Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Структурно-функциональная организация растительных клеток привоздействии высокоэнергетических частиц

ВАК РФ 03.00.25, Гистология, цитология, клеточная биология

Автореферат диссертации по теме "Структурно-функциональная организация растительных клеток привоздействии высокоэнергетических частиц"

7 0 9

АКАДЕМИЯ НАУК СССР ИНСТИТУТ ЦИТОЛОГИИ

На правах рукописи

УДК: 620.187: 576.39: 58.03: 621.384.6

ВАСИЛЕНКО Александр Иванович

СТРУКТУРНО-ФУНКЦИОНАЛЬНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ РАСТИТЕЛЬНЫХ КЛЕТОК ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ВЫСОКОЭНЕРГЕТИЧЕСКИХ ЗАРЯЖЕННЫХ ЧАСТИЦ

03.00.25 — клеточная биология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Ленинград 1991 г.

Работа выполнена в отделе цитологии Института ботаники им. Н. Г. Холодного ЛН УССР

Научный руководитель: доктор биологических наук,

проф. Е. Л. Кордюм

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

проф. Л. И. Орел

доктор биологических наук В. М. Михельсон

Ведущее учреждение: Институт биофизики клетки

АН СССР

Защита состоится ¿¿¿ОНА 1991 г. в

на заседании Специализированного совета Д.002.73.01 при Институте цитологии АН СССР по адресу: 194064, Ленинград, Тихорецкий пр., 4.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института цитологии АН СССР.

Автореферат разослан « » раОлЯ 1991 г.

■Ученый секретарь Специализированного совета,

кандидат биологических наук Л. Н. Писарева

©—Институт цитологии АН СССР

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Тема настоящей диссертации "связана с одной из важных и актуальных проблем клеточной биологии - изучением структурной организации и механизмов функционирования клеток растений после действия заряженных частиц высоких энергий - вредоносного и сугубо специфического фактора космического полета.

Уровни радиации, обусловленные космическим излучением, - достаточно велики и возрастают с увеличением длительности и дальности полетов. Дозный эквивалент за пределами магнитосферы Земли для космонавтов в 10 раз превышает уровень предельно допустимых доз, принятый для лиц группы "А" /непосредственно работающих с источниками радиоактивных излучений//1^а* et а1., 1988/.

Высокая плотность иовизаций в треках высокоэнергетических заряженных частиц обуславливает качественно иные механизмы радиобиологического действия, при которых единичная частица в состоянии вызвать гибель целой клетки и даже группы клеток или их трансформацию. Поэтому» обстоятельное изучение радиационного риска космического излучения возможно лишь с привлечением современных цитологических и биофизических подходов с целью адекватного определения всего спектра возникающих радиационных повреждений на клеточном и субклеточном уровнях.

Растения, как основной компонент замкнутых экологических систем жизнеобеспечения в длительных космических полетах, удобны для радиобиологических исследований благодаря простоте культивирования и наличию в них популяций пролиферирующих клеток - меристем /Гудков, 1985/.

Исследования биологического действия частиц высоких энергий непосредственно в условиях космического полета проводились с использованием биосборок типа "Биоблок" и "Еиостек". Круг изучаемых биологических объектов включал бактериальные споры, цисты простейших, семена растений, яйца креветок и насекомых /Акоев, 1979; Григорьев, 1982;

Максимова, 1987; Невзгодина и др., 1984; Horneck et al.,1990; pianei et al., 1974 /, то есть биологические обькты с замедленный обменом веществ. Использование таких экспериментальных систем затрудняет оценку биологического действия заряженных частиц космического излучения на клеточном и субклеточном уровнях /Максимова, 1987/. К недостаткам экспериментов в космосе с использованием биосборок следует отнести их высокую стоимость, сложности идентификации сорта и времени попадания единичных заряженных частиц, а гакяе трудности обеспечения жизнедеятельности активно ые-таболизирующих биологических объектов.

