Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Сравнительная характеристика ДНК коринеморфных бактерий

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Фомин, Борис Андреевич

Тпл, Тэл, Топ

DS-Na РРО РОРОР РНКаза SAM ГАП ССР ЭДГА МПБ Ш.ДГ

- соответственно температура плавления, температура эллюции и оптимальная температура реассоциации ДНК

- гиперхромный эффект

- додецилсульфатнатрия

- 2,5-диминилоксазол

- I,4-бис/5-фенилоксазолил-2/-бензол

- рибонуклеаза

- s -аденозилметионин

- гидроксапатит

- стандартный солевой раствор

- этилендиаминтетрацитат

- мясопептонный бульон

- ферментативный дрожжевой гидролизат казеина

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Феносистематика коринеформной группы бактерий

1.2. Геносистематика коринеформной группы бактерий.

1.2Д. Нуклеотидный состав.

1.2.2. Размер генома.

1.2.3. Систематика на основе изучения гомоло-гий нуклеотидных последовательностей

1.2.4. Систематика на основе изучения структуры РНК

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1, Материалы.

2.1.1. Исследуемые микроорганизмы.

2.1.2. Реактивы.

2.2. Методы.

2.2.1. Культивирование микроорганизмов.

2.2.2. Выделение ДНК из биомассы.

2.2.3. Определение нуклеотидного состава

2.2.4. Фрагментирование ДНК.

2.2.5. Определение размера генома.

2.2.6. Получение радиоактивномеченых препаратов ДНК.

2.2.7. Молекулярная ДНК-ДНК гибридизации на фильтрах.

2.2.8. Определение термостабильности гибридных дуплексов ДНК.

2.2.9. Молекулярная ДНК-ДНК гибридизация в растворе.

2.2.10. Математическая обработка результатов экспериментов

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Испытание питательной среды и культивирование исследуемых микроорганизмов.

3.2. Выделение и характеристика препаратов ДНК исследуемых микроорганизмов

3.3. Мечение препаратов ДНК радиоактивными изотопами.

3.4. Нуклеотидный состав ДНК коринеморфных бактерий.

3.5. Размер генома коринеморфных бактерий.

3.6. Определение гомологий нуклеотидных последовательностей ДНК коринеморфных бактерий

Введение Диссертация по биологии, на тему "Сравнительная характеристика ДНК коринеморфных бактерий"

Коринеформные бактерии широко распространены в природе (Го-Л0БЛев,1978; Veldkamp, 1970; Keddie, 1978; Goodfellow,Minnikin, 1981; Pitcher, 1983). Группа коринеформных бактерии объединяет как сапрофитные, так и патогенные для животных и растений виды. Интерес к этим микроорганизмам обусловлен прежде всего тем, что среди них имеются возбудители инфекционных заболеваний человека и животных. Кроме того, пристальное внимание отечественных и зарубежных ученых к коринеформным бактериям привлечено наличием среди них, в частности, в роде коринебактерий, отдельных видов, обладающих иммуномодулирующей активностью (Доклад научной группы ВОЗ, 1978). Систематика представителей коринеформной группы определяется несколькими концепциями и еще далека от совершенства ( Jensen, 1952,1966;Yamada,Komagatа,1972Ъ; Rogosa et al.,1974;Keddie,1978).

Особенно малосистематизированными остаются морфологически сходные бактерии, изолируемые из крови и органов больных злокачественными образованиями людей, здорового и больного хроническим лимфолейкозом крупного рогатого скота (Крестовникова,1965,1971; Голосова с соавт.,1969,1972; Каган с соавт.,1971; Мартынова с соавт.,1971; Бархударян,1973; Азизов,1974; Jackson, 1954; Seibert et al., 1970, 1972).

Изучение этих микроорганизмов, позволило отнести их к коринеформной группе бактерий (Бархударян,1973; Андреева с соавт., 1981). Однако по данным определения морфологических, тинкториалъ-ных и биохимических свойств генетические связи с типичными корине-бактериями, а также между собой у этих изолятов установлены не были (Андреева с соавт.,1981).

В настоящее время наряду с традиционными методами при систематже микроорганизмов обязательно применяются молекулярные характеристики их макромолекул, в первую очередь, нуклеиновых кислот. Теоретической основой использования в систематике молекулярных характеристик служат следующие положения молекулярной биологии: во-первых, информационные молекулы можно рассматривать в качестве молекулярных хронометров, измеряющих не только эволюционные взаимоотношения, но и эволюционные расстояния между организмами; во-вторых, филогенетическая информация "записана" в виде последовательностей в ДНК и РНК; в-третьих, последовательность и число нукле-отидных замен в информационных молекулах отражает историю происхождения и развития организмов (Белозерский,1967; Дуда,1984; Дикерсон,1984).

Представленная работа посвящена определению молекулярных характеристик ДНК группы коринеморфных изолятов для их классификации.

Цели и задачи исследований. Целью наших исследований является определение нутслеотидного состава, молекулярной массы (размера генома), гомологий нуклеотидных последовательностей ДНК бактерий, выделяемых от здорового и больного хроническим лимфолейкозом крупного рогатого скота, больных злокачественными образованиями людей для использования данных молекулярных характеристик при классификации этих микроорганизмов.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Разработать метод выделения ДНК из коринеморфных изолятов.

2. Установить нуклеотидный состав ДНК и размер генома микроорганизмов изучаемой группы.

3. Определить степень подобия нуклеотидных последовательностей ДНК коринеморфных бактерий, изолируемых от животных и человека.

4. Установить на основе молекулярных характеристик ДНК степень сходства и различия представителей этой группы бактерий и нескольких музейных штаммов коринебактерий.

Научная новизна работы. Впервые у значительной группы коринеморфных бактерий, изолированных от здорового и больного хроническим лимфолейкозом крупного рогатого скота, больных злокачественными образованиями людей, определен нуклеотидный состав, молекулярная масса, уровень гомологий нуклеотидных последовательностей их ДНК. Показано значительное отличие по первичной структуре ДНК коринеморфных изолятов от ряда музейных штаммов выбранных видов коринебактерий. Представители исследуемой группы коринеморфных изолятов распределены в несколько подгрупп, в которые отнесены изоляты, имеющие близкие молекулярные характеристики ДНК.

Практическая ценность работы. Проведенные исследования показывают целесообразность использования молекулярных характеристик ДНК для классификации коринеморфных изолятов. Данные по нукле-отидному составу и определению степени гомологий нуклеотидных последовательностей ДНК могут быть использованы при идентификации морфологических сходных с изученными микроорганизмов. Ускоренный метод выделения ДНК из коринеморфных бактерий вошел в сборник: "Проведение биохимических, иммунокомпетентных клеток, клеточных структур и их компонентов" (Москва, ВАСХНИЯ, 1983), Материалы диссертации использованы в методических рекомендациях: "Применив молекулярных характеристик ДНК для идентификации микроорганизмов" (Москва, ВШВ), одобренных секцией "Биология общая и сравнительная патология животных" Отделения ветеринарии ВАСХНИЛ. Разработанная и испытанная питательная среда применяется для культивирования коринеморфных бактерий (Храмова и соавт., в печати).

Апробация результатов исследований. Материалы диссертационной работы доложены на:

- на конференциях молодых ученых ВИЭВ (Москва, 1983,1984),

- на I Всесоюзной конференции "Хроматография в Биологии и Медицине" (Москва, 1983J,

- на Всесоюзной конференции молодых ученых по сельскохозяйственной радиологии (Обнинск,1983),

- на конференции "Итоги и перспективы внедрения идей и методов биохимии в животноводстве ж ветеринарии" - посвященной 60-летию организации А.Н.Бахом лаборатории биохимии сельскохозяйственных животных в ГИЭВе (Москва, 1983),

- на секции "Биология, общая и сравнительная патология животных" Отделения ветеринарии ВАСХНИП (Москва, 1983),

- на секции "Биохимия сельскохозяйственных животных" Московского отделения Всесоюзного биохимического общества Ж СССР (Москва, 1984),

- на конференции молодых ученых МГУ (Москва, 1984),

- на П Всесоюзной конференции по сельскохозяйственной радиологии (Обнинск, 1984).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 работ.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Фомин, Борис Андреевич

ВЫВОДЫ

1. Нуклеотидный состав ДНК коринеморфных бактерий, изолируемых от здорового и больного хроническим лимфолейкозом крупного рогатого скота, больных злокачественными образованиями людей заключается в интервале 55,2-65,3 мол.$ ГЦ, что подтверждает принадлежность этих микроорганизмов к коринеформной группе бактерий.

2. Показана полимодальность распределения коринеморфных изолятов по нуклеотидному составу их ДНК. Выявлено три группы со средними значениями 58,1; 61,9 и 64,1 мол.$ ГЦ.

3. Впервые определен размер генома коринеморфных бактерий, выделяемых от крупного рогатого скота и больных людей. Величина этого показателя для всех изолятов, кроме 24, составляет 1,0Q

1,7*10 дальтон.

4. Методом ДНК-ДНК гибридизации выявлена гетерогенность изучаемых коринеморфных бактерий. Показано наличие четырех самостоятельных подгрупп, первая из которых включает изоляты 51,18,ЗВА, 55; вторая - 26,30,24; третья - 17,20,19,9,22,21,16,38; четвертая - 66,69,40,8,65,31,67,35,68 с уровнем гомологии нуклеотидных последовательностей ДНК внутри подгрупп свыше 67$, 43$, 58$ и 65$ соответственно.

5. По нуклеотидному составу ДНК, размеру генома, степени подобия нуклеотидных последовательностей ДНК коринеморфные изоляты достоверно отличаются от типового вида Corinebacterium, C.diphteriae, а также ОТ ВИДОВ C.fla-vidum, C.pseudodiphteriticum, C.renale, С.xerosis и C.ulcerans.

6. Установлено, что для коринеморфных бактерий нуклеотидный состав является эффективным критерием их предварительной классификации.

- 127

7. Показано, что использование молекулярных характеристик ДНК (нуклеотидный состав, размер генома, степень подобия нуклеотидных последовательностей) целесообразно для идентификации фено-тшшчески сходных коринеморфных бактерий, выделяемых от здорового и больного хроническим лимфолейкозом крупного рогатого скота,больных злокачественными образованиями людей.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Предложен метод выделения ДНК из коринеморфных бактерий, позволяющий уменьшить исходное количество биомассы и получать препараты ДНК высокой степени чистоты.

2. Методические рекомендации "Применение молекулярных характеристик ДНК для идентификации микроорганизмов" одобрены секцией "Биология общая и сравнительная патология животных" Отделения ветеринарии ВАСХНШ.

3. Предложена питательная среда для культивирования коринеморфных бактерий, которая является технологичной в приготовлении и дает высокий выход биомассы.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Комплексный анализ результатов определения нуклеотидного состава, размера генома, степени подобия нуклеотидных последовательностей, термостабильности и гибридных молекул ДНК позволяет сделать заключение о неоднородности изучаемой группы коринеморфных изолятов. Выявлено наличие четырех дискретных подгрупп.

В первую подгруппу вошли изоляты 51,18,ЗВА и 55; во вторую 26,30,24; в третью - 17,20,19,9,22,21,16,38; в четвертую - 66,69, 40,8,65,31,67,33,68. Уровень гомологии нуклеотидных последовательностей ДНК представителей внутри подгрупп, как правило, выше 70%. Тогда как между подгруппами - менее 40$. Кроме того, подгруппы П, Ш и 1У достоверно различаются (Р< 0,001) по нуклеотидному составу ДНК (Хп = 58,1 мол.% ГЦ; Хщ = 62,0 мол.% ГЦ; Xjy = 64 мол.% ГЦ и средних квадратичных отклонениях - 0,7; 0,8 и 0,7 соответственно).

Следует отметить, что подгруппа I представлена в основном бактериями, выделяемыми от больных злокачественными образованиями людей, П и Ш - от больного лейкозом крупного рогатого скота, а 1У, наряду с бактериями от здоровых животных, как теми, так и другими.

Такие различия в свойствах подгрупп, по нашему мнению, позволяют считать их отдельными видами одного рода.

Несмотря на то, что проведенные исследования показали значительное отличие по первичной структуре ДНК коринеморфных изолятов от выбранных видов коринебактерий, по данным определения нуклеотидного состава можно судить о принадлежности изученных нами микроорганизмов к коринеформным бактериям. Не исключено, однако, что Корин еморфные изоляты представляют собой обособленную группу бактерий.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Фомин, Борис Андреевич, Москва

1. Азизов Н.М. Микробиологическое исследование органов и тканей крупного рогатого скота больного лейкозами и с лейкомоидными реакциями. М.: Канд.дисс., 1974. - 182 с.

2. Артюшин С.К. Изучение генетического родства лептоспир. -М.: Автореф.канд.дисс., 1981.

3. Артюшин С.К., Киктенко B.C., Ежов Г.И., Лысенко A.M. Нуклеотидный состав, размер генома и гомологии в ДНК лептоспир серогруппы Axmenica. Биологические науки, 1982, № 10, с.19-21.

4. Ашмарин И.П., Лойцянская М.С., Харченко Е.П. Насколько тесно связан ряд биологических особенностей бактерий с составом и содержанием ДНК? В кн.: Строение ДНК и положение организмов в системе. М.: изд.», 1972, с.135-147.

5. Ашмарин И.П. Молекулярно-биологические основы классификации микроорганизмов. В сб.: Тезисы докладов школы-семинара микробиологов, М.: СОНТИ ин-та ВНИИсинтезбелок, 1979, с. 52-68.

6. Барышникова Л.М., Санданов Ч.М., Монахова Е.В., Голов-лев Е.Л. Дифференциация родов корннеподобных бактерий, синтезирующих аминокислоты и нуклеотиды. Микробиология, 1982, т.51, с.125-129.

7. Бархударян В.А. Бактериологические исследования крови и пораженных органов больного лейкозом крупного рогатого скота. -М.: Канд.дисс., 1973. 168 с.- 129

8. Бархударян В.А., Гевондян B.C., Карпов В.П. Противоопухолевое действие вакцины из микроорганизмов, выделенных от больного лейкозом крупного рогатого скота. Вестник сельскохозяйственной науки, 1977, № 6, с.95-100.

9. Белозерский А.Н. Молекулярная биология новая ступень познания природы. - М.: Знание, 1967. - 63 с.

10. Белозерский А.Н., Спирин А.С. Химия нуклеиновых кислот микроорганизмов. В кн.: Нуклеиновые кислоты, М.: И.Л., 1962, с.123-155.

11. Блохина И.Н., Леванова Г.Ф. Первичная структура ДНК и систематика бактерий. В кн.: Строение ДНК и положение организмов в системе. М.: изд.МГУ, 1972, с.91-134.

12. Блохина И.Н., Леванова Г.Ф. Геносистематика бактерий. -М.: Наука, 1976, 151 с.

13. БруднаяЮ.Е., Макаревич Н.М., Амфитеатрова Н.Ф., Абдул-лина Р.Я.О нуклеотидном составе ДНК некоторых видов условно патогенных микобактерий. Проблемы туберкулеза, 1980, В 12, с.51-53.

14. Брэдли С., Элквист Л. Нуклеиновые кислоты. В кн.: Молекулярная микробиология, М.: Мир, 1977, с.54-112.

15. Бурьянов Я.И., Богдарина И.Г., Нестеренко В.Ф., Баев А.А. Использование ДНК и«тилаз в качестве реагента для получения меченых изотопами^ - ДНК. - Биохимия, 1982, т.47, с.695-697.

16. Вальехо-Роман К.М. Гибридизация ДНК. В кн.: Молекулярные основы геносистематики, М.: изд.МГУ, 1980, с.86-106.

17. Ванюшин Б.Ф. Определение нуклеотидного состава нуклеиновых кислот. В кн.: Современные методы в биохимии, М.: изд.Медицина, 1964, с.236-249.

18. Гевондян B.C., Бархударян В.А., Карпов В.П. Вакцины из коринеморфных бактерий и их влияние на перекисное окисление ли- ISO годов у мышей с привитой саркомой. Сельскохозяйственная биология, 1979, т.НУ, с.71-75.

19. Головлев Е.Л. Коринеподобные бактерии и близкие к ним организмы. Успехи микробиологии. М.: Наука, 1978, т.13, с.73-83.

20. Голосова Т.В., Мартынова В.А., Осеченская Г.В. Выделение и идентификация микроорганизмов из крови и костного мозга больных острым лейкозом. Пробл.гематол.и пер.крови, I9S9, т.З, с.25-29.

21. Голосова Т.В., Мартынова В.А., Осеченская Г.В., Абакумов Е.М., Ковалева Л.Г. Микробный фактор при осложнениях острого лейкоза. Пробл.гематол.и пер.крови, 1972, т.5, с.7-11.

22. Дикерсон Р.Э. Спираль ДНК. В мире науки, 1984, № 2, с.34-48.

23. Друца В.Л. Радиоизотопное мечение ДНК. В кн.: Молекулярные основы геносистематики. М.: изд.МГУ, 1980, с.35-51.

24. Дуда В.И. Архибактерии новое царство живых организмов.-Природа, 1984, Л 2, с.13-25.

25. Единицы измерения, символы, сокращения. Биохимия, 1979, т.44, с.1338-1341.

26. Ежов Г.И., Киктенко B.C., Березов Т.Т. Содержание нуклеиновых кислот и нуклеотидный состав ДНК у лептоспир. ЖГЭМИ, 1975, т.19, с.233-240.

27. Зайцева Г.Н. Биохимия азотобактера. М.: Наука, 1965. -303 с.

28. Иммунологические адыоввнты. Доклад научной группы ВОЗ, 1978. - 44 с.

29. Кренков И.П., Фомин Б.А. Содержание гуанина и цитозина в ДНК кампилобактерии. В сб.: Научные основы технологии промышленного производства ветеринарных биологических препаратов.- 131 тезисы докл.П Всесоюзной конфер.ВНИИ и ТИБП), М.: 1981, с.80-81.

30. Каган Г.Я., Голосова Т.В., Мартынова В.А., Чумакова Л.П., Коптелова Е.И., Раскова Т.М. Выделение и идентификация микробных агентов из костного мозга и крови больных острым лейкозом. Ж. Микробиол. , 1971, т.9, с.72-76.

31. Каграманова В.К. Исследование нуклеотидного состава ДНК с помощью высокоэффективной ионообменной колоночной хроматографии. В кн.: Молекулярные основы геносистематики, М.: изд.МГУ, 1980, с.6-19.

32. Карева В.А., Философова Т.С. Состав азотистых оснований ДНК некоторых штаммов дифтирийных бацилл. Украинский биохимический журнал, 1966, т.38, с.321-324.

33. Крестовникова В.А. Природа ракового антигена и использование его для диагностики рака. М.: Медицина, 1985. - 106 с.

34. Крестовникова В.А. Сравнительное изучение микроорганизмов, выделенных из опухолей и крови больных людей и животных и возбудителя рака растений. Вестн.сельскохозяйственной науки, 1971, J6 5, с.74.

35. Крылова М.Д., Водорацкая И.И. Уточнение предварительной схемы подразделения возбудителей дифтерии относимых к c.diphteriae v.gravis.- Ж. Микробиол., 1983, В 2, с.44-48.

36. Крылова М.Д., Лысенко A.M. Изучение гомологии ДНК групп I, П И Ш Corynebacterium diphteriae v.gravis, Corynebacterium ulcerans Corynebacterium pseudotuberculosis (ovis). Ж. Микробиол., 1984, В 3, с.48-54.

37. Куцемакина А.З. Нуклеотидный состав ДНК холероподобных и холерных вибрионов. Ж. Микробиол., 1966, J£ 3, с. 10.

38. Мангольд X. Хроматография в тонких слоях. М.: Мир, 1965, - 417 с.- 132

39. Мандель М., Мармур Дж. Определение содержания гуанина и цитозина с помощью кривых плавления. В кн.: Методы исследования нуклеиновых кислот. М.: Мир, 1970, с,183-191.

40. Мандель М., Шильдкраут К., Мармур Дж. Определение содержания гуанина и цитозина в ДНК с помощью ультрацентрифугирования в градиенте плотности CsCl . В кн.: Методы исследования нуклеиновых кислот. М.: Мир, 1970, с.175-183.

41. Мартынова В.А., Голосова Т.В., Каган Г.Я., Чумакова Л.П. Образование Л-форм бактерий у больных лейкозом. Пробл.гемат. и пер.крови, 1971, т.7, с.32-35.

42. Медников Б.М., Ахудов А.Г. Систематика рода благородных лососей Salmo (Pasces, Salmonidae) в свете данных ПО молекулярной гибридизации ДНК. Докл.АН СССР, 1975, т.222, с.774-776,

43. Медников Б.М., Турова Т.П. Анализ термостабильности гибридных ДНК микроорганизмов. Мол.биол., 1978, т.12, с.853-956.

44. Оболенская М.Ю., Платонов О.М., Грабко В.И. Некоторые методические особенности молекулярной гибридизации РНК и ДНК. В кн.: Методы молекулярной биологии, Киев.: Наукова думка, 1979.

45. Остерман Л.А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот. Электрофорез и ультрацентрифугирование. М.: Наука, 1981. - 285 с.

46. Остерман Л.А. Исследование биологических макромолекул электрофокусированием имглуноэлектрофорезом и радиоизотопными методами. М.: Наука, 1983. - 306 с.

47. Петров Н.Б. Методы изучения реассоциации ДНК. В кн.: Молекулярные основы геносистематики. - М.: изд.МГУ, 1980, с.51-78.

48. Плохинский Н.А. Биометрия. М.: МГУ, 1970. - 367 с.

49. Прангишвили Д.А. Молекулярная биология архибактерий. -Мол.биол., 1983, т.17, с.234-248.

50. Примакова Г.А., Турова Т.П., Воробьева Т.И., Фиш A.M., Антонов А.С. Микробиология, 1983, т.52, с.290-293.

51. Румшиский Л.З. Математическая обработка результатов эксперимента. М.: Наука, 1971. - 192 с.

52. Слюсоренко А.Г. Физико-химические методы анализа состава дезоксирибонуклеиновых кислот. В кн.: Строение ДНК и положение организмов в системе. М.: изд.МГУ, 1972.

53. Спирин А.С., Белозерский А.Н. Состав нуклеиновых кислот при экспериментальной изменчивости у бактерий кишечной группы. -Биохимия, 1956, т.21, с.768-775.

54. Спирин А.С., Белозерский А.Н., Шугаева Н.В., Ванюшин Б.Ф. Изучение родовой специфичности нуклеиновых кислот у бактерий. -Биохимия, 1957, т.22, с.774-781.

55. Спирин А.С. Спектрофотометрическое определение суммарного количества нуклеиновых кислот. Биохимия, 1958, т.23, с.656-659.

56. Турова Т.П. Филогения прокариот на основе анализа аминокислотных и нуклеотидных последовательностей. Успехи микробиологии. М.: Наука, 1983, т.18, с.93-112.

57. Уайатт Г. Разделение компонентов нуклеиновых кислот при помощи хроматографии на бумаге. В кн.: Нуклеиновые кислоты. М.: ИЛ., 1957, с.443-463.

58. Хергарут Ф. Методы общей бактериологии. М.: Мир, 1984. - 263 С.

59. Хоулт Дж. Краткий определитель бактерий Берги. М. : Мир, 1980. - 495 с.

60. Шибина Е.А. Применение метода молекулярной гибридизации ДНК в микросистематическом исследовании. В кн.: Молекулярные- 134 основы геносистематики. М.: изд.МГУ, 1980, с.185-203.

61. Barksdale L. Corynebacterium diphteriae and its relatives. Bacteriological Reviews, 1970, v.34, p.378-422.

62. Barksdale L. The genus Corynebacterium. Prokaryotes, 1981, v.2, p.1827-1837.

63. Barton M.D., Hughens K.L. Corynebacterium equis a review. Vterinary bulletin, 1980, v.50, p.65-80.

64. Beaman B.L., Kwang-Shin K., Laneelle M.A., Barksdale L. Chemical characterization of organisms isolated from leprosy patients. J.Bacterid., 1974, v.117, p.1320-1329.

65. Bolton E.T., McCarthy B.J. A general method for the isolation of RNA complementary to ША. Proc.Kat.Acad.Sci., 1962, v.48, p.1390-1397.

66. Book Review. Int.J.Syst.Bacterid.,1982,v.32,p.150-151. Goodfellow M., Board R.G.(eds.). Microbiological classification and identification. Acad.Press, London: 1980. -480 p.

67. Bousfield I.J. A.taxonomic study of some coryneform bacteria. J.Gen.Microbiol., 1972, v.71, p.441-455.

68. Bowie I.S., Grigor M.R. , Dunckley G.G., Loutit M.W., Loutit J.S. The DNA base composition and fatty acid composition of some Gram-positive phomorphic soil bacteria. Soil Biol.Bio-chem., 1972, v.4, p.397-412.

69. Bradly S.G., Brownell G.H. , Clark J. Genetic homologies among noncardiac and other actinomycetes. Canad.J.Microbiol., 1973, v.19, p.1007-1014.

70. Breed R.S. , Murray E.G.D., Hitchens A.P. (eds.) Bergey's manual of determinative bacteriology. 6th ed., 1948, Baltimore: Williams & Wilkins.

71. Breed R.S., Murray E.G.D., Smith N.R.(eds.) Bergey's manual of determinative bacteriology. 7th ed., 1957, Baltimore: Williams & Wilkins.

72. Brendle J.J., Rogul M., Alexander A.D. Deoxyribonucleic acid hybridisation among selected Leptospira serotypes. Int.J. Syst.Bacteriol., 1974, v.23, p.298-307.

73. Brenner D.J. DNA reassociation in the taxonomy of enteric bacteria. Int. J.Syst.Bacterid., 1973, v.23, p.298-307.

74. Brenner D. J., Fanning G.R., Steigerwalt A.G. Deoxyribonucleic acid relatedness among Erwiniae and other Enterabacteria-ceae. Int.J.Syst.Bacteriol., 1974, v.24, p.197-204.

75. Britten R.J., Kohne D.E. Repeated sequences in DNA. -Science, 1968, v.161, p.529-540.

76. Buchanan R.E., Gibbons N.E. (eds.). Bergey's manual of determinative bacteriology. 8th ed., 1974, Baltimore: Williams & Wilkins.

77. Carle P., Bove J.M. Genome size determination. Meth. Mycoplasmol., 1983, v.l, p.309-311.

78. Carle P., Saillard C., Bove J.M. DNA extraction and purification. Meth.Mycoplasmol., 1983, v.l, p.295-299.

79. Chargaff E. Nucleic acids of microorganisms. Heme Congres.Intern.de Biochemie. Simp.sux metabolism microbien., Paris, 1952, v.41.

80. Charlier G., Dekeyser P., Florint A., Strobbe R., DeLey J. DNA base composition and biochemical characters of Campylobacter strains. Antonie v.Lecuwenhoek, 1974, v.40, p.145-151»

81. Cohn W.E. The separation of purine and pynimidine bases and of nucleotides by ion exchange. Science, 1949, v.109, p«377-378.

82. Collins M.D., Goodfellow M., Minnikin D.E. A survey of the structures of a mycolic acids in Corynebacterium and related taxa. J.Gen.Microbiol., 1982, v.128, pJ29-149.

83. Collins-Thompson D.L. , S/Srhang Т., Witter L.D. , Ordal L.J. Taxonomic consideration of Microbacterium lacticum, Microbac-terium flavum and Microbacterium thermosphactum. Int.J.Syst. Bacteriol., 1972, v.22, p.65-72.

84. Conn J. A protest against the misuse of the generic name Corynebacterium. J.Bacteriol., 1947, v.54, p.10-16.

85. Crombach W.H.J. DNA base composition of soil arthrobac-ters and other coryneforms from cheese and sea fish. Antonie v. Leeuwenhock, 1972, v.38, p.105-120.

86. Crombach W.H.J. , van Yeen VI.L. , Bots W.C.P.M. DNA base composition of some shearted bacteria. Antonie v.Leeuwenhoek, 1974a, v.40, p.217-220.

87. Crombach W.H.J. Thermal stability of homologous and heterologous bacterial ША duplexes. Antonie v. Leeuwenhoek, 1974c, v.40, p.133-141.

88. Crombach W.H.J. ША base ratio and DM hybridisation studies of coryneform bacteria, mycobacteria and neocardia. -In: Bousfield I.J., Calley A. G. (eds.). Coryneform bacteria, London, N.Y.: Acad.Press, 1978, p.161-179.

89. Cummins C.S. Chemical composition and antigenic structure of cell walls of Corynebacterium, Mycobacterium, Nocardia, Actinomyces and Artrobacter. J.Gen.Microbiol., 1962, v.28,p.35-50.

90. Cummins C.S. Cell wall composition in Corynebacterium bovis and some other corynebacteria. J.Bacterid., 1971, v.105, p.1227-1228.

91. Cure E.L., Keddie R.M. Method for the morphotiological monitoring of Environments. London, N.Y.: Acad.Press, 1973, S.7, p.123-135.

92. Danhaive P., Hoet P., Cocito C. Base compositions and Homologies of Deoxyribonucleic Acids of Corynebacteria Isolated from Human Leprosy Lesions and Related Microorganisms. Int.J. Syst.Bacterid., 1982, v.32, p.70-76.

93. DeLey J. The quick approximation of ША base composition from absorbancy ratios. Antonie v.Leeuwenhoek, 1967, v.33, p.203-208.

94. DeLey J. Compositional nucleotide distribution and the theoretical prediction of homology in bacterial ША. J.Theor. Biol., 1969, v.22, p.89-116.

95. DeLey J., Cafton H., Reynaerts A. The quantitative measurement of DNA hybridization from renaturation rates. Eur.J. Biochem., 1970, v.12, p.133-142.

96. DeLey J., DeSmedt J. Improvements of the membrane filter method for DNA-rRNA hybridization. Antonie v.Leeuwenhoek, 1975, v.41, p.287-307.

97. DeLey J., Segers P., Gilles M. Intra- and intergeneric similarities of Chromobacterium and Jantlinobacterium ribosomal ribonucleic acid cistrons. Int.J.Syst.Bacteriol., 1978, v.28, p.154-168.

98. Denhardt D.T. A membrane-filter for the detection of complementary DNA. Biochem.Biophys.Res.Commun., 1966, v.23, p. 641-646.

99. DeSmedt J., DeLey J. Intra- and intergeneric similarities of agrobacterium ribosomal ribonucleic acid cistrons. Int.J. System.Bact., 1977, v.27, p.222-240.

100. Diller I. Occurrence of mycotic granules in mouse tissues infected with an acid-fast organism. Mycopatol.,Mycol. Appl., 1962, v.16, p.255-258.

101. Diller I., Donnelly A. Experiments with mammalian tumor isolates. Ann.N.Y.Acad.Sci., 1970, v.174, p.655.

102. Doi R.H., Igarashi R.T. Conservation of ribosomal and messenger ribonucleic acid cistrons in Bacillus species. J.Bacteriol. , 1965, v.90, p.384-389.

103. Fox G.E. , Pechman K.R., Y«oese C.R. Comparative cataloging of 16 S ribosomal RNA: Molecular approach to procaryotic systematics. Int.J.Syst.Bacteriol., 1977, v.27, p.44-57.

104. Gibson T. The taxonomy of the genus Corymbacterium. -Att. del VI Congresso Internazionale di Microbiologia, 1953, Roma, 1, p.16-20.

105. Gilles M., DeLey J., DeCleine M. The determination of molecular weight of bacterial genome DNA from renaturation rates. Eur.J.Biochem., 1970, v.12, p.143-153.

106. Gillespie D., Spiegelman S. A quantitative assay for DNA-RNA hybrids with DNA immobilized on a membrane. J.Molec.Biol., 1965, v.12, p.829-847.

107. Gillespie S., Gillespie D. Ribonucleic acid deoxyribonucleic acid hybridization in aqueous solution and in solution containing formamide. - Biochem.J., 1971, v.125, p.481-487.

108. Goodfellow M., Minnikin D.E. Introduction to the coryn-form bacteria. Prokaryotes, 1981, v. 2, p.1811-1826.

109. Hall R.H. Separation of nucleic acid degradation products on paritition columns. J.Biol.Chem., 1962, v.237, p.2283-2288.

110. Herdman B.H., Janvier M., Rippka R., Stanier R. Genome size of cyanobacteria. J.Gen.Microbiol., 1979, v.Ill, p.73-85*

111. Hill L.R. An index to deoxyribonucleic acid base composition of bacterial species. J.Gen.Microbiol., 1966, v.44, p.419-437.

112. Hill E.B., Wayne L.G., Gross W.M. Purification of mycobacterial deoxyribonucleic acid. J.Bacterid., 1972, v.Ill,p.1033-1039.

113. Hollander R., Pohl S. Deoxyribonucleic acid base composition of bacteria. Zbl.Bacterid.Parasitenk.Infekt.undHyg. , 1980, A.246, p.236-275.

114. Hoyer B.H., McCullough N.B. Polynucleotide homologies of Brucella geoxyribonucleic acids. J.Bacteriol., 1968, v.95, p.444-448.

115. Huang P.O., Rosenberg E. Determination of DNA base composition via depurination. Analyt.Biochem., 1966, v.16, p.107-113.

116. Imaeda T., Barksdale L., Kirchheimer W.P. Deoxyribonucleic Acids of Mycobacterium Lepraemurium: Its Genome Size, Base Ratio, and Homology with Those of Other Mycobacteria. Int. J.Syst.Bacterid., 1982a, v.32, p.456-458.

117. Imaeda Т., Kirchheimer W.F., Barksdale L. DNA isolated from Mycobacterium leprae: genome size, base ratio and homology with other related bacteria as determinated by optical DNA-DNAreassociation. J.Bacterid., 1982Тэ, v.150, p.414-417.

118. Irgens R.L. Meniscus, a new genus of aerotolerant, gas-vacuolated bacteria. Int.J.Syst.Bact., 1977, v.27, p.38-43

119. Jackson A. A specific types of microorganisms isolated from animal and human cancer: Bacteriology of the organism. -Growth, 1954, v.18, p.37-44.

120. Keddie R«M. What do we mean by Coryneform bacteria? In: Bousfield I.J., Calley A.G. (eds.). Coryneform bacteria, London, N.Y.: Acad.Press, 1978, p.1-12.

121. Keddie R.M., Cure C.L. Cell wall composition of coryneform bacteria. In: Bousfield I.J., Callely A.G.(eds.). Coryneform bacteria. London, K.Y.: Acad.Press, 1978, p.47-83.

122. Keddie R.M., Jones D. Saprophytic, aerobic coryneform bacteria. Prokariotis, 1981, v.2, p.1838-1878.

123. Kohne D.E. Isolation and characterization of bacterial ribosomal RNA cistrons. Biophys.J., 1968, v.8, p.1104

124. Komagata K., Yamada Y., Ogawa H. Taxonomic studies on coryneform bacteria. I. Division of bacterial cells. J.Gen.Ap. Microbiol., 1969, v.15, p. 243-259.

125. Komura I., Yamada K., Otsuka S., Komagata K. Taxonomic significance of phospholipids in coryneform and nocardioform bacteria. J.Gen.Appl.Microbiol., 1975, v.22, p.251-261.

126. Lehman K.B., Neumann R. Atlas und Grundriss der Bacterio-logie und Lehrbuch der speciellen bacteriologischen Diagnostic. -1st edition (1896). Munchen: J.F. Lehmann from Goodfellow M., Minnikin D.E. (1981).

127. Miniatis Т., Fritsch E.F., Sambrook J. Molecular cloning. Cold spring harbor laboratory, 1982. - 545 p.

128. Marmur J. A procedure for isolation of deoxyribonucleic acid from micro-organisms. J.Mol.Biol., 1961, v.3, p.208-218.

129. Marmur J., Doty P. Determination of the base composition of deoxyribonucleic acid from its thermal denaturation temperature. J.Mol.Biol., 1962, v.5, p.109-118.

130. Marmur J., Falkow S. , Mandel M. New approaches to bacterial taxonomy. Ann.Rev.Microbiol., 1963, v.17, p.329-372.

131. Marmur J., Rownd R., Shildkrant C.L. Denaturation and renaturation of deoxyribonucleic acid. Progr.Nucleic Acid.Res. mol.Biol., 1963, v.1, p.231-300.

132. McCarthy B.J., Bolton E.T. An approach to the measurement of genetic relatedness among organisms. Proc.Nat.Acad.Sci., 1963, v.50, p.156-164.

133. McCarthy B.J. The evolution of base sequences in polynucleotides. Acid.Res.Mol.Biol., 1965, v.4, p.129-160.

134. Moore R.L. Nucleic acid reassociation as a guide to genetic relatedness among bacteria. Current Topics in Microbiol. Immunol., 1974, v.64, p.105-128.

135. Mordarski M., Goodfellow M., Szyba K., Pulverer G., Tkacz A. Classification of the "rodochrous" complex and allied taxa based upon deoxyribonucleic acid reassociation. Int.J.System.Bact. , 1977a, v.27, p.31-37.

136. Mordarski M., Schaal K.P., Szyba K., Pulverer G., Tkacz A. Interrelation of Nocardia asteroides and related taxa as indicated by deoxyribonucleic acid reassociation. Int.J.System.Bact., 1977b, v.27, p.66-70.

137. Randerath K. Two-dimensional separation of nucleic acid bases on cellulose layers. Nature, 1965, v.205, p.908.

138. Rogosa M., Cummins C.S., Lelliott R.A., Keddie R.M. Coryneform group of bacteria. Inj Bergy's Manual of Determinative Bacteriology. 8th edition, 1974, p.599-632. Ed. by Buchanan R.E., Gibbons N.E. Baltimore: Williams & Wilkins.

139. Schildkraut C.L., Marmur J., Doty P. The formation of hybrid DNA molecules and their use studies of DNA homologies. -J.Molec.Biol., 1961, v.3, p.595-617.

140. Seibert F., Feldman F., Davis R., Richand I. Morphological, biological and immunological studies an isolates from turners and leukemic bloods. Ann.N.Y.Acad., 1970, v.171, p.690-728.

141. Seibert F., Yemans F., Baker J., Davis R. Bacteria and tumors. Trans.N.Y.Acad.Sci., 1972, v.34, p.504.

142. Sguros P.L. New approach to the mode of formation of classical morphological configurations by certain coryneform bacteria. J.Bacteriol., 1957, v.74, p.707-709.

143. Skyring G.M., Quadling C. Soil bacteria: a principal component analysis and guanine-cytosine contents of some artrobac-ter coryneform soil isolates and of some named cultures. Canad. J.Microbiol., 1970, v.16, p.95-106.

144. Sneath P.H.A., Jones D. Brochothrix a new genus tentatively placed in the family Lactobacillaceae. Int.J.Syst.Bacteriol. , 1976, v.26, p.102-104.

145. Stackebrandt E. Waht is an actinomycete? Actinomycetes, 1981-1982, v.16, p.132-138.185» Stackebrandt E., Fiedler F. DNA-DNA homology studies among strains of Arthrobacter and Brevibacterium. Arch.Microbiol., 1979, v.120, p.289-295.

146. Starr M.P., Kuhn D.A. On the origin of V-forms in Arthro-bacter atrocyaneus. Archiv fur Mikrobiologie, 1962, v.42, p.289-298.

147. Starr M.P., Mandel M., Murata N. The phytopathogenic coryneform bacteria in the light of DNA and DNA-DNA segmental homology. J.Gen.Appl.Microbiol., 1975, v.21, p.13-26.

148. Stuart S.E., Welshimer H.J. Taxonomic reexamination of Listeria Pirie and transfer of Listeria grayi and Listeria murrayi to a new genus Murraya. Int.J.Syst.Bacteriol., 1974, v.25, p. 324-328.

149. Stuy J.H. The nucleic acids of Bacillus cerreus. J. Bacteriol., 1958, v.76, p.179-184.

150. Effects of deamination cytosine. Biochem.Biophys.Acta, 1973, v.294, p.416-424.

151. Veldkamp H. Saprophytic coryneform bacteria. Ann.Rev. Microbiol., 1970, v.24, p.209-240.

152. Veron M., Chatelain R. Taxonomic study of the genus Campylobacter Sebald and Veron, and disignation of the neotype strain for the type species, Campylobacter fetus (Smith and Taylor) Sebald and Veron. Int. J.Syst .Bacterid. , 1973, v.23, p. 122-134.

153. Wayne L.G., Gross W.M. Base composition of deoxyribonucleic acid isolated from mycobacteria. J.Bacteriol., 1968, v.96, p.1915-1919.

154. Wyatt G.R. Separation of nucleic acid components by chromatography on filter paper. In: Chargaff E., Davidson J.N. (eds.). The nucleic acids. N.Y.: Acad.Press, 1955, v.l, p.243-265»

155. Yamada K., Komagata K. Taxonomic studies on coryneform bacteria. II. Principal amino acids in the cell wall and their taxonomic significance. J.Gen.Apl.Microbiol., 1970a, v.16,p.103-113.

156. Yamada K., Komagata K. Taxonomic studies on coryneform bacteria. III. DNA base composition of coryneform bacteria. J. Gen.Apl.Microbiol., 1970b, v.16, p.215-224.

157. Yamada K., Komagata K. Taxonomic studies on coryneform bacteria. IV. Morphological, cultural, biochemical and physiological characteristics. J.Gen.Appl.Microbiol.,1972a, v.18, p.399-416.

158. Yamada K., Komagata K. Taxonomic studies on coryneform bacteria V. Classification of coryneform bacteria. J. Gen.Appl. Microbiol., 1972b, v.18, p.417-431.

159. Yankofsky S., Spiegelman S. The identification of the ribosomal RNA cistron by sequence complementarity. I. Specificity of complex formation. Proc.Nat.Acad.Sci., 1962a, v.48, p.1069-1078.

160. Yankofsky S., Speigelman S. The identification of the ribosomal RNA cistron by sequence complementarity. II. Saturation of and competitive interaction at the r-RNA cistron. Proc. Nat.Acad.Sci., 1962b, v.48, p.1466-1472.

161. Yankofsky S., Spiegelman S. Distinct cistrons for the two ribosomal RNA components. Proc.Nat.Acad.Sci., 1963, v.49, p.538-544.