Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Структурная реорганизация хроматина гепатоцитов в процессе активации и инактивации транскрипции протоонкогенов C-FOS и C-MYC

ВАК РФ 03.00.02, Биофизика

Автореферат диссертации по теме "Структурная реорганизация хроматина гепатоцитов в процессе активации и инактивации транскрипции протоонкогенов C-FOS и C-MYC"

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК ИНСТИТУТ БИОХИМИЧЕСКОЙ ФИЗИКИ им. Н.М. Эмануэля

Б*-, »о На правах рукописи

ТЕРЕНТЬЕВ Алексей Алексеевич

СТРУКТУРНАЯ РЕОРГАНИЗАЦИЯ ХРОМАТИНА ГЕПАТОЦИТОВ В ПРОЦЕССЕ АКТИВАЦИИ И ИНАКТИВАЦИИ ТРАНСКРИПЦИИ ПРОТООНКОГЕНОВ С-БОв И С-МУС

(03.00.02 - биофизика) (03.00.04 - биохимия)

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва 1997 г.

Работа выполнена в Институте Химической Физики в Черноголовке РА]

Научный руководитель: доктор биологических наук

П.Я. Бойков

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Ведущая организация: Институт Теоретической и Экспериментальн

Биофизики РАН, г. Пущино

заседании Диссертационного Совета Д.200.53.01 в Инстит Биохимической Физики РАН им. Н.М. Эмануэля. Адрес: 117977, Москва, ул. Косыгина, 4.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Объединен!: Института Химической Физики РАН им. H.H. Семенова.

Автореферат разослан ^-Х) ;..Я ^jj-^ ^97 г.

Ученый секретарь

Диссертационного Совета Д.200.53.01

кандидат химических наук М.А. Смотря^

Л.Б. Горбачева

кандидат биологических наук

Н.С. Куприянова

Защита состоится

Общая характеристика работы

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. ДНК эукариотической клетки ассоциирует с многочисленными белками ядра, образуя хроматин -многоуровневую систему пространственной организации ДНК внутри адра (Збарский, 1988). За последние 25 лет, прошедшие после открытия нуклеосом (Hewish, Burgoyne, 1973) накоплен большой экспериментальный материал, свидетельствующий в пользу того, что хроматин, помимо упаковки ДНК в ядре, также участвует в многочисленных процессах, связанных с регуляцией транскрипции генов.

Особая актуальность данной проблемы связана с тем, что в основе практически всех наследственных болезней и онкологических заболеваний лежат нарушения в регуляции генетической активности. Регуляция генетической активности - сложный многоступенчатый процесс. Многие из этапов регуляции связаны с внутриядерными реакциями и направлены на взаимодействие различных факторов с ДНК (Студитский, Храпко, 1990; Наш et al., 1992). Это, в свою очередь, является важной предпосылкой для участия белковых компонентов хроматина в регуляции транскрипции.

Регуляция транскрипции может осуществляться на каждом уровне организации хроматина. Важность нуклеосом для регуляции экспрессии показана в целом ряде исследований, свидетельствующих о том, что положение нуклеосом в генном локусе часто достаточно жестко зафиксировано (Grunstein, 1991). Существуют также прямые исследования, показывающие участие нуклеосом во взаимодействии регуляторных факторов с промотором гена (Stein et al., 1994,1996). Для осуществления процесса транскрипции необходимы изменения конформации хроматина с тем, чтобы ДНК-матрица освободилась для взаимодействия с транскрипционным комплексом. Все факторы,

осуществляющие процесс транскрипции, определенным образ расположены в пространстве, и данная пространственная организаи поддерживается с участием компонентов ядерного матрикса (Stein et; 1994,1996). Приведенные данные показывают, что регуляи генетической активности на уровне клеточного ядра не сводится активации факторов транскрипции и их взаимодействию промоторной областью генов. Компоненты хроматина так выступают в качестве факторов, регулирующих генную экспрессию.

В то же время, следует отметить, что данные по функционалы« изменениям хроматина, описанные в современной литературе, получе в разных условиях и на разных модельных генах. В частное результаты, полученные с применением экзогенных ДНКаз, часто соответствуют данным, полученным при использовании активное внутриядерных нуклеаз (Yamamoto et al., 1984, Ходарев, Вотрин, 19 Ходарев с соавт., 1987). Большинство исследований проведены на д£ крайних состояниях хроматина, т.е. хроматина неактивных и актнвн в транскрипции генных локусов, без учета промежуточных состоял (Andreeva et al., 1992), причем часто проводятся сравнения меж разными генами в разных состояниях (Миронов, 1987; De Ambrosis et; 1987). Таким образом, динамика структурной реорганизации хромати изучена слабо. В связи с этим была определена цель и задачи настоящс исследования.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ РАБОТЫ. Цель настоящей работы заключалаа изучении механизмов структурно-функциональных перестрс хроматина в процессе изменения активности транскрипци.

В связи с поставленной целью необходимо было выбрать моде исследования и модельные гены, отвечающие главному услови данные гены в ходе эксперимента должны проходить все стадии с

неактивного состояния до полностью активного. Поэтому в качестве модельных были выбраны гены раннего ответа с-Гов и с-тус (Филиппова с соавт., 1989; Макто е1 а1., 1984; Завяоп-Сога е1 а1., 1989). В качестве модели для исследования была использована модель ЦГИ-индуцированной пролиферации гепатоцитов (Бойков, 1986). ЦГИ вызывает сильную и достаточно продолжительную индукцию данных генов в гепатоцитах (Филиппова с соавт., 1989). В качестве нуклеазного зонда на структуру хроматина применили внутриядерную Ca2+/Mg2+-зависимую эндонуклеазу (Ходарев, 1989). Главная цель ее применения - сохранение и исследование нативного состояния ядерных структур, которое может искажаться при использовании экзогенных ДНКаз. Для получения фракций хроматина, различающихся по структуре, и препаратов ядерного матрикса был применен метод

фракционирования хроматина в трис-магниевом буфере (Миронов, 1987; Шевченко с соавт., 1985).

Исходя из изложенного, основные задачи исследования состояли в следующем:

1) Определить режим нуклеазной обработки ядер Са2+/М§2+-зависимой ДНКазой для сохранения нативной структуры хроматина в ходе исследования.

2) Получить различные фракции хроматина и оценить их структурные особенности и возможную функциональную нагрузку входящего в них материала.

3) Исследовать общие изменения в структуре хроматина ядер, происходящие при активации транскрипции циклогексимидом.

4) Методом блот-гибридизации ДНК, очищенной из различных фракций хроматина, с [32Р]-меченными зондами генов с-Гов и с-тус изучить изменения в структуре хроматина данных генных локусов в процессе их индукции циклогексимидом.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ. В ходе настоящего исследоьш были продолжены исследования модели ЦГИ-индуцироваш пролиферации гепатоцитов, разработанной в лаборато; молекулярной биологии ИХФЧ (Бойков, 1986). На данной модели б проведен ряд экспериментов по изучению механизмов структур: функциональных перестроек хроматина гепатоцитов в целом и отдельных генных локусах генов раннего ответа с-К« и с-тус.

В ходе исследования был разработан новый ме: электрофореза ДНК в агарозных гелях. Данный метод "двойн< старта" с использованием комбинированных агарозных га позволил значительно повысить разрешение фрагментов ДНК. Это свою очередь, позволило установить параметры нуклеолиза хромат! и достоверно определить различия в структуре хроматина рази фракций.

В ходе исследования рассмотрены процессы структур: функциональной реорганизации хроматина в динамике, от начальн этапов активации до конечных - инактивации транскрипции на оби уровне и в отдельных генных локусах. Данный подход позво; выявить общие закономерности структурной реорганизации хромати: При изучении структурно-функциональных перестроек в локу| генов с-{оз и с-тус обнаружено, что их активация сопрововдается ассоциацией со структурами ядерного матрикса. Данные, получен!: по гену с-тус, дополняют имеющиеся в литературе сведения ассоциации с ядерным матриксом активно транскрибируемых с-п последовательностей (Апскееуа е1 а1., 1992). Данные по гену с-являются новыми. В ходе исследования на уровне структу хроматина было подтверждено предположение о нали* дополнительного, слабовыраженного периода активации гена с-т Обнаружено, что степень ассоциации гена с-тус с ядерным матриксо

не зависит от максимального уровня его экспрессии. Полученные результаты отражают насыщаемость ассоциации гена со структурами ядерного матрикса.

Обнаружено, что гидролиз хроматина гепатоцитов после введения ЦГИ носит выраженный колебательный характер, и данные колебания коррелируют с этапами активации транскрипции. В результате проведенного исследования обнаружено, что активация транскрипции в гепатоцитах и индукция генов с-тус и с-К« сопровождается понижением степени гидролиза хроматина эндогенной Са2+ЛУ^2+-зависимой ДНКазой. Полученные результаты расходятся с описанным явлением повышенной чувствительности активного гена к экзогенным нуклеазам и, вероятно, связаны с характером функционирования внутриядерных систем структурно-функциональных перестроек генома.

На основании данных, полученных в результате проведенного исследования, обсуждаются механизмы одного из этапов многоступенчатого процесса, приводящего к установлению и поддержанию активной конформации хроматина.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. Результаты настоящего исследования имеют как теоретическое, так и практическое значение для изучения механизмов регуляции генетической активности.

Разработанный в ходе данной работы метод электрофореза нуклеиновых кислот имеет широкие возможности для применения в различных областях биологических исследований в связи с простотой, эффективностью и возможностями различных выриаций параметров метода.

Феноменология, изученная в ходе настоящей работы, может служить основой для функциональных исследований неизученных

областей генома, проводимых, в частности, в рамках Государствен!! научно-технической программы "Геном человека". Явление ассоциац активных протоонкогенов с ядерным матриксом открывг возможности новых подходов к генотерапии различных заболеваш Аналогичное приложение могут иметь полученные данные особенностям функционирования внутриядерных ДНКаз.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ. ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1. Активация транскрипции сопряжена с ассоциаци транскрибируемой ДНК со структурами ядерного матрикса.

2. Активация транскрипции сопровождается понижением активное Са2+ЛУ^2+-зависимой эндонуклеазы в локусе транскрибируемого гена.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Результаты исследования доложены Всероссийской школе-конференции молодых ученых "Современн проблемы молекулярной биологии", Черноголовка, 1995, на ГЪп конференции "Геном человека-96", Черноголовка, 1996, на Шал конференции "Геном человека", Москва, 1996, на XII Всероссийск симпозиуме "Структура и функции клеточного ядра", Санкт-Петербург, 199

ПУБЛИКАЦИИ. По материалам диссертации опубликовано печатных работ, 2 работы приняты в печать.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ РАБОТЫ. Диссертация состоит из введен! обзора литературы (главы 1 - 4), описания материалов и метод исследования, результатов исследования и их обсуждения (главы 5 -выводов и списка литературы.

Объем диссертации составляет 152 страницы машинописного текс включая 29 рисунков. Библиография включает 232 наименования.

Методы исследования

ЦГИ вводили самцам крыс линии \Vistar (0.3 мг/100 г веса). На разных этапах действия ЦГИ животных забивали и извлекали печень, из которой затем выделяли клеточные ядра. Ядра помещались в буфер, в котором активируется внутриядерная Са2+/М£2+-зависимая эндонуклеаза.

После нуклеазной обработки проводилась процедура фракционирования хроматина на 4 фракции - 2 фракции, растворимые в буфере с низкой концентрацией ионов Мд2+ (0.2 тМ М§СЬ и 10 тМ трис-НС1, рН 7.5 (ТМ-буфер)) при +4°С и при +30°С. Фракции обозначены, соответственно, Хр-1 и Хр-2. Затем хроматин экстрагировался тем же буфером в присутствии 2М ШС1 (высокосолевая фракция, Хр-ВС). После отмывки ТМ-буфером с тритоном Х-100 получали конечный осадок - фракцию хроматина, содержащюю ядерный матрикс (Хр-ЯМ).

Из каждой фракции очищалась ДНК, после электрофореза ДНК переносилась на нитроцеллюлозные фильтры или нейлоновые мембраны и проводилась процедура блот-гибридизации с [замеченными зондами генов с-Гоб и с-тус.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Макроструктурная реорганизация хроматина при подавлении трансляции и активации транскрипции циклогексимидом.

Циклогексимид (ЦГИ) вызывает глубокое (на 80 - 95 %) подавление синтеза белка в гепатоцитах и, одновременно,-периодическую активацию транскрипции. Нарис.1 показаны изменения

О 2 4 6 8 10 12

время, ч

Рис.1. Изменения в относительном содержании хроматина ] фракциях Хр-1 (1), Хр-2 (2), Хр-ВС (3) и Хр-ЯМ (4) после введения ЦП

содержании хроматина в разных фракциях после введения ЦГИ. I рис.1 видно, что при действии ЦГИ снижается количество хроматин ратсворимого в ТМ-буфере, и повышается содержан: труднорастворимого хроматина (Хр-ВС). Содержание хроматина ядерном матриксе (Хр-ЯМ) коррелирует с периодами активации РН] полимеразы II (1-2 ч и 6 - 12 ч после введения ЦГИ (Шевченко с соавт

1985)) по времени и по выраженности. Обращают на себя внимание противонаправленные изменения в содержании хроматина во фракциях Хр-ВС и Хр-ЯМ. Полученные данные свидетельствуют о том, что с ядерным матриксом ассоциирован транскрипционно активный хроматин, а фракция Хр-ВС представлена неактивными областями генома.

2. Изменения в структуре хроматина на нуклеосомном уровне.

Выраженные изменения в растворимости хроматина, отражающие его макроструктурную реорганизацию, должны отражаться на структуре нуклеосомной нити. При электрофорезе ДНК, очищенной из фракций хроматина, обнаружено, что во фракцию Хр-1 периодически экстрагируется хроматин, для которого характерны удлиненные нуклеосомные фрагменты (рис.2(А)). Данные периоды коррелируют по времени с противонаправленными изменениями в содержании хроматина во фракциях Хр-ВС и Хр-ЯМ (рис.1). Применение разработанного электрофореза с двойным стартом позволило выявить подобные изменения на начальной стадии действия ЦГИ (рис.2(Б)). Полученные данные и тот факт, что фракция Хр-2 обогащена активностью РНК-полимеразы II (Шевченко с соавт., 1985), показывают, что фракция Хр-1 представлена хроматином в переходном состоянии - от неактивного компактного (Хр-ВС) к активному некомпактному (Хр-2), ассоциированному с ядерным матриксом (Хр-ЯМ).

3. Ассоциация транскрибируемых последовательностей ДНК с ядерным

матриксом.

При гибридизации ДНК, очищенной из фракций хроматина, с радиоактивными зондами генов с-йк и с-тус показано, что неактивные

А

к 1 2

И

Зп 2в-

2ч 1 2

-Зп Зп-2п

4ч 6ч

1 2 1 2

-311

Зп-

-2п

ГП

Зпч

"Зп 211ч

-Зп -2п

К

.ЦД

30мШ1

2п-~

-2в

Рис.2. А: электрофорез в 1%-ном агарозном геле ДН очищенной из растворимых фракций хроматина Хр-1 (1) и Хр-2 (2) , (К) и после введения ЦГИ (2 ч, 4ч, 6ч). Б: Электрофорез в составш агарозном геле (3%-1% агароза) ДНК, очищенной из фракций Хр-1 (Г Хр-2 (2) до (К) и через 30 мин после введения ЦГИ. Стрелками (п, 2п, 3 указаны положения соответствующих нуклеосомных фрагментов.

протоонкогены с-Го я и с-шус ассоциированы в основном с труднорастворимой фракцией хроматина Хр-ВС (рис.3). Обнаружено, что активация исследуемых генов сопровождается повышением количества зонда, сгибридизованного с ДНК фракции Хр-ЯМ. Подобные изменения показаны для гена раннего ответа с-тус на более поздних этапах действия ЦГИ (рис.З(Б)). Полученные данные подтверждают наличие дополнительного периода индукции гена с-тус через 9 - 10 ч после введения ЦГИ, обнаруженного ранее при блот-гибридизации РНК сотрудниками лаборатории регуляторных процессов клетки ИХФЧ Г.В. Косткж с соавт. Показано, что степень ассоциации со структурами ядерного матрикса не коррелирует с уровнем максимальной экспрессии гена с-тус.

4. Изменения в характере гидролиза хроматина при активации и инактивации транскрипции.

После сканирования негативов, полученных при фотосъемке электрофореза ДНК, и радиоавтографов, полученных при блот-гибридизации, определялось относительное содержание материала (немеченной или меченной ДНК) в низкомолекулярной области сканограммы, с длиной фрагментов ниже 2027 п.н. (в качестве маркера использовался фрагмент соответствующей длины, полученный при рестрикции ДНК фага А. рестриктазой НшсПИ). Результаты измерений содержания низкомолекулярных фрагментов (НМФ) в ДНК фрауций представлены на рис.4. Видно, что периоды понижения содержания НМФ коррелируют с периодами активации транскрипции (1-2 ч и 6 -12 ч после введения ЦГИ (Шевченко с соавт., 1985)).

Данные, полученные при сканировании радиоавтографов после блот-гибридизации с радиоактивными зондами генов с-Сох и с-тус

50- 3

§ 30-Е В

время, ч

8 30-

I

4 Л.

время, ч

Рис.3. Изменения относительного содержания генов с-й« (А) I туе (Б) во фракциях хроматина Хр-1 (1), Хр-2 (2), Хр-ВС (3) и Хр-З (4) после введения ЦГИ.

|-,-,-,-,-,-,-.-|-.-,-.-1

0 2 4 6 8 10 12

время, ч

Рис.4. Изменения относительного содержания низкомолекулярных фрагментов (НМФ) в ДНК фракций Хр-1 (1), Хр-2 (2), Хр-ВС (3) и Хр-ЯМ (4) после введения ЦГИ.

(рис.5) показывают, что активация транскрипции сопровождается понижением степени фрагментированности хроматина при действии внутриядерной Са2+/Мд2+-зависимой ДНКазы (СМЭ) в отдельном генном локусе. Полученные данные расходятся с представлениями о повышенной чувствительности транскрибируемой ДНК к нуклеазам. Однако, учитывая функциональную роль Са2+Л^2+-зависимой ДНКазы, связанную с реорганизацией хроматина, ее неслучайное распределение внутри ядра и возможность ее регуляции (Ходарев, 1989), можно видеть, что функционирование СМЭ не связано с процессами транскрипции.

0 12 3 4

I-.-1-1-1-1-1-1-1-1-1-1-1

О 2 4 6 8 10 12

время, ч

Рис.5. Изменения в относительном содержании низкомолекул: ных фрагментов в ДНК фракций Хр-1 (1), Хр-2 (2), Хр-ВС (3) и Хр-5 (4), сгибридизованных с зондами генов с-йэв (А) и с-тус (Б) по> введения ЦГИ.

Таким образом, предполагается существование механизмов, определяющих селективное понижение активности СМЭ в локусе активно транскрибируемого гена.

5. Анализ механизмов структурно-функциональной реорганизации хроматина при изменениях транскрипционной активности.

Хроматин в отдельном генном локусе может находиться в различных структурных состояниях. На примере генов раннего ответа с-йм и с-тус показано, что определенное состояния хроматина можно определить как систему, в которую входит ряд конформационных интермедиатов. Так, и в условиях активной экспрессии, и при отсутствии экспрессии последовательности ДНК, соответствующие исследуемым генам, обнаруживаются во всех фракциях хроматина. Поэтому изменения в транскрипционной активности приводят не столько к генерализованной реорганизации хроматина, сколько к смещению равновесия в системе в сторону одного из промежуточных состояний.

На рис.6 представлена схема, описывающая три конформационных состояния хроматина. В локусе неактивного гена (рис.6(А)) состояние хроматина таково, что равновесие между различными конформациями смещено в сторону образования компактной структуры хроматина (Хр-ВС). Изменения конформации при переходах от одного промежуточного состояния к другому осуществляются, вероятно, при участии Са2+/Мя2+-зависимой ДНКазы.

Активация транскрипции сопровождается смещением равновесия в данной системе в сторону открытой конформации фракции Хр-2 и параллельно происходит ассоциация хроматина генного локуса со структурами ядерного матрикса (рис.б(В)).

А Хр-ВС Хр-1 Хр-ЯМ Хр-2 I-1 I-1 I-II-1

неактивный ген

мРНК

низкоактивныи ген

мРНК

активный ген

Рис.6. Схема структурно-функциональной реоргакизаг хроматина при изменениях транскрипционной активности. Pol - PI полимераза. Черными прямоугольниками обозначены конститутивг контакты ДНК генного локуса с ядерным матриксом. Осталы пояснения см. в тексте.

В настоящем исследовании показана возможность третьего состояния хроматина, в котором обнаруживается смещение равновесия в сторону образования относительно некомпактного, но нетранскрибируемого хроматина (рис.б(Б)). Возможно, подобное состояние характерно для хроматина покоящихся гепатоцитов (рис.1), а также проявляется во время второго периода активации гена с-шус (рис.3).

В целом, подобная равновесная система конформационных интермедиатов хроматина, по-видимому, является основой быстротечной реорганизации хроматина в локусах генов раннего ответа с-1о5 и с-шус и определяет их быструю активацию непосредственно после воздействия. Кроме того, подобная система может определять быструю и генерализованную реакцию хроматина на подавление трансляции.

20

ВЫВОДЫ

1. Глубокое подавление трансляции и связанная с ним активац: транскрипции сопровождаются реорганизацией структур хроматш Данные перестройки затрагивают все уровни организации хроматин; от нуклеосомного до макроструктурного, что выражается в изменен; характера фракционирования хроматина.

2. Структурная реорганизация хроматина в ответ на подавлен белкового синтеза носит выраженный периодичный характер. Данн периодичность коррелирует с процессами активации и инактивац транскрипции.

3. Хроматин в локусах неактивных генов с-Азв и с-гг представлен преимущественно компактной структурой и входит состав труднорастворимой фракции хроматина.

4. Активация транскрипции в гепатоцитах и индукция генов Гой и с-тус сопровождается ассоциацией хроматина с ядерш матриксом. На примере гена с-тус показано, что степень ассоциацш хроматина ядерным матриксом не коррелирует с уровнем максимальн экспрессии гена.

5. Активация транскрипции сопровождается понижени степени гидролиза хроматина эндогенной Са2+/Гу^2+-зависим эндонуклеазой как на общем уровне, так и на уровне отдельных локус генов с-1о8 и с-тус. Данное явление предполагает сущсствова: механизмов защиты активно транскрибируемых генов от эндогенн ДНКаз.

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1. Бойков П.Я., Костюк Г.В., Терентьев A.A., Шевченко H.A. Концентрирование протоонкогенов в ядрах гепатоцитов. // Молекулярная биология,- 1995,- Т.29.- Вып.5,- с. 1335-1341.

2. Терентьев A.A. Пути регуляции протоонкогена c-fos. // Биохимия.-1995.- Т.60,- Вып. 12,- с.1931-1952.

3. Терентьев A.A., Костюк Г.В., Бойков П.Я. Ассоциация гена с-тус с ядерным матриксом в процессе его активации. // Тезисы Пятой конференции "Геном человека-96", 15-18 января 1996 г., Москва, 1996,-с.64.

4. Бойков П.Я., Костюк Г.В., Терентьев A.A., Макарьева Е.Д., Логинов A.C. Реорганизация структуры хроматина при переключении генов "раннего ответа" на "средние" гены в клетках печени крыс. // Тезисы XII Всероссийского симпозиума "Структура и функции клеточного ядра", 22-24 октября 1996 г., Санкт-Петербург. В журнале "Цитология".- 1997,- Т.39,- №1. - с.43-44.

5. Терентьев A.A., Костюк Г.В., Бойков П.Я. Изменение структурной организации нуклеосомной нити в процессе активации протоонкогенов. // Биохимия,- 1998,- Т.63,- Вып.2.

6. Терентьев A.A., Костюк Г.В., Бойков П.Я. Динамика ассоциации-циссоциации гена с-тус с ядерным матриксом в процессе активации-инактивации гена. // Биохимия.- 1998.- Т.63.- Вып.4.