Модельные эксперименты по облучению биологических систем на ускорителях многозарядных ионов имеют весомые преимущества по сравнению с натурными исследованиями в космосе благодаря тому, что в наземных экспериментах получает пучки заряженных частиц с энергиями, близкими к энергиям частиц космического излучения, и в то se время с хорошо известными, легко варьируемыми и воспроизводимыми характернотиками /Зиновьев и др., 1982/.

Цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования являлось изучение нарушений энергетического метаболизма, структурно-функциональной организации растительных клеток и репродукции растений после воздействия частиц высоких энергий.

При этом были поставлены следующие основные задачи:

1. Определить отношение аденилатов АТФ/АДФ в цитозоле клеток корней гороха и культивируемых клеток табака

на ранних этапах пооле облучения ускоренными протонами и ионами гелия.

2. Изучить структурно-функциональную организацию микроядер, образовавшихся в меристематических клетках корней гороха спустя неокольво циклов деления после облучения высоноэнергетическими заряженными'частицами.

3. Определить количественные закономерности образов

вания микроядер после облучения клеток меристемы корней гороха заряженными частицами с различными линейными потерями энергии.

4. Оценить биологическую эффективность ускоренных ионов железа по критерию прорастания облученных этими ионами семян арабицопсиса.

Научная новизна. Впервые выявлены ранние изменения уровня аденилатов АТФ и АДФ и их отношения в цитозоле клеток растений in vivo и in vitro после облучения ускоренными заряженными частицами.

Впервые с помощью ультраструктурного анализа показана различная степень функциональной активности микроядер, образовавшихся в растительных клетках после облучения вы-соноэнергетическими заряженными частицами.

Впервые исследованы количественные закономерности образования микроядер в клетках корневой меристемы растений при облучении заряженными частицами с различными линейными потерями энергии /ЛПЭ/.

Впервые в радиобиологических экспериментах был применен анализ поверхности диэлектрических трековых детекторов с помощью растрового электронного микроскопа для определения плотности потока и пространственного распределения ускоренных заряженных частиц.

Практическая ценность. Полученные данные о сегрегации ядерного материала при воздействии заряженных частиц и образовании микроядер с различной ультраструктурной организацией и функциональной активностью имеют значение для выяснения особенностей радиобиологического действия этого вида излучения на репаративаые и восстановительные процессы в клетках растений. При исследовании модифицирующего влияния различных физиологических факторов на радиационный ответ клеточной системы, важное значение могут иметь установленные нарушения энергетического баланса. Результаты этой работы могут найти применение при разработке удобных тест-систем на основе пролиферирующих кле-

ток растений для оценки биологической эффективности при действии высокоэнергетических заряженных частиц в космосе и плотноионизирующего излучения от искусственных источников на Земле.

Публикация и апробация результатов. По материалам диосертацни опубликовано 8 работ. Результаты исследований докладывались на семинарах отдела цитологии Института ботаники АН УССР Д987 - 1990Д на Ш Республиканской конференции "Электронная микроскопия и вопросы диагностики", Кишинев, 1986; У1Д съезде Украинского ботанического общества, Ивано-Франковск, 1987; У1 Всесоюзном симпозиуме "Ультраструктура растений", Чернигов, 1988; ХХХТХ Меадународном астронавтическом конгрессе МАФ, Бангалор, Индия, 1988; ХХУП Меаду народном конгрессе КОСПАР, Хельсинки, Финляндия, 1988; XXIX Международном астронавтическом конгрессе МАФ, Малага, Испания, 1989; 1У Мех-республиканской конференции "Электронная микроскопия и современная технология", Кишинев, 1990; ХХУШ Международном конгрессе КОСПАР, Гаага, Нидерланды, 1990.

Обьем и структура дисоергацив. Диссертация изложена на 142 страницах, включая 3 таблицы, 54 рисунка и содв!>-жит следующие разделы: введение, обзор литературы, материал и методика исследований, результаты исследований, обсуждение результатов, выводы и литература из 182 публикаций.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙ

В качестве объектов исследований были использованы апексы корней гороха (Pieum sativum) /сорт Уладовснай/, кресо-салата (Luctuca sativa), клетки табака (Nicoti-аыа tabacum) в культуре ±n vitro , а также воздушно-сухие семена арабидопсяса (Arabidopais thaliana).

Наклюнувшиеся семена гороха и кресс-салата проращивали в темноте в течение 2-х суток, семена арабидопсиса проращивали стерильно в чашках Петри на агаризованной среде Ленгриджа-Квитко /Иванов, 1974/ в течение 7-ми суток, культивируемые клетки табака выращивали стерильно в чашках Петри на агаризованной среде Мурасиге-Скуг /Мига-chige and Scoog, 1962/.

Облучение выбранных биологических объектов осуществляли на ускорителях: "У-240" Института ядерных исследований АН УССР /г. Киев/, "УМЗИ-ЗОО" Объединенного института ядерных исследований /г. Дубна/ и "Bevaiac" Лаборатории Э.Лоуренса в Калифорнии /г. Беркли, США/. Характеристики ускоренных ионов представлены в таблице I.

Таблица I. Характеристики заряженных частиц, применявшихся для облучения клеток растений.

Излучение 60Со: 1н 12С 5бРе

Энергия, МэВ/нукл. - : 70 25 10 320 450

ЛПЭ, КэВ/мнм : 0.91 9,3 221 12,6

Флюзнс, см"2 - !э.З'1о]2 3,5-Ю9 7«109 3,3-108 5-105 7 1,25*10' 5*10 950

Дозы, Гр 56??6q!50; юо 50;100 139 0,01; 0,25;1,0 <9,01

Ускорит. - : У-240 У-240 У-240 У-300 Kevalac »

Кдеточ. система Pisum aativua, Hicotiana tabacum • Luctuca lArabi- sativa Idopais •

Методы нсслед. биоломинесцвнтный анализ, анализ ультраструктуры, млкроядераоа тестирование ультра-структ. анализ :ннак-:тива-:ция

Дозиметрия пучков заряяенннх частиц была осуществлена пря помощи комплекса стандартной радиофизической аппа-

2-8706

ратуры, включающей в себя систему коллимирующих щелей, яонозационные камеры и цилиндр Фарадея. Перемещение, замену и криофиксащш биологических объектов выполняли с помощью дистанционно управляемых манипуляторов под визуальным контролем.

Для определения плотности и пространственной неравномерности потока ускоренных ионов 14н применяли электронно-микроскопический анализ поверхности облученного и ватем протравленного твердотельного трекового детектора.

Содержание АТФ в цитозоле клеток корней гороха и культивируемых клеток табака, фиксированных спустя 2 с и 30 мин после облучения ускоренными протонами и ионами гелия путем погружения в жидкий азот, определяли биолюминесцентным методом с применением люциферин-люцифераз-ной ферментной системы по Мэлику-Тиманну /Malik and Thimann, 1980/ с небольшими модификациями.

Перевод АДО в АТФ осуществляли с применением ФЕП -пируваткиназы ло методике Киммича с соавторами /Kimmich et ai., 1975/. Для каждой серии экспериментов готовили три повторности и строили стандартные кривые для АТФ и АДФ.

В клетках корневой меристемы гороха спустя 84 часа после облучения высокоэнергетическими заряженными чаоти-цами исследовали на давленных препаратах аберрации хромосом в метафазе и на постоянных препаратах проводили подсчет микроядер. Давленные препараты окрашивали ацет-орсеином по методике Цунаха с соавторами /Кунах и др., 1975/; срезы окрашивали по Фельгену /Лилли, 1968/. В каждом опыте анализировали не менее 3-х тысяч меристематических клеток.

Для электронно-микроскопического анализа клеток и ра.диационно-индуцированных микроядер, апексы корней гороха спустя 84 часа после облучения на ускорителе фиксировали 2,5 % раствором глютарового альдегида на фосфат-

ном буфере в течение 12 часов и затем фиксировали ОзО^ в течение 2 часов. После обезвоживания и заключения в смесь смол: эпон - аралдит по методике /Ситник и др., 1984/, готовили срезы на ультрамикротоме системы lkb. Срезы фиксировали цитратом свинца и изучали на увеличениях от 4000 до 50000 с помощью -трансмиссионного электронного микроскопа JEM-1200EX.

Для статистической обработки результатов в работе использовали критерий Стьюдента /Бронштейн и Семендяев, 1986/.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Ранние изменения знергообмена в клетках растений in vivo и in vitro при дейотвли ускоренными ионами. Цель данного этапа исследований заключалась в оценке уровней энергообмена и возможностей восстановления растительных клеток посла радиационного воздействия путем определения содержания АТФ, АДФ, а также их соотношения в цитозоле клеток in vivo и in vitro. Биолюминесцентный анализ показал, что уже спустя 20 с после облучения клеток корней гороха относительно низкими дозами гамма-излучения /5 и 20 Гр/ происходит значительное .возрастание цитозольного отношения аденилатов АТФ/АДО по сравнению с уровнем контрольного варианта /см. рис.1/. Однако, при облучении дозами 50 и 100 Гр происходит снижение цитозольного отношения АТФ/АДФ по сравнению с контролем. Для всех уровней доз указанная тенденция сохраняется спустя 30 мин после облучения. Мы предположили, что при облучении низкими дозами гамма-излучения возросшее соотношение АТФ/АДФ может указывать на активацию энергозависимых процессов в клетках.

При действии как ускоренными протонами, так и ускоренными ионами гелия /см. рисунок 2/,в клетках корней

2Х_870б

- 7 -

т/т,

°-е- 0,15

ОД

0,05 0

Рис. I. Цитозольное отношение АТФ/АДО в клетках корней

гороха спустя 20 с и 30 мин после гамма-облучения.

______-о

о— — — О „контр.

__ -V

0-5 Гр ?-20 Гр

' л-50 Гр

01-! 00 Гр

а— —

10° I? 1? I?

время после облучения, с

АМ/АДФ, о.е.

1.2 0,8

0.4

О

Рис. 2. Цитозольное отношение АТФ/АДФ в клетках корней

гороха спустя 2 с и спустя 30 мин после облучения ускоренными ионами гелия.

гороха наблюдали существенное снижение АТФ/АДФ в цитозоле. При облучении ускоренными протонами этот эффект был обусловлен увеличением содержания АДФ. При облучении ионами

гелия происходило уменьшение содержания АТФ, что вызывало

\

о - контроль д - 50 Гр а -100 Гр

\

\

\

V

Ч

ла

10° 101 102 103

время после облучения, с

АТФ/АДФ, о.е. ^ о 0,3

0,2

О-КОНТМЛЪ ^

л-50 гр а-100 Гр

106 I? 10З

время после облучения, с Рис. 3. Цитозольное отношение АТФ/АДФ в культивируемых клетках табака спустя 20 с и 30 мин после гамма-облучения.

АТФ/АДФ, о.е. 1.0

0,8

0,6

0,4

0,2 О

о—

о-контроль д-50 Гр

□ -100 Гр

л

------

10°

101 102 103

время после облучения, с

Рис. 4. Цитозольное отношение АТФ/АДФ в культивируемых клетках табака спустя 2 с и 30 мин после облучения ускоренными ионами гелия.

более чем 2-х кратное снижение уровня АТФ/АДФ.

В культивируемых клетках табака, облученных гамма-лучами, было отмечено снижение уровня АТФ и некоторое снижение уровня АМ практически для всех опытных вариантов, что правело к снижению уровня АТФ/АДФ по сравнению с контролем /см. рпс. 3/. На рисунке 4 показано 2 -

_ о _

3-х кратное снижение цитозольного отношения АТФ/АДФ для всех вариантов эксперимента. Этот эффект был вызван увеличением содержания АДФ в клетках табака, облученных ускоренными ионами гелия. Сходный эффект был выявлен и при облучении ускоренными протонами.

Обнаруженные нами нарушения баланса АТФ/АДФ в цито-золе растительных клеток были более глубоки при облучении ускоренными ионами гелия, чем при облучении ускорен-вшш протонами при одних и тех же дозах. Этот эффект, вероятно, связан с увеличением на порядок ШЭ ионов гелия. Указанная тенденция сохраняется для клеток растений in vivo и in vitro и характеризует общее для этих двух клеточных систем состояние энергетического "голода".

Таким образом, нарушение баланса между аде ниновыми нуклеогидами приводит к сдвигу констант равновесия энергозависимых реакций /Герасименко и Дворжецкий, 1989/, в том числе и процессов репарации, в сторону более низких значений. Учитывая важность этих процессов в защите целостности клеточной ДНК при повреждающем воздействии, состояние энергетического метаболизма может быть лимитирующим звеном в модификации радиационного ответа после действия заряженных частиц высоких энергий.

Цитогенетдческие эффекты при облучении меристемати-ческих клеток корней гороха ускоренными ионами. Дня оценки повреждающего действия высокоэнергетических заряженных частиц на генетический аппарат растительных клеток были проведены цитогенетические исследования облученных клеток при тех же дозовых нагрузках. Наряду с ааализом хромосомных аберраций применяли микроедерное тестирование - быстрый и удобный подход, позволяющий обходиться без обработки клеток химическими мутагенами - блокаторами веретена деления и исследовать клетки на протяжении всего клеточного цикла /Heddle et al., 1983/.

Как показывают данные рис. 5, спонтанный уровень микроядер в клетках корневой меристемы гороха достаточно ни-

Рис. 5. Меристематические клетки с микроядрами, образовавшимися спустя 84 часа после облучения корней гороха ^-лучами, ускоренными протонами и ионами гелия.

50 100 Доза, Гр

зон и весьма стабилен. После облучения гамма-лучами и ускоренными протонами уровень клеток с микроядрами достоверно увеличивался и находился на уровне 6 % от общего количества анализируемых меристематических клеток. После облучения ускоренными ионалш гелия происходило существенное увеличение числа клеток с микроядрами, достигая 40 % от общего числа клеток для дозы 100 Гр. Оцениваемый выход клеток с микроядрами в клетках корней гороха, облученных 14н не превышал 7 %.

Имеющиеся литературные данные о количественных закономерностях образования микроядер при облучении клеток ускоренными ионами /Akhmadieva et al., 1984/ указывают на существование линейных зависимостей этих эффектов от довы. Подученные нами данные по оценке выхода микроядер в клетках корней гороха при облучении сублетальними и летальными дозами заряженных частиц высоких энергий указывают на возможную зависимость этого выхода от ЛПЭ излучения,

Светооптическнй анализ препаратов облученных клеток позволил выявить профазные переотройки части рддиационно-

индуцированиях микроядер, заключающиеся в спирализадии их хромосом синхронно со спирализацией хромосом основного ядра. Хромосомы микроядер в ряде случаев в метафазе образовывали обособленную экваториальную пластинку, что позволяет предположить о наличии в них кинетохора.

Ультраструктурная организация меристематических клеток корней гороха облученных ускоренными ионами. С целью более глубокого изучения процессов, приводящих к сегрегации ядерного материала и к образованию микроядер в облученных высокоэнергетическими заряженными частицами клетках, мы применили ультраструктурный анализ. Применение высоких доз для облучения выбранных биологических объектов было необходимо для эффективного анализа радиацион-но-индударованных микроядер методом электронной микроскопии.

Ультраструктурная организация клеток первичной коры корней гороха на уровне 2-х слойного чехлика в контроле была типичной душ клеток этой зоны /Данилова, 1974/. При анализе ультраструктуры основное внимание было уделено организации ядра. Для необдученных меристематических клеток было характерно округлое ядро с одним ядрышком /размером 2-3 мкм/. Тонкое строение ядрышка /фибриллярный и гранулярный компонент/, а также степень конденсации хроматина отражали определенную фазу клеточного цикла.

Спустя 84 часа после облучения ускоренными протонами , ионами гелия и азота ультраотруктура ядра и ядрышка была без видимых отклонений. Ультраструктурная организация органелл и цитоплазмы клеток с обнаруживаемыми радиаци-онно-индуцированными микроядрами не выявляла явных нарушений функциональной активности или признаков деструкции.

Полученные нами данные показывают, что многие микроядра содержат оформленные ядрышки /см. рис. 6, а/. По степей конденсации хроматина такие микроядра не отличались в значительной степени от основного ядра. Локализация кон-

то

к • »'V % С к . ' ■ » . "

|

й<г ■ -

Рис. б. Ультраструктурная организация микроядер, отличающихся по степени конденсации хроматина/ХЛа;. О, в, г -микроядра с плотно конденсированным хроматином. Обозначения: Мн - микроядро, Яд - ядршко»

то

денсированного хроматина на периферии микроядра указывает на формирование так называемого "ядрышкового канала" /см. рис. 6, а/, что служит доказательством дифференциации рибосомальных генов в хорошо организованные ядрышки и транскрипции этих генов/Gerand et al., 1989/. Наличие в микроядрах ядерных пор указывает на существование ядер-но-цитоп.г.азматяческих обменов. Методом преждевременной конденсации хромосом /Колюбаева и др., 1989/ и с помощью флуорисцирующих антител к центромерам /Marguiis, 1973/ обнаружено, что микроядра могут состоять из одной или нескольких хромосом нормального строения.

В наших исследованиях на светооптическом уровне была установлена возможность участия микроядер в цитокинезе. Многочисленными данными и, в том числе,в экспериментах на хромосомах с синтетическими сEN -фрагментами, связывающими кинетохор /Льюин, 1987/, доказана возможность участия хромосом в цитокинезе при наличии центромеры.

Ультраструктурный анализ микроядер, заполненных плотно конденсированным хроматином /см. pic. 6, а,б,в/ не выявил дифференцированных ядрышек и ядерных пор, что указывает на отсутствие транскрипции рибосомальных генов в составе данных хроматиновых кластеров, отсутствие какой-либо транскрипционной активности их хроматина и ядерно-цитоплазматических обменов /cerand et al., 1989/. Такие образования не принимают участие в цитокинезе и их хромосомный материал не претерпевает митотических перестроек. В этих образованиях выявляются мембрано-подобные структуры /см. рис. 6, в/; происходит их обволакивание цистернами эндоплазматического ретикулума и в конечном итоге, вероятно, элиминация /см. рис. б, г/.

Биологические эффекты ускоренных ионов углерода и железа. Цель данного раздела работы состояла в изучении биологических эффектов единичных ускоренных ионов.

При электронно-микроскопическом исследовании префик-

сированных и фиксированных глютаровым альдегидом сцустя Ю минут после облучения ускоренными ионамя клеток корней кресс-салата не были обнаружены так называемые "микроповреждения мембран"/не1з0а and. ТоЪ1аз, 1903/.

...... Уровень выживания семян арабидопсиса, облученных еда-

нпчными ионами ^Fe, равнялся 53,3±14,2, что соответствует уровню выливания при облучении гамма-лучами в дозе около 300 Гр /Гродзинский, 1989/. Зто согласуется с выводами Кранца /Kranz, 1986/ о том, что ОБЭ высокоэнергетических заряженных частиц по выбранному критерию может превышать значение 10^.

ВЫВОДЫ

1. Исследование структурно-функциональной организации и ростовых характеристик растительных клеток выявило специфические биологические эффекты высокоэнергетических заряженных частиц, отличающиеся от эффектов редкоионизи-рующего излучения.

2. В цитозоле клеток растений in vivo и in vitro в ранние сроки после облучения ускоренными протонами и ионами гелия происходит существенное снижение отношения аденнлатов АТФ/АДФ.

3. Микроядра, образованные в клетках меристемы корней гороха после облучения ускоренными протонами, ионами гелия и азота, имеют различную степень функциональной активности хроматина. Микроядра с хорошо организованными ядрышками и диффузным хроматином, выявляемыми при субмик-роскопическоы анализе - транскрипционно активны и могут, вероятно, принимать участие в клеточном делении. Микроядра, заполненные плотно конденсированным хроматином -транскрипционно неактивны я в последующих циклах деления, по-видимому, элиминируются.

4. Образование микроядер в облученных ускоренными

- Т5 -

ионами меристематических клетках корней гороха зависит от ЛПЭ ионов.

5. По критерию прорастания семян арабидопсиса, облученных единичными ионами железа, биологическая эффективность превышает I03, что уназывает на серьезную опасность космического излучения, в эффективную дозу которого значительный вклад вносят ионы железа.

Список работ, опубликованных по теме дисоертации:

1. Василенко А.И. Изменения содержания АТФ в культуре клеток Haplopappus gracilis (Nutt) A.Grey На начальных этапах клиностатирования // Укр„ бот. журнал. -1986. -Т. 43, Ji 4. - С. 84-85.

2. Василенко А.И., Карнаух И.М. Энергообмен аденоаин-фосфатов в клетках растений in vitro на начальных этапах клиностатирования !) В кн.: Тез докл. наTflllсъезде Украинского ботанического общества, Ивано-Франковск. - 1987.

- Киев: Наукова думка. - 1987. - С. 176.

3. Василенко А.И. Структурно-функциональные особенности пролиферирующих растительных клеток при облучении высокоэнергетическими протонами /У В кн.: Тез докл. У1 Всесоюзного симпозиума "Ультраструктура растений", Чернигов, 1988. - Киев: Наукова думка. - 1988. - С. 143.

4. Zhadko S.I., Baraboy V.A., Polylakh Ju.A., Sidoren-ko P.G. and Vasilenko A.I. Early reactions of plant cells on microgravity and power-energy charged particles // In: Abstracts of the XXXIX International Astronautical Congress IAF. - Bangalore, India. - 1988. - P. 498.

5. Vasilenko A.I., VictorovaN.V., Sidorenko P.G. Structural and functional pecularitiee of proliferative plant cells under the effects of accelerated ions. - Helsinki, Finland. - 1988. - 8 p. -(Preprint/XXVII Plenary Meeting

of the COSPAR, Helsinki, Finland).

6. Kordium E.L., Klimchuk D.A., Martin G.M., Zhadko S.I Vasilenko A.I. and Sidorenko P.G. Prospects of studies in

space phytobiology, Malaga, Spain, 1989 —7 p.— (Preprint / XXXX International Astronautical Congress IAF, Malaga, Spain).

7. Vasilenko A. I. and Sidorenko P. G. Biological effects of accelerated heavy ions on the cellular level in plants. Hague, Netherlands.— 1990,— 17 p. — (Preprint / XXVIII Plenary Meeting of the COSPAR, Hague, Netherlands).

8. Василенко А. И., Сидоренко П. Г. Использование электронной микроскопии для анализа микроядер в клетках растений, как теста радиационных повреждений тяжелыми ионами // В кн.: Сб. тез. IV Межреспубликанской конференции «Электрон-лая микроскопия и современная технология». — Кишинев. — 1990.— С. 45.

Подписано к печати 29.03.91. Формат 60X84'/,6. Офсетная печать. Усл. печ. л. 0,93. Уч.-пзд. л. 0,7. Тир. 100 экз. Зак. 8796.

ППП УкрНИИНТИ, 252171, Киев, ул. Горького, 180.