Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Технология получения биосовместимых полимерных материалов на основе природных белков и полисахаридов

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Содержание диссертации, кандидата химических наук, Антонов, Сергей Федорович

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 8 1.1. Место раневых покрытий из биосовместимых материалов среди других лекарственных форм, используемых для лечения ожогов, ран и язв

1.2. Требования к биосовместимым материалам

1.3. Достоинства и недостатки различных форм биосовместимых материалов 15 1.3.1. Сорбирующие биосовместимые материалы 17 1; 3.2. Биосовместимые материалы, предотвращающие испарение экссудата

1.3.3. Неприлипающие биосовместимые материалы

1.3.4. Рассасывающиеся биосовместимые материалы

1.3.4.1 Рассасывающиеся биосовместимые материалы из полисахаридов

1.3.4.2 Биосовместимые материалы на основе коллагена

1.3.5. Изолирующие биосовместимые материалы 20 1.3 .6. Биосовместимые материалы на ожоги в виде гелей

1.4. Виды коммерческих биодеструктируемых биосовместимых материалов на основе природных полимеров

1.5. Разработка и производство биосовместимых материалов в России

1.6. Достоинства и недостатки коллагена как основы биосовместимых материалов

1.7. Достоинства и недостатки хитозан как основы биосовместимых материалов

1.8. Методы структурирование биосовместимых материалов

1.9. Способы включение лекарственных веществ в полимерные основы и механизм их выхода

1.10. Методы стерилизации биосовместимых материалов

1.11. Технология получения сухих биосовместимых материалов

Введение Диссертация по биологии, на тему "Технология получения биосовместимых полимерных материалов на основе природных белков и полисахаридов"

Актуальность проблемы.

Проблема лечения язвенных повреждений кожи: открытых ран и обширных ожогов остается одной из актуальных задач медицины [1], несмотря на большое число предложенных методов лечения, и материалов для пластики. Одним из перспективных направлений наружной терапии ожогов, кожных ран и язвенных поражений является создание раневых покрытий из природных полимеров [3], которые защищают раны от проникновения инфекции и стимулируют репарационные процессы. Многие природные полимеры резорбируются организмом, благодаря чему можно существенно сократить число перевязок, травмирующих рану. Применение раневых покрытий является существенно более дешевым и доступным способом, чем хирургические методы аутопластики, аллопластики и живых эквивалентов кожи, а также может предшествовать использованию последних. Полимерные покрытия легко совмещаются с лекарственными веществами и могут служить средством доставки и пролонгации их действия. В настоящее время постоянно разрабатываются новые виды раневых покрытий, что связано как с различной этиологией и патогенезом поражений кожи, так и с постоянным расширением спектра используемых лекарственных веществ.

Вместе с тем в промышленно выпускаемых раневых препаратах возможности этой лекарственной формы реализованы не полностью. Например, известны губки на основе коллагена - «Комбутек», альгинатов - «Альгипор» и желатины - «Губка гемостатическая с гентамицином» [5]. В большинстве своем они имеют ряд недостатков: малая гигроскопичность, недостаточная пластичность, малая заживляющая активность, плохой газообмен, что связано главным образом с недостатками гомополимерной матрицы. Круг лекарственных веществ, вводимых в покрытия, ограничен антисептиками и протеолитическими ферментами, которые играют вспомогательную роль в раневых процессах. Избыток антисептиков не только не способствует репарационным процессам, но часто подавляет формирование грануляционной ткани и реэпителизацию ран [2]. В составах коммерческих губок практически отсутствуют лекарственные вещества способные эффективно стимулировать раневые процессы и обладающие ярко выраженной противовоспалительной и противошоковой активностью.

Конструирование смешанной полимерной матрицы из коллагена и хитозана позволяет соединить достоинства каждого из полимеров и преодолеть недостатки покрытий, свойственных губкам из гомополимеров. Коллаген проявляет стимулирующее действие на 5 репарационные процессы в основном на первой стадии раневого процесса [6], тогда как на последующих стадиях он тормозит заживление вследствие плохой воздухопроницаемости. Хитозан, помимо стимулирования пролиферации, на первых стадиях, очень полезен на завершающей фазе заживления - перестройке рубца (его присутствие помогает избежать образования грубых рубцов) [7]. Хитозан хорошо проводит воздух к заживляемой поверхности. Меняя соотношение полимеров в матрице можно варьировать свойства губки: пористость, пластичность, скорость резорбции и другие характеристики.

Введение в состав раневых покрытий антиоксидантного фермента супероксиддисмутазы (СОД) и неферментного антиоксиданта р-каротина в наиболее биодоступной липосомальной форме позволит значительно повысить эффективность покрытий при лечении повреждений кожи.

В ходе воспаления, сопровождающего раны, ожоги, язвы и другие кожные заболевания из фагоцитов выделяются токсические вещества, содержащие радикалы (свободнорадикальное перекисное окисление липидов) [8], которые вызывают повреждение окружающих здоровых тканей, препятствуют репаративным процессам и в тяжелых случаях могут вызывать развитие шока. Среди внутриклеточных антиокислительных ферментов, защищающих ткани от свободных радикалов (каталаза, глутатионпероксидаза, СОД) ключевым является СОД, которая удаляет супероксидные радикалы и предотвращает образование других, более опасных для организма кислородных радикалов[9]. Лекарственные препараты на основе СОД являются наиболее перспективными среди противовоспалительных и противошоковых препаратов.

Р-каротин также обладает антиоксидантной активностью [10, 11], связанной с особенностями его молекулярной структуры, содержащей систему сопряженных двойных связей. В связи с этим, Р-каротин осуществляет защиту клеток от разрушительного действия синглетного кислорода и других окислителей, ультрафиолетового облучения, ионизирующей радиации, участвует в переносе электронов, протонов и кислорода через мембраны клеток и их органелл, в окислительном метаболизме клеток и в стабилизации белков путем формирования каротинпротеидов. индуцирует выработку интерлейкина, у-интерферона, фактора некроза опухолей и др. цитокинов.

При местном лечении повреждений кожи на всех стадиях раневого процесса требуется постоянная защита от патогенной микрофлоры [12], что обеспечивается введением в состав покрытия антибактериальных средств.

Цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования явилась разработка нового поколения раневых покрытий, а также технологии их производства. Структура и 6 материал этих покрытий обеспечили оптимальные клинические эксплуатационные свойства: пластичность, гигроскопичность, неаллергенность, совместимость с лекарственными веществами и стимуляцию репарационных процессов.

Для достижения поставленной цели были решены следующие задачи:

- Оценка различных полимеров по их пригодности к формированию основы покрытий;

- Оптимизация химического состава матрицы покрытия;

- Выбор лекарственных веществ, обладающих ярко выраженным бактериостатическим, противовоспалительным и ранозаживляющим действием для включения в состав покрытия;

- Изучение совместимости лекарственных веществ с матрицей покрытия и кинетики их диффузии в раневую зону в процессе эксплуатации;

- Оптимизация технологических стадий получения покрытия: диализ, дубление, лиофилизация;

- Исследование бактериостатических свойств полученных покрытий;

- Клинические испытания покрытий.

Научная новизна. Получены раневые покрытия нового поколения, отличающиеся от предшественников: 1) смешанной полимерной матрицей из двух полимеров; 2) введением в качестве лекарственного вещества рекомбинантного белка; 3) введением в состав покрытия липосомальной формы лекарственного вещества*

Разработаны научные основы технологии получения раневых покрытий на основе полимеров коллагена и хитозана. Определены условия формирования микрофибриллярной нативноподобной структуры коллагена в коллаген-хитозановой смеси. Установлена взаимосвязь между исходными параметрами, такими как содержание и соотношение полимеров, количество структурообразователя, условия проведения замораживания, и конечными характеристиками препарата: форма и размер пор, однородность структуры, сорбционная емкость, пластичность. Показано, что коллаген-хитозановая матрица хорошо совместима с широким кругом лекарственных веществ различных классов: антисептики, антиоксиданты ф-каротин), антиоксидантные ферменты (супероксиддисмутаза (СОД)), цитокины (интерлейкин-1р), опсонины плазмы крови (фибронектин).

