Иммунохимические показатели в клинической оценке черепно-мозговой и скелетной травмы

Коханов, Александр Владимирович

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Иммунохимические показатели в клинической оценке черепно-мозговой и скелетной травмы
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Иммунохимические показатели в клинической оценке черепно-мозговой и скелетной травмы"

На правах рукописи

Коханов Александр Владимирович

ИММУНОХИМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ В КЛИНИЧЕСКОЙ ОЦЕНКЕ ЧЕРЕПНО-МОЗГОВОЙ И СКЕЛЕТНОЙ ТРАВМЫ

03.00.04.— Биохимия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

' 3 Л /7 Р 23

Москва — 2009

003466905

Работа выполнена в государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Астраханская государственная медицинская академия Федерального агенства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный консультант:

член-корреспондент РАМН, доктор медицинских наук, профессор

Терентьев Александр Александрович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор ФГУ «НИИ трансплантологии и искусственных органов Росздрава».

доктор медицинских наук, профессор ГОУ ВПО РГМУ Росздрава

Шевченко Ольга Павловна

Ивков

Николай Николаевич

доктор медицинских наук, профессор Сучков

ГОУ ВПО МГМСУ Росздрава Сергей Викторович

Ведущая организация: - ФГУ «Научно-исследовательский институт физико-химической медицины Федерального агенства по здравоохранению и социальному развитию» Адрес: 119992, Москва, ул. Малая Пироговская, д. 1а.

Защита диссертации состоится «_» _2009 г. в _ часов на

заседании Диссертационного Совета Д.208.072.01 при ГОУ ВПО «Российский государственный медицинский университет Федерального агенства по здравоохранению и социальному развитию» по адресу: 117997, Москва, ул. Островитянова, 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО РГМУ по адресу: 117997, ул. Островитянова, 1)

Автореферат разослан «_»_2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор медицинских наук,

профессор

П.К. Джанашия

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. За последние 5 лет летальность от дорожно-транспортных происшествий в РФ увеличилась на 65% и число погибших, по данным ГИБДД, достигает 33-35 тыс. человек в год [Багненко С.Ф. и соавт., 2008; Соколов В.А. и соавт., 2008]. Травма, особенно черепно-мозговая (ЧМТ) и политравма, остаётся одной из ведущих причин смертности и иывалидизацип населения [Шапот Ю.Б. и соавт., 2002; Агаджанян В.В., 2003; Гаврилин C.B. и соавт., 2006], а у лиц, не достигших 40 лет, тяжелая сочетанная травма занимает первое место среди причин смерти [Краснов А.Ф., Соколов В.А., 1995; Бондаренко A.B. и соавт., 2004; Соколов В.А., 2006].

Отдельной проблемой социального и медицинского характера является высокая взаимосвязь травматизма с состоянием алкогольной интоксикации пострадавших [Шабанов П.Д., Калишевич С.Ю., 1998; Демин А.К., Демина И.А., 2000; Пауков B.C. и соавт., 2001; Ельский A.B. и соавт., 2003; Цивинский А.Д. и соавт., 2003; Соколов В.А., 2006]. Интоксикация этанолом, обнаруживаемая у 35% пострадавших [Цеймах Е.А. и соавт., 2003], существенно утяжеляет течение травматической болезни и ухудшает ее прогноз.

Наиболее распространенным сочетанием при политравмах остается комбинация повреждений опорно-двигательного аппарата и головного мозга [Цеймах Е.А. и соавт., 2003; Соколов В.А., 2006]. Даже в случае изолированной ЧМТ легкой степени, на долю которой в структуре нейротравмы приходится от 60 до 80%, все более ощутимой становится ее социальная и экономическая цена [Лихтерман Л.Б. и соавт., 2000; Лебедев В.В., Крылов В.В., 2000; Куршакова И.В., 2006; Царенко C.B., 2006].

Несмотря на очевидные успехи медицинской науки по спасению и реабилитации контингента ранее обреченных больных, сохраняется высокий процент смертности и осложнений после тяжелых изолированных, множественных и сочетанных травм [Неговский В.А., Мороз В.В., 2000; Гуманенко Е.К., Сингаевский А.Б., 2004; Гаврилин C.B. и соавт.,2006; Царенко C.B., 2006].

Отсутствие заметного прогресса в лечении этой группы пострадавших привело в 90-х годах к пересмотру взглядов на патогенез травмы и возникновению концепции травматической болезни [Дерябин И.И., Насонкин О.О., 1987; Котельников Г.П., Чеснокова И.Г., 2002; Вашетко Р.В., 2003; Капинкин О.Г., Калинкин А.О, 2003; Селезнев С.А., Шапот Ю.Б., Багненко С.Ф., 2003]. Суть ее в том, что вызываемые травмой нарушения витальных функций и параметров гомеостаза носят закономерный пролонгированный характер и характеризуются однотипностью первичных аварийных регуляторных реакций и адаптационных синдромов, независимо от локализации повреждения [Флорикян А.К., 1999; Немченко Н.С. и соавт., 2001; Зайчик А.Ш., Чурилов Л.П., 2005; Астраков C.B., 2007; Кудлай Д.А., 2007].

С другой стороны известно [Шапот Ю.Б. и соавт., 1995; Лейдерман И.Н. и соавт., 1997; Соколов В.А., 2006; Царенко C.B., 2006], что изменения многих показателей аварийного метаболизма при ЧМТ отличаются от первичных аварийных регуляторных реакций, характерных для травмы другой локализации, в частности, опорно-двигательного аппарата (ОДА).

Для решения вопроса о клиническом значении сходства и различий аварийного метаболизма при ЧМТ и травме ОДА полезную информацию можно получить, применив чувствительные методы иммунохимического анализа [Зильбер Л.А., 1968; Петров Р.В., 1987; Нго Т., Ленхофф Г., 1988; Егоров A.M. и соавт., 1991], которые пока не находят распространения в ургентной медицине.

Исследования роли иммунохимических показателей в остром периоде травмы должны получить добавочный импульс еще и в силу того, что появление нанотехнологий уже привело к созданию новых экспресс-методов анализа [Биосенсоры, 1992; Дзантаев Б.Б. и соавт., 2003; Гвоздев А.Р., Гвоздев Р.И. 2003; Ермолов A.C. и соавт., 2008; Заседателев A.C. и соавт., 2008; Меньшиков В.В., 2008; Рупперт Й., Кузьмина Н. 2008; Morgan C.L. et al., 1996; Vikinge T.P. et al., 1998] (иммуносенсорьт, иммуночипы, количественные и качественные иммунохроматографические тесты, основанные на методах «сухой» химии), отвечающих потребностям медицины критических состояний [Зильбер А.П., 1995; Неговский В.А., Мороз В.В., 2000].

Однако, на сегодняшний день спектр иммунохимических тестов, диагностически и прогностически значимых для острого периода ЧМТ и травмы ОДА и пригодных для мониторирования состояния больных, не систематизирован [Немченко Н.С. и соавт., 2001; Верховский А.И. и соавт., 2003; Черный и соавт., 2003].

Неравномерно исследованы взаимосвязи отдельных белков со степенью выраженности основных синдромов травматической болезни (гипоксия, системный воспалительный ответ, коагулопатия, токсемия и т.д.) [Гуманенко Е.К. и соавт., 1999; Верховский А.И. и соавт., 2003; Куршакова И.В. и соавт., 2003; Мустафин Р.Д., 2004; Гаврилин C.B. и соавт., 2006; Матюшичев В.Б., Шамратова В.Г., 2006; Соколов В.А., 2006], не проводилось комплексного изучения взаимосвязи уровня и спектра белков сыворотки с количественной оценкой (в баллах) степени тяжести состояния пострадавших.

Вместе с тем, давно существует и постоянно пополняется широкий выбор маркерных белков для иммунохимического контроля воспалительных и иммунных реакций, септических осложнений, повреждения тканей и органной недостаточности [Долгов В.В., Шевченко О.П., 1997; Чехонин В.П. с соавт., 1999; Мороз В.В. и соавт., 2000; Назаров П.Г., 2001; Черешнев В.А., Гусев Е.Ю., 2001; Назаренко Г.И., Кишкун A.A., 2002; Галстян Г.М. и соавт., 2003; Лисков Л.В., 2003; Симбирцев A.C., 2004; Титов В.Н., 2004; Шевченко О.П. и соавт., 2005; Наджар М.Х. и соавт., 2007; Brunkhorst F.M. et al., 2000].

Роль других белков, таких как СБАГ, транскортин или ГПЦФ, в патогенезе травмы практически не исследована, очевидно, по причине

отсутствия на эти белки коммерческих тест-систем [Зорин H.A. и соавт., 2006; Сухарев А.Е. и соавт., 2006; БезрукавниковаН.В., 2008]. Для восполнения этого пробела становится актуальной проблема их выделении, очистки и конструирования моноспецифических тест-систем для их количественного анализа.

Систематизация значимых имунохимичсских индикаторов состояния постравматического аварийного метаболизма актуальна и для диагностики и прогнозирования осложнений, и для оценки результатов оперативного и консервативного лечения. В том числе такого перспективного метода немедикаментозного лечения, как транскутанная электростимуляция головного мозга (ТКЭС), эффективной при лечении сопутствующей травме алкогольной интоксикации [Кацнельсон Я.С., 1985; Гриненко АЛ. и соавт., 19S8; Крупицкий Е.М. и соавт., 1988; Герасимова Л.И. и соавт., 1997; Бураков A.M. и соавт., 1999; Кораблева H.H., 1999; Демичев Н.П. и соавт., 2002; Суринков Д.Е., 2004].

Цель исследования.

Улучшение диагностики и мониторинга состояния пострадавших с травмами головного мозга и опорно-двигательного аппарата путем включения е программу клинико-лабораторного обследования иммунохимических показателей.

Задачи исследования.

1. Изучить физико-химические свойства альфа-фетопротеина (АФП), плацентарной щелочной фосфатазы (ПЩФ), связанного с беременностью альфа2-гликопротеина (СБАГ), транскортина (ТК) и сывороточного альбумина (CA).

2. Разработать методы выделения и очистки СБАГ, ТК, АФП и ПЩФ и сконструировать иммунохимические тест-системы различной чувствительности для определения СБАГ, ТК и ПЩФ.

3. Определить связь этих и других белков крови со степенью тяжести травматического эндотоксикоза, гипоксии, системного воспалительного ответа, комы и других патологических синдромов острого периода черепно-мозговой травмы (ЧМТ) и травмы опорно-двигательного аппарата (ОДА).

4. Разрабатывать иммунохимические тесты для количественной оценки эндогенной интоксикации, гипоксии, кровопотери и других синдромов.

5. Проанализировать в динамике травматической болезни взаимосвязь уровней иммунохимических, биохимических и гематологических показателей между собой и с количественной оценкой тяжести повреждения, общего состояния пострадавшего, выраженности алкогольной интоксикации при поступлении, характера последующих осложнений и метода лечения, в том числе транскутанной электроимпульсной стимуляции головного мозга.

6. Используя методы статистического анализа отобрать диагностически и прогностически значимые лабораторные и иммунохимические показатели, общие и различные для травмы головного мозга и перелома длинных костей.

Научная новизна исследования.

На основании изучения физико-химических характеристик сывороточных белков, связывающих гидрофобные лиганды, разработан новый общий метод выделения и очистки альфа-фетопротеина (АФП), связанного с беременностью альфаг-гликопротеина (СБАГ), транскортина (ТК) и сывороточного альбумина (СА), основанный на принципах гидрофобной, высаливающей и аффинной хроматографии.

Впервые обнаружена корреляция уровней СБАГ, ТК и СА как со степенью выраженности интоксикационного синдрома (значения МСМ и ЛИИ), так и со степенью выраженности SIRS. Показано, что белки с транспортной функцией в большей степени коррелируют со степенью интоксикационного синдрома, и в меньшей — с SIRS. Для СРБ и других БОФ, не выполняющих транспортную функцию наблюдаются противоположные корреляционные отношения.

Впервые в сыворотках крови больных с выраженным травматическим эндотоксикозом обнаружено явление нарастания термостабильной фракции сывороточного альбумина (ТСА), пропорционально степени выраженности эндотоксикоза. Разработан и внедрен в клиническую практику новый иммунохимический способ определения связывающей емкости альбумина по отношению к низкомолекулярным веществам различного происхождения, являющийся иммунохимическим способом количественной оценки степени эндогенной интоксикации.

Проведен многомерный статистический анализ уровней изученных биохимических, гематологических показателей и содержания острофазовых, сывороточных и онкофетальных белков в сыворотках у больных в группах с изолированной и сочетанной ЧМТ и травмой ОДА с количественной оценкой тяжести травмы и общего состояния пострадавших при поступлении и в динамике травматической болезни, в том числе с учетом сопутствующей алкогольной интоксикации (АИ) при поступлении.

Впервые определена диагностическая и прогностическая эффективность определения у больных с изолированной и сочетанной ЧМТ и переломами длинных костей отдельных иммунохимических показателей, а также их комбинаций и отношений (диагностических коэффициентов). С помощью многомерного факторного анализа из числа острофазовых, сывороточных и органоспецифических белков отобраны маркеры, эффективные для оценки степени выраженности гипоксии, интоксикации, SIRS, септических осложнений на ранних и поздних стадиях ЧМТ, травмы ОДА и политравмы.

Впервые определена взаимосвязь каждого из отобранных антигенов со степенью выраженности основных патологических синдромов, сопутствующих изолированной и сочетанной ЧМТ и травме ОДА.

сывороточных уровней железосодержащих белков ферритина и лактоферрина, в сочетании с некоторыми биохимическими параметрами (глюкоза и рО;) перспективные в дифференциальной диагностике этиологии комы.

Впервые для оценки степени гипоксии при тяжелой нейро- и скелетной травме использован иммунохимичсский тест на фетальный гемоглобнн, введен новый информативный показатель: коэффициент отношения НЬР/НЪА.

Впервые с иммунохимических позиций подтверждена эффективность применения у больных с СГМ и диафизарными переломами длинных костей разновидность транскраниальной электростимуляции мозга — МДМ-терапии.

Практическая значимость работы.

Предложенные схемы выделения и очистки белков с помощью хроматографии на аффинных и гидрофобных носителях позволяют получать очищенные препараты ШДФ, СБАГ и ТК для конструирования иммунохимических тест-систем.

Установлено, что тяжелая изолированная и сочетанная ЧМТ и травма ОДА сопровождаются эндогенной интоксикацией, пропорциональной степени тяжести повреждения. Отмечено повышение в крови тяжелых больных термостабилыюй фракции сывороточного альбумина в 1,5-2,5 раза. Это факт реализован в «способе определения связывающей емкости альбумина человека», который может быть использован как для исследования межмолекулярных взаимодействий типа «лиганд-альбумин» в эксперименте, так и для диагностики степени интоксикации в клинической практике.

По результатам исследований разработан и внедрен ряд диагностических тестов для иммунохимической оценки степени интоксикации и системного воспалительного ответа, степени тяжести политравмы, степени гипоксии при ЧМТ, степени травматического повреждения головного мозга, а также способ оценки эффективности МДМ-терапии при травматической болезни. Для нужд экспериментальной хирургии разработан новый иммуноферментный тест на АФГ1 кролика для оценки послеоперационных репаративных процессов в паренхиматозных органах.

Предложен иммунохимический «способ оценки адаптационных реакций у травматологических больных» по результатам определения и последующего вычисления соотношения острофазовых белков (СРБ и СБАГ) и онкомаркеров (АФПиПЩФ).

Иммунохимические экспресс-тесты на СБАГ, НЬБ, АФП, ПЩФ, ферритан, лактоферрин, а2-макроглобулин, продукты деградации фибриногена могут найти применение в качестве критериев эффективности лечения травматической болезни мозга и ОДА.

Внедрение результатов исследования в практику.

медицина» «Астраханьгазпрома», МУЗ «Станция скорой медицинской помощи» г.Астрахани, отделения реанимации МУЗ «Клинический родильный дом» г.Астрахани.

Материалы научных исследований используются в научных разработках и в педагогическом процессе на всех факультетах на кафедрах биологии, биохимии с курсом клинической лабораторной диагностики, патологической физиологии, нервных болезней, травматологии и ортопедии Астраханской государственной медицинской академии.

Положения, выносимые на защиту:

1. Хроматографические характеристики альбумина, АФП, ПЩФ, СБАГ и ТК на гидрофобных и аффинных сорбентах зависят от ионной силы элюэнта, концентрации и свойств лигандов, что позволяет подбирать условия для их выделения и очистки. Характеристика очищенных препаратов АФП, ПЩФ, СБАГ и ТК и иммунохимических тест-систем для их определения.

2. Термостабильность транспортных белков сыворотки изменяется в присутствии лигандов, в том числе эндотоксинов известного и неизвестного составов. Это явление повышения термостабильности альбумина может быть использовано как тест для диагностики степени эндогенной и экзогенной интоксикации в клинической практике.

3. Уровни острофазовых, сывороточных и органоспецифических белков в сыворотках пострадавших, биохимические и гематологические показатели крови в динамике острого периода изолированной травмы головного мозга и переломов длинных костей в зависимости от степени тяжести травмы и степени тяжести состояния пострадавших при поступлении. Особенности изучаемых показателей в остром периоде нейро- и скелетной травмы на фоне алкогольной интоксикации при поступлении и во взаимосвязи с характером оперативного лечения и проводимой МДМ-терапией.

4. Взаимосвязь изучаемых иммунохимических показателей пострадавших с данными биохимических и гематологических исследований в динамике острого периода изолированной и сочетанной ЧМТ и травмы ОДА. Иммунохимические показатели, эффективные для оценки основных патологических синдромов травматической болезни: маркеры степени выраженности гипоксии, интоксикации, SIRS, репаративных процессов, осложнений травмы ОДА и ЧМТ.

Апробация работы.

Основные положения диссертации доложены на заседаниях кафедры биохимии с курсом клинической лабораторной диагностики, научно-практических конференциях сотрудников медицинской академии (Астрахань, 2000-2008); на заседаниях Астраханского областного научного общества травматологов-ортопедов (Астрахань, 2000-2005) и областного научного общества врачей скорой помощи (Астрахань, 2004-2007); на заседании проблемной комиссии ГОУ ВПО АГМА «Теоретическое и практическое изучение белков маркеров патологических состояний», 2004.

Материалы диссертации были представлены на Всероссийской конференции «Влияние антропогенных факторов на морфогенез и структурные преобразования органов», Астрахань, 1991; международной конференции «Структурные преобразования органов и тканей на этапах онтогенеза человека в норме и при воздействии антропогенных факторов. Экология и здоровье населения. Актуальные проблемы биологии и медицины», Астрахань, 2000, 2007; на V научной конференции с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге 2001»; на III съезде биохимического общества РАН, Санкт-Петербург, 2002; на VII съезде травматологов-ортопедов Белоруссии, Гомель, 2002; на 2-й и 3-й научно-практической конференции и школе-семинаре для молодых ученых с международным участием «Белки-маркеры патологических состояний», Астрахань-Москва, 2001, 2003; на научно-практической конференции с международным участием «Современные достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины», Астрахань-Москва, 2004, Астрахань-Волгоград-Москва, 2006; на VIII Международной научной конференции «Эколого-биологические проблемы бассейна Каспийского моря», Астрахань, 2005; Всероссийской конференции, посвященной 85-летию Астраханского областного научного общества хирургов (Астрахань, 2006); на научно-практическом Симпозиуме "Национальные дни лабораторной медицины России" (Москва, 2007, 2008) и Объединенном Иммунологическом Форуме (Санкт-Петербург, 2008).

Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 55 научных работ, в том числе, 13 в рецензируемых научных изданиях, рекомендуемых ВАК.

Структура и объем работы.

Диссертация изложена на 310 страницах текста, иллюстрирована 49 таблицами, 37 рисунками, состоит из введения, обзора литературы, главы методов исследования, характеристики обследованных больных, трех глав результатов исследования и их обсуждения, заключения, выводов, практических рекомендаций, указателя литературы, включающего 319 отечественных и 144 зарубежных источника.

Личное участие автора в получении результатов исследования

Основной материал, представленный в диссертации, получен, обработан и проанализирован лично автором.

В работу вошли результаты исследований, проведенных совместно с представителями клинических кафедр и научных лабораторий АГМА, РГМУ, других учебных и научных учреждений. Автор выражает благодарность всем коллегам, в соавторстве с которыми были опубликованы работы.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Объектом биохимического исследования являлась группа сывороточных и ассоциированных с беременностью белков, обладающих сродством к

стероидным гормонам: альбумина, АФП, ТК и СБАГ (сыворотки крови пуповинной крови и беременных третьего триместра при нормально протекающей беременности и с гестозом), ГПДФ (экстракт плаценты). Образцы препаратов белка исследовались методами ионообменной, гидрофобной, высаливающей и аффинной хроматографии. Очищенные препараты белков ТК и СБАГ получали из сывороток беременных, АФП— из абортивного материала, ГПЦФ — из экстракта доношенной плаценты по схемам, разработанным самостоятельно.

Дня качественной и количественной характеристики исходных препаратов., фракций и очищенных препаратов ТК, СБАГ и ГПЦФ использовали иммунохимические, электрофоретические и хроматографические и другие методы очистки белков (Л.А.Зильбер, ред., 1968; Г.Детерман, 1970; Г.Маурер, 1971; Э.Руослахти, 1979; Л.А.Остерман, 1983,1985; Э.Гааль и соавт., 1982; X. Фримель, ред., 1987; О.Микеш, ред., 1982; Р.Скоупс, 1985; А.М.Егоров и соавт., 1991). Использовали диск- (Davis 1964; Ornstein 1964) и SDS-электрофорез (Laemmli, 1970), электрофорез в градиенте концентраций (5-40%) ПААГ (Kopperschlander et al. 1969) и градиенте мочевины (0-8М), двухмерные системы (фингерпринты); препаративный электрофорез. Идентификацию полученных препаратов проводили методами иммунохимического анализа. Содержание общего белка в экстрактах и фракциях определяли по O.H.Lowry et al. (1951) или спектрофотометрически при 280 и 260 нм по Варбургу. Всего протестировано свыше 3000 образцов биоматериала.

Антисыворотки к ТК, ПЩФ и СБАГ получены нами самостоятельно путем гипериммунизации кроликов очищенными антигенами по общепринятым схемам. Верификацию моноспецифических тест-систем проводили с референтными наборами на эти антигены из банка тест-систем кафедры биохимии АГМА.

Клинический материал представлен 472 больными с изолированными и сочетанными черепно-мозговыми травмами и переломами длинных (трубчатых) костей нижних конечностей мужского и женского пола в возрасте от 19 до 70 лет обследованными в период с 1996 по 2007 годы (табл.1).

Больные с травмами опорно-двигательного аппарата (ОДА) в зависимости от степени тяжести повреждений были распределены на три группы (табл.1). В первую группу (ОДА I) вошли 143 больных (59 женщин и 84 мужчины) с закрытыми переломами диафиза берцовой кости или дистального отдела костей голени (одной лодыжки). Шокогенность травмы по Цибину 0,1 балла, тяжесть повреждений по AIS и ISS — 2 балла. Все больные находились в удовлетворительном клиническом состоянии; влияющих на исход травмы сопутствующих заболеваний у них не обнаружено.

Во вторую группу (ОДА II) были включены 82 больных (40 женщин и 42 мужчины) с закрытыми переломами диафиза и проксимального отдела бедра, осложненные непродолжительным периодом шока I степени, обеих костей голени, множественными, открытыми или оскольчатыми переломами костей голени. Шокогенность травмы по Цибину не выше 2-х баллов, тяжесть

повреждений по AIS — 2-3 балла (2,5±0,06). Больные находились в

клиническом состоянии средней тяжести.

Таблица 1

_Распределение обследованных больных по характеру повреждении__

Характер повреждений Число больных в% Тяжесть травмы

AIS ВПХ-П

Травма: 472 100

Переломы длинных костей нижн. конечностей 265 56.1 2,4 1,6

диафиза большеберцовой кости закрытый 102 21,6 2 0,1

диафиза обеих костей голени 20 4,2 2 2

дистального отдела костей голени 41 8.7 2 0,1 1

диафиза бедренной кости закрытый 18 3,8 3 2

вертельной области 21 4,4 3 2

шейки бедра 23 4,9 2 2

диафиза бедра открытый + шок 1-И 11 2.3 3 6

множественные и о/переломы + шок П-Ш 29 6,1 4 6

Всего по группе ОДА I: 143 30,3 2 0,1

Всего по группе ОДА II: 82 17,4 2,5 2

Всего по группе ОДА III: 40 8,5 3,7 6

Множ. травмы ОДА + шок П-Ш (ОДА 111) 142 30,1 3,4 4,7

Изолированная ЧМТ: 30 6,4 2 2

СГМ 22 4,7 3 5

УГМ легкой степени 41 8,7 4 5

УГМ средней степени 49 10,4 4 6

УГМ тяжелой степени 52 11,0 2,4 3,3

Всего по группе ЧМТ I: 90 19,1 4,0 5,5

Всего по группе ЧМТ 11: 65 13,7 6,8 6,5

ЧМТ, сочетанная с травмой ОДА 143 30,3 2 0,1

втом числе:

ЧМТ Ц + ОДА I 27 5,7 6 5

ЧМТ II + ОДА П 26 5,5 7 7

ЧМТ П + ОДА Ш 12 2,5 8 9

Доноры 68

ВСЕГО 540

В третью группу (ОДА III) вошли 40 больных (12 женщин и 28 мужчин) с закрытыми и открытыми диафизарными переломами бедра и с множественными переломами длинных костей нижних конечностей, осложненными шоком 11-111 степени тяжести. Шокогенность травмы по Цибину до 6 баллов, тяжесть повреждений по AIS 3-4 балла (3,7±0,07).

Диагноз СГМ ставили в соответствии с принятой единой классификацией острой ЧМТ [Коновалов А.Н., 1992]. Больные с ЧМТ условно были разделены на две группы (табл.1).

В группу пациентов с легкой черепно-мозговой травмой (ЧМТ I) были включены больные с сотрясением головного мозга — 30 человек (8 женщин и 22 мужчины) и ушибом головного мозга легкой степени — 22 человека (5 женщин и 17 мужчин). В этой группе больных у 5 пациентов было диагностировано субарахноидальное кровоизлияние, перелом свода черепа — у 5, и переломы костей лицевого черепа — у 8, средняя оценка по шкале комы Глазго на момент поступления в клинику составила 13,7±0,09 балла и 2,4±0,07 балла по международной шкале повреждений AIS. Клиническая симптоматика поражения нервной системы носила нестойкий характер, характеризовалась наличием рассеянной микроорганики и симптомами вегетативной дисфункции.

Группу с тяжелой черепно-мозговой травмой (ЧМТ П) составили 90 пациентов, из которых 41 пациент с ушибом головного мозга средней степени тяжести (5 женщин и 36 мужчин) и 49 с тяжелым ушибом и сдавленней головного мозга (8 женщин и 41 мужчина), у 45 пациентов из этой группы было диагностировано субарахноидально-паренхиматозное кровоизлияние, у 8 — эпидуральная гематома, у 10 — субдуральная гематома, у 1 пациента внутримозговая гематома, переломы свода черепа были выявлены у 19 пострадавших, основания черепа у 10, переломы лицевого черепа — у 5, средняя оценка по шкале комы Глазго на момент поступления в клинику составила 8,0±0,19 и колебалась от И до 5-4 баллов по шкале AIS.

Группа пациентов с сочетанной ЧМТ (табл.2) включала 65 больных, из них 36 пациентов —• с диагнозом ушиб головного мозга средней степени тяжести (балл ЧМТ по AIS—4) и 29 больных с диагнозом тяжелый ушиб головного мозга (AIS—4) в сочетании с переломами бедра (AIS—3-4) и костей голени (AIS—2). Пострадавшие с ЧМТ, сочетанной с травмой нижних конечностей легкой степени, соответствующей 1 баллу по системе AIS (ушибы, ссадины, растяжения связок) квалифицировались как пострадавшие с изолированной ЧМТ. Пострадавшие с сочетанными травмами других областей тела в обследование не включались. Средняя балльная оценка тяжести повреждений в группе пациентов с сочетанной ЧМТ составила по шкале AIS — 6,8±0,09 баллов (из них 4 балла — вклад ЧМТ), по шкале тяжести политравм ISS — 22,6±0,7б и по шкале комы Глазго — 7,3±0,20, что соответствует тяжелой сочетанной травме [Соколов В.А.,2006]. У большинства больных с тяжелой сочетанной черепно-мозговой травмой выявлялись очаговые симптомы базально-стволового уровня, в ряде случаев поражение внутренней капсулы.

Структура политравмы в этой группе такова: сочетания ЧМТ II с ОДА I выявлено у 27 из 15 больных, с ОДА П — у 26 из 15, с ОДА Ш—■ у 12 пострадавших.

По возрасту и полу больные распределились следующим образом (табл.2). Средний возраст всех пациентов с изолированной и сочетанной ЧМТ и

переломами нижних конечностей составил 43,8±0,62 года (женщин 45,4± 1,11 года и мужчин 43,0±0,75 года), ОДА I - 42,1±1,08 года, ОДА II - 53,2±1,59 года, ОДА III - 43,1±1,66 года, ЧМГ I - 41,3±1,85 года, ЧМТ П - 43,1±1,37 года, сочетанная ЧМТ+ОДАII - 39,1±1,44 года.

Повышенные цифры среднего возраста больных в группе ОДА II связаны с тем, что по степени тяжести травмы в эту группу вошли пациенты с переломами шейки бедра, средний возраст которых составил 63,3±1,45 года.

Таблица 2

Распределение обследованных пострадавших с изолированной и сочетанной ЧМТ и травмой ОДА и по гголу, возрасту и наличию алкогольной интоксикации

(АИ) при поступлении

ЧМТ Переломы длинных костей н/конечностей Сочетанная травма

Мужчины 116 154 43

Из них с АИ: 33 (28,4%) 47 (30,5%) 16 (37,2%)

15-39 лет 49 58 25

40-59 лет 56 69 16

60 лет и старше 11 27 2

Женщины 26 111 22

Из них с АИ: 6 (23,1%) 21 (18,9%) 8 (36,4%)

15-39 лет 12 36 9

40-59 лет 11 42 12

60 лет и старше 3 33 1

Всего Из них с АИ: 142 39 (27,5%) 265 68 (25,6%) 65 24 (36,9%)

Как видно из табл.2, большинство больных составляли лица молодого и среднего возраста, тогда как пациентов старше 60 лет было 16,3%. У лиц молодого и среднего возраста преобладали ЧМТ, переломы голени и бедра, частое наличие сопутствующей алкогольной интоксикации (рисЛ), а в возрасте 60 лет и старше - переломы вертельной области и шейки бедренной кости.

Среди мужчин переломы голени встречались чаще, чем у женщин почти в 2 раза, диафиза бедра и ЧМТ — более, чем в 3 раза. Среди женщин преобладали переломы шейки бедренной кости (более чем в 2 раза чаще, чем у мужчин).

Ни в одной группе обследованных больных в период наблюдения летальных исходов не зафиксировано. Больные с сопутствующей соматической патологией исключены из исследования. Больные с кранио-абдоминальной сочетанной травмой, имеющих высокую госпитальную летальность (Шапот Ю.Б., 2002), а также пострадавшие с ретроспективно установленной политравмой более двух систем в данное исследование не включены.

Оценивались следующие клинические параметры, необходимые для балльной оценки тяжести травмы и общего состояния: характер, локализация и

степень повреждений (AIS, ISS, шкала Цибина), степень тяжести шока (индекс Альговера), комы (по шкале ком Глазго — SCG) и общего состояния (шкала ВПХ-СП, АРАСНЕ-П — у пострадавших и больных, находящихся в ОРИТ, отдельно три параметра SIRS лейкоцитоз, температуру, частоту сердечных сокращений в баллах, взятых из шкалы APACHE-II). Наличие и степень алкогольной интоксикации (АИ) при поступлении определялось по записи в истории болезни о концентрации этанола в крови. Учитывались следующие характеристики больных: возраст, пол, характер предпринимавшегося оперативного вмешательства и последующих физиотерапевтических воздействий и вид посттравматических осложнений (нагноения, пневмонии).

РЭ Л/f,^,.» R3 ИГ а..

ОД-\1 ОДАП ОДАШ ЧМТ1 чмтн

Политравма

Рис.1. Частота наблюдения алкогольной интоксикации у пострадавших в зависимости от степени тяжести изолированной травмы опорно-двигательного аппарата (ОДА), изолированной ЧМ'Ги политравмы (ЧМТ + скелетная травма)

Всем больным проводилось подробное клиническое обследование, включая в зависимости от характера травмы методы инструментальной (ЭКГ, ЭЭГ и др), рентгенологической (рентгенография, в том числе рентгеноскопия, КТ, ангиография). У тяжелых больных в реанимационном отделении мониторовались параметры, необходимые для количественной оценки тяжести состояния по угрозометрическим шкалам. Всем больным с изолированной и сочетанной ЧМТ, травмой ОДА проводилась адекватная соответстующая терапия и необходимые оперативные вмешательства.

Кровь с антикоагулянтом (трилон Б) и сыворотку крови для гематологических, биохимических и иммунохимических исследований в соответствии с требованиями этического комитета забиралась на 1-3, 5-7 и при возможности на 14-19 сутки после травмы. У некоторой части больных удавалось провести дополнительный 4-й забор крови на 21-28 сутки. Общее количество проанализированных с 2000 по 2007 годы образцов крови и сыворотки от 472 пациентов и 68 доноров составило 1773.

Результаты анализа крови пострадавших включали СОЭ и следующие параметры, определенные на автоматическом гематологическом анализаторе МАХ (Франция): '№ВС (лейкоциты), ИБС (эритроциты), НОВ (гемоглобин), НСТ (гематокрит), МСУ (средний объем эритроцита), МСН (среднее

содержание гемоглобина в эритроците), МСНС (средняя концентрация гемоглобина в эритроците), RDW (анизоцитоз), PLT (тромбоциты), NEU%#, LYM%#, MON%# или MXD%# (соответственно % и абсолютное количество нейтрофилов, лимфоцитов, моноцитов или смеси моноцитов, эозинофилов и базофилов).

Лейкоцитарный индекс интоксикации (ЛИИ) рассчитывали по формуле Кальф-Калифа, С.Ф.Хомич в модификации АЛ.Костючснко и соавт. (2000): ЛИИ * количестео лейкоцитов {тыс. в мкл) х шйтрофилы (%) 100 - пейтрофилы (%)

У больных, находящихся после тяжелой травмы в реанимационном отделении, помимо шкалы комы Глазго (SCG), точнее ее обратной величины (15 — SCG), двух гематологических показателен HCT и WBC, креатинина в сыворотке, дополнительно учитывались еще 8 параметров, необходимых для балльной оценки по системе APACHE-II: температура тела, среднее АД [(2АДдиаст+АДс„ст)/3], ЧСС (частота сердечных сокращений), ЧДД (частот и дыхательных движений), р02 или ра02, pH артериальной крови или содержание Na+, К+ и бикарбоната в сыворотке, сыворотки.

Триада клинических показателей: гипертермия, тахикардия и лейкоцитоз считаются клиническими проявлениями SIRS. Признаками напряженности SIRS служили повышение температуры более 38,5°С, ЧСС более 90 в мин и лейкоцитоз свыше 12*109/л — параметры, которые включены в шкалу APACHE-II. Исходя из этой системы, SIRS в баллах оценивали следующим образом: температура - 38,5-38,9°С (1 балл), 39-40,9ЭС (3 балла), >4ГС (4 балла), пульс -110-139 (2 балла), 140-179 (3 балла), >180 (4 балла), лейкоциты, х109/л- 15-19,9 (1 балл), 20-39,9 (2 балла), >40 (4 балла).

Из биохимических показателей крови, определенных одномоментно на автоматическом анализаторе "Hitachi 911" (Австрия) с использованием реактивов фирмы «Олвекс» (г.Санкт-Петербург) или на анализаторе «HUMAN» с наборами реактивов фирмы «HUMAN» (Германия) и «LACHEMA» (Чешская Республика), в исследование включены следующие параметры: уровень глюкозы, общего белка, альбумина, ферментов (ACT, AJ1T, ГГТ, ДДГ, КК и ЩФ), мочевины, мочевой кислоты и креатинина.

Содержание «молекул средней массы (МСМ) в сыворотке крови определяли скрининг-методом (Габриэлян Н.И. с соавт., 1985). Уровень МСМ выражали в единицах оптической плотности при длине волны 280 нм.

В динамике травматической болезни мозга и ОД/К различными иммунохимическими методами были исследованы сывороточные уровни белков, отражающих влияние травмы на иммунный и системный воспалительный ответ —• иммуноглобулины трех классов (IgG, IgM, IgA), острофазовые белки: лактоферрин (ЛФ), СРБ, связанный с беременностью ü2-гликопротеин (СБАГ), а2-макроглобулин (МГ), на окислительный стресс— церуллоплазмин (ЦП), на систему гемостаза — продукты деградации фибриногена (ПДФ), повреждение тканей — ферритин (Фр), и органоспецифические белки: миоглобин (MG), тропонины Т и I (TrT, Tri),

креатинфосфокиназа (КФК), костная кислая фосфатаза (ККФ), костная щелочная фосфатаза (КЩФ), нейроспецифический белок S-100 (S-100), репаративную регенерацию — онкомаркеры альфа-фетопротеин (АФП), раковоэмбриональный антиген (РЭА) и щелочную фосфатазу плацентарного типа (ПЩФ).

В этих же сыворотках больных иммунохимическими методами исследовалась концентрации транспортных сывороточных белков сывороточного альбумина (CA), его термостабильной фракции (ТСА), транскортина (ТК), соотношению уровней субфракций альбумина и содержание МСМ, а в крови этих же больных иммунохимическими методами исследовалась концентрации HbF.

Количественное определение HbF проводили в гемолизированной сапонином или гипотоническим шоком крови методом радиальной иммунодиффузии по Манчини с использованием кроличьих антисывороток к HbF из банка иммунохимических тест-систем Астраханской медицинской академии.

Количественное определение СБАГ, СРБ и ПДФ, а также идентификация тканевых и сывороточных белков в период конструирования моноспецифических тест-систем проводилась двойной радиальной иммунодиффузией (РИД) в агаре по Ouchterlony в модификации Н.И. Храмковой и Г.И. Абелева (1961), концентрации ТСА, МГ, ЦП и ПДФ, иммуноглобулинов IgG, IgA, IgM — методом радиальной иммунодиффузии в геле по Mancini (1970) на готовых планшетах или с применением тест-систем и моноспецифических антисывороток фирм-изготовителей (Нижегородского, Санкт-Петербургского НИИВС; Берингверке, ФРГ; Sebia, Франция; Corning, Великобритания). CA, ТСА, ТК и МГ — методом метод «ракетного» иммуноэлектрофореза по Laurell et al. (1972), ПЩФ, частично ЛФ и Фр в экстрактах тканей — методом встречного иммуноэлектрофореза по Kohn (1970)., ККФ. КЩФ определяли в единицах Боданского денситометрией диск-электрофореграмм после инкубации с ингибиторами и субстратами. ПЩФ и оксидазную активность ЦП после специального окрашивания иммунопреципитатов. Определение высокочувствительного С-реактивного белка (hsCRP) проводили на автоматическом анализаторе Cobas С (Швейцария), идентификацию КФК, миоглобина и тропонинов Т и I — методом иммунохромато-графического анализа (Прогрессивные медицинские технологии, Россия; ACON, США; Hoffman La Roche, Россия—Швейцария).

РЭА, кортизол, частично АФП и Фр определяли методом РИА с реактивами фирм (Hoechst, Германия; Cis Bio International, Франция; рио-РЭА-125J-M, Беларусь). Радиометрию результатов РИА осуществляли на радиоизотопном анализаторе "Гамма-1" и "Гамма-800". В основном антигены (АФП, ЛФ, Фр, ЦП, S-100, МГ) определялись количественно методом ИФА в различных модификациях с использованием коммерческих тест-наборов (ЗАО «Вектор-Бест», Новосибирск; «Spmreact S.A.», Испания) в соответствии с требованиями фирм-поставщиков реагентов.

Молекулярные массы очищенных белков определяли методом диск-электрофореза в SDS- и градиенте концентраций ПААГ, на колонке с сефадексом G-100 и G-200 с использованием как минимум пяти соответствующих маркеров с известной молекулярной массой (Sigma): ферритина (440 kDa), сывороточного альбумина быка или человека (67 kDa), овальбумина (45 kDa), трипсина (23 kDa), тропошшов Т, I, С (38; 24; 18,5 kDa), цитохрома С (12 kDa).

Для изучения влияния мезодиэнцефальной модуляции (МДМ) на лабораторные показатели крови с первых суток после получения травмы 77 пациентам с переломами длинных костей нижних конечностей нз групп ОДА I и II и 33 пациентам с сотрясением и ушибом головного мозга легкой степени нз группы ЧМТ I в схему лечения были включены сеансы МДМ по 12 процедур модулированной частотой 70-90 Гц, длительностью импульса 3,0-5,0 мс, продолжительность воздействия - 30 минут. Остальные больные служили контрольной группой, которых лечили по традиционной схеме. Для проведения данной процедуры использовался аппарат МДМ - 101. Электроды накладывались в саггнтальной плоскости, один из которых располагался в области лба, второй в проекции затылочного отверстия. Сила тока зависела от индивидуальной чувствительности пациентов и колебалась от 0,5 до 2,5 мА. Сеансы мезодиэнцефальной модуляции хорошо переносились больными. Пострадавшие, имевшие на голове раны и другие дефекты кожного покрова входили в контрольную группу больных, не получавших МДМ-терапию.

Для статистической обработки и анализа полученных результатов исследования, а также построения графиков на полученных данных был использован лицензионный пакет прикладных программ статистического анализа Excel-98 (Microsoft), Statistica 6.0 (StatSoft. Inc.).

Для каждой выборки вычисляли средние величины (М), среднее квадратичное отклонение (о), среднюю ошибки средней арифметической (т). Оценку нормальности распределений проводили с использованием коэффициентов асимметрии и эксцесса.

С целью определения значимости (достоверности) р различий сопоставляемых средних величин применялся критерий t Стьюдента и однофакторный дисперсионный анализ с вычислением критерия F Фишера. Разницу средних величин считали достоверной при р < 0,05.

Статистические взаимосвязи между показателями оценивались применением корреляционного, регрессионного анализа и методов многомерной статистики (Гланц С., 1999).

Результаты исследования и их обсуждение

Среди иммунохимических маркеров, представляющих интерес для оценки травматической болезни, для трех белков (СБАГ, ТК, ПЩФ) по разным причинам, отсутствовали доступные коммерческие наборы для их определения.

Для конструирования иммунохимических тест-систем на связанный с беременностью альфа2-гликопротеин (СБАГ), транскортин (ТК), плацентарную щелочную фофатазу (ПЩФ) предварительно исследовали их поведение на

гелях для ионообменной (КМ- и ДЕАЕ-целлюлоза), гидрофобной (фенил-сефароза), амфифильной (агароза) и аффинной хроматографии (эстрадиол-сефароза и голубая сефароза). Параллельно изучались хроматографические характеристики еще двух белков — сывороточного альбумина (СА) и альфа-фетопротеина (АФП). Для иммунохимической идентификации белков во фракциях на данном этапе исследования применяли тест-системы для РИД по Оухтерлони, любезно предоставленные д.м.н. Сухаревым А.Е. (ПЩФ), к.м.н. Безрукавниковой Н.В. (ТК), к.м.н. Никулиной Д.М. (СБАГ) и антисыворотки НИИВС им. И.И.Мечникова (АФП и поливалентные к белкам сыворотки человека).

Акцент на методы гидрофобной хроматографии и аффинной элюции сделан в связи с общей особенностью всех пяти белков связываться или изменять свою активность (ПЩФ) в присутствии стероидных гормонов и триазиновых красителей.

Ионообменная хроматография. Установлено, что АФП, ПЩФ, ТК и ЧСА не адсорбируются на катионообменнике СМ-сефадексе С-50 (Pharmacia, Швеция) при трех значениях рН (8,0; 6,6; 5,8) 0,02М фосфатного и рН 4,6 0,02М ацетатного буферов. СБАГ довольно прочно связывается с катионообменным гелем в нейтральной и слабощелочной среде (рН 6,6 и 8,0).

Нами проанализирован характер элюции белков с этих анионообменников в зависимости от значения рН буферных систем (табл.3). Пробы в колонку вносились из расчета 20 мг белка на 1 мл геля. Хроматографию сывороток и экстрактов на колонке с ДЕ-52 целлюлозой проводили стартовым 0,01 М фосфатным или ацетатным буфером с линейным градиентом NaCI от 0 до 0,ЗМ.

Все белки связываются с анионообменной целлюлозой DE-52 (Watman, США) при низкой ионной силе (0,02 М) стартового буфера в диапазоне рН 5-9.

Установлено, что при рН 5,1 ацетатного буфера все белки слабо связывались с анионообменником и легко десорбировались уже 0,05М NaCI. При всех остальных значениях рН первым из пяти белков элюируется ПЩФ при концентрации NaCI 0Д0М. Альбумин десорбируется с хроматографической колонки широким пиком при ионной силы NaCI от 0,12 до 0,21М независимо от рН элюирующего буфера в диапазоне от 5,8 до 8,0. В отличие от альбумина пик АФП с уменьшением рН элюэнта десорбируется все более высокими концентрациями NaCI (табл.3). Этот факт может быть использован для отделения АФП от основной массы СА как один из этапов выделения и очистки АФП. Параметры десорбции ТК близки к таковым для СА (табл.3) и не позволяют отделять его от остальных сывороточных белков.

Повышенную «липкость» проявляет СБАГ и к анионообменному сорбенту (табл.3). При рН 8,0-6,4 белок элюируется более высокими концентрациями NaCI, чем все остальные рассматриваемые белки. СБАГ также как и СА десорбируется достаточно широким пиком, в связи с чем, применение ионообменной хроматографии в классическом виде для очистки СБАГ не дает определенных преимуществ. Вместе с тем, возможности анионообменной

хроматографии могут быть расширены за счет использования аффинной элюции и гидрофобных свойств ионообменников на основе целлюлозы.

Таблица 3.

Условия десорбции (начальная и конечная молярной концентрации элюирующего буфера) белков с анионообменной целлюлоза ДЕ-52

рН буфера СА АФП ГПЦФ СБАГ ТК

8,0 0,13-0,21 0,14-0,18 0,10-0,15 0,15-0,25 0,15-0,21

7,2 0,13-0,21 0,15-0,20 0,11-0,18 0,18-0,25 0,13-0,20

6,4 0,12-0,20 0,17-0,22 0,12-0,18 0,13-0,20 0,13 - 0,20

5,8 0,12-0,21 0,20 - 0,23 0,13-0,18 0,08-0,11 0,11-0,18

5,1 0,05-0,11 0,11-0,20 0,08 - 0,09 — 0,05 - 0,09

Гидрофобная хроматография. Поскольку макромолекулы АФП, ПЩФ, ТК, СБАГ и ЧСА имеют на своей поверхности гидрофобные области, необходимые для осуществления их транспортной и (или) каталитической функции (Чегер С.И., 1975; Луйк А.И., Лукьянчук В.Д., 1984; Терентьев А.А., 1990; Розен В.В., 1994; Кривенцев Ю.А., 1999; Сухарев А.Е. и соавт., 2006), мы сочли целесообразным применение гидрофобной хроматографии для изучения их поведения на гидрофобных гелях, их разделения и очистки.

В качестве гидрофобного сорбента мы использовали фенилсефарозу CL-4В. Активацию геля проводили в колонке последовательным промыванием 1% тритоном Х-100 на 0,02М фосфатном буфере рН 7,2, 20%, 50%, 96% этанолом, бутанолом, этанолом в обратной последовательности, фосфатным буфером и буфером с добавлением 0,5 М NaCl или 2 М (Nfii^SC^.

Смесь белков из расчета 50 мг на мл геля в 2М сульфате аммония после центрифугирования при 8000 g и удаления осадка при комнатной температуре наносили на колонку, заполненную фенилсефарозой. В случае хроматографии сывороток беременных, содержащих СБАГ, проба и колонка с агарозой содержали 1 моль/л соли. Результаты хроматографических экспериментов представлены в табл.4.

В варианте хроматографии нисходящим линейным градиентом сульфата аммония забуференного до рН 7,2 СА начинал десорбироваться 0,8М солью и его широкий пик заканчивался при 0Д5М концентрации соли, но следы ЧСА содержались и в последних фракциях. АФП более прочно связывался с сорбентом и незначительно элюировался заключительным объемом градиентного буфера, начиная с 0,13 М (NK,)2S04, но основная фракция АФП продолжал десорбироваться после дополнительного промывания колонки 0,02 М стартовым буфером. ПЩФ элюировался с фенилсефарозы раньше АФП, начиная с 0,5М (NiLtbSO^ и его пик заканчивался при ОДМ концентрации соли. Пик ТК десорбировэлся после СА.

СБАГ прочно связывался с гидрофобной колонкой и не десорбировался промыванием стартовым буфером. Для его элюции требовалось дополнительная обработка колонки неионным детергентом. Таким образом,

применение простого солевого градиента позволило нам отделить АФП, ТК и СБАГ от основной массы альбумина.

Таблица 4.

Условия десорбции (начальная и конечная молярной концентрации _элюирующего буфера) белков с фенил-сефарозы СЬ-4В

СА АФП ПЩФ СБАГ* ТК

Сульфат аммония градиент 2М -ОМ 0,8М--0,15М 0.13М--0М 0,5М--0ДМ Не десор--бируется 0,35М--0М

Сульфат аммония 1М Тритон Х-100 0-1% 0,1%--0,5% 0,2%--0,4% 0,1%--0,3% 0,4% --1% 0,2%--0,5%

Сульфат аммония 1М Глицерин 0 -75% 25%-75% Не десор--бируется 25%- 75% Не десор--бируется 50%- 75%

Сульфат аммония 2М-0 М Тритон Х-100 0-0,5% 1,2 - 0,7М 0,2 -0,33% 1,0 - 0,6М 0,25-0,35 1,2 - 0,6М 0,2-0,35% 0,6 - 0,ЗМ 0,35-0,42 1,0- 0,6 М 0,25-0,35

Сульфат аммония 2М-0 М Глицерин 0 -75% 1,2-0,5 М 29-57% 0,8 - 0,ЗМ 45 - 65% 1,0-0,6 М 38 - 50% 0,3 - ОМ 65 - 75% 0,9 - 0,ЗМ 34 - 65%

* — линейный градиент сульфата аммония 1М-ОМ

Десорбция связанных с фенилсефарозой белков ускорялась снижением полярности 0,02 М фосфатного буфера добавлением 0,1% тритона Х-100, но не глицерина. Дополнительное введение в элюирующий буфер гидрофобных лигандов (спиртовых растворов билирубина, стероидных гормонов) с целью создания эффекта аффинной элюции было невозможно из-за их нерастворимости в солевых растворах высокой концентрации.

Как видно из табл.4, при изменении полярности с помощью детергента и глицерина на фоне неизменной 1М концентрации сульфата аммония, сходные по электрофоретической подвижности белки ведут себя по разному: тритон хорошо десорбирует ПЩФ (0,1-0,3%), С А (0,1-0,5%), ТК (0,2-0,5%), и АФП (0,2-0,4%) пики которых полностью накладываются друг на друга. СБАГ в присутствии сульфата аммония десорбируется с гидрофобной колонки только высокими концентрациями тритона Х-100. Глицерин частично вымывает СА и ПЩФ, начиная с 25% концентрации вплоть до последней фракции (75%), начиная с 50% элюирует ТК и не элюирует АФП и СБАГ на фоне такой ионной силы, задаваемой сульфатом аммония.

В последующих опытах (табл.4) нарастающий градиент тритона или глицерина добавлялся к понижающемуся градиенту концентрации соли (ножницы). Применение таких комбинаций получило в гидрофобной хроматографии особенно широкое распространение (Туркова Я., 1979; Скоупс Р., 1985; ОсЬоа Д.Ь. 1978).

Обе комбинации ножниц (табл.4) давали приблизительно сходные картины элюции белков: сначала вымывался альбумин, затем ПЩФ, ТК и АФП, причем, их пики частично перекрывались. Последним элюировался СБАГ. Таким образом, целенаправленно изменяя в циклах гидрофобной рехроматографии концентрацию соли, детергента и неполярного растворителя

в элюирующей буферной системе, можно подобрать условия для их выделения и очистки.

Амфифилъная (высаливающая'.) хроматография. Обнаружено, что замещенные целлюлозы способны эффективно адсорбировать белки при высокой концентрации соли (Скоупс Р., 1985). Еще в большей степени, чем у ДЕАЕ-целлюлозы гидрофобные свойства выражены у агарозы. Благодаря своей амфифилыюн природе эти матрицы (частично гидрофобные и частично гидрофильные) подходят для адсорбции белков при высоких концентрациях соли, чем чисто гидрофобные материалы (Von der Haar F., 1976).

Белки, связанные с такими целлюлозными и агарозными матрицами, можно элюпровать раствором с такой же высокой концентрацией соли, которая используется для их адсорбции, добавив в раствор вещества, ослабляющие водородные связи, — глицерин, сахарозу, мочевину или этанол (Fujíta Т. et al.. 1980).

Таким образом высаливающая хроматография на агарозном геле может использовать как принципы гидрофобной, так и аффинной хроматографии. Важным ограничением амфифильной хроматографии по сравнению с аффинной является то, что лиганд должен сохранять способность связываться с белком при высокой концентрации соли.

В качестве амфифилыюго сорбента мы использовали агарозу (Serva, США). Активацию геля проводили в колонке по схеме для фенилсефарозы и уравновешивали 2М (NH^SOí. В случае хроматографии сывороток беременных, содержащих СБАГ, проба и колонка с агарозой содержали соли в 2 раза меньше (1 моль/л).

Смесь белков из расчета 10 мг на мл геля в 2М или 1М сульфате аммония после центрифугирования при 8000 g и удаления осадка наносили на колонку, заполненную агарозой при комнатной температуре.

Установлено что в присутствии 2М сульфата аммония, растворимые при такой концентрации белки (ПЩФ, ТК, CA, АФП) адсорбируются на геле агарозы, снижение концентрации соли до 1,8-1,5М вызывает их десорбцию с колонки. Нерастворимый в 2М (NH4)2S04 СБАГ удерживается на агарозе при 1-0,5М концентрации соли и элюируется при более низких концентрациях сульфата аммония в буфере. При постоянной IM концентрации сульфата аммония десорбцию СБАГ с агарозы можно осуществлять 0,1% тритоном X-100, солевым 5-15% раствором глицерина или 1-2М мочевины.

Аффинная хроматография. Из аффинных сорбентов для исследования хроматографичекого поведения белков мы применяли голубую сефарозу (Pharmacia, Швеция), представляющую собой коммерческий конъюгат сефарозы 4В с ковалентно присоединенным красителем цибакроновым синим, и два варианта иммобилизованного эстрадиола.

Конъюгат эстроген-бензидин-сефароза был синтезирован и любезно предоставлен канд. хим. наук Р.З.Алиевым (Астраханская медакадемия) и представлял собой иммобилизованный на сефарозе через б «функциональный бензидиновый спейсер эстрадиол, ковалентно присоединенный по кольцу А.

Второй сорбент — эстрадиол-С-17-триазинхлорид-сефароза был приготовлен на кафедре биохимии РГМУ и любезно предоставлен член-корр. РАМН, профессором А.А.Терентьевым.

На этапе получения высокоочищенных препаратов АФП, ТЩФ, ТК и СБАГ мы применили аффинные сорбенты, в которых использовались иммобилизованные различными методами антитела (негативные и позитивные иммуносорбенты).

Результаты изучения поведения белков на двух типах неантительных аффинных сорбентов, лиганды которых, эстрадиол и триазиновый краситель — цибакроновый синий, по литературным сведениям имеют сродство к исследуемым белкам (Иванов В.Б.,1982; Скоупс Р., 1985) представлены в табл.5.

На подготовленную к работе голубую сефарозу наносили диализованные против стартового 0,02 М трис-солянокислого буфера рН 7,4 растворы белка из расчета 10 мг белка на 1 мл влажной суспензии. Хроматографию проводили стартовым буфером в объеме 160 мл со скоростью 10 мл/час линейным от 0 до 2М градиентом №С1. Собранные фракции иммунохимически тестировались на изучаемые белки.

Установлено что на голубой сефарозе сорбируется альбумин, но не ПЩФ, АФП и ТК. Основной пик ЧСА обнаруживается во фракциях, содержащих 0,8-1М №С1, однако альбумин частично вымывается стартовым буфером и загрязняет фракции АФП. СБАГ частично связывается с голубой сефарозой и элюируется 0,07-0,12 М ИаС1 на 0,02 М, трис-солянокислом буфере, другая часть этого белка элюируется стартовым буфером.

Таким образом, АФП и альбумин отличаются по их поведению на голубой сефарозе — ЧСА связывается с красителем, АФП — нет. Полученные данные обосновывают применение на одном из этапов очистки АФП негативной хроматографии на сорбенте с триазиновыми красителями — голубой сефарозе. Что касается адсорбции СБАГ на голубой сефарозе, то учитывая физико-химические свойства этого белка, можно предположить о катионообменном, а не об аффинном механизме его связывания с окрашенным гелем.

Хроматографию белков на сорбентах эстрадиол-бензидин-сефарозы и эстрадиол-С-17-сефарозы проводили в двух режимах (табл.5).

Смесь белков, диализованная против солевого фосфатного буфера наносилась на колонку с эстрадиол-сефарозой, промывалась стартовым буфером и элюировалась ступенчатым градиентом КаС1 до 1М на том же буфере. Последние ступени кроме соли содержали 2% тритона или эстрон в 20% диоксане.

Для хроматографии на эстрадиол-сефарозе в гидрофобном режиме проба в стартовом фосфатном буфере рН 7,2 с добавлением 1М сульфата аммония элюировалась нисходящим линейным градиентом этой соли.

В первом режиме на колонку наносилась диализованная против стартового буфера смесь исследуемых белков, при этом все белки вымывались

со свободным объемом, не связываясь с сорбентом. Дополнительная последовательная элюция через колонку буферного раствора со ступенчатым градиентом КаС1 до 2М, 1% тритона Х-100 и или эстрона на 20 % водном растворе диоксана не обнаружила в этих фракциях исследуемых белков.

Таблица 5.

Условия десорбции (начальная и конечная молярной концентрации

элюирующего буфера) белков с с аффинных сорбентов _

Сорбент Стартовый буфер Линейный градиент CA АФП ПЩФ СБАГ* ТК

Голубая сефароза 0,02 М, рН 7,4 трис-НС1 0 - 2 М КтаС1 0,6-1,1 М NaCl Стартовым буфером Стартовым буфером 0,07- 0,12М NaCl Стартовым буфером

Эстрадиол-бензидин-сефароза 0,02 М, рН 7,2 фосфатный Стартовым буфером Стартовым буфером Стартовым буфером Стартовым буфером Стартовым буфером

Эстрадиол-бензидин-сеф 0,02 М, рН 7,2 фосфатный 1-ОМ (ШД^О,, 0,5 -ОМ (NH4)2S04 0,2 - 0 М (МН4)2804 0,3 - 0 М (ЫН4)2504 0,05 - 0 М (NH4)2S04 0,15-ОМ (Ш4)2804

Эстрадиол-С-17-сефароза 0,02 М, рН 7,2 фосфатный Стартовым буфером Стартовым буфером Стартовым буфером Не десор--бируется Стартовым буфером

Эстрадиол-С-17-сефароза 0,02 М, рН 7,2 фосфатный 1-ОМ (КНО.^О, 0,5 - 0 М (NH4)2S04 0,2 - 0 М 0,2 - 0 М (Ш4)2804 Стартовым буфером 0,1 - ОМ (ИН^СХ,

Так как белки при низкой ионной силе буферного раствора не связывались с иммобилизованным на сефарозе через бензндиновый спейсер по бензольному кольцу эстрадиолом, что совпадает с известными данными (Терентьев A.A., 1990), мы попытались сорбировать белки на этой колонке в гидрофобном режиме, при высокой моляриости стартового буфера (табл.5.).

Установлено, что все белки связывались с эстрадиол-бензидин-сефарозой как с гидрофобным сорбентом в 1М сульфате аммония, (если на 1 мл аффинного геля наносилось не более 10 мг белка) и десорбировались с колонки при уменьшении концентрации соли в последовательности: CA => АФП => ШЦФ => ТК => СБАГ (табл.5).

Аффинный сорбент эстрадиол-С-17-триазинхлорид-сефароза, созданный для выделения эсгрогенсвязывающих белков при хроматографии стартовым буфером не связывал CA, АФП, ТК и ШЦФ, так как имеет слишком короткий триазиновый спейсер (Терентьев A.A., 1990), однако в данном режиме на нем адсорбировался СБАГ, который потом элюировался при добавлении в стартовый буфер 1 М NaCl или водонасыщенного бутанола на этом буфере.

Разработка технологии получения препарата СБАГ и транскортина аз сыворотка беременных. Обнаруженные нами особенности поведения СБАГ и ТК на хроматографических носителях легли в основу разработанных нами методов одновременного выделения этих белков из пула (500 мл) сыворотки крови беременных Ш триместра (табл.6 и 7). Метод для обоих белков включает последовательную высаливающую, ионообменную, гидрофобную и аффинную хроматографию и не требует промежуточных этапов диализа и концентрирования.

Таблица. 6

Характеристика препарата СБАГ на этапах выделения._

Этап очистки Содержание белка, мг Содержание целевого продукта % Степень очистки Выход (%)

общий СБАГ

Исходный материал 31200 26,8 0,09% 1 100

Осаждение (N114)2804 40% насыщения (осадок) 6736 28,0 0,42% 4,5 97

Высаливающая хроматография 1855 19,0 1,01% ИД 66,0

Хроматография на ДЕ-52 целлюлозе 872 15,3 1,8% 19,0 53,1

Гель-фильтрация на Сефадексе 0-200 373 14,2 3,8% 41,2 49,3

Хроматография на фенил-сефарозе СЬ-4В 194,7 12,5 6,4% 69,6 43,2

Хроматография на голубой сефарозе 82,5 9,5 11,5% 125 33,0

Хроматография на эстрадиол С-17-сефарозе 8,0 6,7 83,8% 907 7,81

Характеристика очищенного СБАГ представлена на рис.2, а очищенного транскортина вместе с маркерами молекулярной массы на рис.3.

Полученный нами препарат СБАГ не взаимодействовал с антисыворотками против сывороточных белков донора и против сывороточного альбумина и давал единственную дугу преципитации с поливалентной антисывороткой, полученной иммунизацией кроликов сывороткой беременных.

Методом диск-злектрофореза препарат СБАГ выявлял только одну окрашенную полосу в зоне макроглобулинов (рис.2), а электрофорез полоски полиакриламидного геля во втором направлении с антисывороткой к сывороточным белкам беременной выявил единственный пик иммунопреципитата, принадлежащий СБАГ (рис.2).

По результатам SDS-ПААГ электрофореза препарат транскортина выявлял только одну окрашенную полосу в зоне между БСА (65 кД) и овальбумином (45 кД), соответствующую молекулярной массе 50-55 кД (рис.3).

Таблица. 7

Характеристика препарата транскортина на этапах выделения._

Этап очистки Содержание белка, мг Содержание целевого продукта % Степень очистки Выход (%)

общий ТК

Исходный материал 31200 26,0 0,08% 1 100

Надосадок (НН4)2804 40% насыщения 24400 25,0 0,10% 1,2 96

Высаливающая хроматография 4530 15,5 0,34% 4,1 60

Хроматография на ДЕ-52 целлюлозе 688 10,7 1,56% 18,7 41,2

Осаждение (КН4)250,, 60% насыщения (осадок) 79,3 9,2 11,6% 139,2 35,4

Хроматография на фенил-сефарозе СЬ-4В 18,1 8,5 47% 583 32,7

Хроматография на голубой сефарозе 5,3 4,2 79% 950 16,2

Оба препарата не проявляет иммунохимической активности при взаимодействии с антителами к ТБГ, ПЩФ, АФП и с большинством коммерческих антисывороток к белкам плазмы человека, а их антисыворотки не дает перекрестных линий преципитации между собой (рис.4).

Рис. 2. Двумерный электрофорез препарата СБАГ. В первом направлении - электрофорез в 7,5% ПАА.Г, во втором направлении - электрофорез в агарозе с иммунопроявлением 15% антисывороткой к сывороточным белкам беременной.

Для выделения и очистки ПЩФ гомогенат зрелой плаценты, полученой в родах и освобожденной от плодных оболочек, смешивали с тремя объемами 0,02М трис-НС1 буфера рН 8,6, троекратно замораживали при -6-8°С, оттаивали и добавляли один объем холодного бутанола.

Моноспецифические антисыворотки на СБАГ, транскортин и ПЩФ использованы для получения иммунодиффузионных и иммуноферментных наборов для их количественного определения при изучении роли иммунохимических показателей в оценке состояния пострадавших с изолированной и сочетанной ЧМТ и травмы ОДА. Смесь перемешивали на

магнитной мешалке, центрифугировали и в делительной воронке собирали нижнюю (водную) часть, содержащую ШДФ.

ферритин (440 кД) церулоплазмин (180 кД)

БСА (67 кД)

Транскортин —> транскортин

_ _ овальбумин (45 кД)

■^«Алвж <- линия Кольрауша

Рис. 3. Характеристика очищенного препарата транскортина методом ЗБВ-ПААГ электрофореза в сопоставлении с маркерами молекулярной массы

О^гО

Рис.4. Иммунодиффузионный анализ качества полученных антисывороток против СБА Г и ТК.

В отличие от известных способов получения ГТЩФ (Lehman et al., 1974; Сухарев А.Е. с соавт., 2006), в основе предлагаемого нами способа, лежит обнаруженный нами феномен относительной устойчивости ПЩФ к некоторым ионам тяжелых металлов (кадмий) при прогревании.

К плацентарному экстракту добавляли сульфат кадмия до конечной концентрации 0,14% и раствор прогревали при 65°С в течение 1-3 минут до образования осадка, который отделяли центрифугированием (табл.8). В супернатант добавляли сульфат аммония до 40% насыщения и после удаления осадка проводили с супернатантом дальнейшие хроматографические этапы, которые отражены в таблице 8.

Степень очистки ПЩФ по данному способу превышала 1000 раз, а чистота препарата достигала 98% (табл.8). Удельная активность фермента при его концентрации 10 мг/л составляла 8-10 тыс нмоль/сек/л (ME).

Так как в иммунохимическом анализе у пострадавших с травмами применялась коммерческая тест-система на АФП, данные по его хроматографической очистке не приводятся.

Таблица. 8

Характеристика препарата ГШДФ на этапах выделения._

Этап очистки Содержание белка, мкг Содержание целевого продукта % Степень очистки Выход (%)

общий ПЩФ

Бутанольный экстракт плаценты (1 литр) 4400000 4000 0,10% 1 100

0,14% СС1504 65°С х 1-3 мин 250000 2500 1,0% 11 63

Надосадок (МН4)2504 40% насыщения 200000 2400 1,2% 13,2 60

Высаливающая хроматография 120000 1800 1,5% 16,5 45

Хроматография на ДЕ-52 целлюлозе 16000 1200 7,5% 82,5 30

Осаждение (ЫН4)2В04 60% насыщения (осадок) 4000 880 22% 242 22

Хроматография на фенил-сефарозе СЬ-4В 360 320 89% 980 8,0

Хроматография на голубой сефарозе 285 280 98,2% 1080 7,0

Тепловая денатурация белков. Отношение к температуре — одна из важных физических характеристик белка. Термостабильность белков может варьировать в определенных пределах в зависимости от целого ряда факторов: природы белка, рН, ионной силы раствора, присутствия различных низкомолекулярных лигандов. На примере транспортного белка — сывороточного альбумина, обладающего сродством к большому количеству гидрофильных и гидрофобных лигандов нами исследована возможность регулировать такой параметр как термическая устойчивость.

Выбор СА в качестве экспериментальной модели связан не только с его биологической ролью в организме как главного неспецифического транспортного белка сыворотки, но и с удобством его иммунохимической регистрации даже при тысячекратном снижении концентрации (рис.5)

Для сравнительной оценки влияния лигандов на температуру денатурации СА в качестве низкомолекулярных лигандов использовали спиртовые растворы билирубина и эстрадиола (Merck, ФРГ), водонасыщенный бутанол, растворы глицерина, сульфата аммония и хлорида натрия различной концентрации (Реахим, Россия). Кроме того, исследовали комбинацию неизвестных низкомолекулярных лигандов в составе смывов гипертоническим раствором (1М NaCl) с медицинских угольных сорбентов «СНК», «СКК» и «СУГС» после сеанса гемосорбции у больных с интоксикационным синдромом различной этиологии (рис.6), полученными из отделения гемодиализа НПК «Экологическая медицина» Газпрома (г. Астрахань).

Рис.5 Результаты определения в и

крови уровней термостабильной фракции альбумина методом «ракетного» иммуноэлектрофореза по Лоурелю в зависимости от степени нагрузки альбумина лигандом

: ■ ; Л

! ~ Г*

Г" • ■

-СА+сульфат

аммония «СА+зндотоксин

"СУГС" -Альбумин (СА)

-СА+билирубин

60 70 80 90 температура, С

Рис.6. Кривые денатурации альбумина в присутствии различных лигандов

В качестве препаратов СА использовали сыворотки крови доноров, беременных, больных с выраженным эндотоксикозом, пуповинной крови и кристаллический СА человека фирмы ВБН (США). Перед прогреванием готовили 0,5% растворы СА, а сыворотки разводили в 10 раз для профи ластики гелеобразования.

Препараты СА с добавлением лигандов прогревали в стеклянных пробирках на водяной бане при следующих режимах 50° х 1 час, 60° х 1 час, 70° х 15 мин, 80° х 15 мин, 90° х Ю мин или 100° х ю мин.

Установлено, что СА переносит без денатурации температуру до 70°С, сохраняется на четверть при 80°С и на 2-3% при 100°С. Высокие концентрации глицерина (20%) и солей (1М) предохраняют белок от денатурации при кипячении на 20-40%. Незначительное (до 2-3 раз) увеличение термостабильной фракции альбумина (ТСА) при 100°С наблюдается под влиянием гидрофобных лигандов (эстрадиола и билирубина).

Способность повышать концентрацию ТСА выявлена также у смеси токсинов элюированных с гемосорбента «СУГС» от больных перитонитом (рис.6).

В серии экспериментов иммунохимическими методами в индивидуальных разбавленных сыворотках здоровых лиц и больных с различной патологией, сопровождающейся эндотоксикозом, до и после

обработки активированным углем определяли концентрации альбумина (ракетный иммуноэлектрофорез) (рие.5). Достоверно отличающиеся концентрации белков в параллельных пробах до и после обработки активированным углем выявлены у больных с выраженным токсикозом.

Предложен новый подход оценки степени выраженности эндогенной интоксикации (заявка на изобретение№ 2007146077, приоритет от 11.12.2007) при помощи количественной оценки термостабильной фракции сывороточного альбумина (ТСА). Способ заключается в одномоментном измерении уровня альбумина в одной микропробе кипяченой и некипяченой разбавленной крови методом иммунохимического анализа.

Результаты определения ТСА, СА, отношения ТСА/СА и обратного отношения (СА/ТСАх]00%) коррелируют с другими лабораторными данными (общий анализ крови; ЛИИ, СМП254) —- маркерами интоксикации (г = +0,99 между ССА и МСМ, г = +0,95 между ССА и ЛИИ, г = +0,97 между ЛИИ и МСМ, г = -0,87 между ЛИИ и ОССА, г = -0,94 между ОССА и МСМ, г = -0,96 между ОССА и ССА).

Сравнительная характеристика чувствительности различных методов оценки интоксикации в% к контролю предсталена на рис.7.

панкреонекроз гестоз беременных политравш

Га ЛИИ а МСМ D TCA/CA в СА/ТСА

Рис.7. Сравнительна характеристика чувствительности тестов количественной оценки степени интоксикации в % к контролю (доноры)

Иммунохимический мониторинг и лабораторные показатели в динамике изолированной и сочетанной ЧМТ и травмы ОДА

Клинические показатели при изолированной и сочетанной ЧМТ и травме ОДА. Средний балл тяжести травмы по шкале AIS у травматологических больных (табл.9) составил 2,4±0,04, по шкале ISS — 4,9±0,29, по ВПХ-П(МТ) — 0,8±0,07 балла. Между шкалами AIS и ВПХ-П(МТ) у больных с травмами ОДА имеется тесная прямая корреляция (г=0,88).

Таблица 9

Интегральные показатели степени повреждения и тяжести состояния при

поступлении у больных с изолированной и сочетанной ЧМТ _и с переломами нижних конечностей__

Тяжесть повреждения Тяжесть состояния

A1S ISS ВПХ-П (МТ) ВПХ-СП Шкала Глазго

ОДА I (п = 143) 2 2 0,1 12,4±0,08 14,7+0,05

ОДА II (п = 82) 2,5±0,05 5,3±0,39 2 13,3+0,20 14,7±0,07

ОДА III (п = 40) 3,7±0,07 14,1 ±0,50 6 19,6+0,45 14,2+0,14

ЧМТ+ОДА (п = 65) 6,8±0,09 22,6±0,76 6,5±0,18 21,2+0,24 7,3±0,20

ЧМТ И (п = 90) 4 16 5,5±0,05 19,9+0,28 8.0+0,19

ЧМТ I (п = 52) 2,4±0,07 5,0±0,48 3,3±0,21 14,4+0,36 13,7+0,09

Степень тяжести состояния пострадавших с травмой ОДА по шкале комы Глазго (ЗСв) обычно соответствовала норме — 15 баллов. Однако в связи с тем, что определенная часть (25,6%) пострадавших поступала в стационар в состоянии алькогольного интоксикации (АИ) с признаками угнетения сознания, балл БСО снижался вплоть до 11, и в среднем по группе пострадавших с изолированной травмой ОДА составил 14,7±0,05 балла.

ОДА I ОДА II ОДА III ЧМТ+ОДА ЧМТ И ЧМТ I

ШВПХ-П(МТ) BAIS га ISS К ВПХ-СП а Шкала Глазго

Рис. 8. Средние баллы тяжести травмы при поступлении пострадавших в стационар в шести обследованных группах.

Применение МДМ-терапии позволило значительно улучшить показатели лечения и у больных с переломами (ОДА I и II) и у больных с ЧМТ I. В группе больных, лечившихся скелетным вытяжением и получавших мезодиэнцефальную модуляцию (34 больных) средний срок скелетного вытяжения составил 17,8 дней (табл.10). В контрольной группе (25 больных) -21,6 дня.

Таблица 10

Длительность основных этапов лечения больных с переломами длинных костей _(группы ОДА I и II), леченных консервативно (в днях)_

Группа Этапы лечения

Скелетное Сращение Реабили- Общий срок

вытяжение перелома тация лечения

МДМ-терапия 17,8 94,5 13,5 108,0

Контрольная 21,6 107,4 14,0 121,4

В первую неделю после поступления больных в стационар наиболее частым осложнением была гипостатическая пневмония, особенно у лиц пожилого возраста или страдающих алкогольной болезнью. Использование мезодиэнцефальной модуляции позволило снизить количество гипостатических пневмоний с 3,6% в группе больных, не получавших МДМ-терапию, до 1,9% у больных ее получавших, гнойных осложнений в 3,4 раза - с 6,1% до 1,8% соответственно.

Раннюю гипостатическую пневмонию следует дифференцировать от похожих клинически осложнений 3-4 суток после перелома — жировой эмболии легочной артерии и синдрома «шокового легкого» (Соколов В.А.,2006). В этой ситуации показана оценка иммунохимических маркеров, характеризующих свертывающую систему и степень инфузионной гемодшпоции.

Гематологические показатели при изолированной и сочетанной ЧМТ и травме ОДА. У больных с переломами длинных костей из группы ОДА I степень выраженности анемии была незначительной, так как наблюдались больные с повреждением одного сегмента, поэтому, не потребовалось назначения антианемических лекарственных средств. У больных с переломами длинных костей из группы ОДА II-III, в первую неделю после травмы отмечается нарастание анемии, что проявляется снижением числа эритроцитов, гемоглобина, гематокрита и среднего содержания гемоглобина в эритроцитах. Такая динамика согласуется с исследованиями других авторов (Селезнев С.А., Худайбергенов Г.С., 1984, Takahashi, Henmi, Yaraki с соавт., 1983).

У больных с изолированной и сочетанной ЧМТ тяжелой степени такие лабораторные показатели красной крови как количество эритроцитов (RBC), гемоглобин (HGB), гематокрит (HCT) достоверно снижены с первых дней после травмы. Через 5-7 суток после травмы продолжают снижаться: эритроциты (4,5±0,12х1012/л и 4,4±0,09*1012/л) и гемоглобин (136±2,82 г/л и 134±3,53 г/л соответственно). Среднее содержание гемоглобина в эритроците (МСН) достоверно снижается только в 1-3 сутки (32,7±0,79 пг и 31,2±0,83 пг) и имеет достоверную тенденцию к снижению и к 21 суткам до 31,7±1,39 пг. Гематокрит падает с 42,2±0,40 до 38,7±1,58 к 5-7 суткам, остается сниженным и на 14-16 сутки - 41,4±1,93% с намечающейся тенденцией к повышению на 21

день. Таким образом, у больных с изолированной и сочетанной ЧМТ тяжелой степени, несмотря на отсутствие выраженной кровопотери, в первую неделю после травмы отмечается нарастание анемии, что проявляется снижением числа эритроцитов, гемоглобина, гематокрита и среднего содержания гемоглобина в эритроцитах.

На фоне показателей анемизации у больных тяжелой черепно-мозговой травмой обнаружено достоверное (р<0,01) снижение уровня НЬБ. Начиная с 3-й недели при изолированной травме ОДА и при сочетанной с ЧМТ травме ОДА, отмечается повышение абсолютного (г/л) и относительного (НЬБ/НЬ в %) уровней фетального гемоглобина, чего не наблюдается у больных с тяжелой ЧМТ, видимо в результате нарушения центральных механизмов адаптации.

Показатели крови у больных из групп с травмами ОДА 1-И и ЧМТ I на фоне мезодиэнцефальной модуляции восстанавливаются до исходного уровня примерно на одну неделю раньше, чем в соответствующей контрольной группе, что свидетельствует о выраженном положительном эффекте данного метода на организм- пострадавших, в том числе у больных, поступивших в состоянии алкогольной интоксикации. Улучшение лабораторных показателей красной крови и иммунитета к 5-7 суткам в группе больных, получавших МДМ-терапию, по сравнению с контрольной группой (только на 14-19 сутки) создавало более благоприятные условия для оперативного лечения, способствовало снижению числа осложнений в раннем и позднем послеоперационном периоде.

Анализ полученных результатов показал, что через 5-7 суток после легкой травмы (ЧМТ I, ОДА I) наблюдалось максимальное увеличение числа лейкоцитов до 11,8+0,6 тыс. в 1 мкл, видимое сохранение на уровне нормы абсолютного числа лимфоцитов до 11,8±0,6 тыс в 1 мкл (26±0,6 %) и в дальнейшем восстановление их до нормы к третьей неделе.

Биохимические и иммунохшшческие показатели сыворотки при изолированной и сочетанной ЧКГГ и травмы ОДА. К наиболее лабильным биохимическим показателям, отражающим даже легкую травму следует отнести кортизол, изменяющимся даже в течение суток. Менее лабильная, но также цикличная для травмы легкой и средней тяжести характерна для транскортина (ТК). Уровень мочевины достоверно повышается через 5-7 суток после травмы до 6,37+0,86 ммоль/л (р < 0,05). Это, по нашему мнению, свидетельствует о выраженности дезадаптационных процессов, являющихся результатом стрессовой реакции, а так же следствием непрямого воздействия механической травмы на обменные процессы в организме. К 14-19 суткам уровень мочевины снижается до 4,40+0,64 ммоль/л, что несколько ниже, чем содержание мочевины в сыворотке крови при поступлении.

Результаты биохимических исследований крови больных с изолированной ЧМТ тяжелой степени (ЧМТ II) показали, что в восстановительном периоде изолированной ЧМТ нормализация уровней основных обменных процессов наступает достаточно быстро к 5-7 дню.

В динамике травматической болезни головного мозга достоверное увеличение активности ферментов наблюдается в 1-3 сутки ЧМТ, что свидетельствует об активизации катаболических процессов у пострадавших в этот период. Нормализация катаболических процессов у больных с изолированной ЧМТ тяжелой степени происходит в пределах 5-7 суток, однако активность обеих трансаминаз (АСТ и АЛТ) сохраняется повышенной до двух-трех недель.

Полученные данные подтверждают, что первый период травматической болезни мозга, характеризует эти изменения метаболизма как «пожар обмена» (Ромоданов А.П., 1990).

Применение МДМ с первых суток после травмы позволяет ускорить процесс восстановления механизмов неспецифической резистентности организма и устранить иммунодепрессию уже на 5-7 сутки, о чем свидетельствует нормальное содержания иммуноглобулинов в сыворотке крови больных из групп ОДА 1-Н и ЧМТ I, нормальные цифры содержания лейкоцитов к 5-7 суткам, а также восстановление показателей уровня белков острой фазы в эти же сроки, в то время как в контрольной группе возврат к исходному уровню происходит лишь на 14-19 сутки.

В 1-3 сутки, то есть до или в самом начале сеансов МДМ-терапии лабораторные и иммунохимические показатели в зспериментальной (77 больных с переломами нижних конечностей и 20 больных с ЧМТ I) и контрольной (42 и 18 больных соответственно) подгруппах, сформированных случайным образом, практически не отличались между собой, поэтому в точке «1-3 день» их значения объединены в одну группу (табл.11).

Вслед за резким подъемом в крови уровня белков острой фазы (БОФ) в течение первых 24-48 часов после травмы ОДА и ЧМТ формируются характерные для каждого реактанта кривые экспрессии и нормализации уровня белка. Усредненные данные для пяти БОФ у больных из групп ОДА 1-11 и ЧМТ I, получавших и не получавших МДМ-терапию, представлены в табл. 11.

СРБ на 5-7 сутки в контрольной группе снижается с 6,3+1,08 мг/л (485%) до 3,6±0,98 мг/л (277%) и незначительно возрастает до уровня 3,9±0,73 мг/л (300% от референтного значения) к 14-19 суткам (табл.10). В группе больных, получавших мезодиэнцефальную модуляцию, сохраняется приблизительно аналогичный уровень 3,4+0,52 мг/л белка через 5-7 суток после травмы (262%) и наблюдается тенденция к более ранней нормализации содержания СРБ до 2,1±0,48 мг/л (162%) к 14 - 19 суткам.

Для СБАГ характерно медленное нарастание с 3,9±0,54 мг/л (260%) до 4,3±1,06 мг/л (287%) с максимальным содержанием 6,4±1,19 мг/л (427% от референтного значения) к 14—19 суткам.

Для лейкоцитарного лактоферрина (ЛФ) характерно возрастание в контрольной группе на 5-7 сутки с 2,8±0,51 мг/л (187%) до 3,4±0,91 мг/л (227%) (обе группы достоверно отличаются от доноров по данному белку) со снижением к 14-19 суткам (2,1±0,62 мг/л или 140%). В группе МДМ снижение

носит более выраженный характер (2,2±0,65 мг/л или 147%) на 5-7 сутки и восстановление показателей к 14-19 суткам на 67% от донорского уровня 1,0±0,42 мг/л (различие достоверно, р<0,05).

Наименее выраженные изменения наблюдались при изучении а2-макроглобулина. После кратковременного снижения до 82% от донорского уровня, уровень МГ нарастает до максимального на 5-7 сутки и постепенному снижается к 19 суткам.

Таблица 11

Усредненная динамика восстановления уровней некоторых белков острой фазы

в крови у больных с легкой и средней изолированной ЧМТ _и у больных с переломами нижних конечностей (ЧМТ I + ОДА 1-Й)

Показатели

Группа СРБ СБАГ МГ ЛФ Фр

мг/л мг/л г/л мг/л нг/мл

Контроль (доноры) . 1,30±0,53 1,50±1,31 1,70±0,65 1,5±0,10 115±20,5

1-3 сутки 6,30±1,08* 3,90±0,54* 1,40±0,34 2,80±0,51* 222±33,7*

5-7 сутки 3,60±0,98 4,30±1,06 2,30±0,92 3,40±0,91 247±25,3*

14-19 сутки 3,90±0,73 6,40±1,19 2,0±0,88 2,10±0,62 196±21,2*

5-7 сутки МДМ 3,40±0,52 4,50±0,65 2,70±0,80* 2,20±0,65* 166±16,7*

14-19 сутки МДМ 2,10±0,48* 2,70±0,60* 1,90±0,73 1,00±0,42* 178±12,3*

* — достоверные (р<0,05) различия с контрольной группой доноров

Полное снижение уровней БОФ у больных с переломами коррелирует с выявляемыми биомеханически и рентгенологически конечными этапами консолидации перелома — редукцией пери- и эндостального регенерата с параллельным развитием интермедиарной мозоли, определяющей собственно сращение перелома.

Уровни феритина (Фр) (табл. 10) при лечении переломов длинных костей без включения метода МДМ-терапии достоверно повышаются в 1,5-2 раза, начиная с первых 5-7 дней после перелома и незначительно снижаются, сохраняясь на достоверно высоком по сравнению с контролем уровне на 14-19 сутки. Под влиянием МДМ-терапии проискодит более быстрое снижение содержания Фр в крови, начиная с 5-7 дня.

При сопоставлении травмы ОДА и ЧМТ уровень Фр достоверно (р<0,01) повышается в сыворотке пациентов с тяжелой и сочетанной травмой, у больных с изолированной ЧМТ, но сохраняется на относительно низком уровне в остром периоде при закрытых переломах длинных костей.

Средние значения Фр у пострадавших с ЧМТ на фоне алкогольной интоксикации выше, чем значения у трезвых пострадавших равной степени тяжести повреждения. Обнаружены противоположно направленные изменения биохимических показателей у пострадавших в первые сутки после тяжелой ЧМТ: на фоне алкогольной интоксикации уровень глюкозы в крови (4,4±0,57 ммоль/л) достоверно ниже (р<0,02), а ферритина (185±29,3 нг/мл) достоверно выше (р<0,05), чем у пострадавших с равной степенью тяжести ЧМТ по шкале комы, но без признаков алкогольной интоксикации (6,8±0,75 ммоль/л и 134±26,4 нг/мл соответственно).

Таким образом, коэффициент ферритин/глюкоза при ЧМТ на фоне алкогольной интоксикации в 2 раза выше (42,0 и 19,7 соответственно), чем у пострадавших с ЧМТ без признаков алкогольной интоксикации. Данная зависимость может представлять интерес в плане дифференциальной диагностики токсической и травматической комы.

Кроме СРБ, СБАГ, МГ, Фр и ЛФ в первые три дня изолированной и сочетанной ЧМТ II пропорционально степени выраженности состояния пострадавших по шкале AIS и SCG в крови увеличиваются концентрации ЦП, ТК, ПЩФ. В результате повреждения головного мозга у всех больных независимо от вида и исхода мозгового повреждения на 1-10 сутки формируются неспецифические посттравматические реакции. Наиболее обязательными ее проявлениями являются SIRS, синдром гемостазиологических нарушений (тромбоцитопения, ЦДФ),

гиперферментемия (ACT, АЛТ, ЩФ) и интоксикационный синдром (МСМ, ТС А).

В отличие от острофазовых белков концентрация ТС А в сыворотке больных, прошедших МДМ-терапию, не отличалась от контрольной группы, что свидетельствует о невыраженности эндотоксикоза при неосложненных изолированных переломах длинных костей.

Установлено, что кроме ТСА, сильную связь с маркерами интоксикации (МСМ и ЛИИ) при травматическом токсикозе как на фоне тяжелой ЧМТ, так и при травме ОДА демонстрируют АФП, СБАГ и ТК, кортизол, ПДФ, умеренную — СРБ, ЛФ и некоторые другие БОФ.

У больных из групп ОДА III, сочетанной и изолированной и ЧМТ II обнаружена корреляция уровней АФП, СБАГ, ТК и альбумина как со степенью выраженности интоксикационного синдрома, так и со степенью выраженности SIRS в баллах. Показано, что белки с транспортной функцией в большей степени коррелируют со степенью интоксикационного синдрома (г=0,86), и в меньшей с SIRS (г=0,58). Для СРБ и других БОФ, наблюдаются противоположные корреляционные отношения.

Ранними признаками инфекционных постгравматических осложнений является повторное нарастание СРБ, ПДФ и ЛФ. Повышенные уровни белка S-100 пропорциональные степени травмы обнаруживаются не только у пострадавших с ЧМТ, но и при переломах длинных костей, особенно у пострадавших с алкогольной болезнью и после первых сеансов МДМ-терапии.

Клиническая эффективность МДМ-терапии коррелирует с нормализацией СРБ, СБАГ и IgM.

Включение в комплекс диагностических мероприятий у больных с переломами длинных костей и ЧМТ клинических (балльная оценка) и иммунохимических маркеров SIRS позволяет повысить точность прогноза осложнений. При отсутствии осложнений инфекционного характера на 3-4-ой неделе посттравматического периода диагностически и прогностически значимыми становятся онкомаркеры АФП и ШЦФ, уровни которых отражают степень консолидации длинных костей и репаративные процессы после ЧМТ.

Анализ полученных данных показал достоверные изменения содержания иммуноглобулинов IgA, IgG, IgM во всех группах в сроки 1-3, 5-7, 14-19 сутки после травмы.

Исследование содержания иммуноглобулинов IgA, IgG, IgM выявило следующие закономерности: IgA на 5-7 сутки в контрольной группе снижается с 1,94±0,09 г/л до 1,78±0,12 г/л и почти восстанавливается до прежнего уровня к 14-19 суткам 1,92±0,08 г/л; в группе больных, получавших мезодиэнцефальную модуляцию, наоборот наблюдается значительное повышение содержания иммуноглобулинов этого класса до 2,09±0,09 г/л через 5-7 суток после травмы с восстановлением данного показателя на несколько более высоком уровне к 14-19 суткам.

Для иммуноглобулинов IgG так же характерно снижение в контрольной группе на 5 -7 сутки с 9,02 ±0,19 г/л до 8,10±0,09 г/л с восстановлением к 14— 19 суткам (9,00+0,08 г/л), в то время как в группе МДМ снижение носит незначительный характер (8,92±0,08 г/л) на 5-7 сутки и восстановление показателей к 19 суткам до прежнего уровня (рис.9).

Со держание ЬО е сыворотке крови больных с переломами длинных костей на фоне МДМ

сутки после травмы

С МДМ Е Контроль

Содержание 1дМ в сыворотке крови больных с переломами блинных костей на фоне МДМ

□ ЛЩМ □ Контроль

Рис.9.

Рис.10.

Динамика содержания иммуноглобулинов класса IgM (рис.10) у больных с переломами длинных костей на фоне проводимой мезодиэнцефальной модуляции и в контрольной группе несколько отличается. Восстановление его до исходного уровня 1,22±0,02 г/л к 14—19 суткам происходит только в группе больных, которым назначена МДМ - терапия. На 5-7 сутки в этой группе повышение их незначительно 1,29 ± 0,05 г/л. В контрольной группе к 14-19 суткам восстановления содержания этих иммуноглобулинов не происходит 1,10±0,02 г/л, а в сроки 5-7 суток после травмы эти значения ниже, чем в МДМ -группе 1,06+0,03 г/л.

Из онкомаркеров альфа-фетопротеина (АФП), раково-эмбрионального антигена (РЭА) и плацентарной щелочной фосфатазы (ПЩФ) последний имел пик на 1-3 день, а не на 5-7-й день, как АФП и РЭА и постепенно снижается до нормы к 21 дню. Содержание АФП и РЭА в 1-3 сутки возрастает в полтора-два раза, достигая максимальных значений в конце первой недели (рис.43), в дальнейшем уровень РЭА снижается до нормы к 21-28 дню, а уровень АФП продолжает оставаться повышенным (рис.11).

600

500 --

400 --

300 --

200 --

100--

0--

1-3

Рис.11. Динамика онкомаркеров при переломах (группа ОДАП) в %

Содержание в сыворотке АФП, ПЩФ в большей степени зависит от тяжести травмы, чем РЭА. Максимальный уровень АФП при тяжелых травмах, осложненных травматическим шоком, возрастает по сравнению с донорами в 10 раз.

Повышенные концентрации ПЩФ при переломах в отдаленные сроки выявляется лишь у части больных с выраженным регенераторным ответом и коррелирует с активной консолидацией перелома. При этом успешно репонированные переломы одной из костей голени и бедра не приводили к появлению повышенных уровней ПЩФ. При вяло текущем заживлении, даже в

случаях множественных и открытых переломов с повреждением окружающих тканей, появление ПЩФ было не характерно.

ВЫВОДЫ

1. На аффинных (иммобилизованный эстадиол и цибакроновый синий), гидрофобных и амфифильных сорбентах исследованы хроматографические свойства ассоциированных с этими лигандами белков альфа-фетопротеина (АФП), сывороточного альбумина (СА), транскортина (ТК), СБАГ и ПЩФ и установлены факторы, позволяющие управлять их поведением в колонке.

2. Разаработаны методы выделения и очистки ТК, СБАГ и ПЩФ, получены моноспецифические антисыворотки на эти белки и сконструированы иммунохимические тест системы для их определения методами иммунодиффузионного и иммуноферментного анализа.

3. Установлена обратная корреляционная зависимость между концентрацией гидрофобного и гидрофильного низкомолекулярного лиганда, адсорбированного на поверхности макромолекулы альбумина, и степенью его термической денатурации. Разработан способ количественной оценки эндогенной интоксикации по нарастанию уровня термостабильной фракции сывороточного альбумина.

4. Установлена прямая корреляционная зависимость между степенью тяжести повреждения в баллах по шкалам AIS и ВПХ-П и сывороточным уровнем ферритина (Фр), КФК, белка S-100 и кортизола (для ЧМТ) или уровнем Фр, КФК, миоглобина, кортизола и мочевины (для переломов длинных костей). Повышенные уровни белка S-100 обнаруживаются не только у пострадавших с ЧМТ, но и при переломах длинных костей у пострадавших с алкогольной болезнью, а также после первых сеансов МДМ-терапии.

5. Средние концентрации Фр при ЧМТ I составили 166±24,7; при ЧМТ П -222±33,7; при сочетанной ЧМТ - 296±73,9; при травме ОДА I - 103±12,5; при травме ОДА II - 136±24,1; при травме ОДА III - 168±2б,5; у доноров - 86±13,2 нг/мл. Повышение уровня Фр в крови выше 150 нг/мл является референтным для ЧМТ и может быть вместе с белком S-100 рекомендовано для качественных экспресс-тестов для догоспитальной диагностики.

6. При равной оценке степени тяжести ЧМТ по шкале ком Глазго наличие и отсутствие сопутствующей травме алкогольной интоксикации проявляются разными биохимическими и иммунохимическими профилями. Отношение ферритин/глюкоза достоверно выше (р<00,1) у пострадавших с алкогольной интоксикацией.

7. Уровень ЛФ в сыворотке крови достоверно повышается с первых дней травмы только у больных с сочетанной ЧМТ. Увеличение концентрации ЛФ на фоне синдрома взаимного отягощения повреждений указывает на одновременное с процессами деструкции начало активизации факторов специфической иммунной защиты.

8. Оценка состояния пострадавшего по шкалам ВПХ-СП, ВПХ-СГ и APASHE-2, после травмы коррелирует с клиническими, биохимическими и

иммунохимическими маркерами гипоксии, гиперферментемии (ACT, AJIT, ЩФ), гемостазиологических нарушений (тромбоцитопения, ПДФ), травматического токсикоза и синдрома системного воспалительного ответа (ССВО, SIRS).

9. Клинические параметры SIRS (лихорадка, лейкоцитоз, тахикардия) входящие в шкалу оценки состояния реанимационных больных APASHE-2 и измеренные в баллах, находятся в тесной взаимосвязи с концентрацией белков острой фазы (СРВ - г=0,97), (СБАГ - г=0,92), (ЦП - г=0,91), (ЛФ - г=0,89), (ПДФ - г=0,81), (МГ - r=0,75), (СА - г=-0,67), (Фр - г=0,65) и в слабой связи (г=0,3-0,4) с транспортными белками и онкомаркерами (ТК, АФП, РЭА, П1ЦФ). Ранними признаками инфекционных постгравматических осложнений является повторное нарастание СРБ, СБАГ, ПДФ и ЛФ. Одновременное появление, определяемых иммунодиффузионными методами концентраций СРБ, ПДФ, ПЩФ и подъем уровней ЛФ более 1000 нг/мл и Фр свыше 200 нг/мл характерно для гипостатической или нозокомиалыгой (внутрибольничной) пневмонии.

10. Лабораторные параметры интоксикационного синдрома (МСМ, ЛИИ) демонстрируют сильную связь (г=0,90-0,80) с концентрацией термостабильной фракции альбумина (ТСА), миоглобина, ТК, кортизола, ПЩФ, ЦП, ПДФ, трансаминаз и умеренную связь с другими БОФ (СРБ - г=0,67), (СБАГ -г=0,65), (ЛФ - г=0,44), (МГ - г=0,39), (Фр - г=0,36).

11. Лабораторные показатели красной крови свидетельствуют о развитии у больных с тяжелой сочетанной ЧМТ (группа ЧМТ+ОДА), синдрома.взаимного отягощения повреждений, проявляющегося более выраженной анемизацией, по сравнению с больными с изолированной ЧМТ II и травмой ОДА III, и об отсутствии симптомов анемизации в группах ЧМТ I и ОДА I. В первые дни после ЧМТ и скелетной травмы обнаружено достоверное снижение в крови уровня фетального гемоглобина HbF. Начиная с 3-й недели во всех группах, отмечается повышение абсолютного (г/л) и относительного (HbF/Hb в %) уровней HbF. Не обнаружено взаимосвязи (г=0,1) между степенью сатурации артериальной крови кислородом (р02) и содержанием в венозной крови HbF.

12. У больных из групп с травмами ОДА 1-Й и ЧМТ I обнаружена более ранняя нормализация всех показателей в условиях применения неспецифической транскутанной электроимпульсной стимуляции головного мозга методом МДМ-терапии. Использование мезодиэнцефальной модуляции с первых суток после получения травмы позволяет снизить количество гипостатических пневмоний в 1,9 раз, уменьшить число воспалительных местных послеоперационных осложнений в 3,4 раза, количество вялоконсолидирующих переломов и ложных суставов в 3,3 раза.

Практические рекомендации

1. Способность стероидсвязывающих и транспортных белков изменять в широких пределах свои хроматографические характеристики в присутствии специфичных и неспецифичных лигандов различной природы позволяет

управлять их сорбционными свойствами и добиваться разделения близких по физико-химическим свойствам белков.

2. Предлагаемые схемы выделения альбумина, АФП, ПЩФ, СБАГ и транскортина с помощью аффинной, высаливающей и гидрофобной хроматографии дают возможность при минимальных экономических затратах очищать белки для последующего получения на эти белки моноспецифических антисывороток.

3. Для определения связывающей емкости альбумина по отношению к низкомолекулярным веществам-токсинам целесообразно применять иммунохимический способ измерения термостабильной фракции сывороточного альбумина (ТСА), с последующим вычислением соотношения ТСА/СА. Этот же иммунохимический метод может быть использован для количественной оценки синдрома эндогенной интоксикации.

4. Ранними признаками инфекционных посттравматических осложнений является повторное нарастание СРБ, СБАГ, ПДФ и ЛФ. Одновременное появление, определяемых иммунодиффузионными методами концентраций СРБ, ПДФ, ПЩФ и подъем уровней ЛФ более 1000 нг/мл и Фр свыше 200 нг/мл позволяет для гипостатической пневмонии.

5. Коэффициент ферритин/глюкоза при ЧМТ на фоне алкогольной интоксикации в 2 раза выше (42,0 и 19,7 соответственно), чем у пострадавших с ЧМТ без признаков алкогольной интоксикации. Рекомендуется использовать данное отношение для дифференциальной диагностики токсической и травматической комы..

6. При оценке тяжести состояния и прогнозировании исходов изолированной и сочетанной ЧМТ и травмы ОДА в острейшем периоде повреждения (1-7 сутки) следует неоднократно в динамике сопоставлять параметрическую оценку состояния пострадавшего в баллах с наиболее значимыми лабораторными показателями (уровни красной и белой крови, БОФ, ACT, АЛТ, тромбоцитов, HbF, мочевины, глюкозы) для своевременной коррекции интенсивной терапии.

7. Для оценки степени гипоксии при тяжелой нейро- и скелетной травме наряду с показателями оксигенации (р02), кровопотери (уровень альбумина и гравиметрия крови) и анемии (RBC, HGB, HCT) рекомендуется использовать иммунохимический тест на фетальный гемоглобин и коэффициент HbF/HbA.

8. В комплексную терапию всех больных с ЧМТ легкой степени и диафизарными переломами длинных костей, особенно пострадавших с алкогольной интоксикацией при поступлении, необходимо с первых суток включать МДМ-терапию, что позволяет уменьшить вероятность истощения адаптационного потенциала и предотвращает развитие гиперкатаболизма и осложнений раннего периода травматической болезни.

9. При оценке тяжести состояния и прогнозировании исходов изолированной и сочетанной ЧМТ и травмы ОДА в острейшем периоде повреждения (1-10 сутки) следует неоднократно в динамике сопоставлять клиническую оценку состояния пострадавшего в баллах (ВПХ, SCG, триада SIRS) с наиболее

значимыми лабораторными показателями (уровни иммунохимических

маркеров, биохимических и гематологических показателей).

Иммунохимические тесты на СРБ, СБАГ, ЦП, ЛФ, МГ, HbF, АФП, ПЩФ, Фр,

ТСА, ТК, MG рекомендуются для оценки эффективности лечения и прогноз

течения травматической болезни мозга и ОДА.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Коханов A.B., Ульянов A.A. К вопросу о физиологической роли альфа-фетопротеина: влияние на процессы регенерации и воспаления // Особенности физиологии и патологии детей раннего возраста. - Саратов. -1984. - С.19-23.

2. Коханов A.B. Возможности гидрофобной хроматографии в разделении белков с высокой степенью гомологии // Тезисы докладов 66-й научной конференции Астр.мединститута - Астрахань. - 1985. - С.91-92.

3. Мирошников В.М., Резников И.И., Коханов A.B. Сравнительная оценка действия некоторых сывороточных белков на регенерацию тканей // Бюлл. эксперим. биологии. - 1987. - №1. — С. 95 - 97.

4. Коханов A.B., Ульянов A.A., Коханов C.B. Четвертьвековой юбилей в иммунодиагностике: некоторые итоги и перспективы изучения первого иммунохимического маркера рака // Пролиферация и рак: медико-биологические проблемы. Сборник научных трудов. - Саратов. - 1988. -С.10-18.

5. Мирошников В.М., Коханов A.B. Иммунобиологические особенности регенерации при использованиии официнальных белковых препаратов // Патол. физиология и эксперим. терапия. - 1988. - №4. - С. 54 - 57.

6. Коханов A.B., Гайнуллина Л.Х. Белки беременности животных, их диагностическое значение // Сборник научных трудов СГУ. - Саратов. -1990. - С.20-21.

7. Гайнуллина Л.Х., Коханов A.B. Антигены репродуктивной системы млекопитающих и их значение для экологического мониторинга // Влияние антропогенных факторов на морфогенез и структурные преобразования органов. Материалы Всероссийской конференции. Астрахань. - 1991. -С.35-36.

8. Коханов A.B., Костина Л.А. Тест на стадиоспецифические белки как дополнительный критерий иммунологической реактивности организма для оценки экзогенных повреждающих факторов // Влияние антропогенных факторов на морфогенез и стру1сгурные преобразования органов. Материалы Всероссийской конференции. Астрахань. -1991. - С. .81-82.

9. Мамиев О.Б., Коханов A.B. Специфичность аутоантител у женщин в гестационном периоде // Сборник докладов IV съезда врачей и провизоров Калмыцкой АССР. - Элиста. - 1990. - С.91-92

10. Гончарова Л.А., Коханов A.B., Корнеев Н.В. Значение иммунохимических исследований в процессе хирургического лечения ортопедических больных

// Хирургия на пороге XXI века. Труды АГМА - Астрахань. - 2000. Т. 18. -С.157-163.

11. Коханов A.B., Костина ДА., Коханов C.B., Основин С.А. Эмбриональные костно-хряшевые протеины: возможности в диагностике, профилактике и терапии // Структурные преобразования органов и тканей на этапах онтогенеза человека в норме и при воздействии антропогенных факторов. Экология и здоровье населения. Актуальные проблемы биологии и медицины. Материалы международной конференции. Астрахань. - 2000. -С.83-84.

12. Коханов A.B., Костина JI.A., Шац Е.И., Корнеев Н.В. Острофазовые белки и аутоантитела к тканевым антигенам как маркеры хронических деструктивно-пролиферативных процессов костной ткани // Хирургия на пороге XXI века. Труды АГМА - Астрахань. - 2000. Т.18. - С. 225-230.

13. Коханов A.B., Мирошников В.М., Костина Л.А., Суринков Д.Б. Иммунохимический мониторинг в процессе хирургического лечения травмы опорно-двигательного аппарата // Структурные преобразования органов и тканей на этапах онтогенеза человека в норме и при воздействии антропогенных факторов. Экология и здоровье населения. Актуальные проблемы биологии и медицины. Материалы международной конференции. Астрахань. - 2000. - С. 232-233.

14. Безрукавникова Н.В., Никулина Д.М., Коханов A.B., Григорьева Т.А. Иммунохимические маркеры в клинической оценке дисгормональных заболеваний и гормонзависимых опухолей // Материалы пятой научной конференции с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге 2001». - Медицинская иммунология - С-Пб. - 2001. - Т.З. - №2. - С. 263.

15. Коханов A.B., Мирошников D.M., Суринков Д.Б., Коханов C.B. Стадиоспецифические антигены в оценке эффективности лечения больных с переломами длинных костей методом МДМ - терапии // Материалы пятой научной конференции с международным участием «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге 2001». - Медицинская иммунология - СПб. - 2001. - Т.З. - №2. - С. 323.

16. Коханов A.B., Гончарова JI.A., Костина Л.А. Иммунохимические маркеры в оценке и прогнозировании результатов лечения детей с травмами и заболеваниями опорно-двигательного аппарата // Актуальные проблемы педиатрии. Труды АГМА. - Астрахань. - 2001. Т.23. - С.95-97.

17. Коханов A.B., Гончарова Л.А., Суринков Д.Б., Костина Л.А. Особенности антигенного и изоферментнорго спектров костной ткани в процессе перинатального остеогенеза. // Материалы 78-й итоговой конференции АГМА - Астрахань. - 2001. Т.22. - С.94-97.

18. Суринков Д.Б., Коханов A.B. Маркеры репаративной регенерации, иммунного статуса и адаптационных реакций у больных с переломами длинных костей на фоне мезодиэнцефальной модуляции // Материалы конференции молодых ученых с международным участием «Белки-

маркеры патологических состояний». - Астрахань-Москва. - 2001. - С.144-146.

19. Асфандияров Р.И., Лазько А.Е., Коханов A.B. Изомеры щелочной фосфатазы и остеогенез // Морфология. - 2002. - Т. 121 - №2-3. - С. 13

20. Демичев Н.П., Резаев A.A., Суринков Д.Б., Коханов A.B. Влияние мезодиэнцефальной модуляции на иммунологические показатели крови у больных с переломами длинных костей П Вестник новых медицинских технологий. - 2002. - T.IX - №2. - С. 46-47.

21. Демичев Н.П., Резаев A.A., Суринков Д.Б., Коханов A.B. Коррекция иммунологических нарушений у больных с переломами длинных костей методом мезодиэнцефальной модуляции // Современные технологии лечения и реабилитации повреждений и заболеваний опорно-двигательной системы. Материалы VII съезда травматологов-ортопедов Республики Беларусь, Гомель, 3-5 октября 2002 г. - Минск. - 2002. - С. 159-161.

22. Демичев Н.П., Резаев A.A., Суринков Д.Б., Коханов A.B. Мезодиэнцефальная модуляция как метод повышения адаптации больных с переломами длинных костей // Международный медицинский журнал. -2002. - Т.8 - №3. - С. 94-95.

23. Демичев Н.П., Резаев A.A., Суринков Д.Б., Коханов A.B. Содержание мочевины в сыворотке крови больных с переломами длинных костей на фоне мезодиэнцефальной модуляции // Труды АГМА - Астрахань. - 2002. Т.24.-С.199-204.

24. Коханов A.B., Мирошников В.М., Суринков Д.Б., Демичев Н.П. Онкомаркеры при физиологической и патологической консолидации переломов длинных костей // Материалы III съезда биохимического обществаРАН. С-Пб. -26 июня -1 июля 2002. С.180-181.

25. Демичев Н.П., Коханов A.B., Суринков Д.Б. Уровни термостабильного альбумина и плацентарной щелочной фосфатазы в процессе консолидации переломов длинных костей // Белки-маркеры патологических состояний -Материалы 3-й научной конференции и школы-семинара для молодых ученых - Астрахань. - 2003. - С.94-97.

26. Коханов A.B., Смычкова Е.В., Белопасов В.В., Суринков Д.Б. Изменения уровня сывороточного лактоферрина после ЧМТ и скелетной травмы // Теоретические вопросы современной медицины (по материалам научно-практической конференции, посвященной 85-летию ВУЗа). Труды АГМА -Астрахань. - 2003. Т.28. - С.133-138.

27. Коханов A.B., Суринков Д.Б., Дячина М.Н., Костина Л.А. Особенности антигенного и изоферментного спектров костной ткани при остеомиелитах различной этиологии II Теоретические вопросы современной медицины (по материалам научно-практической конференции, посвященной 85-летию ВУЗа). Труды АГМА - Астрахань. - 2003. Т.28. - С.129-132.

28. Смычкова Е.В., Белопасов В.В, Коханов A.B., Широков H.A., Барабаш В.И. Железосодержащие белки в оценке степени тяжести закрытой черепно-мозговой травмы // Белки-маркеры патологических состояний -

Материалы 3-й научной конференции и школы-семинара для молодых ученых - Астрахань. - 2003. - С.148-153.

29. Суринков Д.Б., Коханов A.B. Иммунохимический контроль эффективности лечения больных с переломами длинных костей методом МДМ - терапии // Современные проблемы развития регионального здравоохранения.-Казань: Арт-Кафе, 2003. - С.235

30. Безрукавникова Н.В., Коханов A.B., Гречухин С.Н. Иммунохимический анализ транспортной функции сывороточных белков // Современные достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины - Материалы научно-практической конференции и школы-семинара для молодых ученых с международным участием - Астрахань-Москва. - 2004. - С. 114-118.

31. Демичев Н.П., Коханов A.B., Суринков Д.Б Кинетика белков воспаления и иммунитета в крови у больных с переломами длинных костей под воздействием мезо-диэнцефальной модуляции // Анналы травматологии и ортопедии. - 2004. - № 1. - С. 47-52.

32. Волохина И.В, Демичев Н.П., Коханов A.B., Суринков Д.Б. Влияние мезодиэнцефальной модуляции на показатели красной крови у больных с переломами длинных костей // Вестник новых медицинских технологий. -2004. - Т.Х - №1-2. - С.

33. Метелкина Е.В., Коханов A.B., Агапова А.Б., Кривенцев Ю.А., Суринков Д.Б. Железосодержащие белки в остром периоде черепно-мозговой и скелетной травмы травмы // Современные достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины - Материалы научно-практической конференции и школы-семинара для молодых ученых с международным участием - Астрахань-Москва. - 2004. - С.114-118.

34. Коханов A.B. / Возможность использования иммуносенсоров в ургентной медицине // Успехи современного естествознания. - 2005. - № 12.-С.43-44

35. Коханов A.B., Метелкина Е.В., Барабаш В.И. Уровень термостабильной изоформы альбумина крови как показатель степени интоксикации // Эколого-биологические проблемы бассейна Каспийского моря. — Материалы 8-й Международной конференции. 11-12 октября 2005 г. -Астрахань. - 2005. - С. 199-200

36. Коханов A.B., Петрова О.В., Попов С.Н., Гордиенко A.A. Применение иммунопероксидазных комплексов в иммунодиффузионном анализе новых антигенов костной ткани // Актуальные вопросы современной медицины (по материалам научно-практической конференции, посвященной 87-летию ВУЗа). Труды АГМА - Астрахань. - 2005,- Т.31. - С.147-150

37. Коханов A.B., Юсупов Р.Ш. Колебания уровней сывороточных белков и реактантов острой фазы у больных с тяжелой травмой на протяжении суток // Актуальные вопросы современной медицины (по материалам научно-практической конференции, посвященной 87-летию ВУЗа). Труды АГМА -Астрахань. - 2005.- Т.31. - С.150-153

38. Коханов A.B., Анферов A.A., Мустафин Р.Д. Иммунохронобиологический анализ в оценке критических состояний в абдоминальной хирургии // Актуальные вопросы современной хирургии — Материалы Всероссийской конференции, посвященной 85-летию Астраханского областного научного медицинского общества хирургов — Астрахань, 2006. — С. 110-111.

39. Коханов A.B., Метслкина Е.В., Кривенцев Ю.А., Белопасов В.В. Суточные ритмы показателей системы эритрона у больных, с тяжелой черепно-мозговой травмой // Актуальные вопросы современной медицины (по материалам научно-практической конференции, посвященной 88-летию ВУЗа). Труды АГМА - Астрахань. - 2006,- Т.ЗЗ. - С.264-267

40. Коханов A.B., Метелкина Е.В., Суринков Д.Б., Юсупов Р.Ш., Мамедов А.Э., Черкашина О.В. Суточные ритмы показателей красной крови в норме // Достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины — Материалы 5-й научно-практической конференции с международным участием - Астрахань-Волгоград-Москва, 2006. - С. 305307

41. Кчибеков Э.А., Коханов A.B., Метелкина Е.В., Белопасов В.В., Суринков Д.Б., Антонова J1.H. Уровни лактоферрина, ферритина и фетального гемоглобина при заболеваниях гепатобилиарной зоны и травмах // Актуальные вопросы современной хирургии — Материалы Всероссийской конференции, посвященной 85-летию Астраханского областного научного медицинского общества хирургов — Астрахань, 2006. — С.313-314.

42. Безрукавникова Н.В., Коханов A.B., Кривенцев Ю.А., Никулина Д.М., Берштейн Л.М., Кутуков В.В. Стероидсвязывающие белки у больных раком молочной железы // Вопросы онкологии. - 2007.- Т.53. - №4- С.409-413

43. Безрукавникова Н.В., Коханов A.B. Физико-химическая характеристика транскортина и подходы к его очистке // Актуальные вопросы современной медицины (по материалам научно-практической конференции, посвященной 89-летию АГМА). Труды АГМА - Астрахань. - 2007,- Т.35. -С.243-246

44. Коханов A.B., Белопасов В.В., Барабаш В.И., Мустафин Р.Д., Парфенов Л.Л., Анферов A.A., Волохина И.В., Суринков Д.Б. Сывороточные белки -маркеры интоксикации // Астраханский медицинский журнал. - 2007. -№1.-С. 100

45. Коханов A.B., Белопасов В.В., Меркулов A.M., Волохина И.В., Суринков Д.Б. Лактоферрин и ферритин в оценке тяжести политравмы // Астраханский медицинский журнал. - 2007. - №1. - С. 100-101

46. Коханов A.B., Касаткин В.Н., Курьянов П.М., Медведев P.A. Методы лабораторной экспресс-диагностики в практике врача скорой медицинской помощи // Актуальные вопросы современной медицины (по материалам научно-практической конференции, посвященной 89-летию АГМА). Труды АГМА - Астрахань. - 2007.- Т.35. - С.238-242

47. Коханов A.B., Николаев A.A. Биохимические аспекты патологических изменений у больных с тяжелой черепно-мозговой травмой // Клиническая лабораторная диагностика. - 2007. - №9. - С. 63

48. Коханов A.B., Николаев A.A. Определение онкомаркеров и железосодержащих белков в различные периоды травмы опорно-двигательного аппарата // Клиническая лабораторная диагностика. - 2007. - №9. - С. 63-64

49. Безрукавникова Н.В., Коханов A.B. Транскортин как онкомаркер // Астраханский медицинский журнал. - 2008. - №1. - С. 9-11

50. Коханов A.B., Белопасов В.В., Метелкина Е.В., Демичев Н.П., Ларионов A.A., Суринков Д.Б., Николаев A.A., Петрова ОЗ. Взаимосвязь уровней сывороточных, острофазовых белков и онкомаркеров с количественной оценкой тяжести травмы и общего состояния пострадавших. // Клиническая лабораторная диагностика. - 2008. - №9. - С. 40

51. Коханов A.B., Белопасов В.В., Метелкина Е.В., Демичев Н.П., Ларионов A.A., Суринков Д.Б., Петрова О.В. Иммунохимические особенности сыворотки крови у больных с изолированной ЧМТ и травмой опорно-двигательного аппарата (ОДА) // Российский иммунологический журнал. -2008. - Т.2. - №2-3. - С. 143

52. Коханов A.B., Кривенцев Ю.А., Никулина Д.М., Белопасов В.В., Метелкина Е.В. Фетальный гемоглобин как маркер гипоксии при ЧМТ // Астраханский медицинский журнал. - 2008. — №1. - С. 171-173

53. Мусатов О.В., Коханов A.B. Альфа-фетопротеин как маркер репаративных и иммунорегуляторных процессов после пластических операций // Российский иммунологический журнал. - 2008. - Т.2. -№2-3. - С. 181

54. Мусатов О.В., Коханов A.B., Мустафаев И.М-А., Луцева O.A., Медведев P.A. Альфа-фетопротеин как маркер репаративной регенерации II Астраханский медицинский журнал. - 2008. - №1. - С. 34-35

55. Петрова О.В., Коханов A.B., Лапин A.A., КазимироваЕ.И. Уровни ферритина в тканях больных с алкогольной болезнью // Вопросы наркологии. - 2008. — №5. - С. 54-57

Патенты на изобретения

1. Способ определения связывающей емкости альбумина человека / приоритет от 11.12.2007 Заявка№ 2007146077 (050497). (Коханов A.B.).

2. Способ компрессионного артродеза голеностопного сустава при травматическом остеоартрозе / приоритет от 09.01.2008 Заявка № 2008100976 (001068) (Коханов A.B., Ларионов A.A., Суринков Д.Б.).

Список использованных сокращений

АИ - алкогольная интоксикация

АФП- альфа-фетопротеин

БОФ - белки «острой» фазы

Д,кД- дальтон, килодальтон

ИФА - иммуноферментный анализ

ККФ - костная кислая фосфатаза

ЛИИ- лейкоцитарный индекс интоксикации

ЛФ - лактоферрин

МГ - а2-макроглобулин

МДМ - мезодиэнцефальная модуляция (метод ТКЭС-терапии)

МСМ - молекулы средней массы

ОДА - опорно-двигательный аппарат

ПДФ - продукты деградации фибриногена

ПЩФ - щелочная фосфатаза плацентарного типа

РИА - радиоиммунный анализ

РЭА - раково-эмбриональный антиген

CA — сывороточный альбумин

СБАГ — связанный с беременностью альфа2-гликопротеин («2-PAG) СГМ, УГМ - сотрясение (ушиб) головного мозга

СРБ - С - реактивный белок (CRP)

ТБ — травматическая болезнь

ТК — транскортин

ТКЭС - транскраниальная электростимуляция головного мозга

ТСА - термостабильная фракция сывороточного альбумина

Фр - ферритин

ЦП - церуллоплазмин

ЧМТ - черепно-мозговая травма

AIS, ISS — международные шкалы тяжести повреждений

APASHE-2 шкала оценки тяжести состояния

НЬА - гемоглобин А

HbF - фетальный гемоглобин F

IgM, IgG, IgA - иммуноглобулины трех классов

р02 - напряжение кислорода (показатель оксигенации крови)

S-100 - нейроспецифический белок S-100

SCG - шкала комы Глазго

SIRS - синдром системного воспалительного ответа (ССВО)

КОХАНОВ Александр Владимирович

ИММУНОХИМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ В КЛИНИЧЕСКОЙ ОЦЕНКЕ ЧЕРЕПНО-МОЗГОВОЙ И СКЕЛЕТНОЙ ТРАВМЫ

03.00.04. — Биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Тираж 100 экз. Подписано в печать 26.02.09r. Заказ №2546

Издательство ГОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия Росздрава», 414000, г. Астрахань, ул. Бакинская, 121

Содержание диссертации, доктора медицинских наук, Коханов, Александр Владимирович

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. МОЛЕКУЛЯРНЫЕ ОСНОВЫ ПАТОГЕНЕЗА И ПОДХОДЫ К БИОХИМИЧЕСКОЙ ОЦЕНКЕ ТРАВМАТИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ (обзор литературы).

1.1. Основные патологические процессы и синдромы острого периода травмы и их молекулярные механизмы.

1.2. Лабораторные, биохимические и иммунохимические методы оценки синдромов и диагностики осложнений травматической болезни

1.2.1. Маркеры синдрома системного воспалительного ответа (SIRS) и септических осложнений травматической болезни.

1.2.2. Травматический токсикоз и методы его диагностики.

1.2.3. Маркеры синдрома диссеминированного внутрисосудистого свертывания и других нарушений гемостаза и фибринолиза.

1.2.4. Система эритрона при травме и методы оценки острой крово-потери, анемии и гипоксии.

1.2.5. Лабораторные и биохимические методы диагностики ранних и поздних осложнений травматической болезни.

1.2.6. Клинические, лабораторные и биохимические особенности течения травмы на фоне острой и хронической алкогольной интоксикации

1.2.7. Клиническая, лабораторная и биохимическая оценка эффективности МДМ-терапии.

1.2.8. Лабораторные и биохимические особенности изолированной и сочетанной черепно-мозговой травмы (ЧМТ) и травмы опорно-двигательного аппарата (ОДА).

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Общая характеристика обследованных больных.

2.2. Методы оценки тяжести повреждений и тяжести состояния больных

2.3. Материал и методы лабораторного исследования.

2.4. Методы идентификации, выделения и очистки белков.

2.5. Методы статистического анализа.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

ГЛАВА 3. ХАРАКТЕРИСТИКА, ВЫДЕЛЕНИЕ И ОЧИСТКА НЕКОТОРЫХ БЕЖОВ, ЗНАЧИМЫХ ДЛЯ ОЦЕНКИ СИНДРОМОВ ТРАВМАТИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ, И РАЗРАБОТКА

ИММУНОХИМИЧЕСКИХ ТЕСТОВ НА ЭТИ БЕЛКИ.

ЭЛ. Белки крови, перспективные для иммунохимического мониторинга основных процессов травматической болезни.

3 Л .1. Сывороточные и острофазовые белки.

ЗЛ.2. Сывороточные гормонтранспортирующие белки.

3.1.3. Тканевые и органоспецифические белки.

3.1.4. Онкофетальные и канцероплацентарные белки.

3.2. Хроматографическая характеристика сывороточного альбумина, АФП, ГПЦФ, СБАГ и транскортина человека.

3.3. Разработка метода определения связывающей способности сывороточного альбумина и оценки степени эндотоксикоза.

3.4. Разработка технологии получения препарата СБАГ и транскортина из сыворотки беременных и ГПЦФ из экстракта плаценты.

3.5. Характеристика очищенного препарата СБАГ, транскортина и

ГЛАВА 4. ИММУНОХИМИЧЕСКИЕ И ЛАБОРАТОРНЫЕ

ПОКАЗАТЕЛИ В ОЦЕНКЕ ИЗОЛИРОВАННОЙ И СОЧЕТАННОЙ

ЧМТ И ТРАВМЫ ОДА.

4.1. Клинические показатели у больных при изолированной и сочетанной ЧМТ и травме ОДА при поступлении.

4.2. Иммунохимические и лабораторные показатели в динамике изолированной и сочетанной ЧМТ и травме ОДА.

4.3. Иммунохимические показатели в диагностике осложнений травмы и в оценке эффективности МДМ-терапии травматической болезни

Введение Диссертация по биологии, на тему "Иммунохимические показатели в клинической оценке черепно-мозговой и скелетной травмы"

Актуальность работы. За последние 5 лет летальность только от дорожно-транспортных происшествий в РФ увеличилась на 65% и число погибших, по данным ГИБДД, достигает 33-35 тыс. человек в год [18, 253]. Травма, особенно черепно-мозговая (ЧМТ) и политравма, остаётся одной из ведущих причин смертности и инвалидизации населения [3, 53, 307, 436], а у лиц, не достигших 40 лет, тяжелая сочетанная травма занимает первое место среди причин смерти [28, 142, 253].

Отдельной проблемой социального и медицинского характера является высокая взаимосвязь травматизма с состоянием алкогольного интоксикации пострадавших [79, 90, 215, 253, 294, 305]. Интоксикация этанолом, обнаруживаемая у 35% пострадавших [291], существенно утяжеляет течение травматической болезни и ухудшает прогноз.

Наиболее распространенным сочетанием при политравмах остается комбинация повреждений опорно-двигательного аппарата и головного мозга [253, 291]. Даже в случае изолированной легкой ЧМТ, на долю которой в структуре нейротравмы приходится от 60 до 80%, все более ощутимой становится ее социальная и экономическая цена [149, 155, 162, 290].

Несмотря на очевидные успехи медицинской науки по спасению и реабилитации контингента ранее обреченных больных сохраняется высокий процент смертности и осложнений после тяжелых изолированных, множественных и сочетанных травм [53, 76, 198, 290].

Отсутствие заметного прогресса в лечении этой группы пострадавших привело в 90-х годах к пересмотру взглядов на патогенез травмы и возникновению концепции травматической болезни [34, 82, 114, 136, 243]. Суть ее в том, что вызываемые травмой нарушения витальных функций и параметров гомео-стаза носят закономерный пролонгированный характер и характеризуются однотипностью первичных аварийных регуляторных реакций и адаптационных синдромов, независимо от локализации повреждения [16, 93, 147, 202, 284].

С другой стороны известно [147, 160, 308], что изменения многих показателей метаболизма при ЧМТ отличаются от первичных аварийных регулятор-ных реакций, характерных для травмы опорно-двигательного аппарата (ОДА).

Для решения вопроса о клиническом значении сходства и различий аварийного метаболизма при ЧМТ и травме ОДА полезную информацию можно получить применив чувствительные методы иммунохимического анализа [89, 111, 112, 218], которые пока не находят распространения в ургентной медицине.

Исследования роли иммунохимических показателей в остром периоде травмы должны получить добавочный импульс еще и в силу того, что появление нанотехнологий уже привело к созданию новых экспресс-методов анализа [27, 55, 85, 91, 94, 175, 238, 413, 453] (иммуносенсоры, иммуночипы, количественные и качественные иммунохроматографические тесты, основанные на методах «сухой» химии), отвечающих потребностям медицины критических состояний [98, 198].

Неравномерно исследованы взаимосвязи отдельных белков со степенью выраженности основных синдромов травматической болезни (гипоксия, системный воспалительный ответ, коагулопатия, токсемия и т.д.) [38, 53, 75, 150, 170, 190, 253], не проводилось комплексного изучения взаимосвязи уровня и спектра белков сыворотки с количественной оценкой (в баллах) степени тяжести состояния пострадавших.

Роль других белков, таких как СБАГ, транскортин или ПЩФ, в патогенезе травмы практически не исследована, очевидно, по причине отсутствия на эти белки коммерческих тест-систем [24, 101, 258]. Для восполнения этого пробела становится актуальной проблема их выделения, очистки и конструирования моноспецифических тест—систем для их количественного анализа.

Систематизация значимых имунохимических индикаторов состояния по-стравматического аварийного метаболизма актуальна как для диагностики и прогнозирования осложнений, так и для оценки результатов оперативного и консервативного лечения. В том числе такого перспективного метода немедикаментозного лечения, как транскутанная электростимуляция головного мозга (ТКЭС), эффективной при лечении сопутствующей травме алкогольной интоксикации [31, 57, 70, 81, 121, 134, 146, 256].

Цель исследования:

Улучшение диагностики и мониторинга состояния пострадавших с травмами головного мозга и опорно-двигательного аппарата путем включения в программу клинико-лабораторного обследования иммунохимических показателей.

Задачи исследования:

1. Изучить физико-химические свойства альфа-фетопротеина (АФП), плацентарной щелочной фофатазы (ПЩФ), связанного с беременностью альфа2-гликопротеина (СБАГ), транскортина (ТК) и сывороточного альбумина (СА).

Новизна исследования:

На основании изучения физико-химических характеристик сывороточных белков, связывающих гидрофобные лиганды, разработан новый общий метод выделения и очистки альфа-фетопротеина (АФП), связанного с беременностью альфа2-гликопротеина (СБАГ), транскортина (ТК) и сывороточного альбумина (СА), основанный на принципах гидрофобной, высаливающей и аффинной хроматографии.

Впервые обнаружена корреляция уровней СБАГ, ТК и СА как со степенью выраженности интоксикационного синдрома (значения МСМ и ЛИИ), так и со степенью выраженности SIRS. Показано, что белки с транспортной функцией в большей степени коррелируют со степенью интоксикационного синдро-, ма, и в меньшей — с SIRS. Для СРБ и других БОФ, не выполняющих транспортную функцию наблюдаются противоположные корреляционные отношения.

Впервые в сыворотках крови больных с выраженным травматическим эн-дотоксикозом обнаружено явление нарастания термостабильной фракции сывороточного альбумина (ТСА), пропорционально степени выраженности эндо-токсикоза. Разработан и внедрен в клиническую практику новый иммунохими-ческий способ определения связывающей емкости альбумина по отношению к низкомолекулярным веществам различного происхождения, являющийся им-мунохимическим способом количественной оценки степени эндогенной интоксикации.

Проведен многомерный статистический анализ уровней биохимических, гематологических показателей и содержания острофазовых, сывороточных и онкофетальиых белков в сыворотках у больных с изолированной и сочетанной ЧМТ и травмой ОДА с количественной оценкой тяжести травмы и общего состояния пострадавших при поступлении и в динамике травматической болезни, в том числе с учетом сопутствующей алкогольной интоксикации (АИ) при поступлении.

Впервые определена диагностическая и прогностическая эффективность определения у больных с изолированной и сочетанной ЧМТ и переломами длинных костей отдельных иммунохимических показателей, а также их комбинаций и отношений (диагностических коэффициентов). С помощью многомерного факторного анализа из числа острофазовых, сывороточных и органоспе-цифических белков отобраны маркеры, эффективные для оценки степени выраженности гипоксии, интоксикации, SIRS, септических осложнений на ранних и поздних стадиях ЧМТ, травмы ОДА и политравмы.

Впервые с биохимических и иммунохимических позиций нашел подтверждение синдром взаимного отягощения при сочетанной травме и у пострадавших с СГМ и диафизарными переломами длинных костей на фоне алкогольной интоксикации (АИ) при поступлении. Обнаружены изменения сывороточных уровней железосодержащих белков ферритина и лактоферрина, в сочетании с некоторыми биохимическими параметрами (глюкоза и рОг) перспективные в дифференциальной диагностике этиологии комы.

Впервые для оценки степени гипоксии при тяжелой нейро- и скелетной травме использован иммунохимический тест на фетальный гемоглобин, введен новый информативный показатель: коэффициент отношения HbF/HbA.

Положения, выносимые на защиту:

4. Взаимосвязь изучаемых иммунохимических показателей пострадавших с данными биохимических и гематологических исследований в динамике острого периода изолированной и сочетанной ЧМТ и травмы ОДА. Иммунохими-ческие показатели, эффективные для оценки основных патологических синдромов травматической болезни: маркеры степени выраженности гипоксии, интоксикации, SIRS, репаративных процессов, осложнений травмы ОДА и ЧМТ.

Научно-практическая значимость:

Предложенные схемы выделения и очистки белков с помощью хроматографии на аффинных и гидрофобных носителях позволяют получать очищенные препараты ГПЦФ, СБАГ и ТК для конструирования иммунохимических тест-систем.

Установлено, что изолированная и сочетанная ЧМТ и травма ОДА сопровождаются эндогенной интоксикацией, пропорциональной степени тяжести повреждения. Отмечено повышение в крови тяжелых больных термостабильной фракции сывороточного альбумина в 1,5-2,5 раза. Это факт реализован в «способе определения связывающей емкости альбумина человека», который может быть использован как для исследования межмолекулярных взаимодействий типа «лиганд-альбумин» в эксперименте, так и для диагностики степени интоксикации в клинической практике.

Иммунохимические экспресс-тесты на СБАГ, HbF, АФП, ПЩФ, ферри-тин, лактоферрин, а2-макроглобулин, продукты деградации фибриногена могут найти применение в качестве критериев эффективности лечения травматической болезни мозга и ОДА.

Внедрение результатов работы в практику:

Разработанные в диссертации методики и полученные результаты внедрены в практическую деятельность отделения анестезиологии и реанимации, нейрохирургического, травматологического отделений МУЗ «Городская клиническая больница №3» г.Астрахани, МНТК «Экологическая медицина» «Аст-раханьгазпрома», МУЗ «Станция скорой медицинской помощи» г.Астрахани, отделения реанимации МУЗ «Клинический родильный дом» г.Астрахани.

Апробация работы:

2002; на 2-й и 3-й научно-практической конференции и школе-семинаре для молодых ученых с международным участием «Белки-маркеры патологических состояний», Астрахань-Москва, 2001, 2003; на научно-практической конференции с международным участием «Современные достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины», Астрахань-Москва, 2004, Астрахань-Волгоград-Москва, 2006; на VIII Международной научной конференции «Эколого-биологические проблемы бассейна Каспийского моря», Астрахань, 2005; Всероссийской конференции, посвященной 85-летию Астраханского областного научного общества хирургов (Астрахань, 2006); на научно-практическом Симпозиуме "Национальные дни лабораторной медицины России" (Москва, 2007, 2008) и Объединенном Иммунологическом Форуме (Санкт-Петербург, 2008).

По теме диссертации опубликовано 55 научных работ, в том числе, 13 в рецензируемых научных изданиях, выпускаемых центральными издательствами.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Коханов, Александр Владимирович

262 ВЫВОДЫ

1. Установлена закономерность, заключающаяся в способности стероидсвязывающих и транспортных белков изменять в широких пределах свои хроматографические характеристики в присутствии гидрофобных, аффинных и амфифильных лигандов, что позволяет управлять их сорбционными свойствами.

2. Предложены схемы выделения и очистки альбумина, АФП, ПЩФ, СБАГ и транскортина с помощью аффинной, высаливающей и гидрофобной хроматографии. Путем рехроматографии на одном и том же носителе в условиях изменяющегося элюирующего буфера удается избавиться от близких по свойствам балластных белков и добиться высокой степени очистки без использования других методов фракционирования. Получены очищенные препараты АФП, ПЩФ, СБАГ и транскортина, моноспецифические антисыворотки на эти белки и сконструированы иммунохимические тест-систем для их идентификации и количественного определения.

3. Обнаружено явление повышения термостабильной фракции сывороточного альбумина, пропорционально степени выраженности эндотоксикоза. Разработан и внедрен в клиническую практику простой иммунохимический способ определения связывающей емкости альбумина по отношению к низкомолекулярным веществам различного происхождения, а также новый класс лабораторных иммунохимических тестов для оценки эндогенной интоксикации.

4. Установлена высокая корреляция уровней термостабильной изоформы альбумина (i—+0,89) со степенью выраженности интоксикационного синдрома и уровнем маркеров интоксикации МСМ и ЛИИ. Сильную связь с маркерами интоксикации при травматическом токсикозе как на фоне ЧМТ, так и при травме ОДА демонстрируют АФП, СБАГ и ТК, кортизол, ПДФ, умеренную — СРБ,ЛФ и другие БОФ.

5. Обнаружена корреляция уровней АФП, СБАГ, ТК и альбумина как со степенью выраженности интоксикационного синдрома, так и со степенью выраженности SIRS. Показано, что белки с транспортной функцией в большей степени коррелируют со степенью интоксикационного синдрома (г=0,86), и в меньшей с SIRS (г=0,58). Для СРБ и других БОФ, наблюдаются противоположные корреляционные отношения.

6. -Уровень ФР достоверно (р<0,01) повышается в сыворотке пациентов с тяжелой и сочетанной травмой, у больных с изолированной ЧМТ, но сохраняется на относительно низком уровне в остром периоде при закрытых переломах длинных костей.

7. Обнаружены противоположно направленные изменения биохимических показателей у пострадавших в первые сутки после тяжелой ЧМТ: в случае ретроспективно установленного факта алкогольной интоксикации уровень глюкозы в крови (4,4±0,57 ммоль/л) достоверно ниже (р<0,02), а ферритина (125±25,3 нг/мл) достоверно выше (р<0,05), чем у пострадавших с равной степенью тяжести ЧМТ по шкале комы, но без признаков алкогольной интоксикации (6,8±0,75 ммоль/л и 64±16,4 нг/мл соответственно). Предложено использовать данную закономерность для дифференциальной диагностики токсической и травматической комы.

8. Для оценки степени гипоксии при тяжелой нейро- и скелетной травме наряду с показателями оксигенации (р02), кровопотери ( уровень альбумина и гравиметрия крови) и анемии (RBC, HGB, НСТ) рекомендуется использовать иммунохимический тест на фетальный гемоглобин и коэффициент HbF/HbA. На фоне показателей анемизации у больных с тяжелой черепно-мозговой травмой обнаружено достоверное (р<0,01) снижение уровня HbF. Начиная с 3-й недели при изолированной травме ОДА и при сочетанной с ЧМТ травме ОДА, отмечается повышение абсолютного (г/л) и относительного (HbF/Hb в %) уровней фетального гемоглобина, чего не наблюдается у больных с тяжелой ЧМТ в результате нарушения центральных механизмов адаптации.

9. Уровень ЛФ в сыворотке крови достоверно повышается с первых дней травмы только у больных с ЧМТ, сочетанной с травмами ОДА. В группах с изолированной ЧМТ и с переломами костей уровень ЛФ повышается незначительно и постепенно нормализуется. Повышение уровня ЛФ, иммуноглобулинов на 5-й день после изолированной ЧМТ ассоциируется с благоприятным течением посттравматического периода. У больных с тяжелой сочетанной ЧМТ на 3-4 неделе снова происходит его повторное возрастание (1,7±0,20 мкг/мл, р<0,01), при переломах длинных костей, наоборот, повышенный биосинтез ЛФ начинается в более поздний период и сопровождается возвратом к норме уровней иммуноглобулинов.

10. Ранними признаками инфекционных посттравматических осложнений является повторное нарастание СРБ, ТК и ЛФ. Повышенные уровни белка S-100 пропорциональные степени травмы обнаруживаются не только у пострадавших с ЧМТ, но и при переломах длинных костей, особенно у пострадавших с алкогольной болезнью и после первых сеансов МДМ-терапии.

11. Обнаружена более ранняя нормализация всех показателей в условиях применения неспецифической транскутанной электроимпульсной стимуляции головного мозга методом МДМ-терапии. В комплексную терапию больных с СГМ и диафизарными переломами длинных костей, особенно пострадавших с алкогольной интоксикацией при поступлении, необходимо с первых суток включать МДМ-терапию, что позволяет уменьшить вероятность истощения адаптационного потенциала и предотвращает развитие гиперкатаболизма и осложнений раннего периода травматической болезни.

12. В первые три дня изолированной и сочетанной ЧМТ пропорционально степени выраженности состояния пострадавших по шкале AIS и SCG в крови увеличиваются концентрации Фр, ЛФ, ТК, ПЩФ и других БОФ. В результате повреждения головного мозга у всех больных независимо от вида и исхода мозгового повреждения на 1-10 сутки формируются неспецифические посттравматические реакции. Наиболее обязательными ее проявлениями являются SIRS, синдром гемостазиологических нарушений (тромбоцитопения, ПДФ, D-димер), гиперферментемия (ACT, АЛТ, ЩФ) и интоксикационный синдром (МСМ, ТСА)

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для выделения и очистки липофильных и амфифильных сывороточных белков рекомендуется хроматография на аффинных, амфифильных и гидрофобных сорбентах. Изменяя условиях сорбции и десорбции в процессе рехроматографии удается избавиться от близких по свойствам балластных белков и добиться высокой степени очистки при минимальных экономических затратах.

2. Способ определения связывающей емкости альбумина человека может быть использован как для исследования межмолекулярных взаимодействий типа «лиганд-альбумин» в эксперименте, так и для диагностики степени интоксикации в клинической практике.

3. Коэффициент ферритин/глюкоза при ЧМТ на фоне алкогольной интоксикации в 3 раза выше (28,4 и 9,4 соответственно), чем у пострадавших с ЧМТ без признаков алкогольной интоксикации. Рекомендуется использовать данное отношение для дифференциальной диагностики токсической и травматической комы.

4. Для оценки степени гипоксии при тяжелой нейро- и скелетной травме наряду с показателями оксигенации (р02), кровопотери (гравиметрия крови) и анемии (RBC, HGB, НСТ) рекомендуется использовать иммунохимический тест на фетальный гемоглобин и коэффициент HbF/HbA. На фоне показателей анемизации у больных с тяжелой черепно-мозговой травмой наблюдается достоверное снижение уровня HbF.

5. По результатам определения и последующего вычисления соотношения острофазовых (СРБ и СБАГ) и онкофетальных (АФП и ПЩФ) белков рекомендуется иммунохимический «способ оценки адаптационных реакций у травматологических больных».

6. Иммунохимические тесты на БОФ, HbF, АФП, ПЩФ, ФР, Лф, ТСА, ТК, MG могут найти применение в качестве критериев степени тяжести травмы и общего состояния больных с изолированными и сочетанными ЧМТ и диафизарными переломами длинных костей тяжести, а также позволяют оценить эффективность лечения и прогноз течения травматической болезни мозга и ОДА.

7. При оценке тяжести состояния и прогнозировании исходов изолированной и сочетанной ЧМТ и травмы ОДА в острейшем периоде повреждения (1-10 сутки) следует неоднократно в динамике сопоставлять параметрическую оценку состояния пострадавшего в баллах (SCG) с наиболее значимыми лабораторными показателями (уровни иммунохимических маркеров, биохимических и гематологических показателей) для своевременной коррекции интенсивной терапии.

8. В комплексную терапию больных с СГМ и диафизарными переломами длинных костей, особенно пострадавших с алкогольной интоксикацией при поступлении, необходимо с первых суток включать МДМ-терапию

- 267

Библиография Диссертация по биологии, доктора медицинских наук, Коханов, Александр Владимирович, Москва

1. Абелев Г.И. Принципы иммунодиагностики опухолей // Иммунология 1982. - №4.- С.5-12.

2. Авдеева М.Г., Шубин М.Г. Патогенетические механизмы инициации синдрома системного воспалительного ответа // Клин, лабор.диагностика. — 2003.-№6.-С. 3-10.

3. Агаджанян В.В. (ред.). Политравма. Новосибирск : Наука, 2003. - . 492 е.

4. Агаджанян Н.А., Елфимов А.И. Функции организма в условиях гипоксии и гиперкапнии. М.: Медицина , 1986. - 272 е.

5. Агапова А.Б. Клинико-диагностическое значение определения фетального гемоглобина у больных при некоторых заболеваниях, сопровождающихся гипоксией: Автореф. дис. . канд. мед. наук. Астрахань. • -2003.-20 е.

6. Айсен П.Н. Трансферрины (сидерофилины) // Неорганическая биохимия. М.-1978. р.1. - С. 333-360.

7. Алекперли А.У., И.В.Куршакова, В.Л.Карташкин Особенности диагностики и лечения сочетанных повреждений у лиц пожилого и старческого возраста // Скорая мед. помощь. 2003. - № 4. - С.52-54.

8. Алешкин В.А., Новикова Л.И., Лютов А.Г. и соавт. Белки остройфазы и их клиническое значение // Клиническая медицина. 1988. - №. 8. — С.39-48.

9. Алиев Н.А. Нейроэндокринные и иммунохимические взаимодействия при хроническом алкоголизме // Фармакология и токсикология. 1991. - т.54. - № 6. - С.16-19.

10. Анкин Л.Н., Анкин H.JI. Практическая травматология. Европейские стандарты диагностики и лечения. — М., 2002. — 408 е.

11. Анохина И.П. Лекции по наркологии. — М., Медицина. 1998. - 267е.

12. Апарцин К.А, Новожилов А.В., Олейник А.В., Игнатьева Ю.Е., Корнилов М.Н. Сравнительный анализ операционных характеристик шкал для оценки тяжести повреждений при сочетанной механической травме // Скорая мед. помощь. 2004. - № 3. - С.141-143.

13. Арискина О.Б., Пивоварова Л.П., Осипова И.В., Логинова М.П. Иммунологические показатели как маркеры эндогенной интоксикации при шокогенной механической травме // Скорая мед. помощь. 2003. - № 4. - С. 5557.

14. Астраков С.В. Неспецифические синдромы у больных с тяжелыми повреждениями головного мозга на нейрореанимационном этапе: Автореф. дис. . д-ра. мед. наук. СПб., 2007. - 46 е.

15. Асфандияров Р.И., А.Е.Лазько, А.В.Коханов. — Изомеры щелочной фосфатазы и остеогенез // Морфология. 2002. - Т. 121 - №2-3. - С. 13.

16. Багненко С.Ф., Лапшин В.Н., Шах Б.Н. Перфузионные и метаболические расстройства у пострадавших с шокогенными повреждениями в остром периоде травматической болезни // Скорая мед. помощь. 2004. - №3. -с.144.

17. Балашов В.И. Иммунохимическое изучение фибриногена и продуктов его распада в онтогенезе и при некоторых заболеваниях человека, сопровождающихся повышением фибринолитической активности: Автореферат дис. . канд. мед. наук. Астрахань, 1971. - 18 е.

18. Баркаган З.С. Геморрагические заболевания и синдромы. 2-е изд. -М., 1988.-526 е.

19. Баркаган З.С., Момот А.П., Тараненко И.А., Шойхет Я.Н. Основы пролонгированной профилактики тромбоэмболии. — М.: Ньюдиамед, 2003. 41 е.

20. Безрукавникова Н.В., Коханов А.В., Кривенцев Ю.А., Д.М.Никулина, JI.M. Берштейн, В.В.Кутуков. Стероидсвязывающие белки у больных раком молочной железы // Вопросы онкологии. 2007.- Т.53. — №4- С.409-413.

21. Белицер В.А., Хороводова E.JL, Смехова Б.А. Об альфа2-глобулине сыворотки крови, модифицирующем активность трипсина // Докл. АН СССР. -1967.- №3.- С.723-726.

22. Белопасов В.В. Клинико-диагностическое значение иммунохимического анализа белкового спектра ликвора при заболеваниях нервной системы: Автореф. дис. . д-ра мед. наук. — М., 1997. 36 е.

23. Биосенсоры: основы и приложения / Под ред. Э. Тернера и др. М.: Мир, 1992.- 614 с.

24. Бондаренко А.В., Пелеганчук В.А., Герасимова О.А. Госпитальная летальность при сочетанной травме и возможности ее снижения // Вестн. травматол. ортопед. 2004. - №3. - С. 49-52.

25. Бородай Е.А. Клинико-морфологическая характеристика пневмоний в разные периоды травматической болезни // Скорая мед. помощь. 2003. - № 4.-С. 127-131.

26. Бугланов А.А. Метаболизм железа и металлопротеиды (обзор) // Вопр. мед. химии. 1988. - № 1. - С. 2-7.

27. Ван Лир Э., Стикней К. Гипоксия / Пер. с англ. М.: Медицина, 1967. - 367 е.

28. Васильев М.Ю., Авдеев Г.И. Количественное иммуноферментное определеннее лактоферрина и альфа-лактабульмина в сыворотке крови онкологических больных // Экспер. Онкология. 1985. — Т. 3. - N 5. - С. 56-60.

29. Вашетко Р.В. Некоторые аспекты патогенеза и патоморфологии травматической болезни // Скорая мед. помощь. 2003. - №4. - С. 20-22.

30. Веремеенко К.Н., Волохонская Л.И. Определение альфа2-макроглобулина в сыворотке крови человека и его клиническое значение // Лаб. дело. 1969. - №7. - С.394-397.

31. Веремеенко К.Н., Голобородько О.П., Кизим А.И. Протеолиз в норме и при патологии - Киев, 1988. — 198 е.

32. Верещагина В.М., Машков А.Е., Коптева Е.В., Величкина Н.П. Биохимическая оценка остроты воспалительного процесса при гематогенном остеомиелите у детей // Клин, лабор. диагностика. — 2005. № 10. — С. 52.

33. Верховский А.И., Маматханов М.Р., Бумай А.О. Прогностические критерии при тяжелой черепно-мозговой травме // Скорая мед. помощь. — 2003. -№4.-С. 22-23.

34. Вилкинсон Д. Принципы и методы диагностической энзимологии / Пер. с англ. М.: Медицина, 1981. - 624 е.

35. Владимиров Ю.А, Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. — М.: Наука, 1972. — 252 е.

36. Владимиров Ю.А., Добрецов Г.Е. Флюоресцентные зонды в исследовании биологических мембран. — М.: Наука, 1980. — 320 е.,

37. Власов В.В. Введение в доказательную медицину — М.: Медиа Сфера, 2001.—392 е.

38. Власов В.В. Эффективность диагностических исследований — М.: Медицина, 1988.—256 е.

39. Власова И.Т., Агаджанян Н.А. Индивидуальная устойчимость к гипоксии организма и нервной клетки. // Бюлл. эксперим. биол. и мед. 1994. -Т. 118.-№11.- С. 454-464.

40. Воеводин Д.А., Розанова Г.Н. Цитокиногормональные взаимодействия: положение об иммуноэндокринной регуляторной системе // Педиатрия. 2006. - №1. - С.95-102.

41. Волохина И.В., Н.П.Демичев, А.В.Коханов, Д.Б.Суринков. Влияние мезодиэнцефальной модуляции на показатели красной крови у больных с переломами длинных костей // Вестн. новых мед. технологий. 2004. — Т.Х -№1-2.-С. 47-48.

42. Волощук С.Г. Иммунохимическое изучение эмбрионального преальбумина-1 в эмбриональных, дефинитивных и опухолевых тканях человека: Автореф. дис. . канд. мед. наук. -М., 1982. — 16 е.

43. Воробьев А.И. Синдромы диссеминированного внутрисосудистого свертывания крови. М.: Ньюдиамед, 1996. - 34 е.

44. Воскресенская О.Н., Шуковский В.В., Коршунов Г.В. Гемостаз и перекисное окисление липидов при терапии острого периода сотрясения мозга

45. Клин, лабор. диагностика. 2005. - №1. - С. 24, 33-35.

46. Гаал Э., Медьише Г., Верскеи JI. Электрофорез в разделении биологических молекул. —М.: Мир, 1982. — 416 е.

47. Габриэлян Н.И., Дмитриев А.А., Севастьянова О.А и др. Средние молекулы и уровень эндогенной интоксикации у реанимационных больных // Анестезиол. и реаниматол. 1985. - №1. - С. 36-38.

48. Гаврилин С.В., Бояринцев В.В., Сингаевский А.Б. Ошибки анестезиологической и реаниматологической помощи раненым и пострадавшим. СПб.: Фолиант, 2006. - 208 е.

49. Галстян Г.М., Городецкий В.М., Берковский A.JL, Сергеева Е.В., Сперанская JI.JI. Прокальцитонин — маркер инфекционного воспаления: клиническое значение и область применения // Анестезиол. и реаниматол. -2003. -№ 1.-С. 26-31.

50. Гвоздев А.Р., Гвоздев Р.И. Использование ферментативных и неферментативных тест-систем на основе метода "сухой химии" для качественного, полуколичественного и количественного экспресс-анализа мочи // Клин, лабор. диагностика. 2003. - № 9. - С. 31-32.

51. Герасимов A.M., Фурцева Л.И. Биохимическая диагностика в травматологии и ортопедии. — М., 1986. 234 е.

52. Гланц С. Медико-биологическая статистика.— М.: Практика, 1999 —459 е.

53. Гнездицкая Э.В., Бухова В.П., Захарова Н.А. Стимуляция экспрессии рецепторов для Ig М и Ig G на лимфоцитах тимуса человека при действии лактоферрина // Бюл. эксперим. биолог, и мед. — 1987. - N 4. - С. 447449.

54. Говорова Н.В., Войнов А.Ю., Лукач В.Н., Семченко В.В., Щербаков П.Н. Повреждение сосудистого эндотелия и нарушения системы регуляции агрегатного состояния крови у больных с тяжелой черепно-мозговой травмой //

55. Анестезиол. и реаниматол. 2004. - № 6. - С. 32-35. /

56. Голиков П.П. Рецепторные механизмы глюкокортикоидного эффекта. М.: Медицина, 1988. - 288 е.

57. Голубев A.M. Изоферменты новообразований. М.: Медицина, 1981. - 144 е.

58. Горин B.C. Белки беременности и макроглобулины в оценке течения неосложненного послеродового периода и при развитии локализованных форм послеродовых гнойно-воспалительных заболеваний // Автореф. дис. . д-ра. мед. наук. М.: 1996. - 47 е.

59. Грабар П., Бюртен П. Иммуноэлектрофоретический анализ. М.: "И.Л.", 1963. - 164 е.

60. Грачев С.В., Прохоренко И.Р., Прохоренко С.В. Роль белков крови в начальной стадии патогенеза эндотоксинового шока // Молекулярная медицина. -2004.-№ 1.-С. 20-25.

61. Грачева Л.Н. Сравнительная иммунохимическая и физико-химическая характеристика тканевых альфа2 — ферропротеинов человека: Автореф. дис. . кан. биол. наук. Астрахань, 1979. - 20 е.

62. Гребнева О.Л., Ткачук Е.А. Модификация расчета показателя веществ низкой и средней молекулярной массы плазмы крови. // Клин. лаб. диагн. 2005. - № 10. - С. 4.

63. Грезнухин Э.Г., Кустов В.М. Причины летальных исходов у пострадавших с полифрактурами нижних конечностей // Проблемыполитравмы. Смоленск, 1998. - 157-158 е.

64. Гублер Е.В. Вычислительные методы анализа и распознавания патологических процессов. Л., Медицина. - 1978. - 296 е.

65. Гублер Е.В. Информатика в патологии, клинической медицине и педиатрии. Л., Медицина. - 1990. - 167 е.

66. Гудумак B.C., Марченко В.П., Нигуляну В.И. Трипсин-антитрипсиновая система и содержание среднемолекулярных пептидов в крови при экспериментальном травматическом шоке // Патол. физиол. и эксперим. терапия. — 1990.— № 2. — С. 30-32.

67. Гуманенко Е.К., Бояринцев В.В., Супрун Т.Ю. Объективная оценка тяжести травмы. СПб., 1999. - 109 е.

68. Гуманенко Е.К., Сингаевский А.Б. Достижения в лечении тяжелой сочетанной травмы за последние 20 лет // Скорая мед. помощь. — 2004. № 3. — С. 153-154.

69. Даренский И.Д., Мельников А.В. Влияние электротранквилизации на некоторые гормональные показатели у больных алкоголизмом. // Вопросы наркологии. 1997.- № 5. - С. 45-47.

70. Дементьева И.И. Лабораторная диагностика полиорганной недостаточности. // Клин, лабор. диагностика. 2005. - № 9. - С. 8.

71. Демин А.К., Демина И.А. Злоупотребление алкоголем в Российской Федерации // Российская ассоциация общественного здоровья. 2000. - № 1. -С.8-20.

72. Демичев Н.П., Резаев А.А., Суринков Д.Б., Коханов А.В. Влияние мезодиэнцефальной модуляции на иммунологические показатели крови у больных с переломами длинных костей // Вестник новых медицинских технологий. 2002. - T.IX - №2. - С. 46-47.

73. Дерябин И.И., Насонкин О.С. Травматическая болезнь. Л.: Медицина, 1987. - 304 е.

74. Детерман Г. Гель-хроматография. М.: Мир, 1970. - 264 е.

75. Дзантиев Б.Б. Жердев А.В., Попов В.О. и др. Системы экспрессной иммунодетекции биологически активных соединений // Клин, лабор. диагностика. 2002. - № 8. - С. 25-32.

76. Дзантиев Б.Б., Вызова Н.А., Жердев А.В., Венгеров Ю.Ю., Тогузов Р.Т. Иммунохимические экспресс-тесты для медицинской диагностики // Клин, лабор. диагностика. 2003. - № 9. - С. 31.

77. Долгов В.В., Шевченко О.П. Лабораторная диагностика нарушений обмена белков. //Пособие для врачей. РМАПО.-М.-1997. - 63 е.

78. Дранник Г.Н., Ена Я.М., Варецкая Т.В. Продукты расщепления фибрина/фибриногена при патологических процессах. Киев: Здоровья, 1987. -151с.

79. Дюк В.А., Эмануэль В.Л. Информационные технологии в медико-биологических исследованиях. — СПб., 2003.

80. Егоров A.M., Осипов А.П. и др. Теория и практика иммуноферментного анализа. — М.: Высшая школа, 1991. — 154 е.

81. Ельский А.В., Золотухин С.Е.,.Крюк Ю.Я, Баешко А.А. Особенности биохимических показателей крови у пострадавших с травмой на фоне алкогольной интоксикации и пути ее коррекции // Скорая мед. помощь. 2003. - № 4. - С. 24-27.

82. Ермолов А.С., Годков М.А., Булава Г.В., Меньшиков Д.Д. Роль лабораторной службы при оказании экстренной медицинской помощи // Клин, лабор. диагностика. 2008. - №9. - С. 39-40.

83. Ефимова М.Г., Щербакова И.С., Шушакова Н.Д. Трансферрин и ферритин — модуляторы активности кальций — кальмодулинзависимой фосфодиэстеразы мозга // Биохимия. — 1997. — Т.62. № 2. — С. 195-201.

84. Зайчик А.Ш., Чурилов Л.П. Механизмы развития болезней и синдромов. СПб.: ЭЛБИ-СПб, 2005. - 507 е.

85. Заседателев А.С., Михайлович В.М., Грядунов ДА., Наседкина Т.В., Рубина А.Ю., Паньков С.В., Барский В.Е. Применение биочипов в лабораторной медицине // Клиническая лабораторная диагностика. — 2008. № 9.-С. 3.

86. Захарова Е.Т., Васильев В.Б., Горбунова В.Н. и др. Церулоплазмин // Биохимия. 1983. - Т. 48. - № 10. - С. 1709-1720.

87. Земсков A.M., Земсков В.М., Ворновский В.А., Новикова Л.А. -Биохимическая составляющая иммунопатологии // Иммунопатология, аллергология и инфектология. 2000. - №4. - С.37-47.

88. Зенков Н.К., Ланкин В.З., Меныцикова Е.Б. Окислительный стресс. Биохимический и патофизиологический аспекты. — М.: МАИК Наука, 2001. 343 е.

89. Зильбер А.П. Медицина критических состояний: Общ. проблемы. — Петрозаводск: Изд-во Пегрозавод. ун-та, 1995. — Кн.1. — 360 е.

90. Золотокрылина Е.С. Постреанимационная болезнь // Анестезиол. и реаниматол. — 2000. — №6. — С. 68-73.

91. Зорин Н.А., Жабин С.Г., Белогорлова Т.И., Архипова С.В. Сравнительное изучение альфа2-макроглобулина и ассоциированного сбеременностью альфа2-гликопротеина как возможных аналогов // Вопр. мед. хим. 1991.- №37(3).- С.48-50.

92. Зорин Н.А., Зорина В.Н., Зорина P.M. Роль белков семейства макроглобулинов в регуляции воспаления. // Биомед. химия — 2006 — Т. 52. — С. 229-238.

93. Зорин Н.А., Зорина P.M. Неспецифический маркер рака — ассоциированный с беременностью альфа2-гликопротеин // Вопр. онкол. 1988. -№6.-С. 651-655.

94. Зубаиров Д.М. Биохимия свертывания крови. М.: Медицина. - 1978. - 176 е.

95. Иванов В.Б. Активные красители в биологии // М.,"Наука". 1982.224 е.

96. Иванов Д.Е., Меламуд Э.Е., Пучиньян Д.М. Динамика активности амипотрансфераз в плазме крови как отражение особенностей патологического процесса у больных с черепно-мозговой травмой // Патол. физиол. и эксперим. терапия. 1998. №4. - С. 6-8.

97. Ивашкина С.Г., Немов В.В., Кораблев С.Б. и др. Динамика сывороточного ферритина при термической травме // Гематология и трансфузиология. 1997. - № 6. - С. 42-43.

98. Игнатов С.В. Система эритрона при ожогах // Гематология и трансфузиология. 1990. - № 3. - С. 22-26.

99. Игонин А.А., Кукес В.Г., Пальцев М.А. Сепсис: молекулярные механизмы системного воспаления в качестве модели для изучения перспективных терапевтических мишеней // Молекулярная медицина. 2004. -№2.-С. 3-12.

100. Ильинский О.Б., Лебедев В.П., Савченко А.Б., Спевак С.Е., Соловьева А.И. Влияние транскраниального неинвазивного раздражения антиноцицептивной системы на процессы репарации // Физиол. журн. им. И.М. Сеченова. 1987,- Т.73. - №1-2, С. 223-229.

101. Иммунологические методы / под ред. Г.Фримеля М.: Медицина,1987.-472 е.

102. Ш.Иммуноферментный анализ / под ред. Т.Нго и Г.Ленхоффа М.: Мир, 1988.-446 е.

103. Иммунохимический анализ / под ред. Л.А.Зильбера М.: Медицина, 1968.-238 с.

104. Калашников В.В., Борисенко С.А., Татаринов Ю.С. Иммунохимическая идентификация нового эмбрионального антигена в опухолевой ткани яичников. // Бюлл. эксперим. биол. и мед. 1976. - №6. — С. 725-726.

105. Калинкин О.Г.,.Калинкин А.О. К патогенезу травматической болезни 11 Скорая мед. помощь. 2003. -№ 4. С. 30-33.

106. Кальф-Калиф Я.Я. О лейкоцитарном индексе интоксикции и его практическое значение // Врач. дело. — 1941. — № 1. — С. 31-35.

107. Картавенко В.И., Голиков П.П., Давыдов Б.В., Андреев А.А. Состояние процессов перекисного окисления липидов и антиоксидантной системы у пострадавших с тяжелой сочетанной травмой // Патол. физиол. и эксперим. терапия. 2004. - №1. - С. 8-11.

108. Картавенко В.И., Шабанов А.К. Применение шкалы APACHE-II для оценки тяжести пострадавших // Интегральная оценка и прогнозирование в экстренной медицине: Матер, конф., поев. 70-летию со дня рожд. проф. Ю.Н.Цибина.— СПб, 2001.— С. 18-25.

109. Карташкин В.Л. Принципы диагностики сочетанных шокогенных повреждений на современном этапе // Скорая мед. помощь. 2004. № 3. - С. 160-161.

110. Карякина Е.В., Белова С.В. Молекулы средней массы как интегральный показатель метаболических нарушений (обзор литературы) // Клин, лабор. диагностика. — 2004. № 3. - С. 3-8.

111. Кассиль В.Л. Что такое острый респираторный дистресс-синдром: есть ли смысл в дискуссии? // Вестн. Интенсив. Терапии. 2006. - № 4. — С.53-58.

112. Кацнельсон Я.С. Транскраниальная электроаналгезия как компонент анестезиологического пособия и средство купирования болевых синдромо: Автореф. дисс. канд. мед. наук., Л., 1985.- 18 е.

113. Кузник Б.И., Васильев Н.В., Цибиков Н.Н. Иммуногенез, гемостаз и неспецифическая резистентность организма. М.: Медицина, 1989. - 320 с.

114. Ким Л.Б., Калмыкова Е.Ю. Диагностическое и прогностическое значение сывороточного церулоплазмина // Клин, лабор. диагностика. 2006. -№5.-С. 13-19.

115. Клиническая оценка лабораторных тестов / Под ред. Н.У. Тица. М.: Медицина, 1986. - 480 е.

116. Клиническое применение прокальцитонина (ПКТ) для диагностики и мониторинга сепсиса / Руководство. М.: Brahms, 2004. - 24 е.

117. Клиническое руководство по черепно-мозговой травме / Под. ред. А.Н.Коновалова, Л.Б.Лихтермана, А.А.Потапова. -М.: Антидор, 1998 550 е.

118. Ковалев И.Е., Полевая О.Ю. Антитела к физиологически активным соединениям. —М.: Медицина, 1981. — 125 е.

119. Кожевникова Т.А., Кожевников В.Н. Влияние методики транскраниальной электростимуляции (ТКЭ) на иммунную систему // Тез. докл. на 4 Междунар. конгр. "Иммунореабилитация и реабилитация в медицине", Сочи, 5-9 июля, 1998 г.- вып. 8 .- С. 175.

120. Кожура В.Л., Новодержкина И.С., Кирсанова А.К. Острая массивная кровопотеря: механизмы компенсации и повреждения // Анестезиол. и реаниматол. 2002. - № 6. - С. 9-13.

121. Козинец Г.И., Макарова В.А. (ред.). Исследование системы крови в клинической практике. —М.: Триада-Х, 1997. — 480 е.

122. Козлов В.А. Эритрон как саморегулирующаяся гомеостатическая система (?)! // Патол. физиол. и эксперим. терапия. 2001. - №3. - С. 9-11.

123. Колосова Л.И., Акоев Г.Н., Лебедев В.П., Моисеева А.Б., Рябчикова О.В. Влияние транскраниальной электростимуляции в анальгетическом режиме на восстановление функции поврежденного седалищного нерва

124. Транскраниальная электростимуляция, сб. трудов, СПб., 1999. С. 30-34.

125. Конышев В.А. Связывание и транспорт веществ альбумином сыворотки крови // Вопр. мед. химии. 1973. - № 4. - С. 339—350.

126. Кораблева Н.Н. Транскраниальная электромодуляция в комплексном лечении больных с травмами и заболеваниями опорно-двигательной системы: Пособие для врачей.- М., 1999. 13 е.

127. Котельников Г.П., Кондурцев В.А., Чеснокова И.Г. Травматическая болезнь: клинико-патогенетическое, диагностическое и прогностическое значение изменений в системе гемостаза // Клин, мед.- 1998.-№1.-С.31-34.

128. Котельников Г.П., Чеснокова И.Г. Травматическая болезнь. — М.: Медицина, 2002. 156 е.

129. Коханов А.В., Николаев А.А. Биохимические аспекты патологических изменений у больных с тяжелой черепно-мозговой травмой // Клин, лабор. диагностика. 2007. - №9. — С. 63.

130. Коханов А.В., Николаев А.А. Определение онкомаркеров и железосодержащих белков в различные периоды травмы опорно-двигательного аппарата // Клин, лабор. диагностика. 2007. - №9. - С. 63-64.

131. Краснов А.Ф., Соколов В.А. О состоянии медицинской помощи при дорожно-транспортных травмах // Анналы травматол. и ортопед. — 1995. -№ 3. -С. 9-17.

132. Кривенцев Ю.А. Изучение физико-химических свойств и межмолекулярных взаимодействий сывороточных белков беременности: Автореф. дис. . канд. мед. наук. — Астрахань, 1999. 19 е.

133. Кривенцев Ю.А., Никулина Д.М. Строение и биологическая роль белков гемоглобинового профиля (учебное пособие для студентов медицинских и биологических факультетов высших учебных заведений). -Астрахань: АГМА, 2007. 118 е.

134. Кримштейн Т.А., Хватов В.Б. модификация метода определения а2-макроглобулина для параллельного исследования его и ai-антитрипсина в крови человека // Лаб. дело. — 1978. —№ 4. С. 234-237.

135. Кудлай Д. А. Иммунометаболические аспекты патогенеза политравмы: Автореф. дис. . д-ра. мед. наук. — Новосибирск, 2007. —47 е.

136. Кулагин В.К. Патологическая физиология травмы и шока.— Л., 1978. 296 е.

137. Куршакова И.В. Энцефалопатия как осложнение тяжелых внечерепных повреждений: Автореф. дис. . д-ра. мед. наук. — СПб., 2006. — 45 е.

138. Кухта В.К., Олецкий Э.И., Стожаров А.Н. — Белки плазмы крови // Патохимия и клиническое значение: Справ. — Мн., Беларусь. — 1986. — 80 е.

139. Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник. Под ред. В.В. Меньшикова.— М.: Медицина, 1987. 368 е.

140. Ланкин В.З., Тихазе А.К., Беленков Ю.Н. Свободнорадикальные процессы в норме и при патологических состояниях: Пособие для врачей.— М.: РКНПК МЗ РФ, 2001. — 78 е.

141. Ларский Э.Г., Комелькова Л.В. Белки острой фазы, современное состояние вопроса (обзор) // Лаб. дело — 1988. № 12. — С. 34-37.

142. Лебедев В.В., Крылов В.В. Неотложная нейрохирургия: Руководство для врачей.— М.: Медицина, 2000. — 568 е.

143. Лебедев В.П. Транскраниальная электростимуляция: новый подход (экспериментально-клиническое обоснование и аппаратура) // Мед. техн. 1997. - вып. 2. - С. 7-13.

144. Лебедев В.Ф., Рожков А.С. Инфекционные осложнения тяжелой травмы: достижения и проблемы // Воен.-мед. журн. 2001. — Т. 322. - № 10. -С. 40-45.

145. Левтов В.А., Шуваева В.Н. Влияние транскраниальной электроанальгезии на реологические свойства крови // Транскраниальная электростимуляция: сб. трудов.- СПб, 1999.- С. 79-82.

146. Лейдерман И.Н. Синдром полиорганной недостаточности (ПОН). Метаболические основы. Http: // www.Medi.ru / "Периодика" Вестник интенсивной терапии. №№ 2, 3. 1999.

147. Лейдерман И.Н., Руднов В.А., Клейн А.В., Николаев Э.К. Синдром гиперметаболизма универсальное звено патогенеза критических состояний. // Вестник интенсивной терапии.— 1997.— № 3.— С. 17-23.

148. Лисков А.В. Механизмы регуляции остеогенеза (обзор литературы) // Анналы травмат. и ортопед. 2003. - №3. - С. 70-75.

149. Лихтерман Л.Б. Лебедев В.В., Крылов В.В. Неотложная нейрохирургия. Руководство для врачей. — М.: Медицина, 2000. — 568 е.

150. Лихтерман Л.Б. Принципы современной периодизации течения черепно-мозговой травмы // Вопр. нейрохир. 1990. - № 6. — С. 13-16.

151. Луйк А.И., Лукьянчук В.Д. Сывороточный альбумин и биотранспорт ядов. — М.: Медицина, 1984, 224 е.

152. Лунев В.Е., Мельникова Я.И., Кошкин С.А. и др. Моноклональные антитела к ферритину селезенки человека. I. Получение и исследование взаимодействия с изоферритинами и апоферритином // Биохимия. — 1993. — Т.58. Вып.5. - № 5. - С. 745-757.

153. Мазаев В.П., Шевченко А.О. // Лаборатория. — 2001. № 4. - С. 3-5.

154. Малахова М.Я. Метод регистрации эндогенной интоксикации: Пособие для врачей. — СПб., 1995. — 100 е.

155. Мальцева Н.В., Гарин B.C., Жабин С.Г., Зорин Н.А. Сравнительное изучение иммуносупрессивных свойств ассоциированного с беременностью протеина А и альфа2-гликопротеина, а также альфа2-макроглобулина // Акуш. и гинек. 1991.- № 5.-С.27-29.

156. Мансуров Х.Х., Вознесенский Н.К. а 1-Антитрипсин и его роль в развитии заболеваний печени (Обзор) // Клин. мед. 1976. — №11.- С. 19—24.

157. Матюшичев В.Б., Шамратова В.Г. Динамика взаимосвязи клинических индексов при переломах костей опорно-двигательного аппарата // Клин, лабор. диагностика 2006. - № 4. - С. 47-50.

158. Маурер Г. Диск электрофорез. М., Мир. - 1971. - 284 е.

159. Медицинская лабораторная диагностика (программы и алгоритмы): справочник / Под ред. А.И. Карпищенко. СПб.: Интермедика, 2001. - 544 е.

160. Меерсон Ф.З., Малышев И.Ю., Замортинский А.В. Генерализованное накопление стресс-белков при адаптации организма к стрессорным воздействиям // Бюлл. эксперим. биол. и медицины. 1993. - Т.116. - № 9. -С.231-233.

161. Мельникова Я.И., Лунев В.Е., Прейгерзон В.А. и др.

162. Моноклональные антитела к ферритину селезенки человека. II. Локализация эпитопов и количественные параметры связывания антигена // Биохимия. — 1993. Т. 58. - Вып. 5. - № 5 - С. 759-771.

163. Меньшиков В.В. Портативные аналитические устройства в оперативном лабораторном обеспечении медицинской помощи // Клин, лабор. диагностика. 2008. - №9. - С. 31-32.

164. Меркулов А.Г., Шевченко О.П. Количественное иммуноферментное определение лактоферрина в сыворотке и плазме крови // Вопр. мед. химии. — 1989.-№6.-С. 125-128.

165. Метельская В.А., Туманова Н.Г. Скрининг-метод определения уровня метаболитов оксида азота в сыворотке крови // Клин, лабор. диагностика. 2005. - №6. - С. 15-18.

166. Мехтиев Н.Х., Деушева Г.Г., Риш М.А. Изоэнзимы щелочной фосфатазы и их исследование у человека и животных // Усп. Биол. химии. — 1974. Т.15. - С. 156-165.

167. Мжельская Т.И. Церулоплазмин // Бюл. экспер. биол. — 2000. Т. 130, №8.-С. 124-133.

168. Мидленко А.И., Биктимиров Т.З., Гармашов Ю.А., Смирнова М.А., Смольянинова В.П. Циркулирующие иммунные комплексы в остром периоде сотрясения головного мозга у детей // Вопр. нейрохир. 2000. - № 4. - С. 21-23.

169. Мирошников В.М. Восстановительные реакции организма и стадиоспецифические антигены. Саратов: Саратовский мединститут, 1992. -160 е.

170. Мирошников В.М. Острофазовый белок зоны беременности в диагностической оценке термических поражений кожи // Вопр. мед. химии. — 1989. -№3.- С. 108-111.

171. Мирошников В.М., Коханов А.В. Иммунобиологические особенности регенерации при использованиии официнальных белковых препаратов // Патол. физиология и эксперим. терапия. 1988. - №4. - С. 54 -57.

172. Мирошников В.М., Коханов А.В., И.И.Резников. Сравнительнаяоценка действия некоторых сывороточных белков на регенерацию тканей // Бюлл. эксперим. биологии. — 1987. №1. — С. 95 — 97.

173. Митерев Ю.Г., Назаретян М.К., Андреева А.П. и др. Ферритин: структура, функция и клинические аспекты // Гематология и трансфузиология. 1983. -№ 6. -С. 38-44.

174. Молчанова JI.B., Яковлева И.И., Шишкина Е.В. Динамика активности креатинкиназы плазмы крови как прогностический показатель у больных в критических состояниях // Анестезиол. реаниматол. 2000. - №6. — С. 43-45.

175. Мороз В.В., Кравченко-Бережная Н.Р., Мещеряков Г.Н., Закс И.О., Радаев С.М. Эффективная концентрация альбумина маркер эндотоксемии при тяжелой механической травме // Анестезиол. реаниматол. — 2000. - №6. - С. 54 -57.

176. Морозов Н.В. Динамика признаков диссеминированного свертывания крови у больных с тяжелой травмой и кровопотерей в раннем постреанимационном периоде: Автореф. дис. . канд. мед. наук. — М., 1987. -24 е.

177. Мусил Я. Основы биохимии патологических процессов. М.: Медицина, 1985. - 432 е.

178. Мустафин Р.Д. Современные подходы и медицинские технологии в лечении распространенного перитонита: Автореф. дис. . д-ра мед. наук. — Волгоград, 2004. 36 е.

179. Наджар М.Х., Матвеев Ю.Г., Долгов В.В., Макарова JI.B., Шевченко О.П. Лабораторные маркеры системного воспалительного ответа при оптимизации искусственного кровообращения // Клин, лабор. диагностика. — 2007. -№ 1.-С. 19-22.

180. Назаренко Г.И. Острая кровопотеря // Вестн. травматол. и ортопед, им. Н.Н. Приорова. 1994. - №2. - С.60-64.

181. Назаренко Г.И., Кишкун А.А. Лабораторные методы диагностики неотложных состояний. — М.: Медицина, 2002. — 568 е.

182. Назаренко Г.И., Кишкун A.JL Клиническая оценка результатов лабораторных исследований. М.: Медицина, 2000. - 544 е.

183. Назаров П.Г. Иммунологические нарушения, связанные с дефицитом С-реактивного белка в организме // Иммунология. — 1996. №3. — С.33-37.

184. Назаров П.Г. Реактанты острой фазы воспаления. С-Пб.: Наука, 2001. -423 е.

185. Неверов В.А. Повреждения опорно-двигательного аппарата // Руководство для врачей скорой медицинской помощи / Под ред. В.А.Михайловича, А.Г. Мирошниченко СПб., 2001 - С. 180-196.

186. Неговский В.А., Мороз В.В. Теоретические и клинические проблемы реаниматологии // Анестезиол. и реапиматол. — 2000. №6. — С. 4-6.

187. Немцова Е.П. Иммунохимическое изучение лактоферрина человека: Автореферат дис. . канд. мед. наук. — М., 1988. — 21 е.

188. Немцова Е.П., Иванова JI.M., Якубовская Р.И. ' и др. Иммуноферментный метод определения лактоферрина человека и его применение для диагностики гнойно-септических осложнений // Вопр. мед. химии. 1995. - № 3. - С. 58-61.

189. Немцова Е.П., Уткин М.И., Якубовская Р.И. Иммунохимическое сравнение лактоферрина женского молока и лактоферрина нейтрофилов // Вопр. мед. химии. 1988. - № 3. - С. 127-131.

190. Немченко Н.С., Гончаров А.В., Борисов М.Б. Метаболические основы патогенеза тяжелой сочетанной травмы. // Вестник хирургии. — 2001, с. 114-119.

191. Никитин Г.Д., Грезнухин Э.Г. Множественные переломы и сочетанные повреждения. 2-е изд. JL: Медицина, 1983. - 295 е.

192. Николаев А.А., Аншакова Н.И. Иммунохимическая и физико-химическая характеристика лактоферрина биологических жидкостей человека // Вопр. мед. химии. 1985. - № 3. - С. 128-131.

193. Никулина Д.М., Белопасова Н.А. Иммунохимические тесты риска воспалительных заболеваний // Лабораторное дело. 1991.- № 1. С.24-26.

194. Окулов В.Б., Пожарисский К.М. Экспериментальное изучение природы раково-эмбрионального антигена // Иммунология опухолей. Тез. докл. симпоз. Киев. - 1975. С. 192-193.

195. Орлова О.В. Клиническое значение неоптерина и белков острой фазы при диагностике и контроле лечения воспалительных процессов, бактериальных и вирусных инфекций // Клин, лабор. диагностика 2005. - № 10.-С. 50.

196. Осипова И.В., Пивоварова Л.П.,.Логинова М.П, Верховский А.И. Нейротропные аутоантитела и их прогностическое значение у пострадавших с закрытой черепно-мозговой травмой легкой степени тяжести // Скорая мед. помощь. 2003. - №4. - С. 45-47.

197. Остерман Л. А. Исследование биологических макромолекул электро фокусированием, иммуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами. М.: Наука. - 1983. - 304 е.

198. Остерман Л.А. Хроматография белков и нуклеиновых кислот. М.: Наука, 1985. -536 с.

199. Охотский В.П., Лебедев В.В., Клопов Л.Г. Тактика оперативного лечения переломов конечностей у больных с черепно-мозговой травмой // Ортопед, травматол. — 1979. № 9. - С. 30-33.

200. Павленко А.А., Епифанцева Н.Н., Чурляев Ю.А., Ситников П.Г. Антитромботические механизмы в остром периоде тяжелой черепно-мозговойтравмы // Анестезиол. и реаниматол. 2004. - № 6. - С. 29-32.

201. Пауков B.C., Беляева Н.Ю., Воронина Т.М. Алкоголизм и алкогольная болезнь // Терапевтический архив. 2001. - № 5. - С.41-44.

202. Петров А. А. Транскраниальная электростимуляция тажелообожженных // Актуал. вопр. комбустиол., реаниматол. и экстрем, мед. — Саранск, 1996.- С. 95-96.

203. Петров В.Н. Физиология и патология обмена железа. — Д.: Наука, 1982.-223 е.

204. Петров Р.В. Иммунология. — М.: Медицина, 1982. 368 е.

205. Петрова О.В., Коханов А.В., Лапин А.А., Казимирова Е.И. / Уровни ферритина в тканях больных с алкогольной болезнью // Вопросы наркологии. — 2008. — №5.-С. 54-57.

206. Пирожков B.C., Панченко Л.Ф. Молекулярные механизмы цито-токсичности наркотических веществ // Вопр. мед. химии. 1991. - Т.37. - № 2. -С.2-10.

207. Плам Ф., Познер Д.Б. Диагностика ступора и комы.— М.: Медицина, 1986.- 544 е.

208. Пожарисский В.Ф. Политравмы опорно-двигательной системы и их лечение на этапах медицинской эвакуации. — М.: Медицина. 1989. — С. 256.

209. Полевщиков А.В. С-реактивный белок и сывороточный амилоид Р в системе иммунорегуляции // Автореф. дис. . д-ра. мед. наук. СПб, 1997. - 40е.

210. Потапов А.А., Лихтерман Л.Б., Гаврилов А.Г. Рекомендации по диагностике и лечению пострадавших с черепно-мозговой травмой с позиций доказательной медицины. Сообщение I. Технологии доказательной медицины // Вопр. нейрохир. 2005. - № 3. - С. 3-8.

211. Прокопенко П.Г., Татаринов Ю.С. Иммунохимические исследования тканевого а2-глобулинов в опухолевой и нормальной тканях почки человека // Бюлл. эксперим. химии и биологии. — 1975. № 8. — С. 102-105.

212. Прокопенко П.Г., Терентьев А.А. Определение ферропротеидов в биологических жидкостях // Лаб. дело. — 1975. № 6. — С. 375.

213. Профилактика и лечение осложнений сочетанных травм. Пособие для врачей / Под ред. С.Ф. Багненко. СПб., 2003. - 105 с.

214. Редысин Ю.В., Соколова Т.Ф., Фоминых С.Г. Анемия и полипептиды средней молекулярной массы в динамике травматической болезни // Эндогенные интоксикации.— СПб., 1994.— С. 46-47.

215. Розен В.В. Взаимодействие стероидных гормонов с белками плазмы // Проблемы эндокринологии. — 1964. т.10. - № 5. - С. 107-115.

216. Розен В.В. Основы эндокринологии. М.: Изд-во МГУ, 1994. - 384 е.

217. Романов Ю.А., Таболин В.А. Биологические ритмы гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы у животных и человека в норме и при патологии. — М.: Медицина, 1975. -128 е.

218. Ромоданов А.П. Прогрессирующие последствия черепно-мозговой травмы//Вопр. нейрохир. 1986.-№ 1. - С. 13-17.

219. Ромоданов А.П., Лисяный Н.И. Черепно-мозговая травма и иммунологическая реактивность организма. Киев: Здоровья, 1991. - 149 е.

220. Рупперт И., Кузьмина Н. Быстрое получение результатов: высокотехнологичные простые тест-системы для исследований по месту лечения // Клиническая лабораторная диагностика. 2008. - № 9. - С. 3.

221. Рябов Г.А. Синдромы критических состояний. — М.: Медицина, 1994, —368 с.

222. Рябов С.И. Основы физиологии и патологии эритропоэза. — Л., 1971—255 е.

223. Рябов Г.А. Критические состояния в хирургии. М., 1979 — 320 с.

224. Селезнев С.А., Худайберенов Г.С. Травматическая болезнь .— Ашхабад: "Ылым", 1984.,—224 е.

225. Селезнев С.А., Шапот Ю.Б., Багненко С.Ф. Травматическая болезнь (30 лет размышлений) // Скорая мед. помощь. 2003. - №4. - С. 6-7.

226. Сергеев П.В., Шимановский Н.Л., Злоказова И.В., Степанянц А.У. Исследование взаимодействия рентгеноконтрастных веществ с сывороточным альбумином человека методами флюоресцентных меток и ЯМР. // Мол. биол. -1977.-№ 1.-С. 82—91.

227. Сергеев С.В., Эзмекна С., Зеленина Л.И. и др. Тактика комплексной профилактики и лечения гнойно-септических осложнений в клинической травматологии // Вестн. травматол. ортопед. 2003. - № 3. -С. 79-84.

228. Симбирцев А.С. Цитокины новая система регуляции защитных реакций организма // Цитокины и воспаление. - 2002. - Т.1№1. - С.9-16.

229. Симбирцев А.С. Цитокины: классификация и биологические функции // Цитокины и воспаление. 2004. - Т.3№2. - С.16-22.

230. Симоненков А.П., Федоров В.Д. О единстве тканевой гипоксии и шока // Анестезиол. и реаниматол. 2000. - № 6. - С. 73-76.

231. Скоупс Р. Методы очистки белков. — М.: Мир, 1985. 358 е.

232. Слуцкий Л.И. Костный метаболизм. М.:Медицина, 1987. - 212 с.

233. Соколов В.А. Инфекционные осложнения при политравме // Вестн. травматол. и ортоп. им. Н.Н. Приорова. -1999. № 3. - С. 63-71.

234. Соколов В.А. Множественные и сочетанные травмы. М., ГЭОТАР-Медиа, 2006. 512 е.

235. Соколов В.А., Картавенко В.И., Иванов П.А., Гараев Д.А. Значение синдрома взаимного отягощения повреждений у пострадавших с сочетанной и множественной травмой // Скорая мед. помощь. 2004. - № 3. - С. 188-189.

236. Стрельчонок О.А., Свиридов О.В., Аввакумов Г.В., и др. Хроматографическое разделение трех специфических гормонсвязующих белков крови человека // в кн: "Хроматография в биологигии и медицине", М., 1986, с.65-66.

237. Суринков Д.Б. Мезодиэнцефальная модуляция в комплексном лечении переломов длинных костей: Автореф. дисс. канд. мед. наук. -Самара, 2004. 25 е.

238. Сухарев А.Е. Тканевые и сывороточные острофазовые белки в клинической оценке неспецифических заболеваний и рака легких (клинико-иммунологическое исследование): Автореф. дисс. д-ра мед. наук. Астрахань, 1992.-38 с.

239. Сухарев А.Е., Николаев А.А., Васильев М.Ю. Уровеньсывороточного лактоферрина в норме и при патологии // Вопр. мед. химии. — 1990.-№3.-С. 81-82.

240. Таранов И.И., Чернов В.Н., Хашиев H.JL, Тенчурин Р.Ш., Бабиев В.Ф. К проблеме снижения уровня миоглобина крови в период посттравматического эндотоксикоза // Скорая мед. помощь. — 2003. № 4. - С. 102-103.

241. Тарелкина М.Н. Белковый катаболизм как критерий интоксикации и тяжести шокогенной травмы // Осложнения шокогенной травмы и травматической болезни: Сб. науч. работ НИИ СП им. И.И. Джанелидзе. — JL, 1994. —С. 4-10.

242. Татаринов Ю.С. Обнаружение фетального глобулина в сыворотке крови при первичном раке печени // Тезисы I Всесоюзного биохимического съезда. М.-Л.: АН СССР, 1963. Т. 2. - С. 274.

243. Татаринов Ю.С. Прошлое и будущее онкофетальных белков // Лекция к актовому дню института. М. - 1988.- С. 23-25.

244. Татаринов Ю.С., Масюкевич В.Н. Иммунологическая идентификация нового бета 1-глобулина в сыворотке крови беременных женщин // Бюлл. экспер. биол. и мед. 1970.- Т.69.- № 6.-С.66-67.

245. Татаринов Ю.С., Масюкевич В.Н., Меснянкина Н.В., Парфенова Л.Ф. Иммунохимическая идентификация нового альфа2-глобулина в сыворотке крови беременных женщин // Акуш. и гинек. — 1970. № 9. - С. 25-28.

246. Терентьев А.А. Стероидсвязывающие онкофетальные белки человека (идентификация, выделение, характеристика, клинические аспекты): Автореф. дис. . д-ра. мед. наук. М., 1990, 42 е.

247. Терентьев А.А., Молдогазиева Н.Т., Тагирова А.К.,. Татаринов Ю.С.

248. Аффинная хроматография альфа-фетопротеина человека на иммобилизированных эстрогенах // Бюлл. эксперим. биол. мед. 1988, - №4. -С. 422-424.

249. Титов В.Н. Диагностическое значение повышения уровня С-реактивного белка в «клиническом» и «субклиническом» интервалах // Клин, лабор. диагностика. — 2004. № 6. — С. 3-10.

250. Титов В.Н. Оксид азота в реакции эндотелийзависимой вазодилатации. Основы единения эндотелия и гладкомышечных клеток в паракринной регуляции метаболизма // Клин, лабор. диагностика. 2007. - № 2.-С. 23-24,33-39.

251. Титов В.Н. С-реактивный белок: гетерогенность и функциональная связь с окислительным стрессом как маркером воспаления // Клин, лабор. диагностика. 2004. - № 7. - С. 3-11.

252. Титов В.Н. Экзогенные и эндогенные патологические факторы (патогены) как причина воспаления // Клин, лабор. диагностика 2004. - № 5. — С. 3-10.

253. Титов В.Н., Близнюков О.П. С-реактивный белок: физико-химические свойства, методы определения и диагностическое значение // Клин, лабор. диагностика — 2004. № 4. - С. 3-9.

254. Титов В.Н., Коткина Т.Н., Волкова Е.И. Миоглобин крови: диагностическое значение и методы исследования // Лаб. дело. — 1991. — №9. — С. 4-10.

255. Ткаченко А.Б. Нарушение транспортной функции сывороточного альбумина при хроническом кислородном голодании и его фармакологическая коррекция // Эксперим. и клин, фармакология. 1993. - Т.56. - №1. - С.57-60.

256. Токсамбаева С.Ж. Острая фаза воспаления: С-реактивный белок и его роль в регуляции иммунитета: Автореф. дис. . д-ра. мед. наук. М., — 1996.-54 е.

257. Топунов А.Ф., Петрова Н.Э. Гемоглобины: эволюция, распространение и гетерогенность // Успехи биологической химии. Т. 41. -2001.-С. 199-228.

258. Тотолян А.А. Значение оценки системы цитокинов в лабораторной диагностике // Клин, лабор. диагностика. 2008. - № 9. - С. 3.

259. Травматическая болезнь и ее осложнения / под ред. С.А.Селезнева, С.Ф.Багненко, Ю.Б.Шапота. СПб.: Политехника, 2004. - 414 е.

260. Троицкий Г.В., Багдасарьян С.Н. Изучение денатурации сывороточного альбумина // Биофизика. — 1979. № 5. - с. 821—825.

261. Трубников Г.А. Иммунохимические маркеры воспаления и опухолей в клинической пульмонологии. Астрахань, 2000. - С.70-80.

262. Туркова Я. Аффинная хроматография. -М.: Мир, 1978. -432 е.

263. Флорикян А.К. Травматическая болезнь. // Международный медицинский журнал. 1999.- Т.5. № 1. - С. 106-109.

264. Фрейдлин И.С., Назаров П.Г. Регуляторные функции провоспалительных цитокинов и острофазных белков // Вест. Рос. АМН. — 1999. №5. С.28-32.

265. Хазанов А.И. Функциональная диагностика болезней печени. — М.: Медицина, 1988.-304 с.

266. Харитонова Г.В., Доброгорская JI.H., Юренкова С.П. О значении определения уровня а2-макроглобулина различными биохимическими методами у больных с тяжелой черепно-мозговой травмой // Клин, лабор. диагностика. — 2005. № 9. - С. 76.

267. Харченко Е.П.; Шестернин C.JI. Психотропный эффект мишенированной транскраниальной электростимуляции при опийном абстинентном синдроме // Докл. РАН.- 1999.- № 5.-С. 714-716.

268. Храмкова Н.И., Абелев Г.И. Предел чувствительности методапреципитации в агаре//Бюлл. экспер. биол.— 1961.—№ 12. — С. 107-109.

269. Цареико С.В. Нейрореаниматология. Интенсивная терапия черепно-мозговой травмы // М.: Медицина, 2006. 352 е.

270. Цеймах Е.А., Бондаренко А.В., Толстихина Т.А., Кузнецов С.Ю. Особенности диагностики и лечения повреждений внутренних органов при тяжелой сочетанной травме // Скорая мед. помощь. 2003. - № 2. - С. 110-111.

271. Цибин Ю.Н. Многофакторная оценка тяжести травматического шока // Вестник хирургии. — 1980,— № 9,— С. 62-67.

272. Цибуляк Г.Н., Самохвалов И.М. // Полиорганная недостаточность при шокогенных травмах и острых хирургических заболеваниях органов брюшной полости: Респ. сб. науч. тр. СПб., 1992. - С. 8-13.

273. Цивинский А.Д, Шевчук М.К., Колбасов С.Е., Стройкова Г.С., Саватеева Т.Н. Экспериментальное изучение препарата "Цитофлавин" при черепно-мозговой травме и интоксикации этанолом // Скорая мед. помощь. — 2003.-№2.-С. 45-46.

274. Чегер С.И. Транспортная функция сывороточного альбумина. Бухарест, 1975. 183 е.

275. Чепелева М.В., Кармацких О.Л., Мартель И.И. Иммунологическая динамика при лечении пациентов с открытыми переломами конечностей методом чрескостного остеосинтеза // Клин, лабор. диагностика. 2005. - № 9. -С. 39.

276. Чередеев А.Н., Ковальчук Л.В. Интерпретация лабораторных показателей при оценке иммунного статуса человека // Лаб. дело. 1991. - № 2. - С.6-14.

277. Черешнев В.А., Гусев Е.Ю. Иммунология воспаления: роль цитокинов // Мед. иммунология. 2001. - Т.З. - №3. — С.361-368.

278. Чернобровкина Т.В. Биохимическая синдромология в лабораторной диагностике заболеваний, связанных с химической зависимостью // Клин, лабор. диагностика. 2000. - № 9. - С.17-18.

279. Чернух A.M. Воспаление. М.: Медицина, 1979 - 447 е.

280. Черный В.И., Городник Г.А., Островой E.JI., Качур И.В. Некоторые особенности течения тяжелой черепно-мозговой травмы // Скорая мед. помощь. -2003. -№ 4. С. 112-114.

281. Чехонин В.П., Дмитриева Т.Б., Жирков Ю.А. Иммунохимический анализ нейроспецифических антигенов. — М.: Медицина, 1999. — 416 е.

282. Чурляев Ю.А. Особенности течения, диагностики и лечения ДВС-синдрома у реанимационных больных с черепно-мозговой травмой: Автореф. дис. д-ра мед. наук. — Новокузнецк, 1997. 37 е.

283. Шабанов П.Д., Калишевич С.Ю. Биология алкоголизма. СПб.: Лань. - 1998.-271с.

284. Шано В.Л., Нестеренко А.Н., Гюльмамедов Ф.И., Гюльмамедов П.Ф. Сепсис и синдром системного воспалительного ответа (обзор литературы). // Анест. и реаниматол. 1998, № 4, С. 60-64.

285. Шапот Ю.Б., Озеров В.Ф., Карташкин В.Л., Ашраф Н.Д. Сравнительный анализ качества помощи и летальности при сочетанной шокогенной травме // Скорая мед. помощь. 2002. - №4. - С. 35-39.

286. Шапот Ю.Б., Селезнев С.Ф., Ремизов В.Б. и др. Множественная и сочетанная травма, сопровождающаяся шоком. — Кишинев, 1993. — 240 е.

287. ЗЮ.Шараев П.Н., Стрелков Н.С., Васильева Т.Н., Лекомцева О.И. Клиническое значение исследований гликопротеинов и гликопептидов всыворотке крови // Клин, лабор. диагностика. 2005. - № 10. - С. 78.

288. Шевченко А. О. Новые лабораторные маркеры ангиогенеза и повреждения атеросклеротической бляшки (лекция) // Клин, лабор. диагностика. — 2006. № б. - С. 23-34.

289. Шевченко Н.Г. Лабораторная диагностика нарушений обмена железа (лекция) // Клин, лабор. диагностика. — 1997. № 4. — С. 25-32.

290. Шевченко О.П., Орлова О.В., Шевченко А.О. Церулоплазмин / Патохимия крови для врачей. —М., 2005. — С. 5— 15; 25-40.

291. Шубич М.Г., Нагоев Б.С. Щелочная фосфатаза лейкоцитов в норме и патологии // М. 1980. - С. 22-23.

292. Щербакова Л.Н., Кравченко-Бережная Н.Р., Бессекеев А.А., Молчанова Л.В. Спектр липопротеидов в плазме крови больных, перенесших тяжелую механическую травму // Анестезиол. и реаниматол. 2002. - № 6. - С. 19-22.

293. Эллиот В., Эллиот Д. Биохимия и молекулярная биология. М:, Материк-альфа. - 2000. - 366 е.

294. Юнкеров В.И. Основы математико-статистического моделирования и применения вычислительной техники в научных исследованиях. СПб - Изд-во ВМедА.-2000,- 140 е.

295. Якубовская Р.И., Немцова Е.Р., Коханова И.Д. Лактоферрин человека: получение высокоочищенных препаратов из молока женщин и распределение в нормальных и опухолевых тканях // Вопр. мед. химии. 1986. - № 6. -С. 75-79.

296. Abilgaard U. The role of alpha2-macroglobulin as an ingibitor of coagulation // In: The physiol. ingibit. of coagul. and fibrinol. Elsevier, biochem. Press. 1979.- P.239-241.

297. Adham N.F., Song M.K., Rinderknecht H. Binding of zinc to alpha2-macroglobulin and its role in enzume binding activity // Biochim. et biophis. acta. -1977.-495.-№2.-P.212-219.

298. Al-Mashikhi S.A., Nacai S. Isolation of bovine immunoglobulins and lactoferrin from they proteins by gel filtration technigues // J. Dairy Sci. —1987. — vol. 70.-N2.-P. 2486-2492.

299. Alonso J.F., Dc Alvarez R.R., Farnham N.G. et al. The pregnansy zone protein destined from transcortin thyroxin binding protein, ceruloplasmin and oxytocinases // Amer. J. Obstet. Gynec. 1964. -V89. -P.204.

300. Alpert E., Schur P., Drysdale J, Issebacher K. Human alpha-fetoprotein: purification and physical properties // Fed. Proc.- 1971. v. 30. - p. 246-253.

301. Angal S., Dean P.D.G. The use of immobilized cibacron blue in plasma fractionation // FEBS Lett. 1978. - v.96. -N.2. - P. 333-338.

302. Aoyagi Y., Ikenoka Т., Ichida F. Alpha-fetoprotein as carier protein in plasma and its bilirubin-binding ability // Cancer Res. 1979. - N.39. - P. 3571-3574.

303. Audrain M.A., Gourbil A., Muller J.Y. et al. Anti-lactoferrin autoantibodies: relation between epitopes and ironbinding domain // J. Autoimmun. — 1996. Aug. 9(4).-P. 569-74.

304. Aussel C., Masseyeff R. Interaction of retinoids and bilirubin with the binding of arachidonic acid to human alpba-fetoprotein // Biochem. and Biophys. Res. Commun. 1984. - v.l 19. - N.3. - P. 1122-1127.

305. Avrameas S., Terninck T. The cross-linking of protein with glutaraldehyde and its use for the preparation of immunoadsorbent // Immunochemistry. 1969. -N.6. - P.53-60.

306. Baker E.N., Lindley P.F. New perspectives on the structure and function of transferrins // J. Inorg. Biochem. 1992. - vol. 47. - N 3. - P. 147-160.

307. Baker S.P. et al. The Injury Severity Score: a method for describing patients with multiple injuries and evaluating emergency care // J. Trauma. 1974. -Vol. 14.-P. 187-196.

308. Ballow M., Doushik P.C., Rapacz P. et al. Tear Lactoferrin levels inpatients with external inflammatory ocular disease // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. — 1987.-v. 28.-N3.-P. 543-545.

309. Bankhurst A.D., Witemeyer S., Williams R.C. A population of human cord blood mononuclear cells with surface alpha-fetoprotein // Immun. Commun. — 1978. Y.7.-N. 2, - p. 187-208.

310. Barret A.J., Starcey B.M., Mun E.A. The unigue nature of the interactrion of a2-macroglobulin with proteinases // In: Bayer-Simp. V. "Proteinase Inhibitors", Berlin. 1974.-P.72-77.

311. Barton R., Cerra F. The hypermetabolism multiple organ failure syndrome // Chest.— 1989. V. 5.— p. 1153-1160.

312. Bellamy M., Takase M., Yamauchi K. et al. Identification of the bactericidial domain of lactoferrin // Biochem. Biophys. Acta. 1992. - vol. 1121. — N l.-P. 130-136.

313. Bentouati L., Samadi M., Hachem H. et al. Hyperphosphatasemia related to three intestinal alkaline phosphatase isoforms: biochemical study // Clin. Chim. Acta. 1990. - V. 189.- P.145-152.

314. Bersinger N.A., Rageth G.C. A comparison between pregnancy-associated alpha2-glycoprotein, cercino-embryonic antigen, CA-125, and С A 15-3 as tumor markers in breast cancer // Eur. J. Gynaecol-Oncol. 1990.- V.l 1,- P.135-144.

315. Birgens H.S. The biological significance of lactoferrin in hematology // Scand. J. Haematol. 1984. - v. 33. - P. 225-230.

316. Birkenmeier G., Uzbeck E„ Saro L., Kopperschlager G. Triazin dye binding of human a-fetoprotein and albumin // J.Chromatogr. — 1983. v. 265. - N.l. - P. 27-35.

317. Birkenmeier G., Uzbesk E., Kopperschlager G. Affinity partitioning of albumin and a-fetoprotein in aqueous twophase sistem using polyethylene glycolbound triazine dyes. // Anal. Biochem. 1984, - v.136,1, p.- 264-271.

318. Bohn H. Biochemistry of Placental Proteins // Proteins of the placenta: 5th Intern.Congress of Placental Proteins. Annecy. Basel. - 1985. - P.1-25.

319. Bohn H. Detection, characterisation and diagnostic significance of human pregnancy-associated glycoproteins.// Blut. — 1973. -N26. P.205-208.

320. Braun J., Dalhoff K., Lipp R. et al. Myeloperoxidase, Lactoferrin and elastaze in bronchoalveolar lavage and plasma in pneumonia // Pneumologie. — 1992.- vol. 46.- N 4. -P. 141-147.

321. Brenner Т., Beyth Y., Abramsky O. Inhibitory effect of a-fetoprotein jn the binding of myasthenia gravis antibody to acetylcholine receptor // Proc. Nat. Acad. Sci. USA / Biol. Sci. 1980. - V.77. - N.6. - p. 3635-3639.

322. Britigan B.E., Serody J.S., Hayek M.B. et al. Uptake of form lactoferrin by mononuclear phagocytes inhibits ability to form hydroxyl radical and protects them from membrane autoperoxidation // J. Immunol. — 1991.-vol. 147.- N 12. — P.4271-4277.

323. Brugge W.R., Burke C.A. Lactoferrin secretion in alcoholic pancreatic disease//Dig. Dis. Sci. 1988. - vol. 33.-N2.-P. 178-184.

324. Brunkhorst F.M. et al. Procalcitonin for early diagnosis and differentiation of SIRS, sepsis, severe sepsis, and septic shock // Intensive Care Med. 2000.- vol. 26.(Suppl. 2)-P. 148-152.

325. Brunkhorst F.M. Foricki Z. P., Wagner J. Soluble CD-14 receptors for early diagnosis and differentiation of sepsis, and septic shock // Shock. — 1997. -Vol. 7.-P. 124-128.

326. Cairo G., Tacchini L., Pogliaghi G. et al. Induction of ferritin synthesis by oxidative stress. Transcriptional and posttranscriptional regulation by expansion of the "free" iron pool // J. Biol. Chem. 1995. - V. 270. - №2. - P. 700-703.

327. Charpentier C., Audibert G., Dousset B. Is endotoxin and Cytokine release related to a decrease in gastric intramucosal pH after hemorrhagic shock? // Intensive. Care. Med.— 1997.—V. 23, № 10.—p. 1040-1048.

328. Christensen U., Sottrup-Jensen L., Harrit N. Pregnancy zone protein, aproteinase binding alpha-macroglobulin. Stopped flow kinetic studies of its interaction with chymotrypsin // Biochim. Biophys. Acta. 1991. - Jan.8.- 1076.-P.91-97.

329. Crichton R.R. Ferritin Structur und Funktion // Med. Welt. 1981. - Bd 32. -Heft 38. -S. 1401-1404.

330. Crouch S.P., Slater K.J., Fletcher J. Regulation of cytokine release from mononuclear eels by the iron-binding protein lactoferrin // Blood. 1992. - v. 80. — N l.-P. 235-240.

331. Delmas P.D. Biochemical markers of bone turnover // Acta Orthop. Scand. -1995. V.66. - Suppl. 266 - P. 176-182.

332. Dionysius D.A., Grieva P.A., Milne J.M. Form of lactoferrin: their antibacterial effect on enterotoxigenic Escherichia coli // J. Dairy. Sci. — 1993. — v. 76.-N9.-P. 2597-2600.

333. Dleha A., Brock J.H. Effect of transferrin, lactoferrin and chelated iron on human T-Lymphocytes // Br. J. Haemat. 1992. - vol. 80. - N 2. - P. 235-241.

334. Doe R.P., Fernandez R., Seal U. // J. clin. Endocr. 1964. - v.24, - p. 10231029.

335. Drysdale J.W. Ferritin phenotypes: structure and metabolism // Iron Metabolism. 1977.-P. 41-57.

336. Fedail S.S., Harvey R.F., Salmon P.R. et al. Tripsin and lactoferrin levels in pure pancreatic juice in patients with pancreatic disease // Gut. 1979. - vol. 20. -N 11.-P. 983-986.

337. Fishman W.H. Immunologic and biochemical approaches alkaline phosphatase isoenzyme analysis: the Regan isoenzyme. // Ann. N.Y. Acad. Sci. -1969.-V.166.-P. 745-749.

338. Foster I.F. Some aspects of the structure and conformational properties ofserum albumin. — In: Albumin structure, function and uses / Ed. V. Rosenoer et al. Oxford. 1977. - p. 53—84.

339. Frenoy J.P., Bourrillon R. Human a2-macroglobulin: time dependent degradation under denaturating conditions // Biochimie. 1980.- 62.- N 7.- P.497-507.

340. Ganrot P. Studies of serum protease inhibitors with special referense to a2-macroglobulin// Acta. univ. lund. 1967.- section 2. -N 2. - P. 1-36.

341. Gold P., Freedman S.O. Specific carcinoembryonic antigen of the human digestive sistem.// J.Exp. Med. 1965. - v.122. - P.467 - 481.

342. Goldblum S.E., Cohem D.A., Jay M. et al. Intleukin l-induced depression of iron and zinc: role of granulocytes and lactoferrin // Am. Physiol. 1987. — vol. 252.-N l.-Pt. l.-P. 27-32.

343. Granick S. Iron metabolism. // Bull. New. York Acad. Med. 1954. - V. 31-P. 81-88.

344. Grasso A., Roda G., et al. Preparation and properties of the brain specific protein 14-3-2 // Brain Res. 1977. - Vol. 124. - P. 497-507.

345. Hall C. Essential biochemistry and physiology of (NT-pro)BNP // European J. Heart Failure. 2004. - Vol. 6. - №.3. - 257-261.

346. Hall P.K., Roberts R.C. Physical and chemical properities of human plasma a2-macroglobulin //Biochem. J. 1978. - 173.- №>l.-P.27-38.

347. Halliday J., Powell L.W. Ferritin metabolism and liver // Seminars in liver disease. 1984. - V.4. - № 3. - P. 207-216.

348. Harle J., Figarella С., Fossot C.H. et al. Lactoferrin plasmaigue et numeration sanguine des polynucleares neutrophiles // Pathol. Biol. 1984. — v. 32. — N4.-P. 239-244.

349. Harpel P.C. Studies on human plasma a2-macroglobulin-enzyme interaction // J. Exp. Med. 1973.-138.- №3.- P.508-521.

350. Harrington J.P., Stuart J., Jones A. Unfolding of iron and copper complexes of human lactoferrin and transferrin // Int. J. Biochem. 1987. — v. 19. — N 10.-P. 1001-1008.

351. Harrison P.M., Arosio P. The ferritins: molecular properties, iron storage function and cellular regulation // Biochim. Biophys. Acta. 1996. — V. 1275. - № 3. -P. 161-203.

352. Hayakawa Т., Kondo Т., Snibata T. et al. Secretory component and lactoferrin in pure pancreatic juice in chronic pancreatitis // Dig. Dis. Sci. — 1993. -v. 38.-N l.-P. 7-11.

353. Hecke F., Schmidt U., Kola A. Circulating complement proteins in multiple trauma patients-correlation with injury severity, development + of sepsis, and outcome // Crit. Care Med. 1997. - Vol. 25, N 12. - P. 2015-2024.

354. ITeimsurger N. Biochemistry of proteinase inhibitors from human plasma // Bayer-Symp.-V."Proteinase inhibitors".- Berlin. 1974.- P. 14-22.

355. Henthorn P.S., Raducha M, Edwards I.H. et al. Nucleotide and aminoacid sequences of human intestinal alkaline phosphatase: close homology to placental alkaline phosphatase. //Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1989.- V. 84.- P.1234-1238.

356. Higashino K., Otani R. A fetal-intestinal-type alkaline phosphpatase in hepatocellular carcinoma tissue // Clin. Chem. 1977. — V.23. - N 9. — P. 16151623.

357. Hofmann R., Friemel H., Behm E. Immunochemische Untersuchungenzum problem der "pregnancy zone". 1. Antischwangeren-Immunoserum I I Arch. Gynak. 1969,- Bd.208.- №2,- S.178-180.

358. Home C.H.W., Gerrie L.M., Armstrong S.S., Brunt P.W., Nowat N., Sinclair T.S. Deficiency of serum "pregnancy-associated" a2-glucoprotein association with desease // J. Clin. Pathol. 1986.-V.39. - №2. - P.195-198.

359. Huse K., Himel M., Birkenmeier G. et al. A novel purification procedure for human a-fetoprotein by application of immobilised Cibacron Blue F3G-A as affinity ligand.// Clin.Chim.Acta. 1983. - v.133. -N 3. - P. 335-340.

360. James K. a2-macroglobulin and its possible importanse in immune systems //Trends Byochem. Sci. 1980. V.5. -N2. -P.43-47.

361. Jensen P., Stigbrand T. Differences in the proteinase inhibition mechanism of human alpha2-macroglobulin and pregnancy zone protein // Eur. J. Biochem. (FEBS). 1992. -V.210. - P.1071-1077.

362. Karlbauer A., Woidke R. Оценка тяжести травмы: обзор наиболее часто используемых систем для оценки тяжести повреждений у травматологических больных болезни // Вестн. травматол. ортопед. 2003. - № З.-С. 16-20.

363. Khalil F.K., Stephan Е., Guibaud S. Purification of placental alpha-fetoprotein.// Clin.Chim.Acta, 1978, v.88,1, p.167-172.

364. Kim E.E., Wyckoff H.W. Structure of alkaline phosphatases // Clin. Chim. Acta.-1989.-V. 186.- P.175-188.

365. Knaus W.A., Draper E.A., Wagner D.P., Zimmerman I. APACHE II: A severity of disease classification system // Crit. Care Med. 1985. - Vol. 13, N 10. -P. 818-829.

366. Knaus W.A., Wagner D.P., Draper E.A. et al. The APACHE-III prognostic system: Risk prediction of hospital mortality for hospitalized adults // Chest. 1991.-Vol. 100.-P. 1619.

367. Kohn J. Method for the detection and identification of a 1-fetoprotein in serum // J. Clin. Path. 1970. V.23. -P. 733.

368. Laemmli Y.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of thehead of bacteriophage.//Nature, 1970, v. 227, p.680-682.

369. Laurell C.B. Electroimmunoassay // Scand. J. Clin. Lab. Invest. 1972. -v.29.-Suppl.l24.-P. 21-37.

370. Le-Gaillard F., Racadot A., Aubert J.P., Dautrevaux M. Modification of human transcortin by tetranitromethane. Evidence for the implication of a tyrosine residue in Cortisol binding. // Biochimie. 1982; -p. 153-158.

371. Lehmann F.G. Hyperphosphatasemia related to three intestinal alkaline phosphatase isoforms: biochemical study // Clin. Chim. Acta. 1990. - V. 189.-P.145-152.

372. Lowry O.H., Rosenbrough N.J., Farr A.L, Randall RJ. Protein measurement with Folin phenol reagent.// J.Biol. Chem. 1951. - v. 193. - P. 265269.

373. Mac Connel D.I. Inhibitirs of kallikrein in human plasma // J. Clin. Invest. 1972.- V.51.- №7.- P.1611-1623.

374. Mancini G., Nash D.R., Heremans J.F. Further studies on single radial immunodiffusion. III. Quantitative analysis of related and unrelated antigens // Immunochemistry. 1970. -N.7. - P. 261-264.

375. Maneva A.I., Taleva B.M., Manev V.V. et al. Effect of bovine milk antigens and egg lysozyme on the binding of 59Fe-Lactoferrin to platelet plasma membranes // Int. J. Biochem. 1993. - Dec. - vol. 25. -N 12. - P. 1785-1790.

376. Masseyeff R. Human alpha-fetoprotein // Path.Biol., 1972, v.20, p.703725.

377. Meakins J., Marshall J. The gastrointestinal tract: the "motor" of MOF // Arc. Surg.— 1996.—v. 121.—p. 197-201.

378. Miyauchi J., Watanabe J. Immunocytochemical localisation of lactoferrin in human neutrophils. An ultrastructural and morphometrical study // Cell. Tissue. Res. 1987. - vol. 247. -P. 249-258.

379. Monnard C., Vernet M. Lactoferrin: biochemistry, physiological role and value in human biology '// Pathol. Biol. 1988. - vol. 36. - N 7. - P. 933-939.

380. Monteiro H.P., Winterbourn C.C. The superoxide-dependent transfer of iron from ferritin to transferrin and lactoferrin // Biochem. J. - 1988. - vol. 256. — N3.-P. 923-928.

381. Moore B.W. A soluble protein characteristic of the nervous system // Biochem. biophys. Res. Commun. — 1965. — Vol. 19. — P. 739-744.

382. Morgan C.L.; Newman D.J.; Price C.P. Immunosensors: Technology and opportunities in laboratory medicine // Clin. Chem. — 1996. -N 2. P. 193-209.

383. Muller C., Rahn B1A., Pfister U. The incidence, pathogenesis, diagnosis and treatment of fat embolism // Orthop. Rev. 1994. - Vol. 23, N 2. r.P. 107-117.

384. Nakayama Т., Yoshida M. L-leucine sensitive, heat-stable alkaline phosphatase isoenzyme detected in a patient with' pleuritis carcinomatosa // Clin. Chim. Acta. 1970. - V.30. - P. 546-548. '

385. Nishi S. Isolation and characterisation of a human fetal a-globulin from the sera of fetuses and a hepatoma patients // Cancer Res. 1970.- V.30.- P.2507-2513.

386. Nuijens J.H., Abbink J.J., Wachtfogel Y.T. et al. Plasma elastase, alpha 1-antitrypsin and lactoferrin in sepsis evidence for neutrophils as mediators in fatal sepsis//J. Lab. Clin. Med. 1992.-V. 119.-N2.-P. 159-168.

387. Nunez E.A., Benassayag C., Savu L. et al. Oestrogen-binding function ofalpha-fetoprotein // J.Steroid Biochem. 1979. - v.l 1. - Suppl.l A. - p.237-243.

388. Ochoa J.L. Hydrophobic (interaction) chromatography // Biochimie. -1978.- V.60.-N 1. -P.l-15.

389. Orino K., Lehman L., Tsuji Y. et al. Ferritin and the response to oxidative stress // Biochem. J. 2001. - V. 357(Ptl). - P. 241-247.

390. Ouchterlony O. Diffusion in gel methods for immunological analysis // Progress in Allergy. 1958. - v. 5. -p.l-15.

391. Petersen S.M. a2-macroglobulin and pregnancy zone protein. Serum levels, a2-macroglobulin receptors, cellular syntesis and aspects of function in relation to immunology // Dan. Med. Bull. 1993. - V.40. - P.409-446.

392. Raphael G.D., Davis J.L., Fox P.C. et al. Grandular secretion of lactoferrin in a patient with neutrophil lactoferrin deficiency // J. Allergy. Clin. Immunol. 1988. - vol.84. - N 6. - Pt. 1. - P. 914-919.

393. Reist K., Hielfiker O. et al. Sepsis score in surgical intensive care medicine // Anasthesiol. Intensivmed. 1996. - Vol. 31, N 9. - P. 556-562.

394. Roberts R.C., Riesen W.A., Hall R.K. Studies on the guaternary structure of human serum a2-macroglobulin // In: Bayer. Symp. V "Proteinase Inhibitors", Berlin. 1974.- P.63-71.

395. Ruoslahti E., Engvall E. Immunological cross-reaction between alpha-fetoprotein and albumin // Proc.Nat.Acad.Sci.USA. 1976. - v.73. - p.4641-4644.

396. Ruoslahti E., Seppala.M. Alpha-fetoprotein in normal serum // Nature. — 1972. v.235. - p.161-163.

397. Ruoslahti E., Terry W. a-fetoprotein and serum albumin sequence homology // Nature. 1976. - v.260. - p.804-805.

398. Salvesen G.S., Barret A.J. Covalent binding of proteinases in thieir reaction with a2-macroglobulin // Biochem. J. 1980.- V.l87.- №3.- P.695-701.

399. Sandberg A.A., Slaunwhite W.R. J clin. invest., 1969, v. 42, p. 511.

400. Scatchard G. The attraction of proteins for small molecules and ions // Ann. N.Y. Acad. Sci. 1949. - v.51. - p.660-672.

401. Schoultz В., Stigbrand T. Characterization of the "pregnancy zone" protein in relation to other a2-globulin of pregnancy // Biochem. Biophys. Acta. -1974.- V.359.- №2.- P.303-304.

402. Schoultz В., Stigbrand T. Purification of the "pregnancy zone" protein // Acta. Obstet. Gynec. Scand. 1973.- V.52.- P.51-54.

403. Shackford S.R., Mackersie R.C., Holbrook T.L. The epidemiology of traumatic death: a population-based analysis // Arch. Surg. 1993. - Vol. 128. -P. 571-575.

404. Sibbald W., Doig G., Inman K. Sepsis, SIRS and infection // Intensive Care Med. 1995. - Vol. 21. - P. 299-301.

405. Slater K., Fletcher J. Lactoferrin derived from neutrophils inhibits the mixed lymphocyte reaction // Blood. 1987. - vol. 69. - N 5. - P. 1328-1333.

406. Smail N., Messiah A., Edouard A. et al. Role of systemic inflammatory response syndrome and infection in the occurrence of early multiple organ dysfunction syndrome following severe trauma // Intensive Care Med. — 1995. Vol. 21.-P. 813—816.

407. Smithies O.U. Zone electrophoresis in starch gels and its applications to studies of serum proteins // Adv. Prot. Press. N. I. Chem. Acad. 1959.- V.14.- P.65-66.

408. Song M.K., Adham N.F., Rindercknecht H. Large Scale purification of a2-macroglobulin from human plasma // Biochem. Med. 1975. - vol.14. — N 2. -P.162-169.

409. Sottrup-Jensen L., Stepanik T.M., Lombland P. Primary structure of a2-macroglobulin // Thromb. and Haemost. 1981,- V.46.-№1.- P.87-92.

410. Steinbuch M. Regulation of proteinases activity // Coll. Ges. Biol. Chem. -1979. V.30.- P.207-222.

411. Straube W. Pregnancy-associated a2-glycoprotein past, present andfuture//Zentrabl-Gynacol. 1989.- V.lll.-P.1461-1468.

412. Strecker W., Gebhard F., Roger I. et al. Early biochemical characterization of soft-tissue trauma and fracture trauma // J. Trauma. — 1999. — Vol. 47, N2.— P. 358-364.

413. Sutscliffe R.G., Kukulska-Langland B.M., Cogging J.R. Studies of human pregnancy-associated plasma protein A. Purification by affinity chromatography and structural comparisons with a2-macroglobulin // Biochem. J. 1980. -vol.191. — N 3. -P. 799-809.

414. Tenenbaum A., Leclercq G. Different chromatographic behaviours on blue sepharose CL-6B of free and estradoil complexed forms of the estrogen mammary // J. Steroid. Biochem. 1980. - v. 13. - P. 829-833.

415. Ternynck Т., Avrameas S. Polyacrilamide-protein immunosorbents prepared with glutaraldehyde.// FEBS Lett. 1972. - v.23. -N 1. - P. 24-28.

416. Theil E. Ferritin: structure, gene regulation and cellular function in animals, plants and microorganisms // Ann. Rev. Biochem. — 1987. -V. 56. P. 289315.

417. Thomson A.W., Home C.H.W. Biological and clinical significanse of pregnancy-associated a2-glycoprotein // Invest. Cell. Kathol. 1980.- №3.- P.295-309.

418. Ura H, Hirata K, Yamaguchi K, Katsuramaki T, Denno R. Mechanism of the development of organ failure. Nippon Geka Gakkai Zasshi 1998 Aug; 99 (8):485-489.

419. Van de Winkel M., de Bactselier P., Grooten J., Hamers R. Binding of alpha-fetoprotein on the membrane lympho cells // 6th Meeting Int.Res.Group Carcino-Embrionic Proteins,I.R.G.C.P. Sept., 17-21, 1978, Marburg/Gahn.,Germani, 182 p.

420. Vikinge T.P., Askendal A., Liedberg В., Lindahl Т., Tengvall P. Immobilized chicken antibodies improve the detection of serum antigens with surface plasmon resonance (SPR). // Biosens. and Bioelectron. 1998. - N 12. - P. 12571262.

421. Von der Haar F. Purification of proteins by fractional interfacial salting -out chromatography on unsubstituted agarose gels // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1976. - Vol. 70, N 4. - P. 1009-1013.

422. Waydhas C., Nast-Kolb D., Iochum M. et al. Inflammatory mediators, infection, sepsis and multiorgan failure after sever trauma // Arch. Surg. 1992. -Vol. 127. - P. 460.

423. Waydhas C., Nast-Kolb D., Trupka A. et al. Posttraumatic inflammatory response, secondary operations and late multiple organ failure // J. Trauma. 1996. -Vol. 40, N4. - P. 624-630.

424. Wick M., Koller M., Muhr G. Immunologische veranderungen beim polytrauma // Trauma Berufskrankh. 2000. - Bd 3. - S. 220-222.

425. Wintenbourn C.C., Molloy A.L. Susceptibilities of lactoferrin and transferrin to myloperoxidase-dependent loss of iron-binding capacity // Biochem. J. 1988. - vol. 250. -N 2. -P. 613-616.

426. Wu-H.E., Lundbild R.L., Church F.C. Neutralization of heparin activity by neutrophil lactoferrin // Blood. 1995. - vol. 85. -N 2. - P. 421-428.

427. Zallen G., Moore E.E., Johnson J.L. Circulating postinjury neutrophils are primed for the release of proinflammatory Cytokines // J. Trauma.— 1999.— V.46, № 1.-p. 42-48.

428. Zimmerman E.F., Voorting-Hawking M., Michael J.G. Immunosuppression by mouse syalylated a-fetoprotein // Nature. 1977. - v.265. — N.5592.-p.354-356.

429. Zoller M., Matzku S. Antigen and antibody purification by immunoadsorbtion, elimination of non-biospecifically bound proteins.// J. Immunol. Meth. 1976. - v.l 1. - No 3-4. - P. 287-295.

Информация о работе

Коханов, Александр Владимирович
доктора медицинских наук
Москва, 2009
ВАК 03.00.04

Диссертация

Иммунохимические показатели в клинической оценке черепно-мозговой и скелетной травмы - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы