Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Средства, методы лечения, профилактики и иммунокоррекции при инфекционных болезнях крупного рогатого скота смешанной этиологии

ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов

Автореферат диссертации по теме "Средства, методы лечения, профилактики и иммунокоррекции при инфекционных болезнях крупного рогатого скота смешанной этиологии"

На правах рукописи

АЛЕКСЕЕВА ИРИНА ГЕННАДЬЕВНА

СРЕДСТВА, МЕТОДЫ ЛЕЧЕНИЯ, ПРОФИЛАКТИКИ И ИММУНОКОРРЕКЦИИ ПРИ ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЯХ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА СМЕШАННОЙ ЭТИОЛОГИИ

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

2 О ЛЕК 2012

ОМСК-2013

005047557

005047557

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Омский государственный аграрный университет имени П.А.Столыпина»

Научный руководитель: Красиков Александр Пантелеевич

доктор ветеринарных наук, профессор

Официальные оппоненты:

Плешакова Валентина Ивановна

доктор ветеринарных наук, профессор, зав. кафедры ветеринарной микробиологии, вирусологии и иммунологии ФГБОУ ВПО ОмГАУ им. П.А. Столыпина

Шкиль Николай Алексеевич

Заслуженный деятель науки РФ, доктор ветеринарных наук, профессор, зам. директора по науке ГНУ ИЭВСиДВ Россельхозакадемии

Ведущая организация: Федеральное государственное бюджетное

образовательное учреждение высшего профессионального образования «Новосибирский государственный аграрный университет»

Защита состоится « // _» января 2013 года, в /Х~часов на заседании диссертационного совета Д 220.050.03 при ФГБОУ ВПО «Омский государственный аграрный университет имени П.А. Столыпина» по адресу: г. Омск 644008, Институтская площадь 2, тел. (3812) 24-39-63, факс (3812) 24-39-63

E-mail :lescheva@list.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО ОмГАУ им. П.А. Столыпина

Автореферат разослан « 2012 г.

и 7"

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат ветеринарных наук, доцент

^ф^-Лещёва

H.A.

1. Общая характеристика работы

Актуальность темы: Респираторные и желудочно-кишечные инфекционные болезни занимают одно из ведущих мест в патологии молодняка крупного рогатого скота и рассматриваются как серьезная экономическая проблема современного животноводства. Высокая заболеваемость молодняка приводит к значительному вынужденному убою или падежу животных, недополучению живой массы, затрат на лечение и профилактику болезней. Для полноценного оборота стада важно не только получение приплода, но и его сохранность.

В Сибири и на Урале, по данным А.Г. Глотова (2006), ежегодно по причине респираторных заболеваний гибнет до 30% телят в возрасте от 1 до 6 месяцев. В отдельных хозяйствах гибель молодняка в совокупности с вынужденным убоем достигает 40- 55%, а привесы снижаются в 2 - 3 раза. Указанная патология приводит к снижению экономической эффективности отрасли (Мищенко В.А., 2011). В ряде хозяйств при появлении пневмонии и энтеритов смешанной этиологии, погибает от 8 до 20% телят (Колесниченко И.Д., 1987; Басова Н.Ю., 2002; Шипицин А.Г., 2003). Немаловажная роль в возникновении смешанных болезней крупного рогатого скота принадлежит микоплазмам и хламидиям.

В Омской области сложилась аналогичная ситуация по сохранности молодняка крупного рогатого скота. По сведениям ГУ ветеринарии в Омской области ежегодный выход телят на 100 коров составляет 78-80, при этом в 20072011 гг. процент народившихся телят составил 9,6; 8,1; 7,7; 6,7; 5,9 погибло 3,4; 3; 2,8; 2,7; 2,2 к обороту стада соответственно.

Причиной гибели телят, как указывает А.П. Красиков (2004), во многих случаях являются возбудители инфекционных болезней, причем инфекционный процесс носит, главным образом, ассоциативный характер.

На ассоциативный характер инфекции с участием условно патогенной микрофлоры, вирусов, хламидий и микоплазм указывают П.М. Митрофанов, 1979;А.Л. Буланкин, 1996; В.А. Мищенко, 2003, Н.А.Шкиль, 2003 и др. Основную роль в возникновении вспышек первичных респираторных болезней молодняка крупного рогатого скота играют вирусы, которые повреждают защитные механизмы дыхательной системы, чем облегчают проникновение различных микроорганизмов (Pasteurella, Klebsiella, Pseudomona, Haemophylys, Proteus, Mycoplasma и Chlamydia), которые в значительной степени определяют тяжесть течения болезни (Мищенко В.А., 2009).

Развивающиеся патологические процессы характеризуются снижением локального и общего иммунного статуса животных, активацией свободноради-кальных механизмов и перекисного окисления липидов; развитием интоксикационных процессов и диктуют необходимость комплексного терапевтического подхода (Слободяник В.И.,1991; Томчук В.А. с соавт.,2003; Нежданов А.Г.,2005; Полянцев Н.И., 2007).

Успех борьбы с инфекционными болезнями телят полиэтиологической природы во многом зависит от правильно выбранной схемы лечения. Необхо-

димо применять лекарственные средства с хорошей терапевтической активностью, обладающие политропным действием, пролонгирующими свойствами и невысокой себестоимостью. Такими свойствами обладают комбинированные препараты, в состав которых входит два или более лекарственных вещества, растворенных в полимере-наполнителе (Саркисов А. X. и др., 1982; Парфенов И. С., 1983). Кроме того, существенную роль в профилактике и лечении телят с признаками поражения органов дыхания и пищеварения играет разработка средств, способствующих повышению уровня факторов естественной защиты организма и устраняющих иммунодефициты у животных (Подкопаев В.М., 1985; Придыбайло Н.Д., 1991; Олейник A.B., 2009).

Применение в схемах лечения композиций комбинированных антимикробных препаратов на основе полимеров-пролонгаторов в сочетании с иммунокорректирующими средствами - один из новых путей терапии животных с инфекционной патологией, существенно отличающийся от привычных, традиционных, применяемых в животноводческих хозяйствах.

Биологически активным средством, который в настоящее время внедряют в ветеринарию, является «Бетулин-экстракт», представляющий собой экстракт бересты березы повислой (Betula pendula), содержащий не менее 83% бетулина. В медицине широко изучены гепатопротекторные и ранозаживляющие свойства бетулина (Катикова О.Ю. и др.,2002; Дьячук Г.И. и др.,2004), изучена его фар-макокинетика (Дьячук Г.И., 2004) и иммунотропная активность (Коваленко А.Д., 2003), способность бетулина влиять на репродукцию противовирусных факторов защиты организма (Щегловитова О.Н., 2009). Величко Г.Н. с соавт. (2005) установлено его противовирусное действие при лечении телят, больных инфекционным ринотрахеитом и вирусной диареей.

На данный момент в ветеринарной медицине возникла необходимость использования, наряду с широко распространенной антибиотикотерапией, экологически чистых лекарственных средств растительного происхождения, обладающих иммуностимулирующим, противовирусным и антитоксическим действием. Поэтому весьма актуальным для профилактики и лечения телят при болезнях, вызванных ассоциацией различных микроорганизмов и вируса ИРТ, является разработка удобного в применении, малотоксичного антибактериального, антивирусного и иммуностимулирующего средства. Также большой интерес представляет возможность сочетанного использования бетулина со специфическими антигенами для получения активных диагностических сывороток, применяемых для индикации и идентификации возбудителей инфекционных болезней, а также с целью повышения клеточных и гуморальных факторов поствакцинального иммунитета у телят.

Цель исследований.

Разработать средства, методы лечения, профилактики и иммунокоррекции при инфекционных болезнях крупного рогатого скота смешанной этиологии, вызванных ассоциацией патогенных и условно-патогенных микроорганизмов.

Задачи исследований.

1. Изучить эпизоотическую обстановку и распространение наиболее опасных инфекционных болезней крупного рогатого скота смешанной этиологии, вызванных в различных сочетаниях ассоциацией микроорганизмов в хозяйствах Омской области.

2. Провести токсикометрическую оценку препаратов бетулина (Бетулин-Э и Бетулин-ЭПГ) и выявить их иммуностимулирующие свойства.

3. Определить действие бетулина-экстракга и его суспензии на клинико-иммунный статус телят при профилактике и терапии респираторных и желудочно-кишечных патологий, обусловленных ассоциацией различных возбудителей инфекционных болезней.

4. Изучить терапевтическую эффективность комбинированных пролонгированных антибактериальных препаратов и их сочетания с Бетулин-Э и Бету-лин-ЭПГ для профилактики вирусо-микробоносительства у глубокостельных коров, нетелей и быков-производителей, лечения телят при смешанных и ассоциативных желудочно-кишечных и респираторных инфекционных болезнях

5. Разработать оптимальные, эффективные схемы лечения телят с применением левотетрасульфина, тетрациклина-ПГ в сочетании с Бетулином-Э и Бе-тулином-ЭПГ и дать им экономическое обоснование.

Научная новизна.

Выявлена широкая распространенность ассоциативных инфекционных болезней среди телят, коров и быков-производителей в хозяйствах Омской области. Изучены микропаразитоценозы различных экологических ниш у спонтанно инфицированных коров родильно-профилакторного периода, телят и быков-производителей. Установлено, что основными сочленами ассоциаций, представляющих эпизоотическую опасность, являются патогенные микроорганизмы: хламидии, лептоспиры, листерии, вирусы ИРТ-ПВ, кампилобактерии, риккетсии и условно патогенные — микоплазмы, пастереллы, сальмонеллы, энтеротоксигенные сероварианты кишечной палочки, стрептококки, фузобактерии, стафилококки и диплококки в различных сочетаниях от двух до семи.

Разработано новое средство на основе полимера-наполнителя для парентерального введения - Бетулин-ЭПГ (0,25% суспензия бетулина-экстракта), которое обладает высокой лечебно-профилактической

эффективностью при желудочно-кишечных и респираторных болезнях телят смешанной этиологии. Впервые изучено действие препаратов бетулина на гуморальный и клеточный иммунитет у телят при респираторных и желудочно-кишечных болезнях. Отработаны способы, схемы и дозы его применения. Получена приоритетная справка на изобретение «Способ лечения животных при ассоциативных болезнях различной этиологии» (№ 2012121337/13 (032228) от 23.05.2012 г.).

Теоретическая и практическая значимость работы.

Материалы диссертации дополняют концепцию о паразито-хозяинных отношениях и вносят определенный вклад в развитие науки паразитоценологии

об ассоциативных инфекционных процессах. Результаты исследований имеют практическое значение в усовершенствовании лечебно-профилактических мероприятий при болезнях телят с участием условно патогенной и патогенной микрофлоры, и служат основанием для внедрения в ветеринарную практику нового иммуностимулирующего, противомикробного и противовирусного препарата Бетулин-ЭПГ при лечении телят с симптомами поражения органов дыхания и пищеварения. А также для получения активных, специфических лечебно-диагностических сывороток для профилактики, лечения, индикации и идентификации микроорганизмов, участвующих в ассоциативном инфекционном процессе.

Применение комбинированных препаратов на глубокостельных коровах, нетелях и быках-производителях позволит профилактировать у них ассоциированное вирусо-бактериальное носительство и заражение новорожденных телят, а использование их в сочетании с Бетулином-ЭПГ в разработанных схемах лечения повысит эффективность оздоровительных мероприятий и снизит их заболеваемость и гибель.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на: Международном научно-техническом форуме «Реализация Государственной программы развития сельского хозяйства и регулирование рынков сельскохозяйственной продукции, сырья и продовольствия: инновации, проблемы, перспективы» (Омск, 2009, ФГОУ ВПО ОмГАУ); Межрегиональной научно-практической конференции «Патология продуктивных и непродуктивных животных, рыб и птиц» (Омск, 2009, СО РАСХН ВНИИБТЖ); X международной научно-практической конференции, посвященной памяти А.. В. Копырина «Теоретические и прикладные аспекты диагностики болезней животных» (ГНУ ВНИИБТЖ Россельхозакадемии, Омск, 21-23 сентября 2010); XV научной конференции профессорско-преподавательского состава и аспирантов «Научные инновации — аграрному производству» (ФГОУ ВПО ОмГАУ, 2010, Омск); Международной научно-практической конференции, посвященной 90-летию СибНИВИ-ВНИИБТЖ «Инфекционная патология животных» (22-24 ноября 2011, Омск);

Публикации результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 8 научных статей, в том числе 2 статьи в журнале «Ветеринарная патология», рекомендованных ВАК Минобразования и науки РФ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 189 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических предложений и приложения. Список использованной литературы включает 195 наименований, в том числе 34 зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 52 таблицами и 7 рисунками.

Внедрение результатов исследований. Результаты научных исследований использованы при подготовке методических рекомендаций: «Профилактика и лечение телят при ассоциативных инфекционных болезнях с использованием бетулина», утверждены Ученым советом ИВМиБ ФГБОУ ВПО ОмГАУ

им.П.А.Столыпина, протокол № 6 от 30.05.2012 г. и секцией животноводства Центра научного обеспечения АПК при Министерстве сельского хозяйства и продовольствия Омской области протокол № 4 от 28.08.2012 г.

Результаты исследований внедрены в СПК «Камышино-Курское» Муромцевского и СПК «Сибирь» Любинского районов Омской области. Материалы диссертации используются в учебном процессе кафедры эпизоотологии, паразитологии, инфекционных и инвазионных болезней ИВМиБ ФГБОУ ОмГАУ им. П.А. Столыпина.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Ассоциативные формы проявления инфекционных болезней у коров, быков-производителей и телят вызваны различными сочетаниями патогенных и условно-патогенных микроорганизмов.

2. Комбинированные, пролонгированные антибактериальные препараты Тетрациклин-ПГ и Левоэритроциклин-ПЭГ профилактируют ассоциативное микробоносительство у глубокостельных коров, нетелей, быков-производителей и заражение телят.

3. Бетулин-ЭПГ обладает выраженными стимулирующими свойствами на факторы клеточного и гуморального иммунитета у телят. Он активирует Т - и В-лимфоциты, фагоцитарную активность нейтрофилов и повышает уровень поствакцинальных антител, что позволяет с его помощью корректировать недостаточность иммунной системы.

4. Сочетанное использование Бетулина-ЭПГ с комбинированными антибактериальными препаратами повышает эффективность лечения телят при ассоциативных инфекциях с экономическим эффектом 61,77 рублей на один рубль ветеринарных затрат.

2.СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы исследования

Работа выполнена в 2009-2012 г.г. в соответствии с планом научно-исследовательских работ и является самостоятельным разделом комплексной государственной программы «Профилактика (диагностика) и меры борьбы с ассоциативными инфекционными и инвазионными болезнями животных и птиц» (№ гос. регистрации 01.2.001100602). Исследования проводились в лаборатории микст-инфекций кафедры эпизоотологии, паразитологии, инфекционных и инвазионных болезней ИВМиБ ОмГАУ им. П.А. Столыпина, в лаборатории иммунитета и специфической профилактики туберкулеза животных ВНИИБТЖ СО Россельхозакадемии, в ГНУ СибНИИП Россельхозакадемии и в хозяйствах Омской области.

Объектом исследования служили крупный рогатый скот - нетели и коровы родильно-профилакторного периода с признаками эндометритов, маститов и артритов, быки-производители и телята разных возрастов с клиническими признаками бронхитов, бронхопневмонии, диареи, артритов и конъюнктивитов, а также здоровые телята из 9-ти хозяйств Омской области. Всего было исследовано 297 голов молодняка крупного рогатого скота разных половозрастных групп (2-20, 15-30, 30-45 и 60-120 дней), 218 коров и нетелей за

10 до и через 10 дней после отела, 22 головы быков производителей. В качестве лабораторных животных использовали 50 белых мышей и 33 кролика.