Показано, что суммарные бактериостатические свойства покрытия определяются вкладом полимерной основы и влиянием лекарственных веществ, входящих в состав рецептуры. 7

Практическое значение.

1. Результаты исследований по разработке технологии получения коллаген-хитозановых покрытий с СОД и Р-каротином использованы при выполнении ПИР ГНЦ Гос.НИИ ОЧБ по теме «Разработка технологий получения готовых лекарственных форм направленного и пролонгированного действия генно-инженерных белков и пептидов» и в работах по проекту МНТЦ-420 по теме «Разработка программируемых лекарственных препаратов для лечения кожных заболеваний, глубоких ожогов и трофических язв на основе полимерных материалов (пленки, губки), содержащих высокоактивные белковые вещества».

2. Разработаны и успешно внедрены в практику лечения трофических язв и других поражений кожи новые медицинские изделия: раневое покрытие с Р-каротином «Хитоскин-бета» (ТУ 9393-002-0047941-97) и раневое покрытие с СОД «Хитоскин-супер» (ТУ 9393-004-00479741-97).

3. Разработана отечественная технология получения коллаген-хитозановых губок, содержащих антисептики и противовоспалительные препараты. Различные модификации раневых покрытий могут быть использованы в следующих областях: в терапии язвенных поражений кожи, лечении ожогов, ран, кожных заболеваний; при хирургических и косметических операциях для обеззараживания и стимуляции образования рубца; для создания временного замещающего каркаса отсутствующих тканевых оболочек; в ветеринарии для тех же целей; в гинекологии для лечения различных заболеваний; в тканевой инженерии для создания живого эквивалента кожи.

Апробация работы. Материалы работы доложены на конференции «Разработка технологий получения новых систем доставки лекарственных веществ (Проект МНТЦ # 420)» (С-Пб, ГНЦ Гос.НИИ особо чистых биопрепаратов, 1998); 7-й международной конференции, «СПИД, рак и родственные проблемы» (С-Пб, 1999).

Публикации. Основное содержание диссертации опубликовано в статье в журнале «Биотехнология» и 2-х статьях в журнале «Архив ветеринарных наук». По материалам работы получено три патента России.

Объем и структура работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, включающих описание материалов и методов исследований, изложения результатов исследований, их обсуждения, выводов, списка цитируемой литературы, включающего 108 ссылок, из них 73 работ зарубежных авторов и приложения.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Антонов, Сергей Федорович

выводы едложено в качестве основы биосовместимого материала использовать два нерастворимых в 1е полимера* отличающихся по своей природе, гидрофильности и изоэлектрическим точкам: юк - коллаген и полисахарид - хитозан. Изучено фазовое состояние полимеров в растворе в тети рН от 2.8 до 9.5. Определены границы рН и температуры, в пределах которых эисходит формирование микрофибриллярной, коллоидно-устойчивой дисперсной фазы, казана роль диффузионно-кинетических явлений в реализации особого, неравновесного, ;учего состояния полимерной смеси в области рН от 4.5 до 5.5. Благодаря этому в пимерную смесь могут быть легко введены лекарственные вещества. фаботана технология получения биосовместимых коллаген-хитозановых губок, включающая 1дии: смешения и очистки сырья, структурирования, замораживания и сублимационной дки композиционного состава. Разработанные материалы имеют хорошую пластичную и сперсную структуру. Проведена оптимизация технологических стадий. Установлено, что гимальная концентрация полимеров находится в пределах 1-2% при концентрации >уктурирующего агента не более 2% от веса полимеров. Замораживание необходимо оводить со скоростью не больше 4°/час, либо необходимо производить вспенивание мпозиции полимеров перед замораживанием. зработанные биосовместимые коллаген-хитозановые губки являются матрицей, хорошо вместимой с широким кругом лекарственных веществ, имеющих различные физико-мические свойства: антисептики (гибитан), антиоксиданты (Р-каротин), антиоксидантные рменты (супероксиддисмутаза), цитокины (интерлейкин-1 (3), опсонины плазмы крови ибронектин). зработаны методы связывания лекарственных веществ с матрицей, позволяющие гулировать скорость их выхода из губки в широких пределах от полной иммобилизации на лимерной матрице до полного выхода в течение одних суток. Изменение скорости ювобождения лекарственных веществ обеспечивается изменением степени сшивки териала. едицинские испытания показали высокую эффективность коллаген-хитозановых материалов СОД и 3-каротином при терапии язвенных поражений кожи. Установлена безопасность их вменения и хорошая переносимость. Выявлен ряд преимуществ использования зработанных материалов по сравнению с традиционными методами лечения: сроки лечения (стожоговых и травматических ран сокращаются на 4-5 дней, при лечении трофических язв кращение глубины и площади язвы на 50% наблюдается на 10-15 суток раньше. Кратность

161 эевязок может быть сокращена до 1-2 раз в неделю, что может дать значительный »номический эффект, обусловленный как возможностью перевода части больных на эулаторное лечение, так и сокращением расхода традиционного перевязочного материала.

162

В заключение приношу свою глубокую благодарность моим научным руководителям октору химических наук, профессору Анатолию Иосифовичу Гинаку, кандидату етеринарных наук Владимиру Олеговичу Виноходову, кандидату медицинских наук Сергею ергеевичу Автушенко за методическое руководство при выполнении и оформлении работы; орису Алексеевичу Никонову, доктору медицинских наук Борису Алексеевичу Парамонову, андидату химических наук Людмиле Александровне Селезневой за инициацию сследований, их техническую и идеологическую поддержку; кандидату медицинских наук [аталье Николаевне Третьяковой за внедрение разработанных раневых покрытий в практику ечения язвенных поражений кожи; кандидату химических наук Ирине Васильевне Чур иловой а помощь в изучении свойств губок с СОД; Игорю Леонидовичу Потокину за помощь в роведении электронномикроскопического исследования структуры полимерных материалов; андидату биологических наук Наталье Борисовне Вербицкой за помощь в исследовании актериостатических свойств биосовместимых полимерных материалов; кандидату физико-имических наук Геннадию Ивановичу Сигаеву и кандидату химических наук Муховикову Владимиру Васильевичу за большую помощь в подготовке рукописи диссертации, а также риношу свою глубокую благодарность всем коллегам принимавшим участие в работах по еме диссертационного исследования.

163

Библиография Диссертация по биологии, кандидата химических наук, Антонов, Сергей Федорович, Санкт-Петербург

1. Терских В.В., Васильев A.B. Эпидермальные кератиноциты человека и животных. Проблемы культивирования и трансплантации. М.: Наука, 1995. - 104 с. . Полимеры медицинского назначения/ Под ред. Сенсо Манабу/ пер. с яп. - М.: Медицина, 1981.-248 е.

2. Пхакадзе Г.А. Биодекструктируемые полимеры,- Киев: Наук, думка, 1990,- 160 с. . Регистр лекарственных средств России. / Под общ. ред. Ю.Ф. Крылова. М.: Инфармхим, 1993. - 1006с.

3. Коллагенопластика в медицине./ Под ред. В.В.Кованова и И.А.Сыченикова. М.:

4. Медицина, 1978, 256 с. . Chandy Т., Shrama С.Р. Chitosan - as biomaterial.// Art. cells, art. org. - 1990. - V.18(l). - P.l-24.

5. Burton G.W., Ingold K.U. Beta-carotene: An unusual type of lipid antioxidant.// Science. 1984. - 224. - P.569-573.

6. Burton G.W. Antioxidant action of carotenoids.// J. Nutr. -1989. V.l 19. - P. 109-111.

7. Афиногенов Г.Е., Блинов Н.П. Антисептики в хирургии. Л.: Медицина, 1987. - 144с.

8. Gourley S.T., Rice R.M., Hegueli A.F., et al.// J. Biomed Mat. Res. 1978, -V.12, N 2, - P.219-232.

9. Даценко Б.М., Белов С.Г., ТаммГ.И. Гнойная рана. Киев: Здоров'я, 1985. - 136с.

10. Вихрев Б.С., Бурмистров В.М. Ожоги: руководство для врачей. М.: Медицина, 1986. -271с.

11. ГОСТ СССР N 5556-66, (1966).164

12. Э. Патент N 1221282 Англия, A 61 L 15/00. Collagen sponge/ W.F. Milton, H. Brockenshaw, J.L. Shaw. Заявл. 8.01.1969; Опубл. 1.06 1971.

13. Патент N 1253845 Англия, А 61 L 15/06. Medical Dressing/ R.S. Wharton, J.D. Banks. -Заявл. 16.04.1968; Опубл. 17.11.1971.

14. A comparative study of synthetic and biological materials for wound dressing/J. Guldalian, C. Jelencko, D. Gallaway, J.T. McKnight// J. Trauma. 1973. - V.13. -N 1 - P.32-35.

15. A. c. N 658148 СССР, МКИ С 08 J 9/16. Способ получения пористого материала, обладающего ранозаживляющим действием / Л.П. Раскина, B.C. Якубович, М.Б. Шенкер и др. № 2388457/23-05; Заявл. 19.07.76; Опубл. 25.04.79. Бюл. - N 15 - 4с.

16. Радаева И.Ф., Костина Г.А. Использование гиалуроновой кислоты при различных патологических состояниях.// Химико-фармацевтичёский журнал. 1998. - Т.32. - №9. -С.38-40.

17. Патент N 3800782 США, А 61 В 17/04. Liguid-laid, поп-woven, fibrous collagen derived, surgical web having hemostatik and wound sealing properties./ M.M. Crus, N.J. Pennington, O.A. Battista et al. Заявл. 4.12.1972; Опубл. 14.05.1974.

18. Патент N 4060081 США, А 61 L 15/00. Multilayer membrans useful as synthetic skin. Я.У. Yannas, J.F. Burke, P.L. Gordon, Ch. Huang. -N 596112 Заявл. 15.07.1975; Опубл. 29.11.1977.-15р.

19. Патент N 3491760 США, А 61 В 17/04. Wound coverings./B. Braun, Н. Thiele (ФРГ). N563086, Заявл. 6.07.1966; Опубл. 27.01.1970. 7р. !8. Патент N 4089333 США, А 61 L 15/00. Method of treating a wound of burn./ Akira Utsuo,

20. Патент № 5278201 США, МКИ А 61 F 2/02, 2/00. Biodegradable in situ forming implantans and method of producing the same. /R.L. Dann, D.R. Cowsar, et al. Заявл. 24.04.90; Опубл. 11.01.94.

21. Peacock E.E., Seicler H.F. Biggers P.W.// Ann. Surgery. 1965. - V.161. - N1, - P.238-247.

22. Пат. Европ. N 200574, A 61 L 27/00. Заявл. 2.05.85; Опубл.5.11.86.

23. Yannas I.V. et al. // J. Biomed. Mat. Res. 1980. - V.14. - P.65-68.

24. Living Tissue Formed in vitro and Accepted as Skin-Equivalent Tissue of Full Thickness./ E. Bell, H.P. Ehrling, D.J. Buttle, T.Nakatsuji//Science. 1981. - V.211. -N4486, - P.1052-1054.

25. Development and use of a living skin equivalent. / E. Bell, H.P. Ehrlich, S. Sher et al. 111. Plast Reconst. Surg. 1981. - V.67. - N 3. - P 386-392.

26. Патент N 3429038 ФРГ, A 61 К 47/00. Wirkstoff Depart./P.Fleckenstein, D.E. Tuldabruck -Заявл. 07.08.84 ; Опубл. 20. 02. 86.

27. Патент N 8504413 Международный, С 08 L 89/09. Biodegradable matrix and method for production same./ F. Silver, R. Berg, D. Birk, et al. Заявл. 27.03.84; Опубл. 10.10.86.

28. Патент N 4320201 США, С 14 С 1/00. Method for making collagen sponge for medical and cosmetic uses./ A. Berg, Z. Eckmayer/ 435/265/ Заявл. 15.06.80; Опубл. 16.03.82.

29. Ю. А.с. N 192397 СССР /С. А. Миханов, Л.Г. Богомолова, И.Г. Андрианова/(1967); Бюл. N 5.

30. П. Иванова Л.А., Сычеников И.А., Кондратьева Т.С. Коллаген в технологии лекарственных форм. М.: Медицина, 1984. С.87-91.

31. Использование альгипора при лечении ожогов. /М.И. Кузин, В.К. Сологуб, В.В. Юденич и др.// Хирургия. 1979. - N 8. - С.86-88.

32. Adherence, proliferation and collagen turnover by human fibroblast seeded into different types of collagen sponges./ E. Middelkoop, H.J. Devries, L. Ruuls et al. // Cell and Tissue Research. -1995. V.280. - N 2. - P.447-453.

33. Коротяев А.И., Бабичев C.A. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. Учебник,- СПб.: Специальная литература, 1998. 592 с.166

34. Effect of 2-amino oleic acid exposure conditions on the inhibition of calcification of glutaraldehyde crosslinked porcine aortic valves. / W. Chen, J.D. Kim et al. //J. of Biomecd Mater. Res. 1994. - V.28. - P.

35. Патент. N 1814764 РФ, МКИ A 61 К 31/557, 47/48. Способ получения средства для лечения гнойно-некротических ран.ЯО.М. Гафуров и др. Заявл. 20.04.90; Опубл. 20.03.95/. Бюл. -№8.

36. Besimer G.J., van Blitterswijk С. A., Ponec М. Biocompatibility of biodegradable matrix used as a skin substitute. An in vivo evaluation.//J. of Biomedical Materials Research. 1994 - V.28, -P.545-552.

37. Properties of collagen and Hyaluronic acid composite materials and their modification by chemical crosslinking./ M. Kehakova, D. Bakos et al.// J. of Medical Materials Reseach. 1996. -V.30. - P.369-372.

38. Daniels R., Mittermaier E.M. Influence of the type of acid used for pH adjustment on the complex coacervation of gelatin/acacia mixtures.// Arch. Pharm. 1991. - V.324. - N.9. - P.695.

39. Chavasit V., Torres AJ. Chitosan-poly(acrylic acid): mechanism of complex formation and potential industrial application.// Biothechnol. Prog. 1990. - N.6. - P.2-6

40. Дубинина E.E. Биологическая роль супероксидного анион-радикала и супероксиддисмутазы в тканях организма. //Успехи современной биологии. 1989. -т. 108. -N.11. -С.3-8.

41. Гоготов И.Н., Кулаков С.М. Функции и свойства супероксиддисмутазы микроорганизмов.//Успехи микробиологии. -1981. -т. 16. -С.30-35.

42. Marklund S.L. Distribusion of Cu,Zn superoxide dismutases and Mn superoxide dismutase in human tissues and extracellular fluids.// Acta Physiiol. Scand. 1980. - V.492. - P. 19-23.

43. Structure of superoxide dismutase./ J. A. Tainer, E.D. Getzoff, K.M. Beem, D.C. Richardson. // J. Mol. Biol. 1982. -V. 160. - P. 181-217.

44. Koppenol W.H. Study of superoxide dismutase.// Oxygen and Oxy-radicals in chemistry and biology. /M.A.J. Rodgers,E.L. Powers, eds/. 1981. -P.671-674.

45. SO. Патент N 5169630 США, МКИ A 61 7/48 37/50. External skin preparation// Okya Yoshio et al. -Заявл. 18.10.90; Опубл. 08.12.92.167

46. Патент № 2085217 РФ, МПК А 61 L 15/00, А 61 К 31/74.Ранозаживляющее покрытиеЖД. Сидорова, Е.А. Селиванов, Н.Н. Алексеева и др. Заявл. 22.2.94; Опубл. 27.07.97, Бюл. №21.

47. Heywood R., Palmer А.К., Gregson R.L. The toxicity of beta-carotene.// Toxicology. 1985. -№36.-P.91-100.

48. Bendich A. The safety of beta-carotene.// Nutr. Cancer. 1988. - 11. - P.207-214.

49. Shekelle R.B., Lepper M., Liu S. Dietary vitamin A and risk of cancer in the western electric study.//Lancet. 1961. -2. - P. 1185-1190.

50. Krinsky N.I. The protectiv functions of carotenoids pigments.// Photophysiology./ A.C. Giese, Ed. New York: Academic Press, - 1968. - V.3, - P. 123-195.

51. Krinsky N.I. Membrane antioxidants. // Membrane in Cancer Cells./ Y.A. Scarpa, Eds. Ann. -N.Y.: Academ. Sci. 1988. - 551. - P. 17-33.

52. Krinky N.I. Biology and photobiology of singlet oxigen. // Oxigen radicals in chemistry and biology. /W. Bors, W. Saran, D. Tait, N.J. Berlin: Cruyter:. 1984, - P.453-464.

53. Изучение продукции противовоспалительных цитокинов и функции нейтрофилов в очаге воспаления./ Е.А. Варюшина, Ю.А. Котов, А.Г. Конусова, А.С. Симбирцев и др. // Русский журнал ВИЧ/СПИД. 1998. - Т.2. - №2. - С.45-46.

54. М. Лавров В.А., Заец Т.Л. Фибронектин, как составная часть раневого экссудата и его значение в заживлении раны.// Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -1998, Т. 125. - №3. - С.335-357.

55. Sciarra J.J., Patel S.P. In vitro release of therapeutically active ingredient from polymer matrixes//.!. Pharm. Sci. 1976. - V.65. -N 10 - P. 1519.168

56. Получение пористого материала на основе альгиновой кислоты, содержащей иммобилизованный террилитин./ А. Л. Комиссарова и др. //Антибиотики. 1988. -Т.23. -С.735-739.

57. Коллаген и его применение в медицине./ А.М. Хилькин и др. -М: Медицина, 1976. I. Kind F. A., et al.// Arch. Pharm. 1984. - V. - 317. - N 8. - P.657-661.

58. Liposome-collagen gel Matrix: a novel sustained drug delivery system /A.L. Weiner, S.S. Cappenter-Green, E.C. Soehngen et al.// "J. Pharm. Sci. 1985. - V.74. - N 9. - P.922-925.

59. Bough W.A.// Poultry Sci. 1976. - V.54, - N 6. - P. 1904-1914.

60. Mashi M.S. et al.// Preceedings of the First Internetional Conference on Chitin/Chitosan./ eds. R.A.A. Muzzarelli, E.R. Pariser/ Mil Sea Crant Report, 1978. P.364-374.

61. Патент N 8074794 Япония/ 1980.

62. Кравченко И.А., Давиденко Т.И., Чаланова Р.И. Исследование протеолитических ферментов на основе гидрофильных полимеров.// Химико-фармацевтический журнал. -1998. -Т32, -№5, -С. 40-45.

63. Коллагеновая губка «Цитотимакол» стимулятор заживления ран. / В.В. Малинин, М.А. Буракова, Н.Д. Сидорова и др. // Химико-фармацевтический журнал. - 1998. - № 11. - Т.32.- С.54-56.

64. Коваленко Г.А. Иммобилизованные протеолитические ферменты для наружного применения.// Химико-фармацевтический журнал. 1998., - Т.32. - №4. - С.41-44.

65. Государственная фармакопея СССР, изд. XI вып.2. М: «Медицина», 1990. - С. 187-210.

66. Патент №2085187 РФ, МПК А 61 К 7/48/ Гель для ухода за кожей и лечения ее заболеваний и композиция для ее получения./ В.А. Быков, Н.А. Овчинникова. Заявл. 22.11.95; Опубл. 27.7.97, Бюл. №21.

67. Ю. Радиационная стерилизация лекарственных средств./ В.В. Бочкарев, Е.П. Павлов, В.В.

68. Патент № 4016877 США, А 61 L 51/00. Fibrous collagen derived web hawing hemostatic and wound sealing properties./M.M. Crus, NJ. Pennington, J.H. Tenery et al. Заявл. 23.02.1976; Опубл. 12.04.1977.

69. Патент № 5206028 США, МКИ А 61 К 9/14. Dense collagen membrane matrices for medical uses:/Li Shu-Tung. -N 653178, Заявл. 11.02.91; Опубл. 27.04.93/.

70. Тец B.B. Справочник по клинической микробиологии. -СПб.: Стройлеспечать, 1997. 224 с.

71. Тихомиров В.К. Пены. Теория и практика получения и разрушения. 2-е изд., перераб. -М.: Химия, 1983.-264 с.

72. Адамсон А.А. Физическая химия поверхностей. М.: Мир, 1979. - 568 с.

73. Чебиляев Т.Х., Вайнштейн В.А., Сапожкова С.М. Исследование комбинированной лекарственной формы Р-каротина с витаминами и антимикробными препаратами. //Хим,-фарм. журн. 1998. - 32(2). - С.34-37.

74. Green Н. Regeneration of the skin after grafting of epidermal cultures.// Lab. Investig. 1989. - V.60.-N5. -P.583-584.

75. Cultured epithelium as a skin substitute. / A. Eldad, A. Burt, J.A. Clarke, B. Gusterson. // Berns. 1987. - V.13, - N 3. - P.173-180.

76. Progressiv replacement of human cultured epithelium allograft by recipient cells as evidence by HLA class I expression. / V. Gielen, M. Faure, G. Mauduit, J. Thivolet.// Dermatológica. -1987. -V. 175. P. 166-170/

77. Rosdy M., Clauss L -C. Cytotoxity testing of wound dressing using normal human keratinocytes in culture, ill. Biomed. Mater. Res. 1990. - Vol.24. - N3. - P. 363-378/

78. Jacobs J.P., Jones C.M., Bailie J.P. Characteristics of a human diploid cell designated MRC-5. //Nature. 1970. - V.227. -P.168-170.

79. Гликозаминогликаны роговицы крупного рогатого скота как потенциальное лекарственное средство для применения в офтальмологической практике./ Н.Н. Сигаева,170

80. З.А. Даутова, И.А. Басченко и др. // Химико-фармацевтический журнал. 1997. - Т.31. -№6. - С.40-43.

81. Состав и фармакологическая активность хондроитинсульфата, полученного из трахей северного оленя. / Р.Х. Мударисова, Н.П. Зимина, Е.А. Глухов и др. // Химико-фармацевтический журнал. 1997. - Т.31. - №2. - С.25-27.171