Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Тамм-Хорсфалл протеин у детей, страдающих сахарным диабетом 1-го типа с сопутствующей кандидозной инфекцией

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Тамм-Хорсфалл протеин у детей, страдающих сахарным диабетом 1-го типа с сопутствующей кандидозной инфекцией"

На правах рукописи

003052Т15 МИЛЕНИНА ОЛЬГА ЕВГЕНЬЕВНА _ _

ТАММ-ХОРСФАЛЛ ПРОТЕИН У ДЕТЕЙ, СТРАДАЮЩИХ САХАРНЫМ ДИАБЕТОМ 1 ТИПА С СОПУТСТВУЮЩЕЙ. КАНДИДОЗНОЙ ИНФЕКЦИЕЙ

03.00.07 - микробиология 14.00.09 - педиатрия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук

Москва-2007

003052715

Работа выполнена на кафедре микробиологии и кафедре детских болезней медицинского факультета ГОУ ВПО "Российский университет дружбы народов".

Научные руководителя:

кандидат медицинских наук, доцент

Кравцов Эдуард Георгиевич

доктор медицинских наук, профессор

Кузьменко Лариса Григорьевна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор

Токмалаев Анатолий Карпович

доктор медицинских наук, профессор

Логачёв Михаил Фёдорович

Ведущая организация:

ГОУ ДПО "Санкт-Петербургская медицинская академия последипломного образования Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию"

на заседании диссертационного совета Д.212.203.05 при ГОУ ВПО "Российский университет дружбы народов" (117198, Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 6).

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке ГОУ ВПО "Российский университет дружбы народов" (117198, Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 6).

Автореферат разослан ~__2007 г.

часов

Учёный секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук, доцент

О. Б. Гигани

Актуальность темы

В настоящее время во всех странах мира, особенно в промышленно развитых, наблюдается повышение заболеваемости сахарным диабетом. Большая социальная значимость сахарного диабета состоит в том, что он приводит к ранней инвалидизации и летальности, которая обусловлена наличием поздних сосудистых осложнений диабета: мик-роангиопатнй (ретинопатия и нефропатия), макроангиопатий (инфаркт миокарда, инсульт, гангрена нижних конечностей), нейропатий. Среди поздних осложнений сахарного диабета первое место по частоте занимает диабетическая нефропатия. Современные методы исследования позволяют диагностировать диабетическую нефропатию только на стадии микроальбуминурии.

Однако, по всей видимости, микроальбуминурия не относится к числу самых ранних симптомов, свидетельствующих о поражении почек. Основанием для такого предположения является указание на существование у больных сахарным диабетом гиперфильтрации и гиперперфузии, предшествующих микроальбуминурии, которые, как известно, сопровождаются повышением внутриклубочкового давления (Дедов И. И., Шестакова М. В., 2000). Внутриклубочковая гипертензия способна привести к поражению эпителия клубочков, а в последующем, и эпителия канальцев. В настоящее время поражение почки на стадии гиперфильтрации может документироваться данными, полученными только при биопсии почки. Поэтому, крайне актуальным является создание малоинвазивных методов и тест-систем ранней диагностики поражения почек при сахарном диабете на доклинической стадии заболевания.

< В этом плане внимание привлекает белок Тамма-Хорсфалла, представляющий собой гликопротеин, синтезирующийся эпителиальными клетками проксимальных канальцев восходящей петли Генле и являющийся специфическим почечным антигеном. Этот белок в количестве 50 - 100 мг присутствует в моче здоровых людей, и в крови этих лиц имеется фоновый уровень специфических антител (Майданник В. Г., Дранник Г. Н., 1990). Превышение концентрации антител фонового уровня к указанному протеину может свидетельствовать о вовлечении в патологический процесс почечных канальцев.

Белок Тамма-Хорсфалла у больных сахарным диабетом, особенно у больных сахарным диабетом 1 типа, привлекает внимание и в связи с имеющимся предположением возможности существования перекрёстных реакций этого протеина с антигенами Candida albicans, поскольку указанный контингент пациентов склонен к развитию кандидозной инфекции. Возможность развития перекрёстных реакций Тамм-Хорсфалл протеина с антигенами С. albicans существует в связи с наличием общности структуры этого белка с маннопротеином клеточной стенки С. albicans.

Хотя физиологическая роль Тамм-Хорсфалл протеина до конца не ясна, наличие в его составе высокоманнозных остатков способствует связыванию Тамм-Хорсфалл протеина с пилями первого типа Escherichia coli, чем он препятствует распространению восходящей уроинфекции (Pak J. et al., 2001). Это обстоятельство, а также существование перекрёстных реакций между О-антигеном Е. coli и Тамм-Хорсфалл протеином представляет интерес для исследования Тамм-Хорсфалл протеина у больных острым и хроническим пиелонефритом.

Цель исследования: выяснение роли Тамм-Хорсфалл протеина у детей, страдающих сахарным диабетом 1 типа с сопутствующей кандидозной инфекцией.

Задачи исследования:

1. Разработать диагностические тест-системы для выявления антител к Тамм-Хорсфалл протеину и к антигенам С. albicans. В связи с тем, что С. albicans при переходе в инвазивную форму изменяет антигенную структуру, провести поиск антигенов для конструирования тест-систем, позволяющих детектировать антитела, отражающие агрессивность популяции грибов.

2. Провести сопоставление общности антигенной структуры Тамм-Хорсфалл протеина и кандидозных антигенов.

3. Изучить специфичность разработанных тест-систем и определить диагностический титр антител.

4. Провести сравнительное изучение синтеза антител к Тамм-Хорсфалл протеину, поверхностным и секретируемым антигенам С. albicans у детей, больных сахарньм диабетом 1 типа при манифестации кандидоза и у пациентов групп сравнения.

Научная новизна

Создана диагностическая тест-система для определения Тамм-Хорсфалл протеина и антител к этому белку по специфичности превышающая зарубежные аналоги.

Предложен комплекс диагностикумов, позволяющий контролировать изменение популяции грибов рода Candida в динамике микотической инфекции.

Впервые установлено, что у детей при сахарном диабете 1 типа возрастает титр антител к почечноспецифическому антигену - Тамм-Хорсфалл протеину и определён их уровень, который следует рассматривать как маркёр доклинической стадии диабетической нефропатии.

Выявлена общность антигенов С. albicans и Тамм-Хорсфалл протеина. Исследование иммунного ответа на антигены агрессии С. albicans создаёт возможность дифференциации перехода от состояния инапарантного кандидоза в его манифестную форму.

Практическая значимость

Разработанная нами тест-система для определения уровня антител к Тамм-Хорсфалл протеину может быть использована для ранней диагностики поражения почек у детей, больных сахарным диабетом 1 типа. Повышение титра антител к Тамм-Хорсфалл протеину у детей с пиелонефритом следует считать показателем поражения канальцевого аппарата почек, что может использоваться при дифференциальной диагностике пиелита и пиелонефрита. Диагностикумы на белковые антигены грибов могут быть полезны при мониторинге за состоянием популяции грибов-комменсалов при различных заболеваниях и патологических состояниях.

Основные положения, выносимые на защиту

1. У детей, больных сахарным диабетом 1 типа отмечается выраженный иммунный ответ на секвестрированный почечный антиген - Тамм-Хорсфалл протеин, титр антител к которому снижается после начала лечения инсулином. При длительности заболевания более 3 лет уровень антител к этому белку вновь достигает высоких значений.

2. Несмотря на то, что в антигенной структуре Тамм-Хорсфалл протеина выявлены общие детерминанты с секретируемыми белковыми антигенами кандид, иммунный ответ на почечный и грибковые антигены не ассоциирован.

3. Манифестная форма кандидозной инфекции у детей при сахарном диабете 1 типа сопровождается нарастанием титров антител к поверхностным и секрети-руемым антигенам С. albicans.

• 4. Транслокация микробной флоры при травме сопровождается нарастанием титров антител к поверхностным белковым антигенам С. albicans, но не к секрети-руемым антигенам, как это имеет место при манифестной микотической инфекции.

Внедрение в практику

Основные положения, выводы и рекомендации диссертации внедрены в педагогический процесс кафедры микробиологии и кафедры детских болезней медицинского факультета Российского университета дружбы народов и используются в педагогическом процессе при проведении лабораторных занятий, семинаров и при чтении лекций студентам, ординаторам, аспирантам.

Апробация работы

Материалы и основные положения диссертации изложены на семинарах кафедры микробиологии и кафедры детских болезней медицинского факультета Российского университета дружбы народов (Москва, 2005).

Публикация результатов

По теме диссертации опубликовано 4 печатные работы.

Объём и структура работы

Работа представлена на 102 листах машинописного текста компьютерного набора, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов, методов и результатов экспериментальных исследований, их обсуждения и выводов, а также библиографического указателя, включающего 159 источников. Диссертация иллюстрирована 7 таблицами и 4 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

В работе представлены результаты наблюдения за 154 пациентами, 3-14 лет, из которых 119 детей находились в Морозовской детской городской клинической больнице и 35 детей - в травматологическом отделении Центрального научно-исследовательского института травматологии и ортопедии имени Н. Н. Приорова в период 2003 - 2006.

Все пациенты были разделены на 4 группы. Основная группа была представлена 51 ребёнком, страдающим сахарным диабетом 1 типа (24 - мальчика и 27 - девочек), которые находились в специализированном эндокринологическом отделении Морозовской больницы, из них у 12 сахарный диабет был выявлен впервые, у 11 - длительность заболевания не превышала 3 лет, и у 28 детей длительность диабета была более 3 лет. У 8 детей сахарный диабет был выявлен в возрасте до 3 лет, у 34 - заболевание дебютировало в 3-10 лет, у 9 детей - старше 10 лет. В группу детей, больных сахарным диабетом, включались пациенты, у которых содержание глюкозы в плазме крови натощак было более 7 ммоль/л. При поступлении в стационар у всех детей отмечалась гипергликемия (средний уровень сахара -16,47±1,3 ммоль/л) и глюкозурия. У 26 детей наблюдался кетоацидоз, из них 4 ребёнка находились в состоянии кетоацидотической комы, у 3 - поступлению в стационар предшествовали гипогликемические судороги, сменившиеся резкой гипергликемией.

У всех пациентов с впервые выявленным сахарным диабетом при поступлении отмечались жалобы на полиурию, полидипсию, зуд кожи, особенно выраженный в области вульвы (у девочек) и крайней плоти (у мальчиков), резкое похудание за 2 - 3 месяца до госпитализации. Со слов родителей, заболевание у детей начиналось как бы внезапно, у 7 из них - после перенесённой респираторной вирусной инфекции, у 5 - сахарный диабет дебютировал как бы на фоне полного здоровья. 39 детей, имевших определённую длительность сахарного диабета, поступили в стационар для коррекции дозы инсулина и скрининга осложнений. У всех наблюдалась лабильность показателей гликемии, глюкозу-

рия, у 17 из них - кетонурия на фоне нарушения диеты и неправильного расчёта дозы инсулина, у 3 была рвота на фоне выраженного кетоацидоза. В анамнезе у 10 детей родственники первой - второй линии родства были больны сахарным диабетом 1 типа; у 3 детей сахарный диабет 1 типа наследовался от матери; у 15 - родственники первой - второй линии родства были больны сахарным диабетом 2 типа; у остальных пациентов, согласно опросу родителей, возможность наследования заболевания установить не удалось.

В первую группу сравнения были включены 16 практически здоровых детей, 10 -девочек и 6 - мальчиков, поступивших в Морозовскую больницу на обследование.

Вторую группу сравнения составили 52 ребёнка с пиелонефритом, находившихся в нефрологическом отделении, из них 30 человек было с острым пиелонефритом, 22 - с хроническим. В данной группе детей были только девочки, из них первичный пиелонефрит наблюдался у 14 человек и у 38 - вторичный

Согласно анамнезу, у 10 детей с первичным пиелонефритом заболевание возникло на фоне перенесённой острой респираторной вирусной инфекции, у 4 детей - на фоне переохлаждения. У 25 пациентов с вторичным пиелонефритом причиной заболевания явился пузырно-мочеточниковый рефлюкс, который возник на фоне хронического цистита, а у 12 детей пиелонефрит развился на фоне аномалий развития мочевых путей, таких как удвоение чашечно-лоханочной системы (7 детей), дисплазии почки (2 детей), дисплазии мочеточника (3 детей), у 1 ребёнка была выявлена опухоль почки. Среди детей с хрЪническим пиелонефритом 12 поступили в связи с обострением болезни и 10 - для обследования. У детей с острым пиелонефритом при поступлении отмечались жалобы на слабость, повышение температуры тела до 39 °С, боли в пояснице, у 8 детей - дизурические явления, болезненное, учащенное мочеиспускание. Температура была субфебрильной; у 5 детей жалобы отсутствовали, однако, у всех имела место лейкоцитурия, выявленная при диспансерном наблюдении.

Дети с дисметаболической нефропатией в исследование не включались.

Третью группу сравнения, составили дети с переломами конечностей в возрасте 3 -14 лет (20 - девочек и 15 мальчиков). Сыворотки крови этих пациентов были получены из лаборатории Центрального научно-исследовательского института травматологии и ортопедии имени Н. Н. Приорова.

Все дети были обследованы нами на антитела к Тамм-Хорсфалл протеину, поверхностному и секретируемому антигенам С.albicans.

Тамм-Хорсфалл протеин был получен методом солевого осаждения (I. Tamm, F. Horsfall, 1950). Получение сыворотки к Тамм-Хорсфалл протеину проводили по методу Кравцова Э.Г., Карманова М.И. (1983). Специфичность сыворотки оценивали в реакции

торможения пассивной гемагглютинации (РПГА) и реакции иммунодиффузии по Оухтер-лони.

Для выделения поверхностных и секретируемых антигенов С, albicans использовали клинический изолят C.albicans N3b, выделенный от беременной женщины с проявлениями кандидозного вагинита. Белковые антигены C.albicans были выделены согласно методике, описанной М. Barki et al. (1994) в нашей модификации.

Для получения поверхностного антигена на основе маннопротеина клеточной стенки C.albicans клетки грибов в мицелиальной форме обрабатывали 0,02М 0-меркаптоэтанолом с последующим переосаждением выделенного экстракта 70% этанолом и обработкой литиказой Arthrobacter luteus (SIGMA) в концентрации 1000 U/мл.

Секретируемые антигены C.albicans осаждали 70% этанолом из культуральной жидкости с последующей обработкой выделенного субстрата литиказой.

Для получения сывороток к белковым антигенам C.albicans, находящимся в инва-зивной фазе роста, мы применили тот же приём, что и при получении сывороток к ТХП.

Эритроцитарные диагностикумы готовили по общепринятой методике.

Антитела к Тамм-Хорсфалл протеину, поверхностному и секретируемому антигенам C.albicans в сыворотке крови исследуемых групп детей определяли в реакции пассивной гемагглютинации, результаты выражали в десятичных логарифмах татра.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 1 .Клиническое обследование детей на этапе отбора

При обследовании больных сахарным диабетом у всех детей был выявлен кандидоз слизистых оболочек вульвы (у девочек) и крайней плоти (у мальчиков). При микроскопическом исследовании отделяемого слизистых были обнаружены грибы рода Candida в мицелиальной форме. Помимо этого у 40 детей в клиническом анализе мочи при микроскопии мочевого осадка выявили мицелиальные клетки кандид. При посеве мочи на хромо-генный агар идентифицировали грибы С. albicans.

У всех наблюдавшихся пациентов отмечалась лабильность показателей гликемии, глюкозурия, средний уровень гликозилированного гемоглобина был равен 10,9 ± 0,4% (норма 6 - 8%), что свидетельствовало о декомпенсации сахарного диабета. В биохимическом анализе крови у 9 детей из 22 обследованных отмечалось повышение уровня креати-нина.

Нарушения липидного обмена были выявлены у 14 детей, из них у 12 был повышен уровень общего холестерина, у 4 - триглицериды, у 14 - Р-липопротеиды.

У 5 детей с длительностью диабета более 3 лет в анализах мочи была выявлена микроальбуминурия более 30 мг/л, что явилось критерием для постановки диагноза начи-

нающейся диабетической нефропатии (согласно классификации диабетической нефропа-тии, предложенной Mogensen, 1983).

В группе детей с острым пиелонефритом и обострением хронического признаки кандидозиой инфекции отсутствовали.

Дети из травматологического отделения никакими сопутствующими заболеваниями не страдали.

2. Изучение специфичности иммунных сывороток

Исследование сыворотки к Тамм-Хорсфалл протеину (ТХП) показало, что в ней присутствуют, кроме антител, специфичных по основному компоненту, антитела к альбумину человека. Для элиминации этих антител был использован приём истощения сыворотки от контаминирующей специфичности, путём включения на этапах реиммунизации сорбции сыворотки продуцента альбумином и последующим внутривенном введении преципитата, сформированного при взаимодействии ТХП и истощённой аутосыворотки. Использованный приём позволил, на конечном этапе, получить моноспецифичную сыворотку.

При получении сывороток к поверхностным (ПА) и секретируемым антигенам (СА) С. albicans для сорбции использовали взвесь грибов в дрожжевой форме. Полученные таким образом сыворотки преципитировали белковые антигены инвазивной формы С. albicans, но не агглютинировали клетки грибов в дрожжевой форме.

3. Исследование перекрестных реакций между Тамм-Хорсфалл протеином

и антигенами C.albtcans 'Для исследования возможности перекрестных реакций между Тамм-Хорсфалл протеином и белковыми антигенами С. albicans использовали реакцию торможения пассивной гемагопотинации. Для этого раститровывались сыворотки к поверхностному и секре-тируемому антигенам С. albicans, начиная с разведения 1:2, затем в каждую лунку вносили ТХП в концентрации 100 мкг/мл и добавляли соответствующий диагностикум. Наблюдалось торможение агглютинации сыворотки к СА на 3 разведения, в то время как титр сыворотки к ПА после добавления ТХП не изменялся. Далее мы трижды раститровали сыворотку на ТХП, начиная с разведения 1:200, предварительно определив её титр, который был равен 1:1280. В каждую лунку первого ряда вносили ЕА, второго - СА, третьего - ТХП, в концентрации 35 мкг/мл каждого антигена, во все лунки добавили диагностикум на ТХП. Торможение агглютинации сыворотки наблюдалось в ряду с СА и полное блокирование агглютинации ТХП. Внесение в систему ПА не влияло на агглютинацию. Результаты опыта представлены в табл. 1.

Таблица 1

Перекрестные реакции Тамм-Хорсфалл протеина с белковыми антигенами С. albicans

Иммунная сыворотка к антигенам Блокирующий антиген Разрешающий реакцию диагностикум

ПА СА ТХП

ПА + - - ПА

СА + + + СА

ТХП - + + ТХП

Примечание: знак «+» - ингибирование РПГА,«-» - отсутствие ингибирования.

В соответствии с полученными данными, можно считать, что ТХП перекрёстно реагирует с антителами к СА мицелиальной формы С. albicans, но не имеет общих эпито-пов с ПА.

Таким образом, разработанные нами иммунореагенты могут быть охарактеризованы следующим образом: диагностическая система, включающая высокоспецифичную сыворотку и диагностикум к ТХП позволяет определять не только уровень антител к этому белку, но и провести иммунохимический анализ этого белка. При этом нами впервые было показано, что в структуре ТХП имеются эпитопы общие с белковыми компонентами антигенного комплекса грибов рода Candida. Перекрёстно реагирующие компоненты сек-ретируются кандидами в случае перехода их в мицелиальную форму, но не обнаруживаются у грибов в том случае, когда они находятся в дрожжевой форме. Это послужило основанием предполагать, что манифестация микотической инфекции может активировать иммунный ответ на почечноспецифический антиген, и, тем самым, включиться в патогенез диабетической нефропатии. Внести ясность в этот вопрос мог анализ гуморального ответа у таких больных на ТХП и разные антигены кандид.

4. Исследование антителопродукции к Тамм-Хорсфалл протеину у детей наблюдавшихся групп

При проведении данного исследования группа детей, страдающих сахарным диабетом 1 типа, сравнивалась с объединённой группой практически здоровых детей и детей с переломами конечностей в периоде реконвалесценции. Объединить эти две группы позволило наличие идентичных показателей средних титров антител к Тамм-Хорсфалл протеину (р > 0,05). При обследовании группы сравнения, в которую были включены практически здоровые дета и дети с переломами конечностей в периоде реконвалесценции, антитела к ТХП были выявлены у 54,29 ± 6,9% детей, при этом их средний титр не превышал

1,76 ± 0,054. В этой группе не обнаружены сыворотки с титром > 2,5. В то же время у больных сахарным диабетом детей превышение значений указанного титра встречалось достаточно часто, что позволяет принять титр 2,5 как диагностический. В группе больных пиелонефритом частота серопозитивных детей достигала 100%, у больных сахарным диабетом 1 типа этот показатель так же был выше, чем в объединенной группе сравнения и составлял 86,3 ± 4,8% (р < 0,001). Средние значения титров антител к ТХП в обследованных группах представлены в табл. 2.

Таблица 2

Уровень антител к Тамм-Хорсфалл протеину в обследованных группах

Наименование группы Частота серопозитивных детей Средний титр серопозитивных сывороток (М±т)

%

Группа сравнения (практически здоровые дети и дети с переломами конечностей) 54,29 ± 6,90 1,76 ±0,054

Дети с сахарным диабетом 1 типа: 86,30 ±4,81 2,12 ± 0,067

с впервые выявленным 91,70 ± 7,9 2,20 ±0,16

с длительностью диабета < 3 лет 73 ±13,3 2,01 ±0,19

с длительностью диабета > 3 лет 89,3 ± 5,8 2,13 ±0,78

Дети с пиелонефритом: 100 2,26 ±0,042

с острым пиелонефритом 100 2,30 ± 0,054

с хроническим пиелонефритом 100 2,21 ± 0,067

Из приведенных данных следует, что средний титр антител к ТХП у детей, страдающих сахарным диабетом 1 типа, существенно выше, чем у здоровых (р < 0,001), при этом его значение приближается к показателю среднего титра у больных пиелонефритом, у которых данный показатель является максимальным. Необходимо отметить, что частота серопозитивных детей с впервые выявленным диабетом, достигала 91,7 ± 7,9%, при этом средний титр антител к ТХП не отличался от аналогичного показателя у детей с пиелонефритом.

После назначения таким детям инсулина наблюдалась отчётливая тенденция = 1,7) к уменьшению количества серопозитивных детей. При длительном течении диабета (> 3 лет), частота серопозитивных детей достигала 89,3 ± 5,8%, а титр антител к ТХП со-

ставлял 2,13 ± 0,078. Из этого следует, что при повреждении почечной ткани, как в случае пиелонефрита, так и диабета, можно наблюдать иммунный ответ на органоспецифический почечный антиген, которым является ТХП.

5. Исследование иммунного ответа на белковые антигены C.albicans у детей,

страдающих сахарным диабетом 1 типа Имея в распоряжении антигенные диагностикумы, различающиеся по специфичности, мы считали целесообразным провести анализ антителопродукции к поверхностным антигенам и антигенам, ассоциированным с инвазивной фазой роста кандид у детей, страдающих сахарным диабетом 1 типа. Первоначально необходимо было определить, в какой степени продукция противокандидозных антител разной специфичности выражена у здоровых детей. Результаты исследования показали, что антитела на ПА и СА были выявлены у 100% детей, при этом их средний титр по ПА не превышал 1,862 ± 0,106, по СА -1,843 ± 0,114. В группе детей, страдавших сахарным диабетом, эти показатели были значительно выше, их средние титры составляли 2,962 ± 0,108 (р < 0,001) и 2,394 ± 0,061(р < 0,001) соответственно. В контрольной группе не обнаружены сыворотки с титром по ПА > 2,5 и СА >2,8. Эти значения были приняты как диагностические, т. е. обнаружение у пациента антител в титре выше этого уровня свидетельствует об активации микотической инфекции. Исходя из этих данных, был проведен анализ иммунного ответа на антигены грибов в различных исследуемых группах. Показатели, на основании которых проводили этот анализ представлены в табл.3.

Таблица 3

Выявление антител к поверхностному и секретируемому антигенам С. albicans в обследованных группах

Наименование группы Частота серопозитивных детей, превышающих диагностический титр Средний lg титра антител серо-позитивных сывороток (М±т)

ПА, % СА, % ПА СА

Практически здоровые дети - - 1,862 ±0,106 1,843 ±0,114

Дети с переломами конечностей 45,7 ±8,4 11,4 ±5,3 2,483 ± 0,095 2,02 ± 0,089

Дети с сахарным диа- 56,8 ± 6,9 7,8 ± 3,7 2,962 ±0,108 2,394 ±0,061

бетом 1 типа:

с впервые выявленным 75 ± 12,5 33,3 ± 13,6 3,308 ± 0,22 2,542 ±0,109

с диабетом, имеющим определённую длительность 48,7 ±8,0 2,6 ± 2,5 2,843 ±0,11 2,297 ±0,049

Из представленных данных следует, что у детей с сахарным диабетом 1 типа частота случаев, при которых титр антител к ПА превышает диагностический, составляет 56,8 ± 6,9%, а к СА - 7,8 ± 3,7%. При этом среднегеометрический титр оказывается значительно выше (р < 0,001), чем у здоровых детей. Эти показатели наиболее высоки у детей с диабетом, выявленным впервые. Повышение титра было отмечено и в группе сравнения, в которую были включены дети, поступившие в травматологическое отделение без диабета и проявлений кандидозной инфекции. Однако превышение диагностического титра у таких детей было несколько ниже, чем у больных диабетом. При этом среднегеометрический титр был высок только по отношению к ПА С. albicans (р < 0,001), в то время как к СА он статистически значимо не отличался от этого показателя у здоровых детей (р > 0,05). Вероятно такая ситуация может возникнуть в результате того, что при травме возникает транслокация популяции грибов-комменсалов, которые в норме включены в микробные ценозы в дрожжевой форме и не экспрессируют секретируемые антигены агрессии.

Таким образом, в случае диабета, когда происходит манифестация кандидозной инфекции, наблюдается активация иммунного ответа не только на поверхностные антигены гриба, но и на секретируемые. В то же время в случае травмы выраженный ответ отмечается только на поверхностные антигены. Принимая во внимание то, что используемые нами иммунореагенты были сконструированы на основе антигенов, выделенных из культуры С. albicans, находящейся в мицелиальной форме, т.е. в той фазе роста, когда эти грибы проявляют инвазивную активность, можно предположить, что в случае кандидоза на фоне диабета происходит антителопродукция не только на поверхностные антигены кандид, но и на секретируемые антигены агрессии.

Для ответа, связано ли повышение титра антител к ТХП с микотической инфекцией нами была изучена корреляция между титрами ТХП, ПА и СА С. albicans в различных исследуемых группах. Результаты представлены в табл.4.

Из представленных данных в табл. 4 следует, что уровень антител к ТХП очень слабо коррелирует с титром ПА, коэффициент ранговой корреляции (г) не превышает значений 0,1. В группе здоровых детей и детей с переломами конечностей практически отсутствует корреляция между ПА и ТХП (г = - 0,13; г = - 0,05), у детей с сахарным диабетом она становится очень слабоположительной (г = 0,1). Антитела к антигенам агрессии СА, также как и к ПА, практически не ассоциируют с иммунным ответом на ТХП (табл.4).

Таблица 4

Корреляционный анализ взаимосвязи между титрами антител к Тамм-Хорсфалл протеину, поверхностным и секретируемым антигенам С.аШсат

Показатель Коэффициент корреляции, г

Практически здоровые дети Дети с переломами конечностей Дети с сахарным диабетом 1 типа

Мевду титрами антител к ТХП и ПА -0,13 -0,05 0,1

Между титрами антител к ТХП и СА 0,04 0,06 - 0,005

Между титрами антител к ПА и СА 0,91 0,58 0,44

Результаты проведённого исследования указывают, что общность антигенной структуры ТХП и секретируемых антигенов агрессии грибов не влияет на индукцию аутоанти-тел. Очевидно, микотическая инфекция не может выступать в роли пускового механизма аутоиммунного ответа на органоспецифический антиген ТХП.

