Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Сравнительный анализ полиморфизма гена DQB главного комплекса гистосовместимости у крупного рогатого скота

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Сравнительный анализ полиморфизма гена DQB главного комплекса гистосовместимости у крупного рогатого скота"

РГ6 од

? Я МАЙ 1995 российская академия наук

' ' институт общей генетики Ш. н.и. вавилова

на правах рукописи УДК 575.174.015.3: 636.2

чжан юй го

сравнительный анализ полиморфизма гена оцв главного комплекса гистосовместшости у крупного'рогатого скота

(03.00.15 - генетика)

автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва 1995

Работа выполнена в лаборатории сравнительной генетики животных Института Общей Генетики им.Н.И. Вавилова РАН.

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор И.А. Захаров

Официальные оппоненты: докт.биол.н., проф. М.М.Асланян

канд.биол.н. Т.В. Малинина

Ведущее учреждение: Всероссийский Институт физиологии, биохимии и питания сельскохозяйственных животных РАСХН

Защита состоится << >> _ 1995.г. в_ на

заседании диссертационного совета (Д002.49.01) при Институте Общей Генетики им. Н. И. Вавилова РАН по адресу: Москва, ул. Губкина, 3.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ИОГен РАН.

Автореферат разослан << >> ____ 1995 г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат биологических наук

Г.Н.ПОЛУХИНА

Актуальность проблемы. Главный комплекс гистосовместимос-ти (ГКГ) присутствует у всех позвоночных и обеспечивает шмун-ный ответ на чужеродные антигены. ГКГ представляет собой кластер тесно сцепленных генов, состоящий из трех областей (гены классов 1,11 и III).

Исследование полиморфизма генов ГКГ позволяет выявить связи между определенными аллелями генов ГКГ и резистентностью к различным заболеваниям. Особенно это относится к генам класса II ГКГ, называемыми генами иммунного ответа, которые, как правило, в большей степени вовлечены в ассоциации с заболеваниями. У крупного рогатого скота главный комплекс гистссовмес-тимости обозначается BoLA. Показаны ассоциации между определенными аллелями генов класса II BoLA и предрасположенностью или устойчивостью к таким заболеваниям как клинический мастит, лейкоз крупного рогатого скота и др. 'Помимо этого, отмечены корреляции между определенными галлотипаш и воспроизводством, продуктивностью и другими хозяйственно-ценными признаками. Таким образом, анализ полиморфизма генов ГКГ может стать основой для создания высокоинформативных генетических маркеров хозяйс--, твенно-полезных признаков, пригодных для использования в селекционных программах. Для исследования полиморфизма генов ГКГ активно разрабатываются молекулярно-генетические методы, основанные на анализе полиморфизма ДНК, и позволяющие упростить такой анализ и сделать его доступным для массового тестирования животных. Б настоящее время предложен метод анализа специфических последовательностей ДНК после их амплификации in vitro с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). Полиморфизм длин рестрикционных фрагментов (ПДРФ) таких амплифицированных последовательностей можно определять без применения изотопных методов анализа, путем простого сравнения подвижностей полученных фрагментов после злектрофоретического разделения в по-лиакриламидном и агарозных гелях.

Целью исследований было сравнительное изучение днк-полиморфизма локуса DQB класса II BoLA у двух пород крупного рогатого скота: бестужевской и черно-пестрой методами пцр и пдрф. Сравнительный анализ полиморфизма предполагалось проводить в двух направлениях: выявление внутри- и межпородных различий исследуемых пород и характеристика уровня полиморфности

разных областей гена 003 (5'- и З'-нетранслируемые области и белок-кодирующий участок).

Для этого были поставлены следующие задачи:

1. разработка условий анализа полиморфизма ДНК трех областей локуса ВоЬА-ОЦВ ГКГ у крупного рогатого скота с помощью полимеразной цепной реакции (ЩР и ЩР-ПДРФ).

2. Исследование полиморфизма ВоЬА-ПСр бестужевской и черно-пестрой пород крупного рогатого скота.

3. Сравнительный анализ уровня полиморфности трех исследуемых областей гена.

4. Поиск внутрипородных и межпородных различий при анализе полиморфизма локуса ВоЬА-ООВ.

Научная новизна полученных результатов. В работе предложен метод полимеразной цепной реакции для изучения полиморфизма локуса ВоЬА-БОЗ У крупного рогатого скота, проведена оптимизация условий полимеразной цепной реакции. Впервые изучен полиморфизм разных областей гена ЮОВ у бестужевской и черно-пестрой пород крупного рогатого скота и показан высокий уровень полиморфности З'-области и экзона £ гена О0В по сравнению с более консервативной 5*-нетранслируемой областью. Впервые изучены меж- и внутрипородные различия у этих пород крупного рогатого скота по локусу БОВ. Обнаружен ранее не описанный рестрикционный полиморфизм по эндокуклеазе А1и1 для 5'-области гена.

Практическая ценность. Данное исследование относится к фундаментальным областям науки. Результаты работы вносят вклад в исследования уровня полиморфности различных областей гена, несущих разную функциональную нагрузку. Выявлены породоспеци-фичные алдельные варианты и генотипы локуса ВоЬА-ВОВ, что может представлять практическую ценность как основа для создания породоспецифичных генетических маркеров. Полученные данные целесообразно использовать также в качестве учебного материала в подготовке специалистов биологического и зоотехнического профиля.

Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на I Международной конференции по молекулярно-генетическим маркерам животных, Киев, 27-29.01.1994, и доложены на межлабораторном семинаре Института общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН.

- о -

По материалам диссертации опубликована 1 работа, 1 сдана в печать.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на ..страницах машинописного текста; содержит 14 таблиц, 13 рисунков; состоит из введения, обзора литературы, методической части, результатов и их обсуждения, еыводов и списка литературы.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Исследование проведено на двух породах крупного рогатого скота: черно-пестрой,, бестужевской.

Выделение ДНК и злектрофоретический анализ проводили по стандартным методикам (Маниатис и др., 1984).

Рестрикцию ДНК эндонуклеазами осуществляли при оптимальных для каэдого фермента условиях: температуре и буфере. Электрофорез проводили в 6%-ом полиакриламидноы геле в трис-боратнсм буфере (Маниатис и др., 1984).

Полимеразную цепную реакцию проводили по Saiki et al. (1988) с модификациями.

Для подбора праймеров были использованы компьютерные' программы "Oligo" и " Topt", любезно предоставленные З.М. Берберовым (ИОГЕн РАН), а также программы "Micro Genie" и -"Biosys". Работа проводилась на IBM-совместимых персональных компьютерах.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ Характеристика исследуемый областей гена BoLA-DQB.

Для исследования были выбраны функционально различные участки гена DQ3: 5'-ветранслируемая область, 3'-область и участок, кодирующий Ы-домен антигена (bl-область) (Схема 1).

- б -BoLA-DQB

б'-нетранслируемая область

-259 -110

5' _ ____________________________ 3'

__149 н.п. _

QB1 Qß2

5'CAGATGAAGTTTTTCCGCTCC-3' 3'CGACACAACTGATGGTAATCA-5'

Ы- область

3518 3838 5'--:----3'

QB3 QB4

5'AATGTGTGGCTGATCTTGCCC-3' 35-CCAACTACCTCAACGTGGTCC-5'

З'-нетранслируемая область

1330 1581

5----3'

QB9 QB10

5 * -CCCGCAGAGGATTTCGTGGTC-3*5'-CCSCTGCCAGGTGAAGGGGGC-3'

Схема .1. Локализация и состав праймеров QJ31-QJ32,

QB3-QB4 и QB9-QB10.

Первым шагом в изучении генов DQB было проведение с помощью компьютерной программы "Micro Genie" анализа нуклеотид-ных последовательностей исследуемых фрагментов с целью поиска сайтов рестрикции для 150 ферментов. Подученные рестриктные карты использовались затем для поиска растрикционного помор-физма амплифицированных фрагментов.

Поскольку наши исследования полиморфизма гена DQB являются оригинальными как в отношении Еыбора исследуемых фрагментов гена, так и в отношении подбора праймеров, необходимыми этапами работы были характеристика праймеров и оптимизация условий

полимеразной цепной реакции.

Характеристика праймеров и оптимизация условий полимеразной цепной реакции (ПНР)

Теоретические характеристики праймеров 0ВЗ-ЦВ4 и ЦВЭ-ОВЮ даны в таблице 1 (праймеры ОВ1-ОВ2 уже описаны ранее (Сулимова И др., 1992, Соколова, 1993).

Таблица 1

Характеристики праймеров, использованных в работе.