Бактериальные и вирусные болезни диагностировали на основании анализа эпизоотологических данных с учетом клинических признаков, патологоанатомических изменений, результатов серологического исследования патологического материала от больных и павших телят. Для прижизненной диагностики использовали бронхоальвеолярную слизь телят, сыворотку крови, слизь и фекалии из прямой кишки, суставную жидкость, конъюнктивальные смывы, а для посмертной - паренхиматозные органы. От коров исследовали сыворотку крови, секрет вымени и урогенитального тракта, суставную жидкость и секрет молочной железы. От быков-производителей — сыворотку крови, препуциальные смывы и пробы спермы для искусственного осеменения. Кроме того, были исследованы: пробы воды из котлованов для поения скота, паренхиматозные органы павших голубей и клещи, собранные с пастбищ хозяйств.

Для выявления сывороточных антител крови, тканевых «местных» или локальных антител в вымени, легких, а также антигенов возбудителей инфекционных болезней использовали реакции непрямой и прямой иммунофлуоресценции (РНИФ и РПИФ). В качестве антигенов применяли: антигены вакцинных штаммов и стандартные антигены, используемые для постановки РА и РСК, а в качестве антител — гомологичные антигенам кроличьи и бычьи антисыворотки, антивидовые для РНИФ и специфические сальмонеллезные, риккетсиозные, листериозные для РПИФ люминесцентные сыворотки меченные ФИТЦ (ИЭМ им. Гамалеи).

В производственных опытах, проводимых на базе ЗАО «Кам-Курское» Муромцевского района, СПК «Сибирь» Любинского района и ЗАО «Солнцево» Исилькульского района в качестве иммуностимулирующих, антивирусных и усиливающих антимикробное действие средств нами испытаны следующие препараты: Бетулин-экстракт (Бетулин-Э) ТУ 26 3142-025-04740886-2011, производства ООО «След» г. Пермь и изготовленная нами на его основе 0,25% суспензия Бетулина-экстракта в 1,2-пропиленгликоле (Бетулин-ЭПГ).

Опыты по изучению острой токсичности препаратов бетулина, проведены согласно «Методическим рекомендациям по изучению общетоксического действия фармакологических веществ» на белых мышах и кроликах.

В опытах по изучению иммуностимулирующих свойств Бетулина-ЭПГ, проводили вакцинацию кроликов антибактериальной и антивирусной вакциной, телят — антибактериальной вакциной с применением препаратов бетулина (опытные группы) и без него (контрольные группы). В пробах крови животных определяли титр сывороточных антител в сроки от 3 до 28 дней после иммунизации. Кроме этого, в крови и сыворотке крови телят определяли число Т-лимфоцитов с помощью спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана (Е-рок); Т-киллеров - непрямого глобулинового розеткообразования с эритроцитами быка (ЕА-рок); В-лимфоцитов - комплементарного розеткообразования с эритроцитами быка. Функциональную активность

нейтрофилов оценивали в НСТ-тесте: спонтанном без нагрузки и стимулированном с использованием сальмонеллезного антигена с последующей фиксацией реакции с помощью многоканального иммунохимического анализатора «РкюгойН БТОЬезз - 486-М». Оценку концентрации образовавшегося диформазана (ДФ) в нейтрофилах определяли при Х,=630 нм с последующим подсчетом коэффициента стимуляции (К ст. НСТ) К ст. -оптическая плотность в стимулированных лунках / оптическая плотность в контрольных лунках. Содержание циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) определяли методом осаждения полиэтиленгликолем (ПЭГ - 6000) с последующим фотометрическим определением оптической плотности образовавшегося преципитата на многоканальном иммунохимическом анализаторе при >.=450 нм. Окраску мазков крови, подсчет лейкоцитов и выведение лейкоцитарной формулы проводили по общепринятым методикам.

Антимикробные свойства Бетулина-Э и Бетулина-ЭПГ, изучали в сочетании с применением Левотетрасульфина и Тетрациклина-ПГ.

В производственных опытах определяли эффективность

комбинированных антимикробных препаратов для профилактики

микробоносительства у крупного рогатого скота с применением Тетрациклина-ПГ и Левоэритроциклина - ПЭГ.

Расчет экономической эффективности лечения телят осуществляли в соответствии с методикой определения экономической эффективности ветеринарных мероприятий, утвержденной ГУВ Госагропрома СССР (1982г.) и методикой определения экономической эффективности использования в ветеринарии результатов НИР, отделения ветеринарии ВАСХНИЛ (1987г.). Цифровые данные экспериментов, при необходимости, обрабатывали методом статистики с использованием таблиц Стьюдента (Усович А.Т., Лебедев П.Т., 1970).

2.2. Эпизоотическая ситуация по инфекционным болезням крупного рогатого скота смешанной этиологии и их распространение в хозяйствах

Омской области

Выборочно обследованы хозяйства Муромцевского, Исилькульского, Любинского, Калачинского и Омского районов Омской области, где отмечался высокий процент гибели телят.

Из 9-ти хозяйств Омской области, хламидиоз установлен во всех (100%), в 8-ми (88,8 %) - энтерококкоз, в 6-ти (66,6 %) - ИРТ-ПВ, сальмонеллез и микоплазмоз, в 5-ти хозяйствах (55,5%) - листериоз, эшерихиоз и риккетсиоз, в 4-х хозяйствах (44,4%) - пастереллез, в 3-х (33,3%) - лептоспироз, 1-м хозяйстве (11 %) - стафило- и стрептококкоз. Кроме того, в 7-ми хозяйствах (77,7 %) дополнительно выявлены антигены возбудителей кампилобактериоза у коров, быков-производителей и телят. Наиболее распространенными являются хламидиоз, энтерококкоз, кампилобактериоз, листериоз, инфекционных ринотрахеит и микоплазмоз. При этом наиболее яркий микробный пейзаж возбудителей инфекционных болезней наблюдали в 7-ми хозяйствах.

При изучении микроэкологии систем организма животных установлено, что

наличие у маточного поголовья коров эндометритов, маститов, конъюнктивитов и артритов обусловлено возбудителями хламидиоза и ИРТ (до 60%), листериоза, микоплазмоза, энтеро- и стрептококкоза (до 50%), сальмонеллеза и стафилококкоза (до 70%), лептоспироза и ку-лихорадки (до 40%), кампилобакгериоза (до 20%). Причем у 25% коров в ассоциированном инфекционном процессе участвовали от двух до трех возбудителей хламидиоза, коксиеллеза, ИРТ-ПВ, кампилобактериоза и листериоза в различных сочетаниях. В 80% случаев микропаразитоценоз вымени коров представлен возбудителями инфекционных болезней в различных сочетаниях от 4 до 7.

Диапазон клинического проявления болезней органов дыхания и пищеварения у телят разнообразен: от ринитов, бронхитов, диареи и, как её следствие, резко выраженной дегидратации и интоксикации, до тяжелой бронхопневмонии, пневмонии, плевритов, изнуряющих поносов и гибели животных. При комплексном исследовании биоматериала от больных телят 9-ти хозяйств были зарегистрированы: хламидиоз в 8-ми (88%), листериоз, сальмонеллез - в 5-ти (55%), лептоспироз, пастереллез, микоплазмоз и ИРТ -в 4-х хозяйствах (44%). По распространенности преобладали: хламидиоз, ИРТ, лептоспироз, пастереллез и листериоз. Инфекционный процесс был осложнен ассоциацией микроорганизмов, число которых у некоторых животных достигало до 5-ти.

Результаты прижизненных исследований биоматериала от телят подтверждались выделением антигенов возбудителей хламидиоза (50-83%), лептоспироза (33%), листериоза (17 %), кампилобактериоза (20-33%), микоплазмоза (17%), ИРТ (17%), сальмонеллеза (17%), ку-лихорадки (17-20%) эшерихиоза (33%) и диплококкоза (17-33%) в патологическом материале после гибели животных, где одновременно были выделены антигены против 5-ти инфекций (хламидиоз+листериоз+микоплазмоз+ИРТ+диплококкоз), что свидетельствует о смешанной этиологии болезни.

