Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Структура и функции С-концевого домена тропомодулина, белка, кэпирующего актиновые филаменты

ВАК РФ 03.00.03, Молекулярная биология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Кригер, Инна Владимировна

Список сокращений:.

ВВЕДЕНИЕ.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Актиновые филаменты и актин-связывающие белки, контролирующие динамику актина в клетке.

1.2 Регуляция длины актиновых филаментов.

1.3 Тропомодулин - белок, кэпирующий актиновые филаменты на медленно растущем конце.

2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1 Экспрессия и выделение тропомодулина Тшос! (N39).

2.2 Получение и очистка С-концевого фрагмента тропомодулина (С20).

2.3 Получение и очистка Ы-концевого фрагмента тропомодулина (N11).

2.4 Получение и очистка Ы-концевого фрагмента небулина М1-М2-МЗ.

2.5 «Сшивание» глутаровым альдегидом.

2.6 Биотинилирование тропомодулина и С20.

2.7 Дот-эксперименты по связыванию биотинилированного тропомодулина (или С20).

2.8 Кристаллизация С20 и сбор дифракционных данных.

2.9 Решение и уточнение структуры С20.

3 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1 Выделение и очистка белков.

3.2 Взаимодействие тропомодулина с тропомиозином, актином и небулином

3.3 Кристаллизация С20.

3.4 Сбор рентгеноструктурных данных.

3.5 Построение и уточнение атомной модели С20.

3.6 Описание структуры С-концевой половины троломодулина (С20).

3.7 LRR как новый для актин-связывающих белков способ укладки полипептидной цепи и его возможный вклад в кэпирование медленно растущего конца актиновых филаментов.

3.8 Возможный механизм кэпирования медленно растущего конца актиновых филаментов тропомодулином.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Структура и функции С-концевого домена тропомодулина, белка, кэпирующего актиновые филаменты"

Актиновые филаменты выполняют множество важных функций - в частности, участвуют в мышечном сокращении, транспорте органелл и делении клеток. Актиновый филамент полярен, так что его концы (быстро растущий и медленно растущий) отличаются друг от друга, как по структурным, так и по динамическим характеристикам. Тропомодулин 40 кДа) специфически связывается с медленно растущим концом актиновых филаментов, подавляя дальнейший рост или диссоциацию филамента на этом конце, и таким образом принимает участие в определении и регуляции длины актиновых филаментов в клетках. Тропомодулин встречается в большинстве типов клеток млекопитающих. На данный момент описано четыре изоформы тропомодулина, два более крупных родственных белка (~ 64 кДа), названых лейомодинами, и гомолог тропомодулина (продукт гена Запроёо) у Эго$орЫ1а, отвечающий за асимметричное деление клеток.

На медленно растущем конце актиновых филаментов тропомодулин взаимодействует с тропомиозином, актином и, если есть, небулином. В отсутствие тропомиозина сродство тропомодулина к медленно растущему концу актиновых филаментов мало, тогда как в присутствии тропомиозина это сродство возрастает больше чем в 1000 раз. Кэпирующую активность приписывают С-концевой половине тропомодулина. Ы-конец тропомодулина взаимодействует с 1Ч-концом тропомиозина, предположительно образуя тройную скрученную спираль. Установлено, что тропомодулин также способен взаимодействовать с Ы-концевым фрагментом небулина (модулями М1-М2-МЗ).

Для понимания механизма кэпирования медленно растущего конца тропомодулином очень важной представляется информация о структуре этого белка. До недавнего времени, пока в нашей лаборатории не были проанализированы данные малоуглового рентгеновского рассеяния, даже форма молекулы была спорным вопросом. В настоящей работе представлена атомная структура С-концевой половины тропомодулина. Эта часть молекулы была выбрана в качестве объекта структурных исследований из-за ее основной роли в собственно кэпировании, а также по причине ее компактности, показанной в предшествующих исследованиях методами ограниченного протеолиза и калориметрии.

Исследования, проделанные в нашей лаборатории, показали, что С-концевая и N-концевая половины тропомодулина различаются как структурно, так и функционально. N-концевая половина вытянута и в растворе не имеет определенной третичной структуры, но, очевидно, структурируется при связывании с тропомиозином. Тогда как С-концевая половина представляет собой компактно свернутый домен, устойчивый к протеолизу и плавящийся кооперативно.

Атомная структура С-концевой половины тропомодулина (С20) содержит лейцин богатые повторы (leucine-rich repeat или LRR), имеющие характерную соленоидную упаковку. Основываясь на функциональных экспериментах и на информации из литературы о способах функционирования LRR белков, мы предлагаем возможный механизм кэпирования тропомодулином медленно растущего конца актиновых филаментов.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Молекулярная биология", Кригер, Инна Владимировна

выводы

1. Показано, что N-концевая часть тропомодулина взаимодействует с тропомиозином, С-концевая - с небулином, и обе части слабо взаимодействуют с актином.

2. Получены кристаллы С-концевого домена тропомодулина (С20), отражающие рентгеновские лучи с разрешением до 1.25 Ä и пригодные для рентгеноструктурного анализа. Кристаллы принадлежат к пространственной группе симметрии R3 с параметрами элементарной кристаллической ячейки: а -b - 69.29 А, с - 101.23 Ä, ос- ß = 90°, 7= 120°, независимая часть элементарной ячейки содержит одну молекулу С20.

3. Измерены интенсивности рентгеновских отражений от кристаллов С20 до разрешения 1.45 Ä с использованием синхротронного излучения.

4. Определены и уточнены координаты тяжелого атома (Zn). Методом многоволновой аномальной дисперсии (MAD) рассчитаны фазы структурных факторов белка до разрешения 1.8 Ä, которые затем были улучшены и расширены до разрешения 1.45 Ä.

5. Построена и уточнена атомная модель фрагмента С20 при разрешении 1.45 Ä, с Ä-фактором 0.2118 и отклонением длин связей от идеальных 0.005 Ä. Модель молекулы С20 содержит 1297 белковых атомов, 170 молекул воды и 1 ион цинка.

6. На основе полученной атомной модели С20, функциональных экспериментов и данных литературы предложен механизм кэпирования тропомодулином медленно растущего конца актиновых филаментов.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Кригер, Инна Владимировна, Москва

1. Almenar-Queralt, A., Gregorio, C.C. and Fowler, V.M. (1999a) Tropomodulin assembles early in myoiibrillogenesis in chick skeletal muscle: evidence that thin filaments rearrange to form striated myofibrils. J Cell Sci, 112,1111-23.

2. Almenar-Queralt, A., Lee, A., Conley, C.A., Ribas de Pouplana, L. and Fowler, V.M. (1999b) Identification of a novel tropomodulin isoform, skeletal tropomodulin, that caps actin filament pointed ends in fast skeletal muscle. J Biol Chem, 11 A, 28466-75.

3. Altschul, S.F., Madden, T.L., Schaffer, A.A., Zhang, J., Zhang, Z., Miller, W. and Lipman, D.J. (1997) Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs. Nucleic Acids Res, 25, 3389-402.

4. Appel, R.D., Bairoch, A. and Hochstrasser, D.F. (1994) A new generation of information retrieval tools for biologists: the example of the ExPASy WWW server. Trends Biochem Sci, 19,258-60.

5. Babcock, G.G. and Fowler, V.M. (1994) Isoform-specific interaction of tropomodulin with skeletal muscle and erythrocyte tropomyosins. J Biol Chem, 269, 27510-8.

6. Bamburg, J.R., McGough, A. and Ono, S. (1999) Putting a new twist on actin: ADF/cofilins modulate actin dynamics. Trends Cell Biol, 9, 364-70.

7. Borisy, G.G. and Svitkina, T.M. (2000) Actin machinery: pushing the envelope. Curr Opin Cell Biol, 12, 104-12.

8. Brown, J.H., Kim, K.H., Jun, G., Greenfield, N.J., Dominguez, R., Volkmann, N., Hitchcock-DeGregori, S.E. and Cohen, C. (2001) Deciphering the design of the tropomyosin molecule. Proc Natl Acad Sci USA, 98, 8496-501.

9. Brunger, A.T. (1992) . Yale University Press, New Havenm CT.

10. Buchanan, S.G. and Gay, N J. (1996) Structural and functional diversity in the leucine-rich repeat family of proteins. Prog. Biophys. molec. Biol., 65, 1-44.

11. Burtnick, L.D., Koepf, E.K., Grimes, J., Jones, E.Y., Stuart, D.I., McLaughlin, P.J. and Robinson, R.C. (1997) The crystal structure of plasma gelsolin: implications for actin severing, capping, and nucleation. Cell, 90, 661-70.

12. Carlier, M.F. (1998) Control of actin dynamics. Curr Opin Cell Biol, 10, 4551.

13. Carlier, M.F., Ressad, F. and Pantaloni, D. (1999) Control of actin dynamics in cell motility. Role of ADF/cofilin. J Biol Chem, 274, 33827-30.

14. CCP4. (1994) The CCP4 suite: programs for protein crystallography. Acta Cryst., 760-763.

15. Chalovich, J.M., Sen, A., Resetar, A., Leinweber, B., Fredricksen, R.S., Lu, F. and Chen, Y.D. (1998) Caldesmon: binding to actin and myosin and effects on elementary steps in the ATPase cycle. Acta Physiol Scand, 164, 427-35.

16. Chen, H., Bernstein, B.W. and Bamburg, J.R. (2000) Regulating actin-filament dynamics in vivo. Trends Biochem Sci, 25,19-23.

17. Chik, J.K., Lindberg, U. and Schutt, C.E. (1996) The structure of an open state of beta-actin at 2.65 A resolution. JMol Biol, 263, 607-23.

18. Conley, C.A., Almenar-Queralt, A., and Fowler, V.M. (1998) Identifying novel tropomodulin isoforms. Mol. Biol. Cell, 9, ISA.

19. Conley, C.A., Fritz-Six, K.L., Almenar-Queralt, A. and Fowler, V.M. (2001) Leiomodins: larger members of the tropomodulin (tmod) gene family. Genomics, 73,127-39.

20. Cooper, J .A. and Schafer, D.A. (2000) Control of actin assembly and disassembly at filament ends. Curr Opin Cell Biol, 12, 97-103.

21. Cox, P.R. and Zoghbi, H.Y. (2000) Sequencing, expression analysis, and mapping of three unique human tropomodulin genes and their mouse orthologs. Genomics, 63, 97-107.

22. De Matteis, M.A. and Morrow, J.S. (2000) Spectrin tethers and mesh in the biosynthetic pathway. J Cell Sci, 113, 2331-43.

23. Egelman, E.H. (1997) New angles on actin dynamics. Structure, 5, 1135-7.

24. Fedorov, A.A., Lappalainen, P., Fedorov, E.V., Drubin, D.G. and Almo, S.C. (1997) Structure determination of yeast cofilin. Nat Struct Biol, 4, 366-9.

25. Fischer, R.S., Lee, A. and Fowler, V.M. (2000) Tropomodulin and tropomyosin mediate lens cell actin cytoskeleton reorganization in vitro. Invest Ophthalmol Vis Sci, 41, 166-74.

26. Fowler, V.M. (1987) Identification and purification of a novel Mr 43,000 tropomyosin-binding protein from human erythrocyte membranes. J Biol Chem, 262, 12792-800.

27. Fowler, V.M. (1996) Regulation of actin filament length in erythrocytes and striated muscle. Curr Opin Cell Biol, 8, 86-96.

28. Fowler, V.M. (1997) Capping actin filament growth: tropomodulin in muscle and nonmuscle cells. Soc Gen Physiol Ser, 52, 79-89.

29. Fujisawa, T., Kostyukova, A. and Maeda, Y. (2001) The shapes and sizes of two domains of tropomodulin, the P-end-capping protein of actin-tropomyosin. FEBS Lett, 498,67-71.

30. Gregorio, C.C. (1997) Models of thin filament assembly in cardiac and skeletal muscle. Cell Struct Funct, 22,191-5.

31. Gregorio, C.C., Weber, A., Bondad, M., Pennise, C.R. and Fowler, V.M. (1995) Requirement of pointed-end capping by tropomodulin to maintain actin filament length in embryonic chick cardiac myocytes. Nature, 377, 83-6.

32. Holmes, K.C., Popp, D., Gebhard, W. and Kabsch, W. (1990) Atomic model of the actin filament. Nature, 347,44-9.

33. Huff, T., Muller, C.S., Otto, A.M., Netzker, R. and Hannappel, E. (2001) beta-Thymosins, small acidic peptides with multiple functions. Int J Biochem Cell Biol, 33,205-20.

34. Huxley, A.F. (2000) Cross-bridge action: present views, prospects, and unknowns. JBiomech, 33, 1189-1195.

35. Ito, M., Swanson, B., Sussman, M.A., Kedes, L. and Lyons, G. (1995) Cloning of tropomodulin cDNA and localization of gene transcripts during mouse embryogenesis. Dev Biol, 167, 317-28.

36. Kabsch, W., Mannherz, H.G., Suck, D., Pai, E.F. and Holmes, K.C. (1990) Atomic structure of the actin:DNase I complex. Nature, 347, 37-44.

37. Kabsch, W. and Vandekerckhove, J. (1992) Structure and function of actin. Annu Rev Biophys Biomol Struct, 21,49-76.

38. Kajava, A.V. (1998) Structural diversity of leucine-rich repeat proteins. J Mol Biol, 111, 519-27.

39. Kajava, A.V., Vassart, G. and Wodak, S.J. (1995) Modeling of the three-dimensional structure of proteins with the typical leucine-rich repeats. Structure, 3, 867-77.

40. Kobe, B. and Deisenhofer, J. (1993) Crystal structure of porcine ribonuclease inhibitor, a protein with leucine-rich repeats. Nature, 366, 751-6.

41. Kobe, B. and Deisenhofer, J. (1994) The leucine-rich repeat: a versatile binding motif. Trends Biochem Sci, 19,415-21.

42. Kobe, B. and Deisenhofer, J. (1995a) Proteins with leucine-rich repeats. Curr Opin Struct Biol, 5,409-16.

43. Kobe, B. and Deisenhofer, J. (1995b) A structural basis of the interactions between leucine-rich repeats and protein ligands. Nature, 374,183-6.

44. Kobe, B. and Kajava, A.V. (2000) When protein folding is simplified to protein coiling: the continuum of solenoid protein structures. Trends Biochem Sci, 25,509-15.

45. Kostyukova, A., Maeda, K, Yamauchi, E., Krieger, I. and Maeda, Y. (2000) Domain structure of tropomodulin Distinct properties of the N-terminal and exterminai halves. Eur J Biochem, 267, 6470-6475.

46. Kostyukova, A.S., Tiktopulo, E.I. and Maeda, Y. (2001) Folding properties of functional domains of tropomodulin. Biophys J, 81, 345-51.

47. Kraulis, PJ. (1991) MOLSCRIPT: a program to produce both detailed and schematic plots for protein structures. J. Appl. Crystallogr., 24,946-950.

48. Krieger, I., Kostyukova, A.S. and Maeda, Y. (2001) Crystallization and preliminary characterization of crystals of the C-terminal half fragment of tropomodulin. Acta Crystallogr D Biol Crystallogr, 57,743-744.

49. Kruger, M., Wright, J. and Wang, K. (1991) Nebulin as a length regulator of thin filaments of vertebrate skeletal muscles: correlation of thin filament length, nebulin size, and epitope profile, J Cell Biol, 115, 97-107.

50. Kuhlman, P.A. (2000) Characterization of the actin filament capping state in human erythrocyte ghost and cytoskeletal preparations. Biochem J, 349, 105111.

51. Labeit, S. and Kolmerer, B. (1995) The complete primary structure of human nebulin and its correlation to muscle structure. J Mol Biol, 248, 308-15.

52. Laemmli, U.K. (1970) Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature, 221,680-5.

53. Littlefield, R., Almenar-Queralt, A. and Fowler, V.M. (2001) Actin dynamics at pointed ends regulates thin filament length in striated muscle. Nat Cell Biol, 3, 544-51.

54. Littlefield, R. and Fowler, V.M. (1998) Defining actin filament length in striated muscle: rulers and caps or dynamic stability? Annu Rev Cell Dev Biol, 14,487-525.

55. Lorenz, M., Popp, D. and Holmes, K.C. (1993) Refinement of the F-actin model against X-ray fiber diffraction data by the use of a directed mutation algorithm. J Mol Biol, 234, 826-36.

56. Matsuoka, Y., Li, X. and Bennett, V. (2000) Adducin: structure, function and regulation. Cell Mol Life Sci, 57, 884-95.

57. Matthews, B.W. (1968) Solvent content of protein crystals. J Mol Biol, 33, 491-7.

58. McElhinny, A.S., Kolmerer, B., Fowler, V.M., Labeit, S. and Gregorio, C.C. (2001) The N-terminal End of Nebulin Interacts with Tropomodulin at the Pointed Ends of the Thin Filaments. J Biol Chem, 276, 583-592.

59. McGough, A. (1998) F-actin-binding proteins. Curr Opin Struct Biol, 8, 16676.

60. McGough, A., Chiu, W. and Way, M. (1998) Determination of the gelsolin binding site on F-actin: implications for severing and capping. Biophys J, 74, 764-72.

61. McLaughlin, P.J., Gooch, J.T., Mannherz, H.G. and Weeds, A.G. (1993) Structure of gelsolin segment 1-actin complex and the mechanism of filament severing. Nature, 364, 685-92.

62. Meritt, E.A. and Murphy, M.E.P. (1994) Raster3D Version 2.0 a program for photorealistic molecular graphics. Acta Crystallogr., D50, 869-873.

63. Miegel, A., Kobayashi, T. and Maeda, Y. (1992) Isolation, purification and partial characterisation of tropomyosin and troponin subunits from the lobster tail muscle. J. Muscle Res. Cell Motil, 13,608-618.

64. Mitchison, T.J. and Cramer, L.P. (1996) Actin-based cell motility and cell locomotion. Cell, 84, 371-9.

65. Moncman, C.L. and Wang, K. (1995) Nebulette: a 107 kD nebulin-like protein in cardiac muscle. Cell Motil Cytoskeleton, 32, 205-25.

66. Mooseker, M.S. (1985) Organization, chemistry, and assembly of the cytoskeletal apparatus of the intestinal brush border. Annu Rev Cell Biol, 1, 209-41.

67. Morris, M.B. and Lux, S.E. (1995) Characterization of the binary interaction between human erythrocyte protein 4.1 and actin. Eur JBiochem, 231, 644-50.

68. Nodelman, I.M., Bowman, G.D., Lindberg, U. and Schutt, C.E. (1999) X-ray structure determination of human profilin II: A comparative structural analysis of human profilins. J Mol Biol, 294, 1271 -85.

69. Otterbein, L.R., Graceffa, P. and Dominguez, R. (2001) The crystal structure of uncomplexed actin in the ADP state. Science, 293, 708-11.

70. Otwinowski, Z.M., W. (1997) Processing of X-ray Diffraction Data Collected in Oscillation Mode. Methods in Enzymology, 276, 307-326.

71. Papageorgiou, A.C., Shapiro, R. and Acharya, K.R. (1997) Molecular recognition of human angiogenin by placental ribonuclease inhibitor—an X-ray crystallographic study at 2.0 A resolution. EmboJ, 16, 5162-77.

72. Park, M., Yaich, L.E. and Bodmer, R. (1998) Mesodermal cell fate decisions in Drosophila are under the control of the lineage genes numb, Notch, and sanpodo. Mech Dev, 75, 117-26.

73. Perrakis, A., Morris, R. and Lamzin, V.S. (1999) Automated protein model building combined with iterative structure refinement. Nat Struct Biol, 6, 45863.

74. Pflxhl, M., Winder, S .J., Castiglione Morelli, M.A., Labeit, S. and Pastore, A. (1996) Correlation between conformational and binding properties of nebulin repeats. J Mol Biol, 257, 367-84.

75. Pfuhl, M., Winder, S.J. and Pastore, A. (1994) Nebulin, a helical actin binding protein. EmboJ, 13, 1782-9.

76. Pollard, T.D., Blanchoin, L. and Mullins, R.D. (2000) Molecular mechanisms controlling actin filament dynamics in nonmuscle cells. Annu Rev Biophys Biomol Struct, 29, 545-76.

77. Puius, Y.A., Mahoney, N.M. and Almo, S.C. (1998) The modular structure of actin-regulatory proteins. Curr Opiti Cell Biol, 10, 23-34.

78. Robinson, R.C., Mejillano, M., Le, V.P., Burtnick, L.D., Yin, H.L. and Choe, S. (1999) Domain movement in gelsolin: a calcium-activated switch. Science, 286,1939-42.

79. Robinson, T.F. and Winegrad, S. (1979) The measurement and dynamic implications of thin filament lengths in heart muscle. J Physiol (Lond), 286, 607-19.

80. Roussel, A. and Cambillau, C. (1996). AFMB-CNRS, Marseille, France.

81. Schluter, K., Jockusch, B.M. and Rothkegel, M. (1997) Profilins as regulators of actin dynamics. Biochim Biophys Acta, 1359, 97-109.

82. Schutt, C.E., Myslik, J.C., Rozycki, M.D., Goonesekere, N.C. and Lindberg, U. (1993) The structure of crystalline profilin-beta-actin. Nature, 365, 810-6.

83. SIGMA. BiotinTag, Microbiotinylation Kit.

84. Spudich, J.A. and Watt, S. (1971) The regulation of rabbit skeletal muscle contraction. I. Biochemical studies of the interaction of the tropomyosin-troponin complex with actin and the proteolytic fragments of myosin. J Biol Chem, 246,4866-71.

85. Spudich JA, H.H., Finch JT. (1972) Regulation of skeletal muscle contraction II. Structural studies of the interaction of the tropomyosin-troponin complex with actin. J. Mol. Biol., 72, 619-632.

86. Squire, J.M. and Morris, E.P. (1998) A new look at thin filament regulation in vertebrate skeletal muscle published erratum appears in FASEB J 1998 Sep; 12(12): 1252. Faseb J, 12, 761-71.

87. Sung, L.A., Fan, Y. and Lin, C.C. (1996) Gene assignment, expression, and homology of human tropomodulin. Genomics, 34, 92-6.

88. Sung, L.A., Fowler, V.M., Lambert, K., Sussman, M.A., Karr, D. and Chien, S. (1992) Molecular cloning and characterization of human fetal liver tropomodulin. A tropomyosin-binding protein. J Biol Chem, 267,2616-21.

89. Sung, L.A. and Lin, J.J. (1994) Erythrocyte tropomodulin binds to the N-terminus of hTM5, a tropomyosin isoform encoded by the gamma-tropomyosin gene. Biochem Biophys Res Commun, 201, 627-34.

90. Terwilliger, T.C. and Berendzen, J. (1999) Automated MAD and MIR structure solution. Acta Crystallogr D Biol Crystallogr, 55, 849-61.

91. Tilney, L.G., Connelly, P.S., Vranich, K.A., Shaw, M.K. and Guild, G.M. (2000) Regulation of actin filament cross-linking and bundle shape in Drosophila bristles. J Cell Biol, 148, 87-100.

92. Tirion, M.M. and ben-Avraham, D. (1993) Normal mode analysis of G-actin. J MolBiol, 230, 186-95.

93. Tse, W.T. and Lux, S.E. (1999) Red blood cell membrane disorders. Br J Haematol, 104, 2-13.

94. Vale, R.D. and Milligan, R.A. (2000) The way things move: looking under the hood of molecular motor proteins. Science, 288, 88-95.

95. Van Troys, M., Vandekerckhove, J. and Ampe, C. (1999) Structural modules in actin-binding proteins: towards a new classification. Biochim Biophys Acta, 1448, 323-48.

96. Vera, C., Sood, A., Gao, K.M., Yee, L.J., Lin, J.J. and Sung, L.A. (2000) Tropomodulin-binding site mapped to residues 7-14 at the N-terminal heptad repeats of tropomyosin isoform 5. Arch Biochem Biophys, 378, 16-24.

97. Watakabe, A., Kobayashi, R. and Helfman, D.M. (1996) N-tropomodulin: a novel isoform of tropomodulin identified as the major binding protein to brain tropomyosin. J Cell Sci, 109, 2299-310.

98. Wear, M.A., Schafer, D.A. and Cooper, J.A. (2000) Actin dynamics: assembly and disassembly of actin networks. Curr Biol, 10, R891-5.

99. Weber, A. (1999) Actin binding proteins that change extent and rate of actin monomer-polymer distribution by different mechanisms. Mol Cell Biochem, 190, 67-74.

100. Weber, A., Permise, C.R., Babcock, G.G. and Fowler, Y.M. (1994) Tropomodulin caps the pointed ends of actin filaments. J Cell Biol, 127, 162735.

101. Weber, A., Pennise, C.R. and Fowler, V.M. (1999) Tropomodulin increases the critical concentration of barbed end-capped actin filaments by converting ADP.P(i)-actin to ADP-actin at all pointed filament ends. J Biol Chem, 274, 34637-45.

102. Xu, P., Mitchelhill, K.I., Kobe, B., Kemp, B.E. and Zot, H.G. (1997) The myosin-I-binding protein Acanl25 binds the SH3 domain and belongs to the superfamily of leucine-rich repeat proteins. Proc Natl Acad Sci USA, 94, 3685-90.

103. Мне хотелось бы поблагодарить:

104. S А. С. Костюкову за всестороннее руководство и неоценимую помощь в выполнении этой работы;•S Ю. Маеда за руководство и полезные замечания;•S моих японских коллег Атсуко Ямасита и Соити Такеда - за полезные обсуждения и помощь в работе;

105. S Ф. А. Саматей за поддержку и поучительные советы при решении структуры;

106. S С. Адати и С. Пак за помощь в работе на линии BL44B2 синхротрона Spring-8;•S К. Грегорио за любезно предоставленную плазмиду фрагмента небулина;

107. S И.А. Залунина и Г.Г. Честухину за своевременные полезные советы и полученные знания;•S Н.Б. Гусева за чуткое отношение к этой работе и полезные советы;

108. S коллектив компании CD-Labs за дружескую помощь в оформлении и печати этой работы.