Лраймер Тш Наличие Наличие ос ■ шпилек димеров

авз аВ4 0В9

цвю

56.2 + 53.4 +

60.3 68.2 +

+++

++++

+

Оптимальные условия амплификации гена 0$В с помощью ЩР для Тад-полимеразы приведены в таблице 2.

Таблица 2

Оптимальные условия амплификации генов БОВ с помощью ЩР для Тад-полшерагы.

Г 1 | Праймеры! 1 Кол-во! Ожиг Синтез 1 Денатурация!

ЦИКЛОВ 1 мин 1:0С минЛ°С мин.1°С !

| Ср1-ЦВ2 | ! 35 ! 1.0 56 •1.5 72 0.6 92.5 !

1 0ВЗ-0В4 | 30 ( 1.0 57.5 1.5 72 0.5 93 |

1 0В9-0ВЮ! 1 .. , ... 1 30 1 . 1 1.0 64 1.5 72 0.6 93 | I

ПЦР-анадиз полиморфизма 5*-нетранслируемой области гена DQB

В результате амплификации ДНК животных бестужевской породы был получен фрагмент, размер которого соответствовал ожидаемому 149 п.н., как и у животных черно-пестрой и холмогорской породы (для представителей холмогорской, черно-пестрой породы анализ был проведен ранее в лаборатории сравнительной генетики животных Института общей генетики РАН). Всех животных, имевших фрагмент длиной в 149 п.н. объединили в один генотипический вариант, который был обозначен ранее как вариант L (Соколова, 1993). Полученные результаты указывают на отсутствие протяженных дедеций и вставок в изучаемой области. Для L варианта отмечен рестрикционный полиморфизм по рестриктазам Alul.

В пробах ДНК бестужевских животных обнаружен ноеый сайт для Alul с предположительной локализацией в 23 положении от 5'-конца амплифицируемого фрагмента (схема 2)

Alul* I

CAGATGAAGT TTTTCCGCTC CAG CTGCTGATTGGTCCCTTT 10 20

Схема 2. Возможная локализация нового сайта рестрикции Alul* ( AGCT) в 5'-области гена DQB. Выделен нуклеотид, вставка которого может привести к образованию сайта рестрикции для Alul.

Два животных бестужевской породы, имевших новый сайт для Alul в 23 положении, давали следующую рестрикционную картину: фрагменты в 149 п.н., 127 п.н., 73+76 п.н.. Полученная картина рестрикции по Alul может служить подтверждением существования двух копий гена на гаплоидный набор хромосом. В данном случае можно говорить о гетерозиготных по локусу DQJ3 животных, генотип которых складывается из двух гаплоидных наборов, один из которых представлен двумя копиями гена DQB, различающихся по Alul-сайтам в исследуемой области гена, другой - двумя копия-

ми, одинаковыми по этому параметру. Одна из возможных моделей структуры такого генотипа представлена на схеме 3.

DQB1 5'-область Alul-

h

149 п.н.

DQB2 5'-область

Alul+

I

Н-..h

.-) Alu+Alu-

73 + 76 П.н.

А1и1- А1и1*

4 .

\...............-1..................-| А1и*+А1и-

149 п.н. 23 + 127 п.н.

Схема 3. Одна из возможных моделей генотипа животного бестужевской породы, гетерозиготного по локусу ВОВ.

Также в выборке животных бестужевской породы .было одно животное, при рестрикции продуктов амплификации ДНК которого зндонукдеазой Alul получались фрагменты в 127 п.н. и в 73+76 п.н.. У этого животного вероятно существуют две разные копии гена: в одной присутсвует Alul-сайт в положении 23, в другой -в 73 положении от 5'-конца амплифицируемого фрагмента. Однако, установить, относятся ли зти копии к одному или разным гапло-типам, без семейного анализа установить невозможно. Бестужевские животные имели отличительную особенность: у всех изученных животных отсутствовал сайт рестрикции для Hinfl.

В результате наших и ранее проведенных исследований 5'-области гена DQB у трех пород крупного рогатого скота методом ЩР-ЦЦРФ с применением рестриктаз Alul и Hinfl было выявлено семь генотипов, различающихся по наличию или отсутствию соответствующих сайтов рестрикции (Таб.3).

ПЦР-анализ полиморфизма 3*-области гена DQB

При проведении амплификации in vitro фрагмента З'-области гена DQB на ДНК животных черно-пестрой и бестужевской пород крупного рогатого скота получены довольно разнообразные спект-

ры длин амплифицированных фрагментов. Всего тестировались 13

Таблица 3

Частоты генотипов по локусу СОВ у животных бестужевской, холмогорской и черно-пестрой пород, на основе рестрикци-онного анализа продуктов амплификации 5'-области гена СОВ.

1 ¡Генотип 1 ¡Холмогорская п 1 |Черно-пестрая п 1 -..... 1 ¡Бестужевская п 1

1 i 1 1 п 1 I |Частота 1 1 1 п 1 1 ¡Частота 1 , 1 1 п ! 1 ¡Частота | 1 1 ! 1

l(Al-H-) 11 0,234 19 0,730 |

I(А1+Н-) 9 0,236 11 0,234 4 0,154 1

1(Al*+H-) 3 0,078 1 0,021 3 0,116 |

1(А1-Н+) 16 0,420 11 0,234

I(А1+Н+) 8 0,210 6 0,127

|(Al*+H+) 2 0,052 3 0,063

|(А1-Н+Н**) 1 4 0,085 1

Примечание: AI+, Al*+, Н+, Н*+ - сайты рестрикции для Alul и Hinfl в положении 73, 23, 47 и 73 положении от от 5'-конца амплифицируемого фрагмента соответственно. Данные по холмогорской и черно-пестрой породам взяты из работы Соколовой (1993).

фрагментов различной длины ( таблица 4 ). Кроме того, часть образцов ДНК не давала амплификации ( 0 вариант ). В процессе амплификации вероятно происходила димеризация фрагмента в 310 п.н. Так, в пробах животных черно-пестрой породы присутствуют димеры в 620 п.н (310 х 2), а в пробах бестужевских животных прослеживаются димеры в 620 п.н. и тримеры в 930 п.н. Однако, нельзя исключать и возможность дупликации фрагментов гена in vitro. Во всяком случае наличие дупликации было отмечено ранее для гена DRB (Соколова, 1993). На существование такой возможности может указывать отсутствие фрагмента 310 п.н. в некоторых пробах.

Таблица 4

Основные продукты амплификации 3'-области локуса ВОВ у животных бестужевской и черно-пестрой пород

-1 I I

Размер | Бестужевская порода | Черно-пестрач порода | фраг- 1 | |

мента | п частота ошибка! п Частота ошибка |

940-930 7 0. ,212 0.0051 0 0 0

920-910 7 0. .212 0.0051 0 0 0

790 7 0. ,212 0.0051 0 0 0

650 21 0. .636 0.0071' 21 0. 875 0.0046

620 4 0. ,121 0.0032 11 0. 458 0.0103

575 9 0. .273 0.0060 12 0. 500 0.0104

519-524 17 0. .515 0.0076 12 0. 500 0.0104

485 11 0. .333 0.0067 12 0. 500 0.0104

448-436 5 0. .152 0.0039 1 0. 042 0.0017

400-390 •15 0. .455 0.0075

310 10 0. .303 0.0064

235 4 ' 0. .121 0.0032

215 4 0. .121 0.0032

- 1с. -

Наибольшее количество фрагментов 3'-области, равное 13, показано у бестужевской порода, обнаружены фрагменты разной длины, частоты которых варьируют от 0,121 до 0,636. Фрагменты 940-930, 920-910, 790, 400-390, 310, 235, 215 существовали только в пробах данной породы и, по-видимому, могут служить ее породными маркерами. Разумеется, окончательное суждение о "пород оснецифичности" указанных фрагментов на основе приведенных данных пока сделать нельзя из-за малых выборок и ограниченного числа исследованных пород. Полученные результаты являются предварительными, однако они представляют интерес с точки зрения получения новых маркерных систем и могут служить обоснованием для расширения исследований в этом направлении.

У животных черно-пестрой породы было 6 различных фрагментов, спектр молекулярных весов от 660 до 448-436 п.н. Не было выявлено фрагментов, специфичных для черно-пестрой породы'. Все фрагменты обнаружены и у бестужевских животных. Как сообщалось ранее (Сулимова и др, 1992, Удина и др 1994), исследуемые животные черно-пестрой породы не являются в полном смысле этого слова чистопородными, в формировании данного поголовья участвовали быки джерсейской и голштино-фризской пород. Любопытно отметить, что у этих животных отсутствовал фрагмент в 310 п.н.

Таким образом злектрофоретическая картина анализа продуктов амплификации имела сложный характер, сопоставимый в какой-то степени с результатами, полученными для повторяющихся последовательностей или многокопийных генов типа рибосомаль-ных.

Отдельные амплифицированные фрагменты присутствали у исследованных животных одновременно, составляя устойчивые сочетания (генотипические варианты), определявшее генотип животного по данной области локуса (таблица 5). Генотипические варианты обозначались большими латинскими буквами. Среди продуктов амплификации присутствовали как фрагменты, представленные в большинстве генотипов, так и фрагменты, характерные для отдельных генотипов.

Для черно-пестрой породы можно выделить 5 различных гено-типических вариантов.- Г, и, V, У, Ц, различающихся по числу и размерам фрагментов, У животных бестужевской породы найдено 7

Таблица 5

Генотипические варианты 3"-области локуса 00В у животных бестужевской и черно-пестрой пород

1 Размер фрагмента , 1 | Бестужевская порода п-33 |Черно-пестрая порода п-24 ) | варианты | варианты | | Ох) I I? | X | 2 | V ! Б | V 1 X | и 1 V | У | Ц | |п-6 |п-1 [п=7!п-4|п-4!п=»5|п-6Iп-9 |п-1 |п-12|п-1|п-1 | 1 111111(1111 1

940-920 к ) 1

920-910 *

790 *

660 * * * ■к * * 1

620 -к * •к -к |

575 ■к * Л * к к |

519-524 * * * * !

485 * * -к * * к J

448-436 А * 1

400-389 * * * !

310 * А *

235 * 1

215 * 1

Частота 0.18 .03 .21 .12 .12 .15 .18 .38 1 .04 .50 .04 .04 ! i 1

Примечание: х) в этом варианте объединена животные не дававшие амплификацию с праймерами 0ВЗ-О.В4.

вариантов: О, R, X, Z, W, S, V. Вариант V, обнаруженный у 50% черно-пестрых животных, присутствовал и у бестужевских животных (18,6%). Другие генотипические варианты - породоспецифич-ны.

Генотипические варианты у животных черно-пестрой породы имеют более узкий спектр длин фрагментов и значительно меньшее количество фрагментов (шах-4).

Обобщая полученные результаты по 3'-области гена DQB, можно сделать следующее заключение: 3'-область локуса DQB представляет собой достаточно высокополиморфную область, имеющую определенные межпородные различия у крупного рогатого скота. Эти различия проявляются в размерах амплифивдрованных продуктов, которые отличаются у исследованных пород, что может служить системой маркеров в селекционно-генетических изысканиях.

ПЦР-анализ Ы-области гена DQB

При проведении амплификации in vitro фрагмента М-области гена DQB на ДНК животных черно-пестрой породы крупного рогатого скота все образцы давали амплификацию. Были получены довольно разнообразные спектры длин амплифицированных фрагментов. Всего тестировалось 9 фрагментов различной длины (таблица 6). Существуют фрагменты: 640-620, 405, 135, 123, 90, 45 п.н. Среди продуктов амплификации можно отметить фрагменты, соответствующие по длине димерам в 540 п.н (270 х 2) и тримерам в 810 п.н. (270 х 3) ожидаемой длине амплифицируемой последовательности. Не исключено, что это связано с особенностями структуры гена (присутствием дуплицированных последовательностей внутри исследуемой области гена и наличием двух копий гена на гаплотип, которые также могут различаться по первичной структуре), но может быть обусловлено и димеркзацией продуктов в процессе амплификации in vitro.

По числу и размерам фрагментов можно выделить 3 генстипи-ческих варианта, обозначенных AI, А2, A3 (Таблица 7).

Наследование описанных по локусу BoLA-DQB генотипов не противоречит менделевскому типу наследования, о чем свидетельствует анализ генотипов трех семей (схема 4).

Обобщая полученные результаты по Ы-области гена DQB, можно сделать заключение о высоком уровне полиморфизма данной области, хотя он и менее выражен, чем это было показано для bl-области локуса DRB (Соколова, 1993).

Таблица 6

Основные продукты амплификации Ы-области локуса Бф у животных черно-пестрой породы

1 ! Размер | фрагмента i 1 1 n i Частота i ошибка t

j 810 23 0 74 0 006 i

i . 640-620 31 1 00 0 000 1

! 540 31 1 00 0 000 |

I 405 23 0 7.4 0 006 1

! 270 9 ' 0 29 0 007 1

1 135 23 0 74 0 006 1

i 123 9 0 29 0 007 1

! 90 9 0 29 0 007 |

| 45 f 31 1 00 0 000 i 1

Таблица 7

Генотйпические варианты Ы-области гена БОВ черно-пестрой породы

1 Размер i | Варианты генотипов (n-31)|

фраг- 1 !

мента 1 AI i А2 1 A3 | |

in-14 | i i П-3 | i п-8 | ! 1 I

810 а а 1 1

640-620 * а а |

540 а а а |

405 л * 1

270 а 1

135 * а 1

123 а 1

90 а 1

45 а а а | |

Частота 0.45 0.29 1 0.26 1 1

■Tenor-Al

-98382 A3

5679-A3

r---Capri

I A3

71050 Al

70403 Al

70227 A3

6087-A1

-Passiv-A3

71431 Al

70759 A3

Схема 4. Распределение генотипов по локусу ОЦВ у животных черно-пестрой породы, относящихся к трем различным семьям. Структура генотипов ( А1 и АЗ ) представлена в таблице 7. Номерами обозначены самки, кличками - быки-производители.

Анализ генотипов исследованных животных по двум или трем областям гена 1К}В

Поскольку мы имели данные по полиморфизму трех участков гена 00В у черно-пестрой породы и двух участков гена ВЦВ у бестужевской породы, это позволило нам оценить уровень полиморфизма гена БОВ по трем или двум участкам в целом у животных двух изученных пород.

.-.„Нами рассчитаны частоты сочетаний разных вариантов полиморфизма трех областей, и бшо отмечено, что частоты сочетаний разных вариантов сильно варьируют у животных черно-пестрой породы, т.е. генотипы локуса ООЭ довольно разнообразны и представлены с разной частотой.

С целью сравнительного анализа уровня полиморфизма по двум участкам гена ВОВ (5'-, 3'-области) в целом между двумя породами крупного рогатого скота были рассчитаны частоты сочетаний разных вариантов двух областей у каждой породы.

По данным частот разных сочетаний вариантов в гене ПОВ мы рассчитали показатели генного разнообразия з двух популяциях крупного рогатого скота. Показатели изменчивости для двух пород оказались одинаковыми, однако, у животных черно-пестрой

породы в гене ВРВ обнаружено больше вариантов сочетании, чем у бестужевской породы. Хотя полученные результаты еще недостаточны для достоверной оценки полиморфизма гена БЦВ у двух популяций, представленных в данной работе малыми выборками, тем не менее, возможность различного уровня полиморфизма гена ОДВ у разных пород несомненно заслуживает дальнейшего специального изучения.

ВЫВОДЫ

1. Разработаны условия анализа полиморфизма 5'-области, 3'-области и М-области гена БОД' класса II главного комплекса гистосовместимости у крупного рогатого скота (ВоЬА) с помощью полимеразной цепной реакций и анализа полиморфизма длин рест-рикционных фрагментов.

2. Для Ь1-области (второй экзон), и 3'-области (пятый эк-зон) гена ОЦВ свойственен высокий уровень полиморфизма. 5*-не-транслируемая область -гена ООВ (регуляторная) является менее , полиморфной.

3. Выявлен рестрикциснный полиморфизм, не описанный ранее, по эндонуклеазе А1и1 для 5*-области гена СОВ у животных бестужевской породы. Новый сайт рестрикции локализован предположительно в 23 положении от 5'-конца амплифнцируемого фрагмента.

4. По 3'- и 5*- нетранслируемым областям гена ОЦВ выявляются как внутри-, так и межпородные различия у животных бестужевской и черно-пестрой пород.

5. По локусу БШ У изученных пород существуют породоспе-цифичные аллельные варианты и генотипы.

- 18 -Основные публикации:

Чжан Юй Го, Р.Е.Сулимова. Анализ полиморфизма генов главного комплекса гистосовместимости у крупного рогатого скота (ВоЬА) при помощи ЩР. // Тезисы I Международной конференции по молекулярно-генетическим маркерам животных, 27-29 января 1994 г. Киев. С. 69.

Сулимова Г.Е., Удина.И.Г., Чжан Юй Го, Соколова С.С. Сравнительный анализ полиморфизма ДНК локуса ВОВ главного комплекса гистосовместимостм у крупного рогатого скота // Генетика (сдана в печать).