Технология производства и обеспечение качества синбиотиков лактосубтил-форте и авилакт-форте, эффективность их применения в птицеводстве

Неминущая, Лариса Анатольевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Технология производства и обеспечение качества синбиотиков лактосубтил-форте и авилакт-форте, эффективность их применения в птицеводстве
ВАК РФ 03.01.06, Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)

Автореферат диссертации по теме "Технология производства и обеспечение качества синбиотиков лактосубтил-форте и авилакт-форте, эффективность их применения в птицеводстве"

На правах рукописи

Немннущая Лариса Анатольевна

ТЕХНОЛОГИЯ ПРОИЗВОДСТВА И ОБЕСПЕЧЕНИЕ КАЧЕСТВА СИНБПОТИКОВ ЛАКТОСУБТИЛ-ФОРТЕ И АВИЛАКТ-ФОРТЕ, ЭФФЕКТИВНОСТЬ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ В ПТИЦЕВОДСТВЕ

03.00.06 - биотехнология (в том числе бнонанотехнолоши)

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

- 8 ДЬН 2011

Щелково-2011 г.

005006550

Работа выполнена в ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский н технологический институт биологической промышленности» Российской академии сельскохозяйственных наук.

Научный консультант:

академик РАСХН. академик НААН Украины, доктор ветеринарных наук, профессор, лауреат Государственной премии РФ,

Заслуженный деятель науки РФ Анатолий Яковлевич Самуйленко

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, профессор Василий Иванович Белоусов

доктор биологических наук, профессор Нина Ивановна Малик

доктор биологических наук, профессор Игорь Владимирович Тихонов

Ведущая организация:

ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р.Коваленко»

Защита состоится 23 декабря 2011 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 006.069.01 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук во Всероссийском научно-исследовательском и технологическом институте биологической промышленности РАСХН по адресу: 141142, Московская область, Щелковский район, пос. Бнокомбнната, д. 17, ВНИТИБП, e-mail: vnitibp@mail.m

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского научно-исследовательского н технологического института биологической промышленности.

Автореферат разослан 22 ноября 2011г. Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат биологических наук Фролов Юрий Дмитриевич

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Акту альность темы. В приоритетном национальном проекте «Развнтае агропромышленного комплекса Российской Федерации» указано, что решение актуальных проблем развитая сельского хозяйства напрямую связано с использованием инноваций н наукоемких технологий, играющих ключевую роль в обеспечении населения качественной н безопасной продукцией животноводства.

Наиболее динамично развивающейся н наукоемкой отраслью АПК является птицеводство. В 2010 г. производство мяса птицы увеличилось на 13,5%, его доля на внутреннем рынке мясных ресурсов соответствовала мировым показателям и составила 40%, из них 83% обеспечено отечественным производством (Бобылева Г.А., 2010; Фнснннн В.И., 2011). Успехи достигнуты за счет внедрения максимально продуктивных кроссов н интенсивных технологий выращивания. В то же время увеличение поголовья привело к значительному усилению техногенной н микробиологической нагрузки на организм птицы, что особенно важно для бройлерного птацеводства (Шоль В.Г., 1999; Малнк Н.И., 2004; Салеева ИЛ., 2007).

Высокопродуктивная птица характеризуется повышенной чувствительностью к стрессам н нарушениям в режимах кормления и содержания, низкой иммуно-компетентиостью. Основное место среди причин отхода молодняка занимают днсбактерноз (Сидоров И.В., 1976; Бессарабов Б.Ф. с соавт., 1988; Груздев К.Н., 2005; Внноходов В.О., Лысенко С.Н., 2008), вирусные болезни (ньюкаслская болезнь, грипп и др.) н мнксг-ннфекцнн (Сафонов ГА,, 1984; Смоленский В.И., 2007; Алнпер Т.И. с соавт., 2007; Тихонов ИВ., 2008; Джавадов Э.Д., 2010).

В сложившейся ситуации необходимо качественное изменение характера кормовой базы за счет создания н применения экологически безопасных и эффективных биологически активных кормовых добавок, обладающих не только питательной ценностью, но и защщным действием на организм ппщы (Егоров И.А., 2004; Околелова Т.М., 2004), что обусловило интенсивное развтие такого направления экобнотехнологин, как разработка н использование в ветеринарии пробиотиков, пребиотнков и синбнотиков (Антнпов В .А. с соавт., 1995; Панин АД. с соавт., 2004; Субботин В.В., Данилевская Н.В., 2009). Это дает возможность решить проблему профилактики и терапии днсбакгернозов, повысить эффективность вакщшопрофилакшкн инфекционных болезней за счет предотвращения/снижения риска развития вторичных нммуноде-фицнтов, нммунодепресснвного действия ряда вакцинных штаммов на организм

животных н птицы (Зинченко Е.В., 2002; Борнсенкова АЛ. с соавт., 2004; Федоров Ю. Н., 2005; Красочко П. А с соавт., 2009).

Лечебно-профилактические н ростоспшулнрующне экологически безопасные препараты при малых расходах (в зависимости от их состава - от 200 г до 5 кг на тонну корма) физиологичны по своему действию, безвредны для животных, технологичны в производстве н применении (Fuller R., 1989; Тараканов Б.В., 2000; Сидоров М.А., 2001; Маднк Н.И., 2001; Грязнева Т. Н., 2005; Шевдеров БА., 2005; Римарева Л.В. с соавт., 2008; Воробьева Г.И. с соавт., 2010). Их можно производить по унифицированным технологиям на гибких технологических линиях, тиражированных и размещенных в непосредственной близости к потребителю - на модульных бнозаводах, агропредприятиях н птицеводческих комплексах (Самуй-ленко АЛ. с соавт., 2009).

Конкурентоспособность инновационных разработок характеризуется оптимальным соотношением затраты/эффективность (Данилевская Н.В., Субботин A.B., 2005) н задается в процессе разработки новых препаратов, построенном с учетом требований современных международных н национальных законов («Об обращешш лекарственных средств», «О ветеринарии»), стандартов ИСО с. 9000 (ГОСТ Р ИСО 9001-2008) н GMP (ГОСТ Р 52249-2009). На этапе проектирования процесса создания новой продукции (согласно требованиям стандарта ИСО 10006:2003) закладываются характеристики ее качества и безопасности. В методологию проектного подхода входит планирование н проведение доклинических исследований (ДИ), которые осуществляются в соответствии с Правилами GLP и требованиями Директивы ЕС «О защите животных, используемых в экспериментальных и научных целях». Для оценки безопасности в качестве альтернативы опытам на животных рекомендуется использовать чувствительные бнотест-системы доорганизменного уровня (Крылов Ю.Ф., 1985; Внноходов Д. О., 2008).

Предметом настоящих исследований явилась разработка на основе концепции «пробнотнк + пребнотнк» и «пробиотнкн + белковая кормовая добавка» новых сннбиотическнх комплексов (далее - синбнопжов), в которых препараты н способы их применения в птицеводстве подобраны таким образом, чтобы их можно было использовать как биологически активные кормовые добавки.

1.2. Цель и задачи исследований. Цель работы - разработать рецептуры новых синбнотнков, технологию нх производства, средства н методы обеспечения качества, способы применения в птицеводстве при выращивании бройлеров.

Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи:

- научно обосновать выбор н исследовать характеристики штаммов микроорганизмов - продуцентов пробнотиков, пребнотнка и белковой кормовой добавки, входящих в состав сннбиотиков;

- разработать систему изготовления и контроля посевного материала для производства пробнотиков АВИЛАКТ-1К (Lactobacillus acidophilus) и АВИСУБ-ТИЛ (Bacillus subtilis), пребнотнка АВИСТИМ (культуральная жидкость гриба Fusariuin sambucinum) и белковой кормовой добавки ЦЕРЕВЕТ (ннакптированная биомасса дрожжей Saccharoiiiyces cerevisiae);

- разработать схему доклинических исследований безвредности, эффективности н стабильности препаратов, новые методы контроля безвредности с помощью биологических тест-систем доорганизменного уровня;

- разработать технологию изготовления препаратов АВИЛАКТ-1К, АВИСУБТИЛ, АВИСТИМ и ЦЕРЕВЕТ с использованием универсальной питательной среды для культивирования микроорганизмов;

- изготовить опытные образцы препаратов и провести их доклинические исследования; изучить ангноксидангаое действие препарата АВИСТИМ в качестве новой характеристики биологической активности пребнотнков;

- определить эффективность применения синбиотиков АВИЛАКТ-ФОРТЕ (АВИЛАКТ-1К + АВИСТИМ) н ЛАКТОСУБТИЛ-ФОРТЕ (АВИЛАКТ-1К + АВИСУБТИЛ + ЦЕРЕВЕТ) при выращивании цыплят-бройлеров; разработать способы их применения;

- определить экономический эффект применения новых кормовых добавок на основе синбиотиков при выращивании бройлеров и разработать коммерческое предложение по их использованию в птицеводстве.

13. Научная новизна. Научно обоснована концепция кормовых добавок на основе сннбиотнческнх комплексов («пробнотнк+пребиотшс» и «пробнота-кн+кормовая добавка»), сконструированы новые сннбнотнки для птицеводства ЛАКТОСУБТИЛ-ФОРТЕ и АВИЛАКТ-ФОРТЕ.

Установлено, что выбранные штаммы бактерий (Lactobacillus acidophilus, штамм 1К и Bacillus subtilis, штамм М-8) по уровню антагонистической активности к патогенным микроорганизмам и резистентности к антибиотикам удовлетворяют требованиям, предъявляемым к продуцентам пробнотиков. На нх основе разработаны новые пробнотикн АВИЛАКТ-1К и АВИСУБТИЛ.

Выделен новый штамм шщелиалыюго гриба Fusarium sambucinum, исследована его безопасность, химический состав биомассы н культуральной жидкости (Патент РФ № 2259209 «Штамм гриба Fusarium sambucinum — продуцент биологически активных веществ», приоритет от 26.03.2004, в соавт.). На основе культуральной жидкости гриба разработан новый пребиотнк АВИСГИМ. Установлено антиоксидантное действие культуральной жидкости как показатель биологической активности пребнотиков.

Показана высокая питательная ценность биомассы ннактнвированных клеток дрожжей Sacdiammyces cerevisiae, шт. diastaticus ВКПМ-у-1218, разработана новая белковая кормовая добавка ЦЕРЕВЕТ.

В технология изготовления входящих в состав синбнотнков препаратов (пробиотнков, пребнотика и белковой кормовой добавки) для культивирования пробнонтных бактерий, триба и дрожжей-сахаромицетов использована универсальная питательная среда на основе ферментолнзата отходов зерносырья.

Разработан состав сннбиотнков ЛАКТОСУБТИЛ-ФОРТЕ и АВИЛАКТ-ФОРТЕ и способы их применения при выращивании цыплят-бройлеров (Патент РФ № 2286066 «Кормовая добавка для птицеводства н способ выращивания птицы», приоритет от 26.04.04, в соавт.). Установлен синергизм действия препаратов прн их применении в составе комплексов.

Эффективность применения сннбиотнков прн выращивании цыплят-бройлеров определена с использованием широкого спектра показателей: европейский индекс продуктивности (интегральная характеристика зоотехнических параметров выращивания — живая масса н сохранность птицы, затраты корма); качество продукции (содержание белка н жира в мясе, выход мясных частей); экономический эффект; влияние на эффективность вакцинации птицы на модели ньюкасл-ской болезни (Патент РФ № 2035915 «Способ профилактики болезни Ньюкасла», приоритет от 28.12.92, в соавт.; Патент РФ №2035917 «Вакцина против болезни Ньюкасла н способ ее применения», приоритет от 28.12.92, в соавт.).

Впервые для обеспечения качества пробиотяков, пребнотика и белковой кормовой добавки в процессе их разработки н производства реализованы:

- методология проектного подхода согласно требованиям ГОСТ Р ИСО 90012008 «Системы менеджмента качества. Требования». Алгоритм исследований соответствовал основным этапам разработки н внедрения в производство нового лекарственного средства: научная гипотеза и поисковые исследования; доклиниче-

craie исследования; разработка технологии производства и наработка опытных партий препаратов; клинические испытания в ппщехозянстве и оценка экономической эффективности;

- схема доклинических исследований безопасности, активности, стабильности препаратов в соответствии с Правилами GLP, предусматривающая обоснование выбора показателей н методов их определения; установление допустимых границ показателей; разработку и применение для определения безопасности методов биотестирования на моделях доорганнзменного уровня - тест эмбриотоксичности на развивающихся эмбрионах кур и модификация ХЕТ-КАМ теста на хорноаллан-тонсной оболочке куриного эмбриона; изготовление н использование стандартных образцов - лабораторных рабочих эталонных материалов.

1.4. Практическая ценность работы. Применение сннбнотнков АВИЛАКТ-ФОРТЕ н ЛАКТОСУБТШ1-ФОРТЕ в ппщеводсгве способствует повышению продуктивности птицы, обеспечению ветеринарного благополучия птицехозяйств, гарантии качества, биологической и экологической безопасности как самой продукции, так н процесса ее производства.

По разработанной технологии изготовлено 45 серий препаратов. В доклинических исследованиях и производственных испытаниях подтверждена их безопасность и эффективность. В ппщехозянстве проведен 21 научно-производственный опыт и два производственных испытания на цыплятах-брошках различных кроссов (суммарное поголовье - 10 ООО голов). Разработаны способы применения сннбнотнков при различных путях введения препаратов (выпаивание, смешивание с кормом, напыление на гранулы комбикорма). Результаты испытаний включены в «Методические рекомендации по использованию пробнотнков, пребнотнков н снмбнотнков в птицеводстве» и «Методические рекомендации по технологии камерной аэрозольной вакцинации цыплят против ньюкаслской болезни».

Экономический эффект от применения сннбнотнков ЛАКТОСУБТИЛ-ФОРТЕ и АВИЛАКТ-ФОРТЕ прн выращивании бройлеров составил (в расчете на 1000 голов) 7862 н 1374 руб. соответственно.

С учетом требований Правил GMP разработана н утверждена в установленном порядке нормативная документация: на препараты АВШ1АКТ-1К, АВИСУБ-ТИЛ, АВИСТИМ н ЦЕРЕВЕТ - технологические регламенты, стандарты органн-

зацнн (ТУ) н инструкции по применению; на сннбнотнкн ЛАКТОСУБПШ-ФОРТЕ н АВИЛАКТ-ФОРТЕ - инструкции по применению.

Опыт применения методологии проектного подхода и доклинических исследований использован в «Методических рекомендациях по разработке и реализации проекта создания нового лекарственного средства», «Рекомендациях по проведению доклинических испытаний новых лекарственных средств для животных н биологически активных добавок к кормам», «Методических рекомендациях по исследованию стабильности иммунобнопрепаратов на этапе разработки и в условиях действующего производства», «Методике определения раздражающего действия лечебно-профилактических препаратов для животных и их ингредиентов с помощью теста на хорноаллангонсной оболочке куриного эмбриона (ХЕТ-КАМ тест)», (Методике определения потенциальной токсичности лечебно-профилактических препаратов для животных и их ингредиентов на куриных эмбрионах (тест эмбрно-токсичности)».

Разработан в соавторстве и внедрен ОСТ 100083-95 «Продукция агробиологической промышленности. Технологические регламенты производства. Содержание, порядок разработки, построения, согласования н утверждения», основные положения которого в 2010 г. актуализированы с учетом требований ГОСТ Р 52249-2009 («Правила производства и контроля качества лекарственных средств») и включены в проект национального стандарта РФ «Средства лекарственные для животных. Технологические регламенты производства. Содержание, порядок разработки, согласования и утверждения». Материалы документов использованы в 2003-2011 гг. при внедрении системы менеджмента качества на биопредпрнятиях: ФГУП «Щелковский бнокомбннат», «Орловская биофабрика», «Курская бнофаб-рнка», ОАО «Покровский завод биопрепаратов».

Результаты работы использованы для обоснования разработанной во ВНИ-ТИБП н одобренной Президиумом Россельхозакадемни (протокол №4 от 21.04.2011) «Концепции научного обеспечения создания н развития региональных биологических предприятий по производству препаратов для защиты животных, растений н средств, повышающих эффективность функционирования агропромышленного комплекса Российской Федерации», а также в лекционном материале курсов повышения квалификации специалистов птицеводческих предприятий «Новые технологии и пути повышения эффективности производства мяса бройлеров» (ГНУ ВНИТИП Россельхозакадемии, г.Сергнев Посад, 2011 г.).

1.5. Основные положения диссертационной работы, которые выносятся на защиту:

- характеристика ппаммов микроорганизмов - продуцентов пробиотнков, пребнотнка н белковой кормовой добавки, входящих в состав сннбнотнков;

- система получения и контроля посевного материала для изготовления препаратов АВИЛАКТ-1К, АВИСУБТИЛ, АВИСТИМ нЦЕРЕВЕТ;

- схема доклинических исследований безопасности, активности н стабильности препаратов, гармонизированная с международными требованиями;

- методы определения безвредности препаратов с помощью биологических тест-систем доорганнзменного уровня;

- технология изготовления препаратов с использованием универсальной питательной среды на основе ферментолнзата отходов зерносырья;

- ангаоксндангная активность пребнотнка;

- эффективность применения сннбнотнков при выращивании цыплят-бройлеров;

- влияние сннбнотнка АВШ1АКТ-ФОРТЕ на эффективность вакцинации пга-цы против ньюкаслской болезни;

- способы и экономическая эффективность применения сннбнотнков АВИ-ЛАКТ-ФОРТЕ и ЛАКТОСБТИЛ-ФОРТЕ в ппщеводстве.

1.6. Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены: в виде ежегодных отчетов по темам госззданий на заседаниях ученого совета и методической комиссии ВНИТИЕП (1991 - 2010 гг.); на секции «Ветеринарная биотехнология» Отделения ветеринарной медицины РАСХН (2004-2010 гг.); на пяти Международных конгрессах (XI International congress of the World Veterinary poultry association, Будапешт,1997 г.; I и Ш Международные ветеринарные конгрессы по птицеводству, Москва, 2005 и 2007 гг.; конгрессы «Биотехнология -2009, 2011», Москва, 2009,2011 гг.); на 42 Всесоюзных, Республиканских, Международных н Всероссийских конференциях, проводившихся в Москве, Минске, Риге, Киеве, Харькове, Алуште, Петербурге, Саранске, Владимире, Краснодаре, Курске, Пущино, Боровске, Светлогорске, Сергневом Посаде, Покрове, Щелково (1991-2011 гг.).

Разработки удостоены: бронзовой медалн н Диплома Ш степени (Российская агропромышленная выставка «Золотая осень», 2011 г.), Дипломов V,VI н VII Ме-

ждународных выставок «Лаборатория Экспо» (2007, 2008,2009 гг.), Диплома Рос-сельхозакадемни за лучшие завершенные научные разработки 2010 г.

1.7. Публикации. Основные положения диссертационной работы опубликованы в 71 научной работе, в том числе в 15 статьях в изданиях по перечню, рекомендованному ВАК Минобрнауки России для публикации материалов докторских диссертаций. По результатам исследований получено 4 Патента РФ.

1-8. Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, включающих материалы и методы, результаты (4 главы), обсуждение, выводы и практические предложения, содержит 73 таблицы и 33 рисунка. Список литературы включает 577 источников. В приложении представлены копии документов, подтверждающих достоверность результатов работы, ее научную и практическую значимость.

1.9. Личный вклад автора заключается в формулировании проблемы, постановке цели н задач исследований, методологическом обосновании путей решения поставленных задач, непосредственном планировании экспериментов и выполнении исследований, обобщении н интерпретации результатов, разработке нормативной документации. Автор принимала личное участие в изготовлении и контроле опытных серия препаратов, их испытаниях в птнцехозяйстве, в подготовке научных публикаций и разработке методических документов.

1.10. Благодарности. Автор выражает благодарность научному консультанту, директору ВНИТИБП, академику РАСХН АЛ. Самуйленко. В выполнении некоторых разделов диссертации принимали участие и оказывали практическую и консультативную помощь сотрудники института Э.Ф. Токарнк, Г.И. Воробьева, В.И. Еремец, Т.А.Скотннкова, Н.К.Еремец, АЛ. Нежута, А.И. Албулов, В.И.Клюкнна, Е.П.Салегнна, С.В.Кузнецова, Е.И.Школьников, МА.Фролова, Ю.Д. Фролов, ТА. Авдеева, ТАЛомакнна, ЛА.Елисеева, С.В.Калугнн, а также сотрудники ВГНКИ: В.И. Смоленский, О.А Тугаринов; и ВНИТИП: В.И. Фнло-ненко, В.Г. Шоль, И.П. Салеева, В.СЛукашенко, Ш.А. Имангулов, Г.В. Игнатова -за что приносим им сердечную благодарность.

2.МЛТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Работа выполнена в 1991-2011 гг. во ВНИТИБП и его опытном производстве. Часть исследований проводили совместно с сотрудниками ВГНКИ, ГосНннснн-тезбелок, ГНУ ВНИТИП Россельхозакадемни, Института мтсробнолопщ РАН,

кафедры микробиологии МГАВМиБ им. К. И. Скрябина; эффективность разработок испытывали в опыгаом хозяйстве ГУЛ «Загорское ЭПХ ВНИТИП».

Объектами исследований служили: штаммы-продуценты (L. acidopliilus, шт. 1К, ВКПМ № В-2991; В. subtilis, шт. М-8, ВКПМ № В-1948; S. cerevisiae (diastati-cus) ВКПМ-у-1218; F. sambucinum MKF 2001-3, ВКПМ № F-867); автолшат биомассы и культуральная жидкость гриба; новые препараты АВИЛАКТ-1К (пробио-тик в жидкой н сухой формах, содержащий живые клетки L. acidopliilus, шт. 1К) и АВИСУБТИЛ (иробнотнк в жидкой и сухой формах, содержащий живые клетки В. subtilis, пгг.М-8); пребнотнк АВИСТИМ (культуральная жидкость гриба F.sambucinum, шт. MKF 2001-3); белковая кормовая добавка ЦЕРЕВЕТ (сухая бномаса 1шактнвироваиных клеток дрожжей S. cerevisiae diastatícus ВКПМ-у-1218); сннбнотнкн АВИЛАКТ-ФОРТЕ (комплекс препаратов АВИЛАКТ-1К и АВИСТИМ) и ЛАКТОСУБТИЛ-ФОРТЕ (комплекс препаратов АВИЛАКТ-1К. АВИСУБТИЛ и ЦЕРЕВЕТ).

Для оценки безопасности препаратов определяли: токсичность для белых беспородных мышей (масса тела 12-14 г) после внутрнбрюшннного введения препарата в широком интервале доз; токсичность для 9-10 суточных SPF-эмбрнонов кур (тест эмбрнотоксичностн); безвредность для цыплят суточного возраста после введения препаратов с кормом или водой; раздражающее действие на слизистые оболочки (ХЕТ-КАМ Тест в модификации).

Антагонистическую акгавность пробнотаков характеризовали в опытах: in vitro - по величине задержки роста полевых штаммов патогенных культур эшернхнй (K-S8, К-99, А-20Е) и сальмонелл (S. tuphimurium, S. dublin, S. gallinarum); in vivo -по выживаемости цыплят при контрольном заражении полевым нзолятом патогенного штамма Е. coli, выделенного в хозяйстве. Резистентность к антибиотикам определяли in vitro дисковым методом. Устойчивость бактерий-пробнотнков к действию желудочного сока (сухой медицинский, желудочный сок «Эквин». НПО «Биомед», г. Пермь) и желчи (желчь медицинская, ООО «Самсон», г.Санкт-Петербург) определяли по изменению количества живых бактерий после контакта с ними. Количество жизнеспособных бактерии определяли высевом на среды MRS-5 и сусло-агар.

Для характеристики химического состава пребиотнка, кормовой добавки и зерноотходов определяли: массовую долю сухих веществ (по ГОСТ 28561-90); массовую долю золы (по ГОСТ 12572-67); массовую долю жира (по ГОСТ

13496.15-97); общий белок (по ГОСТ 26889-86); общее содержание углеводов (по ГОСТ 26176-91); макро- и микроэлемент методом атомно-абсорбцнонной спек-трофотометрии (на приборе АА8-1Ы); органические кислоты методом газо-жндкостнон хроматографии (на хроматографе Хьюлетт - Паккард, колонка -полнсорб); витамины (флюорометрнческим методом по ГОСТ 29138-91,19139-91, 29140-91); состав н содержание аминокислот (на аминокислотном анализаторе Бнотроник ЕХ>7000).

Антиоксндантную активность культуральной жидкости триба определяли амперометрнческн на приборе «Яуза-ААА-01» (Яшин Я.И., Яшин А.Я., 2002).

Эффективность сннбиотнков для цыплят-бройлеров (кроссов «Смена», «Конкурент^», «Кобб - 500» н «Кобб — авнан-48») оценивали по зоотехническим показателям (масса и сохранность птицы, затраты корма); европейскому индексу продуктивности (ЕИП) и качеству мяса (выход мясных частей, содержание в них белка и жира) с использованием соответствующих рекомендаций, разработанных ГНУ ВНИТИП. ЕИП определяли по формуле:

ЕИП = АхВ/СхЕ), где: А - живая масса, кг; В - сохранность, %; С - срок выращивания, сутан; О - затраты корма на 1 кг привеса, кг).

Влияние синбнотнка на эффективность вакшшапнн птицы против НЕ (вакцина против НБ птиц, штамм Ла-Сота, ТУ 10-19-212-8 6) оценивали по содержанию антител в сыворотке крови цыплят в реакции торможения гемагглютннацнн.

Экономическую эффективность сннбиотнков рассчитывали по формуле: где: С6 и С„ — себестоимость 1 кг прироста живой массы в базовом и новом вариантах; Ая - валовый прирост живой массы в новом варианте, кг.

Сухие формы препаратов получали методами сублимационного и распылительного высушивания. Контроль готовых препаратов осуществляли в соответствии с разработанными стандартами организации (СТО).

Статистическую обработку результатов (с числом повторяй) проводили методами Кербера в модификации Ашмарнна, наименьших квадратов, статистических критериев Стьюденга-Фшпера (»-критерий) и Кокса-Споарта с использованием стандартных программ МАТНСасЬ2001.

Структурно-логическая схема достижения цели диссертационной работы представлена на рнс 1.

Эгаиы разработки

Научная гипотеза к поисковые исслСловакия

Доклинические исследования безопасности, активности и стабильности

Клинические испытания

Алгоритм исследовании

Выбор и характеристика штаммов-продуцентов по специфическим свойствам

ЬасюЬасПШ« асМорЬНш, шт. 1К. вкпм № В-2991 ВасШиз $иЫШ$, шт. М-8, ВКПМ № В-1948 Рияапиш затЬисшит МК.Н 2001-3, ВКПМ № 1--867 ЗаесЬаготусж; сегеУ151ае (с]1а5га11си&) ВКПМ-у-1218

Разработка системы посевных материалов (Яссе! 1.01 Бу^ст. _

Изготовление и контроль посевных материалов

Разработка технолога» изготовления и схемы доклинических исследовании (ДИ)

Изготовление и ДИ опытно-промышленных серий

Испытания в птшехозяйстве эффективности синбиотаков при выращивании бройлеров

Разработка способов применения I Оценка экономического эффекта

Разработка коммерческого предложения

Форма завершения

Спецификации на штаммы

Стандарты организации (СТО) на посевные материалы

Технологические регламенты и СТО

* Акты испытаний

Инструкции по применению

Рис. I. Структурно-логическая схема достижения цели диссертационно» работы.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Характеристика штаммов микроорганизмов — продуцентов пробпо-тиков, пребиотика и белковой кормовой добавки.

На основании анализа существующего в настоящее время научного подхода и данных литературы сформулированы основные критерии отбора штаммов микроорганизмов - продуцентов пробнотиков, пребнотнков н белковых кормовых добавок микробиологической природы. Штаммы-продуценты получают селекцией по заданным свойствам или выбирают в коллекции промышленных микроорганизмов в соответствии с определенными требованиями. В качестве объектов исследований из Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ) ФГУП Гос-НИИГенешка нами выбраны: бактерии L. acidophilus, штамм 1К, ВКПМ № В-2991 (группа симбионтов); В. subtilis, штамм М-8, ВКПМ № В-3121 (транзнгорная группа); дрожжи S. cerevisiae diastaticus (ВКПМ-^1218). Для получения пребнотнка использован новый штамм высшего лечебного гриба F. sambucinum, шт. MKF 2001-3. Исследованы характеристики штаммов как продуцентов пробнотиков, пребнотиков и белковых кормовых добавок.

3.1.1. Характеристика штамма 1KL. acidophilus (В-2991). Штамм дцдетц ю кишечника курицы и в соответствии с паспортом имеет следующие характеристики: по культурально-морфологаческим признакам - крупные грамположигельные палочки; генетически устойчив, не модифицирован; не патогенен для человека (классификация микроорганизмов по СП 1.2.731-99), прн работе не требует специальных мер предосторожности; растет на обезжиренном молоке прн температуре 37-40°С

Дня штамма определены: чувствительность бактерий к действию желудочного сока н желчи; антагонистическая активность (АнтА) в отношении патогенных микроорганизмов как основная характеристика пробнотнческой активности; резистентность к действию часто применяемых в птнцехозяйствах антибиотиков.

Лактобактерш! данного штамма устойчивы к воздействию желчн н несколько меньше - желудочного сока. Снижение концентрации живых бактерий по сравнению с исходным значением составило (0,6±0,2) lg КОЕ/см3 н (1,7±0,3) Ig КОЕ/см3 соответственно (п=5). Прн определении АнтА в опытах in vitro (п=10) установлен (см. рнс.2) выраженный антагонизм штамма в отношения патогенных микроорганизмов. Показано (п=4), что лактобактерин высокочувствительны (диаметр зоны ЗР >25мм) к кламокснлу, левомнцегнну, тетрациклину, цефазолину, ам-пшщшшну н рнфампицину; чувствительны (15-25 мм) к генгамицину; умеренно

чувствительны (11-15мм) к офлоксацину, ципрофлоксацнну, энрофлону, лннкомн-цину и флавомнцину (см. рнс. 3).

I 25 £ 20

1 м

Г1

10 5

I { 1 ц*-1 j I

1 в :J ц 1 1 еЛ

Я /ШТ. И бац,

S.lyph. S.dubiin 5, gall. E.COliK-88 E.coli K-99 E.COliA-20

Рис. 2. Антагонистическая активность бактерий-пробиотиков.

3.1.2. Характеристика штамма М-8 В. subtilis (В-3121). Штамм выделен из молока; культуралыю-морфологаческне признаке - грамположигельные неоднородные палочки длиной 2-3 мкм; является продуцентом протеолнтнческнх ферментов; генетически не модифицирован; не патогенен для человека (СП 1.2.731-99), при работе не требует специальных мер предосторожности; культивируется на ОМ, МПА при рН 7,0-7,2 и температуре 40°С.

Для характеристики безопасности штамма в опытах на белых мышах исследованы: безвредность (при введении per os дозы 10 и 50x10® КОЕ/О,5см3), возможная вирулентность (при введении внутрнбрюшинно суспензии живых бактерий в дозе 5 н 10х109 КОЕ/О,5см3), токсичность (при введении внутрнбрюшинно суспензии инактнвнрованных бактерий в дозе 1,0 и 2,0x10s КОЕ/О,5см3) и токсиген-ностъ (при введении в/б 0,5 и 1,0 см3 кулыуральной жидкости). Установлено, что за весь период наблюдения (5 суток) животные (по 20 голов в группе) были клинически здоровы, активны, их поведенческие реакции не изменялись.

Определена концентрация бактерий после контакта с желудочным соком и желчью, которая составила (8,6±0,3) lg КОЕ/см3 и (7,8±0,2) lg КОЕ/см3 соответственно при исходном значении (9,1±0,3) lg КОЕ/см3, что свидетельствовало об устойчивости к желудочному соку и несколько большей чувствительности к желчи. При исследовании АнтА in vitro (п=10) установлено (см. рис.2), что штамм обладает выраженным антагонизмом в отношении патогенных микроорганизмов, превышающим по величине аналогичные значения АнтА для лактобактернй. Бактерии В.subtilis более устойчивы к действию антибиотиков по сравнению с лакто-бактернями (см. рнс.З).

1 ! 1 ! г I I I 1

«1 1-1 1,1 1 и II ЬыпешИ:

О ■Т.ЬТШ.1Ш Я.т■..,. ■ ,М Ж -ласт.

////////. /У/ / МГИЧ

Рис. 3. Аатибиотикорезистентность оактерий-пробнотиков.

3.1.3. Характеристика штамма МКР-2001-3 F. ттЬистит (Р-867). Для разработан пребнотнка использован новый штамм МКР-2001-3 гриба Р. затЬшл-пит. Изучение фнзнолого-бнохнмнческих характеристик штамма, его поддержание, обеспечение чистоты и стабильности свойств проведено при участии доктора биологических наук, профессора ГЛ. Воробьевой. Штамм депонирован в ВКПМ (№Р - 867). В ФГУП «Государственный научный центр по антибиотикам» исследована безопасность штамма и установлено, что он не патогенен дня растений и животных, не токсичен; может использоваться при производстве биологически активных веществ (БАВ) для пищевой промышленности.

Штамм выделен из растительного сырья и в соответствии с разработанным паспортам имеет следующие характеристики: кулыурапьно-морфологачеекие признаки - на агаризованной среде Чапека и сусло-агаре образует колонии с хорошо развитым воздушным мицелием, сначала белым, затем розовеющим, при старении приобретающим охряно-коричневьге тона; физиологические признаки - сбраживает и ассимилирует сахара, усваивает уксусную, молочную, янтарную и лимонную кислоты, растет на аммонийном азоте; продукт, синтезируемый штаммом - обильный, быстрорастущий мицелий, содержащий БАВ в лнпидной н белковой фракциях и белок в количестве 40-42 %; активность (продуктивность) штамма - до 15 г сухого мицелия на 1л культуральной жидкости; устойчив к антибиотикам и фагам, лизирующнм клетки других штаммов того же вида грибов; не является генномодн-фнцированным, зоо- и фигопатогенным, не токсичен; культивируется на солодовом (6-7 Бал) сусло - агаре при 26°С 72 часа; поддерживается путем периодических пересевов (3-4 раза в год), культура хранится при 18-20°С.

Для оценки нового штамма как продуцента БАВ исследован (см. табл.1) химический состав биомассы (БМ), культуральной жидкости (КЖ) и автолизата мицелия (АМ). Показано, что в их состав входят все незаменимые аминокислоты, полный набор микро- н макроэлементов в виде органических соединений, комплекс витаминов группы В. Культуральная жидкость по сравнению с мицелием грнба содержит больше органических кислот (10,9 г/л): в том числе лимонной (0,5 г/л), яблочной (0,4 г/л), фумаровон (0,3 г/л), янтарной (0,5 г/л), щавелево-уксуснон (0,3 г/л), уксусной (0,5 г/л).

Таблица 1

Химический состав биомассы, культуральной жидкости и

автошпата мицелия триба

Показатели КЖ АМ БМ

1 2 3 4

Общий анализ (масс %)

Сухие вещества 1,5 76,8 93,1

Общий белок 2,5 46,3 47,5

Жиры 0,02 4,8 7,1

Углеводы 13,0 18,7 22,0

Макро- и микроэлементы (мг/г)

Калий 45,0 13,35 19,35

Натрий 17,5 5,88 1,25

Кальции 12,5 1,935 29,95

Магния 1,75 1,225 2,95

Железо 0,005 0,922 0,65

Медь 0,003 0,028 0,015

Цинк 0,03 0,062 0,043

Марганец 0,012 0,043 0,244

Азот 10 23,6 34,9

Фосфор 23 11.8 17,45

Никель 0,001 0,006 0,01

Кобальт 0,001 0,002

Свинец н/обн н/обн н/обн

Ртуть н/обн н/обн н/обн

Мышьяк н/обн н/обн н/обн

Аминокислоты (% АСВ)

Лизин 0,18 1,98 2,8

Гистидин 0,26 1,05 1,57

Аргинин 0Д7 2,01 2,2

Аспарагиновая кислота 0,41 3,17 3,25

Треонин 0,18 1,33 2,00

Серии 0,15 123 1,70

Пролив 0,36 1,15 1,59

Глицин 0,24 1,35 1,75

Алании 0,25 1,94 3,00

Продолжение таблицы 1

1 2 3 4

Цнстин 0,10 0,18 0,45

Ваяин 0,21 1,70 1,90

Метаояин 0,08 0,42 0,80

Изолейцин 0,16 1,25 1,37

Лейцин 0,18 2,10 2,25

Тирозин 0,01 1.11 1,40

Фенилаланин 0,11 1,25 1,81

Глютамивовая кислота 0,72 3,67 4,60

Сумма аминокислот 3,87 26,89 34,44

Витамины (мг/г)

В] (тиашша хлорид) 0,009 0,001 11,2

В} (рибофлавин) 0,11 0,088 60,0

Вз (пантетеновая ж-та) 0,06 0,145 305,0

Всхолил) н/обн н/обн следы

В; (никотиновая кислота) 9,60 0,087 49,5

Вв (пиридоксин) 0,05 0,008 15,0

Вэ (фолиевах кислота) 0,025 0,017 12,5

Вп(цианокобаламин) 0,020 0,0002 7.5

Н (биотан) следы 0,001 1,5

А (ретинол) н/обя н/обн н/обн

Е (токоферол) 0,031 0,032 ОД

Новый штамм гриба К вашЬисшшп МКР 2001-3 сравнивали с известным штаммом - Р. вашЬисшит РБ-64 (ВКПМ № Р-165) по продуктивным свойствам и способности КЖ гриба ускорять рост дрожжей. Установили, что масса мицелия, продуцируемая культурой гриба нового штамма, увеличилась на 25%, содержание белка - на 5,1%, углеводов - на 3,7% (в том числе гликанов на 6%); время накопления биомассы гриба сократилось на 2-4 часа. КЖ нового штамма более эффективно влияла на рост дрожжей Б. сегеушае {Иа^айсш ВКПМ - у -1218, чем КЖ штамма триба К затЪиопшп Рв-64: скорость роста увеличивалась на 37,3%, степень потребления Сахаров - на 33,7%, азота - на 34,8% (в пересчете на ЫН4 ), фосфора - на 35,9% (в пересчете на РгО}).

3.1.4. Характеристика шталта & сегехЫае (¿¡оШвсих) ВКПМ-у-1218. Селекция штамма проведена на гидролизных средах и смеси гидролизных и крахмалсодержа-пщх субстратах. Купьтурально-морфологаческне признаки - на сусло-агаре имеет вид округлых, гладких, тускло-блестящих, светло-кремовых колоний; устойчив к фагам, лнзирующим клетки других штаммов того же вида микроорганизмов; генетически не модифицирован; не патогенен для человека (СП 1.2.731-99), при работе не требует специальных мер предосторожности; культивируется на различных углевод- и

крахмалсодержащих средах при рН - 4,2-5,8 и температуре 30-32°С, способен накапливать биомассу на отходах зериопронзводства (зерно, отруби, мука).

Биомасса дрожжей исследуемого штамма исследована по химическому составу в сравнении с другими белковыми кормовыми добавками (см. табл. 2). По химическому составу и питательной ценности биомасса аналогична соевому н подсолнечному шротам, в отличие от других кормовых добавок содержала витамины Вп, А, Д, Е, С и К, по содержанию белка уступала только рыбной муке.

Таблица2

Состав различных белковых кормовых добавок

Показатель, единицы измерения Подсолнечн. шрот Соевый шрот Дрожжи кормовые Рыбная мука ВКПМ-у-1218

45 45 60 45

Клетчатка, % 15 7 1.5 1 8

Лизин, % 1,2 2,7 2,9 V 3,07

Метнонин, % 0,68 0,61 0,54 1,7 1,13

Триптофан, % 0,45 0,59 0,62 0,60 0,37

Фосфор, % 0,9 0,63 1,32 3,5 0,88

Вь мг/кг 3,2 3,1 16 1 38,7

Вз, мг/кг зд 3,8 40 11 239,4

В?, мг/кг 13 16 60 17 67,8

Ва .мг/кг 2300 2500 2800 3500 1040

В5, мг/кг 240 40 250 90 234

В<5. мг/кг 11 5 30 4 29

Вп, мг/кг _ - - - 34

А. мг/кг _ - - - 88,5

Д, мг/кг _ - - - 119,2

Е. мг/кг _ - - - 585

С. мг/кг - - - 168

К, мг/кг - - - 0,45

Обменная энергия, 26/0 2500 2800 2810 2890

Переваримость белка. % 86 90 88 90 86.5

Таким образом, выбранные штаммы отвечают предъявляемым к ним требованиям и могут служить продуцентами при разработке препаратов пробнотиков, пре-биотнков и кормовых добавок с пребиотнческнми свойствами.

3.2. Изготовление н контроль посевного материала.

Согласно современным требованиям (ГОСТ Р 52249-2009, ГОСТ Р 20012008) разработка системы изготовления и методов контроля посевного материала, используемого в технологическом процессе производства биопрепаратов, является обязательным условием обеспечения их качества. Реализация стандартной процедуры изготовления и контроля посевного материала позволяет: 1) гарантировать

идентичность исходному пггамму характеристик н свойств материала, используемого для изготовления конечного продукта; 2) определить методы контроля безопасности, активности и стабильности препарата; 3) включить данную процедуру в виде самостоятельного документа в технологические регламенты производства. В отечественной практике разработки н производства лекарственных средств для ветеринарии н кормовых добавок для животных системный подход к данной процедуре не имеет широкого распространения, поэтому его реализация является актуальной.

Система посевных материалов (Seed Lot System, S.L.S.) - это технологическая система, в которой последовательные серии промежуточных продуктов (вирусной или микробиологической природы) получают посредством установленного количества пересевов (пассажей). Она состоит из главного (Master Seed, M.S.), рабочего (Working Seed, W.S.) и производственного (Production Seed, P.S.) посевного материала, предназначенного только для производства серии конечной продукции. Последовательность получения посевного материала: Master Seed -* Woiking Seed —* Production Seed. Для изготовления небольших объемов продукции допускается использовать непосредственно рабочий посевной материал.

Микроорганизмы выбранных штаммов-продуцентов культивировали в соответствии с условиями, указанными в паспорте на данный штамм. Полученные культуры контролировали мнкроскопированием на отсутствие посторонней микрофлоры и подлинность (культурально-морфологические признаки), стабилизировали путем сублимационного высушивания с защитной средой ОМ (M.S. - в ампулах по 1 см3, W.S. - в пенициллиновых флаконах по 2 см3) по режимам, разработанным при участии доктора биологических наук A.A. Нежуты. Готовый посевной материал (MS. и W.S.) контролировали по показателям подлинности, безопасности и активности, a M.S. - дополнительно на соответствие основным характеристикам штамма. Для характеристики безопасности определяли: контаминацию посторонней бактериальной и грибковой микрофлорой, безвредность для цыплят суточного возраста и токсичность для развивающихся SPF-эмбрнонов кур (РЭК) с использованием разработанного нами теста эмбрнотокснчности. Активность пробнотиков оценивали по количеству жизнеспособных бактерий, антагонистической активности in vitro, резистентности к антибиотикам. Полученные серии хранили: M.S. - 5 лет при температуре < - 40°С, W.S. - 18 месяцев при температуре 8-10°С.

3.2.1. Посевной материал L. acidophilus для пробиотика АВИЛАКТ-1К M.S. представлял собой 2-й пассаж коллекционного штамма, W.S. - 3-й пассаж M.S. Изготовлено 300 ампул сернн M.S. и 3 серии W.S. по 300 флаконов каждая. Одна серия W.S. использована в качестве лабораторного рабочего эталонного материала (ЛРЭМ) для стандартизации определения количества жизнеспособных лактобакгерий и исследования их термостабнльностн. Контроль изготовленных серий M.S.H W.S. показал: 1) отсутствие контаминации посторонней микрофлорой; 2) отсутствие эмбрнотокснчноега; 3) безвредность для цыплят суточного возраста (прн однократном выпаивании дозы препарата, составляющей 0,5 и 1,0% суточного количества корма); 4) соответствие показателей активности характеристикам, определенным д ля коллекционного штамма; количество жизнеспособных лактобакгерий составило не менее 5,0x10s КОЕ/г. Для M.S. установлено соответствие паспортным характеристикам по культурально-морфолопиеаснм пршнакам н чувствительности лактобакгерий к действию желудочного сока и желчи.

3.2.2. Посевной материал В. sublilis для пробиотика АВИСУБТИЛ. M.S. -2-й пассаж коллекционного штамма, W.S. - 2-й пассаж M.S. Изготовлено 300 ампул серии M.S. и 2 сернн по W.S. по 300 флахонов. Контроль изготовленных серий M.S.h W.S. показал: 1) нх безопасность; 2) соответствие показателей активности характеристикам, определенным для коллекционного штамма; количество жизнеспособных бактерий - не менее 5хЮ®КОЕ/г. M.S. дополнительно контролировали на соответствие паспортным характеристикам штамма и отсутствие токснгенно-стн, вирулентности, острой н хронической токсичности по методикам, использованным прн характеристике штамма.

3.2.3. Посевной материал F. sambucinum для пребиотика АБИСТНМ. M.S. - 2-й пассаж коллекционного штамма, W.S. - 2-й пассаж M.S. Изготовлено 300 ампул серии M.S. и 2 сернн W.S. по 300 флаконов. Готовый посевной материал (M.S. и W.S.) контролировали по культурально-морфологнческнм признакам, содержанию сырого протеина в биомассе, активности (продуктивности) штамма и показателям безопасности. Культуральную жидкость (КЖ) M.S. характеризовали по содержанию органических кислот, сухнх веществ, величине рН. Безопасность КЖ дополнительно характеризовали по потенциальному раздражающему действию на слизистые оболочки ЖКТ с использованием ХЕТ-КАМ теста в нашей модификации.

Контроль серий M.S. н W.S. показал: 1) соответствие культурально-морфологнческнх признаков паспортным данным; 2) безопасность; 3) содержание белка в биомассе 40,7 и 41,3 % для M.S, и W.S. соответственно; 4) продуктивность - 14,1 и 13,8 г мнцелня/1 л КЖ. При контроле ОС установлено: 1) безопасность; 2) высокое содержание органических кислот - 10,1 г/я (в том числе лимон-нон - 0,7 г/л, яблочной - 0,5 г/л, фумаровой - 0,4 г/л, янтарной - 0,4 г/л, щавелево-укеусной - 0,6 г/л, уксусной - 0,8 г/л); 3) содержание сухих веществ 2,5 -3,1% АСВ; 4)рН в пределах 6,6-7,0.

3.2.4. Посевной материал S. cerevisiae для кормовой белковой добавки ЦЕРЕ-ВЕТ. M.S. - 2-й пассаж коллекционного штамма, W.S. - 3-й пассаж M.S. На базе ФГУП ГосНннСннтезбелок готовый посевной материал (M.S. и W.S.) контролировали: 1) по химическому составу (содержание в сухом продукте сырого протеина, истинного белка, лнпндов, углеводов, золы); 2) на подлинность (вультуралыю-морфопогаческне признаки) н содержание дрожжевых клеток (мнкроскопнрованнем и посевом на плотную питательную среду); 3) безопасность (отсутствие посторонней микрофлоры, безвредность для цыплят суточного возраста, отсутствие эм-брнотокснчности и токсичности для тест-культур инфузорий тетрахнмена пнри-формнс н стнлоннхнй). Результаты контроля серий M.S. и W.S. показали: подлинность; безопасность; содержание дрожжевых клеток 5,0x10® н 4,8x10е / г для M.S. н W.S. соответственно; соответствие химического состава характеристикам, определенным для коллекционного штамма (массовая доля сырого протеина - не менее 38%, истинного белка - не менее 28% , лнпндов - не более 10%, углеводов -не более 28%, золы - не более 12%).

Разработанная и реализованная система изготовления и контроля посевных материалов обеспечивала их соответствие исходным штаммам и гарантировала получение конечного продукта с заданными свойствами. На процедуры изготовления и контроля посевных материалов разработаны н утверждены директором ВНИТИБП соответствующие стандарты организации (СТО).

3.3. Технология производства н доклинические исследования препаратов (пробпотнков ЛВ11ЛАКТ-1К, АВИСУБТИЛ, пребпотпка АВИСТИМ н белковой кормовой добавки ЦЕРЕВЕТ), изготовление опытных серий.

3.3.1. Разработка технологии производства препаратов.

Процесс изготовления препаратов является типовым для микробиологических производств н подчиняется обшей технологической схеме, состоящей из основных технологических процессов (ГП), подготовительных (ПР) н вспомогатель-

ных (BP) работ. ПР включали подготовку воздуха, помещении, оборудования, одежды, посуды, инструментов, материалов первичной упаковки, укупорнвання и этнкетнровання. BP - получение производственного посевного материала (P.S.), приготовление питательных сред, вспомогательных растворов. ТП состояли из этапов приготовления питательной среды и культивирования бактерий в биореакторе, фасования, сублимационного высушивания (при получении сухой формы), укупорнвання и этнкетнровання препарата. Качество препаратов в процессе производства обеспечивали системой технологического контроля. Для разработки схемы контроля устанавливали контрольные точки (КГ), показатели, определяемые в этих точках, их допустимые пределы и методы определения. Качество готового продукта контролировали по показателям, определенным нами при изготовлении посевных серий. Определены требования к качеству исходных материалов и промежуточных продуктов, к обеспечению безопасности производства н персонала, охране окружающей среды.

С целью унификации процесса культивирования штаммов-продуцентов нами исследована возможность кулынвнровання микроорганизмов с использованием универсальной питательной среды на основе ферменголнзата отходов зерносы-рья.

3.3.1.1. Технология изготовления пробиотиков АВИЛАКТ-1К и АВИСШМ

Культивирование L. acidophilus и В. subtilis. Посевной материал (P.S.) для культивирования бактерий в бнореакгоре получали из рабочей посевной серии (W.S.) при выращивании в колбах с питательной средой на основе молочной сыворотки (МС) или ферменголнзата отходов зерносырья (ФЗ).

Состав среды МС: сухая молочная сыворотка - ЗОг; (NHO2SO4-5,0 г; КН2Р04 - 3,0 г, дрожжевой автолизат - 0,01 дм3; вода водопроводная - 1,0 дм3. Характеристика среды после стерилизации (0,5 атм 30 мни): редуцирующих веществ (РВ) -1,6%; NH, - 0,9 г/дм3; Р205 - 0,5 г/дм3.

Состав среды ФЗ: (NH4)2S04- 5,0 г; КН2Р04 - 2,0 г, дрожжевой автолизат - 10 см3, мел - 3 г; ферменголнзат отходов зерносырья - 1,0 дм3. Среду стерилизовали при 1 aiM 40 мни. Для получения ферменголнзата смесь измельченной ржи и пшеничных отрубей (в соотношении 30:70) разбавляли водой (гидромодуль 1:6 или 1:8) н подвергали последовательно: термообработке при температуре 80±1°С -1ч; обработке в роторно-пульсационном аппарате при температуре 75±1°С - 40 мин; ферменголнзу зерновой пульпы глюкавамарииом ГЗХ при температуре 55±1°С - 4

ч при рН 5,0-5,2. Среду стерилизовали при 1 атм 40 мни. Характеристика среды после стерилизации: редуцирующих веществ РВ - 2,5-3,0%; NH, - 0,9 -1,0 г/дм3; Р205-0,4-0,5 г/дм3.

Для получения P.S L. acidophilus культивировали в термостате при температуре 37±0,5°С в течение 70-72 ч (перемешивание каждые 12 ч), B.subtilLs - на качали® (g=200 об/мии) при температуре 37±1°С в течение 40-48 ч. После окончания процесса состояние каждой кулыуры контролировали микроскопированием на отсутствие посторонней микрофлоры и соответствие культрально-морфоло-гаческнм признакам; определяли накопление клеток, которое было одинаковым для обеих сред и составляло для L. acidophilus 109-101° КОЕ/см3, для В. subtilis 10й-10й КОЕ/см3 (количество спор 40-60%). Полученный посевной материал использовали для культивирования бактерий в биореакторе (V=30 и 300 дм3).

Режим культивирования L. acidophilus в бнореакторе: количество P.S. составляло 8-10% от объема питательной среды ФЗ; температура - 31-32°С, время - 20-24 ч; перемешивание в течение первых двух часов (по 15 мин/ч, g=180 об/мин); начальное значение рН -7,0-7,2; при культивировании поддерживали рН на уровне 6,5-7,0 (6%-ной аммиачной водой). Конечная концентрация сухих веществ в биомассе - 10,0-12,0 г/дм3; концентрация Сахаров в среде снижалась до 0,2%. Накопление лактобактерий - не менее 5x10® КОЕ/см3.

Режим культивирования B.subtilis в бнореакторе: объем посевного материала -5-6%; температура - 37-38°С, время 36-48 ч; перемешивание мешалкой (300 об/мин); аэрация (1 дм3 воздуха/1 дм3 среды/мин.); начальное значение рН 7,0-7,2, в процессе культивирования величина рН не регулировалась. Конечная концентрация бактерий не менее - 5x1010 КОЕ/см3, количество спор 40-50%.

Состояние культур бактерий контролировали микроскопированием.

Изготовление готовых форм препаратов. Для пробнотиков разработано две готовые формы - жидкая и сухая. После культивирования и контроля качества продукт в первом случае фасовали в первичную тару и укупоривали, во втором — фасовали в кассеты и подвергали сублимационному высушиванию по режимам, разработанным для двух питательных сред: МС и ФЗ. Количество живых бактерий L. acidophilus и В. subtilis в суком материале составляло не менее ЗхЮ9КОЕ/г н 5хЮ10КОЕ/г соответственно. Жидкий препарат расфасовывали в стеклянную или полиэтиленовую тару, предназначенную для лекарственных средств и пищевых продуктов. Сухой препарат расфасовывали в полимерные пакеты.

3.3.1.2. Технология производства пребиотика АВИСТИМ.

Культивирование К затЬистит. Посевной материал (Р.в.) получали культивированием в колбах со средой МС или ФЗ при температуре 2б±1°С на качалке (¿=160 об/мин). Время культивирования пассажей: первого — 96 часов, второго — 48 часов, третьего н последующих — 24 часа. Контролировали микроскопнрованнем состояние культуры, определяли накопление биомассы - 5-6 г/дм3 (одинаковое для обеих сред) н использовали для культивирования в бнореакторе при следующих параметрах: обьем Р.в. - 2-4%; температура - 27±2°С; время - 30-34 ч; перемешивание постоянное (¿=120 об/мни); барботаж воздухом (при 1,1 атм); остаточное давление 0,25 атм; начальное значение рН 5,5-6,0; процесс заканчивали при снижении рН до 4,1±0,5. Через 12 часов после начала процесса отбирали пробы (1 раз каждые 3 часа) для определения рН среды, концентрации биомассы, контроля состояния мицелия. После окончания процесса культуральную среду подкисляли до рН 3,0-3,5 н выдерживали в течение 1-3 ч. Концентрация биомассы составляла 1012 г/дм3, содержание белка - 46-53%.

Получение готовой формы препарата. КЖ отделяли от биомассы фильтрацией на иутч-фнльтрах (фильтрующая ткань типа лавсана, разрежение 0,05-0,07 МПа, скорость 90-110 л/кЙшш.), подвергали стерилизующей фильтрации и расфасовывали в стеклянную или полиэтиленовую тару.

3.3.1.3. Технология производства белковой кормовой добавки ЦЕРЕВЕТ.

Культивирование дрожжей-сахаромицетов. Посевной материал (Р.в.) культивировали в колбах со средой МС или ФЗ на качалке (§=160 об/мин.) при температуре 33±1°С и рН 4,5-5,5 в течение 24-36 ч до полного потребления свободных углеводов. Контролировали состояние культуры, определяли концентрацию биомассы (23-25 г/дм3), содержание остаточных РВ в культуральной среде (0,1-0,2%) н использовали для культивирования в биореакторе при следующих параметрах: объем посевного материала - 4-5%; начальное значение рН 5,(Ш),5; температура -31±1°С; время - 18-19 ч; постоянное перемешивание ^=120 об/мин), аэрация (1 дм3 воздуха/1 дм3 среды, расход воздуха 7-9 м^час); конечная концентрация биомассы - 20-25 г/дм3, содержание РВ в среде - 0,1-0,2%.

В качестве бнокаталшатора при культивировании дрожжей в бнореакторе использовали КЖ гриба, которую добавляли в ферментолнзат в количестве 0,1-1,0% от объема среды- При добавлении КЖ в питательную среду совращалось время

накопления биомассы с 19 до 10 часов, увеличивалась скорость потребления Сахаров (на 32,1%), минерального азота (на 21,5%) н фосфора (на 45,4%).

Получение готовой формы препарата. Биомассу подвергали плазмолизу при 80° С в течение 1 ч, контролировали на отсутствие живых клеток н сушили на распылительной сушилке типа Niro Atomizer (температура на входе — 130° С, на выходе - 95°С). В сухом продукте содержание сырого протеина составляло 4045%, истинного белка - 30-38%. Препарат фасовали в полимерные пакеты.

3.3.2. Разработка схемы доклинических исследований (Д11) препаратов.

Исходя из общих требований к проведению ДИ, нами разработана для данного класса препаратов схема ДИ по основным показателям - безопасности, специфической активности и стабильности. Определена номенклатура показателей, методы их определения н допустимые значения. Исследования выполняли с использованием лабораторных рабочих эталонных материалов (ЛРЭМ).

3.3.2.1. Определение безопасности. В качестве критериев оценки безопасности нами определены: отсутствие контаминации препарата посторонней микрофлорой, отсутствие токсичности для эмбрионов кур и безвредность для цыплят суточного возраста, т.к. разрабатываемые препараты предназначены для птицы. КЖ гриба впервые использована в качестве пребнотнка для птиц, поэтому для нее введен дополнительный контроль - отсутствие потенциального раздражающего действия на слизистые оболочки ЖКТ птицы. Требования к кормовой добавке ЦЕРЕВЕТ гармонизировали с существующей в РФ базой нормативных документов (НД) на кормовые добавки (в том числе и кормовые дрожжи), для чего введены контролн на отсутствие металломапгатных примесей и живых клеток дрожжей, а контроль на отсутствие контаминации посторонней микрофлорой заменен на определение общей бактериальной обсемененности н исследование токсичности экспресс-методами с использованием инфузорий.

Токсичность для куриных эмбрионов (тест эмбриотокстности). Развивающиеся эмбрионы кур (РЭК) занимают среднее положение по чувствительности к токсическим веществам между лабораторными животными н культурой клеток и являются удобной моделью для оценки острой токсичности. Нами разработан и использован в ДИ тест эмбрнотокснчностн - экспресс-тест, принцип которого заключается в следующем: 9-10 суточным SPF-эмбрнонам в аллантонсную полость вводят 0,1-0,2 см3 препарата и инкубируют прн температуре 37+0,5°С до вывода цыплят, учитывая раз в сутки количество погибших эмбрионов. Критерием эм-

бриотокснчности препарата является эмбриональная смертность, суммированная по всем дням инкубации, а также состояние вылупившихся цыплят (отсутствие уродств и внешних патологий). Контроль - интактные и инокулированные физиологическим раствором (ФР) по 0,1-0,2 см3 эмбрионы.

Потенциальное раздражающее действие на слизистые оболочки ЖКГ. Для определения потенциального раздражающего действия КЖ на слизистые оболочки ЖКТ птицы использовали ХЕТ-КАМ тест в нашей модификации. Принцип ХЕТ-КАМ теста: раздражающее действие исследуемого вещества моделируется на хо-рноаллантонсной оболочке (ХАО) 9-10 суточных развивающихся БРЕ-эмбрионов кур (А.С. Лукьянов, 1998). На ХАО наносят 0,5 см3 испытуемого раствора н наблюдают с помощью бинокулярного микроскопа за состоянием оболочки под каплей раствора. При отсутствии раздражающего действия за период наблюдения (1-3 мнн) оболочка не должна нарушаться, сеть кровеносных сосудов и капилляров должна функционировать нормально. Изменения на оболочке могут выражаться в замедлении тока крови н тромбозе отдельных капилляров, покраснении оболочки или выходе из капилляров форменных элементов кровн, остановке кровотока. Исследуемые в данной работе объекты, в целом, можно отнести к нетоксичным соединениям, которые не могут обладать сильным раздражающим действием, поэтому тест нами модифицирован: 1) при наблюдении за изменениями на ХАО выбирали поле с мелкими сосудами и капиллярами; 2) время наблюдения увеличили до 10 минут; 3) реакцию считали положительной (+), если изменения наступали через 3-5 минут наблюдения; слабоположительной (+-) при наблюдении изменений в интервале 5-10 минут; отрицательной, если изменения не наступали в течение 10 мину. Состояние ХАО фотографировали. В качестве положительного контроля использовали 70%-ный этиловый спирт, обладающий выраженным раздражающим действием на слизистые, отрицательного кошроля - физиологический раствор, не раздражающий слизистые.

Определение безвредности для суточных цыплят. Суточным цыплятам-бройлерам перорально однократно вводили препараты АВИЛАКТ-1К и АВИ-СУБТИЛ (по 10® н Ю10 КОЕ/гол. соответственно); АВИСТИМ выпаивали в дозе, равной 16 суточного объема вода; ЦЕРЕВЕТ скармливали (3% от суточной нормы корма). Цыплят наблюдали в течение 10 суток, регистрируя состояние (активность, аппетит, динамику массы, поведенческие реакции) и уровень падежа.

3.3.2,2. Определение специфической активности. Специфическую активность пробнотнков оценивали по подлинности, количеству жизнеспособных микроорганизмов, антагонистической активности in vitro и in vivo, резистентности к антибиотикам. Для биологически активных добавок (в частности пребнотнков), которые являюстя полнкомпонентнымн по своему составу и полнфункциональными по механизму действия, в настоящее время не существует общепринятых подходов к определению показателей их специфической активности. Нами определены интегральные показатели состава и определяемого им физиологического действия. Благодаря своему составу КЖ может обладать ашпоксидантным действием, которое является одним то антистрессовых механизмов, его величина (антноксндант-ная активность - АА) может служить показателем специфической активности препарата. Поэтому для характеристики пребнотнка выбраны следующие показатели: содержание сухих веществ, величина рН и АА. Специфическую активность кормовых добавок характеризовали по питательной ценности, которая, согласно НД на кормовые добавки, определяется содержанием в них белка, углеводов, лнпндов, а также сухих веществ.

Определение подлинности бактерий-пробиотиков устанавливали общепринятым методом окрашивания мазков по Граму.

Количество жизнеспособных микроорганизмов в препаратах АВИЛАКТ-1К и АВИСУБТИЛ определяли стандартным методом подсчета колоний. Метод характеризуется большим разбросом данных, поэтому проведена стандартизация условий определения количества жизнеспособных лактобакгернн по разработанной нами и утвержденной директором ВНИТИБП «Методике построения гистограмм для оценки стабильности и точности технологических процессов и операций». По результатам статистической обработки многократного (п = 68) определения количества жизнеспособных яакгобакгерий в образцах ЛРЭМ построена гистограмма распределения данных, определено среднее значение количества жизнеспособных бактерий (X) и его среднеквадратичное отклонение (s): x±s = (8,7 ± 0,5)х10® КОЕ/см3. Характер гистограммы свидетельствовал о нормальном характере распределения данных и, следовательно, о стабильности результатов определения показателя в контролируемых сериях препарата. Если полученное для ЛРЭМ значение количества жизнеспособных яакгобакгерий укладывалось в интервал (8,7 ± 0,5)х10® КОЕ/см3, то условия определения считали стандартными, а полученное

значение в контролируемой серии - достоверным при указанной величине ошибки определения.

Определение антагонистической активности (АнтА) препаратов АВИЛАКТ-J К и АВИСУБТИЛ по отношению к патогенными и условно-патогенным микроорганизмам в опытах in vitro. По данным, полученным при характеристике штаммов и контроле посевных материалов, установлены минимально допустимые значения АнтА для L. acidophilus (зона задержки роста эшерихнй - не менее 7 мм, сальмонелл — не менее б мм) н В. subtilis (зона задержки роста эшерихнй — не менее 15 мм, сальмонелл - не менее 10 мм). Для стандартизации условий определения АнтА использовали образцы ЛРЭМ. Если в контролируемой серии получали значения АнтА ниже заданных показателен, проводили повторное исследование параллельно с образцом ЛРЭМ. При подтверждении полученного результата серию считали не прошедшей контроль по данному показателю. Наличие антагонистической активности препаратов, установленное в опытах in vitro, подтверждено исследованиями АнтА в опытах in vivo.

Определение антагонистической активности пробиотиков в опытах in vivo. Величину АнтА определяли по выживаемости цыплят при контрольном заражении патогенным изолятом Е. coli, выделенным в ЭПХ из организма больной птицы. Работа по выделению нзоляга н определению его патогенности для мышей (500 млн.кл./гол.) проведена совместно с ВГНКИ ветпрепаратов. Для цыплят 10-суточного возраста при внутримышечном введении 10-кратных разведений культуры E.coli определили летальную дозу (LD^/cm3) и ее доверительный интервал (Р< 0,05) для контрольной группы (К) и групп, получавших L. acidophilus н B.subtilis (JI и Б соответственно): lg LD30/cm3 (К) = - 2,9 + 0,2; lg LDso/см3 (Л) = -2,4 ± 0,2 и lg LDso/см3 (Б) = - 1,9 ± 0,2. Увеличение величины LD50/CM3 при применении пробиотиков подтвердило, что препараты обладали антагонистической активностью по отношению к патогенной культуре Е. coli.

Определение резистентности препаратов АВИЛАКТ-1К и АВИСУБТИЛ к антибиотикам. Для стандартизации условий определения резистентность препаратов сравнивали со значениями, полученными при характеристике штамма-продуцента и контроле посевных материалов. Если получаемые значения были ниже заданных показателен, проводили повторное исследование параллельно с образцом ЛРЭМ.

Определение антиоксидантной активности (АА) пребиотика АВИС1ИМ С помощью прибора «Яуза-ААА-01» на базе ОАО «НПО Хнмавтоматнка» нами исследована АА трех образцов КЖ, полученных при изготовлении посевного материала, в сравнении с маркером днгндрокверцетином. Препарат АВИСТИМ обладал выраженной ангаоксидаигной активностью, превышающей АА маркера в 5,55,9 раза.

Для стандартизации состава пребиотика АВИСТИМ общепринятыми методами определили содержание в КЖ сухих веществ (ГОСТ Р 52838) - не менее 2,5% и величину рН (ОФС 42-0048-07, ХП изд. Гос. Фармакопеи РФ) - 6,6-7,0.

Состав кормовой добавки ЦЕРЕВЕТ стандартизовали по минимально допустимому содержанию белка (38% АСВ) н максимально допустимому содержанию лнпидов (10%) и углеводов (28%). Сравнение химического состава ЦЕРЕВЕ-Та и аналогичной лечебно-профилакгаческой добавки «Естур» (США) показало, что ЦЕРЕВЕТ содержал больше белка (на 36,3%), макро- и микроэлементов (фосфора - на 13,8%, кальция - на 39,4%, железа - в 3 раза, марганца - в 2,8 раза) и аминокислот (лизина, аргинина, фенилаланнна, треонина и триптофана - в 1,5-2 раза).

3.3.2.3. Определение стабильности препаратов. Стабильность препаратов оценивали с целью определения их сроков годности н условий хранения.

Исследование стабильности препарата АВИЛАКТ-1К. На образцах ЛРЭМ определяли сохранность живых бактерий (в жидкой и сухой формах) при повышенных температурах (термостабильность) и при длительном хранении. Исследование термостабильностн осуществляли согласно разработанным с нашим участием «Методическим рекомендациям по исследованию стабильности нммунобноп-репаратов на этапе разработки и в условиях действующего производства».

Исследование термостабильностн жидкой формы препарата. При прогревании жцдкнх образцов трех серий препарата в течение 15 мин при температурах 40-, 45-, 50-, 55- н 60°С установлено, что при 50°С в течение 15 мин количество живых клеток снижалось в среднем на 52%, поэтому при 50°С исследовали кинетику инактивации бактерий в течение 5-, 10-, 15-, 20-, 25- и 30 мин. Статистическая обработка показала, что снижение количества жизнеспособных бактерий в суспензии зависело от продолжительности теплового воздействия и описывалось (коэффициент корреляции г*= -0,92) кинетическим уравнением первого порядка:

1§У = 1ёУо—ки

где: у0 - исходная активность препарата; у - величина активности через время I; К - константа скорости ннактнвацин (сек').

