Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Морфологическая характеристика слизистой оболочки тонкой кишки при воздействии сероводородсодержащим газом (экспериментальное исследование)

ВАК РФ 03.03.04, Клеточная биология, цитология, гистология

Автореферат диссертации по теме "Морфологическая характеристика слизистой оболочки тонкой кишки при воздействии сероводородсодержащим газом (экспериментальное исследование)"

005047052

На правахлутписи

БАХТИН АРТУР АЛЕКСАНДРОВИЧ

МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ТОНКОЙ КИШКИ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ СЕРОВОДОРОДСОДЕРЖАЩИМ ГАЗОМ (экспериментальное исследование)

03.03.04 - клеточная биология, цитология, гистология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

2 О СЕН 2012

Саранск-2012

005047052

Работа выполнена на кафедре гистологии и эмбриологии Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Астраханская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор

Ведущая организация: Саратовский государственный медицинский университет им. В. И. Разумовского

Защита состоится «5» октября 2012 г. в «12.00» часов на заседании Диссертационного Совета Д 212.117.01 в ФГБОУ ВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева» по адресу: 430005, Республика Мордовия, г. Саранск, ул. Большевистская, 68.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБОУ ВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева» по адресу: 430005, Республика Мордовия, г. Саранск, ул. Большевистская, 68.

Объявление о защите и автореферат диссертации размещены на официальном сайте Мордовского государственного университета им. Н. П. Огарёва www.mrsu.ru и интернет-сайте ВАК http://vak2.ed.gov.ru

Автореферат разослан «_»_2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук,

Наумова Любовь Ивановна

Официальные оппоненты:

Профессор, д.м.н., зав. кафедрой гистологии и эмбриологии, Ямщиков Николай Васильевич (Самарский государственный медицинский университет, г. Самара) Профессор, д.м.н., зав. кафедрой гистологии и эмбриологии Степанова Ирина Петровна (Смоленская государственная медицинская академия, г. Смоленск)

профессор

В.П. Балашов

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы. Эпителиальные клетки кишечника находятся в постоянном контакте с множеством чужеродных антигенов, поступающих с пищей к так называемым биологическим барьерам, основной задачей которых является поддержание гомеостаза организма. Необходимая для этого целостность эпителия обеспечивается интенсивными процессами клеточной регенерации, изучение механизмов регуляции которых относится к разряду наиболее интенсивно разрабатываемых научных направлений (Темчура В.В., 2001).

Смена эпителия в тонкой кишке происходит быстро, о чем свидетельствуют показатели митотического индекса (МИ) и индекса апоптоза (ИА) эпителия тонкой кишки. Отношение МИ к ИА особенно высоко в области крипт и нижней трети ворсинок и низкое в области боковых поверхностей ворсинок. Это дало основание сделать вывод, что репродуктивной зоной эпителия тонкой кишки является не только крипта, но и нижняя треть ворсинок (Романова Т.А., 2010).

Так как кишечник постоянно подвергается воздействию различных биотических и абиотических неблагоприятных факторов, которые в конечном итоге приводят к формированию гипоксии, в нем должны происходить, помимо деструктивных процессов, и изменения адаптивного характера (Звягинцева Т.Д., Гриднева C.B., 2005; Михайлова З.М. с соавт., 2010). В том числе и сдвиг клеточного соотношения, который является необходимым для поддержания адекватного функционирования.

Ухудшение экологической ситуации в результате воздействия химических токсикантов является одним из факторов, определяющих изменение физиологических функций и процессов физиологической регенерации в человеческом организме и обуславливающих развитие широкого спектра заболеваний, в том числе тонкой кишки ( Заброд-ский П.Ф. с соавт., 1994; Боева О.И., 1998; Fleming L.E. et al., 1992). Уже в начальном периоде токсического воздействия изменяется состав и функции клеток слизистой оболочки тонкой кишки (Давлатова И.С., 2010), что, вероятнее всего, связано с изменением регуляторных связей в клеточном цикле. Нарушение контроля над соотношением пролиферации и клеточной гибели ведет к сдвигам гомеостаза, изменению гистоархитектоники и развитию целого ряда различных патологических состояний (Заводиленко К.В., 2006; Манских В.Н., 2007; Бажанова Е.Д., 2011).

Можно сказать, что вопросы пролиферативной активности, клеточной гибели и реактивности в системе «крипта-ворсинка» при воздействии токсических экзогенных факторов остаются открытыми, поскольку отсутствуют данные о влиянии соединительнотканного каркаса на пролиферативные возможности кишечного эпителия на фоне действия патогенных факторов. Решение этих вопросов необходимо для понимания развития патологических процессов в тонкой кишке в условиях изменённой внешней среды, что создаст возможность правильного подхода к диагностике, профилактике и лечению подобного рода заболеваний.

Цель исследования: проанализировать морфологические особенности слизистой оболочки тонкой кишки при воздействии серово-дородсодержащим газом.

Задачи исследования:

1. Выявить особенности пролиферации и апоптоза эпителия слизистой оболочки тонкой кишки крыс в условиях хронического воздействия сероводородсодержащим газом.

2. Охарактеризовать соединительнотканную строму и сосуды стенки тонкой кишки крыс в условиях хронического воздействия сероводородсодержащим газом.

3. Определить с помощью иммуногистохимического метода маркеры пролиферации и апоптоза (p27kipl, Ki-67, Bcl-xl, In-tegrin beta 5, Cadgerin pan) в эпителии слизистой оболочки тонкой кишки крыс в условиях хронического воздействия сероводородсодержащим газом.

4. На основании комплекса исследований дать характеристику процессам регенерации в системе крипта-ворсина в условиях хронического воздействия сероводородсодержащим газом.

Научная новизна исследования.

Выявлены особенности процессов пролиферации и апоптоза в эпителии слизистой оболочки тонкой кишки в динамике на фоне хронического воздействия природного газа Астраханского месторождения. Дано морфологическое обоснование преобразованиям соединительнотканной стромы тонкой кишки крыс в зависимости от продолжительности действия сероводородсодержащего газа сроком от 30 до 120 дней. Определен вклад соединительнотканных компонентов стенки тонкой кишки в процессы регенерации эпителиального пласта слизистой оболочки тонкой кишки крыс при воздействии полютантов. Выявлено распределение маркеров пролиферации и апоптоза (p27kipl, Ki-67, Bcl-xl, Integrin beta 5, Cadgerin pan) с помощью иммуногисто-

химического метода в зависимости от срока воздействия сероводород-содержащего газа Астраханского месторождения. Установлено, что в условиях хронического воздействия природного газа Астраханского месторождения интенсивность апоптоза эпителиоцитов тонкой кишки крыс нарастает, а пролиферации снижается, происходит нарушение межклеточных взаимодействий. Кроме того, показана качественная и количественная трансформация соединительнотканных компонентов стенки тонкой кишки крыс при воздействии полютантов.

Научно - практическая значимость.

В работе приведена динамическая морфофункциональная характеристика процессов апоптоза и пролиферации эпителиоцитов тонкой кишки крысы на фоне длительного воздействия сероводород-содержащим газом в концентрации 3 мг/м3. Полученные данные позволяют выявить особенности регенеративных процессов в эпителии тонкой кишки в зависимости от срока хронического эксперимента и продемонстрировать негативное влияние длительно действующего природного газа малой концентрации на процессы пролиферации эпителиальных клеток тонкой кишки. С позиций оценки клеточного обновления, рассматривается экологически обусловленная патология пищеварительной системы, что позволяет подвести морфологическую базу для объяснения некоторых клинических и диагностических проявлений заболеваний органов пищеварительного тракта при воздействии сероводородсодержащим газом. Эта оценка клеточного обновления, с точки зрения баланса пролиферации и апоптоза, может рассматриваться как одна из основ терапевтической стратегии. Результаты исследования дают возможность разработать морфологический прогноз эволюции патологических изменений слизистой оболочки тонкой кишки и тактику курации больных с заболеваниями органов пищеварения после воздействия сероводородсодержащим газом.

Положения, вносимые на защиту:

1. В условиях хронического воздействия сероводородсодержащим газом Астраханского месторождения, сроком от 30 до 120 дней, интенсивность апоптоза клеток эпителия слизистой оболочки тонкой кишки крыс нарастает как в ворсинках, так и в криптах.

2. Длительное воздействие сероводородсодержащим газом, сроком от 30 до 120 дней, в малых концентрациях (Змг/м3) сопровождается количественными и качественными изменениями соединительнотканной стромы.

3. Длительное воздействие сероводородсодержащим газом, в течение 120 суток, в концентрации по сероводороду Змг/м3 вызывает стойкие изменения гистологических, гистохимических и иммуногистохимических показателей кишечной стенки крыс.

Апробация работы. Результаты работы доложены и обсуждены: на 87-89 итоговых научно-практических конференциях сотрудников академии, врачей города и области (г. Астрахань, 2010-2012 гг.); г. Ханты-Мансийск, 5-6 октября 2011 г.; II международной научной конференции, посвященной 80-летию академика РАЕН, заслуженного работника высшей школы РФ, д.б.н., профессора Д.Л. Теплого ( г. Астрахань, 2011 г.); X Конгрессе Международной ассоциации морфологов (г. Ярославль 29-30 сентября, 2011 г.); XI Конгрессе Международной ассоциации морфологов (г. Самара 29 мая-1 июня, 2012 г.); международной научной конференции «Структурные преобразования органов и тканей на этапах онтогенеза в норме и при воздействии антропогенных факторов» посвященной памяти профессора Р.И. Ас-фандиярова ( г. Астрахань, 27-29 сентября 2012 г.)

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 126 стр. машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов, глав собственных исследований, обсуждения, выводов, практических рекомендаций и списка использованной литературы. Указатель литературы включает 79 отечественных и 47 иностранных источников. Работа иллюстрирована 3 таблицами, 42 рисунками.

Содержание работы

Материалы и методы. Работа представляет собой экспериментальное комплексное исследование, выполненное на 70 беспородных крысах - самцах массой 180-220 г., прошедших карантин в течение 30 суток в специальном помещении вивария и в дальнейшем находящихся на стандартном лабораторном содержании. Протокол экспериментов в разделах выбора, содержания животных, моделирования патологических процессов составлен по принцам биоэтики, правилам лабораторной практики (вЬР), соответствующим этическим нормам, изложенным в Женевской конвенции (1971), «Международных рекомендациях по проведению медико-биологических исследований с использованием животных» (1985) и согласно приказу МЗ РФ № 267 от 19.06.2003 «Об утверждении правил лабораторной практики» (Минздрав ССР № 755 от 12.08. 1977), положениям «Хельсинской Декларации по вопросам медицинской этики» и «Международным рекомен-

дациям по проведению медико-биологических исследований с использованием животных» (1989). Проведение экспериментальных исследований было оценено этической комиссией (заключение №1 от 27 января 2012 г.).

Моделирование патологии при воздействии сероводородсодер-жащим газом проводилось путем помещения животных на 4 часа в специальные затравочные камеры производства Московского института профзаболеваний и гигиены труда им. Эрисмана объемом 200 литров. Животные были распределены на 5 групп. Экспериментальные группы в количестве 60 животных подвергались воздействию природного газа в концентрации Змг/м3 по сероводороду на протяжении 5 суток в неделю в течение 1, 2, 3 и 4 месяцев. Контролем служили 10 крыс того же возраста, находившиеся в стандартных условиях вивария. Выведение животных из опыта проводилось по всем требованиям соответствующих нормативных документов. В качестве непосредственного метода эвтаназии использовалась ингаляция смертельной дозы эфира для наркоза (этоксиэтан) (Западшок И.П., Западшок В.И.. Захария Е.А., 1974).

После фиксации извлеченных органов 10% нейтральным забу-ференным формалином были приготовлены парафиновые блоки. Обзорные гистологические препараты получали путем окраски срезов толщиной 5-7 мкм гематоксилином и эозином (70 шт.). Коллагеновые волокна выявляли окраской но Ван Гнзону (70 шт.), эластические - с помощью окраски резорцин-фуксином по Вейгерту (70 шт). Гликозо-аминогликаны и сиаломуции определяли ШИК-реакцией в сочетании с альциановым синим (70 шт.), общий белок окрашивали прочным зеленым (70 шт.). Иммуногистохимический метод исследования проводился с помощью антител к Cadgerin pan, Integrin beta 5, Ki-67, bcl-xl, p27kipl и системы детекции фирмы Spring Bioscience (США), всего было поставлено 700 иммуногистохимических проб. В соответствии с принципами системного количественного анализа (Автандилов Г.Г., 1996) исследовались глубина крипт, высота ворсинок, толщина мышечной и подслизистой оболочек. Всего было изготовлено 1050 препаратов, из них 150 приходилось на контроль и 900-на экспериментальные группы. Фотографирование микропрепаратов производилось на камеру Levenhuk С 510.

Для установления достоверности полученных данных при анализе результатов исследования все материалы были подвергнуты статистической обработке. Материалы обрабатывались на персональном компьютере с помощью программ «Microsoft Office Windows 2007»,

«Microsoft Office Excel 2007». При обработке полученного материала использовались следующие статистические подходы и показатели: определение средних величии, оценка достоверности различий по коэффициенту Стьюдента, где разница с контролем считалась достоверной при р<0,05 (Плохинский Н.А., 1961, Лакин Г.Ф., 1990).

Собственные результаты исследования Динамические изменения слизистой оболочки топкой кишки под влиянием сероводородсодержащего газа отмечались уже через один месяц эксперимента. Это, прежде всего, отек слизистого и подслизи-стого слоев, а также соединительнотканной прослойки межмышечного слоя. В собственной пластинке слизистой оболочки и в подслизи-стой основе определялась умеренная клеточная инфильтрация преимущественно клетками лимфоцитарно-макрофагального рядов, а также увеличением числа эозинофилов, что может говорить о начале воспалительной реакции. Явных процессов коллагенообразования в первый месяц эксперимента не наблюдалось, однако при окрашивании прочным зеленым отмечалось снижение количества общего белка в стенке тонкой кишки.

К концу второго месяца воздействия сероводородсодержа-щим газом в предельно допустимой концентрации отмечалось усиление инфильтрации, происходило нарастание протеолитической активности в отношении эластических волокон. Сиаломуцины, обнаруживаемые до этого только на поверхности энтероцитов и в секрете бокаловидных клеток, определялись уже и в собственной пластинке слизистой и подслизистой основе. Отмечалось явное начало коллагенообразования с рыхлым расположением волокон и большим количеством основного вещества. Причем, процесс разрастания соединительной ткани имел четкую направленность от сосудов подслизистого слоя в сторону системы «крипта - ворсинка». В результате формирования жесткого соединительнотканного каркаса нарушалось питание слизистой оболочки и снижались её регенераторные свойства. Ввиду того что основной процесс, происходящий в стенке тонкой кишки, был направлен на коллагенизацию, количество общего белка в структурах тонкой кишки продолжало снижаться.

Наиболее выраженные гистологические и гистохимические изменения стенки тонкой кишки отмечались в течение третьего месяца хронического воздействия природным газом. В результате повреждения эластического каркаса кишечной стенки наблюдалось истончение мышечного слоя, разобщение гладких миоцитов. Кроме того, отмечалось нарушение целостности ворсинок вследствие как отека,

так и дезорганизации эластическом ткани. Нарушенная барьерная функция эпителиальной выстилки способствовала повышенному проникновению содержимого кишечника в толщу слизистой оболочки. Поступающие из просвета антигены усиливали миграцию лимфоид-ных клеток из собственной пластинки и подслизистой оболочки в эпителиальный слой и просвет кишечника. В брыжейке тонкой кишки, а также в подслизистой основе отмечались изменения, связанные с кровеносными сосудами, — это, прежде всего, выбухание ядер эндо-телиоцитов и расположение их группами. При окрашивании кровеносных сосудов прочным зеленым резко снижалась интенсивность и однородность окраски их стенки, отмечалось периваскулярное отложение белка. При окраске ШИК-реакцией, альциановым синим к концу четвертого месяца эксперимента отмечалось дальнейшее отложение сиаломуцинов в собственной пластинке слизистой оболочки и подслизистой основе. В условиях нарастающей гипоксии и развивающегося хронического воспаления происходит усиленная пролиферация фпбробластов. В результате наблюдалась нарастающая фукспно-филия собственной пластинки слизистой оболочки и подслизистой основы тонкой кишки, а также соединительнотканной перегородки мышечной оболочки. Мышечная пластинка слизистой оболочки носила фрагмеитированный характер н прерывалась участками соединительной ткани (рис.1, рис.2). Встречались также участки, где мышечная пластинка слизистой оболочки полностью замещалась соединительной тканыо. Отложение коллагена в данных участках носило как диффузный, так и гомогенный характер. Вследствие столь неблагоприятного фонового окружения энтероцитов было обнаружено перераспределение дифферепцировки камбиальных элементов тонкой кишки с увеличением числа бокаловидных экзокриноцитов. Кроме того, помимо увеличения количества последних, наблюдалась и качественная трансформация их секрета. Если в контрольной группе секрет бокаловидных экзокриноцитов содержат, в основном, нейтральный муцин с незначительным включением сиаломуцина, то уже через 4 месяца эксперимента в них преобладали сиаломуцины.

В настоящее время известно, что межклеточные взаимодействия обеспечиваются четырьмя разными группами факторов: адгезивными молекулами, экстрацеллюлярным матриксом, растворимыми медиаторами и онкогенами. Особое внимание обращается на взаимодействие клеток и экстрацеллюлярного матрикса. В частности, установлено, что экстрацеллюлярный матрикс может модулировать пролиферацию, дифференцировку и даже миграцию клеток (Труфа-

кин В.А., Трунова Л.А., 1994). Связь с экстрацеллюлярным матриксом осуществляется с помощью интегриновых рецепторов (интегринов), взаимодействующих с его компонентами: коллагенами, гликонроте-идами, гепаринсульфатами, гликозаминогликанами. Являясь трансмембранными образованиями, интегриновые рецепторы одновременно взаимодействуют как с компонентами экстрацеллюлярного мат-рикса, гак и с белками цитоскелета клеток. Иммуиогистохимнческие показатели в контрольной группе соответствовали следующим значениям: Ki-67 (ворс- 40,1±0,6; крипта-64,0±1,3), bcl-xl (ворс.-82,1±2,2; крипта—49,1± 1,1), Integrin beta 5 (ворс.-69,6±2,4; крипта-70,5±0,7), Cadgerin pan (ворс.-28,0±0,5; крипта-41,3±1,4) p27kip 1 (ворс.-52,4±2,4; крипта-56,7±1,8).

Уже через месяц эксперимента наблюдалось снижение экспрессии Integrina beta 5 (рис. 9). Уменьшение интегринов можно связать с процессами усиления слущивания энтероцитов на фоне усиленного апоптоза. Вследствие этого уже через месяц хронической ингаляции сероводородсодержащего газа отмечались изменения, связанные с пролиферативной активностью эпителия. Это, прежде всего, повышение экспрессии p27kip1 (рис. 8), что говорит о более детальном контроле митотической активности эпителия, чтобы не пропустить клетку с поврежденным хромосомным аппаратом. Кроме того, повышенная выработка белка p27kipl блокирует комплекс циклинза-висимая киназа-2/циклин-Е, циклинзависимая киназа-2/циклин-А, что приводит к остановке митотического деления в фазе Gl и S (Мушкам-баров H.H., Кузнецов С.Л., 2003). Остановка митотического цикла по своей сути является не чем иным, как прохождением «сверочных точек». Первая «сверочная точка» приходится на фазу G|. С этой точкой связана гиперэкспрессия белка p27kipl, нарастание которого, по мере увеличения срока эксперимента, было зафиксировано в нашей работе. Если защитным механизмам удастся справиться с повреждениями, то клетка перейдет в следующий период жизненного цикла, если процесс восстановления затянется или повреждения окажутся слишком значительными, увеличится экспрессия белков, отвечающих за апопгоз. Соответственно, экспрессия белков, отвечающих за митоз, начнет снижаться. В том числе, уменьшится содержание маркера пролиферации Ki-67 (рис.8), что было обнаружено в результатах работы.

Вследствие более «детальной проверки» энтероцитов, находящихся в фазе митоза, и действия абиотических факторов все больше клеток «выбраковывается» из дифферона с помощью одного из механизмов клеточной гибели - апоптоза. Последний - это физиологиче-

ский процесс, его нарушение ведет к нелегитимному выживанию клеток и к заболеваниям опухолевого и неопухолевого характера. Программа апоптоза запускается в двух случаях: неудовлетворительное состояние самой клетки или негативная сигнализация снаружи (Белкина A.B., 2005; Суханова Г.А., Акбашева O.E., 2009). К факторам, вызывающим апоптоз изнутри, относятся чрезмерные плохо репари-руемые или полностью нерепарпруемые повреждения ДНК, а также серьезные повреждения мембран, особенно митохондриальных. Наиболее опасными в данном случае являются оксид азота и супероксидный радикал. В работах Шишкиной Т.А. (2008) и Давлатовой И.С. (2010) показано, что хроническое воздействие сероводородсодержащим газом Астраханского месторождения в малой концентрации повышает образование оксида азота и увеличивает активность ПОЛ, в том числе, в структурах тонкой кишки. В делящихся клетках добавляется еще один фактор риска - сам процесс деления. Таким образом, в популяциях часто обновляющихся клеточных линий, к которым относится и эпителии тонкой кишки, деления повышают вероятность апоптоза.

Уже к концу первого месяца эксперимента отмечалось снижение экспрессии противоапоптотического маркера Bcl-xl (воре-81,0±0,5; крипта-43,6±0,4), что свидетельствует об увеличении клеточной гибели. Преобладание апоптозов над митозами приводит к атрофии. Кроме того, данный срок эксперимента характеризуется повышением экспрессии p27kipl(Bopc.-53,2±0,4; крипта-58,4±2,1) и снижением маркера пролиферации Ki-67 (ворс.-38,6±1,9; крипта-60,8±1,8) и Integrin beta 5 (ворс.-67,1±1,6; крипта-64,2±0,2) (рис. 8, рис.9).

Во второй месяц эксперимента в эпителии отмечались имму-ногистохимические показатели с незначительным повышением их значений относительно предыдущего срока, что расценивалось как стабилизация адаптивных процессов. Кроме того, сохранялась тенденция к повышению экспрессии p27kipl (ворс - 55,8±2,2; крипта-59,0±0,3) и снижению экспрессии таких маркеров, как Ki-67 (ворс-37,3±0,4; крипта-58,0±0,8), bcl-xl (ворс.-78,0±1,9; крипта-40,3±2,5), Cadgerin pan (ворс - 24,6±0,6; крипта-39,5±0,7), Integrin beta 5 (ворс-64,3±0,8; крипта-60,9±0,3). Данное соотношение маркеров клеточной экспрессии говорит об усугублении атрофических процессов, происходящих в эпителии. Уменьшение экспрессии Integrin beta 5 отражается на состоянии базальной мембраны.

К концу третьего срока эксперимента в иммуногистохимических исследованиях продолжало нарастать количество p27kipl(ßopc-63,]±0,7; крипта- 68,3±2,1) и снижаться количество всех остальных маркеров.

Четвертый месяц эксперимента характеризовался максимальным значением p27kip (ворс.-69,1±0,2; крипта-79,4±0,7) и минимальными Integrin beta 5 (ворс.-61,9±0,9; крипгга-55,4±0,9), Cadherin pan (ворс.-20,2±3,5; крипта-34,7±1,8), bei—xl (ворс.-73,3±2,1; крипта-37,0±2,7) и Ki-67 (ворс.-32,3±0,6; крипта-47,7±1,5) (рис. 3, рис.4).

Как уже сказано выше, действие природного газа приводит к образованию и накоплению активных форм кислорода с формированием оксидативного стресса и антиоксидантной недостаточности. В результате повышается проницаемость мембран, особенно чувствительны к радикалам мембраны митохондрий (Наумова Л.И., 2002; Суханова Г.А., Акбашева O.E., 2009). Через поврежденные мембраны митохондрий диффундируют различные белки, активирующие кас-пазный каскад апоптоза. В результате увеличивается количество проапоптотических и снижается концентрация противоапоптотиче-ских факторов, в том числе Bcl-xl. Снижение его экспрессии было обнаружено в эпителии тонкой кишки пропорционально увеличению срока эксперимента. Белки группы Bel регулируют перенос Ca21 через мембраны эндоплазматического ретикулума и митохондрий и отменяют сигнал для входа экстрацеллюлярного Са2+, предотвращая, таким образом, повышение цитозольного Са2+ в клетке и запуск апоптоза. Что касается апоптоза «по команде», то в этом случае запрограммированная клеточная гибель развивается, если не выполняется хотя бы одно из условий: отсутствие ростового фактора, потеря связи с опорным субстратом или контакт клеток между собой. Также апоптоз запускается при действии антимитогенных факторов, например, глюко-кортикоидов, ФНО и многих других (Чернышева A.J1. с соавт., 2003; Slieng X. et al., 1998). В работе показано, что хроническое действие природного газа приводит к изменению качественного состава экстрацеллюлярного матрикса. Это сопровождается накоплением сиалому-цинов и разрушением базальной мембраны. Соответственно, связь эпителиальных клеток с базальной мембраной уменьшается, что проявляется уменьшением количества интегриновых связей и снижением концентрации Integrin beta 5 (рис.5, рис 6), что является дополнительным фактором запуска апоптоза. Что касается изучаемого нами Cadg-erin pan, уменьшение его экспрессии (рис. 9) мы связываем с уходом Са2+, необходимого для поддержания межклеточных связей, в клетки

из-за снижения в последних Bcl-xl на фоне действия природным газом.

Таким образом, четвертый месяц эксперимента характеризовался грубыми деструктивными изменениями: отмечалась резкая гиперплазия бокаловидных клеток, выявлены изменения, происходящие в соединительнотканном каркасе, обнаружено преобладание апоптоза над пролиферативными процессами, смена процентного соотношения пула различных энтероцитов, что приводят к изменениям морфометри-ческих показателей (рис.7). Выявленные изменения изучаемых имму-ногистохимических маркеров полностью согласовались с полученной гистологической картиной. При хроническом воздействии сероводо-родсодержащим газом в эпителии тонкой кишки происходит преобладание апоптоза над пролиферацией. Причем, запрограммированная клеточная гибель запускалась как в ответ на действие внешних факторов «по команде», так и «изнутри».

Выводы:

1. По мере увеличения срока (от 30 до 120 дней) хронического воздействия сероводородсодержащим газом отмечалось преобладание процесса апоптоза над процессами пролиферации, что морфологически проявлялось уменьшением глубины крипт, высоты ворсинок, а также толщины мышечной оболочки и подслизистой основы.

2. При хроническом воздействии сероводородсодержащим газом происходили изменения соединительнотканной стромы, выражавшиеся в интенсивном коллагенообразовапии, дезорганизации эластической ткани, замещении нейтральных гликозаминопшканов на сиало-муцины.

3. По мере увеличения срока хронического воздействия сероводородсодержащим газом отмечалось нарушение клеточных контактов эпи-телиоцитов тонкой кишки, что характеризовалось снижением экспрессии таких маркеров, как Cadgerin pan и Integrin beta 5.

4. При хронической ингаляции сероводородсодержащего газа отмечается сдвиг дифференцировки камбиальных элементов тонкой кишки с увеличением количества бокаловидных экзокриноцитов.

5. В условиях хронического воздействия сероводородсодержащим газом происходит уменьшение таких иммуногистохимических показателей, как Ki-67, Bcl-xl, Integrin beta 5, Cadgerin pan и увеличение p27kipl, что в комплексе с гистохимическими и морфометрическими показателями рассматривается как деструктивный процесс.

Практические рекомендации

1. Полученные данные позволяют выявить особенности регенеративных процессов в эпителии тонкой кишки в зависимости от срока хронического эксперимента и продемонстрировать негативное влияние длительно действующего природного газа малой концентрации на пролиферативную способность слизистой тонкой кишки.

2. Практические рекомендации работы заключаются в рассмотрении экологически обусловленной патологии желудочно-кишечного тракта с позиции оценки клеточного обновления, что позволяет подвести морфологическую базу для объяснения некоторых клинических и диагностических проявлений заболеваний органов пищеварения при воздействии эндогенных и экзогенных токсических факторов. Оценка клеточного обновления с точки зрения баланса пролиферации и апопгоза может рассматриваться как одна из основ терапевтической стратегии.

3. Результаты исследования дают возможность разработать морфологический прогноз эволюции патологических изменений слизистой оболочки тонкой кишки и тактику курации больных с заболеваниями органов пищеварительного тракта после воздействия эндогенных и экзогенных токсических факторов.

Рис. 1 Мышечная и под-слизистая оболочки тонкой кишки. Контрольная группа. Окраска по Ван Гизону. У в: об.40, ок.10

Рис. 2 Повышенное колла-генообразование и замещение мышечной пластинки слизистой оболочки соединительной тканью. 4 экспериментальная группа. Окраска по Ван Гизону. Ув: об.40. ок.10.

Рис. 3 Экспрессия белка Ю-67 в тонкой кишке. Контрольная группа. Иммуногистохимическая реакция на выявление К>67. Ув: об.90, ок.10.

Рис. 4 Экспрессия белка Ю-67. 4 экспериментальная группа. Иммуногистохимическая реакция на Ю-67. Ув: об. 90, ок.10

Рис. 5 Распределение Integ-rin beta 5 в ворсинке тонкой кишки. Контрольная группа. Иммуногистохимиче-ская реакция на выявление Integrin beta 5. У в: об.40. ок. 10.

Рис. 6 Распределение Integrin beta 5 в ворсинке тонкой кишки. 4 экспериментальная группа. Иммуногисто-химическая реакция на выявление Integrin beta 5. Ув: об.40, ок.10.

Контроль 1 месяц 2 месяц 3 месяц 4 месяц

1 Высота ворсинки і Глубина крипт

Толщина

мышечной

оболочки

• Толщина подслизистой оболочки

Рис. 7 Изменение размеров структур стенки тонкой кишки на разных сроках хронического воздействия сероводородсодержащим газом в концентрации 3 мг/м .

■ Кі-67.Восинка ■Bcl-xl.Ворсинка p27kipl.Ворсинка К.і-67. Крипта bcl-xl.Крипта p27kipl.Крипта

Контроль 1 месяц 2 месяц 3 месяц 4 месяц

Рис. 8 Иммуногистохимические показатели Кь67, Ьс1-х1, р27к1р 1 в стенке тонкой кишки па разных сроках хронического воздействия сероводородсо-держащим газом в концентрации 3 мг/м.

80

70

60

50

40

30

20

10

0

■ Integrin beta 5. Ворсинка

•Cadherin pan. Ворсинка

Контроль I месяц 2 месяц 3 месяц 4 месяц

Рис. 9 Иммуногистохимические показатели Integrin beta 5, Cadherin pan в стенке тонкой кишки на разных сроках хронического воздействия серово-дородсодержащим газом в концентрации 3 мг/м.

Список опубликованных работ по теме диссертации

1. Бахтин A.A. Проницаемость сосудов легких при воздействии сероводородсодержащим газом / Бахтин A.A. // Материалы 89-ой итоговой студенческой научной конференции, посвященной 450-летию г. Астрахани. - 2008. - С.15.

2. Бахтин A.A. Изменения иммуногистохимических показателей Cadgerin pan в системе крипта-ворсинка тонкой кишки при воздействии сероводородсодержащего газа Астраханского месторождения / Наумова JI. И., Бахтин A.A. // «Актуальные вопросы современной медицины»: Сборник трудов Астраханской государственной медицинской академии. - Астрахань: АГМА, 2011. - С. 50-51

3. Бахтин A.A. Иммуногистохимические показатели p27kiple стенке тонкой кишки при воздействии сероводородсодержащего газа Астраханского месторождения / Бахтина A.A. // «Актуальные вопросы современной медицины»: Сборник трудов Астраханской государственной медицинской академии. - Астрахань: АГМА, 2011. - С. 5152.

4. Бахтин A.A. Иммуногистохимическая характеристика p27kipl в тонкой кишке при воздействии неблагоприятных экологических факторов / Бахтин A.A. // «Свободные радикалы, антиоксиданты и старение» Материалы II Международной научной конференции. -

г. Астрахань: Астраханский университет - 2011- С. 181-183.

5. * Бахтин A.A. Особенности гистохимических показателей в тонкой кишке при воздействии неблагоприятных экологических факторов / Бахтин A.A.// Современные проблемы науки и образования. -2012. -№1. -www.science-education.ru/101-5345

6. * Бахтин A.A. Распределение Bcl-xl в стенке тонкой кишки при воздействии антропогенных факторов / Бахтин A.A. // Морфология.-2012.-№3.-С. 22.

7. * Бахтин A.A. Характеристика Integrin beta-5 в системе крипта-ворсинка тонкой кишки при воздействии природного газа / Бахтин A.A., Наумова Л.И. // Морфология. - 2012. -№3. - С. 22.

8.* Бахтин A.A. Особенности иммуногистохимических показателей bcl-xl в тонкой кишке при воздействии неблагоприятных экологических факторов / Бахтин A.A. // Астраханский медицинский журнал. 2012.-№2-С. 27-28.

*издания, рекомендованные ВАК для опубликования основных

результатов диссертации.

БАХТИН АРТУР АЛЕКСАНДРОВИЧ

МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ТОНКОЙ КИШКИ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ СЕРОВОДОРОДСОДЕРЖАЩИМ ГАЗОМ (экспериментальное исследование)

03.03.04 - клеточная биология, цитология, гистология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Подписано к печати 07.07.2012. Объем 5 печ.л. Тираж 100 экз. Заказ № 738 Отпечатано в типографии «Новая Линия» г. Астрахань, ул. Ак. Королева, 26, тел 8(8512) 51-00-12.

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Бахтин, Артур Александрович

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Структурно-функциональная организация неизмененной слизистой оболочки тонкой кишки.

1.2 Механизмы поддержания динамического равновесия в клеточной популяции эпителия тонкой кишки.

1.3 Гибель клетки как способ поддержания равновесия в клеточной популяции.

1.4 Особенности организации и функционирования клеточного пула слизистой тонкой кишки в условиях воздействия неблагоприятных факторов внешней среды.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1 Исследование морфологических изменений в системе крипта ворсинка в норме и при воздействии неблагоприятных факторов внешней среды.

3.2. Исследование гистохимических изменений в системе крипта ворсинка тонкой кишки при воздействии неблагоприятных факторов внешней среды.

3.3. Исследование иммуногистохимических изменений в системе крипта ворсинка тонкой кишки при воздействии неблагоприятных факторов внешней среды.

3.3.1. Иммуногистохимическое исследование p27kipl.

3.4.2. Иммуногистохимическое исследование Cadgerin pan.

3.4.3. Иммуногистохимическое исследование bcl-xl.

3.4.4. Иммуногистохимическое исследование Integrin beta 5.

3.4.5. Иммуногистохимическое исследование Ki-67.

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Морфологическая характеристика слизистой оболочки тонкой кишки при воздействии сероводородсодержащим газом (экспериментальное исследование)"

Эпителиальные клетки кишечника находятся в постоянном контакте с множеством чужеродных антигенов, поступающих с пищей к так называемым биологическим барьерам, основной задачей которых является поддержание гомеостаза организма. Необходимая для этого целостность эпителия обеспечивается интенсивными процессами клеточной регенерации, изучение механизмов регуляции которых относится к разряду наиболее активно разрабатываемых научных направлений (Темчура В.В., 2001).

Смена эпителия в тонкой кишке происходит быстро, о чем свидетельствуют показатели митотического индекса (МИ) и индекса апоптоза (ИА) эпителия тонкой кишки. Отношение МИ к ИА особенно высоко в области крипт и основания ворсинок и низкое - в области боковых поверхностей ворсинок. Это дало основание сделать вывод, что репродуктивной зоной эпителия тонкой кишки является не только крипта, но и основание ворсинок (Романова Т.А., 2010).

Так как кишечник подвергается постоянно различным биотическим и абиотическим неблагоприятным факторам, которые в конечном итоге приводят к гипоксии, в нем должны происходить помимо деструктивных изменений и изменения адаптивного характера (Звягинцева Т.Д., Гриднева C.B., 2005; Михайлова З.М. с соавт., 2010), в том числе и изменения клеточного соотношения, что является необходимым для поддержания адекватного функционирования.

Ухудшение экологической ситуации в результате воздействия химических токсикантов является одним из факторов, определяющих изменение физиологических функций и процессов физиологической регенерации в человеческом организме и обуславливающих развитие широкого спектра заболеваний, в том числе тонкой кишки (Забродский П.Ф. с соавт., 1994; Боева О.И., 1998; Fleming L.E. et al., 1992). Уже в начальный период токсического воздействия изменяются состав и функции клеток слизистой оболочки тонкой кишки (Давлатова И.С., 2010), что вероятнее всего связано с изменением регуляторных связей в клеточном цикле. Нарушение контроля над соотношением пролиферации и клеточной гибели ведет к сдвигам гомеостаза, изменению гистоархитектоники и развитию целого ряда различных патологических состояний (Заводиленко К.В., 2006; Манских В.Н., 2007; Бажанова Е.Д., 2011).

Можно сказать, что вопросы пролиферативной активности, клеточной гибели и реактивности в системе "крипта-ворсинка" при воздействии токсических экзогенных факторов остаются открытыми. Кроме того, отсутствуют данные о влиянии соединительнотканного каркаса и микроциркуляторного русла кишечника на пролиферативные возможности кишечного эпителия на фоне действия патогенных факторов. Их решение необходимо для понимания развития патологических процессов в тонкой кишке в условиях изменённой внешней среды, что создаст возможность правильного подхода к диагностике, профилактике и лечению подобного рода заболеваний.

Цель исследования - проанализировать морфологические особенности слизистой оболочки тонкой кишки при воздействии сероводородсодержащего газа.

Задачи исследования:

1. Выявить особенности пролиферации и апоптоза эпителия слизистой оболочки тонкой кишки крыс в условиях хронического воздействия сероводородсодержащего газа.

2. Охарактеризовать соединительнотканную строму и сосуды стенки тонкой кишки крыс в условиях хронического воздействия сероводородсодержащего газа.

3.* Определить с помощью иммуногистохимического метода маркеры пролиферации и апоптоза (p27kipl, Ki-67, Bcl-xl, Integrin beta 5, Cadgerin pan) в эпителии слизистой оболочки тонкой кишки крыс в условиях хронического воздействия сероводородсодержащего газа.

4. На основании комплекса исследований дать характеристику процессам регенерации в системе крипта-ворсина в условиях хронического воздействия сероводородсодержащего газа.

Научная новизна исследования Выявлены особенности процессов пролиферации и апоптоза в эпителии слизистой оболочки тонкой кишки в динамике на фоне хронического воздействия природного газа Астраханского месторождения. Дано морфологическое обоснование преобразованиям соединительнотканной стромы тонкой кишки крыс в зависимости от продолжительности действия сероводородсодержащего газа сроком от 30 до 120 дней. Определен вклад соединительнотканных компонентов стенки тонкой кишки в процессы регенерации эпителиального пласта слизистой оболочки тонкой кишки крыс при воздействии полютантов. Выявлено распределение маркеров пролиферации и апоптоза (p27kipl, Ki-67, Bcl-xl, Integrin beta 5, Cadgerin pan) с помощью иммуногистохимического метода в зависимости от срока воздействия сероводородсодержащнго газа Астраханского месторождения. Установлено, что в условиях хронического воздействия природного газа Астраханского месторождения интенсивность апоптоза эпителиоцитов тонкой кишки крыс нарастает, а пролиферации снижается, происходит нарушение межклеточных взаимодействий. Кроме того, показана качественная и количественная трансформация соединительнотканных компонентов стенки тонкой кишки крыс при воздействии полютантов.

Научно-практическая значимость

Работа носит фундаментальный характер и содержит динамическую морфофункциональную характеристику процессов апоптоза и пролиферации на фоне длительного воздействия сероводородсодержащего газа в концентрации 3 мг/м . Полученные данные позволяют выявить особенности регенеративных процессов в эпителии тонкой кишки в зависимости от срока хронического эксперимента и продемонстрировать негативное влияние длительно действующего природного газа малой концентрации на состояние пролиферации. Практическая значимость работы заключается в рассмотрении экологически обусловленной патологии пищеварительной системы с позиций оценки клеточного обновления, что позволяет подвести морфологическую базу для объяснения некоторых клинических и диагностических проявлений заболеваний органов пищеварения при воздействии эндогенных и экзогенных токсических факторов. Оценка клеточного обновления с точки зрения баланса пролиферации и апоптоза может рассматриваться как одна из базисных основ терапевтической стратегии. Результаты исследования дают возможность разработать морфологический прогноз эволюции патологических изменений слизистой оболочки тонкой кишки и тактику курации больных с заболеваниями органов пищеварения после воздействия эндогенных и экзогенных токсических факторов.

Положения, выносимые на защиту:

1. В условиях хронического воздействия природного газа Астраханского месторождения интенсивность апоптоза в эпителии слизистой оболочки тонкой кишки нарастает как в ворсинках, так и в криптах.

2. Длительное воздействие природного газа в малых концентрациях сопровождается негативными изменениями морфофункционального состояния микроциркуляторного русла тонкой кишки, а также количественного и качественного изменения соединительнотканной стромы.

3. Длительное воздействие природного газа в течение 120 сут. в концентрации по сероводороду Змг/м вызывает стойкие изменения в структурных компонентах кишечной стенки и микроциркуляторном русле.

Апробация работы.

Результаты работы доложены и обсуждены: на 87-89 итоговых научно-практических конференциях сотрудников академии, врачей города и области (г. Астрахань, 2010-2012 гг.); г. Ханты-Мансийск, 5-6 октября 2011 г.; II международной научной конференции, посвященной 80-летию академика РАЕН, заслуженного работника высшей школы РФ, д.б.н., профессора Д.Л. Теплого ( г. Астрахань, 2011 г.); X Конгрессе Международной ассоциации морфологов (г. Ярославль 29-30 сентября, 2011 г.); XI Конгрессе Международной ассоциации морфологов (г. Самара 29 мая-1 июня, 2012 г.); международной научной конференции «Структурные преобразования органов и тканей на этапах онтогенеза в норме и при воздействии антропогенных факторов» посвященной памяти профессора Р.И. Асфандиярова ( г. Астрахань, 27-29 сентября 2012 г.)

Заключение Диссертация по теме "Клеточная биология, цитология, гистология", Бахтин, Артур Александрович

3. Результаты исследования дают возможность разработать морфологический прогноз эволюции патологических изменений слизистой оболочки тонкой кишки и тактику курации больных с заболеваниями органов пищеварительного тракта после воздействия эндогенных и экзогенных токсических факторов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Полученные данные позволяют выявить особенности регенеративных процессов в эпителии тонкой кишки в зависимости от срока хронического эксперимента и продемонстрировать негативное влияние длительно действующего природного газа малой концентрации на пролиферативную способность слизистой тонкой кишки.

2. Практические рекомендации работы заключаются в рассмотрении экологически обусловленной патологии желудочно-кишечного тракта с позиции оценки клеточного обновления, что позволяет подвести морфологическую базу для объяснения некоторых клинических и диагностических проявлений заболеваний органов пищеварения при воздействии эндогенных и экзогенных токсических факторов. Оценка клеточного обновления с точки зрения баланса пролиферации и апоптоза может рассматриваться как одна из основ терапевтической стратегии.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Бахтин, Артур Александрович, Саранск

1. Агаджанян, H.A. Экологические аспекты генеза токсического отека легких / H.A. Агаджанян, И.Н. Полунин, H.H. Тризно. Астрахань, 1996. -180 с.

2. Агаджанян, H.A. Экологические аспекты бронхолегочной патологии Волжского Понизовья / А.Н. Агаджанян, И.Н. Полунин, Г.А. Трубников-Астрахань, АГМА, 2000. 168 с.

3. Аруин, Л.И. Клиническая морфология энтеропатий. / Л.И. Аруин // Вестник РАМН. 1994. - №5. - С. 32-38.

4. Аруин, Л.И. Морфологическая диагностика болезней желудка и кишечника / Л.И. Аруин, Л.Л.Каппулер, В.А. Исаков. М.:Триада-Х; 1998. -496 с.

5. Аруин, Л.И. Апоптоз при патологических процессах в органах пищеварения / Л.И. Аруин // Клин.мед.- 2000 Т.78 , №1 -С. 5 - 10.

6. Бажанова, Е.Д. Механизмы регуляции апоптоза в нейроэндокринной системе гипоталамуса в позднем онтогенезе / Е.Д. Бажанова. Автореф. дис. д.б.н. - СПб., 2011 - 40 с.

7. Белоцкий, С.М. Воспаление. Мобилизация клеток и клинические эффекты / С.М. Белоцкий, P.P. Авталион. М.: Изд-во БИНОМ, 2008. - 240с.

8. Белушкина, H.H. Молекулярные основы патологии апоптоза./ Н.Н.Белушкина, С.Е. Северин // Арх. пат. -2001 №1. С. 51- 60.

9. Белушкина, H.H. Молекулярные основы апоптоза / Н.Н.Белушкина, Хасан Хамад Али, С.Е. Северин // Вопр. биол. мед. и фарм. химии 1998 -№4 С, - 15-23.

10. Белушкина, H.H., 2004. Молекулярно-медицинские аспекты клеточной гибели. / Н.Н.Белушкина, И.И. Белицкий // В кн.: Введение в молекулярную патологию. М.: Медицина - С. 414 - 445.

11. Бережков, Н.В. Апоптоз управляемая смерть клетки / Н.В. Бережков// Арх. анат., гистол. и эмбриол. 1990. Т. 99. №12. С. 68 - 75.

12. Берлин, Л.Б. Атлас патологической гистологии слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки / Л.Б. Берлин, Б.Г. Лисочкин, Г.И. Сафонов, В.М. Успенский. М.: Медицина, 1975. - 170с.

13. Боев, В.М. Адаптивная регуляция функций у операторов газохимического производства / В.М. Боев, Н.П. Сетко // Физиология человека. 1990. - Том 16. - № 4. - С.140 -146.

14. Боев, В.М. Сернистые соединения природного газа и их действие на организм / В.М. Боев, Н.П. Сетко. М.: Медицина. - 2001. - 216с.

15. Боева, О.И. Возможности цитоэнзимохимического анализа лейкоцитов в диагнозе и дифференциальном диагнозе токсических поражений печени / О.И. Боева Автореф. дисс.,. канд. мед. наук - Ставрополь, 1998.-23 с.

16. Бондарева, В.А. Значение прогностических маркеров опухолевой прогрессии К1-67 и р53 в опухолях молочной железы. / В.А. Бондарева, И.С. Шпонька // Морфология,- 2007,- Т. 1, № 1. С. 40 - 44.

17. Борелло, С.П. Микрофлора, секреторная и моторная деятельность желудочно-кишечного тракта // Физиология и патофизиология желудочно-кишечного тракта / С.П. Борелло // М.: Медицина, 1989. С. 482 - 493.

18. Бучин, В.Н. Системные основы стресса у работников газовой промышленности / В.Н. Бучин, М.В. Лазько // Вест, новых мед. технологий. -2002. Т9, №2. - С.56-58.

19. Бучина, М.М. Реактивность бронхов у рабочих газоперерабатывающего производства/ М.М. Бучина// Автореф. дисс. канд. мед. наук. Москва, 2001.-22с.

20. Вайнштейн, С.Г. Особенности перекисного окисления липидов у больных язвенной болезнью / С.Г. Ванштейн, Ф.А. Звершхановский // Гастроэтерология. 1984.-Вып. 16.-С. 51-53.

21. Ведина, JI.А. Влияние кондиционных сред, полученных от мышиных эмбриональных клеток печени, на колониеобразующую активность клеток кишечника/ Л.А. Ведина., A.B. Шурлыгина, C.B. Сенников, В.А. Труфакин, В.А.Козлов // Бюллетень СЩ РАМН,- 2006 №1- 119 с.

22. Величковский, Б.Т. Патогенетическая классификация профессиональных заболеваний органов дыхания, вызванных воздействием фиброгенной пыли / Б.Т. Величковский // Пульмонология 2008 -№4 - С.93-100.

23. Владимирская, Е.Б. Механизмы апоптотической смерти клеток / Владимирская Е.Б. // Гематология и трансфузиологии.-2002.-Т.47, №2 С. 35-40.

24. Грачева, Н.М. Дисбиозы кишечника, причины возникновения, диагностика, применение бактерийных биологических препаратов. Пособие для врачей и студентов / Грачева Н.М., Ющук Н.Д., Чупринина Р.П., Мацулевич Т.В., Пожалостина Л.В. М.:Медицина, 1999. - 44 с.

25. Гребенев, А.Л. Болезни кишечника / А.Л. Гребенев, Л.П. Мягкова. М.: Медицина, 1994. - 240 с.

26. Григорьев, П.Я. Клиническая гастроэнтерология / П.Я. Григорьев, A.B. Яковенко. М.: Медицинское информационное агентство, 2004. - 704 с.

27. Давлатова, Л.В. Защитные свойства желудочно-кишечного тракта животных / Л.В. Давлатова // Сельскохозяйственная биология. 1974. -Т.9, № 2. -С. 269-274.о

28. Давлатова, И.С. Морфофункциональная характеристика стенки тонкой кишки при хроническом воздействии сероводородсодержащим газом (экспериментальное исследование) / И.С. Давлатова. Автореф. дисс. канд. мед. наук. - Тюмень, 2010. - 18 с.

29. Забродский, П.Ф. Иммунотропная активность химических веществ как возможная причина заболеваемости в экологически неблагополучныхрегионах / П.Ф. Забродский, A.A. Кажекин, И.В.Саватеев // Военно мед. журнал. 1994. - № 6. - 28 - 34 е.

30. Заводиленко К.В. Клеточное обновление в очагах кишечной метаплазии слизистой оболочки желудка при атрофии и эрозивно-язвенных поражениях (биопсийное исследование): Автореф. дис. . канд. мед. Наук / Заводиленко К.В. -М, 2006,- 18 с.

31. Звягинцева, Т.Д. Современные представления о сосудистом эндотелии в норме и при патологии желудочно-кишечного тракта / Т.Д. Звягинцева, C.B. Гриднева // Эксп. клин, гастроэнтерол. 2005. - № 4. - С. 6 - 12.

32. Зуфаров, К.А. Структурные основы компенсаторно-приспособительных процессов./ К.А. Зуфаров Ташкент: Фан. - 1974. - 222 с.

33. Зуфаров, К.А. Руководство по гистологии. / К.А.Зуфаров, А.Ю. Юлдашев // СПб. 2002. - Т. 2. - С. 115 - 140.

34. Иванченкова, P.A. Энтеросан и гепатосан в лечении диспепсии при хронических заболеваниях желчевыводящих путей/ Иванченкова P.A., Атькова Е.Р., Гаценко В.П. // Поликлиника, 2009. № 2. - С.48 - 50.

35. Ивашкин, В.Т. Синдром раздраженной кишки. Практическое руководство для врачей / В.Т. Ивашкин. М, РТА, 1999. - 28с.

36. Ивашкин, В.Т. Местный иммунитет и микробиоценоз при заболеваниях кишечника / В.Т. Ивашкин, H.JT. Денисов // Росс, журнал гастроэнтерол. гепатол. колопроктол. 2009. - Т. 19, №6. - С.11 - 16.

37. Измеров, Н.Ф. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном воздействии / Н.Ф. Измеров, И.В. Саноцкий, К.К. Сидоров. -М.: Медицина, 1977. 240с.

38. Клинико-генетические аспекты воспалительных заболеваний кишечника / Е.Ю. Валуйских, И.О. Светлова С.А. Курилович и др. // Росс, журнал гастроэнтерол. гепатол. и колопроктол. 2008. - Т. 18, № 6. - С. 68 - 74.

39. Кулагина, Г.М. Микрофлора кишечника у работников вредных производств / Г.М. Кулагина, C.B. Фиалкина // Журн. микробиол. 2004. -№4. С. 59-61.

40. Кривонос, В.А. Значение щеточной каймы, эпителиальной базальной мембраны и волокон собственного слоя в иммунобарьерной функции слизистой оболочки кишечника. Автореф. дисс. . канд. мед. наук / В.А. Кривонос. Краснодар, 1978. - 16 с.

41. Лягина, И. А. Характеристика кишечной микрофлоры у больных язвенным колитом / И.А. Лягина, Т.К. Корнева, О.В. Головенко, A.B. Веселов // Росс, журнал гастроэнтерол. гепатол. и колопроктол. 2008. - Т. 18, № 2. -С. 48-54.

42. Майоров, В.М. Длительно не заживающие язвы желудка / В.М. Майоров // Терапевт, архив. 1985. № 2. - С. 43 -47.

43. Малов, Ю. С. Нарушение механизмов защиты желудочно-кишечного тракта у больных язвенной болезнью / Ю. С. Малов // Тер. арх. 1984 -№ 2. -С. 19-22.

44. Манских, В. Н. Пути гибели клетки и их биологическое значение / В. Н. Манских // Цитология. 2007. -Т. 49. - № 11. - С. 909 - 915.

45. Марстон, А. Сосудистые заболевания кишечника (пер с англ.) / А. Марстон .- М., Медицина. 1989. - 304с.

46. Меерсон, Ф.З. Адаптация, стресс, профилактика/ Ф.З. Меерсон М. Медицина - 1981.-278 с.

47. Методы определения токсичности и опасности химических веществ. Токсикометрия. / И.В. Саноцкий. М., 1970. - 243с.

48. Михайлова, З.М. Бронхолегочные поражения при хронических воспалительных заболеваниях кишечника / З.Ф. Михайлова, Л.Б. Лазебник, А.И. Парфенов // Тер. архив. 2010. - № 3. - С. 61 - 64.

49. Морфофункциональные изменения и микробиоценоз тонкой кишки у больных неспецифическим язвенным колитом / Парфенов А.И., Богомолов П.О., Луфт В.М. и др. // Российский журнал гастроэнтерол. гепатол. и колопроктол. 2000. - Т 10, №1. - с.55-61.

50. Мушкамбаров, H.H. Молекулярная биология/ H.H. Мушкамбаров, C.JI. Кузнецов. Мед. инф. агентство (МИА). - 2003. - 536 с.

51. Наумова, JI.И. Становление структуры и ритмообразовательной функции сердца в измененных условиях среды/ Автореф. докт. мед. наук./ Л.И. Наумова- Москва 2002. -40 с.

52. Новочадов, В.В. Эндотоксикоз: Моделирование и органопатология: монография / В.В. Новочадов, В.Б. Писарев. Волгоград: Изд-во ВолГМУ, 2005.-240с.

53. Патологическая анатомия / Курс лекций; под ред. М. А. Пальцева, В. В. Серова, М.: Медицина, 1998,- с.78-80

54. Полунин, И.Н. Токсический отек легких при остром отравлении сероводородсодержащим газом / И.Н. Полунин, Р.И. Асфандияров, H.H. Тризно. Астрахань. - Изд-во АГМА - 1999. - 219 с.

55. Полякова, B.C.Структурная реорганизация клеток Клара и их роль в подержании гомеостаза в респираторном отделе легких / B.C. Полякова, А.Н. Боркина, К.Н. Мещеряков // Морфология. Том 134. - 2008. - №5. - С. 36 -38.

56. Поражения кардиореспираторной системы у рабочих газоперерабатывающих производств / Г.А. Трубников, И.Н. Полунин, В.Н. Бучин, М.И. Шевченко, М.М. Бучина // Астрахань. АГМА. - 2002 . - С. 160

57. Проскуряков, С. Я. Некроз активная, управляемая форма программируемой клеточной гибели / С. Я. Проскуряков, В. JI. Габай, А.Г. Коноплянников // Биохимия. 2002. - Т. 67. - С. 467 - 491.

58. Проскуряков, С. Я. Иммунология некроза и апоптоза / С. Я. Проскуряков, В.П Гавай, А.Г Коноплянников // Биохимия. 2005. - Т.70. -№42.-С. 1593 - 1605.

59. Райхлин, Н.Т. Регуляция и проявления апоптоза в физиологических условиях и в опухолях/ Н.Т. Райхлин, А.Н. Райхлин // Вопросы онкологии.-2002. Т.48, №2. - С. 159-171.

60. Рыжов, C.B. Молекулярные механизмы апоптотических процессов/ C.B. Рыжов, В.В. Новиков // Российский биотерапевтический журнал. 2000. -Т.1. - №3. - С. 27-33.

61. Рысс, Е.С. Функциональные расстройства желудочно-кишечного тракта / Е.С.Рысс, В.И. Симаненков // Приложение к журналу "Новые Санкт-Петербургские врачебные ведомости",- 2001 №2. - 56 С.

62. Серосодержащие газы, их действие на организм и пути дезинтоксикации в эксперименте / H.H. Тризно, Ф.Р. Асфандияров, И.А. Беднов, А.К. Аюпова. Астрахань. - Издательствово: АГМА - 2005. - 116с.

63. Системная патология при хронической обструктивной болезни легких / Н.Е. Чернеховская, Т.А. Федорова, В.Г. Андреев, М.М. Кириллов. М.: «Экономика и информатика».- 2005. -192с.

64. Скулачев, В.П. Старение как атавистическая программа, которую можно попытаться отменить / В.П. Скулачев // Вестн. РАН . 2005. - т. 75. - №9. -С. 831 -843.

65. Суханова, Г.А. Апоптоз. Учебное пособие / Т.А. Суханова, O.E. Акбашева. Томск. - Издательство: ТПУ. - 2009. - 172с.

66. Тельцов, Л.П. Закономерности развития тканей органов пищеварения в онтогенезе/ Л.П. Тельцов // Морфология. 1996 - № 2. - С.34 - 35.

67. Темчура, В.В. Роль растворимых факторов, продуцируемых эпителиальными клетками тонкого кишечника мыши, в регуляции гемо-,иммуно- и энтеропоэза : автореф. дис. . канд. биол. наук / В.В. Темчура. -Новосибирск. 2001. - 8 с.

68. Токсикометрия химических веществ, загрязняющих окружающую среду / Под общ. ред. A.A. Каспарова, И.В. Саноцкого. М., 1986 .- 97 с.

69. Труфакин, В.А. Иммунологические механизмы, формирования экологически обусловленной патологии / В.А. Труфакин, JI.A. Трунова // Вестник АМН СССР.- 1994.- № 7.- С. 15-19.

70. Труфакин, В.А. Иммунная система и ее регуляторная роль в процессах пролиферации идифференцировки в организме/ В.А. Труфакин, А.Н. Шмаков // Вестник АМН СССР,- 1991,- № 2,- С. 23-29.

71. Фролькис, A.B. Функциональные заболевания желудочно-кишечного тракта/ A.B. Фролькис. СПб. - Медицина - 1991 - 224 с.

72. Хавкин, А.И. Микробиоценоз кишечника и иммунитет / А.И. Хавкин // Русс. мед. журнал. 2003. - Т. 11, № 3. - С. 122 - 125.

73. Хрипунова, И.Г. Синдром хронической диареи в практике терапевта / Хрипунова, И.Г., Павленко А.Ф. Изд-во Ставропольской ГМА- 2007. - 48с.

74. Чекунова, И.Ю. Сравнительная характеристика структурных компонентов и метаболических процессов в легочной ткани в норме и при воздействии природного газа Автореф. дисс. канд. биол. наук / И.Ю. Чекунова. Астрахань. - 2010. - 24с.

75. Черников, В.П. Роль индуцируемого гипоксией транскрипционного фактора HIF-1 в регуляции метаболизма энтероцитов. Архив патологии,-2008-№6.-С. 6-9.

76. Чучалин, А.Г. Хроническая обструктивная болезнь легких / А.Г. Чучалин. М.: ЗАО Изд-во БИНОМ,- 1999. - 480с.

77. Шанин, Ю.Н. Антиоксидантная терапия в клинической практике/ Ю.Н. Шанин, В.Ю. Шанин, Е.В. Зиновьев. СПб.: ЭЛБИ. -2003. - 131с.

78. Шишкина, Т. А. Патогенетические механизмы нарушения микроциркуляции в легких при хроническом воздействии сероводородсодержащим газом (экспериментальное исследование). Автореф. дисс. канд. мед. наук / Т.А. Шишкина. Саратов. - 2008. - 24с.

79. Яцина, А.И. Морфологические изменения слизистой оболочки кишечного мочевого пузыря (обзор литературы) / Яцина А.И., Витрук Ю.В., Гаврилюк О.Н., Емец А.И. // Клиническая онкология Т. 2 .- №2. - 2011 С. 56 - 60.

80. Ahlborg, G. Hydrogen sulphide poisoning in shale oil industry / G. Ahlborg // Arch. Indust. Hyg. Occup. Med. 1951. - Vol.3.- P. 247 - 266.

81. Bjerknes M. Gastrointestinal stem cells. 11. Intestinal stem cells./ M.Bjerknes, H.Cheng // Am. J.Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 2005,- 289(3): G381 - 7.

82. Brandtzaeg, P.P. Regional specialization in mucosal immune system: what happens in the microcompartmens? / Brandtzaeg P., Baekkevold E.S., Farsad I.N // Immunol. Today. 1999-Vol. 20. - №3,- P. 141-150.

83. Bouchard, V. J. PARP-1, a determinant of cell survival in response to DNA damage. / V. J.Bouchard, M.Rouleau, G. G. Poirier // Exp. Hematol.-2003.- 31-P. 446—454

84. Cairnie, A. B. Effect of morphine on some sympathetically innervated effectors/ A. B.Cairnie, H. W.Kostliiz, D. W. Taylor // Brit. J. Pharmacol.- 1961.-17.-P. 539- 551.

85. Cheng, H.M. The stem-cell zone of mouse small-intestinal epithelium. In Cell Proliferation in the Gastrointestinal Tract H.M. Cheng, Tunbridge. - Wells M.H. Bjerknes. - Pitman Medical. - 1980. - p. 155.

86. Coffin, B. Diagnosis of irritable bowel syndrome / Coffin B. // Gastroenterol Clin Biol. 2009. - Vol.33 (Suppl. 1). - P.9 -16.

87. Dao, T. IL-18 augments perforin-dependent cytotoxicity of liver NK-T cells/ T.Dao, W.Z. Mehal, I.N. Crispe . J Immunol.- 1998.-161:2217-22.

88. Degenhardt, K. Autophagy promotes tumor cell survival and restricts necrosis, inflammation, and tumorigenesis/ K. Degenhardt, R. Mathew, B. Beaudoin-Cancer Cell. 2006. - 10:51-64.

89. Drossman, D.A. The Functional Gastrointestinal Disorders. Diagnosis, Pathophysiology, and treatment/ D.A. Drossman. A Multinational Consensus. Little, brown and Company. Boston / Hew York / Toronto/ London. - 1994. -370 p.

90. Drossman, D.A. The Functional Gastrointestinal Disorders and the Rome II process/ D.A. Drossman // Gut. 1999. -45(Suppl.2) -P.314.

91. Drossman, D.A What determines severity among patients with painful functional bowel disorders? / D.A. Drossman, W.E. Whitehead, B.B. Toner // Am J Gastroenterol. 2000. - Vol. 95. - 4. - P. 862 - 3

92. Fiers, W. More than one way to die: Apoptosis, necrosis and reactive oxygen damage / W. Fiers, R. Beyaert, W. Declercq, P. Vandenabeele //. Oncogene.1999. Vol.18. - P.7719-7730.

93. Fleming, L. E. Disease clusters in occupational medicine: a protocol for their investigation in the workplace. / L. E. Fleming, A. M. Ducatman // Am J Ind Med.- 1992.-221.-P. 33-47.

94. Freeman, B.A. Intravascular reaction of superoxide and hydrogen peroxide / B.A. Freeman//J. Cell Biochem. 1991. - Suppl. 15. -P.205.

95. Go, L.L. The effect of endotoxin on intestinal mucosal permeability to bacteria in vitro / L.L. Go, P.G. Healey, S.C. Watkins // Arch. Surg. 1995. - Vol. 130, № l.-P. 53 - 58.

96. Gozuacik, D. Autophagy as a cell death and tumor suppressor mechanism/ Gozuacik D., Kimchi A. // Oncogene. 2004 - 23,- P.2891 - 2906.

97. Gunther, K. Colonic lateonset familial adenomatous polyposis combined with duodenal polyposis and familial endometrial cancer/ K. Gunther, N.Horbach, W. Hohenberger // Am. J. Med. 2000. - Vol. 108. - №8. - P. 681 - 683.

98. Gutierrez-Gonzalez, L. Biology of intestinal metaplasia in 2008: more than a simple phenotypic alteration / L.Gutierrez-Gonzalez, N.A. Wright //.-2008.-Dig. Liver Dis. -40. P. 510-522

99. Hunter, J.J. A peptide sequence from Bax that converts Bcl-2 into an activator of apoptosis./ Hunter, J.J. , Parslow,T.G. // J. Biol. Chem. .- 1996.-Vol.271. P. 8521 -8524.

100. Holly, J.M. Insulin-like growth factors; autocrine, paracrine or endocrine? New perspectives of the somatomedin hypothesis in the light of recent developments/ J.M. Holly, J.A.Wass // J Endocrinol.-1989. Sep; 122. - 3. -P.611-618.

101. Jattela, M. Multiple cell death pathways as regulators of tumour initiation and progression / M. Jattela // Oncogene. 2004. - Vol. 23.-P. 2746-2756.

102. Kondo, Y. The role of authophagy in cancer development and response to therapy. / Y.Kondo, T. Kanzawa, R.Sawya, S.Kondo // Nat. Rev. Cancer. 2005-5.-P. 726-734.

103. Kroemer, G. Classification of cell death: recommendations of the Nomenclature Committee on Cell Death 2009. Cell Death Differ / G. Kroemer, L.Galluzzi, P.Vandenabeele, J. Abrams 2009 - 16- p. 3-11

104. Levin, B. Autophagy in cell death: an innocent convict? / Levin B., Yuan J. //J. Clin. Investig. 2005. - 115. - P. 2679 - 2688.

105. Logan, A. Intracrine regulation at the nucleus a further mechanism growth factor activity? / A.Logan // J. Endocr.- 1990,- Vol. 125,- P. 339 - 343.

106. Lockshin ,R. A. Apoptosis, autophagy, and more./ R. A. Lockshin, Z. Zakeri // IJBCB. 2004. - Vol. 36. - P. 2405 - 2419.

107. Midle-Langosch, K. Bamberger A-M pl6/MTSl and pRb expression in endometrial carcinomas. / K. Midle-Langosch , L. Riethdorf // Virchows Arch. -1999,- Vol. 434.-P.23-28.

108. Nagata, S. The fas death factor / S.Nagata, P. Golstein // Science.- 1995.-Vol. 261.- P. 1449-1456.

109. Okada, H. Pathways of apoptotic and non-apoptotik death in tumor cell./ H.Okada, T.W.Mak // Nat. Rev. Cancer.-2004.-Vol. 4,- P. 592-603

110. Otto, H. Cerebral scintigraphy in relation to roentgenological methods for detection of tumours situated in the sellar region and the posterior fossa / H. Otto, O. Fiebach, J. Sauer, W. Bettag // Neuroradiology.-1972.- Jun;4.-l.-P.30-35.

111. Potten, C.S. Continuous labeling studies in mouse skin and intestine / C.S. Potten, E. Hamilton // Cell and Tissue Kinet. 1974. - №7. - P.271 - 283.

112. Potten, C. S. Evidence for discrete cell kinetic subpopulations in mouse epidermis based on mathematical analyses / C. S. Potten, H. E. Wichmann, M.Loeffler, K. Dobek // Cell Tiss. Kinet. 1982.-Vol.15.-P. 305-329.

113. Proskuryakov, S.Y. Necrosis: a specific form of programmed cell death?/ S.Y.Proskuryakov, A.G. Konoplyannikov, V.L. Gabaib // Exp. Cell Res. 2003 -Vol. 283.-P. 15-16.

114. Reznikov , K. Clastering of apoptotic cells via bystanger killing by peroxides./ K.Reznikov, A.L.Kolesninikov, Pramanik A., K.Tan-No // FASEB J-2000- Vol. 14.-P. 1754.

115. Rijke, R.P. Zingeving bij ziekte en gezondheid van een mechanistische naar een ecologische visie./ R.P. Rijke // In 'Zelfhulptechnieken' (red. Lafaille e.a.), van Loghum Slaterus, Utrecht. - 1984. -Vol. 2.1- P.23

116. Roninson, I.B. If not apoptosis, then what? Traetment-induced senescence and mitotic catastrophe in tumor cells. / I.B. Roninson , E.V. Broude , B. D. Chang // Drug Resist.-2001.-Updates. 4.-P.145-153.

117. Sheng, X. Bcl-2 gene expression in endometrial carcinoma/ X.Sheng, H.Song, X.He // 1998. Vol. 20. - №5. - P 365 - 366.

118. Shirin, H. Helicobacter pylori inhibits the G1 to S transition in AGS gastric epithelial cells / H. Shirin, E.M. Sordillo, H. Yamamoto // Cancer-Res. 1999 -Vol. 59 (Suppl. 10). - P. 2277 - 2281.

119. Solary, E. The role of apoptosis in the pathogenesis and treatment of diseases / Solary E„ L. Dubrez. // Eur Respir J.- 1996. Vol. 9- P. 1293-1305

120. Steven, F. M. Effect of scatter factor on motility of epithelial cells and fibroblasts / F. M. Steven M.D., N.Yaron M.D., // J.Cell.Physiol. 1989. - Vol. 139.-P. 565 -569.

121. Suda, T. Molecular cloning and expression of the Fas Iigand, a novel member of the tumor necrosis factor family / T.Suda, T.Takahashi, P.Golstein, S.Nagata // Cell 75,- 1993.-Vol. 11.-№ 69(1). P. 178.

122. Strand, S. Lymphocyte apoptosis induced by CD95 (APO-l/Fas) ligand-expressing tumour cells a mechanism of immune evasion?/ Strand S, Hofmann WJ, Hug H, Miiller M, Otto G // Nature Med. - 1996. -Vol. 2.-P. 1361-1366

123. Tsubouchi, S. Theoretical implications for cell migration through the crypt and the villus in labelling studies conducted a t each position within the crypt / S. Tsubouchi // Cell Tissue Kinet.- 1983,- №16.-P. 441.

124. Tsuji, M. Dynamic interaction between bacteria and immune cells leading to intestinal IgA synthesis / M. Tsuji, K. Suzuki, K. Kinoshita, S. Fagarasan // Semin Immunol. 2008. - Vol. 20. - N 1. - P.59 - 66.

125. Vaux, D.L. bcl-2 gene promotes haematopoietic cell survival and cooperates with c-myc to immortalize pre-B cells / D.L.Vaux, S.Cory, J.M. Adams // Nature. 1988. - Vol. 335. - P. 440 - 442.