Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Технологические факторы при разбавлении, замораживании и оттаивании семени баранов

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Технологические факторы при разбавлении, замораживании и оттаивании семени баранов"

ВСЕСОЮЗНЫЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЖИВОТНОВОДСТВА

АВАНОВ НИКОЛАЯ ЯКОВЛЕВИЧ

ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ ПРИ РАЗБАВЛЕНИИ, ЗАМОРАЖИВАНИИ И ОТТАИВАНИИ СЕМЕНИ БАРАНОВ

03.00.13 — Физиология человека и животных (физиология сельскохозяйственных животных)

Автореферат диссертации иа соискание ученой степени кандидата биологических наук

На правах рукописи

УДК 636.3.082.453.53.

Дубровкцы, Московской обл. 1984 г.

Работа выполнена в отделах биологии воспроизведения и искусственного осеменения сельскохозяйственных животных Всесоюзного орцена Трудового Красного Знамени научно-ис -следовательского института животноводства и Всероссийского научно-исследовательского института племенного дела.

Научный руководитель - доктор биологических наук

Е.И.ПЛАТОВ

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук,

профессор Л.Й.ПАКЕНАС

кандидат биологических наук К.Т.КАСШОВ

Ведущее учреждение - Украинский научно-иссдедов&тель-ский институт степных районов им. М.Ф.Иванова ."Аскания Нова*.,

Защита диссертации состоится на заседании специализированного Совета Д.СЁО.16.02 по за -щите диссертации на соискание учёной степени доктора наук при Всесоюзном научно-исследовательском институте животно -водства.

Адрес: 142012.Дубровицы,Подольского района,Московской области.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан " <¡<£1)/' 1934

Учёный секретарь специализированного Совета,

каздвдат биологических наук И.И.ШИШШ

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ <

Актуальность темы. МаЯскиЯ <1962 г.) Пленум ЦК КПСС принял Продовольственную программу,направленную на решение проблемы обеспечения населения молоко» и мясом.Успех в решении затронутоП проблемы заложен не только в увеличении маточного поголовья»но и в повышении его продуктивности.Осуществление поставленной задачи возможно лишь при квалифицированно!! применении метода генотишгческой селекции,основанного на использовании самцов-производителей,оцепен-ньсс по качзству потомства как улучшатели.

Метод генотлпической селекции получает возможность широкой практической реализации благодаря1способу длительного хранения семени производителей при низких температурах.

Открытие В.К.Ииловановым,И.И.,СокодовскоЙ и И.В.йюрновам возможности сохранения живчиками биологической полноценности после.зар-мораживания (1947) позволило широко внедрить криогенную технологи» в практик/ скотоводства.Технология же хранения семени баранов в замороженной состоянии находится в процессе разработки и совер — шенствования.

Производственная проверка методов замораживания семени бара -нов показала,что на результат осеменения существенно влияют технологические факторы.Производству необходимо-дать конкретные,объск -тикшс,доступные метода оценки качества семени,рекомендации по борьбе с микробной загрязнённость»,строго установленные режимы оттаива«-гам. Поэтому разработка конкретных рекоме:щации5является актуальным.

Цель и задачи исследований. Целью исследования было улучшение эффективности длительного хранения семсни барана

В связи *с этим были поставлены задачи:

I.Изучить действие лактозо-жолточно-трис-цитратной среда с

1 ......¿-НО!?.....

гуммиарабиком на качество семени.

2.Изучить целесообразность биологической оценки замороженного семени барана по существукцкм методикам,разработанным применительно я семени быка.

3.Выяснить возможность замены гуммиарабика другими компонентам ш предполагаемого аналогичного действия в составе лактозо*«елточно-трпс-цитратной среда.

4.Выяснить действие, комплексного санирующего препарата — "спер* мосан-3" в среде для семени барана на качество его после оттаивания, определить оптимальнее концентрацию спермосана по выживаемости живчиков барана и результатам ягнении,

5.Определить оптимальные режимы оттаивания и усовершенствовать оттаиватель для замороженного семени барана.

Научная новизна. Установлено,что методы биологической оценки* разработанные для семени. быка,не позволяют объективно оценить влияние сред на семя барана в процессе технологической обработки.

Впервые изучено влияние разных концентраций комплексного са — нирущего препарата - "спермосан-3" на показатель абсолютной выживаемости живчиков барана до и после замораживания ,на полноценность и оплодотворялцую способность замороженного-оттаянного семени бережна,показана губительность на живчиков передозировки.санирущего препарата в синтетической среде «определена максимально допустимая доза антибиотика - 25 тыс.ЕЬ/100 мл.разбавленного семени.На данную разработку получено положительное решение фармакологического Сове" та ИСХ СССР и изданы в соответствии с нашими рекомендациями "Вре — иенные наставления по применению дактозо-желточно—гумыиарайико-трис-цитрат)го-глицериновой (ЛЖГ7ЦГ) среды для разбавления,эамор&> 1 живания и хранения спермы баранов-производителей".

Определена криоскопическая точка для среды с гуммиарабиком —

минус 39,3°С.

Доказано влияние количества одновременно оттаиваемых.гранул -эаморохенного семени,температуры оттаивания и материала,из кото - , poro изготовлен оттаиватель на качество оттаянного семени.Лучшие результаты э опытах подучены при оттаивании 15 гранул при температуре 70°С б оттаивателе из стекла.На основании данного предяоже - -ния КБ ВНИИплевдела разработало стеклянный оттаиватель - ОГСБ-2.

Впервые исследована возможность замены гуммиарайиха другими камедями растительного происхождения (абрикосовым клеем,вишнёвым клеем и инулином)..

Практическая ценность работы. Использование подученных , результатов даст возможность улучшить технологию замораживания и оттай' — ранил семени баранов.

Определена оптимальная концентрация'"спермосана^З" и доказано положительное влияние антибиотика на выживаемость к оплодотворяемое» живчиков после оттаивания. '

Доказано преимущество стеклянного оттаивателя перед металле^ ческим и определена оптимальная температура оттаивания,повшавдвя выживаемость живчиков на 55-Ч50&. - ' ' 1

Доказано положительное влияние замороженного семени на живу» массу ягнят при роедении и отсутствие влияния на пол потомства.

Реализация результатов исследований. Подученные результаты расширяют представление' о роли криопротекторов в процессе замораживания и оттаивания. '

Результаты исследования наши отражение во "Временных наставлениях по применению лактозо-кедточно-гуммиарабико-трис-цитратно— глицериновой среды" и опробированы Роспяемобъединением в 1962 г. в 4-х областях РСФСР и в 1963 г. в II автономных республиках*.

Апробация работе» Материалы диссертации доложены на конферен цин молодых учёных и аспирантов ВИХа (1979), наВсесоюзиых сеыина -рах по замораживанию семени барана* (ЕДНХ СССР 1932,1983) ,на Учаном Совете ШЛО по плевделу (Быково 1980-1983).

Объём работы. Диссертация состоит из введения»обзора литературы,целей и задач исследований,методик исследований,резудьтатов соб ственных исследований,обсуждения результатов исследований,выводов, практических предложений*й приложений.Работа изложена на 126 странницах, иа них содержит : 97 страниц текста,иллпстрированных 20 таблицами, 3 рисунками,22 страниц списка литературы,включающего 256 ис -точников,из них 63 иностранных,5 страниц сгрможениями. -

МАТЕРИАЛЫ И ЫЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена на протяжений 1970-1980 г.г.В опытах исполь эовано семякликически здоровых баранов-производителей 6 пород в возрасте от 2-х до 5 лет «Кормление и содержание их соответствовало общепринятым зоотехническим нормативам:и ветеринарно-санитарным требованиям. .... ^

Семя от баранов брали на искусственную вагину,определяли его объём и оценивали по подвижности по 10 бальной шкале.В опытах ис -пользовали семя с концентрацией живчиков 2,6 - 2,6 ылрц/ш. и с подвижностью не ниже 8 баллов.

Выживаемость живчиков при температуре 2~4°С определяли через каждые 24 часа до полного прекращения их поступательного движения (в часах) и показатель абсолютной выживаемости по В.К.Мшгованову (1962). '

Концентрацию веществ в средах определяли криоскопическим мето

дом по Бе кману .Концентрацию водородных ионов измеряли потенциомет—

i

poil JQ14-OI и pli иетро»*-340.

Семя разбавляли по методике Е.М.Платова (1978) .В зависимости от задач опытов использовали среды с различными криопротекторами.

Содержание легкогидрояизуемого фосфора (АТФ+ДЦФ) определяли по ГОСТ 20909,6-75. . г

ДегидрОгенезную активность,физиологическую (осмотическую) резистентность и устойчивость живчиков.к холодовому удару определяли по ГОСТ 20909,4-75.

Эвтектическую температуру растворов определяли с помощь» прибора /кояЦы'А№/ (ФРГ) по изиенению:электросо-

противления исследуемого раствора в зависимости от температуры. ^ Для выявления доли влияния повреждающих факторов при замораживании и отогреве применяли двухфакторный^дисперсионный,анализ. ■

Оптимальную температуру оттаивания определяли по показателю абсолютной выживаемости живчиков. ,

С целью • предупреждения роста микрофлоры и улучшения оплодо -творящей способности семени был применён комплексный санирующий препарат — "сперыосан-3".Оптимальную концентрацию антибиотика, определяли по показателю абсолютной выживаемости живчиков,Все опыты по санации семени проводили под руководством заведующего лабораторией по контролю препаратов.применяемых при искусственном осеменении ВГШИ ветпрепвратов,кандидата биологически* наук'Н.Г.Бала-шова. , , . ■>

Оплодотворяющую - способность семени проверяли на клинически здоровых овцах, под обра! шых по принципу аналогов.

Полученные данные обработаны методом вариационной статистики ( В.С.Асатиани 19б5,И.А.Пяохинский19б9,Г.Ф.Лакин 1980)

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

I. ¡Изучение влияния состава сред на замораживание семени.

В 1977 г. Е.М.Платовым впервые была применена в качестве крио-

- 5 -

протектора приходная камедь-гумми араб и к. Л акт о э о -ж елто ч] 1о-гумми ар а-бико-трис~цитратно-глицериновая (в дальнейшем ЛЖГГЦГ) среда была рекомендована Росплемобъединением ЫСХ РС1СР для внедрения в овцеводческие зоны РОШСР (1978).В данных исследованиях проведено комплексное изучение вляяниягуымиарабика на биологические показатели в средах и в разбавленном семени барана.

Ввиду отсутствия специальных методик и в связи с разработкой стандартов для биологической оценки э»мороженного семени барана была предпринята попытка рассмотреть возможность такой оценки, используя для этого существующие ГОСТы для оценки семени быко^-производи-телей.

В опытах исследовано влияние режима разбавления .двухчасовой вадержкипри 2-4°С и замораживания на исследуеше показатели.Контролем во всех опытах служила среда без гуммиарабика (в дальнейшем

лжтцгу.

Исследованиями установлено,что содержание легкогцдродизуеыого' фосфора АГФ+АДО значительно сшивается на всех этапах технологической обработки. ' '•• -

Наибольшее снижение лабильного фосфора наблвдается после замораживания, что . объясняется понижением синтеза АТФ за- счёт дыхания, т.е.происходит разобщение фосфорилировакия с окислением.В опытах не установлено влияние гуммиарабика на динамику фосфора .АТВ+ДЦФ. Разница иежду средами с гуммиарабиком и без него статистически: недостоверна,

, Дегвдрогеназную активность семе:вд определяли по скорости обесцвечивания метиленовой сини.Расчёт дегидроген&зной активности в относительных единицах проводили по формуле;предложенной нами

Да . Пс * С

Т..

где По - подвижность живчиков в баллах Л- ;

С - концентрация живчиков в I мл.

Т - время обесцвечивания метиленовой сини

Опытдии установлено значительное снижение показателя в опытней и контрольной средах, однако разница мезду ними'статистически недостоверна

Аналогичные результаты получены при оценке влияния состава сред на резистентность живчиков к осмотическому и холодовому удару.

Подводя итог сказ энному .можно* сделать вывод,что методы оценки, разработанные для семени быка не позволяет объективно оценивать влияние сред на семя баранов в процессе технологической обработки.

С цель» улучшения защитных свойств сред,используемых для разбавления и замораживания семени баранов.проведены исследования по замене гуммиарабика другими высокомолекулярными соедкнениямиана-догичкого химического состава.Иыи оказались соки вишнёвого и абрикосового деревьев,а также резервное питательное вещество некоторых сложноцветных - инулин. "

Оптимальную дозу камедей в средах определяли по показателю абсолютной выживаемости жисчиков.

v - . Таблица I

ПоказательпабсолютноЙ выживаемости живчиков при 2 - 4 С в оттаянном семени в зависимости от содержания кемедей. п „ ю

Кяирпи - Показатель.абсолютной выживаемости живчиков

' в средах со следующей концентрацией камедей

i% .2* . . зс . 4%

: Ы + м : 11 + м : II ± м : М м

Абрикосовый клей 123 + 8,6 181 ± 10,6 188 + 12,8 12*3 + 11,6 Вишнёвый клей 118 + 12,9 191 + 14,1 148 + 15,3 128 + 12,2

Инулин 99 + 6,4 161 + 22,1 81 + 6,4: 42 + 6,6

С увелкченАем концентраций хамедей (тебл.1) показатель абсо -летной выживаемости живчиков достоверно увеличивается (р 0,001) и достигает наивысшего значения в 256 концентраций у вишневого клея и 3£-ной концентраций у абрикосового клея.Выживаемость в среде с 2Й инулина достоверно выше,чей.в средах с 1,3 и

Разница между средами,содержащими % и вишнёвого и абрико -сового клея и I и 2Й инулина незначительна.

Учитывая, что на живчиков .наиболее неблагоприятное влияние ока» зываит водородные ионы,которые сообщают семени кислую реакцию,в подученных средах определяли концентрацию водородных ионов «- рН.

Согласно проведённым исследованиям во всех средах,в том числе и в контроле (среда. ЛЖТЦГ без камедей) рН колебалась от 7,0 ^ контроле до 7,23 в среде с инулином.

Кроме того известно,что на живчиков оказывает значительное влияние изменение осмотического давления.

Данный показатель определяли в средах без глицерина, т,к.глицерин понижает точку кристаллизации растворов и не оказывает, осмотического давления на живчиков. : . ,

Согласно получешаш данным осмотическое давление во всех средах было приблизительно на одинаковом уровне и колебалось от 1,23 1Ша в среде с гуммиарабиком до 1,3 в среде с инулинсм.

В целом можно сделать вывод,что исследусмые камеди не оказы — вают отрицательного влияния на рН и осмотическое давление и могут быть использованы в качестве криопротекторов.

2,Усовераенствовшше метода оттаивания замороженного семени барана.

На первом этапе исследований определяли эвтектическую, температуру среды с гуммиарабиком и выявляли долю влияния криопротектора на исследуемый показатель.Поэтому эвтектическую температуру иэмеря—

ли в лактозо-*едточной (Ш) среде,в дшстозо«*елточной с гуммиарабика и в дадтозо^елточно-гуммиарабвко-трис-цитратно-гдицерюю-бой (ЛХГТЦГ) среде.

Наиболее точно эвтектическая точка раствора определяется по зависимости электросопротивления среди от, температуры в зоне фазового перехода при замораживании я отогреве.

Согласно проведённым исследованиям эвтектическая температура для лактоэо-желточноЯ среды составила мицус 18,4°С, введение гуммиарабика повысило искомое значение незначительно до минус 17,1°С. В то же время добавление глицерина резко понизило криоскопическую точку до минус 39,3°С.Этот температурный промежуток необходимо "проскочить" максимально быстро во избежание отрицательного влияния на живчиков образующихся кристаллов льда.

Для ускорения теплообмена в этой области необходимо увеличить разность температур мехду гранулами и водой в бане (в оттаиватехе) и уменьшить тепловое сопротивление стенок, из олируюц их семя от на** греваацей среды.

Этот принцип положен в основу термостатического оТтаив&теля В.П.Кононова (1976) и модифицированного оттаиватехя Е.М.Платова и А.С.Волкова (1978).

Поскольку объём воды.в оттаиватехе этой конструкции неболь -той - 0,2 - 0,3 л.- то на скорость тепло обменные процессов должны оказывать влияние количество одновременно оттаиваемых гранул,те»-* пература оттаивания и материал,из которого изготовлен оттаиватель.

С целью проверки данной гипотезы и определения оптимальных условий при оттаивании лактозо-желточную среду с. 6% гуммиарабика, замороженную гранулами по 0,2 мл..размораживали по 5 , 10 * 15 и 20 гранул при температуре 50 , 60 , 70 и 80°С. (Опыт поставлен 5 раз).

Зависимость скорости оттаивания от количества гранул и температуры при оттаивании в метал -лическом оттамватеяе

Температура оттаивания в °С. Число гванул

5 ) 10 1 15 : 20

Скооость оттаивания в сек.

50 43,8 + 0,6 43,8 ¿ 0,7 27,8 ¿1,3 22,6 + 0,5

60 .33,0 ± 1,3 28,6 +1,6 24,6 ± 2,4 15,0 ± 0,9

70 31,4 ¿ 0,5 29,2 + 0,8 23,0 ¿ 0,4 13,6 * 0,7

80 28,8 ¿1,6 23,0 ± 2,6 20,2 ¿1,6 12,2 £ 0,7

Повышение скорости оттаивания с увеличением числа гранул (табл.2) объясняется тем,что при больших количествах гранул первые порции жвдкой фазы смачиваю* ец§ не оттаявшие, гранулы,образуя плёнку жидкости между стенкой оттаиватвжя и твёрдой фазой, В такой плёнке интенсивность теплообменных процессов примерно на порядок выше, чем в воздушной прослойке.

При малом количестве гранул первые порции жидкой фазы успевают ршыве выйти из зоны оттаивания, чем смочить гранулы и в итоге теплообмен замедляется.

Полученные данные обрабатывали дцухфакторшм дисперсионным анализом, который позволил с высокой степенью надёжности «0,01) сделать вывод о влиянии на скорость оттаивания и количества гра — пул и температур« оттаивания,Кроме того влияние температура проявляется неодинаково при разном числь гранул (эффект взаимодействия). Показатель абсолютной выживаемости живчиков,оттаянных при указанных режимах оттаивания составил 100 (табл.4).

Низкое значение этого показателя обусловлено высокой температурой стенки оттайвателя из-за чего часть белков живчиков подвер-

гается коагуляция.

Чтоб избавиться от этого явления высокотеплопроводный металл был заменен менее теплопроводный стеклом.Предполагалось,что при высокой разности температур при оттаивании и достаточно низком тепловом сопротивлении (толщина стекла незначительна) удаётся из* бавиться от местных перегревов и эвакуировать оттаянную жидкую фазу до того,как она нагреется выше комнатной температуры или,кон -тактируя с твёрдой фазой,вызовет протекание рекристаллизационных процессов.

Для проведения эксперимента был скянструирован огтаиватель, состоящий из двух цилиндрических со судов: наружного металлического из нержавеющей стали,диаметром 80 мм. и вну*Ренн9ГО из химического жаростойкого стекла диаметром 10 мм. (при выборе диаметра внутреннего сосуда учитывалась необходимость соприкосновения каждой гра — нулы при оттаивании со стенками цилшщра).В основании наружного цилиндра имеется отверстие,1фда вставляется стеклянный сосуд е выходным отверстием диаметром 3 мм.:

Таблица 3

Зависимость скорости оттаивания от количества гранул и температуры в стеклянном оттаявателе

Температура оттаивания в °С Число гоанта

5 : 10 г 15 ! 20

Скорость оттаивания в сек.

50 32,6 ± 0,6 31,2 + 0,6 35,8 1 0,8 29,8 +0,1

60 21,4 + 0,5 28,2 ± 0,7 22,8 + 0,1 10,6 0,1

70 24,0 + 0,1 19,6 ± 0,5 18,0 + 0,1 22,4 ± 0,6

80 23,8 + 0,6 18,4 + 0,7 15,2.+ 0,1 20,4 ± 0,9

Полученные данные (табл.3) обработаны методом дщухфакториого дисперсионного анализа.

Проведенные расчёты позволяет'сделать вывод о том, что как и в случае металлического оттаивателя влияние обоих факторов (темпе-

ратура и количество гранул,раздельно и суммарно) значимо о высокой степенью достоверности.

Наиболее высокая скорость оттаивания набладается при оттаивании 15 - 20 гранул при температуре 60-80°С.

В последующих опытах по определению влияния указанных рехи — нов оттаивания на показатель абсолютной выживаемости живчиков от — тоивание проводили при температуре 60 и 70°С 15 гранул заморожен -ного семени.

Указанные режимы были взяты из желания проводимую работу максимально приблизить к производственным условиям.В частности темпера»-ТУРУ вО°С трудно поддержать в горных условиях где температура кипения воды не превышает 90°С.

Социальное количество гранул - 15 взято из тех соображений, что один,эякулят берена^редко превышает I мл.Таким образом при замораживании по 0,2 ил. семени,разбавленного в отношении 1:2 количество гранул составит 15.

Для проведения эксперимента с вехе взятое семя разбавляли и замораживали в средах с гуммиарабиком и без него (контроль)..

Таблица 4

Показатель абсолютной выживаемости замороженного семеня,оттаянного в разных оттаивателях при разных температурах

Оттайватель : Температура : оттаивания : в °С п Показатель абсолютной вики -ваемости живчиков в средах : ЛЖГГЦГ : п : Л1ТЦГ Ц + м : : Ц + м

Стеклянный 60 8 117 + 7,9 8 142 + 10,0

Кетеллический 9 99+ 7,0 9 128+ 6,5

Стеклянный 70 9 187 + 10,0 8 170 + 8,0

11еталличеекий 9 104 + 9,0 9. 116 з 13,0

Показатель абсолютной выживаемости живчиков,оттаянных в стек-

ляниоы оттаивателе при температуре 60 и 70°С достоверно отличается от того хе показателя живчиков,оттаянных в металл треском отт&ива-теле Ср > 0,01) (табл.4)

С целью определения влияния состава сред и температуры отта- -ивания приведенные в табл.4 данные обработаны методом двухфажтор — ного дисперсионного анализа.

Из анализа следует,что при оттаивании при 60 и 70°С на показатель абсолютной вьпсиваемости в обоих случаях состав среды не оказывает влияния.

Температура оттаивания оказывает разное влияние на выжива -емость живчиков.Если при 60°С выживаемость в обоих случаях очень низкая (£ »100-140),то при 70°С на уровне сО - 0,05 показатель абсолютной выживаемости достоверно повышается,что подтверждает мнение о том,что повышение температуры,а соответственно скорости оттаивания исключает перегрев живчиков.

3.Влияние спермосана-3 на выживаемость живчиков.

Согласно действующим инструкциям ЫСХ СССР по искусственному осеменению сельскохозяйственных животных в среды для разбавления семени необходимо добавлять комплексный санирующий препарат — "спсрмосан-3*.

Дозы антибиотика для замороженного семени барана не разработаны. Оптимальную дозу спермосана определяли по показателю абсолютной выживаемости"живчиков в семени подвергавшемуся и не подвергавшемуся замораживания.

Из таблицы 5 видно,что показатель абсолютной выживаемости ^живчиков в незамороженном семени возрастает с увеличением концентрации спермосана-3 и достигает своего пика при 25 тыс.£д/100 мл. разбавленного семени.

Влияние спермосана^-3 на выживаемость разбавленного семени барана при 2-4С до замораживания п « 15

Концентрация спешосана~3 на 100 мл.раз-бавяышаго семени (в тыс.Ед.) : Среда с гуммиара» : бином ( + ) и : без него ( - )' Показатель абсолютной выживаемости живчиков Н -Ь м : Ы.

0 + 484 + 10,3

- ■ 457 + 8,6

12,5 + 496 + 8,0 0,9

- 487 + 13,7 1,82

25 + 524 + 10,3 2,79

- 529 + 11,2 5,06

50 + 386 + 8,0 7,55

332 + 5,7 7.4

100 + 345 + 6,7 11,3

- 330 + 4,7 12,9

Дальнейшее увеличение спериос ана~3, по-видимому > оказывает на живчиков токсическое действие,эначительносникая выживаемость.Уже в 50 тыс.концентрации она даже ниже контроля (р <. 0,001).

Бремя выживания в средах,содеркащих спермосан-3 в дозе 25 тыс. Е&.было тше выше в сравнение со средами с повышенным содержанием антибиотика.Это подтверздает ранее, высказанное мнение о том, что увеличение содеркания спермосана-3 подавляюще действует на жизнеспособность живчиков в незамороженном состоянии,приводя их к быстрой гибели.

Действие сперыосана-3 на живчиков после замораживания анало -точно его действии в незамороженном семени.Из таблицы 6 ввдно,что с увеличением концентраций епермосана-3 до 25 тыс Ец. достоверно возрастает показатель абсолютной выкиваемости живчиков (р С 0,001)

Дальнейшее увеличение концентраций спермосана-3 ведёт к снижению показателя абсолютной -выживаемости до уровня контрольной среды.

Действие еперыосша-3 на показатель абсолютной выживаемости живчиков после оттаивания

Концентрация спермосана-3 в 100 «л.разбавленного семени (в тыс.ВД

Среда с гумми • арабиком' + ) и без него

Показатель абсолютной выживаемости живчиков

• :п : М + м -¿и.

+ ,24 144+ 9,0

- " 24 154 ¿ 8,1

+ 21 191 + 10,3- 3,5

- 21 г 221 ¿.13,2 4,3

+ ,15 257,+ 19,0 .5,6

- 21 24Г±И,4 6,0

+ 21 182 113,2' 2,4

- 24 198 + 2,8 5,1

+ 18 169 + 8,6 1,6 >

- 24 167+10,4 0,98

12,5

25

50

100

Время выживания живчиков также выше в семени,содертащем 25 тыс. Цц.спермосана-3.Увеличение концентраций антибиотика снижает выжи«-ваемость живчиков.

Во всех случаях разница мезду средами с гуммиарабиком и без него статистически недостоверна.

4.Результаты производственных опытов.

Производственные опыты по проверке оплодотворяющей способное— тя семеш! барана, замороженного в средах с камедями проводили в колхозе "Родшш* При кубанского района Карачаево-Черкесской автономной', обл.Ставропольского края.в 1978 - 1980 г.г.

Учёт результатов ягнения осеменённого поголовья овец вехи соответственно в 1979 и в 1980 г.г;

В опытах 1578 г. испытыаалась среда с гуммиарабиком (ЛЖГЩГ)

без спермосана^-З и с добавлением антибиотика в концентрации 25 и 50 тыс.Ец.,а также бикарбонатная среда с вишневым клееы следующего состава:

Дистшхлированная-вода - 100,0 мл. Лактоза - - 12,0 г.

Сода двууглекислая - 0,1 г. Глицерин - 8,0 ил.-

Шелток — 20,0 мл, .

Вигн§вый клей - 4,0 г.

Результаты искусственного осеменения овцематок в 1978 г.

Таблица 7

Среда и режим :Осеменено:Выбыло:Осталось: Из них объягнилось хранения : 0Бец : иэ :в опыте : голов : % : '.опыта I %

ЛЕГТЦГ без сп ерю сана

(-196°С) 60 3 57 31 54,3 + 6,6

ЛГЩГ' + 25 тыс.Ей.спер-

мосана (-196°С) 66 I 65 37 56,9 + 6Д

мгтцг + ■

50 тыс.Е^.спср- , ■

мосайа С-196°С) 132 8 124 43 34,6 + 4,3 Ж"+ вишнёвый клей

(-196°С) 102 7 05 37 39,9 ± 5,0 Щ5Е контроль

(2 - 4°С) 98 5 93 47 50,5 ¿ 5,1 ;Ь таблицы 71 следует,что добавление сперыосана-3 в дозе 25

тыс.не повысило результативность ягнения,а увеличение концен -трации спермосана до 50 тыс. Ед.снизило результативность на 19£, . т.е.на статистически достоверную величину (-Ь£. « 2,4)

Добавление вишнёвого клея несколько снизило суягность овец,' но эта разница (14,4$) статистически'недостоверна.

В опытах 1970-1979 г.г.учитывали пол,живую кассу и число двоен в помёте. '

Анализ проведанных исследования позволил сделать вывод о том, что ягнята,полученные от замороженного семени не только не усту — пают контрольным по массе,но,порой,даже превосходят их(Количество двоен оказалось больше в группе овец, осеменённых сеыенеы,заморо женным в средах, содержащих спершсан-З в концентрации 25 и 50 тыс.

Число баранчиков и ярочек было приблизительно на одинаковом уровне во всех группах.

. I;

Дня более объективной оценки влияния сред на оплодотворяящую способность семени бши скомплектованы 2 группы:

?.Лактоэо-иелточно-гуммиарабико-трис-цитратно-«елточная (ЛЗГТЦГ) среда. , . ■ -

Среда ЛЖПЦГ + 25 тыс.Е&.спермосана^ •

. Среда ЛШТЦГ + 50 тыс.Ед.спермосана-3 -

Во всех случаях использовали.гуммиарабик чехословацкой' фирма "Хемапол"

, 2.Среда ЛЖПЦГ (гуммиарабик фирмы "Хемапол")

Среда ЛЖПЦГ (гуммиарабик западно германской фирмы "Мерк") Среда ЖЩГ + ЗС вишнёвого клея Среда ЛЖТЦГ + ЭЙ абрикосового клоя Среда ЖЩГ + ицулша

В обоих случаях применяли метод разделённых эякулятов.Для этого семя,разбавленное лактозо-яел точной средой в отношении 1:0,5

делили в первом случае на три части,а во втором-на пять частей,и лишь после этого разбавляли испытуемыми средами 1:1.

Таблица в

Результативность ягнения овец, осеменённых замороженным семенем с применением различных доз спериосань-З в среде с гуммиарабиком

Осеменено:Выбыло:Осталось:Объягнилось Испытуемая среда : овец : из : к :

: ¡опыта :ягнению :

% ягнения

ЛИТЦГ (контроль) 41 4 37 23 60,2 ±

ДЖПЦГ + 25 тыс. Ец.спермосана-3 69 5 64 40 62,5 +

ЛИТЦГ + 50 тыс. Е&. спермосена^-З . 59 I 58 27 44,0 +

Суягность овец (табл.осеменённых семенем,разбавленным контрольной средой, составила 60!? .Добавление 25 тыс. . спермо сана«-3 повысило результативность незначительно .Увеличение дозы сшшру — оцего препарата достоверно снизило суягность до 44%,

■ В параллельно проведённом опыте суягность овец,осеменённых семенем,разбавленным средой ЛЯПЦГ без спермосана-3 осталась на том же уровне (60Й) .Замена гуммиарабика чехословацкой фирмы "Хеыа-пол" препаратом немецкого лроиэводств&-"Мерк"-не улучшила процента суягности.

Введение в состав сред вместо гуммиарабика абрикосового клея, вишнёвого клея и инулина достоверно снизило результативность осе — менения.

ВЫВОДЫ

Х.Ыетоды биологической оценки¡определение количества легко — гидролиэусыого фосфора АТ$+ОДФ,дегидрогенаэ:юй активности,фиэиоло-

пгсеской (осмотической) резистентности и резистентности живчиков к холодовому удару,разработанные для семени быка не позволяют объективно оценивать влияние сред на семя барана в процессе технологической обработки.

2.При разработке сред для^разбавления семени животных их необходимо оценивать по рН,осмотическому давлению и электропровод -ности. Л

3.На качество оттаянного семени существенное влияние оказывает как количество оттаиваемых гранул,так и температура оттаива-ния.Установдепо оптимальное:количество одновременно оттаиваемых гранул замороженного семени барана - 15 при температуре 70°С.На качество оттаянного семенк значительное влияние 'оказывает материал, из которого изготовлен оттаиватель .Доказано преимущество стеклянного оттаивателя перед металлическим.

4.Сравнительная оценка защитных свойств криопротекторов,относящихся к группе камедей (гуммиарабик,вишнёвый и абрикосовый клеи и инулин) в составе лахтозо-желточно-трис-цитратно-глицериновой среды показала,что на предохранение биологической полноценности живчиков барана после замораживания-оттаивания они обладают в разной степени защитным действием.Суягность овец,осеменЗнных Семеном, замороженным в средах с гуммиарабиком,визнЗвым и абрикосовым клеем составила соответственно:60»1+3,8; 32,2+6,1 ; 20,2+4,8

■5.Санирующий препарат-"слсрыосан-3" в составе лажтозо-жел точно^гуимиарэбико-трис-цитратно-глицериновой: среды по разному влияет на выживаемость и оплодотворяющую способность живчиков барана после замораживания-оттаивания.Если в концентрации 25 тыс,Ед/ 100 мл.разбавленного семени препарат повышает показатель абсолютной выживаемости живчиков и оплодотворяющую способность от первого осеменсния (62Й),то повышение концентрации антибиотика до 50 тыс.

достоверно снизило оба показателя.Поэтому*при использовании пре— . парата для санации семени барана необходимо строго контролировать дозирование.

6.При осеменении овец замороженным-оттаянным семенем большое влияние на результативность осеменения оказывает место введения семени .Введение семени во влагалще в сравнение с цервикальным осеменением сникает суягно сть в два раза.

7.3аиораживаиие-юттаивание семени в лактозо-аелточно-гукми-арабико-трис-цитратно-глицериновой среде не влияет на живую массу ягнят, которая составляет при осеменении овец,замороженным в ШПЦГ среде семенем без спериосана-З 5,6 кг.для баранчиков и 4,5 кг. дня ярочек»соответственно в среде с 25 тыс.Ед/100 ил.раэбав -ленного семени спермосана-3 - 4,5 и 4 кг.и в среде с 50 тыс.ЕЙ. сперыосанаг-3 - 5,0 и 4,4 кг.В контрольной группе овец живая масса ягнят при рождении составила соответственно 5,1 к 4,4 кг.

Кахсимальное количнство двоен-24,3 и 25,6!? родилось от, овец, осеменённых семенем, замороженным в средея, содераецих спермосан-3 в концентрации 25 и 50 тыс.Е^/100 шг.разбавленного семени.

Количество баранчиков в двойнях пре во л иро вал о над ярочками (13 против 5) только в груше маток, осемен&шых семенем с 25 тыс. сперыосана-3,в остальных случаях в помете бшо приблизительно равное количество баранчиков и ярочек.

8. Замораживание-оттаивание семени баранов в лактозо-желточко-гуммигфабико—трис-сргтратно-глицериновой среде не действует избирательно на живчиков,несущих различные половые нгены (х и у) ,т.к. соотношение числа баранчиков и ярочек в потомстве огаггных и контрольной групп было одинаковым и составляло соответственно 46,5 : 53,5 и 48,6 : 51,4..

првдлашш производству

1.Для широкого использования в производственных условиях замороженного семени баранов-производителей рекомендуется добавлять в среды для разбавления и хранения семени баранов при -19б°С комплексный санирующий препарат - *спермосан-3".

Указанное предложение одобрено Ветеринарным фармакологическим Советом при ЦСХ СССР (I декабря 1931 г. протокол №8) и использовано во "Временных наставлениях по применении лактозо««елточно-гуммиарабико-трис-цитратно-гдицериновой (ЖПЦГ) среды для раз -бавяения,замораживания и хранения спермы бараков-производителей" (апрель 1983 г.)

2.Для оттаивания завороженного семени барана использовать оттаиватель с внутренним стеклянным сосудом в виде воронки.

Основное содержание диссертации опубликовано в следущих работах:

I .Замораживание спермы в среде со сперыосаноы-3,-Овцеводство 1979,10,с.Э7-38.

2.Замораживание спермы баранов в средах с полисахаридами.— Овцеводство,1980,10,с.38-39. (в соавт.)

3.Синтетическая среда.-Удостоверение на рационализаторское предложение № 739-3/502 от 4.05.82 г.ВНПО по плевделу.

4.Усовершенствование замороженной сперкы баранов.-В сб.:Кон-троль качества и стандартизации биопрепаратов,фармажологических средств,корювых добавок,применяемых в ветеринарии и животновод— стве.М.:1982,с.204-508 (в соавт.)

Л—69774 Подписано к печати 30.07.04 г. Формат бушлата 60x04/16 обьем 1,25 печ.л. Тир. 100 экз. Зак. 2136 Готащжнт.

Тотограоия НШАЫ г. 1церб:п1Ка