Рассчитана величина Кт = -1,6x10"3 сек"1. В качестве экспресс-теста оценки стабильности препарата АВИЛАКТ-1К в жидкой форме рекомендован тест «ускоренного старения» - 50°С в течение 15 мнн.

Исследование термостабнльностн сухого препарата проводили по аналогичной схеме. При 60°С в течение 30 мин количество живых клеток снижалось, в среднем, на 44,4%. Прн температуре 60°С (10-, 20-, 25-, 30-, 40- н 50 минут) исследовали кинетику ннактнващш бактерий. Показано, что, как н для жидкого препарата, снижение количества жизнеспособных бактерий в суспензии имело линейный характер (коэффициент корреляции г*= -0,93). Рассчитана величина Кт=-3,8х10'4 сек1 и определены условия теста «ускоренного старения» для препарата в сухой форме - 60°С в течение 30 мнн.

Стабильность препарата прн хранении определяли по снижению количества живых лактобактерни в течение 12 месяцев прн 8-10°С и прн 18-20°С. Установлено, что с учетом определенной нами ошибки титрования (±0,5 ^ КОЕ/см3) достоверное снижение количества жизнеспособных лактобактернй в препарате начиналось: для жидкой формы через 4 месяца хранения прн 8-10°С н через 1 месяц - прн 18-20°С; для сухой формы - через 10 месяцев хранения прн 8-10°С н через 4 месяца - при 18-20°С. Исходя то этого, определен срок годности жидкого препарата -Змесяца, сухого препарата - 9 месяцев прн температуре хранения 8-10°С.

Исследование стабильности препарата АЗИСУБШЛ. Стабильность препарата определяли по снижению количества живых бактерий прн 8-10°С н 18-20°С в течение 12мес. Показано, что жизнеспособность бактерий в препарате достоверно сохранялась: для жидкой формы в течение 10 месяцев хранения прн 8-10°С н 8 месяцев - прн 18-20°С; для сухой формы в течение 12 месяцев хранения прн 8-10°С и 18-20°С. Установлен срок годности жидкого препарата - 9 месяцев, сухого препарата - 12 месяцев при 8-10°С.

Исследование стабильности препарата АВИСТИМ. Стабильность препарата оценивали по отсутствию осадка в течение 12 месяцев хранения прн температуре 8-10°С. Осадок появлялся через 4-5 месяцев, рН препарата за этот период не менялся. Определен срок хранения препарата - 3 месяца прн 8-10°С.

Срок и условия хранения препарата ЦЕРЕВЕТ установлены согласно аналогичным требованиям, заложенным в нормативную документацию на родственные препараты кормовых дрожжей (ГОСТ 20083-74): 6 месяца при 8-10°С.

3.3.3. Изготовление и контроль опытно-промышленных серий препаратов АВИЛАКТ-1К, АВИСУБТШ, АВИСТИМ и ЦЕРЕВЕТ.

По разработанной технологии в условиях опытного производства ВНИТИБП изготовлено: 17 серий пробнотнка АВИЛАКТ-1К (7 серий в жидкой форме и 10 серий - в сухой); 13 серий пробиопжа АВИСУБТИЛ (7 серий в жидкой форме и б серий - в сухой); 7 серий пребнотнка АВИСТИМ; 8 серий белковой кормовой добавки ЦЕРЕВЕТ. Все серии прошли ДИ в соответствии с разработанной схемой. Полученные результаты контроля по всем показателям соответствовали установленным нормам, что свидетельствовало о воспроизводимости разработанной технологии. Разработаны н утверждены в установленном порядке технологические регламенты производства и стандарты организации (ТУ).

3.4. Определение эффективности сннбвотяков АВИЛАКТ-ФОРТЕ и ЛАКТОСУБТИЛ-ФОРТЕ при выращивании цыплят-бройлеров.

АВИЛАКТ-ФОРТЕ - синбиотический комплекс, включающий пробнотнк АВИЛАКТ-1К и пребнотик АВИСТИМ; ЛАКТОСУБТИЛ-ФОРТЕ - синбиотический комплекс, включающий пробиотнкн АВИЛАКТ-1К н АВИСУБТИЛ, а также белковую кормовую добавку ЦЕРЕВЕТ.

Испытания (21 опыт и 2 производственных испытания) проводили на цыплятах — бройлерах (общее поголовье — 10 ООО голов) кроссов «Конкурент-2» и «Смена» (период выращивания до 49-дневного возраста), «Кобб - 500» и «Кобб -авиан-48» (период выращивания до 35-дневного возраста).

3.4.1. Эффективность синбиотика АВИЛАКТ-ФОРТЕ при выращивании цыплят-бройлеров кросса «Конкурент-2».

Исследования осуществляли по следующей схеме: определение дозы, количества н длительности курсов применения пробнотнка АВИЛАКТ-1К в жидкой н сухой форме; исследование эффективности пробнотнка АВИЛАКТ-1К в сравнении с «Лактобактернном» н «Бифндум СЖК»; определение дозы пребнотнка АВИСТИМ; исследование пребиотических свойств препарата АВИСТИМ и биомассы гриба Р. зашЬисшиш; определение схемы применения синбиотика АВИЛАКТ-ФОРТЕ; определение эффективности синбиотика АВИЛАКТ-ФОРТЕ при клеточном н напольном способах содержания птицы, а также при совместном

применении с другими антибактериальными средствами (органическими кислотами н кормовым антибиотиком).

Определение дозы, количества и длительности курсов применения пробио-тика АВИЛАКТ-1К в жидкой и сухой форме. При определении дозы пробнотика (1,0; 0,5; 0,1; 0,05 см3/гол. в сутки в течение всего периода выращивания) достоверно (Р<0,05, п=40) установлено (см. рис. 4, опыт 1), что доза препарата 0,1 см3 /гол./сут (107 КОЕ/гол./сут.) наиболее эффективна по динамике роста живой массы, затратам корма н европейскому индексу продуктивности (ЕНП).

ОПЫ11 ont.it 2 ояытЗ

Рис. 4. Эффективность препарата АВИЛАКТ-1К.

С использованием этой дозы определяли количество курсов применения: один курс (весь период выращивания) н два курса (1-7 и 21-28 дни). Получили одинаковое увеличение живой массы на 9,9% (Р<0,05) и снижение затрат корма на

3 ,3% по сравнению с контрольной группой, которую содержали на общем рационе (ОР). Таким образом, определена наиболее эффективная схема - доза 1х107 КОЕ/гол,/сут., применение двумя курсами - 1-7 и 21-28 дни (см. рнс. 4, опыт 2).

Установили (см. рис. 4, опыт 3), что данная схема эффективна н при применении сухой формы препарата АВШ1АКТ-1К: живая масса увеличились на 10,4% (Р<0,05), ЕИП - на 27,7%, затраты корма уменьшились на 13,8%.

Исследование микрофлоры кишечника цыплят сразу после вывода не выявило наличия бактерий и грибов (цыпленок до первого получения воды н корма имел стерильный кишечник), поэтому необходимо применение пробнотнка с первого дня жизни. К концу содержания количество лактобактернй в кишечнике птицы, получавшей пробнотик, в 100 раз превышало этот показатель в контроле.

Исследование эффективности пробнотика АВИЛАКТ-1К в сравнении с «Лактобактерином» и «Бифидум СЖК». При применении по одинаковой схеме

(4х107 КОЕ/гол./суг. 1-7 и 21-28 дни) АВИЛАКГ-1К в болыпей степени способствовал увеличению живой массы, чем «Лакгобактернн» н «Бнфадум СЖК» (на 4,7 и 3,1% соответственно) н сохранности птнцы (на 2,5% в обоих случаях), снижению расхода корма (на 4,1 и 2,9%). Содержание лактобакгернй в кишечнике у цыплят, получавших АВИЛАКТ-1К, бьшо в 100 раз больше по сравнению с «Лакто-бактерином».

Определение дозы пребгютика АВИСТИМ При сравнении двух доз АВИ-СТИМа (50 и 10% от суточного количества воды) установлено, что доза 10% обеспечила наибольшие отличия от контрольной группы (увеличение живой массы на 15,4%, ЕИП - на 32,3%; снижение затрат корма на 10,5%).

Исследование пребиоттеских свойств препарата АВИСТИМ и биомассы гриба Р. хатЬистит. Установлено, что препарат АВИСТИМ по пребнотическнм свойствам не уступал более богатой по составу БМ гриба: их применение (в комплексе с пробиотнком) способствовало увеличению сохранности цыплят на 5%, прироста живой массы на 5,5 и 4,5% и уменьшению затрат корма на 7,8 н 6% соответственно по сравнению с контролем.

Схема применения синбиотика АВИЛАКТ- ФОРТЕ. Определена схема применения сннбиотнка АВИЛАКТ-ФОРТЕ: препараты применяют двумя курсами (17 и 21-28 дни выращивания) в дозе АВИЯАКТ-1К - 1хШ7КОЕ/пж./сут.; АВИСТИМ - 10% от суточной нормы воды в сутки. Исследование мясных качеств птицы показало: применение сннбнотика способствовало увеличению выхода съедобных частей в тушке на 1,0%, отношения съедобных частей к несъедобным на 1,1%; отношения массы мышц к массе костей - на 1,1%; уменьшению содержания жира в мясе груди и ног на 2,2% (по сравнению с контрольной группой).

Определение эффективности синбиотика АВИЛАКТ-ФОРТЕ при клеточном и напольном способах содержания птшрл. Оценивали эффективность сннбнотика АВИЛАКТ-ФОРТЕ при содержании птицы в клеточных батареях (200 голов) н на подстилке из опнлок (650 голов). Установлено, что сиибиотик эффективен как при клеточном, так и при напольном способах содержания: по сравнению с контролем живая масса увеличилась на 5,8 и 4,0%, сохранность на 2,5 и 7,5%, затраты корма сократились на 0,9 и 1,1%, содержание лактобакгернй првышало контрольную величину в 100 н 10 раз соответственно.

Определение эффективности синбиотика АВИЛАКТ-ФОРТЕ при совместном применении с другими антибактериальными средствами (органическими ки-

слотами и кормовым антибиотиком). В опытах по совместному применению сннбнотнка с органическими кислотами (молочной н препаратом Сал-карб) и кормовым антибиотиком флавомнцнном установлено (см. табл. 3), что добавление к сннбнотнку органических кислот достоверно не влияло на его эффективность; сннбнотнк снижал отрицательное влияние ангабнотика, был более эффективен н экономически выгоден (за счет более краткого курса применения), может служить альтернативой кормовым антибиотикам.

Таблица 3

Результаты определения эффективности сннбнотнка при совместном при-

менении с другими антибактериальными средствами

№ Показатель, ед. шмер. № группы* (п=40)

1 2 3 4 5 6(к)

1 Живая масса на 42 день, г (М±ш) 1689,16 ±30,03 1600,98 ±28,56 1599,32 ±42,11 1695,60 ±29,89 1638,18 ±25,81 1570,75 ±37,01

2 Сохранность на 42 день, % 97,5 90 9S 97,S 100 87,5

3 Затраты корма на 1 кг прироста, г 2,36 2,5 6 2,42 2,45 2,38 2,58

4 Содержание лахтобакгерий, КОЕ/см3 2,3x10° 9,6x10Э 2,3x1o5 9,1x1o3 5,3x104 1,0x10J

1 - АВИЛАКТ-ФОРТЕ; 2 - органические кислоты (OK); 3 - ОК+флавомищш (Ф); 4 - АВИЛАКТ-ФОРТЕ+ОК; 5 - АВШХАКТ-ФОРТЕ+ОК+Ф; 6 - контроль (ОР).

3.4.2. Эффективность синбиотика АВИЛАКТ-ФОРТЕ при выращивании цыплят-бройлеров кросса нКобб-500».

Разработка схемы применения синбиотика АВИЛАКГ-ФОРТЕ для цыплят-бройлеров кросса «Кобб-500». Проведено 2 опыта (по 40 гол. в группе) и производственные испытания (по 105 гол.). В первом опыте определили эффективную дозу пробношка АВИЛАКТ-1К (из трех - lxIO7, IxlO8, lxlO9 КОЕ/1 кг корма) при дозе пребиотнка - 10% от суточной нормы воды. Препараты применяли в 1-10 и 21-28 дни выращивания. При дозе lxlO9 КОЕ/кг корма живая масса бройлеров была выше на 3,3% (Р0,05), ЕИП выше на 3,4%, затраты корма ниже на 1,4% по сравнению с контролем.

Во втором опыте определяли количество курсов применения сннбнотнка

АВИЛАКТ-ФОРТЕ (доза пробнотика - lxlO9 КОЕ/кг корма): однократно (1-7 или

1-14 дни) н двукратно (1-7 и 21-28 дни). При двукратной схеме применения по

сравнению с контролем сохранность повысилась на 2,5%, живая масса - на 4,3%, ЕИП-на 9,3%, затраты корма снизились на 1,3%. В балансовом опыте, проведенном в 28-дневном возрасте, установлена тенденция к повышению в опытных группах переваримости сухого вещества, сырого протеина и сырого жира на 1,01,2%, 1,0-2,3% и 1,0-1,3% соответственно по сравнению с этими показателями в контрольной группе (без применения сннбиотика).

В производственных испытаниях определяли эффективность двух схем применения АВИЛАКТ ФОРТЕ: однократно в 1-7 дан (1 вариант) и двукратно в 17 н 21-28 дни (2 вариант). Дозировка препаратов одинакова для двух вариантов: пробиотнк АВШ1АКТ-1К - 1х109 КОЕ/кг корма, пребнотик АВИСТИМ - 10% от суточной нормы воды. Лучший результат получен для варианта 2 (см. табл. 4): по сравнению с контролем сохранность цыплят выше на 3,8%, затраты корма ниже на 3,8%, ЕИП выше на 25 единиц.

Таблица 4.

Результаты производственных испытаний эффективности АВИЛАКТ ФОРТЕ

Показатель Вариант

1 2 Контроль

Сохранность. % 98,1 98,1 94,3

Живая масса 1 гол., г (1- 37 дни) 2054,1 ± 33,6 2060,4 ±37,9 2049,3±3 5,1

Затраты корма на 1 кг прироста, кг 1,782 1,744 1,813

ЕИП 306 313 288

Определение эффективности комплекса АВИЛАКГ-ФОРТЕ при напольном способе содержания тпш/ы и при совместном применении с флавомицином. Снн-бнотик применяли двумя курсами. Как и для цыплят кросса «Конкурент-2», показана его эффективность при напольном содержании (опытная труппа - 450 голов, контроль - бройлеры в птичнике): увеличение живой массы на 12,4%, сохранности на 2,2%; снижение затрат корма на 4,2%. Результаты по совместному применению сннбиотика и флавошщина аналогичны результатам опыта для кросса «Конкурент-2»: сннбнотнк снижал отрицательное влияние антибиотика, был более эффективен и экономически выгоден (за счет более краткого курса применения), может служить альтернативой кормовым антибиотикам.

3.4.3. Влияние синбиотика АВПЛАКТ-ФОРТЕ и пробиотика АВИПАКТ-1Кна эффективность вакцинации птицы против ньюкаслской болезни (НБ).

Влияние пробиотика АВИЛАКТ-]К на эффективность вакцинации цыплят против НБ. Птицу (кросс «Смена», 2000 голов) в суточном возрасте вакцннирова-

лн аэрозольно в камере специальной конструкции с последующим применением АВИЛАКТ-1К (107КОЕ/гол./сутки, в 1-7 и 18-25 дни выращивания). Установлено, что применение пробнотика не оказывало отрицательного влияния на эффективность вакцинации клинически здоровой гггацы: средний (п=20) титр антигемагт-яютинннов (антн-ГА) у вакцинированных цыплят на 21 день наблюдения незначительно повышался (4,0 log2) по сравнению с контрольной (без применения пробнотика) группой (2,9 log2).

Исследовали влияние пробиотика на динамику роста живой массы шипы (2000 голов) после плановой вакцинации (в возрасте 14 дней). Применение пробиотика (107КОЕ/гол./сутки, в 1-7 и 18-25 дни) улучшало (М3,05) динамику увеличения живой массы вакцинированной птицы (см. рис. 5).

Рис. 5. Влияние пробнотика на динамику роста живой массы вакцинированной птицы (1- вакцинация с пробиотиком, 2 - вакцинация без пробиотика, 3 - контроль: без вакцинации и пробиотика).

Влияние стбиотика АВИЛАКТ-ФОРТЕ на эффективность ваюрмации пти-г{ы против НБ. Исследования проводили на клинически здоровой и переболевшей колибактериозом птиц, для чего моделировали экспериментальное заражение цыплят в возрасте б суток патогенным изолятом Е.соЦ, выделенным в данном хозяйстве. Выжившую после заражения птицу (120 голов) вакцинировали против НБ в возрасте 18 суток. Результаты показали (см. рис. б), что применение АВИЛАКТ-ФОРТЕ не оказывало отрицательного влияния на формирование уровня специфических антител к вирусу НБ у здоровой птицы, а при вакцинации переболевшей птицы способствовало повышению уровня специфических (к вирусу НБ) антител с 2,2 в контрольной группе (заражение Е.соН + вакцинация) до 4,4 1о§2 в опытной (заражение Е.соЦ + вакцинация + синбиотик). Повышение с помощью сннбио-

тнка эффективности вакцинации птицы против НБ в угрожающих по колнбакге-рнозу ситуациях является очень важным моментом, потому что в настоящее время в РФ колнбактерноз составляет 52% от общего числа инфекционных заболеваний птицы.

Рис. 6. Влияние синбиотика на эффективность вакцинации против НБ здоровой и переболевшей козибактериозом птицы.

3.4.4. Эффективность применения синбиотика ЛАКТОСУБТИЛ-ФОРТЕ при выращивании цыплят-бройлеров.

Исследования осуществляли по следующей схеме: определение эффективность кормовой добавки ЦЕРЕВЕТ; разработка схемы применения синбиотика.

Определение эффективности кормовой добавки ЦЕРЕВЕТ. На бройлерах (по 70 голов в группе) кросса «Кобб-500» исследовали влияние ЦЕРЕВЕТА на эффективность выращивания бройлеров по сравнению с кормовыми дрожжами (ГОСТ 20083-74). Доза препаратов была одинаковой - 3% от суточного рациона. Показано, что применение ЦЕРЕВЕТА способствовало (по сравнению с контролем - препаратом кормовых дрожжей) увеличению живой массы цыплят на 5% (Р<0,05 и среднесуточных привесов на 5,1%, снижению затрат корма на 6,9%, обеспечивало полную (100%) сохранность птицы.

Разработка схемы применения синбиотика ЛАКТОСУБТИЛ-ФОРТЕ. На цыплятах кросса «Кобб-авнан-48» провели 3 опыта (по 40 голов в каждой группе) и производственные испытания.

В первом опыте определяли эффективность препаратов АВИЛАКТ-1К и ЦЕ-РЕВЕТ при их совместном применении различными курсами: однократно (в 1-7 дан) н двукратно (1-7 и 21-28 дни, а также в 1-7 и 28-33 дни). АВИЛАКТ-1К напыляли на гранулы комбикорма ш расчета Ю8КОЕ/гол/сут., ЦЕРЕВЕТ смешивали с кормом - 1.5% от суточной дозы корма. Лучшие показатели получены при двукратном применении в 1-7 и 18-24 дни: повышение живой массы и среднесуточного прироста цыплят на 2,5 %, снижение затрат корма на 3% по сравнению с контролем, сохранность -100 %.

Во втором опыте испытывали эффективность пробнотнка АВИСУБТИЛ (напыление на гранулы комбикорма из расчета Ю9КОЕ/гол/сут.) и кормовой добавки ЦЕРЕВЕТ (1,5%) при их совместном применении теми же курсами. Лучшие результаты (Р<0,05) получены при двукратных схемах приема (в 1-7 и 18-24 дин, 1-7 н 28-33 днн): по сравнению с контролем живая масса цыплят была выше на 4,8%, конверсия корма - ниже на 1,5%. Сохранность поголовья составила 100 %.

В третьем опыте испытывали эффективность синонотнка - совместное применение препаратов АВИЛАКТ-1К, АВИСУБТИЛ и ЦЕРЕВЕТ теми же курсами и в таких же дозировках, как в опытах 1 н 2. Наиболее эффективным было двукратное применение в 1-7 и 21-28 дни: увеличение живой массы и снижение затрат корма на 3,7% (по сравнению с контролем) при 100%-нон сохранности птнцы. ЕИП составил 286 единиц (в контроле - 259).

В производственных испытаниях (по 100 голов в каждой группе) дозировку пробнотнков в составе комплекса уменьшили в два раза, контролем служили лучшие варианты первых двух опытов. В 35-дневном возрасте лучший результат получен при применении сннбнотнка: живая масса превышала контрольные показатели на 12,4% (1,46 и 4,24% для 1 и 2 опытов соответственно), затраты корма снизились на 6,6% (0,51 н 6,1%), сохранность птнцы составила 100% (97,5 % в 1 и 2 опытах соответственно). Установлено, что при снижении дозировки препаратов в два раза эффективность комплекса увеличилась - ЕИП повысился на 42 единицы (328 против 286).

3.4.5. Разработка способов применения синбиотических комплексов.

В результате проведенных исследований были разработаны способы применения сннбиотнков, которые включены в инструкции по нх применению:

-АВИЛАКТ-ФОРТЕ: двумя курсами (в 1-7 и 21-28 дни выращивания) из расчета АВШ1АКТ-1К в дозе 1х109 КОЕ/1 кг корма, АВИСТИМ в дозе 10% от суточной нормы воды;

- ЛАКТОСУБТИЛ-ФОРТЕ: двумя курсами (в 1-7 дни н 21-28 дни выращивания) из расчета АВШ1АКТ-1К 0,5хЮ7КОЕ/гол/сут., АВИСУБТИЛ -0,5x108КОЕ/гол/сут., ЦЕРЕВЕТ - 1,5 % от суточной дозы корма.

3.4.6. Экономическая эффективность применения сшбиотиков.

Экономический эффект от применения сннбиотнков АВИЛАКТ ФОРТЕ н ЛАКТОСУБТИЛ ФОРТЕ, полученный за счет повышения сохранности поголовья на 2,5% и 3,8%, прироста живой массы на 6,9% и 10,5%, снижения затрат корма (в пересчете на 1 кг прироста живой массы) на 3,8% и 6,1%, составил в расчете на 1000 голов 1370,3 руб. и 7862,5 руб. (соответственно).

Результат фармакоэкономическнх исследований подтвердили оправданность использования новых сннбиотнческих комплексов в промышленном бройлерном птицеводстве. Разработано коммерческое предложение по применению сннбиотнков для повышения эффективности выращивания бройлеров, которое было представлено вниманию специалистов отрасли на курсах повышения квалификации руководителей и специалистов птицеводческих предприятий «Новые технологии и пути повышения эффективности производства мяса бройлеров» (ГНУ ВНИТШ1 Россельхозакадешш, г.Сергнев Посад, 2011 г.).

4. ВЫВОДЫ

1. Научно обоснована концепция создания сннбиотнческих комплексов «про-биотик + пребиотик» и «пробиотики + белковая кормовая добавка». Разработаны новые препараты (пробиотики АВШ1АКТ-1К, АВИСУБТИЛ, пребиотик АВИСТИМ, белковая кормовая добавка ЦЕРЕВЕТ) и синбнотическне комплексы на их основе АВИЛАКТ-ФОРТЕ н ЛАКТОСУБТИЛ-ФОРТЕ.

Определены н охарактеризованы штаммы-продуценты микроорганизмов для получения препаратов, входящих в состав комплексов; разработана технология их изготовления и схема контроля качества (безопасность, активность, стабильность); определен состав комплексов, способы их применения и эффективность при выращивании бройлеров.

2. Штаммы IK L. acidophilus (ВКПМ № B-2991) н M-8 B. subtilis (ВКПМ № B-3121), используемые для изготовления препаратов АВИЛАКТ-1К и АВИСУБ-ТИЛ, in vitro обладали выраженным антагонистическим действием по отношению к патогенным штаммам сальмонелл (S. gallinarum, S.tuphimurium, S.dublin) н эше-рихнй (Е. coli К-88, Е. coli К-99, Е. coli А-20). В опытах in vivo они обеспечивали увеличение выживаемости птицы на 30 и 51% соответственно при контрольном заражении патогенным нзолятом Е. coli, выделенным в хозяйстве.

3. L. acidophilus умеренно чувствительны к офлоксацину, цнпрофлоксацнну, энрофлону, флавомнцину, лннкошщину. В. subtilis устойчивы к кламоксилу, ле-вомицетину, тетрациклину, ампициллину, рифамшщину, гентамнцину, энрофлону, флавомнцину, лннкомицину н умеренно чувствительны к цефазолину, офлоксацину, цнпрофлоксацнну.

4. Выделен из растительного сырья, изучен и депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов новый штамм мнцелнального гриба F. sambucinum MKF-2001-3 (ВКПМ № F-867). Штамм не патогенен для человека и животных, является продуцентом биологически активных веществ (аминокислот, углеводов, лнпндов, макро- и микроэлементов, витаминов, органических кислот). На его основе создан пребнотнк АВИСТИМ, который обладает ростостимулн-рующнмн свойствами н отличается высоким содержанием (10,9 г/л) органических кислот, в том числе лимонной (0,5 г/л), яблочной (0,4 г/л), фумаровой (0,3 г/л), янтарной (0,5 г/л), щавелево-уксусной (0,3 г/л) и уксусной (0,5 г/я).

5. Величина ангаоксидантной активности препарата АВИСТИМ, определенная с помощью инструментального метода, превышает активность маркера (ди-гндрокверцилш) в 5,5-5,9 раза и может служить характеристикой его биологического действия.

6. Биомасса ннактивированных клеток дрожжей S. cerevisiae diastaticus (ВКПМ № у-1218) - основа белковой кормовой добавки ЦЕРЕВЕТ - содержит в своем составе белки, углеводы, минеральные элементы, аминокислоты, витамины, олиго-сахарнды (глюканы и маннаны), ферменты (амилазы, прогеазы, цеялюлазы и гемнцел-люлазы), обладает питательной ценносшо н биологической активностью. По питательной ценности биомасса аналогична соевому и подсолнечному шротам, в отличие от других кормовых добавок содержит витамины Вп, А, Д, Е, С и К.

7. Использование универсальной питательной среды на основе ферментолн-заха отходов зерносырья при культивировании микроорганизмов обеспечивало

высокое накопление продукта; L. acidophilus - не менее 5x10® КОЕ/см3, В. subtilis — не менее 1хЮ10 КОЕ/см3, биомассы гриба н дрожжей 10-12 г/п и 20-25 г/л соответственно. Внесение в питательную среду культуральнон жидкости гриба (0,011% от объема среды) при культивировании дрожжей сокращало время накопления биомассы с 19 до 10 часов, способствовало ее более интенсивному накоплению (на 65%), более быстрому усвоению Сахаров (на 32,1%) и более активному потреблению минеральных азота (на 21,5%) н фосфора (на 45,4%).

8. Получение сухой формы пробнотшсов АВИЛАКТ-1К и АВИСУБТИЛ методом сублимационного высушивания обеспечивало концентрацию бактерий в препаратах не менее 3x10® КОЕ/г и 5x1010 КОЕ/г (соответственно) и увеличивало срок их хранения (по сравнению с жидкой формой) с 3 до 9 и с 10 до 12 месяцев (соответственно) при температуре 8-10°С.

9. Обеспечение качества при разработке и изготовлении препаратов, входящих в состав синбнотнков, осуществлялось на основе методологии проектного подхода (ГОСТ Р ИСО 9001-2008), разработки и применения системы изготовления в контроля посевного материала, реализации схемы доклинических исследований безвредности, активности и стабильности препаратов (ГОСТ Р 52249-2009).

10. Препараты безвредны для суточных цыплят при плюральном применении в дозах, в 5-10 раз превышающих рекомендуемые. Для определения безопасности биотесшрованнем на моделях доорганизменного уровня разработан тест эмбрио-токсичностн (на развивающихся эмбрионах кур) и модифицирован ХЕТ-КАМ тест (определение раздражающего действия химических веществ на хорноаллантоис-ной оболочке куриного эмбриона).

11. Стандартизованы условия определения количества жизнеспособных лакто-бакгернй. Условия определения считали стандартными, а полученное значение для контролируемой серии - достоверным (при указанной величине ошибки определения), если полученное в ходе параллельного определения значение количества жизнеспособных лакгобакгерий в образце лабораторного эталонного рабочего материала укладывалось в интервал (б,7±0,5)х 1 OsKOE/cM3.

12. Исследована термостабнльносгь препарата АВИЛАКТ-1К, определены величины констант скоростей инактивации лактобактернй в жидком и сухом препарате Кт= -1,6x10"3 сек1 и Кт= -3,8x10"* сек"1 соответственно. В качестве экспресс-теста оценки стабильности рекомендованы теста «ускоренного старения» - 50°С в течение 15 минут (для жидкой формы) и 60°С - 30 минут (для сухой).

13. Определен состав сннбиотиков ABI1ЛАКТ-ФОРТЕ (АВИЛАКТ-1К + АВИСТИМ) и ЛАКТОСУБТШ1-ФОРТЕ (АВ1ШАКТ-1К + АВИСУБТ1Ш + ЦЕРЕ-ВЕТ) н эффективность их применения при выращивании цыплят-бройлеров кроссов различной продуктивности. Применение сннбиотиков способствовало увеличению показателя европейского индекса продуктивности на 25 (АВ1ШАКТ-ФОРТЕ) и 57 (ЛАКТОСУБТТШ-ФОРТЕ) едшпщ, повышению зоотехнических показателей (увеличению привесов на 6,9 и 10,2 %, сохранности птицы на 2,5 н 3,8 %, уменьшению затрат корма на 3,8 и 6,1 % соответственно) и улучшению качества мяса (увеличению выхода съедобных частей в тушке на 1,0%, уменьшению содержания жира в мясе на 2,2%).

Уменьшение дозировки препаратов в составе сннбнотнка ЛАКТОСУБТИЛ-ФОРТЕ в два раза (по сравнению с их самостоятельным применением) не снижало эффективность его применения (показатель европейского индекса продуктивности увеличился с 286 до 328 единиц).

14. Исследовано влияние сннбнотнка АВИЛАКТ-ФОРТЕ на эффективность вакцинации птицы против иыокаслской болезни. Установлено, что применение сннбнотнка повышало на 2,1 log2 уровень антнгемагглютннинов в сыворотке крови птицы, переболевшей колибактернозом после экспериментального заражения патогенным нзолятом E.coli. Применение пробнотнка АВШ1АКТ-1К корректировало сшсженне роста жтевой массы вакцинированной птицы на 21,1%, 31,3%, 16,7% (Р<0,05) в возрасте 3,4 и 8 недель соответственно.

15. Совместное применение сннбиотиков с флавошщнном компенсировало на 90-95% негативное действие антибиотика (ухудшение зоотехнических показателей, снижение содержания лактобакгерий в желудочно-кишечном тракте птнцы). Показано, что синбнотнкн могут служить альтернативой кормовым антибиотикам, нх применение более безопасно, эффективно н экономически выгодно (в пересчете на стоимость курса), чем использование кормовых антибиотиков.

16. Разработаны способы применения сннбиотиков при выращивании цыплят-бройлеров: АВИЛАКТ-ФОРТЕ - двумя курсами (в 1-7 и 21-28 дай содержания) га расчета пробнотик АВИЛАКТ-1К в дозе 1х109 КОЕ/1 кг корма, пребнотнк АВИСТИМ в дозе 10% от суточной нормы воды; ЛАКТОСУБТТШ-ФОРТЕ - двумя курсами (1-7 дни и 21-28 дни) из расчета пробнотнки АВИЛАКТ-1К н АВИСУБ-

ТИЛ напылением на гранулы комбикорма в дозах 0,5х107 и 0,5x108КОЕ/гол/сут соответственно, ЦЕРЕВЕТ - 1,5 % от суточной дозы корма.

Сннбнотнки АВИЛАКТ-ФОРТЕ и ЛАКТОСУБТИЛ-ФОРТЕ эффективны как при клеточном, так н при напольном способах содержания птицы: по сравнению с контролем живая масса увеличивалась на 4,0 и 5,8 % соответственно, сохранность - на 2,5%, затраты корма сократились на 0,9 н 1,1%.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для практического использования предложены следующие документы.

Нормативная документация: ТУ-10.07-023-93 («Авалакт-Ж» - пробиотнк для птиц); Технологические регламенты производства препаратов АВИЛАКТ-1К, АВИСУБТИЛ, АВИСТИМ и ЦЕРЕВЕТ, утвержденные директором ВНИТИБП 07.09.2010; Стандарты организации (ТУ) на препараты АВШ1АКТ-1К, АВИСУБТИЛ, АВИСТИМ а ЦЕРЕВЕТ (№№ 9337-003-11734126-10; 9337-004-1173412610; 9291-005-11734126-10; 9291-006-11734126-10 соответственно), утвержденные директором ВНИТИБП 03,10.2010 и согласованные директором ФГУ ВГНКИ 27.12.2010; Инструкции по применению препаратов АВИЛАКТ-1К, АВИСУБТИЛ, АВИСТИМ, ЦЕРЕВЕТ н сннбиотнков АВИЛАКТ-ФОРТЕ и ЛАКТОСУБТИЛ-ФОРТЕ, утвержденные директором ВНИТИБП 07.09.2010 и находящиеся на утверждении в Россельхознадзоре.

ОСТ 100083-95. Продукция агробиологической промышленности. Технологические регламенты производства. Содержание, порядок разработки, построения, согласования н утверждения. — М.,1994.- 100 с.

Методические рекомендации: «Технология камерной аэрозольной вакцинации цыплят против ньюкаслской болезни» / РАСХН - ВНИТИБП - ВНИТИП -Вирусологический центр НИИ мнкробнолопш МО РФ,- Сергиев Посад: ВНИ-ВИП, 1996 г. - 53 е.; «Использование пробнотнков, пребиотнков н снмбиотнков в птицеводстве» / ВНИТИП - ВНИТИБП - ООО «Бнотроф» - ООО «Пробнотик Центр». - Сергеев Посад, 2008,- 43с.; «Разработка н реализации проекта создания нового лекарственного средства. Обеспечение качества лекарственных средств для животных в процессе разработки», утв. РАСХН 28.03.08.- М., 2009.-б2с.; «Исследование стабильности нммунобнопрепаратов на этапе разработки и в условиях действующего производства», утв. РАСХН 28.03.08.- М.,2009. - 32 с.

