а 20

0

3 м. 6 м. 12 18 24 м. м. м. 3 образец -контрольный тромбопластин

Рис. 9. Влияние условий хранения различных образцов тромбопластина на гемокоагуляаионную активность (в % к исходной активности).

Для получения более стабильного препарата тканевого троибопласти-необходимы: 1) дополнительная обрабогка препарата тканевого тромбо-астина антиоксидантом ионолом и 2) хранение препарата тканевого омбопластина, обработанного ионолом, без доступа кислорода.

ВЫВОДЫ

Тканевой тромбопластин термолабилен, его термическая инактивация на воздухе складывается из необратимой денатурации апопротеина III и пере-кисного окисления липидного компонента.

При нагревании препарата тканевого тромбопластина на воздухе окислительный компонент инактивации преобладает над денатурационным.

Обработка препарата тканевого тромбопластина антиоксидантом ионолом тормозит перекисное окисление его липидного компонента и стабилизирует его биологическую, гемокоагуляционную активность.

Препарат тканевого тромбопластина (также как и суммарная фосфолипид-ная фракция из него) стабилен при значениях рН близких к нейтральному,, и теряет свою активность при рН 5 и ниже; и при рН 11 и выше.

При длительном (до 2-х лет) хранении препарата тканевого тромбопластина его активность лучше сохраняется в присутствии антиоксиданта ионола в безкислородной среде.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1. Зубаиров Д.М., Свинтенок Г.Ю. Термическая инактивация тканевого тр( пластина. //Казанский мед.журнал.- 1983,- Т.64, N1,- С.26-28.

2. Зубаиров Д.М., Байкеев Р.Ф., Свинтенок Г.Ю. Новая асимметричная Mi тканевого тромбопластина. //Казанский мед.журнал.- 1983,- T.64.N5.- С.380-381.

" ■ 3. Байкеев Р.Ф., Свинтенок Г.Ю., Соболева И.В., Зубаиров Д.М. Протеоли екая инактивация тканевого тромбопластина. //В кн.: Клинические и зкепер; тальные аспекты регуляции агрегатного состояния крови. Саратов.- 1984,- С.79-84.

4. Свинтенок Г.Ю., Зубаиров Д.М. Роль перекисного окисления липидов в цессе термической инактивации тканевого тромбопластина. //Вопросы мед.хи 1986,- Т.32.- С.80-81.

5. Зубаиров Д.М., Байкеев Р.Ф., Баишев И.М., Соболева И.В., Свинтенок Ченборисова Г.Ш. Инициальные механизмы свертывания крови. //II Всеросси] съезд гематологов и трансфузиологов. Тезисы докладов. Челябинск,- 1986.- 376.

6. Зубаиров Д.М., Давыдов B.C., Андрушко И.А., Баишев И.М., Байкеев Зинкевич О.Д., Киршин C.B., Киселев C.B., Литвинов Р.И., Попова Л.Г., Свин Г.Ю., Соболева И.В., Субханкулова Ф.Б., Тимербаев В.Н., Ченборисова Г.Ш. Ис< вания инициальных механизмов диссеминированного внутрисосудистого сверты крови. //Сборник Казанский мед.институт 1814-1989. Часть 2. Основные направ, исследований и развития научных школ на современном этапе. Изд-во Казанской: верситета.- 1989.- С.42-47. . .

7. Свинтенок Г.Ю., Зубаиров Д.М., Ченборисова Г.Ш. Необратимая денатурация тканевого тромбопластина. //Вопросы мед.химии,- 1991.- Т.37,- С.31

8. Свинтенок Г.Ю. Поиск путей стабилизации тканевого тромбопла< //Вопросы трансфузиологии и клинической медицины. Материалы IV Н; практической конференции молодых ученых. Киров,- 1994,- С.12-13.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В АВТОРЕФЕР^

АЧТВ — активированное частичное тромбопластиновое время ГД — гидроперекиси. ДК — диеновые конъюгаты. МДА — малоновый диальдегид.

ПОЛ — перекисное окисление липидов.