Сравнительное биохимическое и иммунохимическое изучение тканевых и сывороточных железосодержащих белков

Рамазанов, Магомед Валединович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Сравнительное биохимическое и иммунохимическое изучение тканевых и сывороточных железосодержащих белков
ВАК РФ 03.01.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Сравнительное биохимическое и иммунохимическое изучение тканевых и сывороточных железосодержащих белков"

На правах рукописи

005054087

Рамазанов Магомед Валединович

СРАВНИТЕЛЬНОЕ БИОХИМИЧЕСКОЕ И ИММУНОХИМИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ТКАНЕВЫХ И СЫВОРОТОЧНЫХ ЖЕЛЕЗОСОДЕРЖАЩИХ БЕЛКОВ

03.01.04 - биохимия

Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

- I НОЯ 2012

Казань 2012

005054087

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Астраханская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития (ГБОУ ВПО АГМА Минздравсоцразвития России)

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор

Никулина Дина Максимовна

Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор

Сентюрова Людмила Георгиевна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Ерлыкина Елена Ивановна, зав. кафедрой биохимии ГБОУ ВПО «Нижегородская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России;

доктор медицинских наук,профессор Мустафин Ильшат Ганиевич, зав. кафедрой биохимии ГБОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет» Минздравсоцразвития России.

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития РФ (ГБОУ ВПО «СамГМУ» Минздравсоцразвития России)

Защита состоится «тб•¡'»¡¿йЯд/** ¿012 г. в/^¿^час. на заседании диссертационного совета Д 212.081.08 ФГАОУ ВПО «Казанский (Приволжский) федеральный университет» Министерства образования и науки Российской Федерации (420008, Казань, ул. Кремлевская, д. 18. тел.: (843)233-78-67), Факс: (843) 238-76-01)

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ФГАОУ ВПО «Казанский (Приволжский) федеральный университет» (420008, Казань, ул.Кремлевская, д.35)

Автореферат разослан «/-Л 2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор биологических наук, профессор 3. И. Абрамова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Железо, уникальный химический элемент, относится к разряду так называемых «облигатных биометаллов», крайне важных для нормального функционирования практически любых живых систем. Все железо организма находится в связанном состоянии, в комплексе с важнейшими металлопротеинами, и обеспечивает функционирование более сотни белков с различными функциями (A.A. Булганов и совт., 1991; И.П. Лубянова, 2010; J.Halliday, 1984; Т. Goswami, 2002; M.W. Hentze, 2004).

К настоящему времени накоплена объемная информация о свойствах и метаболизме железа и, в меньшей степени, о железосодержащих белках в организме человека. Интересным фактом является описание их как острофазовых белков (БОФ), тем более что широко применяемые в современной медицинской практике тесты на БОФ не всегда полно отражают характер и течение воспалительного процесса из-за ограниченности перечня коммерческих наборов на БОФ и недостаточной изученности их поведения при многих нозологических формах, особенно при хирургических заболеваниях (Г.А.Трубников и др., 1975-1991; Д.М. Никулина и совт., 1980-2009;. A.A. Николаев и со-авт., 1985-2009; В.А. Алешкин и соавт.,1988; Сухарев А.Е., 1991; П.Г. Назаров, 2000; Э. А. Кчибеков Э. А., 2006-2011 и др.).

Изменение продукции лактоферрина (Лф) и ферритина (Ф), а также обмена железа как реакции организма на острые и хронические воспалительные заболевания является одним из ключевых регуляторов защитных функций организма и медиаторов взаимодействия нервной и иммунной систем (A.A. Левина и соавт, 1991; Е.А.Лукина и соавт., 1992; B.W. Beljaars at al., 2001; A. Nozaki at al., 2003; M.Viejo-Diaz, 2004 и др.). По мнению американского исследователя Е. Weinberg (1996), удержание железа, Лф и трансферрина (Тф) во внутренней среде организма является одним из ведущих механизмов его защиты от инфекций и опухолевого роста. Вероятно, недостаток легкодоступного Fe в организме носителя угнетает рост микроорганизмов. В клиническом плане наиболее изученным и востребованным

в лабораторной диагностике является термостабильный межорганный белок Ф (Я.И. Мельникова и соавт, 1993; Y. Deugnier at al., 1998; К. Orino at al., 2001; F.M. Torti, S.V.Torti, 2002).

В течение последнего десятилетия интенсивно растет число публикаций об изменениях при воспалении концентраций в крови иммуномодулирующих цитокинов и других биологически активных веществ. Однако количественного определения содержания цитокинов при развитии инфекционных процессов недостаточно для оценки течения воспалительного процесса (Н.М. Бережная, 2000; A.C. Сим-бирцев, 2010; L. DeVita at al., 2006).

На сегодняшний день не существует полной и окончательной схемы взаимосвязи различных компонентов, влияющих на метаболизм железа и железосодержащих белков. Возможно, провоспали-тельные цитокины стимулируют синтез Лф, который связывает Fe с большей аффинностью, чем Тф. Железо, связанное с ЛФ, поглощается макрофагами и хранится в виде тканевого Ф или передается непосредственно на сывороточный Ф, тем самым снижая доступ Fe к бактериальным клеткам и способствуя этим ограничению их жизнедеятельности (A.M. Белоус, А.Т. Конник, 1991; Е. Kemna at al., 2005; N. В. Nguyen at al., 2006).

Таким образом, комплексная оценка продукции ферропротеинов в биологических и патологических жидкостях, анализ их диагностической значимости в сравнении с другими БОФ, разработка и внедрение в клиническую практику диагностических иммунохимических алгоритмов выявления и оценки деструктивно-воспалительных состояний актуально и целесообразно, так как позволит оптимизировать диагностику, мониторинг и оценку качества лечения воспалительных заболеваний, в том числе острых гнойных процессов в хирургии.

Цель исследования: получить дополнительные сведения по распределению и локализации железосодержащих белков в биологических жидкостях и тканях органов человека для повышения их диагностического потенциала при воспалительных и деструктивных процессах.

Задачи исследования:

1. Оптимизировать способы выделения и очистки ферритина и лакто-феррина

2. Смоделировать иммунохимические тест-системы на ферритин и лактоферрин

3. Провести количественный анализ ферритина и лактоферрина в биологических жидкостях и тканях человека

4. Определить локализацию ферритина в клетках здоровых и патологически измененных тканях органов человека

5. Изучить клинико-диагностическое значение иммунохимических тест-систем на ферритин и лактоферрин в сравнении с другими БОФ при воспалительных заболеваниях органов брюшной полости

Научная новизна исследования. Разработаны и апробированы алгоритмы выделения и очистки Ф и Лф и сконструированы соответствующие моноспецифические иммунодиффузионные тест-системы.

Методом иммунофлюоресценции с помощью самостоятельно полученной антисыворотки выявлены различия в локализации Ф в структурах клеток тканей (печень, почка).

Количественный иммуноферментный анализ Ф и Лф в биологических жидкостях и тканях здорового человека и пациентов с воспалительными заболеваниями органов брюшной полости показал диагностическую ценность Ф и Лф как маркеров острого деструктивного процесса.

Практическая значимость работы. Разработаны и запатентованы новые способы диагностики и оценки течения острого деструктивного воспалительного процесса по результатам иммунохимиче-ской индикации ферропротеинов, отличающиеся достоверным выявлением не только манифестных, но и латентных деструктивных состояний. Предложенные алгоритмы очистки ферропротеинов и конструирования специфических иммунохимических тест-систем позволяют получать при экономии исходного биоматериала и реагентов компоненты для соответствующих тест-систем, как для научного исследования, так и для практического применения.

Основные положения, выносимые на защиту

Разработаны и апробированы оригинальные методы выделения и очистки Ф и Лф и сконструированы соответствующие специфические иммунодиффузионные тест-системы. При этом выявлена зависимость белкового спектра термостабильных тканевых экстрактов органов человека от температурного режима и органной принадлежности.

С помощью самостоятельно полученных антисывороток проведен методом РИД по Манчини анализ Ф в экстрактах тканей органов человека, показавший незначительные количественные различия, а методом иммунофлюоресценции выявлены различия в локализации Ф в структурах тканей печени и почки.

Показана диагностическая ценность Ф и Лф как маркеров острого деструктивного процесса. Полученные результаты доказывают, что ферропротеины являются надежными маркерами острого воспалительно-деструктивного процесса наряду с другими, в том числе классическими, белками острой фазы.

Предложен новый способ диагностики и оценки течения острого воспалительного-деструктивного процесса на основе оценки результатов иммунохимической индикации ферропротеинов, отличающийся достоверностью в диагностике не только явных, но и латентных деструктивных состояний.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на: международных научно-практических конференциях «Достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины», Астрахань (2008, 2010, 2011); международной научной конференции студентов и молодых ученых ОГМУ, Одесса (2009); 4-й международной Пироговской научной медицинской конференции РГМУ, Москва, 2010; Астраханской областной конференции молодых ученых (на секциях: биология и экология; медицина и фармация), 2010; региональной научно-практической конференции «Исследования молодых ученых - вклад в инновационное развитие России», 2011; Всероссийской конференции с международным участием «Профилактическая медицина - 2011», СПб. - 2011; Online конференции молодых ученых

«Охрана здоровья населения промышленных территорий», Пермь, 2011.

Диссертационная работа обсуждена на межкафедральной конференции ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России 27.01.2012 г.

Публикации: По теме диссертации опубликовано 17 научных работ общим объемом 24 страницы, в том числе 3 из них в рецензируемых научных изданиях, и 2 патента на изобретение.

Структура и объем работы: Диссертация изложена на 145 страницах, состоит из введения, шести глав, выводов, списка литературы. Иллюстративный материал представлен 21таблицей, 31 рисунком. Библиография включает в себя 123 отечественных и 118 зарубежных источника.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследований

В ходе работы для достижения цели были выполнены все поставленные задачи в шесть соответствующих этапов. Каждый последующий этап являлся логическим продолжением предыдущего.

Выполненное исследование содержит экспериментальную и лабораторную часть. В работе был использован биоматериал для выделения и очистки изучаемых белков, лабораторные реагенты и образцы биологических жидкостей больных для клинико-лабораторной части (таб. 1).

Для оптимизации способов выделения и очистки изучаемых белков были использованы методы фракционирования белков, применяемые как в классических вариантах, так и модифицированных в ходе работы. Проведено 1369 исследований с использованием биохимических (центрифугирование, солевое осаждение, диализ, концентрирование, аналитический электрофорез, электрофорез в ПААГ, гель-фильтрация, ИХ и др.), иммунохимических (ИДА по Оухтерло-ни, РИД по Манчини, иммуноэлектрофорез, ракетный иммуноэлек-трофорез, иммунопроявление в ПААГ, реакция иммунофлюоресцен-сии, истощение антисывороток и др.) и гистохимических методов.

Таблица 1

Перечень использованного в работе материала

Материал Число образцов

Ткани

Желчный пузырь 27

Печень 54

Почка 40

Плацента 40

Женское молоко 12

Сыворотка крови больных:

острым гангренозным аппендицитом 53

острым флегмонозным аппендицитом 48

перитонитом 77

перфоративной язвой 44

флегмонозным холециститом 30

гангренозным холециститом 36

Экссудаты больных:

острым гангренозным аппендицитом 52

острым флегмонозным аппендицитом 36

перитонитом 21

перфоративной язвой желудка 44

флегмонозным холециститом 22

гангренозным холециститом 28

Итого 664

Статистический анализ результатов исследования проведен согласно руководствам по медицинской статистике с применением современных методов виртуального математического анализа, а именно, с использованием программ «STATISTICA 6.0 for Windows» фирм «Stat Soft, Inc.» и «Microsoft Office Excel 2003».

Результаты исследования

Для выбора оптимального исходного материала выделения и очистки ферритина экстракты тканей подвергали воздействию температур в пределах 70-95°С в экспозиции 15-20 мин (рис. 1).

Окрашивание на негемовое железо показало наличие железосодержащих белков в термостабильных фракциях практически во всех исследованных образцах. Наличие Ф, обладающего электрофоретиче-ской подвижностью альфа2-глобулинов, во фракциях определяли ме-

тодом иммунодиффузии в агаре со стандартной тест-системой на Ф, количество Ф во фракциях определяли иммунодиффузионным титрованием в агаре.

Интакт.ткань 70°С 80°С 95°С К

* у-глобулин

* [¡-глобулин ■» а.2-глобулин

* а1 -глобулин

-» Ачъбумин Линия Кольрауша

Рис 1. Спектр термостабильных белков в тканях при нагревании в температурном режиме от 70 до 95°С. Контроль - нативные экстракты. 1 Плацента, 2.Печень, 3.Почка, 4.Поджелудочная железа, 5.Селезенка, 6.Мозг. К. сыворотка крови доноров

По результатам эмпирического подбора в качестве исходного биоматериала для выделения и очистки Ф нами была определена плацента. Преимущества выбора исходного биологического материала являлась доступность, ткань получают не после смерти, а в ходе запланированных родов и эффективность обусловлена высоким удельным содержанием Ф.

При выделении и очистке исследуемых протеинов преследовали цель разработать оптимальный алгоритм получения чистых препаратов на основе известных биохимических способов (табл. 2, 3).

Таблица 2

Качество препаратов на этапах выделения ферритина из плаценты

Основные этапы выделения Объем, мл Об.белок, мкг/мл Кол-во Ф, мкг/мл Целевой Продукт, % Степень очистки Выход (%)

Гомогенизирование 48000 11700 32,3 0,27 1 100

Терм, обр-ка, 90°С, и центрифуг-е (надосад) 20600 104 60,4 63 233 85

Ионообмен. хромат-я, QAE-sephadex А-50 200 6398 6046 89 328 78

Способ выделения и очистки Ф оказался эффективным по большинству характеристических параметров и по результатам аналитического электрофореза (рис.2).

ерритин

+ у -глобулин

* Р - глобулин

* а2 - глобулин

* а1- глобулин

•> Альбумин ♦Линия Кольрауша

Рис. 2. Анализ чистоты полученного препарата феритина методом электрофореза в ПААГ

1. -Гомогенат плаценты; 2. - Препарат после термической обработки при 90°С в течение 15 мин; 3. - Очищенный препарат ферритина после ионообменной хроматографии на ОАЕ-верЬаёех А-50; 4 - Сыворотка донора (контроль)

В таблице 3 представлена схема выделения Лф и характеристика полученного очищенного препарата.

Таблица 3

Анализ качества выделения и очистки лактоферрина

Основные этапы выделения Объем, мл Об. белок, мкг/мл Концент-я Лф, мкг/мл Целевой продукт, % Степень очистки Выход (%)

Женское молоко 3000 43600±132 3280±56 7,5 1 100

Осаждение 30% №4)2 804 150 238545±57 52480±43 22 3 80

Обессоливание 500 47020±640 8934±114 21 2,8 56

Ионообм.хроматография, КМ С 50 400 10092±303 6432±220 64 8,5 47

Результаты электрофоретического анализа (рис. 3) свидетельствуют о неполной очистке Лф, что по сравнению с предыдущим результатом представляется совершенно логичным, так как разделять нативные белки между собой сложнее, нежели отделить денатурированные балластные белки (основная масса) от сохранившего нативные свойства.

1 2

у -глобулин Р -глобулин -* «2 -глобулин -*-

а] -глобулин

Альбумин — Линия Кольрауша -*■

Рис. З.Анализ чистоты полученного препарата Лф, электрофорез в ПААГ

1. - Сыворотка крови донора (контроль)

2. - Женское грудное молоко; 3. -Препарат после высаливания; 4. -препарат лактоферрина после ионообменной хроматографии КМ С 50

-Лактоферрин

Статистический анализ результатов серии опытов показал достаточную степень чистоты Ф и Лф (рис. 4) для последующей иммунизации лабораторных животных.

Рис. 4. Контроль чистоты полученных белковых фракций Ф (А) и Лф (Б) методом иммунопреципитации

В центральных лунках - поливалентная антисыворотка на белки сыворотки крови человека; в лунках 1, 2- фракции последовательных этапов выделения, 3 - очищенный Ф (А) и полуочищенный Лф (Б). В остальных лунках - физиологический раствор

На втором этапе с целью получения специфических антисывороток на Ф и Лф подвергали иммунизации кроликов-акселератов весом 3-4 кг. Антигены (хроматографические фракции) с полным адъю-вантом Фрейнда вводили под кожу и внутримышечно дробными возрастающими дозами (4 до 20 мг белка) в течение месяца. Забор крови производили на 7-9 сутки после заключительной иньекции. После освобождения от форменных элементов крови и фибринового сгустка антисыворотки при необходимости истощали белками лиофилизиро-ванной плазмы крови человека (очистка от балластных антител).

Контроль качества полученных антисывороток осуществляли иммунохимическим сопоставлением с исходным материалом и контрольными белками, который показал, что исследуемая антисыворотка на Ф давала линии преципитации только с экстрактом тканей плаценты и очищенным препаратом Ф, а полученные антисыворотки на Лф положительно преципитировали с препаратом ЛФ. В обоих случаях отмечали положительное окрашивание линий преципитации на железо.

В лабораторной медицине для количественного выявления Ф и Лф имеются коммерческие ИФА наборы, что не исключает разработку более простых и дешевых методов для многоцелевых научных исследований.

Наличие препаратов исследуемых белков и антисывороток к ним, как исходных компонентов, позволило нам смоделировать специфические иммунодиффузионные тест-системы на Ф и Лф, послужившие основой для реализации третьего этапа работы: количественного анализа изучаемых белков в биологических жидкостях и тканях человека. Для выявления ферропротеинов в экстрактах тканей в качестве методической основы выбрали радиальную иммунодиффузию по Манчини и соавт. в модификации Фехей и Мак-Келви (рис. 5).

Для формирования алгоритма количественного анализа Ф и Лф по данной методике для каждого из белков были стандартизированы оптимальные параметры методики: рабочая концентрация антисыворотки, рабочие разведения стандартных образцов, специфическое окрашивание препарата. По данным статистической обработки результатов серии экспериментов были построены стандартные калибровочные графики для количественного определения Ф и Лф с порогом чувствительности 3 и 3,6 мкг/мл.

е * °

Рис. 5. Радиальная иммунодиффузия по Манчини на Ф

Верхний ряд - титрование стандартного антигена для моделирования калибровочной кривой

Нижний ряд - регистрация искомого антигена в исследуемых пробах

На четвертом этапе, на статистически значимой выборке, проведен клинический анализ содержания Ф, Лф и железа в биологических жидкостях (сыворотка крови и перитонеальный экссудат) при широком перечне нозологических форм: острый и хронический холецистит, осложненный аппендицит, распространенный перитонит, пер-форативная язва желудка (табл. 4,5). Главным мотивом в выборе заболеваний являлись острота процесса и деструктивная составляющая.

Таблица 4

Железо и БОФ в сыворотке больных воспалительно-деструктивными заболеваниями органов брюшной полости

Показатель XX ОХ ОГА ОФА пя ОРП Контр.

п 19 18 22 18 17 19 20

Железо (ммоль/л) 7.7±3 68±13* 84±3,6* 78±7,6* 58±4,3* 86±16* 13,5±4

ф (нг/мл) 59,2±7 296± 33* 248±22* 348±34* 277±26* 418,5±70* 120±20

Лф (нг/мл) 2828± 308* 1284± 149 1246± 302 2768± 325* 1716± 124 2753±414* 1113±98

СРБ (мкг/мл) - - 37±4* 37±3,3* 48±5,6* 121±11,4* 2,5±0,5

СБАГ (мкг/мл) - - 15±1,6* 12±1,1* 8,5±0,8* 18±3* 1,8±0,3

МГ (мкг/мл) - - 287±34* 226±20* 445±16* 287±68* 38±3

ТФ (мкг/мл) - - - - - 830±124* 2479± 600

Примечание. *- достоверные (начиная ср<0,05) различия с контрольной группой доноров

Одновременно отмечены более высокие концентрации Ф и Лф в экссудатах по сравнению с аналогичными параметрами в сыворотке крови по всем вышеперечисленным нозологиям (табл. 5, рис.6).

Таблица 5

БОФ в экссудатах больных с воспалительно-деструктивными заболеваниями органов брюшной полости

Диаг- п Ф (нг/мл) Лф (нг/мл) СРБ СБАГ МГ

ноз (мкг/мл) (мкг/мл) (мкг/мл)

ОХ 15 700±215* 10000±600* - - -

ОГА 20 719±42,4* 10335±60,9* 37,8±4,3 14,1±1,7 238±15

ОФА 18 548±79,5* 10809±570* 34,3±4,8 9,9±0,9 313,3±5,5

ПЯ 17 578±4,3* 12280±565* 132±7,6* 9,0±1,5 137,1±15*

ОРП 22 1173±79* 11643±680* 54,7± 11,7* 15,6±3,2 110±13,4

Всего 92

Примечание. *- достоверные (начиная с р<0,05) различия с сывороточным уровнем в анаю-гичной группе больных

Для работы с клиническим материалом применяли коммерческие ИФА тест-системы на Ф и Лф (ИФА анализатор Hoffman La Roche). Кроме того, для сравнительного анализа результатов лабораторного исследования на Ф и Лф проводили определение других БОФ с использованием моновалентных иммунохимических тест-систем на СБАГ и на МГ, разработанных сотрудниками лаборатории кафедры биохимии с курсом КЛД АГМА, и коммерческого набора на С-реактивный белок (СРБ), индикацию которого проводили методом ИДА.

Количественный иммунохимический анализ Ф, Лф, МГ, СБАГ и СРБ по всем названным формам показал идентичную картину их присутствия: уровень железа и ферропротеинов (Ф и Лф) в сыворотке крови при остром холецистите, осложненных аппендицитах, остром распространенном перитоните, перфоративной язве был достоверно повышен относительно группы контроля в разы, а уровень СРБ и СБАГ в некоторых случаях повышен на порядок или в десятки раз.

Как видно по данным, представленным в таблице 4, развитие XX сопровождается понижением уровня Ф в сыворотке крови. Так, у больных с пролонгированным течением XX исходный уровень Ф в сыворотке был на нижней границе нормы. Отмеченное нами снижение уровня сывороточного железа у больных XX согласуется с литературными данными. Низкий уровень сывороточного железа, отмечаемый в условиях воспаления, по-видимому, объясняется эффектами провоспалительных цитокинов, в частности ИЛ-6, индуцирующих функциональный железодефицит.

Возможно, что функционально родственные белки (Ф и Лф) выступают в роли индикаторов воспалительного процесса, то есть, относятся к позитивным БОФ. Такая однозначная тенденция доказывает диагностическую ценность изучаемых белков как маркеров острого и хронического воспалительного процесса. Усиление продукции Ф и Лф имело косвенное подтверждение фактом параллельного повышения сывороточного железа.