Рекомендации по проведению доклинических испытаний новых лекарственных средств для животных н биологически активных добавок к кормам, утв. РАСХН 16.11.05.

Руководство по разработке системы технологической документации на предприятии биологической промышленности или опытном производстве соответствующего профиля, утв. РАСХН 23.11.04 // Новые методы исследований по проблемам ветеринарной медицины, ч. 2. Методы исследований в области паразитологии, эпизоотического мониторинга, биотехнологии. -М.: РАСХН, 2006. - С. 312-348.

Методики: «Определение потенциальной токсичности лечебно-профилактических препаратов для животных и их ингредиентов на куриных эмбрионах (тест эмбриотоксичностн)», утв. РАСХН 14.11.06; «Определение раздражающего действия лечебно-лрофнлакгаческнх препаратов для животных и их ингредиентов с помощью теста на хорноаллантоисной оболочке куриного эмбриона (ХЕТ-КАМ тест)», утв. РАСХН 14.11.06.

6. СПИСОК ОСНОВНЫХ ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

6.1. Статьи в журналах, реферируемых ВАК.

1. Самуйленко АЛ. Стабильные иммунобиопрепараты - залог успешной вакцинолрофя-яактики птиц / Самуйленко АЛ., Неминущая Л.А., Скотникова ТА: тр. Кубанского гос. аграрного университетата (серия: Ветеринарные науки). - 2009,- №1 (4.1). - С. 91-92.

2. Самуйленко АЛ. Эффективная вакцинация цыплят-бройлеров против ньюкаслской болезни / Самуйленко АЛ., Скотникова Т.А., Неминущая Л.А.: тр. Кубанского гос. аграрного университетата (серия: Ветеринарные науки). - 2009,- Xsl (4.1). - С. 89-90.

3. Воробьева Г.И. Белковые компоненты в стартовых комбикормах для рыб i Воробьева Г.И., Максимова Г.Н., Неминущая Л .А., Головин П.П., Шевченко Д., Приз В. // Комбикор-иа.-2009.-№3--С.45-4б.

4. Еремец О.В. Проектный подход в обеспечении качества и безопасности лекарственных средств для животных / Еремец O B., Малышева М А., Неминущая Л.А., Люяькова Л.С., Еремец Н.К., Скотникова ТА. //Ветеринария и кормление. - 2010,- №6_-С.бО-б1.

5. Немннушая Л. А. Антиоксидантная активность пребиотнков - новая характеристика их функциональной ценности / Неминущая Л. А. // Бутлеровские сообщения. -2010. - Т.21, Л°9. — С.71-77.

6. Немпвущая ЛА. Использование статистических методов в управлении бпотехноло-гичеспши процессами / Неминущая Л.А., Еремец О.В., Скотникова ТА., Еремец Н.К., То-карик Э.Ф., Еремец В.И., Самуйленко А_Я., Безпш В.М., Егоров В.Е., Ганяев А.М. // Ветеринарный врач. - 2010. - №5. - С.29-32.

7. Неминущая Л.А. Исследование эффективности многофункциональных синбиотиче-ских комплексов в зависимости от их состава и схемы применения в промышленном птицеводстве / Неминущая Л.А., Еремец В.И., Самуйленко А.Я., Салеева ИЛ. // Птицеводство. -2010.- №4.- СЛ4-15.

8. Немпнущая Л.А. Лечебно-профилактические кормовые белковые добавки на основе высшего лечебного гриба Ризалит катЬисшит МКГ-2001-3 / Немпнущая ЛА. // Ветеринария и кормление. - 2010. - №4. - С. 8-9.

9. Немпнущая Л.А. Микроорганизмы - основа для создания лечебво-профклахтичесхях кормовых добавок / Немппущая Л .А. // Ветеринарный врач. - 2010. - № 6 - С.47-50.

10. Немпнущая Л .А. Роль доклинических испытаний в обеспечении качества лекарственных средств и биологически активных добавок к кормам для животных / Немпнущая Л.А., Еремец НЛС, Люлькова Л.С.. Скотникова ТА., Токарик Э.Ф., Бобровская И.В., Самуй-ленко АЛ. // Ветеринарная медицина. — 2010. - №5-6. — С.14-16.

11. Немпнущая Л.А. Эффективность нового синбиотического комплекса для птиц АВИЛАКТ ФОРТЕ / Немпнущая Л.А., Токарик Э.Ф., Воробьева ГЛ., Самуйленко АЛ., Салеева ИЛ., Игнатова Г.В. // Птицеводство. - 2010. - №1. - С.45-46.

12. Скошнкова ТА. Управление рисками в производстве иммунобиологических ветеринарных препаратов / Скотникова ТА., Немпнущая ЛА., Люлькова Л.С., Еремец Н.К., Бобровская И.В., Самуйленко А-Я. // Ветеринарная медицина. — 2010. - №5-6. - С. 16-17.

13. Самуйленко АЛ. Вопросы экологической безопасности и ресурсосбережения в биотехнологии производства и применения препаратов для ветеринарии / Самуйленко АЛ., Скотникова Т.А., Немпнущая Л.А., Беро ИЛ., Токарик Э.Ф., Еремец Н.К., Люлькова Л.С., Бобровская И.В. // Известия Самарского науч. центра РАН.-2011.-Т.13, №5(3).-С.178-180.

14. Самуйленко АЛ. Задачи биотехнологии в реализации доктрины продовольственной безопасности Российской Федерации / Самуйленко АЛ., Раевский АА., Бондарева НА., Немпнущая Л.А., Беро ИЛ., Грянь СА., Литвинова Е.О., Кшп Л .К., Гринь А.В., Шубина Е А. // Ветеринария и кормление. -2011.- №2. -С.22-29.

15. Самуйленко АЛ. Нормативные и информационно-справочные документы по вопросам обеспечения безопасности и качества лекарственных средств для животных I Самуйленко АЛ, Скотникова Т.А, Немпнущая Л.А., Еремец Н.К., Еремец В .И., Токарик Э.Ф., Бобровская И.В., Шубина ЕА., Еремец ОЗ. // Известия Самарского науч. центра РАН.-2011,-Т.13, Х»5(3).-С.181-184.

6.2. Патенты

16. Патент РФ № 2035915. Способ профилактики болезни Ньюкасла / Токарик Э.Ф., Ковальская Л.А., Скотникова ТА., Елисеева Л.А., Смоленский В.И., Фшюненко В.И. - Заявка №92014691; заявл. 28.12.92; опубя.27.05.95, БИ№ 15.-С. 101.

17. Патент РФ № 2035917. Вакцина против болезни Ньюкасла и способ ее применения / Токарик Э.Ф., Скотникова ТА., Ковальская Л.А., Смоленский В Л., Шевырев Н.С., Самуйленко АЛ. - Заявка № 92014928; заявл. 28.12.92; опубл. 27.05.95, БИ № 15.- С. 10118. Патент РФ Кг 2259209. Штамм гриба Виагшт затЬпсшит -продуцент биологически

активных веществ / Зуев Е.Т., Брапгацева ЛМ, Воробьева Г.И., Немппущая Л.А., Токарик Э.Ф., Еремец Н.К. - Заявка № 2004105836/13; заявл. 01.03.2004; опубл. 27.08.2005, БИ Л» 24. - С. 97.

19. Патент РФ № 2286066. Кормовая добавка для птицеводства и способ выращивания птицы / Немпнущая Л.А., Токарик Э.Ф., Шоль В.Г., Филоненко В.И., Салеева И.П., Скотникова ТА., Воробьева Г.И., Самуйленко АЛ., Калугин СЛ., Еремец ВН. - Заявка № 2004! 12505/13; заявл. 26.04.2004; опубл. 27.10.2006, БИ № 30. - С.83.

6.3. Публикации в других изданиях

20. Ковальская Л.А. Использование теста эмбриотоксичносги при оценке качества ветеринарных препаратов / Ковальская ЛА., Елисеева Л А., Иванова НА. // Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов : тез. докл.IVВсесоюз.конф. -М., 1991.-С.183-184.

21. Скотнихова ТА. К вопросу о гармонизации международных н национальных требований к показателям качества и методам их определения / Скотнихова ТА., Ковальская Л.А., Иванова НА. //Вирусные болезни с/х животных : шт. Всерос. научно-практич. конф. -Владимир, I995.-C.185.

22. Тохарих Э.Ф. ОСТ 10089-95. Продукция агробиологической промышленности. Технологические регламенты производства. Содержание, порядок разработки, построения, согласования и утверждения / Токарик Э.Ф., Еремец Н.К., Иванова НА,, Ковальская Л.А., Скотнихова ТА.- M., 1995.-10ÛC.

23. Филоненко ВН. Технология камерной аэрозольной вакцинации цыплят против ньк>-каслекой болезни : метод, рекомендации / Филоненко В Л., Шоль ВТ., Фисинин В.И., Спирина СЛ. Присяжный Г.И., Офицеров ВА., Королева НА., Филоненко Н.Н., Вострякова ГЛ., Токарик Э.Ф., Скотникова ТА., Ковальская Л.А., Елисеева ЛА., Смоленский В.И., Григоренко А.И., Власов Н.Г., Ананьевскнн С.М., Королев Б.М., Бильдев Н.П. - Сергиев Посад; ВНИТИП, 1996.- 53с.

24. Токарик Э.Ф. О гармонизации отечественной нормативно-технической документации на производство лекарственных средств для ветеринарии с международными требованиями / Токарик Э.Ф., Ковальская Л.А., Скотнихова ТА., Еремец Н.К., Чернявская OA. // Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов : тез. докл. V Всерос. конф. - Щелково, 1996.-С.281-282.

25. Ковальская ЛА. Новые препараты (биофармкомплексы) и способ их применения для профилактики ныокаслской болезни I Ковальская Л.А., Скотникова ТА., Елисеева ЛА., Марыгина А.Ф., Галибина Н.В., Токарик Э.Ф., Смоленский В.И., Филоненко А.И., Григоренко А.И. // Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов : тез. докл.У Всерос. конф. — Щелково, 1996. - С.24-25.

26. Ковальская Л.А. Лекарственные средства для защиты почв, растений и животных -новые подходы и разработки / Ковальская ЛА., Авдеева Т.А., Токарик Э.Ф., Самуйленхо А_Я., Смолннский ЕА., Воробьева Г.И. // 100 лег Курской биофабрике и агробиологической промышленности России : тез. докл. научно-производств. конф. - Курск, 1996.- С.146-148.

27. Skotnikova ТА. Newcastle disease vaccin : perfection and application method / Skotnikova T.A., Kovalskaya L.A., Eliseeva LA., Samvilenko А.У., Smolensky V.I. // Xl-th International congress of the World Veterinary poultry association.- Budapest, 1997.- P. 213.

28. Токарик Э.Ф. Документирование технологических процессов производства лекарственных средств для ветеринарии и животноводства / Токарик Э.Ф., Еремец Н.К., Ковальская Л.А., Скотникова ТА., Самуйленко АЛ., Еремец В.И. // Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов : тез. докл. Всерос. научно-практич. конф.- Щелково, 1998.-С.6-7.

29. Еремец Н.К. Научно-методическое обеспечение управления качества лекарственных средств для ветеринарии и животноводства / Еремец Н.К., Скотникова ТА., Ковальская Л. А., Токарик Э.Ф., Самуйленко А .Я. // Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов : тез. докл. Всерос. научно-практич. конф. -Щелково, 1998.-С.8-9.

30. Скотникова ТА. Вопросы технологии производства безопасных лекарственных средств дня ветеринарии н животноводства / Скотникова ТА., Ковальская Л.А., Еремец Н.К., Токарик Э.Ф., Самуйленхо А_Я. И Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологвчесхих препаратов : тез. докл. Всерос. научно-практич. конф.-Щеяково, 1998.- С.42-43.

31. Ковальская ЛА. Повышение эффективности профилактики пыокаслсхой болезни птиц путем комплексного применения вакцины и пробиотика / Ковальская Л А., Скотникова ТА., Елисеева ЛА.,Токарик Э.Ф., Смоленский В Л. // Политика здорового питания России: пробиотихн и пробиотические продукты в профилактике и лечении наиболее распространенных заболеваний человека : материалы Всерос. конф.- M., 1999.-С.62-63.

32. Сазанова ЭЛ. Управляемое глубинное культивирование пробиотиков / Сазанова ЭЛ., Андреев В А., Ковальская Д.А. II Политика здорового питания России: нробиотикн и про-биотическне продукта в профилактике и лечении наиболее распространенных заболеваний человека : материалы Всерос. конф. - М.,1999. - С.44

33. Скотникова ТА Эффективная и экологически безопасная технология вакцинации цыплят-бройлеров против ньюкаслской болезни ! Скотникова ТА, Елисеева ЛА., Ковальская Л.А., Шоль В.Г. // Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов : тез. докл. Всерос. научно-практич. конф,- Щелково, 2000,—С.45-47.

34. Ковальская J1.A. Препараты для птиц «Авнлакт -1К» и «Авинорм-3» - бнофармхом-плексы на основе пробиотиков н биолопмески-акгавных добавок / Ковальская Л.А., Сазанова Э.Я., Калугин C.B., Токарнк Э.Ф., Фнлоненхо В.И., Воробьева Г.И.: тез. докл. Всерос. научно-практич. конф. « Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов».- Щелково-2000.С.345-346,

35. Калугин C.B. Отработка технологических процессов изготовления и контроля про-бнотиха «Авилакг-IK» / Калугин C.B., Ипатов A.B., Ковальская ЛА., Еремец В.И. // Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов : сб. докл. Меягдун. конф. молодых ученых,- Щелково, 2001.-С.88-91.

36. Зуев Е.Т. Модификация ХЕТ-КАМ теста для определения раздражающего действия биологически активных добавок к пищевым продуктам и кормам для животных / Зуев Е.Т., Караваева CA., Ковальская ЛА., Калугин C.B., Мальцев OB., Еремец Н.К. И Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов : сб. докл. Междун. конф. молодых ученых. - Щелково, 2002.-С. 148-161.

37. Токарнк Э.Ф. О структуре системы технологической документации биопредприятий / Токарнк Э.Ф., Еремец H .К., Скотникова Т.А., Ковальская Л.А., Еремец В.И. И Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов : маг. Междун. научно-практич. конф.- Щелково, 2003,- Ч.1.-С.12-16.

38. Ковальская ЛА. Метод оценка стабильности и точности технологических процессов н операций производства лекарственных средств для животных / Ковальская Л.А., Скотникова ТА, Еремец HJC., Токарнк Э.Ф., Безгнн В.М. Н Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов : мат. Междун. научно-практич. конф.- Щелково, 2003,-4.1.-С. 33-39.

39. Зуев Е.Т. Культуры высших грибов — потенциальный источник БАВ для функциональных напитков / Зуев Е.Т., Ковальская ЛА., Воробьева ГЛ., Брагинцева ЛМ. И Здоровое питание населения России : мат. VII Всеросс, конгр.-М., 2003.- С.198-200.

40. Ковальская ЛА. Результаты доклинических испытаний препарата «Авнлакт- форте» - биофармкоыплекса для птиц / Ковальская ЛА., Еремец В.И. Н Современные вопросы патологии с/х животных : мат. Междун. научн.-практич. конф,- Минск, 2003.- С. 38-39.

41. Немпнущая ЛА. Эффективность применения пробиотиков «Авияакг-1К» и «Лакто-бакгерин» при выращивании цыплят-бройлеров / Немпнущая ЛА., Токарнк Э.Ф., Еремец В.И., Зуев И.В., Калугин C.B., Фнлоненко В.И., Салеева ИЛ. И Пробногаки, пребиотшш, синбиотики и функциональные продукты питания. Современное состояние и перспективы : мат. Междун. конф.- M., 2004.-С.153-154.

42. Зуев Е.Т. Применение метода гистограмм для статистического контроля производственных процессов в пищевой и биологической промышленности I Зуев Е.Т., Гурьев В.И., Недшнушая Л А, Скотникова ТА. // Ветеринария медицина. Межведомст. тематич. научн. сб. -Харьков, 2004,- Т.84.-С.823-827.

43. Самуйленко AM. Некоторые вопросы технического регулирования в сфере разработки и производства лекарственных средств для животных в АПК России / Самуйленко AM., Еремец В.И., Токарнк Э.Ф., Еремец Н.К., Немннущая ЛА., Скотникова ТА. И Ветеринария медицина. М£жвщом. тематич. науковий зб^рнпк- Харыав, 2004.- Т.84.-С.830-851.

44. Немннущая Л.А. Эффективность различных лекарственных форм препарата «Ави-лакт-форте» для птиц / Неминущая Л.А., Токарнк Э.Ф., Еремец Н.К., Еремец В.И., Зуев

ИЛ., Салеева ИЛ. // Сельскохозяйственная наука Республики Мордовия: достижения, направления развития: шт. Всерос. научно-практич. конф.-Саранск, 2005.-Ч.2.- С. 335-336.

45. Неминущая Л.А. Вакцинация бройлеров против ньюкаслской бодезнв с использо-ваниеы пробиотического препарата «Авилакт-форте» / Неминущая ЛЛ., Скотникова ТА.., Еремец HJC., Еремец В.И., Самуйленко АЛ. Н Сельскохозяйственная наука Республики Мордовия: достижения, направления развития : мат. Всерос. научно-практич. конф. - Саранск, 2005.-Ч. 2.-С. 334-335.

46. Немпвущая Л.А. Возможность получения пребиотиков го биомассы дрожжей-сахаромицетов в гриба Fusarium sambucmum шт. MKF-2001-3 / Немпвущая JLA., Воробьева ГЛ., Токари* Э.Ф., Еремец В.И., Самуйленко АЛ. // Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов : мат. Междун. конф.-Щелково, 2005.- С.511-516.

47. Немпнущая Л.А. Новый штамм гриба Fusarium sambucmum - продуцента биологически активных добавок / Немпнущая Л.А., Воробьева Г.И., Токаршс Э.Ф., Еремец В.И. // Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов : мат. Междун. конф,- Щелково, 2005.- С. 517-521.

48. Еремец В.И. Перспективы использования пробиотического препарата «Авилакг-форте» при вакцинации бройлеров прошв ныокаслской болезни / Еремец В.И., Неминущая JLA., Скотникова ТА., Еремец Н.К., Самуйленко АЛ.: ыат. VI Украинской конф. по птицеводству с международным участием. - Птах1вництво. - 2005. -Вип.57. - С.395-398.

49. Скотникова Т.А. Лабораторный рабочий эталонный материал: назначение, принципы приготовления, характеристика и калибровка / Скотникова ТА., Немпнущая Л.А., Токаршс Э.Ф., Смоленский В.И., Руденко Т.В., Горева И.П.: мат. I Междун. ветеринарного конгресса по птицеводству.- М., 2005- С. 147-152.

50. Еремец В.И. Руководство по разработке системы технологической документации на предприятии биологической промышленности или опытом производстве при организациях соответствующего профиля / Еремец В.И., Токаршс Э.Ф., Еремец Н.К., Скотникова ТА., Неминущая Л.А. // Новые методы исследований по проблемам ветеринарной медицины. Методы исследований в области паразитологии, эпизоотического мониторинга, биотехнологии: сб. тр. - М.: РАСХН, 2006. -Ч. 2,- С.312-348.

51. Скотникова ТА. Способы реализации процессного и проектного подходов в системе целевых мероприятий по внедрению системы менеджмента качества на предприятиях АПК / Скотникова ТА., Токаршс Э.Ф., Неминущая Л.А., Еремец В.И., Еремец Н.К. Самуйленко АЛ. II Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов : мат. Междун. научно-практич. конф. — Щелково, 2006.- С.32-35.

52. Неминущая ЛЛ. Интегрированная система менеджмента биофармпредприягия агробиологической промышленности. Управление рисками при производстве лекарственных средств / Неминущая Л.А., Скотникова ТА... Спиридонов AB. : шт. Междун. юбилейной научно-практич. конф., поев. 110-летию Курской биофабрики и агробиологической промышленности России.- Курск, 2006,- С.27-42.

53. Скотникова ТА. Интегрированная система менеджмента качества биофармпредприя-тия агробиологической промышленности. Базовые стандарты ИСО 9000 и Правила СМР / Скотникова ТА., Неминущая Л.А., Люшша Н.В. : мат. Междун. юбилейной научно-практнч. конф., поев. 110-летию Курской биофабрики и агробиологической промышленности России.- Курск, 2006.- С.42-51.

54. Немпвущая Л.А. Исследование антиоксидантной активности препарата «Ависпш» -пребиотика для птиц / Неминущая Л.А., Скотникова ТА., Еремец Н.К., Самуйленко АЛ., Еремец В.И., Крыжановская Е.В., Чулков А.К.: мат. Ш Междун. ветеринарного конгресса по ппщеводству.- М., 2007,- С.214-215.

55. Скотникова ТА. Вопросы обеспечения безопасности производства нммунобяотех-нологаческих ветеринарных препаратов / Скотникова ТА., Немпнущая Л.А., Еремец Н.К., Самуйленко АЛ., Крыжановская Е.В., Чулков А.К. : мат. Ш Междун. ветеринарного конгресса по птицеводству,- М., 2007.- С.58-59.

56. Еремец В.И. Информационно-справочные документы снстеш менеджмента качества для цредпрятпй агропромышленного комплекса / Еремец В.И., Токарик Э.Ф., Скотникова ТА., Еремец Н.К. Неминущая Л.А., Самуйленко АЯ. I/ Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов : маг. Междун. научно-практич. конф. — Щелково, 2007.-С.10-14.

57. Неминущая Л.А. Исследование in vitro антагонистической активности и чувствительности к антибиотикам бактерий-пробиотиков / Неминущая Л.А., Скотникова ТА., Еремец Н.К., Еремец В.И., Самуйленко АЛ., Крыжановская ЕВ. // Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов : мат. Межд. научно-пракгич. хонф,- Щелково, 2007.-С.284-289.

58. Воробьева Г .И. Производство лечебно-профилактических кормовых добавок — снн-биотиков для сельского хозяйства / Воробьева ГЛ., Максимова ГА, Неминущая Л А., Токарик Э.Ф., Еремец В.И., Самуйленко АЛ., Крыжановская Е.В.: материалы Межд. научно-практич. конф. « Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов».

- Щелково.-2007.-С.З73-376.

59. Имангулов ША. Использование пробиотиков, пребиотшсов и симбиотиков в птицеводстве : метод, рекомендации / Имангулов Ш А., Егоров И. А., Ленкова Т Л., Игнатова Г JB., Паньков П.Н., Розанов БЛ., Егорова Т.В., Харламов КЗ., Елизаров И.В., Свитхин B.C., Еремец В.И., Неминущая Л .А., Гинсбург A.C.- Сергиев Посад, 2008.- 43с.

60. Самуйленко АЛ. Метод, рекомендации по разработке и реализации проекта создания нового лекарственного средства. Обеспечение качества лекарственных средств для животных в процессе разработки / Самуйленко АЛ, Еремец В.И., Шурыгян АЛ., Токарик Э.Ф., Еремец Н.К., Скотникова ТА, Неминущая Л А., Спиридонов A.B.- М., 2009.-62С.

61. Воробьева Г.И. Использование белковых компонентов на основе биомассы дрожжей-сахаромицетов при создании стартовых кормов для личинок рыб I Воробьева ГЛ., Максимова ГЛ., Неминущая Л.А., Головин П.П. // Биотехнологая-2009 : мат. Междун. конгр.-М., 2009.-С. 362.

62. Скотникова ТА. Интегрированная система менеджмента качества на предприятиях агропромышленного комплекса, выпускающих лекарственные средства / Скотникова ТА., Неминущая Л.А., Токарик Э.Ф., Еремец Н.К., Еремец В.И., Самуйленко АЯ. И Научные основы производства ветеринарных бнол. препаратов : мат. Междун. научно-практич. конф. -Щелково, 2009,- С. 90-95.

63. Токарик Э.Ф. Разработка и оптимизация параметров технологического процесса сублимационной сушки биомзтериалов: современный взгляд на достижения я перспективы научного направления / Токарик Э.Ф., Нежута АА, Скопшкова ТА., Неминущая Л.А., Панферов В.В. // Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов : мат. Междун. научно-практич. конф. - Щелково, 2009.- С. 49-56.

64. Неминущая Л.А. Синбиотики — белковый кормовой продукт 21 века / Неминущая Л.А, Воробьева ГЛ., Токарик Э.Ф., Еремец В.И., Беро ИЛ., Самуйленко АЛ. // Научные основы производства ветеринарных биол. препаратов : мат. Междун. научно-практич. конф.

- Щелково, 2009.- С. 489^97.

65. Скотникова ТА. Роль стабильности в обеспечении качества лекарственных средств (иммунобиологических препаратов) для животных / Скотникова ТА., Немпиушая Л.А., Токарик Э.Ф., Сапепша Е.П., Самуйленко АЛ // Научные основы производства ветеринарных биол. препаратов: мат.Междун. научно-практич. конф .-Щелково, 2009,- С. 656-662.

66. Неминущая ЛА. Роль синбиотиха АВИЛАКТ-ФОРТЕ в повышении эффективности вакцинации бройлеров против ньюкаслской болезни / Неминущая Л.А., Скотникова ТА, Еремец В Л., Самуйленко АЛ, Салеева ИЛ. // Актуальные проблемы биологии в животноводстве :мат. VМеждун. науч. конф.-Боровск,2010.-С.298-299.

67. Неминущая ЛА. Доклинические исследования безопасности лребиотиков на био-тесг-системах различной сложности / Неминущая Л А // Актуальные проблемы биологии в животноводстве : мат. VМеждун. науч. конф, —Боровск, 2010.-С. 293-294.

68. Немннущая Л.А. Новые сннбиотические комплексы дм птицеводства -разработка и перспективы применения / Немпиущая ЛА. // Актуальные проблемы биологии в животноводстве : мат.У Междун. науч. конф.- Боровск, 2010. - С. 295-296.

69. Неминушая Л.А. Фармакоэкономические аспекты разработки я применения новых синбиотиков в бройлерном птицеводстве / Немппушая ЛА., Ломакина ТА., Самуйленко А.Я., Салеева И.П. // Актуальные проблемы биологии в животноводстве : мат. V Междун. науч. конф.-Боровск,2010.-С.296-297.

70. Самуйленко А .Я. Актуализация нормативных и информационно-справочных документов по вопросам обеспечения биобезопасяости в качества лекарственных средств для животных / Самуйленко АЛ, Еремец В.И., Токарик Э.Ф., Немннущая Л.А., Скотникова ТА., Еремец Н.К., Люлькова Л.С. // Ветеринарна медицина. Мхжвщомчий тематичный нау-ковий збфнпк. - Харькш, 2010. - Вип. 94. - С.346-347.

71. Немпяущая Л.А Биотехнологические аспекты получения синбиотических комплексов для сельского хозяйства / Немннушая Л.А., Самуйленко АЛ., Воробьева ГЛ., Титова Е.И., Еремец О.В. // Биотехнология: состояние и перспективы развития : мат. VI Моск. Междун. контр.-М., 2011.-С.215-216.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АА - антиоксндантная активность AM - автолизат мицелия АитА - антагонистическая активность БАВ - биологически активные вещества БМ-биомасса

BP - вспомогательные работы

ДИ - доклинические исследования

ЕИП - европейский индекс продуктивности

ЖКТ - желудочно-кишечный тракт

ЗР - задержка роста

КЖ - культуральная жидкость

КОЕ - колониеобразующие единицы

ЛРЭМ - лабораторный рабочий эталонный материал (стандартный образец)

МПА - мясо-пепгоннын агар

МС - молочная сыворотка

НБ - ньюкаслская болезнь

НД - нормативная документация

ОМ - обезжиренное молоко

ОР — общий рацион

ПР - подготовительные работы

РВ - редуцирующие вещества

РЭК- развивающиеся эмбрионы кур

СП - санитарные правила

СТО - стандарт организации

ТП - основные технологические процессы

ТУ - технические условия

ФЗ - ферменголизат отходов зерносырья

ФР - физиологический раствор

ХАО - хориоаллантонсная оболочка

ХЕТ-КАМ тест - Hen's egg test at the chorioallantoic membrane test (тест на хорио-аллангонсной оболочке куриного эмбриона

анти-ГА - ашигемагглютнннн в/б - внутрибрюшинно

GCP - Good Clinical Practice (надлежащая клншгческая практика)

GLP— Good Laboratory Practice (надлежащая лабораторная практика)

GMP — Good Manufacturing Practice (надлежащая производственная практика)

LDjo/cm3 - 50%-ная летальная доза

M.S. - Master Seed (главный посевной материал)

P.S. - Production Seed (производственный посевной материал)

S.L.S. - Seed Lot System (система посевных материалов)

SPF (specific pathogen free) - свободный от специфических патогенов

W.S. - Working Seed, рабочий посевной материал

Тираж 120 экз. Отпечатано в ООО "КопиМастерЦентр" г. Москва, ул. Воронцовская35а, теп.: (<595) 856-62-63 www.copycenler.ru

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Неминущая, Лариса Анатольевна

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 .Состояние отечественного птицеводства.

1.2.Факторы, индуцирующие изменение кишечной флоры.

1.3.Пробиотики, пребиотики и синбиотики в птицеводстве.

1.4.Факторы, влияющие на эффективность синбиотиков.

1.5.Обеспечение безопасности в качества про-, пре и синбиотиков в свете современных требований.

1.6.3аключение по обзору литературы.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1.Материалы и методы.

2.2.Результаты исследований.

2.2.1.Характеристика штаммов микроорганизмов-продуцентов пробиотиков, пребиотика и белковой кормовой добавки.

2.2.1.1.Штамм IK Lactobacillus acidophilus, В-3121.

2.2.1.2.Штамм М-8 Bacillus subtilis, В-3121.

2.2.1.3.Штамм дрожжей Saccharomecescerevisiae (diastaticus) 177 ВКПМ-у-1218.

2.2.1.4.Штамм гриба Fusariumsambucimum MKF-2001-3, F

2.2.2.Изготовление и контроль посевного материала

2.2.2.1.Посевной материал L.acidophilus для пробиотика АВИЛАКТ-1К.

2.2.2.2.Посевной материал В.subtilis для пробиотика АВИСУБТИЛ

2.2.2.3. Посевной материал дрожжей S.cerevisiae для кормовой белковой добавки ЦЕРЕВЕТ.

2.2.2.4. Посевной материал гриба F.sambucinum для пребиотика АВИСТИМ.

2.2.3.Технология производства и доклинические исследования препаратов (пробиотиков АВИЛАКТ-1К, АВИСУБТИЛ, пребиотика АВИ-СТИМ и белковой кормовой добавки ЦЕРЕВЕТ), изготовление опыт- 204 ных серий.

2.2.3.1.Разработка технологии производства препаратов.

2.2.3.2.Разработка схемы доклинических исследований препаратов

2.2.3.3.Изготовление и контроль опытно-промышленных серий препаратов.

2.2.4. Определение эффективности синбиотиков АВИЛАКТ-ФОРТЕ и ЛАКТОСУБТИЛ-ФОРТЕ при выращивании цыплят-бройлеров.

2.2.4.1. Эффективность синбиотика АВИЛАКТ-ФОРТЕ для цыплят-бройлеров кросса «Конкурент-2».

2.2.4.2. Эффективность синбиотика АВИЛАКТ-ФОРТЕ для цыплят-бройлеров кросса «Кобб-500».

2.2.4.3. Влияние синбиотика АВИЛАКТ-ФОРТЕ и пробиотика АВИЛАКТ-1К на эффективность вакцинации птицы против ньюкаслской болезни.

2.2.4.4. Эффективность применения синбиотика ЛАКТОСУБТИЛ-ФОРТЕ.

2.2.4.5. Разработка способов применения синбиотических комплексов.

2.2.4.6. Расчет экономической эффективности применения синбиотиков.

3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

4. ВЫВОДЫ.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Технология производства и обеспечение качества синбиотиков лактосубтил-форте и авилакт-форте, эффективность их применения в птицеводстве"

Обеспечение продовольственной и биологической безопасности страны является основной задачей АПК на современном этапе. В приоритетном национальном проекте «Развитие агропромышленного комплекса» указано, что решение актуальных проблем развития сельского хозяйства напрямую связано с переводом отрасли на современные агропромышленные технологии. Система модернизации АПК, комплексное техническое и технологическое перевооружение отрасли невозможно без использования инноваций и наукоемких технологий, которые играют ключевую роль в обеспечении населения качественной и безопасной продукцией животноводства и растениеводства. Без ветеринарных препаратов, кормов и кормовых добавок, созданных на основе последних достижений науки, сложно добиться высокой конкурентоспособности на рынке [85, 143, 160, 220, 245, 257, 362, 365].

Интенсивный характер современных технологий выращивания сельскохозяйственных животных и птицы оказывает негативное влияние на микроэкологию желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), изменяя эволюционно сложившуюся в условиях свободного выгула структуру кишечного микробиотипа [9, 34, 35, 49, 135, 195, 226, 281, 327, 403, 407, 422, 423, 432, 437, 449, 460,463,476,485,517,522,528,549,577]. Стратегия и тактика терапии и профилактики дисбактериозов животных и птицы заключается в необходимости применения экологически безопасных эффективных препаратов, способных обеспечить биологическую защиту животных. Это обусловило интенсивное развитие экобиотехнологий, в частности, направление, связанное с разработкой и применением пробиотиков, пребиотиков и синбиотиков как в здравоохранении, так и в ветеринарии [5, 11, 30, 31, 48, 61, 84, 90, 95, 102, 127, 137, 175, 232, 247-249, 252,259, 278, 298, 301, 302, 326, 329, 332, 358, 367, 379, 382, 398, 401, 404, 415, 433, 442, 451, 458, 508, 543, 573]. Такие лечебно-профилактические и ростостимулирующие экологически чистые препараты физиологичны по своему действию, безвредны для животных, просты в наработке, дешевы, технологичны для группового применения.

Использование пробиотических препаратов для профилактики и лечения кишечных дисфункций в ветеринарной практике имеет важное преимущество перед применением антибиотиков [6, 15, 94, 107, 118, 150, 171, 174, 191, 232, 237, 256, 296, 325, 386, 395, 435, 443, 463, 479, 485, 506, 544, 577]. К наиболее часто используемым в качестве пробиотиков микроорганизмам относятся: неспорообразующие бактерии, продуцирующие молочную кислоту - Bifidobacterium, Lactobacillus и др. [36, 65, 87, 127, 147, 196, 202, 229, 252, 287, 289, 307, 327, 359, 397, 408, 410, 444, 486, 522, 537]; аэробы - спорообра-зующие бактерии рода Bacillus [17, 23, 88, 175, 183, 216, 223, 299, 311, 354, 388, 402, 467, 507, 541]; анаэробы - спорообразующие бактерии рода Clostridium и др. [95, 110, 132, 197,219, 283,320,337,378,381,424, 499,511,573].