При исследовании препуциальных смывов быков производителей из 4-х хозяйств Омской области выявлены антигены возбудителей хламидиоза (100%), листериоза (25%), лептоспироза, кампилобактериоза и коксиеллеза (по 10%).Причем, в биоматериале в 4 % случаев зарегистрированы одновременно 4 антигена возбудителей инфекционных болезней.

В воде из трех котлованов (60%) обнаружены коксиеллы, при этом в одном из них дополнительно и лептоспиры (20%). Из двух клещей (17%), собранных с пастбищ, были выделены коксиеллы возбудителя ку-лихорадки. В патологическом материале у одного из погибших голубей были обнаружены антигены хламидий.

Таким образом, нами установлены пути выделения возбудителей инфекционных болезней от источника, факторы передачи и способы заражения молодняка крупного рогатого скота.

2.3. Влияние бетулина-экстракта на клеточный и гуморальный поствакцинальный иммунитет животных

Влияние препаратов бетулина на синтез гуморальных антител было

изучено в 3 опытах на кроликах и телятах. Количество поствакцинальных антител определяли в (РНИФ).

В первом опыте изучали иммуностимулирующие свойства препаратов бетулина при сочетанном его применении с антибактериальной вакциной. Кролики пяти (4 опытных и контрольной) групп были привиты поливалентной вакциной ВГНКИ против лептоспироза животных. Одновременно с введением вакцины животным первой опытной группы вводили подкожно Бетулин-ЭПГ в дозе 0,2 мл/кг. Повторное подкожное введение препарата осуществляли на третьи сутки после вакцинации. Животным второй, третьей и четвертой опытных групп Бетулин-Э задавали внутрь во время первого кормления, ежедневно, в течение пяти дней, в дозе 0,1; 0,5 и 1 г/гол соответственно. Животные пятой группы служили контролем, им бетулин не применяли. Синтез антител изучали в динамике на 3, 7, 14, 21 и 28 сутки после иммунизации.

Во втором опыте было изучено влияние бетулина-ЭПГ на формирование гуморального иммунитета при применении вирус-вакцины. Кроликам опытной группы, одновременно с вакциной против вирусной геморрагической болезни, вводили Бетулин-ЭПГ подкожно, двукратно с интервалом в 3 дня в дозе 0,2 мл/кг массы тела. Кроликам контрольной группы Бетулин-ЭПГ не применяли. Синтез антител изучали в динамике на 14, 21 и 28 сутки после иммунизации.

Третий опыт был поставлен на телятах, которым, в сочетании с вакциной против сальмонеллеза, вводили подкожно Бетулин-ЭПГ в дозе 0,2 мл/кг массы. Контролем служили привитые животные, которым препарат не применяли. Синтез антител изучали в динамике на 3,14 и 28 сутки после иммунизации.

В ходе экспериментов установлено, что у животных всех групп после однократной инъекции вакцины, происходит выработка специфических антител, однако интенсивность их накопления различна и зависит от наличия иммуностимулятора и способа его введения (рис. 1,2).

Так, в ходе первого опыта в группах животных, которым, в сочетании с вакциной, парэнтерально вводили Бетулин-ЭПГ, специфические антитела обнаруживались уже на третий день после вакцинации в титрах 1:10 и нарастали к 28 дню до 1:640. Во втором опыте - на 14 день в титрах 1:40 и на 28 день - 1:320. В контрольных группах животных, где бетулин-ЭПГ не применяли, количество антител было ниже в 4 раза.

Способствовало нарастанию титров специфических антител и применение Бетулина-Э per os, однако антитела впервые были зарегистрированы только на 14 сутки после иммунизации и в более низких титрах по сравнению с парентеральным введением препарата. Причем, более выраженный иммунный ответ регистрировали у группы кроликов, которым, наряду с вакциной, задавали Бетулин-Э в дозе 0,5 г/гол.

Подкожное введение телятам Бетулина-ЭПГ одновременно с вакциной против сальмонеллеза, способствовало более интенсивному образованию специфических антител, чем в контрольной группе, где иммуностимулятор не применяли. Антитела на 3, 14 и 28 день исследования регистрировали в титрах

1:400, 1:1600 и 1:20480 соответственно, что в 6, 13 и 43 раза соответственно превышали показатели контроля (рис.3).

титры антител

% реагирующих

1400 1200 1000 800 600 400 200 О

ь

в 1 опытная группа ■ 2 опытная группа о 3 опытная группа О 4 опытная группа

7 14 21 28

Прим. I опытная группа кроликов (Бетулин-ЭПГподкожно, в дозе 0,2 мл/гол, I раз в 3 дня); 2 опытпая группа кроликов (Бетулин-Э внутрь в дозе 0,1 г/гол, 5 дней подряд); 3 опытная группа кроликов (Бетулин-Э внутрь в дозе 0,5 г/гол, 5 дней подряд); 4 опытная группа кроликов (Бетулин-Э внутрь в дозе 1 г/гол, 5 дней подряд); контрольная группа кроликов (Бетулин-Э не применяли).

Рисунок 1. Динамика синтеза антител в сыворотке крови кроликов на введение противолептоспирозной вакцины и препаратов Бетулина на 3, 7, 14, 21, 28 день исследования (взяты максимальные показатели по группам).

титры антител % реагирующих

250 200 150 100 50 0

[!

1

' {

1 1

: { 11 11 1

О опытная группа (среднее значение)

щ контрольная группа (среднее знамение}

14 21

28

Прим. опытная группа кроликов: Бетулин-ЭПГ подкожно, в дозе 0,2 мл/кг, двукратно с интервалом 3 дня в сочетании с внутримышечным введением вакцины против ВГБК в дозе 0,5 мл/гол., контрольная группа кроликов: внутримышечное введение вакцины против ВГБК в дозе 0,5 мл/гол.

Рисунок 2. Динамика синтеза антител в сыворотке крови кроликов на введение вакцины против вирусной геморрагической болезни кроликов и Бетулина-ЭПГ (14, 21, 28 день).

титры антител % реагирующих

25000 т

20000

10000

15000

5000

0

■ вакцина+бетулин В вакцина_

Здень 14 28 день день

Рисунок 3. Динамика синтеза антител в сыворотке крови телят после введения вакцины против сальмонеллеза в сочетании с подкожным введением суспензии Бетулина-ЭПГ (3, 14, 18 день исследования)

Кроме того, в третьем опыте был изучен механизм действия Бетулина-ЭПГ на клеточный состав крови и иммунокомпетентные клетки при профилактической вакцинации телят против сальмонеллеза. На 14 день исследования в периферической крови телят опытной группы (вакцина и Бетулин-ЭПГ) после контакта с антигеном, общее количество лимфоцитов в периферической крови достоверно снижается (Р<0,05) в 1,25 раза, также происходит снижение в 3,4 раза числа Т-лимфоцитов при степени достоверности (Р<0,001). В меньшей степени снижается (в 1,3 и 1,4 раза соответственно) общее количество лимфоцитов (Р<0,01) и Т-лимфоцитов (Р<0,05) в крови телят контрольной группы, которым бетулин-ЭПГ не применяли.

Одновременно в крови телят обеих групп регистрируется достоверное уменьшение количества Т-киллеров и нейтрофилов (Р<0,05 и Р<0,001), соответственно в 1,6; 2,1 и в 1,6; 1,6 раз. Что, вероятно, обусловлено их активацией и выведением из организма вместе с вакцинным антигеном.

При исследовании крови на 28 сутки после вакцинации в крови телят опытной группы (вакцина+бетулин-ЭПГ), происходит достоверное (Р<0,05) увеличение в 2,6 раз количества Т-лимфоцитов (по сравнению с результатами исследований крови на 14 день), снижение в 1,4 раза количества В-лимфоцитов (Р<0,05), в 2,4 раза Т-киллеров (Р<0,001), также, в 1,2 раза снижается количество циркулирующих иммунных комплексов крови (Р>0,05). В контрольной группе телят (вакцина) происходит увеличение количества Т-лимфоцитов в 1,05 раза (Р<0,01), также, но в меньшей степени, снижение количества В-лимфоцитов в 1,4 раза (Р>0,05), и Т-киллеров достоверно (Р<0,001) - в 2 раза. Количество ЦИК уменьшается незначительно в 1,2 раза при степени достоверности (Р<0,01).

Количество специфических Т-лимфоцитов, при стимуляции препаратом Бетулин-ЭПГ в крови телят опытной группы больше в 2,4 раза, чем в крови

телят контрольной группы. При этом, активированные Т-лимфоциты, взаимодействуя с В-лимфоцитами, стимулируют их антителообразование.

Уменьшение числа В-лимфоцитов, по всей вероятности, связано с активной их трансформацией в плазматические клетки и активизацией синтеза антител. Количество нейтрофилов в крови телят опытной группы (вакцина+бетулин-ЭПГ) достоверно (Р<0,05) в 1,3 раза выше, чем аналогичных элементов в крови телят контрольной группы (вакцина). С использованием Бетулина-ЭПГ развитие иммунного ответа усиливается, что и приводит к повышению уровня специфических антител. Повторное введение вакцины через 10 дней стимулирует развитие иммунного ответа по типу вторичного (иммунологическая память), который сопровождается усилением и ускорением образования антител. При этом вторичный иммунный ответ также более выражен у телят, которым подкожно вводили суспензию бетулина.

2.4. Схемы лечения телят с применением комбинированных антимикробных препаратов и Бетулина В опытах применяли антибактериальные препараты пролонгированного действия Левотетрасульфин (1 мл/10 кг массы внутримышечно раз в день с интервалом 3 дня) и Тетрациклин-ПГ (1 мл/10 кг массы внутримышечно 1 раз в день 5 дней подряд). В сочетании с данными препаратами был применен Бетулин-Э per os в дозе 10 мг/кг массы тела ежедневно в течение 5 дней и Бетулин-ЭПГ подкожно в дозе 0,2 мл/кг массы тела 1 раз в день с интервалом в 3 дня. Эффективность санации оценивали по отсутствию: гибели животных, клинических признаков болезни и антигенов возбудителей в биоматериале от телят до и после проведенного лечения. В эксперименте были изучены схемы лечения больных телят с учетом всех сочленов ассоциации микроорганизмов, участвующих в инфекционном процессе.

В опытах, по принципу аналогов, подобрали телят с признаками поражения органов дыхания, пищеварения, глаз и суставов. Лечение телят осуществляли по схемам, представленным в табл.1.

Таблица 1

Схемы лечения телят и их эффективность при ассоциативных инфекционных болезнях различной этиологии

Хозяйство Схема лечения Эффективность

CQ Й Выздоровело / пало гол. выздоровления в %

Количество голе Продолжительно! болезни (дней) клинического микробиологич.

ЗАО 7 Левотетрасульфин + 3-4 7/0 100 71

«Кам- Бетулин-Э

Курское» 7 Левотетрасульфин 7 5/2 71 28

ЗАО «Солнцево» 5 Левотетрасульфин + Бетулин-Э 6 5/0 100 100

5 Левотетрасульфин + стрептомицин 8 5/0 100 80

СПК «Сибирь» 5 Левотетрасульфин + Бетулин-ЭПГ 6 5/0 100 100

5 Тетрациклин-ПГ + Бетулин-ЭПГ 7 5/0 100 100

5 Левотетрасульфин 12 5/0 100 40

5 Тетрациклин-ПГ 11 5/1 80 40

Установлено, что сочетанное применение Бетулина-Э с комбинированным антибактериальным препаратом Левотетрасульфин повышает эффективность лечения телят за счет усиления его бактерицидных свойств. Кроме того, Бетулин-Э стимулирует иммунную систему, способствует синтезу антител у ранее не реагирующих и увеличивает количество серопозитивных телят на 60% (с 15% до 75%).

При лечении телят с применением Бетулина-ЭПГ получены следующие результаты. До лечения, при исследовании биоматериала от телят были зарегистрированы антигены хламидий, лептоспир, пастерелл, вируса ИРТ, энтеро - и пневмококков. После терапии у телят опытных групп отсутствовали антигенывозбудителей инфекционных болезней, тогда как у телят контрольной группы, которым суспензию Бетулина-ЭПГ не применяли, обнаружены антигены возбудителей хламидиоза (у 20%) , лептоспироза (у 20%), энтерококкоза (20%) и ИРТ (20%).

После лечения в сыворотке крови телят обнаружили поствакцинальные антитела против сальмонеллеза (у 100%) и лептоспироза (у 50%), которые ранее отсутствовали. Увеличилось и число животных с синтезом локальных антител в бронхоальвеолярной слизи у телят, при санации которых применяли левотетрасульфин в сочетании с Бетулином-ЭПГ, против лептоспироза и диплококкоза у 100% и 60% соответственно, а у телят, которым применяли тетрациклин-ПГ с парентеральным введением бетулина - пастереллеза и сальмонеллеза - 20% и 100% соответственно.

Результаты опытов свидетельствуют о противовирусном и, дополнительном к антибиотикам (левотетрасульфину и тетрациклину-ПГ), противомикробном действии суспензии Бетулина-ЭПГ. Кроме того, способность препарата стимулировать синтез «местных» тканевых антител, улавливаемых в бронхоальвеолярной слизи у телят, показывает его иммуностимулирующие свойства.

Установлено, что эффективными и оптимальными для лечения телят с признаками поражения органов дыхания, пищеварения, глаз и суставов являются схемы применения левотетрасульфина, тетрациклина-ПГ в сочетании с подкожным введением суспензии Бетулина-ЭПГ, при которых клиническое и микробиологическое выздоровление животных наступает на 6-7 день и составляет 100%.

С целью изучения профилактики ассоциированного микробо- и вирусоносительства, была изучена эффективность различных схем применения комбинированных антибактериальных препаратов на глубокостельных коровах, носителях вируса ИРТ и микоплазм (70%), хламидий и лептоспир (60%), сальмонелл (50%) и риккетсий (20%), и быках-производителях (носительство хламидий и микоплазм) после превентивной санации которых данные микроорганизмы не выявляли.

Таким образом, применение комбинированных препаратов на глубокостельных коровах, нетелях и быках-производителях позволит профилактировать у них ассоциированное вирусо-бактериальное носительство и заражение новорожденных телят.

2.5.0ценка профилактической и терапевтической эффективности

препаратов бетулина в производственных условиях В СПК «Сибирь Любинского района был проведен широкий производственный опыт по применению в схеме лечения телят, наряду с левотетрасульфином, Бетулина-ЭПГ в качестве антибактериального, антивирусного и иммуностимулирующего средства. По клиническим признакам выявлено 130 голов телят в возрасте от 20 дней до 3 месяцев с поражением органов дыхания, пищеварения, глаз и конечностей, от которых выборочно был исследован биоматериал. При этом, в бронхоальвеолярных смывах обнаружены антигены хламидий (25%), пастерелл (40%), вируса ИРТ (45%) и энтеро-, пневмококков (45%). В сыворотке крови и бронхоальвеолярных смывах обнаружены антитела против хламидиоза у 45%, листериоза и ИРТ - у 15% телят, что свидетельствует о сенсибилизации их возбудителями данных инфекций, циркулирующих в стаде животных, а также поствакцинальные антитела против сальмонеллеза и лептоспироза у 25% и 45% телят соответственно.

Через 14 дней после лечения при выборочном исследовании биоматериала от 10-ти телят, антигенов возбудителей инфекционных болезней не обнаружено (табл.2).

Таблица 2

Определение антигенов возбудителей инфекционных болезней в бронхоальвеолярных смывах телят до/после лечения (выборочно)

а а

3 ё

левотетрасупьфин + бетулин-ЭПГ

+/-+/-

+/-

-I-+/-

+/-

+/-

+/-

+/-

+/-

7 13 +/- -/- +/- -/- -/- +/- -/- -/- +/- -/-

8 15 +/- -/- +/- -/- -/- -/- -/- -/- -/-

9 16 -/- -/- -/- -/- -/- +/- -/- -/- -/- -/-

10 18 -/- -/- -/- -/- +/- -/- -/- +/- -/-

всего, % 50/0 0/0 50/0 0/0 о/о 70/0 0/0 о/о 50/0 0/0

Клиническое выздоровление наступило на 5-7 день по всей группе санированных животных, за исключением восьми телят, которые погибли после первого введения препаратов, не пройдя полного курса лечения. При этом эффективность лечения составила 94%.

В результате проведенных лечебно-оздоровительных мероприятий в СПК «Сибирь» Любинского района Омской области был снижен падеж телят с 34 до 8 голов и предотвращен экономический ущерб на сумму 1255423,1 рублей, а экономический эффект на один рубль ветеринарных затрат составил 61,77 рублей.

Выводы

1. Ассоциативные инфекционные болезни, телят, коров и быков-производителей широко распространены в хозяйствах Омской области, при этом основными сочленами ассоциаций являются патогенные микроорганизмы: хламидии, лептоспиры, листерии, сальмонеллы, кампилобактерии, коксиеллы и вирус ИРТ-ПВ, а также условно-патогенные: микоплазмы, пастереллы, кишечная палочка, стрептококки, фузобактерии, диплококки и стафилококки в различных сочетаниях

2. Комплексное эпизоотологическое обследование хозяйств с применением лабораторных методов диагностики с учетом эндо- и экзоэкологии микропаразитоценозов во взаимосвязи их с иммунным ответом организма, позволяет наиболее полно выявлять источники инфекции, факторы передачи, пути заражения и разрабатывать эффективные меры борьбы и профилактики инфекционных болезней крупного рогатого скота смешанной этиологии.

, 3.Комбинированные, пролонгированные антибактериальные препараты тетрациклин и левоэритроциклин профилактируют ассоциированное микробоносительство у глубокостельных коров, нетелей, быков-производителей и заражение телят.

4. Бетулин-Э и Бетулин-ЭПГ не токсичны, хорошо переносятся животными, являются экологически чистыми препаратами. Бетулин-ЭПГ обладает выраженными стимулирующими свойствами на клеточные и гуморальные факторы иммунитета у телят. Он активизирует Т-, В- лимфоциты, фагоцитарную активность нейтрофилов и повышает уровень поствакцинальных антител в 43 раза, что позволяет с его помощью корректировать имеющуюся недостаточность иммунной системы.

5.Сочетанное использование Бетулина-ЭПГ с комбинированными антибактериальными, пролонгированными препаратами (левотетрасульфин, тетрациклин) повышает эффективность лечения телят при ассоциативных инфекциях за счет усиления бактерицидных свойств препаратов и стимуляции иммунной системы, является альтернативой в уменьшении дозы и кратности применяемых антибиотиков и быстро восстанавливает состояние

биологического равновесия в системе паразито-хозяинных отношений.

6. Эффективность клинического выздоровления телят при парентеральном применении Бетулина-ЭПГ и комбинированных антибактериальных препаратов составляет 100%, микробиологического - 100%, а при пероральном Бетулина-Э -100% и 96% соответственно. При этом первый способ является более технологичным и экономичным.

7. Применение Бетулина-экстракта в схеме лечения больных телят с признаками поражения органов дыхания и пищеварения, обусловленных ассоциацией вирусов и бактерий позволило в базовом хозяйстве в 4 раза снизить гибель животных и предотвратить экономический ущерб на сумму 1255423,1 рублей. При этом экономический эффект на один рубль ветеринарных затрат составил 61,77 рублей.

Практические предложения

Материалы диссертации могут использоваться для написания монографий, методических рекомендаций, учебных пособий для студентов, преподавателей, аспирантов, научных сотрудников, практикующих ветеринарных врачей и руководителей хозяйств. Использование комплексных лабораторных методов диагностики, схем лечения коров и телят при ассоциативных инфекциях с применением комбинированных препаратов и их сочетание с Бетулином, а также его применение для повышения напряженности поствакцинального иммунитета у телят, повысит сохранность и продуктивность животных. Сочетанное применение Бетулина-ЭПГ с вакцинами может использоваться в ветеринарной практике для получения активных специфических лечебно-диагностических сывороток.

Список опубликованных работ по теме диссертации

1. Красиков А.П., Вологодская О.В., Водопьянова Н.И., Алексеева И.Г. Профилактика носительства ассоциаций патогенных микроорганизмов у беременных коров и нетелей /А.П.Красиков, И.Г.Алексеева, О.В.Вологодская, Н.И.Водопьянова//Ветеринарная патология. - 2006. - № 3. - С. 144-147.

2. Красиков А.П., Афанасенко В.И., Алексеева И.Г. Инновационные методы диагностики, профилактики и лечения при ассоциативных инфекциях телят/А.П.Красиков, В.И. Афанасенко, И.Г.Алексеева// Реализация государственной программы развития сельского хозяйства и регулирование рынков сельскохозяйственной продукции, сырья и продовольствия: инновации, проблемы, перспективы: материалы международного науч.-техн. форума. -Омск, 2009.-С. 145-147.

3. Красиков А.П., Лобанова Н.В., Афанасенко В.И., Алексеева И.Г. Диагностика и основные биологические свойства возбудителей ассоциативных и смешанных инфекционных болезней животных/А.П.Красиков, Н.В.Лобанова, В.И.Афанасенко, И.Г.Алексеева//Патология продуктивных и непродуктивных

животных, рыб и птиц: сборник научных трудов ВНИИБТЖ СО РАСХН. -Омск, 2009. - С. 76-89.

4. Алексеева И.Г., Красиков А.П. Меры борьбы и профилактики при ассоциативных инфекционных болезнях крупного рогатого скота с учетом эндо-и экзоэкологии паразитоценозов/И.Г.Алексеева, А.П.Красиков//Актуальные проблемы инфекционных и незаразных патологий животных: материалы междунар. науч.-пракг. конф., посвящ. памяти выдающегося организатора Сибирской ветеринарной науки А.В.Копырина. - Омск, 2010 г. - С.162-167.

5. Красиков А.П., Алексеева И.Г., Деев Л.Е., Панфилов Р.Ю. Применение бетулина для лечения телят при ассоциативных инфекциях/А.П.Красиков, И.Г.Алексеева, Л.Е.Деев, Р.Ю.Панфилов// Ветеринарная патология. - 2010. - № 1(32). - С. 49-57.

6. Алексеева И.Г., Красиков А.П., Земляницына И.Ю. Иммуномоделирующие свойства бетулина и перспективы его применения в ветеринарной медицине//И.Г.Алексеева, А.П.Красиков, И.Ю.ЗемляницынаУ/Инфекционная патология животных: материалы междунар.науч.-практич.конфер., поев. 90-летию СибНИВИ-ВНИИБТЖ -Омск, 2011.-С.179-186.

7. Земляницына И.Ю., Алексеева И.Г., Красиков А.П. Изучение острой токсичности препарата «Бетулин» и «Бетулин-ПЭГ» на лабораторных животных/И.Ю.Земляницына, И.Г.Алексеева, А.П.Красиков, М.В.Задорожная, С.В.Лыско//Инфекционная патология животных: материалы междунар.науч.-практич.конфер., поев. 90-летию СибНИВИ-ВНИИБТЖ - Омск, 2011. - С.250-255.

8. Красиков А.П., Алексеева И.Г., Наконечный О.И. Взаимосвязь между паразитоценозами различных экологических ниш крупного рогатого скота и иммунным ответом их организма/А.П.Красиков, И.Г.Алексеева, О.И.Наконечный//Достижения сравнительной, возрастной и видовой морфологии - практике ветеринарной медицины: сборник научн.тр. к 80-летию профессора Ю.Ф.Юдичева ФГОУ ВПО ОмГАУ. - Омск, 2011. - С.98-105.

Подписано в печать 28.11.2012. Формат 60x84/8. Бумага писчая. Оперативный способ печати. Усл. печ. л. 1,00. Тираж 100 экз. Заказ № 673.

Отпечатано в «Полиграфическом центре КАН» тел. (3812) 24-70-79, 8-904-585-98-84.

E-mail: pc_kan@mail.ru 644050, г. Омск, ул. Красный Путь, 30 Лицензия ПЛД № 58-47 от 21.04.97

Текст научной работыДиссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Алексеева, Ирина Геннадьевна, Омск

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ «ОМСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

ИМЕНИ П.А.СТОЛЫПИНА»

04201 352429 На правах рукописи

Алексеева Ирина Геннадьевна

СРЕДСТВА, МЕТОДЫ ЛЕЧЕНИЯ, ПРОФИЛАКТИКИ И ИММУНОКОРРЕКЦИИ ПРИ ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЯХ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА СМЕШАННОЙ ЭТИОЛОГИИ

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

ДИССЕРТАЦИЯ

на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор А.П. Красиков

0мск-2013

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 14

1.1. Ассоциативные и смешанные инфекционные болезни крупного рогатого скот...................................................................... 14

1.1.1. Распространение ассоциативных и смешанных болезней и экономический ущерб от них.................................................. 17

1.1.2. Взаимосвязь между микропаразитоценозами различных экологических ниш крупного рогатого скота.............................. 24

1.2. Терапия при ассоциативных и смешанных болезнях крупного рогатого скота..................................................................... 29

1.2.1. Роль комбинированных антибактериальных препаратов в терапии инфекционных болезней крупного рогатого скота смешанной этиологии........................................................................... 32

1.2.2. Биологически активные добавки и их роль в процессе лечения животных............................................................................ 38

1.2.2.1. Фармакологические свойства и механизм действия бетулина......... 39

1.3. Заключение........................................................................ 45

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ...................................... 48

2.1. Материалы и методы исследования, объем работы........................ 48

2.2. Изучение эпизоотической ситуации по инфекционным болезням крупного рогатого скота смешанной этиологии, вызванных ассоциацией патогенных и условно-патогенных микроорганизмов и их распространение в хозяйствах Омской области....................... 54

2.3. Изучение микропаразитоценозов различных экологических ниш (биотопов) и иммунного ответа у крупного рогатого скота при ассоциативных и смешанных инфекциях................................... 66

2.4. Теоретическое и практическое обоснование применения комбинированных антимикробных препаратов и биологически активной добавки Бетулин для лечения крупного рогатого скота при

смешанных вирусно- бактериальных инфекциях........................... 87

2.4.1. Определение острой токсичности Бетулина............................... 93

2.4.2. Выявление иммуностимулирующих свойств Бетулина................. 100

2.4.2.1. Влияние действия препарата Бетулин-ЭПГ на синтез гуморальных

антител.............................................................................. 100

2.4.2.2. Механизм действия препарата на иммунокомпетентные клетки 107 крови телят.........................................................................

2.4.2.3. Изучение противомикробного и иммуностимулирующего действия 110 Бетулина в производственных опытах........................................

2.5. Лечебно-профилактическая эффективность комбинированных антимикробных препаратов и их сочетание с Бетулином при инфекционных болезнях крупного рогатого скота смешанной этиологии в производственных условиях................................... 130

2.6. Экономическая эффективность схем сочетанного применения комбинированных антибактериальных препаратов с Бетулином для лечения телят при инфекционных болезнях смешанной этиологии... 144

3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ........................................... 148

ВЫВОДЫ.......................................................................... 164

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ..................................... 166

БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК..................................... 167

ПРИЛОЖЕНИЯ.................................................................. 190

ВВЕДЕНИЕ

Респираторные и желудочно-кишечные инфекционные болезни занимают одно из ведущих мест в патологии молодняка крупного рогатого скота и рассматриваются как серьезная экономическая проблема современного животноводства. Высокая заболеваемость молодняка приводит к значительному вынужденному убою или падежу животных, недополучению живой массы. Кроме того, болезни наносят хозяйствам большой экономический ущерб, складывающийся из отставания в росте и развитии телят, затрат на лечение и профилактику болезней, смертности животных. Для полноценного оборота стада важно не только получение приплода, но и его сохранность. В 2005 году в России болезнями органов дыхания переболело свыше 11% общего поголовья скота, что составило 25% заболевшего крупного рогатого скота. Заболеваемость телят желудочно-кишечными болезнями составила 36,9%, заболеваемость коров акушерско-гинекологической патологией - 19,2% [109].

Респираторные болезни телят превалируют над всеми другими патологиями. В отдельных хозяйствах гибель молодняка в совокупности с вынужденным убоем достигает 40 - 55%, а привесы, т.е. окупаемость корма у больных и переболевших животных, снижаются в 2 - 3 раза. Указанная патология приводит к снижению экономической эффективности отрасли [93].

По данным А.Г. Глотова (2006) в Сибири и на Урале ежегодно по причине респираторных заболеваний гибнет до 30% телят в возрасте от 1 до 6 месяцев, кроме того, вирусы участвуют в патологии воспроизводства крупного рогатого скота, где экономические потери очень велики.

В Омской области сложилась аналогичная ситуация по сохранности молодняка крупного рогатого скота. По данным Главного управления ветеринарии в Омской области ежегодный выход телят на 100 коров составляет 78-80, при этом в 2007-2011 гг. процент народившихся телят составил 9,6; 8,1;

7,7; 6,7; 5,9 погибло 3,4; 3; 2,8; 2,7; 2,2 к обороту стада соответственно. За последние 5 лет в области погибло 40864 голов телят.

Причиной гибели телят, как указывает А.П. Красиков (2004), во многих случаях являются возбудители инфекционных болезней, причем инфекционный процесс носит, главным образом, ассоциативный характер.

Содержание в одном помещении животных с разным иммунобиологическим фоном, при воздействии различных стрессов, приводит к возникновению иммунодефицитного состояния, способствующего повышенной восприимчивости молодняка к различным ауто - и эктопатогенам, и в итоге, к массовым респираторным болезням. В настоящее время известно 10-15 различных вирусных и бактериальных агентов и их ассоциаций, способные вызвать острые респираторные заболевания телят. [34, 35].

Часто болезни крупного рогатого скота проявляются в виде ассоциативной инфекции с участием условно патогенной микрофлоры, вирусов, хламидий, микоплазм [15, 53, 68, 86, 92, 145, 156]. Основную роль в возникновении вспышек первичных респираторных болезней молодняка крупного рогатого скота играют вирусы парагриппа-3, инфекционного ринотрахеита, респираторно-синцитиальной инфекции и коронавирус; в меньшей степени -вирус диареи, аденовирусы, тогавирусы, реовирусы, парвовирусы и риновирусы. Вирусы повреждают защитные механизмы дыхательной системы, чем облегчают проникновение различных микроорганизмов (Pasteurella, Klebsiella, Pseudomona, Haemophylys, Proteus, Mycoplasma и Chlamydia), которые в значительной степени определяют тяжесть течения болезни [88].

Развивающиеся патологические процессы характеризуются снижением локального и общего иммунного статуса животных, активацией свободнорадикальных механизмов и перекисного окисления липидов; развитием интоксикационных процессов [96, 113, 130, 141] и диктуют необходимость комплексного терапевтического подхода.

Успех борьбы с инфекционными болезнями телят во многом зависит от правильно выбранной схемы лечения. Широкое внедрение в практику лечения скота антибактериальных препаратов в начальный период заболевания создало иллюзию решения проблемы бактериальных инфекций. Однако эффективность многих антибиотиков, как и других антибактериальных препаратов, резко снижается из-за широкого распространения резистентных к ним штаммов микроорганизмов. В некоторых регионах России, наряду с возрастанием заболеваемости коров и телят, снижается эффективность терапевтических мероприятий. Пахмутов В.М. с соавт.(2006) указывает, что в Новосибирской области заболеваемость коров эндометритом с 2003 г. по 2006 г. возросла на 6,31%, а показатель терапевтической эффективности за этот же период сократился на 3,9%.

В многочисленных экспериментах, проведенных коллективами ученых ВИЭВ, ВГНКИ, МВА, УНИЭВ и др., под руководством ученых - Саркисова А.Х., Мозгова И.Е., Леонова H.H., Солнцева K.M.и др. изучены актуальные вопросы, касающиеся рационального применения антибиотиков в ветеринарии и животноводстве. В последние годы в области антибиотикотерапии все большее предпочтение отдается лекарственным формам пролонгированного действия [24].

Для практикующего ветеринарного врача важно иметь в арсенале лекарственные средства с хорошей терапевтической активностью, обладающие политропным действием, пролонгирующими свойствами и невысокой себестоимостью. Это позволяет при применении одного препарата оказывать разностороннее влияние на возбудителей болезни и основные этапы развития патологического процесса, а также стимулировать защитные силы организма и процессы выздоровления. Такими свойствами обладают комбинированные препараты, в состав которых входит два или более лекарственных вещества, растворенных в полимере-наполнителе. В настоящее время им и отдается предпочтение по нескольким причинам. Сочетание нескольких составляющих

позволяет: во-первых, усилить их фармакологические эффекты за счет синергизма, во-вторых, снизить токсические свойства веществ либо за счет включения компонентов, нивелирующих негативные последействия других, либо за счет элементарного снижения количества отдельно взятых компонентов, учитывая их сочетания. И, наконец, в-третьих, применение комплексного препарата облегчает врачебные манипуляции и, что самое главное, снижает до минимума стрессовый фактор у животного от многократных инъекций [108].

Чаще всего в комбинированные препараты включают лекарственные вещества, оказывающие адекватное действие на причину и основные звенья патогенеза болезни в малых или средних дозах, когда между ними существуют явления синергизма. К средствам, подавляющим отдельные звенья патологии, желательно добавлять лекарственные вещества, стимулирующие защитные силы организма [34].

Разработка и изучение комплексных антибактериальных препаратов впервые были проведены профессором Дольниковым Ю.Я. (1985) при создании «препаратов-комбитеров» серии стартина для лечения телят при массовых желудочно-кишечных болезнях.

Разнообразие причин возникновения болезней телят снижает эффективность применения специфических препаратов. Как правило, бронхолегочные заболевания возникают с 15-20-дневного возраста и применение вакцин в этом возрасте неэффективно, так как иммунная система молодняка способна реагировать на антигены с 1,5-2 месячного возраста. Поэтому существенную роль в профилактике и лечении болезней играет разработка средств, способствующих повышению уровня факторов естественной защиты организма и устраняющих иммунодефицита у животных [102, 111].

Применение в схемах лечения композиций комбинированных антимикробных препаратов на основе полимеров-пролонгаторов в сочетании с

иммунокорректирующими средствами - один из новых путей терапии животных с инфекционной патологией, существенно отличающийся от привычных, традиционных, применяемых в животноводческих хозяйствах. К средствам, подавляющим отдельные звенья патологии, добавляются лекарственные вещества, стимулирующие защитные силы организма. Биологически активные добавки растительного происхождения широко используются в ветеринарии для улучшения пищеварения, нормализации обмена веществ, повышения резистентности организма животных к неблагоприятным факторам воздействия внешней среды [51].

Одной из биологически активных добавок, которая в настоящее время внедряется в ветеринарию, является «Бетулин-экстракт», представляющий собой экстракт бересты березы повислой Betula pendula, содержащий не менее 83% бетулина. Бетулин - это тритерпеновый спирт ряда лупана, имеющий химическую формулу СзоН5о02 и химическое название бетуленол. Он содержится в большом количестве растений (орешник, календула, солодка и пр.), но в промышленных масштабах его получают экстракцией из бересты -наружного слоя коры березы белой (betula alba).

Выявлены лечебный эффект бетулина и его способность предотвращать репродукцию вируса инфекционного ринотрахеита (ИРТ) в организме восприимчивых животных. Это выражается в отмене клинических проявлений экспериментальной инфекции, в отсутствии постинфекционной сероконверсии и живого вируса у обработанных бетулином инфицированных телят. Одним из механизмов иммуномодулирующего и лечебного эффектов бетулина, как указывает Щегловитова О.Н. (2009), является его способность влиять на репродукцию противовирусных факторов защиты организма.

Величко Г.Н. с соавт. (2005) установлено противовирусное действие бетулина при лечении телят, больных ИРТ и ВД-БС.

В медицине широко изучены свойства бетулина как биологически активной добавки. Василенко Ю.К., Толстикова Т.Г.с соавт. занимались

изучением фармакологических свойств и биологической активности тритерпеноидов коры березы. Изучена фармакокинетика [39] и иммунотропная активность бетулина [55].

Кроме того, по данным Дьячук Г.И., Вишневецкой Т.П., Юрченко И.В. (2004), Катиковой О.Ю. и др. (2002), бетулин обладает гепатопротекторными и ранозаживляющими свойствами.

На данный момент в ветеринарной медицине возникла необходимость использования, наряду с широко распространенной антибиотикотерапией, экологически чистых лекарственных средств растительного происхождения, обладающих иммуностимулирующим, противовирусным и антитоксическим действием. В особенности, это касается лечения телят, которые потенциально подвержены развитию вторичного иммунодефицита [8, 12].

Поэтому весьма актуальным для профилактики и лечения телят при болезнях, вызванных ассоциацией различных микроорганизмов, является разработка удобного в применении, малотоксичного антибактериально-антивирусного и иммуностимулирующего средства. В этом отношении большой научный и практический интерес представляет 0,25% суспензия бетулина-экстракта на пропиленгликоле (Бетулин-ЭПГ) для парентерального применения, которая в сочетании с левотетрасульфином или другими комплексными антибактериальными препаратами, позволит в очень короткие сроки купировать инфекционный процесс. А также представляет большой интерес возможность сочетанного использования Бетулина-ЭПГ со специфическими антигенами для получения активных специфических сывороток, применяемых для индикации и идентификации возбудителей инфекционных болезней, и с целью повышения клеточных и гуморальных факторов поствакцинального иммунитета у телят.

Цель и задачи исследований. Разработать средства, методы лечения, профилактики и иммунокоррекции при инфекционных болезнях крупного

рогатого скота смешанной этиологии, вызванных ассоциацией патогенных и условно-патогенных микроорганизмов.

Для достижения данной цели необходимо было решить следующие основные задачи:

• Изучить эпизоотическую обстановку и распространение наиболее опасных инфекционных болезней крупного рогатого скота смешанной этиологии, вызванных в различных сочетаниях ассоциацией микроорганизмов в хозяйствах Омской области.

• Провести токсикометрическую оценку препаратов бетулина (Бетулин-Э и Бетулин-ЭПГ) и выявить их иммуностимулирующие свойства.

• Определить действие бетулина-экстракта и его суспензии на клинико-иммунный статус телят при профилактике и терапии респираторных и желудочно-кишечных патологий, обусловленных ассоциацией различных возбудителей инфекционных болезней.

• Изучить терапевтическую эффективность комбинированных пролонгированных антибактериальных препаратов и их сочетания с Бетулин-Э и Бетулин-ЭПГ для профилактики вирусо-микробоносительства у глубокостельных коров, нетелей, и быков-производителей, лечения телят при смешанных и ассоциативных желудочно-кишечных и респираторных инфекционных болезнях.

• Разработать оптимальные, эффективные схемы лечения телят с применением левотетрасульфина, тетрациклина-ПГ в сочетании с Бетулином-Э и Бетулином-ЭПГ и дать им экономическое обоснование.

Научная новизна работы. Выявлена широкая распространенность ассоциативных инфекционных болезней среди телят, коров и быков производителей в хозяйствах Омской области. Изучены микропаразитоценозы различных экологических ниш у спонтанно инфицированных коров родильно -профилакторного периода, телят и быков-производителей. Установлено, что основными сочленами ассоциаций, представляющих эпизоотическую

опасность, являются патогенные микроорганизмы: хламидии, лептоспиры, листерии, вирусы ИРТ-ПВ, кампилобактерии, риккетсии и условно патогенные - микоплазмы