В проведённых нами исследованиях было показано, что патологические изменения в почечной ткани при сахарном диабете 1 типа могут проявлять себя уже в дебюте болезни. Показано, что еще до появления микроальбуминурии у больных сахарным диабетом в крови накапливаются антитела к ТХП. Будучи секвестрированным антигеном, в норме он не доступен иммунокомпетентным клеткам, но при деструктивных изменениях в почечной ткани поступает в кровь и индуцирует иммунный ответ.

В свою очередь, накопление аутоантител к ТХП сопровождается образованием иммунных комплексов, что вызывает иммуноопосредованное поражение почечной ткани. Формирование такого порочного круга достаточно убедительно обосновано при пиелонефрите.

Именно по этой причине в наши исследования была включена группа сравнения с данной патологией. Следует отметить, что в случае пиелонефрита тригерную роль в развитии аутоиммунного процесса выполняет уроинфекция, вызванная микробами-оппортунистами.

Сахарный диабет является предрасполагающим фактором для развития таких инфекций, среди которых кандидоз занимает ведущее место. Возможность кандид индуцировать иммунный ответ на ТХП можно обсуждать в том случае, если существует общность в ан-

тигенной структуре ТХП и грибов рода Candida. При изучении белковых антигенов С. albicans нами было показано, что такая общность обнаруживается между ТХП и секрети-руемыми антигенами гриба, находящегося в мицелиальной форме. Эти антигены не были идентичны белковым компонентам маннопротеинового комплекса клеточной стенки С. albicans, которые не имели общих детерминант с ТХП.

Именно по этой причине можно было ожидать, что стимуляция иммунного ответа на ТХП изначально может происходить за счёт микотической инфекции на той её стадии, когда грибы переходят в инвазивную фазу роста, т. е. при образовании герминативных трубок с последующим прорастанием в эпителиальный слой слизистой. Такая ситуация может складываться при манифестации инфекции. В то же время транслокация кандид, описываемая при стрессе, травме, дисбалансе микрофлоры, увеличении плотности популяции грибов в естественной экологической нише и т. д. стимулирует антителопродукцию к поверхностным антигенам клеточной стенки грибов.

Эта закономерность была подтверждена нами при сравнительном изучении антитело-продукции у детей с манифестной формой микотической инфекции и транслокацией кандид при травме. Установлено, что только при манифестном проявлении кандидоза, когда в кровь поступают секретируемые антигены, связанные с инвазивностью гриба, можно наблюдать выраженный ответ на такие антигены, в то время как при транслокации микотической флоры при травме существенное увеличение титра антител было отмечено по поверхностным белковым антигенам клеточной стенки гриба. Следовательно, только манифестация инфекции вызывает продукцию антител именно к тем антигенам, которые имеют общие эпитопы с ТХП.

Однако стимуляция таких антител не ассоциируется с антителопродукцией на ТХП, на что указывала низкая корреляционная связь между титрами антител на ТХП и СА. Это позволяет заключить, что микотическая инфекция сама по себе не играет тригерной роли в развитии диабетической нефропатии. Вероятно, повреждение почечной ткани первоначально определяется процессами, связанными с гипергликемией, которая играет роль пускового механизма при индукции иммунного ответа на секвестрируемый почечноспецифи-ческий антиген ТХП. Кандидоз же в этом оказывается вторичным. Вопрос о влиянии перехода кандидозной популяции в инвазивную форму на динамику развития нефропатии остаётся открытым и требует специальных исследований, выходящих за рамки данной работы. Разработанные нами иммунореагенты позволяют решать такого рода задачи. Предложенный диагностикум к ТХП оказался достаточно эффективен при раннем выявлении изменений в тубулярной части нефрона. По уровню антител к ТХП оказалось возможным диагностировать патологический процесс в почках до появления микроальбуминурии.

Динамика титров антител может быть принята как прогностический показатель поражения почек при сахарном диабете и отражать адекватность проводимой терапии.

Целесообразным в решении указанного вопроса может быть использование предлагаемых нами диагностикумов, сконструированных на основе белковой составляющей маннопротеинового комплекса клеточной стенки С. albicans и секретируемых белков гриба, находящегося в инвазивной форме роста. Такого рода диагностикумы позволяют контролировать не только иммунный ответ на сопутствующую диабету микотическую инфекцию, но и дифференцировать его от фоновой иммунизации индигенной микрофлорой.

В проведённых исследованиях было показано, что, используя эти два диагностикума, можно судить о состоянии популяции грибов в естественных экологических нишах. Оказалось, что изменение популяции в сторону повышения инвазивности сопровождается нарастанием титра антител к секретируемым антигенам. Получаемая таким образом комплексная информация при использовании предлагаемых трёх диагностических тест-систем может оказаться полезной не только при решении научных задач, но и в клинической практике.

ВЫВОДЫ

1. Разработанная тест-система для определения аутоантител к Тамм-Хорсфалл протеину позволяет выявлять поражение почек на уровне канальцевого аппарата.

2. Разработанные два варианта диагностикумов на основе поверхностных и секретируемых белковых антигенов инвазивной формы С. albicans позволяют дифференцировать кандидоз от кандидоносительства.

3. Выявлены общие антигенные детерминанты в структуре Тамм-Хорсфалл протеина и секретируемых белковых антигенов С. albicans, находящихся в мицелиальной форме.

4. Нарастание уровня антител к секретируемым белковым антигенам мицелиальной формы С. albicans ассоциируется с манифестацией микотической инфекции, а увеличение титра к поверхностным антигенам клеточной стенки с транслокацией популяции грибов в неинвазивной форме.

5. У детей, страдающих сахарным диабетом 1 типа, выявляется образование аутоантител к Тамм-Хорсфалл протеину, уровень которых можно считать ранним прогностическим признаком поражения почек и показателем адекватности терапии. Данный тест позволяет диагностировать диабетическую нефропатию на стадии, предшествующей микроальбуминурии.

Практические рекомендации

1. У больных сахарным диабетом 1 типа целесообразно исследовать уровень антител к Тамм-Хорсфалл протеину с целью раннего выявления поражения почек.

2. Определение уровня антител к Тамм-Хорсфалл протеину целесообразно использовать в клинической практике для скрининга компенсации сахарного диабета.

3. Рекомендуется исследовать уровень антител к поверхностным и секретируемым антигенам кандид для дифференциальной диагностики инвазивного кандидоза и кандидоносительства и использовать данный тест в качестве контроля эффективности антифунгальной терапии.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. A.B. Ружанская, O.E. Миленина, Э.Г. Кравцов, М.В. Далин, Н.И. Габриэлян. Методические подходы к определению Tamm-Horsfall протеина.// Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.-2005.-Т. 140.- № 9. - С. 316-319.

2. ОЕ. Миленина, Э.Г. Кравцов, A.B. Ружанская. Иммунный ответ к Тамм-Хорсфалл протеину при пиелонефрите у детей.//Аллергология и иммунология в педиатрии. - 2006. - № 2-3(9). - С. 59 - 60.

3. ОЕ. Миленина, Э.Г. Кравцов, Л.Г. Кузьменко, М.В. Далин, В.В. Смирнов. Значение антител к Ташт-Хорсфалл протеину у детей, страдающих сахарным диабетом 1 типа.// Иммунопатология, аллергология, инфектология. - 2006. - № 3, - С. 43 -45.

4. O.E. Миленина, Э.Г. Кравцов, Л.Г. Кузьменко, М.В. Далин, И.С. Мавричева, Е.Е. 1 Петряйкина, JI.B. Матыцин. Особенности иммунного ответа на белковые антигены

Candida albicans (Robin) Berkhout у детей, страдающих сахарным диабетом 1 типа.// Проблемы медицинской микологии. - 2006. - Т. 8. - № 3. - С. 14 - 16.

Миленина Ольга Евгеньвна (Россия)

Тамм-Хорсфалл протеин у детей, страдающих сахарным диабетом 1 типа с сопутст-

Разработана тест-система для определения уровня антител к Тамм-Хорсфалл протеину, поверхностному и секретируемому антигенам Candida albicans. Выявлены перекрёстные реакции между Тамм-Хорсфалл протеином и секретируемыми антигенами ми-целиальной формы Candida albicans.

При серологическом обследовании детей с сахарным диабетом 1 типа отмечалось значительное повышение уровня антител к Тамм-Хорсфалл протеину, средний титр антител к Тамм-Хорсфалл протеину был существенно выше, чем у здоровых (р < 0,001), при этом его значение приближалось к показателю среднего титра у больных пиелонефритом, у которых данный показатель являлся максимальным. После назначения таким детям инсулина наблюдалась отчётливая тенденция (t = 1,7) к уменьшению количества серопозитивных детей.

У детей с сахарным диабетом 1 типа отмечалось повышение титра антител, как к поверхностному, так и к секретируемому антигенам Candida albicans. В группе сравнения, представленной детьми с переломами конечностей без проявлений кандидозной инфекции, выраженный ответ наблюдался только на поверхностные антигены гриба, как следствие транслокации кишечной микрофлоры на фоне травматического повреждения.

Tamm-Horsfall protein in children with diabetes of type 1 and concomitant candidosis

There elaborated the test-system for detection level of antibodies to Tamm-Horsfall protein, superficial and secretory antigens of Candida albicans. There found the cross reactions between Tamm-Horsfall protein and secretory antigens of cord-forming Candida albicans.