Пребиотики - биологически активные вещества, селективно стимулирующие рост микроорганизмов-симбионтов и оказывающие положительное воздействие на организм животного. К ним относятся: моносахариды и спирты (глюкоза, сорбит и др.); олигосахариды (лактулоза); полисахариды (пектины); ферменты ([3 - галактозидаза, протеаза); пептиды; антиоксиданты (витамины группы В), аминокислоты, растительные экстракты, органические кислоты [39, 48, 144, 151, 169, 198, 278, 282, 335, 349, 382, 437, 452-454, 472, 502, 542, 543, 557, 572]. В качестве пребиотиков могут служить биомасса и автолизаты кормовых дрожжей [33, 59, 157, 176, 492, 510, 521, 523, 546, 563], а также биомасса высших лечебных грибов и препаратов на ее основе, которые применяются в медицине и пищевой промышленности в качестве биологически активных добавок (БАД) [1, 19, 24, 38, 73, 123, 170, 186, 301, 358, 363].

Инактивированная биомасса кормовых дрожжей, помимо пребиотиче-ских свойств, обладает за счет своего химического состава высокой питательной ценностью, не уступающей таким традиционным белковым кормам, как соевый шрот, мясокостная мука, рыбная мука и др. [58, 115, 233, 263, 278, 8

536]. Это актуально, потому что в настоящее время животноводство и птицеводство России испытывают большую потребность в полноценной кормовой базе для своего развития и становления [16, 66, 234, 390, 493].

В настоящее время все большее распространение получают синбиотики - научно обоснованные комплексы пробиотиков и пребиотиков, которые могут обладать потенциальным синергетическим эффектом и за счет действия входящих в их состав препаратов способны:

-поддерживать высокий физиологический и иммунный статус организма животных [2, 20, 26, 28, 45, 61, 95, 97, 132, 138, 149, 157, 168, 225, 236, 251, 308, 309, 313, 320, 321, 337, 371, 402, 409-411, 415, 427, 428, 431, 434, 449, 481, 498, 500, 511, 518, 519, 534, 547, 558, 562, 564, 571];

- обеспечивать профилактику заболеваний молодняка и взрослых особей за счет защиты от патогенных и условно-патогенных возбудителей болезней [30, 31, 36, 49, 57, 60, 69, 87, 90, 104, 107, 111, 116, 125, 126, 156, 174, 181, 188, 249, 250, 255, 280, 300, 339, 351, 354, 367, 372, 375, 378, 381, 394, 414, 417, 419, 423, 424, 432, 439, 487, 504, 507, 517, 524, 525, 527, 528, 549, 554, 563, 565, 570, 574, 575 ];

-компенсировать в рационах дефицит физиологически важных элементов - аминокислот, витаминов и микроэлементов [96, 137, 154, 171, 229, 274, 298,350, 463,523,533,572];

-повышать степень усвоения кормов [3, 134, 137, 153, 186, 194, 201, 235, 247, 283, 287, 436, 469, 520];

- снижать влияние неблагоприятных экологических факторов (загрязнение окружающей среды, кормов и воды нитратами, пестицидами, гербицидами, тяжелыми металлами и радионуклидами) и компенсировать последствия стрессов различной природы [14, 53, 63, 109, 140, 163, 185, 192, 222, 282, 376, 384].

Препараты, входящие в состав синбиотиков, можно производить по унифицированным технологиям на гибких технологических линиях, которые могут быть тиражированы и размещены в непосредственной близости к по9 требителю (на агропредприятиях и птицеводческих комплексах) [264, 265, 293, 368, 373], и применять в виде лечебно-профилактических кормовых добавок.

Расходы таких лечебно-профилактических добавок необычайно малы - от 200 г до 5 кг на тонну корма (в зависимости от их состава). В России они представлены, в основном, импортными препаратами (Германия, США, Голландия, Бельгия и др.) и имеют высокую стоимость [3, 153].

Птицеводство является наиболее динамично развивающейся отраслью АПК [29, 215, 364, 365]. Ежегодный прирост производства мяса составляет 15%. В 2015 году планируется произвести около 3 млн т мяса домашней птицы, для этого потребуется более чем 7-8 млн т комбикормов, что означает значительный рост всей комбикормовой промышленности [16, 29, 117, 234, 493, 546]. Внедрение в промышленное птицеводство максимально продуктивных кроссов, интенсивных технологий выращивания, а также наращивание поголовья птицы привело к значительному усилилению техногенной и микробиологической нагрузки на организм птицы. Изменение в количественном и качественном составе условно-патогенной и нормальной кишечной микрофлоры (дисбактериоз) является одним из главных факторов развития диарейного синдрома, который занимает основное место среди причин отхода молодняка [5, 31, 35, 49, 51, 61, 86, 97, 111, 121, 128, 160, 161, 174, 181, 188, 189, 351, 381, 446, 484, 517, 576].

В существующей ситуации необходимо изменение характера кормовой базы как количественно, так и качественно за счет создания лечебно-профилактических кормовых добавок, обеспечивающих не только питательную ценность, но и биопротекторное действие на организм птицы. Это особенно важно для бройлерного птицеводства из-за специфики технологии содержания и кормления бройлеров [290, 385, 557, 577]. Применение синбиотических комплексов является необходимым условием оптимизации технологического процесса производства мяса бройлеров и способствует обеспечению реализации генетического потенциала птицы, ее необходимой сохранности и прою дуктивности [492, 494, 513, 523, 532, 555], требуемого качества и безопасности продукции [9, 13, 40, 85, 94, 102, 143, 162,170, 370, 387, 392, 466, 506].

Особую опасность для птиц представляют вирусные болезни (ньюкасл-ская болезнь, грипп и др.), а также микст-инфекции [22, 26, 35, 103, 275, 304, 305, 372, 459, 478, 504]. Развитие вторичных иммунодефицитов, иммуноде-прессивное действие ряда вакцинных штаммов на организм птиц препятствует созданию напряженного поствакцинального иммунитета [113, 135, 168, 192, 331, 361, 411, 550]. Решением данной проблемы может служить совместное применение вакцин с препаратами, обладающими иммунокоррегирующим действием - иммуностимуляторами, пробиотиками, пребиотиками [41, 42, 61, 72, 98, 104, 127, 149, 244, 273, 460, 500].

Широкий спектр существующих и вновь разрабатываемых про-, пре- и синбиотиков ставит задачу их правильного выбора и рационального использования. С точки зрения обеспечения конкурентоспособности продукции основным критерием такого выбора является соотношение затраты/эффективность, которое устанавливается при проведении фармакоэконо-мических исследований [141, 266, 324, 391].

Кардинальное изменение экономических отношений в нашей стране, подготовка к вступлению России в ВТО, значительные изменения законодательства в сфере производства и сбыта лекарственных средств (ЛС), в том числе ЛС для животных, требуют внедрения новых подходов к их разработке, производству и обращению [360]. В настоящее время российские предприятия, производящие ЛС для животных, находятся в условиях перехода к работе в соответствии с международными требованиями стандартов ИСО 9000:2008 (ГОСТ Р ИСО 9001-2008) и вМР (ГОСТ Р 52249-2009), которые являются базовыми при построении интегрированной системы менеджмента качества [9, 13, 25, 76, 77, 81, 82, 99, 136, 213, 230, 265, 266, 324, 330, 389, 480] и содержат требование использовать проектный подход при реализации инноваций [12, 75, 123, 217, 315, 497], поскольку именно на этапе проектирования закладываются характеристики качества и безопасности продукции

ИСО 10006:2003). Проект должен содержать информацию и результаты расчетов, подтверждающие, что в процессе разработки получен продукт, востребованный рынком и характеризующийся оптимальным соотношением цены и качества, а технология производства и методы контроля обеспечивают его эффективность и безопасность, соблюдение гуманных правил работы с лабораторными животными.

В современной биофармацевтической индустрии обеспечение качества - это всеобъемлющая концепция, охватывающая все этапы жизненного цикла продукции от ее разработки и исследований при производстве до контроля качества, хранения, оптовой реализации и информирования потребителя. Надлежащая лабораторная практика (GLP) вместе с надлежащей клинической практикой (GCP) и надлежащей практикой производства (GMP) представляют собой три основных международных профессиональных кодекса, призванных обеспечивать эффективность, безопасность и качество биофармацевтической продукции на всех этапах ее разработки (GLP), апробации (GCP) и производства (GMP).

В законе об обращении J1C [360] установлена необходимость проведения доклинических исследований и клинических испытаний регистрируемых продуктов [114, 285, 286, 353, 477, 531]. Планирование и проведение доклинических исследований (ДИ), связанных с определением безопасности исследуемого вещества, осуществляется в соответствии с Правилами GLP (Good Laboratory Practice) и требованиями Директивы ЕС 86/609/ЕЭС от 1986 г. «О защите животных, используемых в экспериментальных и научных целях» [106, 208, 267, 268, 270]. Применение этих Правил обязательно при разработке и внедрении новых JIC. Схема, по которой реализуются ДИ, конкретизируется в зависимости от того, к какому классу относится препарат (иммунобиологический, фармацевтический, БАД) [92].

Правилами GLP для лекарственных средств установлено определение специфической активности и безопасности (токсичности) в качестве обязательных показателей доклинических исследований. Согласно рекомендациям

ВОЗ, важным показателем качества иммунобиологических препаратов, к которым можно отнести пробиотики, является их стабильность [207, 209, 241, 242, 284, 447, 448]. На современном этапе исследований наиболее объективным и перспективным для оценки стабильности биологических препаратов различной природы считается метод ускоренного определения при повышенных температурах [130, 172].

При разработке, производстве и применении кормовых добавок самое пристальное внимание должно уделяться исследованию их безопасности [120, 145, 165, 220, 246, 257, 362].

Обязательные показатели должны определяться стандартными методами в стандартных условиях, что достигается использованием стандартных образцов сравнения, для которых установлены статистически достоверные значения исследуемых показателей [267]. Для этих целей ВОЗ рекомендует утверждать лабораторные рабочие эталонные материалы (ЛРЭМ), одна из функций которых - подтверждение правильности результатов количественного анализа активности испытуемого биологического препарата [213, 214].

В развитие Положения о необходимости гуманного обращения с лабораторными животными актуально проведение сравнительных исследований по изысканию чувствительных биотест-систем для оценки токсичности в параллельном изучении на животных [47, 187]. Преимуществом использования тест-организмов и биомоделей является быстрота анализа, относительная дешевизна, высокая чувствительность к токсическим факторам и наглядность в проявлении биологического эффекта [108, 210, 377]. При получении достоверной корреляции с опытами на животных методы биотестирования на системах различной сложности (культура клеток, эмбрионы, культура тетрахи-мена пириформис) можно рекомендовать для оценки потенциальной и острой токсичности [52, 271].

Предметом настоящих исследований явилась разработка на основе концепции «пробиотик + пребиотик» и «пробиотики + белковая кормовая добавка» новых синбиотических комплексов (далее - синбиотиков), в которых

13 препараты и способы их применения в птицеводстве подобраны таким образом, чтобы их можно было использовать как лечебно-профилактические кормовые добавки.

Цель и задачи исследований. Цель работы - разработать рецептуры новых синбиотиков, технологию их производства, средства и методы обеспечения качества, способы применения в птицеводстве при выращивании бройлеров.

Для достижения поставленной цели определены следующие задачи:

- научно обосновать выбор и исследовать характеристики штаммов микроорганизмов - продуцентов пробиотиков, пребиотика и белковой кормовой добавки, входящих в состав синбиотиков;

- разработать систему изготовления и контроля посевного материала для производства пробиотиков АВИЛАКТ-1К и АВИСУБТИЛ, пребиотика АВИСТИМ и белковой кормовой добавки ЦЕРЕВЕТ;

- разработать схему доклинических исследований безвредности, эффективности и стабильности препаратов, новые методы контроля безвредности с помощью биологических тест-систем доорганизменного уровня;

- изготовить опытные образцы препаратов и провести их доклинические исследования; исследовать антиоксидантное действие препарата АВИСТИМ в качестве новой характеристики биологической активности пребиотиков;

- определить эффективность применения синбиотиков АВИЛАКТ-ФОРТЕ (АВИЛАКТ-1К+АВИСТИМ) и ЛАКТОСУБТИЛ-ФОРТЕ (АВИ-ЛАКТ-1К+АВИСУБТИЛ+ЦЕРЕВЕТ) при выращивании цыплят-бройлеров; разработать способы их применения;

Научная новизна. Научно обоснована концепция кормовых добавок на основе синбиотических комплексов («пробиотик + пребиотик» и «пробиоти-ки + кормовая добавка»), сконструированы новые синбиотики для птицеводства ЛАКТОСУБТИЛ-ФОРТЕ и АВИЛАКТ-ФОРТЕ.

Установлено, что выбранные штаммы бактерий (Lactobacillus acidophilus, штамм 1К и Bacillus subtilis, штамм М-8) по уровню антагонистической активности к патогенным микроорганизмам и резистентности к антибиотикам удовлетворяют требованиям, предъявляемым к продуцентам пробиоти-ков. На их основе разработаны новые пробиотики АВИЛАКТ-1К и АВИ-СУБТИЛ.

Выделен новый штамм мицелиального гриба Fusarium sambucinum, исследована его безопасность, химический состав биомассы и культуральной жидкости (Патент РФ № 2259209 «Штамм гриба Fusarium sambucinum - продуцент биологически активных веществ», приоритет от 26.03.2004 в соавт.). На основе культуральной жидкости гриба разработан новый пребиотик АВИСТИМ. Установлено антиоксидантное действие культуральной жидкости как показатель биологической активности пребиотиков.

Показана высокая питательная ценность биомассы инактивированных клеток дрожжей Saccharomyces cerevisiae, шт. diastaticus ВКПМ-у-1218, разработана новая белковая кормовая добавка ЦЕРЕВЕТ.

В технологии изготовления входящих в состав синбиотиков препаратов (пробиотиков, пребиотика и белковой кормовой добавки) для культивирования пробионтных бактерий, гриба и дрожжей-сахаромицетов использована универсальная питательная среда на основе ферментолизата отходов зерносырья.

Разработан состав синбиотиков ЛАКТОСУБТИЛ-ФОРТЕ и АВИЛАКТ-ФОРТЕ и способы их применения при выращивании цыплят-бройлеров (Патент РФ № 2286066 «Кормовая добавка для птицеводства и способ выращивания птицы», приоритет от 26.04.04, в соавт.). Установлен синергизм действия препаратов при их применении в составе комплексов.

Эффективность применения синбиотиков при выращивании цыплят-бройлеров определена с использованием широкого спектра показателей: европейский индекс продуктивности (интегральная характеристика зоотехнических параметров выращивания - живая масса и сохранность птицы, затраты корма); качество продукции (содержание белка и жира в мясе, выход мясных частей); экономический эффект; влияние на эффективность вакцинации птицы на модели ньюкаслской болезни (Патент РФ № 2035915 «Способ профилактики болезни Ньюкасла», приоритет от 28.12.92, в соавт.; Патент РФ №2035917 «Вакцина против болезни Ньюкасла и способ ее применения», приоритет от 28.12.92, в соавт.).

Впервые для обеспечения качества пробиотиков, пребиотика и белковой кормовой добавки в процессе их разработки и производства реализованы:

- методология проектного подхода согласно требованиям ГОСТ Р ИСО 9001-2008 «Системы менеджмента качества. Требования». Алгоритм исследований соответствовал основным этапам разработки и внедрения в производство нового лекарственного средства: научная гипотеза и поисковые исследования; доклинические исследования; разработка технологии производства и наработка опытных партий препаратов; клинические испытания в пти-цехозяйстве и оценка экономической эффективности;

- схема доклинических исследований безопасности, активности, стабильности препаратов в соответствии с Правилами ОЬР, предусматривающая обоснование выбора показателей и методов их определения; установление допустимых границ показателей; разработку и применение для определения безопасности методов биотестирования на моделях доорганизменного уровня - тест эмбриотоксичности на развивающихся эмбрионах кур и модификация ХЕТ-КАМ теста на хориоаллантоисной оболочке куриного эмбриона; изготовление и использование стандартных образцов - лабораторных рабочих эталонных материалов.

Практическая ценность работы. Применение синбиотиков АВИ

ЛАКТ-ФОРТЕ и ЛАКТОСУБТИЛ-ФОРТЕ в птицеводстве способствует повы

16 шению продуктивности птицы, обеспечению ветеринарного благополучия птицехозяйств, гарантии качества, биологической и экологической безопасности как самой продукции, так и процесса ее производства.

По разработанной технологии изготовлено 45 серий препаратов. В доклинических исследованиях и производственных испытаниях подтверждена их безопасность и эффективность. В птицехозяйстве проведен 21 научно-производственный опыт и два производственных испытания на цыплятах-бройлерах различных кроссов (суммарное поголовье - 10 ООО голов). Разработаны способы применения синбиотиков при различных путях введения препаратов (выпаивание, смешивание с кормом, напыление на гранулы комбикорма). Результаты испытаний включены в «Методические рекомендации по использованию пробиотиков, пребиотиков и симбиотиков в птицеводстве» и «Методические рекомендации по технологии камерной аэрозольной вакцинации цыплят против ньюкаслской болезни».

Экономический эффект от применения синбиотиков ЛАКТОСУБТИЛ-ФОРТЕ и АВИЛАКТ-ФОРТЕ при выращивании бройлеров составил (в расчете на 1000 голов) 7862 и 1374 руб. соответственно.

С учетом требований Правил вМР разработана и утверждена в установленном порядке нормативная документация: на препараты АВИЛАКТ-1К, АВИСУБТИЛ, АВИСТИМ и ЦЕРЕВЕТ - технологические регламенты, стандарты организации (ТУ) и инструкции по применению; на синбиотики ЛАК-ТОСУБТИЛ-ФОРТЕ и АВИЛАКТ-ФОРТЕ - инструкции по применению.

17 паратов для животных и их ингредиентов с помощью теста на хориоалланто-исной оболочке куриного эмбриона (ХЕТ-КАМ тест)», «Методике определения потенциальной токсичности лечебно-профилактических препаратов для животных и их ингредиентов на куриных эмбрионах (тест эмбриотоксично-сти)».

Разработан в соавторстве и внедрен ОСТ 100083-95 «Продукция агробиологической промышленности. Технологические регламенты производства. Содержание, порядок разработки, построения, согласования и утверждения», основные положения которого в 2010 г. актуализированы с учетом требований ГОСТ Р 52249-2009 «Правила производства и контроля качества лекарственных средств» и включены в проект национального стандарта РФ «Средства лекарственные для животных. Технологические регламенты производства. Содержание, порядок разработки, согласования и утверждения». Материалы документов использованы в 2003-2011 гг. при внедрении системы менеджмента качества на биопредприятиях: ФГУП «Щелковский биокомбинат», «Орловская биофабрика», «Курская биофабрика», ОАО «Покровский завод биопрепаратов».

Результаты работы использованы для обоснования разработанной во ВНИТИБП и одобренной Президиумом Россельхозакадемии (протокол №4 от 21.04.2011) «Концепции научного обеспечения создания и развития региональных биологических предприятий по производству препаратов для защиты животных, растений и средств, повышающих эффективность функционирования агропромышленного комплекса Российской Федерации», а также в лекционном материале курсов повышения квалификации специалистов птицеводческих предприятий «Новые технологии и пути повышения эффективности производства мяса бройлеров» (ГНУ ВНИТИП Россельхозакадемии, г.Сергиев Посад, 2011 г.).

Основные положения диссертационной работы, которые выносятся на защиту:

- характеристика штаммов микроорганизмов - продуцентов пробиоти-ков, пребиотика и белковой кормовой добавки, входящих в состав синбиоти-ков;

- система получения и контроля посевного материала для изготовления препаратов АВИЛАКТ-1 К, АВИСУБТИЛ, АВИСТИМ и ЦЕРЕВЕТ;

- схема доклинических исследований безопасности, активности и стабильности препаратов, гармонизированная с международными требованиями;

- методы определения безвредности препаратов с помощью биологических тест-систем доорганизменного уровня;

- технология изготовления препаратов с использованием универсальной питательной среды на основе ферментолизата отходов зерносырья;

- антиоксидантная активность пребиотика;

- эффективность применения синбиотиков при выращивании цыплят-бройлеров;

- влияние синбиотика АВИЛАКТ-ФОРТЕ на эффективность вакцинации птицы против ньюкаслской болезни;

- способы и экономическая эффективность применения синбиотиков АВИЛАКТ-ФОРТЕ и ЛАКТОСБТИЛ-ФОРТЕ в птицеводстве.

Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены:

- в виде ежегодных отчетов по темам госзаданий на заседаниях ученого совета и методической комиссии ВНИТИБП (1991 - 2010 гг.);

- на секции «Ветеринарная биотехнология» Отделения ветеринарной медицины РАСХН (2004-2010 гг.);

- на пяти Международных конгрессах (XI International congress of the World Veterinary poultry association, Будапешт, 1997 г.; I и III Международные ветеринарные конгрессы по птицеводству, Москва, 2005 и 2007 гг.; конгрессы «Биотехнология-2009, 2011», Москва, 2009, 2011 гг.);

- на 42 Всесоюзных, Республиканских, Международных и Всероссийских конференциях, проводившихся в Москве, Минске, Риге, Киеве, Харькове, Алуште, Петербурге, Саранске, Владимире, Краснодаре, Курске, Пу-щино, Боровске, Светлогорске, Сергиевом Посаде, Покрове, Щелково (1991 -2011 гг.).

Разработки удостоены:

- серебряной медали и Диплома II степени (Российская агропромышленная выставка «Золотая осень», 2011 г.);

- Дипломов У,У1 и VII Международных выставок «Лаборатория Экспо» (2007, 2008, 2009 гг.);

- Диплома Россельхозакадемии за лучшие завершенные научные разработки 2010 г.

1.ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Обеспечение продовольственной и биологической безопасности страны является основной задачей АПК на современном этапе, что делает актуальными научные разработки, направленные на ее решение [220, 245, 362]. В Межведомственной координационной программе фундаментальных и приоритетных прикладных исследований по научному обеспечению развития АПК Российской Федерации на 2006-2010 гг. одна из проблем сформулирована следующим образом: «Разработка новых методов и средств диагностики, лечения и профилактики болезней животных и рыб для обеспечения устойчивого ветеринарного благополучия и получения продукции АПК высокого санитарного качества». Она направлена на научное обеспечение приоритетного национального проекта «Развитие АПК» и реализацию приоритета «Ускоренное развитие животноводства» (этап «Изучить особенности эпизоотического процесса и разработать высокоэффективные средства и оптимальные способы их применения для диагностики, профилактики и борьбы с инфекционными и паразитарными болезнями животных и птиц»). Научно-исследовательские работы должны включать изучение вопросов эпизоотологии особо опасных инфекционных болезней и смешанных форм их течения, создание нового поколения средств диагностики, специфической и неспецифической профилактики, терапии и дезинфекции, методов обеспечения устойчивого ветеринарного благополучия промышленного животноводства и птицеводства, биобезопасности получаемой продукции.

В настоящее время организм человека и животных подвергается воздействию целого комплекса неблагоприятных факторов, влияющих на нормальное функционирование основных систем жизнедеятельности, среди которых влияние ухудшающейся экологической обстановки, увеличение количества стрессовых ситуаций, массовое бесконтрольное применение химиоте-рапевтических препаратов, в том числе и антибиотиков [367, 382].

При профилактике болезней сельскохозяйственных животных и птицы необходимо учитывать :

- наличие комплекса инфекций в хозяйствах, на фоне которого борьба с отдельно взятой инфекцией становится неэффективной за счет снижения общего иммунного статуса организма животных [86, 127, 331, 361];

- в условиях интенсивного промышленного ведения животноводства повышается роль болезней, обусловленных условно-патогенной микрофлорой и ассоциациями возбудителей [9, 35, 49];

-большая концентрация животных создает благоприятные условия для быстрого перезаражения, при этом изменяется значение различных факторов передачи возбудителей от зараженных животных к восприимчивым [86, 161];

- неблагоприятные экологические факторы, недоброкачественные корма и несбалансированное кормление, плохое содержание животных приводят к резкому ухудшению качества продукции (мяса, молока, яиц) и несоответствию ее требованиям ФАО и ВОЗ [53,43].

Одним из современных подходов к решению проблемы является разработка, производство и применение новых экологически безопасных эффективных препаратов, способных обеспечить биологическую защиту животных [88, 95, 127, 196, 252, 328, 338]. Такие препараты должны обеспечивать:

- повышение физиологического и иммунного статуса организма животных;

- лечение и профилактику заболеваний молодняка и взрослых особей за счет защиты от патогенных и условно-патогенных возбудителей болезней ЖКТ;

- компенсацию в рационе кормления дефицита аминокислот, витаминов и микроэлементов, а также повышение степени усвоения кормов;

- токсико- и радиопротективного действие, снижающее влияние неблагоприятных экологических факторов (загрязнения окружающей среды нитратами, пестицидами, гербицидами, тяжелыми металлами и радионуклидами);

- повышение эффективности вакцинопрофилактики инфекций при ее использовании в комплексе оздоровительных мер;

- качество и безопасность продукции.

Это обусловило интенсивное развитие экобиотехнологий, в частности направление, связанное с разработкой и применением пробиотиков [5,11, 23, 30, 61, 95, 102, 127, 175, 247, 248, 252, 259, 302, 326, 379, 398, 401, 433, 442, 573], пребиотиков [48, 90, 232, 249, 298, 301, 404,], и синбиотиков [5, 31, 84, 137, 278, 329, 332, 349, 358, 367, 382, 407, 432, 451, 458, 508, 543], как в здравоохранении, так и в ветеринарии. Такие лечебно-профилактические и росто-стимулирующие экологически чистые препараты физиологичны по своему действию, безвредны для животных, просты в наработке, дешевы, технологичны для группового применения, что особенно актуально для отечественного птицеводства, занимающего передовые позиции в АПК [29].

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)", Неминущая, Лариса Анатольевна

4. ВЫВОДЫ

1. Научно обоснована концепция создания синбиотических комплексов «пробиотик + пребиотик» и «пробиотики + белковая кормовая добавка». Разработаны новые препараты (пробиотики АВИЛАКТ-1К, АВИСУБТИЛ, пребиотик АВИСТИМ, белковая кормовая добавка ЦЕРЕВЕТ) и синбиотиче-ские комплексы на их основе АВИЛАКТ-ФОРТЕ и ЛАКТОСУБТИЛ-ФОРТЕ.

Определены и охарактеризованы штаммы-продуценты микроорганизмов для получения препаратов, входящих в состав комплексов; разработана технология их изготовления и схема контроля качества (безопасность, активность, стабильность); определен состав комплексов, способы их применения и эффективность при выращивании бройлеров.

2. Штаммы IK L. acidophilus (ВКПМ № В-2991) и М-8 В. subtilis (ВКПМ № В-3121), используемые для изготовления препаратов АВИЛАКТ-1К и АВИСУБТИЛ, in vitro обладали выраженным антагонистическим действием по отношению к патогенным штаммам сальмонелл (S. gallinarum, S.typhimurium, S.dublin) и эшерихий (Е. coli К-88, Е. coli К-99, Е. coli А-20). В опытах in vivo они обеспечивали увеличение выживаемости птицы на 30 и 51% соответственно при контрольном заражении патогенным изолятом Е. coli, выделенным в хозяйстве.

3. L. acidophilus умеренно чувствительны к офлоксацину, ципрофлок-сацину, энрофлону, флавомицину, линкомицину. В. subtilis устойчивы к кламоксилу, левомицетину, тетрациклину, ампициллину, рифампицину, ген-тамицину, энрофлону, флавомицину, линкомицину и умеренно чувствительны к цефазолину, офлоксацину, ципрофлоксацину.

4. Выделен из растительного сырья, изучен и депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов новый штамм мицелиаль-ного гриба F. sambucinum MKF-2001-3 (ВКПМ № F-867). Штамм не патогенен для человека и животных, является продуцентом биологически активных веществ (аминокислот, углеводов, липидов, макро- и микроэлементов,

321 витаминов, органических кислот). На его основе создан пребиотик АВИ-СТИМ, который обладает ростостимулирующими свойствами и отличается высоким содержанием (10,9 г/л) органических кислот, в том числе лимонной (0,5 г/л), яблочной (0,4 г/л), фумаровой (0,3 г/л), янтарной (0,5 г/л), щаве-лево-уксусной (0,3 г/л) и уксусной (0,5 г/л).

5. Величина антиоксидантной активности препарата АВИСТИМ, определенная с помощью инструментального метода, превышает активность маркера (дигидрокверцитин) в 5,5-5,9 раза и может служить характеристикой его биологического действия.

6. Биомасса инактивированных клеток дрожжей S. cerevisiae diastaticus (ВКПМ № у-1218) - основа белковой кормовой добавки ЦЕРЕВЕТ - содержит в своем составе белки, углеводы, минеральные элементы, аминокислоты, витамины, олигосахариды (глюканы и маннаны), ферменты (амилазы, протеазы, целлюлазы и гемицеллюлазы), обладает питательной ценностью и биологической активностью. По питательной ценности биомасса аналогична соевому и подсолнечному шротам, в отличие от других кормовых добавок содержит витамины В12, А, Д, Е, С и К.

7. Использование универсальной питательной среды на основе фермен-толизата отходов зерносырья при культивировании микроорганизмов обеспечивало высокое накопление продукта: L. acidophilus - не менее 5x109 КОЕ/см , В. subtilis - не менее 1x1010 КОЕ/см3, биомассы гриба и дрожжей 10-12 г/л и 20-25 г/л соответственно. Внесение в питательную среду культу-ральной жидкости гриба (0,01-1% от объема среды) при культивировании дрожжей сокращало время накопления биомассы с 19 до 10 часов, способствовало ее более интенсивному накоплению (на 65%), более быстрому усвоению Сахаров (на 32,1%) и более активному потреблению минеральных азота (на 21,5%) и фосфора (на 45,4%).

8. Получение сухой формы пробиотиков АВИЛАКТ-1К и АВИСУБТИЛ методом сублимационного высушивания обеспечивало концентрацию бактерии в препаратах не менее 3x109 КОЕ/г и 5x1010 КОЕ/г (соответственно) и

322 увеличивало срок их хранения (по сравнению с жидкой формой) с 3 до 9 и с 10 до 12 месяцев (соответственно) при температуре 8-10°С.

9. Обеспечение качества при разработке и изготовлении препаратов, входящих в состав синбиотиков, осуществлялось на основе методологии проектного подхода (ГОСТ Р ИСО 9001-2008), разработки и применения системы изготовления и контроля посевного материала, реализации схемы доклинических исследований безвредности, активности и стабильности препаратов (ГОСТ Р 52249-2009).

10. Препараты безвредны для суточных цыплят при пероральном применении в дозах, в 5-10 раз превышающих рекомендуемые. Для определения безопасности биотестированием на моделях доорганизменного уровня разработан тест эмбриотоксичности (на развивающихся эмбрионах кур) и модифицирован ХЕТ-КАМ тест (определение раздражающего действия химических веществ на хориоаллантоисной оболочке куриного эмбриона).

11. Стандартизованы условия определения количества жизнеспособных лактобактерий. Условия определения считали стандартными, а полученное значение для контролируемой серии - достоверным (при указанной величине ошибки определения), если полученное в ходе параллельного определения значение количества жизнеспособных лактобактерий в образце лабораторного эталонного рабочего материала укладывалось в интервал (6,7±0,5)хЮ8КОЕ/см3.

12. Исследована термостабильность препарата АВИЛАКТ-1К, определены величины констант скоростей инактивации лактобактерий в жидком и сухом препарате Кт= -1,6х10"3 сек"1 и Кт= -3,8х10"4 сек"1 соответственно. В качестве экспресс-теста оценки стабильности рекомендованы тесты «ускоренного старения» - 50°С в течение 15 минут (для жидкой формы) и 60°С - 30 минут (для сухой).

13. Определен состав синбиотиков АВИЛАКТ-ФОРТЕ (АВИЛАКТ-1К +

АВИСТИМ) и ЛАКТОСУБТИЛ-ФОРТЕ (АВИЛАКТ-1К + АВИСУБТИЛ +

ЦЕРЕВЕТ) и эффективность их применения при выращивании цыплят

323 бройлеров кроссов различной продуктивности. Применение синбиотиков способствовало увеличению показателя европейского индекса продуктивности на 25 (АВИЛАКТ-ФОРТЕ) и 57 (ЛАКТОСУБТИЛ-ФОРТЕ) единиц, повышению зоотехнических показателей (увеличению привесов на 6,9 и 10,2 %, сохранности птицы на 2,5 и 3,8 %, уменьшению затрат корма на 3,8 и 6,1 % соответственно) и улучшению качества мяса (увеличению выхода съедобных частей в тушке на 1,0%, уменьшению содержания жира в мясе на 2,2%).

Уменьшение дозировки препаратов в составе синбиотика ЛАКТОСУБТИЛ-ФОРТЕ в два раза (по сравнению с их самостоятельным применением) не снижало эффективность его применения (показатель европейского индекса продуктивности увеличился с286до328 единиц).

14. Исследовано влияние синбиотика АВИЛАКТ-ФОРТЕ на эффективность вакцинации птицы против ньюкаслской болезни. Установлено, что применение синбиотика повышало на 2,1 уровень антигемагглютининов в сыворотке крови птицы, переболевшей колибактериозом после экспериментального заражения патогенным изолятом Е.соН. Применение пробиотика АВИЛАКТ-1К корректировало снижение роста живой массы вакцинированной птицы на 21,1%, 31,3%, 16,7% (Р<0,05) в возрасте 3, 4 и 8 недель соответственно.

15. Совместное применение синбиотиков с флавомицином компенсировало на 90-95% негативное действие антибиотика (ухудшение зоотехнических показателей, снижение содержания лактобактерий в желудочно-кишечном тракте птицы). Показано, что синбиотики могут служить альтернативой кормовым антибиотикам, их применение более безопасно, эффективно и экономически выгодно (в пересчете на стоимость курса), чем использование кормовых антибиотиков.

16. Разработаны способы применения синбиотиков при выращивании цыплят-бройлеров: АВИЛАКТ-ФОРТЕ - двумя курсами (в 1-7 и 21-28 дни содержания) из расчета пробиотик АВИЛАКТ-1К в дозе 1x109 КОЕ/1 кг корма, пребиотик АВИСТИМ в дозе 10% от суточной нормы воды; ЛАКТО

324

СУБТИЛ-ФОРТЕ - двумя курсами (1-7 дни и 21-28 дни) из расчета пробио-тики АВИЛАКТ-1К и АВИСУБТИЛ напылением на гранулы комбикорма в

7 8 дозах 0,5x10 и 0,5x10 КОЕ/гол/сут соответственно, ЦЕРЕВЕТ - 1,5 % от суточной дозы корма.

Синбиотики АВИЛАКТ-ФОРТЕ и ЛАКТОСУБТИЛ-ФОРТЕ эффективны как при клеточном, так и при напольном способах содержания птицы: по сравнению с контролем живая масса увеличивалась на 4,0 и 5,8 % соответственно, сохранность - на 2,5%, затраты корма сократились на 0,9 и 1,1%.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для практического использования предложены следующие документы.

Нормативная документация: ТУ-10.07-023-93 («Авилакт-1К» - про-биотик для птиц); Технологические регламенты производства препаратов АВИЛАКТ-1К, АВИСУБТИЛ, АВИСТИМ и ЦЕРЕВЕТ, утвержденные директором ВНИТИБП 07.09.2010; Стандарты организации (ТУ) на препараты АВИЛАКТ-1К, АВИСУБТИЛ, АВИСТИМ и ЦЕРЕВЕТ (№№ 9337-00311734126-10; 9337-004-11734126-10; 9291-005-11734126-10; 9291-00611734126-10 соответственно), утвержденные директором ВНИТИБП 03.10.2010 и согласованные директором ФГУ ВГНКИ 27.12.2010; Инструкции по применению препаратов АВИЛАКТ-1К, АВИСУБТИЛ, АВИСТИМ, ЦЕРЕВЕТ и синбиотиков АВИЛАКТ-ФОРТЕ и ЛАКТОСУБТИЛ-ФОРТЕ, утвержденные директором ВНИТИБП 07.09.2010 и находящиеся на утверждении в Россельхознадзоре. /Приложение П.2/

ОСТ 100083-95. Продукция агробиологической промышленности. Технологические регламенты производства. Содержание, порядок разработки, построения, согласования и утверждения. - М.,1994,- 100 с.

Методические рекомендации: «Технология камерной аэрозольной вакцинации цыплят против ньюкаслской болезни» / РАСХН - ВНИТИБП -ВНИТИП - Вирусологический центр НИИ микробиологии МО РФ,- Сергиев Посад: ВНИВИП, 1996 г. - 53 е.; «Использование пробиотиков, пребиотиков и симбиотиков в птицеводстве» / ВНИТИП - ВНИТИБП - ООО «Биотроф» -ООО «Пробиотик Центр». - Сергиев Посад, 2008.- 43с.; «Разработка и реализации проекта создания нового лекарственного средства. Обеспечение качества лекарственных средств для животных в процессе разработки», утв. РАСХН 28.03.08.- М., 2009.-62с.; «Исследование стабильности иммунобиоп-репаратов на этапе разработки и в условиях действующего производства», утв. РАСХН 28.03.08.- М.,2009. - 32 с. /Приложение П.5/

Рекомендации по проведению доклинических испытаний новых лекарственных средств для животных и биологически активных добавок к кормам, утв. РАСХН 16.11.05.

Методики: «Определение потенциальной токсичности лечебно-профилактических препаратов для животных и их ингредиентов на куриных эмбрионах (тест эмбриотоксичности)», утв. РАСХН 14.11.06; «Определение раздражающего действия лечебно-профилактических препаратов для животных и их ингредиентов с помощью теста на хориоаллантоисной оболочке куриного эмбриона (ХЕТ-КАМ тест)», утв. РАСХН 14.11.06. /Приложение П.5/

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Неминущая, Лариса Анатольевна, Щёлково

1. Авакян А.Д. Изменение картины белой крови при применении культуральной жидкости желтого гриба / Авакян А.Д. // Успехи медицинской микологии : материалы I Все-рос. конгресса по медицинской миологии.-М., 2003.-Т.1.-С.198-203.

2. Аказеева О.И. Использование биогенных препаратов для повышения продуктивности и сохранности птицы / Аказеева О.И., Петрянкин Ф.П., Иванов Н.Г. // Тр. Чувашской ГСХА, Чебоксары.-2005.-Т.20 (4.1).- С.421-423.

3. Алексеева С.А. Влияние пробиотиков Лактур и Бифитрилак на белковый обмен / Алексеева С.А., Клетикова Л.В., Копоть О.Ю. // Агрорынок.-2009.-Май.-С.44-45.

4. Альпейсов Ш. Микробиологические препараты в рационах молодняка Электронный ресурс. / Альпейсов Ш., Ахметжанов Д., Едыгенов А. Режим доступа: http:// www. webpticeprom .ru/ru/ articles-veterinary ,html?pageID=1261732018.

5. Алямкин Ю. Пробиотики вместо антибиотиков это реально / Алямкин Ю. // Пти-цеводство.-2005.-№2.-С. 17-18.

6. Антипов А.А. Европейский фактор эффективности выращивания бройлеров / Ан-типов А.А. // Комбикорма.-2008.-№8.-С.65-66.

7. Антипов А.А. Обоснование применения пробиотика «ОНп» при выращивании бройлеров / Антипов А.А., Фисинин В.И., Егоров И.А. // Ветеринария и кормление.-2011,-№1.-С.10-13.

8. Антипов В.А. Актуальные проблемы фармации в ветеринарии / Антипов В.А., Мамсирова С.К., Семененко М.Л. // Труды Кубанского гос. аграрн. университетата (серия: Ветеринарные науки). 2009. - №1 (ч.1). - С.253-254.

9. Антипов В.А. Фармако-токсикологические свойства ацидофилина / Антипов В.А., Кременщикова В.И. // Ветеринария,- 1987,- №6.-С.57-59.

10. Антипов В.А. Эффективность и перспективы применения пробиотиков / Антипов В.А., Субботин В.М. //Ветеринария,-1980,- №12,- С.55-57.

11. Анч Л. Вывод на рынок нового лекарственного препарата / Анч Л. // Ремедиум.-2006,- Июнь.-С.37-42.

12. Аронов И. Качество продукции и безопасность: что первично? / Аронов И. // Стандарты и качество,- 2006.-№1.-С.34-37.

13. Архипов A.B. Антиоксиданты в животноводстве / Архипов A.B. // Актуальные проблемы биологии в животноводстве : мат. V Междун. научной конф. г. Боровск, 2010. - С.129-131.

14. Архипов A.A. Как обойтись без кормовых антибиотиков? / Архипов A.A.: мат. I Междун. ветеринарного конгресса по птицеводству.-М.,2005.-С.232-235.

15. Афанасьев В. Комбикормовое производство: состояние и проблемы / Афанасьев В. // Комбикорма.-2009.-№ 1 .-С.9-13.

16. Ашмарин И.П. Статистические методы в микробиологических исследованиях / Ашмарин И.П., Воробьев A.A.- Л.: Ленмедгиз, 1962. 180 с.

17. Бабкина М. П. Коррекция иммунного статуса и повышение продуктивности цыплят бройлеров пробиотиками / Бабкина М. П. // Актуальн. пробл. интенсивн. развития животноводства : сб. науч. тр.-Горки, 1998.- С.201-207.

18. Байрамашвили Д.И. Биотехнологические способы получения фармацевтических препаратов : автореф. дис. . д-ра хим. наук / Байрамашвили Д.И. -М., 2007.-49с.

19. Барт Стоквис. Смешанные инфекции кур-несушек / Барт Стоквис : мат. VI Междунар. ветеринарного конгресса по птицеводству,- М., 2010.-С.82-84.

20. Башкиров О.Г. Биоплюс 2Б натуральный пробиотик с широким спектром многофакторной активности / Башкиров О.Г. // Зооиндустрия.-2002.-№2.-С.24-27.

21. Белова Н.В. Природа биологической активности высших грибов / Белова Н.В. // Успехи медицинской микологии : материалы I Всерос. конгресса по медицинской миоло-гии.-М., 2003.-Т. 1.-С.230-233.

22. Береговых В.В. Управление рисками качества в фармотрасли / Береговых В.В. // Безопасность и управление рисками в фармацевтических и биотехнологических отраслях : сб. докладов VI Междун. конференции,- М., 2006.-С.29-31.

23. Бессарабов Б.Ф. Применение нового антистрессового препарата при вакцинации цыплят против ньюкаслской болезни / Бессарабов Б.Ф., Сушкова Н.К., Мельникова И.И. // IV Межд. ветер, конгр. по птицеводству,- М,- 2008,- С. 148-150.

24. Бессарабова Е. Опыт применения мелкодисперсной формы пробиотика Лактобифа-дол курам / Бессарабова Е.: мат. VI Междунар. ветеринарного конгресса по птицеводств,-М., 2010.-С.158-163.

25. Бобылева Г.А. Состояние и перспективы развития отрасли птицеводства / Бобылева Г.А.: мат. VI Междунар. ветеринарного конгресса по птицеводству,- М., 2010.-С.7-14.

26. Бондаренко В.М. Пробиотики, пребиотики и синбиотики в терапии и профилактике кишечных дисбактериозов / Бондаренко В.М., Грачева Н.М. // Фарматека.-2003.-№7.-С.56-60.

27. Борисенко Е.Г. Дрожжевые пребиотики: технология и биологическое действие / Борисенко Е. Г., Солдатова С.Ю. // Пробиотические микроорганизмы современное состояние вопроса и перспективы использования : мат. Междунар. научно-практич. конф,-М.,2002.-С.76.

28. Бородин Л.М. Подбор штаммов молочнокислых микроорганизмов для создания противомаститного препарата / Бородин Л.М., Богуш A.A. // Российский ветеринарный журнал.-2008.-№2.-С.21-22.

29. Брагинцева ji.M. Грибы источник биологически активных веществ / Брагинцева JI.M. // Успехи медицинской микологии : материалы I Всерос. конгресса по медицинской миологии.-М., 2003.-Т.1.-С.242-244.

30. Брылин А.П. Уникальный пребиотик нового поколения / Брылин А.П. // РацВе-тИнформ.-2005.-№7.-С.21-25.

31. Бузлама B.C. Экологические требования к ветеринарным фармакологическим препаратам // Вестник РАСХН. Состояние, проблемы и перспективы развития ветеринарной науки России.-М., 1999.-С.83-85.

32. Бурдейный В.В. Влияние изамбена и тимогена на иммунный ответ при вакцинации птицы против ньюкалской болезни / Бурдейный В.В., Комиссаров В.Б., Бурдейная Р.В.: I Междун. ветеринарный конгресс по птицеводству.-Москва.-2005.-С. 88-90.

33. Бутова С.Н. Биотехнологическая деградация отходов растительного сырья / Бутова С.Н.- М.: Россельхозакадемия, 2004,- 207с.

34. Василенко В.Н. Гематологические показатели цыплят-бройлеров при использовании в рационе L-карнитина / Василенко В.Н., Макарова И.В. // Птица и птицепродукты,-2009.-№1.-С.45-47.

35. Васильева С. Тест-система для оценки иммунного статуса цыплят при воздействии тяжелых металлов / Васильева С., Берзиня Н. // Материалы III Украинской конф. по птицеводству с международным участием. Борки, 2001.-Вып. 51.-С.31.

36. Верещака Е. Решение актуальных проблем бактериальной этиологии в промышленном птицеводстве / Верещака Е.: мат. VII Междун. ветеринарного конгресса по птице-водству.-М., 2011.-С.107-109.

37. Верстакова O.JI. Доклиническая оценка лекарственных средств, полученных биотехнологическими методами / Верстакова О.Л., Масычева В.И. // Ведомости НЦ ЭСМП.-2006.-№2,- С. 13-20.

38. Виноходов В.О. Колибактериоз любимая тема современной российской ветеринарии Электронный ресурс. / Виноходов В.О., Лысенко С.Н. // Ветеринария в птицеводстве. - 2008. - Режим доступа: http://ptizevod.narod.ru/production31.htm

39. Виноходов Д.О. Биотестирование в птицеводстве и ветеринарии. Введение в биотестирование / Виноходов Д.О. // Новое в диагностике и профилактике болезней птиц : мат. научно-практ. конф,- Санкт-Петербург, Ломоносов, 2008. С. 188-200.

40. Водолажченко С. Кормовые факторы вызывают заболевания птицы Электронный ресурс. / Водолажченко С.- Режим доступа: http://www.webpticeprom.ru/ru/articles.

41. Воейкова A.B. Совместное культивирование лактобацилл и микоплазм / Воейкова

42. A.B., Ермоленко Е.М., Тец В.В. // Пробиотические микроорганизмы современное состояние вопроса и перспективы использования: мат. Междунар. научно-практич. конф.-М.,2002.-С.25.

43. Волков М.Ю. Разработка лекарственных форм пробиотиков, иммобилизованных на природных адсорбентах / Волков М.Ю., Заболоцкая A.A. // Ветеринарная медицина. -2011.-№1.-С.10-13.

44. Волошин Д.Б. Сравнение антиоксидантных свойств различных производных органического селена / Волошин Д.Б., Заводник Л.Б., Шимкус А. // Актуальн. проблемы биологии в животноводстве : мат. V Междун. научной конф. г. Боровск, 2010. - С.146-147.

45. Вольская О.Г. Изучение антагонистического действия некоторых пробиотиков / Вольская О.Г., Заболотная Д.Д. // Биотехнология: состояние и перспективы развития : мат. II Междунар. конг,- M., 2006.-С.87.

46. Воробьева Г.И. Дрожжи-сахаромицеты в кормопроизводстве / Воробьева Г.И., Сушкова В.И., Филоненко В.И. и др. // Комбикорма.- 2005.-№6.-С.59.

47. Воронин Е.С. Антагонистическая активность Биоспорина-В / Воронин Е.С., Дев-ришов Д.А., Канардов П.П. // Ветеринарная медицина.-2001.-№1.-С.15

48. Воронин Е.С. Иммуномодуляторы и пробиотики при болезнях молодняка перспективное направление в ветеринарной медицине / Воронин Е.С., Петров Р.В., Шишков

49. B.П. // Иммунодефицита сельскохозяйственных животных : мат. Всерос. науч. конф. -М., 1994, с.6-8.

50. Востоков В. Статистическое управление качеством биопродукции / Востоков В., Ивашкин Е. // Стандарты и качество.-2006.-№5.-С. 42-44.

51. Вторушина А.Н. Биологически активные вещества источник антиоксидантов в пище / Вторушина А.Н., Короткова Е.И., Аврамчик O.A. // Биотехнология: вода и пищевые продукты : мат. научного и практич. конгресса.- М., 2008.- С. 178.

52. Габисония Т. Чувствительность к антибиотикам анаэробных бактерий / Габисония Т., Дидебулидзе К., Кочламазашвили К. и др. // Птицеводство.-2007.-№10.- С.42.

53. Гангуева Г. Отечественному АПК качественные корма / Гангуева Г. // Arpo Ры-нок.-2009.-Февраль.-С.14-16.

54. Ганина В.И. Повышение жизнеспособности клеток пробиотических бактерий в процессе сублимационного высушивания / Ганина В.П., Сониева М.М., Соловьева А.Н. // Биотехнология: вода и пищевые продукты : мат. научного и практич. конгресса,- М., 2008,- С.77.

55. Герасимов Я.В. Технология псевдокапсулирования современный подход к производству премиксов Электронный ресурс. / Герасимов Я.В., Рысев О.А - Режим досту-na:http://www.webpticeprom.ru/ru/articles-birdseed.html?pageID= 1217861401.

56. Геркели М.Н. Организация двухстадийной распылительной сушки термолабильных материалов в щадящем температурном режиме / Геркели М.Н. // Биотехнология: вода и пищевые продукты : мат. научного и практич. конгресса,- М., 2008,- С.33.

57. Головещенко A.A. Применение фоспренила при откорме цыплят-бройлеров / Голо-вещенко A.A., Деева A.B., Головещенко К.А. и др. // Ветеринария -2002.-№12.-С.12-15.

58. Горшина Е.С. Биотехнологический способ получения биологически активной субстанции лекарственного гриба корпола опущенного / Горшина Е.С. // Биотехнология на рубеже двух тысячелетий : мат. Междун. науч. конф,- Саранск, 2001.-С.173-175.

59. ГОСТ 13496.7-97. Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения токсичности. М.: Стандартинформ, 1997,- 15с.

60. ГОСТ Р 15.201-2000. Система разработки и постановки продукции на производство. Продукция производственно-технического назначения. Порядок разработки и постановки продукции на производство. М.: Стандартинформ, 2000.-32с.333

61. ГОСТ Р 52249-2009. Правила производства и контроля лекарственных средств. -М.: Стандартинформ, 2010.-139с.

62. ГОСТ Р 52537-2006. Производство лекарственных средств. Система обеспечения качества. Общие требования. М.: Стандартинформ, 2006,- 74с.

63. ГОСТ Р 52550-2006. Производство лекарственных средств. Организационно-технологическая документация. М.: Стандартинформ, 2006.- 54с.

64. ГОСТ Р 54065-2010. Средства лекарственные для животных пробиотические. Методы определения пробиотических микроорганизмов.-М.: Стандартинформ, 2010.-32с.

65. ГОСТ Р ИСО 13408-1. Асептическое производство медицинской продукции. Часть 1. Общие требования. М.: Стандартинформ, 1998.-57с.

66. ГОСТ Р ИСО 22000-2007. Системы менеджмента безопасности пищевой продукции. М.: Стандартинформ, 2007,- 49с.

67. ГОСТ Р ИСО 9001-2008. Система менеджмента качества. Требования. М.: Стандартинформ, 2008.-37с.

68. Государственная Фармакопея РФ. XII издание, часть 1. 2007. ст. 14 «Ионометрия», п.З «Потенциометрическое определение рН».

69. Гоцуленко М.И. Получение БАД синбиотика / Гоцуленко М.И., Капрельянц Л.В. // Биотехнология: вода и пищевые продукты : мат. научного и практич. конгресса,- М., 2008,- С.85.

70. Гражданкин Б. Как получить здоровые и безопасные продукты птицеводства? Электронный ресурс. / Гражданкин Б. // Режим доступа: www.krestyanin.com.-2010.-январь-февраль.-С.84-87.

71. Груздев К.Н. Ветеринарные проблемы в промышленном птицеводстве России / Груздев К.Н.: мат. I Междун. ветеринарного конгресса по птицеводству.-Москва, 2005.-С.1-5.

72. Грязнева Т. Н. Антагонистическая активность бифидо- и лактобактерий в отношении энтеробактерий / Грязнева Т. Н., Ставцева Л.Я. // Ветеринария,- 1991,- №6.-С.21-22.

73. Грязнева Т.Н. Технология производства пробиотика Биод-5 и его лечебно-профилактическая эффективность для разных видов животных: автореф. дис. . д-ра биол. наук / Грязнева Т.Н. М., 2005.-43с.

74. Гужвиньска С.О. Удосконалення технологи люфинзаци виробничих штам1в молоч-нокислих бактерш / Гужвиньска С.О. // Ветеринарна медицина. М1жвщомчий тематичный науковий зб1рник. -Харьюв, 2010. -Вип. 94. -С.113-115.

75. Гулюшин С. Роль пребиотиков в регуляции кишечной микрофлоры у бройлеров / Гулюшин С., Садовникова Н., Рябчик И. // Актуальные проблемы биологии в животноводстве : мат. V Междун. науч. конф,-г. Боровск, 2010. С.283-284.

76. Гунар О.В. Анализ риска получения ложных результатов при контроле качества лекарственных средств по микробиологическим показателям / Гунар О.В. // Медицинский бизнес.-№7-8.-С.42-43.

77. Гуськова Т.А. Оценка безопасности лекарственных средств на стадии доклинического изучения / Гуськова Т.А. // Химико-фармацевтический журнал,-1990.-Т. 24, №7,-С.10-15.

78. Данилевская Н.В. Выбор ветеринарных технологий в промышленном птицеводстве России в условиях глобализации рынков / Данилевская Н.В., Субботин А.В. // БИО. Журнал для специалистов птицевод, и животновод. хозяйств.-2006.-Сентябрь.-С.10-12.

79. Данилевская Н.В. Фармакостимуляция продуктивности животных пробиотическими препаратами : автореф. дис. д-ра вет. наук / Данилевская Н.В. -М., 2007.-49с.

80. Данилян JT.T. Биологические свойства культуральной жидкости и активного вещества чайного гриба / Данилян JI.T. // Успехи медицинской микологии : материалы I Все-рос. конгресса по медицинской миологии.-М., 2003.-Т.1.-С.198-203.

81. Девришов Д.А. Разработка и изучение свойств иммуномодуляторов и биологических препаратов для профилактики и лечения болезней молодняка сельскохозяйственных животных: автореф. дис. . д-ра биол. наук / Девришов Д.А. М., 2000.-53с.

82. Деева А.В. Опыт применения иммунобиостимуляторов Фоспренил и Гамавит в промышленном птицеводстве / Деева А.В., Пронин А.В., Иванов Н.В. и др. : мат. I Меж-дун. ветеринарного конгресса по птицеводству.-Москва, 2005.-С.222-226.

83. Декларация Российского открытого акционерного общества «Росагробиопром» о качестве продукции (принята Советом директоров РОАО «Росагробиопром» протокол № 75 от 15.03.2006 г.).

84. Денисенко В.В. Антибиотикорезистентность штаммов молочнокислых бактерий, перспективных для создания пробиотиков / Денисенко В.В., Найденео И.А. // Биотехнология: состояние и перспективы развития : мат. IV междунар. конгресса.- М., 2007.-С.185.

85. Денисов Г. В. Обоснованность применения пробиотиков в промышленном птицеводстве Электронный ресурс. / Денисов Г. В. Режим доступа: http://www.webpticeprom.ru/ru/articlesveterinary.html?pageID=l 261732018.

86. ЮЗ.Джавадов Э.Д. Иммунологические аспекты вакцинопрофилактики вирусных болезней птиц / Джавадов Э.Д., Дмитриева М.Е. // БИО.-2010.-Апрель.-С.7-9.

87. Джанова З.Ф. Сочетанное применение пробиотика бифидумбактерина и иммуно-модулятора тималина для профилактики колибактериоза у цыплят : автореф. дис. . канд. вет. наук / Джанова З.Ф.- Санкт-Петербург, 2001,- 25с.

88. Директива Совета о защите животных, используемых в экспериментальных и научных целях (86/609/ЕЭС), 24 ноября 1986г.-25с.

89. Долгов В.А. Применение биотестирования для оценки безопасности объектов вете-ринарно-санитарного и экологического контроля / Долгов В.А., Лавина С.А., Самохин И.В. : мат. VI Междунар. ветеринарного конгресса по птицеводству, М., 2010.-С.22-23

90. Драчева Л.В. Пробиотики аспект антиоксидантной активности / Драчева Л.В. // Биотехнология: вода и пищевые продукты : мат. научн. и практич. конгресса.- М., 2008,- С.66.

91. ПО.Драчева Л.В. Пропионовокислые бактерии аспект антиоксидантной активности / Драчева Л.В. // Биотехнология: состояние и перспективы развития : мат. V Моск. междун. конгресса.-М., 2009.-С.158-159

92. Дудикова Г.Н. Новый пробиотик «Biokons» для профилактики сальионеллезной и колибактериозной инфекции у птицы / Дудикова Г.Н., Чижаева A.B., Орлюк Т.М. и др. // Биотехнология: сост. и персп. развития : мат. II Междунар. конг,- М., 2006.-С.250-251.

93. ПЗ.Дурдыев Ш.К. Влияние Е. coli на организм птиц, вакцинированных против нью-каслской болезни / Дурдыев Ш.К. // Ветеринария.-1993.-№5.-С.25-26.

94. Дурнев А.Д. Современная практика доклинической оценки безопасности лекарств / Дурнев А.Д. // Фармобращение : мат. совещания по вопросам гос. регулирования в сфере обращения лекарственных средств и медицинских изделий,- М.- 2005. С.28-29.

95. Егоров И А Эффективная кормовая добавка для бройлеров / Егоров И А, Голубов ИИ, Андрианова E.H. и др.: мат. VII Междун. вет. конгр. по птицеводству.-Москва.-2011.-С.189-192.

96. Егоров И.А. Применение нанотехнологий для профилактики микотоксикозов в бройлерном птицеводстве / Егоров И.А., Мухина Н.В., Черкай З.Н. : мат. VII Междун.вет. конгр. по птицеводству.-М., 2011.-С. 192-197.336

97. Егоров И.А. Эффективность действия кормовой добавки «Натресорб» на цыплятах-бройлерах и курах-несушках / Егоров И.А., Андрианова E.H., Присяжная JI.M., Белоусов В.И. // Птица и птицепродукты.-2009.-№1.-С41-44.

98. Елисеева E.H. Использование химиотерапевтических, пробиотических и иммуно-моделирующих препаратов и дезинфектантов / Елисеева E.H. : мат. VII Междун. ветеринарного конгресса по птицеводству.-М., 2011.-С. 117-119.

99. Ефимочкина Н.Р. Совершенствование методов микробиологического контроля безопасности биотехнологических продуктов / Ефимочкина Н.Р. // Биотехнология: состояние и перспективы развития : мат. V Моск. междун. конгресса.-М., 2009.-С.27.

100. Ещенко И.Д. Опыт применения препаратов КРКА для оптимизации эпизоотической обстановки в птицехозяйствах / Ещенко И.Д., Филина Т.Н. // Ветеринария и кормле-ние.-2005.-№6.-С.26-27.

101. Зинченко Е.В. Иммунобиотики в ветеринарной практике / Зинченко Е.В., Панин А.Н.- Пущино, 2000.- 163с.

102. Зон Г.А. Бактерии рода Proteus как этиологический фактор заболеваний у птицы / Зон Г.А., Макеев A.B. : мат. I Междун. ветеринарного конгресса по птицеводству,-М.,2005.-С.166.

103. Иванов E.H. Изучение биологического метода обезвреживания кормов от микоток-синов / Иванов E.H., Еремеев И.Н., Тремасов М.Я. // Ветеринарна медицина. М1жвщомчий тематичный науковий 36ipHHK. Харьюв. - 2010. - Вип. 94. - С.233-234.

104. Иванова А.Б. Фармакологическая коррекция продуктивности птицы с использованием пробиотиков / Иванова А.Б., Ноздрин Г.А. // Сиб. Вестн.с.-х. науки.-2008.-№5,-С.110-115.

105. Измайлович И.Б. Кормовая добавка «Фекорд-У» как стимулятор роста и естественной резистентности птицы / Измайлович И.Б. // Актуальные проблемы биологии в животноводстве : мат. V Междун. науч. конф,- Боровск, 2010. С. 171-172.

106. Иммунокоррекция в клинической ветеринарной медицине / Под ред. П.А.Красочко,- Минск: Техноперспектива, 2008.-507с.

107. Использование пробиотиков, пребиотиков и симбиотиков в птицеводстве / Фиси-нин В. И., Егоров И.А., Имангулова Ш.А. и др. //Методические рекомендации. Сергиев Посад: ВНИТИП, 2008,- 44 с.

108. Кабисов Р.Г. Влияние молочнокислых микроорганизмов на показатели крови цыплят / Кабисов Р.Г., Цугкиев Б.Г., Мурзабеков A.A. и др. // Ветеринария,- 2011.-№ 2 С.17-18.

109. Каврук JI.C. Экспериментальное обоснование к созданию пробиотика с пролонгированным действием / Каврук Л.С., Сотников Р.П. // Актуал. пробл. вет. науки: сб. науч. тр.-М., 1999.-С. 54-55.

110. МО.Кавтарашвили А.Ш. Стресс в промышленном птицеводстве и методы его предупреждения / Кавтарашвили А.Ш., Колокольникова Т.Н. // РацВетИнформ.-2010.-№4 (104).-С.13-19.

111. Кальницкая О.И. Биологическая безопасность продукции птицеводства / Кальниц-кая О.И., Уша Б.В.: мат. VI Междунар. ветеринарного конгресса по птицеводству,- М., 2010.-С.20-22.

112. Канардов П.П. Экспериментальные данные изучения токсических свойств Биоспо-рина-В на лабораторных моделях / Канардов П.П., Девришов Д.А. // Ветеринарная медицина,- 2001. -№1.-С. 15-16;

113. Капрельянц JI.B. Ферментативная модификация биополимеров зернового сырья / Капрельянц J1.B. // Биотехнология: вода и пищевые продукты : мат. научного и практич. конгресса,- М., 2008,- С.250.

114. Киселев А.Н. Сочетанное применение антибиотика и пробиотика при респираторном микоплазмозе птиц / Киселев А.Н., Бессарабов Б.Ф., Сушкова Н.К. и др. : мат. VII

115. Междун. ветеринарного конгресса по птицеводству.-М., 2011.-С. 105-107.339

116. Киселев С.А. Пребиотики: новая стратегия лечения дисбактериоза кишечника Электронный ресурс. / Киселев С.А., Чичерин Д.С., Харитонов Д.В.- Режим доступа: http://www.webpticeprom.ru/ru/articles-veterinary.html?pageID=l 177395185.

117. Клетикова Л. Лактур в кормлении цыплят и кур / Клетикова Л., Копоть О. // Птицеводство,- 2011.-№1,- С.21-22.

118. Ковалев В. О. Использование антиоксидантов в профилактике хронических мико-токсикозов у цыплят-бройлеров / Ковалев В. О. // Новое в диагностике и профилактике болезней птиц : мат. научно-практ. конф,- Санкт-Петербург, 2008. С.212-214.

119. Ковехова Н.П. Применение пробиотиков в инкубатории повышает сохранность и продуктивность птицы Электронный ресурс. / Ковехова Н.П., Пышманцева H.A., Лебедева И.А,- Режим ÄOCTyna:http://www.biotehagro.ru.

120. Кожемяка Н.В. Не подменяйте биобезопасность вакцинацией / Кожемяка Н.В., Бурдаева Е.С. // Агрорынок.-2009.-№2.-С.23-24.

121. Кожемяка Н.В. Ветеринарная защита при выращивании бройлеров / Кожемяка Н.В., Самойлова Л.Ф. // Ветеринария.-2003.-С.10-13.

122. Козак С.С. Снижение контаминации тушек бройлеров сальмонеллами путем использования в корме пробиотиков / Козак С.С., Барышников С.А. // Птица и птицепродук-ты.-2009.-№3.-С.32-34.

123. Козлова З.Г. Количественная оценка антиоксидантной активности БАДов на основе автолизатов пивных дрожжей / Козлова З.Г., Харитонова А.А., Цепалов В.Ф. // Биотехнология: вода и пищевые продукты : мат. научного и практич. конгресса.- М., 2008,- С. 107.

124. Колесникова А. Как снизить антибактериальную резистентность Электронный ресурс. / Колесникова А. Режим доступа: http://www.webpticeprom.ru/ru/articles-veterinary.html?pageID= 1201084114.

125. Комаров А.А. Современная методология аналитического контроля безопасности кормов и продукции животноводства / Комаров А.А. // Сборник научных трудов ФГУ «ВГНКИ».-2006.-Том 67.-С.58-65.

126. Комитет экспертов ВОЗ по стандартизации биологических препаратов. СТД №41.-Женева: ВОЗ, 1994. С.39-47.

127. Компьютерные системы биотехнологических исследований / под ред. Маслака1. A.А. М., 1993.-432с.

128. Конопатов Ю.В. Основы иммунитета и кормление сельскохозяйственной птицы / Конопатов Ю.В., Макеева Е.Е. С.-Петербург, 2000.-120с.

129. Корнеева О.С. Биотехнология маннозы и исследование ее пребиотических свойств / Корнеева О.С., Черемушкина И.В., Черенков Д.А. и др. // Биотехнология: состояние и перспективы развития : мат. V Моск. междун. конгресса.-М., 2009.-С.290-291.

130. Кроссмайер Артур. Натуральные промоутеры роста. Широкие возможности для всего мира / Кроссмайер Артур // Аграрный эксперт.-2009.-Март. -С.49-51.

131. Кузнецов В.Д. Прогнозирование выживаемости лиофилизированных спор Actinomyces parvullus, основанное на методе «ускоренного хранения» / Кузнецов В.Д., Филлипо-ва С.Н., Муравьева С.А. и др. // Микробиология.- 1977,- т. 46. -С.906-909.

132. Кузнецов Л.А. Инновационные технологии управления качеством / Кузнецов Л.А. // Методы менеджмента качества.-2008.-№11.-С.36-41.

133. Кузьмин В. А. Комплексная система профилактики сальмонеллеза в птицеводстве / Кузьмин В. А., Ещенко ИД. : мат. I Междун. ветеринарного конгресса по птицеводству.-М., 2005.-С.167-170.

134. Кузьмин В.А. О пользе пробиотиков в промышленном птицеводстве / Кузьмин

135. B.А., Кудрявцева А.В., Щепеткина С.В. // РацВетИнформ.-2001.-№3.-С.10-12.

136. Куликов С.П. Экофильтрум эффективный препарат против микотоксикозов / Куликов С.П. // Актуальные проблемы биологии в животноводстве : мат. V Междун. науч. конф.-Боровск, 2010. - С.188-190.

137. Лакин Г.Ф. Биометрия / Лакин Г.Ф. 3 изд., перераб. и дополи. - М.: Высш. шк., 1980,- 294с.

138. Лапач С.Н. Статистические методы в медико-биологических исследованиях с использованием Excell / Лапач С.Н., Чубенко A.B.- Киев: «Морион», 2001.-408с.

139. Лаптев Г.Ю. T-RFLP новый биотехнологический метод для оценки микрофлоры рубца КРС / Лаптев Г.Ю., Кряжевских Л.А. // Актуальные проблемы биологии в животноводстве : мат. V Междун. науч. конф,-Боровск, 2010. - С.287-288.

140. Лебедева И. Влияние добавок на дисбактериоз бройлеров в предстартовый период / Лебедева И., Шацких Е., Зеленская О. // Птицеводство.-2007.-№10.-С.37-39.

141. Леванова Г.Ф. Плазмидный анализ бактерий рода bacillus, используемых в конструировании пробиотиков / Леванова Г.Ф., Кашников С.Ю., Лазовская А.Л. // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии,- 2007.-№ 5.-С.77-79.

142. Ленкова Т. Н. Отечественный пробиотик ПРОВАГЕН® сила природы для сохранения жизни Электронный ресурс. / Ленкова Т. Н,- Режим досту-na:http://www.webpticeprom.ruyru/articles-veterinary.html?pageID=l 277197268.

143. Лиморенко А.Н. Оценка возможности использования ферментативных гидролиза-тов соевой муки в производстве Биоспорина / Лиморенко А.Н., Рогожин А.З., Коломейцев A.B. и др. // Ветеринарная медицина.-2002.-№1.-С.16-17.

144. Липских О.И. Исследование антиоксидантных свойств пробиотических композиций / Липских О.И., Дорожко Е.В., Короткова Е.И. // Биотехнология: вода и пищевые продукты : мат. научного и практич. конгресса.- М., 2008.- С.116.

145. Лоенко H.H. Экстракт биомассы гриба Fusarium sambucinum в кормлении самок соболей / Лоенко H.H., Чернова И.Е., Харламов К.В. и др. // Актуальные проблемы биологии в животноводстве : мат. V Междун. науч. конф,- Боровск, 2010. С.290-291.

146. Лыско С.Б. Влияние пробиотиков на патогенную микрофлору желудочно-кишечного тракта цыплят-бройлеров / Лыско С.Б. // Новое в диагностике и профилактике болезней птиц : мат. научно-практ. конф,- Санкт-Петербург, 2008. С. 140-142.

147. Макарова O.A. Влияние нового бактериально-спорового препарата на эндо- и экзо-микрофлору при выращивании цыплят-бройлеров / Макарова O.A., Лыско С.Б., Красиков А.П. и др. : мат. VII Междун. ветеринарного конгр. по птицеводству.-М., 2011.-С. 127-130.

148. Макаровский B.B. Использование некоторых статистических параметров для оценки распределения случайных ошибок в лабораторной практике / Макаровский В.В., Титова И.А., Михайлов C.B., Шафранский Ю.А., Ермакова Е.А. // Лабораторное дело.-1985.-№1.-С.54-56

149. Малахеева Л.И. Резистентность микроорганизмов и современная стратегия использования антибактериальных препаратов / Малахеева Л.И. // Новое в диагностике и профилактике болезней птиц : мат. научно-практ. конф,- Санкт-Петербург, 2008. С.127-134.

150. Малахеева Л.И. Эффективность поливитаминного препарата Солвимин Селен при вторичном гиповитаминозе у цыплят-бройлеров, обусловленном вакцинальным стрессом / Малахеева Л.И., Татарчук О.П., Бирюкова A.B. и др. // БИО.-2010.-Апрель.-С.23-25.

151. Малик Е.В. Ферментативная активность кишечных изолятов спорообразующих бактерий / Малик Е.В., Малик Н.И., Щекотуров В.Л. // Сборник научных трудов ФГУ «ВГНКИ».-М.,2006.-Том 67.-С.49-58.

152. Малик Е.В. Ростостимулирующее влияние пробиотика биокорм пионер на цыплят-бройлеров / Малик Е.В., Малик Н.И., Адамов А.Н. и др. // Сборник научн. Трудов ФГУ « ВГНКИ».-М., 2006.-Т.67.-С.22-29.

153. Малик Е.В. Характеристика микробиотопа кишечника домашней и промышленной птицы / Малик Е.В., Панин А.Н., Малик Н.И., Сканчев А.И. // Сборник научных трудов ФГУ «ВГНКИ».-2006.-Т.67.-С.9-22.

154. Малик Н. И. Новые пробиотические препараты ветеринарного назначения : авто-реф. дис. . д-ра биол. наук / Малик Н. И. -М., 2002.- 42 с.

155. Мартыновченко В. Использование энзимо-пребиотических комплексов для бройлеров / Мартыновченко В., Васильев А. // Птицеводство.- 2010.-№ 10.-С.23-25.

156. Мартыненко H.H. Биотехнологические основы высокоэффективных препаративных форм дрожжей рода Saccharomyces : автореф. дис. . д-ра биол. наук / Мартыненко H.H. Щелково, 2009.- 48с.

157. Маслиева О.И. Методика проведения опытов и техника расчётов переваримости кормов и баланса питательных веществ в организме птицы / Маслиева О.И. // Методики научных исследований по кормлению сельскохозяйственной птицы. M : ВАСХНИЛ, 1967,- С.13-20.

158. Матвеева Т.В. Использование пробиотических препаратов при выращивании цыплят-бройлеров / Матвеева Т.В., Бондаренко H.H., Дауда Т.А. и др. // тр. Кубанского гос. аграрного университетата (серия: Ветеринарные науки). 2009. - №1 (ч.1). - С.294-296.

159. Методика определения экономической эффективности использования в сельском хозяйстве результатов научно-исследовательских и опытно-конструкторских работ, новой техники, изобретений и рационализаторских предложений / ВАСХНИЛ.-М., 1980.-112с.

160. Методика проведения научных и производственных исследований по кормлению сельскохозяйственной птицы. Рекомендации / Под общей редакцией Фисинина В.И. и Имангулова Ш.А. Сергиев Посад: ВНИТИП, 2004,- 44 с.

161. Методические рекомендации по физико-химическому и биологическому контролю белковых гидролизатов для бактериологических питательных сред / под ред. Простякова А.П.-М., 1983.-27с.

162. Методические указания по определению по определению уровня антител к вирусу ньюкаслской болезни в РТГА, утв. Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода России 23.06.97 г., № 13-7-2/988.

163. Мешковский А.П. Нормативные проблемы установления сроков годности лекарственных продуктов / Мешковский А.П. // Ремедиум,- 2008.- №3 (март). С. 36-39.

164. Мешковский А.П. Надлежащая лабораторная практика (GLP): сравнительный анализ международных и российских требований / Мешковский А.П. // Фарматека 2001.-№ 7. - С.11-17.

165. Мешковский А.П. Испытания стабильности и установления сроков годности лекарственных препаратов / Мешковский А.П. // Фарматека,- 2000,- № 2. С.25-34.

166. Ю.Михайлова О.М. Очень быстрый и надежный метод оценки состояния биомассы в промышленных ферментерах / Михайлова О.М., Лапин Б.П. // Биотехнология: вода и пищевые продукты: мат. научного и практич. конгресса,- М., 2008.- С.421-422.

167. Моридзи Т. Обезвоживание живых клеток замораживанием (перевод с японского) / Моридзи Т. // Refrigeration.- 1973,- т.48, № 549. С.723-730.

168. Надлежащая практика производства биологических препаратов // Комитет экспертов ВОЗ по стандартизации биологических препаратов. Сер. технич. докл. № 771. Женева: ВОЗ., 1991. - С.41-53.

169. Надлежащая практика производства биологических препаратов // Комитет экспертов ВОЗ по стандартизации биологических препаратов. Сер. технич. докл. № 760. Женева: ВОЗ., 1990. - С.18-36.

170. Научные основы кормления сельскохозяйственной птицы / под ред. Фисинина В.И.- Переработанное и дополненное издание. Сергиев Посад: ВНИТИП, 2009. - С. 320-329.344

171. Небу Т. Разработка лекарственных средств: от создания молекулы до готового препарата / Небу Т // Фарматека.-2007.-№3.-С.21-27.

172. Нежута А.А. Научное обоснование и методика разработки и совершенствования промышленной технологии сублимационного высушивания биопрепаратов : автореф. дис. . д-ра биологических наук / Нежута А.А. М., 2003. -44с.

173. Несчисляев В.А. Новый пробиотический препарат «Микростим» / Несчисляев В.А., Сафонова Г.М., Чистохина Л.П. // Пробиотические микроорганизмы современное состояние вопроса и перспективы использования: мат. Междунар. научно-практич. конф,-М.,2002.-С.49.

174. Нетесов С.В. Рекомендации ВОЗ по биобезопасности и национальные правила работы с патогенами: сравнение и ситуация в разных странах / Нетесов С.В. // Биотехнология: состояние и перспективы развития : мат. V Моск. междун. конгресса.-М., 2009.-С.26.

175. Неустроев М.П. Технология получения сухой формы пробиотика / Неустроев М.П., Тарабукина Н.П., Федорова М.П. и др. // Ветеринария и кормление.-2010.-№4.-С.20-21.

176. Никитин Е.Е. Замораживание и высушивание биологических препарато / Никитин Е.Е., Звягин И.В. // М.: Колос,- 1971.-343 с.

177. Новик Г. И. Теоретические основы селекции производственных штаммов пробиотических микроорганизмов / Г. И. Новик // Инновационные технологии в производствепищевых продуктов : мат. V Междун. научно-практич. конф,- Минск : БелГИПК, 2007,-С.111-112.

178. Новик Г.И. Криоконсервация пробиотических микроорганизмов / Новик Г.И., Сидоренко A.B. // Биотехнология: вода и пищевые продукты : мат. научного и практич. конгресса,- М., 2008.- С.34.

179. Ноздрин Г.А. Пробиотики и микронутриенты при интенсивном выращивании цыплят кросса Смена / под ред. Ноздрина Г.А. Новосибирск: НГАУ, 2009. -207 С.

180. Околелова Т. Ферменты и пробиотики в кормах с повышенным содержанием подсолнечного жмыха / Околелова Т., Гейнель В., Петенко А. // Птицеводство.-2007.-№10.-С.20-21.

181. Олива Т.В. Влияние пробиотического препарата на резервы роста, развития и продуктивности птицы / Олива Т.В. // тр. Кубанского гос. аграрного университета (сер.: Вет. науки).- 2009,- № 1(ч.1).-С.284-286.

182. OCT 10083-95 Стандарт отрасли. Продукция агробиологической промышленности. Технологический регламент производства. Содержание, порядок разработки, построения, согласования и утверждения.

183. ОСТ 64-02-003-2002. Стандарт отрасли. Продукция медицинской промышленности. Технологические регламенты производства. Содержание, порядок разработки согласования и утверждения.

184. Отраслевой стандарт. Лекарственные средства. Испытания сроков годности. Проект (взамен ОСТа 42-2-72) // Фарматека,- 2000,- № 2. С.34-38.

185. ОФС 42-0075-07. Общая фармакопейная статья «Сроки годности лекарственных средств». Государственная фармакопея РФ. XII издание,- М., 2007.- 4.1. С.488-493.

186. Оценка качества кормов, органов, тканей, яиц и мяса птиц. Методические рекомендации для зоотехнических лабораторий / Под общ. ред. Фисинина В.И. и Гишенкова А.Н. -Сергиев Посад: ВНИТИП, 1998.-114 с.

187. Паланский A.M. Повышение эффективности вакцинации цыплят-бройлеров против ньюкалской болезни с помощью левомизола и нуклеината натрия / Паланский A.M., Рягин С.Т., Герман В.В. // Ветеринария.-1990.-Вып. 65.-С. 9-12.

188. Панин А.Н. Проблема обеспечения продовольственной безопасности Российской Федерации и безопасности продовольствия / Панин А.Н., Мельников В.А. // Ветеринария.-2011.-№ 1 -С.12-15.

189. Панин А.Н. Современный подход к регуляции безопасности пробиотиков / Панин А.Н., Малик Н.И., Илаев О.С. и др. // Ветеринария,- 2011.-№ 1 С.41-44.

190. Панин А.Н. Пробиотики неотъемлемый компонент рационального кормления животных / Панин А.Н., Малик Н.И. // Ветеринария. -2006.-№7.-С.3-6.

191. Панин А.Н. Пробиотики в промышленном птицеводстве / Панин А.Н., Малик Н.И., Малик Е.В.: мат. I Междун. ветеринарного конгресса по птицеводству.-М.,2005.-С.235-239.

192. Панин А. Н. Пробиотики: теоретические и практические аспекты / Панин А.Н. // БИО : журнал для специалистов птицеводческих и животноводческих хозяйств.- 2002,- № 2,- С. 4-7.

193. Панин А.Н. Биотехнологические аспекты изготовления сухих пробиотических препаратов / Панин А.Н., Малик Н.И., Авылов Ч.К. // Науч.основы пр-ва вет.биол.препаратов: сб. науч. тр.- Щелково, 2000.-С. 343-345.

194. Пасько О.В. Разработка новых технологий пробиотических молокосодержащих продуктов с использованием иммобилизованных культур микроорганизмов / Пасько О.В. // Биотехнология: вода и пищевые продукты: мат. научного и практич. конгресса,- М., 2008,- С.145.

195. Перепелкин Н.В. Пробиотики эффективная альтернатива антибиотикам и стимуляторам роста животных / Перепелкин Н.В. // Ценовик.-2010.-Январь.-С.45.

196. Петенко А.И. Обеспечение биологической безопасности кормов / Петенко А.И., Ярошенко В.А., Кощаев А.Г. и др. // Ветеринария. -2006.-№7.-С.7-11.

197. Петренчук Э.П., Фукс П.П. Усовершенствование технологии получения сухих пробиотиков / Петренчук Э.П., Фукс П.П. // Общ. эпизоотология: иммунол., экология и мето-дол. пробл. : мат. науч. конф.- Харьков, 1995.-С.91-92.

198. Петров J1.H. Основы конструирования пробиотиков повышенной терапевтической активности / Петров JI.H. // Пробиотические микроорганизмы современное состояние вопроса и перспективы использования: мат. Междунар. научно-практич. конф,- М.,2002,-С.12.

199. Пименов Е.В. Новый пробиотический препарат «Билакт» на основе ассоциации лактобацилл / Пименов Е.В., Дармов И.В., Комоско Г.В. и др. // Биотехнология: состояние и перспективы развития : мат. II Междунар. конг,- М., 2006.-С.108.

200. Пировано Ф. Пробиотики: производственно-технологические аспекты / Пировано Ф. // Пробиотики и пробиотические продукты : тез. докл. Всерос. конф,- М., 1999.-С. 38.

201. Плохинский НА. Алгоритмы биометрии / Плохинский H.A. М.: Изд-во Московского университета, 1980. - 150 с.

202. Подобед JI. На каких дрожжах растет птица Электронный ресурс. / Подобед JL-Режим flocTyna:http://www. webpticeprom.ru/ru/articles-birdseed.html?pageID=l 177395258.

203. Попов А.Ю. Современный подход к аппаратурно-технологическому оформлению ферментационных процессов в биотехнологии / Попов А.Ю. // Биотехнология: вода и пищевые продукты: мат. научного и практич. конгресса,- М., 2008.- С.241-242.

204. Попов И. Экономический анализ в условиях рынка / Попов И. // Птицеводство.-2000.-№1 .-С.25-28.

205. Правила лабораторной практики в Российской Федерации: приказо МЗ Российской Федерации №267 от 19.06.2003.- 2004.-23с.

206. Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных : приказ МЗ СССР № 755 от 12.08.1987.-1987.-15с.

207. Практическое руководство по биологической безопасности в лабораторных условиях. Третье издание.-ВОЗ: Женева, 2004,-190с.

208. Принципы доброкачественной лабораторной практики (87/18/ЕЭС), 4 февраля 1983г.-19с.

209. Присуха Н.С. Биотестирование и его применение сегодня / Присуха Н.С. // Медицинский бизнес.-2007.-№11 (159).-С.40-41.

210. Промышленная микробиология. Под общей редакцией Н.С.Егорова. М.: «Высшая школа», 1989,- С.438-450.

211. Пышманцева H.A. Пробиотики в кормлении ремонтных цыплят / Пышманцева H.A., Ковехова Н.П. // Актуальные проблемы биологии в животноводстве : мат. V Междун. науч. конф,-Боровск, 2010. С.301-303.

212. Резниченко JT.B. Эффективность использования Гала-вета при колибактериозе птицы / Резниченко JI.B., Мерзленко А.Р., Ахапкин А.Н.: мат. I Междун. ветеринарного конгресса по птицеводству.-М.,2005.-С.200-201.

213. Рекомендации по кормлению сельскохозяйственной птицы / Под общей редакцией Фисинина В.И., Имангулова Ш.А., Егорова И.А., Околеловой Т.М.- 3-е издание, дополненное и переработанное Сергиев Посад: ВНИТИП, 2006. - 143 с.

214. Римарева Л. Использование кормовых дрожжей из зерновой барды / Римарева Л., Лозанская Т., Худякова Н. // Агрорынок.-2008.-№4.-С.25-26.

215. Римарева Л.В. Перспективные биотехнологии в производстве биокорректоров пищи, БАД и кормов / Римарева Л.В., Погоржельская Н.С. // Биотехнология: вода и пищевые продукты: мат. научного и практич. конгресса,- М., 2008.- С.367-268.

216. Рогов И.А. Современное состояние и перспективы применения стартовых культур в производстве продуктов здорового питания / Рогов И.А., Ганина В.И. // Биотехнология: вода и пищевые продукты : мат. научного и практич. конгресса,- М., 2008.- С.14-16.

217. Романенко И.А. Эффективность использования антистрессовых препаратов при выращивании цыплят-бройлеров / Романенко И.А. // тр. Кубанского гос. аграрн. ун-та (сер.: Вет. науки).-2009.-№1 (ч.1).- С.318-320.

218. Руководство по испытанию стабильности фармацевтических препаратов, содержащих широко распространенные лекарственные вещества в соответствующих лекарственных формах. СТД № 863,- Женева: ВОЗ., 1998.- Приложение 5.- С.79-99.

219. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под ред. Фисенко В.Н.-М., 2000.-380с.

220. Салеева И.П. Технологические методы и приемы повышения эффективности производства мяса бройлеров : автореф. дис. . д-ра с.-х. наук / Салеева И.П.-Сергиев Посад, 2007.-39с.

221. Самуйленко А.Я. Анализ надежности поддержания асептических условий в биотехнологии / Самуйленко А.Я., Рубан Е.А., Дадасян А.Я. // Ветеринария и кормление.-2005.-№6.-С14-16.

222. Самуйленко А.Я. Основы технологии производства ветеринарных биологических препаратов /Самуйленко А.Я., Рубан Е.А.- М: Россельхозакадемия,- Т 1.- Т 2,- М.: РАСХН, 2000,- 781 с.

223. Семенов Г.В. Стенд для изучения процессов вакуумного обезвоживания термолабильных материалов / Семенов Г.В., Буданцев Е.В., Булкин М.С. // Биотехнология: вода и пищевые продукты : мат. научного и практич. конгресса,- М., 2008.- С.329.

224. Скворцова Л.Н. Улучшение состояния микрофлоры кишечника птицы при использовании лактулозосодержащего пребиотика / Скворцова Л.Н. // Актуальн. проблемы биологии в животноводстве : мат. V Междун. науч. конф.- Боровск, 2010. С.305-306.

225. Скворцова М.М. Биологически активные добавки на основе биомассы высшего гриба / Скворцова М.М., Горшина Е.С., Качепай Д.П. // Успехи медицинской микологии : мат. I Всерос. конгр. по медицинской микологии.-М., 2003.-Т. 1.-С. 198-203.

226. Смирнов В.В. Пробиотики на основе живых культур микроорганизмов / Смирнов

227. В.В., Коваленко Н.К., Подгорский B.C. и др. // Микробиол. журн.-2002,- Т.64, №4.-С.62351

228. Смирнов B.B. Рост и спорообразование Bacillus subtilis в различных условиях аэрации / Смирнов В.В., Осадчая А.И., Кудрявцев В.А. // Микробиол. журн.-1993.-№3.-С.38-43.

229. Смоленский В.И. Качество и стандартизация биопрепаратов против болезней птиц / Смоленский В.И., Зуев Ю.В., Руденко Т.В. и др. // Ветеринария,- 2011.-№ 1 С.44-46.

230. Смоленский В.И. Обеспечение качества производства и применения лекарственных средств в промышленном птицеводстве. /III Межд. Ветер. Конгресс по птицеводст-ву.-М,- 2007,- С.28-31.

231. Сорокулова И.Б. Влияние пробиотиков из бацилл на функциональную активность макрофагов /Сорокулова И.Б. // Антибиотики и химиотерапия.- 1998.- №2.-С. 20-23.

232. Сорокулова И.Б. Изучение безопасности и реактогенности нового пробиотика Субалин на добровольцах / Сорокулова И.Б. // Микробиол. Журн.-1998.-№4.-С.23-28.

233. Сорокулова И.Б. Перспективы применения бактерий рода Bacillus для конструирования новых биопрепаратов /Сорокулова И. Б. //Антибиотики и химиотерапия. 1996. -№ 10. - С. 13-15.

234. З.Спиридонова В.А. Иммуномодулирующий эффект экстрактов мицелия грибов, выращенных глубинным способом / Спиридонова В.А., Шамцян М.М. // Биотехнология: вода и пищевые продукты : мат. науч. и практич. конгр,- М., 2008,- С. 179-180.

235. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования / под ред. Биргера М.О.- М.: Медицина, 1982,- 462с.

236. Стандарт ИСО 10006:2003 Менеджмент качества. Руководящие указания по менеджменту проектов.

237. Статистические материалы и результаты исследований развития агропромышленного производства России,- M.: РАСХН, 2011.-С.7.

238. Статистические методы повышения качества / под ред. Хитоси Куме (перевод с англ. и дополн. Адлера Ю.П., Конаревой Л.А.).-М.: Изд-во стандартов, 1990.- 301с.

239. Статистическое управление процессами. SPC : пер. с англ. / под ред. Воинова Е.Г.Н.Новгород: АО НИЦ КД, СМЦ «Приоритет», 2001. 181 с.

240. Статистическое управление технологическим процессом : методическое пособие. Серия «Все о качестве. Отечественные разработки».- М.: НТК «Трек», 2002.-Вып. 6-С.42-51.

241. Степаненко И.П. Влияние пробиотического препарата стрептобифида-форте на иммуногенез и формирование кишечного микробиоценоза цыплят : автореф. дис. . канд. биол. наук.- М., 2001.- 24с.

242. Степанов A.B. Иммуномодулирующее действие биоспорина /Степанов A.B., Мисников О.П., Василенко А.Ж. //Актуальн. вопр. клиники, диагностики и лечения: сб.науч.тр. BMA.- Санкт-Петербург, 1997.- С. 300-301.

243. СТО ВГНКИ 00494189-0003. Технические условия на лекарственные средства и корма. Правила разработки, оформления, обновления и отмены.

244. Структура и стабильность биологических макромолекул // под ред. М.В. Волькен-штейна.- М., 1973.-584 с.

245. Субботин A.B. Система менеджмента качества в промышленном птицеводстве / Субботин A.B.: I Междун. ветеринарный конгр. по птицеводству.-Москва.-2005.-С.13-14.

246. Субботин В.В. Опыт разработки и применения пробиотика ветеринарного назначения в промышленном птицеводстве: Руководство / Субботин В.В., Данилевская Н.В.- М., 2010.-35с.

247. Субботин В.В. Пробиотические препараты в промышленном птицеводстве / Субботин В.В., Данилевская Н.В.: мат. I Межд. вет. конгресса по птицеводству,- М., 2005.- С.239-241.

248. Субботин В.В. Биотехнология пробиотика лактобифадола (бифацидобактерина) и его лечебно-профилактическая эффективность : автореф. дис. . д-ра ветеринарных наук / Субботин В.В.-М, 1999.-51с.

249. Субботин В.В. Биотехнология пробиотиков ветеринарного назначения/Субботин В.В., Сидоров М.А.//Аграрн. наука,- 1998.-№ 3.-С.20-21.

250. Сударев И. Соотношение стандартов ИСО серии 9000 и GMP при построении системы менеджмента качества на фармацевтическом предприятии / Сударев И., Гандель В. //Мед. бизнес,- 2005,- №11.-С.56-57.

251. Сунцова O.A. Профилактика вторичных иммунодефицитов в современном промышленном птицеводстве / Сунцова O.A., Брайт С.А., Простокишин A.C.: мат. VI Меж-дунар. ветеринарного конгресса по птицеводству,- М., 2010.-С. 128-131.

252. Суханова С. Комплексное применение пробиотика и бентонита Электронный ресурс. / Суханова С., Кожевников С. Режим досту-na:http://www.webpticeprom.ru/ru/articlesbirdseed.html?pageID=l 25637820.

253. Сушкова В.И. Безотходная конверсия растительного сырья в биологически активные вещества / Сушкова В.И., Воробьева Г.И. М.: ДеЛи принт, 2008.-216с.

254. Тарабукина Н.П. Морфологические, культуральные и биологические ройства Bacillus subtilis «ТНП-3» / Тарабукина Н.П. // Научное обеспечение ветеринарных проблем в животноводстве : сб. науч. тр. Новосибирск, 2000. -С. 264-266.

255. Тараканов Б.В. Микрофлора кишечника, иммунный статус и продуктивность цып-пят-бройлеров при включении в рацион пробиотика Микроцила / Тараканов Б.В., Николи-чева Т.А., Манухина А.И. и др. // Сельскохозяйственная биология.-2007.-№2. С. 87-93.

256. Тараканов Б.В. Использование пробиотиков в животноводстве / Тараканов Б. В. -Калуга, 1998.-54 с.

257. Тараканов М.А. Механизм действия пробиотиков на микрофлору пищеварительного тракта и организм животных /Тараканов М.А. // Ветеринария.- 2000.- №5.- С 32-33.

258. Темираев Р. Пробиотики и антиоксиданты в рационах птицы / Темираев Р., Цогое-ва Ф., Албегова Л.И. др. // Птицеводство.-2007.-№10.-С.24-25.

259. Теоретические и практические основы технологии сублимационного высушивания биопрепаратов / Нежута A.A., Токарик Э.Ф., Самуйленко А.Я. и др. -Курск: Изд-во КГСХА, 2002.-239с.

260. Терешина В.М. Получение из мицелиальных грибов полисахаридных комплексов и определение степени их деацетилирования / Терешина В.М., Меморская A.C., Феофилова Е.Л. и др. // Микробиология,- 1997,- Т.66, №1.-С.84-86.

261. Тихонов И.В. Технология приготовления стабилизированной рабочей культуры в качестве посевного материала для глубинного культивирования / Тихонов И.В., Овсянников Ю.С., Романов В.Е // Ветеринарная медицина.-2010.-№3-4.-С.23-25.

262. Тихонов И. В. Концентрирование и высушивание биопрепаратов : учебно-методич. пособие / под ред. Тихонова И.В.-М.: МГАВМиБ, 2002,- 50 с.

263. Тихонов И. В. Промышленное культивирование микроорганизмов : учебно-методическое пособие по биотехнологии / под ред. Тихонова И.В.-М.: МГАВМиБ, 2000, 60 с.

264. Токаев Э.С. Разработка синбиотического продукта с использованием бифидогенно-го волокна / Токаев Э.С., Максимов A.A. // Биотехнология: состояние и перспективы развития : мат. V Моск. междун. конгресса.-М., 2009.-С. 106-107.

265. Топурия Л.Ю. Влияние пробиотика Олин на организм цыплят-бройлеров / Топурия Л.Ю., Григорьева Е.В. : мат. VII Междун. вете. конгр. по птицеводству.-М., 2011.-С. 131132.

266. Топурия Л.Ю. Пробиотикотерапия сальмонеллезов сельскохозяйственной птицы / Топурия Л.Ю. // Актуальные вопросы ветеринарии.- Оренбург, 1997.-С.79-83.

267. Требования к доклиническому изучению общетоксического действия новых фармакологических веществ. М., 1985, 19 с.

268. Труфанов О.В. Эффективность применения препаратов «Моноспорин ПК» и «Ба-целл» при микотоксикозах птицы / Труфанов О.В., Бойко Н.В. // Корма и кормовые добавки.-2009.-№6.-С.42-48.

269. Тулупов П.Е. Новое решение проблемы эффективного контроля качества лекарственных препаратов / Тулупов П.Е. // Биотехнология: состояние и перспективы развития : мат. II Междунар. конг,- М., 2006.-С. 146.

270. Урбах В.Ю. Статистический анализ в биологических и медицинских исследованиях / Урбах В.Ю. -М.: Медицина, 1975. 242 с.

271. Усенко В.В. Особенности иммунного ответа цыплят-бройлеров / Усенко В.В., Виноградова Е.В., Андреев Д.С. и др. // тр. Кубанского гос. аграрного ун-та (сер.: Вет. науки). 2009. - №1 (ч.1). - С.341-343.

272. Ушакова Н.А. Lactobacillus sake новый перспективный пробиотик / Ушакова Н.А., Рожнов В.В., Козлова А.А. и др. // Биотехнология: состояние и перспективы развития : мат. IV междунар. конгресса.- М., 2007.-С.177.

273. Федеральный закон РФ от 12 апреля 2010г. №61-ФЗ «Об обращении лекарственных средств. Статья 12.-С.6-7.

274. Федоров Ю.Н. Иммунокорригирующая терапия: принципы и средства / Федоров Ю.Н. // Ветинформ.-2001.-№3.-С.4-5.

275. Федорова В.А. Основные направления и принципы совершенствования мероприятий по биобезопасности на современном этапе / Федорова В.А., Ласкавый В.Н. // Ветери-нарна медицина. Miжвiдoмчий тематичный науковий зб1рник. Харьюв. - 2010. - Вип. 94. - С.45-46.

276. Фисинин В.И. Новые направления в кормлении птицы / Фисинин В.И., Егоров И.А. : мат. VII Междун. вет. конгр. по птицеводству.-М., 2011.-С. 185-188.

277. Фисинин В.И. Птицеводство России в 2010 году состояние и стратегические тренды инновационного развития отрасли / Фисинин В.И. : мат. VII Междун. вет. конгр. по птицеводству.-М., 2011.-С.5-19.

278. Фукс П.П. Разработка новой технологии получения сухого пробиотика / Фукс П.П., Петренчук Э.П. // Ветеринарная медицина,- 1997,- Вип.73.-С. 33-35.

279. Харечко А.Г. Эубиотики для профилактики, лечения и реабилитации больных при инфекционных заболеваниях и дисбактериозах. Методические рекомендации / Харечко А.Г., Ларионов Л.П., Литусов Н.В. Екатеринбург, 1998.-19с.

280. ЦВТП БЗ НИИМ МО РФ.-Екатеринбург, 1997. С. 55-62.356

281. Хорошевская JI. Инновационные подходы к использованию биологически активных препаратов в бройлерном птицеводстве / Хорошевская Л., Хорошевский А., Ларичев О. т др. : мат. VI Междун. вет. конгр. по птицеводству.-М., 2010.-С.142-145.

282. Цой И.Г. Иммуностимулирующее действие лактобактерий на цитотоксичность естественных клеток киллеров и продукцию интерферона / Цой И.Г., Сапаров A.C., Тимофеева И.К. //Микробиол. эпидемиол. и иммунобиол.-1994.-№6.-С. 112-113.

283. Черных М. Неспецифическая профилактика ассоциированных инфекций Электронный ресурс. / Черных М., Федотов С. Режим доступа: http://www.webpticeprom.ru/ru/articles-veterinary.html?pageID= 1261732018.

284. Чистые помещения и связанные с ними контролируемые среды. Семейство стандартов ГОСТ Р ИСО 14644.

285. Чудновская И.В. Антивирусная активность пробиотиков из бацилл / Чудновская И.В., Рыбалко С.Л., Сорокулова И.Б. //Доповш Наюнально1 адемп наук Украши. 1995. -№2. - С. 124-126.

286. Шабаев И.С. Влияние экстракта дрожжей на развитие кишечника и продуктивность бройлеров / Шабаев И.С. // Доклады РАСХН.-2011.-№2.-С.46-48.

287. Шамилова Т.А. Применение пробиотика «Энтероспорин» при микотоксикозах / Шамилова Т.А., Матросова Л.Е., Тремасов М.Я. и др. // Ветеринарна медицина. М1жвщомчий тематичный науковий зб1рник. Харьюв, 2010. - Вип. 94. - С.155-156.

288. Шапошникова Л.И. Перспективы использования жидких пробиотиков в лечении аллергических заболеваний кожи / Шапошникова Л.И., Вакулина О.В. // Медицинская картотека. -2001. -№ 1 (45).-23-24.

289. Шкундина И. С. Прионы / Шкундина И. С., Тер-Аванесян МД. // Успехи биологической химии.- 2006.-Т. 46.-С. 3^42.

290. Шолохова Е.И. Биофармацевтические аспекты пробиотиков / Шолохова Е.И. // Про-биотические микроорганизмы современное состояние вопроса и перспективы использования: мат. Междун. научно-практич. конф,- М.,2002,- С.64-65.

291. Шоль В.Г. Показатели мясных качеств бройлеров кроссов «Кобб 500», «Конкурент 2» / Шоль В.Г., Филоненко В.И., Салеева И.П. // Птицеводство мировой и отечественный опыт : мат. III междун. конф.-М., 2004.-С.122-123.

292. Шчука Леон. Резистентность бактерий к противобактериальным активным субстанциям в ветеринарии / Шчука Леон // Ветеринария и кормление.-2005.-№2.-С.26-27.

293. Шюц В. Качественная работа по всей цепочке. Опыт организации межхозяйсивен-ного менеджмента здоровых животных и качества продукции при производстве мяса / Шюц В., Шульце-Альтхоф Г., Петерсен Б. // Новое сельское хозяйство.-2008.-№2.-С.46-48.

294. Щербинин С. Термостабильность пробиотика БиопЛЮС 2Б Электронный ресурс. /Щербинин С. // 2011.-2с.-Режим доступа :http://bichem.net.ru/ publ.php? D = 34& cm d&file =Publikac&view =l&id=9.

295. Щетинина M. Грамотное сочетание систем качества по ISO 9000 и GMP в силах обеспечить безопасность продукции и эффективность бизнеса / Щетинина М. // Фармацевтический вестник.-2005.-№1.-С.8-11.

296. Яковлева Н. НАССР система контроля качества, которая обеспечивает безопасность продукции на 100% / Яковлева Н. // Аграрный эксперт.-2009.-Март.-С.36-39.

297. Яшин Я.И. Анализ пищевых продуктов и напитков с помощью хроматографиче-ских методов / Яшин Я.И., Яшин А.Я. : материалы VII Всероссийского конгресса «Здоровое питание населения России». М„ 2003.-С.595-596.

298. Adams M.R. Growth inhibition of food-born patogens by lactic and acetic acids and their mixtures / Adams M.R., Hall C.J. // Int. J. Food Scin. Technol.- 1988,- V.3.- P. 287-292.

299. Affitives, antibiotics and probiotics: Choices for the future // Poultry intern.- Vol. 35, №4,- 1996.-P. 34-39.

300. Allison L.M.C. An accelerated stability test procedure for lyophilized measles vaccines / Allison L.M.C., Mann G.F., Perkins F.T. et al. // J. Biol. Standard.- 1981,- № 9. P. 185-194.

301. Axelsson L. Lactobacillus reuteri, a member of the gut bacterial flora /Axelsson L. // Mi-crob. Ecol. Health and Disease.-1989.-Vol.2., № 2. P. 466-468.

302. Bansal S. Probiotics in health and disease /Bansal S. //J. Assoc. physicians.- 2001.-№ 7.-P.735-741.

303. Barbosa T.M. Screening for bacillus isolates in the broiler gastrointestinal tract / Barbosa T.M. et al. // Appl. Environ. Microbiol.- 2005,- Vol.71.-P.968-978.

304. Barrow P. Probiotics. "The scientific basis" /Barrow P. // Edd by R.Fuller.- First edition.- London : SE 1 8HN, 1992.-P. 225-257.

305. Barry R. Goldin. Healt benefits of probiotics / Barry R. Goldin. // British Jornal of Nutri-tio.- 1998.-Vol.80, Suppl. 2,- P.203-207.

306. Benedettini G. Immunomodulation by Bacilllus subtilis spores / Benedettini G., Delibero C, Pierotti R. // Boll. Inst. Sieroter.- Milan, 1983,- №6.-P.509-516.

307. Benno J. Bifidoflora and microflora /Benno J., Mitsuoka T. // Development of intestinal microflora in human and animals. 1986. -Vol. 5, №1.- P. 13-25.

308. Berg R.D. Probiotics, prebiotics, or conbiotics /Berg R.D. // Trends Microbiol. 1998. -Vol. 6. - P.89-92.

309. Cheng C.C. Effect of peptides and amino acid prodused by Lactobacillus casei in milk on the acid production of bifidobacteria /Cheng C.C, Nagasawa T. // Japanise J. of Zootechical Sci. -1984. Vol.55, №5. - P.339-349.

310. Colins E.V. Production og hydrogen peroxide by Lactobacillus acidofillus / Colins E.V., Aramaki K. // J. Dairy Sci.- 1980.- Vol. 63,- P. 353-357.

311. Collins M.D. Probiotics, prebiotics, and synbiotics: approaches for modulating the microbial ecology of the gut / Collins M.D. // Am J. Clin. Nutr.-1999.- № 9.- P. 1052-1057.

312. Condons S. Responses of lactic acid bacteria to oxygen / Condons S. // FEMS Microbiol. Rev.- 1987,- Vol.46.- P. 269-280.

313. Crary R.S. Effects of probiotics and prebiotics on blood lipids / Crary R.S., Taylor Christine, Williams M. // British Jornal of Nutrition.-1998.-Vol. 7.- P. 225-230.

314. De Simone C. Effect of Bifidobacterium longum and Lactobacillus acidophilus on gut mucosa and peripheral blood B-lymphocytes /De Simone C, Ciardi A., Grassi A. // Immuno-pharmacol.- 1992,-Vol. 14, №1-2. P.41-43.

315. De Simone C. The role of probiotics in modulation of the immune system in man and in animals /De Simone C, Vesely R., Bianchi Salvadori B. // Int. J. Inmunother. 1993,- № 9.-P.23-28.

316. De Valdez G.F. Effect of drying medium on residual moisture content and lability of freeze dried lactic acid bacteria / De Valdez G.F., De Jion G.S., De Rmz Holgado A.P. et al. //Appl. Environ. Microbiol.- 1985.- № 2,- P. 413-415.

317. De Vos W.M. Gene expression systems for lactic acid bacteria /De Vos W.M. // Curr Opin. Microbiol. -1999.- №2,- P.289-295.

318. De Vuyst L. Antimicrobial potential of lactic acid bacteria / De Vuyst L.,Vandamme E.J. // In Bactericins of Lactic Acid Bacteria.- Blackie Academic and Professional, Glasgow, 1994. -P.91-142.

319. Delneste Y. Functional foods: Mechanisms of action on immunocompetent cells / Del-neste Y., Donnet-Hughes A., Schiffrin E.J. //Nutr. Rev. -1998.-№56.- P. 93-98.

320. Diep D.B. An bacteriocin-like peptide induces bacteriocin synthesis in Lactobacillus plantarum / Diep D.B., Havarstein L.S., Nes I.F. // Mol. Microbiol. -1995. -Vol. 18, №4. P. 631-639.

321. Diez K.A. Antibacterial activity of lactic acid bacteria / Diez K.A., Daintly R.H., Shaw G. // Ann. Fac. Veter. Leon. 1979. - № 25. - P. 255 -271.

322. Dodd H.V. Bacteriocins of lactic acid bacteria / Dodd H.V. // In Genetics and Biotechnology of Lactic Acid Bacteria.-Edds Gasson M.J. and de Vos W.M. -Blackie Academic and Professional, Glasgow, 1994. P. 211-251.

323. Drago L. Inhibition of in vitro growth of enteropathogens by new Lactobacillus isolates of human intestinal origin / Drago L., Gismondo M.R., Lombardi I. et al. // FEMS Microbiol. Lett. -1997. -Vol. 153, № 2. P.455-463.

324. Earll A. M. Ecology and genomics of Bacillus Subtilis / Earll A. M., Losick R., Kolter R. // Trends in Microbiology.-2006.-Vol. 16, № 6.-P. 269-275.

325. Eijsink V.G. Induction of bacteriocin production in Lactobacillus sake by a secreted peptide / Eijsink V.G., Brurberg M.B., Middelhoven P.H. et al. // J. Bacteriol. -1996. -Vol. 178, №8. P. 2232-2237.

326. Elkins C.A. Identification of genes encoding conjugated bile salt hydrolase and transport In Lactobacillus johnsonii 100-100 / Elkins C.A., Savage D.C. // J. Bacteriol. -1998. № 180,- P.4344-4349.

327. Elmer G.W. Biotherapeutic agents. A neglected modality for the treatment and prevention of selected intestinal and vaginal infections /Elmer G.W., Surawicz CM., Mc.Farland L.V. // Source JAMA.-1996,- Vol. 275, №11,- P.870-876.

328. Ewans D. K. Inactivated Propionibacterium acnes Jmmuno-Regulin ®. as adjunct to conventional therapy in the treatment of eguine respiratory diseases / Ewans D.K., Rollins J.B. , Huff G. K. et al // Eguine practice. 1988. - Vol. 10, №6. - P. 17-21.

329. Ewe K. Effect of lactose, lactulose and bysacodyl on gastrointestinal transit studied by metal detector /Ewe K., Ueberschaer B., Press A.G. // Aliment Pharmacother.- 1995,- Vol.9, № l.-P. 69-73.

330. Fadden K. Alteration in fecal microflora enzymes related to diet age, Lactobacillus supplements and dimethylhydrazine / Fadden K., Hill M.J., Owen R.W. // Cancer. -1998. -№ 40. P.2421-2426.

331. Fais S. Lymphocyte activation by Bacillus subtilis spores / Fais S. // Boll. Inst. Sieroter., Milan. 1987. - Vol. 66, № 5. - P. 391-394.

332. Famularo G. Stimulation of immunity by probiotics /Famularo G., Moretti S., Marcelli S. et al. // Probiotics. 2. Applications and practical aspects.- In Fuller (ed.).- Chapman and Hall, New York, 1977. P. 133-161.

333. Farrell R.J. Microbial factors in inflammatory bowel disease / Farrell R.J., LaMont J.T. // Gastroenterol Clin North Am.- 2002.-Vol.3.-P.41-62.

334. Fernandes C.F. Therapeutic role of dietary Lactobacilli and lactobacillic fermented dairy products / Fernandes C.F., Shahani K.M., Amer M.A. // FEMC Microbiol. Rev. -1987.-Vol.466,-P.343-356.

335. Fiorini G. Bacillus subtilis selectively stimulates the synthesis of membrane bound and secreted IgA / Fiorini G., Cimminel C., Chianese R. // Chimioterapia. 1985. -№ 4. - P. 310-315.

336. Floch M.H. Probiotics and functional foods in gastrointestinal disorders / Floch M.H., Hong-Curtiss J. // Curr. Gastroenterol. Rep.- 2001.-Vol.3.-P.343-350.

337. Folwaczny C. Probiotics for prevention of ulcerative colitis recurrence: alternative medicine added to standard treatment / Folwaczny C. // Gastroenterol.-2000.- Vol.38.-P.547-550.

338. Foran C. Bacillus secreted IgA / Foran C. // Chimioterapia.-1989.- №6.- P. 218-231.

339. Freter R. Factors affecting on the colonization of the gut by Lactobacilli and other bacteria / Freter R., De Macias M.E. // In: Old Herborn University Seminar Monograph. № 8. Probiotics of use in Opportunistic Infections.- 1995,- P. 256 -420.

340. Fuller R. Probiotics and prebiotics: microtiora management for improved gut health /Fuller R., Gibson G.R. // Clin. Microbiol. Infect.-1998.-№4.- P. 477-480.

341. Fuller R. Probiotics. 2. Application and practical aspects. Introduction: Development of commercial preparations. Factors affecting the response / Fuller R.-1997.-153p.

342. Fuller R. Probiotics: prospects of use in opportunistic infections / Fuller R. N.Y., 1995.-371p.

343. Fuller R. History and development of probiotics / Fuller R. // Probiotics. The scientific basis. London, Chapman a. Hall, 1992. - P. 29-53.

344. Fuller R. Probiotics: the scientific basis /Fuller R. London: Chapman S Hall, 1992. p. 216-226.

345. Fuller R. Probiotics in man and animals / Fuller R. // J. Appl. Bacter. 1989.- Vol.66, №5,-P. 365-378.

346. Fuller R. Microbial competition in the mouth and gastrointestinal tract. / Fuller R., Gould G.W., Rhodes-Roberts M.E. et al.- Natur. Antimicrobial System.- Bath University Press. Bath., 1986,-P. 11-28.

347. Fuller R. Probiotics /Fuller R.// J. Appl. Bacteriol. Symposium Supplment.- 1986.- P. 1-7.

348. Fuller W.B. Probiotics. Fact or fiction / Fuller W.B. // Large Animal Veterinarian.- November-December.- 1987,- P.28-30.

349. Garlson H. Deference mechanisms of the avian gastrointestinal tract / Garlson H. // Poultry Sci. -1982. -Vol.61, № 7. P. 1268-1272.

350. Garrett E.R. Prediction of stability in Pharmaceutical Preparation II / Garrett E.R. // J. Americ. Pharmac. Assoc.- 1956,- Vol.45, № 3. P.171-178.

351. Garrett E.R. Prediction of stability in Pharmaceutical Preparation I / Garrett E.R., Carper R.F. // J. Americ. Pharmac. Assoc.- 1955,- Vol.44, № 8. -P.515-518.

352. Genetics and Biotechnology of Lactic Acid Bacteria / Ed. Gasson M.J. and de Vos W.M. Blackie Academic and Professional, Glasgow, 1996. - P.211-251.

353. Gibson G.R. Aspects of in vitro and in vivo research approaches directed toward identifying probiotics and prebiotics for human use / Gibson G.R., Fuller R. // J. Nutr.- 2000.-Vol.130, №2,- P.391-395.

354. Gibson G.R. Dietary modulation of the human gut microflora using the prebiotics oligofructose and inulin / Gibson G.R. //J. Nutr.- 1999.-Vol. 129, №7,- P.1438-1441.

355. Gibson G.R. Oligosaccharides and prebiotics /Gibson G.R. // Petfood Forum'96, Chicago, USA.- Chicago, 1996. P. 15-18.

356. Gibson G.R. Dietary modulation of the human colonic microbiota: Introducing the concept of prebiotics / Gibson G.R., Robefroid M.B. // J. Nutr. 1995. -Vol.25, № 6. - P. 14011412.

357. Gilliland S. E. Antagonistic action of Lactobacillus acidophilus towards intestinal and food-bome pathogens in associative culture / Gilliland S. E. // FEMS Microbiol. Rev.- 1990.-Vol. 87.- P.198-206.

358. Gilliland S.E. Use of the Minitek system for characterizing Lactobacilli / Gilliland S.E., Speck M.L. //Appl. Environ.Microbiol. 1985. -№ 33. - p. 1289-1293.

359. Gilliland S.E. Influence of consuming milks containing cells of Lactobacilli acidophilus on lasctose malabsorption in humans / Gilliland S.E., Kim H.S. // Abstr. Ann. Meet. Am.Soc. Microbiol. -1981. -№ 27. p.200.

360. Gissen A.S. Off probiotics, prebiotics and synbiotics / Gissen A.S. // ISS VRP'S Inc. Vit. Res. Prod. Newsletters. USA, 1995.-P. 111-117.

361. Glebocka K. Gut health is a critical factor for litter quality / Glebocka K. // World Poultry. -2008.-№l 2.-P.27-31.

362. Gobel T. W. F. Identification of T cell receptor-chain genes in the chicken / Gobel T. W. F., Chen C. H., Lahti J. et al. // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. -1994,- № 91,- P.1094-1098.

363. Goldberg I. Stability of lactic acid bacteria to freezing as related to their fatty acid compositions / Goldberg I., Eschar L. // Appl. Environ. Microbiol.- 1977,- № 28.- P. 489-496.

364. Goldin B.R. Lactobacillus GG: a new strain with properties favorable for survival, adhesion and antimicrobial activity in the gastrointestinal tract /Goldin B.R., Gorbach S.L. // FEMS Microbiol. Rev.-1987.-Vol. 46, №3,- P.72.

365. Gorbach S.L. The discovery of Lactobacillus GG / Gorbach S.L. // Nutrition Today.-1996. -Vol.31, №6,- P.28-48.

366. Gordon J.I. Interactions between epithelial cells and bacteria /Gordon J.I., Booper L.V., Bry I. et al. / /Science.-1997,- № 276,- P.965-973.

367. Green A.A. The role of probiotic in producing quality poultry products / Green A.A., Sainsbury D.W.B.: XV Europ. Symp. Quality of Poultry Products. XV Europ. Symp. Quality of Poultry Meat.- Turkey, 2001.-P. 245-251.

368. Green D.H. Characterization of two Bacillus probiotics / Green D.H. // J. Appl. and Environ. Microbiol. 1999. - Sept. - P. 4288-4291.

369. Greiff D. Applications of vacuum technigues to the freeze-drying of biological materials / Greiff D. // AlCh E Sym. Ser.-1972.-Vol.68, № 125.-P.7-15.

370. Guillot J.-F. Role des probiotiques utilises en alimentation animale / Guillot J.-F. // C.R.Acad.Agr.Fr.- 1997,- Vol.83, № l.-P. 87-96

371. Gupta M. Lytic effect of Bacillus subtilis elastase on gram-positive and negative bacteria / Gupta M., Kaur M., Gupta K.G. // Indian J. Exp. Biol.-1992.-Vol.30, № 5,- P. 380-383.

372. Hoch J.A. Bacillus subtilis and other grampositive bacteria: biochemistry, physiology, and molecular genetics / Hoch J.A., Losick R., Sonenshoin A.L. ASM Press, 1993. -1020 p.

373. Hoffmann K. Untersuchungen uber die Wirkungsweise der Lactulos / Hoffmann K., Mossel D.A.A., Korus W. et al. // Klin. Woshenschr.- 1964.-Vol.42,- P. 126-130.

374. Hong H.A. The use of bacterial spore formers as probiotics / Hong H.A. et al. // FEMS Microbiol. Rev.- 2005.-Vol.29.-P.813-835.

375. HonmaN. K. On effects of lactic acid bacteria. Part I. / HonmaN.K., Ohatani and H. Ki-kuchi.: Clinical effects.- New Med. Clinic., 1987.-P.36-75.

376. Huis H.J. Selection criteria for probiotic microorganisms / Huis H.J., Shortt C. // Gutflora and health — past, present and future. London; New York: Roval Soc. Med. Press Li363mited., 1996. P. 27-36.

377. Hunter J.O. A review of the role of the gut microflora in irritable bowel syndrome and the effects of probiotic / Hunter J.O., Madden J.A. // Br. J. Nutr.- 2002,- Vol.88 (suppl. IV).-P.67-72.

378. ICH: Harmonized tripartite guidance for industry. S6 Preclinical safety evaluation on biotechnology-derived pharmaceuticals.- July, 1997,- 71p.

379. Iwama T. Resistance of lactic acid bacteria products (Streptococcus faecalis) against artificial gastric acid and a number of anti-bacteria / Iwama T. // Pharmacy. 1970. - Vol. 21, № 5.-P. 69.

380. Jerne N.K. The stability of biological standards / Jerne N.K., Perry W.L.M. // Bull. World Health organis.- 1956,- Vol.14, № 1,- P. 167-182.

381. Jin L.Z. Probiotics in poultry: modes of action / Jin L.Z. // World's Poult. Sci. J.-1997,-Vol.53, №4.-P. 351-368.

382. Jiraphocakul S. Influence of dried B.subtilis cultura and antibiotics on performance and intestinal microflora in turkeys / Jiraphocakul S. // Poultry Science. 1990,- Vol.69, №11,- P. 1966-1973.

383. Kailasapathy K.A. Survival and therapeutic potential of probiotic organisms with reference to Lactobacillus acidophilus and Bifidobacterium spp. / Kailasapathy K.A. // Chin J. Immunol. Cell Biol.-2000.- № 78,- P. 80-84.

384. Killen М. Genetic modification of intestinol lactobacilli and bifidobacteria / Killen M., Klatnhamm M. / /J. Mol. Biol.- 2000.- № 2,- P. 41-50.

385. Kim W. Purification and characterization of a fibrinolytic enzyme proved from Bacillus sp. strain CK 11-4 screened from Chungkook-Jang /Kim W., Choi Keehyun, Kim Y. // Appl. and Environ. Microbiol. 1996. - № 7. - P. 2482-2488.

386. Kitler M.E. Lactitoland Lactulose. An in vivo and in vitro comparison of their effects on human intestinal flora / Kitler M.E., Luginbuhl M., Lang O. et al. // Drug Invest.-1992.-№4.-P.73-82.

387. Korotkova E.I. Usage potential of microbal nature antioxidants in meat production / Ko-rotkova E.I., Karbainov Y.A., Avramchik O.A. // Analytical and Bioanalytical Chemistry.-2003,- V.375, № 3,- P.465-468.

388. Kumprecht I. Continious application of probiotics based on Saccharomyces cerevisiae var. Elipsoideus and Bacillus C.I.P. 5832 in the nutrition of chicken broilers / Kumprecht I., Zo-bac P. // Zivocina Viroba.-1996.- Vol. 41, №7.-P.311-316.

389. Larbier M. Nutrition and feeding of poultry / Larbier M., Leclercq B.-UK, Nottingham University Press, 1994.-217p.

390. Leary A. NuPro: Giving broiler chicks a flying start to success / Leary A.: International Poultry Scientific Forum.- USA, 2007.-P.179.

391. Lebenthal E. Probiotics an important therapeutic concept awaiting validation / Lebenthal E., Lebenthal Y. // IMAJ.- 2002.-№4.-P.374-375.

392. Leclere V. Characterization of a constitutive mycosubtilin overproducing Bacillus subtilis strain and its antagonistic activity / Leclere V., Bechet M., Adam A. et al. // Appl Environ Microbiol.- 2004.-Vol. 71.-P.4577-4584.

393. Levesque Justin. The innovation process and quality tools // Levesque Justin, Y. Fred Walker // Quality Progress.-July, 2007.-P. 11-13.

394. Lilley D.M. Probiotics: growth promoting factors produced by microorganisms / Lilley D.M., Stillwell R.J. // Science. -1965.-№ 147.-P. 747-748.

395. Lion A.B. Probiotics /Lion A. B., Gumming R. B., Kent R. D. // Austral. Vet.- 1977.-№7,-P. 53-55.

396. Ltaf-ur-rahman. Probiotics as an immune enhancer in broilers / Ltaf-ur-rahman, Sarzamin khan, Daulat khan et all // Sarhad J. Agric.-2009.-Vol.25, №3.-P.457-462.

397. Lucchini F. Specific delection of a probiotic Lactobacillus strain in faecal samples by using multiplex PCR / Lucchini F., Kmet V., Cerena C. et al.// FEMS Microbiol. Lett. 1998. -Vol. 158, №2. -P. 273-278.

398. MacGillivray P.C. Use of lactulose to create a preponderance of Lactobacilli in the intestine of bottle-fed infants /MacGillivray P.C, Finlay H.V.L, Binns T.B. // Scott. Med. J.-1959.-№4,-P. 182-189.

399. Malih K.A. A new freze-drying methods for preservation of nitrogen-ling and other fragile /Malih K.A. // J. Microbiol. Methods. 1988. - Vol. 8, №5,- P. 259-271.

400. Mallick B.B. Nonspecific immunostimulation against viruses / Mallick B.B., Kishore S., Das S.K. et al. // Comp. Jmmun. Microbiol. Jnfect Dis.-1995.-Vol. 8, №1. P.53-63.

401. Manachini P.L. Thermostable alkaline protease produced by Bacillus thermoruber a new species of Bacillus /Manachini P.L., Fortina M.G., Parini C. // Appl. Microbiol. Biotechnol. -1988. - Vol. 28, № 4/5. - P. 409-413.

402. Maruta Kiyoshi. Probiotics or antibiotics / Maruta Kiyoshi. // World Poultry.-1999.- №3.-P. 112-127.

403. Mazza P. The use of Bacillus subtilis as an antidiarrhoeal microorganism / MazzaP. // Bull. Chem. Farm. -1994.-Vol. 133, №1.- P. 3-18.

404. Mc Farland L.V. Biotherapeutic agents: past, present and future / Mc Farland L.V., Elmer G.W. // Microecology Ther.- 1995.- № 23,- P. 46-73.

405. Mc Farland L.V. Biotherapeutic agents: boon or bane? / Mc Farland L.V .// Microbil. Ecol. Health and Disease.- 1994.-Vol.7, №1,- P.585-586.

406. Mendonca A.L. Bacillus spp. produtores de proteases: isolamento, caracterizacao e mel-horamento de B. cereus / Mendonca A.L., Mariano R.L.R., Araujo J.M. // Arg. biol. e tecnol. -1996. -Vol. 39, № 2. P. 359-372.

407. Midilli M. The effects of enzyme and probiotic supplementaiton to diets on broiler performance / Midilli M. and S.D. Tuncer // Turk. J. Vet. Anim. Sci.- 2001.-№5.-P.895-903.

408. Mitic S. Predicting the stabilities of freeze-dried suspensions of L. acidophilus by the accelerated storage test / Mitic S., Othenhajmer I./ Cryobiology.- 1974,- Vol.11, № 2. P. 116-120.

409. Mitsuoka I. Comparative studies on Lactobacilli from faeces of man, sivine and chickens /Mitsuoka I. // Zbl. Bacterid., parasitenk. infections krankh. Ung. Hyg. -1969. Vol. 210, № 1,- P. 52-64.

410. Morikawa M. Beneficial biofilm formation by industrial bacteria Bacillus subtilis and related species /Morikawa M.// J. of Bioscience and Bioengineer.- 2006,- Vol.101, No.1.-P. 1-8.

411. Mulder R.W. Probiotics as a tool against Salmonella contamination / Mulder R.W. // World Poultry. 1991. - Vol.7, № 3. - P. 36-37.

412. Muscettola M. Effect of Bacillus subtilis spores on interferon production / Muscettola M., Grasso G., Blach-Olszewska Z.// Pharmacological Research.-1992,- №26, Suppl. 2. P. 176-177.

413. Muscettola M. Plasma interferon-like activity in rabbits after oral administration of Bacillus subtilis spores / Muscettola M., Grasso G., Migliaccio P. et al. // J.Chemother.- 1991. №3, Suppl. 3. - P. 130-132.

414. Nielsen O.H. Microbiological evaluation of jejunal aspirates and faecal samples after oral administration of bifidobacteria and lactic acid bacteria / Nielsen O.H. // J. Appl. Bacterid.-1994.-№76.-P. 469-474.

415. Nollel L. Effect of a yeast extract, added to broiler starter diets on bird performance Australia / Nollel L., Geers R., Spring P. et al. // XXIII World's Poultry Congress.- Australia, 2008,-P.31-35.

416. Panda A.K. Growth, carcass characteristics, immunocompetence and response to Escherichia coli of broilers fed diets with various levels of probiotic / Panda A.K., Reddy M.R., Rao S.V.R. et al. // Archiv fur Geflugelkunde.- 2000,- Vol. 64.-P.152-156.

417. Parker R. The use of bacteria as probiotics / Parker R. // Anim. Nutr. Health. 1974. -Vol 29. - P. 4-8.

418. Parkes A.S. Recent Research in Freezing and Drying / Parkes A.S., Smith A.U. Oxford, 1960.-320 p.

419. Pasanen M. Preclinical safety of biotechnology-derived pharmaceuticals? / Pasanen M. -Terveyden tutkimuksesta tuotteeksi-seminaari 30.01.2002. : http//www.nam.fi/ uploads/ semi-naari/semin020130pasanen.pdf.

420. Patterson J. A. Selektive enrichment of bifidobacteria in the intestinal tract of broilers by termally produced Kestoses and effect on broiler perfomance / Patterson J.A., Orban S.I., Sutton A.L. et al. Poultry Sc.- 1997.- Vol 76, №3, P. 497-500.

421. Pelug W. Vitamin B6 biosynthese in Bacillus subtilis /Pelug W., Ligens F. // Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem. -1978. -Vol.359, № 5. - P. 559-570.

422. Perdigon G. Lactic acid bacteria and their effect on the immune system / Perdigon G., Fuller R., Raya R. // Curr. Issues Intes. Microbiol.- 2001.-№2.-P.27-42.

423. Pollmann D.S. Influence of Lactobacillus acidophilus inoculum on gnotobiotic and conventional pigs / Pollmann D.S., Danielson D.M., Uren W.S.// J. Anim. Sci. 1980. - Vol. 51, № 3.-P. 629- 637.

424. Pretorius I.S. Designer yeasts for the fermentation industry of the 21st century / Pretorius I.S., Toit M., Rensburg P. // Food. Technol. Biotechnol.-2003.-№41 (1).-P.3-10.

425. Rasik J.L. Bifidobacteria and their role /Rasik J.L., Kurmann I.F. // Birkhauser verlag. Basel, Boston, Stuttgart. 1983. 278 p.

426. Redway R.F. Effect of Carbohydrates and Related Compounds on the Long-Term preservation of freeze-dried bacteria / Redway R.F., Lapage S.P. // Cryobiology.- 1974,- Vol.11, № 1. -P. 73-79.

427. Reid G. Probiotics for urogenital health / Reid G. //Nutr. Clin. Care.- 2002.-№5.-P.3-8.

428. Reid G. The scientific basis for probiotic strains of Lactobacillus /Reid G. // Appl. and Environ. Microbiol. 1999. - Sept. - P. 3763-3766.

429. Ricca E. Bacterial spore formers: probiotics and emerging applications / Ricca, E. et al., eds. Horizon Scientific Press, 2004,- P.35-44.

430. Roberfroid M.B. Prebiotics: preferential substrates for specific germs? / Roberfroid M.B. // Am. J. Clin. Nutr.- 2001 .-Vol.73(suppl. II).-P.406-409.

431. Roberfroid M.B. Prebiotics and probiotics: are they functional foods? Roberfroid M.B.//Am. J. Clin. Nutr.-2000.-Vol.71, №6.-p.l682-1687.

432. Roberton J.L. Compatibility between antibiotic and probiotic / Roberton J.L. // Pigs.-1991,- Vol.7, №5,- P.ll.

433. Roffe C. Biotherapy for antibiotic-associated and other diarrhoeas /Roffe C. // J. Infect.-1996,-№32. P. 1-10.

434. Sacranie A. Benefits of supplementing yeast extract / Sacranie A., Rawlings R.: International Poultry Scientific Forum, USA, 2007.-P.159.

435. Salminen S. Lactulose, lactic acid bacteria, intestinal microecology and mucosal protection / Salminen S., SalminenE. // Scand. J. Gastroenterol.- 1997.-Vol.222(suppl III).-P.45-48.

436. Salminen S. Gut flora in normal and disordered states / Salminen S., Isolauri E., Onnela T. // Chemotherapy.- I995.-Vol.41 (suppl.I).-P.5-15.

437. Sandrin C. Coproduction of surfactin and iturin A, lipopeptides with surfactant and antifungal properties, by Bacillus subtilis / Sandrin C., Peypoux F., Michel G. // Biotechnol Appl Biochem.- 1990,-Vol. 12.-P.370-375.

438. Servin-Massien M. Effects of freeze-drying and sporulation of microbial variation / Ser-vin-Massien M. // Curr. Top. Microbiol. Immunol.- 1971,- Vol.54.- P. 9-150.

439. Setlow P. Spores of Bacillus subtilis: their resistance to and killing by radiation, heat, and chemicals / Setlow P. // J. Appl. Microbiol.-2006.- September; 101(3).-P. 514-525.

440. Shanahan F. Probiotics in inflammatory bowel disease / Shanahan F. // Gut.- 2001.-Vol.48.-P.609.

441. Shoeib H.K. Response of broiler chicks to probiotic (Pronifer) supplementation / Shoeib H.K., Sayed A.N., Sotohy S.A. and et al. // Assiut Vet. Med. J.- 1997,- Vol. 36.-P. 103-116.

442. Slabospitskaja A.T. Biosinthesis of enzymes by bacilli respective for production of bio-preparations /Slabospitskaja A.T., Reznik S.R., Krymovskaja S.S. // IUMS. Congress: Bacteriology, Mycology. Osaka, 1990. - P. 92.

443. Sofos J.N. Effects of sorbic acid feed fungistat on the intestinal microflora of floor-reared broiler chickens / Sofos J.N., Fagerberg D.J.,Quarles C.L. // Poultry Sc.-1985.- Vol.64, №5,-P.87-93.

444. Spreafico F. L'effetto immunostimolatore dell spore di B. subtilis: aspetti sperimentali / Spreafico F., Polentarutti N., Vecchi A. // Chemioter. Antimicrob.-1980.- №4.-P.259-261.

445. Steidler L. Mucosal delivery of murine IL-2 and IL-6 by recombinant strains of Lacto-coccus lactis coexpressing antigen and cytokine / Steidler L., Robinson K., Chamberlain L. et al. //Infect. Immun.- 1998,-Vol. 66.-P.3183-3189.

446. Stein T. Bacillus subtilis antibiotics: structures, syntheses and specific functions / Stein T. // Mol. Microbiol.- 2005.-Vol.56.-P. 845-857.

447. Stephen A.M. Mechanism of action of dietary fiber in the human colon / Stephen A.M., Cummins J.H. //Nature.- 1980,-Vol. 284,- P. 283-284.

448. Su Li. Influence of a new living preparation Bacillus on mikroflora of inline of animals and function of immunity / Su Li, Zhang Zhihong, Xiao Xianzhi et al. //J. Wuhan.Univ. Natur. Sci. Ed. 1996. -Vol.42, № 4. - P. 516-518.

449. Surawicz C.M. Prevention of antibiotic associated diarrhoea by Saccaromyces boulardii: a prospective study / Surawicz CM., Elmer G.W., Speelman P. // Gactroenterology.-1989.-№96.-P. 981-988.

450. Takahahi K. Effect of a probiotika on immune responses in boiler chick unter different sanitary conditions or immune activations / Takahahi K., Akiba Y., Matsuda A. // Anim. Sc. Technikol.- 1997. -Vol.68, №6/- P. 537-544.

451. Tanaka R. Probiotics: prospects of use in opportunistic infections /Tanaka R. // Microbiol. Biochem. 1995,- №7,- p. 123-127.

452. Tannock G.W. Probiotics. A critical review / Tannock G.W. Norfolk, England: Horizon Sci Press., 1999.-P.104-109.

453. Tannock G.M. Genetic manipulation of gut microorganisms /Tannock G.M. // Probiotics. The scientific basis.-London: Chapman Hall, 1992.-P. 181-207.

454. Thihole F. Effects of probiotics / Thihole F. // U. Zdravstv. Vesth.-1981.-Vol. 51,- P.3-5.

455. Tournut J. Applications of probiotics to animal husbandry /Tournut J. // Rev. Sci.Tech. Off. Int. Epiz.-1989.-Vol.8, №3,- P.551-556.

456. Tovey M.G. Oral mucosal interferon therapy: Marked antiviral and antitumor activity / Tovey M.G., Maury C. // J. Interferon Cytokine Res.-1999.- Vol.l9.-P.145-147.

457. Van der Waal O. Evidence of immunoregulation of the composition of intestinal microflora and its practical on sequences / Van der Waal O. // Eur. J. Clin. Microbiol.-1988.-№7.-P. 101 -106.

458. Van Loo. Functional food properties of non-digestible oligosaccharides: a consensus report from the HVDO project (DGXII AIRII-CT94-1095) /Van Loo, Cummings G.A., Delzenne369

459. J.A. et al. // Br . J. Nutr.- 1999,-Vol. 81, №2 .- P. 121-132.

460. Vanbelle M. New probiotics and application of them in veterinary science and medicine / Vanbelle M. // Ann. Microbiol.-2000.-Vol. 140a, №8,- P. 251-253.

461. Vollenbroich D. Antimycoplasma properties and applications in cell culture of surfactin, a lipopeptide antibiotic from Bacillus subtilis / Vollenbroich D., Pauli G., Ozel M. et al. // Appl. Environ Microbiol.- 1997,-Vol. 63.-P.44-49.

462. Vollenbroich D. Mechanism of inactivation of enveloped viruses by the biosurfactant surfactin from Bacillus subtilis / Vollenbroich D., Ozel M., Vater J. et al. // Biologicals.- 1997.-Vol. 25.-P.289-297.

463. Wood T.N. Probiotics shown to change bacterial community structure in the avian gac-trointestinal tract / Wood T.N. // J. Appl. and Environ. Microbiol.-1999.-Nov.- P.134-138.

464. Yeo J. Effect of feeding diets containing an antibiotic, a probiotic or yucca extract on growth and intestinal urease activity in broiler chicks / Yeo J. and Kim K.I. // Poult. Sci.-1997.-Vol.76.-P. 381-385.

Информация о работе

Неминущая, Лариса Анатольевна
доктора биологических наук
Щёлково, 2011
ВАК 03.01.06

Диссертация

Технология производства и обеспечение качества синбиотиков лактосубтил-форте и авилакт-форте, эффективность их применения в птицеводстве - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы