Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Сравнительная характеристика структурных компонентов и метаболических процессов в легочной ткани в норме и на фоне хронического воздействия сероводородсодержащего газа

ВАК РФ 03.03.04, Клеточная биология, цитология, гистология

Автореферат диссертации по теме "Сравнительная характеристика структурных компонентов и метаболических процессов в легочной ткани в норме и на фоне хронического воздействия сероводородсодержащего газа"

На^йравах рукописй

ЧЕКУНОВА ИРИНА ЮРЬЕВНА

«СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СТРУКТУРНЫХ КОМПОНЕНТОВ И МЕТАБОЛИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ В ЛЕГОЧНОЙ ТКАНИ В НОРМЕ И НА ФОНЕ ХРОНИЧЕСКОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ СЕРОВОДОРОДСОДЕРЖАЩЕГО ГАЗА»

(экспериментальное исследование)

03.03.04 - клеточная биология, цитология, гистология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Астрахань - 2010

003493287

Работа выполнена на кафедре гистологии и эмбриологии Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Астраханская государственная медицинская академия» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор

Наумова Любовь Ивановна

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Смирнов Алексей Владимирович

доктор биологических наук Родзаевская Елена Борисовна

Ведущая организация: ГОУ ВПО Ставропольский

государственный университет

Защита состоится «26» марта 2010 года в 15 часов на заседании диссертационного совета ДМ 212.009.01 при Астраханском государственном университете по адресу: 414000, г. Астрахань, пл. Шаумяна, 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Астраханского государственного университета по адресу: 414000, г. Астрахань, пл. Шаумяна, 1.

Автореферат разослан «_» февраля 2010 года.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы.

Нарастающие темпы научно-технического прогресса вызывают массу проблем в вопросах охраны окружающей среды, в профилактике и лечении экологически обусловленных заболеваний. Безотходные технологии химической, нефтеперерабатывающей и газовой промышленностей являются реальностью далекого будущего, а в настоящее время именно они возглавляют список самых вредных производств (Резаев A.A. с соавт., 1998, Агаджанян H.A. с соавт., 2000, Трубников Г.А. с соавт., 2000, 2002, Кузьмина Л.П., 2008, Мадаева И.М. с соавт., 2009).

Активно функционирующий в Астраханской области газоперерабатывающий комплекс стал основным источником загрязнения атмосферы за счет регулярного выброса продуктов переработки газа и его конденсата. Большое количество людей, прежде всего рабочие и жители прилежащих населенных территорий, оказываются в зоне продолжительного воздействия сероводородсодержащего газа, концентрация которого в окружающем воздухе чаще всего не превышает предельно допустимой (ПДК). Распространенность бронхолегочной патологии среди людей перечисленных категорий, многими исследователями рассматривается как результат негативного влияния природного газа (Великанов Э.Б., 1994, Орлов М.А., 1996, Воробьева Т.Б. с соавт, 2000, Бучин В.Н. с соавт., 2000, ЛомтеваТ.Ф., 2002, Бучина A.B., 2004, Наумова Л.И., 2008, Шишкина Т.А., 2008,2009).

Длительное воздействие сероводородсодержащего газа вследствие прямого раздражающего эффекта формирует воспалительный процесс в легких с активацией целого комплекса стандартных защитных механизмов. Декомпенсация систем антирадикальной, антипротеазной, специфической и неспецифической иммунной защиты приводит к стойким нарушениям структурной организации компонентов легочной ткани и формированию хронического патологического процесса (Прокофьев В.Н. с соавт., 1995, Резаев A.A. с соавт., 1998, Кочеткова Е.А. с соавт., 2004, Постникова Л.Б. с соавт., 2004, Тризно H.H. с соавт., 2005, Жестков A.B. с соавт., 2008). Длительное течение с неяркой клинической симптоматикой создает массу проблем в своевременной диагностике и предупреждении серьезных осложнений хронического бронхита, что объясняет широкую распространенность этого заболевания среди рабочих и высокий процент потери трудоспособности (Гамбарян М.Г. с соавт, 2006, Вермель А.Е., 2007, Величковский Б.Т., 2008).

Необходимость понимания процессов на уровне доклинических проявлений заболевания, связанных со снижением функциональных резервов, обеспечивающих резистентность организма к влиянию вредных факторов внешней среды, подтверждает важность изучения в пульмонологии нереспираторных функций легких. Идентификация признаков нарушения метаболического равновесия позволяет определить выраженность течения воспаления и репарации в легких.

Несмотря на большое количество исследований, проводимых в этой области, работ с морфологическим обоснованием патогенетических механизмов развития бронхолегочной патологии не достаточно. Необходимость изучения метаболической функции во взаимной связи со структурными преобразованиями легочной ткани является весьма актуальной и перспективной в плане возможного использования результатов исследования при разработке комплекса профилактических мероприятий на экологически вредных производствах.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ. Выявить динамику и взаимосвязь морфологических показателей структурных компонентов и метаболических процессов в легочной ткани в условиях хронического воздействия сероводородсодержащим газом в концентрации 3 мг/м3.

ЗАДАЧИ ИССЛЕ ДОВАНИЯ.

1. Дать характеристику структурной организации легочной ткани и микроциркуляторного русла лабораторных животных в норме и в разные сроки хронического воздействия сероводородсодержащего газа.

2. Оценить гистохимическую картину (метаболизм липидов, белков и углеводов) в структурах легочной ткани лабораторных животных в норме и в разные сроки хронического воздействия сероводородсодержащего газа.

3. Провести метаболический анализ следующих биохимических показателей крови: общего белка, альбуминов, глобулинов, молочной и пировиноградной кислоты, липопротеидов низкой плотности, липопротеидов очень низкой плотности, липопротеидов высокой плотности, общего холестерина, триглицеридов в норме и в разные сроки хронического воздействия сероводородсодержащего газа.

4. Определить зависимость между морфофункциональными изменениями и активностью метаболических процессов в структурах легочной ткани лабораторных животных в норме и в разные сроки хронического воздействия сероводородсодержащего газа.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИЯ. Впервые исследована морфология структурных и метаболических изменений легочной ткани в динамике на фоне хронического воздействия сероводородсодержащим газом в концентрации, не превышающей ПДК.

Впервые дано морфологическое обоснование преобразованиям микроциркуляторного русла в зависимости от длительности воздействия сероводородсодержащего газа.

Дана характеристика тканевому обмену в легких в зависимости от срока ингаляции природным газом низкой концентрации.

По результатам исследования проведена оценка структурных и метаболических показателей в зависимости от состояния микроциркуляторного русла на разных сроках воздействия природным газом в концентрации по сероводороду 3 мг/м3.

Выявлена взаимосвязь и проведена корреляция между данными морфологических, гистохимических и биохимических показателей в динамике хронического эксперимента.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. Работа носит фундаментальный характер и представляет динамическую морфофункциональную характеристику структурных элементов легочной ткани крыс в норме и на фоне длительного воздействия сероводородсодержащего газа. Полученные данные позволяют выявить особенности структурных и метаболических преобразований в зависимости от срока хронического эксперимента и продемонстрировать негативное влияние длительно действующего природного газа с допустимой концентрацией сероводорода на состояние дыхательной системы. Практическая значимость работы заключается в том, что она позволяет значительно расширить существующие представления о механизмах развития экологически обусловленной патологии бронхолегочной системы и подвести морфологическую базу для объяснения некоторых клинических и диагностических проявлений заболеваний органов дыхания. Разработанный комплексный подход дает возможность не только в деталях охарактеризовать гистологические и гистохимические изменения в тканях легких, но и представить общую картину взаимодействующих процессов.

Полученные данные внедрены для преподавания соответствующих разделах гистологии, патологической и нормальной физиологии, патологической анатомии, биохимии. Результаты исследования могут быть использованы в написании монографий, руководств по пульмонологии, токсикологии и патологической анатомии и служить в качестве методической основы для последующих исследований в этой области.

ПОЛОЖЕНИЯ. ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ.

1. Степень структурных и метаболических изменений в легких зависит от длительности воздействия природным газом в предельно допустимой концентрации.

2. Длительное воздействие сероводородсодержащего газа в предельно допустимых концентрациях вызывает изменение

биохимических показателей крови (общего белка, количества альбуминов, общего холестерина, липопротеидов низкой плотности (ЛПНП), липопротеидов высокой плотности (ЛПВП), липопротеидов очень низкой плотности (ЛПОНП), триглицеридов, молочной и пировиноградной кислоты) сопоставимых с динамикой метаболических процессов в структурах легких.

3. Длительное влияние природного газа в концентрации по сероводороду Змг/м3 вызывает стойкие структурные изменения в легких, сохраняющиеся в течение месяца после прекращения его воздействия.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ.

Результаты работы доложены и обсуждены на конференции «Современные аспекты гистогенеза и вопросы преподавания гистологии в вузе», посвященной 100-летию со дня рождения профессора Л.И. Фалина, Москва, 2007; на международной научной конференции, посвященной 450-летию города Астрахани, Астрахань, 2007; на XII Международном конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореабилитации, Паттайя, Таиланд, 5-9 декабря 2007 г; на IX Конгрессе Международной Ассоциации Морфологов, г. Бухара, респ. Узбекистан, 14 - 17 мая, 2008г.; на коференции, посвященной 90-летию АГМА, 2008г.; на IV Всероссийском съезде анатомов, гистологов и эмбриологов, Саратов, 23 -25 сентября 2009.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ.

Дисертация изложена на 141 стр. машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследований, глав собственных исследований, обсуждения, выводов, практических рекомендаций и списка использованной литературы. Указатель литературы включает в себя 159 отечественных и 49 иностранных источников. Работа содержит 7 таблиц, 59 рисунков из которых, 52 фотографии.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

Работа представляет собой экспериментальное комплексное исследование, выполненное на 320 беспородных крысах, самцах массой 180 - 220 г., прошедших карантин в течение месяца в специальном помещении вивария и в дальнейшем находящихся на стандартном лабораторном содержании. Протокол экспериментов в разделах выбора, содержания животных, моделирования патологических процессов и выведения их из опыта был составлен в соответствии с принцами биоэтики, правилами лабораторной практики (GLP); он соответствует этическим нормам, изложенным Женевской конвенции (1971), «Международных рекомендациях по проведению медико-биологических исследований с использованием животных» (1985) и в соответствии с приказом МЗ РФ №

267 от 19.06.2003, «Об утверждении правил лабораторной практики», (Минздрав ССР № 755 от 12.08.1977), атакже положениями «Хельсинской Декларации по вопросам медицинской этики» и «Международными рекомендациями по проведению медико-биологических исследований с использованием животных» (1989). Проведение экспериментальных исследований было оценено этической комиссией (заключение №3 от 25.09.2009)

Моделирование воздействия сероводородсодержащего газа проводилось путем помещения животных на 4 часа в специальные затравочные камеры производства Московского института профзаболеваний и гигиены труда им. Эрисмана объемом 200 литров. Все животные были распределены на 6 групп. Экспериментальные группы подвергались воздействию природного газа в концентрации Змг/м3 по сероводороду на протяжении 5 дней в неделю в течение 1,2,3 и 4 месяцев. В пятую группу были включены животные для изучения восстановительных возможностей бронхолегочной системы через месяц после окончания воздействия. Контролем служили крысы того же возраста, находившиеся в стандартных условиях вивария.

По истечении каждого срока эксперимента животным вводили внутрибрюшинно этаминал натрия в концентрации 40 мг/кг массы. После фиксации извлеченных органов 10% нейтральным формалином приготавливались парафиновые блоки. Обзорные гистологические препараты получали путем окраски срезов толщиной 5-10 мкм гематоксилином и эозином. Коллагеновые волокна выявляли окраской по Ван Гизон, состояние гладкой мышечной ткани сосудистой стенки окраской ГОФП. Анализ тканевого обмена в легких проводился путем полуколичественного метода гистохимических реакций на белок прочным зеленым методом Шаффера (1957), углеводы ШИК-реакциейпо Me Manus (1946) в модификации Hotchkiss (1948), липиды Суданом III (по Лилли Р., 1969).

Для выявления изменения сосудистой проницаемости в сосудистое русло вводился 0,3%-ый раствор акридинового оранжевого с последующей люминесцентной микроскопией легочных микрососудов.

Использование количественных морфологических методов в данном исследовании было продиктовано, прежде всего, необходимостью сравнения динамики качественных и количественных изменений в структурах легочной ткани в ответ на хроническое воздействие сероводородсодержащим газом. В соответствии с принципами системного количественного анализа (Автандилов Г.Г., 1996, 2002) исследовались толщина сосудистой стенки, альвеолярной

перегородки, бронхиальной стенки, воздушность легочной ткани, интенсивность клеточной интоксикации.

Для оценки интенсивности гистохимических реакций применяли условные обозначения: (0) — отсутствие окрашивания; (±) — сомнительный результат; (+) — слабое окрашивание; (++) — среднее окрашивание; (+++) — интенсивное окрашивание (К. Великан и Д. Великан, 1963; С.С.Касабьян,1961).

Для оценки метаболических изменений были выбраны следующие биохимические показатели крови: содержание общего белка и его основных фракций определялись методом электрофоретического разделения на бумаге, общего холестерина, липопротеидов низкой плотности, липопротеиды очень низкой плотности, липопротеидов высокой плотности и триглицеридов на автоматическом анализаторе «Union Carbaite» (Швеция), концентрация молочной кислоты с помощью колориметрирования методом Л.Г. Смирновой (1960) и пировиноградной кислоты методом Ю.Б. Филипповича (1982).

Полученные данные обрабатывали методом вариационной статистики с использованием критерия Стьюдента- (t). Вычисляли среднее арифметическое выборочной совокупности (М), ошибку среднего арифметического (т), среднее квадратичное отклонение (с). Достоверность различия определяли в каждой серии по отношению к исходному значению (р). Результаты опытов статистически обработаны с помощью MicrosofitExcel «Биометр».

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ .

Результаты, полученные в процессе хронического эксперимента, свидетельствуют о явном негативном влиянии предельно допустимых концентраций сероводородсодержащего газа на респираторную систему животных. Сравнительный анализ морфологических показателей легких был проведен путем детального изучения серии гистологических препаратов, соответствующих каждому этапу эксперимента. Последовательность изменений, отражающих динамику процесса, сравнивалась по ряду параметров с каждым предыдущим сроком. За основу были приняты следующие показатели: воздушность легочной ткани, толщина сосудистой стенки, диаметр сосуда, форма и размеры бронхов, толщина альвеолярной стенки. Метаболическая функция оценивалась по результатам гистохимических исследований и биохимических показателей крови. Анализ гистохимических показателей проводился путем сравнения интенсивности цветовых реакций, отражающих количество содержащегося вещества. В биохимических исследованиях оценивалось содержание ЛПНП, ЛПОНП,

ЛПВП, общего ХС, ТГ, общего белка, альбуминов, молочной и пировиноградной кислот в каждом сроке хронического эксперимента.

В обзорном исследовании гистологических препаратов, окрашенных гематоксилин-эозином, в контрольной группе животных видны типичного строения бронхи с хорошо выраженной складчатостью слизистой оболочки. Высокий призматический эпителий четко отделен от подлежащей собственной пластинки непрерывной границей. Проходимость бронхов не нарушена. В гомогенно окрашенной мышечной оболочке продолговатые ядра гладких миоцитов занимают строго циркулярное расположение. В пределах одного поля зрения воздушность легочной ткани и распределение клеток межальвеолярного матрикса имеют равномерный характер. В просвете кровеносных сосудов кровь, контуры стенок четкие, мышечная оболочка проявляет гомогенную эозинофилию, ядра миоцитов продолговатой формы, циркулярно ориентированные, лежат в 1 -2 ряда.

В легочной ткани, окрашенной методом Ван Гизон, наличие кол-лагеновых волокон в собственной пластинке слизистой бронхов и наружной оболочке сосудов проявляется умеренной фуксинофилией. На фоне слабо окрашенного межальвеолярного матрикса заметна сеть тонких эластических волокон. Гомогенную пикринофилию демонстрирует мышечная оболочка кровеносных сосудов и бронхов.

Умеренную положительную ШИК- реакцию в норме дают основное вещество, коллагеновые волокна и мышечная ткань за счет содержания в них мукополисахаридов, что отражается на тинкториальных свойствах стенок сосудов и бронхов. В паренхиме интенсивность окраски менее однородная из-за неодинаковой способности клеток накапливать гликоген. Волокнистое строение стромы проявляется в виде нежной сеточки, хорошо заметной во всех структурах легких. Цитоплазма клеток бронхиального эпителия проявляет различную чувствительность к ШИК-реакции. Небольшая группа клеток имеет слабо окрашенную цитоплазму, другая, большая часть клеток, дает умеренную или интенсивную ШИК-положительную реакцию. Краситель в цитоплазме этих клеток располагается диффузно или глыбками в апикальной части.

Окрашивание легких прочным зеленым показало значительное содержание белка во всех структурах, включая эпителий бронхов, где гомогенность окраски нарушается только присутствием бокаловидных клеток со светлой цитоплазмой. В собственной пластинке хорошо контрастируют с общим фоном пучки волокон, повторяющие ход складок. Часть из них уходят в ниже лежащие слои, сливаясь с волокнами экстрацеллюлярного матрикса, где и участвуют в образовании общего волокнистого каркаса.

Наибольшую интенсивность окраски проявляют мышечные оболочки сосудов и бронхов. Клетки паренхимы легких демонстрируют разную степень тинкториальности, что придает ей пеструю картину.

Состояние микроциркуляторного русла оценивалось с помощью люминесцентной микроскопией после внутривенного введения раствора акридинового оранжевого. Сосуды капиллярного русла легких контрольной группы животных демонстрировали четкое окрашивание стенок с выходом малой части красителя в периваскулярное пространство в результате транскапиллярного обмена.

В течение первого месяца хронической ингаляции наблюдаются незначительные изменения в структурах легочной ткани. Эпителий бронхов увеличивает секрецию слизи, что проявляется гиперплазией бокаловидных клеток и накоплением ШИК - позитивных гранул в их цитоплазме. Усиление секреторной активности в совокупности с работой реснитчатого аппарата обеспечивает защиту и очищение бронхов. Однако длительная обструкция воздухоносных путей при гиперпродукции слизи создает благоприятные условия для персистенции инфекции, повреждения эпителия бронхов и развития воспалительного процесса (Карпина В.А., 2005, Чучалин А. Г., 2007). Отмечается усиление клеточной инфильтрации периваскуляр-ного и перибронхиального пространства. Активированные альвеолярные макрофаги и нейтрофилы вырабатывают ферменты с мощным деструктивным действием, нарушающие нормальную архитектонику легких. В первую очередь, разрушаются тонкие эластические волокна альвеолярных перегородок, что ведет к появлению раздутых альвеол с истонченными стенками (Величковский Б.Т., 2008, Лощилов Ю.А., 2008г., Черняев А.Л. с соавт., 2008г., Черняев А.В. с соавт., 2009, КаШпутаМ Е1 а1, 1994, Ывка В. в., 1998, ЫакасЫ К. Е1 а1,1993). Нарушение вентиляции легких и неравномерное утолщение межальвеолярных перегородок за счет очаговой клеточной инфильтрации и набухания эпителия приводят к уменьшению воздушности легочной ткани относительно контрольных показателей (табл. 1).

Результатом действия протеолитических ферментов можно объяснить увеличение интенсивности ШИК-реакции волокнистых структур в стенках бронхов и оболочек сосудов. Отщепляющиеся от белков стромы в процессе протеолиза гликозаминогликаны увеличивают свое содержание в соединительнотканных структурах и усиливают её тинкто-риальные свойства.

Увеличение интенсивности ШИК-позитивной реакции цитоплазмы клеток периваскулярного пространства свидетельствует о накоплении гли-козаминогликанов, что можно было бы расценить как подготовку клеток к

синтезу компонентов межклеточного вещества. К морфологическим признакам реакции сосудов на воздействие природного газа на этом этапе эксперимента относится гипертрофия их оболочек, связанная в основном с отеком и клеточной инфильтрацией. Мышечные клетки сосудистой стенки находятся в состоянии сокращения, что проявляется округлением и сближением их ядер с образованием непрерывной цепочки. Ядра эпителиальных клеток при этом выбухают в просвет сосуда.

Люминесцентная микроскопия свидетельствует о повышении сосудистой проницаемости, так как свечение контрастного вещества хорошо определяется в стенках сосудов и паравазальной области.

К концу первого месяца происходит резкое повышение содержания общего холестерина, в основном, за счет холестерина ЛПНП, основного поставщика холестерина в клетку (Климов А.Н. с соавт., 1999, Горбанев Е.А., 2004, Решетова Т.Г с соавт., 2005). Холестерин является важной составляющей клеточных мембран, способствующей их устойчивости к внешним воздействиям. Процессы повреждения и регенерации усиливают потребность клеток в холестерине, а медиаторы воспаления увеличивают его синтез в печени и выделение в кровь в составе ЛПНП. Отмечается повышение содержания триглицеридов и ЛПОНП, что свидетельствует о переключении энергетического обмена с углеводного на липидный тип (Котенко Т.В. с соавт., 1985, Атаджанов М.А. с соавт., 1995, Лизенко М.В. с соавт., 2004, Братусь В.В. с соавт, 2007). В связи с увеличением потребности в холестерине и снижением акцепторных свойств ЛПВП из-за изменения белкового компонента, количество его в крови снижается (Рис. 3,4).

Влияние низких концентраций сероводородсодержащего газа в течение первого месяц эксперимента сопровождается, в первую очередь, патохимическими изменениями, заключающимися в мобилизации транспортных форм липидов и белков для компенсации нарушений метаболического равновесия, наблюдаемых в легочной ткани.

Морфологические показатели второго месяца эксперимента демонстрируют продолжающееся уменьшение воздушности легочной ткани за счет усиления клеточной инфильтрации межальвеолярных перегородок. Зоны ателектазов чередуются с эмфизематозно расширенными участками. Процесс разрушения эластического каркаса распространяется уже на более толстые пучки эластических волокон бронхиальной стенки, что приводит к деформации стенок некоторых бронхов (Черняев А.Л. с соавт., 2008, Кузьмина Л.П., 2008).

Нарушается складчатость слизистой за счет несостоятельности соединительнотканного каркаса. Увеличение клеточной инфильтрации

приводит к гипертрофии стенок бронхов, нарушению целостности базальной мембраны. Мышечная оболочка теряет гомогенность окраски и циркулярное расположение ядер миоцитов. В просвете бронхов, вдоль эпителия, формируются отложения гомогенного вещества, инфильтрированного клетками. В интерстиции вблизи некоторых бронхов диффузные клеточные инфильтраты организуются в четкие скопления, напоминающие лимфоидные фолликулы. Нарушение кровообращения проявляется запустеванием некоторых сосудов, что объясняется перераспределением крови из менее в более вентилируемые участки легких, нарушением эластического каркаса и вазоконстрикторным эффектом (Смирнова Т.И. с соавт., 2008). В других сосудах отмечается эритроцитарный стаз. Стенки их, относительно предыдущего срока, утолщаются, просвет уменьшается за счет клеточной инфильтрации и расслоения мышечных клеток в результате отека. В периваскулярной области некоторых сосудов отмечается наличие плотных клеточных инфильтратов, по окраске гематоксилином напоминающих лимфоцитарные (табл. 1).

Явных признаков коллагенообразования в этом месяце не наблюдается. Деструктивные процессы, клеточная инфильтрация и отек уменьшают содержание белка в структурах легочной ткани, что отражается на их тинкториальных свойствах. Усиление интенсивности окраски прочным зеленым демонстрирует только периваскулярная область. Сосуды усиливают проницаемость для компонентов крови, что повышает содержание белков в периваскулярном интерстиции. Повышенную экссудацию контрастного вещества в паравазальную область регистрирует люминесцентная микроскопия.

В условиях развивающейся гипоксии в результате воздействия серо-водородсодержащего газа происходят изменения в углеводном обмене. В течение второго месяца эксперимента отмечается значительное повышение количества молочной кислоты и незначительное пировиноградной, что отражает нарастание степени гипоксии в тканях легких и усиление анаэробного гликолиза (рис. 2). С увеличением проницаемости сосудистой стенки и ростом потребности в транспортных формах белков, к концу второго месяца эксперимента заметно снижается содержание общего белка в крови, в основном за счет концентрации альбуминов (Anderson N.L. et al, 2002, Diamandis E.P., 2003) (рис. 1). Сохраняется тенденция к повышению общего холестерина и холестерина ЛПНП, триглицеридов и ЛПОНП. Количество ЛПВП в крови уменьшается, что предотвращает отток холестерина из тканей (рис.3,4).

Усиленное поглощение макрофагами и другими клетками ретикулоэндотелиальной системы липидов наблюдается при окрашивании тканей легких Суданом III. Отмечается появление в периваскулярном интерстиции клеток, содержащих липидные включения. Липидсодержащая выстилка альвеол деформируется за счет клеточной инфильтрации и отека. Количество её уменьшается в участках ателектаза, что объясняется нарушением кровоснабжения и секреторной активности альвеолоцитов II типа.

В течение третьего месяца от начала эксперимента происходят значительные структурные изменения в легочной ткани. Воздушность легочной ткани увеличивается по мере нарастания эмфизематозных участков. В пределах одного поля зрения соседствуют рядом альвеолы с растянутыми, истонченными стенками и толстыми межальвеолярными перегородками, инфильтрированными клетками, в несколько раз превышающими размеры самой альвеолы.

Многие бронхи деформированы, на разрезе имеют звездчатую форму и содержат скопления слизи, инфильтрированной клетками. Толщина бронхиальной стенки уменьшается относительно предыдущего месяца. Слоистая структура стенок нарушается. Встречаются полипообразные выпячивания слизистой в просвет бронха. Эпителий слизистой уплощается, его базальная граница становится неровной, прерывистой или исчезает совсем в области массивной клеточной инфильтрации.

Часть кровеносных сосудов запустевает. Усиление сосудистой проницаемости сопровождается появлением в периваскулярной области участков, богатых белками плазмы, проявляющих интенсивную эозинофилию. Толщина стенок заметно не изменяется, но увеличивается диаметр сосудов. Сократительная контрактура мышечных и эндотелиальных клеток сохраняется. Прогрессируют процессы атрофии мышечной оболочки бронхов, что выражается в уменьшении её объема и увеличении межмышечной соединительной ткани (табл. 1).

Активные процессы коллагенизации проявляются к концу третьего месяца хронического эксперимента интенсивной фуксинофилией перибронхиальной области. Неоднородность окраски мышечной оболочки объясняется появлением участков фуксинофилии. Места отложения коллагена носят гомогенный характер, что характерно для молодых его образований. Наиболее яркую реакцию дают кровеносные сосуды (Разумов В.В. с соавт., 2008). Интенсивной окраске подвергаются наружная оболочка сосуда и периваскулярное пространство. Отложение коллагена здесь носит как гомогенный, так и пучковый характер. Степень фуксинофилии уменьшается в сторону паренхимы легких и выражается в виде слабого

межклеточного вещества.

При окраске прочным зеленым стенки сосудов визуально нарушают свою целостность, в них формируются «пустоты», соответствующие межмышечным расслоениям и клеточным инфильтратам. Контуры и толщина стенок становятся неровными. Волокна, определяемые раньше в оболочках и межклеточном веществе паренхимы, истончаются и плохо контурируют на общем фоне. Периваскулярное пространство бледнеет и приобретает ячеистый характер из-за неоднородного окрашивания. Стенки бронхов проявляют неравномерные тинкториальные свойства, местами истончаются и теряют четкость контуров.

При окраске Суданом III увеличивается количество липидных включений в клетках и между ними. Липидсодержащая выстилка деформируется и местами отслаивается за счет отека и клеточной инфильтрации.

Биохимические показатели крови демонстрируют рост уровня общего холестерина, триглицеридов, ЛПОНП и ЛПНП, хотя темпы роста концентрации холестерина в крови в силу интенсивной утилизации его тканями падает (рис. 2, 3, 4). Количество общего белка снижается за счет уменьшения содержания альбуминов. По мере нарастания степени гипоксии в легких отмечается значительный рост концентрации молочной кислоты в крови.

Четвертый месяц эксперимента характеризуется грубыми деструктивными изменениями. Нарастает количество деформированных бронхов с мешковидными выпячиваниями стенок, характерных для бронхоэкгазов. Сужение просвета бронхов и обтурация их слизью, инфильтрированной клеточными массами, приводят к ухудшению вентиляции. Атрофические процессы в бронхиальной стенке обусловлены разрастанием и отеком межмышечной соединительной ткани. Собственная пластинка практически не определяется. Мышечная оболочка плохо окрашивается эозином, ядра гладких миоцитов дезориентированы. Воздушность легких увеличивается с нарастанием объема эмфизематозно измененной паренхимы (табл. 1).

Метод Ван Гизон демонстрирует прогрессию процессов коллагенообразования. Мышечная оболочка бронхов усиливает свою фуксинофилию, причем отложения коллагена в ней носят очаговый характер. В стенке бронхов по-прежнему интенсивно окрашенными остаются собственная пластинка и перибронхиальное пространство. В сосудистой стенке мышечная оболочка подвергается процессам активной коллагенизации. Интенсивное диффузное окрашивание фуксином

периваскулярного пространства показывает увеличение отложения коллагена с распространением процесса в окружающую паренхиму.

Увеличение объема соединительной ткани в стенках бронхов и перибронхиальном пространстве проявляется слабой ШИК-реакцией. В процессе протеолиза образуются коллагеновые волокна, в основном, III типа, дающих интенсивное окрашивание, что делает их хорошо заметными на общем фоне (Кругликов Г.Г. с соавт., 2008). Отмечается прерывистость и дезориентация волокнистых структур, особенно в области массивных клеточных инфильтраций.

Гистохимические показатели липидного обмена в легких, в основном, касаются липидсодержащей выстилки альвеол. По мере нарастания процессов пероксидации в цитоплазме макрофагов увеличивается количество липидных включений, что сопровождается повышением их функциональной активности.

В окрашенных Суданом препаратах отмечается увеличение липидных включений в цитоплазме клеток и межклеточном пространстве, деформация и уменьшение липидсодержащей выстилки альвеол.

В биохимических показателях крови продолжается увеличение содержания холестерина ЛПНП в составе общего холестерина. Появляется тенденция к снижению триглицеридов и ЛПОНП. Концентрация ЛПВП снижаться. По мере неравномерного снижения содержания глобулинов и альбуминов в составе общего белка, происходит изменение их соотношения в сторону увеличения глобулинов. Во всех сроках эксперимента происходит стабильное увеличение содержания молочной кислоты (Рис. 1-4).

Таким образом, наиболее значимым проявлением третьего и четвертого месяца эксперимента является нарушение структурной организации легких. Процессы коллагенизации становятся очевидными в течение третьего месяца хронической ингаляции с последующим нарастанием интенсивности по мере увеличения срока воздействия.

Исследование восстановительных возможностей респираторной системы испытуемых животных через месяц после окончания воздействия природным газом в концентрации по сероводороду Змг/м3 демонстрируют результаты пятого месяца эксперимента. На препаратах, окрашенных гематоксилин-эозином, происходят незначительные изменения относительно предыдущего месяца эксперимента. Положительным моментом можно отметить лишь восстановление границ эпителия с собственной пластинкой. Она стала более четкой, ровной и непрерывной. Остальные параметры гистологических и гистохимических методов исследования свидетельствуют о продолжении процессов коллагенообразования в структурах легочной ткани.

а Альбумины ■ Глобулины

контроль

1 месяц

2 месяца

3 месяца

4 месяца 5 месяцев

Рис. 1. Изменение содержания альбуминов и глобулинов в сыворотке крови при хроническом воздействии сероводородсодержащего газа в концентрации 3 мг/м3 по сероводороду (ммоль/л).

ммоль/л

— Молочная кислота

Пировиноград ная кислота

контроль 1 месяц 2 месяца 3 месяца 4 месяца 5 месяцев

Рис.2. Изменение содержания молочной и пировиноградной кислот при хроническом воздействии сероводородсодержащего газа в концентрации 3 мг/м3 по сероводороду (ммоль/л).

Начальные проявления, характеризующие восстановительные процессы в метаболической функции легких после прекращения воздействия сероводородсодержащего газа, отражаются, в первую очередь, в результатах биохимических показателей крови животных. В течение месяца отмечается повышение концентрации общего белка и альбуминов в сыворотке крови, относительная стабилизация показателей ЛПВП, ЛПНП, триглицеридов, уменьшение количества молочной

кислоты. Несмотря на положительную динамику результатов исследования последнего месяца эксперимента, мы можем говорить лишь о тенденции к восстановлению метаболического равновесия, так как полной нормализации биохимических показателей не происходит. Структурные изменения демонстрируют более стойкий характер (рис. I -4).

ммоль/л

2,5

2

1,5

1

♦

г ♦ - —4- «^Ш — ™ - ♦ — —щ

ж - „ ни - , - * - • — - „, , « «^ « ** - - -1

♦—лпвп -и— лпнп

0,5 |-А ->—'41-* ■-■ - * А ----* ' "-*---А- ■ ЛПОНП

О -

контроль 1 месяц 2 месяца 3 месяца 4 месяца 5 месяцев

Рис. 3. Содержание липопротеидов высокой, низкой и очень низкой плотности в крови при хроническом воздействии сероводородсодержащего газа в концентрации 3 мг/мЗ на концентрацию (ммоль/л).

ммоль/л

4 -

3,5 3 2,5

2 ■ ЯЖ-1,5 1

0,5

контроль 1 месяц 2 месяца 3 месяца 4 месяца 5 месяцев

И Холестерин И Триглицериды

Рис. 4. Содержание общего холестерина и триглицеридов в крови при хроническом воздействии сероводородсодержащего газа в концентрации 3 мг/мЗ на концентрацию (ммоль/л).

Таблица 1.

Морфометрические показатели в легких на разных сроках хронического воздейстия сероводородсодержащим газом в концентрации 3 мг/м3, М ± m

контроль 1 месяц 2 месяц 3 месяц 4 месяц 5 месяц

Толщина сосудистой стенки (мкм) 16,8 ± 1,4 24,8 ± 2,5* 36,0 ±2,48 42,3 ±0,63* 46,7 ± 0,6* 48,5 ± 0,6*

Толщина альвеолярной стенки (мкм) 40,9 ± 0,35 47,2 ± 0,6* 67,0 ± 0,6* 55,0 ±5,5* 52,0 ± 0,2* 50,3 ± 0,8*

Воздушность легочной ткани (%) 25,0± 0,5 23,56± 2,1 18,4± 0,5* 24,7± 3,1 26,3± 3,5 29,2± 3,7

Диаметр сосуда (мкм) 65,2 ± 0,9 78,3 ± 0,5* 84,2 ± 1,5* 95,1 ± 1,3* 102,5 ± 1,5* 98,3 ±1,2*

Толщина бронхиальной стенки (мкм) 92,3 ± 0,9 107,5 ± 1,1* 116,0 ±2,4* 118,1 ± 1,0* 112,5 ± 1,3* 109,7 ±2,5*

Периваскулярная инфильтрация (мкм3/мкм3) - 29,14 ±1,3 32,48 ± 2,4 34,6 ± 0,7 33,9 ± 1,5 24,7 ±2,1

Перибронхиальная инфильтрация (мкм3/мкм3) - 11,8 ±0,9 15,9 ±1,8 18,5 ±3,7 16,7 ±0,74 13,6 ±0,62

Примечание: * - разница с контролем достоверна при р<0,05

выводы

1 .Морфологические проявления начального этапа хронического воздействия природного газа в структурах легочной ткани отражают функциональный характер изменений, выражающихся усилением клеточной инфильтрации, повышением проницаемости сосудистого русла, бокалоклеточной гиперплазией. Возникающее нарушение метаболического равновесия ослабляет резистентность организма к повреждающему действию сероводородсодержащего газа и приводит к разрушению эластического каркаса легких, деформации бронхов, изменению воздушности легочной ткани, прогрессирующей пролиферации соединительной ткани, перестройке микроциркуляторного русла.

2. Хроническое воздействие природного газа вызывает изменения в сосудах микроциркуляторного русла, характеризующиеся прогрессирующей гипертрофией сосудистой стенки, обусловленной усилением клеточной инфильтрации, отеком, разрастанием межмышечной соединительной ткани в средней оболочке и гиперплазией интимы, что приводит к усилению проницаемости и интенсивному коллагенообразованию в периваскулярной области.

3. На фоне хронической ингаляции природным газом происходит изменение гистохимической картины адекватно последовательности метаболических процессов в легочной ткани. С нарастанием активности протеолитических ферментов, снижается содержание белков и увеличивается количество углеводов в структурах легких. С пролиферацией соединительной ткани уменьшается содержание углеводов в легочной ткани. В цитоплазме клеток паренхимы постепенно увеличивается содержание липидов, уменьшается и деформируется липидсодержащая выстилка альвеол.

4. По мере увеличения срока эксперимента уменьшается концентрация общего белка и альбуминов крови, увеличивается содержание молочной кислоты, холестерина и триглицеридов, ЛПНП и ЛПОНП, уменьшается количество ЛПВП.

5. Хроническая ингаляция природного газа в концентрации, не превышающей ПДК, вызывает стойкие структурные изменения в легочной ткани, сохраняющие свои параметры через месяц после окончания его воздействия. Положительную динамику восстановительного периода в первую очередь демонстрируют биохимические показатели крови, выражающиеся в тенденциях к уменьшению содержания в крови ЛПНП, ЛПОНП, общего холестерина, триглицеридов, молочной кислоты и увеличения ЛПВП, общего белка и альбуминов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Рекомендуется включить в комплекс мероприятий профилактических медицинских осмотров биохимические исследования крови для определения степени метаболических и структурных изменений бронхолегочной системы.

2. Результаты, отражающие динамику морфологических и функциональных процессов в легочных тканях могут быть использованы в учебном процессе в медицинских ВУЗах при преподавании соответствующих курсов гистологии, патологической анатомии, нормальной и патологической физиологии.

3. Продемонстрированный в настоящем исследовании неблагоприятных эффект хронического воздействия малых доз сероводородсодержащего газа на структуры и метаболическую функцию легких необходимо принимать во внимание при разработке нормативов предельно допустимых концентраций газа в производственных помещениях и в санитарно-защитной зоне, прилегающей к газодобывающим и газоперерабатывающим предприятиям.

СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ЛПНП-липопротеиды низкой плотности

ЛПОНП-липопротеиды очень низкой плотности

ЛПВП-липопротеиды высокой плотности

ПДК- предельно допустимая концентрация

ХС - холестерин

ТГ - триглицериды

СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1.Чекунова, И.Ю. Реакция дыхательной системы на действие неблагоприятных факторов среды / Т.А. Шишкина, И.Ю. Чекунова, Л.И. Наумова, И.С. Фисенко // «Современные аспекты гистогенеза и вопросы преподавания гистологии в ВУЗе», посвященная 100-летию со дня рождения профессора Л.И. Фалина. - Морфология. - 2007 - №3, - Стр. 102.

2.Чекунова, И.Ю. Анализ микроциркуляторных изменений в организме лабораторных животных при воздействии неблагоприятных факторов среды / Т.А.Шишкина, И.С. Фисенко, И.Ю. Чекунова // XII Международный конгресс по реабилитации в медицине ииммунореабилитации 5-9 декабря 2007 г. - Иммунология. - 2007. - №12. -Стр.89.

3. Чекунова И.Ю. Особенности морфологических изменений микроциркуляторного русла легких при адаптации к хроническому воздействию сероводородсодержащего газа / Л.И. Наумова, Н.В. Милехина, А. А, Осипов, Т. А. Шишкина, И.Ю. Чекукнова//Морфология. -2008. -№2. -Стр.94.

4. Чекунова, И.Ю. Структурные и функциональные изменения микроциркуляторного русла легких и тонкого кишечника при воздействии токсических веществ /Л.И. Наумова, Т.А. Шишкина, Н.В. Милехина, O.A. Доброславская, И.Ю. Чекунова // Труды Астраханской Государственной Медицинской Академии «Актуальные вопросы современной медицины» (посвященные 90-летию АГМА) -2008 -Т. 37, - С.52-53.

5. Чекунова, И.Ю. Использование препаратов системной энзимопатии в условиях хронической ингаляции природного газа / Т.А. Шишкина, Л.И., Наумова, Н.В. Милехина, A.A. Осипов, O.A. Доброславская, И.Ю. Чекунова // Материалы конференции «Актуальные проблемы клинической иммунологии и аллергологии» 23-24 октября 2008 года. - Цитокины и воспаление. -2008. - № 3 - Стр.74.

6. Чекунова, И.Ю. Морфологические изменения микроциркуляторного русла респираторной системы и желудочно-кишечного тракта при воздействии токсических веществ / Т.А. Шишкина, Л.И. Наумова, И.Ю. Чекунова, Е.Ю. Панкратова // Материалы конференции молодых ученых «Микроциркуляция человека в норме и патологии (экспериментальные и клинические аспекты) 26-27 февраля2009г. -2009. -С. 24-27.

7. Чекунова, И.Ю. Оценка функциональной активности микроциркуляторного русла на фоне хронического действия сероводородсодержащего газа / Шишкина Т.А., Наумова Л.И., Панкрашова Е.Ю. // Материалы конференции молодых ученых «Микроциркуляция человека в норме и патологии (экспериментальные и клинические аспекты) 26-27 февраля 2009 г. - 2009. - С.30-33.

8. Чекунова, И.Ю. Состояние соединительнотканных элементов в легких лабораторных животных при хроническом воздействии природного газа / Т.А. Шишкина, Л.И. Наумова, A.A. Осипов, И.Ю. Чекунова // Морфология-2009- №4-С. 157.

9. Чекунова, И.Ю. Морфологические особенности микроциркуляторного русла легких на фоне хронического действия токсических веществ // Л.И. Наумова, Т.А. Шишкина, A.A. Осипов, И.Ю. Чекунова // Морфология-2009-№4-С. 105.

10 Чекунова, И.Ю. Структурные изменения и медиаторы при эндотелиальной дисфункции, вызванной воздействием токсических

веществ / И.Ю. Чекунова, Л.И. Наумова, Т.А. Шишкина // Морфологические ведомости- 2009-№1-2- С.60-63.

11. Чекунова, И.Ю. Особенности реакции микроциркуляторного русла легких на действие неблагоприятных факторов среды / Т.А. Шишкина, Л.И. Наумова, И.Ю. Чекунова // Морфологические ведомости -2009-№ 1-2- С.156-158.

Подписано к печати 12.02.2010 Заказ № 0147. Тираж 100 экз. Уч.-изд. л. 1,4. Усл. печ. л. 1,3

Оттиражировано в Издательстве «Печатный дом» г. Астрахань, ул. Коммунистическая, 8

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Чекунова, Ирина Юрьевна

ВВЕДЕНИЕ.5.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.10.

1.1 Метаболическая функция легких в норме и при бронхолегочных заболеваниях.10.

1.2 Функциональная морфология микроциркуляторного русла в норме и при патологии органов дыхания.22.

1.3 Особенности реакции дыхательной системы на воздействие патогенных факторов.30.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.36.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.52.

3.1 Исследование морфологических и гистохимических изменений в ' респираторной системе при хроническом воздействии сероводо-родсодержащим газом.52.

3.2. Морфофункциональная характеристика микроциркуляторного русла легких.76.

3.3. Изменения биохимических показателей у крыс при хронической ингаляции сероводородсодержащего газа.89.

3.3.1. Изменение липидного обмена при хронической ингаляции сероводородсодержащего газа.89.

3.3.2. Изменение углеводного обмена при хронической ингаляции сероводородсодержащего газа.97.

3.3.3. Изменение белкового обмена при хронической ингаляции сероводородсодержащего газа.99.

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.103.

ВЫВОДЫ.114.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Сравнительная характеристика структурных компонентов и метаболических процессов в легочной ткани в норме и на фоне хронического воздействия сероводородсодержащего газа"

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ.

Нарастающие темпы научно-технического прогресса вызывают массу проблем в вопросах охраны окружающей среды, в профилактике и лечении экологически обусловленных заболеваний. Безотходные технологии химической, нефтеперерабатывающей и газовой промышленностей являются реальностью далекого будущего, а в настоящее время именно они возглавляют список самых вредных производств (Резаев А.А. с соавт., 2001, Агаджанян Н.А. с соавт., 2000, Трубников Г.А. с соавт., 2000, 2002, Кузьмина Л.П., 2008, Мадаева И.М. с соавт., 2009).

Активно функционирующий в Астраханской области газоперерабатывающий комплекс стал основным источником загрязнения атмосферы за счет регулярного выброса продуктов переработки газа и его конденсата. Большое количество людей, прежде всего рабочие и жители прилежащих населенных территорий, оказываются в зоне продолжительного воздействия сероводо-родсодержащего газа, концентрация которого в окружающем воздухе чаще всего не превышает предельно допустимой (ПДК). Распространенность брон-холегочной патологии среди людей перечисленных категорий, многими исследователями рассматривается как результат негативного влияния природного газа (Великанов Э.Б., 1994, Орлов М.А., 1996, Воробьева Т.Б. с соавт, 2000, Бучин В.Н. с соавт., 2002, Ломтева Т.Ф., 2002, Бучина А.В., 2004, Наумова Л.И., 2008, Шишкина Т.А., 2008, 2009).

Длительное воздействие сероводородсодержащего газа вследствие прямого раздражающего эффекта формирует воспалительный процесс в легких с активацией целого комплекса стандартных защитных механизмов. Декомпенсация систем антирадикальной, антипротеазной, специфической и неспецифической иммунной защиты приводит к стойким нарушениям структурной организации компонентов легочной ткани и формированию хронического патологического процесса (Прокофьев В.Н. с соавт., 1995, Резаев А.А. с соавт., 2001, Кочеткова Е.А. с соавт., 2004, Постникова Л.Б. с соавт., 2004, Тризно Н.Н. с соавт., 2005, Жестков А.В. с соавт., 2008). Длительное течение с неяркой клинической симптоматикой создает массу проблем в своевременной диагностике и предупреждении серьезных осложнений хронического бронхита, что объясняет широкую распространенность этого заболевания среди рабочих и высокий процент потери трудоспособности (Гамбарян М.Г. с соавт, 2006, Вермель А.Е., 2007, Величковский Б.Т., 2008).

Необходимость понимания процессов на уровне доклинических проявлений заболевания, связанных со снижением функциональных резервов, обеспечивающих резистентность организма к влиянию вредных факторов внешней среды, подтверждает важность изучения в пульмонологии нереспираторных функций легких. Идентификация признаков нарушения метаболического равновесия позволяет определить выраженность течения воспаления и репарации в легких.

Несмотря на большое количество исследований, проводимых в этой области, работ с морфологическим обоснованием патогенетических механизмов развития бронхолегочной патологии не достаточно. Необходимость изучения метаболической функции во взаимной связи со структурными преобразованиями легочной ткани является весьма актуальной и перспективной в плане возможного использования результатов исследования при разработке комплекса профилактических мероприятий на экологически вредных производствах.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Выявить динамику и взаимосвязь морфологических показателей структурных компонентов и метаболических процессов в легочной ткани в условиях хронического воздействия сероводородсодержащим газом в концентрации 3 мг/м3.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.

1. Дать характеристику структурной организации легочной ткани и ми-кроциркуляторного русла лабораторных животных в норме и в разные сроки хронического воздействия сероводородсодержащего газа.

2. Оценить гистохимическую картину (метаболизм липидов, белков и углеводов) в структурах легочной ткани лабораторных животных в норме и в разные сроки хронического воздействия сероводородсодержащего газа.

3. Провести метаболический анализ следующих биохимических показателей крови: общего белка, альбуминов, глобулинов, молочной и пировино-градной кислоты, липопротеидов низкой плотности, липопротеидов очень низкой плотности, липопротеидов высокой плотности, общего холестерина, триглицеридов в норме и в разные сроки хронического воздействия сероводородсодержащего газа.

4. Определить зависимость между морфофункциональными изменения- -ми и активностью метаболических процессов в структурах легочной ткани лабораторных животных в норме и в разные сроки хронического воздействия f сероводородсодержащего газа.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИЯ. Впервые исследована морфология структурных и метаболических изменений легочной ткани в динамике на фоне хронического воздействия сероводородсодержащим газом в концентрации, не превышающей ПДК.

Впервые дано морфологическое обоснование преобразованиям микроциркуляторного русла в зависимости от длительности воздействия сероводородсодержащего газа.

Дана характеристика тканевому обмену в легких в зависимости от срока ингаляции природным газом низкой концентрации.

По результатам исследования проведена оценка структурных и метаболических показателей в зависимости от состояния микроциркуляторного русла на разных сроках воздействия природным газом в концентрации по сероводороду 3 мг/м3.

Выявлена взаимосвязь и проведена корреляция между данными морфологических, гистохимических и биохимических показателей в динамике хронического эксперимента.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. Работа носит фундаментальный характер и представляет динамическую морфофункциональную характеристику структурных элементов легочной ткани крыс в норме и на фоне длительного воздействия сероводородсодержащего газа. Полученные данные позволяют выявить особенности структурных и метаболических преобразований в зависимости от срока хронического эксперимента и продемонстрировать негативное влияние длительно действующего природного газа с допустимой концентрацией сероводорода на состояние дыхательной системы. Практическая значимость работы заключается в том, что она позволяет значительно расширить существующие представления о механизмах развития экологически обусловленной патологии бронхолегочной системы и подвести морфологическую базу для объяснения некоторых клинических и диагностических проявлений заболеваний органов дыхания. Разработанный комплексный подход дает возможность не только в деталях охарактеризовать гистологические и гистохимические изменения в тканях легких, но и представить общую картину взаимодействующих процессов.

Полученные данные внедрены для преподавания соответствующих разделах гистологии, патологической и нормальной физиологии, патологической анатомии, биохимии. Результаты исследования могут быть использованы в написании монографий, руководств по пульмонологии, токсикологии и патологической анатомии и служить в качестве методической основы для последующих исследований в этой области.

ПОЛОЖЕНИЯ. ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ.

1. Степень структурных и метаболических изменений в легких зависит от длительности воздействия природным газом в предельно допустимой концентрации.

2. Длительное воздействие сероводород содержащего газа в предельно допустимых концентрациях вызывает изменение биохимических показателей крови (общего белка, количества альбуминов, общего холестерина, липопротеидов низкой плотности (ЛПНП), липопротеидов высокой плотности (ЛПВП), липопротеидов очень низкой плотности (ЛПОНП), триглицеридов, молочной и пировиноградной кислоты) сопоставимых с динамикой метаболических процессов в структурах легких.

3. Длительное влияние природного газа в концентрации по сероводороду Змг/м3 вызывает стойкие структурные изменения в легких, сохраняющиеся в течение месяца после прекращения его воздействия.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ.

Результаты работы доложены и обсуждены: на конференции «Современные аспекты гистогенеза и вопросы преподавания гистологии в вузе», посвященной 100-летию со дня рождения профессора Л.И. Фалина, Москва, 2007; на международной научной конференции, посвященной 450-летию города Астрахани, Астрахань, 2007; на XII Международном конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореабилитации, Паттайя, Таиланд, 5 — 9 декабря 2007 г; на IX Конгрессе Международной Ассоциации Морфологов, г. Бухара, респ. Узбекистан, 14—17 мая, 2008г.; на конференции, посвященной 90-летию АГМА, 2008г.; на IV Всероссийском съезде анатомов, гистологов и эмбриологов, Саратов, 23 — 25 сентября 2009.

Заключение Диссертация по теме "Клеточная биология, цитология, гистология", Чекунова, Ирина Юрьевна

ВЫВОДЫ

1. Морфологические проявления начального этапа хронического воздействия природного газа сопоставимы с нормальными показателями тканей легких и отличаются, в основном, изменениями функционального характера, выражающимися усилением клеточной инфильтрации, повышением проницаемости сосудистого русла, бокаловидноклеточной гиперплазией. Степень негативного влияния сероводородсодержащего газа усиливается по мере увеличения срока ингаляции и проявляется разрушением эластического каркаса легких с нарастанием признаков эмфиземы, деформации бронхов, прогрессирующей пролиферацией соединительной ткани, перестройкой микроциркуляторного русла.

2. Изменения качественного состава крови прогрессируют по мере увеличения срока ингаляции и сопровождаются морфофункциональными преобразованиями в структурах легких. Сравнительный анализ биохимических показателей крови в норме и на фоне хронического воздействия природного газа демонстрирует прогрессирующее уменьшение концентрации общего белка, в основном, за счет альбуминов, увеличение общего холестерина, триглицеридов, ЛПНП, ЛПОНП, молочной кислоты и уменьшение содержания ЛПВП.

3. При сравнительном анализе морфофункциональных показателей сосудов микроциркуляторного русла в норме и на фоне хронической ингаляции природного газа выявлено, что по мере нарастания клеточной инфильтрации и отека мгжмышечной соединительной ткани сосудистой стенки происходит увеличение ее проницаемости с последующим интенсивным коллагенообразованием в периваскулярной области.

4. На фоне хронической ингаляции природного газа происходит изменение гистохимической картины адекватно последовательности метаболических процессов в легочной ткани. С нарастанием гистологических признаков воспаления (усиление клеточной инфильтрации, сосудистой проницаемости, отека ткани), вследствие протеолиза белков соединительнотканных структур увеличивается содержание гликозаминогликанов в периваскулярной области и сосудистой стенке. С активацией процессов коллагенизации количество гликозаминогликанов в тканях легких уменьшается.

5. Хроническая ингаляция природного газа в концентрации, не превышающей ПДК, вызывает стойкие структурные изменения в легочной ткани, сохраняющие свои параметры через месяц после окончания его воздействия. Положительную динамику восстановительного периода в первую очередь демонстрируют биохимические показатели крови, выражающиеся в тенденциях к уменьшению содержания в крови ЛПНП, ЛПОНП, общего холестерина, триглицеридов, молочной кислоты и увеличения ЛПВП, общего белка и альбуминов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Рекомендуется включить в комплекс мероприятий профилактических медицинских осмотров биохимические исследования крови для определения степени метаболических и структурных изменений бронхолегочной системы.

2. Результаты, отражающие динамику морфологических и функциональных процессов в легочных тканях, могут быть использованы в учебном процессе в медицинских ВУЗах при преподавании соответствующих курсов гистологии, патологической анатомии, нормальной и патологической физиологии.

3. Продемонстрированный в настоящем исследовании неблагоприятных эффект хронического воздействия малых доз сероводородсодержащего газа на структуры и метаболическую функцию легких необходимо принимать во внимание при разработке нормативов предельно допустимых концентраций газа в производственных помещениях и в санитарно-защитной зоне, прилегающей к газодобывающим и газоперерабатывающим предприятиям.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Чекунова, Ирина Юрьевна, Астрахань

1. Аверьянов, А.В. Нейтрофильная эластаза и болезни органов дыхания / А.В. Аверьянов, А.Э. Поливанова // Пульмонология. — 2006. — №3.- С.74-79.

2. Агаджанян, Адаптация и резервы здоровья (очерки по экологии человека) / Н.А. Агаджанян, И.Н. Полунин, Ю.В. Павлов // Астрахань. Изд-во АГМА. — 1997. - С.156.

3. Агаджанян, Н.А. Экологические аспекты бронхолегочной патологии Волжского понизовья / Н.А. Агаджанян, И.Н. Полунин, Г.А.Трубников // Астрахань 2000. — 256с.

4. Адаптационные механизмы, обеспечивающие поверхностное натяжение в легких / JI.K. Романова, А.А. Жаворонков, Б.Л. Лемперт, М.С. Покровская, Л.Н. Филиппенко // Физиология человека. — 1977. Том 3. -№6. - С.1006-1020.

5. Айсатов, З.Р. Хронические обструктивные болезни легких / З.Р. Айса-тов, А.Н. Кокосов, С.И. Овчаренко // Consilium medicum. — 2000. -№1.-С.211-214.

6. Анаев, Э.Х. Конденсат выдыхаемого воздуха в диагностике и оценке эффективности лечения болезней органов дыхания / Э.Х. Анаев, А.Г. Чуча-лин // Пульмонология. 2006. - №4. - С. 12-20.

7. Андреенко, Г.В. Роль липидов в функциональной активности тромбоцитов / Г.В. Андреенко, Л.А. Суворова // Успехи современной биологии. — 1986. Том 101.- С. 436-446.

8. Александров, П.Н. Реакция капилляров легкого на гистамин /П.Н. Александров, В.И. Чумаков, В.Е. Красников // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 1982. - №6. - С.70-74.

9. Асфандияров, Р.И. Влияние газообразных серосодержащих поллю-тантов на микроциркуляторное русло / Р.И. Асфандияров, Ф.Р. Асфандияров, А.Е. Лазько, М.В. Лазько // Труды Астраханской медицинской академии. — 1999. -Том XXXVIII. С.60-62.

10. Асфандияров, Р.И. Острые отравления серосодержащими газами / Р.И. Асфандияров, В.Н. Бучин, А.Е. Лазько, А.А. Резаев // Изд-во АГМА. — Астрахань, 1995. 178с.

11. Банин, В.В. Участие внеклеточного матрикса в регуляции ангиогенеза / В.В. Банин // Морфология. 2006. - №4. - С. 17-18.

12. Беднов, И.А. Физиологические механизмы хронического воздействия серосодержащим газом в эксперименте: Автореф. дис.канд. мед. наук / И.А. Беднов. Астрахань, 2004. - 22с.

13. Биличенко, Т.Н. Методологические аспекты оценки влияния качества атмосферного воздуха на формирование болезней органов дыхания у населения / Т.Н. Биличенко// Пульмонология. 2006. - №4. - С.94-101.

14. Боев, В.М. Сернистые соединения природного газа и их действие на организм / В.М. Боев, Н.П. Сетко. М.: Медицина. -2001. - 216с.

15. Бойко, В.И. Актуальные вопросы медицины труда в газоперерабатывающей промышленности / В.И. Бойко, Ю.И Доценко., М.И. Гололобов // Труды Астраханской медицинской академии. 1999. - Том XXXVTII. -С.9-14.

16. Братусь, В.В. Оксид азота как регулятор защитных и гомеостатиче-ских реакций организма /В.В.Братусь //УкраУнський ревматолопчний журнал. 2003. - №4. - С.3-10.

17. Братусь, В.В. Метаболический синдром: природа и механизмы развития (обзор литературы) /В.В. Братусь // Журнал АМН Украины. 2004, т. 10, № 4. С. 646-670.

18. Бучин, В.Н. Здоровье населения и его охрана в регионе Астраханского газового комплекса / В.Н. Бучин// Автореф. дисс. докт. мед. наук. -Москва, 1996.-40с.

19. Бучин, В.Н. Системные основы стресса у работников газовой промышленности / В.Н. Бучин, М.В. Лазько // Вест, новых мед. технологий. — 2002. Т9, №2. - С.56-58.

20. Бучина, А.В. Эндоэкологическая реабилитация в лечении и профилактике хронического бронхита у рабочих Астраханского газоперерабатывающего производства / А.В. Бучина// Автореф. дисс. канд. мед. наук. Москва, 2004. - 24с.

21. Бучина, М.М. Реактивность бронхов у рабочих газоперерабатывающего производства/ М.М. Бучина// Автореф. дисс. канд. мед. наук. -Москва, 2001.-22с.

22. Быков, В.Л. Частная гистология / В.Л. Быков. СПб.: СОТИС, 2002. -520с.

23. Величковский, Б.Т. Патогенез профессиональных заболеваний в легких пылевой этиологии / Б.Т. Величковский // В сб.: «Медицина труда и промышленная экология», Астрахань, 1994. №5-6. - С. 1-8.

24. Величковский, Б.Т. Патогенетическая классификация профессиональных заболеваний органов дыхания, вызванных воздействием фиброген-ной пыли / Б.Т. Величковский // Пульмонология 2008 - №4 - С.93-100.

25. Величковский, Б.Т. Патогенетическое значение пиковых подъемов среднесуточных концентраций взвешенных частиц в атмосферном воздухе населенных мест / Б.Т. Величковский // Пульмонология — 2003 №1 - С. 6-9.

26. Верболович, В.П. О регуляции свободно-радикального окисления ли-пидов легочных сурфактантов / В.П. Верболович, Е.П. Петренко, Ю.К. Подгорный // Вопросы медицинской химии. — 1985. №5. - С. 65-67.

27. Вермель, А.Е. Современная терапия хронической обструктивной болезни легких и её перспективы / А.Е. Вермель// Клиническая медицина. — 2007. №1. - С.8-15.

28. Визель, А.А. Саркоидоз: обзор работ последних лет / А.А. Визель // Пульмонология. -2009. №1. - С.83-89.

29. Владимиров, Ю.А. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах / Ю.А. Владимиров, А.И. Арчаков. М.:Наука, 1972.-252с.

30. Владимиров, Ю.А. Роль нарушения липидного слоя мембран в развитии патологических процессов / Ю.А. Владимиров// Пат. Физиология и экспериментальная терапия. 1989г. - №4. - С.7-18.

31. Гамбарян, М.Г. Факторы риска хронической обструктивной болезни легких, их взаимосвязь и прогностическая значимость / М.Г. Гамбарян,

32. Н.А. Дидковский, A.M. Калинина, А.Д. Деев // Пульмонология. — 2006. №3. - С.72-76.

33. Гладченко, Ю.Л. Клинико-токсикологическая оценка отравлений компонентами газового конденсата, вызванных аварийными выбросом, лечение и профилактика / Ю.Л. Гладченко, В.Э. Вальтер, А.С. Пушкарев // Астрахань, 2005г. 128с.

34. Горбанев, Е.А. Нарушения липидного обмена. Дислипопротеиде-мии, дислипидемии / Е.А. Горбанев. — Астрахань, 2004. 76с.

35. Дейл, М.М. Эндотелиальные клетки сосудов / М.М. Дейл, Т-П.Д. Фан. В кн.: Дейл М.М. Формен Дж.К. Руководство по иммунофармакологии: Пер. с англ. М.: Медицина. 1998. - С.87-102.

36. Демидова, Т.Ю. Эндотелий как мишень терапевтического воздействия антигипертензивной терапии у больных сахарным диабетом 2 типа / Т.Ю. Демидова, А.С. Аметов, Л.В. Смагина // Клиническая медицина. 2005. -№10.-С. 25-30.

37. Ерохин, В.В., Функциональная морфология респираторного отдела легких / В.В. Ерохин. М.: Медицина, 1987. - 274с.

38. Жестков, А.В. Клинико-иммунологические особенности профессионального бронхита / А.В. Жестков, В.В. Косарев, С.А. Бабанов, А.И. Косов // Пульмонология. №4. - 2008. - С.31-35.

39. Жмуров, В.А. Состояние окислительного метаболизма и антиокси-дантной защитной системы в альвеолярных макрофагах у больных бронхиальной астмой / В.А. Жмуров, С.В. Лапик, Т.Б. Попова // Пульмонология. — 1995. -№4.-С.60.

40. Загидуллин, З.Ш. К вопросу о заболевании органов дыхания у рабочих нефтепромыслов и нефтеперерабатывающих заводов / З.Ш. Загидуллин // Тр. Уфим. НИИ гигиены и проф. заболеваний. Уфа, 1963. - Том 2. -С.204-211.

41. Зайчик, А.Ш. Основы патофизиологии / А.Ш. Зайчик, Л.П. Чурилов. -СПб., 2001. ЭЛБИ-СПб,688с.

42. Заяц, Л. М. Состояние сурфактантной системы и ультраструктура аэрогематического барьера легких в условиях промышленного загрязнения атмосферы // Эфферентная терапия. — 2003. № 3. — С. 25-29.

43. Ивчик, Т.В. Прогнозирование развития обструктивного синдрома у больных хроническим бронхитом с учетом наследственных факторов / Т.В. Ивчик, А.Н Кокосов., Г.И. Разоренов//Тер. арх. 2001. - №3. - С.33-37.

44. Ильин, А.А. Гликопротеиды, эластин и метаболиты коллагена в диагностике и прогнозировании хронического бронхита у лиц пожилого возраста/ А.А. Ильин. Автореф. дисс. .кан. мед. наук, 1995. — Саратов. - 23с.

45. Итмезех, Ахмад Механизмы формирования пневмосклероза при хроническом эндотоксикозе / Ахмад Итмезех // Автореферат дисс. канд.-мед.наук. Волгоград, 2006. - 24с.

46. Казначеев, В.П. Клиническая патология транскапиллярного обмена / В.П. Казначеев, А.А. Дзизинский . М.: Медицина.,1975. - 143с.

47. Кароли, Н.А. Дисфункция эндотелия сосудов у больных хроническими обструктивными болезнями легких / Н.А. Кароли, А.П. Ребров,(

48. Ю.Н. Юдакова // Проблемы туберкулеза и болезней легких. 2004. - №4.1. С. 19-23.

49. Кароли, Н.А. Эндотелиальная дисфункция и ее клиническое значение у больных хроническими обструктивными заболеваниями легких / Н.А. Кароли, А.П. Ребров // Клиническая медицина. 2005. - №9. - С.10-16.

50. Карпин, В.А. Теоретическая схема патологического процесса. Частный анализ хронического бронхита / В.А. Карпин// Клиническая медицина. — 2005. -№10. -С.71-73.

51. Кауфман, О .Я. Гипертрофия и регенерация гладких мышц / О .Я. Кауфман. -М.МЕДИЦИНА, 1979. 94с.

52. Киселева, Е.А. Факторы риска хронической обструктивной болезни легких / Е.А. Киселева, Л.Н. Карлова. Изд-во «Терра». — 2003. С.6-15.

53. Климов, А.Н. Обмен липидов и липопротеидов и его нарушения», руководство для врачей / А.Н. Климов, Н.Г. Никульчева. Изд-во Терра, Москва.-1999.-138с.

54. Кожевников, Ю.Н. О перекисном окислении липидов в норме и патологии / Ю.Н. Кожевников // Вопросы медицинской химии. 1985г. - Том №5. - С. 2-7.

55. Козлов, Ю.П. Липиды: структура, биосинтез, превращения и функция/ Ю.П. Козлов. М.Медицина, 1977. - С.80-93.

56. Козлявина, Н.В. Варианты дислипидемий у больных хроническим бронхитом / Н.В. Козлявина, Н.С. Журавска. // Вестник Санкт-Петербурга, гос. мед. акад. им. Мечникова И.И. 2006 - №1. — С. 124-127.

57. Коровина, О.В. Клинико-морфологическая характеристика различных форм хронического бронхита / О.В. Коровина А.Г., Бобков, С.Л. Совчен-ко //Пульмонология. 1991. - №4. - С.41-44.

58. Котенко, Т.В. Роль липидов и продуктов перекисного окисления в развитии пневмосклероза / Т.В. Котенко, И.В. Двораковская, Н.Н. Зыбина // Вопросы медицинской химии. — 1985. том 6. - стр. 4-6.

59. Кругликов, Г.Г. Морфологическая характеристика хронического об-структивного бронхита / Г.Г. Кругликов Б.Т., Величковский, А.Г. Чучалин // Пульмонология. 2003. - №3. - С. 16-19.

60. Кругликов, Г.Г. Ультраструктурные особенности аэрогематического барьера при развитии пневмокониозов / Г.Г. Кругликов Б.Т., Величковский // Пульмонология. 2008. - №6. - С.77-79.

61. Кузьмина, Л.П. Биохимические и молекулярно-генетические механизмы развития профессиональной бронхолегочной патологии / Л.П. Кузьмина // Пульмонология. 2008. - №4. - С. 107-110.

62. Кузнецова, Э.Э., Транспортная способность альбумина у больных распространенным гнойным перитонитом / Э.Э. Кузнецова, А.Г. Горохова, А.Г. Горохов // Успехи современного естествознания. — 2003. №8. - С. 57.

63. Куприянов, В.В. Микроциркуляторное русло / В.В. Куприянов, Я.Л. Караганов, В.Н. Козлов. М.: Медицина, 1975.-266с.

64. Левин, Г.Я. Роль фосфолипазы А в агрегации клеток крови / Г.Я. Левин, Ю.А. Шереметьев // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 1979. - №1. - С.43-44.

65. Лещенко, И.В. Основные положения международных клинических рекомендаций по диагностике и лечению хронической обструктивной болезни легких / И.В. Лещенко, Н.А. Эсаулов // Пульмонология. — 2005. №3. - С.101-108.

66. Ливанов, Г.А. Сурфактантная система при заболеваниях легких у взрослых / Г.А. Ливанов, А.Н. Лодягин, Е.И. Мартынов, Б.В. Батоцыренов, С.Е. Колбасов // Анестезиология и реанимация. — 2004. №6. - С.56-62.

67. Лизенко, М.В. Нарушение структурных липидов в патогенезе бронхиальной астмы / М.В. Лизенко, В.И. Петровский, Т.И. Регеранд, A.M. Бахи-рев, С.А. Давыдов // Пульмонология. 2004. - том 4. - С 34-36.

68. Ломтева, Т.Ф. Клинико-патогенетическое значение процессов пере-кисного окисления липидов у детей, проживающих в районе расположения крупного газохимического комплекса. Автореф. дисс. канд. мед. наук. /Т.Ф. Ломтева. Астрахань. - 2002. - 26с.

69. Лощилов, Ю.А. «Особенности формирования гипертензии в малом круге кровообращения при пневмокониозах / Ю.А. Лощилов // Пульмонология. №4. - 2008. - С.111-112.

70. Мазуров, В.И. Биохимия коллагеновых белков / В.И. Мазуров. — М.: Медицина. 1974. - 247с.

71. Малахова, М.Я. Метаболизм липидов при поражении легких. Автореф. дисс. докт. мед. наук., Ленинград. 1990. —38с.

72. Малахова, Э.А. О новой функции липопротеидлипазы в крови / Э.А. Малахова, Г.Г. Базазьян, Т.П. Левчук, Б.А. Кудряшов // Доклады Академии наук СССР. 1976. - Том 231. - №2. - С.495-498.

73. Мадаева, И.М. Синдром обструктивного апноэ / гипопноэ сна и перекисное окисление липидов / И.М. Мадаева, В.А. Петрова, Л.М. Колесникова, О.Н. Шевырталова // Пульмонология. 2009. - №2. - С.65-69.

74. Маркеры тромбофилии при легочном фиброзе, осложненном легочной гипертензией / Д.В. Архипова, Е.В. Привалов Л.В., Козловская, Б.М. Корнев Е.Н., Попова, В.В. Краева, В.И. Осипенко, В.О. Бицадзе // Тер. Арх. 2004. - №3. - С.43-49.

75. Марков, Х.М. Эндогенные ингибиторы оксида азота и их значение в патологии / Х.М. Марков // Росс, педиатрический журнал. 2005. -№6. - С.31-35.

76. Марусев, Д.С. Микроциркуляция крови и реактивность терминальных сосудов легких у облученных и необлученных животных: Автореф. дисс. . канд. мед. наук / Д.С. Марусев,- Москва, 1970.-28с.

77. Международные рекомендации по проведению медико-биологических исследований с использованием животных // Ланималогия. — 1993. -№1. -С.29.

78. Метаболические функции легких при бронхиальной астме у детей / Т.Г. Решетова, А.И. Рыбкин, Н.С. Побединская, Е.Н. Андрианова, Р.М. Ла-рюшкина, Ассан Вадакаил, Е.Е. Стеблецова, О.В. Кузнецова, Т.В Крупина // Педиатрия. 2005. - №4. - С.4-8.

79. Микроциркуляция и способы ее коррекции / Н.А. Ефименко, Н.Е. Чернеховская, Т.А. Федорова, В.К. Шишло. М.: Арт-Омега. - 2003. -172с.

80. Мотавкин, П.А. Клиническая и экспериментальная патофизиология легких / П.А.Мотавкин, Б.И.Гельцер. М.: Наука, 1998. - 336с.

81. Нестеров, Ю.В. Липидный обмен и стресс-реактивность легких / Ю.В. Нестеров. АГПУ. - 2002. - 81с.

82. Нестеров, Е.Н. Сурфактанты легкого в норме и патологии / Е.Н. Нестерова. -Киев, 1983. С. 102 - 108.

83. Новочадов, В.В. Липиды плазмы крови животных с эндотоксемией как модификаторы активности ферментов in vitro /В.В. Новочадов// Успехи соввременного естествознания. 2003. - №8. — С.65.

84. Новочадов, В.В. Эндотоксикоз: Моделирование и органопатология: монография / В.В. Новочадов, В.Б. Писарев. — Волгоград: Изд-во ВолГМУ, 2005.-240с.

85. Озолиня, А.Ж. Биохимические аспекты реактивности соединительной ткани / А.Ж. Озолиня. — Изд-во Зинатне, Рига. — 1986. — 82с.

86. Орлов, М.А. Хронический бронхит в условиях промышленного загрязнения воздуха сернистыми поллютантами при переработке высокосеро-водородсодержащего природного газа и конденсата. Автореф. дисс. канд. мед. наук. / М.А. Орлов. 1996г. Астрахань. — 24с.

87. Ойвин, И.А. Проникновение и метаморфизация сероводорода в организме / И.А. Ойвин // Фармакология и токсикология. — 1943. Т6. -№3. - С.54-59.

88. Патологическая анатомия бронхов и респираторной ткани крыс при воздействии диоксида азота / И.В. Двораковская, Н.А. Кузубова, A.M. Фио-ник, И.С. Платонова, Е.С. Лебедева, Л.Н. Данилов // Пульмонология. 2009г. - №1. - С.78-82.

89. Поражения кардиореспираторной системы у рабочих газоперерабатывающих производств / Г.А. Трубников, И.Н. Полунин, В.Н. Бучин, М.И. Шевченко, М.М. Бучина. Астрахань: АГМА. - 2002 г. - 160с.

90. Предупреждение стрессорной дислипидемии с помощью адаптации к коротким стрессорным воздействиям / Ф.З. Меерсон, В.П. Твердохлиб, Г.Т. Лобанова, Л.Ю. Голубева, А.А. Никоноров // Физиологический журнал. -1987.- том 33.-№6.- С.5-7.

91. Серосодержащие газы, их действие на организм и пути дезинтоксикации в эксперименте / Н.Н. Тризно, Ф.Р. Асфандияров, И.А. Беднов, А.К. Аюпова. — Астрахань, 2005. 116с.

92. Сетко, Н.П. Характеристика биологического действия продуктов переработки природного газа и нефти как источников химического загрязнения окружающей среды / Н.П. Сетко // Гигиена и санитария. — 1989. -№8. С.59-63.

93. Симбирцев, С.А. Липопротеиды как субстрат для синтеза сурфак-тантов легочной ткани / С.А. Симбирцев, А.Я. Малахова, Н.А. Беляков // Тезисы докладов Всесоюзного симпозиума по биохимии липидов. — Киев. -1983. С.101-102.

94. Сидоренко, Г.И. Современные проблемы гигиены окружающей среды и её место в системе наук о биосфере / Г.И. Сидоренко, Н.Н. Литвинов, С.А Шиган // Сб.: Обзорная информация серия Гигиена. - М., Медицина. -1986г. - С. 76.

95. Системная патология при хронической обструктивной болезни легких / Н.Е. Чернеховская, Т.А. Федорова, В.Г. Андреев, М.М. Кириллов. -М.: «Экономика и информатика», 2005. 192с.

96. Смирнова, Т.В. Особенности сосудистой реактивности у больных бронхиальной астмой» / Т.В. Смирнова, Ю.М. Перельман, В.П. Колосов // Пульмонология. 2008. - №6. — С.63-66.

97. Соодаева, С.К. Роль свободного железа в процессах ПОЛ при воздействии асбеста / С С.К.оодаева, Е.А. Острахович // Пульмонология. — 1995.-№1.-стр.50.

98. Состояние микроциркуляции у больных ишемической болезнью сердца с сопутствующими бронхолегочными заболеваниями / Л.М. Клячкин, В.В. Щегольков, В.В. Булавин, В.М. Проскурин // Клин, медицина. 1990. -№7. - С.75-77.

99. Спектр фосфолипидов в органах мишенях при хроническом стрессе / М.А. Атаджанов, Н.С. Баширова, П.Д. Усманходжаева, Г.Р. Садыко-ва, Х.Х. Таджибаева // — Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 1995.-Т. 4.- С.46-48.

100. Спицин, В.А. Генетический полиморфизм и профессиональные заболевания: история 10-летнего исследования / В.А. Спицин // Вестн. РАМН 2000. - №5. - С.27-32.

101. Струков, А.И. Функциональные структуры микроциркуляции и их роль в патологии / А.И. Струков // Кардиология. 1975. - №12. - С.5-11.

102. Струков, А.И. Сравнительная патология микроциркуляторного русла / А.И. Струков, А.А. Воробьева // Кардиология. — 1976. -№11. — С.8-17.

103. Сыромятникова, Н.В. Метаболическая активность легких / Н.В. Сыромятникова, В.А. Гонарова, Т.В . Котенко. Л.: Медицина. -1987. -168 с.

104. Сюрин, С.А. Влияние длительного табакокурения на процесс ПОЛ у больных хроническим бронхитом / С.А. Сюрин // Пульмонология. — 2004.- №2.- С.83-85.

105. Терховская, Т.И. Влияние спектра липопротеидов плазмы крови на уровень холестерина мембран эритроцитов / Т.И. Терховская, Э.М. Холи-лов, Е.С. Фертинская// Патология, физиология и экспериментальная терапия. 1995. - №3. - С. 83-87.

106. Тихонравов, В.А. О кинетике окисления сероводорода в организме / В.А. Тихонравов// Фармокология и токсикология. — 1943. Т.6. -№5. -С.36-39.

107. Требования Международного комитета по науке по использованию в экспериментальных исследованиях лабораторных животных // Бюллетень ИКЛАС. 1978. - № 24. - С. 4-5.

108. Трубников, Г.А. Хронический бронхит в условиях экологического неблагополучия / Г.А. Трубников. Астрахань, 1996. - 112с.

109. Трубников, Г.А Экологическая пульмонология и новые аспекты патогенеза, диагностики, лечения заболевания легких / Г.А. Трубников // Актовая речь к 78 годовщине АГМА 20 ноября 1996года. — Астрахань, 1996. -12с.

110. Турлубеков, К.К. Взаимоотношение агрегации тромбоцитов и спектра липопротеидов у больных ишемической болезнью сердца. Автореф. дисс. канд. мед. наук / К.К. Турлубеков. 1982г. - Москва. - 16с.

111. Федорова, Т.А. Хроническое легочное сердце / Т.А. Федорова // Хронические обструктивные болезни легких / Под ред. А.Г. Чучалина. — М., 2000.-С. 192-216.

112. Хлыстова, З.С. Морфология эпителия переднего отдела пищеварительной и дыхательной системы / З.С. Хлыстова. М.Медицина. - 1971. 284с.

113. Хадарцев, А.А. Биофизико-химические процессы в управлении биологическими системами / А.А. Хадарцев // Вестник новых медицинских технологий. 1999. - Т. IV. - №2. - С.34-37.

114. Хаютин, В.М. Отрицательные обратные связи в патогенезе первичной артериальной гипертонии: механочувствительность эндотелия / В.М. Хаютин, Е.В. Лукошкова, А.И. Рогоза, В.П. Никольский // Физиолог, журн.- 1993.-№8. -С.1-12.

115. Цветкова, О.А., Воронкова О.О. Состояние системы провоспали-тельных цитокинов у больных хронической обструктивной болезнью легких / О.А. Цветкова, О.О. Воронкова // Пульмонология. — 2005. №3. - С.96-100.

116. Черняев, А.П. Патогенез и патологическая анатомия первичной легочной гипертензии / А.П. Черняев, М.В. Самсонова Изд. Media Medica. -2000. - 128с.

117. Чернух, A.M. Микроциркуляция / A.M. Чернух, П.Н. Александров, О.В. Алексеев. М.: Медицина, 1975. - 456с.

118. Чернух, A.M. Воспаление / A.M. Чернух. М.: Медицина, 1979.448с.

119. Черняев, А.П. Патологическая анатомия хронического обструк-тивного бронхита и бронхиальной астмы: сходства и различия / А.П. Черняев, М.В. Самсонова // CONSILIUM MEDICUM. 2003. - Том 3 (3). - С. 108114.

120. Чучалин, А.Г. Хронические обструктивные болезни легких / А.Г. Чучалин. М.: Бином; 1998. -480с.

121. Чучалин, А.Г. Респираторная медицина / А.Г. Чучалин. — М.: Медицина. 2007. 280с.

122. Шишкина, Т.А. Патогенетические механизмы нарушения микроциркуляции в легких при хроническом воздействии сероводородсодержащим газом. Автореф. дисс. канд. мед. наук / Т.А. Шишкина. — Саратов. 2008. 24с.

123. Шишкина, Т.А. Состояние соединительнотканных элементов в легких лабораторных животных при хроническом воздействии природного газа / Т.А. Шишкина, Л.И. Наумова, А.А. Осипов, И.Ю. Чекунова, // — Морфология 2009 - №4-С.157.

124. Шойхет, Я.Н. Клинико-морфологические сопоставления острых абсцессов легких / Я.Н. Шойхет, А.В. Лепилов, Ю.Г.Мотин, Н.В. Лель // Пульмонология. №2. - 2009. - С.60-64.

125. Штефель, В.О. О сроках воздействия при моделировании интоксикаций в токсиколого-гигиенических исследования / В.О. Штефель // Гигиена и санитария. 1996. - №8. - С.70-72.

126. Шур, Р.Л. Сравнительная токсичность нефтяного газа, содержащего сероводород и чистого сероводорода / Л.Р. Шур // Фармакология и токсикология. 1949. - Т12. - №1. - С.47-55.

127. Юлдашева, И.А. Роль NO и процессов липопероксидации в формировании обструкции бронхов при бронхиальной астме / И.А. Юлдашева, М.И. Арипова // Клиническая лабораторная диагностика. 2003. -№5. - С.3-8.

128. Яковлев, М.Ю. Альвеолярные макрофаги в физиологии и патологии легких / М.Ю. Яковлев, Л.Д. Зубаирова, А.Н. Крупник, Н.К. Пермяков // Архив патологии. №3. - 1991. - Том 53. - С.3-8.

129. Ямчук, Ю.И. Нарушения микроциркуляции при тяжелых формах бронхиальной астмы и их коррекция: Автореф. дисс. . канд. мед. наук / Ю.И. Ямчук. Саратов, 1990. - 30с.

130. Ahlborg, G. Hydrogen sulphide poisoning in shale oil industry / G. Ahlborg // Arch. Indust. Hyg. Occup. Med. -1951. Vol.3. - P. 247-266.

131. Anderson, N.L. The human plasma proteome: history, character, and diagnostic prospects / N.L. Anderson, N.G. Anderson //Mol. Cell. Proteomics — 2002. -T.l P. 845-867.

132. Augusti, A. Hypothesis: does COPD have an autoimmune component / A. Augusti, W. Mac Nee, K. Donaldson // Torax 2003- T. 58. -P.832-834.

133. Barberd, J.A. Pulmonary hypertension in chronic obstructive pulmonary disease. / J.A. Barberd, V.I. Peinado, S. Santos// Eur. Respir. J.- 2003- T. 21. — P.892-905.

134. Bergofsky, E. H. Study of the mechanisms involved in the pulmonary arterial presser response to hypoxia / E. H. Bergofsky, S.A. Holtzman // Circ. Res. —1967. -N20. -P.506-519.

135. Bradrford, M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding / M.M. Bradrford // Analyt. Biochem. 1976. - T. 72/ -P. 248-254.

136. Blum, H. Silver staining of proteins in polyacrylamide gels / H. Blum, H. Beier, H. J. Gross // Electrophoresis 1987 -N.8 P. 93 - 99.

137. Burrows, B. Patterns of cardiovascular dysfunction in chronic obstructive lung disease / B. Burrows, L.J. Kettel, A. H. Niden et al // N. Engl. J. Med. 1972. N. 286. - P. 912-918.

138. Cannon, R.O. Does coronary endothelial dysfunction cause myocardial ischemia in the absence of obstructive coronary artery disease? / R.O. Cannon// Cirulation. 1997. - V.96. - P.3251-3254.

139. Chen, J. Plasma proteome of severe acute respiratory syndrome analyzed by two-dimensional gel electrophoresis and mass spectrometry / J. Chen, Y.-W Chang., Ch.-W. Yao// Proc. Natl. Acad. Sci. 2004. - T. 101. - P. 1703917044.

140. Cherniaev, A. Pulmonary vascular remodeling in COPD versus bronchial asthma / A. Cherniaev M., Samsonova, S. Avdeev, D. Bazarov// Eur. Respir. J. 2003. - N22 (suppl. 45): 82s.

141. Corretti, M. C. Guidelines for the ultrasound assessment of endothelial dependent flow — mediated vasodilatation of the brachial artery / M. C. Corretti, T. J. Anderson, E. J. Benjamin // J. Am. Coll. Cardiol. - 2002. - N. 39 -P.257-265.

142. Dorfmuller, P. Pathology and aspects of pathogenesis in pulmonary arterial hypertension / P. Dorfmuller, M. Humbert, F. Capron, К. M. Muller // Sarcoidosis. Vase. Diffuse Lung. 2003. - Vol. 20. -№1. - P.9-19.

143. Diamandis, E. P. Proteomic patterns in biological fluids: do they represent the future of cancer diagnostics / E. P. Diamandis // Clin. Chem. 2003 — T.49-P. 1272-1275.

144. Jeager, H. Glucose metabolism in lung slices of late fetal, newborn and adult rats / H. Jeager, P.S. Hicks // Proc. Soc. Exptl. Biol. Med. 1972. - vol. 141. -P.l-3.

145. Fessler, H. E. Heart-lung interactions: applications in the critically ill / H. E. Fessler //Eur. Respir. J. 1997. -N10. -P.226-237.

146. Gelfand, E.W. T-lymphocytes: Setting the tone of the airways / E.W. Gelfand, Ch.G. lrvin. // Nature Med. 1997. - Vol.3(4). - P.382-3.

147. Hart, C.M. Nitric oxide in adult lung disease / C.M. Hart // Chest. -1999. Vol.115, N5. - P.1407-1417.

148. Hashimoto, M. Quantitative analysis of bronchial wall vascularity in the medium and small airways of patients with asthma and COPD / M. Hashimoto, H. Tanaka, S. Abe //Chest. 2005. - N. 127 - P.965-972.

149. Hitchcoc, k-O Banaccorco / k-O Hitchcoc, K. Hare, E. Meymaris // Histochem. Cytochem. 1976. - Vol. 24. - P.487.

150. Hida, W. Pulmonary hypertension in patients with chronic obstructive pulmonary disease: recent advances in pathophysiology and management / W. Hida, Y. Turn, Y. Kikuchiet al. // Respiration. 2002. -N. 7 -P.3-13.

151. Hutchinson, D. The epidemiology of alpha-1- antitrypsin deficiency / D. Hutchinson // Lung. 1990. - Vol.168 (suppl.). - P.535-542.

152. Katunuma, N. Biological function of proteases and inhibitors / N. Katunuma, K. Suzuki, J. Tranis, H. Fritz, eds. // Basel: Japan Scientific Societies Press; Karger; 1994.

153. Killy, D.G. Nitric oxide and Cardiac function / D.G. Killy, S.L. Baf-figand, T.W. Smith // Circulat. Res. 1996. - V.79. - P.363-380.

154. Kwok, J.S Protease inhibitor phenotypes and serum alpha-1-antitrypsin levels in patients with COPD: a study from Hong Kong / J.S. Kwok, J.W Lawton., W.W. Yew et al. // Respirology. 2004. - №9(2). - P.265-270.

155. Laurell, C.B. The electrophoretic alpha 1-globulinpattern of serum in alpha 1-antitrypsin deficiency / C.B. Laurell, S. Eriksson // Scand. J. Clin. Lab. Invest. 1963. - 15: 132-140.

156. Levy, S.E. The role of glucose in lung metabolism / S.E. Levy // Clin. Res. 1971. - vol. 19. - P 145-199.

157. Liska, D.G. The Detoxification enzyme systems / D.G. Liska // Altern. Med. Rev. 1998. -N3(3). - P. 187-198.

158. Mac Nee, W. Pathophysiology of cor pulmonale in chronic obstructive pulmonary disease / W. Mac Nee // Am. J. Respir. Crst. Care Med. 1994. -Vol.150: 833-852.-P.1158-1168.

159. Mason, R. Textbook of respiratory medicine / R. Mason, C. Broaddus, J. Murray, J. Nadel. 2005. - v.l, v.2. Elsevier Saunders.

160. Mercer, R. Structural changes in elastic fibers after pancreatic elastase administration in hamsters / R.Mercer, J. D. Crapo // J. Appl. Physiol. 1992. -N72. — P.1473-1479.

161. Muler, H.A. Heparanase and platelet factor 4 induce smooth muscle (Tokyo) / H.A. Muler, J. L. West // 2002, Jum; 131(6), -P. 913- 922.

162. Oliver, J.J. Function in humans stimulated tissue plasminogen activator release as marker of endothelial function in humans / J.J. Oliver, D.J.Webb, D.E. Newby // Arterioscler.Thromb. Vase. Biol.- 2005 Vol. 25 - P. 2470-2479.

163. Rich, S. A Primary pulmonary hypertension. A national prospective study / S. Rich, D.R. Dantzker, S.M. Ayres et al. // Ann. Intern Med. 1987. -N. 107-P. 216-223.

164. Sampson, A.P. Clinical Exp A. Sandford, T. Veir & P. Pare. The genetics or asthma / A.P. Sampson. // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 1996. -Vol.153. -P.1749-65.

165. Scharf, S. M. Hemodynamic characterization of patients with severe emphysema / S. M. Scharf, M. Iqbal, C. Keller et al. // Am. J. Respir. Crit. Care Med.-2002-Vol. 166-P.314-322.

166. Schroth, M.K. Adhesion molecules in asthma and allergy / M.K. Schroth // Immunol and Allergy Clin North America. 1996. - Vol. 16(3). -P.643-57

167. Sies, H. Oxidative Stress / H. Sies. London, 1985. - 380p.

168. Sram, R.G. Effect of glutathione S-transferase Ml polymorphism on biomarkers of exposure / R.G. Sram // Environ. Hlth. Perspect. -1998. N.106. -P. 231-239.

169. Strdling, J.R. Handbook if sleep-related breathing disorders / J.R. Strdling // Oxford: University Press. 1993. - P.65-81.

170. Simonneau, G. Clinical classification of pulmonary hypertension / G. Simonneau, N. Galie, L. J. Rubin et al. // J. Am. Coll. Cardiol. 2004. -N.43-P. 56-126.

171. Terran, L.M. The chunkiness: their potential role in allertgic inflammation / L.M. Terran, D.E. Davies. // Clinical Exp Allergy. 1996. - Vol.26. — P.1005-19

172. Wali, S. O. Susceptibility of LDL to oxidative stress in obstructive sleep apnea / S. O. Wali, A.S. Bahammam, H. Massaeli et al. // Sleep. 1998. -Vol.21 (3). - P.290-296.

173. Ware, L. Alveolar fluid clearance is impaired in the majority of patients with acute lung injury and acute respiratory distress syndrome / L. Ware, M. Matthay // Am. J Respir Crit Care Med. 2001. - v. 163. - P.1376-1383.

174. Weitzenblum, E. Chronic cor pulmonale / E. Weitzenblum // Heart. — 2003.-N. 89-P. 225-230.

175. Zinchuk, V. V. Prooxidant-antioxidant balance in rats under hypothermia combined with modified hemoglobin-oxygen affinity / V. V. Zinchuk, L. V. Dorokhina, A. N. Maltsev // J. Thermal Biology. 2002. - Vol. 27. - P. 345-352.