The substantial increase in antibodies level to Tamm-Horsfall protein was analyzed in sera from children with diabetes of type 1, medium antibody titer to Tamm-Horsfall protein was significantly higher, than in healthy children (p < 0,001), at the same time its value approximated to the index of medium antibody titer in pyelonephritis patients, whose index was a maximum. After insulinotherapy there was the evident tendency (t =1,7) to descending of seropositive children.

The children with diabetes of type 1 expressed the increase of antibodies titer to superficial antigen of Candida albicans as well as secretory ones. In the test group of children with fractures of extremities without manifestations of candidosis we marked the evident reactions only to superficial antigens of fungus, as a result of translocation of gut organisms in case of traumatic injury.

вующей кандидозной инфекцией

Milenina Olga Evgenievna (Russia)

Подписано в печать 15.02.2007. Формат 60x90/16. Бумага офсетная. Печать офсетная. Уч.-изд. л. 1,0. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ 12 2 Отпечатано в службе множительной техники ГУ РОНЦ РАМН им. Н. Н. Блохина РАМН 115478, Москва, Каширское ш., 24

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Миленина, Ольга Евгеньевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.„.

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

М. Общая характеристикаТамч-Хорефалл протеина.

12. Структура Тачч-Хорсфадя протеина.„„„„.„.„„. ,3, Способы идентификации и выделения Там м■Xорсфолл приша.

1.4. Роль Тамм-Xорсфалл протеина в развитии восходяшсй уроннфскцни N

1.5. Гкрекр£сп1ые реакции между Томм-Хорсфалл протеином и бактериальными ли шгсшши. ,„. „„, ,.,.„„„„

6, Бнологичсеизя роль Тачм-Хорсфадя протснка.

I 7, Исследование Тамм-Хорсфолл протеина на МИШШЫХ моделях

•с значение Гамм-Хорсфилл протеина с Тамм-Хорсфалд протеина а норме и при

I в,2. Аитнте.топродукиня к Тамм'Хорсфаял протеину

I 8.3. Возрастная зависимость шггитслообраюваннл к Тамм-Хорсфолл про

I .К,J Антителонродукиил к Томм-Хорефилл протеину при патологических состояниях почек.

1.9. Иммуностимулирующая активность Тамм-Хорсфолл протеина.

140. Поражение почек про сахарном диабете I типа.„.„.,,.,

1,11. Candida albicans как у ело вно- наготе и ны ft ыикрооргаинм.

I 12. Сахарный диабет как фактор риска ратвитня каилидочной инфекции.?

I 13. Феномен транслокации н его место в патогенезе кандидатов инфекции.

1.14. Антигены Candida albicans.,„,„.„.„.,,.

I 15. Методы вы деления поверхностных антигенов Candida albicans бел ко

L16. Проблемы диагностики каиднловд на С4ЦКНЙ1Н0И этапе.

ГЛАВА It, МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Объект исследования

2,1,1 Обшая характеристика иабполшта бвтшх.«*«.

2.1 .2. Характеристика бальных сшрнш диабетом 1 типа

2.13. Характеристика детей групп сравнении.—

2.1.4. Экспериментальные животные.+,.„

2.2, Материалы

22.1. Реактивы .-. 2,2,2 Характеристика используемого в работе шта ммаС albicam.

2 24. Оборудование.

2 X Методы

2.3.1. ПолучениеТвмм'Хорефаил протеина и-» мочи.„,„„,«.+„„^,.

2.3.2. Получение иммунной сыворотки на Там м- X орсфалл протеин .

2-3.3. Получение эритроцкгврного диагноста кума иа Тамм-ХорсфйЯМ протеки .—.

2.3.4. Культивирование С* albicans.,.

2-3.5. Изучение морфологических и культуршгышх спйеп С- albican*

2.3.6. Получение антигенов С a/iicaiw. SO

2-3.7. Получение иммунных сывороток на антигены С albicam.SI

2.3.8, Получение диалюстикумов иа ОС КОМ UIHRHOIС alhii-aru.„

2.3.9, Реакция пассивной гемагтлютннации .—™.

2.3.10, Реакция торможения пассивной гемагтлютишшин . ,,.,,

2.3.11, Реакция иейтраличации антител (РНАТ),.

2.3.12, Реакция преципитации в геяе.,. ,■.,.■„■.,—

2.3.13, Имчуиотлектрофорез.

23.I4 Статистическая обработка полученных данных.

Глава ш РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Клиническое обомлевшие детей, страдающих сахарным диабетам I типа на этапе отбора.„Д

3.2. Клиническое обследование детей групп сравнения на этапе отбора

3.3. Изучение специфичности си вороток ua Тлмм -Xорсфодл протеин.-.

3.4. Исследование диагностической тест-системы для определения Тамы-Хорсфаил протеина,

3.5. Изучение специфичности сывороток на поверхностный н секретируемый антигены С albicans , .■.,, tww„.

3.6. Исследование активности тсст-снстемы на основе порсрчюегного и сек-ретнруемОго антигенов С.ЫЫеат.

3.7. Исследование перекрестных реакций между ТХП к антигенами СлШеош.

3.8. И тучен и е югжтелопродукцмк к Тамм-Хорсфплл протсмиу у деий п исследуемых группах,.W

3.9. Изучение иммунного ответа на белковые ипигенн С albicans у детей, страдающих сахарным диабетом I типа.™.,.,.„

3.10. Изучение корреляции между титрами антител к Тамм-Хорсфодл протеину и уровнем антител к белковым антигенам Calbkam в исследуемых группах. .,

Введение Диссертация по биологии, на тему "Тамм-Хорсфалл протеин у детей, страдающих сахарным диабетом 1-го типа с сопутствующей кандидозной инфекцией"

В настоящее время по нссх странах мира, особенно в промЫШЛСННО развитых, наблюдается повышение «болеваемоети сахарным диабетом. Большая социальная значимость сахарного дпбш состоит п том, что он приводит к ранней ннвалидизацин н летальности. которая обусловлена наличием ПОЗДНИХ сосудистых ослочакнмЙ диабета: мнкроаипюпатий (ретинопатия н нсфропатня}. макрочигнопвтнй (инфаркт миокарда, инсульт, гангрснл нижних конечностей), нсЛропатнй Среда поздних осложнений сахарного диабета первое место по частоте занимают сосудистые аигиопатми. в частности. диабетическая нефропатня Современные методы исследования тпю-ляют диагностировать диабетическую нефропаткю только на стадии мнхро-мьбуминурян,

Однако, но nceft видимости, мнкроолЫЗуми»*урия не относится к числу самых ранних симптомоп. свидетельствующих о поражения почек. Основанием для такого предположения является указание на еущестяомте у больных сахарным диабетом I иперфилътраиип и I ннерперфузин, предшествующих микр0*лы5умнкурии. которые, как инистно. сопровождаются повыпк-нием внутриклубочкового давления (Дедов И И , Шестахова М. В.ч 2000). Внутриклубочковая гнпертенщя способна привести к поражению эпителия клубочков, а а последующем, и эпителия канальцев В настоящее время поражение ПОЧКИ на стадии пшерфкльтропии может документироваться данными, по лучимыми только при биопсии почки, Поэтому, крайне актуальным является создание малоинвазнвных методов и тест-систем ранней диагностики поражения почек при еахпр«ом диабете на доклинической СПДОИ мбвле-вакия.

В этом плане внимание привлекает белок Тамма-Хорсфалла, представляющий собой гликопротенм. сюггешрующиЯог эпителиальными клетками проксимальных канатьпев восходящей петли Гснле н являющийся специфическим почечным антигеном 'Этот бедок в количестве SO - 100 мг присутствует в моче моровых людей н в крови тли лнц имеется фоновый уровень специфических антител (Млйданник В Г г Дранннк Г. Н„ IWOi Превышение концентрации антител фонового уровня к указанному протеину может ciui.ie-ic'ibcriiaiiiiii. о вовлечении в патологический процесс почечных канадьисв

Белок Том м-п ■ Xарефаллп у больных сахарным диабетом. особенно у бОйЫШХ сахарныч[ диабетом I tuna, привлекает шеммлше и и спиui с имеющимся предположением возможности существования перекрестных реакций этого протеина с антигенами CumltJa albicans, поскольку указанный контингент пациентов склонен к развитию кандндозной инфекции. Возможность развитии перекрёстных реакций Тамм-Хорсфалл протеина с антигенами С albicans существует в святи с наличием общности структуры этого белка с чаинопротсииом клеточной стенки С. aJbicaru.

Хотя физиологическая роль Тамм-Хорсфалл протеина до конца не ясна, наличие в его составе высокомаииозных остатков способствует связыванию Там и-Хорефал л протеина с пншши первого nura Etcbcrichia coli, чем он препятствует распространению (««ходящей уроннфскинн (Рак J. et al., 2001 Это обстоятельство, а тпкже существование перекрёстных реакций между О антигеном Е coti и Томм-Хорефадл протеином представляет Hirrepec для исследования Тамм-Хорсфалл протеина у больных острым и хроническим пиелонефритом.

Цель исследовании: выяснение ролн Тамм-Хорсфодл протеина у детей, страдающих сахарным диабетом 1 тина с сопутствующей кандндозной инфекцией.

Та,win исследования:

I. Разработать диагностические тест-системы для выявления антител к Тамм-Хорсфашт протеину н к антитенам С albicanт. В связи с тем, что С albican* при переходе в KHHiKHIjn форму изменяет антигенную структуру, провести поиск антигенов для конструирования тест-систем, позволяющих детектировать аитнтсла, отражающие агрессивность популяции грибов

2. Провести сопоставление общности антигенной структуры Гамм-Хорсфалл протеина и кашшдозных антигенов

3. Изучить специфичность разработанных тест-систем и определить диагностический титр антител.

4. Провести сравнительное изучение tunieta антител к Тамм-Хорсфалл протеину, поверхностным и сеКрстнруемым антигенам С albicans у детей, больных сахарным диабетом 1 тина при манифестации канлидон н у пациенток групп сравнения.

Научна! ысшнтна

Создана диагностическая тест-снсгема для определения Тамм-Хорсфадд протеина и антител к этому белку, по специфичности превышающая зарубежные аналоги

Предложен комплекс диагностику мовг позволяющий контролировать изменение популяции грибов рода Candida и диилмнке чнкотмческой инфекции.

Biccptiwc установлено, что у детей при сахарном диабете 1 типа возрастает уровень антител к почечноспеинфичеекому антигену - Тамм-Хорсфалл протеину и определен уровень антител, который следует рассматривать как маркер доклинической Сталин дзйбетической 1кфропатин,

Hwirплена общность антигенов С albicans и Тамм-Хорсфалл протеина Исследование иммунного ответа на антигены агрессин С alhicuni coi-дабт воыожность дифференциации переход* от СОСТОЯНИИ инапврюгпюго кандидата д его манифесту» форму Практическая значимость

Разработанная нами тест-снстсма для определения уровня антител к Тамм-Хорсфалл протеину может бьггь нспальювакв для ранней диагностики поражении почек у детей лрн сахарной диабете 1 типа, 1 1овыакннс Tirrpu антител к Тамм-Хорсфалл протеину у детей с пиелонефритом следует считать 1К№*мтедем поражения каиллыквого аппарата почек, что может ис-иолькиштка при дифференциальной диагностике пиелита и пиелонефрита.

Диагностик) мы иа белковые антигены грибов могут быть псионы при мониторинге та состоянием популяции грибов-комменсалов при различных заболеваниях и патологических состояниях

Основные пыожснии, выносимые на и.у

I. У детей при caxapwoM диабете I тип» отмечается выраженный иммунные ответ на секвестрированный почечный антиген Тамм-Хорсфэлл протеин, титр антител к которому снижаете! после начти лечения инсулином. П(И« дпгкпмюпя заболевания Гдалее 1 лет уровень антител к ягому белку ином*, достигает высоких значений, 2 Несмотря на то. что в антигенной структуре Тамм-Хорсфолл протеина выявлены общие детерминанты с сскретируемыми белковыми антигенами камдид, иммунный ответ на почечный и грибковые антигены не ассоциирован У Манифестная форма клидшотноИ инфекции у детей при сахарном диабете I типа сопровождается нарастанием титров антител к но, иермижгиым II «крсгнрусмыч шиш спим С albicans. 4 Транслохация микробной флоры при травме сопровождайся нарастанием титров антител к поверхностным белкоаым антигенам С. albicans, но не к еекретнруемым Шпигелем, как тго имеет место при манифестной микотической инфекинн,

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Миленина, Ольга Евгеньевна

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕИДАЦИ И

1- У болиш сахарным диабетом I тина цвмсооброк исследовать уровень антител к Тамм-Хорсфалл протеину с целью раннего выявления поражения почек.

2 Определение уровня антител к Тамм-Хорсфалл протеину целесообразно использовать в клинической практике для скрининга компенсации сахарного диабета,

3 Рекомендуется ikследовать уровень антител к поверхностным и секре-тнрусмым антигенам кандид для дифференциальной диагностики ии-вазинного канднлои н клндндоноентельства и использовать данный тест в качестве ксчггроля эффективности мтмфунгальиoft терапии.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Миленина, Ольга Евгеньевна, Москва

1.■ Бурова С.А , Воинова Г,В. Клинические разновидности и лечение клизм лом // Вести дерматол., 1997; 4:24-28.

2. Гельфанд Б.Р., Гельфанд Е Е Грибковая инфекция в абдоминальной хирургии. С-131-155 В кн Л»гтиблктериадЫ1ая героиня абдоминальной хирургической инфекции под ред В.С.Савельева, Б.Р.Гельфанда, Москва, 2003.

3. Гликонротеииы. Под ред. Готтшалка А. том 2, Москва 1069, Им. Мир., 300 с,

4. J- Ледов И, И , Шеста ком М. В. Диабетическая нефропатня. Москва. 2000,139с.

5. Долгушин ИИ. Эбсрт ЛЯ. Лившиц Р.И. Иммунология травмы Свердловск. Изд-во Урод, ун-та, 1989,188 с,6, Елинст Н-П. Химическая микробиология. М: Высшая школа, 19S9.C. 349-365.

6. L Никзттенко В.И, Бухарин О.В » Никнтенко И.К. Явлскмс естественного защитного бактериального механизма при повреждениях. Заявка на открытие № ОТ 11353, ВКИИГПЭ, 1986.

7. Сергее» А, Ю , Сергеев Ю В. Кандидот Природа инфекций. мехаиит-мы агрессин и зашиты, .лабораторная диагностика, клиника и лечение. М.: "Триада-Х", 2001. - 472с.

8. Смирнов В.В е еоавт О некоторых механизмах воингкиовения бее-симптомиоЛ бактериемии, Микробиолог жури 1988. т. 50. Nt 5, с. 5659.

9. Шабанкяа II В., Фролова Е. В. Иммунитет при орофлрингеадьном кандндо* (обзор>- Проблемы медншшехоб микологии. Санкт-Петербург, 2005. там 7, № 4, с. 27 32.

10. Шевяков М А, Диагностика и лечение канлилола кишечника. Терапевтический архив. 2003, № И, с 77-79.

11. Шевяков М А. Диагностика и лечение кандндоза пищевода Фармягека. 2005, № (102), с. 60-63.

12. Шссгакова М. Ф ЛТод ред. Дедова И. И, Диабетическая нефропатия' механизм и развития, клиника, диагностика, лечение. М, 2003.73с.

13. Эберт Л,Я с соалт, Острая эндогенна* бактериемия как способ повышения релистснтности организма к действию чрезвычайных ряздрожи-тел ей в условиях стресс-реякшш, Факторы ест, иммунитета при рай фнэ. и пат. состояниях. Челябинск, 1979. вып 6, с. 16-19.

14. Adawi У. Molnt О , Jeppsson В. Inhibition of nitric oxide production and the effects оГ arginine and Lactobacillus administration in an асше liver injury model. Ann. Surg. 1998, Dec. 228(6), 748-755

15. Akiyama A, Stein P., Houshtar A. Parsons L Urothelial cytoprotective ac-liviiy of Tamm-Horsbll protein isolated from the unne of healthy subjects and patient» with interstitial cystilit, lot J. of urology. 2000.7,176- 183.

16. Alexander J. W. Boyce S. Т., Babcockc G. F. Giaiurtli L„ Pcct M D. Dunn D. L, Pyles Т., Childress Ch. P., Ash S. K. J. Ann. Surg, 1990., Oct 212(4); 49«,-512.

17. Allen F. Usher C- Morphology of the ascending thick limb of Hente Kid' My. In* . 976.9.8 22.

18. Andriole V. T. The role ofTamnv-Horsfall protein in the pathogenesis of reflux nephropathy and chronic pyelonephritis- )r Bks(, Med-, 1985, v. 58. p 91 100,

19. Barki M„ Koltin Y„ Wetter M„ and Rosenberg M. A Candida albicans surface antigen mediating adhesion and autoaggregation in Saceharomyces cer-cvisiae. J. Infection and Immunity. Oct 1994, Vol. 62, № 10f p 4107 -4111.

20. Вагшгеп В. Bikandi J., San Milla R , Moraines M l) , Rergule* P., Quin-dor* G. and poniom J. Variability in expression of antigen* responsible for serotype specifily in Candida albicans. Microbiology 1995, 141: 1535 -1543.

21. Bates J. M., RafTi H.M., Prasadan K. et al Tamra-Horsfall protein knockout mice are more prone to urinary tract infection: rapid communication. Kidney2004.65:791-797.95.

22. Berg R.D Bacterial translocation from the intestines Jikkcn Dobiltsu, 1985, Jan. 34( 1), 1-16.

23. Berg Rll, Gorflngton AW. Translocation of certain indigenous bacteria from ibe gastrointestinal tract to the mesenteric lymph nodes and other organs in a gnotobiotic mouse model. Infect, tmmim, 1979, Feb,, 23(2}, 403-II,

24. Beyer A, J. Han Т. C„ Shibabi Z,. Robins V., Hoycr J. Munitions tn the uromodulin gene decrease urinary excretion of Tamnv-Horsfall protein. Kidney tm„ 20IM, v, 66,974 977.

25. Bichler K, H„ Haupt H„ Uhlemaitn G„ Schwick M.G, Human wromucoid: I.Quantitative immunoassay, Urol. Res., 1973,1r 50- 59.

26. Bishop С. T , BEani. F, Gardner P E. The «il wail polysaccharides of Candida albicans: gluean, mannan and chain. Can J. Chcm, I960, 38; 860 881,

27. Bohaiuion NIV Treatment of vulvovaginal candidiasis in patterns with diabetes, Diabetes Care. 1 «в; 21 г 45 Ы$б.

28. Burg M. B. Green N. Function of Henlc's loop. Am. J of Physiology, 1973. 33-1 Carvalho M Rote of Tamttt-HoreEMI protein and urotnodulin in calcium oxalate crystallization. Braz, J Med. Res., 2002,35(10), 1165 1172.

29. Casanova M, Gil M. L., Cardcnoso L., Martinez J. P. and Scntandreu R. Identification of wall-specific antigens synthesized during genu lube formation by Candida albicans. Infect. Immun. 1989.57:262-271.

30. Cavallone D,, Malagollni N. Giovanni-Maria F . Serafint-Cesst F Mechanism of release of urinary Tamrn-Morsfall protein from the kidney GPI-anchored counterpart. Biochemical and biophysical research communications, 2001. 280, 110 1 M.

31. Cavallone D., Malagolint N. Monti A., Wu X. R., Scrafini-Cessi F Variation of high nunnose chains of Tamm-Horsfall glycoprotein confers duffernsial binding to type I-fimbriated E, coli J, Biol, Chem,. 2004. Jan 2.V.279.1.216 222.

32. Cavallone D., Malagolint N. Seratlni-Ccssi F. Binding of human neutrophils to cell-surface anchored Tamm-Hor*faIl glycoprotein in tubulamtersliual nephritis, Kidney Int., I9W. 5S(S). 1787-1789,

33. Chick S, Hotter M J„ MacKenne R, Asscher A. W Modified method for studying bacterial adhesion to isolated uroepithelial cells and uromweoid. Inf. And Immun., 1981, Oct., 256 261,

34. Cohen A. H., Border W. A , Rajfer J., Dumkc A. Identification and morphologic pattern of injury. Lab. Invest., 1984,50,5,519.

35. Сок О. Т., Seshan K. Ft-, Pope L, M , Yancey R. J. Morphological aspects of gastrointestinal tract invasion by Candida albicans in the infant mouse. J, Med. Vet. Mycol. 1988; 26: 173 185.

36. Dalian К. Devuyst 0-. Smaers M et aj. A cluster of mutations in the UMOD gene causes familial juvenile hyperuricemy nephropathy with abnormal expression of uromodulin, J, Am- Soc. Nephrol- 2003. 14: 2883 -2893.

37. Dshan К, Fuehshubcr A. Adamis S ct al. Familial juvenile hypcruriccmic nephropathy and autosomal dominant medullary cystic kidney disease type 2: two facets of the same disease? J, Am- Soc. Nephrol. 2001; 12: 2348 -2357.

38. Dawncy A., Thomley C .CaticI W. R An improved radioimmunoassay for urinary Tamm-Horsfall glycoprotein. Biochcm. J. 1982, v.206, p. 461.

39. Dawncy A., McLean C. Cattel W. R. The development of a radioimmunoassay for Tamm-Horsfall glycoprotein in serum. Bioehem. J. 1980. v. 185, p, 679-687

40. Dcitch E.A. Bacterial translocation: the influence of dietary variables. Gut., 1994 Зап., 35(1 Suppl), 23-27.

41. Deitch E.A., Bndges RAt Effect of stress and trauma on bacterial translocation from the gut J, Surg, Res, 1987, May, 42(5}, 536-542.

42. Demclriadcs D. ct al. Bactcrictdal/permcability-incrcasing protein (тВР121) in patients with hemorrhage due to trauma: results of a mulUcenter phase II clinical trial. rBPI2I. Acute Hemorrhagic Trauma Study Group. J. Trauma. 1999. Apr. 46(4), 667-676.

43. Devuyst O., Dahan K„ Pirson Y. Tamm-Horsfall protein or uromodulm: new ideas about an old molecule. Nephrology Dialysis Transplantation, 2005, 20 (7): 1290 1294.

44. Dulawtt J, Jann К, Thomscn M Tamm-Horsfall protein interferes with bacterial adherence to human kidney cells. Eur J. of Clin. Invests 1988, IS, 87-91.

45. Did awe J-, Rambausek M„ Jann K„ Notobamiprodjo M. Ritz E. Abnormal rndioforosemidc binding by Tumm-Horsfitll glycoprotein of diabetic patients. Diabetologia, 1985, v. 2®, 827 830.

46. Edmiston C.E. Jr. Condon R E. Bacterial translocation. Surg. Gynecol Obstct. 1991. Jul., 173(1 >.73-83

47. Ella M de Leon. Scon J Jacober, Jack D Sobd, and Betsy Foxman, Prevalence and risk factors for vaginal Candida colonization in women with type I and type2diabetes. BMC Infect Dts. 2002;2:1.

48. Fasth., Ahlsiedi S., Hanson L, Jann В., Jann Kaijser В., Oiling S. Crossreaction between die Tamm-Horsfall glycoprotein and Escherichia coli. Int. Archs- Allergy appl. Immunology, 1980,63:303 II.

49. Fasth A., Bjure J., Hellstron M , Jacobsson В. JodaJ (J. Autoantibodies to Tamm-Horsfall glycoprotein in children with renal damage associated with urinary tract infections. Acta Paediur. Scand-, 1980,09,709 71S.

50. Fasth A,, Hanson L. A,. Jodal U, Peterson M. D. Autoantibodies to Tamm-Horsfall glycoprotein associated with urinary tract infections in girls. The J. of Pediatrics, 1979. v. 95.1.54 60.

51. Fasdi A. Hoyer J-R-, Seiler M. W. Renal tubular immune complex fontta-lion in mice immunized with Tamm-Horsfall protein. Am, J, pethoL 1986, 125; 555 562.

52. Fasth A. Jodal U. Progr. Allergy, 1983,33.247 258.

53. Fidel P- I, Jr. Instinct protective hoii defence* against oral and vaginal candidiasis J Med Mycol,, 2002, Vol. 40, p. 359 375

54. Fischer JF, Chew WH, Shadomy S et al Urinary trad infections due to Candida albicans Rev Infect Dis 1982; 4; 1107-18.

55. Fletcher A. P. Neubergcr A. Tamm-Horsfall urinary glycoprotein. The sub-unit structure. Biochent. J„ 1970,120.420-425

56. Fowler у е. Милаша М., Lou J, ЬТ. Interaction ofTamiD-i lorafall protein with transitional cell» and transitional epithelium The J. of Urology, 138, Aug» 446.

57. Fu X.B. et ai. Multiple organ injuries and failures caused by shock and «perfusion after gunshot wounds, J, Trauma, 19%, Mar. 40(3 Suppl). 135139,

58. Geerlings S. E., Mciland R , Emiel C. ci al. Adherence of Type 1-fimbriated Escherichia coli to uroeptthelial cells. Diab Care, 2002,25,1405 1409

59. Grant A. M S. Ncuberger А. ТЪе development of radioimmunoassay for the measurement of urinary Tamm-Horsfall glycoprotein in die presence of sodium dodeeyl sulfate. Clin. Sci, 1973. v.p, 163 179

60. Goilglioiw D„ Ceridlo A,, Paolisso G. Oxidative stress and diabctk vascular complications, Diabetes Care, 1996, Vol. 19, p. 257 -267.

61. Guze L. В., Hariey L. D. Fungus infections of the urinary tract Vale J. Biol Med, 1957; 30:292 305.

62. Ha H. Kim K- Role of oxidative stress in the development of diabetic nepit-ropathy, Kidney Int., 1995., Vol.48 (suppl. 51), p. sl«- s 21.

63. Han V., Cutler JE. Antibody response dui protects against disseminatedcandidiasis. Infect. Immun. 1995, Jul 63:71714 -9.

64. Hanson L A, el al Immunological aspects of pj elonephnhs Contrib, Nephrol., 1979.16.16-21.

65. Hanson L A, Fasth A , Jodol U. Auto-antibodies to Tamm-HorsfaH protein, a tool for diagnosing (be level of urinary1 infections. Lancet., 1976, 1: 226 228,

66. Hcam V, M-, Cole G. T. and Suzuki S. In: Structure of Antigens (Van Re-gemmortel, M. H. V,. ed ), CRC Press, Boca Raton, 1993.211 260.

67. Hodson C. J. Mailing Т. M , McMananun P. j. Brit. J. Radml. 1975. 13. I -26

68. Holgretn J, Hanson L A„ Holm S, П. and Kaijser B. Antigenic relationship and certain E. coli strains. Int. Arch. Allergy Appl. Immunol., 1971.41: 463

69. Hoycr J. R. TubulointcrsUtial immune complex nephritis in rat* immunized with Tamm-Horsfall protein. Kidney Inl, 1980,284 292.

70. Hoyer ). ft,, Resnick J. Ontogeny of Tarnm-Horsfall urinary glycoprotein Lab, Invest, 1974, v. 30. №6,757.

71. Hoyer J R., Sciler M. W. Pathophysiology of Tamm-Horafall protein Kidney Int., 1979, 16,279 289,

72. Hoyer J. ft., Si*»Ofl S, P, Vernier R. L, Tamm-Horsfall glycoprotein. Ultra-stnKtural immunoperoxidase localization in rat kidney. Lab. Investigation., 1979, v. 41.2.

73. Jelakovic B. Bcnkovie J , Cikcc N. Kuzmaoi D Antibodies to Tamm-Horsfall protein in endcmic nephropathy. Nephrol. Dial. Tnuaplant., 1999, 14: 2645-2649

74. Jones JM Quantitation of antibody against eel I wall mannan and major cytoplasmic antigen of Candida in rabbits,, mice and humans. Infect. Immun , 1980, 50.78-89.

75. Keutcl II, J,, King J, S„ Boycc W. H. Further studies of uromueoid in normal and stone urine, LFrotogia Int. 1964.17.324 341,

76. Keutel H. J. Localisation of uromucoid in human kidneys and In sections of human kidney stone with fluorescein antibody technique. J. Histochem. Cy-tocbem . 1965, v, 13, p, (55.

77. Kjellsson В., Soderstorm T, An EI.ISA-method few quantification of Tamm-Horslalf protein using monoclonal antibodies.

78. Klingspor I Eberbard TH. Stintzing G-. Tollcmar J. Antibody response to Candida and its use in clinical practice. Mycoses. 1994 Jun-Jtil 37: S 6 199 -204.

79. Kobayashi H., Matsuda К , Ikeda Т., Suzuki M., Takahashi S„ Shibata N. Suzuki S. Structures of cell wall mannans of pathogenic Candida tropkalis IFO 0199 and IFO 1647 yeast strains. Infect. Immun. 1994, Feb. 62: 2 615 -22,

80. Krause W . Matheis H, Wulf K. Fungaemia and funguria after oral administration of Candida albicans. Lnncrt , 1969,22: 598 599.

81. KLurajama 1 J„ Kobayashi K., Fukuota S. Lab. Invest., 1990,5,54.

82. Lemaire L.C- et al Thoracic dud in patients with multiple organ failure, no major route of bacterial translocation, Ann. Surg. 1999, Jan , 229(1), 128136.

83. Lewis R-A. Schwarz R. II, Shenk E. A. Tamm-Horsfall mucoprotcin. On-togenie development. Lab. Invest, 1972, v. 26, p. 728.

84. Lose G,, Srensen K., Frandscn B , Nathan E Excretion of urinary Tamm-Hcirsfall glycoprotein in girls with recurrent urinary tract infection, Urol. Res,. 1987, v. 15, p. 249.

85. Lowiy О. H-, Rosehrough N. I., Farr A. L, Randall R.J. Protein measurement with the Folin phenol reagent J, Biol, Chcm,, 1951,193( I). 265 275

86. Oft, Mamous M R. et al Studies of the route, magnitude, and tinie course of bacterial translocation in a model of systemic inflammation, Arch. Surg 1991. Jan., 126(1), 33-37.

87. Martinez JP., Gil ML., Lopez-Ribot M., Chaffin WL. Serologic response to ceil wall nunnoprotcins and proteins of Candida albicans. Clin Microbiol Rev., 1998 Jan И I 121-41

88. Matthews R C„ Bumic J, P-, Kowai D,, Rowland T and Walton F Autoantibody to hsp90 can mediate protection against sysicmic candidosis 1 mmunologj'i 1991,74; 20 24.

89. Maxfield M,, Stefanye О The amino acid composition of normal human urinary miKoprotein J, of biological chemistry', 1962, v. 8,237

90. Muzuchi N. Pecarovich R-. Ross N„ Rodriquez i , Sanguincui С- M, Tamm-Horsfall unnary glycoprotein Quantitation by radial immunodiffusion: normal patterns. J. Lab, Clin. Med, 1974, v. 84. p. 774 776.

91. McQueen E. G„ Engel G. B. Factors determining the aggregation of urinary mucopmtcin. J. Clin Path., 1966, v. 19, p. 392 396.

92. Мают P- D., Debrie A-S. Tissier J-P , Locht C, Pelhe К . Raze D. Interaction of human Tamm-Horsfall glycoprotein with Bordetella pertussis tosin' Microbiology, 2002,148, p. 1193 1201.

93. Mogen&en С. E. Chrislenscn C , Vininghus E. The stages in diabctic renal dbeue with emphasis on the «age of Incipient diabetic nephropathy. Diabetes, 1983, Vol J2, p. 64 74.

94. Muchmore Л. V., Decker J. M. Uromodulin: a unique 85-kilodalton immunosuppressive glycoprotein isolated from urine of pregnant women. Sienec. 1985; 229: 479 481.

95. Mycrowitz RL, Layman H., Petursson S„ Vee RB IJia^fnostic value of Candida precipitins determined by counterimmunoclectrophoresis in patients with acute leukemia: a prospective study. Am J Clin. Pathol, 1979; 72 (6): 963-7,

96. Napi Г Tubulointerstitial nephritis by Tamm-Horafoll glycoprotein or egg white component. Nephron., 1987,47; 134 140.

97. Olliez-Hanmiiim M , Pouget-Abadie C, Boullie j . Harunaiui L Variation of urinary Tamm-Worsfall glycoprotein in human dining 'he first thirty years of lift, Nephron, 1984, v 38. p. 163.125, Orskov U Ferenez A., Orskov F Lancet, 1980,1.887

98. Ostcrby R. Lessons from kidney biopsies. Diab. Metab. Raw,, 1996, Vol. 12. p 151 174.

99. РЛ J.r Pu Y , Zhang Z. Т., Hasty D. L., Wu X- ft- Tamm-Horsfalt protein binds Ю type I fimbriated Escherichia coli and prevents E- coli from binding to uroplakin la and lb receptors Biol. Chcm. 2001 Mar. 30:276 (13): 9924 -30,

100. Parkkincn J. Finne j. Isolation and structural characterization of five major sialyoligosaccharides and a sialyglycopeptide from normal human urine. Eur, J, Biodtem,. 1983, v, 136 (8), p. 355 366,

101. Paifckinen J,. Viikola R,. Kefhonen T, Identification of factors in human urine that inhibit the binding of E, coli adhesions. Inf. and Imm, 1988. Oct. 2623 2630.

102. Pennica D., Kohr W. S.t Kuang W. S et al. Identification of human uromodulin as the Tamnt-Horsfall urinary glycoprotein, Sience, 1987. v. 236. p. 83 88.

103. Poulain D. Tronchin G.4 Vcmcs A., Popeye r and BigueL Antigenic variations of Candida albicans in vivo and in vitro relationship between P antigens and serotypes. Sabouraudia 1983.21:99- 112.

104. Prescott R.J. Harris M. Banerjcc S.S. Fungal infections of small aiwi large tntestine.J-clHt-Pa«h-.l 992. Vol.45. P.806-8II,

105. Rambausek M„ Kahm IW, Jomt K-. SJotohamiprodjo M-, Ritz E, Abnormal glycolisation of Tamm-Horsfall piolein (THP) in diabetes. Kidney Int. 1984. v. 25. 1,237.

106. Rampoldi U Caridi G-. Santon D- Г:1 al. Alfclism of MCKD. FJHN and OCKD caused by impairment of uromodulin export dynamics. Hum. Mol Genet., 2003,12:3369 3384,

107. Ravfield EJ, Ault Ml, Keusch GT, Brothers MJ, Nechemias C. Smith H Infection and diabetes: the case for glucose control, Am J Med 1982; 72: 439450.

108. Redmond Shoo J. Kelly CJ. el al, Protein-calorie malnutrition impairs host defense against Candida alhicans.J. Surg. Res.l 991 .VoJ.50, R552-559.

109. Re in hart H. Obedenau N. Walz D. A new EL1SA method for the rapid quantitation of Tamm-Honfall protein in urine. AJCP, aug., 1989.

110. Remuzzi G„ Fitzgerald G,, Potrono C. Thromboxane synthesis and action within the kidney. Kidney. Int., 1992, Vol. 41, p 1483 1493.

111. Sou/a L ct al. Bacterial translocation in acute pancreatitis Experimental study in rats, Rev Hosp Clin, Fitc. Med. San Paulo. 1996. lul.-Aug., 51(4), 116-120.

112. Schcttk E. A., Schwartz R. H,, Lewis R, д, Tamm-Hor»fall mucoprotein. Localization in the kidney. Lab- Investigation. 1971. v. 25,1,92.

113. Stevenson F K, The viscosity of Tamm-Horsfall mucoprotein Bioehem. BiojAys. Acta. 1968,160,296 298.

114. Stevenson F K, Kent P W Subunils of Tamm-llorsfall glycoprotein Bioehem. J,. 1970,116: 791 796

115. Su S. J., Chang K. L. Lin T. M„ Huang Y. H . Yeh Т. M. Uromodulin and Tamm-Horsfall protein induce human mo<tocytc5 to secrete INF and express tissue factor. 1. Immunol. 1997,158: 3449 3456.

116. Suzuki M , Fukasumu Y. Immunochemical characterization of Candida albicans cell wall artligens: specific determinant of Candida albicans serotype A mannan. Microbiol Immunol., 1982,26: 5 387 402.

117. Г49 Shibata N. fkula K. Imai Т., Saioh V., S'atoh R . Suzuki A„ Kojitrn C. Kobayashi H., Hisamichi K. and Suzuki S. Existence of Branched Side Chams in the Cell Wall mannan of Pathogenic Yeast, Candida albicans. J. Biol. Cbem 1995.270. 1113-И22.

118. Tamm I. HorsfaM J. Characterization and separation of viral hemagglutination present in urine Prac. Soc. Exp. Biol Med., 1950,74; 10S 114.

119. Toroeanlucci A., Bromuro C„ Gormez M. J., Ausicllo С. M., Urbani F. And Cassone A. Identification of a 65-kDa mannoprotetn as a main target of humann cell mediated immune response to Candida albicans У Infect. Dis., 1993, 168:427-435,

120. Von der Anwera P, Denis R. Acta din. Belg. 1985,40,3,179 193. 155 Work J. Andriole V. Т., Yale J. Biol. Med., 1980.53.3. 133 - 148.

121. Weiehart Т., Zlabtnger G. J„ SSemaim M. D. The multiple functions of Tamm-l brslall protein in human hcolth and disease: A mystery clears up. Wien Klin Wochenschr,, 2005.117(9-10)316 322.