Сравнительный анализ метаболитов вторичного обмена Artemisia Dracunculus L. сортов "Французский" и "Русский"

Агларова, Айшат Мамайхановна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Сравнительный анализ метаболитов вторичного обмена Artemisia Dracunculus L. сортов "Французский" и "Русский"
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Сравнительный анализ метаболитов вторичного обмена Artemisia Dracunculus L. сортов "Французский" и "Русский""

жщнтшси

Агларова Айшат Мамайхановна

СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ МЕТАБОЛИТОВ ВТОРИЧНОГО ОБМЕНА ARTEMISIA DRACUNCULUS L. СОРТОВ «ФРАНЦУЗСКИЙ» И «РУССКИЙ»

03.00.04 — биохимия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Махачкала - 2006

адм

А НА

го научного центра Российской академии наук

Научный руководитель - доктор биологических наук, профессор

Менланов Иззет Сиражудинович

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Габибов Магомед Магомедович

кандидат биологических наук, доцент Даудова Татьяна Николаевна

Ведущая организация —

Дагестанская государственная медицинская академия

Защита состоится «29» ноября 2006 года в 16*00 часов на заседании диссертационного совета К 212.053.12 по присуждению ученой степени кандидата биологических наук при Дагестанском государственном университете по адресу: 367025, г. Махачкала, ул. Батырая, 4, Даггосунивер-ситет, биологический факультет.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Даггосуниверситета.

Автореферат разослан «28» . октября . 2006 года.

Ваш отзыв, заверенный печатью, просим направлять по адресу: 367025, г. Махачкала, ул. М. Гаджиева, 43 «а», биологический факультет, е-таП - avran5@mail.ni.

Ученый секретарь Т»

диссертационного совета 1Л

доктор биологических наук / Магомедова М.А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Одной из важных особенностей, отличающих представителей царства растений от животных, является их прикреплен-ность к субстрату, вследствие чего у растений отсутствует поведенческая адаптация. Это ограничение преодолевается за счет более мощных механизмов биохимической адаптации. Проявляется это в более развитой и разнообразной системе вторичного обмена у растений по сравнению с животными. Разнообразие продуктов вторичного обмена позволяет растениям реагировать на самые незначительные изменения внешних условий варьированием химического состава органов и тканей [Харборн, 1985; Thomas et al, 1992; Kutchan, 2001; Shan, 2002; Ryu et al, 2004].

Исследование биохимических адаптации у растений является одним из актуальных направлений современной биохимии. Адаптации на биохимическом уровне не всегда сопровождаются изменениями морфологии и зачастую являются единственным признаком, с помощью которого можно различать близкие формы, сходные морфологически [Лукнер, 1979; Kutchan, 2001].

Род полыней Artemisia L. (сем. Asteracea) объединяет свыше 400 видов, распространен по всему земному шару и представляет собой пример разнообразия биохимических и морфологических адагггаций. Не всегда эти адаптации у полыней сопровождаются существенными морфологическими изменениями. Например, вид Artemisia dracunculus L. в природе представлен несколькими хеморасами, отличающимися по химическому составу в зависимости от условий обитания, в то время как морфологически эти хеморасы практически неразличимы [Кононенко, 1978; Бухарин и др., 1989]. Это говорит о том, что биохимические адаптации у рода полынь играют важную роль. Многие из видов полыней используются в официальной и народной медицине, парфюмерно-косметической и пищевой промышленности. Поэтому исследование особенностей химического состава полыней представляет значительный интерес. В этих целях для сравнения взяты два сорта A. dracunculus - «Французский» и «Русский», уже давно используемые в пищевой промышленности и народной медицине. Морфологически эти два сорта весьма близки друг другу, однако по вкусовым качествам и аромату заметно отличаются [Кононенко, 1978; Бухарин и др., 1989].

В литературе имеются немногочисленные сведения о химическом составе растений сорта «Русский» и практически отсутствуют данные о составе сорта «Французский» [Greger, 1979; Hoffmann, 1985, Kawadias, 2000; Manitto, 2000; Куркина, 2001].

Учитывая широкое использование A. dracunculus в пищу и в качестве лечебного средства, представляет значительный интерес изучение хи-

мического состава и биологической активности экстрактов этих двух сортов.

Цели II задачи исследования. Целью работы является изучение химического состава продуктов вторичного обмена, содержания микро- и макроэлементов в различных органах А. <1гасипси1и$ в онтогенезе и оценка биологической активности ее экстрактов.

Поставленная цель реализуется при решении следующих задач:

1. Изучение динамики содержания кумаринов, органических кислот, микро- и макроэлементов в зеленой биомассе в онтогенезе растения.

2. Исследование содержания флавоноидов, аскорбиновой кислоты и водорастворимых полисахаридов в органах растения.

3. Анализ состава эфирного масла и экстрактов, полученных диоксидом углерода в сверхкритическом состоянии (СК-ССЬ-экстракты) зеленой биомассы А.<1гасипси1и£.

4. Исследование бактериостатического, антигипоксического, спазмолитического, анальгезирующего, гепатопротекторного, гастропротек-торного и диуретического эффектов различных экстрактов А. йгасипсЫш;.

Научная новизна. Впервые систематически исследовано содержание классов соединений в органах А. йгасипсШш сорта «Французский» в онтогенезе. Найден рад новых соединений в СК-ССЬ-экстрактах зеленой биомассы А. ёгасипсиШБ. Проведен сравнительный анализ состава СК-СОг-экстрактов сортов «Французский» и «Русский» А. йгасипсШш. Исследована биологическая активность различных экстрактов А. йгасипсЫиБ сорта «Французский».

Теоретическая и практическая значимость работы. Обширный экспериментальный материал по химическому составу органов А. с1гасип-си1и$ может быть использован для построения теории биохимической адаптации растений. Результаты исследований могут быть широко использованы в практической медицине.

Основные положения, выдвигаемые на защиту:

1. Два сорта А. йгасипсЫш, близкие по морфологическим признакам, существенно отличаются по химическому составу продуктов вторичного обмена. Химический анализ СК-СОг-экстракгов сортов «Французский» и «Русский» А. 4гасипси1ш, проведенный методом газожидкостной хроматографии, выявил новые соединения, ранее не обнаруженные в А. <1гасипси1и$. СК-СОг-экстракгы сорта «Русский» имеют более широкий спектр соединений по сравнению сортом «Французский».

2. Специфика содержания основных групп вторичного обмена -флавоноидов, кумаринов, водорастворимых полисахаридов, аскорбиновой кислоты в органах А. дгасипоЛив закономерно изменяется в онтогенезе.

3. Спиртовые экстракты обладают бакгериостатической, антигипок-сической, спазмолитической, анальгетической, диуретической, желчегон-

ной и гепатопротекторной активностью, сравнимой и в ряде случаев превосходящей активность стандартных, рекомендованных Минздравом, средств.

Апробация работы. Основные положения, материалы и фрагменты диссертационной работы доложены: на 57-й региональной конференции по фармации, фармакологии и подготовке кадров (Пятигорск, 2002), Всероссийской научно-практической конференции (Махачкала, 2002), VI симпозиуме по фенольным соединениям (Москва, 2004), 57-й научной конференции молодых ученых и студентов (Махачкала, 2005), IV Международной конференции «Регуляция роста, развития и продуктивности растений» (Минск, 2005), 10-м Междунар. съезде «Фитофарм 2006» (Спб, 2006).

Публикации. Основное содержание диссертации опубликовано в 10 научных работах.

Структуры и объем работы. Диссертация изложена на 176 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов и обсуждения, заключения, включает 18 таблиц, 50 рисунков, 260 литературных источников, из них 60 иностранных авторов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Основными объектами исследований являлись: зеленая биомасса, листья, цветки, стебли A. dracunculus сорта «Французский» и сорта «Русский». Материал для исследования был собран на плантации Дагестанской опытной станции ВИР (с. Вавилово, Дербентский район) в фазы стрелкования, бутонизации, цветения и плодоношения в 2002-2004 гг. Условия выращивания двух сортов одинаковые. Зеленую биомассу растений сушили до воздушно-сухого состояния в условиях естественной воздушно-теневой сушки при t = 25-30°. Объектами для исследования служили также СК-СОг-эксгракты, водный настой и 20, 40, 70%-е спиртовые настойки A.dracunculus.

Для выделения и очистки различных классов соединений применялись традиционные методы экстрагирования, фракционирования, хроматографии [Лурье, 1978; Кирхнер, 1981; Зенкевич, 2001]. Из физико-химических методов использовали оптические методы: УФ-спекгрофотомет-рия, фотоэлектроколометрия, атомно-абсорбционная спектроскопия [AASIN, ГДР, Carl Zeiss, Jena; Разумов, 1986].

Экстракция липофильной фракции зеленой биомассы, измельченных до размера частиц 0,5-1,0 мм, осуществлялась сжиженным оксидом углерода (IV) в сверхкритическом флюидном (СКФ) состоянии на опытной лабораторной установке Горного ботанического сада Дагестанского науч-

ного центра РАН при рабочем давлении 10 атм и температуре 20°С (СК-СОг-экстракты) [Касьянов и др., 1978].

Сравнительный анализ СК-С02 экстрактов, эфирного масла А. dracunculus проводился методом газовой хроматографии с масс-спектр аль-ной и УФ-дстекцией на приборе Satum-2000 (Varían) на колонке Stabilvax. Идентификация соединений осуществлялась по базе данных специализированной компьютерной программы; содержание каждого вещества приведено в процентах к сумме обнаруженных соединений [Практическая..., 1998].

Микробиологические исследования проводили на кафедре биохимии и микробиологии Пятигорской государственной фармацевтической академии (г. Пятигорск). Исследования проводились способом «колодцев» [ГФ XI изд].

Все фармакологические исследования проводили в соответствии с рекомендациями Государственного фармакологического комитета МЗ РФ [Методические...,2000] на белых беспородных мышах-самцах массой тела 16-20 г, белых беспородных крысах массой тела 180-280 г и половозрелых лягушках массой 20-30 г. Животные выращены в питомнике «Рапполово» и содержались на стандартном рационе в виварии Санкт-Петер-бургской Химико-Фармацевтической Академии (г. Санкт-Петебург). Изучались ан-тигипоксическое, спазмолитическое, гастропротекторное, гепатопротек-торное, диуретическое, желчегонное и седативное свойства экстрактов зеленой биомассы растений по общепризнанным моделям [Пастушенков, 1989; Тринус и др, 1994; Лесиовская, 1997; Руководство, 2000; Методические.,.,2000].

Статистическую обработку результатов проводили общепринятыми методами. Достоверность различий оценивали с помощью t-критерия Стьюдента. Различия по сравнению с контролем считали статистически существенными при Р < 0,05 [Лакин, 1990]. Эксперименты проводили в 3-х кратной биологической повторности (в опыте 70-100 растений).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Сравнительный газохромаюграфический анализ С02-экстрактов и эфирного масла. В таблице 1 приведены данные по химическому составу СК-СОг-экстрактов зеленой биомассы A. dracunculus сорта «Французский» и сорта «Русский». В экстракте сорта «Русский» обнаружено 39 индивидуальных соединений, в экстракте сорта «Французский» - 24. 17 соединений из списка для сорта «Русский» отсутствуют в экстракте сорта «Французский». Два соединения из экстракта сорта «Французский» отсутствуют в экстракте сорта «Русский».

Кроме соединений, указанных в списке, в обоих экстрактах присутствуют неидентифицированные предельные углеводорода в количестве ~ 5% от общей массы экстракта. Обращают на себя внимание также существенные различия в количественном содержании некоторых веществ в растениях двух сортов. Например, эстрагола в экстракте сорта «Русский» в 100 раз, 7-метоксикумарина в 20 раз меньше, чем в экстракте сорта «Французский».

Основная масса экстракта сорта «Русский» приходится на метилэвгенол, изоэлемецин, азарон, гексадеценовую кислоту, сквален, 9-октадеце-новую кислоту, 3, 4, 7-триметоксикумарин, 6, 7-диметоксикумарин (итого 81%). В экстракте сорта «Французский» основная доля приходится на эст-рагол, метилэвгенол, метилгексадеканоат, изоэлемецин, азарон, тетраде-кановую, н-гексадекановую, 7-метоксикумарин (итого 85%).

Таблица 1

Химический состав СК-СОг-экстрактов из зеленой биомассы А. (1гасипси1иэ сортов «Русский» и «Французский» (экстракты получены из 70 растений каждого сорта)

№ п/п

Соединение

в % от общей суммы обнаруженных соединений

сорт «Русский»

сорт «Французский»

Р-Фелландрен

1,773 ± 0,104

р-Пинен

0,106 ±0,007

Терпинолен

0,148 ±0,008

Лимонен

0,514 ±0,029

0,983 ± 0,059*

Бициклогепт-2-ен

0,093 ± 0,005

•у-Терпинен

0,584 ± 0,034

Цимол

0,111 ±0,006

Терпинолен

0,048 ± 0,002

4-Терпинеол

0,380 ±0,021

Бициклогеггган

0,601 ± 0,035

0,133 ± 0,007*

Эстрагол (метилхавикол)

0,280 ±0,014

28,309 ± 1,887*

7-Элемен

0,159 ±0,008

Нерила цетаг

0,162 ±0,008

Гексановая кислота

0,269 ±0,015

0,788 ±0,046*

Метилтетрадеканоат

0,222 ± 0,012

0,616 ±0,036*

Метилэвгенол

13,774±0,912

4,841 ±0,302*

0,120 ±0,006 0,441 ±0,027

0,416 ±0,024*

1,747 ±0,097 0,812 ±0,047 Щ-478 ГО,052^0,11

Примечание: * - отличие статистически достоверно по сравнению с сортом «Русский» при Р < 0,05

Из таблицы 1 видно, что основными компонентами СК-СОг-экстра-ктов обоих сортов являются низкомолекулярные терпены. Большинство из них обладают значительной биологической активностью и уже давно используются в медицине и парфюмерии [Растительные ресурсы, 1996].

В то же время большинство из них до сих пор не было обнаружено в А. <3гасипси1и5. В частности цнмол, сквалек, оцимен, азарон, гексановая кислота, октадекановая кислота, тетрадекановая кислота и другие впервые обнаружены в данной работе.

Исследованные нами два сорта были получены посредством искусственного отбора по вкусовым качествам. Считается, что сорт «Французский» обладает более острым вкусом и пряным ароматом по сравнению с «Русским». Возможно, что это различие во вкусе и аромате обусловлено различием в составе исследованных нами экстрактов.

Между составами СК-СОг-экстрактов проявляются основные сортовые различия: состав условно «легкой» фракции (светло-серая заливка, табл. 1) у сорта «Русский» разнообразнее, но ее суммарная доля составляет 19,224%, в то время как у сорта «Французский» ей принадлежит 35,670%.

Значительно богаче и разнообразнее СК-СОг-экстракг сорта «Русский» по составу «тяжелой» фракции, определяющей основные различия между эфирными маслами и СК-С02-экстрактами. Сумма кумариновых производных в СК-СОг-экстракте сорта «Русский» составляет 16,591%, в СК-С02-экстракте сорта «Французский» - 25,370%, в эфирном масле сорта «Русский» кумарины не обнаружены (табл. 2).

Таблица 2

Сравнительный анализ СК-С02-экстракта и эфирного масла из зеленой биомассы А.(1гасипси1ия сорта «Русский» (экстракт и эфирное масло получены из 70 растений)

№ п/п

Соединение

в % от общей суммы обнаруженных соединений

С02-экстракт

Эфирное масло

Р-Фелландрен

1,773 ±0,104

12,485 ±0,781*

Р-Пинен

0,106 ±0,007

0,392 ±0,021*

а-Фелландрен

0,076 ± 0,004

Терпинолен

0,148 ± 0,008

0,603 ±0,033*

Лимонен

0,514 ±0,029

0,555 ±0,035

Бициклогепт-2-ен

0,093 ± 0,005

1,447 ±0,090

Т-Терпинен

0,584 ± 0,034

1,154 ±0,072

Оцимен

1,398 ±0,087

Цимол

0,111 ±0,006

0,310 ±0,016*

Терпинолен

0,048 ± 0,002

0,401 ±0,024*

Линалоол

0,110 ±0,005

Метил-2-циклогексеноат

0,160 ±0,008

Борнилацетат

0,017 ±0,001

4-Терпинеол

0,380 ± 0,021

3,218 ±0,189*

Бициклогептан

0,601 ± 0,035

1,023 ±0,054

Эетрагол (метилхавикол)

0,280 ±0,014

1,023 ±0,057*

а-Терпинеол

0,179 ±0,009

7-Элсмен

0,159 ±0,008

0,147 ±0,008

Нерилацетат

0,162 ± 0,008

0,491 ±0,027*

Гексановая кислота

0Д69 ±0,015

0,113 ±0,007

Метилгетрадеканоат

0,222 ±0,012

0,160 ±0,009

Метилэвгенол

13,774 ±0,912

0,120 ±0,006

0,441 ±0,027

46,550 ±3,103*

0,090 ±0,006

1,747 ±0,097

2,029 ±0,119

0,527 ±0,031

1,919 ±

; 0,031 0,113»

0,171 ±0,010

Этил-гексадеканоаг

0,193 ±0,011

Элемецин ^З^.-»1-:'

0,125 ±0,006

0,077 ±0,005

3,4-диметилбензальдегид »''^Ш^

0,102 ±0,005

Азарон

21,693 ±1,356 ^ 4,949 ± 0,275»

Метил-октадеканоат

0,210 ±0,010

0,159 ±0,009

Эгилолеат

0,111 ± 0,005

3,4,5-триметилбензальдегид^

0,885 ± 0,052

9,12,15-Октадекатриеновая

0,171 ±0,009

Тетрадекановая кислота"

Л21ЩЦ32&1

Пеиггадекановая кислота

0,754 ± 0,042

¿12М-&5941| 1,070 ± 0,063'

н-Гексадекановая кислота

7-Мстоксюсумарии

0,637 ± 0,037

¿6041 1,976 ± о,11 о*

Гексадеценовая кислота я

Примечание: * - отличив статистически достоверно по отношению к СОу экстракту, при Р<0,05.

В эфирном масле, как и предполагалось, значительная доля (72,012%) принадлежит «легкой» фракции, почти половину в нем занимает одно вещество - метилэвгенол (46,550%). Доля насыщенных углеводородов в эфирном масле, по сравнению с СК-СОг-экстрактом, выше в 45 раз.

Перегонка с водяным паром, помимо воздействия пара, связана с присутствием воды в конце процесса; конденсат после полного охлаждения имеет нескольких фаз: твердую, состоящую из «смолистых» веществ; водную фазу, которая растворяет ряд полярных соединений; и эфиромас-личную фазу, состоящую из неполярных веществ — терпеноидов, ароматических соединений, сложных эфиров и других соединений. Экстракция сжиженным СОг в сверхкритическом состоянии позволяет во многом сохранить разнообразие веществ, составляющих липофильную фракцию перерабатываемого сырья, так как ведется при комнатной температуре, инертным экстрагентом, защищающим продукт от воздействия кислорода (это видно, к примеру, по наличию в СК-ССЪ-экстрактах альдегидных соединений) [Лепешков и др, 2001]. Большинство СК-С02-экстрактов характеризуется повышенными показателями кислотных чисел, что связано, по-видимому, с карбоксипроизводными углеводородов. Так, в составе СК-СОг-экстракта сорта «Русский» карбоновые кислоты (предельные и не-

предельные) занимают 17,855%, в С02-экстракте сорта «Французский» их 11,374%, в то время как в эфирном масле - всего 1,183%. Одним из механизмов их образования может являться гидролиз высокомолекулярных эфиров (восков), входящих в состав кутикулы и ли пи до в мембран растительных клеток с участием угольной кислоты, которая образуется из С02 и остаточной воды из сырья, а под высоким давлением становится реагентом. В экстракционных процессах угольная кислота также предотвращает контаминацию конечных продуктов, консервирует и стабилизирует их.

Проведенный сравнительный анализ эфирного масла и СК-С02-экстракта из травы Л.(1гасипси1и5 сорта «Русский» показал, что СК-СОг-экстракт существенно отличается от состава эфирного масла, полученного паровой перегонкой. Учитывая, что в пищевой отрасли или косметологии СК-СОг-экстракты активно используются в качестве заменителей эфирных масел и пряностей, вопросы их фармакологической активности являются особенно актуальными. К примеру, если эфирное масло А. дгасипси-1из сорта «Русский» можно считать практически нетоксичным, то присутствие кумаринов в его СК-СОг-экстракте создает необходимость более глубокой оценки возможных побочных действий.

Большое разнообразие липофильных биологически активных веществ, входящих в состав СК-СОг-экстрактов А.с1гасипси1и5 сорта «Французский», вызывает большой интерес и служит основанием для их дальнейших биохимических и фармакологических исследований.

Определение содержания основных групп веществ. Исследование динамики накопления вторичных метаболитов в онтогенезе растения показало, что содержание кумаринов, эфирного масла, органических кислот увеличивается от фазы стрелкования к фазе цветения, где оно достигает своего пика. Затем содержание исследуемых групп соединений заметно снижается (рис. 1).

куиарнны —к—эфирное масло —о— органически* кислоты

3.5 -р

0.5 -

О -1-

стрелкование бутонизация

цветение

п л одон ошен и е

Рис. 1. Динамика накоплении основных групп веществ в зеленой

биомассе А. <1гасипси1и$ сорт «Францу}С|сий»по фазам вегетации (в % к сухому весу растительного материала)

Накопление этих веществ в фазу цветения обусловлено необходимостью привлечения опылителей и защитой от поедания животными.

Изучение распределения основных групп соединений по органам растения показало, что флавоноиды, каротиноиды, водорастворимые полисахариды, аскорбиновая кислота накапливаются, главным образом, в листьях и цветках (табл. 3).

Таблица 3

Содержание основных групп веществ в различных органах А. (1гасипси1и$ сорта «Французский» (в % к сухому весу травы, в опыте 100 растений)

№ Группа веществ Части растения Трава

п/п стебли листья цветки

1 Флавоноцды 0,17 ± 0,02 1,80 ±0,03 1,29 ±0,02 1,10 ±0,04

2 Каротиноиды — 0,02 ± 0,01 1,40 ±0,04 1,02 ±0,02

3 Водорастворимые (низкомолекулярные) полисахариды 6,29 ± 0,06 18,48 ±0,02 16,28 ±0,05 14,61 ±0,39

4 Аскорбиновая кислота — 0,38 ± 0,05 0,38 ± 0,07 0,28 ± 0,05

Таблица 4

Содержание микро- и макроэлементов в зеленой биомассе А.с1гасипси1и5 сорта «Французский» (мг/кг сухого веса травы, в опыте 100 растений)

Объект исследования Содержание, мг/кг сухой биомассы

2п N1 Ге ме Си Са N3 К

Почва 98,24 ±4.24 60,45 ±5,21 1131,22* 70,45 6821,27 ±324,56 40,72 ±3,09 1357,47 ±132,56 2705,88 ±169,67 12443,44 ±957,67

Фаза стрелкования 55,25 ±4,34 29,67 ±2,01 53,43 ±2,10 959,30 ±58,65 14,53 ±1,89 1614,99 ±1146,67 1411,50 ±63,45 31250,00 ±2232,78

Фаза бутонизации 34,30 ±2,95 - 258,87 ±32,34 4609,48 ±243,76 16,18 ±1,23 2960,95 ±155,56 957,11 ±7934 15772,73 ±1265,75

фаза цветения 96,77 ±6,21 - 312,69 ±29,93 4210,62 ±246,45 19,14 ±0,99 2481,00 ±155,67 1369,51 ±105,67 15545,54 ±1195,34

Фаза плодоношения 71,79 ±7,73 13,40 ±1,56 556Д6 ±23,45 662,84 ±67,34 26,48 ±1,78 80,23 ±6,23 1476Д5 ±108,56 16704,11 ±1392,34

При изучении динамики содержания микро- (2п, Ре, Си) и макроэлементов (М£, Са, Ыа, К) в онтогенезе А. с1гасипси1и5 сорта «Французский» установлено накопление железа и меди в растениях от фазы стрел-

кования к фазе плодоношения. Содержание и Са увеличивается в фазу бутонизации и цветения, но затем резко снижается в фазу плодоношения (см. табл. 4).

Биологические свойства А. йгасипсиШв. Опираясь на исследования химического состава, учитывая неизученность биологических свойств А. с!гасипси1ш сорта «Французский», высокое терапевтическое значение выявленных классов соединений вторичного метаболизма, мы сочли целесообразным изучить биологическую активность экстрактов А. с1гасипси1и5 сорта «Французский», определив при этом терапевтически значимые формы экстрактов и дозы.

Объектами исследований бактериостатической активности явились водный настой (1:10), водные растворы (1:10) упаренных спиртовых экстрактов с использованием 40% и 70%-го этанола. Исследования проводились способом «колодцев». Оценка результатов производилась по диаметру зон задержки роста вокруг диска, включая и диаметр самого диска (5 мм). Зоны замеряли с помощью циркуля и миллиметровой бумагой. В результате микробиологических исследований (табл. 5).

Таблица 5

Бактериостатическая активность экстрактов зеленой биомассы А. <1гас11пси1|1$ сорта «Французский» (диаметр задержки роста колоний, мм; в опыте 100 растений)

№ Опытный Тест-культуры

образец 1 2 3 4 5 6 7 8

1 Вода — — — — — — — —

1 Водный экс- 9,0 ±

тракт 0,8

2 Спиртовый экстракт (экстрагент— 40% этанол) 11,0 ±0,8 13,0 ±1>1 10,0 ±0,2 11,0 ±0,6 — - 12,0 ±1,0 12,0 ±0,3

3 Спиртовый экстракт (экстрагент -70% этанол) 10,0 ±0,5 9,0 ±0,3 11,0 ±0,7 12,0 ±0,9 — - 11,0 ±0,4 12,0 ±0,1

Примечание: до 10 мм - малая чувствительность, > 10 мм - чувствительность средняя; 1 — Staphilococcus aureus 209-р, 2 - St. aureus (Макаров), 3 — St aureus Type, 4 - St. epidermidis Wood-46, 5 - Escherechia coli 675, 6 - Shigella flexneri 266,7 - Bacillus subtilis L2, 8 — Вас. anthracoides-1.

Установлено, что водные настои не проявили антимикробной активности, 40 и 70%-е спиртовые настойки оказали антибиотический эффект по отношению к Staphilococcus aureus 209-р, St. Aureus (Макаров), St.

Aureus Type, St. epidermidis Wood-46, Bacillus subtilis L2, Вас. Anthra-coides-1. Escherechia coli 675 и Shigella flexneri 266 к спиртовым настойкам оказались нечувствительными.

Противогипоксический эффект экстрактов A. dracunculus сорта «Французский» исследовали на модели острой гипобарической гипоксии. Эффективность исследуемых соединений сравнивали с одним из наиболее известных отечественных антигипоксантов - гутимином, рекомендованным Минздравом в качестве эталона при исследовании антигипоксиче-ской активности веществ. Как показывают результаты, наибольшую анти-гипоксическую активность проявляют настойки, приготовленные с использованием 40% и 70% этилового спирта в дозе 1:10 и 1:30. Выживаемость в этих группах составила 40-80%. По своему влиянию на выживаемость 70%-я настойка в дозе 1:10 и 1:40 сравнима с препаратом сравнения гутимином. Водный настой не проявил выраженную антигипоксическую активность. Водные разведения этанола различной концентрации не проявляли антигипоксическую активность.

Таблица 6

Антигипоксическая активность водных и спиртовых экстрактов из зеленой биомассы A. dracunculus сорта «Французский» на модели острой гипобарической гипоксии (п=5)

Варианты Извлечение доза1 разведение Продолжительность жизни (мни.) Прирост времени жизни к контролю, % Выживаемость %

Когггроль вода 4,7 ± 1,3 0

Гутимин 100 мг/кг 20,0 ±0* 326 100

1:10 4,7 ±1,3 — 0

I 1:20 4,8 ± 1,0 2 0

1:30 4,7 ±13 — 0

1:40 4,6 ± 1,2 — 0

1 1:50 4,7 ±1,1 — 0

1:100 4,9 ±13 4 0

1 ^ 1:10 13,9 ±1,1* 196 60

1:20 7,5 ±1,5 60 0

1 Ё 1 1:30 16,8 ±1,0* 257 60

1i* к ¥ о 1:40 16,7 ±1,8* 255 60

1:50 14,8 ±2,1* 215 40

1:100 3,0 ± 1,4 — 0

1:10 4,7 ±1,3 — 0

40% эта- 1:20 4,9 ±1,1 4 0

нол 1:30 4,7 ±1,2 — 0

1:40 4,8 ±1,3 2 0 1

1:50 4,7 ±1,0 — 0

1:100 4,9 ±1,1 4 0

1 1:10 13,3 ±2,1* 183 40

й Ё о 1 | « Ё* v? 1:20 9,8 ±1,7 109 0

1:30 16,6 ±1,2* 253 40

1:40 17,0 ±1,5* 262 60

кч Я ¿^ К И о (Г) Si 1:50 12,3 ±1,0* 162 40

1:100 5,2 ±1,4 И 0

1:10 4,7 ±1,1 — 0

1 1:20 4,9 ±1,3 4 0

I 1:30 4,7 ±1,2 — 0

О г» 1:40 4,9 ± 1,0 4 0

1:50 4,7 ±1,1 — 0

1:100 4,8 ±1,3 2 0

1 /-V 1:10 17,1 ±2,1* 264 80

1:20 16,4 ±1,7* 249 60

1 1:30 20,0 ± 0* 326 100

« -р 1:40 18,0 ±2,5* 283 80

Я о" i-С И О 1:50 12,8 ±1,8* 172 60

1:100 3,78 ±1,9 — 0

Примечания: * - отличие статистически достоверно по сравнению с контролем при Р < 0,05

1 - все извлечения, независимо от разведения, вводили в дозе 25 мл/кг

Исследования анальгетической активности экстрактов из A. dracun-culus сорта «Французский» на модели "уксуснокислых корчей" показали (рис. 2), что у контрольных животных латентный период составил 4,8 мин, а количество корчей в среднем доходило до 55. Водные извлечения увеличивали латентный период на 46-87% по отношению к контролю и уменьшали количество корчей на 64-82%. 20% спиртовые извлечения увеличивали латентный период на 133%, а количество корчей уменьшалось на 72%. Самым эффективным анальгезнрующим эффектом обладали 40% и 70%-е настойки, у которых латентный период увеличивался на 191 и 212% соответственно, а количество корчей уменьшалось на 87 и 93%.

Влияние спиртовых извлечений из травы A. dracunculus сорта «Французский» на состояние центральной нервной системы мы изучали в тестах "открытое поле" и "норковый рефлекс" на 30 крысах-самцах массой 180-200 г. Результаты исследований показали, что настойки A. dracunculus сорта «Французский» можно оценить как седативное и стабилизирующее, поскольку при их применении наблюдался рост эмоциональной лабильности (в 2,7-3 раза), стабилизировалась ориентацнонная активность, замет-

□ латентный период ■ количество корчей

Рис. 2. Анальгезирующая активность экстрактов зеленой биомассы А. йгасипси-

1из сорта «Французский» на модели уксуснокислых корчей (в %); 1 - контроль (очищенная вода); 2 — анальгин; 3 — 20%-спиртовая настойка; 4 — 40%- спиртовая настойка; 5 — 70%- спиртовая настойка; б — 90%-спиртовая настойка; 7 - настой (1:10); 8-настой(1:50); 9-20%этанол; 10-40%этанол; 11 -70%этанол. Объем вводимой

дозы 25 мл/кг внугрибрюшинно.(п=5)

ным было также снижение поисковой активности, а также выраженное снижение агрессии.

Лнтиэкссудативные свойства экстрактов оценивали на модели формалинового отека лапы крысы (рис. 3) и адреналинового отека легких мышей (рис. 4). Результаты исследований процесса экссудации на модели формалинового отека лапы показали, что изменение объема лапы для контрольной группы животных составил 0,62 ± 0,01 мл. Использование 40% и 70%-й спиртовых настоек снижает степень отека лапы на 80% по сравнению с контролем. Их эффективность несколько превосходит эффект препарата сравнения фенил бутазо на (рис 3). 70%-я настойка на модели адреналинового отека легких оказывает противовоспалительный эффект, превосходящий по своему действию фенилбутазон (рис. 4).

Оценивая состояние слизистой оболочки желудка при использовании модели бутадиеновой язвы, было установлено, что спиртовые настойки А. (1гасипси1и$ сорта «Французский» оказывают выраженное противоязвенное и противовоспалительное действие. Максимальный эффект, превосходящий эффект облепихового масла, наблюдали у настойки, приготовленной на 70%-м этаноле (табл. 7).

110100»

то.

п п

РнсЗ. Влияние экстрактов А.{1гасш1<-ц1цч сорта «Французский» на экссудатнвную фазу воспаления (модель формалинового отека лапки крысы, в каждой группе по 5 животных) 1 - контроль; 2 - фенилбугазон; 3 - 40% спиртовое извлечение; 4 - 70% спиртовое извлечение, (п^)

Рис.4. Антиэкссудативная активность экстрактов А^гасипсиЬм сорта «Французский» на модели адреналинового отека легких, %; 1 - Контроль; 2 - фенилбугазон; 3- 40% настойка; 4 -70% настойка. (п=5)

Таблица 7

Результаты оценки гастропротекторной активности спиртовых настоек ш травы А.с1гасипси1и5 сорта «Французский» на модели

бутадионовой язвы желудка (п=5)

Варианты Доза (мл/кг) Количество язв, шт Всего ИП ПА**

крупные средние мелкие шт %к контролю

Контроль Вода очищенная 2,4±0,7 1,8±0,7 10,7±1,2 14,9±0,9 100 5,0 1,0

Облепихи Масло 1,0 0,4±0,1 * 3,0±0,1* 3,0±0,3* б,4±0,2* 43 2,2 2,3

40%-ная настойка 12,5 1,0±0,1* 0 2,6*±0,2 3,6±0,2* 24 и 4,2

70%-ная настойка 12,5 0,4±0,1* 0 2,2*±0,3 2,6±0,2* 17 0,9 5,5

Примечание: * -значения статистически отличны от контроля при Р<0,05; ИП (индекс Паулса)= А'Б/100%, где А - среднее число деструкцнй на одно животное; Б-число животных с изъязвлениями в группе ПА — противоязвенная активность. ПА =ИПконгроль/ИПопыт;

**прн ПА > 2 изучаемый экстракт считается активным.

При оценке диуретической активности установлено» что 40 и 70%-е спиртовые настойки А.с1гасипси1и5 сорта «Французский» увеличивалидиу-рез через 4 часа на 10 и 55%, а через 24 часа - на 43 и 73% соответственно. Максимальный эффект наблюдался у 70%-ной настойки, у которой мочегонный эффект превосходил эффект препарата сравнения хвоща полевого (рис. 5).

12 3 4

■ через 4 часа □ через 24 часа

Рис.5. Диуретическая активность экстрактов зеленой биомассы А.с1гасШ1си1и5 сорта «Французский»; 1 - Контроль; 2 — трава хвоща; 3- 40%-ная настойка;

4 - 70%-ная настойка. (п=5)

Таблица 8

Влияние спиртовых настоек А* (1гасипси1и$ сорта «Французский» на желчеобразование и желчевыделение у лягушек

(п=5)

варианты Изменение массы желчного пузыря

через 1 час через 2 часа через 3 часа

мг % мг % мг

контроль 66,0 ± 0,8 — 64,0 ±0,7 — 65,0 ± 0,6 —

40%-я настойка 69,0 ± 0,5 4 102,0 ±1,5* 59 97,0 ±1,3* 49

70%-я настойка 96,0 ±0,9* 45 32,0 ±1,2* 50 71,0 ± 1,7 9

Примечание: *- значения статистически отличны от контроля при Р<0,05

При изучении влияния спиртовых настоек на процесс желчеообразо-вания оценивалась масса желчного пузыря у половозрелых лягушек. Результаты наших опытов показывают, что настойки А. с1гасипси1и5 сорта «Французский» стимулируют желчеообразование и желчевыделение. При

этом 70%-я настойка действует значительно быстрее: уже через 1 час масса желчного пузыря статистически достоверно превышает таковую в контроле, через 2 часа у всех животных регистрируется активное изгнание желчи, а через 3 часа - восстановление нормального объема пузыря. Действие 40-й настойки отсрочено.

Изучение гепатопротекторных свойств Л.(1гасипси1и5 сорта «Французский» на модели острого токсического гепатита у крыс, вызванного введением ССЦ показало, что по сравнению с контролем: 1) в группе животных, принимавших 70%-ю настойку, наблюдается уменьшение площади некрозов и уменьшение числа гепатоцитов в состоянии жировой дистрофии, что свидетельствует о лучшем функциональном состоянии печени (в контроле у 75% животных некрозы занимают 1/2 площади среза и более, у 70-85% животных, принимавших 70%-ю настойку некрозы занимают 1/3 площади среза и меньше); 2) в опытных группах животных, принимавших 40% и 70%-е настойки участки сохранной паренхимы содержат большее количество гепатоцитов без признаков дистрофических изменений по сравнению с контролем. Следовательно, можно сказать, что экстракты А. с1гасипси1и5 сорта «Французский», усиливают компенсаторно-приспособительные возможности печеночной паренхимы, повышая ее устойчивость к неблагоприятным факторам.

Таким образом, в результате фармакологических исследований установлено, что экстракты А. <1гасипси1из сорта «Французский» обладают выраженным антигипоксическим, противовоспалительным, анальгези-рующим, спазмолитическим, нормализующим функциональное состояние ЦНС, диуретическим, желчегонным, гепатопротекторным, гастропротек-торным эффектами, сравнимыми, а в некоторых случаях превосходящими эффекты препаратов сравнения.

Таким образом, А.(1гасипси1и5 является весьма перспективным растением для широкого применения в медицине.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Вторичный обмен у растений характеризуется десятками тысяч различных соединений. Химическое разнообразие продуктов вторичного обмена обусловлено чрезвычайной вариабельностью экологических связей организма. Среди важнейших экологических факторов - взаимодействие растения с другими растениями и с животными, абиотические факторы -температура, освещенность, состав атмосферы [Лукнер, 1979; КшсЬап, 2001]. Реакция растения на изменения величин абиотических факторов и на взаимодействие с животными большей частью состоит в синтезе, накоплении и эмиссии специфических веществ вторичного обмена [Носов» 1994]. Комплект этих веществ является результатом интеграции множест-

венных влияний на данное растение и состав этого комплекта может служить паспортной характеристикой данного вида растений или хеморасы данного растения.

Нами исследован спектр соединений, содержащихся в СК-С02-экстрактах двух сортов полыни A.dracunculus - «Французского» и «Русского». Эти два сорта весьма близки по морфологическим признакам, но по вкусу и аромату значительно отличаются друг от друга. Это отличие коррелирует с обнаруженным нами различием состава СК-СОг-экстрактов этих двух сортов. СК-С02-экстракты сорта «Русский» существенно богаче по спектру содержащихся в них веществ по сравнению с сортом «Французский». В СК-СОг экстракте сорта «Русский» содержатся р-фслландрси, 3-пинен, терпинолен, бициклогепт-2-ен, у-терпинен, цимол, 4-терпинеол, у-элемен, нерилацетат, этил-гексадеканоат, 3, 4-диметилбензальдегид, эти-лолеат, пентадекановая кислота, гексадеценовая кислота, 9, 12, 15-октаде-катриеновая к-та, 9-октадеценовая кислота, отсутствующие в экстрактах сорта «Французский».

За синтезом каждого нового соединения стоят соответствующие ферменты. Особенностью генома растений, видимо, является его толерантность к параллельному переносу генов, кодирующих синтез ферментов вторичного обмена, В частности, это относится к синтетазам [Lücker et al, 2004]. Биосинтез терпеноидов организован так, что интродукция моно-терпен-синтетаз не нарушает общий план биосинтеза терпенов, но увеличивает число конечных продуктов этих метаболических путей. В связи с полученными нами данными, большой теоретический и практический интерес представляет сравнительное исследование активности монотерпен-сиитетаз в двух сортах полыни. Поскольку сорта «Русский» и «Французский» морфологически различаются незначительно, можно предположить, что адаптация посредством модификации формы - более трудный эволюционный путь по сравнению с биохимической адаптацией, не затрагивающей морфологические признаки.

Монотерпены играют важную роль в защитных механизмах растений [Zevinsohn et al, 1991; Pare, Tumlinson, 1999; Dong et al, 2001; Couin-genuene, Turlings, 2002; Duda re va et al, 2004]. В особенности это касается защиты от растительноядных насекомых. Набор соединений, синтезируемых и секретируемых в ответ на поранение, вызванное животным, зависит от вида животного [Couingenuene, Turlings, 2002]. Поэтому изменение состава синтезируемых соединений вторичного обмена указывает на изменение экологических связей и возможное изменение экологической ниши.

Обращает на себя внимание тот факт, что в СК-СОг-экстрактах сорта «Русский» содержание эстрагола (метилхавикола) весьма незначительно, а в сорте «Французский» - в 100 раз больше и составляет около 30% от общей суммы соединений. Эстрагол — это производное бензола с молеку-

лярной массой 148Да и, согласно литературным данным, его содержание в эфирном масле полыни эстрагон может достигать 60-75% от общей массы [Ханина, 2001]. В экстрактах сорта «Русский», однако, оно весьма незначительно. Напротив, содержание азарона + изоэлемецина в сорте «Русский» составляет 28%, а в сорте «Французский» лишь 9%. Можно выделить и другие существенные различия в составе СК-ССЬ-экстрактов исследованных нами сортов. По содержанию основного компонента в эфирном масле некоторые исследователи предлагают вьщелить две хеморасы A.dracunculus: «метилхавиколовую» (горная популяция) и «метилэвге-нольную» (равнинная популяция) [Бухарин и др., 1989; Vienne, 1989; Кирьялов и др., 1996; Ханина, 2001]. По содержанию этих веществ можно предположить, что сорт «Русский» отобран из равнинной популяции, а сорт «Французский» - из горной. Так можно объяснить более широкий и разнообразный спектр соединений, найденный в экстракте сорта «Русский», что, по-видимому, связано с большей плотностью и разнообразием насекомых в экосистеме равнины по сравнению с горной экосистемой.

Исследование содержания металлов в биомассе сорта «Французский» показало, что A.dracunculus может накапливать значительные количества таких металлов, как цинк, железо, никель и медь. Известно, что накопление металлов в растениях опосредовано соответствующими транспортными механизмами, локализованными в корнях [Marschner et al, 1995]. Железо и медь накапливаются в растении от стадии стрелкования к стадии плодоношения. Динамика содержания магния и кальция несколько иная: происходит существенное увеличение содержания этих металлов в стадии бутонизации с последующим снижением в стадии плодоношения. Дальнейшее изучение динамики накопления различных металлов в структурах полыни, возможно, позволит использовать это растение в ремедиа-ции почв [Pilon-Smit, 2005].

Таким образом, проведенное нами исследование показало существенное различие химического состава продуктов вторичного обмена сортов «Русский» и «Французский» A. dracunculus, которые весьма близки по морфологическим характеристикам, что может свидетельствовать о факте биохимической адаптации этого растения к новым экологическим условиям.

ВЫВОДЫ

1. Сравнительный анализ химического состава близких по морфологическим признакам сортов A. dracunculus - «Русского» и «Французского» — показал существенное различие их по химическому составу продуктов вторичного обмена.

2. В СК-СОг-экстракгах A. dracunculus сорта «Французский» обнаружено 24 соединения. Из них ряд соединений, таких как, сквален, гекса-новая кислота, тетрадекановая кислота, н-гексадекановая кислота, азарон - обнаружены впервые. В экстрактах сорта «Русский» обнаружено 39 соединений. При этом, содержание эстрагола в 100 раз меньше, чем в экстракте сорта «Французский, а содержание изоэлемецина, напротив, в 10 больше.

3. Эфирное масло A.dracunculus сорта «Русский» содержит 33 соединения, а СК-ССЬ-экстракгы - 40 соединений, при этом 6 соединений условно «легкой» фракции, содержащиеся в эфирном масле отсутствуют в СК-С02-экстрактс, а 13 соединений, в основном условно «тяжелой» фракции, содержащиеся в СК-СОг-экстракте, отсутствуют в эфирном масле.

4. Изучение динамики микро- (Zn, Ni, Fe, Cu) и макроэлементов (Mg, Са, Na, К) в онтогенезе A. dracunculus L. сорта «Французский» показало накопление железа, меди в растениях от фазы стрелкования к фазе плодоношения. Содержание Mg и Са увеличивается в фазу бутонизации и цветения, но затем резко снижается в фазу плодоношения. Исследование содержания флавоноидов, каротиноидов, водорастворимых полисахаридов, аскорбата в стеблях, листьях и плодах A. dracunculus сорта «Французский» показало, что основная масса полисахаридов и аскорбата содержится в листьях и плодах. Флавоноиды сосредоточены в основном в листьях (59,3% от общей массы флавоноидов).

5. В динамике онтогенеза A. dracunculus сорта «Французский» максимальное количество кумаринов, эфирного масла, органических кислот приходится на фазу цветения, что свидетельствует о важной роли этих соединений в генеративный период.

6. Экстракты травы A.dracunculus сорта «Французский» обладают бактериостатическим действием, оказывают дозазависимый противоги-поксический, противовоспалительный, гепатопротекторный, диуретический, спазмолитический, гастропротекгорный эффекты.

Список опубликованных работ по теме диссертации

1. Агларова A.M., Зилфикаров И.Н. Исследование полыни эстрагон (Artemisia dracunculus L. ceM.Asteraceae), интродуцированиого в Дагестане // Материалы 57 региональной конференции по фармации, фармакологии и подготовке кадров (Пятигорская государственная фармацевтическая академия). - Пятигорск, 2002. - С. 7-8.

2. Агларова А.М., Зилфикаров И.Н., Абдуллаев К.М. Определение флавоноидов в надземной части полыни эстрагон, культивируемой в Дагестане // Химия и технология в медицине: Материалы всероссийской на-

учно-практической конференции. - Махачкала, ИПЦ ДГУ, 2002. -С, 89-91.

3. Агларова A.M., Зилфикаров И.Н. Изучение динамики накопления кумаринов в надземной части полыни эстрагон // Химия и технология в медицине: Материалы всероссийской научно-практической конференции. - Махачкала, ИПЦ ДГУ, 2002. - С, 91-93.

4. Агларова A.M., Раджабов Г.К. Биологическая активность фе-нольных соединений травы полыни эстрагон Artemisia draciinculus L.// Материалы VI симпозиума по фенольным соединениям, Москва, 2830 апреля 2004 г. - М., 2004. - С. 34.

5. Алиева З.М., Агларова AM. Введение в культуру in vitro полыни эстрагон// Регуляция роста, развития и продуктивности растений (Материалы IV Международной конференции, г. Минск, 26-28 октября 2005 г), - Мн.: Право и экономика, 2005. - С. 13.

6. Агларова AM., Алиева З.М., Юсуфов А.Г. Культура in vitro и фитохимический анализ полыни эстрагон // Известия высших учебных заведений. Северо-Кавказский регион. Естественные науки, 2005. - № 4. -С, 44-46.

7. Алиева З.М., Дибиргаджнева Ш.Д., Агларова А.А. Культура in vitro полыни эстрагона // Тезисы докладов 57-й научной конференции молодых ученых и студентов. - Махачкала, 2005. - С. 84-85.

8. Агларова A.M., Зилфикаров И.Н., Нкикеева Р.А., Северцева О.В., Кривошапкина Л.Г., Абейдулина С.А., Макаров И.Ю. Основные действующие вещества и полезные свойства полыни эстрагон - Artemisia dracunculus L. // Матер. 10-го Междунар. Съезда «Фитофарм 2006» («Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения»). - СПб. - 2006. - С. 7-9.

9. Зилфикаров И.Н., Агларова A.M. Сравнительный анализ эфирного масла и СК-СОг-экстрактов полыни эстрагон / Фармация, 2006. -№ 3. - С. 12-14.

10. Агларова А.М., Зилфикаров И.Н. Исследование фармакологических свойств водных и водно-спиртовых извлечений из травы полыни эстрагон / Фармация, 2006. - № 4. - С. 37-

Подписано в печать 27.10.2006 г.

Формат 60x84.1/16. Печать ризографная. Бумага № 1. Гарнитура Тайме. Усл. печ. л. -1,75 изд. печ. л. -1,75. Заказ - 236 - 06. Тираж 130 экз. Отпечатано в «Деловой мир» Махачкала, ул. Коркмасова, 35а

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Агларова, Айшат Мамайхановна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Роль вторичного метаболизма растений.

1.2. Полынь эстрагон (Artemisia dracunculus L. сем. Asteraceae) общая характеристика, химический состав, биологические свойства и применение.

1.2.1. Историческая справка.

1.2.2. Биологическая характеристика.

1.2.3. Распространение и особенности агротехники.

1.2.4. Применение.

1.2.4.1.Применение в промышленности и быту.

1.2.4.2.Применение в народной медицине.

1.2.5. Химический состав.

1.2.5.1. Эфирное масло.

1.2.5.2. Кумарины.

1.2.5.3. Флавоноиды.

1.2.5.4. Пероксидаза и азотистые основания.

1.2.6. Биологические свойства.

1.2.6.1. Микробиологические исследования.

1.2.6.2. Фармакологические исследования.

1.2.6.3. Клинические исследования.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Объекты исследований.

2.2. Изучение морфолого-анатомического строения.

2.3. Получение экстрактов.

2.4. Анализ химического состава.

2.4.1. Определение содержания эфирного масла.

2.4.2. Определение содержания кумаринов.

2.4.3. Определения содержания флавоноидов.

2.4.4. Определение содержания свободных органических кислот.

2.4.5. Определение содержания хлорофилла и каротиноидов.

2.4.6. Определение содержания суммы водорастворимых полисахаридов.

2.4.7. Определение содержания аскорбиновой кислоты.

2.4.8. Определение содержания микро- и макроэлементов.

2.4.9. Определение содержания экстрактивных веществ.

2.4ЛО.Определение содержания золы.

2.5. Газохроматографический анализ СК-СОг-экстрактов.

2.6. Оценка биологических эффектов экстрактов.

2.6.1. Бактериостатическая активность.

2.6.2.0ценка острой токсичности.

2.6.3. Оценка противогипоксического действия.

2.6.4. Оценка анальгезирующего действия.

2.6.5.Оценка действия экстрактов на функциональное состояние ЦНС.

2.6.6. Оценка противовоспалительного действия.

2.6.7. Оценка гастропротекторной активности.

2.6.8. Оценка диуретической активности.

2.6.9. Оценка желчегонных свойств.

2.6.10. Оценка гепатопротекторных свойств.

2.7. Методы статистической обработки результатов.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Мофолого-анатомические исследования.

3.1.1. Морфологическое исследование.

3.1.2. Анатомическое изучение.

3.2. Определение содержания основных групп веществ.

3.2.1.Определение эфирного масла.

3.2.2. Определение содержания кумаринов.

3.2.3. Макро- и микроэлементный состав.

3.2.4. Определение содержание флавоноидов.

3.2.5. Определение хлорофилла и каротиноидов в листьях эстрагона.

3.2.6. Количественное определение свободных органических кислот.

3.2.7. Определение экстрактивных веществ.

3.2.8. Определение золы.

3.2.9. Определение суммы водорастворимых полисахаридов.

3.2.10. Количественное определение аскорбиновой кислоты.

3.3. Газохроматографический анализ

3.3.1. Характеристика и природа СК-СОг-экстрактов.

3.3.2. Газохроматографический анализ СК-С02-экстрактов и эфирного масла.

3.4. Биологическая оценка полыни эстрагон.

3.4.1. Бактериостатическая активность.

3.4.2. Результаты оценки острой токсичности.

3.4.3. Оценка противогипоксического действия.

3.4.4. Анальгезирующий эффект.

3.4.5. Изучение влияния настоек эстрагона на функциональное состояние ЦНС.

3.4.6. Изучение противовоспалительной активности.

3.4.7.0ценка гастропротекторной активности.

3.4.8.Оценка диуретической активности.

3.4.9. Изучение желчегонных свойств.

3.4.10. Изучение гепатопротекторных свойств.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Сравнительный анализ метаболитов вторичного обмена Artemisia Dracunculus L. сортов "Французский" и "Русский""

Актуальность темы.

Одной из важных особенностей, отличающих представителей царства растений от животных, является их прикрепленность к субстрату, вследствие чего у растений отсутствует поведенческая адаптация. Это ограничение преодолевается за счет более мощных механизмов биохимической адаптации. Проявляется это в более развитой и разнообразной системе вторичного обмена у растений по сравнению с животными. Разнообразие продуктов вторичного обмена позволяет растениям реагировать на самые незначительные изменения внешних условий варьированием химического состава органов и тканей [Харборн, 1985; Федяев и др., 2001; Kutchan, 2001; Ryu е.а., 2004; Dudareva е.а., 2004].

Исследование биохимических адаптаций у растений является одним из актуальных направлений современной биохимии. Адаптации на биохимическом уровне не всегда сопровождаются изменениями морфологии и зачастую являются единственным признаком, с помощью которого можно различать близкие формы, сходные морфологически [Федяев и др., 2001; Kutchan, 2001].

Род полыней Artemisia L. (сем. Asteracea) объединяет свыше 100 видов, распространен по всему земному шару и представляет собой пример разнообразия биохимических и морфологических адаптаций. Не всегда эти адаптации у полыней сопровождаются существенными морфологическими изменениями. Например, вид Artemisia dracunculus L. в природе представлен несколькими хеморасами, отличающимися по химическому составу в зависимости от условий обитания, в то время как морфологически эти хеморасы практически неразличимы [Кононенко, 1978; Бухарин и др., 1989]. Это говорит о том, что биохимические адаптации у рода полынь играют важную роль. Многие из видов полыней используются в официальной и народной медицине, парфюмерно-косметической и пищевой промышленности. Поэтому исследование особенностей химического состава полыней представляет значительный интерес. В этих целях для сравнения взяты два сорта A. dracunculus - «Французский» и «Русский», уже давно используемые в пищевой промышленности и народной медицине. Морфологически эти два сорта весьма близки друг другу. Однако по вкусовым качествам и аромату заметно отличаются [Кононенко, 1978; Бухарин и др., 1989].

В литературе имеются немногочисленные сведения о химическом составе растений сорта «Русский» и практически отсутствуют данные о составе сорта «Французский» [Greger, Bohlman е.а., 1977; Greger, 1979; Greger, Bohlman, 1979; Куркин и др., 1996; Куркин и др., 1997; Hoffmann, Herrman, 1985; Kavvadias е.а., 2000].

Учитывая широкое использование A. dracunculus в пищу и в качестве лечебного средства, представляет значительный интерес изучение химического состава и биологической активности экстрактов этих двух сортов.

Цели и задачи исследования. Целью работы является изучение химического состава продуктов вторичного обмена, содержания микро- и макроэлементов в различных органах A. dracunculus в онтогенезе и оценка биологической активности ее экстрактов.

Поставленная цель реализуется при решении следующих задач:

3. Анализ состава эфирного масла и экстрактов, полученных диоксидом углерода в сверхкритическом состоянии (СК-С02-экстракты) зеленой биомассы A.dracunculus.

4. Исследование бактериостатического, антигипоксического, спазмолитического, анальгезирующего, гепатопротекторного, гастропротекторного и диуретического эффектов различных экстрактов A. dracunculus.

Научная новизна. Впервые систематически исследовано содержание классов соединений в органах A. dracunculus сорт «Французский» в онтогенезе. Найден ряд новых соединений в СК-СОг-экстрактах зеленой биомассы A. dracunculus. Проведен сравнительный анализ состава СК-С02-экстрактов сортов «Французский» и «Русский» A. dracunculus. Исследована биологическая активность различных экстрактов A. dracunculus сорта «Французский».

Теоретическая и практическая значимость работы. Обширный экспериментальный материал по химическому составу органов A. dracunculus может быть использован для построения теории биохимической адаптации растений. Результаты исследований могут быть широко использованы в практической медицине.

Основные положения, выдвигаемые на защиту:

1. Специфика содержания основных групп вторичного обмена -флавоноидов, кумаринов, водорастворимых полисахаридов, пигментов, аскорбиновой кислоты в органах A. dracunculus закономерно изменяется в онтогенезе.

2. Два сорта A. dracunculus, близкие по морфологическим признакам, существенно отличаются по химическому составу продуктов вторичного обмена. Химический анализ СК-С02-экстрактов сортов «Французский» и «Русский» A. dracunculus, проведенный методом газожидкостной хроматографии выявил новые соединения, ранее не обнаруженные в А. dracunculus. СК-С02-экстракты сорта «Русский» имеют более широкий спектр соединений по сравнению сортом «Французский».

3. Спиртовые экстракты обладают бактериостатической, антигипоксической, спазмолитической, анальгетической, диуретической, желчегонной и гепатопротекторной активностью, сравнимой и в ряде случаев превосходящей активность стандартных, рекомендованных Минздравом, средств.

Апробация работы. Основные положения, материалы и фрагменты диссертационной работы доложены: на 57-ой региональной конференции по фармации, фармакологии и подготовке кадров (Пятигорск, 2002), Всероссийской научно-практической конференции (Махачкала, 2002), VI-м симпозиуме по фенольным соединениям (Москва, 2004), 57-й научной конференции молодых ученых и студентов (Махачкала, 2005), IV-ой Международной конференции «Регуляция роста, развития и продуктивности растений» (Минск, 2005), 10-ом Междунар. съезде «Фитофарм 2006» (Спб, 2006).

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Агларова, Айшат Мамайхановна

ВЫВОДЫ

1. Сравнительный анализ химического состава близких по морфологическим признакам сортов A. dracunculus - «Русского» и «Французского» - показал существенное различие их по химическому составу продуктов вторичного обмена.

2. Изучение динамики микро- (Zn, Ni, Fe, Си) и макроэлементов (Mg, Са, Na, К) в онтогенезе A. dracunculus L. сорт «Французский» показало накопление железа, меди в растениях от фазы стрелкования к фазе плодоношения. Содержание Mg и Са увеличивается в фазу бутонизации и цветения, но затем резко снижается в фазу плодоношения. Исследование содержания флавоноидов, каротиноидов, водорастворимых полисахаридов, аскорбата в стеблях, листьях и плодах A. dracunculus сорт «Французский» показало, что основная масса полисахаридов и аскорбата содержится в листьях и плодах. Флавоноиды сосредоточены в основном в листьях (59,3% от общей массы флавоноидов).

3. В динамике онтогенеза A. dracunculus сорт «Французский» максимальное количество кумаринов, эфирного масла, органических кислот приходится на фазу цветения, что свидетельствует о важной роли этих соединений в генеративный период.

4. В СК-С02-экстрактах A.dracunculus сорт «Французский» обнаружено 24 соединения. Из них ряд соединений, таких как, сквален, гексановая кислота, тетрадекановая кислота, н-гексадекановая кислота, азарон - обнаружены впервые. В экстрактах сорта «Русский» обнаружено 39 соединений. При этом, содержание эстрагола в 100 раз меньше, чем в экстракте сорта «Французский, а содержание изоэлемецина, напротив, в 10 больше.

5. Эфирное масло A.dracunculus сорт «Русский» содержит 33 соединения, а СК-С02-экстракты - 40 соединений, при этом 6 соединений условно «легкой» фракции, содержащиеся в эфирном масле отсутствуют в

СК-СОг-экстракте, а 13 соединений, в основном условно «тяжелой» фракции, содержащиеся в СК-СОг-экстракте, отсутствуют в эфирном масле.

6. Экстракты травы A.dracunculus сорт «Французский» обладают бактериостатическим действием, оказывают дозазависимый противогипоксический, противовоспалительный, гепатопротекторный, диуретический, спазмолитический, гастропротекторный эффекты.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Вторичный обмен у растений характеризуется десятками тысяч различных соединений. Химическое разнообразие продуктов вторичного обмена обусловлено чрезвычайной вариабельностью экологических связей организма. Среди важнейших экологических факторов - взаимодействие растения с другими растениями и с животными, абиотические факторы -температура, освещенность, состав атмосферы [Федяев и др., 2001; Kutchan, 2001; Saadali, 2001; Ryu, 2004]. Реакция растения на изменения величин абиотических факторов и на взаимодействие с животными большей частью состоит в синтезе, накоплении и эмиссии специфических веществ вторичного обмена [Носов, 1994]. Комплект этих веществ является результатом интеграции множественных влияний на данное растение и состав этого комплекта может служить паспортной характеристикой данного вида растений или хеморасы данного растения.

Нами исследован спектр соединений, содержащихся в СК-С02-экстрактах двух сортов полыни A.dracunculus - «Французского» и «Русского». Эти два сорта весьма близки по морфологическим признакам, но по вкусу и аромату значительно отличаются друг от друга. Это отличие коррелирует с обнаруженным нами различием состава СК-С02-экстрактов этих двух сортов. СК-СОг-экстракты сорта «Русский» существенно богаче по спектру содержащихся в них веществ по сравнению с сортом «Французский». В СК-С02 экстракте сорта «Русский» содержатся (3 -фелландрен, (3 -пинен, терпинолен, бициклогепт-2-ен, у -терпинен, цимол, 4-терпинеол, у - элемен, нерилацетат, этил-гексадеканоат, 3,4-диметилбензальдегид, этилолеат, пентадекановая кислота, гексадеценовая кислота, 9,12,15 - октадекатриеновая к-та, 9-октадеценовая кислота, отсутствующие в экстрактах сорта «Французский».

За синтезом каждого нового соединения стоят соответствующие ферменты, катализирующие синтез этих веществ. Особенностью генома растений, видимо, является его толерантность к параллельному переносу генов, кодирующих синтез ферментов вторичного обмена. В частности это относится к синтетазам [Lucker е.а., 2004]. Биосинтез терпеноидов организован так, что интродукция монотерпен-синтетаз не нарушает общий план биосинтеза терпенов, но увеличивает число конечных продуктов этих метаболических путей. В связи с полученными нами данными, большой теоретический и практический интерес представляет сравнительное исследование активности монотерпен-синтетаз в двух сортах полыни. Поскольку сорта «Русский» и «Французский» морфологически различаются незначительно, можно предположить, что адаптация посредством модификации формы - более трудный эволюционный путь по сравнению с биохимической адаптацией, не затрагивающей морфологические признаки.

Монотерпены играют важную роль в защитных механизмах растений [Pare, Tumlinson, 1999; Dong, Braun, 2001; Dudareva, 2004; Couingennene, Turlings, 2002]. В особенности это касается защиты от растительноядных насекомых. Набор соединений, синтезируемых и секретируемых в ответ на поранение, вызванное животным, зависит от вида животного. Поэтому изменение состава синтезируемых соединений вторичного обмена указывает на изменение экологических связей и возможное изменение экологической ниши.

Обращает на себя внимание тот факт, что в СК-С02-экстрактах сорта «Русский» содержание эстрагола (метилхавикола) весьма незначительно, а в сорте «Французский» - в 100 раз больше и составляет около 30% от общей суммы соединений. Эстрагол - это производное бензола с молекулярной массой 148Да и, согласно литературным данным, его содержание в эфирном масле полыни эстрагон может достигать 60-75% от общей массы [Ханина, 1999]. В экстрактах сорта «Русский», однако, оно весьма незначительно. Напротив, содержание азарона+изоэлемецина в сорте «Русский» составляет 28%, а в сорте «Французский» лишь 9%. Можно выделить и другие существенные различия в составе СК-С02-экстрактов исследованных нами сортов. По содержанию основного компонента в эфирном масле некоторые исследователи предлагают выделить две хеморасы A.dracunculus: «метилхавиколовую» (горная популяция) и «метилэвгенольную» (равнинная популяция) [Бухарин и др., 1989; Кирьянова, Снегирев, 1936; Ханина, 1999; Шохина и др., 1999; Vienne е.а., 1989]. По содержанию этих веществ можно предположить, что сорт «Русский» отобран из равнинной популяции, а сорт «Французский» - из горной. Так можно объяснить более широкий и разнообразный спектр соединений, найденный в экстракте сорта «Русский», что, по-видимому, связано с большей плотностью и разнообразием насекомых в экосистеме равнины по сравнению с горной экосистемой.

Исследование содержания металлов в биомассе сорта «Французский» показало, что A.dracunculus может накапливать значительные количества таких металлов, как цинк, железо, никель и медь. Известно, что накопление металлов в растениях опосредовано соответствующими транспортными механизмами, локализованными в корнях [Bai е.а., 2006]. Железо и медь накапливаются в растении от стадии стрелкования к стадии плодоношения. Динамика содержания магния и кальция несколько иная: происходит существенное увеличение содержания этих металлов в стадии бутонизации с последующим снижением в стадии плодоношения. Дальнейшее изучение динамики накопления различных металлов в структурах полыни, возможно, позволит использовать это растение в ремедиации почв [Martin-Aragon е.а., 1998].

Таким образом, проведенное нами исследование показало существенное различие химического состава продуктов вторичного обмена сортов «Русский» и «Французский» A.dracunculus, которые весьма близки по морфологическим характеристикам, что может свидетельствовать о биохимической адаптации этого растения к новым экологическим условиям.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Агларова, Айшат Мамайхановна, Махачкала

1. Абилов Ж.Е., Турумбетов М.У., Итжанова Х.И., Водяник А.Р., Лепешков А.Г., Адекенов С.М. Использование сжиженного диоксида углерода для извлечения биологически сесквитерпеновых лактонов// Биотехнология. Теория и практика, 2002. №3. -С. 137-140.

2. Абу Али Ибн Сина (Авиценна). Канон врачебной науки (в 5 кн.). -Ташкент, 1956, кн.2. -827 с.

3. Авдеева Е.В. Изучение некоторых фенольных и терпеноидных соединений, используемых в стандартизации лекарственных растений. Автореферат дисс.канд.фармац.наук (15.00.02)/ Самарский гос.мед.ун-т и НПО "Вилар".-М., 1997. 23с.

4. Авцын А.П., Жаворонков А.А., Риш М.А., Строчкова JI.C. Микроэлементозы человека: этиология, классификация, органопатология. -М., Медицина, 1991.-496 с.

5. Агларова A.M., Зилфикаров И.Н. Исследование фармакологических свойств водных и водно-спиртовых извлечений из травы полыни эстрагон/ Фармация, 2006. -№4. -С.37-39.

6. Агларова A.M., Алиева З.М., Юсуфов А.Г. Культура in vitro и фитохимический анализ полыни эстрагон// Известия высших учебных заведений. Северо-Кавказский регион. Естественные науки, 2005. №4. -С.44-46

7. Агларова A.M., Раджабов Т.К. Биологическая активность фенольных соединений травы полыни эстрагон Artemisia dracunculus L.//

8. Материалы VI симпозиума по фенольным соединениям, Москва, 28-30 апреля 2004. -М., 2004. -С.34.

9. Адлер Ю.П., Маркова Е.В., Грановский Ю.В. Планирование эксперимента при поиске оптимальных условий. М.:Наука, 1976. -279 с.

10. Адо А.Д., Адо М.А., Бочков Н.П. Патологическая физиология. Учебник для мед. вузов. Томск: Изд-во Томск, ун-та: Компания «Томтерра», 1994.-465 с.

11. Алиев Р.К., Дамиров И.А., Исмаилова Н.А. Лечебное значение некоторых плодовых и овощных растений из флоры Азербайджанской СССР// Материалы выездной науч.-практ.конф. Азерб. Науч. Об-ва в г. Кировабаде. -Баку, 1967. -С.84-94.

12. Альперн Д.Е. Воспаление. Вопросы патогенеза. М.:Медгиз, 1959. -286 с.

13. Амельченко В.П., Серых Е.А., Ханина М.А. Интродукционное изучение полыней Сибири/ Теоретические и практические аспекты изучения лекарственных растений (Материалы посвящаются памяти профессора JI.H. Березнеговской). -Томск, 1996. -С. 14-16.

14. Арыкова Т.М. Содержание флавоноидов в некоторых сибирских видах рода Artemisia L. полынь./ Теоретические и практические аспекты изучения лекарственных растений (Материалы посвящаются памяти профессора JI.H. Березнеговской). -Томск, 1996. -С. 19-21.

15. Базарон Э.Г., Асеева Т.А. «Вайдурья онбо» - трактат индотибетской медицины. -Новосибирск: Наука, Сибирское отделение, 1985. -160с.

16. Балынина Е.С., Березовская И.В. Сравнительная оценка методов ориентировочной оценки крыс в токсикологическом эксперименте //Фармакология и токсикология, 1976. №5. - С. 636-638.

17. Бандюкова В.А. Применение цветных реакций для обнаружения флавоноидов путем хроматографирования на бумаге// Раст.ресурсы. -1965. Т.1. №4. -С.591-597.

18. Барабой В.А. Биологическое действие растительных фенольных соединений. -Киев, 1976. 260 с.

19. Барнаулов О.Д. Фитотерапия простудных заболеваний (руководство)/ СПБ.Издательство «Лань», 1998. -С.146.

20. Башкиров А.А. К вопросу о биологической роли физиологической гипоксии// Материалы Всероссийской конференции 2-4 ноября 1997 г. "Гипоксия: механизмы, адаптация, коррекция"- М.: БЭБиМ, 1997. -С. 11.

21. Безрук П.И. Фармакологические данные о некоторых а- и у-пироновых веществах желчегонного и сердечно-сосудистого действия: Автореф.дис. докт.мед.наук. -Харьков, 1970. -32с.

22. Беленький М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. Л.: Медгиз, 1963. - 152 с.

23. Белоногова В.Д. Стандартизация сырья полыни эстрагон и препаратов из лекарственного растительного сырья. -Диссертация на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук. -Пермь, 1999. -199 с.

24. Березнеговская Т.П. Хемотаксономия полыней Южной Сибири: Автореф.дис. .д-ра биолог.наук. -Новосибирск, 1978. -32 с.

25. Березовская Т.П. Биологически активные вещества сибирских видов полыни. /Труды 1-го Всесоюзного съезда фармацевтов 14-19 сентября 1967 г. Пятигорск. -М., 1970. -С.273-279.

26. Березовская Т.П., Гачик В.А. Микроскопические особенности некоторых сибирских видов (Bess) Rydberg// Известия Томскогоотделения Всесоюзного Ботанического общества. -1973. -Т.VI. -С. 147164.

27. Бесполова З.Г. Цветение и плодоношение некоторых полыней Центрального Казахстана. Ботан. журнал, т.49, №2, 1964. -С.223-229.

28. Биологически активные вещества лекарственных растений /Георгиевский В.П., Комиссаренко Н.Ф., Дмитрук С.Е. Новосибирск: Наука. Сиб. Отд-ние, 1990. -333с.

29. Битюцкий Н.П. Необходимые микроэлементы растений. Учебник. -Спб.: Издательство ДЕАН, 2005. -256с.

30. Блинова К.Ф. Тибетская медицина и ее лекарственные средства// Этнографические аспекты изучения народной медицины /Тез.Всесоюзн.науч.конф., 10-12 марта 1975 г., Л.:Наука, 1975. -С.35.

31. Бойко Т.Е., Ивашов А. В. Возрастные особенности экскреции веществ вторичного метаболизма листьев дуба пушистого гусеницами зеленой дубовой листовертки// Ученые записки Таврического национальногоуниверситета, том 14 (53), №2. -С55-58.

32. Борисов Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология: Учебник. М.: ООО «Медицинское информационное агенство», 2005. -736с.

33. Бунятян Н.Д., Герасимова О.А., Сахаров Т.С., Яковлева Л.В. Природные антиоксиданты как гепатопротекторы// Эксперим. и клинич. Фармакол., 1999. №2. -С.64-67.

34. Бухарин П.Д., Воронина Е.П., Дмитриев Л.Б. Некоторые итоги интродукции эстрагона в главном ботаническом саду АН СССР //Бюл.гл.ботан.сада. -1989. -Вып. 153. -С.3-9.

35. Василенко В. X., Гребенев А. Л. Болезни желудка и двенадцатиперстной кишки. М., 1981.-342 с.

36. Войткевич С.А. Эфирные масла для парфюмерии и ароматерапии. -М.: Пищевая промышленность, 1999. -С.212-213.

37. Волкова О.В., Елецкий Ю.К. Основы гистологии с гистологической техникой. М.: Медицина, 1971. - 269 с.

38. Воронина Е.П., Горбунов Ю.Н., Горбунова Е.О. Новые ароматические растения для Нечерноземья. -М.:Наука, 2001. -С. 110-117.

39. Гаврилюк И.И. Тонкослойная хроматография некоторых растительных объектов. -В кн.: Прикладная хроматография. М.:Наука, 1984. -С.294-302.

40. Гагарин П.К. Сезонная динамика минерального состава листьев и стеблей полыней в зависимости от экологических условий в сухих степях Центрального Казахстана.// Ботан. журн., т.51, №7, 1966. -С.962-972.

41. Георгиеский В.П., Комиссаренко Н.Ф., Дмитрук С.Е. Биологические активные вещества лекарственных растений// Новосибирск: Наука. Сиб. Отд-ние, 1990. -333 с.

42. Глушков Р.Г., Либерман С.С., Яхонтов Л.Н. Нестероидные противовоспалительные лекарственные препараты//Журн. Всесоюзн. химическ. об-ва им Д.И. Менделеева. 1970. Т.15. №2. -С. 185-192.

43. Головко Т.К. Дыхание растений (физиологические аспекты). -Спб.:Наука, 1999. -204с.

44. Гончарова Т.А. Энциклопедия лекарственных растений. Лечение травами. Том I. -М.: Издательский Дом МСП, 1997. -С.517.

45. Горяев М.И., Базалицкая B.C., Поляков П.П. Химический состав полыней. Алма-Ата, 1962.-С.55-56,126-127.

46. Государственная фармакопея СССР. -10 изд. -М.Медицина, 1968. -С.876-877.

47. Государственная фармакопея СССР: Вып.1. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье/ МЗ СССР. -11 изд., доп. -М.Медицина, 1987.-336 с.

48. Государственная фармакопея СССР: Вып.2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье /МЗ СССР. -11-е изд., доп. -М.Медицина, 1989. -400 с.

49. Гроссгейм А. А. Растительные богатства Кавказа. -М.:Издания Московского общества испытателей природы, 1952. -123 с.

50. Грэхам-Смит Д.Г., Аронсон Дж.К., Оксфордский справочник по клинической фармакологии и фармакотерапии: Пер. с англ.-М.: Медицина.- 2000.-744с.

51. Губанов И. А., Крылова И. Л., Тихонова В. Л. Дикорастущие полезные растения СССР. М., 1976. -360 с.

52. Демидовская Л.Ф., Егеубаева Р.А., Аверина В.Ю. Полыни Казахстана как сырье для получения эфирных масел и их ценных компонентов. Труды Ин-та ботаники АН КазССР, 1976, т.35. -С.61-73.

53. Дикорастущие полезные растения России./ Справочник.// Под ред. Буданцева А.Л., Лесиовской Е.Е. Спб.: Изд-во СПХФА, 2001. -663с.

54. Дмитриев А.В. Оценка спектра активности болеутоляющих средств с помощью многофакторного регрессионного анализа// Нейрофармакологическая регуляция болевой чувствительности. JL, 1984. С.34-56.

55. Дмитриев Л.Б., Воронина Е.П., Замуренко В.А., Клюев Н.А., Бухарин П.Д., Гранберг И.И. Состав эфирного масла эстрагон (Artemisia dracunculus L.)/Известия ТСХА, выпуск 3, 1991. -С.186-187.

56. Долгова А.А., Ладыгина Е.Я. Руководство к практическим занятиям по фармакогнозии.-М. Медицина, 1977.-275 с.

57. Дорохина Л.Н. Жизненные формы и эволюционные отношения в подроде Dracunculus Bess рода Artemisia L.// Бюл.Моск. об-ва испытателей природы, т.74. Отд. биол., вып.2, 1969. -С.77-89.

58. Дюмаев К.М., Воронина Т.А., Смирнов Л.Д. Антиоксиданты в профилактике и терапии патологий ЦНС М.:Изд-во института биомедиц.химии РАМН, 1995. -С. 8-19.

59. Егоров В.А., Супильникова А.В., Жданов И.П. Настой и настойка полыни эстрагон новые антимикробные лекарственные средства// IX Российский национальный конгресс «Человек и лекарство»: Тезисы докладов. -Москва, 2002. -С.612.

60. Завражнов В.И., Китаева Р.И., Хмелев К.Ф. Лекарственные растения: Лечебное и профилактическое использование. Воронеж: Изд-во ВГУ, 1993.-С.68.

61. Зайцев А.А. Фармакологический анализ опиоид- и адренергических механизмов регуляции гемодинамических ноцицептивных реакций// Нейрофармакологическая регуляция болевой чувствительности. Л., 1984.-С. 53-74.

62. Западнюк И.П., Западнюк В.И., ЗахарияЕ.А., ЗападнюкБ.В. Лабораторные животные. Разведение, содержание, использование в эксперименте. Киев: Вища школа, 1983. - 383 с.

63. Запрометов М.Н. Основы биохимии фенольных соединений. -М.:Высшая шк, 1974 -214 с.

64. Землинский С.Е. Лекарственные растения СССР. -М.: Государственное издательство медицинской литературы «Медгиз», -1958. -С.556-557.

65. Зилфикаров И.Н., Агларова A.M. Газохроматографический анализ и сравнительная оценка эфирного масла и С02-экстрактов полыни эстрагон

66. Иванов Л.В., Хаджай Я.И. Кошелева Л.П., Чуева И.Н., Шеремет И.П., Васеловский В.Ю. Сродство к биомембранам и некоторые особенности фармакокинетики соединений флавоноидной природы/ Хим.фарм.журнал.-Т.26. №2, 1992. -С.20-23.

67. Казанцев А.П. Применение биофлавоноидов в клинике. В кн.: Фенольные соединения и их биологические функции. М., «Наука», 1968. -С.331-338.

68. Калинкина Г.И. и др. Перспективы использования в медицинской практике эфирно-масличных растений флоры Сибири /Г.И. Калинкина,

69. Т.П.Березовская, С.Е. Дмитрук, Е.Н.Сальникова// Химия растительного сырья. 2000.-№3.-С.5-12.

70. Касьянов Г.И., Пехов А.В., Таран А.А. Натуральные пищевые ароматизаторы С02-экстракты. М., 1978. -176 с.

71. Кириллова Е.С., Хамаев Б.И. Фитотерапия заболеваний мочевыводящего тракта// Практическая фитотерапия.- 1999.- № 3. -С.27-28.

72. Кириллова Е.С., ХамаевБ.И., Леднева И.П.,. Ракшаина, Е.М. Баханова. Спазмолитическая и антибактериальная активность фитопрепаратов при уролитиазе// Фитотерапия и фитореабилитация в пожилом ворасте.-М.-1999.-С.34.

73. Кирхнер Ю. Тонкослойная хроматография /Под ред. Проф.В.Г.Березкина. Т. 1. -М. Мир, 1981. -606с.

74. Кирхнер Ю. Тонкослойная хроматография /Под ред. Проф.В.Г.Березкина. Т.2. -М.:Мир, 1981. -516с.

75. Кирьянова Н.П., Снегирев Д.П. О составе эфирного масла полыни эстрагон Artemisia dracunculus L.// Труды Гос.Никитского Ботан. сада им. Молотова. Никитский Сад, 1936,Т.20, вып.1. -С.29-38.

76. Киселева Л.А. Исследования антиоксидантной активности витаминов и аминокислот: Автореф.дис.на соиск.учен.степени кандидата биол.наук. -М., 1986. -24 с.

77. Коновалов Д.А. Ароматические полиацетиленовые соединения сем. Asteraceae и их хемотаксономическое значение.// Растительные ресурсы. -Т.32. Выпуск 4,1996. С.84-97.

78. Коновалов Д.А. Полиацетиленовые соединения рода Artemisia L. и перспективы их использования в медицине// Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: Тез.докл. VI Международного Съезда. -СПб.,. 2002. -С.240.

79. Коновалова О.А., Рыбалко К.С., Шретер А.И. Кумарины видов рода Artemisia // Химия природ.соедин. -1976. -№1. -С.97.

80. Кононенко ДА. Анатомическое строение полыни эстрагон из различных местообитаний./ Известия Академии наук Киргизской ССР. №5. 1978. -С.94-97.

81. Крашенинников И.М. Некоторые формы рода Artemisia Казахстана.// Материалы комиссии экспедиционных исследований, JI.1930. Вып.26. -С.265-275.

82. Кузнецова М.А. Руководство к практическим занятиям по фармакогнозии. -3-е изд. -М.Медицина. 1986. -272 с.

83. Куликова Н.Т. Изменчивость химического состава некоторых пряных культур в Заполярье.// Бюл.ВНИИР, 1975, вып.52. -С.58-64.

84. Кунаева P.M., Мухамеджанов Б.Г. Окисление флавоноидов пероксидазой из полыни, иммобилизованной на сефарозе./ Доклады ВАСХНИЛ, М.: «Колос», 1983. №8. -С.27-29.

85. Куприянов А.Н. Что растет во дворе. Барнаул, 1998. -162с.

86. Куркин В.А., Запесочная Г.Г., Авдеева Е.В. Строение и свойства эстрагонизида нового флавоноида надземной части Artemisia dracunculus// Химия природных соединений. -1997. -№1. -С.61-65.

87. Куркин В.А., Запесочная Г.Г., Мыцык А.В., Куркина А.В., Пименов К.С., Марьина М.С. Флавоноиды надземной части Artemisia dracunculus1., культивируемый в Самарской области// Раст.ресурсы Т.32. -Вып.1-2, 1996. -С.88-92.

88. Куркина А.В., Егоров В. А. К вопросу о целесообразности использования препаратов полыни эстрагон в медицинской практике// «Экология и здоровье человека»: Труды VII Всероссийского Конгресса. -Сам ГМУ. -Самара. -2001. -С.105-106.

89. Куркина А.В., Минахметов Р.А. Хроматографическое исследование сырья и препаратов полыни эстрагон. -Тезисы докладов XXVII Самарской областной студенческой научной конференции. Самара. -2001. -С.97-98.

90. Куркина А.В., Супильников А.А, Поиск новых лекарственных препаратов в целях профилактики и лечения хирургической инфекции// Фармации и медицина. -Самара, 2001. -№7. -С.83-85.

91. Куркина А.В., Супильников А.А. Перспективы использования сырья и препаратов полыни эстрагон в медицинской практике// Актуальные проблемы современной науки: Тезисы докладов 2-ой Международной конференции молодых ученых и студентов. -Самара, 2001. -С.92.

92. Кучеров Е.В., Байков Г.К., Гуфранова И.Б. Полезные растения Южного Урала. М.: Наука, 1976. -С.209.

93. Лавренов В.К., Лавренов Г.В. Полная энциклопедия лекарственных растений. Том II. -СПб.: Издательский дом "Нева"; М.: Олма-Пресс, 1999.-С.267.

94. Лесиовская Е.Е. Антигипоксанты препараты XXI века // ФармЕхргезэ, - 1999.-ноябрь.-С. 2-11.

95. Лесиовская Е.Е. Повышение индивидуальной устойчивости организма к комплексу экстремальных воздействий с помощью новых фармакологических средств.:Автореф. дис. докт. мед. наук.-СПб, 1993.-26 с.

96. Лесиовская Е.Е., Веселова И.Б. Усовершенствованный способ оценки психофизиологического профиля животных// Уд. на рац. предложение №337 от 15.11.1989 г. Л., ЛХФИ.

97. Лесиовская Е.Е., Пастушенков Л.В. Фармакотерапия с основами фитотерапии: Учебное пособие. 2-е изд. - М.:ГЭОТАР-МЕД, 2003. -592 с.

98. Листов С.А., Петров Н.В., Арзамасцев А.П. О содержании тяжелых металлов в лекарственном растительном сырье// Фармация. 1990. -№2. -С.19-25.

99. Лоулесс Д. Энциклопедия ароматических масел/ Пер. с англ. Е.Незлобиной. -М.:КРОН-ПРЕСС, 2000. -С.210-212.

100. Лукнер М. Вторичный метаболизм у микроорганизмов, растений и животных. -М.: Мир, 1979. -548с.

101. Лукьянова Л. Д. Биоэнергетические механизмы формирования гипоксических состояний и подходя к их фармакологической коррекции// Фармакологическая коррекция гипоксических состояний.-М., 1989. - С. 11-44.

102. Лукьянова Л.Д. Механизм действия антигипоксантов. Антигипоксанты новый класс фармакологических веществ.// Итоги наук и техники

103. Серия "Фармакология и химиотерапевтических средств").- М, 1991. — Т.27. С 5-25.

104. Лукьянчук В.Д., Савченкова Л.В. Антигипоксанты: состояние и перспективы// Экспериментальная и клиническая, фармакология, 1998. -Т. 61., №4.-С 72-79.

105. Лурье А.А. Хроматографические материалы (справочник). -М.:Химия, 1978. -434с.

106. Маллабаев А.О., Саитбаева И.М., Сидякин Т.П. Изокумарин артемидиналь из Artemisia dracunculus L.// Химия природных соединений. 1971. -№3. -С.257.

107. Маллабаев А.О., Саитбаева И.М., Сидякин Г.П. Скополетин и |3-ситостерин из Artemisia dracunculus L. //Химия природных соединений. 1969. -№4. -С.320

108. Маллабаев А.О., Сидякин Г.П. Артемидинол новый изокумарин из Artemisia dracunculus L.// Химия природных соединений. - 1975. - №6. -С.811-812.

109. Машанов В.И., Покровский А.А. Пряно-ароматические растения. М: Агропромиздат, 1991.

110. Методические рекомендации по экспериментальному изучению препаратов, предлагаемых для клинического изучения в качестве антигипоксических средств/ Одобрены ФК МЗ СССР 11.04.90. Приказ №7. -М., 1990.- 18 с.

111. МЗ РФ: Фитотерапия // Карпеев А.А., Киселева Т.Л., Коршикова Ю.И. и др./ Метод.рекомендации. №2000/63, утв. 26.04.2000. -М.:НПЦ ТМГ МЗ РФ. 2000. -28 с.

112. Минатуллаев Н.А. О видовой самостоятельности и ареалах распространения некоторых полыней Кавказа// Заметки по систематике и географии растений Тбилис. ботан. ин-та, вып.25, 1965. -С.59-64.

113. Минц И.П. Этимологический словарь латинских названий лекарственных растений/ Под ред.проф. А.Ф.Гаммерман. -Л., 1962. -С.10-11.

114. Мировые ресурсы полезных растений пищевые, кормовые, технические, лекарственные и др. (справочник)/ Вульф Е.В., Малеева О.Ф. -Л.:Наука, 1969. -С.423-424.

115. Муханова Ю.И., Требухина К.А., Туленкова А.Г. Зеленые и пряные овощные культуры. -М.:Россельхозиздат, 1976. -199с.

116. Николаевский В.В., Еременко А.Е., Иванов И.К. Биологическая активность эфирных масел. -М. Медицина, 1987. -144с.

117. Новейший словарь иностранных слов и выражений. -М.:000 «Издательство ACT», Мн.:Харвест, 2002. С.301.

118. Носов A.M. Функции вторичных метаболитов растений in vivo и in vitroZ/Физиология растений, 1994, том 41. №6. -С.873-878.

119. Нуралиев Ю. Лекарственные растения. Н.Новгород: СП "ИКПА", 1991. -С.138.

120. Онучак Л.А., Куркин В.А., Минахметов Р.А., Куркина А.В. Высокоэффективная жидкостная хроматография в анализе экстрактов Artemisia dracunculus./ Химия природ, соед., 2000. -№2. -С. 115-117.

121. Осетров В.Д. Альтернативная фитотерапия. Киев: Наукова думка, 1993.-223с.

122. Отечественные пряности в консервировании. -Киев, 1986. -104 с.

123. Парфенов Э.А., Смирнов Л.Д. Фармакологический потенциал антиоксидантов на основе кумаринов (обзор)// Химико-фармац. Журнал. -М.Медицина, 1988. -Т.22. -№12. -С.1438-1448.

124. Пасешниченко В.А. Растения продуценты биологически активных веществ// СОЖ, 2001, № 8, -С. 13-19.

125. Пастушенков Л.В. Основные методы оценки протекторного действия антигипоксантов в эксперименте и особенности их влияния на обменные процессы в клетке// Фармакологическая коррекция гипоксических состояний. М., 1989. - С. 118-124.

126. Пастушенков Л.В., Лесиовская Е.Е. Растения-антигипоксанты (фитотерапия)/ С-Пб:Хим-фарм. Институт.- 1991.-96 с.

127. Пастушенков Л.В., Лесиовская Е.Е. Фармакотерапия с основами фитотерапии.В двух частях. -СПб.:ЭРВИ.- 1994.- Часть I -160с. Часть II. -248с.

128. Пастушенков Л.В., Лесиовская Е.Е., Фролова Н.Ю. и др. Фитопрофилактика и фитотерапия гипоксических состояний// Фиторемедиум. 2001. №1. -С.

129. Пастушенков Л.В.; Пастушенков А. Л., Пастушенков В. Л. Лекарственные растения: использование в народной медицине и быту. лениздат, 1990. - 384 с.

130. Паткина Н.А., Звартау Э.Э. Поведение крыс в «открытом поле» при хроническом введении морфина//Фармакол. токсикол., 1978. №5. -С. 537-541.

131. Правила сбора и сушки лекарственных растений (сборник инструкций). -М. Медицина, 1985. -328 с.

132. Практическая газовая и жидкостная хроматография: Учеб.пособие/ Б.В. Столяров, И.М.Савинов, А.Г.Витенберг и др. Спб.: Изд-во С.-Петербург.университета, 1998. -612 с.

133. Пряно-ароматические растения СССР и их использование в пищевой промышленности / Ред.М.М.Ильин, С.Н.Суржин. -М., 1963. -431 с.

134. Радбиль О. С. Фармакологические основы лечения болезней органов пищеварениям., 1976. -251с.

135. Растения для нас. Справочное издание/ К.Ф.Блинова, В.В.Вандышев, М.Н.Комарова и др.; Под ред. Г.П.Яковлева и К.Б.Блиновой. -СПб.: Учебная книга, 1996. -652 с.

136. Растения тибетской медицины: Опыт фармакогностического исследования/ Баторова С.М., Яковлев Г.П., Николаев С.М., Самбуева З.Г. Новосибирск: Наука. Сиб. Отделение, 1989. -159 с.

137. Растительные ресурсы России и сопредельных государств: Часть I -Семейства Lycopodiaceae Ephedraceae, часть II - Дополнения к 1-7-му томам. Спб.: Мир и семья-95, 1996. -С.313-315.

138. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование; Семейство Asteraceae (Compositae). -СПб.: Наука, 1993. -С.30-73.

139. Риз И., Титтерингтои Р. Выращивание пряно-ароматических и лекарственных растений/ Пер. с англ. А.Широковой. -М.: КРОН-ПРЕСС, 2001. -С.44-45.

140. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ/ Под ред.В.П.Фисенко. М., 2000. -400 с.

141. Руцких И.Б. и др. Состав эфирного масла полыни тархун (Artemisia dracunculus L) сибирской флоры/ И.Б.Руцких, И.А.Ханина, Е.А.Серых, Л.М.Покровский, А.В.Ткачев// Химия растительного сырья. 2000. -№3. -С.65-76.

142. Садвакосова Г.Г. Пероксидаза и окислительный распад флавоноидовна примере кверцетина): Автореф. дисс.канд. биол. наук/ Ин-тботаники АН Казахской ССР Алма-Ата, 1981. - 25 с.

143. Садчикова Н.П. Совершенствование принципов и методов фармакопейного анализа в системе стандартизации лекарственных средств. -Автореф.дис.доктора фармац.наук. -М., 2001. -С.54.

144. Сальникова Е.Н., Нежувака А.К., Исханова М.А. Антигрибковые свойства эфирных масел рода полынь// 4-й Всесоюз. Съезд фармацевтов.-Казань, 1986.-С.437.

145. Самылина И.А., Грицаенко И.С., Горчакова Н.К. Основные направления исследований лекарственных растений на современном этапе// Современные аспекты изучения лекарственных растений: Научные труды, Т.34. -М, 1995. -С.3-6.

146. Сентемова А.В., Сентемова Е.В., Сентемов В.В. О некоторых новых находках полыней (Artemisia) на территории Удмуртии// Ботан. журн., 1972, т.57, №7. -С.825-826.

147. Середин Р. М., Соколов С.Д. Лекарственные растения и их применение. Ставрополь, 1978.-278с.

148. Сигидин Я.А., Шварц Г.Я., Арзамасцев А.П., Либерман С.С. Лекарственная терапия воспалительного процесса.- М.: Медицина, 1988.-240 с.

149. Словарь античности. Перевод с нем. -М.:Прогресс, 1989. -С.51-52.

150. Словарь иностранных слов /под ред. И.В.Лехина и проф.Ф.Н.Петрова. М.: Государственного издательство иностранных и национальных словарей, 1954.-С.244.

151. Соколова В.Е. О гипоазотемическом действии флавоноидов// Фармакология и токсикология. -Киев, 1975. Вып. 10. -С.62-66.

152. Справочник Видаль. Лекарственные препараты России. -М.:АстраФармСервис, 2001. -1614с.

153. Станков С.С. Дикорастущие полезные растения СССР. -Москва: Советская наука, 1951.-С.264-265.

154. Супильникова А.В. Качественный и количественный анализ лекарственного сырья и настойки полыни эстрагон./ Фармация, 2002. -№2. -С. 11-14.

155. Супильникова А.В. Подходы к стандартизации сырья и препаратов полыни эстрагон (Artemisia dracunculus L) Материалы VI

156. Международного съезда «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения». -Санкт-Петербург. -2002. -С.310-313.

157. Супильникова А.В. Фитохимическое и фармакологическое исследование сырья полыни эстрагон и препаратов на ее основе// Аспирантские чтения 2003 «Молодые ученые медицине»: Тез.докл. Всероссийской конференции - Самара. -2003. -С.277.

158. Супильникова А.В., Кадацкая Д.В., Дубищев А.В. Фитохимическое и фармакологическое исследование сырья и препаратов полыни эстрагон// Актуальные проблемы экологии человека: Тез. докл. VII Международного конгресса. -Самара, 2002. -С.233-235.

159. Съедобные целебные растения Кавказа. Справочник. -Ростов н/Д: Издательство Ростовского университета, 1989. -464с.

160. Тарчевский И.А. Сигнальные системы клеток растений. -М:Наука, 2002. -294с.

161. Требования к доклиническому изучению общетоксического действия новых фармакологических веществ. (Временные методические рекомендации). М.: Медицина, 1985 - С. 12.

162. Тринус Ф.П., Клебанов Б.М., ГанджаИ.М., СейфуллаР.Д. Фармакологическая регуляция воспаления. Киев: Здоровье, 1987. -144 с.

163. Тринус Ф.П., Клебанов Б.М., МохортН.А. Методы скрининга и фармакологическое изучение противовоспалительных, анальгезирующих и жаропонижающих свойств: Метод, рекоменд. -Киев: Здоровье, 1974. 24 с.

164. Турова А. Д., Гладких А. С. Биологическая активность полисахаридов-фармакол. И токсикол., 1965, Т. 28, N 4. -С. 498-504.

165. Тюкавкина Н.А., Руленко И.А., Колесник Ю.А. Дигидрокверцетин -новая антиоксидантная и биологически активная пищевая добавка// Вопросы питания, 1997.- Т. 68, № 6. С. 12-15.

166. Тюкавкина Н.А., Руленко И.А., Колесник Ю.А. Природные флавоноиды как пищевые антиоксиданты и биологически активные добавки// Вопросы питания. 1996. №2. -С.33-38.

167. Тюкавкина Н.А., Руленко И.А., Колесник Ю.А. Природные флавоноиды как пищевые антиоксиданты и биологически активные добавки// Вопросы питания, 1996. № 2. - С. 33-38.

168. Федяев В.В. Рахманкулова З.Ф., Подашевка О.А., Усманов И.Ю. Формирование соотношений альтернативных путей дыхания как реализация типов адаптивных стратегий// Вестник Башкирского университета, 2001. №2 (I). -С.79-82.

169. Физиология растений: Учебник для студ.вузов / Н.Д.Алехина, Ю.В.Балнокин, В.Ф.Гавриленко и др.; Под ред. И.П.Ермакова. -М.:Издательский центр «Академия», 2005. -640 с.

170. Фитоалексины / Под ред. Дж.Лейли, Дж.В.Мансфильда. -Киев: Наукова Думка, 1985. -45с.

171. Фитотерапия с основами клинической фармакологии/ Под ред. В.Г.Кукеса. -М.:Медицина, 1999. -192 с.

172. Флавоноиды надземной части Artemisia dracunculus L., культивируемой в Самарской области/ Куркин В.А., Запесочная Г.Г., Мыцык А.В. и др // Раст.ресурсы. Т.32. Вып. 1-2, 1996. -С.88-92.

173. Флора СССР/ Под ред. Комарова. -М.: Изд-во АН СССР, 1961. С.525-533.

174. Фруентов Н.К. Лекарственные растения Дальнего Востока. Хабаровск, кн.Изд, 1972. -С.317-319.

175. Хаджай Я. И. Фармакологическое исследование флавоноидов, фурохромонов и кумаринов: Автореф. дис. . докт.мед.наук. -Харьков, 1969.-24 с.

176. Хайдав Ц., Меньшикова Т.А. Лекарственные растения в монгольской медицине. Улан-Батор, 1978. -192 с.

177. Ханина М.А. Полыни Сибири и Дальнего Востока (фармакогностические исследования и перспективы использования в медицине): Автореф. дис. д-ра фармац.наук (15.00.02) /Сибирский гос.мед.ун-т.-Пермь, 1999. -46с.

178. Ханина М.А. Полыни Сибири и Дальнего Востока (фармакогностическое исследование и перспективы использования в медицине). Диссертация на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук. -Томск, 1999. -335 с.

179. Харборн Д. Введение в экологическую биохимию. -М.: Мир, 1985. -312с.

180. Харкевич Д.А. Фармакология: Учебник.-6-е изд. Перераб. и Доп,-М. :ГЭОТАР-Мед.- 2001.-664с.

181. Чернух A.M. Воспаление. М.: Медицина, 1979. - 448 с.

182. Чумбалов Т.К., Мухамамедьярова М.М. Флавоноиды Artemisia dracunculus L. // Химия природ.соедин. -1970. -№5. -С.629.

183. Шамсудинов Ш.Н. Физиологическая активность травы полыни эстрагон при некоторых экспериментальных условиях: Автореф.дис.канд.биол.наук. -Душанбе, 1994. -21с.

184. Энциклопедический словарь лекарственных растений и продуктов животного происхождения: Учебное пособие/ Под ред. Г.П.Яковлева и К.Ф.Блиновой. -Спб.: Специальная литература, 1999. -С.231.

185. Эстрагон свежий. РСТ ГССР 85-73. Технические условия. -3 с.

186. Эстрагон свежий. РСТ РСФСР 667-82. Технические условия. -3 с.

187. Юсуфов А.Г. Лекции по эволюционной физиологии растений: Учеб.пособие для студ.вузов по спец. «Биология». 2-е изд., перераб. и доп. -М: Высш.шк., 1996. -225 с.

188. Aliev A.M., Stepanov G.Y., The Visual Investigation of Solubility of Biological Active Substances// proc. 9th Meeting on Supercritical Fluids, Trieste, Italy, 13-16 June, 2004,- p.35-37.

189. Bai C., Relly C., Wood B. Nickel deficiency disrupts metabolism of ureids, amins acids, and organic acids of young pecan foliage/ Plant Physiology. -2006. -V140. -p.433-443.

190. Balza F., Towers G.H.W. Dihydroflavonols of Artemisia dracunculus L. II Phytochemistry. -1984.-Vol.23, No. 10. -P.2333-2337.

191. Changes in the content and composition of the volatile oil// Pharmazie. -1972, May; 27(5).-P.324-331.

192. Chladek Y. Content of vitamin С and (3-carotine in cultivated aromatic and spice plants// Bull. Vysk. Ust. Zelin., Olomouc. -1970-71, No 14-15. -P.61-71.

193. Couingennene S., Turlings T. The effects of abiotic factors on induced volatile emissions in Ccorn Plants/ Plant Physiol. -2002. -V.129. -p. 12971307.

194. Crete P. Brecis de botanic. Т. II, 2-е edition. -Nasson, 1967. -P.399,403,409.

195. Di Vincenzi M., Silano J., Maialetti S., Scazzocchio V. Constituents of aromatic plants: II Estragole Jn Process Citation.// Fitoterapia; 2000, Dec; 71 (6). -P. 725-729.

196. Dong X., Braun E. Grotewold Functional Conservation of Plant secondary Metabolic enzymes revealed by Complementation of Arabidopsis flavonoid Mutants with Maize Genes/ Plant Physiol. -2001. -V.127.-p.46-57.

197. Dudareva N., Pichersky E., Gershenzon J. Biochemistry of Plant Volatiles /Plant Physiology. -2004. -V. -pp. 1893-1903.

198. Gabor M., Szent-Gyorgyl A. The Anti-inflammotory Action of Flavonoids -Budapest, 1972.-318 p.

199. Gerard D. Larousse des plantes qui querisent. Librairie Laraesse. -1974. -P.118-119.

200. Gianfagna Т., Carter C. and Sacalis J. Temperature and Photoperiod Influence Trichome Density and Sesquiterpene Content of Lycopersiocon hirsutum f. hirsutum/ Plant Physsiology. -1992. -V.100. -pp.1403-1405.1 3

201. Gleixner G., Danier H., Werner R., Schmidt H. Correlations between the С Content of primary and Secondary Plant Products in different cell Compartments and that in Decomposing Basidiomycetes/ Plant Physiol. -1993. -V.102. -p.1287-1290.

202. Greger H. Aromatic acetylens and dehydrofalcarinone derivatives within the Artemisia dracunculus group// Phitochemistri. -1979. -Vol.18, No.8. -P.1319-1322.

203. Greger H., Bohlman F. 8-Hydroxycapillarin ein neues Isocumarin aus Artemisia dracunculus L.// Phytochemistry. -1979. - Vol. 18, No. 7. - P. 1244

204. Greger H., Bohlman F., Zdero C. Neue isocumarine aus Artemisia dracunculus L.// Phytochemistry. -1977. -Vol.16, No.6. -P.795-796.

205. Hoffmann В., Herrman K. Flavonolglycoside des Beifuss (Artemisia vulgaris L.), Estragon (Artemisia dracunculus L.) und Vermut (Artemisia absinthium L.)Z. Lebensmitteluntersuch. und Forsh. -1985. Bd.174, No.2. -S.211-215.

206. Valnet J. Aromatherapie Traitement des maladies par less essences des plantes. Paris: Malone S. a. eduteur. -1984. -P.190-191.

207. Kutchan T. Ecological Arsenal and Developmental Dispatcher. The paradigm of Secondary Metabolism. -2001. V.125. -p.58-60.

208. Levinsohn E., Gijzen M., Savage Т., Croteaur. Defense Mechanisms of Conifers// Plant Physiol. -1991. -V.96. -p. 38-43.

209. Linares E, Bye RA Jr. A study of four medicinal plant complexes of Mexico and adjacent United States.// J. Ethnophrmacol 1987, Mar-Apr; - 19 (2). -P. 153-183.

210. Luo J., Qato M.K., Juenthner T.M. Hydrolysis of the 2', 3' dllilic epoxides of allylbenzene, estragole, eugenol, and safrole by both microsomal andcytosolic epoxide hydrolases// Drug Metab Dispos, 1992 May-Jun, 20(3). P.440-445.

211. Manitto P., Monti D., Speranza G. Evidence for an NIH shift as the origin of the apparently anomalous distribution of deuterium in estragol from Artemisia dracunculus// J Nat Prod. (Lloydia). -2000. -Vol.63, No.5. -P.713-715.

212. Martin-Aragon S., Benedi J.M., Villar A.M. Effects of the antioxidant (6,7 -dihydroxycoumarin) esculetin on the Glutation system and lipid peroxidation in mice.// Gerontology, 1998. 44(1). -P.21-25.

213. Miguez M.P., Annundi I. Hepatoprotective mechanism of silimaryn: no evidance for volvement of cythochrome P-450 2E 1// Chem. Biol. Ineract. 1994, Vol. 91. № 1. -P.51- 63.

214. Mothes K. Historical introduction// Encyc.Plant Physiol. New. Ser. V.8 Secondary Plant Product/ Eds Bell E.A., Charliwood B.V. Berlin; Hedelberg; N.J.:Springer Verlag, 1980. -P.7.

215. Johannsen M, Brunner G.Supercritical Fluid Chromatography as Successful Tool in Chemical and Pharmaceutical industry// Proc. 6th International Symposium on Supercritical Fluids. 28-30 April 2003, Versailles, France

216. Pare P., Tumlinson. Plant volatiles as a defense against insect Herbivores Plant Physiol. -1999. -V. 121. -p.325-331.

217. Rainsford K.O., Chang Y.Y., Lewis A.Y., AlanR.L. Modern methods in pharmacology in pharmacological methods in the control of Inflammation // Inc. N. York. 1989, Vol.5. -P. 343-362.

218. Review of literature, thin-layer and gas-chromatographic studies // Pharmazie. 1972, Apr; 27(4). -P.255-265.

219. Rousi A. Cytogenetic comparison between two kinds of cultivated tarragon {Artemisia dracunculus L.). / Hereditas, 1969, Bd.62, N 1-2, -P.193-213.

220. Ryu C., Chia-Hui Hu, Reddy M., Kloepper J. and Pare P. Bacterial in Arabidopsis/ Plant Physiology. -2004. -V.134. -pp.1017-1026.

221. Saadali В., Boriky D., Blaghen M., Vanhaelen M., Talbi M. Alkamides from Artemisia dracunculus// Phytochemistry, 2001, dec; 58(7): -P.1083-1086.

222. Schmolz E., Alborn H., Engelberth J., Tumlinson J. Nitrogen deficiency Increases Volicitin-induced volatile emission, Jasmonic acid accumulation, and ethylene sensitivity in Maize/ Plant Physiol. -2003. -V.133. -p.295-306.

223. Secondary Plant Products / Ed. E.A. Bell and B.V.Charlwood. Encyclopedia of Plant Phisiology. New Series. -V.8. -1980A Springer-Verlag.

224. Simon Mills, Kerry Bone Principles and Practice of Phytotherapy. Modern Herbal Medicine. -Edinburgh, 2000. -643 p.

225. Stafford A., Morris P., Fowler M.W. Plant Cell Biotechnology: A. Perspective// Enzyme Microb. Technol, 1986. V.8. -P.578.

226. Steinegger E., Brantschen A. Uber Coumarin aus Artemisia dracunculus L.// Sci.pharm. -1959. -Vol.27, No3. -P. 184-185.

227. Supilnikova A.V., Kurkin V.A. The flavonoids from Artemisia dracunculus L. herbs// Polyphenols Communications 2002: XXI International conference on polyphenols Marrakech-Morocco. -2002. P.515-516.

228. Swanston-Flatt S.K., Day C., Bailey C.J., Flatt P.R. Evaluation of traditional plant treatments for diabetes: studies in streptozotocin diabetic mice.// Acta Diabetol Lat 1989, Jan-Mar; 26(1). -P.51-55.

229. Swiader K., Lamer-Zarawka E. Flavonoids of rare Artemisia species and their antifungal properties// Fitoterapia. -1996. Vol.67, No.l. -P.77-78.

230. The Chemistry of flavonoid compounds /Ed. By Geissman T.A. -Oxford et Oal.: Pergamon Press, 1962. -665 p.

231. The flavonoids/ Ed. By J.B. Hardorne, T.J.Mabry, H.Mabry. -London: Chapman and Hall, 1975. -1204 p.

232. Theis N., Lerdau M. The evolution of function in plant secondary metabolites//Plant Sci. 164 (3 Suppl.):S93-S102. 2003.

233. Thieme H., Nguyen Thi Tam. Uber eine Methode zur spectrophotometrische Bestimmung von Methylchavicol in Estragonolen// Pharmazie. -1968. -Bd.23, No.6. -S.339-340.

234. Thieme H., Nguyen Thi Tam. Untersuchungen liber die Akkumulation und die Zusammensetzung der atherischen Ole von Saturreja hortensis L., Saturreja Montana L., und Artemisia absinthium L.// Pharmazie. -1972. -Bd.27, No.4. -S.255-265.

235. Thieme H., Nguyen-Thi-Tam. Studies on the accumulation and composition of the volatile oils of Satureja hortensis L., Satureja montana L. and Artemisia dracunculus L. during ontogenesis// Pharmazie. 1972, May; 27 (5). -P.324-331.

236. Ueda I., Kato I. Isdation and Identification of a Senescence promoting substance from wormwood (Artemisia absinthium L.)// Plant Physiology. -1980. -V.66. -p.246-249.

237. Vane J. R. Inhibition of prostaglandin synthesis as a mechanism of action for aspirin-like drugs//Nature, New Biology, 1971. 231(23). -P. 232-235.

238. Vienne M., Braemer R., Paris M., Couders H. Chemotaxonomic study of two cultivars of Artemisia dracunculus L.: ("French" and "Russian" Tarragon) Biochem. Syst. and Ecol. 1989. 17, N5, p.373-374.

239. Vostrowsky O., Michaelis K. Uber die Yusammensetyung des atherischen Ols aus Artemisia dracunculus L.Wahrend der Vegetationsperiode// Z. Naturforsch. -1981. -Bd. 36 C, N. 9-10. -S. 724-727.

240. Vrzalova J., Gapkova. Suitability of tarragon (Artemisia dracunculus L.) varieties to the conditions of South Moravia/ Acta Univ. agriculturae, fac. Agronomica, Brno, 1968, Roc. 16, N4. -P.633-637.

241. Yazdanparast R., Saee A. Effects of aqueous tarragon, Artemisia dracunculus, extract on lipid and coagulatory parameters in rats Biomed. Lett. 1999. 59, N233, p. 137-141.

242. Zani F., Massimo G., Benvenuti S., Bianchi A., Albasini A., Melegari M., essential oils with Bacillus subtillis rec-assay and Salmonella/microsome reversion assay// Planta Med, 1991, Jun; 57 (3). -P.237-241.

243. Zassanyi Z., Stieber G. The volatile oil of secretory system of the tarragon (Artemisia dracunculus L.) leaf. -Acta Agron. Acad. Scient. Hung., 1976, t.25, fasc. 3Л. -P.269-280.

Информация о работе

Агларова, Айшат Мамайхановна
кандидата биологических наук
Махачкала, 2006
ВАК 03.00.04

Диссертация

Сравнительный анализ метаболитов вторичного обмена Artemisia Dracunculus L. сортов "Французский" и "Русский" - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы