Изменения лизосом печени крыс при интоксикации гербицидом 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислотой и коррекции полифенольным комплексом из листьев манжетки обыкновенной (Alchemilla vulgaris L. )

Жанаева, Светлана Яковлевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Изменения лизосом печени крыс при интоксикации гербицидом 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислотой и коррекции полифенольным комплексом из листьев манжетки обыкновенной (Alchemilla vulgaris L. )
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Изменения лизосом печени крыс при интоксикации гербицидом 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислотой и коррекции полифенольным комплексом из листьев манжетки обыкновенной (Alchemilla vulgaris L. )"

На правах рукописи

РГВ од

ЖАНАЕВА ? 5 CFH ?

СВЕТЛАНА ЯКОВЛЕВНА

ИЗМЕНЕНИЯ ЛИЗОСОМ ПЕЧЕНИ КРЫС ПРИ ИНТОКСИКАЦИИ ГЕРБИЦИДОМ 2,4-ДИХЛОРФЕНОКСЙУКСУСНОЙ КИСЛОТОЙ И КОРРЕКЦИИ ПОЛИФЕНОЛЬНЫМ КОМПЛЕКСОМ ИЗ ЛИСТЬЕВ МАНЖЕТКИ ОБЫКНОВЕННОЙ (ALCHEMILLA VULGARIS L.)

03.00.04 - биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Новосибирск - 2000

Работа выполнена в ГУ НИИ физиологии и НИИ клинической и экспериментальной лимфологии Сибирского отделения РАМН г. Новосибирск

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор Т. А. Короленко доктор медицинских наук А. А. Зыков

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук А. Р. Колпаков

доктор медицинских наук, профессор О. Р. Грек

Ведущее учреждение:

Институт цитологии и генетики СО РАН (г. Новосибирск)

Защита диссертации состоится " 28 " июня в 10 часов на заседании диссертационного совета (Д. 001. 37. 01.) при Научно-исследовательском Институте биохимии СО РАМН по адресу: 630117, Новосибирск, ул. Академика Тимакова, 2. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ биохимии СО РАМН.

Автореферат разослан "_" мая 2000 г.

Ученый секретарь

специализированного Ученого совета

кандидат биологических наук

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. 2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота (2,4-Д) входит в группу хлорорганических гербицидных препаратов. Впервые гербициды на основе 2,4-Д стали применять в начале 50-х годов и в настоящее время они являются одними из наиболее эффективных и широко применяемых химических средств борьбы с широколиственными сорняками: в США и Великобритании ежегодно применяется свыше I млн. тонн гербицидов группы 2,4-Д (ВОЗ, 1987). Постоянно возрастающие объем выпуска и масштаб применения гербицидов этой группы создают реальную угрозу состоянию окружающей среды и здоровью человека.

Несмотря на длительность применения гербицидов группы 2,4-Д, применяемые методы и лекарственные средства лечения острых и хронических отравлений 2,4-Д, часто малоэффективны. Поэтому и в настоящее время актуальное значение имеет дальнейшее изучение механизмов, лежащих в основе токсического действия гербицидов группы 2,4-Д и изыскание новых лекарственных средств.

Данные литературы указывают на важную роль в патогенезе интоксикации структурно-функциональных нарушений мембран клеток и субклеточных органелл. Взаимодействуя с мембранами растительных клеток, 2,4-Д изменяет мембранный потенциал плазмалеммы; в высоких концентрациях гербицид нарушает барьерную функцию липидного бислоя, повреждая мембраны по детергенгному механизму (Голубев В.Н., Контуш A.C., 1986; Контуш A.C., 1992). Гербициды группы 2,4-Д, изменяя электрический потенциал мышечных и нервных клеток животных, оказывают токсическое действие на центральную и периферическую нервную систему, при острых отравлениях вызывают развитие тяжелой и стойкой миотонии, оказывают неблагоприятное влияние на миокард. (Elo Н., Ylitalo Р., 1977, 1979; Andreasik Z. et al., 1979), проявляют гепатотоксическое действие (Безуглый В.П. с соавт., 1979; Santagostino А. et al., 1991).

На клеточном уровне особого внимания при изучении токсического действия широкого спектра токсических соединений заслуживают лизосомы клеток и их мембраны. Изучение стабильности мембран лизосом клеток печени животных было предложено в качестве дополнительного теста при мониторинге загрязнения окружающей среды (Kohler А., 1991). Реакция лизосомального аппарата на действие широкого спектра токсических соединений

универсальна и часто сопровождается нарушением стабильности мембран лизосом. При чрезмерной активации лизосомального аппарата клеток и нарушении структурной целостности мембран, высокоактивные кислые гидролазы лизосом, поступая в цитоплазму клеток и во внеклеточную среду, оказывают вторичное повреждающее действие на структуру клеток и внутриклеточных органелл (Короленко Т. А., 1983, 1990).

2,4-Д при острых отравлениях в дозе ЛД50, лабклизирует мембраны лизосом, при этом тяжесть симптомов отравления коррелирует со степенью нарушения стабильности мембран, это диктует необходимость поиска мембранопротекторных препаратов, способных стабилизировать мембраны клеток и субклеточных органелл. С этой точки зрения, весьма перспективными могут оказаться препараты, содержащие комплекс полифенольных соединений лекарственных растений.

Полифенольные соединения лекарственных растений обладают гепатопротекторной активностью при тех видах поражения печени, при которых происходит активация процессов перекисного окисления липидов, оказывают противовоспалительное действие, положительно влияют на гидродинамические свойства крови и сердечно-сосудистую систему в целом, процессы регенерации, угнетают реакции ПОЛ и стабилизируют мембраны клеток и клеточных органелл, повышая адаптационные и усиливая компенсаторно-приспособительные реакции организма на клеточном и субклеточном уровне (Бородин Ю.И., 1983; Барабой В.А., 1984; Hikiho Н. et al., 1986; Rao P.V., 1989; Першукова А.М., 1991; Gilani A.U.H., JanbazK.H., 1995).

Цель исследования - определение структурно-функциональных изменений мембран лизосом при токсическом повреждении печени гербицидным препаратом 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислотой и возможность коррекции нарушений с помощью полифенольного комплекса из листьев манжетки обыкновенной (Alchemilla vulgaris L.).

Задачи исследования:

1. Изучить стабильность и повреждаемость мембран лизосом печени крыс при экспериментальной интоксикации 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислотой.

2. Исследовать эффект 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты на стабильность и проницаемость мембран изолированных лизосом i паренхиматозных клеток печени крыс in vitro.

3. Сравнить выраженность изменений лизосом с морфофункциональными характеристиками печени крыс при интоксикации 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислотой.

4. Изучить изменение содержания малонового диальдегида -продукта перекисного окисления липидов в ткани печени после воздействий 2,4-Д.

5. Исследовать возможность коррекции нарушений мембран лизосом печени крыс при действии 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты полифенольным комплексом из листьев манжетки обыкновенной {Alchemilla vulgaris L.).

Научная новизна работы.

Впервые установлено, что воздействия 2,4-Д в течение 4-х дней в ежедневной дозе 150 мг/кг сопровождаются нарушением стабильности и резистентности мембран лизосом печени крыс. Нарушение стабильности мембран лизосом отмечено через 1 и 5 суток после воздействий 2,4-Д. В эксперименте in vitro с использованием изолированных лизосом и паренхиматозных клеток печени крыс показан дозозависимый повреждающий эффект 2,4-Д на мембраны лизосом печени. Установлено, что 2,4-Д в концентрации 10"4 М повышает проницаемость мембран лизосом печени крыс для ионов К+ и не влияет на стабильность мембран лизосом. Гербицид нарушает стабильность мембран изолированных лизосом в концентрации 10"3 М.

Выявлена мембранопротекторная активность полифенольных соединений из листьев манжетки обыкновенной при токсическом повреждении мембран лизосом печени и селезенки крыс гербицидом -2,4-Д и возможность их использования для предупреждения этих нарушений. Комплекс полифенолов из листьев манжетки обыкновенной предупреждает нарушение осмотических свойств лизосом печени крыс (1 и 5 суток) и способствует более быстрому восстановлению стабильности мембран лизосом печени и селезенки крыс при интоксикации 2,4-Д.

Практическая значимость работы.

Полученные данные о нарушении мембран лизосом печени и селезенки крыс, а также данные об усилении перекисного окисления липидов в печени экспериментальных животных при интоксикации 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислотой, дополняют уже существующие представления о механизмах реализации токсического действия 2,4-Д на организм животных и человека.

Показана целесообразность использования полифенольного комплекса из листьев манжетки обыкновенной (Alchemilla vulgaris L.),

сбЛмДиЮ1Дбгс 2ктиоксид^ктными свойствами в качестве спуДСтез> предупреждающего развитие токсического эффекта 2,4-Д.

Положения, выносимые на защиту.

1. 2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота в дозе 150 мг/кг массы животного при ежедневном введении в течение 4-х дней нарушает осмотические свойства лизосом печени крыс и стабильность мембран лизосом печени и селезенки крыс. Степень нарушения стабильности мембран лизосом в печени и селезенке крыс одинакова.

2. 2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота в концентрации 10"2 М повреждает целостность мембран изолированных лизосом. В концентрации 10"3 М гербицид нарушает стабильность мембран изолированных лизосом печени и лизосом изолированных паренхиматозных клеток печени крыс. В концентрации 10"4 М гербицид повышает проницаемость мембран лизосом печени интактных крыс для ионов К+.

3. Полифенольный комплекс из листьев манжетки обыкновенной (Alchemilla vulgaris L.) оказывает положительное действие на структурно-функциональное состояние печени при интоксикации крыс 2,4-Д, проявляет мембранопротекторные свойства, оказывая защитное действие на мембраны лизосом печени и селезенки крыс в условиях дестабилизирующего воздействия 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты.

Апробация работы. Результаты работы были доложены на 3-м съезде физиологов Сибири и Дальнего Востока, [Новосибирск, 1997]; на 1-ой молодежной научной конференции Новосибирского научного центра СО РАМН, [Новосибирск, 1999]; на 1-й молодежной научной конференции Института физиологии СО РАМН, [Новосибирск, 1999], на межлабораторном семинаре Института физиологии СО РАМН, [Новосибирск, 1999].

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 153 страницах и состоит из введения, обзора литературы, глав "Материалы и методы исследования", "Результаты", "Обсуждение результатов" и "Выводы". Иллюстративный материал представлен в 23 таблицах и 17 рисунках, список литературы содержит 102 отечественных и 152 зарубежных источников.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Лабораторные животные. Исследования выполнены на 10 половозрелых крысах самцах линии Wistar из вивария Института цитологии и генетики, массой 180-250 г.

Для изучения действия 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты на мембраны лизосом печени крыс гербицид (ЧДА) вводили перорально при помощи зонда в дозе 150 мг/кг массы животного. Способ введения гербицида был выбран в связи с тем, что большую часть пестицидов (до 85%) человек получает с пищей (Шарманов Т.Ш., 1990). При изучении защитного эффекта фармакологического средства из листьев манжетки обыкновенной (Alchemilla vulgaris L.) на мембраны лизосом и паренхиматозных клеток печени препарат вводили перорально в дозе 10 мг/кг массы животного с помощью зонда за час до введения гербицида. В этой концентрации комплекс полифенолов из листьев манжетки не оказывал токсического эффекта при длительном введении (Зыков A.A., 1992). Препарат манжетки разработан в лаборатории фитохимии Центрального Сибирского Ботанического Сада (авторское свидетельство №1073916 «Способ получения Р-витаминного средства», авторы: Азовцев Г.Р., Изюмов Е.Г., Зыков A.A. 15 октября 1983 г). Фармакологическое средство из листьев манжетки обыкновенной (Alchemilla vulgaris L.) не менее чем на 50% состоит из полифенольных соединений (Теслов C.B., Макарова Л.С., 1969).

Препараты манжетки и 2,4-Д вводили в течение 4 дней в утренние часы (9-10 часов). Для введения использовали свежеприготовленные водные растворы. Животных декапитировали через 1 и 5 суток после введения препаратов. Согласно литературным данным, при острых отравлениях 2,4-Д в дозе 600 мг/кг через 24 часа после однократного введения препарата наблюдаются наиболее значительные нарушения лизосомального аппарата клеток печени крыс, нормализующиеся на 5 сутки (Кенигсберг Я.Е., Гриц М.А., 1978).

Методики исследования. Гомогенат печени и селезенки крыс получали согласно методике де Дюва и соавт. (1955). Выделение фракции лизосом из печеночного гомогената осуществляли с помощью дифференциального центрифугирования в 0,25 M растворе сахарозы (deDuve, 1955).

Стабильность мембран лизосом печени оценивали по соотношению свободной и общей активности кислой фосфатазы -маркерного фермента лизосом и устойчивости мембран лизосом фракции лизосом печени к действию повреждающих агентов (гипотонического раствора сахарозы и 0,025% раствора тритона Х-100) (Wattiaux, 1966; Neely et al., 1974).

Проницаемость мембран изолированных лизосом печени крыс оценивали по степени увеличения свободной активности кислой

фосфатазы через 1, 2 и 24 часа инкубации фракции лизосом в изотоническом растворе KCl (Forster S., Lloyd J.B., 1987).

Свободную активность кислой фосфатазы определяли сразу же после приготовления гомогенатов органов. Инкубационная смесь содержала 0,25 M раствор сахарозы, время инкубации не превышало 10 мин. Величину свободной активности выражали в % от общей активности фермента. Удельную активность ферментов лизосом определяли после инкубации образцов в 0,1% р-ра тритона Х-100 (конечная концентрация), что приводило к полному разрушению лизосомальных частиц (Barrett A.J. 1972).

Активность кислой фосфатазы определяли

спектрофотометрическим методом, основанном на определении количества неорганического фосфата, высвободившегося в результате ферментативного гидролиза ß-глицерофосфата (de Duve С. et al., 1955). Количество неорганического фосфата определяли по методу Фиске и Субароу (Fiske, Subarow, 1925). Активность ß-галактозидазы определяли спектрофотометрически с использованием в качестве субстрата 4-нитрофенил-Р-0-галактопиранозида (Barrett A.J., 1972). Активность катепсина D определяли используя в качестве субстрата 2% раствор азоказеина (Wiederanders В., Oelke В., 1986). Содержание белка определяли по методу Лоури с соавт. (Lowry О. et al., 1951).

Определение in vitro антиоксидантной активности комплекса полифенолов из листьев манжетки обыкновенной (Alchemilla vulgaris L.) проводили по методу В.И. Бенесович и Л.И. Идельсон (1973) в модификации В.И. Журавкова с соавторами (1998). Для инициирования перекисных процессов использовали 2,2% раствор Н202. Растворы комплексного препарата листьев манжетки обыкновенной готовили на буферно-физиологическом растворе, приготовленном из равных объемов 0,06 M фосфатного буфера и физиологического раствора (pH 7,4). Конечная концентрация полифенольного комплекса манжетки в среде инкубации составляла от 10 нг/мл до 10 мкг/мл. Степень перекисного гемолиза-рассчитывали как отношение экстинкции пробы, содержащей раствор антиоксиданта, к экстинкции той же пробы после полного гемолиза. Перекисную резистентность эритроцитов рассчитывали как величину обратную степени гемолиза.

Количество малонового диальдегида в изучаемых образцах ткани определяли по методу И.Д. Стальной и Т.Г. Гаришвили (1977).

Микроскопическое исследование печени крыс проводили совместно с д.м.н. C.B. Мичуриной. Для светооптического изучения морфологических изменений в печени кусочки средней доли печени

фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина в течение суток, затем образцы обезвоживали в серии спиртов, возрастающей концентрации и заключали в парафин (Волкова О. В., Елецкий Ю. К., 1982). Срезы толщиной 4-5 мкм окрашивали гематоксилином и эозином и заключали в канадский бальзам. Морфометрические исследования образцов печени проводили общепринятыми методами в соответствии с рекомендациями В.А. Шкурупия (1989) и Г.Г. Автандилова (1973, 1990). В печени при помощи морфометрической сетки определяли объемную плотность гепатоцитов, их ядер, синусоидальных клеток, просвета синусоидов; численную плотность гепатоцитов, двуядерных гепатоцитов и синусоидальных клеток.

Обработку результатов производили с использованием пакета компьютерных прикладных программ Statistica, применяя t-критерий Стьюдента (Лакин Г.Ф., 1990). .

СОБСТВЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Реакция лизосомального аппарата клеток на действие широкого спектра токсических соединений часто универсальна и сопровождается активацией кислых гидролаз, лабилизацией мембран лизосом, усилением синтеза первичных лизосом и является частью компенсаторно-приспособительных реакций организма на клеточном уровне (Покровский A.A., Тутельян В.А., 1976; Панин Л.Е., Маянская H.H., 1987).

Влияние 2,4-Д на мембраны лизосом печени интакггных крыс в эксперименте in vitro

В эксперименте in vitro в условиях, исключающих опосредованное воздействие через регуляторные системы организма, выявлено прямое токсическое действие 2,4-Д на мембраны грубой фракции лизосом печени крыс. Гербицид нарушал стабильность мембран лизосом печени крыс в концентрации 10'3 М. В этой дозе действие препарата согласно данным Л.Н. Воробьева и Л. Манусаджянас (1984) аналогично действию разобщителей при установлении Н+ пробоя. В концентрации 10"4 М препарат не оказывал существенного влияния на стабильность мембран лизосом (табл. 1).

В эксперименте in vitro при изучении опосредованного действия 2,4-Д на изолированные паренхиматозные клетки печени крыс, было показано, что гербицид в одних и тех же концентрациях вызывает более значительное повышение свободной активности

кислой фосфатазы в гомогенате" клеток, чем во фракции лизосом (табл. 1). При инкубации гепатоцитов с 2,4-Д в концентрации 10"3 М свободная активность кислой фосфатазы в гомогенате клеток возросла в 1,8 по сравнению с контролем, ив 1,6 раза превышала соответствующий показатель во фракции изолированных лизосом (р<0,05). В концентрации 10*2 М 2,4-Д резко нарушала целостность мембран лизосом гепатоцитов крыс, в 4,5 раза повышая уровень свободной активности кислой фосфатазы.

Гербицид в концентрации КГ4 М повышал проницаемость мембран изолированных лизосом печени интактных крыс для ионов калия. При инкубации лизосом печени крыс в изотоническом растворе КС1 в присутствии в среде инкубации 2,4-Д в концентрации 10"4 М свободная активность кислой фосфатазы возрастала значительнее, чем в лизосомах, инкубировавшихся в растворе сахарозы (рис. 1).

Таблица 1

Влияние 2,4-Д на свободную активность кислой фосфатазы фракции лизосом печени и изолированных гепатоцитах крыс

Свободная активность

Концентрация кислой фосфатазы, %

2,4-Д, М. фракция лизосом гепатоциты

12,9+0,8 16.2+2.7

ОМ 100% 100%

(7) (8)

- 74.5+9.4 *

10"2М 458%*

(6)

18,6+0,6* 28.9+4.2 *

103М 144% 178% *

(б) (5)

14,9+0,8 24.2+3.6

Ю^М 116% 148%

(7) (6)

Примечание: Свободная активность кислой фосфатазы выражена в % по отношению к общей активности фермента. * - р<0,001 - достоверность различий с контролем.

% 45 -40353025 20 15

10.

-i—

Оч

-Раствор сахарозы -KCL

2ч

24 ч

Рис. 1 Влияние in vitro 2,4-Д в концентрации 10 М на проницаемость мембран лизосом печени крыс для ионов калия

* - р < 0.05 по сравнению с контролем.

Свободная активность кислой фосфагазы (КФ) выражена в %

от общей активности

Структурно-функциональные изменения мембран лизосом печени крыс при интоксикации 2,4-Д (in vivo)

2,4-Д при пероральном введении в ежедневной дозе 150 мг/кг в течение 4-х дней оказывала гепатотоксическое действие. Морфологическое исследование печени выявило наличие деструктивных и некробиотических изменений паренхимы печени. Внутри печеночных долек через сутки после повторных воздействий 2,4-Д наблюдали большое количество клеток, с признаками паренхиматозной зернистой дистрофии, являющейся характерной для нарушений белкового обмена. Через 5 суток отмечали наличие гепатоцитов с баллонной дистрофией, возникающей при распаде мембранных структур клетки, а также гепатоциты в состоянии паранекроза или некроза. Разрушение гепатоцитов, а также повышенная функциональная нагрузка на орган, связанная с необходимостью нейтрализовать токсикант, стимулировали компенсаторные процессы. В отдельных участках долек печени появились группы интенсивно делящихся мелких клеток, нарушающих радиальный ход балок, в 2 раза возросла доля двуядерных гепатоцитов

(р<0,001). Относительная объемная плотность ядер гепатоцитов и ядерно-цитоплазматическое отношение возросли в 1,2 раза по сравнению с интактными животными (р<0,001).

Обнаружены циркуляторные нарушения. Центральные вены и сосуды триад были расширены и полнокровны, желчные протоки дилатированы. Наблюдалось чередование участков расширенных синусоидных кровеносных капилляров с ишемически спазмированными, с преобладанием последних, объемная плотность синусоидных капилляров понизилась (р<0,001) по сравнению с показателем интактных животных.

Происходило нарушение функциональной способности печени экспериментальных животных (рис. 2).

Активность аланинаминотрансферазы (АЛТ) в сыворотке крови крыс через 1 и 5 суток после воздействий 2,4-Д в 2,5 и 2,2 раза соответственно превышала показатель интактных животных (рис. 2).

интактные 2,4-Д 1 сут 2,4-Д 5 сут

* - р<0.001

Рис. 2 Изменение активности АЛТ в сыворотке крови крыс через 1 и 5 суток после воздействий 2.4-Д

АЛТ является цитоплазматическим ферментом, локализованным преимущественно в гепатоцитах, и увеличение активности фермента в сыворотке крови рассматривают как признак поражения паренхимы печени (Блюгер А.Ф., 1978).

У этих животных через 1 и 5 суток после воздействий 2,4-Д обнаружены значительные структурные нарушения лизосом печени. Происходило нарушение стабильности мембран лизосом: свободная активность кислой фосфатазы во фракции лизосом печени крыс более чем в 2 раза (1 и 5 сут.) превышала показатель интактных животных.

Изменялись осмотические свойства лизосом печени экспериментальных животных. Прирост свободной активности кислой фосфатазы после обработки фракции лизосом печени в гипотоническом растворе сахарозы был ниже, чем у интактных животных (табл. 2).

Снижение прироста свободной активности ферментов лизосом в гипотонической среде можно рассматривать как признак нарушения структурной целостности мембран лизосом и гибели части популяции лизосом (очевидно, вторичных лизосом). Так, например, при СС14 гепатите у крыс, когда происходила гибель части и образование новой популяции лизосом гепатоцитов, прирост свободной активности ферментов лизосом в гипотонической среде был ниже, чем у интактных животных (Короленко Т. А., 1983)

Значительное, почти в три раза, повышение активности кислой фосфатазы в сыворотке крови экспериментальных животных также косвенно свидетельствует о нарушении структурной целостности мембран лизосом (табл. 2, 3). Повышение активности ферментов лизосом в сыворотке крови считают ранним и весьма чувствительным тестом, свидетельствующем о деструктивных процессах в тканях организма (Короленко Т.А., 1985; Маянская Н.Н с соавт., 1990).

Под влиянием 2,4-Д происходило повышение удельной активности катепсина Б в печени крыс (5 суток), активность кислой фосфатазы и р-галактозидазы изменялась незначительно (табл. 3).

На 5 сутки восстановительного периода после экспериментальной интоксикации крыс 2,4-Д нормализация показателей стабильности мембран лизосом (свободной активность кислой фосфатазы, осмотических свойств лизосом, активности кислой фосфатазы в сыворотке крови крыс) не происходила (табл. 2, 3).

Содержание МДА в ткани печени крыс при интоксикации 2,4-Д.

Стабильность мембран лизосом при некоторых патологических состояниях изменяется в зависимости от степени активности процессов ПОЛ в ткани органов (Тихонова Е.В., 1999). Несмотря на то, что скорость образования липидных перекисей в мембранах лизосом невелика, лизосомы легко повреждаются перекисями липидов, образованными другими клеточными мембранами (Владимиров Ю.А., Арчаков А.И., 1972). Продукты перекисного окисления липидов

Таблица 2

Изменение свободной активности кислой фосфатазы при интоксикации 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислотой и коррекции комплексным препаратом манжетки обыкновенной

группы животных свободная активность кислой фосфатазы, % инкубация лизосом в.0,125 М р-ре сахарозы активность кислой фосфатазы в сыворотке крови ммоль/л в час

свободная активность прирост свободной активности

интактные 15,8+0,9 (16) 35,7+1,7 (8) 19,1+1,5 (8) 6,7+1,0 (7)

2,4-Д 1 сут 33,5 + 1,8*** (6) 42,4 + 2,8 (5) 9,6 + 3,3 * (5) 18,3+3,1 * (5)

2,4-Д 5 сут 33,6+3,3 *** (6) 41,6+5,3 (5) 10,2+2,5 * (5) 20,5+0,8 ** (5)

2.4-Д+манжетка 1 сут 31,6+1,3 *** (7) 48,6 + 4,6 (6) 13,9 + 3,4* (5) 9,6 + 3,4 р<0,001

2,4- Д+манжетка 5 сут 20,9+1,7* р5-з<0.01 36,7 + 2,2 (5) 15,7 + 0,8 (5) 10,6+1,4 р5.3<0.001

Примечание:

Свободная активность кислой фосфатазы выражена в % от общей активности фермента * - р<0,05; ** - р<0,01; *** - р<0,001 - по сравнению с показателями интактных

Таблица 3

Влияние 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты на активность кислой фосфатазы, Р-галактозидазы,

катепсина Б в печени крыс

Группы животных кислая фосфатаза, мкмоль/г белка в мин Р-галактозидаза, мкмоль/г белка в мин катепсин Б, условн. ед./г белка мин

1. Интактные 42,9+3,7 1,7+0,2 11,4+1,2

(12) (9) (8)

2.24-Д, 1 сут 38,8+2,4 1,2+0,2 14,7+2,6

(6) (7) (5)

3. 2,4-Д, 5 суток 38,3+0,8 1,3±0,2 17,8+2,5 *

(5) (6) (5)

4. манжетка+2,4-Д, 1 сут 53,6+6,4 р2-4<0,05 (5) 0,87+0,06 * (5) 12,5+1,1 (5)

5. манжетка+2,4-Д, 5 сут 47,2+1,1 1,24±0,12 14,2+0,8

(5) (5) (5)

Примечание: *- р<0,05 - по сравнению с контролем.

способны активировать фосфолипазы, локализованные в мембранах лизосом, играющие ключевую роль в повреждении мембран этих органелл (Кгошег W. et al., 1998).

Результаты исследования содержания МДА - продукта ПОЛ в . ткани печени крыс через 1 и 5 сутки после воздействий 2,4-Д представлены в таблице 4.

Концентрация МДА в печени экспериментальных животных через сутки после воздействий гербицидом сравнима с показателем интактных животных. Через 5 суток содержание МДА в печени крыс повысилось в 1,6 раза относительно 1 суток и контрольных значений (табл. 4).

Изменение концентрации МДА печени крыс не коррелировало с нарушением стабильности мембран лизосом, которое было выражено в одинаковой степени в печени крыс через 1 и 5 суток после воздействий 2,4-Д.

Причиной наблюдающихся изменений стабильности мембран лизосом, вероятно, является действие гербицида на мембраны лизосом. Активация ПОЛ в печени крыс при интоксикации 2,4-Д, возможно, вторична и является следствием нарушения различных мембранных структур клеток.

Таблица 4

Влияние 2,4-дихлорфеноксиуксусной.кислоты на содержание малонового диальдегида в печени крыс

Группы животных МДА

нмоль/мг белка

1. интактные 0,99+0,12

100%

2. 2,4-Д 24 часа 1,03+0,19

105%

3. 2,4-Д 5 суток 1,67+0,19*

169% *

Примечание: Содержание МДА в группе интактных животных взято за 100%. *- р<0,05 - по сравнению с интактными животными

Активация ПОЛ в печени опытных животных выражена умеренно (табл. 4). Известно, что при токсическом СС14 гепатите, концентрация МДА в печени повышается в 5 и более раз. Очевидно, усиление процессов ПОЛ при интоксикации 2,4-Д может быть следствием нарушения различных мембранных структур клеток.

Известно, что химическое повреждение мембран (тетрахлорэтаном) или недостаточность антиоксидантной системы (исключение из рациона витамина Е) сами могут приводить к активации процессов ПОЛ. Многие химические агенты способны снижать уровень неферментативных и подавлять активность ферментативных антиокислителей, таким образом способствуя активации ПОЛ (Губский Ю.И., Задорина О.В., 1999). Развивающаяся под воздействием токсикантов недостаточность эндогенных антиокислителей усугубляется, как правило, тем, что дополнительное поступление их затруднено из-за нарушения микроциркуляции и проницаемости клеточных мембран. В этих случаях оправдано введение экзогенных антиоксидантов и препаратов, оказывающих стабилизирующее действие на мембраны клеток.

Большинство полифенольных соединений растительного происхождения обладают антиоксидантными свойствами и способностью снижать интенсивность ПОЛ в тканях экспериментальных животных in vivo и в культуре изолированных клеток in vitro (Chen H., Toppel., 1994; Terao J. et al., 1994). Полифенольный комплекс из листьев манжетки обыкновенной, как было показано в нашем исследовании, обладает антиоксидантными свойствами, препятствуя накоплению продуктов ПОЛ в условиях индуцированного перекисного окисления липидов (табл. 5).

В работах Ю.И. Бородина (1983) было показано положительное действие полифенольного комплекса манжетки на процессы микроциркуляции и регенерации в миокарде при экспериментальном инфаркте миокарда. Эти свойства фармакологического средства могут быть полезны для защиты клеток и тканей организма при интоксикации 2,4-Д.

Изучение мембранопротекторных свойств полифенольного комплекса из листьев манжетки обыкновенной

(Alchemilla vulgaris L.) при интоксикации крыс 2,4-Д

Морфологические изменения в печени крыс через сутки после воздействия гербицидом на фоне предварительного введения полифенольного комплекса из листьев манжетки были не столь значительны, как у животных с 2,4-Д интоксикацией, не получавших препарат манжетки. Общая структура печени крыс была не изменена. Печень имела характерное дольчатое . строение. Участки

Таблица 5

Влияние комплексного препарата A.vulgaris L на перекисную резистентность эритроцитов in vitro в условиях

окисления липидов, инициированного Н202

Концентрация препарата Перекисная Степень гемолиза Концентрация МДА,

манжетки обыкновенной резистентность мембран эритроцитов, % нмоль в пробе, %

{A.vulgaris L.) эритроцитов

контроль 1,65+0,08 61+3% 16,6+1,5

(Ю) (10) 100%

(9)

1 мг/мл 1,94+0,16 54+4%

(9) (9)

10 мг/мл 2,27+0,27 * 48+5% * 15,2+1,3

(9) (9) 91%

(9)

100 мг/мл 4,51+0,45 ** 24+3% ** 8,7+0,8 *

(7) (7) 52%

(9)

Примечание:

В скобках указано количество животных в каждой группе.

Степень гемолиза эритроцитов выражена в % по отношению к полному гемолизу клеток под действием 4% раствора сапонина.

*- р<0,05, ** - р<0,001 - по сравнению с контролем.

дистрофически измененных паренхиматозных клеток были единичны. Встречались отдельные гепатоциты с пикнотически измененными ядрами.

Относительная объемная плотность цитоплазмы, ядер гепатоцитов, а также ядерно-цитоплазматическое отношение были ниже, чем у животных с 2,4-Д интоксикацией, не получавших препарат манжетки (р<0,05).

Полифенольный комплекс манжетки оказывал положительное действие на состояние циркуляторного русла в печени крыс, при этом изменения были сходными с таковыми при воздействиях 2,4-Д, но менее значительными. Центральные вены, вены и артерии триад были расширены по сравнению с контролем, но в меньшей степени, чем у крыс, не получавших препарат манжетки. Желчные протоки не дилатированы. Участки суженных кровеносных капилляров немногочисленны, что свидетельствует об усилении дренажной функции микроциркуляторного русла в печени. Объемная плотность кровеносных синусоидных капилляров опытной группы значительно превышала показатель животных с 2,4-Д интоксикацией, не получавших препарат манжетки (р<0,01).

Считают, что микроциркуляторное русло одним из первых систем организма вовлекается в патологический процесс. Поскольку основная функция микроциркуляции - осуществление обмена между кровью и тканью и поддержание гемодинамического и метаболического гомеостаза, необходимого для нормального функционирования систем организма, то нормализация функциональной активности микроциркуляторного русла при патологии, стимуляция лимфатического дренажа являются важнейшими условиями успешного восстановления структурно-функциональных параметров клеток и тканей. С этой точки зрения, способность препарата манжетки нормализовать параметры циркуляторного русла печени является очень важным для реабилитации организма при действии 2,4-Д.

Введение полифенольного комплекса из листьев Шге&бёё способствовало более быстрому восстановлению функциональной активности печени крыс при интоксикации 2,4-Д по сравнению с животными, не получавшими препарат манжетки (рис. 3). Активность АЛТ в этой группе животных была ниже, чем у крыс, не получавших препарат манжетки, а через 5 суток не отличалась от показателя интактных животных. Это говорит о менее интенсивных деструктивных процессах в ткани печени и свидетельствует в пользу

гепатопрогекторных свойств полифенольного комплекса манжетки при повреждении печени этим гербицидом.

Из

-*- □ интакгные Н 1 суг И 5 суг

2.4-Д

2.4-Д + манжетка

* - р<0.001 - достоверные различия с контролем, о - р<0.01 - с 2.4-Д ФУ п пой.

Рис. 3 Влияние препарата манжетки обыкновенной на активность АЛТ в сыворотке крови крыс при интоксикации 2.4-Д .

Комплекс полифенолов манжетки . оказывал частичный защитный эффект на мембраны лизосом печени крыс при интоксикации 2,4-Д. Свободная активность кислой фосфатазы в гомогенате печени крыс не превышала показатель интактных животных (1 и 5 сут). Свободная активность фермента во фракции лизосом печени через сутки после сочетанного введения препаратов не отличалась от показателя в группе крыс, не получавших препарат манжетки. Через 5 суток происходило снижение свободной активности кислой фосфатазы относительно 1 суток и показателя крыс, не получавших препарат манжетки (5 сут) (р<0,001).

Полифенольный . комплекс манжетки препятствовал нарушению осмотических свойств лизосом печени крыс при интоксикации 2,4-Д: прирост свободной активности кислой фосфатазы, после обработки фракции лизосом печени крыс в гипотоническом растворе сахарозы не отличался от показателя интактных животных (1 и 5 сут) (табл. 2).

Активность кислой фосфатазы в сыворотке крови крыс через 1 и 5 суток не отличалась от показателя интактных животных и была

ниже (р<0,001), чем в группе крыс, не получавших препарат манжетки (табл. 2).

Таким образом, комплексный препарат из листьев манжетки обыкновенной обладает мембранопротекторными свойствами и оказывает защитное действие на мембраны паренхиматозных клеток печени и субклеточных органелл (лизосом), при токсическом повреждении печени крыс 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислотой.

ВЫВОДЫ

1. Используемый гербицид 2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота обладает выраженным мембранотропным действием и нарушает стабильность мембран лизосом печени и гепатоцитов крыс в концентрации 10'3 М in vitro; в концентрации Ю^М 2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота повышает проницаемость мембран лизосом для ионов К*.

2. При введении в течение 4-х дней 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты в дозе 150 мг/кг массы животного развиваются дистрофические и некробиотические изменения паренхиматозных клеток печени, повышается активность AJIT в сыворотке крови крыс.

У этих животных нарушается стабильность мембран и осмотические свойства лизосом печени; повышается активность катепсина D в гомогенате печени; аналогичные изменения лизосом развиваются в селезенке.

3. 2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота повышает концентрацию малонового диальдегида в печени крыс (5 суток), что свидетельствует об усилении процессов перекисного окисления липидов мембран в печени.

4. Полифенольный комплекс манжетки обыкновенной проявляет антиоксидантные свойства: препятствует накоплению продуктов ПОЛ и повышает резистентность мембран в условиях индуцированного перекисного окисления липидов.

5. Комплекс полифенолов манжетки обыкновенной предупреждает нарушение стабильности мембран лизосом печени и селезенки крыс (5 суток), а также предотвращает нарушение осмотических свойств лизосом печени (1 и 5 сутки), способствует более быстрому восстановлению структурно-функциональных свойств мембран лизосом печени и селезенки крыс при интоксикации 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислотой.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1. Svechnikova I.G., Urazgalyev К., Djanajeva S. Liver Cysteine proteinases in macrophage depression induced by gadolinium chloride. Cellular peptidases in immune functions and diseases, Magdeburg, 1996, P.43.

2. Жанаева С.Я., Свечникова И.Г., Усынин И.Ф., Зыков А.А.. Нарушение физико-химических свойств мембран лизосом печени крыс при воздействии 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты И 3-й съезд физиологов Сибири и Дальнего Востока. -Новосибирск. - 1997. - С. 71-72.

3. Свечникова И.Г., Короленко Т.А., Уразгалиев К., Вакулин Г.М, Байбородин С.И., Жанаева С.Я. Цистеиновые протеиназы печени лизосом при депрессии и стимуляции системы мононуклеарных фагоцитов // Бюлл. Сибирского Отделения РАМН. - 1997. - № 3. - С.50-54.

4. Korolenko Т., Svechnikova I., Urazgaliyev К., Vakulin G., Djanajeva S. Liver cysteine proteinases in macrophage depression induced by gadolinium chloride // Adv. Exp. Med. Biol., 1997, v.421, p.315-321.

5. Жанаева СЛ. Изменения мембран лизосом печени крыс при интоксикации 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислотой и защитное действие комплексного препарата манжетки обыкновенной (Alchemilla vulgaris L.) // Фундаментальные и прикладные проблемы современной медицины. Материалы 1-ой молодежной научн. конф. научного центра СО РАМН. - Новосибирск, 1999. -С. 40-42.

6. Жанаев Э.Д., Жанаева С.Я. Антиоксидантные свойства комплексного препарата манжетки обыкновенной, Alchemilla vulgaris L. // Фундаментальные и прикладные „проблемы современной медицины. Материалы 1-ой молодежной научн. конф. научного центра СО РАМН. - Новосибирск, 1999. - С. 3840.

7. Жанаева С.Я., Зыков А.А., Мичурина С.В., Короленко Т.А. Повреждение печени экологическим токсикантом 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислотой и защитное действие биофлавоноидного комплекса препарата манжетки обыкновенной // Бюллетень СО РАМН,- 1999. -№ 3. - С. 85-89.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Жанаева, Светлана Яковлевна

Страницы

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Некоторые аспекты состояния лизосомального аппарата клеток в норме и патологии.

1.1.1. Современные представления о структуре и функциях лизосом

1.1.2. Роль лизосом в развитии патологических процессов

1.2. Особенности влияния пестицидов на организм человека и животных

1.2.1. Влияние 2,4-Д на окружающую среду: применение, распространение, трансформация

1.2.2. Влияние 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты на организм человека и животных

1.2.3. Метаболизм хлорорганических гербицидов в организме животных и человека

1.2.6. Влияние 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты и других пестицидов на лизосомальный аппарат клеток

1.3. Характеристика биологического действия полифенольных соединений растительного 39 происхождения

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Лабораторные животные

2.2. Схема введения исследуемых веществ

2.3. Препаративные процедуры

2.4. Изучение состояния лизосом печени и селезенки 48 крыс

2.5. Методы определения активности ферментов и содержания белка

2.6. Определение in vitro аншоксидантной активности препаратов, используемых для коррекции перекисных процессов

2.7. Определение концентрации малонового диальдегида в гомогенате печени крыс

2.8. Микроскопический метод исследования

2.9. Статистические методы обработки результатов

ГлаваЗ. РЕЗУЛЬТАТЫ

3.1. Влияние 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты на мембраны лизосом печени интактных крыс в эксперименте in vitro

3.2. Морфо-функциональные изменения в печени крыс при экспериментальной интоксикации 2,4-Д

3.3. Структурно-функциональные изменения мембран лизосом печени и селезенки крыс при интоксикации 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислотой

3.4. Влияние 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты на перекисное окисление липидов в печени крыс

3.5. Характеристика мембранопротекторных свойств полифенольного комплекса из листьев манжетки обыкновенной {Alchemilla vulgaris L.)

3.6. Морфо-функциональные изменения в печени крыс при экспериментальной интоксикации 2,4-Д на фоне предварительного введения полифенольного комплекса манжетки {Alchemilla vulgaris L.)

3.7. Изучение мембранопротекторных свойств полифенольного комплекса из листьев манжетки

3.7.2. обыкновенной {.Alchemilla vulgaris L.) при

Изменение стабильности мембран лизосом печени и селезенки крыс при интоксикации 2.4-Д на фоне предварительного введения комплекса полифенолов манжетки обыкновенной (A. vulgaris L.) (1 сутки) ( 93 Влияние полифенольного комплекса манжетки обыкновенной (A. vulgaris L.) на состояние лизосом печени и селезенки крыс при интоксикации 2,4-Д через 5 суток после введения препаратов

Влияние комплекса полифенолов из листьев манжетки обыкновенной {Alchemilla vulgaris L.) на лизосомы печени и селезенки интактных крыс интоксикации 2,4-Д

Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Изменения лизосом печени крыс при интоксикации гербицидом 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислотой и коррекции полифенольным комплексом из листьев манжетки обыкновенной (Alchemilla vulgaris L. )"

Актуальность темы. Гербициды - биологически активные химические соединения, используемые для борьбы с сорной растительностью. К числу наиболее активных и широко применяющихся гербицидов относят 2,4-дихлорфеноксиуксусную кислоту и ее производные - соли и эфиры. Гербициды этой группы используют для борьбы с широколиственными сорняками в посевах зерновых культур, при обработке газонов в парках и водоемов, а также для опрыскивания плодовых деревьев с целью предотвращения раннего опадания плодов.

Гербицидные препараты, являясь наиболее широко и интенсивно применяющимися соединениями, занимают одно из первых мест среди различных загрязнителей среды. По данным ВОЗ в сельском хозяйстве США И Великобритании в 80-х годах ежегодно применялось свыше миллиарда килограммов гербицидов группы 2,4-Д (ВОЗ, 1987). Масштабность и повсеместность применения, а также существующая во всем мире тенденция к увеличению объема выпуска и применения хлорфеноксигербицидов увеличивают риск возникновения острых и хронических отравлений и вводят изучение патофизиологических аспектов действия гербицидов группы 2,4-Д на организм животных и человека в круг наиболее актуальных задач медико-биологических исследований.

Гербициды группы 2,4-Д характеризуются многообразием чувствительных к их действию организмов, что объясняют их мембранотропными свойствами. Взаимодействуя с мембранами растительных клеток, 2,4-Д нарушает как структуру, так и функцию мембран, изменяя такие физико-химические характеристики растительных клеток как мембранный потенциал, сопротивление и емкость (Контуш А. С., 1992). В низких концентрациях гербицид не специфически нарушает барьерную функцию липидного слоя для различных ионов и неэлектролитов, повышая текучесть мембран. В более высоких концентрациях эти гербициды, как полагают, повреждают мембраны клеток по детергентному механизму - встраиваясь в липидный матрикс мембран, они нарушают взаимодействие фосфолипидов, вызывая появление в мембранах пор (В.Н. Голубев, А.С. Контуш А. С., 1986).

Хлорорганические гербициды, изменяя электрический потенциал мышечных и нервных клеток, оказывают токсическое действие на центральную и периферическую нервную систему, вызывают развитие тяжелой и стойкой миотонии, приводя к развитию структурных дегенеративных изменений в мышцах; оказывают неблагоприятное влияние на миокард. (Е1о Н., У1ка1о Р., 1977, 1979; РгеБсо« 1.Б. & а1., 1979; Апёгеаз1к Ъ. й а1., 1979). Хлорфёноксиуксусные гербициды проявляют выраженное гонадотропное действие и способность накапливаться в органах репродуктивной сферы, обладают иммунодепрессивными свойствами и способствуют развитию аутоиммунных заболеваний (Федорова Л.М., Белова Р.С., 1983; БаиБЙш А. е1 а1., 1996). Метаболизм феноксиуксусных гербицидов, как и многих других ксенобиотиков, в организме человека и животных протекает с участием цитохром Р450-зависимых микросомальных монооксигеназ клеток печени (Ьютайц N.,1991.; Зап^овгто А. ег а1, 1991).

В условиях токсической агрессии, особого внимания заслуживают структуры, осуществляющие детоксикацию ксенобиотиков. Важнейшим органом, обеспечивающем поддержание гомеостаза и очищения организма от токсинов является печень. На субклеточном уровне к числу органелл, заслуживающих пристального внимания при изучении действия экологических поллютантов, относят лизосомы. Лизосомы - это особый класс внутриклеточных органелл, отличительной особенностью которых является структурно связанная латентность содержащихся в них кислых гидролаз, которая, согласно концепции де Дюва, зависит от существования мембранного барьера, ограничивающего доступ субстратов к соответствующим ферментам ( с1е Биуе С., 1963). Нарушение латентности, то есть постепенное освобождение ферментов лизосом рассматривают как функцию интенсивности или продолжительности действия повреждающего фактора (Покровский A.A. с соавт., 1975). Тест на стабильность мембран лизосом печени рыб, наряду с другими применяемыми методами, был предложен для мониторинга загрязнения водных экосистем экологическими поллютантами (Köhler А., 1991).

Данные литературы о состоянии лизосомально-вакуолярного аппарата клеток при действии гербицидов на основе 2,4-Д единичны. Известно, что при острых отравлениях 2,4-Д нарушается стабильность мембран лизосом, при этом тяжесть симптомов отравления коррелирует со степенью нарушения стабильности мембран. Этот факт говорит о необходимости изучения возможности коррекции нарушений препаратами, способными стабилизировать мембраны клеток и субклеточных органелл.

С этой точки зрения, весьма перспективными могут оказаться препараты, содержащие фенольные соединения из лекарственных растений.

Многие полифенолы растительного происхождения обладают гепатопротекторной активностью при тех видах поражения печени, при которых происходит активация процессов перекисного окисления липидов, оказывают противовоспалительное действие, положительно влияют на гидродинамические свойства крови и сердечно-сосудистую систему в целом, процессы регенерации, угнетают реакции ПОЛ и стабилизируют мембраны клеток и клеточных органелл, повышая адаптационные и усиливая компенсаторно-приспособительные реакции организма на клеточном и субклеточном уровне (Бородин Ю.И., 1983; Барабой В.А., 1984; Hikiho Н. et al., *

1986; Rao P.V., 1989; Першукова A.M., 1991; Gilani A.U.H., Janbaz K.H., 1995).

Цель исследования - изучить структурно-функциональные изменения мембран лизосом при токсическом повреждении печени гербицидным препаратом 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислотой и исследовать возможность коррекции нарушений с помощью полифенольного комплекса из листьев манжетки обыкновенной (Alchemilla vulgaris L.). .

Задачи исследования:

2. Исследовать эффект 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты на стабильность и проницаемость мембран изолированных лизосом и паренхиматозных клеток печени крыс in vitro.

4. Изучить изменение содержания малонового диальдегида - продукта перекисного окисления липидов в ткани печени после воздействий 2,4-Д.

Научная новизна работы.

Выявлена мембранопротекторная активность полифенольных соединений из листьев манжетки обыкновенной при токсическом повреждении мембран лизосом печени и селезенки крыс гербицидом - 2,4-Д и возможность их использования для предупреждения этих нарушений. Комплекс полифенолов из листьев манжетки обыкновенной предупреждает нарушение осмотических свойств лизосом печени крыс (1 и 5 суток) и способствует более быстрому восстановлению стабильности мембран лизосом печени и селезенки крыс при интоксикации 2,4-Д.

Практическая значимость работы.

Показана целесообразность использования полифенольного комплекса из листьев манжетки обыкновенной (Alchemilla vulgaris L.), обладающего антиоксидантными свойствами, в качестве средства, предупреждающего развитие токсического эффекта 2,4-Д.

Положения, выносимые на защиту.

2. 2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота в концентрации

1(Г М повреждает целостность мембран изолированных лизосом. В концентрации 10"3 М гербицид нарушает стабильность мембран изолированных лизосом печени и лизосом изолированных паренхиматозных клеток печени крыс. В концентрации 10"4 М гербицид повышает проницаемость мембран лизосом печени интактных крыс для ионов К+.

Апробация работы. Результаты работы были представлены на 3-м съезде физиологов Сибири и Дальнего Востока, [Новосибирск, 1997]; на научно-практической конференции "Актуальные вопросы современной медицины" [Новосибирск, 1999]; на 1-ой молодежной научной конференции Новосибирского научного центра СО РАМН, [Новосибирск, 1999]; на 1-й молодежной научной конференции Института физиологии СО РАМН, [Новосибирск, 1999], на межлабораторном семинаре Института физиологии СО РАМН, [Новосибирск, 1999].

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Жанаева, Светлана Яковлевна

выводы

1. Гербицид 2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота обладает выраженным мембранотропным действием и нарушает стабильность мембран лизосом печени и гепатоцитов крыс в концентрации 10"3М in vitro; в концентрации I0"4 М 2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота повышает проницаемость мембран лизосом для ионов К1.

3. 2,4-дихлорфеноксиуксусная кислота повышает концентрацию малонового диальдегида в печени крыс (5 суток), что свидетельствует об усилении процессов перекислого окисления липидов мембран в печени.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Жанаева, Светлана Яковлевна, Новосибирск

1. Абрикосов Е.Ю. Изменение активности кислых гидролаз в динамике вирусного гепатита: Автореф дис. канд. мед. наук. М., 1980. - 21с.

2. Барабой В. А. Биологические действия растительных фенольных соединений. Киев: Наукова думка, 1976. - 164 с.

3. Барабой В.А. Растительные фенолы и здоровье человека. Наука, 1984. 137 с.

4. Баранец H.A. Некоторые патохимические изменения в лейкоцитах больных хроническим описторхозом и хроническим холециститом // Ферменты в клинических и экспериментальных исследованиях. Омск, 1975,-с. 23-26.

5. Баширов A.A. Состояние здоровья рабочих, занятых производством гербицидов аминной соли и бутилового эфира 2,4-Д кислоты // Врачебное дело. 1969. - № 10. - с. 92-95.

6. Безуглый В.П., Фокина К.В., Комарова Л.И. Клиника отдаленных последствий острого отравления 2,4-Д и хлорфеноксиуксусной кислоты // Гиг. труда и проф. заболеваний. -1979. №3. - с. 47-48.

7. Березин В.А. Влияние рентгеновского облучения животных на активность соллюбилизацию и каталитические свойства катепсина D головного мозга // Радиобиология. 1980. - Т. 20, № 4. - с. 531-536.

8. Блюгер А.Ф., Майоре А.Я. Молекуляроно-биологичский этап изучения патологии печени // Успехи гепатологии. Рига: Звайгзне, 1973, выпуск 4. - с. 7-38.

9. Блюгер А.Ф. Вирусный гепатит. Рига: Звайгзне, 1978. - 398с.

10. Бреймайер Г.М. Динамика активности лизосомальных ферментов при васкулите и остром лейкозе у детей // Структура и функции лизосом. Тез. докл. Междунар. симп. М., 1976. - с. 38-39.

11. Булычев А.Г. Блинова Т.В. Активность ферментов лизосом естественных киллеров // Цитология. 1991. - Т. 33, № 2. - с. 76-79.

12. Буслович С.Ю., Клободская Ф.Д., Кенигсберг Я.Э. Нарушение гормональной регуляции при отравлении гербицидами хлорпроизводыми феноксикислот // Вопросы гигиены и токсикологии пестицидов. М. Медицина, 1970. - с. 155-157.

13. Буслович С.Ю., Клободская Ф.Д. Активность гексокиназы скелетной мышцы белых крыс при экспериментальной миотонии // Вопр. мед. химии. 1972. - Т. 18, №4. - с. 403-406.

14. Вакшинель В.К. Лизосомальный аппарат тромбоцитов человека и его электронно-гистохимическая характеристика при некоторыхзаболеваниях системы крови // Структура и функции лизосом. Тез. докл. 2-й Всесоюз. симп. Новосибирск, 1980. - с. 40-41.

15. Видюкова А.И., Хаджай Я.И., Оболенцева Г.В. О противовоспалительном действии полифенольного препарата из календулы // Тез. докл. 4-й симп. по фенольным соединениям. Ташкент, 1982.-с. 14-15.

16. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М.: Наука, 1972. - 252 с.

17. Владимиров Ю.А. Биологические мембраны и мембраноактивные соединения. Ташкент, 1985. с. 14-38.

18. Воробьев JI.H., Манусаджянас JI. Особенности действия ИУК и 2,4-Д на биоэлектрические характеристики Nitellopsis obtusa // Физиология растений. М.: Наука, 1984. - Т. 31. - с. 5-12.

19. Галимов Ш. Н., Валеева Г.Р., Хамзина Д.Ш., Байгильдина A.A. Функциональные и морфологические изменения интерстициальных клеток семенников при интоксикации хлорфеноксигербицидами // Фунд. и прик. аспекты совр. биохимии. С.-Петербург, 1998. - с. 377-381.

20. Гомеостаз. / Под ред. Акад. АМН СССР проф. П.Д. Горизонтова. -М.:Медицина, 1981. 571с.

21. Голубев В.Н., Контуш A.C. О механизме физико-химического взаимодействия гербицидов с липидами клеточных мембран // Сельскохоз. Биол. М.: ВО Агропромиздат, 1989. - Т. 3. - с. 18-24.

22. Грек О.Р., Долгов A.B. Перспективы фармакологического изучения растительных полифенольных соединений // Проблемы освоения лекарственных ресурсов Сибири и Дальнего Востока. Тез. докл. Всесоюз. конф. Новосибирск, 1983. - с. 184-185.

23. Гриц М.А. Состояние лизосом печени крыс при острой интоксикации аминной солью 2,4-Д // Фармакология и токсикология новых продуктов органического синтеза. Мат. III Республ. конф. Минск, 1975. - с. 161162.

24. Гриц М.А., Кенигсберг Я.Э. Прямое лабилизирующее действие натриевой соли 2,4-Д на мембрану лизосом // Фармакология и токсикология новых продуктов органического синтеза. Мат. III Республ. конф. Минск, 1975. - с. 171-172.

25. Гриц М.А., Кенигсберг Я.Э., Петрова B.C. Распределение 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты в организме крыс // Ветеринарная наука производству. - Минск: Урожай, 1979. - Т. 17.-е. 148-161.

26. Гриц М.А., Иванов А.Т., Кенигсберг Я.Э. Клиническая картина отравления гербицидами группы 2,4-Д у животных различных видов // Достижения ветеринарной науки и передового опыта -животноводству. -Минск.: Урожай, 1976. вып. 2. - с. 93-97.

27. Гриц М.А. Гормональные сдвиги и изменения лизосом под действием производных хлорфеноксикислот у некоторых видов животных. Автор. Дисс. к.б.н. Минск, 1980. - 22 с.

28. Громаковская М.М. Влияние витамина Р на проницаемость гемато-энцефалического барьера и функциональное состояние животных при воздействии малыми дозами лучей Рентгена // Структура и функция гистогематических барьеров. М.: Наука, 1971. - 149 с.

29. Забозлаев А.Г., Гиновкор А.Г., Доронин A.B., Емельянова Э.Д. Лизосомы печени при описторхозе //: Структура и функции лизосом. Тез. докл. Междунар. симп. 1976. - с. 56-57.

30. Зайцев В.В. Активность лизосомальных ферментов кислой фосфатазы и ß-глюкуронидазы в сыворотке крови и ткани печени больных вирусным гепатитом: Автореф. дис. канд. мед. наук. М., 1974. - 16с.

31. Закиров У.Б., Ганиева Р.Г. О противоязвенной активности производных гассипола // Четвертый симпозиум по фенольным соединениям: Тез. докл. Ташкент, 1982. - с. 17-18.

32. Запрометов М.Н. Биохимия катехинов. М.: Наука, 1964. - с. 244-262.

33. Запрометов М.Н. Фенольные соединения. М.: Наука, 1993. - 271 С.

34. Зыков A.A. Фармакологические свойства биофлавоноидов и их влияние на адаптивно-компенсаторные процессы при ишемических повреждениях: Дисс. докт. мед. наук. Новосибирск, 1992. - 260 с.

35. Каган Ю.С. Токсикология фосфорорганических инсектицидов и гигиена труда при их применении. М. Медицина, 1977. - 98с.

36. Каган Ю.С. Глобальное значение пестицидов и особенности их биологического действия // Профилактическая токсикология. М.: Центр международных проектов ГКПТ, 1984. Т. 2, ч. 1. - 123 с.

37. Каскевич JI.M., Соболева Л.П. Случай острого отравления гербицидом 2,4-Д (отдаленные последствия) //Гиг. труда и профзаболеваний. 1978. -№10. -с. 49-50.

38. Кенигсберг Я.Е., Гриц М.А. Роль лизосом в патологии химической этиологии // Структура и функции лизосом. Тез. докл. 2-ой Всесоюз. симп. Новосибирск, 1980. - с. 81-82.

39. Киселева А.К. Действие разных по химическому составу токсинов чумного микроба на катепсин лизосом печени // Структура и функции лизосом. 2-ой всесоюзный симп. Новосибирск, 1980. - с. 78-79.

40. Колесников С.И., Мичурина C.B., Семенюк A.B., Вакулин Г.М. Печень и ее регионарные лимфатические узлы при воздействии 3,4-бензпиреном. -Новосибирск, 1995. 218 с.

41. Кондакова А.Е., Короленко Т.А., Вакулин Г.М. Изменение лизосом печени крыс при остром отравлении четыреххлористым углеродом // Цитология. 1973. - Т. 15, № Ц. - с. 1382-1389.

42. Кондакова А.Е. Изменения лизосом печени крыс при остром токсическом гепатите и экспериментальных воздействиях: Автореф. . дис. кан. мед. наук. Новосибирск, 1974. - 17 с.

43. Конев C.B. Структурная лабильность биологических мембран и регуляторные процессы. Минск: Наука и техника, 1987. - 239 с.

44. Контуш A.C. Взаимодействие пестицидов с мембранными белками клеточных органелл. Успехи современной биологии. М.: Наука, 1992. -Т. 112, в. 2.-с. 200-215.

45. Короленко Т.А., Пупышев А.Б., Малыгин А.Е. Снижение скорости протеолиза и лабилизация лизосом печени крыс при введении сурамина // Бюл. экспер. биол. и медицины. - 1980. - Т. 90, № 12. - с. 686-688.

46. Короленко Т.А. Структурно-функциональные изменения лизосом при повреждении печени и воздействии лизосомотропных препаратов: Автореф. .дис. док. мед. наук. 1983. - 403 с.

47. Короленко Т.А., Пупышев A.B., Малигин Ä.E., Гаврилова Н.И. Курушева Н.И. Оценка структурных и фунциональных нарушений лизосом печени при токсическом гепатите // Бюл. эксп. биол. мед. 1985. - Т. 100, № 8. -с. 169-172.

48. Короленко Т.А. Цистеиновые протеиназы лизосом и ингибиторы: роль в воспалении и развитии опухолей // Фундаментальные и прикладные аспекты современной биохимии. Труды науч. Конф. С-Петербург, 1998. -Т. 1.-е. 179-187.

49. Кузьминская У. А. Биохимическая характеристика субклеточных структур печени при воздействии пестицидов (к механизму действия хлорорганических и карбаматных пестицидов): Автореф. дисс. док. мед. наук. Киев, 1975. - 42с.

50. Кузьминская У.А., Дробинская ОЗ. Активность ферментов лизосом нейронов животных различных видов после введения нейротоксического пестицида // Гиг. и санит. 1988. Т. 11 - с. 86-88.

51. Лившиц Н.С., Фетисов A.A. Р-витаминная активность препаратов из володушки многожильчатой // Новые лекарственные препараты из растений Сибири и Дальнего Востока. Тез. докл. Томск, 1989. - с. 70-71.

52. Ломакина Л.В. Влияние низкой температуры на перекисное окисление липидов и интенсивность протеолиза в тканях мозга и печени крыс // Укр. Биохим. Журн. 1980. - Т. 52, №> 3. - с. 305-308.

53. Маймулов В.Г., Иванова В.Ф., Пузырев A.A. Структурный гомеостаз некоторых органов при действии антропогенных факторов // Гиг. и сан. -1994.-№1,-с. 30-32.

54. Макаров В. А. Химическое и фармакологическое исследование флавоноидов терновника // Раст. ресурсы. 1972. - Т. 8, № 1. - с. 42-49.

55. Маянский Д.Н. Актуальные аспекты изучения купферовских клеток печени // Успехи современной биологии. 1979. - Т. 82, вып. 3, № 6. - с. 410-427.

56. Маянский Д.Н. Клетка Купфера и система мононуклеарных фагоцитов. -Новосибирск: Наука, 1981. 172с.

57. Мейерсон Ф.З., Каган В.Е., Голубева Л.Ю. и др. Предупреждение стрессорных и гипоксических повреждений сердца с помощью антиоксиданта ионола // Кардиология, 1979. № 8. - с. 108-111.

58. Мишин В.М., Ляхович В.В. Множественные формы цитохрома Р-450. -Новосибирск, 1985. 180 с.

59. Нисевич Н.И., Учайкин В.Ф., Левина Э.И., Левиант М.И. Клинико-патогенетическое лизосомальных протеолитических ферментов при вирусном гепатите у детей // Вопросы охраны материнства и детства. -1978.-Т.23,№3.-с. 31-34.

60. Нурмухамбетова Б.Н. Ультраструктурные изменения стенки и микроциркуляторного русла ворсинок тонкой кишки крысы привоздействии хлорорганических токсикантов // Морфология. 1997 Т. 112, №6.-с. 65-67.

61. Общая патология человека. Руководство. / Под ред. А.И. Струкова, В.В. Серова, Д.С. Саркисова. М. :Медицина, 1990. - Т. 1, - 445 с.

62. Островский Д.Н. Молекулярная организация биологических мембран // Биомембраны. Структура, функции, методы исследования. Рига. Зинатне, 1977. - с. 7-27.

63. Панин Л.Е., Маянская H.H. Влияние субэкстремальных и экстремальных факторов на лизосомы печени // Бюл. Эксперим. биол. и медицины. -1977.-№6. Ос. 678-680.

64. Панин Л.Е., Маянская H.H. Лизосомы: роль в адаптации и восстановлении. Новосибирск: Наука, 1987. 200 с.

65. Першукова A.M. Макаров Н.В., Крюкова Л.Н. Иммунотропная активность флавоноидов надземной части горца змеиного и лапчатки прямостоящей// Известия АН Каз. ССР. Серия биология. 1991. - № 1.-е. 76-80.

66. Пичугин В.В., Конорев Е.А., Конорев Л.А. Кардиопротекторное действие дибунола при транзиторной ишемии миокарда у бодрствующих кроликов// Биоантиоксиданты. 1982. - с. 50-51.

67. Покровский A.A., Тутельян В.А. Изменения ферментов лизосом при белковой недостаточности // Биохимия. 1968. - № 33. - с. 809-816.

68. Покровский A.A., Тутельян В.А. Современные представления о лизосомах // Успехи современной биологии. 1969. - № 68. - с. 318-339.

69. Покровский A.A., Тутельян В.А. Лизосомы. М.: Наука, 1976. - 382 с.

70. Покровский A.A., Тутельян В.А., Кравченко Л.В. К вопросу об оценке стабильности мембран лизосом // Биохимия. 1975. - Т. 40, вып. 3.-е. 545-553.

71. Покровский A.A., Крыстев Л.П. Печень, лизосомы и питание. София: Болгарская академия наук, 1977. - 207 с.

72. Пузырев A.A., Иванова В.Ф., Маймулов В.Г. Адаптация организма к действию экологических факторов на клеточном и субклеточном уровнях // Морфол. 1997. -Т. 112, №4. с. 29-32.

73. Радионов А.Д., Чумаченко А.Н., Кириленко И.И. О санитарно-токсической характеристике гербицида 2,4-Д натриевой, аминной и диметиламинной солей //Гиг. и сан. 1967. - №4. - с. 100-101.

74. Ремизова М.И., Когетыгов Н.И. Изменение состояния лизосомального аппарата клеток печени при тяжелых ожогах у крыс // Патол. Физиол. -1976.-№3.-с. 63-65.

75. Руколайне Т.Р., Высоцкая Р.У. Лизосомальные ферменты различных органов радужной форели при хроническом токсикозе, вызванном смоляными кислотами // Структура и функции лизосом. 2-ой Всесоюз. съезд. Тез. докл. Новосибирск, 1980. - с. 157-158.

76. Русова Т.В. Горбунова Т.Ф. Влияние на лизосомы печени крыс некоторых хлорированных углеводородов // Структура и функции лизосом. 2-ой Всесоюзн. съезд. Тез. докл. Новосибирск, 1980. - с. 158159.

77. Саноцкий И.В., Фоменко В.Н. Отдаленные последствия влияния химических соединений на организм. М.Медицина, 1979. - 230с.

78. Саноцкий И.В., Смирнова О.Н. Краткий обзор документов с перечнем данных о токсичности и опасности веществ, разработанных в разных странах // Гигиена труда и проф. Заболев. 1989. - №3. - с. 33-36.

79. Саркисов Д.С. Структурные основы адаптации и компенсации нарушенных функций. М.¡Медицина, 1987.

80. Серов В.В. Перспективные направления патологоанатомических исследований // Арх. Пат. 1986. - вып. 3. - с. 20-29.

81. Скулачев В.П. Трансформация энергии в биомембранах. М., 1972.

82. Стальная И. Д., Гаришвили Т.Г. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты // Современные методы в биохимии. М.¡Медицина. - 1977. - 391 с.

83. Суханова Г.А., Акбашева O.E. Показатели протеолиза для оценки состояния онкологических больных // Фундаментальные и прикладные аспекты современной биохимии. Труды науч. конф. С-Петербург, 1998. -Т. 1.-с. 207-208.

84. Титова В .Г. Модификация течения хронического токсического гепатита лизосомотропным препаратом тритоном WR-1339. Структурно-функциональные изменения лизосом печени крыс: Автореф. Дис. .кан. мед. наук. Новосибирск, 1978. - 22с.

85. Травкин В.М., Линько Л.А., Головлева Очистка и свойства малеил ацетатредуктазы из штамма Nocardioides simplex ЗЕ, утилизирующего феноксиалкановые гербициды 2,4-Д и 2,4,5-Т // Биохимии. 1999. - Т. 64, вып. 6, - с. 751-757.

86. Федорова Л.М., Белова P.C. Производные хлорфеноксиуксусных кислот и охрана окружающей среды. Саратов, 1983. - с. 28-30.

87. Фролов В.А., Шкирмант В.К. Активность ферментов лизосом кардиомиоцитов, гепатоцитов и сыворотки крови при эксперимементальной дифтерии. .Вопр. мед. хим. 1990. - Т. 36, № 6. -с. 26-28.

88. Царицидзе М.А., Ломсадзе Б.А., Шенгелия М.Г. О природе центров связывания бенз (а) пирена с мембранами лизосом // Вопр. мед. химии. -1984.-Т. 30, вып. 1.-с. 17-20.

89. Черных А.Б. Состояние фосфатаз лизосом при лучевом поражении животных с различной радиочувствительностью // Труды Казанского НИИ онкологии и радиологии. 1970. - Т 7. - с. 19-23.

90. Шубидзе Т.М., Бусова Т.Н., Рязанова Р.А., Табагари С.Г. Структурно-функциональное состояние лизосомального аппарата печени крыс при действии пестицидов дитиокарбаматного ряда // Вопр. мед. химии. -1990.-Т. 36, №6.-с. 24-26.

91. Axelson О., Sundell L., Anderson К., Hogstedt С., Kling Н. Herbicid exposure and tumor mortality: An updated epidemiological investigation on Swedish railroad workers // Scand. J. Work Environ. Helth. 1980. - vol. 6. -p. 73-79.

92. Allison A.C. The role of lysosomes in pathology // Proc. Roy. Soc. Med. -1966. vol. 59, № 3. - p. 867-870.

93. Allison A.C. Lysosomes and disease // Scientific American. 1967. - vol. 217, №5.-p.62-72.

94. Andreasik Z., Kolon S., Smolik R. Health status evaluation in workers packaging the herbicide «Pielik» (chlorophenol) // Arch. Hig. Rad. Toksikol. -1979.-vol. 30.-p. 599-602.

95. Appfel C.A. Action cytostatique de certaines auxines, compterendu preliminaire // Presse med. 1959. - vol. 67, № 6. - p. 207-209.

96. Arjmand M., Hamilton R.H., Mumma R.O. Separation of amino acid conugates of 2.4-dichlorophenoxyacetic acid by high pressure

97. Aronson N.N.Jr., Dennis P.A., Dunn B.A. Metabolism of leupeptin and its effect on autophagy in the perfused rat liver // Acta biol. Med. Germ. 1981. Bd. 40, Hf. 10/11.-S. 1531-1538.

98. Assfalg-Machleidt I, Jochum M, Nast-Kolb D, Siebeck M, Billing A, et al. Cathepsin B-indicator for the release of lysosomal cysteine proteinases in severe trauma and inflammation. // Biol Chem Hoppe Seyler. 1990. - vol. 371.-p. 211-222.

99. Baccino F.M., Zuretti M.F. Permeability of rat liver lysosome membranes// Panminerwa Medica. 1976. - V. 18, № 11. - p. 472-491.

100. Bacher M.A, Gibson G.G. Chlorophenoxyacid herbicides induce microsomal cytochrome P-450 IVA1 (P-452) in rat liver // Chem. Biol. Interact. 1988. -vol. 65, №2.-p. 145-156.

101. Bainton D.F. The discovery of lysosomes // J. Cell Biol. -1981.- vol. 3, Pt 2. -p.66-76.

102. Bairati C., Goi G., Bollini D., Roggi C., Luca M., Apostoli P., Lombardo A. Effects of lead and manganese on the release of lysosomal enzymes in vitro and in vivo // Clin. Chim. Acta. 1997. - vol. 261, № 1. - p. 91-101.

103. Baggiolini M., Schnyder J., Brets U. Lysosomal enzymes and neutral proteinases as mediators of inflammatoin // Adv. In Infl. Res. 1979. - vol. 1. -p. 263-272.

104. Baranski T.J., Faust P.L., Kornfeld S. Generation of a lysosmal enzyme targeting signal in the secretory protein pepsinogen // Cell. 1990. - vol. 63. -p. 281-291.

105. Barret A.J. Lysosomal enzymes. In: Lysosomers: a laboratory handbook // J.T. Dingle ed. Amsterdam. London: North Holland, 1972. - p. 46-135.

106. Belcaro G., Cesarone M.R., de Santis M.T. et al. Laser dopier and transcutaneous oximetry: moden investigations to assess drug afficacy in chronic venous insufficiency // Microc clin. exp. 1995. - vol. 15, № 1. -p. 4549.

107. Bona G, Bracco G, Gallina MR, Iavarone A, et al. A case of acid lipase deficiency: Wolman's disease. // Panminerva Med. 1989. - vol. 31, № 1. - p. 49-53.

108. Bradley M.O. Cytotoxicity as a mechanism of carcinogenesis // Basic Life Sci/ 1985.-vol. 34.-p. 99-109.

109. Brawn W.J., Goodhouse J., Farquhar M.G. Mannose-6-phosphate receptors for lysosmal enzymes cycle between the Gilgi complex and endosomes // J. Cell. Biol. 1986. - vol. 103. - p. 1235-1247.

110. Britten J.S., Blank M. The effect of surface charge on intrfacial ion transport // Bioelectrochem. Bioenerg. 1977. - vol. 4. - p. 209.

111. Brouillet J.P., Spyratos F., Hacene K., Fauque J., et al Immunoradiometric assay of pro-cathepsin D in breast cancer cytosol: relative prognostic value versus total cathepsin D // Eur. J. Cancer. 1993. - vol. 29 a, № 9. - p. 12481251.

112. Bukovska B., Reszka E., Duda W. Influence of phenoxyherbicides and their metabolites on the form of oxy- deoxygemoglobin of vertebrates // Biochem. Mol. Biol. Int. 1998. - vol. 45, № 1. - p. 47-59.

113. Cindy L. Bristow Fernando Di Meo, and Ronald R. Arnold // Specific activity of al Proteinase inhibitor and a2 microglobulin in human serum. Clin. imun. and imunopathology. 1998. - Vol. 89, № 3. - p. 247-259.

114. Checunova M.P. Mechanism of the cardiotoxic of various industrial poispns (metals) // Kardiologiia. 1978. - vol. 18, № 5. - p. 54-61.

115. Collins C.A., Wells W.W. Characterization of endogenous protein phosphorilation in isolated rat liver lysosomes // J. Biol. Chem. 1982. - vol. 257, №2. -p. 1827-2143.

116. Comparative affects of clofibrate on morfological transformation and intercellular communication of Syrian hamster embryo cells / Cruciani V.,

117. Rast C., Durand M.J., NguenBa G., Vasseur P. // Cancinogenesis. 1997. -vol. 18, № 4. - p. 701-706.

118. Cornelissen M, de Ridder L. Dose- and time-dependent increase of lysosomal enzymes in embryonic cartilage in vitro after ionizing radiation // Scanning Microsc. 1990. - vol. 4, № 3. - p. 769-774.

119. Dahmans N.M., Lobel P., Kornfeld S. Mannose-6-phosphate reseptors and lysosomal enzyme targeting // J. Biol. Chem. 1989. - vol. 264. - p. 1211512118.

120. Dunn KW. Studies on the mechanisms of autophagy: Formation of the autophagic vacuole // J. Cell Biol. 1992. - vol. 110. - p. 1923-1933.

121. Dunn KW. Studies on the mechanisms of autophagy: Formation of the autophagic vacuole // J. Cell Biol. 1992. - vol. 110. - p. 1935-1945.

122. Dunn KW, Maxfield FR. Delivery of ligands from sorting endosomes to late endosomes occurs by maturation of sorting endosomes // J Cell Biol. 1992. -vol. 117, №2.-p. 301-310.

123. Dannan G.A., Porubek D.J., Neslob S.D. et al. // Endocrinology. 1986. - vol. 118, №5.-p. 1952-1980.

124. Dashti H., Jeppsson B., Hgerstrand I., Hultberg B., Srinivas U., Abdulla M., Bengmark S. Thioacetamide- and carbon tetrachloride-induced liver cirrhosis // Eur. Surg. Res. 1989. - vol. 21, № 2. - p. 83-91.

125. Davidson H.W., McGowan C.H., Balch W.E. Evidence for the regulation of exocytic transport by protein phosphorilation // J. Cell Biol. 1992. - vol. 116. -p. 1343-1355.

126. De Duve C. C., Pressman B.C., Gianetto et al. Tissue fractionation studies. 6. Intracellular distribution patterns of enzymes in rat-liver tissue // Biochem. J. -1955. vol. 60, № 4. - p. 604-617.

127. De Duve C. C. General propeties of lysosomes. The lysosomes concept // Giba foundation symposium on lysosomes / Eds. A.V. de Reuck, M. P. Cameron. Churchille. London, 1963 a. p. 1-31.

128. De Duve C. C. The lysosomes. Sci. Am., 1963 b. - vol. 208. - p. 65-70.

129. De Duve C. C., Wattiaux R. Function of lysosomes // Annual Rev. Physiol. -1966.-vol. 28.-p. 435-492.

130. De Duve C. C. Die Rolle der Lysosomen in der Zerpathology. Triangle, 1970. - vol. 9, № 6. - p. 200-208.

131. Dice JF, Terlecky SR, Chiang HL, Olson TS, Isenman LD, Short-Russell SR, Freundlieb S, Terlecky LJ. // A selective pathway for degradation of cytosolic proteins by lysosomes. Semin Cell Biol. 1990. - vol. 1, № 6. - p. 449-455.

132. Dock L., Waern F., Martinez M. Studies on the further activation of benzo(a)pyrene diol epoxides by rat liver microsomes nad nuclei //Chem. Biol. Interact. 1986. - vol. 58, №3. - p. 301-318.

133. Dudley A. W., Thapar N.T. Fatal human ingestion of 2.4-D, a common herbicide // Arch. Pathol. 1972. - vol. 94. - p. 270-275.

134. Edwards, M. D., K. A. Pazzi, et al. C-n-ras is activated infrequently in canine malignant lymphoma // Toxicologic Pathology. 1993. - vol. 21, № 3. - p. 288-291.

135. Elo H., Ylitalo P. Substantial increas in the levels of chlorophenoxyacetic acid in the CNS of rats as a result of severe intoxycation // Acta pharmacol. toxycol. 1977. - vol. 41. - p. 280-284.

136. Elsafi M.E., Hultberg B., Isaksson A., Hgerstrand I., et al. Lysosomes and human liver disease: a biochemical and immunohistochemical study of beta-hexosaminidase // Eur. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 1994. - vol. 32, № 9. -p. 669-673.

137. Faustini A., Settimi L., Pacifici R., Fano V., Zucarro P., Forastiere F.11 Immunological changes among farmers exposed to phenoxyherbicided. Occ. and Anvir. Med. 1996. - vol. 53, № 9. - p. 583-585.

138. Fehyr J., Toncsev H., SrHter L., Cornides A., Kiss A. Effect of cyanidanol-3 on lysosomal enzyme activity of serum and granulocytes in chronic liver disease and active hepatitis // Int J Tissue React. 1984. - vol. 6, № 1. - p. 7580.

139. Field J.A. Coupling chemical derivatization reactions with supercritical fluid extraction // J. cromatogr. A. 1997. - N 785. - p. 239-249.

140. Fleming, L. E., J. A. Bean, et al. Mortality in a cohort of licensed pesticide applicators in Florida // Occup. Environ. Med. 1999. - vol. 56, № 1. - p. 1421.

141. Font G., Manes J., Molto J.C., Pico Y. Solid-phase extraction in multy-residue pesticide analysis of water // J. Chromatogr. 1993. - vol. 642. - p. 135-161.

142. Fujita S., Morimoto R., Chiba M. // J. Pharm. Cci. 1987. - V. 76, N.l 1. - p. 537.

143. Gahl W.A. Lysosomal membrane transport in cellular nutrition // Annu Rev. Nutr. 1989. - vol. 9. - p. 39-61.

144. Gerdes M., Meusel M., Spener F. Development of a displasement immunoassay by exploiting cross-reactivity of monoclonal antibody // Anal. Biochem. 1997. - vol. 252. - p. 198-204.

145. Gerdes M., Meusel M., Spener F. Influence of antibody balency in a displasment immunoassay for the quantitation of 2.4-diclorophenoxyacetic acid // J. Immunol. Method. 1999. - vol. 223. - p. 217-226.

146. Gilani A.U.H.,'Janbaz K.H. Preventiv and curative effects of Artemisia absinthium on acetaminophen and CCl4-induced hepatotoxicity // Gen. Pharmacol. 1995. - vol. 3, №26. - p. 309-315.

147. Gullotta F., Stefan H., Mattern H. Pseudodystrophic muscle glycogenosis in adults. (Acid maltase deficiency syndrome) (author's transl) // J. Neurol. -1976. vol. 213, № 3. - p. 199-216.

148. Hard G.C. Mechanisms of chemically induced renal carcinogenesis in the laboratory rodent // Toxicol. Pathol. 1998. - vol. 26, № 1. - p. 104-112.

149. Helenius A., Mellman I., Wall D., Hubbard A. Endosomes // Trends Biochem. Sci. 1983. - vol. 8. - p. 245-250.

150. Hirohata K. Role of lysosome in joint inflammation // Seikei. Geka. 1970. -vol. 21,№2.-p. 102.

151. Holzman E. Lysosomes: A Survey. New York: Springer-Verlag, 1976.

152. Hultberg B., Isaksson A. A possible explanation for the occurrence of increased beta-hexosaminidase activity in pregnancy serum // Clin. Chim. Acta. 1981.-vol. 113, №2.-p. 135-140.

153. Hultberg B., Isaksson A., Nilsson J.A., Lindg^rde F. Serum beta-hexosaminidase isoenzymes are related to risk factors for atherosclerosis in a large population of postmenopausal women // Clin. Chim. Acta. 1994. - vol. 227,№ 1-2,-p. 59-68.

154. Inomata, N., Yoshida H., et al. Effects of MCPA and other phenoxyacid compounds on hepatic xenobiotic metabolism in rats // Tohoku J. Exp. Med. ~ 1991. vol. 165, № 3. -p. 171-182.

155. Janson P.M., Kuhn S.H., Geldenhuys J.J. Lysosomal disruption during the development of endotoxic shock in the baboon // S. Afr. Med. J. 1975. - vol. 49,№26.-p. 1041-1047.

156. Johnson E. S. Association between soft tissue sarcomas, malignant lymphomas, and phenoxy herbicides / chlorophenols: evidence from occupational cohort studies // Fundam. Appl. Toxicol. 1990. - vol. 14 (2). - p. 219-234.

157. Jolliffe L.K., Doyle R.J., Streips U.N. The energized membrane and cellular autolysis in Bacillus subtilis // Cell/ 1981. - vol. 25, № 3. - p. 753-763.

158. Kanase R., Patil S., Kanase A. Effect of hepatoprotective ayurvedic drugs on lysosomal enzymes during hepatic injury induced by single dose of CC14 // Indian J. Exp. Biol. 1994. - vol. 32, № 5. - p. 328-332.

159. Kalra J., Chaudhary A.K., Massey K.L., Prasad K. Effect of oxygen free radicals, hypoxia and pH on the release of liver lysosomal enzymes // Mol Cell Biochem. 1990. - vol. 94, № 1. - p. 1-8.

160. Kirscke H., Wiederandes B. Methoden zum Aktivitatbestimmung und Proteunases // Halle (Saale). 1984.' - p. 47-58.

161. Kimura Y., Okuda T., Okuda H. Effect of flavonoids isolated from Licorice roots on degranulation in human polimorfonuclear neutrophils // Phytoth. Res. 1993. - vol. 3, № 7. - p.335-340.

162. Kirschke H. Lysosomal cysteine peptidases and malignant tumours // Adv. Exp. Med. Biol. 1997. - vol. 421 -p. 253-257.

163. Kohler A. Lysosomal perturbations in fish liver as indicators for toxic effects of environmental pollution // Comp. Biochem. Physiol. 1991. - vol. 100, № (1-2).-p. 123-127.

164. Komor E., Weber H., Tanner W. Greatly decreased susceptibility of nonmetabolizing cells towards detergents // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1979. vol. 76, № 4. - p. 1814-1818.

165. Kornfeld D., Mellman I. The biogenesis of lysosomes // Annu. Rev. Cell Biol.- 1989. -vol. 5. -p. 483-525.

166. Koschier F.J., Girad P. and Hong S.K. Transport of 2.4-dichlorophenoxyacetate by rat renal cortical slides // Toxicol, appl. pharmacol.- 1978.-vol. 45.-p. 883-894,

167. Knutsson M., Nilve G., Mathiasson L., Jonsson J.A. Suppoted liquid membrane technique for time integrating field sampling of acidic herbicides at sub parts per billion level in natural waters // J.Agr. Food Chem. 1992. - vol. 40, № 12.-p. 2413-2417.

168. Lah TT, Calaf G, Kalman E, Shinde BG, et al. Cathepsins D, B, and L in transformed human breast epithelial cells // Breast Cancer Res Treat. 1996. -vol. 39, № 2. - p. 221-233.

169. Lakshmana M.K., Raju T.R. 2.4-dichlorophenoxyacetic acid alters monoamine lever, acetylcholineserase activity and operant learning in rats // J. of Med. Research. 1996. - vol. 104. - p. 234-239.

170. Latha B., Ramakrishnan M., Jayaraman V., Babu M. Serum enzymatic changes modulated using trypsin: chymotrypsin preparation during burn wounds in humans // Burns. 1997. - vol. 23, № 7-8. - p. 560-564.

171. Lawrence B.P., Brown W.J. Autophagic vacuoles rapidly fuse with preexisting lysosomes in cultured hepatocytes // J. Cell Sci. 1992. - vol. 102. - p. 515-526.

172. Lerda L., Rizzi R. // Mutat. Res. 1991. - vol. 262, № 1. -p. 47-50.

173. Ladwic J.C., Chvapil M. Reversible stabilization of liver lysosomes by Zinc ions // J. Nutrition. 1980. - vol. 110, № 5. p.

174. Li J.J., Gonzalez A., Banerjee S., Banerjee S.K., Li S.A. Estrogen carcinogenesis in the hamster kidney: role of cytotoxicity and cell proliferation // Environ. Health Perspect. 1993. - vol. 101, № 5. - p. 259-264.

175. Li S.A., Liao D.Z., Yazlovitskaya E.M., Pantazis C.G., Li J J. Induction of cathepsin D protein during estrogen carcinogenesis: possible role in estrogenmediated kidney tubular cell damage. // Carcinogenesis. 1997. - vol. 18, № 7. -p. 1375-1380.

176. Lowry O., Rosenbrough H., Farr A., Randell R. Protein measurment with the Folin phenol reagent // J. Biol. Chem. 1951. vol. 193, № 1. - p. 265-275.

177. Lukaszewicz-Hussain A., Moniuszko-Jakoniuk J. Changes in rats liver in late period of intoxication with chlorphenvinphos in a single dos // Rocz. Panstw. Zakl. Hig. 1998. - vol. 49, № 3. - p. 313-319.

178. Lynge E. Cancer incidence in Danish phenoxy herbicide workers // Environ. Health Perspect. 1998. - vol. 106, № 2. - p. 683-688.

179. Masegi T., Kato A., Kitai K., Fukuoka M., et al. Lysosome labilizer potentiate the antitumor effects of tumor necrosis factor-alfa // Jpn. J. Cancer Res. -1993. vol. 84, № 4. - p. 451-454.

180. Mazarean H.H., Dux L., Guba F. Changes of metabolism during experimentaly induced myotonia in rats. 1. Alteration in lactate and malate dehydrogenase isoenzyme activities // Biochem. med. 1979 a. - vol. 22. - p. 350-358.

181. Matsunaka S. Metabolism of pestiside in higher plants // Environmental toxycology of pesticides. New York: Academic Press, 1972. - p. 341-365.

182. Mittal S., Raghav N., Pal S., Kamboj R.C., Singh H. Effect of some pesticides/weedicides on cathepsin B activity and lysosomal membrane // Indian J. Biochem. Biophys. 1993. - vol. 30, № 3. p. 187-190.

183. Miura S., Watanabe J., Sano M., Tomita T., et al. Effect of various natural antioxidants on the CU2+ mediated oxidative modification of low density lipoprotein // Biol, and Pharm. Bull. 1995. - vol. 18, № 1. - p. 1-4.

184. Montgomery M.L., Chang U.L., Freed Y.H. Comparative metabolism of 2.4-D by bean and corn plants // J. Agric. Food Chem. 1971. - vol. 19. - p. 12191221.

185. Morrison H.I., Wilkins K., Semenciw R., Mao Y., Wigle D. Herbicides and cancer. // J. Natl. Cancer Inst. 1992. - vol. 84, № 24. - p. 1866-1874.

186. Mourelle M., Rubalcava B. Regeneration of the liver after carbon tetrachlorade // J. Biol. Chem. 1981. - vol. 256, № 4. - p. 1656-1660.

187. Mukherjee A. K., Ghosal S. K., Maity C. R. Lysosomal membrane stabilization by alpha-tocopherol against the damaging action of Vipera russelli venom phospholipase A2 // Cell Mol. Life Sci. 1997. - vol. 53, №2 -p. 152-155.

188. Nilsen O.G., Toftgerd R., Glaumann H. Effects of chlorinated paraffins on rat liver microsomal activities and morphology. Importance of the length and the degree of chlorination of the carbon chain // Arch. Toxicol. 1981. - vol. 49, №1.-p. 1-13.

189. Nilsson E., Ghassemifar R., Brunk U.T. Lysosomal geterogeneity between and within cells with respect to resis against oxidative stress // Histichem. J.1997. -vol. 29, № 11-12. p. 857-865.

190. Nilson T., Baglio D., GaldoMiguez L, Madzen J.O., et al. Solid-phase microextraction followed by gas chromatography mass spectrometry for the analysis of phenoxyasid herbicides in aqueous samples // Cromatography A.1998.-vol. 826.-p. 211-216.

191. Noda T., Farguhar M.G. A non-autiphagic pahtway for divertion of ER secretory proteins to lysosomes // J. Cell. Biol. 1992, v. 119, p. 85-97.

192. Nomura Y., Muguruma H., Yano K., Kugimiya A., McNiven S., Ikebukuro K., Karube I. Selective recognition of 2.4-diclorophenoxyacetic acid using a molecularly imprinted polimer // Anal. Lett. 1998. - vol. 31, N 6. - p. 973980.

193. Novikoff A.B., Essner E., Quintana N. Golgi apparatus and lysosomes // Feb. Proc. 1964. - vol. 23. - p. 1010-1022.

194. Ohta H. Measurement of serum immunoreactive beta-glucuronidase: a possible serological marker for histological hepatic cell necrosis and to predict the histological progression of hepatitis // Hokkaido Igaku Zasshi. 1991. -vol. 66,№4. -p. 545-557.

195. Olson T.S., Terlecky S.R., Dice J.F. Targeting specific proteins for lysosomal proteolysis // Biomed. Biochim. Acta. 1991. - vol. 50, № 4-6. - p. 393-397.

196. Orberg G.J. Observations on the 2.4-dichlorophenoxyacetic acid (2.4-D) excrecion in the goats // Acta pharmacol. toxicol. 1980. - vol. 46. - p. 78-80.

197. Orsi E.V., Bavlsik M., Viera R., Petersheim M., Baturay O.F. Lysosome response and cytoskeleton alteration in cell cultures exposed to airborne lead //

198. EXS. 1987. - vol. 51. - p. 243-248. «

199. Pietras R.J., Szego C.M., Roberts J.A., Seeler B.J. Lysosomal cathepsin B-like activity: mobilization in prereplicative and neoplastic epithelial cells // J. Histochem. Cytochem. 1981. - vol. 29, № 3 a. - p. 440-450.

200. Pisoni R.L., Thoene J.G. The transport systems of mammalian lysosomes // Biochim. Biophys. Acta. 1991. - vol. 1071 (4) - p. 351-373.

201. Polet H. Influence of sucrose on chloroquine~3-H3 content of mammalian cells in vitro: the possible role of lysosomes in chloroquine resistance // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1970. - vol. 173, № 1. - p. 71-77.

202. Prescott I.F., Pare J., Darien I. Treatment of severe 2.4-D and mecoprop intoxication with alkaline diuresis // Br. J. clin. pharmacol. exp. therap. 1979. -vol. 7.-p. 111-116.

203. Pujol P, Maudelonde T, Daures JP, Rouanet P, Brouillet JP, Pujol H, Rochefort H. A prospective study of the prognostic value of cathepsi^D levels in breast cancer cytosol. //Cancer. 1993. - vol. 71, № 6. - p. 2006-2012.

204. Rao P.V., Jordan S.A., Bhatnagar M.K. Ultrastructure of kidney of ducks exposed to methylmercury, lead and cadmium in combination // J. Environ. Pathol. Toxicol. Oncol. 1989. - vol. 9, № 1. - p. 19-44.

205. Rochefort H., Capony F., Garcia M., Cavaillns V. et al. Estrogen-induced lysosomal proteases secreted by breast cancer cells: a role in carcinogenesis // J. Biochem. 1987. - vol. 35, № 1. - p. 17-29.

206. Rosenberg, A.M., Semchuk K. M., et al. Prevalence of antinuclear antibodies in a rural population // J. Toxicol. Environ. Health. vol. 57, № 4. - p. 225236.

207. Rothwell J.T., Harper P.A., Hartley W.J., Gumbrell R.C., Meischke H.R. Suspected lysosomal storage disease in kangaroos // J. Wildl. Dis. 1990. -vol. 26, № 2. - p. 275-278.

208. Saija A., Scalese M., Lanza M., Marzullo D., et al. Flavonoids as antioxidant agents impotance of their interaction with biomembrane // Free radical biol. med. - 1995. - vol. 19, № 4. - p.481-486.

209. Santagostino, A., Leone M. P. Effects of phenoxyacetic acid herbicides on chicken embryo liver drug metabolizing enzymes // Pharmacol. Toxicol. -1999. vol. 68, № 2. - p. 110-114.

210. Saxena A.K., Singh B., Anand K.K. Hepatoprotective effects of Eclipta alba on subcellular levels in rats // J. Ethnopharmacol. 1993. - vol. 40, № 3. - p. 155-161.

211. Schaub J., Janka G.E., Christomanou H., Sandhoff K., et al. Wolman's disease: clinical, biochemical and ultrastructural studies in an unusual case without striking adrenal calcification // Eur. J. Pediatr. 1980. - vol. 135, № 1. - p. 4553.

212. Seabury J.H. Toxicity of 2.4-dichlorophenoxyacetic acid for mean and dog // Arch, environ, helth. 1963. - vol. 7. - p. 202-209.

213. Short K.A., King R.J. Biodégradation of phenoxyacetic acid in soil by Pseudomonas putida PP0301(pR0103), a constitutive degrader of 2,4-dichlorophenoxyacetate // Mol. Ecol. vol. 1, № 2. - p. 89-94.

214. Stadies on intracradiac acid hydrolases in the ischemic myocardial necrosis / Sasai Y., NakamuraN., Kobayashi Y., Katagiri T. // Jpn. Cire. J. 1982. - vol. 46, № 12.-p. 1337-1344.

215. Tageshige K., Baba M., Tsuboi S., Noda T., Ohsumi Y.J. Autophagy in yeast demonstrated with proteinase-deficient mutants and conditions for its induction // Cell. Biol. 1992. - vol. 119. - p. 301-311.

216. Talstad 1.1., Dalen H., Lehmann V. Degranulation and enzyme release during phagocytosis of inert particles and of bacteria by polymorphonuclear neutrophil granulocytes // Acta Pathol. Microbiol. Immunol. Scand. 1983. -vol. 91, №6.-p. 403-411.

217. Temple J.K., Dunn D.W., Blitzer M.G., Shapira E. The "muscular variant" of Pompe disease: clinical, biochemical and histologic characteristics // Am. J. Med. Genet. 1985. - vol. 21, № 3. - p. 597-604.

218. Terao J., Piskula M., Yao Q. Protective effect of epicatechin, epicatechin gallate and quercetin on lipid peroxidation in phospholipid bilayer // Arch, biochem. biophys. 1994. - vol. 308,№ 1. - p. 278-284.

219. Terlecky S.R., Dice J.F. Polypeptide import and degradation by isolated lysosomes // J. Biol. Chem. 1993. - vol. 268, № 31. - p. 23490-23495.

220. Thebault M.T., Raffin J.P. Properties of the lysosomes from liver and gill of rainbow trout, Salmo gairdnerii R.: effect of starvation, salinity and 2,4,5-T // Comp. Biochem. Physiol. B. 1984. - vol 79, № 4. - p. 541-547.

221. Thomssen C., Schmitt M., Goretzki L., Oppelt P., Pache L., Dettmar P., J/jnicke F., Graeff H. Prognostic value of the cysteine proteases cathepsins B and cathepsin L in human breast cancer. // Clin. Cancer Res. 1995. - vol. 1, №7.-p. 741-746.

222. Topal A.N., Adams N., et al. Purification and herbicide metabolism studies on tulip (tulipa-gesneriana) cytochrome-p450 // PesticideJScience. 1993. - vol. 38, № 1.-p. 9-15.

223. Tordera M., Ferrandiz M.L., Alcaraz M.J. Influens of anti-inflamatory flavonoids on degranulation and arachidonic acid release in rat neutropfils // J. of Biosc. 1994. - vol. 49, № (3-4). - p. 235-240.

224. Trew J.A., Ghadially F.N., Chattopadhyay P.K., Lalonde J.M. Enzyme content of hepatocellular lysosomes in the tumour-bearing rat // Br. J. Exp. Pathol. -1979. vol. 60, № 5.-p. 513-517.

225. Tripathi G., Shukla S.P. Enzymatic and ultrastructural studies in a freshwater catfish: impact of methyl parathion // Biomed. Environ. Sci 1990. - vol. 3, № 2.-p. 166-182.

226. Ward D.M., Leslie J.D., Kaplan J. Homotypic lysosome fusion in macrophages: analysis using an in vitro assay // J. Cell Biol. 1997. - vol. 139, №3.-p. 665-673.

227. Wattiaux R. Biochemistry and fanctions of lysosomes. In: Handbook of molecular cytology. Amsterdam: North-Holland Publ. Co., 1966. - p. 11591178.

228. Wiederandes B., Oelke B. // Accumulation of inactive cathepsin D in old rats. Mech. Ageing Dev. 1984. v. 24, № 3. p. 265-271.

229. Wu T.W., Fung K.P., Yang C.C., Weisel R.D. Antioxidation of human low density lipoprotein by morinhydrate // Life sci. 1995. - vol. 57, № 3. - p. 5156.

230. Zahn T., Arnold H., Braunbeck T. Cytological and biochemical response of R1 cells and isolated hepatocytes from rainbow trout (Oncorhynchus mykiss) to subacute in vitro exposure to disulfoton // Exp. Toxicol. Pathol. 1996. - vol. 48, № 1.-p. 47-64.

231. Zdolsek J.M., Svensson I. Effect of reactive oxygen species on lysosomal membrane integrity. A study on a lysosomal fraction. // Virchows Arch B Cell Pathol Incl Mol Pathol. 1993. - vol. 64, Pt. 6- p. 401-406.

232. Zdolsek J., Zhang H., Roberg K. H202-mediated damage to lysosomal membranes of J-774 cells // Free Radic. Rec. Commun. 1993. - vol. 18, № 2. -p. 71-85.

Информация о работе

Жанаева, Светлана Яковлевна
кандидата биологических наук
Новосибирск, 2000
ВАК 03.00.04

Диссертация

Изменения лизосом печени крыс при интоксикации гербицидом 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислотой и коррекции полифенольным комплексом из листьев манжетки обыкновенной (Alchemilla vulgaris L. ) - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы