Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Сравнительная характеристика биологической активности комплексных соединений цинка с некоторыми антимикробными средствами

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Сравнительная характеристика биологической активности комплексных соединений цинка с некоторыми антимикробными средствами"

а правах рукописи

Краснов Андрей Александрович

СРАВНИТЕЛЬНАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ КОМПЛЕКСНЫХ СОЕДИНЕНИЙ ЦИНКА С НЕКОТОРЫМИ АНТИМИКРОБНЫМИ СРЕДСТВАМИ

03.00.07 - микробиологии

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Саратов - 2007

003161760

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Ведущая организация'

ГОУ ВПО «Ульяновский государственный университет»

Защита диссертации состоится «14» ноября 2007г в 09 00 часов на заседании диссертационного совета Д 220 061 04 в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Саратовский государственный аграрный университет им НИ Вавилова» по адресу 410012, г Саратов, Театральная пл , 1 Тел/факс (8-8452) 69-23-46

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Саратовский ГАУ» по адресу 410005, г Саратов, ул Соколовая, 335

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор Лазурина Людмила Петровна

Официальные оппоненты доктор биологических наук, профессор

Щербаков Анатолий Анисимович

доктор медицинских наук Плотников Олег Петрович

Автореферат разослан университета \vwvv ги

2007 г и размещен на сайте

Ученый секретарь

диссертационного совета, профессор

Л В Карпунина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы

Проблема лечения гнойно-септических заболеваний далека от разрешения и в современных условиях представляет определенные трудности в связи с появлением резистентных и полирезистентных форм микроорганизмов к имеющимся антибактериальным препаратам (Кузин, 1983, Гостшцев,1980, Стручков, 1983)

В последние годы повысился интерес к наиболее рациональному использованию уже известных лекарственных средств, а также к возможности их химической модификации, в том числе, к созданию комплексных соединений с металлами, так как одним из факторов, осложняющих течение гнойной инфекции, является нарушение баланса микроэлементов (Авцын, 1991, Азизов, 1980) Нередко комплексные соединения металлов с лекарственными препаратами обладают не только большей биологической активностью по сравнению с исходными лигандами, но имеют и более широкий спектр действия (Юданова, 2003)

Поэтому изучение биологической активности новых комплексных соединений с металлами является актуальной задачей в связи с возможным их практическим использованием и может служить теоретической основой для целенаправленного синтеза соединений с заданными свойствами

Целью работы явилось изучение специфических свойств новых комплексных соединений цинка с производными нитроимидазота, адамантана и нитро-фурана in vitro и in vivo, а также оценка возможности их использования в полимерных лекарственных формах для лечения стафилококковых инфицированных ран

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи

- изучить специфическую активность новых комплексных соединений цинка (антимикробная и антигрибковая активность, влияние на иммунный статус организма) и выявить наиболее эффективные из них для получения лекарственных препаратов на их основе,

- исследовать влияние новых комплексных соединений на течение экспериментальной стафилококковой инфекции,

- обосновать и экспериментально разработать состав лекарственной формы на полимерной основе, содержащей комплексные соединения цинка сульфата, для лечения местных гнойно-воспалительных процессов,

- изучить на модели инфицированной раны биологическую акгивнрстъ разработанных лекарственных форм антимикробного действия в отношении широко распространенных возбудителей гнойных инфекций

Научная новизна работы определяется

- впервые изученной биологической активностью новых комплексных соединений цинка с производными нитроимидазола, адамантана и нитрофурана,

- выявленным антимикробным, фунгацидным и иммуномодулирующим действием новых комплексных соединений, а также установлением возможности их использования в различных лекарственных формах с целью применения в дерматологии,

- установленной высокой антимикробной активностью новых комплексов в отношении стафилококковой инфекции в эксперименте,

- обоснованными и экспериментально разработанными составами и технологией полимерных лекарственных форм, содержащих синтезированные комплексы и обладающих антимикробной активностью в отношении широко распространенных возбудителей гнойных инфекций,

- установленной высокой ранозаживляющей и регенерирующей активностью разработанной лекарственной формы при лечении инфицированной раны в эксперименте на животных

Практическая значимость работы

Результаты проведенных исследований позволяют прогнозировать поиск путей модификации известных лекарственных препаратов и биологически активных соединений с целью получения эффективных антимикробных препаратов, не подавляющих естественный иммунитет животных

Комплексообразование цинка с производными нитроимидазола, адамантана и нитрофурана позволяет повысить антимикробную и противогрибковую активность, а также расширить спектр действия комплексов, и позволяет рекомендовать их для дальнейшего изучения в качестве препаратов при лечении инфекций, вызванных различными видами облигатно и факультативно анаэробных микроорганизмов

Для профилактики и лечения гнойно-воспалительных процессов кожи в первой фазе их протекания предложены лекарственные формы на полимерной основе, обеспечивающие выраженное антимикробное, дегидратирующее, обезболивающее и ранозаживляющее действие и сокращающие сроки лечения

По материалам диссертации опубликованы «Методические рекомендации по изготовлению, контролю качества и использованию гелей на гидрофильных основах, содержащих производное нитрофурана и биокомплекс цинка (II)»

Получено положительное решение по заявке №2005140128/15(044726) на патент «Средство для лечения гнойно-воспалительных процессов кожи и слизистых оболочек различной этирлогии»

Материалы диссертации используются в учебных курсах и научно-исследовательской работе Курского государственного медицинского университета, Курского государственного технического университета, ООО «Техно-фарм»

Основные положения, выносимые на защиту

Новые комплексные соединения цинка (II) проявляют выраженную антимикробную активность и относятся к классу малотоксичных веществ Комплек-сообразование лекарственных средств с металлами способствует появлению иммуномодулирующего действия

Комплексы цинка (II) с производными нитроимидазола, адамантана и нит-рофурана характеризуются высокой антимикробной активностью на модели стафилококковой инфекции

Разработанный состав и технология полимерных лекарственных форм, содержащих комплексные соединения цинка с производными нитроимидазола, адамантана и нитрофурана, обладающих антимикробной активностью в отношении широко распространенных возбудителей гнойных инфекций

Состав и технология получения трансдермальных терапевтических систем для чрезкожного введения синтезированных биокомплексов Апробация результатов работы

Основные положения работы представлены на научных конференциях Курского государственного медицинского университета (2000 - 2004 г г), Межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы хирургии» (Курск, 2005 г ), научной конференции Российской академии естествознание «Современные проблемы науки и образования», посвященной 10-летию РАЕ (Москва, 2006 г ), межкафедральной научной конференции Курского государственного медицинского университета (Курск, 2007 г )

Публикации По теме диссертации опубликовано 19 работ, 2 статьи в издании, рекомендованном ВАК РФ.

Структура и объем диссертации Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, 3 глав экспериментальных исследований, выводов и списка литературы Содержит 120 страниц машинописного текста, 47 таблиц Библиографический указатель включает 178 источников литературы

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

В качестве объектов исследования использованы образцы дельной крови, некоторые органы и биологические ткани экспериментальных животных Объем исследования составил 410 проб биологических объектов (кровь, ткани и органы животных), 152 объекта для гистологического и 494 пробы для микробиологического исследования синтезированных комплексов и лекарственных форм, т е всего 1056 биопроб

В качестве биологически активных лигандов для синтеза металлоком-плексных соединений с антимикробными препаратами были выбраны производные нитроимидазола, адамантана и нитрофурана, которые в последние годы часто применяются для лечения и профилактики различных инфекционных осложнений Коммерческие препараты были получены в ОАО «Фармстандарт -Лексредства» В качестве металла-комплексообразователя для синтеза был выбран цинк (II)

Исследование антимикробной активности в отношении облигатных анаэробных микроорганизмов проводили методом двухслойной агаровой культуры Для исследования антимикробного действия в отношении анаэробных микроорганизмов были использованы как спорообразующие, так и нес-порообразующие тест-культуры микроорганизмов из коллекции ГИСК им Л А Тарасовича (г Москва) Clostridium perjringens 271, Bacteroides fragtlis 323, Bacteroides melaninogenicus 1011, Fusobacterium necrophorum VPJ 2523, Peptococcus magnus 336, Peptostreptococcus HC

Антибактериальную активность лигандов, а также их комплексных соединений с цинком и полимерных лекарственных форм, приготовленных на их основе, в отношении факультативно анаэробных микроорганизмов определяли in vitro методом диффузии в агар (Государственная Фармакопея XI изд , 1990) В соответствии с рекомендациями ВОЗ и ГФ для оценки активности новвдх биокомплексов в качестве тест-культур использовали штаммы факультативно-анаэробных бактерий и грибов из коллекции ГИСК им Л А Тарасевича (г Москва) Staphylococcus aureus АТСС 25923, Staphylococcus aureus 209-Р, Bacillus subtihs АТСС 6633, Bacillus cereus ATCC 10702, Escherichia coll ATCC 25922, Proteus vulgaris ATCC 4636, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Candida albicans NCTC 2625

Биологическую активность биокомплексов in vivo изучали на белых мышах (весом 18-20 г) при моделировании стафилококковой инфекции Для этого мышей внутрибрюшинно заражали суточной агаровой культурой

Staphylococcus aureus № 554 в дозе, вызывающей гибель 50% мышей в течение 7 суток (1х107 микробных тел/мл), и через сутки после заражения в течение 7 дней ежедневно внутримышечно вводили исследуемые препараты Терапевтическую эффективность биокомплексов оценивали по выживаемости животных Определение токсичности биокомплексов проводили на мышах при внутри-брюшинном способе введения (Арзамасцев, 1988, Беленький, 1963)

Для изучения действия новых биокомплексов на гуморальный иммунный ответ крысам-самцам линии Вистар внутримышечно вводили исследуемые препараты в твине и физиологическом растворе в течение 5 дней с последующей иммунизацией животных эритроцитами барана и определением уровня развития гуморального иммунного ответа путем определения в селезенке количества антителообразующих клеток (Мальберг, 1987, Зигль, 1987)

Местноанестезирующую активность разрабатываемых мазей изучали в опытах in vivo методом Ренье-Валета, в основе которого лежит изменение чувствительности роговицы глаза кролика при нанесении на нее исследуемого образца, выражающееся в ответной реакции на раздражитель в виде смыкания века (Панкрушева, 1978)

Изучение влияния биокомплексов на показатели врожденного иммунитета проведено на крысах-самцах линии Вистар массой 100-120 г Препараты вводили внутримышечно один раз в сутки в течение 11 дней По истечении определенного времени животных усыпляли эфиром, вскрывали грудную полость и производили забор крови из нисходящей части грудной аорты Из факторов неспецифической защиты определяли фагоцитарную активность лейкоцитов, активность бактерицидных систем фагоцитов (кислородзависимых и кислородне-зависимых), резервную функцию системы фагоцитоза, уровень сывороточного лизоцима и бактерицидную активность сыворотки крови (БАС)

Фагоцитарную реакцию оценивали в отношении S aureus 209-Р с определением процента активных фагоцитов (фагоцитарный индекс) и числа поглощенных частиц в пересчете на 1 фагоцитирующую клетку (фагоцитарное число) Завершенность фагоцитоза определяли как процент микробных клеток, подвергшихся разрушению фагоцитами при двухчасовом инкубировании

Состояние кислородзависимых бактерицидных систем фагоцитов оценива-чи m vitro с помощью НСТ-теста, отражающего способность супероксиданиона восстанавливать нитросиний тетразолий в диформазан НСТ-тест оценивали по степени восстановления нитросинего тетразолия в спонтанной и продигиозан-стимулированной реакциях при учете внутриклеточных отложений диформаза-на В работе использовали НСТ фирмы «Lachema» (Чехия) Резервную функ-

цию системы фагоцитоза оценивали как разницу между показателями стимулированного и спонтанного теста (Виксман, Маянский, 1979)

Для определения активности кислороднезависимой бактерицидной системы использовали лизосомально-катионный тест, основанный на определении лизосомальных катионных белков в гранулах лейкоцитов периферической крови в мазках, окрашенных бромфеноловым синим (Шубич, 1974, Пигаревский, 1979)

Уровень лизоцима определяли по методу О В Бухарина (1997), бактерицидную активность сыворотки - по F D Schoenknercht (1985)

Для изучения терапевтической эффективности полимерных лекарственных средств, содержащих новые биокомплексы, на крысах-самцах линии Вис-тар моделировали инфицированную гнойную рану Под наркозом в асептических условиях наносилась рана на предварительно выбритой спине крысы по паравертебральной линии 2x2 см2 (глубиной 15 мм), которую инфицировали 0,2 мл взвеси суточной агаровой культуры S aureus № 552, содержащей 1х109 микробных тел/мл На 3 сутки от момента инфицирования развивалось острое гнойное воспаление, формировался выраженный воспалительный процесс с отеком и гиперемией кожи Начиная с 3 суток проводилось лечение раны мазями, содержащими биокомплексы металлов с метронидазолом Морфологические исследования тканей раны, изучение обсемененности и показателей иммуннореактивности производили после декапитации животных на 3, 5, 7, 9, 14 и 21 сутки Динамику репаративных процессов в ране оценивали с учетом наличия и характера воспалительной реакции, состояния краев и дна раны, сроков очищения раны от некротических тканей и появления грануляций, сроков эпителизации раны Скорость заживления раны определяли в динамике заживления путем измерения площади раны, зарисованной перманентным маркером на прозрачной диапозитивной пленке Гистоструктурные изменения в раневых биоптатах изучали при исследовании препаратов, окрашенных гематоксилин-эозином Изучение иммунореактивности производилось по изложенным выше методикам

Все полученные данные подвергнуты статистической обработке с определением критерия Стьюдента при помощи программы «Biostat» на IBM PC компьютере

Результаты исследований и их обсуждение

Актуальность проблемы профилактики и лечения гнойной инфекции сохраняется и в настоящее время, несмотря на наличие ряда высокоэффективных

антибактериальных препаратов Внимание к этой проблеме объясняется широким распространением гнойно-воспалительных заболеваний, частота которых не уменьшается, а тяжесть их течения может приводить к летальным исходам Кроме того, теперь уже очевидно, что необоснованное использование антибиотиков привело к подавлению иммунных реакций организма при гнойной инфекции и к значительной активизации условно-патогенной микрофлоры Все это побуждает исследователей к поиску новых противомикробных лекарственных средств для лечения гнойной инфекции не только не понижающих, но и повышающих естественный иммунитет

Одним из путей решения этой проблемы является химическая модификация уже существующих лекарственных средств путем их комплексообразова-ния с металлами, что способствует повышению фармакологической активности исходного лиганда, а также расширению спектра антимикробной активности

С этой целью нами был синтезирован ряд комплексных соединений цинка с производными нитроимидазола (1-(Р-оксиэтил)-2-метил-5-нитроимидазол) (MN), адамантана (Ы-(1-адамантил)-2-гидрокси-4-оксо-4-(п-толил)-кротонамид) (HAd) и нитрофурана (5-нитрофурфурол семикарбазон) (NFS) и Ы-(5-нитро-3-фурфурияиден)-1 -амино-гидантоин) (NFA) и изучена их биологическая активность, что может служить теоретической предпосылкой для целенаправленного синтеза комплексных соединений с заданными свойствами

В процессе создания нового биологически активного вещества (БАВ) постоянно уточняется справедливость гипотез о механизме патологического процесса и возможных способах его коррекции Поскольку любое БАВ всегда проявляет большое количество эффектов, целесообразно на ранних стадиях прогнозировать спектр его активности, включая основные фармакологические эффекты, механизмы действия и специфическую токсичность, что обеспечивается применением компьютерной системы PASS (Prediction of Activity Spectra for Substance)

С помощью этой программы нами был спрогнозирован спектр основных фармакологических эффектов новых комплексных соединений Установлено, что введение цинка в структуру лекарственного вещества, в частности, производного 5-нитроимидазола, прогнозирует увеличение антибактериальной ак-тигнрсти комплексного соединения по сравнению с лигандом, а также противовоспалительной, дерматологической, противоаллергической и противоязвенной активности Кроме того, для металлокомплексов прогнозируется проявление новых активностей таких как анальгезирующая, противовирусная, антисептическая и др

В эксперименте установлено, что комплексообразование изучаемых лигавд с цинком позволяет увеличить их антимикробную активность (табл 1)

Таблица 1

Антимикробная активность лигандов и их комплексных соединений с цинком в отношении факультативно анаэробных микроорганизмов

Тест-культура Диаметр зоны задержки роста бактерий препаратами в мм (М±т)

HAd HAdZn MN MNZn NFS NFSZn NFA NFAZn

5 аигеил ATCC 25923 8,9±0,3 18,7±0,4 9,2±0,2 19,5±0,4 10,7±0,3 20,5±0,3 9,8±0,3 19,9±0,2

í aureus 209-Р 8,2±0,3 16,5 ±0,3 8 2 ±0,2 |7,2±0,3 11,1 ±0,3 20,1 ±0,3 8,9±0,2 21,4±0,3

В mbnln ATCC 6633 8,9±0,3 18,4±0,4 9,8±0,2 !9,0±0,4 10,2±0,2 21,0±0,4 9,7±0,2 21,6±0,3

В cereus ATCC 10702 7,0±0,2 16,2±0,3 б,8±0,3 16,8±0,4 8,7±0,2 19,2±0,4 7,5±0,3 19,8±0,2

Ecoii ATCC 25922 7 б±0,2 16,4±0,3 8,2±0 3 17,2±0,3 11,3±0,3 22,5±0,4 8,8±0,2 22,0±0,3

Р aeruginosa ATCC 27853 6,4±0,2 15 8±0 2 7,0±0,2 16,3±0,4 10,5±0,3 23,4±0,3 7,3±0,3 20,4±0,2

С albicans NCTC 2625 6,0±0,2 15,0±0,2 8,0± 0,2 16,0±0,2 7,7±0,2 17,2±0,2 7,9± 0,3 18,0±0,2

Примечание HAd - производное адамантана, HAdZn - биокомплекс цинка с адамантаном, различия данных по отношению к адамантану достоверно (Р<0,05), MN - производное нитроимидазола (метронидазол), MNZn - биокомплекс цинка с метронидазолом, различия данных по отношению к метрокидазолу достоверно (Р<0,05), NFS - производное нитрофурана (фурацилин), NFSZn - биокомплекс цинка с фурацилином, различия данных по отношению к фурацилину достоверно (Р<0,05), NFA - производное нитрофурана (фурадокин), NFAZn - биокомплекс цинка с фурадонином, различия данных по отношению к фурадонину достоверно (Р<0 05)

Установлено, что комплексные соединения цинка с производными адамантана, метронидазола, фурацилина и фурадонина в отношении всех изученных тест-микробов проявляли более высокую по сравнению с лигандами антимикробную активность, т к зона задержки роста в отношении исследованных микроорганизмов значительно увеличивалась Определение минимальных подавляющих концентраций изучаемых комплексных соединений выявило их изменение в диапазоне от 0,31 мг/мл до 5,00 мг/мл в отношении исследованных штаммов Таким образом, было установлено, что комплексообразование цинка с различными по строению лигандами повышает их активность in vitro

Работы многих авторов показали, что антимикробная активность in vitro не всегда совпадает с активностью in vivo, поэтому нами была изучена эффективность биокомплексов цинка на мышах при внутрибрюшинном заражении их культурой S aureus № 554 В опытах наблюдалось увеличение биологической активности биокомплексов цинка in vivo по сравнению с исходными лигандами Выживаемость мышей при лечении комплексными соединениями цинка с

производными адамантана составила 80% В случае использования для лечения комплексных соединений цинка с метронидазолом, фурацилином и фурадони-ном практически все животные были живы

Поскольку известно, что микроэлементы принимают активное участие в процессах иммуногенеза, нами было изучено влияние биокомплексов цинка на показатели иммунного ответа (табл 2)

Таблица 2

Иммунномодулирующие свойства биокомплексов цинка

N2 гр Условия опыта Сроки иммунизации, сутки АОК тыс/орган (М±ш)

1 Введение физиологического раствора и иммунизация ЭБ 5 2,91±0,34

2 Введение производного адамантана и иммунизация ЭБ 5 3,02±0,32

3 Введение биокомплекса цинка с производным адамантана и иммунизация ЭБ 5 4,25±0,41' 2

4 Введение метронидазола и иммунизация ЭБ 5 2,89±0,34

5 Введение биокомплекса цинка с метронидазолом и иммунизация ЭБ 5 4,39±0,48' 4

6 Введение фурацилина и иммунизация ЭБ 5 3,94+1,02

7 Введение биокомплекса цинка с фурацилином и иммунизация ЭБ 5 5,54±0,84' 6

8 Введение фурадонина и иммунизация ЭБ 5 3,14±0,50

9 Введение биокомплекса цинка с фурадонином и иммунизация ЭБ 5 5,65±0,62' 8

Примечание 1 - достоверность различий средних относительно 1-й группы (Р<0,05), 2 - достоверность различий средних относительно 2-й группы (Р<0,05), 4 -достоверность различий средних относительно 4-й группы (Р<0,05), 6 - достоверность различий средних относительно 6-й группы (Р<0,05), 8 - достоверность различий средних относительно 8-й группы (Р<0,05)

Введение изучаемых лиганд существенно не влияло на формирование гуморального иммунного ответа, индуцированного эритроцитами барана, т к количество антителообразующих клеток в селезенке крыс, получавших физиологический раствор, производное адамантана, метронидазол, фурацилин и фура-донин существенно не различались

Введение биокомплексов цинка с производным адамантана, метронидазолом, фурацилином и фурадонином активизировало иммуномодулирующее действие лиганда на формирование гуморального иммунного ответа на эритроциты

барана, о чем свидетельствовало увеличение количества антителообразующих клеток в 1,5-2 раза

Одним из важных факторов антиинфекционной защиты, определяющим дальнейшее развитие инфекционного процесса, является ее неспецифическое звено Полученные результаты исследования влияния биокомплексов цинка на фагоцитарную активность лейкоцитов показали (табл 3), что более высокие значения фаюцитоза отмечены в группах животных, которым вводили биокомплексы цинка, тку них фагоцитарный индекс значительно превышал показатели как контрольной группы, которым вводили физиологический раствор, так и групп, которым вводили лиганды

Таблица 3

Влияние биокомплексов цинка на показатели антиинфекционной защиты

Исследованные показатели Физ р-р НАс) нлагп мы МЖп NFSZn далгп

1 2 3 4 5 6 7 8 9

Фагоцитарный индекс % 39,4±2,8 44 2±2,0 48,2±1,8'2 43,2±2,5 49,4±1,912 45,1 ±1,9 52,4±2,0'* 44,8±1,8 51,7±1,9и

Фагоцитарное число 1,8±0 3 1,7±0,3 2 0±0,2 1,7±0,2 2,0±0,3 1,9±0,4 2,5±0 5 1,8±0,3 2,4±0,3

Завершенность фа1 оцитоза, % 61,2±2,3 6Э,4±2,2 64,7±1,5 65,1±1,9 67,3±2,2 66,2±1,8 68,4±2,0 66,0±1,7 67,8±1,9

НСТ-спонтанный 27,2±3,8 28,0±3,0 30,0±1,9 28,4±3,5 30,3±2,9 29,1 ±2,0 31,5±2,2 28,9±1,9 30,б±2,0

нст- стимулированпый 55,2±3,2 56,2+3,0 58,4±2,2 57,4±2,9 61,1 ±3,5 58,9±2,3 62,2±2,916 58,4±2,0 62,4±2,4'"

Функциональный резерв фагоцитов, % 28,0±2,4 29,0±2,1 31,2±2,0 29,0±2,1 30,8±1,9 30,1±1,9 31,5±1,9" 29,7±1,9 30,4±2,0''

Уровень ЛКБ 0,10±0,01 0,13±0,01 0,14±0,02 0,11±0,03 0,1Э±0,02 0,12±0,01 0,14±0,02 0,12±0,01 ),14±0,021

Бактерицидная активность сыворотки крови (БАС) 68,8±5,3 69,7±4,0 79,1±4,0'2 71,5±4,9 81,7±4,3М 73,4±3,0 84,4±3,2" 72,1 ±3,0 83,1 ±3,0"

Лизоцим сыворотки крови 14,2±4,8 13,1 ±3,0 17,8±3,2 15,3±4,5 17,1 ±3,9 16,4±3,1 18,1 ±3,0 1б,0±3,0 18,4±3,0

Примечаиие цифрами надстрочного индекса обозначены группы, по отношению к которым различия достоверны

Показатели НСТ-стимулирующего теста, бактерицидной активности сыворотки крови также характеризовались статистически более высокими значениями в группах опытных животных по сравнению с группой контроля

Таким образом, изучаемые биокомплексы цинка обладают выраженной антимикробной активностью и проявляют иммуномодулирующие свойства

Важную роль в лечении инфицированных ран играют «раневые покрытия», под которыми подразумеваются в настоящее время не только привычные тек-

стильные материалы (марля, сетка, трикотаж, нетканое полотно), но и пленки, пленко-композиции, губки, гидроколлоиды, гели, пасты и комбинации различных материалов Поэтому разработка «раневых покрытий» на полимерной основе с целью пролош ирования действия лекарственных средств при лечении инфицированных ран представляется весьма перспективным направлением При разработке гелеобразной лекарственной формы для лечения ран в качестве гелеобразователя использовались производные целлюлозы Использование полимерных основ в виде 5% глицерогелей натриевой соли карбоксиметилцеллю-лозы (Иа-КМЦ) способствует более полному проявлению антимикробной активности лигандов и их биокомплексов с цинком

Введение изучаемых биокомплексов цинка в состав полимерных основ, усиливает их антимикробное действие (табл 4) в отношении всех изученных тест-штаммов

Таблица 4

Антимикробная активность I лицерогелеи* лигандов и их биокомплексов в отношении факультативно анаэробных микроорганизмов

№ Т Тест-культура Диаметр зоны задержки роста бактерий препаратами, мм (М±ш)

HAd HAdZn MN MNZn NFS NFSZn NFA NFAZn

1 S aureus АТСС 25923 13,5 ±0,2 19,4±0,3' 14,6±0,3 20,4^,4' 16,2±0,3 22,3±0,35 16,5±0,3 22,5±0,47

2 S aureus АТСС 209-P 11,4±0,2 17,3±0,31 10,8±0,3 15,3^,2' 16,0±0,3 23,1 ±0,2' 16 0±0,3 23,2±0,3'

3 В subtiiis АТСС 6633 12,7±0,3 19,9±0,4' 13,8±0,3 20,0±0,4' 17,1 ±0,3 23,9±0,2! 16,7±0,3 23,7±0,27

4 В cereus АТСС 10702 12,8±0,3 16,8±0,3' 13,5±0,3 П^М.З1 16,5±0,2 21,3±0,23 16,8±0,3 21,6±0,37

5 Е coll АТСС 25922 12,3±0,3 16,3±0,21 13 3±0 3 15,2±0,33 16,0±0,3 19,4±0,25 16 5±0,2 20,5±0,27

6 С albicans NCTC 2625 12,0±0,3 15,5±0,3' 12,7±0,3 14,5±0,33 16,6±0 4 19,0±0 3! 16,2±0 2 19,5±0,37

Примечание HAd - производное анамантана, HAdZn ~ биокомплекс цинка с адамаитаноч, I-достоверность различий средних относительно 1-й группы (р<0,05), ММ - производное нитроимидазола (мет-ронидаэол), MNZn - биокомплекс цинка с метронидазолом, 3-достоверность разтичий средних относительно 3-й группы (р<0,05), NFS - производное нитрофурана (фурацилин), NFSZn - биокомплекс цинка с фурацили-ном, 5-достоверность различий средних относительно 5-й группы (р<0,05),ЫГА - производное нитрофурана (фурадонин), NFAZn - биокомплекс цинка с фурадонином, 7-достоверность различий средних относительно 7-й группы (р<0,05), "концентрация антимикробного компонента в глицерогелях 0,5% (для HAd, HAdZn, MN, MNZn), * концентрация антимикробно! о компонента в глицерогелях 0,2% (для NFS NFSZn NFA NFAZn)

Установлено, что полимерные основы не препятствуют высвобождению активного компонента и наиболее полно и быстро высвобождают производное адамантана, метронидазол, фурацилин и фурадонин и их биокомплексы с цинком Так, к 2 - 3-м часам эксперимента в диализате из 5% глицерогеля Ыа-КМЦ обнаружено 89,50±0,68% производного адамантана, 85,50±0,94% метронидазо-ла, 85,70±0,86% фурацилина, 87,50±0,91% фурадонина соответственно

Таким образом, установлено, что достаточной антимикробной активностью обладают 0,5-1% глицерогели как производного адамантана и метронидазола, так и их комплексные соединения с цинком и 0,2-0,5% глицерогели фурацилина и фурадонина и их биокомплексов с цинком, а полимерной основой, наиболее полно и быстро высвобождающей действующее вещество, - 5% глицерогель ЫаКМЦ

Независимо от этиопатогенеза гнойно-воспалительные процессы характеризуются наличием болевого синдрома, патогенной микрофлоры, гнойного экссудата, избыточной гидратации и т д Поэтому научно-обоснованное сочетание в лекарственной форме активных субстанций и вспомогательных веществ, на-правленнодействующих на каждый фактор воспаления, является залогом успешной фармакотерапии Многолетние исследования по изучению механизма раневого процесса и возможностей его коррекции на отдельных этапах, проводимые в нашей стране и за рубежом, создают условия для выработки объективных критериев, позволяющих проводить аргументированный подбор как самих материалов, на основе которых создаются лекарственные формы, так и их рецептуры Наиболее перспективно применение многокомпонентных мазей, сочетающих в своем составе местные анестетики и антисептики, в комплексе оказывающих многонаправленное действие на раневой процесс

Одной из задач исследования явилась разработка состава и технологии получения атравматичного многокомпонентного глицерогеля для лечения инфицированных ран, высокоэффективного с точки зрения биологической доступности лекарственного средства и обладающего многонаправленным терапевтическим действием на гнойно-воспалительный процесс

Для устранения болевого синдрома в составе глицерогеля нами использовался тримекаин, который сохраняет активность в кислой среде, характерной для гнойной раны, и усиливает действие лекарственных средств при сочетании с ним Введение тримекаина в состав глицерогелей, содержащих производное адамантана, метронидазол, фурацилин и фурадонин, а также их биокомплексы с цинком обеспечивало им ценные качества, необходимые в терапии гнойно-воспалительных процессов Показано, что наибольшие показатели силы (ин-

деке Ренье в среднем 1300 уел ед) и продолжитечьности анестезии имеют место при одновременном сочетании в глицерогеле тримекаина, производного адамантана или метронидазола, или фурацилина, или фурадонина, или их био-комадексов с цинком Лиганды и их комплексные соединения с цинком не оказывают влияния Hfi время наступления анестезии, так как оно одинаково во всех анализируемых образцах

Таким образом, пррреденные исследования in vitro и in vivo, показали, что введение тримекаина в 5% глицерогели ЫаКМЦ, содержащие как лиганды, так и их комплексные соединения с цинком является фармакологически оправданным

При разработке состава глицерогеля изучено влияние на антимикробную активность аскорбиновой кислоты, обладающей выраженными антиоксидант-ными свойствами, участвующей в образовании тетрагидрофолиевой кислоты и регенерации тканей, синтезе стероидных гормонов, коллагена, проколлагена, а также микроводоросли спирулины платенсис, содержащей в сбалансированных количествах необходимые незаменимые аминокислоты, витамины Л, В1, В2, В12, Е, минералы и микроэлементы, природные пигменты и оказывающей стимулирующее влияние на иммунную систему

Введение эфирных масел в состав многокомпонентного глицерогеля обеспечивало активацию антимикробного и анестезирующего действия

Таким образом, в результате проведенных исследований разработан состав многокомпонентного геля, способного обеспечить многонаправленное действие в терапии гнойно-воспалительных процессов кожи

Биологическая активность разработанного состава глицерогеля обеспечивается сочетанием комплексных соединений цинка с изучаемыми лигандами, анестетика, эфирного масла, спирулины платенсис, аскорбиновой кислоты, оказывающих влияние на регенерацию тканей, полимерной основы (табл 5), содержащей в качестве гелеобразователя модифицированные производные целлюлозы и гидрогель метил кремниевой кислоты (энтеросгель)

Таким образом, введение в состав антимикробного глицерогеля анестетика, эфирного масла, спирулины платенсис, аскорбиновой кислоты и в качестве дополнительного гелеобразователя гидрогеля метилкремниевой кислоты (энтеросгель) увеличивает его антибактериальную активность по сравнению с гелями, содержащими как только один лиганд, так и его биокомплексы с цинком

Таблица 5

Антимикробная активность многокомпонентного глицерогеля, содержащего комплексные соединения цинка

Тест-культура Диаметр зоны задержки роста тест-штаммов, мм (М±т)

HAd HAdZn MN MNZn NFS NFSZn NFA NFAZn

S aureus ATCC 25923 16,5±0,3 28,5±0,4 17,1 ±0,4 30,6±0,3 17,1 ±0,4 30,6±0,3 17,5±0,3 31,3±0,3

V aureus 209-Р 16,0±0,3 28,1 ±0,3 16,6±0,3 31,0±0,2 25,4±0,3 27,9±0,3 25,9±0,3 28,1 ±0,2

Е colt ATCC 25922 |5,0±0,3 30,3±0,2 14,7±0,3 39,0±0,2 28,4±0,3 29,8±0,2 28,8±0,4 29,9±0,3

В nblihs ATCC 6633 15,0±0 3 29 2±0,3 16,2±0,3 39,0±0,4 34 9±0,3 37,8±0,2 32,4±0,3 35,7±0,3

С albicans NCI С 2625 12,б±0,2 26,4±0,2 12,5±0,3 29,б±0,2 34,7±0,2 39,0±0,3 32,б±0,4 36,0±0,2

Примечание HAd - производное адамантана, HAdZn - бнокомплекс цинка с адамантаном, MN - производное нитроимидазола (метронидазол), MNZn - биокомплекс цинка с метронидазолом, NFS - производное нитрофурана (фурацилин), NFSZn - биокомплекс цинка с фурацилином, NFA - производное нитрофурана (фу-радонин), NFAZn - биокомплекс цинка с фурацонином

На модели полнослойной гнойной раны показана высокая терапевтическая эффективность разработанного антимикробного геля, применение которого быстро купировало воспалительный процесс и оказывало стимулирующее влияние на регенерацию тканей, проявляющееся в раннем устранении перифокаль-ного отека, сокращении сроков очищения раны от гнойного содержимого и некротических масс, в более быстром появлении грануляций и краевой эпите-лизации по сравнению с контролем

Проведенные морфологические исследования показали, что введение в глицерогель изучаемых биокомплексов цинка способствует уменьшению аль-теративных процессов в коже после травмы эпидермиса и дермы, ускоренному очищению раны и активации процессов регенерации по сравнению с использованием глицерогелей, содержащих только лиганды

Ускорение процессов очищения раны и активации процессов регенерации в кожной ране подтверждалось цитограммой клеток дермы уменьшением ней-трофилов в 1,5-2 раза, увеличением количества макрофагов и фибробластов в 2 раза

Подтверждением усиления процессов репаративной регенерации при использовании многокомпонентных глицерогелей, содержащих биокомплексы цинка, являются достоверно более ранние сроки образования струпа по сравнению с контрольной группой и с группой, где использовалась стандартная мазь «Левомеколь» (табл 6)

Таблица 6

Сроки заживления инфицированной раны в эксперименте на животных

№ Ф Наименование группы Сроки образования струпа, сутки

1 Контроль раны 14,2+0,2

2 Лечение мазью «Левомеколь» 13,5+0,2'

3 Лечение гелем, содержащим МЫ 13,5+0,2'2

4 Лечение гелем, содержащим МИгп 12,0+0,2' 2,3

5 Лечение гелем, содержащим МЖп, тримекаин, розовое масло, спирулину платенсис, аскорбиновую кислоту, гидрогель метилкремниевой кислоты (энтерос-гель) 10,0±0,2'234

6 Лечение гелем, содержащим НДс! 13,6±0,212

7 Лечение гелем, содержащим НАс12п 12,2±0,2' 26

8 Лечение гелем, содержащим НАё2п, тримекаин, розовое масло, спирулину платенсис, аскорбиновую кислоту, гидрогель метилкремниевой кислоты (энтерос-гель) 10,5+0,2'2 67

Примечание цифры надстрочного индекса обозначают номера групп, по сравнению с которыми наблюдается достоверные различия (р<0,05)

Таким образом, введение в состав многокомпонентных гелей дополнительно тримекаина, спирулины платенсис, аскорбиновой кислоты и гвоздичного масла усиливает их антимикробную и ранозаживляющую активность, оказывая многонаправленное биологическое действие, что позволяет сократить сроки лечения

Поскольку проблема разработки новых путей и средств доставки лекарственных субстанций в заданный орган-мишень до настоящею времени не потеряла своей актуальности, проведенные нами исследования позволили обосновать состав и технологию полимерных композиций на гидрофильной основе для транс-дермального введения лекарственных средств Такой путь введения в последние годы получил широкое развитие в виде трансдермальных терапевтических систем (TTC) Состав полимерной композиции включал, изучаемые биокомплексы цинка, поливинилпирролидон и поливиниловый спирт, пластификатор, анестетик Проведенные исследования in vitro позволили сделать вывод о биологической доступности высвобождающихся биокомплексов цинка из полимерных компо-

зиций Гистологические исследования полимерных композиций in vivo в эксперименте на лабораторных животных позволили установить их биологическую переносимость при длительном подкожном нахождении (до 14 суток), что позволяет рекомендовать эти композиции для проведения дальнейших исследований с целью разработки пролонгированной антимикробной лекарственной формы

ВЫВОДЫ

1 Установлено, что химическая модификация производных адамантана, нитроимидазола и нитрофурана путем их комплексообразования с цинком способствует повышению антимикробной и противогрибковой активности, а также расширению спектра действия по сравнению с лиган-дами

2 Выявлено, что комплексные соединения цинка обладают высокой антимикробной активностью, низкой токсичностью и отсутствием раздражающего и аллергизирующего эффекта в эксперименте на животных

3 Обнаружено, что комплексы цинка обладают выраженной антимикробной активностью и проявляют иммуномодулирующие свойства, усиливая действие на факторы неспецифической резистентности и гуморального иммунного ответа

4 Показано, что рациональной полимерной основой для гелей, содержащих биокомплексы цинка, является натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы, которая наиболее полно высвобождает активные компоненты и способствуй i проявлению высокой антимикробной активности гелей

5 Обоснован состав и разработана технология получения глицерогелей на основе натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы, содержащих биокомплексы цинка с производными адамантана (0,5-1,0%), нитроимидазола (0,5-1,0%) и нитрофурана (0,2-0,5%), анестетик (1,0-3,0%), эфирное масло (0,1-0,3%), спирулину платенсис (0,5-1,0%), аскорбиновую кислоту (2,05,0%), гидрогель метилкремниевой кислоты (2,0-5,0%) Показана m vitro и in vivo их высокая антимикробная, ранозаживляющая и регенерирующая активность глицерогелей

6 Разработан состав и технология получения полимерных транедермальных терапевтических систем и установлена их биологическая переносимость при длительном подкожном введении, а также возможность обеспечения пролонгированного антимикробного действия, противовоспалительного и обезболивающего эффекта в эксперименте на животных

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Краснов, А А Разработка мазей на коллагеновой основе / А А Краснов, Д А Афанасьев, Л П Лазурина // Сб науч трудов 67-й сессии КГМУ и отделения медико-биологических наук Центрально-Черноземного научного центра РАМН - Курск, 2002 -С 26-27

2 Краснов, А А Антимикробная активность мазей, содержащих некоторые производные 5-нитроимидазола /СИ Московцев, А А Краснов, В М Соломка, И В Самохвалова, О И Басарева, Л П Лазурина // Социально-экономическое развитие регионов реальность и перспективы сб матер Меж-дунар молод науч -практ конф молодых ученых и специалистов - Воронеж, 2003 -С 105

3 Краснов, А А Разработка технологии получения материалов медицинского назначения на основе модифицированной целлюлозы с производным 5-нитроимидазола с эссенциальными металлами / О И Басарева, А А Краснов, Л П Лазурина, И Б Ратушняк // Социально-экономическое развитие регионов реальность и перспективы сб матер Междунар молод науч -практ конф -Воронеж,2003 -С 107

4 Краснов, А А К вопросу повышения эффективности лекарственных средств / А А Краснов, С И Московцев, И В Самохвалова, Л П Лазурина // Медико-экологические информационные технологии сб матер VI Междунар науч конф -Курск, 2003 -С 117-119

5 Краснов, А А Изучение биологической активности некоторых новых координационных соединений с металлами/ ИВ, Самохвалова, А А Краснов, Л П Лазурина// Медико-экологические информационные технологии сб матер. VI Международной науч конф -Курск, 2003 -С 125-126

6 Краснов, А А Изучение возможности использования фурацилина в трансдермальных терапевтических системах / А А Краснов, Р Ю Рыков, И В Самохвалова, Л П Лазурина, В М. Соломка, Т А Звягинцева // Медико-экологические информационные технологии сб матер VI Междунар науч конф -Курск, 2003 -С 126-127

7 Краснов, А А Разработка многокомпонентных мазей, содержащих новые биокомплексы, для лечения гнойной инфекции / А А Краснов, С И Московцев, И В Самохвалова, Л П Лазурина // Медико-экологические информационные технологии сб матер VI Междунар науч конф - Курск, 2003 -С 127-129

8 Краснов, А А Разработка антимикробных мазей на основе коллагена / А А Краснов, С И Московцев, О И Басарева, Л П Лазурина, В М Соломка // Социально-экономическое развитие регионов реальность и перспективы сб науч тр Междунар науч-практ молод, конф - Воронеж, 2003 -С. 103.

9 Краснов, А А Антимикробная активность мазей, содержащей некоторые производные 5-нитроимидазола /СИ Московцев, А А Краснов, Л П Лазурина // Социально-экономическое развитие регионов реальность и перспективы сб науч тр Междунар науч -практ молод конф - Воронеж, 2003 -С 105

10 Краснов, А А Изучение ранозаживляющего действия многокомпонентных мазей, содержащих биокомплексы металлов / С И.Московцев, А.А Краснов, И В Самохвалова, Л.П. Лазурина, Н А.Кореневский // Системный анализ и управление в биомедицинских системах - 2003 - Т. 2, № 3. - С 225227

11 Краснов, А А Изучение влияния комплексных соединений цинка, меди, кобальта и марганца с производным 5-нитроимидазола на антимикробную активность мазей /СИ Московцев, А А Краснов, И В Самохвалова, Л П Лазурина, Н А Кореневский // Системный анализ и управление в биомедицинских системах -2003 -Т 2, № 4 -С 326-327

12 Краснов, А А Изучение биологической активности некоторых новых координационных соединений с металлами / Л П Лазурина, А А Краснов, О И Басарева, П В Калуцкий // Сб матер второго съезда общества биотехнологов России - Москва, 2004 - С 38-39

13 Краснов, А А Создание самофиксирующихся повязок пролонгированного лечебного действия / О И Басарева, А А Краснов, Л П Лазурина, И В Самохвалова, Е А Неструев // Сб тр юбилейной науч конф КГМУ и сессии Центрально-Черноземного научного центра РАМН, посвященной 70-летию КГМУ -Курск, 2005 -С 290-291

14 Краснов, А А Разработка гидрофильных препаратов антибактериального действия / Л П Лазурина, А А Краснов, О И Басарева, И В Самохвалова, Е А Неструев // Сб тр юбилейной науч конф КГМУ и сессии ЦентральноЧерноземного научного центра РАМН, посвященной 70-летию КГМУ - Курск, 2005 -С 291-292

15 Краснов, А А Компьютерный прогноз спектра биологической активности новых биокомплексов / А А Краснов, Л П Лазурина, И В Самохвалова, ВМ Соломка, Д А.Хапчаева // Сб трудов 71 науч конф КГМУ и сессии Центрально-Черноземного научного центра РАМН - Курск, 2006 - С 259

16 Краснов, А А Влияние новых биокомплексов производного 5-нитро-имидазола на антимикробную активность гелей /ЕВ Каштанова, А А Краснов, И В Самохвалова, Л П Лазурина, В М Соломка, Д А Хапчаева // Сб матер науч -метод конф Курского медицинского института - Курск, 2006 -С 90

17 Краснов, А А Синтез и антибактериальная активность некоторых комплексов, содержащих производные нитрофурана / А А Краснов, Е В Каштанова, И.В Самохвалова, Д А Хапчаева, Л П Лазурина // Современные наукоемкие технологии - 2006 - №2 - С 93

18 Краснов, А А Изучение антимикробной активности мазей, содержащих биокомплексы с производным 5-нитроимидазола /ЕВ Каштанова, А А Краснов, И В Самохвалова, В М Соломка, Д А Хапчаева // Актуальные вопросы хирургии сб матер межрегиональной науч -практ конф - Курск, 2005 -С 173

19 Краснов, А А Разработка и исследование полимерных пленочных материалов с некоторыми производными 5-нитрофурана / А А Краснов, Л П Лазурина, И В Самохвалова, С В Костров, Д А Хапчаева, Е И Лизун // Фундаментальные и прикладные исследования - 2006 - № 11 - С 52

Лицензия ЛР № 020862 or 30 04 99 г Сдано в набор 09 10 2007 г Подписано в печать 10 10 2007 г Формат 30x42'/» Бума\ а офсетная Гарнитура Times New Rom Печать офсетная Уел печ л 1,0 Тираж 100 экз Заказ № 16А Издательство Курского государственного медицинского университета 305041, г Курск, ул К Маркса, 3

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Краснов, Андрей Александрович

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Лекарственные формы, используемые в терапии 12 инфицированных ран

1.2. Повышение эффективности лекарственных средств путём 24 комплексообразования с эссенциальными металлами

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Исследование антимикробной активности препаратов in vitro

2.2. Исследование антимикробной активности препаратов и in vivo

2.3. Моделирование раневого процесса и исследование антимикробной активности комплексных соединений цинка в эксперименте

2.4. Оценка динамики репаративных процессов в экспериментальной инфицированной ране

2.5. Исследование местноанестизирующей активности

2.6. Оценка факторов антиинфекционной защиты организма животных

2.7. Оценка выраженности иммунного ответа

2.8. Определение токсичности препаратов

2.9. Изучение высвобождения компонентов из гелевых основ 39 методом диализа

2.10. Определение антигрибковой активности препаратов

2.11. Методика получения глицерогелей

2.12. Статистическая обработка полученных данных

ГЛАВА 3. ИЗУЧЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ НОВЫХ КОМПЛЕКСНЫХ СОЕДИНЕНИЙ ЦИНКА С ПРОИЗВОДНЫМИ АДАМАНТАНА, НИТРОИМИДАЗОЛА И НИТРОФУРАНА

3.1. Изучение антимикробной активности новых биокомплексов цинка in vitro и in vivo

3.2. Изучение антигрибковой активности производных адамантана, нитроимидазола и нитрофурана

3.3. Изучение иммуномодулирующей активности и токсичности биокомплексов цинка с производным адамантана, метронидазола, фурацилина и фурадонина

ГЛАВА 4. ИЗУЧЕНИЕ АНТИМИКРОБНОЙ АКТИВНОСТИ ГЕЛЕЙ, СОДЕРЖАЩИХ БИОКОМПЛЕКСЫ ЦИНКА

С ПРОИЗВОДНЫМ АДАМАНТАНА, МЕТРОНИДАЗОЛОМ, ФУРАЦИЛИНОМ И ФУРАДОНИНОМ

4.1. Исследование влияния на антимикробную активность изучаемых биокомплексов, гидрофильных и гидрофобных основ и состава многокомпонентного геля

4.2. Изучение совместимости и биофармацевтической доступности производного адамантана, метронидазола, фурацилина, фурадонина и тримекаина при разработке многокомпонентных гелей

4.3. Изучение влияния аскорбиновой кислоты на биологическую активность лекарственных веществ в разарабатываемых гелях

4.4. Изучение влияния эфирных масел на биологическую активность лекарственных веществ в разрабатываемых гелях

ГЛАВА 5. ИЗУЧЕНИЕ РАНОЗАЖИВЛЯЮЩИХ СВОЙСТВ МНОГОКОМПОНЕНТНЫХ ГЕЛЕЙ 93 ВЫВОДЫ 101 СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ

Сокращения

ЕАС-РОК

Е-РОК лв мпк

НАёгп MN

Ыа-КМЦ ЫБА

- антителообразующие клетки

- биологически активное вещество

- бактерицидная активность сыворотки крови

- гуморальный иммунный ответ

- гиперчувствительность замедленного типа

- государственная фармакопея (XI издание)

- клетки, образующие розетки с эритроцитами барана при обработке антителами и комплементом

- клетки, образующие розетки с эритроцитами барана

- лекарственное вещество

- минимальная подавляющая концентрация

- метилцеллюлоза

- мясопептонный агар

- нитросиний тетразолий

- производное нитрофурана

- производное адамантана (М-(1-Адамантил)-2-гидрокси-4- оксо-4-(п-толил)-кротонамид)

- комплексное соединение цинка с адамантаном

- производное нитроимидазола (1-(р-оксиэтил)-2-метил-5 -нитроими дазо л)

- комплексное соединение цинка сульфата с метронидазолом (комплекс)

- натриевая соль карбоксиметилцеллюлозы

- производное нитрофурана 1Ч-(5-нитро-3-фурфурилиден)-1 -амино-гидантоин), фурадонин

- производное нитрофурана (5-нитрофурфурол семикарбазон), фурацилин

NFAZn - комплексное соединение цинка с фурадонином

NFSZn - комплексное соединение цинка с фурацилином

PASS - компьютерная система (Prediction of Activity Spectra for Substance)

Введение Диссертация по биологии, на тему "Сравнительная характеристика биологической активности комплексных соединений цинка с некоторыми антимикробными средствами"

Несмотря на широкое применение антибиотиков для лечения раневой инфекции проблема терапии гнойно-воспалительных заболеваний остается нерешенной. Возрастающее количество больных с острыми гнойно-воспалительными заболеваниями, гнойными послеоперационными осложнениями, рост числа неблагоприятных исходов лечения и преобладание в ране микрофлоры малочувствительной или нечувствительной к антибиотикам приводит к ухудшению результатов лечения, увеличению сроков терапии, снижению уровня трудоспособности и росту затрат на лечение, что дополнительно обусловлено сложностью выбора лечебной тактики, а также отсутствием универсального средства и метода лечения [64, 93,142]. Отмечаемый рост лекарственной устойчивости микроорганизмов, иммуносупрессивное действие антибактериальных препаратов, необходимость разработки средств, воздействующих на различные стороны патогенеза раневого процесса - все это делает актуальными разработки и изучение новых биологически активных препаратов для лечения раневой инфекции и лекарственных форм на их основе в связи с возможным их практическим использованием.

В последние годы повысился интерес к наиболее рациональному использованию уже известных лекарственных средств, а также к возможности их химической модификации, в том числе, к созданию комплексных соединений с биометаллами, так как одним из факторов, осложняющих течение гнойной инфекции, является нарушение баланса микроэлементов. Нередко координационные соединения металлов с лекарственными препаратами обладают не только большей биологической активностью по сравнению с исходными лигандами, но имеют и более широкий спектр действия.

Поэтому изучение биологической активности новых координационных соединений с металлами является актуальной задачей в связи с возможным их практическим использованием и может служить теоретической основой для целенаправленного синтеза соединений с заданными свойствами.

Учитывая осложнения антибиотикотерапии, большой интерес, в качестве антимикробных средств представляют как новые биологически активные вещества, так и широко известные, хорошо зарекомендовавшие себя в практической медицине, доступные и относительно дешевые производные нитроимидазола и нитрофурана.

Местные гнойно-воспалительные процессы занимают одно из первых мест среди различных видов хирургической инфекции по распространенности [34]. Входными воротами, в данном случае, служат повреждения кожи и слизистых оболочек, а также хронические кожные заболевания.

Основными задачами лечения инфицированной раны являются: подавление микрофлоры, устранение избыточной гидратации, купирование болевого синдрома, адсорбция продуктов бактериального и тканевого распада, стимуляция репаративных процессов, защита от внутригоспитальной инфекции и мобилизация защитных сил макроорганизма.

Поэтому необходимы дальнейшие исследования по расширению номенклатуры лекарственных препаратов, которые надежно и быстро могли подавлять рост гноеродной инфекции, купировать болевой синдром, т.е. обладать выраженным многонаправленным действием.

С этой целью наиболее часто применяются лекарственные формы местного воздействия, такие как мази на гидрофильных и гидрофобных основах, раневые покрытия, гели и т.д.

Для купирования болевого синдрома при местном применении высокой эффективностью обладают анестетики лидокаин, тримекаин. Увеличение резорбции лекарственных веществ из мазей, потенцирование их антимикробного и анестезирующего эффекта можно добиться введением вспомогательных веществ в качестве компонентов мази, обеспечивающих пролонгированное действие лекарственных средств, локализацию их на пораженном участке и будет способствовать ускорению процесса заживления в целом.

Научно-обоснованный подбор лекарственных средств и вспомогательных веществ позволит разработать составы и технологию оптимальной лекарственной формы, обладающей выраженным терапевтическим действием для профилактики и лечения инфицированных ран.

Целью работы явилось изучение специфических свойств новых комплексных соединений цинка с производными нитроимидазола, адамантана и нитрофурана in vitro и in vivo, а также оценка возможности их использования в полимерных лекарственных формах для лечения стафилококковых инфицированных ран.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- изучить специфическую активность новых комплексных соединений цинка (антимикробная и антигрибковая активность, влияние на иммунный статус организма) и выявить наиболее эффективные из них для получения лекарственных препаратов на их основе;

- исследовать влияние новых комплексных соединений на течение экспериментальной стафилококковой инфекции;

- обосновать и экспериментально разработать состав лекарственной формы на полимерной основе, содержащей комплексные соединения цинка сульфата, для лечения местных гнойно-воспалительных процессов; изучить на модели инфицированной раны биологическую активность разработанных лекарственных форм антимикробного действия в отношении широко распространенных возбудителей гнойных инфекций.

Научная новизна работы определяется:

- впервые изученной биологической активностью новых комплексных соединений цинка с производными нитроимидазола, адамантана и нитрофурана;

- выявленным антимикробным, фунгицидным и иммуномодулирующим действием новых комплексных соединений, а также установлением возможности их использования в различных лекарственных формах с целью применения в дерматологии;

- установленной высокой антимикробной активностью новых комплексов в отношении стафилококковой инфекции в эксперименте;

- обоснованными и экспериментально разработанными составами и технологией полимерных лекарственных форм, содержащих синтезированные комплексы и обладающих антимикробной активностью в отношении широко распространенных возбудителей гнойных инфекций;

- установленной высокой ранозаживляющей и регенерирующей активностью разработанной лекарственной формы при лечении инфицированной раны в эксперименте на животных.

Практическая значимость работы.

Результаты проведенных исследований позволяют прогнозировать поиск путей модификации известных лекарственных препаратов и биологически активных соединений с целью получения эффективных антимикробных препаратов, не подавляющих естественный иммунитет животных.

Комплексообразование цинка с производными нитроимидазола, адамантана и нитрофурана позволяет повысить антимикробную и противогрибковую активность, а также расширить спектр действия комплексов, и позволяет рекомендовать их для дальнейшего изучения в качестве препаратов при лечении инфекций, вызванных различными видами облигатно и факультативно анаэробных микроорганизмов.

Для профилактики и лечения гнойно-воспалительных процессов кожи в первой фазе их протекания предложены лекарственные формы на полимерной основе, обеспечивающие выраженное антимикробное, дегидратирующее, обезболивающее и ранозаживляющее действие и сокращающие сроки лечения.

По материалам диссертации опубликованы «Методические рекомендации по изготовлению, контролю качества и использованию гелей на гидрофильных основах, содержащих производное нитрофурана и биокомплекс цинка (II)».

Получено положительное решение по заявке №2005140128/15(044726) на патент «Средство для лечения гнойно-воспалительных процессов кожи и слизистых оболочек различной этиологии».

Материалы диссертации используются в учебных курсах и научно-исследовательской работе Курского государственного медицинского университета, Курского государственного технического университета, ООО «Технофарм».

Основные положения, выносимые на защиту.

Новые комплексные соединения цинка (И) проявляют выраженную антимикробную активность и относятся к классу малотоксичных веществ. Комплексообразование лекарственных средств с металлами способствует появлению иммуномодулирующего действия.

Комплексы цинка (II) с производными нитроимидазола, адамантана и нитрофурана характеризуются высокой антимикробной активностью на модели стафилококковой инфекции.

Разработанный состав и технология полимерных лекарственных форм, содержащих комплексные соединения цинка с производными нитроимидазола, адамантана и нитрофурана, обладающих антимикробной активностью в отношении широко распространенных возбудителей гнойных инфекций.

Состав и технология получения трансдермальных терапевтических систем для чрезкожного введения синтезированных биокомплексов.

Апробация результатов работы.

Основные положения работы представлены на научных конференциях Курского государственного медицинского университета (2000 - 2004 г.г.), Межрегиональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы хирургии» (Курск, 2005 г.), научной конференции Российской академии естествознания «Современные проблемы науки и образования», посвященной 10-летию РАЕ (Москва, 2006 г.), межкафедральной научной конференции Курского государственного медицинского университета (Курск, 2007 г.).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 19 работ, 2 статьи в издании, рекомендованном ВАК РФ.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, 3 глав экспериментальных исследований, выводов и списка литературы. Содержит 120 страниц машинописного текста, 47 таблиц. Библиографический указатель включает 178 источников литературы.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Краснов, Андрей Александрович

выводы

1. Установлено, что химическая модификация производных адаманта-на, нитроимидазола и нитрофурана путем их комплексообразования с цинком способствует повышению антимикробной и противогрибковой активности, а также расширению спектра действия по сравнению с лигандами.

2. Выявлено, что комплексные соединения цинка обладают высокой антимикробной активностью, низкой токсичностью и отсутствием раздражающего и аллергизирующего эффекта в эксперименте на животных.

3. Обнаружено, что комплексы цинка обладают выраженной антимикробной активностью и проявляют иммуномодулирующие свойства, усиливая действие на факторы неспецифической резистентности и гуморального иммунного ответа.

4. Показано, что рациональной полимерной основой для гелей, содержащих биокомплексы цинка, является натриевая соль карбоксиметилцеллюло-зы, которая наиболее полно высвобождает активные компоненты и способствует проявлению высокой антимикробной активности гелей.

5. Обоснован состав и разработана технология получения глицероге-лей на основе натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы, содержащих биокомплексы цинка с производными адамантана (0,5-1,0%), нитроимидазола (0,51,0%) и нитрофурана (0,2-0,5%), анестетик (1,0-3,0%), эфирное масло (0,10,3%), спирулину платенсис (0,5-1,0%), аскорбиновую кислоту (2,0-5,0%), гидрогель метилкремниевой кислоты (2,0-5,0%). Показана in vitro и in vivo их высокая антимикробная, ранозаживляющая и регенерирующая активность глице-рогелей.

6. Разработан состав и технология получения полимерных трансдермаль-ных терапевтических систем и установлена их биологическая переносимость при длительном подкожном введении, а также возможность обеспечения пролонгированного антимикробного действия, противовоспалительного и обезболивающего эффекта в эксперименте на животных.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Краснов, Андрей Александрович, Курск

1. Авцын, А.П. Микроэлементозы человека / А.П.Авцын, А.А.Жаворонков, М.А.Риши,- М.: Медицина, 1991.-495 с.

2. Авцын, А.П. Патология флюороза / А.П.Авцын, А.А.Жаворонков.-Новосибирск: Наука, 1984.-334 с.

3. Адарченко A.A., Красильников А.П., Собещук О.П. Сравнительное исследование антибиотиков и антисептиков в отношении S. aureus // Антибиотики и химиотерапия. -1991. № 2. - С. 21-24.

4. Азизов, М.А. Изучение реакций комплексообразования первого рода переходных элементов с биологически активными лигандами / М.А.Азизов // Вопр. фармакологии и фармации.- 1980.-Ташкент, С.3-7.

5. Акбаров, А. Б. Бионеорганическая химия металлов, аминокислот и биокомплексов/А. Б.Акбаров, Ю. Я.Харитонов. -Ташкент: Фан, 1994.-324с.

6. Акбаров, А. Б. О координационных соединениях некоторых ЗсЬлементов с метилметионинсульфония хлоридом / А. Б. Акбаров // Узб. хим.журн. -Ташкент, 1983,-Деп.в ВИНИТИ 19.04.83., N2035-83.

7. Акбаров, А. Б. Синтез и исследование координационных соединений галогенидов некоторых Зс1-элементов с метилметионинсульфония хлоридом / А.Б.Акбаров // Узбекский хим. журн.- Ташкент, 1983,- Деп.в ВИНИТИ 19.04.93.-N2034-83.

8. Акбаров, А.Б. К некоторым аспектам направленном синтеза биокомплексов с заданной специфической активностью/ А.Б.Акбаров, Ю.Я.Харитонов // ДАМ СССР.-1990.-Т.310.-Вып. 1 .-С. 103-106.

9. Ю.Алексеев К.В. Теоретическое и экспериментальное обоснование применения редкосшитых акриловых полимеров в технологии мягких лекарственных форм (мазей и гелей) и биопрепаратов: Дис. . докт. фармац. наук. М., -59с.

10. Аспераза энзиматический препарат для очищения ран / В.Т. Чернобой П.И. Кабачный, В.Ф. Рудюк и др. // Хим.-фарм. журн. - 1991. - т. 25, № 1,-С.86-87.

11. Астожников, Ю. В., Богомолова Н. С., Еремина Г. В. Бактероидная инфекция в хирургии / Ю. В.Астожников, Н. С.Богомолова, Г. В.Еремина //Хирургия.-1983.-Ы12.-С.111-116.

12. Н.Афиногенов Т.Е., Блинов Н.П. Антисептики в хирургии. Л.: Меди-1987.-143 с.

13. Афиногенов Т.Е., Панарин Е.Ф. Антимикробные полимеры. СПб.: крат, 1993.-264 с.

14. Ахмед Имад Махмуд. Разработка составов, технологии и исследование мазей с эритромицина эстолатом для лечения местных гнойно-воспалительных процессов: Дис. канд. фарм. наук : (15.00.01)/Ахмед Имад Махмуд; КГМУ. Курск, 2003. - 135 с.

15. Баженов, Л. Г. Бактероидные инфекции в хирургии/ Л. Г. Баженов, X. М.Исхакова//- 1983.-N3.-C. 120-122.

16. Беленький, М. Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта/ М. Л.Беленький.- М.: Наука, 1963.-177 с.

17. Биокомплексы микроэлементов как новая генерация лекарственных средств //Н.И. Калетина, В.Ф. Захарова, Н.В. Козлова, О.Ф. Кокорникова // Актуальные проблемы создания новых лекарственных средств: Тез. докл. Всероссийской науч. конф. СПб., 1996. - С. 49.

18. Биологические аспекты координационной химии /Под ред. К. Б. Яцимирского.-Киев: Наукова думка, 1974.- 205 с.

19. Бондаренко, В. М. Микроэлементы и инфекция/ В.М.Бондаренко, В. Ф.Чубуков, В.М.Бондаренко // Журн. микробиол., эпидемия., иммунобиол. -1987.-N11.-С.118-126.

20. Воронков, М.Г. Антибактериальные и гемостатические свойства серебряных солей полиакриловой кислоты/М.Г.Воронков, JIM. Антоник, A.C. Коган// Хим.-фарм.журнал.-2002.-Т.36.-№2.-С.27-29.

21. Герасименко, М.Ю. Физико-фармакологическое и клиническое обоснование фотофореза геля метрогил дента / М.Ю. Герасименко, В.Ф. Прикулс, С.Н. Сковородько // IX Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство» (8-12 апреля 2002 г., г. Москва). М., 2002. - С.599.

22. Гидроколлоидные покрытия новое поколение средств для лечения ожогов / Г.Я. Кивман, Ю.В. Ляшенко, Э.З. Рабинович, Л.И. Флейдерман //Хим-фарм. журн. - 1994. - т. 28, № 9. - С. 21-27.

23. Гипохлорит натрия в лечении гнойных ран / Петросян Э.А., Сергиенко В.И, Кулаев Г.К. и др. // Вест, хирургии им. Грекова. -1991. № 1. - С. 40-43.

24. Глянцев, С.П. Современные подходы к разработке эффективных перевязочных средств, шовных материалов и полимерных имплантантов, М., 1995.- С.28-29

25. Говарикер, В.Р. Полимеры / В.Р. Говарикер, Н.В. Висванатхан М.: Наука.- 1990. - 396 с.

26. Грудянов, А.И. Обоснование оптимальной концентрации препарата Метрогил-дента при лечении воспалительных заболеваний пародонта / А.И. Грудянов, Н.И. Дмитриева, В.В. Овчинникова // Стоматология. -2002. Т.81, №1. - С. 44-47.

27. Гунько, В.Г. Изучение осмотической активности некоторых мазевых основ /В.Г. Гунько, A.A. Гунько, Н.М. Мусиенко // Хим.-фарм. журн. -1982. -№3-С. 89-91.

28. Даценко Б.М., Белов С.Г., Тамм Т.И. Гнойная рана. Киев, 1985. -136 с.

29. Дашевекая Б.И., Бодня В.М., Глузман М.Х. Использование ПЭО в производстве мазей // Фармация. 1990. - № 6. - С. 31-34.

30. Дашевская, Б.И. Использование ПЭО в производстве мазей / Б.И. Дашевская, В.М. Бодня, М.Х. Глузман // Фармация. 1990. - №6. - С. 3134.

31. Дмитриевский, Д.Д. Создание комбинированных лекарственных форм с заданными фармакотерапевтическими свойствами на основе водорастворимых полимеров: Автореф. дис. . д-ра фарм. наук: (15.00.01) / Д.Д. Дмитриевский. Харьков, 1985. - 47с.

32. Дорофейчук, В.Г. Определение активности лизоцима нефелометрическим методом / В.Г.Дорофейчук // Лаб.дело. 1968. - №1. - С.28-30.

33. Егорова, С.Н. Теоретическое и экспериментальное обоснование состава и технологии лекарственных форм монофосфатов: Автореф. дис. . д-ра фарм. наук: (15.00.01) / С.Н. Егорова. М., 1998 - 44 с.

34. Ежова, Л. А. Комплексные соединения никеля и меди с биологически активными производными тиосалициловой кислоты/ Л.А.Ежова, В. Н. Михайлова // Проблемы современной бионеорганической химии.-Новосибирск: Наука, 1986.-С.223-228.

35. Земцов Р.Н. Изучение возможности использования продуктов переработки эфирномасличных растений как консервантов лекарственных средств // Тез. докл. 4-го Всесоюз. съезда фармац. Казань, 1986. - С. 254-255.

36. Ивченко, В. М. Применение метронидазола и его аналогов в хирургии/ В. М.Ивченко, В. М.Мельник // Клин.хир.-1983.-Ы1.-С. 45-48.

37. Изучение возможности использования геля полиэтиленоксида в фармации / М.В. Гаврилин, Е.В. Компанцева, Л.С. Ушакова и др. // Фармация. 1998. - №2. - С. 20-21.

38. Изучение возможности использования гидрофильных основ в некоторых сложных мазях с новокаином / Т.Н. Закржевская, Г.И. Лукьянчикова, С.Г. Тираспольская и др. // Фармация. 1990. - № 6. - С. 31-34.

39. Изучение местноанестезирующего и ранозаживляющего действия мазей на гидрофильных основах / C.B. Чащина, В.Э Колла, H.A. Горнова и др. // Фармация. 1992. - №3. - С. 17-20.

40. Изучение фунгицидной активности некоторых эфирных масел / Н.И. Ткачева, И.А. Муравьев, H.H. Николаевский, H.H. Синченко // Фармация. -1989.-№3.-С. 72-73.

41. Исаев, С. Д. // Физиол. актив.вещества.-1983.-Ы15.-С.З-15.

42. Исмаилова, Г.М. Получение комплексных соединений Mg(II) с никотиновой кислотой и никодином / Г.М. Исмаилова, И.М. Иминова, А.А. Тулаганов// Хим-фарм. журнал.- №36.- №6.- 2002.- С. 42- 43.

43. Исследование методом гамма-резонансной спектроскопии координационных соединений железа с гидразидом изоникотиновой кислоты / Н. И. Шапиро, Р. А. Стукан, А. Г. Нариманидзе, Г. В. Цинцадзе// Коорд. хим.-1979.-т. N10.-C.1499-1509.

44. Казаков, Э. Ю. Влияние комплексных соединений кобальта на некоторые биохимические и иммунологические показатели организма в возрастном аспекте: Автореф. дис. канд/ Э. Ю. Казаков;.-Ташкент, 1975.-19 с.

45. Калетина, Н. И. N- гликозиламины и микроэлементы/ Н.И.Калетина.-Ереван: Изд. АН Арм. ССР,-1988.-145 с.

46. Калетина, Н. И. Влияние комплексообразования с биометаллами на антибактериальную активность лигандов/ Н. И.Калетина, Л.П.Лазурина, Афанасьев Ю. И. // Экология окружающей среды: Тез. докл. науч.-теор. конф.-Ташкент, 1990.-С.82-84.

47. Калетина, Н. И. Новый подход к повышению эффективности лекарственных средств/ Н. И.Калетина, Стажкова Н. Ю. // Фармация.-1989.-N3. С.38-42.

48. Калетина, Н. И. Усиление антибактериальной активности лигандов при комплексообразовании с металлами/ Н. И.Калетина, Л. П.Лазурина, Н.Ю.Якушева // Актуальные проблемы химиотерапии бактериальных инфекций: Тез. докл. Всесоюз. совещ.-М., 1991.

49. Каримова, С. К. К обмену меди в сопоставлении с некоторыми биохимическими показателями у больных затяжной формой инфекционного и хронического гепатитов: Канд. дис.-Ташкент, 1968.

50. Катацел и катацел А новые лекарственные формы антисептиков / Т.М. Таратина, Г.П. Иванова, Б.В. Москвичев и др. // III Российский национальный конгресс "Человек и лекарство": Тез. докл. - М: РЦ "Фармединфо", -С. 51.

51. Ковтун, В. Ю. Использование адамантанкарбоновых кислот для модификации лекарственных соединений/ В. Ю.Ковтун, В. М.Плахотник // Хим.-фармац. журн.-1987.-Т.21.-Ы8.-С.931-940.

52. Коллагеновая губка "Цитотимакол" стимулятор заживления ран / A.B. Малинин, М.А. Буракова, Н.Д. Сидорова и др. // Хим.-фарм. журн. - 1998. №11.-С. 54-56.

53. Константинова Е.А. Химико-токсикологическое исследование триме-Автореф. дис. канд. фармац. наук. -Львов, 1986.

54. Костюченок Б.М. Современные принципы активного хирургического гнойных ран // Актуальные вопросы хирургии. М., 1985. - С. 140-144.

55. Косырева Н.С., Елагина И.А., Львов Н.Д. Исследование влияния мазевых основ на скорость всасывания и специфическую активность мазей с фосфорноуксусной кислотой // МРЖ. раздел 22. - 1991. - № 4-6. - С. 15.

56. Криворучко, В.И. Экология пестицидов и репаративная регенерация тканей / В.И.Криворучко, Р.Ю.Омиров. Ташкент: Изд-во Ибн Сины,1993.- 120 с.

57. Крисс, Е.Е. Координационные соединения металлов в медицине / Е.Е.Крисс, И.И.Волченкова, А.С.Григорьева //.- Киев: Наук.думка, 1986. -216с.

58. Кузин, М. И. Метронидазол в профилактике и лечении хирургических инфекций/ М. И.Кузин, Г. К.Вандяев, Л.А.Блатун //Хирургия.-1983 .-N6. -С.106-110.

59. Кузин, М. И. Профилактическое применение антибиотиков в плановой абдоминальной хирургии/ М.И.Кузин, Л. А. Блатун, В. С. Полилов // Хирургия.-1983.-N7.- С.131-135.

60. Купчиков, В. В. О закономерностях комплексообразования некоторых белков с лекарственными препаратами и металлами: Автореф. дис. канд/

61. B. В.Купчиков; Саратов, 1972.-14 с.

62. Курбангалеев СМ. Гнойная инфекция в хирургии. М.: Медицина, 1985.272 с.

63. Кэбот, Е. / Е. Кэбот, М.Мейер// Экспериментальная иммунохимия: Пер. с англ. М., 1968. - 684с.

64. Лакин, Г.Ф. Биометрия / Г.Ф.Лакин. М., 1980. - 293 с.

65. Леглер, Е.В. Синтез и антимикробная активность комплексных соединений серебра с аргинином и глутаминовой кислотой /Е.В.Леглер, А.С.Казаченко, В.И.Казбанов //Хим-фарм.журнал.-2001 Т.35.-№91. C.35-36.

66. Лекарственные формы. Термины и определения // Эконом, вестн. фармации.- 2000. №4. - С. 44-47.

67. Лемешко СИ. Лечение гнойных ран: Дис. . канд. мед. наук. Воронеж,1994.-150 с.

68. Лившиц, B.C. Полимерные покрытия на раны и ожоги / B.C. Лившиц // Хим.-фарм. журн. 1988. - №7. - С. 790-797.

69. Мальберг, К. Метод локального гемолиза / К.Мальберг, Э.Зигль // Иммунологические методы: Пер. с нем. / Под ред. Г.Фримеля. М.: Медицина, 1987. - С.57-72.

70. Мамашвили, Т.Н. Синтез тиосемикарбазона метилглиоксаля и его медного комплекса, обладающих ДНК-ингибирующей и противоопухолевой активностью/ Т.Н.Мамашвили, H.A. Кейко, Н.Н.Чипанина //Хим.-фарм. журнал.-1999.-№11.-С.9-11.

71. Маринина, Т.Ф. Эффективность лечения некоторых заболеваний пародонта и слизистой оболочки рта мазью полиферант / Т.Ф. Маринина, JI.H. Савченко, Л.И. Иванова // VIII Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство» (2001 г., г. Москва). М., 2001. - С.421.

72. Матусис, З.Е. К методике определения индекса завершенности фагоцитоза / З.Е.Матусис, С.И.Пылаева // Лаб.дело. 1972. - N4. -С.237-240.

73. Машковский М.Д. Лекарственные средства. Харьков: Торсинг, .-т. 1,592 с; т. 2.-560 с.

74. Медведева, O.A. Исследования и разработка многокомпонентных мазей этония для лечения гнойно-воспалительных процессов: Дис. . канд.фарм. наук: (15.00.01)/ O.A. Медведева; КГМУ. Курск, 1995. -128с.

75. Методические рекомендации по экспериментальному изучению местноанестезирующих средств / Ю.Д. Игнатов, Ю.Н. Васильев, В.Н. Жуков и др.//М., 1990. 49 с.

76. Методические рекомендации по экспертному изучению лекарственных препаратов для местного лечения гнойных ран. МЗ СССР, Фармакологический комитет. М, 1989, с.44

77. Мохнач, И.В. Йодвысокополимеры и биологические возможности организма / И.В.Мохнач. М.: Наука, 1979. - 78 с.

78. Мусин, Р.И. Синтез и биологическая активность кобальтсодержащих комплексов поливинилпирролидона/ Р.И.Мусин, В.А.Ли, Р.Т. Туляганов //Хим.-фарм. журнал.- 1989.-№5.-С.554-557.

79. Набухающие системы с контролируемым высвобождением, современные разработки и области применения // Хим.-фарм. производство за рубежом. Экспресс-информация. 1989. - № 7. - С. 19-23.

80. Назаренко, Г.И. Рана. Повязка. Больной. Руководство для врачей и медсестер // Г.И. Назаренко, И.Ю. Сугурова, С.П. Глянцев. М.: Медицина, 2002. - 472 с.

81. Насолодин, В. В. Взаимосвязь между некоторыми МЭ в процессе обмена их в организме/ В. В.Насолодин, В. Я.Русин // Вопр. питания,-1986.-N6.-С. 9-13.

82. Ноздрюхина, Л. Р. Микроэлементы и атеросклероз/ Л.Р.Ноздрюхина, Е. М.Нейко, И. Н.Ванджура. М.: Наука, 1995.-221 с.

83. Павлов, П. А. Синтез и антимикробная активность некоторых нитрофурансодержащих азометинов / П.А.Павлов, Н.Ю.Басова, П.П.Павлов// Хим. журнал. -2000.-Т34.-№6.-С.24-25.

84. Панкрушева Т.А. Экспериментально-теоретическое обоснование создания мягких лекарственных форм на полимерных основах производных целлюлозы: Автореф. дис. докт. фармац. наук. -М., 1995. - 32 с.

85. Панкрушева Т.А. Экспериментально-теоретическое обоснование создания мягких лекарственных форм на полимерных основах -производных целлюлозы: Дис. . д-ра фарм. наук: (15.00.01) / Т.А.Панкрушева. М., 1995. - 311 с.

86. Парпиев, М. А. Координационные соединения металлов с лекарственными препаратами / М.А.Парпиев, А.М.Кушакбаев, М.М.Азизов.- Ташкент: ФАН, 1983, -283 с.

87. Перцев, И.М. Многокомпонентные мази на гидрофильной основе / И.М. Перцев, Б.М. Даценко, В.Г. Гунько // Фармация. 1990. - №5. - С. 73-77.

88. Пигаревский, В.Е. Лизосомально-катионный тест. Метод, рек. / В.Е.Пигаревский // НИИЭМ АМН СССР. - М., 1979. - 57 с.

89. Ю2.Платэ, H.A. Полимерные носители прорыв в фармакологии / H.A. Платэ, Л.И. Валуев, И.Л. Валуев // Наука в России. - 1998. - №1. - С. 2125.

90. По дымов, В. К. Молекулярные основы лигандной патологии и хелатной фармакологии/ В. К.Подымов, С. П.Гладких, Л. А. Пирузян // Хим.-фарм. >KypH.-1982.-Nl.-C. 9-14.

91. Применение «Динексана-А» при лечении заболеваний слизистой оболочки полости рта / И.М. Рабинович, Е.И. Беляева, Л.М. Демина и др. // II Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство» (10-15 апреля 1995 г., г. Москва).-М., 1995.-С. 191.

92. Проблемы создания осмотически активных лекарственных систем для наружного применения / В.Г. Гунько, Б.М. Даценко, И.М. Перцев, С.Г. Белов // Фарм. журн. 1991. - №3. - С. 62-67.

93. Протеолитические ферменты в гнойной хирургии / В.И. Стручков, Д.В. Григорян, В.К. Гостищев и др. М.: Медицина, 1970. - 408 с.

94. Пуоджанене, Г.А. Разработка полимерных пленок, содержащих иммобилизованную протеазу и диоксидин/ Г.А. Пуоджанене, В.А. Вайчювенас, В.И. Янулис, Ю.Е. Степонавичюс// Хим.-фарм журнал. -2005.- Т.39.-№1.-С.34-36.

95. Ю8.Пуоджюнене, Г.И. Изучение реологических свойств и процесса высвобождения лекарственных веществ из метилцеллюлозных гелевых основ / Г.И. Пуоджюнене, Н.И. Никулынина, A.C. Пуаджюнас // Хим.-фарм. журн. 1982. - №10. - С. 1256-1258.

96. Разработка технологии и анализа препаратов местных анестетиков / Т.А. Панкрушева, J1.H. Ерофеева, Н.Д. Афонина и др. // III Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство» (16-20 апреля 1996 г., г. Москва). М., 1996. -С.279.

97. Раны и раневая инфекция: Руководство для врачей. / Под ред. М.И. Кузина, Б.М. Костюченок: 2 изд., перераб. и доп. М.: Медицина, 1990.592 с.

98. Растительные азулены перспективное сырье для мягких лекарственных форм / Ю.Н. Кирюхин, Р.Г. Заславский, Л.И. Драник и др. // Тез. докл. Всесоюз. НТК. - Харьков, 1990. - С. 105-106.

99. Регистр лекарственных средств России. Изд. 6-е, перераб. и дополн. / Гл. ред. Ю.Ф. Крылов. М.: "РЛС-2000", 1998. - 1072 с.

100. Решетов, И.В. Пленочное покрытие, содержащие хлоргекседин и лизоцим, для лечения ран/ И.В. Решетов, Т.Н. Юданова, О.В. Маторин, Д.С. Морозов// Хим.-фарм журнал. -2004,- Т.38.- №7.-С.41-43.

101. Роговая, Е.П. Клинико-микробиологическая эффективность иммобилизованного на силард-геле этония в лечении воспалительных заболеваний пародонта / Е.П. Роговая, H.H. Гаража // Стоматология. -2001.- №6. -С. 18-21.

102. Рудько А.П., Кривошеий Ю.С., Акимов A.B. Мирамистин -высокоэффективный антисептик с иммуноадъювантным действием // III Российский национальный конгресс "Человек и лекарство": Тез. докл. -М.: РЦ "Фармединфо", 1996.-С. 195.

103. Самусь, Н.М. Синтез и противомикробная активность координационных соединений Зё-элементов с некоторыми гидразонами, полученными на основе 5-нитро-2-фуральдегида /Н.М. Самусь, В.И.Цапков, С.А. Бурачева и др.//Хим.-фарм. журнал.- 1999.-№10.С.41-44.

104. Сафронова, JI.A. Синтез и антибактериальная активность комплексов палладия и кобальта с замещенными фуранами/Л.А.Сафронова, Т.К.Корниенко, Т.М.Шуб, А.Д.Шебалдова// Хим.-фарм журнал. -2000.-Т.34.- №9.-С.22-23.

105. Синтез и исследование координационных соединений некоторых двухвалентных 3<1-элементов с витамином U/ А. Б. Акбаров, X. М. Камилов, Г. М. Миркамилова, Ш. А. Булатова // Узбекский хим.журн.-1988.- N1.-C.14-17.

106. Слюсарь Н.Г. Комбинированное применение местных анестетиков с другими лекарственными средствами // Фармация. 1982. - № 6. - С. 6974.

107. Смирнова, О.В. Определение бактерицидной активности сыворотки крови методом фотонефелометрии / О.В.Смирнова, Т.А.Кузьмина //Журн. микробиологии. 1966. - №4. - С.8-12.

108. Современные йодофоры в лечение и профилан.ике гнойно-воспалительных процессов в ранах / Л.Блатун, А. Светухин, В. Митки и др,//Врач.-2000.-№11.-С 22-25.

109. Способ оценки функциональной активности нейтрофилов человека по реакции восстановления нитросинего тетразолия. Метод, рек. / Сост. М.Е.Виксман, А.Н.Маянский. - Казань, 1979. - 14 с.

110. Справочник лекарственных средств / Под ред. М.А. Клюева, 1993. -511с.

111. Стручков, В.И. Гнойная инфекция в хирургии / В.И.Стручков//Сб.науки.тр.ХХХ съезда хирургов.- Мн., 1983.-С. 14-19.

112. Сульфат ди-1- ( -оксиэтил) -2-метил-5-нитроимидазол. кобальта (II) дигидрат, проявляющий бактериостатическую активность/JI. П. Лазурина, Н. И. Калетина, Н. Ю. Якушева и др. Патент PON 491972/04 (014380) от 4.02.92.

113. Сурина, Л.В. Разработка и исследование многокомпонентных мазей на полимерной основе антимикробного, анестезирующего действия: Автореф. дис. . канд. фарм. наук: (15.00.01) / Л.В. Сурина; КГМУ. М., 1995.-18с.

114. Ташмухамедов, Р. И. Иммуномодуляторы на основе сополимеров винил-пирромидона с микроэлементами/ Р.И.Ташмухамедов, У.М.Маматкулов // XI Всесоюз. конф. по биологической роли микроэлементов и их применении в сельском хозяйстве и медицине. Тез. докл.

115. Тенцова А.И., Киселева Т.С. Биологическая доступность и методы ее определения // Фармация. 1980. - № 2. - С. 10-14.

116. Теплова, С.Н. Оценка факторов неспецифической защиты организма от инфекции в клинической практике (Метод, рек.) / С.Н.Теплова. -Челябинск, 1978. 57 с.

117. Терехов, В.И. Антимикробная активность и токсичность нового нитрофурана /В.И.Терехов, П.А.Павлов // Антибиотики и химиотерапия. -1995.- №4.С.34-36.

118. Усенбаева, Р.Б. Технология и изучение мазей для анестезии и лечения воспаленной пульпы зуба: Автореф. дис. . канд. фарм. наук: (15.00.01) / Р.Б. Усенбаева; М. Медицинский институт им. И.М. Сеченова М., 1985. -26 с.

119. Ушаков, Р.В. Местное антимикробное лечение в стоматологии. /Р.В. Ушаков, В.Н. Царев. Медицинское информационное агенство, М., 2004.- 134 с.

120. Фадеева, Н. И. Биохимические аспекты антимикробного действия синтетических лекарственных препаратов/ Н. И.Фадеева, И. Н.Дегтярева //Хим.-фармац. журн.-1986.-Ы1.-С.11-24.

121. Чижова Е.Т. Медицинские и лечебно-косметические мази / Е.Т.Чижова, Г.В. Михайлова М.: ВУНМЦ. - 1999. - 403 с.

122. Шихман, Ш.М. Применение йодинола в хирургической практике / Ш.М. Шихман//Вестн. хирургии. 1966. -Т. 97, № 8. - С.81-94.

123. Шраер Т.И., Шапошников Ю.Г., Крейнес В.М. Применение липосом в раннем лечении экспериментальных ран // Хирургия. 1994. - № 12. -С.35-38.

124. Шубич, М.Г. Выявление катионных белков в цитоплазме лейкоцитов с помощью бромфенолового синего / М.Г.Шубич // Цитология. 1974. -Т.16, №10. - С.13-21.

125. Щепочкина О.Ю. Применение метода ВЭЖХ в идентификации местных анестетиков из группы ариламидов карбоновых кислот // Материалы Российской национальной конференции. М., 1995. - С. 158-159.

126. Albertsson A.C., Donaruma L.G., Vogl O. Synthetic polymers as drugs //Ann. N. Y. Acad. Sei. 1985. - V. 446. -P. 105-115.

127. Albertsson, A.C. Synthetic polymers as drugs / A.C. Albertsson, L.G. Donaruma, O. Vogl // Ann. N. Y. Acad. Sei. 1985. - Vol. 446. - P. 105-115.

128. Baner R.O., Gehman A.G. Chronic toxicity studies on Methylcellulose in ruts // G. Amer. Pharmac. Assoc, Sei. Educ. -1981. V. 40, № 6. - P. 631-632.

129. Bremecker, K.-D. Novel concept for a mucosal adhesive ointment / K.-D. Bremecker, H. Strempel, G. Klein // J. pharm. Sei. 1984. - Vol. 73, № 4. -P.548-552.

130. Callaghan, V. Platinum andother metal complexes of 2-methyl-5-nitrobenzimidazole andmetronidazole/ V.Callaghan, B. M. L.Goodgame, R.P.Toose // Inorg. Chim. Acta.-1983.-Vol.78.-N.l.-P.l-4.

131. Cho, M. J. Metronidazol ephosphate a water soluble prodrug for parenteral Solutions ofmetronidazole/ M. J.Cho, R. R. Kurtz, C.Lewis // J. Pharm. Sci.-1982.-Vol.71 .-N.4.-P.410-414.

132. Chopra, A. R. Metronidazole (flagyl) in chronicotolaryngological infections/ A. R.Chopra // IndianPractit.-1978.-Vol.31.-N7.-P.593-599.

133. Coudron, P.E. In vitro evaluation as an alternative agent for metronidazole in combination antimicrobal therapy against Helicobacter pylori /P.E.Condron, C.W.Stratton //J. Antimicrob Chemother-1998.-№42. -C.657-660.

134. Coulson, C. G. Platinum nitroimidazole complexes and phaemacentical compositions containing them/ C. G. Coulson, P. J.Sadler // Fr. Demande F. R. 2, 500, 449 (CI C07D233/91) -27 Aug., 1982.-G. B. Appl.81/5, 739.-24 Feb., 1981.-6 pp.

135. Dani, R. Omeprasole, clarithromycin and furazolidone for the eradication of Helicobacter pilori in patients with duodenal ulcer / R.Dani, D.M.Queiroz, M.G.Dias // Aliment Pharmacol Ther. -1999.-№13.-C. 1647-1652.

136. Dijkmans, B. A. C. Relativeanti bacterial efficiency of Clindamycin and Metronidazoleagainst Bacteroides fragilis in vitro and in experimentally infecteod mice/ B. A. C.Dijkmans, J.Vaishnav, M. Mattie // Chemotherapy.-1985 .-Vol.31 .-N.4-P.297-303.

137. D'silva, V. Metronidazole (flagyl) in the treatment of sugrical sepsis / V.D'silva // Antiseptic.-1980.-Vol.77.-N4.-P.219-221.

138. Eykyn, S. J. Metronidazole in surgicalinfection / S. J.Eykyn, I. Phillips // J. Antimicrob. Chemotherapy.-1978.-Vol.4.-Syppl. C.-P. 75-81.

139. Gadomska- Nowak M., Wojdak H., Godlewska J., Pasich J. Badania dostepnosci farmaceutycznej chlorowodorku chlorotetracycliny w wybranych podlozach masciowych // Acta pol. pharm. 1989. -1. 46, № 1. - S. 70-73.

140. Gilmour, D. W. Metal complexes of nitrosubstituted pyrazoles, imidazoles and isothiazoles / D. W. Gilmour, P. J. Sadler //Brit. UK Pat. Appl. G B 2, 122, 194 (C1C07D231/16).- 11 Jan., 1984.-G. B. Appl. 82/17, 722.-18 Jun., 1982.14 pp.

141. Huand, X. Economic assessment of three antimicrobial therapies for uncomplicated urinary tract infection in women /X.Huand, A.G.Hartzema, R.H.Raasch // Clin Ther.- 1999.-№21. C.1578-1588.

142. Johansen, M. A comparison of the chemicalstability and the enzymic hydrolysis of a series of aliphaticand aromatic ester derivatives of metronidazole / M. Johansen, C. Larsen // Int. J. Pharm. -1985.-Vol.26.-N.3.-P.227-241.

143. Jondal, M. Surface markers on human T- and B-lymphocytes. 1. A large population of lymphocytes forming nonimmune rosettes with sheep red blood cells / M.Jondal, G.Holm, H.Wigzell // J.Exp.Med. 1972. - V. 136, №11. -P.207-209.

144. Kramer A., Groschel D., Heeg P. u. Mitarb. Bergiffsbestimmung der Antiseptik und Zielstellung der Klinischen Anwendung von Antiseptika // Klinische Antiseptik, Berlin, 1993. S. 1-22.

145. Lamora, J.Z. Povidone iodine & wound infection / J.Z.Lamora // Surgery. - 1984. - V.95, №1. -P. 121-122.

146. Mitchell, N. J. Preoperation single-dose cefuroximeantimicrobial prophylaxis with and without metronidazole in elective gastrointestinal surgery/ N. J. Mitchell // J. Antimicrob. Chemotherapy.-I980.-Vol.6.-N3.-P.393-399.

147. Mursi, N.M. A new Watersoluble pharmaceutical base / N.M. Mursi, A.S.Geneidi, A.A. Kassem // Pharm. Ind. 1977. - Vol. 39, №9. - P. 918-922.

148. N- (1-Адамантил) -2-гидрокси-4-оксо-4- (n-толил) -кротонамид, проявляющий антистафилококковую активности / Т. Н. Янборисов, 3. Н. Семенова, С. Н. Шуров, Ю. С. Андрейчиков//Авт. Свид. -N1573804, 1988.

149. Nastro, L. J. Bactericidal activity of five ahtimicrobial agents Bacteroides fragilis / L. J.Nastro, S. M.Finegold // J. Infect. Dis.-1972. -Vol.126.-P.104-107.

150. Patel, U. T. Clinical trial of prophylactic metronidazole (flagyl) in cases of vaginal repair operation / U. T.Patel //Indian Practit.-1978.-Vol.31.-N7.-P.475-479.

151. Pekarek, R. S. The effect of leucocytic endogenous mediator (LEM) on the tissue distribution of zinc and iron / R. S. Pekarek, R. W.Wannermacker, W. R. Beisel //Proc. Soc. Exp. Biol. Med.-1972.-V.140.-P.685-688.

152. Pinto, D. J. Rational use of antibiotictherapy after appendicectomy / D.J. Pinto, P. J.Sanderson // Brit. J. Med.-1980. -Vol.280.-N6210. -P 275-277.

153. Plaque techniques for recognising individually antibody-forming cells / N.K.Gerne, C.Henry, A.A.Nordin et all. // Methods in Immunology and Immunochemistry/Ed.C.A.Williams and M.W.Chase. New York: Academic Press, 1976. - V.5. - P.335-370.

154. Schacht, E. Synthesis and characterization of some modified polysaccharides containingdrug moeities / E. Schacht, J.Vermeersch, F.Vandoorne //J. Contr. Release.- 1985.-N.2.-P.245-256

155. Sharma, J. K. Study of metronidazole (flagyl) in the field of otorhinolaryngology / J. K.Sharma, J. Gulati // Indian Practit.-1978.-Vol.31.-N7.-P.576-579.

156. Sharp, D. J. Succussful treatment of bacteroides bactermia with metronidazole after failure with clindamycin and lincomycin / D. J.Sharp // J. Antimicrob. Chemotherapy.-1977.-Vol.-3 .-N3.-P.233-234.

157. Sprott, M. S. Metronidazole-resistant Bacteroides melaninogenicus / M.S. Sprott, A. M.Kearns // J. Antimicrob. Chemother.-1988.-Vol. 22.-N.6.-P.951-952.

158. Tally, F. P. Treatment of anaerobic infections with metronidazole / F.P.Tally // Antimicrob. Ag. Chemotherapy.-1975.-Vol.7.-N.5. P.672-675.

159. Tanner, W. A. Single dose intra-rectale metronidazole asprophylaxis against wound infection following emergencyappendicectomy / W. A.Tanner // Brit. J. Surg.-1980.-Vol 67.-N11.-P.809-810

160. Thorbek, P. Ester of metronidazole with N, N-di-methyglycine and its acid additionSalt / P. Thorbek, H.Bundgaard, C.Larsen // Eur. Pat., Appl. EP.96, 870 (CI. C07D233/95).-28Dec.-1983.-DK Appl. 82/2, 643.-11 Jun, 1982-171. P

161. Verma, N. K. A. Comparative trial of metronidazole (flagyl) alone and metronidazole plus antibiotics in oralinfections / N. K. A.Verma // Indian Practit.-1978.-Vol.31 .-N7.-P.631 -634.

162. Vonkow, L. Ormidarole compared tophenoxymethylpenicillin in the treatment of orofacial infections/ L. Vonkow, C. E.Nord // J. Antimicrobiol. Chemother.-1983.-Vol. 11 .-N3.-P.207-215.