1600 1400 1200 -5 1000

I 800 600 400 200 0

Ферритин Н Сыворотка Ш Экссудат

IM1UI1I1I

—wj

чйи

14000 12000 10000 -58000

Лакгоферрин Н Сыворотка И Экссудат

Рис. 6. Соотношение уровня ферритина и лактоферрина в сыворотке крови и экссудате больных при остром распространенном перитоните

Выявлена высокая прямая корреляция между уровнем СФ и Лф (г=0,92) и обратная корреляция, между Тф и Ф, Тф и Лф (г=-0,96; г=-0,94 соответственно) (рис. 7).

s S з %

ЛФ

Копт

Опыт Til)--Ф

Рис. 7. Корреляция меиеду уровнями ТФ, Ф и Лф при ОРП

По другим, в том числе классическим, БОФ (белки сравнения) картина не столь однозначна: при перфоративной язве желудка наблюдается безусловное превышение уровней экссудативных СРБ и СБАГ над сывороточными, тогда как уровень МГ в сыворотке крови больных был значительно выше, чем в экссудате.

При остром гангренозном, остром флегмонозном аппендиците и остром распространенном перитоните между уровнем СРБ, СБАГ и

МГ в сыворотке крови больных и аналогичными показателями в экссудате достоверных различий обнаружено не было.

Динамика изменения уровня пяти изученных нами БОФ в крови и экссудате больных имеет свои особенности для каждого белка и свидетельствует о специфической роли каждого из них в патогенезе острых воспалительных заболеваний органов брюшной полости. Сравнительный анализ полученных результатов доказывает, что ферро-протеины (Ф и Лф) являются не менее надежными маркерами острого деструктивного процесса, чем известные БОФ, например, СРБ. Этот факт позволил завершить заключительный этап предпринятого исследования созданием нового способа диагностики и оценки течения острого деструктивного процесса в хирургической патологии.

На основании установленной достоверной связи уровня тканевого Ф со степенью остроты процесса разработан способ дифференциальной диагностики и оценки течения острого деструктивного процесса в желчном пузыре, составивший суть патента на изобретение.

Статистическая оценка предлагаемых иммунохимических тестов на Ф и Лф показала высокие значения их чувствительности, специфичности, диагностической эффективности, прогностичности положительного и отрицательного результатов (все значения выше 85%) по всем исследуемым референтным диагнозам.

Следует отметить, что оценку диагностической значимости предлагаемых тестов проводили только по значениям сывороточных Ф и Лф. Высокие концентрации этих белков в перитонеальном экссудате еще более подтверждают их принадлежность к БОФ.

Для определения места локализации и предполагаемого синтеза Ф использовали гистологические препараты из тканей здоровых (ау-топсийный материал от лиц, погибших в результате случайных причин) и патологически измененных тканей (операционный материал).

Известно, что Ф синтезируется в клетках ретикулоэндотелиаль-ной системы. Поэтому нами в первую очередь была исследована печень, так как именно клетки Купфера являются звеном ретикулоэндо-телиальной системы. Клетки Купфера отчетливо выявляются на гистологических срезах при окраске гематоксилином и эозином (рис.8).

Исследование содержания и распределения Ф в тканях печени в норме, при холецистите и раке печени проведено иммунофлюорес-центным методом с использованием самостоятельно полученной антисыворотки (рис. 9-11).

Рис. 8. Срез здоровой печени человека (стандарт). Окраска гематоксилином и эозином. Клетка Купфера показана стрелкой Ув.700

Рис. 9. Контроль РИФ на ферри-тин здоровой печени человека,

Ув.700

Рис. 10. Срез печени при холецистите. Усиление РИФ на ферритин в межклеточном пространстве. Двойными стрелками указаны клетки Купфера Ув. 700

Рис. 11. Срез тканей при раке печени Реакция РИФ на ферритин в стенке сосудов (вена и синус-оидные капилляры), Ув.700

Результаты исследования показали, что при возникновении воспалительного процесса в желчеотводящих путях или в желчном пузыре реакция РИФ на Ф усиливается. Изменение структуры клеток при гепатоме приводит к заметному изменению топографии РИФ на ферритин в паренхиме печени. Особенно следует отметить отложение

Ф в стенке сосудов (вена и синусоидные капилляры).

Изучение распределения Ф в тканях почки (рис. 13-16) объясняется экскреторной функцией этого органа.

* ■ я . .

Щш.

Рис.12. Срез здоровой почки человека

Окраска гематоксилином и эозином, Ув.700

Рис. 13. Срез почки человека. Корковое вещество Стрелками обозначены сосудистые клубочки неф-рона, Ув.700

Рис.15. Срез почки человека. Пиелонефрит

Реакция РИФ на ферритин, Ув. 700

Рис.16. Срез почки при раке

РИФ на Ф в сосудистых клубочках (показано стрелками) и в стенке канальцев нефрона в виде глыбок (показано двойными стрелками) Ув.700

Почка вовлекается в общий процесс организма при развитии даже ограниченного очага воспаления вне зависимости от его локализации и испытывающего повышенную нагрузку. Исследование топографии Ф в структурах неизмененной почки показало, что методом иммунофлюоресценции ферритин определяется по периметру сосу-

дистых клубочков. Мембраны практически не дают реакции на Ф. При процессе воспаления (пиелонефрит) наблюдается отложение ферритина в стенках канальцев, что может быть следствием выраженного деструктивного процесса в корковом веществе почки.

Анализ распределения Ф в почке, пораженной онкологическим процессом, выявил изменение его топографии в органе: ферритин обнаружен в сосудистых клубочках и в стенке канальцев нефрона в виде глыбок.

Таким образом, при исследовании ферритина в печени методом реакции иммунофлюоресценции установлено, что при воспалительных процессах РИФ усиливается в межклеточном пространстве, при онкопатологии - в стенках сосудов, в том числе синусоидных капилляров.

В почке методом РИФ в норме этот белок выявляется в виде равномерного свечения сосудистых клубочков. Воспалительный процесс способствует отложению ферритина в стенках канальцев, а онкопро-цесс дает специфическую картину свечения: РИФ можно наблюдать в краевой зоне сосудистых клубочков в виде гранулярных образований в стенках извитых канальцев нефрона.

ВЫВОДЫ

1. Разработаны и апробированы способы выделения и очистки ферритина и лактоферрина, позволившие получить препараты с их высоким содержанием в конечном продукте (89% и 64% соответственно), которые могут быть использованы в качестве антигенов для приготовления моноспецифических антисывороток на эти белки.

2. Сконструированы иммунодиффузионные тест-системы на ферритин и лактоферрин с порогом чувствительности 3±0,34 (Ф) и 3,6±0,31(Лф) мкг/мл. как технически и финансово доступные методы выявления этих антигенов в различных объектах при научных и клинических исследованиях.

3. Сформированы и успешно апробированы алгоритмы количественного анализа ферритина и лактоферрина в биологических объектах на основе метода радиальной иммунодиффузии по Манчини.

4. Методом иммунофлюоресценции с помощью самостоятельно полученной антисыворотки выявлены различия в локализации фер-ритина в структурах клеток тканей печени и почки.

5. Доказана диагностическая ценность ферритина и лактоферрина как маркеров острого деструктивного процесса на основании достоверного повышения их уровня в сыворотке крови и экссудатах больных с острым холециститом, осложненным аппендицитом, острым распространенным перитонитом и перфоративной язвой.

6. Показано, что ферропротеины являются надежными маркерами воспалительного процесса наряду с другими, в том числе классическими, белками острой фазы. При этом их выявление отличается достоверностью в диагностике не только явных, но и латентных деструктивных состояний.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При очистке Ф рекомендуется использовать сочетание методов гомогенизации и тепловой денатурации с ИХ на С)АЕсефадекс А-50 в восходящем градиенте ионной силы. При очистке Лф рекомендуется последовательное двухступенчатое высаливание сульфатом аммония: до 25% и 50% насыщенности. В качестве окончательного этапа очистки Лф рекомендуется ИХ на ДЕАЕсефадекс А-50 в восходящем градиенте ионной силы.

2. При получении антисывороток на ферритин и лактоферрин рекомендуется использовать высокоочищенные препараты этих белков с последующим ее истощением лиофилизированной плазмой на Bio-Gel 300.

3. Внедрить в лаборатории хирургических клиник и отделений способ

иммунохимического количественного определения ферритина и лактоферрина и разработанные балльные критерии оценки как дополнительный показатель острого деструктивного процесса. При применении названных методов определения ферропротеинов пользоваться смоделированными калибровочными графиками.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Рамазанов М.В. Анализ корреляции ферроиротеинов при распространённом перитоните / М.В. Рамазанов. Е.В. Бутырина, Э.А Кчибеков // Астраханский медицинский журнал. - 2011. - №1 - С.256-258. (перечень ВАК) автора -0,15 пл.

2. Рамазанов М.В. Ферропротеины при вентральной патологии / М.В. Рамазанов, Э.А. Кчибеков, Д.М. Никулина // Астраханский медицинский журнал. -2011. - №2. - С.232-233. (перечень ВАК) автора - 0,15 пл.

3. Рамазанов М.В. Новый способ очистки ферритина / М.В. Рамазанов. Ю.А. Кривенцев, Е.А. Гребнева, А.И.Носков// Астраханский медицинский журнал,- Астрахань -2011. - Т.6, -№3. - С. 245-247. автора - 0,15 пл (перечень ВАК) автора - 0,15 пл.

4. Кчибеков Э.А. Иммунохимический способ диагностики деструктивных форм острого холецистита / Э.А. Кчибеков. М.В. Рамазанов // Труды Астраханской государственной медицинской академии. - Астрахань - 2009. - Т. 40, - С 72-73. автора - 0,15 пл.

5. Кчибеков Э.А. Сравнительная характеристика железосодержащих белков в эктомированных желчных пузырях больных острым холециститом / Э.А. Кчибеков, М.В. Рамазанов // Тезисы международной научной конференции студентов и молодых ученых «Молодёжь медицине будущего» . - Одесса. -2009.-С. 146. автора-0,15 пл.

6. Кчибеков Э.А. Диагностическая ценность белков острой фазы в оценке степени тяжести состояния больных с прободными гастродуоденальными язвами / Э.А. Кчибеков, Ю.А. Кривенцев, М.В. Рамазанов. // Материалы 7-й международной научно-практической конференции «Достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины». - Астраханский медицинский журнал. - Астрахань. - 2010. - Т.5, - №.1 - С.46-48. автора- 0,15 пл.

7. Рамазанов М.В. Сравнительное иммунохимическое изучение спектра термостабильных тканевых белков человека / М.В. Рамазанов. Р.Р. Абдуллаев // Материалами 4 международной конференции студентов и молодых ученых. Приложение к журналу. Вестник Российского государственного медицинского университета. -М. -2010 -Т.2, - С. 540.автора - 0,15 пл.

8. Рамазанов М.В. Комплексный анализ ферропротеинов при остром распространенном перитоните / М.В. Рамазанов. Е.В. Бутырина // Материалы Всероссийской научной конференции с международным участием «Дни биохимии СПбГМУ». - СПб. - 2011. - С.52. автора - 0,15 пл.

9. Рамазанов M.B. Феррокинетика при остром аппендиците / М.В. Рамазанов. А.В, Безносов // Областная конференция. Секция, биология и экология. - Астрахань. - 2010. автора - 0,15 пл.

10. Рамазанов М.В. Новые диагностические аспекты тестов на железосодержащие белки / М.В Рамазанов. Э.А. Кчибеков, A.B. Безносов // Областная конференция. Секция, медицина и фармация. - Астрахань. - 2010. автора - 0,15 пл.

11. Рамазанов М.В. Обмен железа и железосодержащих белков при заболеваниях органов брюшной полости / М.В. Рамазанов, Э.А. Кчибеков, Е.В. Бутырина, A.B. Безносов // Конференция молодых ученых // Издательство «Челябинская государственная медицинская академия». — Челябинск, - 2011 — С.207- 209. автора - 0,15 пл

12. Рамазанов М.В. Патологические механизмы и диагностическое значение железа и железосодержащих белков при перфоративной язве желудка / М.В. Рамазанов. // Online -конференция молодых ученых «Охрана здоровья населения промышленных территорий» - Пермь. - 2011. автора - 0,15 пл.

13. Рамазанов М.В. Маркеры воспаления как предикторы деструкции органов брюшной полости / М.В. Рамазанов // IV Международный молодежный медицинский Конгресс "Санкт-Петербургские научные чтения-2011" - СПб. -2011. -С.24. автора-0,15 пл

14. Рамазанов М.В. Оптимизация способа очистки ферритина и создание диагностической тест-системы / М.В. Рамазанов. М.Ю. Кривенцева // Материалы Региональной научно-практической конференции «Исследования молодых ученых - вклад в инновационное развитие России». - Астрахань. - 2011. -С.152-154. автора-0,15 пл

15. Рамазанов М.В. Металлопротеины как маркеры обострения хронического холецистита / М.В. Рамазанов. Д.М. Никулина // Всероссийская конференция с международным участием «Профилактическая медицина - 2011» - СПб. -2011.-С 261 -263. автора-0,15 пл

16. Пат. 2423706 Российская Федерация. Способ диагностики острого холецистита / Э.А. Кчибеков, М.В.Рамазанов; заявитель и патентообладатель ГБОУ ВПО «АГМА» Росздрава № 2009145842; заявл. 10.12.2009; опубл.10.07.2011г. автора-0,15 пл.

17. Пат. 2407017 Российская Федерация. Способ диагностики деструктивных форм острого холецистита / Э.А.Кчибеков, М.В. Рамазанов; заявитель и патентообладатель ГБОУ ВПО «АГМА» Росздрава № 2009145842; заявл. 16.04.2009; опубл.20.10.2010г. автора-0,15 пл.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

БОФ белки острой фазы

ГФ гель-фильтрация

ИДА иммунодиффузионный анализ

ИФА иммуноферментный анализ

ИХ ионообменная хроматография

Лф Лактоферрин

мг альфа2-макроглобулин (а2 МГ)

ОГА острый гангренозный аппендицит

ОРИ острый разлитой перитонит

ОФА острый флегмонозный аппендицит

ОХ острый холецистит

ПААГ полиакриламидный гель

ПЯ перфоративная язва

РИД радиальная иммунодиффузия

РИФ реакция иммунофлюоресценция

СБАГ связанный с беременностью альфа2-гликопротеин

СЖ сывороточное железо

СРБ С-реактивный белок

СФ сывороточный ферритин

XX хронический холецистит

ТФ Трансферрин

ф Ферритин

Просьба высылать отзывы на автореферат по адресу: 420008, Казань, ул. Кремлевская 18, главное здание КФУ, к. 104, отдел аттестации, ученому секретарю диссертационного совета Д 212.081.08 проф. Абрамовой З.И., факс: (843)238-76-01.

Рамазанов Магомед Валединович

СРАВНИТЕЛЬНОЕ БИОХИМИЧЕСКОЕ И ИММУНОХИМИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ТКАНЕВЫХ И СЫВОРОТОЧНЫХ ЖЕЛЕЗОСОДЕРЖАЩИХ БЕЛКОВ

03.01.04 - биохимия

Автореферат диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

Заказ № 2584. Тираж 100 экз.

_Уч.-изд.-л. 1,5. Усл.-печ. л. 1,4._

Издательский дом «Астраханский университет»

414056, г. Астрахань, ул. Татищева, 20а Тел. (8512) 48-53-47 (отдел маркетинга), 48-53-45, 48-53-44, факс: (8512) 48-53-46. E-mail: asupress@yandex.ru

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Рамазанов, Магомед Валединович

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1 Железосодержащие белки тканей и биологических 12 жидкостей организма человека: сравнительный анализ распределения и функции (обзор литературы ).

1.1 Метаболизм железа.

1.2 Ф и Лф как белки острой фазы.

1.3 Белки острой фазы.

Глава 2 Материалы и методы исследования.

2.1 Объем и характеристика материала исследования.

2.2. Иммунохимические и биохимические методы исследований.

2.2.1 Методы выделения и очистки белков.

2.2.2 Иммунохимические методы исследований.

2.3 Гистохимические методы исследований.

2.4 Методы статистического анализа.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

Глава 3 Биохимическое изучение железосодержащих белков.

3.1 Сравнительная характеристика белковой мозаики тканевых фракций при различных температурных режимах.

3.2. Приготовление компонентов для тест-систем на ферритин и лактоферрин: получение антигена и иммунизация лабораторных животных.

3.2.1 Разработка оптимального способа выделения и очистки ферритина и лактоферрина.

3.2.2 Получение кроличьих моноспецифических антисывороток на Ф и Лф.

3.3 Моделирование иммунодиффузионных тест-систем.

3.4 Разработка алгоритма иммунодиффузионного количественного анализа ферритина и лактоферрина.

Глава 4 Сравнительное изучение уровня ферропротеинов в биологических жидкостях и тканях больных воспалительными заболеваниями органов брюшной полости.

4.1 Выявление Ф, ЛФ и СЖ в сыворотке крови и экссудате больных с воспалительно-деструктивными процессами в желчном пузыре.

4.2 Выявление Ф в деструктивно изменённых тканях желчного пузыря.

4.3 Определение ферропротеинов и острофазовых белков в сыворотке крови и в экссудате при перфоративной язве желудка.

4.4 Выявление ферропротеинов и острофазовых белков в сыворотке крови и в экссудате больных при гангренозной и флегмонозной форме аппендицита.

4.5 Комплексный анализ ферропротеинов при остром распространенном перитоните.

4.6 Оценка диагностической эффективности иммунохимических тестов на Ф и Лф.

Глава 5 Иммуногистохимическое изучение локализации ферритина в здоровых, измененных при воспалении и пограничных тканях.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Сравнительное биохимическое и иммунохимическое изучение тканевых и сывороточных железосодержащих белков"

Железо, уникальный химический элемент, относится к разряду так называемых «облигатных биометаллов», т.е. веществ, крайне важных для нормального функционирования практически любых живых систем. Все железо организма находится в связанном состоянии - в комплексе с важнейшими металлопротеинами - и обеспечивает функционирование более сотни белков с различными функциями [12].

Железо входит в состав окислительно-восстановительных ферментов: цитохромов, железосеропротеинов (транспорт электронов); оксидаз, гидроксилаз; белков, осуществляющих транспорт и депонирование кислорода, - гемоглобина, миоглобина [74]. Транспорт самого железа между органами и тканями обеспечивают трансферрин (Тф), ферритин (Ф), а также лактоферрин (Лф). Эти белки могут связывать только трехвалентную форму железа и передавать его клеткам через Тф- и Л ф-рецепторы.

К настоящему времени накоплена объемная информация о свойствах и, в меньшей степени, метаболизме железа и железосодержащих белков в организме человека. Интересным фактом является описание их как острофазовых белков (БОФ). Большинство железосодержащих белков (цитохромы, Ф, миоглобин, пероксидаза и даже гемоглобин) являются внутриклеточными. Следовательно, их концентрация в биологических жидкостях может повышаться при деструктивных процессах, приводящих к разрушениям значительного числа клеток. Однако широко применяемые в современной медицинской практике тесты на БОФ не всегда полно отражают характер и течение воспалительного процесса из-за ограниченности перечня коммерческих наборов на БОФ и недостаточной изученности их поведения при многих нозологических формах, особенно при хирургических заболеваниях [12].

В течение последнего десятилетия интенсивно растет число 6 публикаций об изменениях при воспалении концентраций в крови иммуномодулирующих цитокинов (ИЛ-1, 6, 8, 10, 12, ФНО, КСФ) и других биологически активных веществ. Однако количественного определения содержания цитокинов при развитии инфекционных процессов недостаточно для оценки течения воспалительного процесса. Поэтому актуальным вопросом остается изучение молекулярных механизмов деструктивной и репаративной стадии воспаления, также поиск чувствительных маркеров позволяющих осуществить мониторинг этого процесса и оценить эффективность лечения.

Изменение продукции Лф и Ф, а также обмена железа как реакции организма на острые и хронические воспалительные заболевания является одним из ключевых регуляторов защитных функций организма и медиаторов взаимодействия нервной и иммунной систем [53; 55; 130; 204; 236].

По мнению американского исследователя Е. Weinberg, удержание железа, Лф и Тф во внутренней среде организма является одним из ведущих механизмов его защиты от инфекций и опухолевого роста. Он постулирует, что в природе существует жесткая конкуренция за необходимое для роста и размножения железо между клетками бактерий, низших грибов, простейших и опухолей, с одной стороны и клетками организма-хозяина с другой. В связи с этим, в клетках, тканях и жидких средах организма-хозяина эволюционно вырабатывается набор молекулярных механизмов удержания (сегментирования, депонирования) железа, которые обеспечивают его резистентность к инфекции и опухолевой прогрессии [177; 9; 85]. Вероятно, недостаток легко доступного Fe в организме носителя угнетает рост микроорганизмов. Лф, сывороточный Ф и Тф являются ключевыми молекулярными компонентами рассматриваемой системы обмена железа при воспалении и соответственно являются частью врожденного иммунитета (естественной резистентности). В клиническом плане наиболее изученным и 7 востребованным в лабораторной диагностике является термостабильный межорганный белок ферритин [62; 146; 207].

На сегодняшний день не существует полной и окончательной схемы взаимосвязи различных компонентов, влияющих на метаболизм железа и железосодержащих белков. Возможно, провоспалительные цитокины стимулируют синтез Лф, который связывает Бе с большей аффинностью, чем Тф. Железо, связанное с ЛФ, поглощается макрофагами и хранится в виде тканевого Ф или передается непосредственно на сывороточный Ф, тем самым снижая доступ Бе к бактериальным клеткам и способствуя этим ограничению их жизнедеятельности [9;182;203].

Задачи исследования

1. Оптимизировать способы выделения и очистки ферритина и лактоферрина

2. Смоделировать иммунохимические тест-системы на ферритин и лактоферрин

3. Провести количественный анализ ферритина и лактоферрина в биологических жидкостях и тканях человека

4. Определить локализацию ферритина в клетках здоровых и патологически измененных тканях органов человека

Научная новизна исследования

Разработаны и апробированы алгоритмы выделения и очистки Ф и Лф и сконструированы соответствующие моноспецифические имму но диффузионные тест-системы.

Предложенные алгоритмы очистки ферропротеинов и конструирования специфических иммунохимических тест-систем позволяют получать при экономии исходного биоматериала и реагентов компоненты для соответствующих тест-систем как для научного исследования, так и для практического применения.

Основные положения, выносимые на защиту

Разработаны и апробированы оригинальные алгоритмы выделения и очистки Ф и Лф и сконструированы соответствующие специфические иммунодиффузионные тест-системы. При этом выявлена зависимость белкового спектра термостабильных тканевых экстрактов органов человека от температурного режима и органной принадлежности.

Апробация диссертации

Материалы диссертации доложены на: международных научно-практических конференциях «Достижение фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины», Астрахань (2008, 2010, 2011); международной научной конференции студентов и молодых ученых ОГМУ, Одесса (2009); 4-й международной Пироговской научной медицинской конференции РГМУ, Москва, 2010; Астраханской областной конференции молодых ученых (на секциях: биология и экология;

10 медицина и фармация), 2010; региональной научно-практической конференции «Исследования молодых ученых - вклад в инновационное развитие России», 2011; Всероссийской конференции с международным участием «Профилактическая медицина - 2011», СПб. - 2011; Online конференции молодых ученых «Охрана здоровья населения промышленных территорий», Пермь, 2011.

В законченном виде диссертационная работа обсуждена на межкафедральной конференции ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России 27.01.2012г.

Структура и объем работы: Диссертация изложена на 145 страницах, состоит из введения, шести глав, выводов, списка литературы. Иллюстрационный материал представлен 21 таблицей и 31 рисунком. Библиография включает в себя 123 отечественных и 118 зарубежных источника.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Рамазанов, Магомед Валединович

выводы

4. Методом иммунофлюоресценции с помощью самостоятельно полученной антисыворотки выявлены различия в локализации ферритина в структурах клеток тканей печени и почки.

5. Доказана диагностическая ценность ферритина и лактофферина как маркеров острого деструктивного процесса на основании достоверного повышения их уровня в сыворотке крови и экссудатах больных с острым холециститом, осложненным аппендицитом, острым распространенным перитонитом и перфоративной язвой.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При очистке Ф рекомендуется использовать сочетание методов гомогенизации и тепловой денатурации с ИХ на QAE сефадекс А-50 в восходящем градиенте ионной силы. При очистке Лф рекомендуется последовательное двухступенчатое высаливание сульфатом аммония: до 25% и 50% насыщенности. В качестве окончательного этапа очистки Лф рекомендуется ИХ на ДЕАЕ сефадекс А-50 в восходящем градиенте ионной силы.

2. При получении антисывороток на Ф и Лф рекомендуется использовать высокоочищенные препараты этих белков с последующим ее истощением лиофилизированной плазмой на Bio-Gel 300.

3. Внедрить в лаборатории хирургических клиник и отделений способ иммунохимического количественного определения Ф и Лф и разработанные балльные критерии оценки как дополнительный показатель острого деструктивного процесса. При применении названных методов определения ферропротеинов пользоваться смоделированными калибровочными графиками.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Рамазанов, Магомед Валединович, Астрахань

1. Адамян, А.И., Гуляев, A.A., Иванина, Т.А. и др. Острофазный ответ.1997. №11. - С.8-10.

2. Алешкин, В.А., Новикова, Л.И., Лютов, А.Г. и др. Белки острой фазы и их клиническое значение. Клин.мед. 1988. - №8. - С.39-48.

3. Андреева А.П., Левина A.A., Кудрявцева Л.М. и др. Диагностическая значимость определения содержания ферритина в сыворотке и эритроцитах у больных гомозиготной ß-талассемией // Гематология и трансфузиология. 1986. - № 3. - С. 12-15.

4. Андреева А.П., Левина A.A., Цимбульская М.М. и др. Обмен железа при приобретенных предлейкозных дизэритропоэзах // Гематология и трансфузиология. 1986. - № 4. - С. 12-16.

5. Арапова Г.С., Еремин А.Н., Метелица Д.И. Пероксидазная активность ферритина в обращенных мицеллах аэрозоля в гептане // Биохимия.1998. Т.63, - № 10. - С. 1400 -1409.

6. Ашмарин И.П. Молекулярная биология / Л. Издательство ленинградского университета. - 2007. - С.105-121.

7. Бабина, С. Е. Лактоферрин как полифункциональная гидролаза молока человека / Диссертация на соискание уч. ст. канд. хим. наук, Новосибирск. 2006.- 20 с.

8. Батов C.B., Вараксин В.В., Репин Л.Д. и др. Диагностическая значимость ферритина, как маркера некоторых онкологических заболеваний // Диагностические аспекты применения ИФА тест-систем «Roche»: мат-лы конф. М., 1996. - С. 62-68.

9. Белоус A.M., Конник А.Т. Физиологическая роль железа. Киев: Наукова думка, - 1991 - 104 с.

10. Бугланов A.A. Метаболизм железа и металлопротеиды (обзор) // Вопросы медицинской химии. 1988. - № 1. - С. 2-7.

11. Булганов A.A., Саяпина Е.В., Тураев А.Т. Биохимическая и клиническая роль железа // Гематология и трансфузиология. 1991. -№ 9. - С. 36-37.

12. Булычева Т.И., Мигунов В.Н., Щербинина С.П. и др. Сравнительный анализ содержания сывороточных иммуноглобулинов у больных гемохроматозом // InternationalJournalonlmmunorehabilitation. 1998. -№9.-С. 98-101.

13. Бурлев В.А., Коноводова E.H. Железодефицитные состояния у женщин в различные возрастные периоды// Русский медицинский журнал. 2007. - Т.15, - №3. - С.189-193.

14. Веремеенко К.Н., Волохонская Л.И. определение альфа2-макроглобулина в сыворотке крови человека и его клиническое значение. - Лаб. дело. - 1999. - № 7. - С.394-397.

15. Власов, В.В. Эффективность диагностических исследований / В.В.Власов М. «Медицина». - 1988. - С. 36.

16. Воробьев В.Г., Трунова Е.М. Динамика уровня сывороточного (Ьешитина в оазные периоды течения острых лейкозов // Гематология1. Л. Л. ± X ± ±и трансфузиология. 1991. - №. 10.-С. 14-16.

17. Гаин Ю.М. Хулуп Г.Я., Завада Н.В. и др. Объективная оценка тяжестисостояния больных и прогноз в хирургии / Минск, 2005. -299 с.

18. Гайнуллина J1.X. Сравнительное иммунохимическое и физико-химическое изучение фетоплацентарных, сывороточных и тканевых белков человека и обезьян: Автореф. дисс. канд. биол. наук. -Астрахань, 2000. - С.24.

19. Гланц, С. Медико-биологическая статистика. Пер. с англ. / Гланц С. -М. «Практика». 1999. - 459 с.

20. Головин A.A., Конвай В.Д. Роль перекисного окисления липидов в патогенезе железодефицитных анемий // Вопросы медицинской химии. 1989. - №7. - С. 85-87.

21. Гриценко В.В., Давыденко В.В., Орловский П.И., Мягкова Л.М., Скоробогатых М.Г. Определение свободного гемоглобина в сыворотке крови реактивом азопираму больных после протезирования аортального клапана // Лаб. дело. №7. М. Медицина. 1988. - С.34-37.

22. Грязнова И.М., Борисенко С.А., Макаров О.В. Сывороточный ферритин и трофобластический глобулин при опухолях половых органов у женщин // Вопросы онкологии. 1990. - Т. 36, - № 2. - С. 181-187.

23. Дворецкий Л.И. Алгоритмы диагностики и лечения анемий // Русский медицинский журнал. 2003. - T.l 1, - №8. - С. 16-27.

24. Делекторская Л.Н., Пименова Л.М., Кадашева О.Г. Оценка диагностической информативности лабораторных тестов (методические рекомендации) // Клин.лабораторная диагностика. -1992.-№1/2.-С.49-59.

25. Дементьева И.И. Лабораторная диагностика полиорганной недостаточности // Клин.лаб. диагностика. 2005. - № 9. - С.8.

26. Демихов В.Г., Инякова Н.В., Морщакова Е.Ф. и др. Иммунный статус и обмен железа при туберкулезной инфекции у детей дошкольноговозраста // Гематология и трансфузиология. 2003. - Т. 48, - № 2. - С. 41-44.

27. Джумабаев Э.С., Асранов Ш.Я., Пахмурин И.Р. и др. Иммунный статус брюшной полости в условиях перитонеального сепсиса и методы его лимфатической коррекции // Вестник лимфологии. 2008. - №3. - С.9-10.

28. Дурманов Н.Д. Филимонов A.C. Диагностика и коррекция нарушений обмена железа в спорте высших достижений / Методические рекоминдации для врачей клубов. 2010. - С. 3.-10.

29. Ермолов A.C., Упырев A.B., Иванов П.А. Хирургия желчнокаменной болезни: от пройденного к настоящему // Хирургия. 2004. - №5. -С.9.

30. Ефимова М.Г., Щербакова И.С., Шушакова Н.Д. Трансферрин и ферритин модуляторы активности кальций -кальмодулинзависимой., Метелица Д.И., Арапова Г.С. Ферритин -биокатализатор окисления ароматических аминов // Биохимия. - 1996. -Т. 61,-№2.-С. 308-321.

31. Жидовинов A.A. Факторы риска и алгоритм прогнозирования осложнений послеоперационного периода у больных с острой хирургической патологией органов брюшной полости / Дис. . докт. мед.наук. Волгоград, -2007. - 312 с.

32. Зайчик А.Ш., Чурилов Л.П. Механизмы развития болезней и синдромов. СПб.: ЭЛБИ-СПб, - 2005. - 507 с.

33. Заяц Р.Г., Бутвиловский В.Э., Рачковская И.В., Давыдов В.В. Общая и медицинская генетика. Лекции и задачи / Серия «Учебники, учебные пособия». Ростов-на-Дону : Феникс, 2002. - 251 с.

34. Зборовский С.С, Щербинина С.П., Левина A.A. Диагностика наследственного гемохроматоза у больных с антигенами HLA-A1 и HLA-A1 и В8 // Гематология и трансфузиология. 2005. - № 1. - С. 39-41.

35. Золотницкая Р.П. Лабораторные методы исследования в клинике. Справочник / Под ред. В.В.Меньшикова. М. 1987. - С.107-109.

36. Зорин H.A., Жабин С.Г., Белогорлова Т.И., Архипова C.B. -Сравнительное изучение альфа2-макроглобулина и ассоциированного с беременностью альфа2-гликопротеина как возможных аналогов // Вопр. мед.хим. 1991. - №. 37(3). - С. 48-50.

37. Ивашкина С.Г., Немов В.В., Кораблев С.Б. и др. Динамика сывороточного ферритина при термической травме // Гематология и трансфузиология. 1997. - № 6. -С. 42-43.

38. Илюкевич Г.В, Смирнова Л.А. Ферропротёины как маркер системного воспаления при остром распространённом перитоните// Тезисы VIII Всероссийского съезда анестезиологов реаниматологов // Омская государственная медицинская академия. Омск: 2002. - С. 92-93.

39. Иммунохимия в клинической лабораторной практике / Под ред. A.M. Уорда, Дж. Т. Уичера. М.: Медицина, - 1981 - С. 132-138.

40. Исследование системы крови в клинической практике / Под ред. Г.И.Козинца, В.А.Макарова. М. 1997. - 192 с.

41. Камышников B.C. Справочник по клинико-биохимической лабораторной диагностике: в 2 т. Мн., Беларусь, - 2002. - Т.2, - 318 с.

42. Канышкова, Т. Г. Нуклеазные активности антител и лактоферрина молока человека // Дисс. канд. хим. Наук. Новосибирск 1999 . - 22 с.

43. Каплан М.А., Матвеенко Е.Г., Фесенко А.И. и др. О дефиците железа у здоровых молодых людей // Гематология и трансфузиология. 1986.-№ 1,-С. 25-29.

44. Казюкова Т.В., Левина A.A., Сергеева А.И., соавт. Феррокинетика и цитокины в раннем онтогенезе человека // Педиатрия. 2008. - Том. 87. -№1. - С. 8-15.

45. Кириленко Н.П. Комплексная оценка запасов железа в организме у женщин // Гематология и трансфузиология. 1992. - № 4. - С. 21-22.

46. Клиническая лабораторная аналитика в пяти томах под общей редакцией В.В. Меньшикова / T.I. М. Агат-Мед. - 2002. - 297 с.

47. Кокуева О.В. Диагностическая информативность компонентов желчи при хронических желчекаменных холециститах. Современные тенденции развития гастроэнтерологии. Тез. докл. научн.-практ. конф. Ижевск, 1995.-С. 91-92.

48. Колб, В.Г. Справочник по клинической химии / Колб В.Г., Камышников B.C. Минск. - 1982. - С.47-51.

49. Лабораторные методы исследования в клинике / Под ред. проф. В.В.Меньшикова М. Медицина. - 1987. - С.108-111.

50. Левина A.A., Андреева А.П., Замчий A.A. и др. Определение концентрации ферритина в сыворотке крови радиоиммунным методом // Гематология и трансфузиология. 1984. - № 5. - С. 57-60.

51. Левина A.A., Андреева А.П., Цибульская М.М. и др. Взаимосвязь между циркулирующими иммунными комплексами и ферритинов сыворотки при гиперсидерозах различной этиологии // Гематология и трансфузиология. 1991. - № 3. - С. 22-25.

52. Лубянова И.П. современные представления о метаболизме железа с позиции профпатолога // Актуальные проблемы транспортной медицины // 2010. - № 2(20). - С.33-36.

53. Лукина Е.А., Левина A.A., Козловская A.C. и др. Диагностическоезначение сывороточных показателей обмена железа у больныхзлокачественными и реактивными гистиоцитозами // Гематология и125трансфузиология. 1992. - № 4. - С. 5-8.

54. Лунев В. Е., Мельникова Я.И., Кошкин С.А. и др. Моноклональные антитела к ферритину селезенки человека. I. Получение и исследование взаимодействия с изоферритинами и апоферритином // Биохимия. 1993. - Т.58, - Вып.5. - № 5. - С. 745-757.

55. Мартюшова H.A., Мартюшов С.И., Солдатенко Н.В. и др. Результаты определения концентрации ферритина в сыворотке крови доноров // Гематология и трансфузиология. 1987. - № 11. - С. 62-63.

56. Маршалл В.Дж. Клиническая биохимия / Пер. с англ. под ред. Н.И.Новикова. М. BINOM. - 1999. - 359 с.

57. Маурер, Г. Диск-электрофорез : (Теория и практика электрофореза в полиакриламидном геле) / Г.Маурер М.: Мир. - 1971. - 250с.

58. Маянский Д. Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге. Новосибирск, -1989.-344 с.

59. Медицинская лабораторная диагностика (программы и алгоритмы): справочник / Под ред. А.И. Карпищенко. СПб.: Интермедика, -2001.-544 с.

60. Мельникова Я.И., Лунев В.Е., Прейгерзон В.А. и др. Моноклональные антитела к ферритину селезенки человека. II. Локализация эпитопов и количественные параметры связывания антигена // Биохимия. 1993. - Т. 58, - Вып. 5. - № 5 - С. 759-771.

61. Метелица Д.И., Арапова Г.С. Ферритин биокатализатор окисления ароматических аминов // Биохимия. - 1996. - Т. 61, - № 2. - С. 308321.

62. Метелица Д.И., Арапова Г.С., Еремин А.Н. Инициирование радикалов в биохимических системах: ферритин гидропероксиды ароматических аминов // Биохимия. - 1997. - Т. 62, - № 4. - С. 460470, 32,61,62.

63. Милованов А.П. Патология системы мать-плацента-плод. М.: Медицина, 1999. - 446 с Морщакова Е.Ф., Павлов А.Д. Регуляция гемостаза железа // Гематология и трансфузиология. - 2003. - Т. 48, -№ 1.-С. 36-39.

64. Милованов А.П. Патология системы мать-плацента-плод. М.: Медицина, - 1999. - С. 446 61, 62.

65. Минаев С. В., Исаева А. В., Обедин А. Н., и др.,С реактывный белок -главный маркер динамики течения острых воспалительных процессов в клинических условиях // Медицинский вестник северного Кавказа -2011.-№2.-С. 95-98.

66. Мирошников В.М. Острофазовый белок зоны беременности в диагностической оценке термических поражений кожи // Вопросы медицинской химии. 1989. - № 3. - С. 108-111.

67. Митерев Ю.Г., Назаретян М.К., Андреева А.П. и др. Ферритин: структура, функция и клинические аспекты // Гематология и трансфузиология. 1983. - № 6. - С. 38-44.

68. Морщакова Е.Ф., Павлов А.Д. Регуляция гемостаза железа // Гематология и трансфузиология. 2003. - Т. 48, - № 1. - С. 36-39.

69. Мурашко A.B., Аль Сейкал Т.С. Железодефицитные состояния при беременности // Гинекология. - 2004. - № 3. - С. 144-147.

70. Мусаева М.Д. Значение допплеровских методик исследования в диагностике заболеваний желчного пузыря.: Автореф. дис. канд. мед.наук. М., - 1997. - 21 с.

71. Наджар М.Х., Матвеев Ю.Г., Долгов В.В. и соавт. Лабораторные маркеры системного воспалительного ответа при оптимизации искусственного кровообращения // Клин.лабор. диагностика. 2007. -№ 1,-С. 19-22.

72. Назаренко ГИ, Кишкун АА. Клиническая оценка результатовлабораторных исследований. М., Медицина,- 2000. - С. 544.

73. Назаров, П.Г. Реактанты острой фазы воспаления. СПб.: Наука, 2001.-423с.

74. Назаров П.Г. Врожденный иммунитет и защита от инфекций // Russ. J. Immunol. 2005. - Vol. 9, № 2. - P. 51-55.

75. Неорганическая химия: в 2 т. Пер. с англ. / М.Е. Вольпина, К.Б. Яцимирского. М., - 1978. - Т.1, - С. 300-328,

76. Никулина Д.М. Иммунохимическое, физико-химическое и клиническое изучение бета 1-глобулина "зоны беременности" // Автореф. дисс. канд. мед.наук. - Астрахань. - 1977. - 20 с.

77. Никулина Д.М. Минорный белок сыворотки крови связанный с беременностью альфа2-гликопротеин: теоретические и практические аспекты / Автореф. . дис. докт. мед. наук. - Москва. - 2009. - 44 с.

78. Никулина Д.М. Практическое освоение иммунохимических методов / Д.М. Никулина. Астрахань, - 1991. - 36с.

79. Никулина Д.М. Биологическая роль и диагностический диапазон белков беременности //Материалы конференции молодых ученых с международным участием «Белки-маркеры патологических состояний». Астрахань-Москва. - 2001. - С. 89-101.

80. Никулина Д.М., Белопасова H.A. Иммунохимические тесты риска воспалительных заболеваний // Лабораторное дело. 1991. - № 1. - С. 24-27.

81. Орлова Е.А.Клинико-диагностическое значение исследованийлактоферрина при острых и хронических неспецифических воспалительных заболеваниях легких: Автореф. дисс. . канд. мед.наук. Астрахань, 1997. - 22 с.

82. Островская JI.K. Железо в растительном мире и карбонатный хлороз Киев.: Наукова думка. 1993. - 48 с.

83. Остерман JI.A. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот. Электрофорез и ультрацентрифугирование. / М.: Наука, 1981. -С.288.

84. Остерман, J1.A. Хроматография белков и нуклеиновых кислот // М. Наука. / Л.А.Остерман 1985. - С.115-167, 301-314.

85. Остерман, Л.А. Исследование биологических макромолекул электрофокусированием, иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами / Л.А.Остерман М. Наука. - 1983. - 418 с.

86. Панцырев Ю.М., Рябов В.И., Ноздрачев В.И. Диагностика острого деструктивного панкреатита // Клиническая медицина. 1981. - № 1.- С. 40-45.

87. Парамонов, А.Д., Моисеев, C.B., Фомин, В.И. и др. Ферритин и другие белки острой фазы при различных формах ишемической болезни сердца. Клин.мед. 2005.-№ 2. - С.25-29.

88. Патологическая анатомия: в 2 т. / М.А. Пальцев, Н.М. Аничков. М.:- Медицина, 2000. Т. 1, - 528 с.

89. Петров В. Н. Физиология и патология обмена железа. Л.: Наука, -1982.-223с.

90. Петрова О.В., Коханов A.B., Лапин A.A. и соавт. Уровни ферритина в тканях больных с алкогольной болезнью // Вопросы наркологии. -2008.-№5.-С. 54-57.

91. Петухов В.И., Быкова Е.Я., Бондаре Д.К. и др. Сывороточный ферритин в диагностике железодефицитных состояний // Гематология и трансфузиология. 2003. - Т. 48, - № 2. - С.36-37.

92. Плоткин Л.Л. Клиническое значение определения маркеров воспаления у пациентов с абдоминальным сепсисом /Л.Л. Плоткин //Вестник хирургии им. H.H. Грекова. 2007. -Т. 166.-№ 2. - С.40-43.

93. Получение и исследование взаимодействия с изоферритинами и апоферритином // Биохимия. 1993. - Т.58, - Вып.5. - № 5. - С. 745757.54.

94. Прейгерзон В.А., Лепешева Г.И., Чейкина A.B. и др. Антитела, меченные изотопной и ферментной метками в иммунометрическом анализе ферритина // Иммунология. 1990. - № 1. - С. 64-66. 51, 54, 59, 85.

95. Румянцева А.Г. и Ю.Н.Токарева. Болезни перегрузки железом (гемохроматозы). / Под ред. А.Г. Румянцева и Ю.Н.Токарева М: ИД Медпрактика - М, - 2004, - 325 с. 6, 7.

96. Рупперт И., Кузьмина Н. Быстрое получение результатов: высокотехнологичные простые тест-системы для исследований по месту лечения // Клиническая лабораторная диагностика. 2008. - № 9. -С.З.

97. Савенков М.С. Малоснмптомный острый деструктивный холецистит: комплексный мониторинг и оптимизация лечебной тактики: Автореф. дис. . кан. мед.наук. Астрахань, -2006. - 22 с.

98. Семенов Б.Ф., Ахматова Н.К., Киселевский М.В. и др. // Клеточные и молекулярные события при введении поликомпонентной бактериальной вакцины и заражении 8а1топе1ЫурЫтигшт //Молекулярная мед. 2005 - № 4 - С. 48-533.

99. Семенов Б.Ф., Зверев В.В. Концепция создания быстрой иммунологической защиты от патогенов // Журн. Микробиол. 2007 -№ 4 - С. 93-100.

100. Сеттарова Д.А., Донсков С.И., Манишкина Р.П. и др. Возможность нетрансфузионного гемосидероза при (3-талассемии, обусловленного ассоциацией с гемохроматозом, сцепленным с НЬА // Гематология и трансфузиология. 1990. - № 3. - С. 16-18.

101. Справочник по лабораторным методам исследования / Под ред. Л.А. Даниловой. СПб.: Питер, - 2003. -736 с.

102. Стародуб Н.Ф., Назаренко В.И. Гетерогенная система гемоглобина: структура, свойства, синтез, биологическая роль / АН УССР, Ин-т молекулярной биологии и генетики. Киев: Наукова думка, 1987. -С.198 .

103. Ступникова, С.К. Выделение и исследование белков / С.К.Ступникова, Т.В.Токарева, И.К.Миронова // Издательство СГУ. -1982. -С.23-31.

104. Сумная, Д.Б., Кучин, Д.Г. Роль металлопротеидов (ферритина и церулоплазмина) в диагностике менингита в остром периоде черепно-мозговой и черепно-лицевой травмы. Нейроиммунология. 2005. -№3. - С.12-13.,

105. Сухарев А.Е., Трубников Г.А., Ничога В.Д. Клинико-диагностическоезначение изучения содержания ферритина в сыворотке крови и мокроте при легочной патологии // Терапевтический архив. 1991. -№ 12.-С. 30-34.

106. Татаринов Ю.С., Масюкевич В.Н., Меснянкина Н.В., Парфенова Л.Ф. Иммунохимическая идентификация нового альфа2-глобулина в сыворотке крови беременных женщин // Акуш. и гинек. 1970. - № 9. - С. 25-28.

107. Титов В.Н. Диагностическое значение повышения уровня С-реактивного белка в «клиническом» и «субклиническом» интервалах // Клиническая лабораторная диагностика. 2004. - № 6. - С. 3-10.

108. ИЗ. Федорова М.В., Калашникова Е.П. Плацента и ее роль при беременности. М.: Медицина, 986 - 252 с.

109. Фофанова И.Ю.Обоснование и результаты лечение железодефицитной анемии у беременных с применением витаминно-минерального комплекса // Гинекология. 2002. - № 2. - С. 86-88.

110. Хаитов Р. М. Иммунология: учебник для студентов медицинских вузов/ М.: ГЕОТАР-Медиа, 2006. -320 с.

111. Хирургические инфекции: руководство / Под ред. И. А. Ерюхина, Б. Р. Гельфанда, С. Л. Шляпникова.-СПб: Питер, 2003. 864 с.

112. Худова С.Ю., Щербинина С.П., Мигунов В.Н.и др. Исследование влияние индукторной роли железа на динамику показателей содержания иммуноглобулинов в сыворотке крови больных гемохроматозом // Гематология и трансфузиология. 2001. - № 2. - С. 33-36.

113. Чанакчи Ч., Чичек Я., Чанакчи В. Активные формы кислорода и воспалительные процессы в зубах человека // Биохимия. 2005. - Т. 70,-№6.-С. 751-761.

114. Шевченко Н.Г., Марцишевская Р.Л. Клинико-диагностическое значение определения железа // Лаб. дело. 1. - М. Медицина. - 1983.1321. С.52-56.

115. Шиффман Ф.Дж. Патофизиология крови : пер. с англ. / М. : БИНОМ ; СПБ. : Невский диалект, 2000. - 448 с.

116. Щербинина С.П., Зборовский С.С., Романова Е.А. и др. Изменение показателей обмена железа в зависимости от типа мутаций гена гемохроматоза HFE // Гематология и трансфузиология. 2005. - № 2.- С. 36-40.

117. Энциклопедия клинических лабораторных тестов / Под ред. Н.У.Тица.- М. Лабинформ. 1997. - С.124-136, 418-420.

118. Эфроимсон, В.П. Введение в медицинскую генетику / В.П. Эфроимсон М. Медицина. - 1998. - С.124-139.

119. Andrews N. С. Forging a field: the golden age of iron biology / Blood. 2008, V. 112, - №. 2. - P. 219-230.

120. Andrews N. Disorders of iron metabolism. N Engl J Med 1999; 341: 19861995.

121. Arbelaez L., Bergmann U., Tuuttila A., Shanbhag V., Stigbrand T. -Interaction of Matrix Metalloproteinases-2 and-9 with Pregnancy Zone Pritein and a2-Macroglobulin // Archives of Biochemistry and Biophysics.- 1997. V.347,- №. 1. - P. 62-68.

122. Arnold, D., Di Biase, A.M., Marchetti, M., Pietrantoni, A., Valenti, P., Seganti, L., Superti, F. Antiadenovirus activity of milk proteins: lactoferrin prevents viral infection // Antiviral Res. 2002. - №53(2). - P. 153-158.

123. Arosio P., Levi S., Gabril E. Ferritins and Isoferritins as Biochemical Markers // Amsterdam. 1984. -P. 33-47

124. Beaumont C., Lenenve P., Devauxl. et al. Mutation in the iron responsive element of the L ferritin mRNA in a family with dominant hyperferritinaemia and cataract // Nat. Genet. 1995. - V. 11, - № 4. - P. 444-446.

125. Beljaars B.W, Molema G., Harmsen M.C., Meijer D.K. Antiviral activities133

126. Berne B.H. Alpha2-pregnoglobulin a unigue macroglobulin in pregnancy, contraception and cancer // Fed. Proc. - 2003.-V.32/3, -P.677.

127. Beutler E, Hoffbrand AV, Cook JD. Iron deficiency and overload.//Hematology Am Soc Hematol Educ Program. 2003. -V.40, -P.61.

128. Bezwoda W., Derman D., Bothwell T.et al. Significance of serum concentrations of carcinoembryonic, ferritin and calcitonin in breast cancer // Cancer. 1981. - V. 48, - P. 1623.

129. Birgens, H. Lactoferrin in plasma measured by an ELISA technique: evidence that plasma lactoferrin is an indicator of neutrophil turnover and bone marrow activity in acute leukaemia (1985) Scand. J. Haematol., V.34(4), P. 326-331.

130. Bohn H. Biochemistry of Placental Proteins // Proteins of the placenta: 5th Intern.Congress of Placental Proteins. Annecy. - Basel. - 1995. - P.l-25.

131. Buerke U., Schneider J., Rijsler J., H.J. Woitowitz H. J. Interstitialpulmonary fibrosis after severe exposure to welding fumes.// Am. J. Ind. Med. 2002. V.41, - P. 259-268.

132. Bullock S., Bomford A., Williams R. A biochemical comparison of normal human liver and hepatocellular carcinoma ferritins // Biochem.J. 1980. -V. 185, -№3.- P. 639 -645.

133. Cadet E., Gadenne M., Capront D., Rochette J. Donnes recentes sur metabolisme du fer: un etat de transition // La revue de medecine interne. -2005.-P. 315-324.

134. Cairo G., Tacchini L., Pogliaghi G. et al. Induction of ferritin synthesis by134oxidative stress. Transcriptional and posttranscriptional regulation by expansion of the "free" iron pool // J. Biol. Chem. 1995. - V. 270, - №2. -P. 700-703.

135. Caskey J.H., Jones C., Mills K.H.G. et al. Human ferritin gene is assigned to chromosome 19 // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1983. - V. 80, - №2. - P. 482-486.

136. Cioffi M., Fratta M., De-Lucia D. et al. A retrospective study of the serum CEA, AFP, TPA and ferritin value in 500 patients chronic liver diseases // Arch. Monaldi. Mai. Torace. 1990. - V. 45, -№ 3. - P. 159-165.

137. Crichton R.R. Ferritin: structure. Synthesis and function // New Engl. J. Med. 1971.-P. 1413-1422.

138. Das M.R., Padhy L.C., Koshy,R., Sirsat S.M., Rich M.A. Human milk samples from different ethnic groups contain RNase that inhibits, and plasma membrane that stimulates, reverse transcription. Nature. 1976. -P.262, 802-805.

139. De Sousa M., Smithyman A.M., Tan C.T.C. Suggested model of ecotaxopathy in lymphoreticular malignancy. The role of iron binding proteins in the control of lymphoid cell migration // Am. J.Pathol. 1978. -V. 90, - P. 497.

140. Deugnier Y., Moirand R., Guyader D. Diagnosis of hyperferritinemia // Ann-Biol-Clin-(Paris). 1998. - № 56. - P. 41-43.49, 100, 105, 107, 137.

141. Devi A.S., Das M.R., Pandit M.W. Lactoferrin contains structural motifs of ribonuclease. Biochim. Biophys. Acta. 1994. - V. 1205(2), P275-281.

142. DeVita L., Balisteri C.R., Arcolio F. et al. Systemic inflammatory response in elderly patients following hernioplastical operation. Immun. Ageing. -2006.-P. 29; 33.

143. Devriendt K., Van-Der-Berdhe H., Cassiman J.J., Maeynen P. Primary structure of pregnancy zone proterin. Molecular cloning of a full-length135

144. PZP cDNA clone by the polymerase chain reaction // Biochim. Biophys. Acta. 1991.-P.95-103.

145. Dufauk B., Hoederath A., Heck H. et al. Einflu beta von körperlicher betastung und training auf das serum ferritin // Deutsche Zeitschrift fur Sportmedizin. 1980. - № 9. - P. 253-261.

146. Epsztejn S., Kakhlon O., Glickstein H. et al. Fluorescence analysis of the labile iron pool of mammalian cells // Anal. Biochem. 1997. - V. 248, -P. 31-40.

147. Fahey J.L., McKelvey E.M. Quantitative determination of serum immunologlobulins in antibody-agar plates // J. Immunol. 1965. -P.84-90.

148. Farnaud S., Evans R.W. Lactoferrina multifunctional protein with antimicrobial properties // Mol. Immunol. 2003. - V. 40(7), - P 395-405.

149. Frenoy J.P., Bourrillon R. Human a2-macroglobulin: time dependent degradation under denaturating conditions // Biochimie. - 2000. - №7. -P.497-507.

150. Frenoy J.P., Razafimahaleo E., Bourrillon R. Etudes sur la structure de 1 a2-macroglobuline humain // Biochim. Biophys. Acta. - 2002. - V 257, -№1. - P.111-121.

151. Fujihara T., Hayashi K. Lactoferrin inhibits herpes simplex virus type-1 (HSV-1) infection to mouse cornea. 1995. - №140 - P. 1469-1472.

152. Furmanski P., Li Z.P., Fortuna M.B., Swamy C.V., Das M.R., Multiple molecular forms of human lactoferrin. Identification of a class of lactoferrins that possess ribonuclease activity and lack iron-binding capacity. 1989. - P.415-429.

153. Gackowski D., Ciecierski M., Jawien A. et al. Background level of 8-oxo-2-deoxyguanosine in lymphocyte DNA does not correlate with concentration of antioxidant vitamins in blood plasma // Acta Biochim. Polon. 2001. - V. 48, - P. 535-539.

154. Giansanti F., Rossi P., Massucci M.T., Botti D., Antonini G., Valenti P., Seganti L. Antiviral activity of ovotransferrin discloses an evolutionary strategy for the defensive activities of lactoferrin. Biochem. Cell Biol., -2002.-V. 80(1),-P. 125-130.

155. Gion M., Mione R., Dittadi R. et al. Carcinoembryonic antigen, ferritin, and tissue polypeptide antigen in serum and tissue // Cancer. -1986. -№ 57. P. 917-922.

156. Goswami T, Rolfs A, Hediger MA. Iron transport: emerging roles in health and disease. //Biochem Cell Biol. 2002. - V.80(5), P.679-89.

157. Granick S. Iron metabolism. // Bull. New. York Acad. Med. 1954. -V. 31,-P. 81-88.

158. Halliday J., Powell L.W. Ferritin metabolism and liver // Seminars in liver disease. 1984. - V.4, - № 3. - P. 207-216.

159. Harada T., Baba M., Torii G. et al. Ferritin selectively suppresses delayed type hypersensitivity responses at indication or effectors phase // Cellular. Immunology. 1987,-V. 109,-P. 75-88.

160. Harding, J.C., Baarsch, M.J., Murtaugh, M.P. et al. Association of tumor necrosis factor and acute phase reactant changes with post arrival disease in swine. Zentraibl Veterinarmed. 1997. - V. 44, - P. 405-413

161. Kawai, T. Inflammatory markers, especially the mechanism of increased CRP. Rinsho Biori. 2000. - V. 48, - № 8. - P. 719-721.

162. Harpel P.S. Human a2-macroglobulin // Ed. L. Lorand. - New York. -Acad. Press. - 1995. - № 45. - P.639-653.

163. Harrison P.M., Arosio P. The ferritins: molecular properties, iron storage function and cellular regulation // Biochim. Biophys. Acta. -1996. V. 1275, - № 3. - P. 161-203.

164. Haverback B.J., Dyce В., Bundy H.F. Protein binding of pancreatic proteolytic enzymes // J. Clin. Invest. - 1962. - V.41, - №5. - P.942-980.

165. Hazard J.t., Drysdale J.W. Ferritinaemia in cancer // Nature. 1977. - V. 265,-P. 755.9, 24, 58, 74, 100, 123, 129, 166.

166. Hentze MW, Muckenthaler MU, Andrews NC. Balancing acts: molecular control of mammalian iron metabolism. Cell 2004. - P. 117:285-297;

167. Hollan S. Риск неоправданного назначения железа // Патология эритрона и метаболизма железа: 2-й Международный симпозиум. -Рязань. 1995.-С. 72-73.

168. Hörne C.H.W., Gerne L.M., Armstrong S.S., Brunt P.W., Nowat N., Sinclair T.S. Deficiency of serum "pregnancy-associated" a2-glucoprotein association with desease // J. Clin. Pathol. - 2006. -V.39, -№2. - P.195-198.

169. Iron and human disease, //ed. By Randall BnLauffer CRC Press, Boca Raton Ann Arbor London Tokio. -1992. - P.534 .

170. Ito H., Takag Y., Ando Y. et al. Serum ferritin levels in patients with cervical cancer // Obstet, and Gynecol. 1980. - V. 55, - № 3. - P. 358362.7,61,65,70, 81, 83, 164.

171. Jacobs A. La ferritina // Haemotologica. 1981. -V. 66, - № 2. - P. 133140.40, 74, 173.

172. James K. a2-macroglobulin and its possible importanse in immune systems // Trends Byochem. Sei. - 1990. - V.5,- №2. - P.43-47.

173. Kanyshkova, T.G., Semenov, D.V., Buneva, V.N., Nevinsky, G.A. Human milk lactoferrin binds two DNA molecules with different affinities. (1999) FEBS Lett., 451, 235-237.

174. Kemna E., Pickkers P., Nemeth E. et al. Time course analisis of hepcidin, serum iron and plasma cytokine levels in humans injected with LPS. Blood. 2005; 106 (5): 1864-1866.

175. Knekt P., Reunanen A., Takkunen H. et al. Body iron stores and risk of cancer // Int. J. Cancer. 1994. - V. 56, - P. 379-382.

176. Kuczynsky I.W. Badania immunochemiscene pod bialkien ciazowym // Prase Komis. Med. Doswiadcz. Rosn. Towazzi. Przyiac. Naur. - 1999. -№.39.-P. 165.

177. Kulnigg S., Gasche C. // Aliment. Pharmacol. Ther. 2006. - V. 24, - P. 1507-1523.

178. Levay P.F., Viljoen, M. Lactoferrin: a general review // Haematologica., -1995. V. 80(3), P. 252-267.

179. Levi S., Corsi B., Bosisio M. et al. A human mitochondrial ferritin encoded by intronless gene // J. Biol. Chem. 2001. - V. 270, - № 27. - P. 24437-24440.

180. Lim C.T., Wong K.S., Foo M.W. The impact of topical mupirocin on peritoneal dialysis infection in SingaporeGeneralHospital // Nefrol. Dial. Transplant. -2005. V. 26(8), - P. 365-368.

181. Lin F., Girotti A.W. Hemin-enhanced resistance of human leukemia cells to oxidative killing: antisense determination of ferritin involvement // Arch. Bioch. Biophys. 1998. - V. 352, - № 1. - P. 51-58.

182. Lohman T.M. Kinetics of protein-nucleic acid interactions: use of salt effects to probe mechanisms of interaction. // CRC Crit. Rev. Biochem., -1986. V.19(3), - P191-245.

183. Mantel, C., Miyazawa, K., Broxmeyer, H.E. Physical characteristics and polymerization during iron saturation of lactoferrin, a myelopoietic regulatory molecule with suppressor activity // Adv. Exp. Med. Biol.,1994.-V. 57, P.121-132.

184. Masci, J.R. Complete response of severe, refractory oral candidiasis to mouthwash containing lactoferrin and lysozyme. 2000. - V. 14(15), - P. 2403-2404.

185. Mickisch O., Baniewicz W., Lutz-Vorderbrugge A. et al. // Gastroenterol.2002. №. 40. - P. 241—248.

186. Munoz-Bongrand N., Panis Y., Soyer P. et al. Serial computed tomography is rarely necessary in patients with acute pancreatitis: a prospective study in 102 patients. 2001. - № 193(2). - P. 146-152.

187. Muramatsu S. Shortening of the peroid of primary immuneresponse by the prior injection of Freunde's adjuvants // Nature. 2005. - V.201, - № 4924.-P. 1141.

188. Nelson R.L., Davis F.G., Sutter E. et al. Body iron stores and risk of colonic neoplasia // J. Natl. Cancer Inst. 1994. - V. 86, - P. 455-460.

189. Nguyen N. B., Callaghan K. D., Ghio A. J., Haile D. J., Yang F. Hepcidin expression and iron transport in alveolar macrophages.// Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 2006. - №. 291(3). - P.417.

190. Odell, E.W., Sarra, R., Foxworthy, M., Chappie, D.S., Evans, R.W. Antibacterial activity of peptides homologous to a loop region in human lactoferrin. 1996. - P. 175-178.

191. Orino K., Lehman L., Tsuji Y. et al. Ferritin and the response to oxidative stress // Biochem. J. 2001. - V. 357(Ptl), - P. 241-247.

192. Oudin, G. Method d'analyse immunochimigue par precipitación specifigue en milien gelifie // Compt. Rend. Acad. Sci. 2006. V.222, - P. 195.

193. Perry H. M., Tipton I. A., Schroeder H. A. et al. Variability in the metal content of human organs // J. Lab. a. Clin. Med. -1962. V. 60, - № 2. -P. 243-253.

194. Perutz M.F. Molecular Anatomy, Physiology, and Pathology of Hemoglobin / Molecular Basis of Blood Diseases. Ed. C. Stammatagayanopoulus et al. Philadelphia: Saunders, 1987. P.349 .

195. Pippard M.J., Tikerpae J., Peters T.J. Ferritin iron metabolism in the rat liver // Br. J. Haematol. 1986. - V. 64, - № 4. - P. 839-842.

196. Ponka P. Cellular iron metabolism // Kidney International. 1999. - V. 55, -P. 2-11.

197. Ponka P. Iron metabolism: Physiology and pathophysiology // J. Trace Elem. Exp. Med. 2000. - V. 13, - P. 73-93.

198. Randall BnLauffer Iron and human disease. // CRC Press, Boca Raton Ann Arbor London Tokio. -1992. - P. 534.

199. Renji Reghunathan, Manikandan Jayapal, Li-Yang Hsu, Hiok-Hee Chng, Dessmon Tai, Bernard P Leung and Alirio J Melendez Expression profileof immune response genes in patients with Severe Acute Respiratory Syndrome // BMC Immunol. 2005. - № 6. - P. 2.

200. Rogers J., Munro H.Tranlation of ferritin light and heavy subunit mRNAs is regulated by intracellular chelatable iron levels in rat hepatoma cell // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1987. - V.84, - P. 2277-2281.

201. Rosenmund, A., Kuyas, C., Haeberli, A. Oxidative radioiodination damage to human lactoferrin // Biochem. J., 1986 - P. 240, 239-245.

202. Rucker P., Torti F.M., Torti S.V. Role of H and L subunits in mouse ferritin // J. Biol. Chem. 1996. - V. 271, - № 52. - P. 33352-33357.

203. Schmielau J., Finn O.J. Activated granulocytes and granulocyte-derived hydrogen peroxide are the underlying mechanisms of suppression of T-cell function in advanced cancer patients // Cancer Res. 2001. - V. 61, - P. 4756-4760.

204. Schoultz B., Stigbrand T. Purification of the "pregnancy zone" protein // Acta. Obstet. Gynec. Scand. 1993. - V.52, - P.51-54.

205. Shongwe, M.S., Smith, C.A., Ainscough, E.C., Baker, H.A., Brodie, A.M., Baker, E.N. Anion binding by human lactoferrin: results from crystallographic and physicochemical studies // Biochem. J., 1992. - P. 31, 4451-4458.

206. Sojar, H.T., Hamada, N., Genco, R.J. Structures involved in the interaction of Porphyromonas gingivalis fimbriae and human lactoferrin. -1998. P. 422, 205-208.

207. Stevens R.G., Graubard B.I., Micozzi M.S. et al. Moderate elevation of body iron level and increased risk of cancer occurrence and death // Int. J.

208. Cancer. 1994. - V. 56, - P. 364-369.

209. Stevens R.G., Jones D.Y., Micozzi M.S. et al. Body iron stores and the risk of cancer // N. Engl. J. Med. 1998. - V. 319, - P. 1047-1052.

210. Strong S.A., Pizarro T.T., Klein J.S. et al. // Gastroenterology. 1998. - V. 114,-P. 1244-1256.

211. Svensson, B. Protein engineering in the alpha-amylase family: catalytic mechanism, substrate specificity and stability. Plant. Mol. Biol., 1994. P.25, 141-157.

212. Takakura, N., Wakabayashi, H., Ishibashi, H., Teraguchi, S., Tamura, Y., Yamaguchi, H., Abe, S. Oral lactoferrin treatment of experimental oral candidiasis in mice // Antimicrob. Agents Chemother. 2003. - V.47(8), -P. 2619-2623.

213. Torti F.M., Torti S.V. Regulation of ferritin gene and protein // Blood. -2002.-V. 99, -№ 10. P. 3505-3516.

214. Tsuji Y., Ayaki H., Whitman S.P. et al. Coordinate transcriptional and regulation of ferritin in response to oxidative stress // Mol. Cell. Biol. 2000. - V. 20, - № 16. - P. 5818-5827.

215. Beljaars B.W., Molema L. G., Harmsen, M.C., Meijer, D.K. Antiviral activities of lactoferrin // Antiviral. Res., 2001. -№. 52(3),P.225-239.

216. Wagner V., Wagnerowa M. Significance of immuno- reactive a2-macroglobulin in health and disease // Cas. Lec. Ces. - 1997. - V.116, -№19. - P.580-583.

217. Wakabayashi, H., Uchida, K., Yamauchi, K., Teraguchi, S., Hayasawa, H., Yamaguchi, H. Lactoferrin given in food facilitates dermatophytosis cure in guinea pig models // J. Antimicrob. Chemother. 2000.-V.46(4), - P. 595-602.

218. Weinberg E.D. The role of iron in cancer // Eur. J. Cancer Prevent. 1996. - V. 5, - P. 202, 203, 213, 214, 225.

219. Weiss G., Goodnough L.T. // New Engl. J. Med. 2005. - V. 352, - P. 1011-1023.

220. Xanthou, M. Immune protection of human milk // Biol. Neonate. 1998 -P.74, 121-133.

Информация о работе

Рамазанов, Магомед Валединович
кандидата биологических наук
Астрахань, 2012
ВАК 03.01.04

Диссертация

Сравнительное биохимическое и иммунохимическое изучение тканевых и сывороточных железосодержащих белков - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы