Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Свободные и мембраносвязанный мультферментные комплексы цикла Кальвина и регуляция их ферментативных активностей

ВАК РФ 03.00.12, Физиология и биохимия растений

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Бабаджанова, Малика Пулатовна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О

НАДМОЛЕКУЛЯРНОЙ ОРГАНИЗАЦИИ ФЕРМЕНТОВ

11 Уровни структурной организации ферментов.

1.2 Функциональные последствия объединения ферментов в надмолекулярные комплексы.

1.3 Надмолекулярные комплексы ферментов цикла Кальвина.

1.4 Резюме.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2 1 Объекты исследования.

22 Методы исследования.

2.2.1 Реактивы.

2.2.2 Определение количественного содержания белка по методу Лоури.

2.2.3 . Микроопределение белка с биуретовым реактивом.

2.2.4 Определение неорганического фосфора.

2.2.5 Определение активности рибозофосфатизомеразы.

2.2.6 Определение фосфорибулокиназной активности.

2.2.7 Определение карбоксилазной активности рибулозо-1,5-бисфосфаткарбокислазы/оксигеназы радиометрическим методом.

2.2.8 Определение карбоксилазной активности рибулозо-1,5-бисфосфаткарбоксилазы/оксигеназы спектрофотометрическим методом.

2.2.9 Определение оксигеназной активности рибулозо-1,5-бмсфосфаткарбоксилазы/оксигеназы.

2.2.10 Определение активности глицеральдегидфосфатдегидрогеназы

2.2.11 Синтез рибулозо-5-фосфата - субстрата фосфорибулокиназной реакции.".

2.2.12 Выделение и очистка свободного мультиферментного комплекса из листьев хлопчатника.

2.2.13 Выделение и очистка в денатурирующих условиях свободного мультиферментного комплекса из листьев хлопчатника.

2.2.14 Выделение и очистка мембраносвязанного мультиферментного комплекса из листьев хлопчатника.

2.2.15 Определение содержания рибулозо-1,5-бисфосфаткарбоксилазы/оксигеназы методом ракетного иммунофореза.

2.2.16 Определение гомогенности ферментных препаратов и их молекулярной массы.

2.2.17 Фракционирование мембран хлоропластов из листьев картофеля.

2.2.18 Определение количества рибулозо-1.5-бисфосфаткарбокси-лазы/оксигеназы, ассоциированной с мембранами.

2.2.19 Количественное определение содержания хлорофилла.

2.2.20 Определение константы Михаэлиса.

2.2.21 Определение коэффициента Хилла.

2.2.22 Статистическая обработка данных.

ГЛАВА 3. ФЕРМЕНТАТИВНЫЕ АКТИВНОСТИ СВОБОДНЫХ МУЛЬТИФЕРМЕНТНЫХ КОМПЛЕКСОВ ЦИКЛА КАЛЬВИНА В ОНТОГЕНЕЗЕ РАСТЕНИЙ ХЛОПЧАТНИКА

3.1 - Онтогенетические изменения ферментативных активностей свободного мультиферментного комплекса.

3.2 Онтогенетические изменения ферментативных активностей свободного мультиферментного комплекса, выделенного в денатурирующих условиях.—

3.3 Резюме.

ГЛАВА 4. МЕМБРАНОСВЯЗАННАЯ РИБУЛОЗО-1,5-ЯЖ7ФОСФАТКАРБОКСИЛАЗА/ОКСИГЕНАЗА ЛИСТЬЕВ КАРТОФЕЛЯ

4.1 Активность мембраносвязанной рибулозо-1,5-бисфосфаткарбоксилазы/оксигеназы в процессе формирования системы внутренних мембран хлоропластов картофеля.

4.2 Реконструкция in vitro мембраносвязанной рибулозо-1,5-бмсфосфаткарбоксилазы/оксигеназы из мембран и свободной формы фермента. 1 ^

4.3 Содержание и активность свободной и мембраносвязанной риб; 1,5-бисфосфаткарбоксилазы/оксигеназы листьев картофеля в связи с продуктивностью.

4.4 Резюме.

ГЛАВА 5. МЕМБРАНОСВЯЗАННЫЙ МУЛЬТИФЕРМЕНТНЫЙ КОМПЛЕКС ЦИКЛА КАЛЬВИНА ИЗ ЛИСТЬЕВ ХЛОПЧАТНИКА

5.1 Определение гомогенности и молекулярной массы одновременно выделенных мультиферментных комплексов -свободного и мембраносвязанного.

5.2 Сравнительные определения ферментативных активностей свободного и мембраносвязанного мультиферментных комплексов.

5.3 Кинетическое поведение рибулозо-1,5-бисфосфаткарбоксилазы/ оксигеназы в свободном и мембраносвязанном мультиферментных комплексах.

5.4 Резюме.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Свободные и мембраносвязанный мультферментные комплексы цикла Кальвина и регуляция их ферментативных активностей"

Фотосинтез остается одной из приоритетных проблем науки, так как он играет ведущую роль в продукционном процессе растений. При переходе земледелия с экстенсивного типа на интенсивный, требующий глубоких знаний об эндогенных регуляторных системах растений, фундаментальные исследования молекулярных основ фотосинтеза являются важным условием выявления способов управления продукционным процессом (Ничипорович, 1956; 1967; 1982,1988; Насыров, 1975; 1982; 1982а; 1986,1989; Лайск, 1977; Оя, Лайск, 1988; Кээрберг, 1989; Кээрберг, Вийль, 1982; 1988; Мокроносов, 1981;1983;1988; Мокроносов, Гавриленко, 1992; Тарчевский, 1977).

Продуктивность фотосинтеза в очень большой степени определяется скоростью и особенностями ферментативных реакций темновой фиксации углекислоты. Для выявления механизмов регуляции скорости фотосинтетического метаболизма углерода необходимо глубокое изучение структурных и функциональных особенностей ферментов цикла Кальвина.

Активность рибулозо-1,5-бмсфосфаткарбоксилазы/оксигеназы

РБФКО, НФ 4.1.1.39) - ключевого фермента цикла Кальвина, считается одним из важнейших ведущих механизмов, регулирующим интенсивность фотосинтеза. Данное положение обосновано обширным экспериментальным материалом. Между интенсивностью фотосинтеза и активностью РБФКО для листьев, находящихся на разных стадиях онтогенеза, в разных естественных и экспериментальных условиях, установлена положительная корреляция (Smillie,1962; Bjorkman, 1966; Андреева, Авдеева, 1970; Бабаджанова и др., 1971; 1971а; 19716; Бабаджанова, 1972; 1974; 1977; 1980; 1981; 1986; Бабаджанова, Доман, Русинова, 1978; Бабаджанова, Хасанов, 1980; Бабаджанова, Бакаева, Гиясов, 1985; Алиев и др., 1980; 1982; Мокроносов, 1981; Фархади и др., 1983; 1985; Фархади, 1987). Обнаружена также корреляция между активностью рибулозобмсфосфаткарбоксилазы/оксигеназы в расчете на единицу площади листа и урожайностью (Peet et al., Murthy, Singh, 1979; Бабаджанова, Гиясов, 1984; Руке, 1985; Leach, 1985; Baer, Granni R., Schrader, 1985; Besford et al., 1985).

Однако, в настоящее время представление о существовании в клетке отдельных независимых ферментов сменяется осознанием надмолекулярной ферментной организации. В живой клетке каждый фермент есть часть мультиферментной системы, ответственной за функционирование какого-либо метаболического пути, который в свою очередь входит в состав еще более крупных систем. Ассоциация ферментов одного или разных метаболических путей в различные формы надмолекулярной организации - мультиферментные ассоциаты, комплексы, конъюгаты, ансамбли адсорбционные и интегральные - дает им многие структурные и функциональные преимущества. Свободные формы ферментов и различные формы их надмолекулярной организации находятся в динамическом равновесии друг с другом, причем их соотношение зависит от вида организма, типа клетки и ее функционального состояния (Srere, 1985; 1987; 1990; Фридрих, 1986; Курганов, 1984; 1986; 1986а; 1992; Курганов и др., 1986; Любарев, Курганов, 1987; Margues et al., 1987; Капрельянц, 1988; Курганов, Любарев, 1989; 1991; Каган, 1989; Ермаков, 1993).

В клетках бактерий и животных надмолекулярная организация ферментов биосинтеза клеточных полимеров - нуклеиновых кислот, белка, гликогена - и ферментов метаболических путей деградации, таких, как гликолиз, цикл трикарбоновых кислот, окисление жирных кислот и др., исследуется в течение уже более 30 лет (Atkinson, 1970; Stadtman, 1970; Ginsburg, Stadtman, 1970; Reed, Cox, 1970: Calvo, Fink, 1971; Welch, 1977; Srere, 1987), и расшифровано кристаллическое строение двух надмолекулярных белковых комплексов: триптофансинтазы (Hyde et al., 1988) и рибофлавинсинтазы (Ladenstein et al., 1988).

Предположения о способности ключевого фермента цикла Кальвина рибулозо-1,5-бисфосфаткарбоксилазы/оксигеназы образовывать комплекс с ферментами, поставляющими ему субстрат - рибозофосфатизомеразой (РФИ, НФ 5.3.1.6) и фосфорибулокиназой (ФРК, НФ 2.7.1.19), высказывались разными исследователями, начиная с 1961 года (Peterskofsky, Racker, 1961; Mendiola, Akazawa, 1964; Каримова (Бабаджанова) и др., 1967; McElroy et al., 1968; Rutner, 1970; Романова, 1973 и др.).

В пользу этого предположения свидетельствовали, например, такие экспериментальные факты, установленные еще в 70-80-е годы Бабаджановой и др., (Каримова и др., 1967; Бабаджанова и др., 1971; 1986), как сопутствие рибозофосфатизомеразы и фосфорибулокиназы на протяжении всех процедур очистки рибулозо-1,5-бисфосфаткарбоксилазы/оксигеназы и способность препаратов РБФКО высокой степени очистки фиксировать углекислоту в присутствии рибозо-5-фосфата и АТФ.

Систематические глубокие исследования молекулярно-кинетических свойств рибозофосфатизомеразы, фосфорибулокиназы и рибулозо-1,5-бг/сфосфаткарбоксилазы/оксигеназы из листьев арабидопсиса и хлопчатника позволили Бабаджановой М.А. с сотрудниками установить кинетическую комплементарность этих ферментов и координированную регуляцию активности одними и теми же эффекторами, что указывало на объединение их в функциональный кластер (Бабаджанова, 1981; 1981а; 1990; 1990а; Бабаджанова и др., 1985; Бабаджанова, Бакаева, Бабаджанова, 1988; Бабаджанова, Бакаева, Алиев, 1989; 1990). Объединение этих ферментов в структурно-функциональный кластер было доказано выделением из листьев арабидопсиса и хлопчатника мультиферментного комплекса с молекулярной массой 520 кД, у которого были определены рибозофосфатизомеразная, фосфорибулокиназная и рибулозобисфос-фаткарбоксилазная активности (Бабаджанова, 1990а; Бабаджанова, Насыров, 1992).

Затем из листьев хлопчатника, гороха, пшеницы были выделены мультиферментные комплексы цикла Кальвина с различными величинами молекулярных масс: 180, 240, 400, 480 и 520 кД (Бакаева и др., 1993; 1993а; 19936; 1994; Бакаева, Лебедева, 1993; Мирзорахимов и др., 1994).

Полученные результаты давали основание считать, что мультиферментные комплексы цикла Кальвина существуют в различных формах - стабильных и динамических. Результаты кинетических исследований каждой ферментативной активности этих комплексов, свидетельствовали о проявлении диссоциативного механизма регуляции активности последовательно действующих ферментов — рибозофосфатизомеразы, фосфорибулокиназы и рибулозо-1,5-бмсфосфаткарбоксилазы/оксигеназы (Бакаева и др., 1994; Бабаджанова и др., 1996; Бабаджанова, 1996).

Из листьев классических энзимологических объектов шпината и гороха были также выделены мультиферментные комплексы цикла Кальвина с различным числом ферментов - от двух до восьми (Sainis, Harris, 1986; Sainis et al., 1989; Gontero et al., 1988; Persson and Johansson, 1989; Anderson etal., 1995).

Sainis, Harris (1986) из листьев гороха был выделен трехферментный комплекс с молекулярной массой 800-850 кД, состоявший из рибозофосфатизомеразы, фосфорибулокиназы и рибулозобмсфосфаткарбок-силазы/оксигеназы, а из листьев шпината — двухферментный комплекс, компонентами которого были ФРК и РБФКО (Sainis, Marriam, Harris, 1989).

Gontero et al. (1988) из листьев шпината был выделен функциональный комплекс с молекулярной массой 520-536 кД, состоявший из пяти ферментов - рибозофосфатизомеразы, фосфорибулокиназы, рибулозо-1,5-бисфосфаткарбоксилазы/оксигеназы, фосфоглицераткиназы (ФГК-аза, НФ 2.7.2.3) и глицеральдегидфосфатдегидрогеназы (ГАФД, НФ 1.2.1.13).

Persson and Johansson (1989) из хлоропластов шпината выделили ассоциат шести ферментов цикла Кальвина - РБФКО, ФГК-азы, триозофосфатизомеразы (НФ 5.3.1.1), ГАФД, альдолазы (4.1.2.13) и фруктозобмсфосфатазы (НФ 3.1.3.11).

Anderson et al., (1995) получен многокомпонентный комплекс, превращавший рибозо-5-фосфат во фруктозо-6-фосфат. Комплекс состоял из восьми ферментов цикла Кальвина: РФИ, ФРК, РБФКО, ФГК-азы, альдолазы (НФ 4.1.2.13), фруктозобмсфосфатазы (НФ 3.1.3.11), ГАФД и триозофосфатизомеразы (НФ 5.3.1.1).

До настоящего времени связь мультиферментных комплексов с тилакоидными мембранами показана только для хлоропластов шпината (Suss, Arcona, Manteufell, Adler, 1993) и фотосинтезирующей бактерии Chlamydomonas reinhardtii (Suss, Prokhorenko, Adler, 1995).

Но не проводилось комплексных исследований структурных и функциональных особенностей различных форм мультиферментных комплексов цикла Кальвина - свободных и мембраносвязанных, одновременно выделенных из одного и того же объекта.

Наличие в хлоропласте рибулозобмсфосфаткарбоксилазы/оксигеназы в двух состояниях - свободном и связанном с мембранами, доказано многочисленными экспериментальными исследованиями (Howell, Mondrianakis, 1967; Raghavendra, Carillo, Vallejos, 1981; McNeil, Walker, 1981; Алиев, Васильева, Насыров, 1982; 1984; Mori, Tetzuko, Akazawa, 1984; Фархади, 1987; Adler, Arkona et al., 1993; Чугунова и др., 1993; Suss,

Prokhorenko, Adler, 1995). Однако оставалось невыясненным, когда происходит связывание свободной формы рибулозобисфосфаткарбоксила-зы/оксигеназы с мембранами - на ранних стадиях онтогенетического развития хлоропластов или же после завершения формирования его мембранной системы и какова функциональная роль связывания фермента с мембранами. Не было исследовано, как меняются в онтогенезе растений ферментативные активности различающихся по молекулярной массе мультиферментных комплексов цикла Кальвина и коррелируют ли они с онтогенетическими изменениями интенсивности фотосинтеза. Сравнительные исследования содержания и активности различных форм мультиферментных комплексов могут выявить механизмы регуляции активности ферментной системы цикла Кальвина и их физиологическую роль в фотосинтетическом метаболизме углерода.

Цель и задачи исследования Целью настоящей работы явилось выделение свободных и мембраносвязанного мультиферментных комплексов цикла Кальвина из хлоропластов высших растений и изучение механизмов регуляции их ферментативных активностей.

Предполагалось исследовать в онтогенезе растений ферментативные активности различных мультиферментных комплексов цикла Кальвина, изучить активности мембраносвязанной рибулозобисфосфаткарбоксила-зы/оксигеназы в процессе формирования мембранной системы хлоропластов, и в связи с различной продуктивностью растений. Разработать метод одновременного выделения из одной навески листьев свободного и мембраносвязанного мультиферментных комплексов, исследовать их структурно-функциональные особенности.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие экспериментальные задачи:

- выделить различные формы свободных мультиферментных комплексов цикла Кальвина из листьев хлопчатника в онтогенезе растений;

- определить у выделенных комплексов величины молекулярных масс и ферментативных активностей;

- изучить активность мембраносвязанной РБФКО в процессе формирования системы внутренних мембран хлоропластов картофеля;

- реконструировать in vitro мембраносвязанную РБФКО из мембран и свободной формы фермента;

- изучить содержание и активность свободной и мембраносвязанной форм рибулозобисфосфаткарбоксилазы/оксигеназы у различающихся по продуктивности линий картофеля;

- разработать метод одновременного выделения свободного и мембраносвязанного мультиферментных комплексов цикла Кальвина из одной навески листьев хлопчатника;

- определить величины молекулярных масс и ферментативных активностей выделенных мультиферментных комплексов;

- исследовать кинетическое поведение рибулозобмсфосфаткарбоксила4 зы/оксигеназы, встроенной в свободный и мембраносвязанный мультиферментные комплексы.

Научная новизна и практическая ценность работы. Впервые установлена зависимость от фазы развития растений величин ферментативных активностей свободных мультиферментных комплексов с молекулярными массами 520 и 240 кД. Онтогенетические изменения величин ферментативных активностей мультиферментных комплексов соответствовали изменениям интенсивности фотосинтеза на различных фазах развития растений хлопчатника. Полученные результаты свидетельствуют о том, что необходимое в фазах формирования репродуктивных органов увеличение интенсивности фотосинтеза обеспечивается возрастанием функциональной активности различных мультиферментных комплексов. Следовательно, функциональная активность мультиферментных комплексов является одним из ведущих факторов онтогенетического контроля фотосинтеза и эпигенеза.

Впервые осуществлена реконструкция in vitro мембраносвязанной РБФКО из первичных мембран и свободной формы фермента и доказано, что связывание свободной растворимой РБФКО происходит на ранних стадиях онтогенетического развития хлоропластов, а не после завершения формирования его мембранной системы. При этом обнаружено, что увеличение количества мембраносвязанной РБФКО в системе in vitro приводит к возрастанию карбоксилазной и ослаблению оксигеназной активности системы. Следовательно, связывание рибулозобмсфосфат-карбоксилазы/оксигеназы с мембранами является одним из важных механизмов усиления карбоксилазной функции фермента. Полученные данные являются доказательством мембранной регуляции обеих функций фермента и ее важной роли при различных физиологических состояниях растений.

Обнаружено, что высокопродуктивные линии картофеля превосходят низкопродуктивные по содержанию мембраносвязанной РБФКО, величинам удельной и общей карбоксилазной активности как свободной, так и мембраносвязанной форм фермента. Совокупность полученных результатов доказывает важную роль мембраносвязанной РБФКО в регуляции соотношения процессов фотосинтеза и фотодыхания, и, следовательно, в повышении продуктивности растений.

Разработан метод одновременного выделения из одной навески листьев различных форм мультиферментных комплексов цикла Кальвина — свободного и мембраносвязанного. Из листьев хлопчатника свободный мультиферментный комплекс имел молекулярную массу 520 кД, а мембраносвязанный - 640 кД.

Впервые проведены сравнительные исследования величин ферментативных активностей свободного и мембраносвязанного мультиферментных комплексов: рибозофосфатизомеразной, фосфорибулокиназной и рибулозобмсфосфаткарбоксилазной.,

Мембраносвязанный комплекс превосходил свободный по величинам молекулярной массы и всех ферментативных активностей, что может свидетельствовать и о различиях в составе комплексов, и о проявлении мембранного уровня регуляции функциональной активности мультиферментного комплекса как единого целого.

Результаты сравнительного исследования кинетических параметров рибулозобисфосфаткарбоксилазной реакции (Vmax, Км) обоих комплексов свидетельствуют о решающей роли мембран в регуляции функциональной активности мультиферментного комплекса как единого целого.

Таким образом, полученные нами результаты экспериментальных исследований указывают на тесную взаимосвязь и взаимозависимость ферментных систем ассимиляции углерода с состоянием мембранной системы хлоропласта.

На основании полученных нами новых экспериментальных данных (Бабаджанова М.А., Бакаева Н.П., Бабаджанова М.П., 2000; Алиев К.А., Бабаджанова М.А., Бабаджанова М.П., Давлятназарова З.Б., 2001; Бабаджанова М.П., Бабаджанова М.А., Алиев К.А., 2002) значительно модифицирована предложенная ранее (Бакаева Н.П., Бабаджанова М.А., Бабаджанова МП, 1994; Бакаева, 1996) схема иерархии механизмов регуляции активности свободных ферментов цикла Кальвина и различных форм их надмолекулярной организации.

Результаты проведенных нами экспериментальных исследований могут быть использованы при решении ряда теоретических и практических задач физиологии и биохимии продукционного процесса растений, теоретических и прикладных аспектов энзимологии фотосинтеза, для развития теории ферментативного катализа.

Методы, разработанные при выполнении данной работы (выделение ферментов в различных состояниях, выделение свободных мультиферментных комплексов с различными величинами молекулярных масс, одновременное выделение свободного и мембраносвязанного мультиферментных комплексов и др.), являются принципиально новыми, и их применение может способствовать дальнейшему развитию исследований в области энзимологии фотосинтеза.

Полученные данные могут быть использованы для чтения лекций по общим курсам физиологии растений, биохимии, спецкурсов по фотосинтезу, энзимологии и экологии на биологических факультетах ВУЗов, а разработанные методы - при проведении различных лабораторных практикумов.

Положения, выносимые на защиту:

- Образование различных по молекулярной массе и функциональной активности мультиферментных комплексов цикла Кальвина необходимо для тонкой и точной регуляции фотосинтетической ассимиляции углекислоты.

- При постоянно изменяющихся условиях внешней и внутренней среды с помощью мультиферментных комплексов реализуются регуляторные механизмы более высоких уровней - механизмы слежения, которые осуществляются с большими скоростями, чем регуляторные механизмы поддержания гомеостаза, свойственные свободным формам ферментов. К числу важнейших механизмов слежения относятся диссоциативная и мембранная регуляция.

- И механизмы гомеостаза, и механизмы слежения находятся под контролем генетической программы развития, в соответствии с которой происходят онтогенетические изменения интенсивности фотосинтеза, обеспечивающие ассимилятами эпигенетические процессы.

Заключение Диссертация по теме "Физиология и биохимия растений", Бабаджанова, Малика Пулатовна

выводы

1. При использовании и комбинировании различных способов выделения и очистки белков из листьев хлопчатника получены свободные мультиферментные комплексы цикла Кальвина с молекулярной массой 520±20 кД и 240±10 кД. Впервые в онтогенезе растений проведены сравнительные исследования величин рибозофосфатизомеразной, фосфорибулокиназной и рибулозобис-фосфаткарбоксилазной активностей у выделенных свободных мультиферментных комплексов.

2. Установлена зависимость величин ферментативных активностей свободных мультиферментных комплексов с молекулярной массой 520 и 240 кД от фазы развития растений. Обнаружено, что ферментативные активности свободных мультиферментных комплексов цикла Кальвина как и интенсивность фотосинтеза, имеют наибольшие величины в фазах формирования репродуктивных органов — бутонизации и цветения. Следовательно, функциональная активность мультиферментных комплексов является ведущим фактором онтогенетических изменений интенсивности фотосинтеза, необходимых для обеспечения ассимилятами эпигенетических процессов.

3. Установлено, что связывание свободной растворимой РБФКО с тилакоидными мембранами происходит на ранних стадиях онтогенетического развития хлоропластов, начиная со стадии образования первичных мембран.

Впервые была осуществлена реконструкция in vitro мембраносвязанной РБФКО из первичных мембран и свободной формы фермента. Полученные результаты свидетельствуют о том, что одним из механизмов усиления карбоксилазной функции РБФКО является ассоциация фермента с мембранами.

4. Обнаружена положительная корреляция между содержанием, удельной и общей карбоксилазной активностью мембраносвязанной РБФКО и продуктивностью растений, что подтверждает важную роль мембранного механизма регуляции обеих функций фермента в продукционном процессе.

5. Впервые из одной навески листьев высшего растения (хлопчатника) одновременно выделены свободный и мембраносвязанный мультиферментные комплексы цикла Кальвина, у которых определены пять ферментативных активностей: рибозофосфатизомеразная, фосфорибулокиназная, рибулозобмсфосфаткарбоксилазная, фосфоглицераткиназная и глицеральдегидфосфатдегидрогеназная.

6. Установлено, что данные мультиферментные комплексы различаются по величинам молекулярной массы и ферментативных активностей. Молекулярная масса свободного комплекса составляла 520±20 кД, а мембраносвязанного - 640±25 кД. Мембраносвязанный комплекс превосходил свободный по величинам всех ферментативных активностей, особенно карбоксилазной.

7. Сравнительные исследования кинетического поведения ключевого фермента цикла Кальвина — рибулозо-1,5-бисфосфаткарбоксилазы/оксигеназы, встроенной в свободный и мембраносвязанный мультиферментные комплексы показали, что при связывании свободного мультиферментного комплекса цикла Кальвина с мембранами происходят изменения кинетических параметров рибулозо-1,5-бг/сфосфаткарбоксилазы (К м снижается, Vmax возрастает), ведущие к усилению карбоксилазной функции мембраносвязанного комплекса.

8. На основании полученных нами результатов экспериментальных исследований модифицирована предложенная ранее

Бакаева, Бабаджанова М.А., Бабаджанова М.П., 1994; Бакаева, 1996; Бабаджанова М.А., Бакаева, Бабаджанова М.П., 2000) схема иерархии механизмов регуляции активности свободных ферментов цикла Кальвина и различных форм их надмолекулярной организации.

Формы ферментов Механизмы регуляции их активности

Рис.1. Иерархия механизмов регуляции активности свободных ферментов цикла Кальвина и различных форм их надмолекулярной организации

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Известно, что регуляторные механизмы живой клетки можно разделить на две группы (Розен, 1969; Конев, 1979): механизмы поддержания клеточного гомеостаза и механизмы слежения. Механизмы слежения занимают более высокое положение на иерархической лестнице уровней контроля клеточного метаболизма в сравнении с механизмами контроля гомеостаза. Эти механизмы тесно связаны между собой.

Сборка в комплекс ферментов, участвующих в общем метаболическом пути, обеспечивает возможность реализации иерархически более высокого регуляторного механизма, осуществляющего контроль функционирования метаболической системы как целого. Этот механизм контроля реализуется с участием вторых посредников (например, гормонов), т.е. является механизмом слежения, переключающем функционирование метаболической системы в новый режим в соответствии с сигналами, поступающими от более высоких уровней контроля метаболизма или из внешней среды. Механизм контроля функционирования мультиферментного комплекса как целого осуществляется с более высокой скоростью в сравнении с механизмами гомеостаза. Мультиферментные комплексы находятся в равновесии со свободными ферментами, что дает возможность эффективного осуществления в клетке и механизмов гомеостаза, и механизмов слежения (Welch, 1977; Курганов, Любарев, 1989; Easterby, 1989; Srere, Ovadi, 1990; Ovadi, 1991; Курганов, 1986; 1986a; 1991; Ushiroyama et al., 1992; Mendes et al., 1992).

Приведенные в литературе и результаты наших собственных экспериментальных исследований свидетельствуют о том, что ферменты цикла Кальвина образуют различные формы мультиферментных комплексов - динамические, стабильные, мембраносвязанные, ферментативные активности которых регулируются и механизмами гомеостаза, и механизмами более высокого уровня контроля - механизмами слежения.

Известно, что реализация фотосинтеза в растении определяется, с одной стороны, высокой функциональной автономностью структур низких порядков (фотосинтетическая единица, хлоропласт, клетка), а с другой -подчиненностью фотосинтетической функции общей системе эпигенеза (Мокроносов, 1981).

В последнее десятилетие интенсивно развивались исследования по выделению различных форм мультиферментных комплексов цикла Кальвина и изучению их функциональных свойств. Однако до настоящего времени не проводились исследования функциональной активности различных мультиферментных комплексов в связи с онтогенетическим аспектом фотосинтеза.

Нами выделены из листьев хлопчатника свободные мультиферментные комплексы цикла Кальвина с различными величинами молекулярных масс - 520 кД и 240 кД. Анализ литературы показывает, что количество ферментов, входящих в состав мультиферментных комплексов может в значительной мере зависеть от объекта, от методов, использованных для выделения и очистки комплексов, а также от различной устойчивости комплексов у разных объектов (Hall, Tolbert, 1978; Halper, Srere, 1977; Miekka, Inghom, 1978; Mc Curry et al., 1982; Sainis et al., 1989; Sainis, Yawali, 1994; Suss et al., 1993 и др.). Поэтому для выделения мультиферментного комплекса с молекулярной массой 240 кД были использованы денатурирующие условия по аналогии с изменениями условий в клетке (рН, ионной силы, концентрации различных метаболитов, температуры и т.д. ), когда происходит диссоциация белков-олигомеров на составляющие их компоненты. Подобный мультиферментный комплекс цикла Кальвина с молекулярной массой 284 кД был выделен также в денатурирующих условиях из листьев шпината (Rault et al., 1993). У обоих мультиферментных комплексов нами были изучены величины рибозофосфатизомеразной, фосфорибулокиназной и рибулозобмсфосфаткарбоксилазной активностей в онтогенезе растений хлопчатника - в фазах 6-8 настоящих листьев, бутонизации и цветения. Установлено, что характер изменений величин ферментативных активностей обоих мультиферментных комплексов находится в точном соответствии с изменениями интенсивности фотосинтеза в онтогенезе растений. Такая положительная корреляция свидетельствует о том, что функциональная активность мультиферментных комплексов находится под контролем генетической программы развития в соответствии с которой происходят онтогенетические изменения фотосинтеза, необходимые для обеспечения ассимилятами эпигенетических процессов.

Наличие в хлоропласте ключевого фермента цикла Кальвина в различных состояниях - свободном, связанном с мембранами и встроенном в свободные мультиферментные комплексы дало нам основание предполагать, что РБФКО может являться основным компонентом и мембраносвязанных мультиферментных комплексов. Однако к началу наших исследований оставалось невыясненным, когда происходит связывание свободной формы РБФКО с тилакоидными мембранами - на ранних стадиях онтогенетического развития хлоропластов или же после завершения формирования его мембранной системы.

Нами установлено, что связывание свободной растворимой РБФКО из листьев картофеля происходит на ранних стадиях онтогенетического развития хлоропластов, начиная со стадии образования первичных мембран. При реконструкции in vitro мембраносвязанной РБФКО была достигнута 23% степень ассоциации свободной, растворимой формы фермента с первичными мембранами. Увеличение количества мембраносвязанной РБФКО в этой искусственно созданной системе привело к возрастанию карбоксилазной активности и ослаблению оксигеназной функции фермента. Полученные результаты указывают на важную биологическую роль мембранного уровня регуляции обеих функций фермента. При определении содержания и обеих активностей свободной и мембраносвязанной форм РБФКО у различающихся по продуктивности линий картофеля обнаружена положительная корреляция между количеством, удельной и общей карбоксилазной активностью мембраносвязанной РБФКО и продуктивностью растений.

Совокупность полученных результатов дает основание считать, что одним из механизмов усиления карбоксилазной функции РБФКО является ассоциация фермента с мембранами. Усиление карбоксилазной функции РБФКО играет важную роль в регуляции соотношения процессов фотосинтеза и фотодыхания, а, следовательно, и в повышении продуктивности растений.

Возрастание удельной карбоксилазной активности мембраносвязанной РБФКО дало нам основание предполагать, что связывание свободного мультиферментного комплекса с мембранами также может привести к увеличению его различных ферментативных активностей.

Для проверки правильности данного предположения нами впервые из хлоропластов высшего растения, из одной навески листьев хлопчатника одновременно выделены стабильные свободный и мембраносвязанный мультиферментные комплексы цикла Кальвина, сохранившие ферментативные активности даже через 7 суток хранения при температуре +4°С. Молекулярная масса свободного мультиферментного комплекса составляла 520±20 кД, а мембраносвязанного — 640±25 кД. У обоих комплексов были определены пять ферментативных активностей: рибозофосфатизомеразная, фосфорибулокиназная, рибулозобмсфосфаткарбоксилазная, фосфоглицераткиназная и глицеральдегидфосфатдегидрогеназная. Величины всех ферментативных активностей мембраносвязанного мультиферментного комплекса цикла Кальвина были значительно выше в сравнении со свободным комплексом. Эти различия особенно четко выражены при проявлении мультиферментными комплексами рибулозобисфосфаткарбоксилазной активности. По величине рибулозобисфосфаткарбоксилазной активности мембраносвязанный мультиферментный комплекс превосходил свободный на 52% или в 1.52 раза. Для изменения же физиологического состояния клетки достаточно изменения активности фермента даже на 10% (Ньюсхолм, Старт, 1977; Хочачка, Сомеро, 1977).

Значительно более высокие величины молекулярной массы и ферментативных активностей мембраносвязанного мультиферментного комплекса цикла Кальвина в сравнении со свободным могли свидетельствовать и о различиях состава их компонентов, и о проявлении мембранного механизма регуляции функциональной активности комплекса, как единого целого. О проявлении мембранного механизма регуляции функциональной активности мультиферментного комплекса могли бы свидетельствовать изменения кинетического поведения ферментов, встроенных в мембраносвязанный комплекс.

Результаты проведенных нами сравнительных исследований кинетических параметров (Км, Ущах) ключевого фермента цикла Кальвина рибулозо-1,5-бисфосфаткарбоксилазы/оксигеназы, встроенной в свободный и мембраносвязанный мультиферментные комплексы, показали, что величины константы Михаэлиса Км ниже, а величины максимальной скорости Ущах выше у РБФКО, встроенной в мембраносвязанный комплекс в сравнении с РБФКО свободного комплекса. Следовательно, при связывании свободного мультиферментного комплекса с мембранами происходят изменения кинетических параметров рибулозо-1,5-бисфосфаткарбоксилазы/окси-геназы, ведущие к усилению карбоксилазной функции мембраносвязанного комплекса.

Имеющиеся в литературе и результаты собственных сравнительных исследований структурной организации и функциональных свойств свободной рибулозо- 1,5-бисфосфаткарбоксилазы/оксигеназы и встроенной в различные мультиферментные комплексы сведены в таблицу. Приведенные в таблице данные четко показывают зависимость функциональной активности рибулозо-1,5-бмсфосфаткарбоксилазы/ оксигеназы от ее структурной организации.

Структурная организация и функциональные свойства свободной рибулозо-1,5 бмсфосфаткарбоксилазы/оксигеназы (РБФКО) и встроенной в мультиферментные комплексы (МФК)

Авторы Объекты Мол.масса, кД Структура Субстрат Vmax, АЦ/сек Km, мМ

Gontero et al., 1993 Шпинат 520 520 Свободная LgSg Свободный МФК L2S4 Рибулозо-1,5-бис фосфат 1.57 7.13 0.14 0.07

Бабаджанова М. А., 1990 Хлопчатник 520 Свободный МФК L2S4 8.43 0.08

Vmax, мкмоль продукта/мин на мл реакционной среды

Бабаджанова М.А., 1992 520 Свободный МФК L2S4 рибулозо-1,5-бис фосфат 2.53 0.07

Бабаджанова М.П., Бабаджанова М.А., Алиев К.А.,2002,2002а Хлопчатник 640 Мембраносвязанный МФК рибулозо-1,5-бмсфосфат рибозо-5-фосфат 3.76 5.91 0.05 0.04

Совокупность полученных нами результатов подтверждает современные представления о том, что «для организма решающее значение имеет не совершенство каждого отдельного фермента, а согласованное действие всей ферментной системы в целом» (Фридрих, 1986).

Таким образом, нами установлен онтогенетический механизм регуляции ферментативных активностей свободных мультиферментных комплексов с различными величинами молекулярных масс; из листьев одного объекта одновременно выделены свободный и мембраносвязанный мультиферментные комплексы цикла Кальвина и проведены сравнительные исследования их структурно-функциональных свойств; выявлен диссоциативный и мембранный механизмы регуляции ферментативных активностей выделенных мультиферментных комплексов.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Бабаджанова, Малика Пулатовна, Душанбе

1. Абдуллаев А. Карбоксилирующие ферменты и регуляция ассимиляции С02 у высших растений: Автореф.дис. .д-ра биол.наук. -Душанбе, 1993. -45 с.

2. Абдуллаев Х.А, Джаногудар B.C., Абдуллаев А.А., Фархади З.Н., Абдурахманова З.Н., Насыров Ю.С. Содержание и активность рибулозобисфосфаткарбоксилазы/оксигеназы у гетерозисных гибридов хлопчатника. //Доклады АН Тадж.ССР. 1990. - Т.ЗЗ, №5. - С.340-343.

3. Алиев К.А., Васильева В.Н., Насыров Ю.С. Свойства свободной и мембраносвязанной рибулозо-1,5-дифосфаткарбоксилазы.оксигеназы в процессе биогенеза хлоропластов//Физиология растений. 1984. - Т.31, вып.1.-С.124-129.

4. Алиев К.А., Насыров Ю.С., Фархади З.Н. Исследование функциональной активности хлоропластов в онтогенезе листа//Тез.докл. симпозиума, организованного XV научно-коорд.совещ.стран-членов СЭВ. -Пущино, 1980.-С.З 7.

5. Алиев К.А., Насыров Ю.С., Фархади З.Н., Музафарова С.М. Соотношение карбоксилазной и оксигеназной активности рибулозо-бисфосфаткарбоксилазы в онтогенезе листа хлопчатника //Докл. АН Тадж.ССР. 1982. - Т.25, №10. - С.604-607.

6. Альберте Б., Брей Д., Льюис Дж., Рэфф М., Роберте К., Уотсон Дж. Молекулярная биология клетки. М.: Мир, 1986, - Т.1. -223 е.,

7. Андреева Т.Ф., Авдеева Т.А. Белок фракции I и фотосинтетическая активность листьев//Физиология растений. 1970. - Т. 17. - вып.2. - С.225-228.

8. Андреева Т.Ф., Маевская С.Н., Степаненко С.Ю., Строганова JI.E., Мурашов И.Н. Активность рибулозобмсфосфаткарбоксилазы-оксигеназы при длительном воздействии на растение света и СО2//Физиология растений. -1982. Т.29. - вып.6. - С.1203-1205.

9. Бабаджанова М.А. Об энзимах карбоксилирующей фазы фотосинтеза и их связи с интенсивностью процесса: Автореф.дис.канд.биол.наук. Москва, 1972. - 32 с.

10. Бабаджанова М.А. Активность фотосинтетических ферментов у мутантных форм хлопчатника//Тез.докл. III Всесоюзного биохимического съезда. Рига, 1974. - Т.2. - С. 137.

11. Бабаджанова М.А. Фосфорибулокиназа листьев хлопчатника сорта 108-Ф и его высокопродуктивного мутанта Дуплекс //Докл,АН ТаджССР. 1980. - Т.23, №11. - С.664-667.

12. Бабаджанова М.А. О регуляции активности энзимов карбоксилирующей фазы фотосинтеза//Всесоюз.совещ. «Энергетика, метаболические пути и их регуляция в фотосинтезе»: Тез.докл. Пущино, 1981. -С.4.

13. Бабаджанова М.А. Молекулярно-кинетические свойства ключевых ферментов фотосинтеза продуктивных форм хлопчатника иарабидопсиса // 2-й Всесоюз. Съезд физиологов растений:Тез.докл. Минск, 1990. -С.12.

14. Бабаджанова М.А. Исследование процессов регенерации и карбоксилирования акцептора СОг в связи с фотосинтетической продуктивностью растений: Автореф.дис. .д-ра биол.наук. Душанбе, 1990. -40 с.

15. Бабаджанова М.А., Бакаева Н.П. Онтогенетические изменения содержания и активности рибозофосфатизомеразы из листьев хлопчатника сорта 108-Ф и его мутанта Дуплекс//Докл. АН ТаджССР. 1986. - Т.29, №2. -С.120-123.

16. Бабаджанова М.А., Бакаева Н.П. Четвертичная структура и некоторые свойства рибозофосфатизомеразы из листьев арабидопсиса расы Энкхайм и его мутантов триплекс, 58/15//Биохимия. 1987. - Т.52, №1. — С.146-153.

17. Бабаджанова М.А., Бакаева Н.П. Влияние рибулозобисфосфата на активность рибозофосфатизомеразы//Докл.АН Тадж.ССР. 1988. - Т.31, №6. -С.415-418.

18. Бабаджанова М.А., Бакаева Н.П., Алиев К.А. Влияние субстратов и температуры на активность фосфорибулокиназы из листьев хлопчатника сорта 108-Ф и его мутанта Дуплекс//Докл.АН Тадж.ССР. 1989. - Т.32, №10.- С.702-705.

19. Бабаджанова М.А., Бакаева Н.П., Алиев К.А. Влияние 3-фосфоглицериновой кислоты на активность рибозофосфатизомеразы и фосфорибулокиназы листьев хлопчатника сорта 108-Ф//Докл.АН Тадж.ССР.- 1990. Т.ЗЗ, №1. - С.57-60.

20. Бабаджанова М.А., Бакаева Н.П., Бабаджанова М.П. Иерархия механизмов регуляции активности различных форм ферментов цикла КальвинаУ/Проблемы биохимии: тр.второй науч.конф. Биохим. о-ва Республики Таджикистан. Душанбе, 1996. - С.7-8.

21. Бабаджанова М.А., Бакаева Н.П., Бабаджанова М.П. Функциональные свойства мультиферментного комплекса ключевых ферментов цикла Кальвина //Физиология растений. 2000. - Т.47, №1 - С.27-36.

22. Бабаджанова М.А., Гиясов Т.Д. Онтогенетические изменения содержания белка и активности рибулозодифосфаткарбоксилазы листьев хлопчатника сорта 108-Ф и его мутанта Дуплекс//Докл. АН ТаджССР. 1984.- Т.27, №9. С.533-536.

23. Бабаджанова М.А., Лебедева Г.П., Мирзорахимов А.К., Бабаджанова М.П., Бакаева Н.П. Функциональный мультиферментный комплекс цикла Кальвина. //I Конф.биохимиков Таджикистана: Тез.докл. — Душанбе, 1993.-C.il.

24. Бабаджанова М.А., Мирзорахимов А.К., Бакаева Н.П. Изучение активности РФИ, ФРК и РБФКО хлопчатника при различных условиях хранения препаратов// Апрельская науч.-теорет. конф. проф.-препод.состава Тадж.гос.ун-та: тез.докл. Душанбе. - 1994. - С.76.

25. Бабаджанова М.А., Насыров Ю.С. Мультиферментный комплекс ключевых ферментов фотосинтеза//Физиология растений. 1992. — Т.39Б вып.4. - С.753-759.

26. Бабаджанова М.А., Хаитова Л.Т., Горенкова Л.Г. Потенциальная интенсивность фотосинтеза и активность ферментов карбоксилирования у исходных и мутантных форм растений//Докл. АН ТаджССР. 1971а. - Т. 14, №4. - С.74-77.

27. Бабаджанова М.А., Хаитова Л.Т., Касьяненко Л.Г. Действие лейцина на потенциальную интенсивность фотосинтеза и активность ферментов, ответственных за фиксацию СОг у исходных и мутантных форм арабидопсиса//Докл. АН ТаджССР. 19716. - Т. 14, №5. - С.50-51.

28. Бабаджанова М.А., Хасанов М. Ферменты карбоксилирующей фазы фотосинтеза листьев хлопчатника сорта 108-Ф и его мутанта Дуплекс//В сб.: Экспериментальная генетика и селекция растений и животных в Таджикистане. Душанбе, 1980. - С.53-54.

29. Бабаджанова М.П. Мультиферментный комплекс цикла Кальвина//Материалы Молодежной конф.ботаников: Тез.докл. Санкт-Петербург, 2000. - С.23.

30. Бабаджанова М.П. Надмолекулярные комплексы ферментов цикла Кальвина из листев хлопчатника//Изв. Академии наук Республики Таджикистан. 2001. - Т.1(142). - С.137-146.

31. Бабаджанова М.П. Кинетические свойства фосфорибулокиназы в мультиферментном комплексе цикла Кальвина//Известия АН РТ, Отд.биол. и мед.наук. 2003. - №1(148). - С.82-86.

32. Бабаджанова М.П. Надмолекулярная организация ферментов. Мультиферментные комплексы цикла Кальвина. Душанбе: «Статус», 2003. -52 с.

33. Бабаджанова М.П. Рибулозобмсфосфаткарбоксилазная активность свободных мультиферментных комплексов цикла Кальвина в онтогенезе растений хлопчатника//Деп. в НПИЦентре. Душанбе, 2003. -№58(1603).-10 с.

34. Бабаджанова М.П. Современные представления о надмолекулярной организации ферментов//Деп. в НПИЦентре. — Душанбе, 2003.-№55(1600).-20 с.

35. Бабаджанова М.П. Надмолекулярные комплексы цикла Кальвина//Деп. в НПИЦентре. Душанбе, 2003. - №57(1602). - 27 с.

36. Бабаджанова М.П. Метод одновременного выделения из листьев хлопчатника свободного и мембраносвязанного мультиферментных комплексов цикла Кальвина//Деп. в НПИЦентре. — Душанбе, 2003. -№56(1601).-16 с.

37. Бабаджанова М.П., Бабаджанова М.А., Алиев К.А. Свободный и мембраносвязанный мультиферментные комплексы цикла Кальвина листьев хлопчатника //Физиология растений. 2002. - Т.49, №5. - С.663-667.

38. Бабаджанова М.П., Бабаджанова М.А., Алиев К.А. Регуляция ферментативных активностей мультиферментного комплекса//Известия АН РТ, Отд.биол. и мед.наук. 2003. - №1(148). - С.63-70

39. Бабаджанова М.П., Бабаджанова М.А., Алиев К.А. Выделение свободного и мембраносвязанного мультиферментного комплекса цикла Кальвина из листьев хлопчатника //Докл.АН РТ. 2003.- Т.46. - №5-6.-с.

40. Бакаева Н.П. Определение молекулярной массы рибозофосфатизомеразы листьев хлопчатника и арабидопсиса методом гель-фильтрации//Респ.конф. молодых ученых и специалистов: Тез.докл. -Душанбе. 1985. - 4.1. - С.121.

41. Бакаева Н.П. рН-зависимые изменения и роль сульфгидрильных групп в проявлении активности фосфорибулокиназы хлопчатника//У Конф.биохимиков республик Средней Азии и Казахстана: Тез.докл. -Ташкент, 1991.-С.148.

42. Бакаева Н.П. рН-зависимые изменения в проявлении активности фосфорибулокиназы хлопчатника//Конф. проф.-препод.состава Тадж.гос.ун-та: тез.докл. Душанбе, 1991а. - С.28.

43. Бакаева Н.П. Субстратная стабилизация сульфгидрильных групп ферментов рибозофосфатизомеразы и фосфорибулокиназы// Конф. проф.-препод.состава Тадж.гос.ун-та: тез.докл.(естественные науки) — Душанбе, 1994.-С.73.

44. Бакаева Н.П. Влияние рН реакционной среды на максимальную скорость фосфорибулокиназной реакции и сродство ФРК к субстрату Ру5Ф // Конф. проф.-препод.состава Тадж.гос.ун-та: тез.докл.(естественные науки) -Душанбе, 1994.-С.75.

45. Бакаева Н.П. Проявление, функционирование и местоположение сульгидрильных групп РФИ, ФРК и РБФК// Конф. проф.-препод.состава Тадж.гос.ун-та: тез.докл.(естественные науки) Душанбе, 1995. - С.41.

46. Бакаева Н.П., Бабаджанова М.А. Регуляция активности рибозофосфатизомеразы рибулозодифосфатом/ЯУ Конф. биохимиков республик Средней Азии и Казахстана: Тез.докл. Ашхабад, 1986. - С.234.

47. Бакаева Н.П., Бабаджанова М.А., Бабаджанова М.П. Различные формы структурно-функциональной организации ферментов цикла Кальвина //Докл. Академии наук Республики Таджикистан 1994. -Т.37, №9-10. - С.41-44.

48. Бакаева Н.П., Бабаджанова М.А., Лебедева Г.П. Исследование фермент-ферментных взаимодействий на примере РФИ и ФРКхлопчатника//Конф. проф.-препод.состава Тадж.гос.ун-та: Тез.докл. Душанбе, 1993.-С.77.

49. Бакаева Н.П., Бабаджанова М.А. Ионизирующиеся группы активного центра фосфорибулокиназы хлопчатника//Докл.Академии наук Республики Таджикистан ТаджССР. 1995. - Т.38, №9/10. - С.67-72.

50. Бакаева Н.П., Бабаджанова М.А., Бабаджанова М.П., Мирзорахимов А.К. Надмолекулярная организация ключевых ферментов цикла Кальвина //Докл. Академии наук Республики Таджикистан ТаджССР. -1994. -Т.37,№6.- С.34-41.

51. Бакаева Н.П., Лебедева Г.П. Изучение активностей рибозофосфатизомеразы и фосфорибулокиназы хлопчатника в двухферментном комплексе//Конф. проф.-препод.состава Тадж.гос.ун-та: Тез.докл. Душанбе, 1993. - С.74.

52. Виноградова Р.П. Молекулярные основы действия ферментов. -Киев: Вища шк. 1978. - 279 с.

53. Гавриленко В.Ф., Ладыгина М.Е., Хандобина Л.М. Большой практикум по физиологии растений. М.: Высш. шк., 1975. - 392 с.

54. Гильманов М.К., Фурсов О.В., Францев А.Г. Методы очистки и изучения ферментов растений. Алма-Ата: Наука, 1981. - 92 с.

55. Гиясов Т.Д. Особенности роста, фотосинтеза и восстановления нитрата у различных форм хлопчатника: Автореф.дисс.канд.биол.наук. -Душанбе, 1992. 24 с.

56. Гиясов Т.Д. Фотосинтез и ассимиляция азота в онтогенезе хлопчатника. Автореф.дисс.доктора биол.наук. Душанбе, 1999. - 49 с.

57. Гиясов Т.Д., Якубова М.М. Фотосинтетическая активность листьев хлопчатника в процессе онтогенеза .Материалы Международн.конф. «Фотосинтез и фотобиотехнология». Пущино. 1991. - С. 24.

58. Диксон М., Уэбб Э. Ферменты: Пер. с англ. М.: Мир, 1982. Т.1. -389 е.; [Т],2. -С.398-806; [Т].3. -С.809-1118.

59. Ермаков Г.Л. Надмолекулярная организация ферментных систем. I. Структурный аспект проблемы //Биохимия. 1993. - Т.58, вып.5. - С.659-674.

60. Иванищев В.В. Физико-химические свойства и структура рибозофосфатизомеразы: Автореф. дис. .канд.биол.наук. -М., 1982. -20 с.

61. Иванищев В.Б., Насыров Ю.С. Об олигомерной структуре рибозо-5-фосфатизомеразы //Докл.Академии наук Республики Таджикистан ТаджССР. 1981. - Т.24, №12. - С.751-754.

62. Каган З.С. Аллостерическая регуляция ферментов и регуляторные энзимопатии //Итоги науки и техники. Серия биологическая химия. -М.:ВИНИТИ, 1989. Т.28. - 148 с.

63. Капрельянц А. С. Пространственно-динамическая организация ферментов в клетке и регуляция метаболизма //Биол.науки. 1988. - №6. -С.5-12.

64. Каримова М.А., Романова А.К., Доман Н.Г. Карбоксилаза рибулозо-1,5-дифосфата, ее свойства и роль в фотосинтезе //Всесоюз. Конф. "Фотосинтез и использование солнечной энергии": тез.докл. Душанбе, 1967.-С.56-57.

65. Каримова М. А., Школьник Р.Я., Доман Н.Г. Карбоксидисмутаза и сопутствующие ей ферменты из листьев гороха, люцерны и Резушки Таля

66. Arabidopsis thaliana (L.) Heihmy/Исследования по фотосинтезу, г.Душанбе, 1967.-C.66-77.

67. Келети Т. Основы ферментативной кинетики: М.: Мир, 1990.390 с.

68. Конев С.В. О принципах и механизмах регуляции в биологических системах //Методологические и теоретические проблемы биофизики. М.: Наука, 1979.-С.78-89.

69. Кочетов Г.А. Практическое руководство по энзимологии. М.: Высш.шк.,1980.-272с.

70. Кретович B.JT. Введение в энзимологию. М.: Наука, 1986. - 336с.

71. Кретович B.JI. Введение в биохимию растений. М.: Наука, 1986. -463с.

72. Курганов Б.И. Аллостерические ферменты. М.: Наука, 1978.247с.

73. Курганов Б.И. Физико-химические механизмы регуляции активности ферментов//Физико-химические проблемы ферментативного катализа/Под ред.Ю.М.Торчинского. -М.: Наука, 1984. -С.97-103.

74. Курганов Б.И. Принципы интеграции клеточного метаболизма //Молекуляр.биология. 1986. - Т.20, вып.2. - С.369-386.

75. Курганов Б.И. Роль мультиферментных комплексов в интеграции клеточного метаболизма //Молекуляр. биология. 1986. - Т.20, вып.6. -С.1530-1538.

76. Курганов Б.И. Физико-химические механизмы регуляции активности ферментов. М.: Наука, 1992. - 62 с. - (46-е Баховское чтение).

77. Курганов Б.И., Любарев А.Е. Принципы организации и функционирования микрокомпартмента метаболона //Биохимия. 1989. -Т.54,вып.5.-С.716-718.

78. Курганов Б.И., Любарев А.Е. Проблемы биохимической организации //Биохимия. 1991. - Т.56, вып.1. - С. 19-32.

79. Курганов Б.И., Сугробова Н.П., Мильман Л.С. Надмолекулярная организация ферментов гликолиза //Молекуляр.биология. 1986. - Т.20, вып.1.-С.41-52.

80. Кээрберг О.Ф. Количественная характеристика путей превращения углерода при фотосинтезе: Дис. В форме науч.докл. .д-ра биол.наук. М., 1989. - 55 с.

81. Кээрберг О.Ф., Вийль Ю.А. Система регуляции и энергетика восстановительного пентозофосфатного цикла //Физиология фотосинтеза. -М.: Наука, 1982. -С.104-110.

82. Кээрберг О.Ф., Вийль Ю.А. Количественная характеристика путей превращения углерода при фотосинтезе //Фотосинтез и продукционный процесс. М.: Наука, 1988. - С.40-53.

83. Лайск А.Х. Кинетика фотосинтеза и фотодыхания Сз-растений. -М.: Наука, 1977. 326 с.

84. Лакин Г.Ф. Биометрия. М.: Высш. шк., 1990. - 353 с.

85. Ленинджер А. Основы биохимии. М.: Мир, 1985. - T.I. - 365 с.

86. Любарев А.Е., Курганов Б.И. Надмолекулярная организация ферментов цикла трикарбоновых кислот //Молекуляр. биология. 1987. -Т.21, вып.5.-С. 1286-1296.

87. Методы биохимического анализа растений/Под ред.Полевого В.В., Максимова Г.Б. Л.: изд-во ЛГУ, 1978. - 163 с.

88. Мирзорахимов А.К., Алиев К.А., Фархади З.Н., Бабаджанова М.П. Карбоксилазная активность и полипептидный состав РБФКО в связи с продуктивностью растений //Докл. АН Республики Таджикистан. 1999. -Т.42, № 1. - С.69-74.

89. Мецлер Д. Биохимия. Химические реакции в живой клетке. М.: Мир, 1980.-Т.2.-606 с.

90. Мокроносов А.Т. Онтогенетический аспект фотосинтеза. -М.: Наука, 1981.-1981.-196 с.

91. Мокроносов А.Т. Фотосинтетическая функция и целостность, растительного организма. М.: Наука, 1983. - 64 с.

92. Мокроносов А.Т. Фотосинтез и продукционный процесс //Физиология растений на службе продовольственной программы. М.: Знание, 1988. - 64 с.

93. Мокроносов А.Т., Гавриленко В.Ф. Фотосинтез, Физиолого-экологические и биохимические аспекты. М.: Изд-во Моск. гос. ун-та, 1992. -320 с.

94. Наградова Н.К. Белок-белковые взаимодействия в функционировании НАД -зависимых дегидрогеназ. М.: Наука, 1990. - 56 с.-(44-е Баховское чтение).

95. Наградова Н.К., Муронец В.И. Белок-белковые взаимодействия в функции пиридиннуклеотид-зависимых дегидрогеназ //Успехи биол.химии. -1985.-Т.26.-С.83-107.

96. Наградова Н.К., Муронец В.И. Мультидоменная организация ферментов//Итоги науки и техники. Серия биол.химия. М.: ВИНИТИ, 1991.-Т.38.- 168 с.

97. Насыров Ю.С. Фотосинтез и генетика хлоропластов. М.: Наука, 1975.-261 с.

98. Насыров Ю.С. Генетика фотосинтеза и селекция. М.: Знание, 1982. - 64 с.

99. Насыров Ю.С. Генетическая регуляция формирования и активности фотосинтетического аппарата //Физиология фотосинтеза. М.: Наука, 1982. -С.146-164.

100. Насыров Ю.С. Генетическая модификация углеродного обмена: перспективы повышения продуктивности растений // Журн. Всесоюз. Хим. 0-ва им. Д.И.Менделеева. 1986. - Т.31, вып.6. - С.583-589.

101. Ничипорович А.А. Фотосинтез и теория получения высоких урожаев,- М.: Наука, 1956. 94 с. - (XV Тимирязевское чтение).

102. Ничипорович А.А. Пути управления фотосинтетической деятельностью растений с целью повышения их продуктивности //Физиология сельскохозяйственных растений. М.: МГУ, 1967. - С.309-353.

103. Ничипорович А.А. Физиология фотосинтеза и продуктивности растений //Физиология фотосинтеза. -М.: Наука, 1982. С.7-33.

104. Ничипорович А.А. Фотосинтетическая деятельность растений как основа их продуктивности в биосфере и земледелии //Фотосинтез и продукционный процесс. М.: Наука. 1988 - С.5-28.

105. Ньюсхолм А., Старт X. Регуляция метаболизма. М.: Мир, 1977.273с.

106. Павловец В.В., Романова А.К. Межмолекулярные взаимодействия НАДФ-маликэнзима и ферментов фазы карбоксилирования в экстрактах из листьев кукурузы/УФизиология растений. 1997. - Т.44. -С.325-330.

107. Расулов Б.Х. Регуляция фотосинтетического газообмена в интактных листьях хлопчатника: Дис. .д-ра биол. Наук. Душанбе. - 1994. -68с.

108. Розен Р. Принципы оптимальности в биологии. М.: Мир, 1969.128 с.

109. Романова А.К. Методы выделения ферментов фазы карбоксилирования восстановительного пентозофосфатного цикла //Методы выделения белков-компонентов фотосинтетического аппарата. Пущино-на-Оке, 1973.-C.33-52.

110. Романова А.К. Регуляция автотрофной ассимиляции углекислоты при фотосинтезе и хемосинтезе //Успехи микробиологии. М., 1975. - Т. 10. -С.27-40.

111. Романова А.К. Биохимические методы изучения автотрофии у микроорганизмов. -М.: Наука, 1980. 160 с.

112. Романова А.К. Рибулозо-1,5-бисфосфаткарбоксилаза-оксигеназа // Успехи биол.химии. 1991. - Т.32. - С.87-113.

113. Романова А.К., Павловец В.В. Надмолекулярные комплексы ферментов автотрофной ассимиляции углекислоты при фотосинтезе //Физиология растений. 1997. - Т.44. - С.264-274.

114. Романова А.К., Русинова Н.Г., Васильева Н.Я., Корницкая В.М. Рибозофосфатизомераза, фосфорибулокиназа и рибулозодифосфат-карбоксилаза в экстрактах из клеток Tiobacillus thiooxidans 58R. // Биохимия, 1973.-Т.,№3 .-С.454-456.

115. Русинова Н.Г., Ле Тхи Лан Оань, Доман Н.Г. Способ получения В-рибулозо-5-фосфата. Авторское свидетельство, №72657,1978.

116. Русинова Н.Г., Jle Тхи Лан Оань, Сеитова Т.А., Доман Н.Г. Полярографическое определение оксигеназной активности рибулозо-1,5-бисфосфаткарбоксилазы/оксигеназы. //Биохимические методы/Под ред.

117. B.Л.Кретовича, Т.Ф.Шольца. М.: Наука, 1980. - С.100-102.

118. Скоупс Р. Методы очистки белков. М.: Мир, 1985. - 358 с.

119. Страйер Л. Биохимия. М.: Мир. - 1984. - T.I. - 232 с.

120. Тарчевский И.А. Основы фотосинтеза. М.: Высш. шк., 1977.255с.

121. Фархади З.Н. Изменения функции рибулозо-1,5-бисфосфаткарбоксилазы/оксигеназы в онтогенезе листа: Автореф.дис. .канд.биол.наук. Душанбе, 1987. - 23 с.

122. Фархади З.Н., Алиев К.А. Накопление и активность рибулозобисфосфаткарбоксилазы в онтогенезе листа хлопчатника//Тез.докл. Всесоюзного симпозиума «Связь метаболизма углерода и азота при фотосинтезе». Пущино, 1985. - С.76-77.

123. Фархади З.Н., Алиев К.А., Васильева В.Н. Онтогенетические изменения содержания и функции рибулозодифосфаткарбоксилазы листьев хлопчатника//Докл.АН Тадж.ССР. 1983. - Т.26, №10. - С.662-665.

124. Фершт Э. Структура и механизм действия ферментов. М.: Мир, 1980.-432 с.

125. Физиология фотосинтеза/Отв.ред. А.А.Ничипорович. М.: Наука, 1982.-316 с.

126. Филиппович И.И., Ноздрина В.Н. Изолирование и электронно-микроскопическая характеристика первичных мембран хлоропластов гороха //Физиология растений. 1983. - Т.30. - С.233-240.180

127. Филиппович И.И., Ноздрина В.Н., Геловани К.Г. Белоксинтезирующий аппарат хлоропластов: организация и роль в биогенезе мембранУ/Современные проблемы биохимии/Под ред. Г.К.Скрябина, М.С.Одинцовой. М.: Наука. - 1991. - С.60-72.

128. Фотосинтез /Под ред. Говинджи. М.: Мир, 1987. - 470 с.

129. Фридрих П. Ферменты: четвертичная структура и надмолекулярные комплексы. М.: Мир, 1986. - 374 с.

130. Хасанов И.К., Ахмедов Ю.Д. Некоторые кинетические свойства фосфорибулокиназы из листьев шпината //Докл. АН ТаджССР. 1982. - Т.25, №9.-С.554-560.

131. Хасанов И.К., Ахмедов Ю.Д. Влияние рН и температуры на активность фосфорибулокиназы //Докл. АН ТаджССР. 1983. - Т.26, №2. -С.110-112.

132. Хасанов И.К., Ахмедов Ю.Д. Влияние субстратов на активность фосфорибулокиназы //Докл. АН ТаджССР. 1983. - Т.26, №6. - С.392-394.

133. Хасанов И.К., Иванищев В.В., Доман Н.Г. Кинетические исследования влияния субстратов на активность фосфорибулокиназы //Биохимия. 1986. - Т.51, №8. - С.1242-1248.

134. Хасанов И.К., Иванищев В.В., Курганов Б.И. Ингибирование фосфорибулокиназы из листьев бобов продуктами ферментативной реакции //Биохимия. 1987. - Т.52, вып.4. - С.531-538.

135. Хочачка П., Сомеро Дж. Стратегия биохимической адаптации. -М.: Мир, 1977.-398 с.

136. Чугунова Н.К., Карташов И.М., Холоденко Н.Я., Музафаров Е.Н. Влияние кинетина на активность растворимой и мембраносвязанной рибулозо-1,5-бисфосфаткарбоксилазы хлоропластов гороха//Физиология растений. 1993. - Т.40. - С.16-31.

137. Эволюция функций в растительном мире. Ленинград: Наука, 1985. с.

138. Эдварде Дж., Уокер Д. Фотосинтез Сз и С4 растений: механизмы и регуляция. М.: Мир, 1986. - 598 с.

139. Юлдашев X. Физиолого-биохимические параметры активности фотосинтетического аппарата хлопчатника: Автореф.дисс.д-ра биол.наук.-Душанбе, 1996. 43 с.

140. Юлдашев Х.Ю., Якубова М.М., Гиясов Т.Д. Содержание белка и фотосинтетическая активность листьев различных форм хлопчатника // Тез.докл.Всесоюзного общ-ва физиологов растений. Часть II. Москва. -1992. -С.52.

141. Якубова М.М. Структурные и функциональные особенности фотосинтетического аппарата мутантов арабидопсис Талиана //Биохимия. -1980. Т.45, №5. - С.864-872.

142. Якубова М.М. Функциональные особенности и структурная организация фотосинтетического аппарата с высокой активностью: Автореф.дис. .д-ра биол.наук. М., 1984. - 46 с.

143. Якубова М.М., Юлдашев Х.Ю. Онтогенетические изменения фотосинтетического метаболизма углерода у гетерозисных форм хлопчатника //Докл.Академии наук Республики Таджикистан ТаджССР. -1983. Т.26, №11. - С.664-665.

144. Якубова М.М., Юлдашев Х.Ю. Фотосинтетический метаболизм углерода в онтогенезе листа хлопчатника //Научные доклады высшей школы, сер.биол.наук. -1984.- №6. -С.60-63.

145. Adler К., Агсопа С., Maunteufell R., Suss К.-Н. Electron-microscopical localization of chloroplast proteins by immunogold labeling of cryo-embedded spinach leaves //Cell.Biol.Yutem. 1993. - V.17. - P.213-220.

146. Anderson L.E. Chloroplast and cytoplasmic enzymes. Pea leaf ribose-5-phosphate isomerase //Biochem.Biophys.Acta. 1971. - V.235. - N 1. - P.245-249.

147. Anderson L.E. Ribose-phosphate isomerase and ribulose-5-phosphate show apparent specificity for a specific ribulose-5-phosphate species//FEBS Lett. -1987.-V.212.-P.45-48.

148. Anderson L.E., Goldhaber-Gordon L.M., Li D., Tang X.Y., Pracosh W. Enzyme-enzyme interaction in the chloroplast: glyceraldehyde-3-phosphate isomerase and aldolase //Planta. 1995. - V.196. - P.245-255.

149. Anderson L.E., Worten L.E., Fuller R.C. The role of ribose-5-phosphate isomerase in regulation of the Calvin cycle in Rhodospirillum rubrum/jin: Comparative Biochemistry and Biophysics of Photosynthesis. Tokyo. - 1968. -P.379-386.

150. Atkinson D.E. Enzymes as control elements in metabolic regulation // The enzymes. (Boyer P.D., ed.). Academic Press, New-York-London. 1970. -V.1.-P.461-489.

151. Axelrod В., Jang R. Purification and properties of phosphoribulokinase from alfalfa //J.Biol.Chem. 1954. - V.209. - N 2. - P.847-855.

152. Axelrod B. Pentose phosphate isomerase //Methods in enzymol. -1955. -V.L P.363-366.

153. Besford R.T., Withers A.S., Ludwig L.J. Ribulose bisphosphate carboxylase activity and photosynthesis during leaf development in the tomato //J.Exp.Bot. 1985. - V.36. -N 171. -P.1530-1541.

154. Bjorkman O. Carboxydismutase activity in relation to light-saturated rate of photosynthesis in plants from exposed and shaded habitats//Annual report of the director department of Plant Biology. 1966. - N94305.

155. Calvo Y.M., Fink G.R. Regulation of biosynthetic pathways in bacteria and fungi //Annu.Rev.Biochem. 1971. - V.40. - P.943-968.

156. Cerff R. Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase (NADP) from Sinapis alba L. NAD(P)-induced conformational changes of the enzyme//Eur.J.Biochem. 1978. - V.82. -P.45-53.

157. Cerff R. Quartemary stmcture of higher plant glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase //Eur.J.Biochem. 1979. - V.94. -P.243-247.

158. Clasper S., Easterby J.S., Powls R. Properties of two high-molecular-mass forms of glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase from spinach leaf. One of which possesses latent phosphoribulokinase activity //Eur.J.Biochem. 1991. -V.202.-P. 1239-1246.

159. Davis B.J. Disc electrophoresis. Method and application to human serum proteins //Ann.N.Y.Acad.Sci. 1964. - V. 181. - P.404-427.

160. Dische Z., Borenfreund E.A. a new spectrophotometry method for the detection and determination of the ketosugars and trioses //J.Biol.Chem. 1951. -V.192.-N2.-P.583-587.

161. Easterby J.S. The analysis of metabolic channeling in multienzyme complexes and multifunctional proteins //Biochem.J. 1989. - V.264. - P.605-607.

162. Ellis R.Y. the most abundant protein in the world //Trends Biochem. Sci. -1979.-V.4.-P.241-244.

163. Gaertner F.H., Fink G.R. Regulation of biosynthesis pathways in bacteria and fungi //Annu.Rev.Biochem. 1971. - V.40. - P.943-968.

164. Ginsburg A., Stadtmann E.R. Multienzyme systems //Ann.Rev.Biochem. -1970.-V.39.- P.429-472.

165. Gontero В., Lebreton S. Multienzyme complexes involved in the Benson-Calvin cycle and in fatty acid metabolizm //Dans. Ann.plant.Reviews/ -V.7.- Acad.Press.-2001. -P. 120-150.

166. Gontero В., Cardenas M.L., Ricard J.A. A functional five-enzyme complex of chloroplast involved in the Calvin cycle //Eur.J.Biochem. 1988. -V.l 73 .-P.43 7-443.

167. Gontero В., Guidici-Orticoni M., Ricard J.A. The modulation of enzyme complexes. 2. Information transfer within a chloroplast multi-enzyme complex containing ribilose-l,5-bisphosphate carboxylase-oxygenase //Eur.J.Biochem. -1994.-V.226.-P.999-1006.

168. Hall N.P., Tolbert N.E. A rapid procedure for the isolation of ribulose bisphosphate carboxylase/oxygenase from spinach leaves //FEBS Lett. 1978. -V.96.-P.167-169.

169. Halper L.A., Srere P.A. Interaction between citrate synthase and mitochondrial malate dehydrogenase in the presence of polyethilene glycol //Arch.Biochem.Biophys. 1977. - V.184. -P.529-534.

170. Hosur M.V., Sainis Y.K., Kannan K.K. Crystallization and X-ray analysis of multienzyme complex containing RUBISCO and RuBP //J.Mol.Biol. -1993.-V.234.-P. 1274-1278.

171. Howell S.H., Mondriakis E.N. Fuction of the quantosome in photosynthesis: structure and properties of membrane bound particle active in the dark reactions of photophosphorilations // Proc.Natl.Acad.Sci. 1967. - V.58. -P.1261-1265.

172. Hurwitz J., Weissbach A., Horecker B.L., Smymiotis P.Z. Spinach phosphoribulokinase // J.Biol.Cem. 1956. - V.218. - N 2. - P.769-783.

173. Hurwitz J. Phosphoribulokinase //Methods in enzymology. 1962. -V.5.-P.258-261.

174. Hyde C.C., Ahmed S.A., Padlan E.A., Miles E.W., davies D.R. three dimensional structure of the tryptophan synthase LzBs multienzyme complex from Salmonella typhimurim //J.Biol.Chem. 1988. - V.263. -P. 17857-17871.

175. Kawashima N. Comparative studies on fraction I protein from spinach and tobacco leaves //Plant cell Physiol. 1969/ - V.10. - P.31-40.

176. Kawashima N., Wildman S.G. A model of the subunit structure and fraction I protein//Biochem.Biophys.Res.Commun. 1970. - V.6. - P. 1463-1468.

177. Kawashima N., Tanabe Y. Purification and properties od D-ribose phosphate isomerase from tobacco leaves //Plant and Cell Physiol. 1976. - V.17. -N4.-P.757-764.

178. Kawashima N., Tanabe Y. Stabilization of ribose-5-phosphate isomerase from tobacco //Plant and Cell Physiol. 1976a.

179. Keleti Т., Ovadi J., Batke J. Kinetic and physico-chemical analysis of enzyme complexes and their possible role in the control of metabolism // Prog.Biophys.Mol.Biol. 1989. -V.53. -P.105-152.

180. Krieger T.J., Miziorko H.M. Affinity labeling and purification of spinach leafribulose-5-phosphate kinase //Biochemistry. 1986. - V.25. - P.3496-3501.

181. Laurell G.B. Quantitative Estimation of protein by electrophoresis in agarose gel containing antibodiesV/AnalytBiochem. 1966. - V.15. - P.45-52.

182. Leegood R.C. Enzymes of the Calvin cycle //Methods Plant Biochem. -1990.-V.3.-P.15-37.

183. Lowry O.H., Rosenbrough N.J., Farr A.L., Randall R.J. Protein measurement with the Folin phenol reagent //J.Biol.Chem. 1951. - V.I 93. - N 2. -P.265-275.

184. Mc Curry S.D., Gee R., Tolbert N.E. Ribulose-l,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase from spinach, tomato or tobacco leaves // Methods in enzymology/Eds.Colowick S.P., Kaplan N.O. New York.: Acad.Press. 1982. -V.90.-P.515-61L

185. McElroy R.D., Johnson E.J., Johnson M.K. Characterization of ribulose diphosphate carbpxylase and phosphoribulokinase from Thiobacillus thioparus and T.neapolitanus //Arch.Biochem.Biophys.Communs. 1968. - V.127. -Nl-3. -P.310-321.

186. Mc Neil P.H., Walkez D.A. The effect of magnesium and other ions on the distribution of ribulose-l,5-bisphosphate carboxylase in chloroplast extracts //Arch.Biochem. andBiophys. 1981. - V.208. -P. 184-188.

187. Martin S.R., Burgos J.A. A new method for determining enzyme kinetic constants //Ann.Fac.vet.Leon. 1979. - V.25. - P.295-307.

188. Margnes LA., Ford D.M., Muschinec G., Anderson L.E. Photosynthetic carbon metabolism in isolated pea chloroplasts: metabolic levels and enzyme activities //Arch.Biochem.Biophys. 1987. - V.252. - P.458-466.

189. Mendes P., Kell D., Westerhoff H.V. Channeling can decrease pool size //Eur.J.Biochem. 1992. - V.204. -P.257-266.

190. Mendiola L., Akazawa T. Partial purification and the enzymatic nature of fraction I protein of rice leaves //Biochemistry. 1964. - V.3. - N 2. - P. 173-179.

191. Mikka S.I., Inghom K.C. Influence of self association of proteins on their precipitation by polyethylene glycol //Arch.BiochemBiophys. 1978. -V.191. -P.525-536.

192. Mori H., Tetzuko Т., Akazawa T. Loose association of ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase with chloroplast thylakoid membranes //Photosynthesis research. 1984. - V.5. - P.17-23.

193. Muller B. A labile COi-fixing enzyme complex in spinach chloroplasts //Z.Naturforsch. 1972. - V.276. - N 8. - P.295-303.

194. Murashige Т., Skoog F.A. A revized medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures //Physiol. Plant. 1962. - V.I 5. - P.473-497.

195. Ovadi J. Physiological significance of metabolic channeling // J.Theor.BioL 1991. - V.152. - P.l-22.

196. Ovadi J., Keleti T. Kinetic evidence for interaction between aldolase and D-glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase //Eur.J.Biochem. 1978. -V.85. -P.157-161.

197. Pawlitzki K., Latzko E. Partial separation and interconversion of NADP and NADPH linked activities of purified glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase from spinach chloroplasts //FEBS.Lett. 1974. - V.42. - P.285-288.

198. Peet H.M., Bravo A., Wallace D.H., Ozbun J.L. Phothosynthesis stomatal resistance to yield of field grown dry bean varieties//Crop.sci. 1977. -V.17. -P.287-293.

199. Peterskofsky A., Racher E. The reductive pentose phosphate cycle. Ш. Enzyme activities in cell-free extracts of photosynthetic organisms //Plant Physiology. 1961. -V.36. -P.409-413.

200. Porter M.A. Aggregation states of spinach phosphoribulokinase //Planta. -1990. V.181.- N.3.

201. Porter M.A., Milanez S., Hartman F.C. Purification and characterization of phosphoribulokinase from spinach //Arch.Biochem.Biophys. -1986.-V.245.-P. 14-23.

202. Porter M.A., Stringer C.D., Hartman F.C. Characterization of the regulatory thioredoxin site of phosphoribulokinase //J.Biol.Chem. 1988. - V.263., -P.123-129.

203. Pupillo P., Faggiani R. Subunit structure of three glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenases of some flowering plants //Arch.Biochem.Biophys. -1979 V.194. - P.581-592.

204. Pupillo P., Piccari G.G. The reversible depolymerization of spinach chloroplast glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase. Interaction with nucleotides and dithiothreitol //Eur.J.Biochem. 1979. - V.51. - P.475-482.

205. Руке К.A., Leech Rachel M. Variation in ribulose-l,5-bisphosphate carboxylase content in a rangue of winter wheat genotypes //J.Exp.Bot. 1985. -V.36. - N171. - P.1523-1529.

206. Rault M., Giudici-Orticoni M.-T., Gontero В., Ricard J. Structural and functional properties of multi-enzyme complex from spinach chloroplasts. 1.

207. Stochiometry of the polypeptide chains // Eur.J.Biochem. 1993. - V.217. -P. 10651073.

208. Reed L.J., Cox D.Y. Multienzyme complexes //Hi: The Enzyme (Boyer P.D., ed.). Academic Press, New-York-London. 1970. - V.I. - P.213-240.

209. Ricard J., Giudici-Orticoni M.-T., Gontero B. The modulation of enzyme reaction rates within multi-enzyme complexes. 1. Statistical thermodynamics of information transfer through multi-enzyme complexes //Eur.J.Biochem. 1994. -V.226.-P.993-998.

210. Ruffer-Timer M.E., Bradbeer J.W. The regulation of activity of Zea mays phosphoribulokinase //Advances in photosynthesis Research (Sybesma (ed.). -1984.-V.3.-P.597.

211. Rutner A.G. Spinach 5-phosphoribose isomerase. Purification and properties of the enzyme //Biochemistry. -1970. V.9. -N 1. - P. 178-184.

212. Rutner A.G., Lane M.D. Non-identical subunits of ribulose-diphosphate carboxylase //Biochem.Biophys.Res.Commun. 1967. - V.26. -P.531-537.

213. Sainis J.K., Harris G.C. The association of ribulose-l,5-bisphosphate carboxylase with phosphoriboisomerase and phosphoribulokinase //Biochem. And Biophys.Res.Commun. 1986. - V.139. -N 3. -P.947-954.

214. Sainis J.K., Marriam K., Harris G.C. The association ofd-ribulose-1,5-bisphosphate carboxylase/oxygenase with phosphoribulokinase //Plant Physiol. -1989. V.89. -N 1. -P.368-374.

215. Sainis J.K., Jawali N. Channeling of the intermediates and catalytic facilitation to Rubisko in multienzyme complex of Calvin cycle enzymes //Indian J.Biochem.Biophys. 1994. - V.31. -P.215-220.

216. Smillie R.M. Photosynhetic and respiratory activities of growing pea leaves//Plant Physiology. 1962. - V.37. -N6. - P.716.

217. Srere P.A. The metabolon //Trends Biochem.Sci. 1985. - V.10. -P.109-110.

218. Srere P.A. Complexes of sequential metabolyc enzymes //Annu.Rev.of Biochem. 1987. - V.56. -P.89-124.

219. Srere P.A., Ovadi J. Enzyme-enzyme interactions and their metabolic role //FEBS Lett. 1990. - V.268. - P.360-368.

220. Stadtman E.R. Mechanism of enzyme regulation in metabolism //In: The Enzymes (Boyer P.D., ed). Academic Press. New-York-London. 1970. - V.I. -P.397-459.

221. Sugiyama Т., Akazawa T. Structure and function of chloroplast proteins. 1. Subunit structure of wheat fraction I protein //J.Biochem. 1967. -V.62. -P.478-482.

222. Sugiyama Т., Tomoko J., Akazawa T. Subunit structure ofribulose-1,5-diphosphate carboxylase from Chlorella ellipsoidea //Biochem. 1971. - V. 10. -P.3406-3411.

223. Suss K.-H., Arcona C., Manteuffel R., Adier K. Calvin cycle multienzyme complexes are bound to chloroplast thylacoid membranes of higher plants m situ //Proc.Natl.Acad.Sci. USA. 1993. - V.90. - P.5514-5518.

224. Ushiroyama Т., Fukushima Т., Styre J.D., Spivey H.O. Substrate channeling of NADH in mitochondrial redox processes //Curr.Top.Cell.regul. -1992.-V.33.-P.297-307.

225. Vitto A., Gaertner F.H. Proteolytic inactivation of a pentafunctional enzyme conjugate: coordinate protection by the first substrate// Biochem.Biophys.Res.Commun. 1978. - V.82. -P.977-981.

226. Wara-Aswapati, Kemble R.I., Bradbeen I.W. Activation of glyceraldehydephosphate dehydrogenase (NADP) and phosphoribulokinase in

227. Phaseolus vulgaris leaf, extracts involves the dissociation of oligomers //Plant Physiol. 1980. - V.66. -N 1. -P.34-39.

228. Welch G.R. On the role of organized multienzyme systems in cellular metabolism: A general synthesis //Prog.Biophys.Molec.Biol. 1977. - V.32. -P.103-191.

229. Wolosiuk R.A., Buchanan B.B. Studies on the regulation on chloroplast NADP-lmked glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase //J.biol.chem. 1976. -V.251.-P.6456-6461.

230. Wolosiuk R.A., Buchanan B.B. Regulation of chloroplast phosphoribulokinase by the ferredoxin/thioredoxin system // Arch.Biochem.Bio-phys. 1978. - V.189. -P.97-101.

231. Yonischot G.R., Ortwerth В., Koeppc O.J. Purification and properties of nicitinamide adenine dinucleotide phosphate requiring glyceraldehyde-3 -phosphate dehydrogenase from spinach leaves //J.Biol.Chem. 1970. - V.245. -P.4193-4198.